БИОРЕГУЛЯТОРНЫЙ КОМПЛЕКС, ОБЛАДАЮЩИЙ ТКАНЕСПЕЦИФИЧЕСКИМ РЕГЕНЕРАТИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ КАТАРАКТЫ С ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ Российский патент 2014 года по МПК A61K35/60 A61K35/66 A61P43/00 

Изобретение относится к способу получения биологически активного комплекса, который может найти применение в медицине, фармацевтике в качестве активного вещества при производстве лекарственных препаратов, стимулирующих физиологическую и репаративную регенерацию, в лечении заболеваний и травматических поражениях кожи, а также в качестве ранозаживляющего средства (причем ран различной этиологии: язвы, ожоговые, вторично инфицированные).

Недавно в арктических экосистемах обнаружено уникальное явление, когда биохимическая программа старения и пострепродуктивного самоубийства атлантического лосося (семги) может выключиться под воздействием симбиотического организма - периодического тканевого паразита эпителия жабр лосося - личинки пресноводной жемчужницы. Тем самым предельная продолжительность жизни лососей продлевается до 13 лет, и лососи вместо однократного нереста стали способными размножаться многократно - до 5-6 раз. Личинка жемчужницы нейтрализует старческие изменения в регуляторной системе лосося "гипоталамус - гипофиз - периферические эндокринные железы - гипоталамус". Личинки моллюска через кровь постоянно снабжают нервные клетки «хозяев» натуральными антидепрессантами и, вероятно, нейротрансмиттерами или их предшественникам. Предварительный анализ показал, что паразит-симбионт секретирует в кровь хозяина водорастворимые субстанции, в том числе аминокислоты, пептиды и гликопротеины (Зюганов В.В. (2005). Долгожитель-паразит, продлевающий жизнь хозяина - Жемчужница Margaritifera margaritifera выключает программу ускоренного старения у лосося Salmo salae [Зюганов В.В. (2005), ДАН. т.403, №5, с.701-705].

В этой связи секрет жабр атлантического лосося, активированного на продленный жизненный цикл симбиотическими личинками моллюска-жемчужницы, может служить источником биологически активного комплекса, который может найти применение в медицине при создании новых лекарственных средств.

Известен биологически активный комплекс "Арктика", применяемый для лечения онкологических заболеваний [патент РФ №2324489, опуб. 2008]. Этот комплекс представляет собой смесь неочищенного комплекса экстракта секрета жабр атлантического лосося и секрет почечных канальцев нерестового самца колюшки на спиртовой настойке-эликсире (высококачественный коньяк пятилетней выдержки). Способ получения биологически активного комплекса не раскрыт.

Катаракта является одной из наиболее частых причин снижения зрения, при этом количество больных с возрастной осложненной и травматической катарактой увеличивается с каждым годом. В настоящее время в лечении катаракты доминирует радикальный хирургический метод, (Копаева В.Г. «Глазные болезни». Учебник. М.: Медицина, 2002 г., с.245-268). Терапевтическое лечение отошло на второй план. Поэтому продолжается поиск лекарственных препаратов, оказывающих приемлемое терапевтическое воздействие.

Наиболее близким к предложенному способу лечения начальной катаракты является способ лечения препаратом "Вилензин" (патент РФ №2367387, опуб. 2009), заключающийся в том, что нейтральный раствор низкомолекулярной фракции пептидов, полученных из фракции кислых белков тканевого экстракта хрусталиков позвоночных, выделенных путем фракционирования в 100%-ном растворе сульфата аммония («Вилензин»), инстиллируют в конъюнктивальную полость в 9, 12 и 17 ч по 2 капли в оба глаза 2 раза с интервалом в 5 мин курсом длительностью 2-6 месяцев с перерывом 10 дней каждые 30 дней.

Однако этот способ лечения имеет существенный недостаток, заключающийся в значительном уплотнении задней капсулы глаза в процессе лечения катаракты препаратом "Вилензин" (ФГУ МНИИ ГБ им. Гельмгольца). Данные допплерографии были не сопоставимы с полученными клиническими результатами и свидетельствовали о том, что параметры показателей после лечения (180 У.Е.-185 У.Е.) были выше, чем до лечения (165 У.Е.-172 У.Е.) [Вериго Е.Н. и др. Перспективность применения препарата «Вилензин» при начальных формах катаракты. Сборник конференция "Нанотехнологии в диагностике и лечении патологий органов зрения". Москва, 2008 г., с.34-37]

Задачей данного изобретения является получение высокоочищенного физиологически активного комплекса биорегуляторов из жабр посленерестового атлантического лосося (Salmo salar L.), активированного симбиотическими личинками (глохидиями) моллюска жемчужницы (Margaritifera margaritifera), на продленный жизненный цикл.

Поставленная задача решается биорегуляторным комплексом, обладающим тканеспецифическим репаративным действием, полученным из жабр посленерестового атлантического лосося (SalmoSalar. L.), активированного на продленный жизненный цикл симбиотическими личинками моллюска жемчужницы (Margaritifera margaritifera), содержащим пептиды и углеводы при содержании углеводов по отношению к пептидам 5-18 мас.%, имеющим размер частиц 80-220 нм в 0,1%-ном водном растворе при температуре 20°C и УФ-спектр с максимумом поглощения при 255-270 нм, «плечо» при 200-229 нм и соотношение интенсивности поглощения при 210 нм к интенсивности поглощения при 255 нм, равное 4,5-5,5, и следующие характеристики для 0,1%-ного водного раствора: изоэлектрическую точку 3,8-4,4 и дзета потенциал - 30-40 мВ при pH 6,5 и 1-3 мВ при pH 4,2.

Биорегуляторный комплекс оказывает ингибирующее действие на развитие катаракты на культурах глаз крыс, возникающей при нарушении работы основных ферментных систем хрусталика - перекисного окисления липидов и Ca²⁺-зависимых протеаз. Биорегуляторный комплекс существенно улучшает остроту зрения пациентов с возрастной и травматической катарактой.

Поставленная задача решается способом получения бирегуляторного комплекса из жабр посленерестового атлантического лосося (Salmo salar L.), активированного на продленный жизненный цикл симбиотическими личинками моллюска жемчужницы (Margaritifera margaritifera), заключающимся в том, что у выловленных после нереста атлантических лососей препарируют жабры и помещают их в воду или в водный раствор 10-40% этанола, полученный экстракт жабр фильтруют, добавляют в фильтрат одноатомный алифатический спирт при соотношении фильтрата и спирта от 3/1 до 1/3 и оставляют до осаждения примесных веществ, выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха, растворяют в воде и очищают с помощью колоночной хроматографии.

При этом в качестве одноатомного алифатического спирта предпочтительно используют этанол, или пропанол, или изопропанол.

Задача также решается способом лечения начальной катаракты, заключающимся в том, что вводят водный раствор хроматографически очищенной фракции биорегуляторного комплекса, полученного из жабр посленерестового атлантического лосося (Salmo salar L.), активированного на продленный жизненный цикл симбиотическими личинками моллюска жемчужницы (Margaritifera margaritifera) с концентрацией 10^-8-10^-14 мг/мл в оба глаза в конъюктивальную полость в эффективном количестве три раза в день курсом длительностью 2-5 месяцев с перерывом 5-10 дней через каждые 30 дней.

Раствор вводят путем закапывания каждый раз в два приема по 1-2 капли в каждый глаз с интервалом 5-7 минут либо путем орошения спреем по два впрыска дозами по 30-70 мкл.

Способ получения биорегуляторного комплекса осуществляется следующим образом. У выловленных после нереста атлантических лососей препарируют жабры, содержащие глохидии, и помещают их в сосуд с водой или водным раствором 10-40% (предпочтительно 30%) этанола в десятикратном избытке по отношению к массе жабр. Полученный экстракт жабр фильтруют. Фильтрат помещают в химический стакан и добавляют одноатомный спирт (метанол, этанол, пропанол или изопропанол) при соотношении 3/1-1/3 и оставляют на ночь при +4°C. Образовавшийся осадок отделяют от надосадочной жидкости фильтрацией. Фильтрат упаривают на роторном испарителе досуха и растворяют в воде. Для получения биологически активной фракции биорегуляторного комплекса дальнейшую очистку проводят методом ВЭЖХ в обращенных фазах в ступенчатом режиме на колонках типа: C8; C16; C18 или C32 с размером частиц неподвижной фазы 1,5-10 мкм. Элюирование веществ с колонки Zorbax C18 (250x22 мм; 5 мкм) проводят в течение 20 минут водой, а затем в течение 20 минут 40%-ным этанолом при скорости подвижной фазы 5 мл/мин и детектировании пиков при 254 нм. На колонку наносят по 2 мл раствора.

Для определения биологической активности полученных хроматографических фракций использован адгезиометрический метод [Ямскова В.П., Резникова М.М. Журнал Общая Биология, 1991, Т.52, №2, с.181-191]. Фракцию, обладающую биологической активностью, накапливают, переносят в круглодонную колбу и упаривают досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в воде, фильтруют и определяют следующие физико-химические показатели:

концентрацию пептидов (бицинхонатный метод; Smithet.al, 1985), олигосахаридов (антроновый метод; Koehler, 1952), снимают УФ-спектр и определяют размеры частиц и дзета-потенциал биорегуляторного комплекса (динамическое светорассеяние).

Установлено, что комплекс биорегуляторов имеет следующие физико-химические характеристики:

1. Состав комплекса:

А) пептиды,

Б) олигосахариды.

Относительное содержание олигосахаридов к пептидам составляет 5-18%.

2. Средний размер частиц комплекса для 0,1% водного раствора при температуре 20°C - 80-220 нм

3. УФ-спектр комплекса:

A) максимум поглощения при 255-270 нм,

Б) плечо при 200-229 нм,

B) соотношение интенсивности поглощения при 210 нм к интенсивности при 255 нм равно 4,5-5,5

4. Изоэлектрическая точка для 0,1% водного раствора комплекса - 3,8-4,4

5. Дзета потенциал для 0,1% водного раствора комплекса:

А) при pH 6,5 равен - 30-40 мВ

Б) при pH 4,2 равен - 1-3 мВ.

Примеры получения биорегуляторного комплекса.

Пример 1. Из выловленных промышленным способом после нереста атлантических лососей препарировали жабры, содержащие глохидии, и поместили их в сосуд с водным раствором 30% этанола в десятикратном избытке по отношению к жабрам. Полученный препарат перевозили в таком виде из места отлова лосося. Спиртовый экстракт жабр фильтровали через воронку Бюхнера, оснащенную фильтровальной бумагой, в колбу Бунзена под вакуумом водоструйного насоса. Фильтрат поместили в химический стакан и добавили этанол при соотношении 1/3 и оставили на ночь в холодильнике при +4°C для осаждения примесных веществ. Образовавшийся осадок отделили от надосадочной жидкости фильтрацией через воронку Бюхнера, оснащенную фильтровальной бумагой, в колбу Бунзена под вакуумом водоструйного насоса. Отфильтрованный раствор упаривали на роторном испарителе досуха и растворяли в воде. Для получения биологически активной фракции биорегуляторов дальнейшую очистку проводили с помощью колоночной хроматографии (методом ВЭЖХ) на колонке Zorbax C18 (250x22 мм; 5 мкм). В течение 20 минут элюирование веществ проводили водой, а затем в течение 20 минут 40% этанолом при скорости подвижной фазы - 5 мл/мин и детектировании пиков при 254 нм. На колонку наносили 2 мл раствора.

Фракцию, обладающую биологической активностью, накапливали, перенесли в круглодонную колбу и упаривали досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворили в воде, фильтровали и определили следующие физико-химические показатели:

1. Состав комплекса:

Относительное содержание олигосахаридов к пептидам составило 10%.

2. Средний размер частиц комплекса для 0,1% водного раствора при температуре 20°C 150 нм

3. УФ-спектр комплекса:

A) максимум поглощения при 270 нм,

Б) плечо при 200-225 нм,

B) соотношение интенсивности поглощения при 210 нм к интенсивности при 270 нм равно 4,5.

4. Изоэлектрическая точка для 0,1% водного раствора комплекса - 4,1

5. Дзета потенциал для 0,1% водного раствора комплекса:

А) при pH 6,5 равен - 40 мВ

Б) при pH 4,2 равен - 2 мВ.

Пример 2. Из выловленных промышленным способом после нереста атлантических лососей препарировали жабры, содержащие глохидии, и поместили их в сосуд с водным раствором 10% этанола в пятикратном избытке по отношению к жабрам. Полученный препарат перевезли в таком виде из места отлова лосося. Спиртовый экстракт жабр фильтровали через воронку Бюхнера, оснащенную фильтровальной бумагой, в колбу Бунзена под вакуумом водоструйного насоса. Фильтрат поместили в химический стакан и добавили этанол при соотношении 3/1 и оставили на ночь в холодильнике при +4°C для осаждения примесных веществ. Образовавшийся осадок отделили от надосадочной жидкости фильтрацией через воронку Бюхнера, оснащенную фильтровальной бумагой, в колбу Бунзена под вакуумом водоструйного насоса. Отфильтрованный раствор упаривали на роторном испарителе досуха и растворяли в воде. Для получения биологически активной фракции биорегуляторов дальнейшую очистку проводили с помощью колоночной хроматографии (методом ВЭЖХ) на колонке Ultrasphere C8 (250x22 мм; 10 мкм). В течение 25 минут элюирование веществ проводили водой, а затем в течение 35 минут 40%-ным этанолом при скорости подвижной фазы 4 мл/мин и детектировании пиков при 254 нм. На колонку наносили 2 мл раствора.

Фракцию, обладающую биологической активностью, накапливали, перенесли в круглодонную колбу и упаривали досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворили в воде, фильтровали и определили следующие физико-химические показатели:

1. Состав комплекса:

Относительное содержание олигосахаридов к пептидам составляет 15%.

2. Средний размер частиц комплекса для 0,1% водного раствора при температуре 20°C - 220 нм

3. УФ-спектр комплекса:

A) максимум поглощения при 260 нм,

Б) плечо при 200-229 нм,

B) соотношение интенсивности поглощения при 210 нм к интенсивности при 265 нм равно 5,3.

4. Изоэлектрическая точка для 0,1% водного раствора комплекса - 5,2

5. Дзета потенциал для 0,1% водного раствора комплекса:

А) при pH 6,5 равен - 30 мВ

Б) при pH 4,2 равен - 3 мВ.

Пример 3. Из выловленных промышленным способом после нереста атлантических лососей препарировали жабры, содержащие глохидии, и поместили их в воду в десятикратном избытке по отношению к жабрам. Полученный препарат перевезли в рефрижераторе из места отлова лосося. Экстракт жабр фильтровали через воронку Бюхнера, оснащенную фильтровальной бумагой, в колбу Бунзена под вакуумом водоструйного насоса. Фильтрат поместили в химический стакан и добавили изопропанол при соотношении 1/2 и оставили на ночь в холодильнике при +4°C для осаждения примесных веществ. Образовавшийся осадок отделили от надосадочной жидкости фильтрацией через воронку Бюхнера, оснащенную фильтровальной бумагой, в колбу Бунзена под вакуумом водоструйного насоса. Отфильтрованный раствор упаривают на роторном испарителе досуха, растворяли в воде и отфильтровывали. Для получения биологически активной фракции биорегуляторов дальнейшую очистку проводили с помощью колоночной хроматографии (методом ВЭЖХ) на колонке Ultrasphere C8 (250x22 мм; 10 мкм). В течение 25 минут элюирование веществ проводили водой, а затем в течение 35 минут 40%-ным этанолом при скорости подвижной фазы 4 мл/мин и детектировании пиков при 254 нм. На колонку наносили 2 мл раствора. Фракцию, обладающую биологической активностью, накапливали, перенесли в круглодонную колбу и упаривали досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворили в воде, фильтровали и определили следующие физико-химические показатели:

2. Состав комплекса:

Относительное содержание олигосахаридов к пептидам составляет 13%.

4. Средний размер частиц комплекса для 0,1% водного раствора при температуре 20°C - 200 нм

5. УФ-спектр комплекса:

A) максимум поглощения при 255 нм,

Б) «плечо» при 200-229 нм,

B) соотношение интенсивности поглощения при 210 нм к интенсивности при 255 нм равно 5,6.

4. Изоэлектрическая точка для 0,1% водного раствора комплекса - 5,1

5. Дзета потенциал для 0,1% водного раствора комплекса:

А) при pH 6,5 равен - 30 мВ

Б) при pH 4,2 равен - 3 мВ.

Было изучено влияние полученного биорегуляторного комплекса на развитие катаракты в эксперименте.

Концентрацию пептидной составляющей биорегуляторного комплекса в растворе устанавливали равной 0,1 мг/мл за счет разведения водой (квалификация Milli-Q). Затем методом последовательных разведений водой получали растворы с концентрацией от 10^-8 до …10^-14 мг/мл, необходимые для биологического тестирования.

Модели катарактогенеза на культурах хрусталиков глаз крысы Wistar

В работе использовали экстрагированные хрусталики глаз крыс породы Wistar.

Хрусталики выделяли микрохирургически в стерильных условиях из глаз животных под контролем бинокулярного микроскопа. Всех животных предварительно наркотизировали.

Водный раствор биорегуляторного комплекса (c=10^-10 мг/мл) добавляли в питательную среду в начале культивирования хрусталиков. Все флаконы с приготовленными культурами герметично закрывали.

Для культивирования хрусталиков использовали среду 199, содержащую 80 мг/л гентамицина сульфата. Хрусталики помещали в стеклянные бюксы в 5 мл среды и культивировали при температуре 37°C в течение 4-5 дней. На третьи сутки производили смену культуральной среды.

Хрусталики крыс разделяли на три группы, по 4-5 хрусталиков в каждой:

1-я контрольная группа - к культурам в 4,5 мл питательной среды 199 добавляли 0,5 мл физраствора;

2-я контрольная группа - к культурам в 4,5 мл питательной среды 199 добавляли 0,5 мл раствора повреждающего агента в концентрации: пероксид водорода 0,5 мМ или хлорид кальция 15 мМ соответственно;

3-я опытная группа - к 4,0 мл питательной среды 199 добавляли 0,5 мл раствора повреждающего агента в той же концентрации, что и во 2-й группе, и 0,5 мл раствора фракции биорегуляторного комплекса.

После 5 суток культивирования хрусталики извлекали и исследовали спектрофотометрически. Опыты каждой экспериментальной серии повторяли трижды.

Определение степени помутнения хрусталиков крыс методом спектрофотометрии

Степень помутнения хрусталиков исследовали спектрофотометрически при длинах волн 340, 405, 490, 550, 630 нм. Хрусталики крыс помещали в 24-луночный планшет и в отсутствие водной фазы определяли интенсивность светорассеяния при указанных длинах волн.

Во всех опытах хрусталики глаз животных оставались прозрачными в течение всего времени культивирования в контрольных флаконах (в среде культивирования, без добавления повреждающих агентов).

Модели катарактогенеза на культурах хрусталиков глаз крыс in vitro

При исследовании воздействия биорегуляторного комплекса (БК) на развитие катарактогенеза в хрусталиках глаз крыс in vitro были поставлены следующие серии опытов:

№1 - питательная среда 199;

№2 - питательная среда 199, содержащая H₂O₂;

№3 - питательная среда 199, содержащая H₂O₂+раствор БК;

№4 - питательная среда 199, содержащая CaCl₂;

№5 - питательная среда 199, содержащая CaCl₂+раствор БК.

На фиг.1 показаны результаты спектрофотометрического исследования влияния биорегуляторного комплекса на катарактогенез в хрусталиках крыс, индуцированный воздействием пероксида водорода и хлорида кальция. По оси абсцисс указаны номера серий опытов, по оси ординат - величина оптической плотности. Справа - данные длины волн (нм). В каждой серии опытов показана величина оптической плотности для длин волн (слева направо): 630, 550, 490, 405 и 340 нм.

Данные серий №2, №3 (контроль-опыт) и №4, №5 (контроль-опыт) достоверны p<0.05.

Представленные на фиг.1 результаты свидетельствуют о том, что добавление в среду культивирования БК способствует увеличению прозрачности хрусталиков крыс приблизительно в два раза по сравнению с хрусталиками, которые культивировали в среде, содержащей катарактогенные агенты.

Таким образом, в настоящем исследовании, проведенном на культурах хрусталиков глаз крыс, было установлено, что применение биорегуляторного комплекса препятствует развитию катарактогенеза у животных in vitro.

В результате проведенных исследований установлено, что биорегуляторный комплекс оказывает ингибирующее действие на развитие катаракты, возникающей при нарушении работы основных ферментных систем хрусталика - перекисного окисления липидов и Ca²⁺-зависимых протеаз.

Исследование активности биорегуляторного комплекса в виде стимулирующего влияния на процессы регенерации кожи крыс

Ожоги у крыс вызывали на спине кипятком в течение 20 секунд. Наносилась стандартная ожоговая рана II-III A степени общей площадью 6 см² кожи и мягких тканей спины с предварительным удалением волосяного покрова.

В контроле (рану не обрабатывали) на 14 сутки после ожога наблюдали практически полную эпителизацию, струп прилегал неплотно к коже. Наблюдали незначительное воспаление в дерме и мышечном слое. Происходил некроз волосяных фолликулов. В мышечном слое наблюдались полости между волокнами, образовавшиеся в результате воспаления. Под эпителием были видны скопления нейтрофилов. Грануляционная ткань волокнисто-клеточная.

К 25 суткам образовался соединительнотканный рубец на месте ожога с незначительным присутствием нейтрофилов, наблюдали некроз волосяных фолликулов. Струп практичеси полностью отслоился.

В случае применения предложенного биорегуляторного комплекса наблюдали на 14 сутки после ожога некроз волосяных фолликулов, эпителизация не полная, струп плотно прилегает к поверхности раны. В коже наблюдается сильное воспаление с инфильтрацией нейтрофилов сразу под эпителием, в мышечном слое наблюдаются полости между волокнами в результате воспаления. Грануляционная ткань больше клеточная, чем волокнистая. Происходило образование сосудов в дерме.

На 25 сутки произошла полная эпителизация с выраженным многоклеточным эпителием, практически полное отслоение струпа. В дерме воспаление практически не наблюдается. Образуется клеточно-волокнистая грануляционная ткань, коллагеновые волокна не рыхлые. Волосяных фолликулов в области повреждения не наблюдалось.

Таким образом, предложенный биорегуляторный комплекс обладает специфической фармакологической активностью в виде стимулирующего влияния на процессы репаративной регенерации кожи, проявляющегося в заживлении ожоговой раны, снятия воспаления и стимуляции пролиферации эпителия кожи в зоне повреждения, а также фибробластов дермы.

В ранах с полной эпителизацией эпителий над ожоговой поверхностью отличался значительно большей толщиной по сравнению с рядом расположенными участками кожи.

Вывод: высокая эффективность предложенного комплекса в заживлении ожоговой раны III А степени, быстрое снятие воспаления и стимуляция пролиферации эпителия кожи в зоне повреждения и фибробластов дермы.

Предложенный способ лечения катаракты осуществляли следующим образом.

Концентрацию пептидной составляющей биорегуляторного комплекса в растворе устанавливали равной 0,1 мг/мл за счет разведения водой (квалификация Milli-Q). Затем методом последовательных разведений водой получали растворы с нужной концентрацией и добавляли CaCl₂ до концентрации 0,1 мг/мл (препарат "Антикатаракт").

Инсталлировали в конъюктивальную полость нейтральный раствор биорегуляторного комплекса в дозах (10^-8-10^-14) мг/мл. Инстилляции осуществляли в 9, 13 и 18 часов по 2 капли или спрей в оба глаза 2 раза с интервалом 5-7 мин курсом длительностью 2-5 месяцев с перерывом 10 дней каждые 30 дней.

Клинические исследования лечения катаракты глазными каплями на основе биорегуляторного комплекса

Состав капель: водный стерильный раствор биорегуляторного комплекса (c=10^-10 мг/мл), содержащий 0,1 мг/мл CaCl₂ («Антикатаракт»).

I группа (37 волонтеров - 37 глаз) с начальной возрастной катарактой и при отсутствии помутнений в хрусталике.

I. группа разделена на подгруппы:

1. Переднекапсулярная катаракта (9 больных - 18 глаз), возраст 40-59 лет. КОЗ от 0,4-0,8.

2. Кортикальная катаракта (8 больных - 16 глаз), возраст 48-67 лет, КОЗ от 0,6 до 0,9.

3. Заднекапсулярная катаракта (20 больных 40 глаз) возраст 55-72 года, КОЗ от 0,2 до 0,8.

II группа (8 больных - 6 глаз) с травматической катарактой.

Методы исследования:

1. Общеклинические методы исследования.

2. Биомикроскопическая фоторегистрация.

3. Фоторегистрация глазного дна.

4. УЗ-допплерография.

В I-й группе использовали глазные капли или спрей.

Капли инсталлировали в конъюктивальный мешок глаза по 2 капли 2 раза с интервалом в 5-7 минут в 9-00, 13-00, 18-00 часов, с перерывом 10 дней каждые 30 дней на протяжении 2-5 месяцев.

Спреем орошалась роговица глаз 2-3 впрыска 2 раза с интервалом в 5-10 минут, в том же режиме, что и капли.

Было проведено 4-кратное динамическое обследование (наружное обследование, КОЗ (коррегированная острота зрения), периметрия, пробы Ширмера и Норна.)

Результаты проведенных исследований на добровольцах следующие.

Динамика остроты зрения в обеих группах приведена в таблице. Острота зрения улучшилась. По возрастной катаракте «Передняя Капсула-7»: после лечения глазными каплями и спреем «Антикатаракт» КОЗ (коррегированная острота зрения) улучшилась на 3 строчки таблицы, до лечения острота зрения не коррегировалась.

«Кортикальные слои-7»: КОЗ после лечения равна 7 (зрение улучшилось на две строчки таблицы).

«Задняя капсула-19»: Возрастная катаракта: острота зрения улучшилась на две строчки таблицы. КОЗ до лечения 5, после лечения 7. (Таблица)

Травматическая катаракта: острота зрения улучшилась на одну строчку таблицы. КОЗ до лечения 5, после лечения 6. (Таблица)

  Динамика остроты зрения в зависимости от локализации и этиологии катаракты Этиология катаракты Локализация помутнения До лечения После лечения 0,2-0,4 0,5-0,7 0,8-1,0 0,2-0,4 0,5-0,7 0,8-1,0 Возрастная (33 больных) Передняя капсула (7) 3 - 4 - 3 4 Кортикальный слой (7) - 1 6 - - 7 Задняя капсула (19) 7 7 5 8 8 7 Травматическая катаракта (7 больных) - 2 5 - 1 6

Примеры лечения катаракты

Пример 1.

Пациент В. 32 года. Диагноз: травматическая катаракта с внутриглазным инородным телом (осложненная катаракта), правый глаз vis=0,1 н/к.

Назначен курс лечения препаратом «Антикатаракт» по следующей схеме: препарат инсталлировали в конъюктивальную полость в 9, 13 и 18 часов по 2 капли с интервалом в 5-7 мин. Курсом от 3 до 4 месяцев с перерывом 10 дней каждые 30 дней.

Через три месяца выявлено уменьшение помутнений в кортикальных слоях хрусталика, улучшение визуализации деталей глазного дна (по данным фоторегистрации на фундус-камере).

Острота зрения после лечения:

Правый глаз vis=0,6 н/к

Таким образом, при использовании препарата «Антикатаракт» у пациента наблюдалось значительное улучшение субъективных и объективных показателей зрения, что свидетельствует о частичном рассасывании катаракты и улучшении функции хрусталиков.

Пример 2.

Пациент 27 лет получил травму левого глаза отскочившим сучком на пилораме. Через 2 месяца отметил резкое снижение зрения. Диагноз: начальная травматическая катаракта левого глаза.

Показатели до лечения:

Правый глаз=0,3 со сф. -1,5=0,9-1,0.

Левый глаз=0,1 со сф. -2,0=0,7

Клинически в левом глазу выявляются травматический мидриаз, помутнения в передних кортикальных слоях и передней капсуле хрусталика. Пациенту проводят лечение препаратом «Антикатаракт» в левый глаз по следующей схеме: препарат инсталлировали в конъюктивальную полость в 9, 13 и 18 часов по 2 капли с интервалом в 5-7 мин. Курсом от 3 до 4 месяцев с перерывом 10 дней каждые 30 дней.

Показатели после лечения:

Левый глаз=0,2 со сф. -2.0=0,9-1,0.

После лечения пациент субъективно отмечает улучшение зрения, исчезновение «пелены» перед глазом. Острота зрения левого глаза с коррекцией=0,9-1,0.

Пример 3.

Пациент В. 67 лет. Диагноз: Начальная сенильная катаракта. Жалобы на снижение зрения в последний 9 лет, закапывала «Тауфон», эффекта не наблюдала.

Острота зрения до лечения vis=0,2c+3,0=0,5.

Пациенту проводят лечение препаратом «Антикатаракт» в оба глаза по следующей схеме: препарат инсталлировали в конъюктивальную полость в 9, 13 и 18 часов по 2 капли с интервалом в 5-7 мин курсом от 3 до 4 месяцев с перерывом 10 дней каждые 30 дней.

Через три месяца выявлено уменьшение помутнений в кортикальных слоях хрусталика (по данным биомикроскопии), а также плотность хрусталика (по данным УЗ-доплерографии от 90 у.е. до 70 у.е), улучшение визуализации деталей глазного дна.

Показатели после лечения: vis=0,4c+2,5=0,8

Таким образом, предложенный биорегуляторный комплекс - препарат «Антикатаракт» - обладает антикатарактальным действием, что приводит к уменьшению площади помутнений, уменьшению плотности вещества хрусталика и, как следствие, хрусталикового астигматизма. Данный препарат предупреждает прогрессирование катаракты, особенно травматического генеза, вызывает частичное или полное рассасывание помутнений в слоях хрусталика.

Исследования позволили предположить, что изменения в слоях хрусталика связаны с тонкими биохимическими процессами, протекающими на фоне лечения препаратом «Антикатаракт», и требуют дальнейшего изучения, особенно, если необходимо учитывать локализацию помутнений и этиологические механизмы, лежащие в основе развития катаракты.

Таким образом, препарат «Антикатаракт» в процессе лечения не уплотняет заднюю капсулу глаза и более эффективен, чем препарат «Вилензин».

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к биорегуляторному комплексу, обладающему регенеративным действием. Биорегуляторный комплекс, обладающий регенеративным действием, полученный из жабр посленерестового атлантического лосося (Salmo salar L.), активированного на продленный жизненный цикл симбиотическими личинками моллюска жемчужницы (Margaritifera margaritifera), содержащий пептиды и олигосахариды с определенными физико-химическими характеристиками. Способ получения биорегуляторного комплекса, заключающийся в том, что у выловленных после нереста атлантических лососей препарируют жабры и помещают их в воду или в водный раствор этанола, полученный экстракт жабр фильтруют, добавляют в фильтрат одноатомный алифатический спирт, оставляют до осаждения примесных веществ, выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха, растворяют в воде и очищают при определенных условиях. Способ лечения начальной катаракты. Вышеописанный биорегуляторный комплекс оказывает эффективное ингибирующее действие на развитие катаракты и обладает выраженным регенерирующим действием. 3 н. и 3 з. п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 6 пр.

1. Биорегуляторный комплекс, обладающий регенеративным действием, полученный из жабр посленерестового атлантического лосося (Salmo salar L.), активированного на продленный жизненный цикл симбиотическими личинками моллюска жемчужницы (Margaritifera margaritifera), содержащий пептиды и олигосахариды при содержании углеводов по отношению к пептидам 5-18 мас.%, имеющий размер частиц 80-220 нм в 0,1%-ном водном растворе при температуре 20°C и УФ-спектр с максимумом поглощения при 255-270 нм, с плечом при 200-229 нм и с соотношением интенсивности поглощения при 210 нм к интенсивности поглощения при 265 нм, равным 4,5-5,5, и следующие характеристики в 0,1%-ном водном растворе: изоэлектрическую точку 3,8-4,4 и дзета потенциал - 30-40 мВ при pH 6,5 и 1-3 мВ при pH 4,2.

2. Способ получения бирегуляторного комплекса по п.1, заключающийся в том, что у выловленных после нереста атлантических лососей препарируют жабры и помещают их в воду или в водный раствор 10-40% этанола, полученный экстракт жабр фильтруют, добавляют в фильтрат одноатомный алифатический спирт при соотношении фильтрата и спирта от 3/1 до 1/3 и оставляют до осаждения примесных веществ, выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха, растворяют в воде и очищают с помощью колоночной хроматографии.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве одноатомного алифатического спирта используют этанол, или пропанол, или изопропанол.

4. Способ лечения начальной катаракты, заключающийся в том, что вводят водный раствор хроматографически очищенной фракции биорегуляторного комплекса по п.1 с концентрацией 10^-8-10^-14 мг/мл в оба глаза в конъюктивальную полость в эффективном количестве три раза в день курсом длительностью 2-5 месяцев с перерывом 5-10 дней через каждые 30 дней.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что раствор вводят путем закапывания каждый раз в два приема по 1-2 капли в каждый глаз с интервалом 5-7 минут.

6. Способ по п.4, отличающийся тем, что раствор вводят путем орошения спреем по два впрыска дозами по 30-70 мкл.