СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ЦИМБИДИУМА in vitro Российский патент 2014 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения растений цимбидиума in vitro.

Известен способ размножения цимбидиума in vitro (См: Mohammad Musharof Hossain, Madhu Sharma, Promila Pathak Cost effective protocol for in vitro mass propagation of Cymbidium aloifolium (L.) Sw. a medicinally important orchid // Engineering in Life Sciences. 2009. - V. 9, №. 6. - P. 444-453). В качестве первичного экспланта использовали семена, которые стерилизовали последовательно в 0,1%-ном растворе сулемы (HgCL₂) с 1-2 каплями 20% раствора детергента Teepol в течение 10 минут, затем в 70% этиловом спирте в течение 30 секунд, после чего высаживали на среду Mitra et al., дополненную сахарозой 30 г/л и регулятором роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина, и культивировали в световой комнате при температуре 25±2°C и 14/10-часовом фотопериоде с освещением белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 3000 лк до образования псевдобульб. Процесс ризогенеза индуцировали добавлением в питательную среду индолилуксусной кислоты в концентрации 0,5 мг/л. Растения-регенеранты высаживали в грунт для укоренения, состоящий из смеси керамзита, древесного угля, вермикулита и торфяного мха в соотношении 1:1:0.5:0.5, и выращивали при температуре 25-30°C и относительной влажности 60-70%.

Недостатком данного способа является невысокий коэффициент размножения.

Технический результат заключается в повышении выхода размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся псевдобульб при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.

Технический результат достигается тем, что в способе размножения цимбидиума in vitro, включающем введение стерильных эксплантов в культуру in vitro, микроразмножение путем отделения псевдобульб от экспланта и посадки на питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение псевдобульб в грунте, после введения в культуру in vitro образовавшиеся псевдобульбы отделяют от экспланта и переносят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 30 г/л сахарозы и раствор препарата эпибрассинолида в концентрации 0,001 мг/л. Псевдобульбы, имеющие корнепобеги, отделяют от эксплантов, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из мха и древесной коры.

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве первичного экспланта используют семена, которые стерилизуют последовательно в 0,1%-ном растворе сулемы (HgCl₂) с 1-2 каплями 20% раствора детергента Teepol в течение 10 минут, затем в 70% этиловом спирте в течение 30 секунд, после чего высаживают на среду Мурасиге и Скуга и культивируют в световой комнате при температуре 25°C с освещением белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 3000 лк до образования псевдобульб. Отделяют псевдобульбы от эксплантов и высаживают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 30 г/л сахарозы и 0,001 мг/л эпибрассинолида. Состав среды, использованный при культивировании псевдобульб, является стандартным для микроразмножения растений в культуре in vitro, за исключением подобранных в предварительных опытах концентраций сахарозы (табл.1) и эпибрассинолида (табл.2). Культивирование осуществляют при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью около 3000 лк и при температуре 25°C (физические условия выращивания близки к оптимальным для культивирования эксплантов растений). При выращивании эксплантов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга используют 0,001 мг/л эпибрассинолида. В течение 4 недель культивирования образуется максимальное число псевдобульб - 17 штук/эксплант (табл.2).

В последующем псевдобульбы с корнепобегами отделяют от экспланта, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и переносят для укоренения в условия ex vitro в грунт, состоящий из смеси мха и древесной коры в соотношении 1:1. Данная обработка была выбрана как наиболее способствующая укоренению ex vitro пробирочных растений цимбидиума (табл.3). После укоренения размноженные растения выращивают обычным способом.

В результате использования данного способа клонального микроразмножения цимбидиума образовывалось 17 псевдобульб/эксплант независимо от сезонности взятия растения-донора. Процент укоренения в условиях ex vitro составил 80%, что приводит к высокой жизнеспособности растений-регенерантов.

Таким образом, данный способ размножения цимбидиума in vitro повышает выход размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся псевдобульб при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.

Таблица 1 сахарозы, г/л Псевдобульбы, штук/эксплант 10 9,8±0,4 20 12,1±0,3 30 14,6±0,2 40 13,8±0,3 50 13,1±0,3 60 Концентрация 11,3±0,4 70 10,6±0,4 80 9,9±0,4 90 9,6±0,5 100 9,3±0,5

Таблица 2 Вариант среды
Псевдобульбы Концентрация эпибрассинолида, мг/л 0,0001 0,001 0,01 0,1 1 10 Количество, штук/эксплант 15,0±0,6 17,5±0,8 13,2±0,5 12,9±0,7 12,3±0,8 10,2±0,5

Таблица 3 Режим обработки
Ризогенез X Индолилуксусная кислота, мг/л 0,1 1 15 минут 30 минут 15 минут 30 минут Процент укоренения 20,1±3,1 30,5±4,3 80,3±5,2 40,7±3,7

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения цимбидиума in vitro включающий введение стерильных эксплантов в культуру in vitro, микроразмножение путем отделения псевдобульб от экспланта и посадки на питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение псевдобульб в грунте, где после введения в культуру in vitro образовавшиеся псевдобульбы отделяют от экспланта и переносят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга,содержащую 30 г/л сахарозы и раствор препарата эпибрассинолида в концентрации 0,001 мг/л, затем псевдобульбы, имеющие корнепобеги, отделяют от эксплантов, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и укореняют в условия ex vitro в грунте с добавлением мха и древесной коры. Изобретение позволяет повысить выход размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся псевдобульб, при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.3 табл.

Способ размножения цимбидиума in vitro, включающий введение стерильных эксплантов в культуру in vitro, микроразмножение путем отделения псевдобульб от экспланта и посадки на питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение псевдобульб в грунте, отличающийся тем, что после введения в культуру in vitro образовавшиеся псевдобульбы отделяют от экспланта и переносят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 30 г/л сахарозы и раствор препарата эпибрассинолида в концентрации 0,001 мг/л, затем псевдобульбы, имеющие корнепобеги, отделяют от эксплантов, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из мха и древесной коры.