СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ С.-Х. ПТИЦ С ПОМОЩЬЮ ПОЛИКАТИОННОГО СОЕДИНЕНИЯ "ТРИВИРОН" (TRIVIRON) Российский патент 2014 года по МПК A61K31/00 A61K31/495 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и предназначено для лечения у сельскохозяйственной птицы вирусных заболеваний, в основе которых лежат РНК вирусы (вирусы гриппа, острая респираторная инфекция, гепатит, синий гребень, инфекционный энтерит, трансмиссивный энтерит, реовирусный энтеронефрит, теносиновит, вирусный артрит, инфекционный бронхит кур, болезнь Гамборо, пневмовирус и т.д.).

В настоящее время известен ряд противовирусных препаратов (они принадлежат к различным классам химических соединений), рекомендуемых к применению в медицинской практике. Однако вследствие их высокой стоимости только некоторые из них испытаны в качестве терапевтических средств при вирусных заболеваниях, как правило при лечении дорогостоящих пород собак и кошек. В ряде случаев, когда отсутствуют препараты, специфичные для конкретных вирусных инфекций, для лечения вирусных заболеваний используются иммуномодуляторы. Однако такие препараты, применяемые в медицинской практике, также имеют высокую стоимость, что исключает возможность их широкого применения в ветеринарной практике.

Соединения, способные расщеплять РНК (искусственные РНКазы), обладают противовирусной активностью в отношении РНК, содержащих вирусы (Goncharova Е.Р. et. al. Inactivation of the tick-borne encephalitis virus by RNA-cleaving compounds // J. Mol. Gen. Med., 2011, V. 5, P. 266-272; Fedorova A.A. et.al. Inactivation of a non-enveloped RNA virus by artificial ribonucleases: Honey bees and acute bee paralysis virus as a new experimental model for in vivo antiviral activity assessment // Antiviral Res. 2011 V. 91, P. 267-277; RU 2399388, 20.09.2010). В частности, искусственные РНКазы на основе производных 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана, а именно 1,5-бис-(4-додецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан дихлорид дибромид, обладают противовирусной активностью по отношению к вирусам гриппа A/WSN/33 (H1N1) и вирусу клещевого энцефалита (штамм Софьин, RU 2399669, 20.09.2010). Однако концентрация этого соединения, необходимая для инактивации указанных вирусов, составляла 20 мкМ, что почти в два раза превышало концентрацию, при которой наблюдались токсические эффекты на клеточной культуре (12 мкМ).

Некоторые другие производные бисчетвертичных солей 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана, будучи ковалентно присоединенными к различного рода поверхностям, придают полученным таким образом материалам противовирусные свойства.

Известен препарат Арговит (RU 2147237, 10.04.2000). Данный препарат обладает широким спектром антимикробного действия в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий. Проявляет вирулицидную (противовирусную) и фунгицидную (противогрибковую) активность. К недостаткам, помимо высокой стоимости, следует отнести тот факт, что препарат выпускается в виде стабилизированного концентрированного 20% раствора (содержание серебра в арговите в пересчете на 100% сухой препарат составляет 5-7%). Форма выпуска препарата накладывает значительные ограничения на условия и сроки хранения препарата. Так, при длительном хранении и особенно под воздействием таких факторов, как свет, колебания температуры, замораживание, происходит агрегация кластерных частиц с образованием коллоидных, малоактивных частиц серебра. Возможно также появление пленки металлического серебра на поверхности концентрата. Частицы серебра не всасываются, что также ограничивает терапию системных и респираторных вирусных инфекций птиц путем выпаивания препарата.

Наиболее близким аналогом заявленного изобретения является способ профилактики и лечения болезней птиц бактериальной и вирусной этиологии, в котором больной птице закапывают в клюв по 1-7 крупинок в растворенном виде комплексное гомеопатическое средство, содержащее Lachesis, Echinacea, Aconitum, Bryonia, Belladonna, взятые поровну, через 0,5-6 ч в течение 1-6 недель (RU 2209076, 27.07.2003).

Техническим результатом настоящего изобретения является расширение арсенала противовирусных средств для нужд ветеринарии, повышение эффективности лечения вирусных заболеваний у сельскохозяйственной птицы, в основе которых лежат РНК вирусы, и обеспечение возможности профилактики и лечения данных заболеваний, после того как они уже возникли, а также возможность делать это используя ввод через систему поения перорально, а не путем инъекций внутримышечно.

Указанный технический результат достигается в способе лечения вирусных заболеваний птиц, вызванных РНК вирусами, в котором в организм птиц вводят поликатионное соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида, которое растворяют в муравьиной 85%-ной кислоте, доводя концентрацию до 3 грамм на 1 литр кислоты, получая маточный раствор, затем маточный раствор разводят водопроводной водой до концентрации 10 мл маточного раствора на 1 литр воды и вводят перорально птице.

Соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00015 мл маточного раствора на 1 голову птиц в первые 3 дня и 0,0003 мл маточного раствора в течение последующих двух дней.

Соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,0003 мл маточного раствора на 1 голову птиц в первые 5 дней и 0,00045 мл маточного раствора на голову птиц в течение последующих двух дней.

Соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00045 мл маточного раствора на голову птиц в первые 5 дней и 0,0009 мл маточного раствора в течение последующих трех дней.

Соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00045 мл маточного раствора на голову птиц в первые 5 дней и 0,001 мл в течение последующих двух дней.

Соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00045 мл маточного раствора на голову птиц в первые 5 дней и 0,0009 мл в течение последующих пяти дней.

Соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00025 мл маточного раствора на голову птиц в первые 5 дней и 0,001 мл в виде маточного раствора в течение последующих трех дней.

Соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00025 мл маточного раствора на голову в первые 5 дней и 0,001 мл в течение последующих двух дней.

Соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00025 мл маточного раствора на голову птиц в первые 6 дней и 0,001 мл в течение последующих трех дней.

Введение препарата 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида осуществляют следующим образом.

Сначала готовят маточный раствор путем растворения препарата в муравьиной 85%-ной кислоте, доводя концентрацию до 3 грамм препарата на 1 литр кислоты, потом маточный раствор разводят водопроводной водой до концентрации 10 мл маточного раствора на 1 литр воды. Разведенный с водой маточный раствор вводится в систему водопоения, обеспечивая дозировку маточного раствора =0,00015-0,001 мл на голову в день в течении 5-10-ти дней.

Соединение в нерастворенном виде хранится и сохраняет свои свойства в течении 3-х лет.

В отличие от аналогов вводится перорально, что делает возможным применение его в промышленном птицеводстве для лечения вирусных заболеваний птиц.

Поликатионное соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида (C₄₇H₁₀₀Br₄N₄) относится к классу поликатионных насыщенных гетероциклических соединений, содержащих гидрофобные алкильные фрагменты, и является производным 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана и имеет следующую структурную формулу:

Ниже приведена схема синтеза 1,5-бис-(4-додецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида (I) (далее препарат в сухом виде либо в растворенном в 85%-ной муравьиной кислоте с названием "TRIVIRON"):

Способ синтеза/получения производного 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана со структурной формулой

заключается в том, что синтез осуществляют при 55°C в течении 24 ч и мольном соотношении следующих компонентов: 1,5-дибромпентана - бромид 1-тетрадецил-4-аза-1-азониабицикло[2.2.2]октана 1:2,16, в метаноле как растворителе, с выходом целевого соединения, превышающим 89%.

Пример получения препарата "TRIVIRON" (поликатионного соединения 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида (I)).

Бромид 1-тетрадецил-4-аза-1-азониабицикло[2.2.2]октана (26,3 г, 65 ммоль) растворяют при нагревании до 55°C в 20 мл метанола. К раствору при перемешивании на магнитной мешалке добавляют двумя порциями с интервалом 12 ч 1,5-дибромпентан (6,9 г, 30 ммоль). После добавления последней порции реакционную смесь перемешивают 24 ч при 55°C. После охлаждения до комнатной температуры (18-22°C) к реакционной смеси добавляют 20 мл ацетонитрила, выпавший осадок отфильтровывают и высушивают в вакууме (17,5 г, 56%). Маточный раствор упаривают на ротационном испарителе, к вязкому сиропообразному остатку добавляют 40 мл ацетонитрила, перемешивают на магнитной мешалке при кипении с обратным холодильником 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры (18-22°C) выпавший осадок отфильтровывают и высушивают в вакууме (10,3 г, 33%). Полученные осадки объединяют. Выход 27,8 г (89,1%).

Спектр ЯМР ¹H, δ, м.д. (J, Гц): 0.93 (уш. т, 6Н, CH ₃(CH₂)₁₁N⁺, J 6.6), 1.32-1.45 (м, 36H, CH₃(CH ₂)₉CH₂CH₂N⁺); 1.32 (м, 2H, ⁺NCH₂CH₂CH ₂CH₂CH2N⁺); 1.88 (м, 4H, CH₃(CH₂)₉CH ₂CH₂N⁺); 1.98 (м, 4H, ⁺NCH₂CH ₂CH₂CH ₂CH₂N⁺); 3.62 (м, 4H, CH₃(CH₂)₁₀CH ₂N⁺); 3.75 (м, 4H, CH₂CH ₂N⁺); 4.07-4.12 (м, 24H, ⁺N(CH ₂CH ₂)₃N⁺).

Спектр ЯМР ¹³C, δ, м.д.: 12.95 (2C, CH₃(CH₂)₁₁N⁺); 21.64 (2C, CH₃ CH₂(CH₂)₁₀N⁺); 22.21 (2C, CH₃CH₂ CH₂(CH₂)₉N⁺); 25.63 (4C, ⁺NCH₂ CH₂CH₂ CH₂CH₂N⁺, CH₃(CH₂)₂ CH₂(CH₂)₈N⁺); 28.66 (2C, CH₃(CH₂)₃ CH₂(CH₂)₇N⁺); 28.95 (4C, CH₃(CH₂)₄ CH₂ CH₂(CH₂)₅N⁺); 29.10 (3C, ⁺N(CH₂)₂ CH₂(CH₂)₂N⁺, CH₃(CH₂)₆ CH₂CH₂(CH₂)₃N⁺); 29.21 (2C, CH₃(CH₂)₈ CH₂(CH₂)₂N⁺); 31.54 (2C, CH₃(CH₂)-CH₂CH₂N⁺); 64.24 (2C, CH₃(CH₂)₁₀ CH₂N⁺); 50.81 и 51.03 (6C, ⁺N(CH₂ CH₂)₃N⁺); 64.71 (2C, CH₂ ⁺N(CH₂CH₂)₃N⁺).

Препарат "TRIVIRON" применяется для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний сельскохозяйственной птицы, в основе которых лежат РНК вирусы, данный препарат вводят перорально, что позволяет существенно оздоровить птицу, снизить ее падеж, исключить задержку привесов и т.п.

Примеры оценки противовирусной активности препарата "TRIVIRON" при испытаниях на сельскохозяйственной птице.

Пример №1. Применение препарата "TRIVIRON" на промышленном стаде с целью снижения смертности на поголовье бройлеров, пораженном инфекционной болезнью Ньюкасла.

Смертность на птицефабрике была с 28 дней - 0,7% в день, птица была угнетена, корм не потребляла, помет был жидкий.

На вскрытии патологоанатомические признаки были: геморрагическое воспаление трахеи, аэросаккулиты, энтероколиты, геморрагический провентрикулит.

Применение препарата "TRIVIRON" начали на поголовье в 30 000 голов в возрасте 31 день. Препарат выпаивали круглосуточно, чтобы обеспечить потребление всем поголовьем препарата в течение 5 дней. Сначала готовили маточный раствор путем растворения в муравьиной кислоте до концентраци 3 грамма препарата на 1 литр 85%-ной муравьиной кислоты, потом растворенное соединение разводили водопроводной водой до концентрации 10 мл маточного раствора на 1 литр воды, препарат вводили в систему водопоения, обеспечивая количество маточного раствора препарата 0,00015 мл на 1 голову в первые 3 дня и 0,0003 мл маточного раствора в течение последующих двух дней.

Падеж/смертность снизился через трое суток применения препарата до 0,3% в день, т.е. более чем в 2 раза, птица начала потреблять корм.

При патологоанатомическом вскрытии павшей птицы обнаружили уменьшение количества фибринозных отложений в грудной и брюшной полости.

Через пять дней лечения смертность уменьшилась до 0,2% в день.

В опытной группе не отмечали сероконверсии в отношении вируса болезни Ньюкасла, т.е. прироста антител в ответ на воздействие вируса.

Пример №2. проводился на предприятии с содержанием продуктивного родительского поголовья кросса Хаббард, пораженного вариантным штаммом Инфекционного брохита птиц (диагноз был подтвержден с помощью вирусологических исследований). Препарат применяли на поголовье птицы в возрасте 50 недель в течение 7 дней с водой. Сначала готовили маточный раствор путем растворения в муравьиной кислоте до концентрации 3 грамма препарата на 1 литр 85%-ной муравьиной кислоты, потом растворенное соединение разводили водопроводной водой до концентрации 10 мл маточного раствора на 1 литр воды, препарат вводили в систему водопоения, обеспечивая в дозе 0,0003 мл маточного раствора на голову препарата в первые 5 дней и 0,0045 мл маточного раствора на голову в течение последующих двух суток

При патологоанатомическом наблюдении были выявлены следующие изменения - снижение влияния нефропатогеного вируса, т.е. отложения уратов (солей мочевой кислоты) в мочеточниках, общее прогрессирующее количество ложной несушки также снизилось, имеющиеся кисты на яичниках остались, а продуктивный период стада продлился без естественного (по возрасту) снижения до 63 недель. Количество фибринозных отложений в грудной и брюшной полостях птицы обнаруживали реже, чем до лечения. Количество деформированного яйца и неоплодотворенного также уменьшилось. Состояние печени также улучшилось - гепатозы и холециститы обнаруживали реже, чем до лечения.

Пример №3. Целью применения было использование препарата "TRIVIRON" как лечебного средства против вирусной пневмовирусной инфекции (ART): пневмовирус был одной из ведущих причин, вызывающих гибель птицы в предубойный период. Диагноз, поставленный на фабрике при вскрытии, был подтвержден при лабораторных исследованиях отобранного патматериала.

Сначала готовили маточный раствор путем растворения в муравьиной кислоте до концентраци 3 грамма препарата на 1 литр 85%-ной муравьиной кислоты, потом, растворенное соединение разводили водопроводной водой до концентрации 10 мл маточного раствора на 1 литр воды, препарат вводили в систему водопоения в дозе 0,00045 мл маточного раствора на голову препарата в первые 5 дней и 0,0009 мл маточного раствора последующие 3 дня.

Результатом использования препарата было снижение падежа в момент пикового отхода птицы в возрасте, начиная с 24 дня выращивания, а также улучшение показателей сохранности птицы в целом, начиная с 14 дня выращивания и до убоя. Параллельно контролировали показатели продуктивности бройлеров: сохранность и среднесуточный привес.

В закрытых партиях наблюдалась положительная тенденция по увеличению сохранности, среднесуточного привеса и конверсии корма в группах, где выпаивался препарат "TRIVIRON", особенно там, где он выпаивался, начиная с 22-24 дней, а именно:

- по сравнению с контрольными птичниками средний показатель сохранности в птичниках, где применялся препарат "TRIVIRON", на 2,31% был выше;

- по сравнению с контрольными птичниками показатель среднесуточного привеса в птичниках, где применялся препарат "TRIVIRON", на 1,44 грамма был выше.

Опыт клинических испытаний препарата "TRIVIRON" на птицефабриках, не благополучных по вирусным инфекциям, вызываемым РНК вирусами приведен в таблице 1. В результате мы отметили результат от введения препарата "TRIVIRON" - повышение процента сохранности по закрытым партиям (таблица 1).

Таблица 1 №
примера РНК инфекционное заболевание Сохранность в опытной группе с препаратом "TRIVIRON" Сохранность в контрольной группе без препарата "TRIVIRON" Дозировки маточного раствора Пример №4 Инфекционный бронхит кур 95% 91,1% 0,00045 мл на голову в первые 5 дней и 0,001 мл вторые 2 дня. Пример №5 Болезнь Гамборо 94,7% 89,2% 0,00045 мл в первые 5 дней и 0,0009 мл вторые 5 дней Пример №6 Пневмовирус 93,8% 89,1% 0,00025 мл на голову в первые 5 дней и 0,001 мл вторые 3 дня Пример №7 Реовирус 96,1 90,7% 0,00025 мл на голову в первые 5 дней и 0,001 мл вторые 2 дня. Пример №8 Пневмовирус 97% 92,1% 0,00025 мл на голову в первые 6 дней и 0,001 мл вторые 3 дня

Таким образом, препарат "TRIVIRON" обладает выраженным противовирусным действием по отношению к вирусным заболеваниям птиц, в основе которых лежат РНК вирусы.

Использование препарата "TRIVIRON" позволяет справляться с большим спектром инфекционных заболеваний, в основе которых лежат РНК вирусы. Эффективность его подтверждается большим количеством проведенных экспериментов на фабриках. Отличительной особенностью его является возможность не профилактировать и лечить данные заболевания, после того как они уже возникли, а также возможность делать это используя ввод через систему поения перорально, а не путем инъекций внутримышечно. К преимуществом относится также отсутствие побочных эффектов.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и направлено на расширение арсенала противовирусных средств для нужд ветеринарии. Способ лечения вирусных заболеваний птиц, вызванных РНК вирусами, характеризуется тем, что в организм птиц вводят поликатионное соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида, которое растворяют в муравьиной 85%-ной кислоте, доводя концентрацию до 3 грамм на 1 литр кислоты, получая маточный раствор, затем маточный раствор разводят водопроводной водой до концентрации 10 мл маточного раствора на 1 литр воды и вводят перорально птице. Изобретение обеспечивает противовирусное и антибактериальное действие, повышение эффективности лечения и профилактики вирусных заболеваний у сельскохозяйственной птицы, вызванных РНК вирусами, а также возможность введения лечебного раствора через систему поения перорально. 8 з.п ф-лы, 1 табл., 8 пр.

1. Способ лечения вирусных заболеваний птиц, вызванных РНК вирусами, характеризующийся тем, что в организм птиц вводят поликатионное соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида, которое растворяют в муравьиной 85%-ной кислоте, доводя концентрацию до 3 грамм на 1 литр кислоты, получая маточный раствор, затем маточный раствор разводят водопроводной водой до концентрации 10 мл маточного раствора на 1 литр воды и вводят перорально птице.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00015 мл маточного раствора на 1 голову птиц в первые 3 дня и 0,0003 мл маточного раствора в течение последующих двух дней.

3. Способ по п.1, характеризующийся тем, что соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,0003 мл маточного раствора на 1 голову птиц в первые 5 дней и 0,00045 мл маточного раствора на голову птиц в течение последующих двух дней.

4. Способ по п.1, характеризующийся тем, что соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00045 мл маточного раствора на голову птиц в первые 5 дней и 0,0009 мл маточного раствора в течение последующих трех дней.

5. Способ по п.1, характеризующийся тем, что соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00045 мл маточного раствора на голову птиц в первые 5 дней и 0,001 мл в течение последующих двух дней.

6. Способ по п.1, характеризующийся тем, что соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00045 мл маточного раствора на голову птиц в первые 5 дней и 0,0009 мл в течение последующих пяти дней.

7. Способ по п.1, характеризующийся тем, что соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00025 мл маточного раствора на голову птиц в первые 5 дней и 0,001 мл в виде маточного раствора в течение последующих трех дней.

8. Способ по п.1, характеризующийся тем, что соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00025 мл маточного раствора на голову в первые 5 дней и 0,001 мл в течение последующих двух дней.

9. Способ по п.1, характеризующийся тем, что соединение 1,5-бис-(4-тетрадецил-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан-1-ил)пентан тетрабромида вводят из расчета 0,00025 мл маточного раствора на голову птиц в первые 6 дней и 0,001 мл в течение последующих трех дней.