ПЕПТИДНЫЕ АГОНИСТЫ GLP-2 Российский патент 2015 года по МПК C07K14/605 A61K38/26 A61P1/00 A61P3/00 

Область изобретения

Изобретение относится к новым соединениям с агонистической активностью к рецепторам GLP-2, к фармацевтическим композициям, содержащим их, и к применению соединений для изготовления лекарственных средств для лечения заболеваний.

Предшествующий уровень техники

Глюкагоноподобный пептид 2 (GLP-2) представляет собой содержащий 33 аминокислоты гормон желудочно-кишечного (GI) тракта, который продуцируется энтероэндокринными клетками в тонком и толстом кишечнике и высвобождается в кровообращение после приемов пищи. GLP-2 также экспрессируется в коре головного мозга и астроцитах. GLP-2 осуществляет свои биологические ответы через специфические рецепторы GLP-2. GLP-2 происходит из проглюкагона, обработанного прогормон-конвертазой (PC) 1/3. Эта переработка также приводит к GLP-1, глицентину и оксинтомодулину. При обработке в альфа-клетках поджелудочной железы посредством РС-2 обработка проглюкагона приводит к глюкагону.

В общем GLP-2 координирует широкий ряд важных ответов GI, включая трофический эффект слизистой оболочки и увеличение поглощение и усвоения питательных веществ в кишечнике (Lovshin, J. and D.J.Drucker, Ped. Diabetes, 1(1):49-57, 2001); противовоспалительные активности; заживление и восстановление слизистой оболочки; уменьшение кишечной проницаемости для бактерий; и увеличение скорости мезентериального кровообращения (Bremholm, L. et al.Scan. J. Gastro. 44(3):314-319, 2009). Ожидается, что такие свойства обеспечат терапевтические преимущества при разных состояниях.

GLP-2 играет определенную роль в кишечнике до рождения. В различных исследованиях новорожденных человека и животного и младенцев была изучена роль GLP-2 в развитии кишечника. Обнаружено, что GLP-2 присутствует в пуповинной крови человека при рождении с уровнями, сравнимыми с уровнями у взрослого человека натощак. (Bode, S., et at. Neonatology 91(1) 49-53, 2007). GLP-2 секретируется в ответ на кормление и считается, что механизм, при помощи которого секретируется GLP-2, устанавливается у новорожденных людей в 24 недели. (Yoshikawa, H., et al. Pediatrics Intl. 48(5):464-469, 2006). GLP-2 и другие происходящие из проглюкагона пептиды играют роль в нормальном развитии кишечника и переработке питательных веществ. (Amin, H., et al. Pediatrics 121(1):e180-e186, 2008). Также было установлено, что уровни GLP-2 снижены у преждевременно родившихся младенцев с пищевой непереносимостью. Поэтому GLP-2 может быть терапевтическими полезным для таких преждевременно родившихся младенцев. (Ozer, E.A., et al. J. Trop. Pediatr. 55(4):276-277, 2009). Некротизирующий энтероколит (NEC) представляет собой еще одно состояние, ассоциированное с преждевременно родившимися младенцами, и GLP-2 ассоциирован с защитой против NEC у крыс и свиней. (Izumi, H., et al. J. Nutr. 139(7):1322-1327, 2009 and Sangild, P.T., et al. Gastroenterology. 130(6):1776-1792, 2006). Парентерально питающиеся новорожденные свинки страдают от недостатка аргинина. Поросята, которые получали дополнительные вливания GLP-2, демонстрировали улучшенные уровни синтеза аргинина, а также улучшения слизистой массы и высоты ворсинок в тонком кишечнике. (Urschel, K.L, etal. J. Nutr. 137:601-606, 2007).

GLP-2 может быть терапевтически полезен для пациентов с различными состояниями кишечника, включающими повреждение кишечника и кишечную недостаточность. Более конкретно: предполагается, что заболевания, включающие нарушение всасывания, воспаление и/или повреждение слизистой оболочки, могут быть облегчены посредством лечения GLP-2. Обзор статей, дающих общее представление о терапевтических эффектах GLP-2, включает Ziegler, T.R., et al. J Parenter. Enteral Nutr. 23(6 Suppl):S174-S183, 1999; Drucker, D.J., et al. J Parenter. Enteral Nutr. 23(5 Suppl):S98-100, 1999; and Estall and Drucker, Ann. Rev. Nutr. 26:391-411, 2006.

Воспаление является симптомом колита, и, как было обнаружено, функциональные изменения в кишечнике, которые сохраняются даже после прекращения воспаления, включают увеличение GLP-2 в иммунореактивных L-клетках. (Lomax, A.E., et al. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 292:G482-G491, 2007). Лечение колита мышей GLP-2 приводило к реверсированию потери массы, снижению экспрессии интерлейкина-1 и увеличению длины толстой кишки, глубины кишечных крипт и площади слизистой оболочки. Это демонстрирует, что GLP-2 может способствовать заживлению кишечника даже при наличии активного воспаления кишечника. (Drucker, D.J., et al. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 276(1):G79-G91, 1999). Глютеновая болезнь также включает воспаление кишечника. Исследования людей с глютеновой болезнью показывают, что GLP-2 может являться частью механизма заживления слизистой оболочки для пациентов с глютеновой болезнью. (Caddy, G.R., et al. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 18(2):195-202, 2006). Мыши с колитом демонстрировали уменьшенное воспаление после лечения GLP-2. Кроме того, механизм противовоспалительной активности представляет собой GLP-2-активацию супрессора цитокинового сигнального пути (SOCS) 3. (Ivory, C.P.A., et al. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 295:G1202-G1210, 2008). Так как SOCS3 может быть вовлечен в подавление опухоли (Lund, P.К. and R.J. Rigby, Gastroenterology 131(1):317-319, 2006), GLP-2-активация пути SOCS3 показывает, что GLP-2 может обладать защитными эффектами против раковых заболеваний кишечника.

Барьерная функция эпителиального слоя тонкого кишечника имеет отношение к ряду расстройств. Примеры включают сепсис и бактериальный перитонит.GLP-2 снижает проницаемость эпителиальной выстилки тонкого кишечника, а также уменьшение апоптоза в криптах и ворсинах в тонком кишечнике (Lovshin and Drucker). Защитное воздействие GLP-2 на барьерную функцию эпителиальной выстилки было показано на Ожеговых пациентах в Китае. (Wang, S.L. Zhonghua Shao Shang Za Zhi 24(5):396-9, 2008). При остром панкреатите имеет место генерализованный воспалительный ответ, и проницаемость кишечника возрастает, что приводит к увеличению транспорта бактерий через эпителий кишечника. Лечение GLP-2 крыс с острым панкреатитом снижало проницаемость кишечника. (Kouris, G.J., et al. Am. J. Surgery 181(6):571-575, 2001). Кроме того, введение GLP-2 мышам с острым панкреатитом улучшало иммунологическую функцию кишечника. (Kong, L.S., et al. Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue. 21(2):103-106, 2009). Вызванное стрессом снижение барьерной функции кишечника у мышей также было улучшено при лечении GLP-2 (Cameron, H.L. and M.H. Perdue. J Pharmacol Exp Ther. 314(1):214-220, 2005). Более конкретно, было установлено, что лечение GLP-2 улучшает барьерную функцию, воздействуя как через парацеллюлярные, так и трансцеллюлярные пути. (Benjamin, M.A., et al. Gut 47:112-119, 2000). Пониженная барьерная функция также была вовлечена в немедленную гиперчувствительность и аллергическое воспаление поздней фазы. (Cameron, H.L, et al. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 284(6):G905-G912, 2003). Кишечная барьерная функция подорвана при диабете и ожирении у мышей, что приводит к метаболическим расстройствам у таких мышей. Увеличение продуцирования эндогенного GLP-2 у таких мышей приводит к улучшению кишечной барьерной функции. (Cani, P.D., et al. Gut 58:1091-1103, 2009).

Было показано, что нарушение всасывания у пожилых людей, которое, как считают, способствует недоеданию в этой популяции, реверсируется GLP-2. (Drozdowski, L. and A.B.R. Thomson, World J. Gastroenterol. 12(47):7578-7584, 2006). К тому же GLP-2 регулирует поглощение липидов в кишечнике, а также сборку и секрецию богатых триглицеридами липопротеинов из энтероцитов кишечника. (Hsien, J., et al. Gastroentorology 137(3):997-1005, 2009). Поглощение липидов в кишечнике улучшалось у людей во время введения GLP-2, свидетельством чего были повышенные концентрации триглицеридов и свободных жирных кислот в плазме после приема пищи. (Meier, J.J., et al. Gastroenterology 130(1):44-54, 2006). Эти результаты позволяют предложить GLP-2 в качестве лечения для стеатореи.

Так как GLP-2 секретируется в кишечнике в ответ на потребление пищи, когда потребление энергии у пациента является отличным от энтерального, недостаток GLP-2 может приводить к различным побочным эффектам в кишечнике. Дисфункция кишечника часто сопровождает рак и его лечение. Показано, что у детей, подвергшихся лечению рака, если потребление энергии было энтеральным, то секреция GLP-2 оставалась нормальной. (Andreassen, B.U., et al. J. Ped. Gastroenterol. Nutr. 40(1):48-53, 2005). У недоношенных младенцев, кишечники которых развились неполностью, питание часто является главным образом парентеральным с незначительным энтеральным для стимулирования развития кишечника. Секреция GLP-2 является важной для такого развития, и было установлено, что 40% всего потребления питательных веществ должно быть энтеральным, чтобы обеспечить нормальную пролиферацию и рост слизистой оболочки. (Burrin, D.G., et al. Am. J. Clin. Nutr. 71(6):1603-10, 2000).

Исследования крыс во время полного парентерального питания (TPN) показывает, что TPN приводит к гипоплазии слизистой оболочки кишечника, которая в свою очередь ассоциирована со снижением иммунного ответа и увеличением перемещения бактерий из кишечника в мезентериальные лимфатические узлы, печень и селезенку. Введение GLP-2 защищает против этого побочного эффекта. (Chance, W.T. et al. Am. J. Gastrointest. Liver Physiol. 273:G559-G563, 1997; Chance, W.T., et al. Peptides, 27(4):883-892, 2006; and Kaji, Т., etal. Eur. J. Pharmacol. 596(1-3):138-145).

Было показано, что GLP-2 вовлечен в регуляцию глюкозы и может иметь применение в лечении и диабета и гипогликемии. De Heer, et al. продемонстрировали, что GLP-2 стимулирует секрецию глюкагона в островках крыс. (Diabetologia 50(10):2135-2142, 2007). Глюкагон в свою очередь увеличивает уровни глюкозы в крови. Wideman, et al. доказали, что посредством изменения экспрессии PC в мышиных альфа-клетках с РС2 на РС1/3, проглюкагон перерабатывается с получением продуктов PC 1/3, (GLP-1, GLP-2, оксинтомодулин), а не глюкагона. Авторы изобретения поэтому предлагают использование GLP-2 в лечении диабета. (Diabetes 56(11):2744-2752, 2007 and Mol. Ther. 17(1):191-198, 2008).

GLP-2 имеет применение в лечении синдрома укороченного кишечника (SBS) и связанных с ним состояний, включая расстройство кишечника. Пациенты с SBS, лечившиеся GLP-2 в течение двух лет, демонстрировали улучшение различных показателей, включая улучшенную почечную функцию, уменьшение фекальной массы и сохранение кишечного сока и поглощение электролитов при более низком пероральном потреблении. Jeppesen, P.B., et al. Gastroenterology Research and Practice, 2009, Article 616054. У крыс, подвергнутых последовательной поперечной энтерпластике (STEP) для лечения SBS, уровни GLP-2 после приема пищи увеличивались по сравнению с крысами с SBS, которые не были подвергнуты STEP. Кроме того, увеличивалась экспрессия рецепторов GLP-2. Исследование показывает, что GLP-2 может быть полезным в стимулирующем применении процедуры STEP. (Kaji, Т., et al. J. Ped. Surgery. 44(8):1552-1559, 2009). Также при помощи GLP-2 помогают адаптации кишечника у крыс после резекции. (Perez, A., et al. J Parenter. Enteral Nutr. 29(2):97-101, 2005; Li, H., et al. Zhonghua Wei Chang Wai Ke Za Zhi 9(1):67-70, 2006; Kaji, Т., et al. J. Surg. Res. 152(2):271-280, 2009; and Garrison, A.P., et al. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296:G643-G650, 2009).

Кишечник может быть поврежден вследствие как химиотерапевтического, так и радиационного лечения рака. Введение тедуглутида (аналога GLP-2) до гамма-облучения продемонстрировало защитный эффект у мышей. (Booth, С., et al. Cell Proliferation 37(6):385-400, 2004). Смотри также Torres, S., et al. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 69(5):1563-1571, 2007. Лечения GLP-2 также обладает защитным воздействием на кишечник во время химиотерапии и помогает восстановлению от повреждения, связанного с химиотерапией. (Boushey, R.P., et al. Cancer Res. 61:687-693, 2001 and Tavakkolizadeh, A., et al. J. Surg. Res. 91(1)77-82, 2000).

GLP-2 также уменьшает повреждение кишечника мышей, обусловленное нестероидными противовоспалительными лекарственными средствами (NSAID). (Boushey, R.P., et al. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 277(5):E937-E947, 1999).

GLP-2 также вовлечен в релаксацию желудка у мышей. (Amato, A., et al. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296:G678-G684, 2009). Кроме того GLP-2 подавляет антральное опорожнение у людей. (Nagell, C.F., et al. Scan. J. Gastroenterol. 39(4):353-358, 2004). Также в связи с аппетитом. GLP-2 подавляет секрецию грелина у людей. (Banasch, M., et al. Reg. Peptides. 137(3):173-178, 2006).

Так же изучали GLP-2 в головном мозге. GLP-2 вовлечен в регенерацию астроглиальных клеток у крыс.(Velazquez, E., et al. Eur. J. Biochem. 270(4):3001-3009, 2003 and Velazquez, E., et al. Mol. Neurobiol. 40:183-193, 2009). Показано, что GLP-2 обладает цитопротективным действием на клетки, происходящие из центральной нервной системы крыс. (Lovshin, J.A., et al. Endocrinology. 145(7):3495-3506, 2004). Показано, что GLP-2 обладает антидепрессивным действием у мышей. (Iwai, Т., et al. Behavioural Brain Res. 204(1):235-240, 2009). Vrang, N., et al. investigated subgroups of GLP-containing neurons и their functions). Brain Res. 1149:118-126, 2007).

Кроме того, было показано, что GLP-2 является эффективным в лечении остеопороза. (Henriksen, et al. Bone, 45(5):833-42, 2009).

В дополнительном исследовании GLP-2 изучали GLP-2 и аутизм (Robertson, M.A, et al. J. Autism Dev. Disord. 38:1066-1071, 2008), GLP-2 и уровни сАМР в адипоцитах 3T3-L1 (Montrose-Rafizadeh, С. et al. J. Cell. Physiol. 172(3):275-283, 1998).

Однако нативный GLP-2 не является подходящим кандидатом в лекарственные средства, так как он быстро разлагается пептидазами (например DPP IV). Поэтому он имеет очень короткий период полувыведения (t_1/2=10 мин. у людей) и быстрый клиренс (CL). Были созданы и усовершенствованы для клинической разработки некоторые аналоги GLP-2 с несколько улучшенным CL относительно hGLP-2, включая [Gly2]hGLP 2 (тедуглутид) и ZP-1846 и ZP-1848.(номер публикации РСТ WO/2006/117565). Несмотря на улучшения по сравнению с нативным GLP-2, считается, что их фармакокинетические свойства по-прежнему не обеспечивают возможности оптимального дозирования лекарственного средства, ограничивая их клиническое использование. Поэтому необходимы аналоги GLP-2 с улучшенными фармакокинетическими свойствами.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Предлагаются соединения, композиции, содержащие соединения, и способы применения этих соединений, где соединения представляют собой агонисты рецепторов GLP-2 и обладают улучшенными фармакокинетическими свойствами по сравнению с доступными в настоящее время аналогами GLP-2, Согласно одному воплощению, соединения по настоящему изобретению имеют общую формулу I:

где R¹ выбран из группы, состоящей из Н, алкила, аралкила и арила;

a выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, и 7;

R² представляет собой гетероарил;

b равен 1 или 2;

каждый из R³ и R⁴ независимо выбран из группы, состоящей из Н и алкила;

каждый из с и d независимо выбран из группы, состоящей из 0 и 1;

R⁵ выбран из группы, состоящей из Н и алкила;

e выбран из группы, состоящей из 1, 2, 3, и 4;

R⁶ выбран из группы, состоящей из Н, алкила, циклоалкила, арила, биарила, гетероарила и -С(O)-NH₂;

f выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2, и 3, при условии, что если R⁶ отличен от Н, то f не равен 0;

R⁷ выбран из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, арила, биарила, диарила, гетероарила и -С(O)-NH₂;

g выбран из группы, состоящей из 1, 2 и 3;

R⁸ выбран из группы, состоящей из Н, алкила, -СН(ОН)-СН₃;

h выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2 и 3;

X₁ представляет собой Gln или Arg;

Х₂, Х₃, и Х₄ каждый независимо присутствует или отсутствуют и, если присутствует, независимо выбран из группы, состоящей из Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asp и Glu; и

Z представляет собой NR⁹R¹⁰ или ОН, где;

R⁹ и R¹⁰ каждый независимо выбран из группы, состоящей из водород, алкила, гетероалкила, циклоалкила, арила, гетероарила, гетероаралкила, аралкила и -(CH₂)_x-[(CH₂)₂-O]_y-(CH₂)_x-[NH-C(O)-CH₂-O-CH₂]_z-C(O)-NHR¹¹, где:

R¹¹ представляет собой Н или -[(CH₂)₂-O]_y-(CH₂)_x-C(O)-NH₂

каждый x независимо выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2 и 3,

каждый y независимо выбран из группы, состоящей из 3, 4, 5 и 6,

z равен 0 или 1, и

R⁹ и R¹⁰ возможно соединяются с образованием 4-7-членного кольца, которое может представлять собой гетероцикл или гетероарил;

и их фармацевтически приемлемых солей.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где R⁶ и f не могут приводить к L-Asn.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где R⁷ и g не могут приводить L-Asn.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где R⁵ и e образуют Nle.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где комбинация R⁶ и f и комбинация R⁷ и g не могут обе приводить к аминокислотам, выбранным из группы, состоящей из Gly, L-Ala, L-Asn, L-Gln, L-Ser, L-Phe, L-Leu, L-Ile, L-Val и L-His.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где R¹ представляет собой Н, а равен 0, R² представляет собой и b равен 1, Это дает гистидин в N-конце соединения.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где все X₂, Х₃, и Х₄ отсутствуют.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где присутствуют все Х₂, Х₃, и Х₄,

В одном воплощении аминокислота, образованная с боковой цепью при R⁶, находится в D-конфигурации.

В одном воплощении аминокислота, образованная с боковой цепью при R⁷, находится в D-конфигурации.

В одном воплощении соединение представляет собой примерное соединение 8 из Таблицы 1, где аминокислота в положении 16 находится в D конфигурации, показанных в Таблице 1. Альтернативно, соединение представляет собой соединение 12, 13, 29, 30, 32, 35, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46,47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61,62, 63,64, 65, 66, 67, 68, 69 или 70 из Таблицы 1, где для каждого примера аминокислота в положении 11 находится в D-конфигурациях, показанных в Таблице 1.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где Z представляет собой NH₂ или ОН.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где Z представляет собой NR⁹R¹⁰ и один из R⁹ и R¹⁰ представляет собой водород.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где с равен 0 и R³ представляет собой Н.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где е равен 3, R⁵ представляет собой метил, f равен 1, R⁶ представляет собой фенил, g равен 1, R⁷ представляет собой изопропил, X₂ представляет собой Ile, Х₃ представляет собой Thr, Х₄ представляет собой Asp и Z представляет собой NH₂ или ОН.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где R³ представляет собой водород, с равен 0, R⁵ представляет собой метил, e равен 3, R⁶ представляет собой фенил или 2-тиенил, f равен 1, R⁷ представляет собой фенил или изопропил, g равен 1, R⁸ представляет собой Н или -СН(ОН)-СН₃ и h равен 0 или 1,

В одном воплощению соединение имеет формулу I, где Z представляет собой NR⁹R¹⁰ и R⁹ представляет собой водород и R¹⁰ представляет собой аралкил или алкил.

В одном воплощению соединение выбрано из группы, состоящей из:

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Thi-Thr-Ile-Leu-Asp-Phe-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-NH₂,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Phe-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ite-Gln-Thr-Lys-NH₂,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Leu-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH₂,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Leu-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NHEt,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Leu-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH-4-Pic,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Leu-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH-((CH₂)₂O)₄-(CH₂)₂-CO-NH₂,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-GIu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Leu-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH-CH₂-((CH₂)₂O)₃-(CH₂)₃-NHCO-CH₂-O-CH₂-CO-NH₂, и

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Leu-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH-изобутил.

В одном воплощении соединение выбрано из группы, состоящей из:

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Leu-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-OH,

His-GIy-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Phe-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH-CH₂-((CH₂)₂O)₃-(CH₂)3-NHCO-CH₂-O-CH₂-CONH₂,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Phe-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH-CH₂-((CH₂)₂O)₃-(CH₂)₃-NHCO-CH₂-O-CH₂-CONH-((CH₂)₂O)₆-(CH₂)₂-CONH₂,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Thi-Thr-Ile-Leu-Asp-Leu-Leu-Ala-Thr-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH₂,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Phe-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gin-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH₂,

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Phe-Thr-Ile-Leu-Asp-Phe-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-OH и

His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Nle-D-Thi-Thr-Ile-Leu-Asp-Phe-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-NH₂,

Также предлагается фармацевтическая композиция, содержащая одно или более соединений по изобретению, возможно вместе с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, разбавителем или носителем.

Также предлагаются способы лечения заболевания из группы, состоящей из желудочно-кишечного повреждения, диарейных заболеваний, кишечной недостаточности, индуцированного кислотой повреждения кишечника, недостатка аргинина, идиопатической гипоспермии, ожирения, глютеновой болезни, катаболической болезни, индуцированного химиотерапией энтерита, фебрильной нейтропении, диабета, ожирения, нарушенной абсорбции жира, стеатореи, аутоиммунных заболеваний, пищевых аллергий, язв желудка, гипогликемии, расстройства желудочно-кишечного барьера, сепсиса, бактериальной перитонита, индуцированного ожогом повреждения кишечника, пониженной желудочно-кишечного подвижности, воспалительной болезни кишечника, расстройства кишечника, химиотерапии, ассоциированной с бактериемией, травмы кишечника, ишемии кишечника, мезентериальной ишемии, синдрома раздраженного кишечника, синдрома укороченного кишечника, недоедания, некротизирующего энтероколита, некротизирующего панкреатита, пищевой непереносимости у новорожденных, NSAID-индуцированного желудочно-кишечного повреждения, недостаточности питания, повреждения желудочно-кишечного тракта, вызванного полностью парентеральным питанием, недостаточности питания у новорожденных, индуцированного радиацией энтерита, индуцированного радиацией повреждения в кишечнике, воспаления слизистой оболочки, резервуарного илеита, ишемии и инсульта, где способ включает введение пациенту-животному, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по изобретению, где животное включает человека. Воспалительные болезни кишечника включают, без ограничения, болезнь Крона и неспецифический язвенный колит.

Также предлагаются способы регулирования аппетита; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения расслабления желудка; контролирования уровней глюкозы; улучшения, стимулирования или ускорения насыщения голода; улучшения иммунной функции кишечника; улучшения, стимулирования или ускорения заживления ран кишечника; усиления, стимулирования или ускорения потери массы у подростков; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения развития кишечника у новорожденных; улучшения, стимулирования или ускорения развития плода или новорожденных; предотвращения раковых заболеваний кишечника; улучшения или стимулирования целостности слизистой оболочки; минимизации, подавления или предотвращения бактериального перемещения в кишечнике; улучшения, стимулирования или ускорения восстановления кишечника после операции; предотвращения рецидивов воспалительных болезни кишечника, включая болезнь Крона и неспецифический язвенный колит, например после операции; или достижения или поддержания энергетического гомеостаза, где способ включает введение пациенту-животному, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по изобретению, где животное включает человека.

Также предлагаются способы лечения заболевания из группы, состоящей из депрессии, аутизма, остеопороза и травматического повреждения головного мозга, где способ включает введение пациенту-животному, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по изобретению, где животное включает человека.

Также предлагаются способы улучшения, стимулирования или ускорения астроглиальной регенерации или улучшения, стимулирования или ускорения восстановления или роста центральной нервной системы; где способ включает введение пациенту-животному, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по изобретению, где животное включает человека.

Также предлагаются применения соединения по изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания из группы, состоящей из желудочно-кишечного повреждения, диарейных заболеваний, недостаточности кишечника, индуцированного кислотой повреждения кишечника, недостатка аргинина, идиопатической гипоспермии, ожирения, глютеновой болезни, катаболической болезни, индуцированного химиотерапией энтерита, фебрильной нейтропении, диабета, ожирения, нарушенной абсорбции жира, стеатореи, аутоиммунных заболеваний, пищевых аллергий, язв желудка, гипогликемии, расстройства желудочно-кишечного барьера, сепсиса, бактериального перитонита, индуцированного ожогом повреждения кишечника, пониженной подвижности желудочно-кишечного, воспалительной болезни кишечника, расстройства кишечника, ассоциированной с химиотерапией бактериемии, травмы кишечника, ишемии кишечника, мезентериальной ишемии, синдрома раздраженного кишечника, синдрома укороченного кишечника, недоедания, некротизирующего энтероколита, некротизирующего панкреатита, пищевой непереносимости у новорожденных, NSAID-индуцированного желудочно-кишечного повреждения, недостаточность питания, повреждения желудочно-кишечного тракта, вызванного полностью парентеральным питанием, недостаточности питания у новорожденных, индуцированного радиацией энтерита, индуцированного радиацией повреждения в кишечнике, воспаления слизистой оболочки, резервуарного илеита, ишемии и инсульта. Воспалительные болезни кишечника включают, без ограничения, болезнь Крона и неспецифический язвенный колит.

Также предлагаются применения соединения по изобретению для изготовления лекарственного средства для регулирования аппетита; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения расслабления желудка; контролирования уровней глюкозы; усиления, стимулирования или ускорения насыщения голода; улучшения иммунной функции кишечника; улучшения, стимулирования или ускорения заживления ран кишечника; усиления, стимулирования или ускорения потери массы у подростков; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения развитие кишечника у новорожденных; улучшения, стимулирования или ускорения развитие плода или новорожденного; предотвращения раковых заболеваний кишечника; улучшения или стимулирования целостности слизистой оболочки; минимизации, подавления или предотвращения бактериального перемещения в кишечнике; улучшения, стимулирования или ускорения восстановления кишечника после операции; предотвращения рецидивов воспалительной болезни кишечника, включая болезнь Крона и неспецифический язвенный колит, например после операции; или достижения или поддержания энергетического гомеостаза.

Также предлагаются применения соединения по изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания из группы, состоящей из депрессии, аутизма, остеопороза и травматического повреждения головного мозга.

Также предлагаются применения соединения по изобретению для изготовления лекарственного средства для улучшения, стимулирования или ускорения астроглиальной регенерации или улучшения, стимулирования или ускорения восстановления или роста центральной нервной системы. ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Если не установлено иное, следующие термины, используемые в данной заявке, включая подробное описание и формулу изобретения, имеют определения, приведенные ниже. Следует отметить, что при использовании в подробном описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа "a," "an" и "the" включают объекты ссылки в форме множественного числа, если контекст очевидно не требует иного. Определение стандартных химических терминов можно обнаружить в упоминаемых работах, включая Carey и Sundberg (2007) Advanced Analytical Chemistry 5^thEa. Vols. A and B, Plenum Press, New York. В практике настоящего изобретения используют, если не указано иное, общепринятые способы синтетической аналитической химии, масс-спектроскопии, препаративные и аналитические способы хроматографии, химии белка, биохимии, технологии рекомбинантной ДНК и фармакологии, в рамках квалификации данной области техники.

"Алкил" представляет собой возможно замещенный алкил с прямой цепью C_1-6 или возможно замещенный алкил с разветвленной цепью С_3-8, включая изо-, втор- и трет- конфигурации.

"Арил" представляет собой возможно замещенные моно- или бициклические ароматические карбоциклические кольцевые системы 5-12 атомов углерода. Типичные моно- и бициклические ароматические карбоциклические кольцевые системы включают возможно замещенный фенил и возможно замещенный нафтил.

"Биарил" представляет собой где Ar представляет собой арильную группу.

"Диарил" представляет собой , где Ar представляет собой арильную группу.

"Аралкил" представляет собой алкильную группу, которая имеет в качестве заместителя арильную группу.

"Гетероарил" представляет собой возможно замещенную ароматическую гетероциклическую пяти- или шестичленную кольцевую систему. Пятичленная гетероароматическая кольцевая система представляет собой моноциклическую ароматическую кольцевую систему, имеющую пять кольцевых атомов, где 1, 2, 3 или 4 кольцевых атома независимо выбраны из N, O и S. Типичные пятичленные гетероароматические кольцевые системы включают возможно замещенный имидазолил, тиазолил, тиенил, фурил, пиразолил и триазолил. Шестичленная гетероароматическая кольцевая система представляет собой моноциклическую ароматическую кольцевую систему, имеющую шесть кольцевых атомов, где 1, 2, 3 или 4 кольцевых атома независимо выбраны из N, O и S. Типичные шестичленные гетероароматические кольцевые системы включают возможно замещенный пиридил, пиримидил и пиразинил.

"Возможно замещенный" означает, что в указанной группировке могут присутствовать одна или более групп заместителей. Группировки заместителя могут представлять собой, например атомы фтора (F), хлора (Cl) и брома (Br) и алкил, гидрокси (-ОН), алкокси (-O-алкил), алкилтио (-S-алкил), циано (-CN), амино (-NH₂), амидо (-С(O)-NH₂), карбоксил (-С(О)-ОН) и C_1-6алкиловый эфир (-С(О)-О-алкил).

Примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли присоединения кислот, например соль, образованную посредством взаимодействия с галогеноводородными кислотами, такими как соляная кислота, и неорганическими кислотами, такими как серная кислота, фосфорная кислота и азотная кислота, а также с алифатическими, алициклическими, ароматическими или гетероциклическими сульфоновыми или карбоновыми кислотами, такими как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, янтарная кислота, гликолевая кислота, молочная кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, аскорбиновая кислота, малеиновая кислота, гидроксималеиновая кислота, пировиноградная кислота, пара-гидроксибензойная кислота, эмбоновая кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, гидроксиэтансульфоновая кислота, галогенобензолсульфоновая кислота, трифторуксусная кислота, трифторметансульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота и нафталинсульфоновая кислота, (смотри, например, Berge et al., J. Pharm. Sci. 66:1-19, 1977 and Wermuth, C.G. and P.H. Stahl, eds. Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use. Zurich: Verlag Helvetica Chimica Acta, 2002).

Используемые сокращения:

Сокращение Общепринятое название Bu бутил - алкильные остатки могут быть дополнительно обозначены как н- (нормальные, то есть неразветвленные), изо- (изо), втор-(вторичные) и трет- (третичные) BzI Бензил CH₃CN Ацетонитрил DCM Дихлорметан DIAD N,N'-Диизопропилазодикарбоксилат DIC N,N'-Диизопропилкарбодиимид DIPEA N,N-диизопропилэтиламин DMF N,N-диметилформамид Et Этил Fmoc 9-флуоренилметоксикарбонил GLP глюкагоноподобный пептид GLP-1 глюкагоноподобный пептид 1 GLP-2 глюкагоноподобный пептид 2 GLP-2 рецептора рецептор глюкагоноподобного пептида 2 h час(ы) HATU N-[(диметиламино)-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридин-1-илметилен]-N-метилметанаминия гексафторфосфата N-оксид hGLP глюкагоноподобный пептид человека hGLP-1 глюкагоноподобный пептид 1 человека hGLP-2 глюкагоноподобный пептид 2 человека His-Aia-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp (SEQ ID NO:1) hGLP-2 рецептора рецептор глюкагоноподобного пептида 2 человека HIPF 1,1,1,3,3,3-гексафтор-2-пропанол Hmb 2-гидрокси-4-метоксибензил HOAt 1-гидрокси-7-азабензотриазол HOBt N-гидроксибензотриазол ВЭЖХ Высокоэффективная жидкостная хроматография изо-Am изоамил (3-метилбутил) LC жидкостная хроматография MS Масс-спектрометрия µg микрограмм HMP N-метилпирролидон Pal Пептид-амидный ликер [5-(4-Fmoc-аминометил-3,5-диметокси-фенокси)валериановая кислота] PEG полиэтиленгликоль 4-Pic 4-метилпиридил (γ-пиколил или 4-пиколил) PS Полистирен tBu трет-бутил BuOH трет-бутиловый спирт TEACIO₄ триэтиламмония перхлорат TEAP триэтиламмония фосфат TFA трифторуксусная кислота TG Тентагель TIPS триизопропилсилан TPP трифенилфосфин Trt тритил [трифенилметил, (С₆Н₅)₃С-]

Если не указано иное, использовали L-аминокислоты и применяли общепринятую для аминокислот терминологию. Примеры аминокислот, отличных от двадцати обычных аминокислот, включают:

Сокращение Общепринятое название 1-Nal 1-нафтилаланин 2-Nal 2-нафтилаланин D-Thi D-β-(2-тиенил)аланин Cha β-циклогексилаланин Aph β-(4-аминофенил)аланин D-Cpa D-β-(4-хлорфенил)аланин Dip D,β-дифенилаланин Bip β-(4,4'-бифенил)аланин hPhe гомофенилаланин D-2-Cpa D-β-(2-хлорфенил)аланин D-Fpa D-β-(4-фторфенил)аланин D-3-Thi D-β-(3-тиенил)аланин D-FurAla D-β-(2-фурил)аланин D-3-Cpa D-β-(3-хлорфенил)аланин Nle норлейцин Hol гомолейцин 2-PhEtHis N-(2-фенилэтил)гистидин 3-MeBuHis N-(3-метилбутил)гистидин OctHis N-(н-октил)гистидин EtHis N-этилгистидин

Соединения

Согласно одному воплощению соединения по настоящему изобретению

имеют общую формулу I:

где R¹ выбран из группы, состоящей из Н, алкила, аралкила и арила;

a выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7;

R² представляет собой гетероарил;

b равен 1 или 2;

каждый из R³ и R⁴ независимо выбран из группы, состоящей из Н и алкила;

каждый из с и d независимо выбран из группы, состоящей из 0 и 1;

R⁵ выбран из группы, состоящей из Н и алкила;

e выбран из группы, состоящей из 1, 2, 3 и 4;

R⁶ выбран из группы, состоящей из Н, алкила, циклоалкила, арила, биарила, гетероарила и -С(O)-NH₂;

f выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2 и 3, при условии что, если R⁶ отличен от Н, f не равен 0;

R⁷ выбран из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, арила, биарила, диарила, гетероарила и -C(O)-NH₂;

g выбран из группы, состоящей из 1, 2 и 3;

R⁸ выбран из группы, состоящей из Н, алкила, -СН(ОН)-СН₃;

h выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2 и 3;

X₁ представляет собой Gln или Arg;

каждый из Х₂, Х₃, и Х₄ независимо присутствует или отсутствует и, если присутствует, то независимо выбран из группы, состоящей из Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asp и Glu;

Z представляет собой NR⁹R¹⁰ или ОН, где:

каждый из R⁹ и R¹⁰ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, гетероалкила, циклоалкила, арила, гетероарила, гетероаралкила, аралкила и -(CH₂)_x-[(CH₂)₂-O]_y-(CH₂)_x-[NH-C(O)-CH₂-O-CH₂]_z-C(O)-NHR¹¹, где:

R¹¹ представляет собой Н или -[(CH₂)₂-O]_y-(CH₂)_x-C(O)-NH₂

каждый x независимо выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2 и 3,

каждый y независимо выбран из группы, состоящей из 3, 4, 5 и 6,

z равен 0 или 1, и

R⁹ и R¹⁰ возможно содинены с образованием 4-7-членного кольца, которое может представлять собой гетероцикл или гетероарил;

и их фармацевтически приемлемые соли.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где R⁶ и f не могут приводить к образованию L-Asn.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где R⁷ и g не могут приводить к образованию L-Asn.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где R⁵ и e образуют Nle.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где комбинация R⁶ и f и комбинация R⁷ и g не могут обе приводить к аминокислотам, выбранным из группы, состоящей из Gly, L-Ala, L-Asn, L-Gln, L-Ser, L-Phe, L-Leu, L-Ile, L-Val и L-His.

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где R¹ представляет собой Н, а равен 0, R² представляет собой и b равен 1. Это дает гистидин в качестве первой аминокислоты на N-конце соединения.

Альтернативно, соединение имеет формулу I, где все Х₂, Х₃ и Х₄ отсутствуют.

В другом воплощении соединение имеет формулу I, где все Х₂, Х₃ и Х₄ присутствуют.

В одном воплощении аминокислота, образованная боковой цепью при R⁶, находится в D-конфигурации.

В одном воплощении аминокислота, образованная боковой цепью при R⁷, находится в D-конфигурации.

В одном воплощении соединение представляет собой приведенное в качестве примера соединение 8 из Таблицы 1, где аминокислота в положении 16 находится в D-конфигурации. Альтернативно, соединение представляет собой соединение 12, 13, 29, 30, 32, 35, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61,62,63, 64, 65,66,67,68, 69 и 70 из Таблицы 1, где для каждого примера аминокислота в положении 11 находится в D-конфигурации.

В другом воплощении соединение имеет формулу I, где Z представляет собой NH₂ или ОН.

В другом воплощении соединение имеет формулу I, где Z представляет собой NR⁹R¹⁰ и один из R⁹ и R¹⁰ представляет собой водород.

В другом воплощении соединение имеет формулу I, где с равен 0 и R³ представляет собой Н.

В другом воплощении соединение имеет формулу I, где e равен 3, R⁵ представляет собой метил, f равен 1, R⁶ представляет собой фенил, g равен 1, R⁷ представляет собой изопропил, Х₂ представляет собой Ile, Х₃ представляет собой Thr, Х₄ представляет собой Asp и Z представляет собой NH₂ или ОН.

В другом воплощении соединение имеет формулу I, где R³ представляет собой водород, с равен 0, R⁵ метил, e равен 3, R⁶ представляет собой фенил или 2-тиенил, f равен 1, R⁷ фенил или изопропил, g равен 1, R⁸ представляет собой Н или -СН(ОН)-СН₃ и h равен 0 или 1,

В одном воплощении соединение имеет формулу I, где Z представляет собой NR⁹R¹⁰, и R⁹ представляет собой водород, и R¹⁰ представляет собой аралкил или алкил.

Примеры соединений по изобретению представлены в Таблице 1. Структуры приведенных в качестве примера соединений определены относительно нативной hGLP-2, которая представляет собой

His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp (SEQ ID NO:1)

Таблица 1 Примеры соединений по изобретению Соединение № Структура Молекулярная масса свободного основания 1 [Gly2,D-Ala4,Nle10] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3417,8 2 [2-PhEtHis1,Nle10] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3522,0 3 [3-MeBuHis1,Nle10] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3487,9 4 [OctHis1,Nle10] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3530,0 5 [Gly2,Nle10] hGLP-2 (1-30)-NH-изо-Am 3473,8 6 [Gly2,Nle10] hGLP-2 (1-30)-NH-Et 3431,8 7 [Gly2,Nle10] hGLP-2 (1-30)-NH-Bzl 3493,8 8 [Gly2,Nle10,D-Phe16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3436,8 9 [Gly2,Nle10,Phe16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3436,8 10 [Gly2,Nle10,Arg28] hGLP-2 (1-30)-NH-изо-Am 3501,9 11 [Gly2,Nle10,Leu16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3402,8 12 [Gly2,Nle10,D-Asn11] hGLP-2 (1-30)-NH-изо-Am 3473,9 13 [Gly2,Nle10,D-Phe11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3436,8 14 [Gly2,Nle10,Phe11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3436,8 15 [Gly2,Nle10,Leu11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3402,8 16 [Gly2,Nle10,D-Leu11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3402,8 17 [Gly2,Nle10,1-Nal16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3486,9 18 [Gly2,Nle10,Tyr16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3452,8 19 [Gly2,Nle10,His16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3426,8 20 [Gly2,Nle10,2-Nal16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3486,9 21 [Gly2,Nle10,Thi16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3442,9 22 [Gly2,Nle10,Trp16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3475,9 23 [Gly2,Nle10,Cha16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3442,9 24 [Gly2,Nle10,Aph16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3451,9 25 [Gly2,Nle10,Cpa16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3471,3 26 [Gly2,Nle10,Dip16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3512,9 27 [Gly2,Nle10,Bip16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3512,9 28 [Gly2,Nle10,hPhe16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3450,9 29 [Gly2,Nle10,D-Cpa11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3471,3 30 [Gly2,Nle10,D-Trp11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3475,9 31 [Gly2,Nle10,lle11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3402,8 32 [Gly2,Nle10,D-Thi11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3442,9 33 [Gly2,Nle10,Cpa11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3471,3 34 [Gly2,Nle10,His11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3426,8 35 [Gly2,Nle10,D-His11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3426,8 36 [Gly2,Nle10,Cha11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3442,9 37 [Gly2,Nle10,Hol11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3416,8 38 [Gly2,Nle10,Bip11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3512,9 39 [Gly2,Nle10,D-Tyr11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3452,8 40 [Gly2,Nle10,D-2-Cpa11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3471,3 41 [Gly2,Nle10,D-Fpa11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3454,8 42 [Gly2,Nle10,D-3-Thi11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3442,9 43 [Gly2,Nle10,D-FurAla11] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3426,8 44 [Gly2,Nle10,D-3-Cpa11] hGLP-2 (1-30)-NH2 3471,3 45 [Gly2,Nle10,D-Thi11,Leu16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3441,9 46 [Gly2,Nle10,D-Thi11,Phe16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3475,9 47 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Phe16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3469,9 48 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3435,9 49 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Tyr16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3485,9 50 [Gly2,Nle10,D-Thi11,Tyr16] hGLP-2 (1-30)-NH₂ 3491,9 51 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-NH₂ 3765,3 52 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16,Thr19] hGLP-2(1-30)-NH₂ 3465,9 53 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-NHEt 3793,3 54 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-NH-4-Pic 3856,3 55 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-
NH-((CH₂)₂O)₄-(CH₂)₂-C(O)-NH₂ 4012,5 56 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-NH-СН₂-((СН₂)₂O)₃-(СН₂)₃-NHC(O)-СН₂-O-CH₂-C(O)-NH₂ 4083,6 57 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-NH-изобутил 3821,3 58 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-NH-Бензил 3855,3 59 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-OH 3766,2 60 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Phe16]hGLP-2(1-33)-NH-CH₂-((CH₂)₂O)₃-(CH₂)₃-NH-C(O)-CH₂-0-CH₂-C(O)-NH₂ 4134,6 61 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Phe16]hGLP-2(1-33)-NH-CH₂-((CH₂)₂O)₃-(CH₂)₃-NH-C(O)-CH₂-O-CH₂-C(O)-NH-((CH₂)₂O)₆-(CH₂)₂-C(O)-NH₂ 4453,0 62 [Gly2,Nle10,D-Thi11,Leu16,Thr19] hGLP-2(1-33)-NH₂ 3805,3 63 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Phe16]hGLP-2(1-33)-NH₂ 3799,2 64 [Gly2,Nle10,D-Phe11,Phe16]hGLP-2(1-33)-OH 3800,2 65 [Gly2,Nle10,D-3-Cpa11,2-Nal16] hGLP-2(1-33)-NH₂ 3883,7 66 [Gly2,Nle10,D-3-Cpa11,Phe16] hGLP-2(1-33)-NH₂ 3833,7 67 [Gly2,Nle10,D-3-Cpa11,Leu16] hGLP-2(1-33)-NH₂ 3799,6 68 [Gly2,Nle10,D-Thi11,Phe16] hGLP-2(1-33)-NH₂ 3805,2 69 [Gly2,D-Ala4,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-NH₂ 3779,3 70 [EtHis1,D-Ala4,Nle10,D-Phe11,Leu16] hGLP-2(1-33)-NH₂ 3821,4

Таблица 2 Ключ к условным обозначениям аминокислот Аминокислота Положение Заявленное условное обозначение 2-PhEtHis 1 R¹=, R²= а=2, b=1 3-MeBuHis 1 R¹=-CH(CH₃)₂, R²= а=2, b=1 OctHis 1 R¹=-CH₃, R²= a=7, b=1 EtHis 1 R¹=-CH₃, R²= a=1,b=1 Gly 2 R³=H c=0 D-Ala 4 R⁴=H d=1 Nle 10 R⁵=-CH₃ e=3 D-Asn 11 R⁶=-C(O)-NH₂ f=1 D-Phe 11 R⁶= f=1 Phe 11 R⁶= f=1 Leu 11 R⁶=-CH(CH₃)₂ f=1 D-Leu 11 R⁶=-CH(CH₃)₂ f=1 Cpa 11 R⁶= f=1 D-Cpa 11 R⁶= f=1 D-2-Cpa 11 R⁶= f=1 D-3-Cpa 11 R⁶= f=1 D-Fpa 11 R⁶= f=1 D-Trp 11 R⁶= f=1 Ile 11 R⁶=-CH(CH₃)-CH₂-CH₃ f=0 D-Thi 11 R⁶= f=1 D-3-Thi 11 R⁶= f=1 His 11 R⁶= f=1 D-His 11 R⁶= f=1 Cha 11 R⁶= f=1 Hol 11 R⁶=-CH(CH₃)₂ f=2 Bip 11 R⁶= f=1 D-Tyr 11 R⁶= f=1 D-FurAla 11 R⁶= f=1 D-Phe 16 R⁷= g=1 Phe 16 R⁶= g=1 hPhe 16 R⁷= g=2 Leu 16 R⁷=-CH(CH₃)₂ g=1 1-Nal 16 R⁷= g=1 2-Nal 16 R⁷= g=1 Tyr 16 R⁷= g=1 His 16 R⁷= g=1 Thi 16 R⁷= g=1 Trp 16 R⁷= g=1 Cha 16 R⁷= g=1 Aph 16 R⁷= g=1 Cpa 16 R⁷= g=1 Dip 16 R⁷= g=0 Bip 16 R⁷= g=1 Thr 19 R⁸=-CH(OH)-CH₃ h=0

Синтез

Производные α-аминокислот приобретали у коммерческих поставщиков (Bachem, Novabiochem and Peptides International). Смолы приобретали у коммерческих поставщиков (Applied Biosystems and Novabiochem). Все дополнительные реагенты, химикаты и растворители приобретали у Sigma-Aldrich, Fluka и Acros Organics.

Соединения в данном описании изобретения синтезировали в твердой фазе стандартными способами пептидной химии, используя Fmoc-методику и проточный автоматический пептидный синтезатор Applied Biosystems Pioneer «Peptide Synthesis System» или автоматический пептидный синтезатор Applied Biosystems 433A с протоколами циклов, указанными Applied Biosystems.

Препаративную ВЭЖХ выполняли на Waters Delta Prep LC 4000, используя картридж PrepPack от Delta-Pack C18, 300 $$\stackrel{\circ }{A}$$ , 15 мкм, 47×300 мм при скорости потока 100 мл/мин. Аналитическую ВЭЖХ с обращенной фазой выполняли на жидкостном хроматографе Waters 600, используя колонку Vydac 218ТР54, C18 (5 мкм, 4,6×250 мм) при скорости потока 2 мл/мин. Анализ конечного соединения выполняли на хроматографе Agilent Technologies 1200 Series с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке Phenomenex MAX-RP 80 $$\stackrel{\circ }{A}$$ C18 (4 мкм, 2×150 мм) при скорости потока 0,3 мл/мин. Масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с электрораспылением MAT Finningan LCQ. Результаты анализа конечного соединения представлены для примеров соединений в Таблице 1.

Если не предусмотрено иное, все взаимодействия выполняли при комнатной температуре. Следующая стандартная справочная литература предлагает дополнительные руководства по общим установкам эксперимента, а также по доступности необходимого исходного вещества и реагентов: Kates, S.A., Albericio, F., Eds., SolidPhase Synthesis: A Practical Guide, Marcel Dekker, New York, Basel, 2000; Greene, T.W., Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley Sons Inc., 2^nd Edition, 1991; Stewart, J.M., Young, J.D., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Company, 1984; Bisello, et al., J. Biol. Chem. 1998, 273, 22498-22505; Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 1963, 85, 2149-2154; and Changand White P.D., «Fmoc SolidPhase Peptide Synthesis: a Practical Approach», Oxford University Press, Oxford, 2000.

Смолу N-α-Fmoc-Pal-PEG-PS (Applied Biosystems, Foster City, California) использовали в качестве исходного вещества для С-концевых первичных карбоксиламидных пептидов. N-a-Fmoc-защищенную аминокислоту, прикрепленную к смоле TGT NovaSyn® (Novabiochem, San Diego, California), использовали в качестве исходного вещества для пептидов со свободным карбоксильным С-концом.

Следующие защитные группы использовали для защиты функциональных групп боковой цепи данной аминокислоты: 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил (Arg); mpem-бутиловую группу (Glu, Asp, Ser, Thr и Tyr); тритиловую группу (His, Gln и Asn), mpem-бутоксикарбонильную группу (Lys и Trp).

Все взаимодействия Fmoc-защищенных аминокислот были опосредованы HATU/DIPEA в DMF. В ходе синтеза использовали одинарные взаимодействия по 35-50 минут с 4-кратным избытком активированных Fmoc-защищенных аминокислот. Удаление защитной группы Fmoc выполняли при помощи шестиминутного проточного промывания пептидной смолы 30% пиперидином в DMF на Pioneer или 20%смесью пиперидин/NMP с УФ-мониторингом на синтезаторе ABI 433 A.

Пептидные аналоги, где а=0 и R¹=Н, собирали автоматически на смоле до связывания остатка в положении 5. Затем N-концевую Fmoc-защитную группу удаляли и вручную вводили (1-4)-фрагмент с 2 эквивалентами полностью защищенной N^α-Boc-тетрапептид-карбоновой кислоты за одно взаимодействие, опосредованное DIC/HOBt в DMF. Тетрапептид получали отдельно посредством ручного синтеза на Н-Gly-2-Cl-тритиловой смоле (Novabiochem).

Пептидные аналоги, где а≠0 или, если а=0, то R¹≠Н и d=0 и R⁴=Н, собирали автоматически на смоле до связывания остатка Gly в положении 4. Остаток Gly вводили с защищающей остов группой Hmb (2-гидрокси-4-метоксибензил) в виде Fmoc-Hmb(Fmoc)Gly-OH. N-концевые Fmoc-защитные группы удаляли и Fmoc-Asp(OtBu)-OH (5 эквивалентов) спаривали вручную, используя DIC в DCM. Два оставшихся остатка вводили вручную, используя 4 эквивалента Fmoc-защищенных аминокислот/DIC/HOBt в DMF. N-концевую группу Fmoc замещали 2-нитробензолсульфонильной группой и связанный смолой сульфонамид алкилировали подходящим первичным спиртом в условиях реакции Мицунобу (10 эквивалентов смеси спирт/TPP/DIAD в DME, в течение ночи). Затем 2-нитробензолсульфонильную группу удаляли при помощи 5% тиофенолята калия в DMF.

После завершения пептидного синтеза, пептиды промывали DCM и сушили в вакууме. Пептиды обрабатывали TFA/H₂O/TIPS 44:3:2 (об./об./об., 25 мл) в течение 2 ч с целью удаления защитных групп боковой цепи с сопутствующим отщеплением пептида от смолы. Пептид фильтровали, осаждали холодным трет-бутилметиловым эфиром, центрифугировали (оставалось твердое вещество), промывали трет-бутилметиловым эфиром, вновь растворяли в смеси ацетонитрил-H₂O (70:30), лиофизировали и очищали препаративной ВЭЖХ.

Очистку пептидов выполняли при помощи препаративной ВЭЖХ. Каждый неочищенный пептид очищали или буферной системой P, или буферной системой C, или P и затем С. Фракции с чистотой более 93%, определенной посредством обращенно-фазовой аналитической ВЭЖХ, объединяли и снова загружали в колонку и элюировали буфером Т с получением трифторацетатньэх солей. Для получения ацетатных солей фракции от прогонов с буфером Р или C снова загружали в колонку и эту колонку промывали 5 объемами 0,1 М ацетата аммония. Конечный продукт элюировали буфером А. Фракции объединяли и лиофилизировали.

Таблица 3 Буферные композиции Буфер Компонент А Компонент В Р 0,25 М фосфат триэтиламмония (ТЕАР) (рН 2,3 или рН 7,0) 60% ацетонитрила, 40% Компонента А С 0,1 М перхлорат триэтиламмония (TEACIO₄) (рН 2,3) 65% ацетонитрила, 35% Компонента А Т 0,1% трифторуксусная кислота (TFA) 60% ацетонитрила, 0,1% TFA А 2% Уксусная кислота (АсОН) 60% ацетонитрила, 2% АсОН

Дополнительные синтезы

Чтобы синтезировать C-концевые вторичные/третичные карбоксиламидные пептиды (где по меньшей мере один из R⁹ или R¹⁰ не представляет собой Н), полностью защищенные C-концевые пептиды карбоновой кислоты отщепляли от смолы NovaSyn® TGT смесью HIPF/DCM 1/4 (об./об.) и потом спаривали в растворе с подходящим амином, используя DIC/HOAt в безводной системе растворителей хлороформ/2,2,2-трифторэтанол 3/1 (об./об.). Защитные группы потом удаляли смесью TFA/H₂O/TIPS 44:3:2 (об./об./об.) и аналоги очищали препаративной ВЭЖХ. Способы хорошо известны в данной области техники, например как описано в М. Goodman, А. Felix, L. Moroder, С.Toniolo, Editors; Synthesis of Peptides and Peptidomimetics, Houben-Weyl, Vols E22a to E22e, Georg Thime Verlag, 2004.

В другом воплощении вторичные амиды, такие как соединения по настоящему изобретению, где R⁹ представляет собой водород и R¹⁰ не представляет собой водород, можно изготовлять на твердой фазе, как описано в ″Backbone Amide Linker (BAL) Strategy for Solid-Phase Synthesis of C-Terminal-Modified and Cyclic Peptides,″ Knud J. Jensen, Jordi Alsina, Michael F. Songster, Josef Vagner, Fernando Albericio, and George Barany, Journal of the American Chemical Society 1998 120 (22), 5441-5452 and ″An Alkanesulfonamide ″Safety-Catch″ Linker for Solid-Phase Synthesis,″ Bradley J. Backes and Jonathan A. Ellman, The Journal of Organic Chemistry 1999 64 (7), 2322-2330.

В еще одном воплощении третичные или циклические амиды, такие как соединения по настоящему изобретению, где ни R⁹, ни R¹⁰ не являются водородом, и R⁹ и R¹⁰ возможно соединены с образованием кольца, можно получать на твердой фазе, как описано в "Structure-Based Design and Synthesis of High Affinity Tripeptide Ligands of the Grb2-SH2 Domain," Pascal Furet, Brigitte Gay, Giorgio Caravatti, Carlos Garcia-Echeverria, Joseph Rahuel, Joseph Schoepfer, and Heinz Fretz, Journal of Medicinal Chemistry 1998 41 (18), 3442-3449.

Агонистическая активность в отношении рецептора GLP-2

Агонистические активности соединений по изобретению в отношении рецепторов hGLP-2 определяли в ходе транскрипционного анализа гена-репортера путем временного трансфицирования ДНК экспрессии рецептора hGLP-2 в клеточную линию почек эмбриона человека (HEK-293) вместе с ДНК репортера, содержащей чувствительные к внутриклеточному ц-АМФ (циклическому аденозинмонофосфату) промоторные элементы регулирования экспрессии люциферазы светлячков. Смотри, например, Himmler et al., J. Recept. Res., (1993), 13, 79-74 для дальнейшего руководства в ходе данного анализа. На клетки воздействовали последовательными разведениями соединений, разведенными полулогарифмически на дозу, в течение 5 часов с последующим лизисом клеток, определением активности люциферазы и определением эффективностей соединения и значений EC₅₀ посредством нелинейной регрессии. hGLP-2, 33-аминокислотный эндогенный лиганд, использовали в качестве внутреннего контроля в каждом эксперименте. Данные отображали нормальную вариацию отдельных выполненных анализов.

Результаты анализа in vitro (значение EC₅₀ для эффективности рецептора hGLP-2 в виде среднего геометрического, выраженного в наномоль/л (нМ)) для соединений из Таблицы 1 находились в диапазоне от примерно 0,01 нМ до примерно 1 нМ. В этих анализах каждое протестированное соединение было аналогично по эффективности или более эффективно в отношении рецептора hGLP-2, чем эндогенный лиганд.

Вышеприведенные результаты показывают, что соединения, раскрытые в данном описании изобретения, входят в объем изобретения и могут быть полезными, например, в безопасном и эффективном лечении человека.

Фармакокинетика

Фармакокинетические (РК) параметры иллюстративных агонистов рецептора GLP-2 определяли на взрослых самцах крыс Sprague-Dawley после внутривенной болюсной инъекции соединений в дозах 0,1-1,0 мг/кг. Трем или четырем дважды каннюлированным животным на соединение вводили дозу через яремную вену, образцы крови отбирали с некоторыми интервалами через сонную артерию и образцы плазмы получали из цельной крови, используя K₂EDTA в качестве антикоагулянта. Последующий биоанализ образцов включал экстракцию соединения и определение концентрации в плазме с использованием стандартных методов LC/MS/MS. Концентрации анализируемого вещества вычисляли из нормированного пика внутреннего стандарта и калибровочных кривых.

Для вычисления РК параметров анализировали кривые концентрация соединения-время с помощью программного пакета анализа некомпартментных данных РК Solutions 2,0™ (Summit Research Services, Montrose CO). Системный клиренс на кг массы тела (CL) вычисляли в виде дозы на кг массы тела, деленной на AUC, экстраполированной на бесконечность, на основе вычисления по методу трапеций (AUC∞). Представленные величины представляют собой среднее арифметическое и среднеквадратическое отклонение от количества животных, используемых для каждого соединения, как показано в Таблице 3.

Каждое протестированное соединение было аналогично в отношении клиренса или имело заметно более низкий клиренс, чем hGLP-2 и тедуглутид. Данные по тестированным соединениям показаны в Таблице 3.

Таблица 4 Фармакокинетические (РК) данные     CL (мл/кг/мин)   Соединение
№ Доза (мг FB/кг) Среднее Среднеквадратическое отклонение n 1 0,20 7,1 0,7 4 5 0,20 1,2 0,1 3 6 0,20 6,3 1,0 3 10 0,18 1,5 0,2 3 11 0,20 0,84 0,06 3 13 0,20 1,2 0,0 3 15 0,20 2,8 0,1 3 16 0,20 3,3 0,4 3 17 0,20 0,43 0,03 3 18 0,20 1,2 0,1 3 20 0,18 0,28 0,05 3 22 0,20 0,50 0,02 3 23 0,20 0,41 0,05 3 24 0,20 1,9 0,1 3 26 0,20 0,33 0,03 3 28 0,20 0,44 0,04 3 29 0,20 0,51 0,02 3 30 0,20 1,2 0,1 3 31 0,18 5,6 0,2 3 32 0,20 1,1 0,1 3 39 0,20 4,9 0,2 3 40 0,20 0,73 0,09 3 42 0,20 1,3 0,1 3 44 0,20 0,32 0,02 3 45 0,20 0,33 0,03 3 46 0,20 0,26 0,02 3 47 0,20 0,30 0,03 3 48 0,20 0,37 0,04 3 49 0,20 0,48 0,07 3 50 0,20 0,52 0,07 3 51 0,20 0,27 0,04 3 51 0,10 0,20 0,02 3 52 0,20 0,49 0,04 3 53 0,20 0,19 0,02 3 54 0,20 0,27 0,01 3 55 0,20 0,23 0,03 3 56 0,20 0,28 0,01 3 57 0,20 0,17 0,01 3 58 0,20 0,10 0,01 3 59 0,20 0,22 0,07 7 60 0,20 0,29 0,02 3 61 0,20 0,16 0,04 3 62 0,20 0,28 0,03 3 63 0,20 0,24 0,02 3 64 0,20 0,15 0,03 3 66 0,20 0,12 0,01 3 68 0,20 0,15 0,03 3 hGLP-2 1,0 24,6 2,3 4 тедуглутид 1,0 8,0 0,3 4 тедуглутид 0,20 9,9 2,1 15 ZP-1846 0,20 2,8 0,4 3 ZP-1848 0,20 2,4 0,4 3

Фармацевтические композиции

Согласно настоящему изобретению в еще одном аспекте предлагается применение соединения формулы (I), как определено в данном описании изобретения, в качестве фармацевтического средства.

Согласно настоящему изобретению в еще одном аспекте предлагается фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I), как определено в данном описании изобретения, в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, разбавителем или носителем.

Фармацевтическая композиция может быть адаптирована для перорального, внутривенного, местного, внутрибрюшинного, назального, буккального, внутриглазного, внутриушного, сублингвального, внутримышечного и подкожного введения и для введения через дыхательные пути, например в форме аэрозоля или взвешенного в воздухе тонкоизмельченного порошка. Таким образом, композиция может быть представлена, например, в форме таблеток, капсул, порошков, микрочастиц, гранул, сиропов, суспензий, растворов, чрескожных пластырей или суппозиториев.

Следует отметить, что фармацевтические композиция согласно настоящему изобретению может включать два или более определенных выше соединений.

Фармацевтическая композиция, возможно, может содержать, например, по меньшей мере один дополнительный агент, выбранный из разрыхлителя, связующего вещества, смазывающего вещества, ароматизатора, консерванта, красителя и любой их смеси. Примеры этих и других дополнительных агентов находятся в «Handbook of Pharmaceutical Excipients»; Ed. A.M. Kibbe, 3^rd Ed., American Pharmaceutical Association, USA and Pharmaceutical Press UK, 2000.

Фармацевтическая композиция может быть адаптирована для парентерального введения, например посредством инъекции. Композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные, изотонические стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические средства, и растворенные вещества, которые делают композицию изотонической крови предполагаемого реципиента, и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты, солюбилизаторы, загустители, стабилизаторы и консерванты. Жидкие носители для инъецируемых растворов включают в качестве примера и без ограничения ими, воду, физиологический раствор, водную декстрозу и гликоли. Примеры парентеральных композиций можно найти в Avis К., Lieberman H., and Lachman L, Editors, Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications Volume 1, Marcel Dekker, New York, 1992, Examples of suspension formulations can be found in Burgess, D.J. Ed., Injectable Dispersed Systems - Formulation, Processing, and Performance, Informa Healthcare, New York, 2007.

В еще одном аспекте изобретения предлагается применение соединения, как указано выше, для изготовления лекарственного средства для лечения заболеваний, включающих желудочно-кишечное повреждение, диарейные заболевания, недостаточность кишечника, индуцированное кислотой повреждение кишечника, недостаток аргинина, идиопатическую гипоспермию, ожирение, глютеновую болезнь, катаболическую болезнь, индуцированный химиотерапией энтерит, фебрильную нейтропению, диабет, ожирение, нарушенную абсорбцию жира, стеаторею, аутоиммунные заболевания, пищевые аллергии, язвы желудка, гипогликемию, расстройства желудочно-кишечного барьера, сепсис, бактериальный перитонит, индуцированного ожогом повреждение кишечника, пониженную желудочно-кишечную моторику, воспалительные болезни кишечника, расстройство кишечника, ассоциированную с химиотерапией бактериемию, травму кишечника, ишемию кишечника, мезентериальную ишемию, синдром раздраженного кишечника, синдром укороченного кишечника, недоедание, некротизирующий энтероколит, некротизирующий панкреатит, пищевую непереносимость у новорожденных, NSAID-индуцированное желудочно-кишечное повреждение, недостаточность питания, повреждение желудочно-кишечного тракта, вызванное полностью парентеральным питанием, недостаточность питания у новорожденных, индуцированный радиацией энтерит, индуцированное радиацией повреждение кишечника, воспаление слизистой оболочки, паучит, ишемию, инсульт, депрессию, аутизм, остеопороз и травматическое повреждение головного мозга. Воспалительные болезни кишечника включают, без ограничения ими, болезнь Крона и неспецифический язвенный колит.

В еще одном аспекте изобретения предлагается применение соединения, как указано выше, для изготовления лекарственного средства для регулирования аппетита; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения расслабления желудка; контролирования уровней глюкозы; усиления, стимулирования или ускорения насыщения голода; улучшения иммунной функции кишечника; улучшения, стимулирования или ускорения заживления ран кишечника; усиления, стимулирования или ускорения потери массы у подростков; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения развития кишечника у новорожденных; улучшения, стимулирования или ускорения развития плода или новорожденного; предотвращения раковых заболеваний кишечника; улучшения или стимулирования целостности слизистой оболочки; минимизации, подавления или предотвращения бактериального перемещения в кишечнике; улучшения, стимулирования или ускорения восстановления кишечника после операции; предотвращения рецидивов воспалительной болезни кишечника, включая болезнь Крона и неспецифический язвенный колит, например после операции; достижения, поддержания энергетического гомеостаза; улучшения, стимулирования или ускорения астроглиальной регенерации; или улучшения, стимулирования или ускорения восстановления или роста центральной нервной системы.

В еще одном аспекте изобретения предлагаются способы лечения заболеваний, включая желудочно-кишечное повреждение, диарейные заболевания, кишечную недостаточность, индуцированное кислотой повреждение кишечника, недостаток аргинина, идиопатическую гипоспермию, ожирение, глютеновую болезнь, катаболическую болезнь, индуцированный химиотерапией энтерит, фебрильную нейтропению, диабет, ожирение, нарушенную абсорбцию жира, стеаторею, аутоиммунные заболевания, пищевые аллергии, язвы желудка, гипогликемию, расстройства желудочно-кишечного барьера, сепсис, бактериальный перитонит, индуцированное ожогом повреждение кишечника, пониженную желудочно-кишечную моторику, воспалительное заболевание кишечника, расстройство кишечника, ассоциированную с химиотерапией бактериемию, травму кишечника, ишемию кишечника, мезентериальную ишемию, синдром раздраженного кишечника, синдром укороченного кишечника, недоедание, некротизирующий энтероколит, некротизирующий панкреатит, пищевую непереносимость у новорожденных, NSAID-индуцированное желудочно-кишечное повреждение, недостаточность питания, повреждения желудочно-кишечного тракта, вызванного полностью парентеральным питанием, недостаточность питания у новорожденных, индуцированный радиацией энтерит, индуцированное радиацией повреждение кишечника, воспаление слизистой оболочки, резервуарный илеит, ишемию, инсульт, депрессию, аутизм, остеопороз и травматическое повреждение головного мозга, где указанный способ включает введение пациенту-животному, включая человека, терапевтически эффективного количества соединения, как указано выше. Воспалительные болезни кишечника включают, без ограничения, болезнь Крона и неспецифический язвенный колит.

В еще одном аспекте изобретения предлагаются способы регулирования аппетита; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения расслабления желудка; контролирования глюкозы уровней; усиления, стимулирования или ускорения насыщения голода; улучшения иммунной функции кишечника; улучшения, стимулирования или ускорения заживления ран кишечника; усиления, стимулирования или ускорения потери массы у подростков; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения развития кишечника у новорожденных; улучшения, стимулирования или ускорения развитие плода или новорожденных; предотвращения раковых заболеваний кишечника; улучшения или стимулирования целостности слизистой оболочки; минимизации, подавления или предотвращения бактериального перемещения в кишечнике; улучшения, стимулирования или ускорения восстановления кишечника после операции; предотвращения рецидивов воспалительной болезни кишечника, включая болезнь Крона и неспецифический язвенный колит, например после операции; достижения, поддержания энергетического гомеостаза; улучшения, стимулирования или ускорения астроглиальной регенерации; или улучшения, стимулирования или ускорения восстановления или роста центральной нервной системы, где указанный способ включает введение животному, включая человека, пациенту терапевтически эффективного количества соединения, как указано выше.

При использовании в данном описании изобретения «лечение» означает облегчение симптомов, задерживание начала заболевания и/или излечение заболевания, когда соединение по изобретению вводят в подходящей дозе.

Типичная доза соединений согласно настоящему изобретению изменяется в широком диапазоне и зависит от различных факторов, таких как индивидуальные потребности каждого пациента и путь введения. Дозу можно вводить один раз в сутки или чаще, чем один раз в сутки, например с перерывами. В общем случае, введенная доза находится, например, в диапазоне 0,01-5000 мкг, например от 100 до 2000 мкг в сутки, например посредством подкожной инъекции. Врач обычной квалификации в данной области сможет оптимизировать дозу в конкретной ситуации.

Все публикации и патентные заявки, указанные в данном подробном описании, включены в данное описание изобретения посредством ссылки как если бы каждую отдельную публикацию или патентную заявку специально и по отдельности указывали как включенную посредством ссылки.

Хотя изложенное выше изобретение подробно описано при помощи иллюстрации и примера для ясности понимания, специалисту в данной области техники в свете изложения данного изобретения будет ясно, что могут быть внесены некоторые изменения и модификации без отклонения от сущности или объема прилагаемой формулы изобретения.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению аналогов GLP-2, и может быть использовано в медицине для лечения расстройств, ассоциированных с GLP-2. Получены аналоги GLP-2 с агонистической активностью в отношении рецепторов GLP-2. Изобретение позволяет повысить устойчивость к протеазам, что обеспечивает более низкий клиренс полученных аналогов и пролонгирование их биодоступности по сравнению с нативным GLP-2. 11 н. и 18 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Соединение формулы I с агонистической активностью к рецепторам GLP-2 (глюкагонподобный пептид 2):




где R¹ выбран из группы, состоящей из Н, C_1-6алкила, группы фенил-C_1-6 алкил и фенила;
а выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7;
R² представляет собой гетероарил, который представляет собой ароматическое гетероциклическое пяти- или шестичленное кольцо, содержащее 1 или 2 гетероатома N;
b равен 1 или 2;
R³ представляет собой Н;
R⁴ выбран из группы, состоящей из H и C_1-6алкила;
c равен 0;
d выбран из группы, состоящей из 0 и 1;
R⁵ представляет собой метил;
e равен 3;
R⁶ выбран из группы, состоящей из H,
C_1-6алкила, C_3-8циклоалкила,
фенила, возможно замещенного группой-заместителем, выбранной из хлора, фтора, брома, амино и гидрокси, бифенила,
гетероарила, который представляет собой ароматическое гетероциклическое пяти- или шестичленное кольцо, содержащее 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N, О и S; и
-C(O)-NH₂,
где R⁶ присоединен таким образом, что образовавшаяся аминокислота находится в D-конфигурации;
f выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2 и 3, при условии что, если R⁶ не является H, то f не равен 0;
R⁷ выбран из группы, состоящей из
C_1-6алкила,
C_3-8циклоалкила,
фенила, возможно замещенного группой-заместителем, выбранной из хлора, фтора, брома, амино и гидрокси, бифенила, дифенила,
гетероарила, который представляет собой ароматическое гетероциклическое пяти- или шестичленное кольцо, содержащее 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N, О и S; и
-C(O)-NH₂,
g выбран из группы, состоящей из 1, 2 и 3;
R⁸ выбран из группы, состоящей из H, C_1-6алкила, -CH(OH)-CH₃;
h выбран из группы, состоящей из 0,1, 2 и 3;
X₁ представляет собой Gln или Arg;
каждый из X₂, X₃ и X₄ независимо присутствует или отсутствует и, если присутствует, независимо выбран из группы, состоящей из Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asp и Glu;
Ζ представляет собой NR⁹R¹⁰ или OH, где каждый из R⁹ и R¹⁰ независимо выбран из группы, состоящей из
водорода,
C_1-6алкила,
C_3-8циклоалкила,
фенила,
гетероарила, который представляет собой ароматическое гетероциклическое пяти- или шестичленное кольцо, содержащее 1 гетероатом N,
группы фенилC_1-6алкил и
(CH₂)_x-[(CH₂)₂-O]_y-(CH₂)_x-[NH-C(O)-CH₂-O-CH₂]_z-C(O)-NHR¹¹,
где R¹¹ представляет собой H или -[(CH₂)₂-O]_y-(CH₂)_x-C(O)-NH₂; каждый x независимо выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2 и 3, каждый y независимо выбран из группы, состоящей из 3, 4, 5 и 6, z равен 0 или 1,
и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п. 1, где R⁷ и g не могут приводить к образованию L-Asn.

3. Соединение по п. 1, где R¹ представляет собой H, а равен 0, R² представляет собой , и b равен 1.

4. Соединение по п. 1, где все X₂, X₃ и X₄ отсутствуют.

5. Соединение по п. 1, где все X₂, X₃ и X₄ присутствуют.

6. Соединение по п. 1, где Ζ представляет собой ΝΗ₂ или OH.

7. Соединение по п. 1, где Ζ представляет собой NR⁹R¹⁰ и один из R⁹ и R¹⁰ представляет собой водород.

8. Соединение по п. 1, где f равен 1, R⁶ представляет собой фенил, g равен 1, R⁷ представляет собой изопропил, X₂ представляет собой Ile, X₃ представляет собой Thr, X₄ представляет собой Asp и Ζ представляет собой NH₂ или OH.

9. Соединение по п. 1, где R³ представляет собой водород, с равен О, R⁶ представляет собой фенил или 2-тиенил, f равен 1, R⁷ представляет собой фенил или изопропил, g равен 1, R⁸ представляет собой H или -CH(OH)-CH₃ и h равен 0 или 1.

10. Соединение по п. 1 или 9, выбранное из группы, состоящей из:

11. Соединение по п. 1 или 9, выбранное из группы, состоящей из:

12. Соединение по п. 9, где X₂ представляет собой Ile, X₃ представляет собой Thr и X₄ представляет собой Asp.

13. Соединение по п. 9, где присутствуют все X₂, X₃ и X₄,

14. Соединение по п. 9, где Ζ представляет собой OH или NH₂,

15. Соединение по п. 9, где Ζ представляет собой NR⁹R¹⁰, R⁹ представляет собой водород и R¹⁰ представляет собой фенилC_1-6алкил или C_1-6 алкил.

16. Фармацевтическая композиция, обладающая агонистической активностью к рецепторам GLP-2, содержащая соединение по любому из пп. 1-15 в терапевтически эффективном количестве.

17. Фармацевтическая композиция, обладающая агонистической активностью к рецепторам GLP-2, содержащая соединение по любому из пп. 1-15 в терапевтически эффективном количестве в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, разбавителем или носителем.

18. Способ лечения заболевания из группы, состоящей из желудочно-кишечного повреждения, диарейных заболеваний, кишечной недостаточности, индуцированного кислотой повреждения кишечника, недостатка аргинина, идиопатической гипоспермии, ожирения, глютеновой болезни, катаболической болезни, индуцированного химиотерапией энтерита, фебрильной нейтропении, диабета, ожирения, нарушенной абсорбции жира, стеатореи, аутоиммунных заболеваний, пищевых аллергий, язв желудка, гипогликемии, расстройств желудочно-кишечного барьера, сепсиса, бактериального перитонита, индуцированного ожогом повреждения кишечника, пониженной желудочно-кишечной моторики, воспалительного заболевания кишечника, расстройства кишечника, бактериемии, ассоциированной с химиотерапией, травмы кишечника, ишемии кишечника, мезентериальной ишемии, синдрома раздраженного кишечника, синдрома укороченного кишечника, недоедания, некротизирующего энтероколита, некротизирующего панкреатита, пищевой непереносимости у новорожденных, индуцированного NSAID (нестероидным противоспалительным средством) желудочно-кишечного повреждения, недостаточности питания, повреждения желудочно-кишечного тракта вследствие полностью парентерального питания, недостаточности питания у новорожденных, индуцированного радиацией энтерита, индуцированного радиацией повреждения кишечника, воспаления слизистой оболочки, паучита, ишемии и инсульта, где способ включает введение пациенту-животному, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-15, где животное включает человека.

19. Способ по п. 18, где воспалительное заболевание кишечника включает болезнь Крона или неспецифический язвенный колит.

20. Способ регулирования аппетита; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения расслабления желудка; контролирования уровней глюкозы; усиления, стимулирования или ускорения насыщения голода; улучшения иммунной функции кишечника; улучшения, стимулирования или ускорения заживления ран кишечника; усиления, стимулирования или ускорения потери массы у подростков; улучшения, стимулирования или ускорения развития кишечника у новорожденных; улучшения, стимулирования или ускорения развития плода или новорожденного; предотвращения раковых заболеваний кишечника; улучшения или стимулирования целостности слизистой оболочки; минимизации, подавления или предотвращения бактериального перемещения в кишечнике; улучшения, стимулирования или ускорения восстановления кишечника после операции; предотвращения рецидивов воспалительного заболевания кишечника или достижения или поддержания энергетического гомеостаза, где способ включает введение пациенту-животному, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-15, где животное включает человека.

21. Способ по п. 20, где воспалительное заболевание кишечника включает болезнь Крона или неспецифический язвенный колит.

22. Способ лечения заболевания из группы, состоящей из депрессии, аутизма, остеопороза и травматического повреждения головного мозга, включающий введение пациенту-животному, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-15, где животное включает человека.

23. Способ улучшения, стимулирования или ускорения астроглиальной регенерации или улучшения, стимулирования или ускорения восстановления или роста центральной нервной системы, включающий введение пациенту-животному, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-15, где животное включает человека.

24. Применение соединения по любому из пп. 1-15 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания из группы, состоящей из желудочно-кишечного повреждения, диарейных заболеваний, кишечной недостаточности, индуцированного кислотой повреждения кишечника, недостатка аргинина, идиопатической гипоспермии, ожирения, глютеновой болезни, катаболической болезни, индуцированного химиотерапией энтерита, фебрильной нейтропении, диабета, ожирения, нарушенной абсорбции жира, стеатореи, аутоиммунных заболеваний, пищевых аллергий, язв желудка, гипогликемии, расстройств желудочно-кишечного барьера, сепсиса, бактериального перитонита, индуцированного ожогом повреждения кишечника, пониженной желудочно-кишечной моторики, воспалительного заболевания кишечника, расстройства кишечника, бактериемии, ассоциированной с химиотерапией, травмы кишечника, ишемии кишечника, мезентериальной ишемии, синдрома раздраженного кишечника, синдрома укороченного кишечника, недоедания, некротизирующего энтероколита, некротизирующего панкреатита, пищевой непереносимости у новорожденных, индуцированного NSAID желудочно-кишечного повреждения, недостаточности питания, повреждения желудочно-кишечного тракта вследствие полностью парентерального питания, недостаточности питания у новорожденных, индуцированного радиацией энтерита, индуцированного радиацией повреждения кишечника, воспаления слизистой оболочки, паучита, ишемии и инсульта.

25. Применение по п. 24, где воспалительное заболевание кишечника включает болезнь Крона или неспецифический язвенный колит.

26. Применение соединения по любому из пп. 1-15 для изготовления лекарственного средства для регулирования аппетита; усиления, стимулирования или ускорения потери массы; улучшения, стимулирования или ускорения расслабления желудка; контролирования уровней глюкозы; улучшения, стимулирования или ускорения насыщения голода; улучшения иммунной функции кишечника; улучшения, стимулирования или ускорения заживления ран кишечника; усиления, стимулирования или ускорения потери массы у подростков; улучшения, стимулирования или ускорения развития кишечника у новорожденных; улучшения, стимулирования или ускорения развития плода или новорожденного; предотвращения раковых заболеваний кишечника; улучшения или стимулирования целостности слизистой оболочки; минимизации, подавления или предотвращения бактериального перемещения в кишечнике; улучшения, стимулирования или ускорения восстановления кишечника после операции; предотвращения рецидивов воспалительного заболевания кишечника или достижения или поддержания энергетического гомеостаза.

27. Применение по п. 26, где воспалительное заболевание кишечника включает болезнь Крона или неспецифический язвенный колит.

28. Применение соединения по любому из пп. 1-15 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания из группы, состоящей из депрессии, аутизма, остеопороза и травматического повреждения головного мозга.

29. Применение соединения по любому из пп. 1-15 для изготовления лекарственного средства для улучшения, стимулирования или ускорения регенерации астроглиальных клеток или улучшения, стимулирования или ускорения восстановления или роста центральной нервной системы.