СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ВАКЦИНЫ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ ТРИХОФИТОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2015 года по МПК A61K36/06 A61P17/00 C12N1/14 

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к производству вакцины для профилактики и терапии дерматофитоза крупного рогатого скота сухой живой «ЛТФ-130».

Согласно требованиям, действующих в настоящее время НТД на вакцины против трихофитозов, необходимо, чтобы в профилактических целях животному внутримышечно было введено не менее 20 млн/см³ гомогенной взвеси культуры рода Trichophyton verrucosum. Для получения такой суспензии надо иметь в исходном гомогенате культуры концентрацию микроконидий в пределах 250-320 млн/см³. На практике это достигается двумя путями:

- оптимизация режима и времени культивирования штаммов рода Trichopyton verrucosum;

- изыскание питательной среды, на которой штаммы рода Trichophyton verrucosum образуют максимальное количество микроконидий с высокой степенью выживаемости.

Известна технология производства вакцины для профилактики и терапии трихофитоза крупного рогатого скота сухой живой «ЛТФ-130». Технология предусматривает засев матовых колб с твердой питательной средой культурой гриба Trichopyton verrucosum, укладку засеянных колб в термостат в горизонтальном (питательной средой вверх) положении, выдерживание при температуре 26-28°C в пределах 11-15 дней, съем культуры, осуществление гомогенизации грибной массы, соединение ее со стабилизатором в соотношении 1:1 и расфасовку во флаконы (Инструкция по изготовлению и контролю вакцины ЛТФ-130 (ВИЭВ) для профилактики и лечения трохофитии (стригущего лишая) крупного рогатого скота).

Существенным недостатком технологии производства вакцин против трихофитозов является длительный цикл культивирования генераций (до 60 дней) и невысокая жизнеспособность микроконидий (65-70%).

Технический результат заявляемого изобретения состоит в сокращении времени производства вакцины и повышении жизнеспособности микроконидий.

Технический результат достигается путем оптимизации температурного режима в пределах (27±0,5)°C, позволяющей сократить время культивирования гриба с 11-15 дней до 8-10 дней, получением гомогената из более молодой культуры, с высокоспорулирующими свойствами, увеличивающими жизнеспособность микроконидий в готовой вакцине.

Способ получения вакцины осуществляется следующим образом.

Исследования проведены с использованием вакцинного штамма Trichophyton verrucosum ТФ-130 Л ВГНКИ.

Визуальный контроль за ростом культуры показал, что и 11-15-дневная культура, выдержанная при температуре 26-28°C, и 8-11-дневная культура, выдержанная при температуре (27±0,5)°C, имеет вид ровной стелющейся, порошистой белой массы. Морфологические элементы представлены мицелием различной толщины и большим количеством овально-удлиненных микроконидий в виде единично расположенных и гроздьевидных скоплений. Могут встречаться единичные макроконидии с поперечными перегородками внутри.

В результате проведения сравнительных опытов на 8-10 сутки культивирования отмечали высокий спорогенез и максимальное накопление культуры Trichophyton verrucosum.

Это объясняется тем, что на 8-10 день культивирования в питательной среде и в самой колбе имеется достаточно влаги, а значит и питательная среда сохраняет все свои свойства и условия для выращивания данной культуры. С 11-15 дня идет обезвоживание питательной среды, - культуре приходится выживать и ее жизнеспособность падает. Кроме того, 8-10-дневная культура снимается легче с поверхности агара, чем 11-15-дневная за счет меньшего врастания мицелия в среду.

Проверка иммуногенной активности культур Trichophyton verrucosum штамма ТФ-130 Л ВГНКИ, выращенных в укороченные циклы, показала, что опытные серии вакцин, изготовленные из этих культур, обладали одинаковым терапевтическим и профилактическим действием с контрольной серией, изготовленной по ранее используемой схеме.

Опыт 1.

Засеяно 250 матрасов культуры гриба Trichopyton verrucosum штамма ТФ-130 Л ВГНКИ. Культивировали при температуре (27±0,5)°C. Съем и гомогенизация проводились на 8, 9, 10, 11, 15 сутки в количестве по 50 матрасов. Гомогенат соединили со стабилизатором в соотношении 1:1, расфасовали по 2,5 см во флаконы и подвергли сублимационной сушке. По окончании лиофилизации вакцина поставлена на контроль, который проводился согласно требованиям СТО 00482861-0071-2012. Общую концентрацию и концентрацию жизнеспособных микроконидий определяли в каждом из трех флаконов контролируемых серий. Результаты контроля представлены в таблице 1.

Опыт 2.

Засеяно 250 матрасов культуры гриба Trichopyton verrucosum штамма ТФ-130 Л ВГНКИ. Культивировали при температуре (27±0,5)°C. Съем и гомогенизация проводились на 8, 9, 10, 11, 15 сутки в количестве по 50 матрасов. Гомогенат соединили со стабилизатором в соотношении 1:1, расфасовали по 2,5 см во флакон. По окончании лиофилизации вакцина поставлена на контроль, который проводился согласно требованиям СТО 00482861-0071-2012. Общую концентрацию и концентрацию жизнеспособных микроконидий определяли в каждом из трех флаконов контролируемых серий. Результаты контроля представлены в таблице 2.

Опыт 3.

Засеяно 250 матрасов культуры гриба Trichopyton verrucosum штамма ТФ-130 Л ВГНКИ. Культивировали при температуре (27±0,5)°C. Съем и гомогенизация проводились на 8, 9, 10, 11, 15 сутки в количестве по 50 матрасов. Гомогенат соединили со стабилизатором в соотношении 1:1, расфасовали по 2,5 см во флакон. По окончании лиофилизации вакцина поставлена на контроль, который проводился согласно требованиям СТО 00482861-0071-2012. Общую концентрацию и концентрацию жизнеспособных микроконидий определяли в каждом из трех флаконов контролируемых серий. Результаты контроля представлены в таблице 3.

Оптимизирована схема культивирования производственного штамма Trichopyton verrucosum ТФ-130 Л ВГНКИ.

Анализ результатов показывает, что данная разработка сокращает цикл производства вакцины на 12-20 суток (ранее цикл культивирования генераций составлял 60 суток, предложенная схема - 40-48 суток), позволяет увеличить концентрацию жизнеспособных микроконидий на 10-20% (ранее количество жизнеспособных микроконидий составляло 65-70%, а в предложенной схеме 75-89%).

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа производств вакцины для профилактики и терапии трихофитоза крупного рогатого скота. Охарактеризованное решение включает засев матрасов культурой гриба Trichopyton verrucosum штамма ТФ-130 Л ВГНКИ на твердую питательную среду. Укладку засеянных матрасов в термостат в горизонтальном положении питательной средой вверх. Съем культуры и осуществление гомогенизации грибной массы. Соединение ее со стабилизатором в соотношении 1:1 и расфасовку во флаконы, при этом культивирование гриба осуществляют в пределах 8-10 дней при температуре (27±0,5)°C. Представленное изобретение позволяет сократить длительность производства вакцины и повысить жизнеспособность микроконидий в готовой вакцине. 3 табл.

Способ производства вакцины для профилактики и терапии трихофитоза крупного рогатого скота, включающий засев матрасов культурой гриба Trichopyton verrucosum штамма ТФ-130 Л ВГНКИ на твердую питательную среду, укладку засеянных матрасов в термостат в горизонтальном положении питательной средой вверх, съем культуры и осуществление гомогенизации грибной массы, соединение ее со стабилизатором в соотношении 1:1 и расфасовку во флаконы, отличающийся тем, что культивирование гриба осуществляют в пределах 8-10 дней при температуре (27±0,5)°C.