Способ иммунизации животных Советский патент 1991 года по МПК A61K39/39 A61K39/12 

LO

С

Изобретение относится к иммунологии и ветеринарной вирусологии. Целью изобретения является повышение иммуноген- ности противовирусных вакцин. Для этого используют в качестве иммуностимулятора суспензии микроконидий грибов-дермато- фитов, выбранных из группы Trichophyton verrucosum (ВГНКИ № 130, 130Л и 153) или Trichophyton mentagrophytes (ВГНКИ №

Изобретение относится к иммунологии и ветеринарной вирусологии.

Цель изобретения - повышение имму- ногенной активности противовирусных вакцин.

П р и м е р 1. Для осуществления способа культуру грибов Trichophyton verrucosum или Trichophyton mentagrophytes выращивают на поверхности сусло агара, рН 6,4 - 6,8, в стеклянных колбах или мэтрах в течение 10-20 дней при 26°С, после чего ее смывают или снимают скребками с поверхности агара, измельчают в стерильном гомогенизаторе до получения суспензии микроконидий, и при необходимости лиофилизируют в ампулах. Концентрацию микроконидий в суспензии определяют подсчетом клеток гриба в камере Горяева. Жизнеспособность спор определяют по количеству выросших колоний на сусло агаре в чашках Петри, засеянных культурой гриба.

Иммунизацию крупного рогатого скота против парагриппа - З(ПГ-З) проводят путем введения живой вакцины ПМ-З, которую предварительно ресуспендируют до рабочего разведения (доза 2 мл) и смеши- вают с микроконидиями штамма T.verrucosum ВГНКИ № 130Л из расчета 8 млн. живых грибных клеток в одной дозе вирусвакцины.

Трем (1,2 и 3) группам телят (по 10 голов в группе) полученный биопрепарат вводят внутримышечно, двукратно с интервалом соответственно 10, 20 и 30 дней. Для контроля в те же сроки иммунизируют по 5 телят вакциной против ПГ-3 без добавления микроконидий гриба. Титры антител к вирусу возбудителю ПГ-3 в сыворотках крови телят определяют в РТГА до иммунизации и в разО VI О

о го о

ные сроки после второй инъекции антигенов. Результаты серологических исследований, представленные в табл. 1, показывают, что у телят, иммунизированных по предлагаемому способу, титры специфических антител в сроки от 10 сут. до 1 года после иммунизации существенно выше (на 0,5 - 1,5 loga), чем у телят, иммунизированных известным способом только вакциной против ПГ-3.

Пример 2. К вакцине против ПГ-3 перед применением добавляют микроконидии штамма T.verrucosum ВГНКИ № 130 из расчета 6,0 млн живых спор в одной дозе вирусвакцины.

Трем (1, 2 и 3) группам кроликов (по 5 животных в каждой) вводят полученную смесь внутримышечно, двукратно с интервалом 10, 20 и 30 сут. Кроликов трех контрольных групп (4, 5 и 6) в те же сроки вакцинируют вакциной против ПГ-3 без добавления микроконидий гриба. Кроликам еще трех групп (7, 8 и 9) дважды, соответственно через 10, 20 и 30 сут. вводят только микроконидии в дозе 20 млн.кл.

Титры антител к вирусу возбудителю парагриппа в сыворотках крови кроликов определяют в РТГА до вакцинации и в разные сроки после второй инъекции антигенов. Результаты представлены в табл.2.

Данные табл. 2 показывают, что у животных, иммунизированных по предлагаемому способу вакциной против ПГ-3, содержащей микроконидии штамма 130, титры специфических антител, спустя 10 - 30 дней после второй инъекции препарата на 1 -2 loga выше, чем у кроликов, вакцинированных известным способом только вакциной против ПГ-3.

П р и м е р 3. Для иммунизации кроликов против микосматоза вирус-вакцину из штамма В-82 вируса миксомы после ресус- пендирования до рабочего разведения - 10 ИДво/мл смешивают с микроконидиями лиофилизированного штамма T.verrucosum ВГНКИ № 153 из расчета 4 млн. живых микроконидий в одной дозе вирусвакцины.

Шесть кроликов иммунизируют введением этой смеси внутримышечно однократно. Еще шести кроликам вводят также внутримышечно однократно вакцину против миксоматоза в дозе 10 ИД50/мл без добавления микроконидий.

До иммунизации в сыворотках крови всех кроликов антитела к вирусу миксомы в реакции диффузионной прецилитации не выявлялись.

На 7-й, 14-й и 21-й дни после иммунизации по 2 кролика из каждой группы и двух контрольных неиммунизированных заражают вирусом миксомы с целью определения сроков формирования и напряженности противовирусного иммунитета. Перед заражением у кроликов берут

кровь для определения титра антител в ИФА(иммуноферментный анализ).

Эффективность иммунизации оценивают по индексу защиты, представляющего собой степень снижения титра контрольно0 го вируса миксомы на вакцинированных животных по сравнению с титром того же вируса на неиммунизированных кроликах. Индекс защиты от 3lg и выше свидетельствует о формировании напряженности имму5 нитета у иммунизированных кроликов.

Результаты, представленные в табл. 3, показывают, что добавление к вакцине против миксоматоза кроликов микроконидий T.verrucosum № 153 стимулирует антитело0 образование, ускоряет формирование иммунитета и усиливает его напряженность.

Пример 4. К живой вакцине против миксоматоза кроликов из штамма В-82 в рабочем разведении 31 ИД50/мл добавля5 ют микроконидии гриба T.mentagrophytes ВГНКИ N 135 из расчета 8 млн. живых микроконидий в одной иммунизирующей дозе. 17 кроликов иммунизируют введением полученного препарата внутримышечно од0 нократно. 17 других кроликов иммунизируют путем однократного внутримышечного введения вакцины против миксоматоза в дозе 31 ИДбо/мл без добавления микроконидий, Группу кроликов не вакцинируют

5 (контроль). До иммунизации у кроликов антител в реакции диффузионной преципитации не выявлялось.

На 7-й, 14-й, 21-й и 28-й дни после иммунизации по 4-5 вакцинированных

0 кроликов из группы заражают вирусом миксомы с целью определения динамики формирования поствакцинального иммунитета, Перед заражением у кроликов берут кровь для определения титров антител

5 в ИФА. Результаты представлены в табл.4. Как видно из полученных данных, добавление к вакцине против миксоматоза кроликов микроконидий T.mentagrophytes стимулирует антителообразование и ускоQ ряет формирование иммунитета у привитых животных.

Таким образом, добавление к противовирусным вакцинам суспензии микроконидий грибов-дерматофитов из

к расчета 4-8 млн, спор в иммунизирующей дозе препарата стимулирует иммунный ответ, что выражается в усилении антигенной и иммуногенной активности биопрепаратов и, тем самым, повышении их эффективности.

Формула изобретения Способ иммунизации животных, включающий введение биопрепарата с иммуностимулятором, отличающийся тем, что,

с целью повышения иммуногенной активно- 5 препарата.

Примечание: П- пэрагрипп-3; Е - Tr verrucosum.

Примечание: П- парагрипп-3: Т - Тг. verrucosum.

Примечание: М- вакцина против миксоматоза кроликов из штамма В-82. Т - суспензия микроконидия штамма Tr. verrucosum №153

сти в качестве иммуностимулятора используют суспензию микроконидий грибов-де- рматофитов в концентрации 4-8 млн. живых спор в иммунизирующей дозе биоТаблица 1

Таблица 2

Таблица 3

Примечание: М- вакцина против миксомэтоза кроликов.

Т - микроконидии дерматофитов штамма Tr. mentagrophytes № 135

Таблица 4