СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕФОТАКСИМА МЕТОДОМ ОБРАЩЕННО-ФАЗНОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ Российский патент 2019 года по МПК G01N30/02 G01N30/10 G01N30/26 G01N30/50 G01N30/74 C07D501/06 C07D501/24 C07D417/12 

Описание патента на изобретение RU2687493C1

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в контрольно-аналитических, клинических лабораториях для определения концентрации цефотаксима, для стандартизации и контроля качества лекарственных средств, для определения антибиотиков в образцах биологического происхождения с целью изучения фармакокинетики, лекарственного мониторинга для регулирования введения оптимальных доз антибиотиков при лечении различных инфекционных заболеваний.

Для определения цефотаксима используют масс-спектрометрию, диффузию в агар, высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), а также потенциометрические методы с применением ионоселективных электродов с различными видами электродно-активных соединений [1].

Для качественного и количественного анализа антибиотиков в фармацевтических формах и биологических жидкостях наиболее перспективным является использование высокоэффективной жидкостной хроматографии в обращенно-фазном режиме. Метод отличается селективностью, точностью и воспроизводимостью, а также высоким уровнем автоматизации.

Известно использование ультрафиолетовой спектрофотометрии для количественного определения цефалоспоринов в биологических средах. Способ заключается в снятии спектров поглощения антибиотика в пробе после удаления из нее твердых элементов и осаждения белков. К недостаткам данного способа можно отнести низкие показатели специфичности и чувствительности (2 мкг/мл) [2].

Известен способ определения цефотаксима методом ультрафиолетовой спектрофотометрии для количественного определения цефалоспоринов в биосредах. Предложенный метод основан на свойстве азотсодержащих органических соединений образовывать окрашенные соединения с солями переходных металлов в водных растворах. Основными недостатками этого способа являются трудоемкая пробоподготовка, низкая специфичность и визуальный учет результата исследования, что может существенно снизить воспроизводимость результатов. Кроме того, для образцов с концентрацией аналита менее 10 мкг/мл применяется дополнительная стадия концентрирования пробы, что еще сильнее затрудняет ход анализа [3].

Наиболее близким к заявляемому изобретению является методика определения цефотаксима натрия методом ВЭЖХ в изократическом режиме с использованием хроматографической колонки размером 250×4 мм, заполненной сорбентом С8 с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония (рН=6,8) с ацетонитрилом в соотношении 85:15. Недостатками метода являются небольшая чувствительность и низкое удерживание цефотаксима в данных хроматографических условиях. Кроме того, низкая буферная емкость раствора ацетата аммония при рН=6,80 может приводить к уширенным и ассиметричным пикам, что существенно осложняет проведение количественного анализа [4].

Целью предлагаемого изобретения является разработка способа определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Технический результат достигается с помощью способа определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, в котором изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, при этом хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН=4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл.

Сущность способа определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, при этом хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН=4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл.

Использование в качестве неподвижной фазы хроматографической колонки размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм, позволяет получить эффективное разделение цефотаксима с примесными соединениями пробы. Меньший внутренний диаметр колонки позволяет уменьшить расход подвижной фазы с сохранением эффективности, а большая гидрофобность сорбента С18 по сравнению с С8 обеспечивает большее удерживание цефотаксима, что повышает разрешающую способность метода.

Применения в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10 позволяет достигнуть высокой симметрии и остроты пиков за счет высокой буферной емкости аммоний-ацетатного буфера при рН=4,70.

Заявляемый способ обладает следующими отличительными от прототипа признаками:

- Высокая чувствительность метода (предел обнаружения 27 нг/мл);

- Повышенная экономическая эффективность анализа: расход подвижной фазы и ацетонитрила ниже в 2 и 1,5 раза соответственно.

На фиг. 1, дан способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, калибровочная кривая цефотаксима.

На фиг. 2, дан способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, хроматограмма цефотаксима.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый образец растворяется в смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10, фильтруется через 0,2 мкм фильтр и анализируется на приборе «Ultimate 3000» Dionex с ультрафиолетовым детектором при длине волны 252 нм, хроматографической колонкой размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм. Режим элюирования изократический, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10, температура термостата колонки 25°С, объем вводимой пробы 10 мкл. Проводится не менее пяти измерений для каждого раствора.

Концентрацию цефотаксима в препаратах определяли с использованием предварительно построенной калибровочной кривой зависимости площади пика аналита от концентрации (фиг. 1).

Возможность практического применения заявленного способа подтверждается примером его конкретного выполнения с использованием совокупности заявляемых признаков.

Пример 1.

200 мкл плазмы крови смешивается с 800 мкл смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10, фильтруется через 0,2 мкм фильтр и анализируется на приборе «Ultimate 3000» Dionex с ультрафиолетовым детектором при длине волны 252 нм, хроматографической колонкой размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм. Режим элюирования изократический, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10, температура термостата колонки 25°С, объем вводимой пробы 10 мкл. Проводится не менее пяти измерений для каждого раствора.

На представленной хроматограмме образца предел обнаружения цефотаксима составляет 27 нг/мл, время удерживания 9,92±0,12 мин (фиг. 2.).

Используемая литература

1. Кулапина, Е.Г. Современные методы определения антибиотиков в биологических и лекарственных средах / Е.Г. Кулапина, О.В. Баринова, О.И. Кулапина, И.А. Утц, СВ. Снесарев // Антибиотики и химиотерапия. - 2009. - Т. 54. - №9-10. - С. 53-60.

2. Патент РФ №2445624. Опубликован 20.03.2012 Бюл. №8.

3. Патент РФ №2567335. Опубликован 10.11.2015 Бюл. №31.

4. Lalitha, N. Development and validation of RP-HPLC method for estimation of cefotaxime sodium in marketed formulations / N. Lalitha, P.S. Pai // J. Basic Clin. Pharm. - 2009. - Vol.1. - P. 26-28.

Похожие патенты RU2687493C1

название год авторы номер документа
Способ определения аминогликозидных антибиотиков методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии 2022
  • Шахова Валерия Николаевна
  • Беляев Валерий Анатольевич
  • Севостьянова Ольга Игоревна
  • Светлакова Елена Валентиновна
  • Говорова Милана Владимировна
  • Жиров Андрей Михайлович
  • Ковалев Дмитрий Анатольевич
RU2786839C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИПРОФЛОКСАЦИНА МЕТОДОМ ОБРАЩЕННО-ФАЗНОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 2020
  • Жиров Андрей Михайлович
  • Ковалев Дмитрий Анатольевич
  • Ульшина Диана Васильевна
  • Писаренко Сергей Владимирович
  • Кузнецова Ирина Владимировна
  • Сирица Юлия Владимировна
  • Бобрышева Ольга Викторовна
  • Евченко Анна Юрьевна
  • Шапаков Николай Андреевич
  • Рязанова Алла Геннадьевна
  • Аксенова Людмила Юрьевна
  • Семенова Ольга Викторовна
  • Варфоломеева Наталья Геннадьевна
  • Куличенко Александр Николаевич
RU2751338C1
Способ определения скорости высвобождения инкапсулированного в ниосомы цефотаксима in vitro 2020
  • Ковалев Дмитрий Анатольевич
  • Жиров Андрей Михайлович
  • Писаренко Сергей Владимирович
  • Куличенко Александр Николаевич
  • Шахова Валерия Николаевна
  • Беляев Валерий Анатольевич
  • Кастарнова Елена Сергеевна
RU2754850C1
Способ определения амиодарона и его основного метаболита дезэтиламиодарона в сыворотке крови человека 2020
  • Родина Татьяна Александровна
  • Мельников Евгений Сергеевич
  • Прокофьев Алексей Борисович
  • Красных Людмила Михайловна
  • Городецкая Галина Ивановна
  • Василенко Галина Федоровна
  • Белков Сергей Александрович
  • Архипов Владимир Владимирович
  • Журавлева Марина Владимировна
RU2749566C1
Способ количественного определения декспантенола и хитозана при их совместном присутствии в геле 2021
  • Доба Солайман Хассеб
  • Карлов Павел Михайлович
  • Бузлама Анна Витальевна
  • Гудкова Алевтина Алексеевна
  • Дагир Сали Руфаиль
  • Аль-Мардини Мухаммад Амир Мухаммад Махжуб
RU2760525C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЭСТРОГЕНА И ДЕКСПАНТЕНОЛА В ДВУХКОМПОНЕНТНОМ ЛЕКАРСТВЕННОМ ПРЕПАРАТЕ МЕТОДОМ ВЭЖХ 2011
  • Моругина Людмила Валентиновна
  • Рудько Александр Иосифович
RU2476873C1
СПОСОБ УВЕЛИЧЕНИЯ СРОКА ЭКСПЛУАТАЦИИ СОРБЕНТА ПРИ ПРОМЫШЛЕННОЙ ОЧИСТКЕ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНОГО ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА 2008
  • Гусаров Дмитрий Алексеевич
  • Соколова Ирина Владимировна
  • Ласман Владимир Александрович
  • Баирамашвили Дмитрий Ильич
  • Мирошников Анатолий Иванович
RU2383624C2
СПОСОБ ОЧИСТКИ ТРИПТОРЕЛИНА 2015
  • Малин Александр Александрович
  • Михайлов Олег Ростиславович
  • Уваров Николай Александрович
RU2585105C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГИДРОКСИМЕТИЛХИНОКСИЛИНДИОКСИДА И ЕГО ПРИМЕСЕЙ МЕТОДОМ ВЭЖХ 2012
  • Моругина Людмила Валентиновна
  • Володина Татьяна Вячеславовна
RU2517761C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ТРОКСЕРУТИНА, ДЕКСПАНТЕНОЛА, БЕНЗОКАИНА И МЕТИЛПАРАГИДРОКСИБЕНЗОАТА В ЛЕКАРСТВЕННОМ ПРЕПАРАТЕ МЕТОДОМ ВЭЖХ 2011
  • Моругина Людмила Валентиновна
  • Чумачева Евгения Алексеевна
RU2475733C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 687 493 C1

Реферат патента 2019 года СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕФОТАКСИМА МЕТОДОМ ОБРАЩЕННО-ФАЗНОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящее изобретение относится к способу определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающему изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, отличающийся тем, что хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН=4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл. Технический результат – эффективное разделение цефотаксима с примесными соединениями пробы и обеспечение большого удержания цефотаксима, что повышает чувствительность и разрешающую способность метода, уменьшение расхода подвижной фазы, что повышает экономическую эффективность анализа. 2 ил., 1 пр.

Формула изобретения RU 2 687 493 C1

Способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, отличающийся тем, что хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН=4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2687493C1

N
Lalitha, P.S
Pai: "Development and validation of RP-HPLC method for estimation of cefotaxime sodium in marketed formulations", J
Basic Clin
Pharm., 2009., vol.1, pp.26-28
L.I
Sokolova, I.V
Chuchalina: "Preconcentration of the antibiotics Cephazolin, Cefotaxime and Levomycetin on modified silicas", Journal of Analytical Chemistry, 2006, vol.61, no.12, pp.1140-1143, DOI: 10.1134/S1061934806120021
CN 101592637 A, 02.12.2009
CN 101592636 A, 02.12.2009
Е.Г
Кулапина и др.: "Современные методы определения антибиотиков в биологических и лекарственных средах (обзор)", антибиотики и химиотерапия, 2009, т
Видоизменение прибора для получения стереоскопических впечатлений от двух изображений различного масштаба 1919
  • Кауфман А.К.
SU54A1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕФАЛОСПОРИНОВЫХ АНТИБИОТИКОВ В БИОСРЕДАХ 2010
  • Кулапина Елена Григорьевна
  • Кулапина Ольга Ивановна
  • Утц Ирина Александровна
  • Михайлова Мария Сергеевна
RU2445624C2
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИПРОФЛОКСАЦИНА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ 2009
  • Смирнова Татьяна Дмитриевна
  • Штыков Сергей Николаевич
  • Неврюева Наталия Владимировна
RU2416792C1

RU 2 687 493 C1

Авторы

Жиров Андрей Михайлович

Ковалев Дмитрий Анатольевич

Ульшина Диана Васильевна

Писаренко Сергей Владимирович

Бобрышева Ольга Викторовна

Куличенко Александр Николаевич

Шахова Валерия Николаевна

Беляев Валерий Анатольевич

Кастарнова Елена Сергеевна

Кузнецова Ирина Владимировна

Сирица Юлия Владимировна

Даты

2019-05-14Публикация

2018-10-08Подача