L-аланиния ацетилсалицилат, проявляющий антикоагуляционную активность Российский патент 2019 года по МПК C07C65/03 C07C229/38 C07C51/41 A61K31/616 A61P7/02 

Изобретение относится к химии и медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии, и может быть использовано для создания новых лекарственных средств профилактики тромбоза и тромбоэмболических осложнений.

Прототипом и препаратом сравнения является гепарин натрия, который длительно и успешно применяется в практической медицине и имеет доказанную эффективность в качестве средства профилактики и лечения тромбоза и тромбоэмболических осложнений (ГОСТ Р 56377-2015. Клинические рекомендации (протоколы лечения). Профилактика тромбоэмболических синдромов от 01.03.2016).

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, проявляющих антикоагуляционную активность.

Технический результат - получение средства, проявляющего антикоагуляционную активность.

Сущность изобретения: применение L-аланиния ацетилсалицилата формулы I в качестве средства, проявляющего антикоагуляционную активность.

Известное соединение синтезировали следующим образом.

Растворимую соль соединения I получали путем взаимодействия ацетилсалициловой кислоты и аминокислоты в мольном соотношении 1:1. К раствору соответствующей аминокислоты в воде прибавляли суспензию ацетилсалициловой кислоты в ацетоне в соотношении 1:2, при перемешивании при температуре 20-30°С, при этом наблюдали образование осадка, который растворяли добавлением небольшого количества ацетона. Реакционную смесь выдерживали при перемешивании при той же температуре, до полного растворения ацетилсалициловой кислоты и образования прозрачного раствора. Контроль за ходом реакции осуществляли методом ТСХ (в системе этанол - вода - 1:1). По завершении реакции раствор стерилизовали методом бактериальной фильтрации, добавляли ацетон стерилизованный методом бактериальной фильтрации. Полученный раствор охлаждали при температуре от 0° дo 6°С около 20 ч до образования кристаллов. Выпавший осадок отфильтровывали, промывали стерильным ацетоном, сушили.

Пример 1. Синтез соединения I.

К раствору 0,8 г L-аланина (8 моль) в 6 мл воды добавляли суспензию 1.7 г ацетилсалициловой кислоты (8 моль) в 5,1 мл ацетона. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре, при этом образуется осадок, который растворяли добавлением 6 мл ацетона. Реакционную смесь выдерживали при этой же температуре. Контроль протекания реакции проводили методом ТСХ (подвижная фаза этанол / вода - 1/1). Затем раствор стерилизовали методом бактериальной фильтрации

К стерильному раствору реакционной смеси добавляли 15 мл ацетона стерилизованного методом бактериальной фильтрации. После перемешивания полученный раствор охлаждают при температуре от 0° дo 6°С около 20 ч до образования кристаллов. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают стерильным ацетоном, сушат.

Выход 2,1 г (76%). L-Аланиния ацетилсалицилата Т. пл. 165-167°С (из водного ацетона).. R_f 0,83 (этанол / вода - 1/1).

Элементный анализ.

Найдено, %: С 53,5 Н 5,3 N 5,0 - C₁₂H₁₄NO₆

Вычислено, %: С 53,7 Н 5,3 N 5,2

ИК Спектр, ν, см^-1: 3390 (NH₃⁺ вал.), 3075 (СООН, Ala, О-Н вал.), 2523 (СООН, Ala, С-С, вал.), 1749 (СООН, Ala, С=O, вал.), 1677 (О(О)ССН₃, AcSal, С=O, вал.), 1636 (AcSal, COO^-, вал.), 1585 (Ar AcSal, С=С, вал.), 1454 (Ala, СН₃, деф.)

Спектр ЯМР ¹Н ДМСО-d6 δ, м.д.: 1.4 (3Н, д, J=2.5 Гц, СН₃); 2.25 (3Н, д, J=2.5 Гц, СН₃); 3.8 (Н, д, J=1.5 Гц, СН); 6.85 (1Н, м, С₅Н); 7.3 (1H, м, С₃Н); 7.65 (1Н, т, J=1.5 Гц, С₄Н), 7.85 (1Н, д, J=1.5 Гц, С₆Н).

Заявляемое соединение представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в воде, в водном ацетоне, смеси этанол вода 1:1.

Пример 2. Антикоагуляционная активность соединения I.

Эксперименты в условиях in vitro выполнены на крови здоровых доноров-мужчин в возрасте 18-24 лет. Общее количество доноров составило 68 человек. Забор крови проводился из кубитальной вены с использованием систем вакуумного забора крови BD Vacutainer® (Becton Dickinson and Company, США). В качестве стабилизатора венозной крови использовался 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении 9:1.

Все тесты проводились на обогащенной и обедненной тромбоцитами плазмах. Образцы богатой тромбоцитами плазмы получали центрифугированием цитратной крови при 1000 об/мин в течение 10 минут, бестромбоцитарной плазмы - при 3000 об/мин в течение 20 минут. В работе использовалась центрифуга ОПН-3.02 (ОАО ТНК "ДАСТАН", Киргизия).

Определение антикоагуляционной активности проводили общепризнанными клоттинговыми тестами на турбидиметрическом гемокоагулометре Solar CGL 2110 (ЗАО «СОЛАР», Беларусь). Изучались показатели активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), протромбинового времени (ПВ) и концентрации фибриногена по A.Clauss. Определение антикоагуляционной активности исследуемых веществ и препарата сравнения проводили в концентрации 5×10^-4 г/мл. В качестве препарата сравнения был выбран «Гепарин натрия» (ОАО «Синтез», Россия). В работе использовались реактивы производства «Технология-Стандарт» (г. Барнаул, Россия).

Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Выявлено, что вид распределения полученных данных отличается от нормального, поэтому при дальнейшей работе использовались непараметрические методы. Данные представлены в виде медианы, 25 и 75 процентилей. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05.

По результатам исследования установлено, что соединение I и гепарин натрия проявляют антикоагуляционную активность, характеризующуюся удлинением показателя внутреннего пути свертывания крови - АПТВ. Гепарин натрия пролонгирует АПТВ на 20,3%, а медиана удлинения АПТВ для соединения I составляет 18,9%. Данные соединения в указанной концентрации не влияли на показатель концентрации фибриногена и ПВ (таблица).

Таким образом, соединение I проявляет выраженную антикоагуляционную активность, сопоставимую с гепарином.

Изобретение относится к применению L-аланиния ацетилсалицилата формулы 1 в качестве средства, проявляющего антикоагуляционную активность. Соединение обладает антикоагуляционной активностью, сопоставимой с гепарином. 2 пр.

Применение L-аланиния ацетилсалицилата формулы

в качестве средства, проявляющего антикоагуляционную активность.