Область техники
Настоящее изобретение относится к аттенуированному штамму вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) и к его применению в качестве вакцины с целью индукции иммунного ответа.
Уровень техники
Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней, обычно обозначаемый сокращенно «вирус РРСС», впервые выделили в Голландии в 1990 во время вспышки инфекции, вызывающей развитие репродуктивной патологии, на свинофермах (19). Постепенно это клиническое проявление заболевания распространилось и на другие страны, не только в Европе, но также в США и в Азии (2, 6, 9, 15). Вирус классифицировали как относящийся к порядку Nidovirales, семейству Arteriviridae, роду Arterivirus (5, 12). Вышеупомянутый возбудитель болезни отличается наличием РНК (SS+, positive-sense single-stranded RNA, одноцепочечная (+)РНК) и геномом, состоящим из 9 открытых рамок считывания (ORF, open reading frame), кодирующих различные вирусные белки, как структурные, так и неструктурные (1, 3, 18). Несмотря на то, что вирус был выделен более 20 лет назад, он продолжает представлять проблему, связанную со здоровьем животных на свинофермах. В дополнение к патологиям репродуктивной системы он отвечает за инфекции дыхательных путей, часто осложненные вторичными инфекциями, вызванными другими возбудителями, что вызывает большие потери животных и влечет за собой огромные финансовые затраты. Сложность контроля данной инфекции связана с двумя основными факторами: 1) постоянной генетической и антигенной вариабельностью вируса (9, 10, 11, 13, 17); и 2) неспособностью организма хозяина активировать полный иммунный ответ (14).
Было показано, что вирус РРСС способен активировать переключение с врожденного ответа на адаптивный ответ с последующей задержкой синтеза антител, нейтрализующих инфекционность вируса, и цитокинов, таких как гамма-интерферон, что приводит к персистированию вируса в свободной форме в организме, к его удалению из зараженных животных по истечении длительного периода времени и последующей передаче инфекции другим восприимчивым животным. Все это приводит к персистированию инфекции на зараженных фермах.
Существует несколько вакцин, специфичных к вирусу РРСС, которые классифицируют по следующим типам: рекомбинантные, живые, аттенуированные и инактивированные (16).
Международная заявка на патент WO2012153160 относится к живой или инактивированной рекомбинантной вакцине, содержащей вирус и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант и/или эксципиент, характеризующейся тем, что вирусный вектор является вирусом, способным индуцировать иммунный ответ за счет повышения образования альфа- и/или гамма-интерферона и способным быстро реплицироваться, а также содержит вставки нуклеотидной последовательности ORF5 и ORF6 вируса РРСС.
Международная заявка на патент WO2013017570 относится к области аттенуированных живых вирусов, применяемых в качестве вакцин или лекарственных средств для предотвращения или лечения свиней с репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), и основана на открытии штамма вируса РРСС, способного индуцировать интерфероновый ответ (интерферон типа I) у природного хозяина, инфицированного указанным возбудителем. В одном варианте осуществления настоящего изобретения вирус РРСС является мутантным вирусом РРСС, содержащим по сравнению с геномом штамма дикого типа мутацию в гене, кодирующем неструктурный белок 1 (nsp1, not structural protein 1) указанного вируса.
Международная заявка на патент WO2013017568 относится к последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей геном инфекционного клона вируса РРСС с генотипом I (EU), применимого для исследования РРСС и для разработки вакцин, терапевтических агентов и для проведения диагностики с целью профилактики, лечения и диагностики РРСС. Заявка на патент раскрывает тот факт, что получение инфекционного клона было начато с вирусного штамма (EUX), выделенного из легких поросенка.
Заявка на патент США US2012189655 относится к аттенуированной живой вакцине, обеспечивающей выраженную иммунологическую защиту свиней от РРСС.
Международная заявка на патент WO9800165 относится к вакцинам против РРСС, полученным посредством аттенуации штаммов дикого типа вируса, выбранных из группы аттенуированных штаммов NADC-8, NADC-9 и NVSL-14. Штамм NADC-8 был выделен из единственного поросенка, оставшегося в живых из всего помета, где остальные поросята погибли в результате природной инфекции вирусом РРСС. Штамм NADC-9 был выделен из легких свиньи с очагами уплотнений в легких, возникших, предположительно, в результате природной инфекции РРСС. Штамм NVSL-14 был отобран из группы 20 полевых штаммов вируса РРСС, поскольку этот штамм реплицировался до образования высокого титра инфекционности в чувствительной клеточной линии (MARC-145). Каждый штамм очищали посредством 3 конечных разведений, а затем аттенуировали посредством уникального процесса быстрой серии пересевов (с суточным интервалом) в клетках MARC-145 при разведении инокулята (≤1:50000) при каждом посеве, а затем тестировали на предмет аттенуации после 84го и после 250го пересева в клеточной культуре, вводя вирус чувствительным молодым свиньям на поздней стадии беременности.
J. Hu et al., Transboundary and emerging diseases, vol.61, no.2, 2013 раскрывает разработку живых аттенуированных кандидатных вакцин против вируса РРСС с помощью серийных пересевов в стабильной клеточной линии со ссылкой на Tian et al. (2009) или с помощью генетической инженерии штаммов дикого типа.
Ограничения доступных в настоящее время вакцин связаны с их неспособностью формировать защитный иммунный ответ в отношении вирусных штаммов со значительно отличающимися геномными областями, которые в основном кодируют структурный гликопротеин 5 (GP5, glycoprotein 5), кодируемый ORF5, и реже - внутренний нуклеокапсидный белок (N, nucleocapsid), кодируемый ORF7. Более того, вакцины, содержащие субъединицы вирусных белков, или вакцины, полученные с применением рекомбинантных векторов, малоэффективны, поскольку не индуцируют полноценный ответ организма.
Описание изобретения
Авторы изобретения выбрали штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), характеризующийся высоким уровнем аттенуации вирулентности и способный индуцировать образование антител так, как это делает вирус РРСС.
Неожиданно авторы изобретения обнаружили, что при проведении серии заражений природных хозяев, т.е. свиней, вирусом РРСС in vivo наблюдалось существенное снижение вирулентности вируса РРСС в отношении хозяев. Действительно, у зараженных свиней клинические симптомы были менее тяжелыми, в то время как виремия продолжает обнаруживаться на пониженном уровне и в течение более короткого периода времени.
Авторы изобретения проанализировали характеристики инокулированного вируса в каждом инфекционном цикле в соответствии со следующими параметрами:
- клинические проявления и гипертермия
- наличие вируса в крови (виремия)
- стимуляция иммунной системы (гуморальный ответ)
- макроскопические наблюдения при вскрытии
- наличие вируса в целевых органах.
Сначала вирус был способен вызывать у зараженных животных тяжелые клинические проявления, характеризующиеся летаргией, тахипноэ, тремором, отеком век, кашлем, одышкой и персистирующей гиперплазией паховых лимфатических узлов длительностью до 20 дней. Некоторые особи погибали. У животных также наблюдалась гипертермия со значениями температуры выше 40°С на протяжении нескольких дней.
Вирус детектировался в сыворотке крови, начиная со второго дня инфицирования, и сохранялся на протяжении более чем 2 дней, в некоторых случаях до 30 дней.
Инфекция активировала классический гуморальный ответ, детектируемый через 7 дней, достигающий максимальных значений через 14 дней.
При вскрытии у животных обнаруживалась интерстициальная пневмония, спленомегалия и гиперплазия паховых лимфатических узлов. Вирус присутствовал в легких, на миндалинах и в медиастинальных и паховых лимфатических узлах.
Указанные условия подвергались постепенной модификации в последующих пассажах, и клинические симптомы у инфицированных свиней были менее выраженными, хотя виремия при этом сохранялась.
Начиная с 18го пассажа in vivo, клинические проявления продолжали постепенно уменьшаться, что привело также к отсутствию гипертермии.
Затем авторы изобретения повторили пересевы in vivo, чтобы добиться на протяжении по меньшей мере 4 последовательных пассажей отсутствия клинических симптомов у свиней, умеренной гипертермии (температуры тела не выше 39°С), отсутствия виремической стадии, отсутствия гистопатологических очагов в целевых органах (в легких, миндалинах, медиастинальных лимфатических узлах) и отсутствия интерстициальной пневмонии и гиперплазии лимфатических узлов. Авторы изобретения обнаружили, что вирус сохранялся в легких и на миндалинах, и спорадически присутствовал в лимфатических узлах, и сохранял способность стимулировать иммунную систему, индуцируя образование гуморальных антител. Затем авторы изобретения выделили вирусный штамм, адаптировали отобранный и очищенный вирусный штамм к клеточной культуре, и провели определение последовательности его генома.
Таким образом, целью изобретения является аттенуированный штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), характеризующийся содержанием полинуклеотида, колирующего по меньшей мере один белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, или его функциональные фрагменты или функциональные производные.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанный полинуклеотид кодирует по меньшей мере один белок, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10.
Предпочтительно, чтобы указанный полинуклеотид содержал молекулу РНК, соответствующую по меньшей мере одному полинуклеотиду, содержащему последовательность с по меньшей мере 85% идентичностью с нуклеотидами 218-7327 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 89% идентичностью с нуклеотидами 7309-11691 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 87% идентичностью с нуклеотидами 11711-12460 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 85% идентичностью с нуклеотидами 11716-11928 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 89% идентичностью с нуклеотидами 12319-13086 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 87% идентичностью с нуклеотидами 12861-13412 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 86% идентичностью с нуклеотидами 13409-14014 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 90% идентичностью с нуклеотидами 14002-14523 SEQ ID NO: 1, или последовательность с по меньшей мере 94% идентичностью с нуклеотидами 14513-14899 SEQ ID NO: 1.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере один белок, как определено выше, содержит молекулу РНК, соответствующую по меньшей мере одному полинуклеотиду, содержащему основную последовательность с нуклеотидами 218-7327 SEQ ID NO: 1 или последовательность с нуклеотидами 7309-11691 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 11711-12460 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 11716-11928 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 12319-13086 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 12861-13412 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 13409-14014 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 14002-14523 SEQ ID NO: 1, или последовательность с нуклеотидами 14513-14899 SEQ ID NO: 1.
В более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере один белок, как определено выше, содержит молекулу РНК, соответствующую по меньшей мере одному полинуклеотиду, содержащему последовательность с по меньшей мере 87% идентичностью SEQ ID NO: 1.
Предпочтительно, чтобы указанная молекула РНК соответствовала полинуклеотиду, имеющему основную последовательность SEQ ID NO: 1.
Предпочтительно, чтобы указанный полинуклеотид был кДНК.
Иными словами, предпочтительно, чтобы аттенуированный штамм настоящего изобретения содержал молекулу РНК, колирующую по меньшей мере один белок или его функциональные фрагменты или функциональные производные, как определено выше. Предпочтительно, чтобы аттенуированный штамм настоящего изобретения содержал молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду ДНК SEQ ID NO:1.
Таким образом, целью настоящего изобретения является аттенуированный штамм вируса РРСС, содержащий молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду ДНК, содержащему последовательность с по меньшей мере 87% идентичностью SEQ ID NO:1.
Также целью настоящего изобретения является аттенуированный штамм вируса РРСС, содержащий молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду ДНК SEQ ID NO:1.
В настоящем штамме последовательность с нуклеотидами 218-7327 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF1a, последовательность с нуклеотидами 7309-11691 SEQ ID NO:1 соответствует ORF1b, последовательность с нуклеотидами 11711-12460 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF2a, последовательность с нуклеотидами 11716-11928 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 2b, последовательность с нуклеотидами 12319-13086 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 3, последовательность с нуклеотидами 12861-13412 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 4, последовательность с нуклеотидами 13409-14014 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 5, последовательность с нуклеотидами 14002-14523 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 6 и последовательность с нуклеотидами 14513-14899 SEQ ID NO: 1 соответствует ORF 7.
Последовательности с нуклеотидами 1-217 и с нуклеотидами 14900-15012 SEQ ID NO: 1 соответствуют 5ʹUTR (untranslated region, нетранслируемая область) и 3ʹUTR вирусного генома, соответственно.
Предпочтительно, чтобы штамм в соответствии с настоящим изобретением был помещен в Национальную коллекцию культур микроорганизмов в соответствии с Будапештским соглашением (Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes, CNCM) под номером CNCM I-4859 5 июня 2014 г. Информация о размещении:
Учетный номер микроорганизма: CNCM I-4859;
Таксономическое название: вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС);
Название депозитарного учреждения: Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes (CNCM);
Адрес депозитарного учреждения: Institut Pasteur, 25-28, rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15, France.
Дата размещения: 5 июня 2014 г.
Таким образом, целью настоящего изобретения является аттенуированный штамм вируса РРСС с указанной выше информацией о размещении.
Авторы назвали штамм настоящего изобретения PRRS/IZSLER/2014.
Штамм в соответствии с настоящим изобретением характеризуется высокой степенью аттенуации вирулентности и способен индуцировать гуморальный ответ, типичный для вируса РРСС.
Другой целью настоящего изобретения является белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, или его функциональные фрагменты или функциональные производные.
Предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является белок, имеющий основную аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10.
Другими целями настоящего изобретения являются выделенный полинуклеотид, содержащий по меньшей мере один из полинуклеотидов, определенных выше, или комплементарную последовательность; рекомбинантный экспрессионный вектор, содержащий указанный полинуклеотид; клетка-хозяин, трансформированная указанным рекомбинантным экспрессионным вектором или содержащая полинуклеотид, как определено выше, предпочтительно, чтобы указанная клетка-хозяин была выбрана из клеток животных, растений, дрожжей, бактерий или насекомых, более предпочтительно, чтобы указанная клетка-хозяин была выбрана из клеток поросят или свиней.
Предпочтительно, чтобы полинуклеотид в соответствии с настоящим изобретением содержал молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду SEQ ID NO:1, или полинуклеотид SEQ ID NO:1.
Другой целью изобретения является иммуногенная или вакцинальная композиция, содержащая штамм, как определено выше, или по меньшей мере один белок или его функциональные фрагменты или функциональные производные, как определено выше, или по меньшей мере один полинуклеотид, как определено выше, или по меньшей мере один вектор, как определено выше, или по меньшей мере одну клетку-хозяина, как определено выше, и по меньшей мере один носитель и/или адъювант, подходящий для применения в ветеринарии.
Другой целью настоящего изобретения является штамм, как определено выше, или белок, или его функциональные фрагменты или функциональные производные, как определено выше, или полинуклеотид, как определено выше, или вектор, как определено выше, или клетка-хозяин, как определено выше для применения в качестве лекарственного средства, в частности для применения в вакцинотерапии репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Предпочтительно, чтобы объектом терапии был поросенок или свинья.
Другой целью настоящего изобретения является способ предотвращения инфицирования свиньи вирусом РРСС или развития РРСС, включающий инокуляцию свиньи штаммом, как определено выше, или иммуногенной или вакцинальной композицией, как определено выше.
Иммуногенная или вакцинальная композиция, как определено выше, содержит эффективное количество вирусных частиц в дозе; предпочтительно, содержит приблизительно 105 TCID50/мл, где TCID50 представляет собой медианную инфекционную дозу для культуры ткани (TCID50, 50% tissue culture infective dose, доза заражения 50% культуры ткани). Предпочтительно, чтобы количество плазмиды, как определено выше, или полинуклеотида, как определено выше, в дозе вакцины настоящего изобретения варьировало от приблизительно 0,1 мкг до приблизительно 100 мг. Подходящий размер дозы варьирует от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 10 мл, и, предпочтительнее, от приблизительно 1 мл до приблизительно 5 мл.
В контексте настоящего изобретения «иммуногенная или вакцинальная композиция» относится к композиции, которая индуцирует защитный иммунный ответ, который может включать индукцию образования антител и/или Т-клеточный ответ, у животного, обработанного вакцинальной композицией.
В контексте настоящего изобретения «полинуклеотид» обозначает полинуклеотид ДНК, кДНК иди РНК и включает как одноцепочечные, так и двухцепочечные молекулы.
Любая комбинация описанных выше полинуклеотидов или белков может быть включена в настоящее изобретение.
В настоящем изобретении «молекула РНК, соответствующая по меньшей мере одному полинуклеотиду» обозначает молекулу РНК, идентичную указанному полинуклеотиду, за исключением того, что последовательность РНК содержит урацил вместо тимина, а остов молекулы РНК содержит рибозу вместо дезоксирибозы.
Например, SEQ ID NO:1 является последовательностью кДНК, соответствующей РНК-геному или кодирующей РНК-геном вирусного штамма настоящего изобретения. Таким образом, последовательность ДНК, комплементарная последовательности ДНК SEQ ID NO:1 является, например, матрицей, т.е. является комплементарной или кодирующей РНК-геном вирусного штамма настоящего изобретения.
В контексте настоящего изобретения ссылка на SEQ ID NO:1 включает SEQ ID NO:1, последовательность РНК, соответствующую SEQ ID NO:1, и последовательность ДНК или РНК, комплементарную SEQ ID NO:1.
Термин «комплементарная» последовательность относится к полинуклеотиду, который не является идентичным последовательности, но имеет последовательность оснований, комплементарную первой последовательности, или кодирует такую же аминокислотную последовательность, что и первая последовательность. Комплементарная последовательность может включать полинуклеотиды ДНК и РНК. Под термином «функциональный фрагмент» или «функциональное производное» понимают способность распознаваться молекулой антитела как эпитоп или способность индуцировать защитный иммунный ответ. Предпочтительно, чтобы длина «фрагментов» составляла по меньшей мере 10 аминокислот, 20 аминокислот, 30 аминокислот, 40 аминокислот, 50 аминокислот, 60 аминокислот, 70 аминокислот, 80 аминокислот, 90 аминокислот, 100 аминокислот, 150 аминокислот, 200 аминокислот, 300 аминокислот, 400 аминокислот, 500 аминокислот, 600 аминокислот, 700 аминокислот, 800 аминокислот, 900 аминокислот, 1000 аминокислот, 1200 аминокислот, 1400 аминокислот, 1600 аминокислот, 1800 аминокислот или 2000 аминокислот. «Производные» могут быть рекомбинантными или синтетическими. Термин «производное», как применяют в настоящей заявке в отношении белка, обозначает химически модифицированный белок или его аналог, в котором по меньшей мере один заместитель не содержится в немодифицированном белке или его аналоге, т.е. ковалентно модифицированный белок. Типичными модификациями являются амидные, углеводные, алкильные группы, ацильные группы, сложные эфиры и подобное. Как применяют в настоящей заявке, термин «производные» также относится к укороченным или удлиненным белкам или к белкам с идентичностью по меньшей мере 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, предпочтительнее, по меньшей мере 99% SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 или SEQ ID NO:10.
В контексте настоящего изобретения «аттенуированный» штамм обозначает вирусный штамм, способный инфицировать чувствительного хозяина и/или реплицироваться в чувствительном хозяине, но не патогенный или менее патогенный для чувствительного хозяина. Например, аттенуированный вирус может вызывать незаметные/недетектируемые проявления или умеренные клинические проявления или обладать пониженной эффективностью репликации и/или пониженной инфекционностью по сравнению с выделенными дикими штаммами. Выражение «чувствительный» хозяин, как применяют в настоящей заявке, обозначает животное, которое можно инфицировать вирусом РРСС. При введении чувствительному животному аттенуированный штамм вируса РРСС также может индуцировать иммунный ответ в отношении вируса РРСС, что вырабатывает у животного иммунитет к заражению вирусом РРСС.
В настоящем изобретении «по меньшей мере 87% идентичность» обозначает, что последовательность может быть по меньшей мере на 87% или на 90%, или на 95%, или на 100% идентична указанным последовательностям. Это применимо ко всем % идентичности. Предпочтительно, чтобы % идентичности относился ко всей длине указанной последовательности.
В контексте настоящего изобретения носитель может быть любым инертным носителем или композицией, участвующей в доставке вакцины субъекту или улучшающей хранение композиции.
В контексте настоящего изобретения «вектор» может обозначать носитель, способный доставлять целевой полинуклеотид в клетку-хозяина, такой как, например, плазмиды и вирусные векторы.
В контексте настоящего изобретения «клетка-хозяин», как определено выше, предпочтительно является клеткой, в которую можно ввести вектор, например, посредством трансдукции, трансфекции, электропорации, инфицирования или слияния клеток.
В иммуногенной или вакцинальной композиции, как определено выше, подходящие носители могут включать воду, буферы, солевой раствор, липосомы, полимерные материалы, консерванты, масла, эмульсии, стабилизаторы и/или частицы носителя. Специалист в данной области техники может выбрать подходящие носители. Ссылкой на составы вакцин является книга Remington (ʺRemington: The Science and Practice of Pharmacyʺ, Lippincott Williams & Wilkins, 2000). Введение вакцины может быть внутримышечным, интраназальным, подкожным, с помощью разбрызгивания или распыления или с питьевой водой.
Настоящее изобретение будет описано с помощью не ограничивающих его объем примеров со ссылками на следующие фигуры:
Фигура 1. Графическое представление степени идентичности последовательностей вируса 14D 4A 3A и европейского протопита, представленного вирусом Lelystad (GenBank M96262.2 (SEQ ID NO:20)). В верхней части фигуры представлена консенсусная последовательность, в нижней части фигуры представлено выравнивание последовательности клона 14D 4A 3A и последовательности вируса Lelystad, а в центре представлена гистограмма, иллюстрирующая степень идентичности двух последовательностей в разных участках.
Фигура 2. Графическое представление степени идентичности последовательностей вируса 14D 4A 3A и североамериканского прототипа VR 2332 (GenBank U87392.3 (SEQ ID NO:21)). В верхней части фигуры представлена консенсусная последовательность, в нижней части фигуры представлено выравнивание последовательности клона 14D 4A 3A и последовательности североамериканского прототипа VR 2332, а в центре представлена гистограмма, иллюстрирующая степень идентичности двух последовательностей в разных участках.
Примеры
Вирусный штамм, являющийся целью настоящего изобретения, отбирали из изолята (BS/114S/2000), выделенного из сыворотки крови свиньи с прерванной беременностью во время вспышки заражения вирусом РРСС на итальянской свиноферме. Указанный изолят характеризовался высокой вирулентностью не только в полевых условиях, но и в экспериментальных условиях. Экспериментально зараженные животные имели типичные симптомы патологии с гипертермией, угнетением и анорексией такой высокой степени тяжести, что вызывали летальный исход. Вирус сохранялся в кровотоке в течение длительного периода времени, как правило, до 28 дней (4, 7, 8).
Вирусный изолят применяли для инфицирования свободных от патогенной микрофлоры (СПФ) поросят в возрасте 20 дней из СПФ стада Института экспериментальной зоопрофилактики областей Ломбардии и Эмилии-Романии в Брешиа (Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Lombardia e dell'Emilia Romagna). Животных инфицировали интраназально (1 мл/ноздря) и внутримышечно (1 мл), и проводили клинические наблюдения инфицированных свиней, определяли виремию и гуморальный ответ. Животных умерщвляли на пике наблюдаемых клинических проявлений, проводили индивидуальную гомогенизацию целевых органов, представленных легкими, миндалинами и лимфатическими узлами, исследовали их на предмет наличия вируса РРСС и применяли для дальнейших исследований in vivo.
Процесс проводили 22 раза, применяя для каждого нового инфицирования вирус, полученный из одного из указанных выше органов с наибольшей концентрацией вируса. Животных инфицировали интраназально (1 мл/ноздря) и внутримышечно (1 мл).
Затем авторы изобретения повторяли пересевы in vivo, чтобы получить вирус в свиньях, который прошел по меньшей мере 4 последовательных пассажа. Авторы изобретения обнаружили, что вирус не вызывал развития клинических симптомов, а гипертермия наблюдалась на протяжении нескольких дней лишь у нескольких свиней, виремия наблюдалась у некоторых инфицированных свиней в течение короткого периода времени. При вскрытии было показано, что вирус сохранялся в легких и на миндалинах, спорадически присутствовал в лимфатических узлах и сохранял способность стимулировать иммунную систему, индуцируя образование гуморальных антител.
Последние эксперименты с вирусом 22 пассажа проводили на четырех поросятах в возрасте 30 дней, свободных от вируса РРСС, которых экспериментально заражали, применяя тканевой гомогенат, полученный в предыдущем исследовании. Животных инфицировали интраназально (1 мл/ноздря) и внутримышечно (1 мл) и проводили клинические наблюдения, вирусологические и серологические исследования. Результаты подтвердили отсутствие каких-либо проявлений клинических симптомов, спорадическую гипертермию (у 2 из 4 животных), ограниченную 2-4 днями после инфицирования, наличие вируса в целевых органах (паховых лимфатических узлах, легких, миндалинах), удаленных при вскрытии, и серологический ответ. При вскрытии не обнаружили никаких макроскопических очагов поражения, связанных с заражением вирусом РРСС. Вирус присутствовал в образцах сыворотки крови лишь у нескольких животных в течение короткого периода времени, не более 4 дней, в отличие от первых экспериментов, в которых вирус обнаруживался в кровотоке всех зараженных животных вплоть до 28 дней.
Вирусную нуклеиновую кислоту оценивали в молекулярно-биологическом исследовании. Общую РНК экстрагировали из 200 мкл цельной крови или сыворотки, применяя набор реактивов RNeasy™ Mini Kit (Qiagen, Milan, Italy) на приборе QIAcube platform (Qiagen, Milan, Italy) в соответствии с инструкциями производителя. Синтез первой цепи кДНК проводили в конечном объеме 20 мкл. Три микролитра экстрагированной общей РНК применяли в качестве матрицы для синтеза кДНК в присутствии обратной транскриптазы M-MLV и рандомных гексануклеотидных праймеров Random Hexamer, используя набор реактивов GeneAMP kit (AB, Monza, Italy) в соответствии с инструкциями производителя. Амплификацию с помощью ПЦР в реальном времени с зондом TaqMan® проводили на приборе CFX96™ Real-Time System (Bio-Rad, Milan, Italy). Амплификацию РРСС проводили с помощью одностадийной реакции, применяя набор праймеров и зонд, подобранный для гена ORF6 вируса РРСС. Каждая смесь для ПЦР объемом 20 мкл состояла из 1× смеси QuantiTect Virus Master Mix, 1× смеси для обратной транскрипции QuantiTect Virus RT Mix (Qiagen, Milan, Italy), 0,4 мкМ каждого праймера, 0,2 мкМ зонда и 3 мкл общей РНК. Условия амплификации были следующими: обратная транскрипция РНК при 50°С 20 мин, затем 95°С 5 мин, затем 40 циклов денатурации при 95°С 15 сек, отжига-элонгации при 60°С 45 сек и сбора данных (сбора данных флуоресценции). Пороговое значение флуоресценции в приборе CFX96™ Real-Time System выставлялось автоматически.
Несмотря на аттенуированное клиническое течение, у свиней развивался типичный для вируса РРСС гуморальный ответ, характеризующийся синтезом ненейтрализующих гуморальных антител класса IgG приблизительно через 7-10 дней после инфекции и позднее (приблизительно через 60 дней после инфекции) появление нейтрализующих антител.
В частности, серологический тест проводили с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA, enzyme linked immunoassay), применяя коммерческий набор реактивов (IDEXX PRRS X3 Ab Test, USA).
Штаммы вируса РРСС, выделенные из легких, миндалин и лимфатических узлов свиней в описанных выше последних экспериментах, в частности, вирус, обнаруженный в легких одной из этих свиней (№ 247), индивидуально адаптировали и проводили серийное культивирование в клеточной линии MARC-145 (почка плода мартышки; код каталога IZSBS: BS CL 127).
Адаптацию и культивирование в клеточной линии MARC-145 проводили только после решения нескольких проблем, связанных с условиями культивирования, и выработки новой стратегии сокультивирования, позволяющей получать инфицированные клеточные линии MARC-145. Ранее адаптацию вируса BS/114S/2000 к клеточной линии MARC-145 проводили с помощью серийных пассажей, и не было необходимости применять более сложные техники, такие как сокультивирование. Эта стратегия включает первую стадию инфицирования штаммами вируса РРСС, выделенными из описанного выше последнего пассажа первичных клеточных культур альвеолярных макрофагов свиньи (SAM, swine alveolar macrophages), считающихся наиболее восприимчивыми к первому вирусному изоляту клетками. После проверки положительной реакции инфицированные клетки MAS культивировали совместно (способ сокультивирования) с клетками линии MARC-145. Таким образом, вирус мог реплицироваться в макрофагах, а высвобождаясь из них, адсорбировался клетками MARC-145. Такая стратегия позволила перенести инфекцию в клеточную линию MARC-145, в которой вирус начал активно реплицироваться, индуцируя цитопатический эффект, типичный для вируса РРСС.
Вирус, адаптированный к указанной клеточной линии и способный активно реплицироваться, индуцируя тем самым цитопатический эффект, применяли для исследований in vitro в серологических и вирусологических тестах.
Затем получали исходную партию вируса с известной инфицирующей концентрацией (106,74 DCP50/мл) на 10 пассаже в клеточной линии MARC-145 и очищали ее, выделяя из 5 бляшек и проводя последующую амплификацию. Для данного исследования в 6-луночных планшетах со средой, обогащенной 5% фетальной бычьей сывороткой, получали клеточную линию MARC-145 и инкубировали ее при 37°С в 5% CO2. При достижении конфлуентности среду удаляли и инфицировали культуры серией 10-кратных разведений вируса. После 60-минутного периода адсорбции при 37°С в 5% CO2 вирус удаляли, на культуры наносили слой 1% агара и оставляли застывать при комнатной температуре. Затем планшеты инкубировали при 37°С в 5% CO2 и ежедневно проверяли на предмет появления изменений клеток, индуцированных вирусом, которые в присутствии агара выглядели как бляшки. При наибольшем разведении некоторые бляшки удаляли и аккуратно разводили в культуральной среде и инокулировали клетки линии MARC-145 в колбах 25 см2. При появлении цитопатогенного эффекта и разрушении клеточного субстрата вирус далее очищали, как указано. Описанный процесс очистки проводили три раза и выделяли три бляшки, обозначенные следующими кодами: 14D2A1A; 14D4A3A; 16D5A2A.
Проводили полногеномное секвенирование клона, полученного при выделении из бляшек и обозначенный кодом 14D4A3A.
Исследования качества
Все клоны исследовали на предмет обнаружения бактериальной, грибковой, микоплазменной и вирусной контаминации.
В частности, их инокулировали в микробиологические среды, специально предназначенные для культивирования микробных и грибковых агентов.
Контаминацию бактериями, грибками и дрожжами исследовали после инокуляции 2 мл каждой клеточной суспензии в микробиологическую среду (агар Сабуро, триптический соевый агар и/или сердечно-мозговой экстракт), инкубировали при 30°С и 37°С, соответственно. Более того, возможную контаминацию микоплазмой исследовали с помощью ПЦР в реальном времени, применяя набор реактивов Mycosensor kit (Agilent Company, IT; M-Medical S.r.l., Milano, Italy). И наконец, вирусные контаминации исследовали с помощью молекулярно-биологических реакций, специфичных к следующим вирусам.
Вирус псевдобешенства (Pseudorabies, PRV)
Цирковирус
Вирус гепатита (Torque Teno Virus, TTV)
Пестивирус (вирус вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота, bovine viral diarrhea virus, BVD, и вирус классической чумы свиней, classical swine fever, CSF)
Парвовирус (Parvovirus, PPV)
Лимфотропный вирус герпеса свиней (Porcine lymphotropic herpes viruses, PLHV)
Эндогенные ретровирусы свиней (Porcine endogenous retroviruses, PERV)
Вирус гриппа А
Вирус гепатита Е (Hepatitis E virus, HEV)
Система контроля качества
Исследование проводили в соответствии с двумя системами контроля качества, применяемыми в лаборатории и представленными, соответственно:
ISO 9001 2008 (получение клеточной культуры и биобанк IZSLER);
ISO IEC 17025 (стандартные вирусы и способы анализа).
Получение партий
Как указано ранее, лишь один из трех клонов, полученный из бляшек и обозначенный кодом 14D4A3A, амплифицировали, титровали и секвенировали. Инфицирующая концентрация партии, полученной на 14 пассаже в клеточной линии MARC-145, составляла 105,74 цитопатических доз (cytopathic doses, CPD)50/мл, при расчете в соответствии с формулой Рида и Мюнча (Reed and Muench).
Исследования качества
Проведенные исследования показали, что отобранные популяции вируса были свободны от бактериальной, грибковой, дрожжевой и микоплазменной контаминации и свободны от экзогенных вирусов. Контаминацию бактериями, грибками, дрожжами и микоплазмой исследовали, как описано выше.
Другие экспериментальные исследования in vivo
Другое экспериментальное исследование in vivo проводили, чтобы проверить, что применяемый процесс очистки не вызвал изменений биологических характеристик вируса, особенно характеристик аттенуации вирулентности.
Для этого проводили in vivo исследование на поросятах в возрасте 30 дней, свободных от вируса РРСС, полученных с фермы без вируса РРСС в провинции Брешиа, которых инфицировали клоном 14D4A3A.
Применяли те же способы, что и в предыдущих исследованиях, основанные на интраназальной инокуляции (1 мл/ноздря) и на внутримышечной инокуляции такой же дозы (1 мл). У животных не обнаруживалось клинических симптомов и не было гипертермии. Вирус детектировался в кровотоке до четвертого дня после инфекции. С 5-6 дня вирус детектировался в очень низкой концентрации (на пределе визуализации) и совсем не детектировался в последующие дни.
Серологические исследования показали, что при гуморальном ответе, наблюдаемом уже через 6 дней после инфицирования (1 свинья) через 14 дней у обеих свиней, детектировались специфичные антитела в соответствии с тем, что было обнаружено в предыдущих экспериментах.
В частности, проводили серологическое исследование, как описано выше.
Вскрытие, проведенное через 14 дней после инфицирования, не выявило никаких макроскопических очагов поражения, вызванных заражением вирусом РРСС.
Целевые органы (миндалины, селезенка, доли легкого, легочные лимфатические узлы, мезентериальные лимфатические узлы, паховые лимфатические узлы) двух зараженных свиней были положительными в отношении содержания вируса, а наибольшая концентрация вируса была в миндалинах и долях и верхушках легкого, как показано в следующей таблице.
Вирусную нуклеиновую кислоту исследовали с помощью молекулярно-биологических способов, описанных выше.
Микробиологические исследования целевых органов двух свиней, проведенные в соответствии с описанными выше способами, не выявили никаких бактериальных или микоплазменных инфекций.
В успешно выделенном вирусном клоне 14D4A3A не обнаруживалось никаких изменений характеристик аттенуации вирулентности. Авторы изобретения назвали его PRRS/IZSLER/2014.
Таблица 1. Результаты ПЦР в реальном времени, проведенной на органах 2 свиней, инфицированных клоном 14D4A3A вируса
Пороговые значения, отмеченные звездочкой, соответствуют наибольшей концентрации вирусной нуклеиновой кислоты.
Секвенирование генома - Аннотация и сравнение с референтными вирусами Lelystad (GenBank M96262.2) и VR-2332 (GenBank U87392.3)
Клон 14D4A3A центрифугировали при 55000 g/60 мин при 4°C; осадок разводили в 2 мл фосфатно-солевого буфера и проводили секвенирование генома, как указано ниже. Из клона 14D4A3A вируса РРСС экстрагировали общую РНК на колонках из набора реактивов (RNeasy mini kit, QIAGEN, Milan, Italy).
С экстрагированной общей РНК проводили обратную транскрипцию с праймером для обратной транскрипции PRRS-RT (Таблица 2), специфичным к вирусу РРСС, в соответствии со стандартными процедурами.
Полученную кДНК амплифицировали со специфичными праймерами для получения 4 перекрывающихся ампликонов, способных покрыть весь геном вируса РРСС от 5'UTR до 3'UTR (Таблица 2).
Затем полученные с помощью ПЦР ампликоны очищали, применяя NucleoSpin Gel и набор PCR Clean-up kit (MACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG, Germany), проводили количественную оценку с помощью спектрофотометрии и получали библиотеку ДНК для секвенирования с помощью набора Nextera-XT kit (Illumina, Inc. - Worldwide Headquarters, San Diego, CA 92122 USA).
Реакцию секвенирования проводили на приборе Illumina MiSeq. Проводили сборку вирусного генома de novo с помощью программного обеспечения DNASTAR NGen (DNASTAR, Inc, WI, USA) и анализировали с помощью DNASTAR Seqman Pro. Получали единый контиг из 15012 нуклеотидов в результате сборки 30712 начальных последовательностей («прочтений») со средним покрытием 372 (SEQ ID NO: 1). Последовательность аннотировали с помощью программного пакета GeneQuest DNASTAR.
Таблица 2. Последовательность праймеров для реакции обратной транскрипции и для амплификации генома клона 14D4A3A вируса РРСС.
Исследуемую последовательность клона вируса РРСС выравнивали с последовательностью референтного штамма вируса РРСС Lelystad (GenBank M96262.2), применяемого в качестве прототипа европейских штаммов, и VR-2332 (GenBank U87392.3), применяемого в качестве прототипа американских штаммов.
Результат выравниваний показан в составной форме ниже (Таблица 3).
Таблица 3. Сходство нуклеотидной последовательности клона 14D4A3 A вируса РРСС и вируса Lelystad (GenBank M96262.2) и VR-2332 (GenBank U87392.3).
Клон 14D 4A 3A вируса РРСС выравнивали с вирусом Lelystad (GenBank M96262.2) (европейский прототип вируса РРСС) и с VR-2332 (GenBank U87392.3) (американский прототип вируса РРСС) с помощью программы ClustalW; анализ показал процент нуклеотидной идентичности, показанный в Таблице 3. Фигура 1 и Фигура 2 являются графическими представлениями выравнивания клона 14D 4A 3А вируса РРСС с вирусом Lelystad (GenBank M96262.2) и VR-2332 (GenBank U87392.3), соответственно, полученными с помощью Geneious.
Литература
1) Balasuriya and Snijder (2008). "Arteriviruses". Animal Viruses. Molecular Biology. Caister Academic Press. ISBN 978-1-904455-22-6.
2) Barboza, David. Chinese Pig Virus Causes Concern Around the Globe. The New York Times. August 15, 2007.
3) Benfield D, Collins J, Dee S, Halbur P, Joo H, Lager K, et al. Porcine reproductive and respiratory syndrome. In: Straw BE, D'Allaire S, Mengeling WL, Taylor DJ, editors. Diseases of the swine. 8° ed. Ames, Iowa: Iowa State University Press; 1999. pp. 201-32.
4) Candotti P, Dotti S, Amadori M, Villa R, Lombardi G, RotaNodari S, Ferrari M. Experimental infection of pure bred landrace pigs with porcine respiratory and reproductive virus (PRRSV): clinical and laboratory findings. 20th IPVS Internationl Pig Veterinary Science Congress: Durban, South Africa, 22-26 June 2008: proceedings.
5) Cavenagh D. Nidovirales: a new order comprising Coronaviridae and Arteriviridae. Arch Virol 1997; 142: 629-33.
6) Collins J, Benfield D, Christianson W, Harris L, Hennings J, Shaw D, et al. Isolation of swine infertility and respiratory syndrome virus (isolate ATCC VR-2332) in North America and experimental reproduction of the disease in gnotobiotic pigs. J Vet Diagn Invest 1992; 4: 117-26.
7) Corradi A, Ferrari M, Cantoni Am, Robotti C, Alborali L, of Lecce R, Candotti P, Sandri Gp, Borghetti P.Study on the virulence, cell-mediated immune response and histolesivity of three field PRRSV strains with an ORF 5 genetic variation Vet Res Commun. - Vol. 29 suppl 2 (2005). pp. 241-243.
8) Ferrari M, Tosini A, Corradi A, Borghetti P, Scalvini A, Cantoni Am, Ferrando L, Alborali L. Experimental infection with a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) strain with relevant genomic mutations in the ORF5 region. PRRS PMWS swine influenza: 4th International Symposium on emerging and re-emerging pig disease: Rome, June 29th - July 2nd, 2003: proceedings
9) Song J, Shen D, Cui J, Zhao B (Oct 2010). "Accelerated evolution of PRRSV during recent outbreaks in China". Virus Genes 41 (2): 241-5. PMID 20652733.
10) Kapur V, Elam MR, Pawlovich TM, Murtaugh MP. Genetic variation in porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates in the midwestern United States. J Gen Virol. 1996 Jun; 77 (Pt 6): 1271-6.
11) Lee, C. and Yoo, D. Cysteine residues of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus small envelope protein are non-essential for virus infectivity. J Gen Virol. 2005 Nov; 86 (Pt 11): 3091-6.
12) Meulenberg, J. J.; Hulst, M. M.; de Meijer, E. J.; Moonen, P. L.; den Besten, A.; de Kluyver, E. P.; Wensvoort, G., and Moormann, R. J. Lelystad virus, the causative agent of porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (PEARS), is related to LDV and EAV. Virology. 1993 Jan; 192 (1): 62-72.
13) Meng XJ, Paul PS, Halbur PG, Morozov I. Sequence comparison of open reading frames 2 to 5 of low and high virulence United States isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. J Gen Virol. 1995 Dec; 76 (Pt 12): 3181-8.
14) Murtaugh M.P, Xiao Z, Zuckermann F. Immunological responses of swine to porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection. Viral Immunol. 2002; 15: 533-547.
15) Nelsen C, Murtaugh M.P, Faaberg K. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus comparison: divergent evolution on two continents. J Virol 1999; 73: 270-80.
16) Petrini S, Ramadori G., Villa R, Borghetti P, De Angelis E, Cantoni AM, Amici A, and Ferrari. Evaluation of Different DNA Vaccines against Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome (PRRS) in Pigs. Vaccines 2013, 1(4), 463- 480; doi: 10.3390/vaccines 1040463.
17) Stadejek T, Stankevicius A, Murtaugh MP, Oleksiewicz MB. Molecular evolution of PRRSV in Europe: Current state of play. Vet Microbiol. 2013; 165: 21-8.
18) Thiel HJ, Meyers G, Stark R, Tautz N, Rumenapf T, Unger G, Conzelmann KK., Molecular characterization of positive-strand RNA viruses: pestiviruses and the porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV). Arch Virol Suppl. 1993; 7: 41-5.
19) Wensvoort G. Lelystad virus and the porcine epidemic abortion and respiratory syndrome. Vet Res 1993; 24: 117-24.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Институт экспериментальной зоопрофилактики областей Ломбардии и Эмилии-Романии «Бруно Убертини» (IZSLER) (Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Lombardia e dell'Emilia Romagna "Bruno Ubertini" (IZSLER))
<120> Аттенуированный штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) и его возможное применение в средствах для иммунизации
<130> 126779 PCT
<150> RM2014A000407
<151> 2014-07-21
<160> 21
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 15012
<212> ДНК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 1
tgtgtagggt attcccccta cgcgcgcaac acttctagtg tttgtgtgcc ttggaggcgt 60
gggtatagcc ccgccccacc tcttggcccc tgttctagcc caacaggaat ccttctccct 120
cggggcgagt gcgccgcctg ctgctccctt gcagtaggaa ggacctcccg agtatttccg 180
gagagcacct gctttacggg acctccaccc tttaaccatg tctgggacgt tttcccggtg 240
catgtgcacc ccggctgccc gggtattttg gaacgccggc caagtctttt gcacacggtg 300
tctcagtgca cggcctcttc tccctccgga gcttcaggac actgatcttg gtggaattgg 360
cttattttac aggcccaaag acaagcttcc ctggaaagtt cccattggca tcccccaagt 420
ggagtgcacg ccatccgggt gctgctggct gtcagccgtt ttccctttgg cgcgcatgac 480
ctccggcaac cacaatttcg tccaacgact tgtgaaagtt gctgatgtgt tgtaccgtga 540
cggttgcttg acccctcgac accttcgtga actccaagtt tacgagcgtg gttgcaactg 600
gtacccgatc acggggcccg tgcccgggat gggtttgttc gcgaactcca tgcacgtgtc 660
tgaccaaccg ttccctggtg ccacccatgt gttgacgaac tcgcctctgc ctcagcaggc 720
ttgtcgacag ccgttctgcc catttgagga ggcccattct gacgtgtata agtggaagga 780
agttgtggtt ttcatggact cctcccccaa cggtcgatct cgcatgatgt ggatgccgga 840
gtccggtgat tcagctgccc tggaggcatt accgcctgag ttagaacgtc aagtcgaaat 900
cctcattcgg agctttcctg cccaccatct tgttgacctt accgactggg agctcactga 960
gtcccctgag cacggttttt ccttcggcac gtcttatcct tgtggttacc ttgcccaaaa 1020
cccttatggt tttgatggca agtgttggct ctcctgcttc ttgggcctgc cgaccaaagt 1080
ttggcgtcat gaggagtatc tagctagcgc tttcggttat cagaccaagt ggggcgtaca 1140
tggcaaatac ctccagcgta ggcttcaaat taacggtgtc cgtgctgcgg tcgatcctga 1200
cggtcccatc cacgttgaag cgctgtcttg cccccagtct tggattaggc acctgacttt 1260
ggacgatgat gttaccccag gattcgttcg cctgatgtcc ctccgcattg taccgaacac 1320
agagcctact accctcccaa tcttccggtt tggggcgcat aaatggtatg gggcagctgg 1380
caaacgagct cgcgccaagc gtgctgccaa aggtaagggg gattcgaatt ccacccccga 1440
agttgcccga gtggctccca ctcacggggt tatcacctat tccccaccgg cagatgggtc 1500
ctgtggttgg catgttattg ccgccgtgat gaaccatatg atgaatggtg aactcacgtc 1560
ccctctgact ccgtacaaca gaccagagga cgactgggct tctgattatg atcttgtcaa 1620
gacaatccaa tatttgcaac tgcccgcaac cgtggttcgg gcccgcgcct gtcccaacgc 1680
taagtacctt gttaagctta atggggtcca ttgggaagta gagatgaggc cgggagtggc 1740
ccctcgctcc cttcctcgcg aatgtgtagt tggcgtctgc tctgaaggct gcgtcacgcc 1800
gcctctttca gagagggtgt tgcctgaccg tgcactcgag gccctggcat ctgcttacag 1860
attgccttcc gactgtgtct gtgacgctgt tgctgacttc ctctccaacc cgccctctca 1920
aggatcctgg actctcgaca gaatgctaac ctccccgtca ccagaacagt ctggtttttc 1980
tagcttgtac agactgctat tggaggttgt tccgcagaaa tgcggagcca cagagggggc 2040
tttcgtctat gccgttgaca ggatgttgaa ggattgtccg agccctaaac aagccatggc 2100
ccttttgggg aaaatcaaaa tcccatcctc gaaggcctcg tctgtgtcct tggacgagtg 2160
ctttcctaca gatgttttga ctgtccccgg gtcggtgttt caggaagagc cccaaagctt 2220
tgacaacgcc atcgccctgt gttcgctgga aaaacaaaag gaaactgagg gggcaagccc 2280
aggaaaagct caagaaagtg attgtaagac cttccgctct gtggttcctg ccgagaaacc 2340
taacatgcag caagtgccgt tggttgagga tgagcaattg aagctcggcg gttgtgactc 2400
agccgttgcg acggttgata gtgatcgggg aaatgaaccg ttagacctat cccgatcagc 2460
cccaactgca acaacaacct ccgtcggagg gcgagcaccc gacaacccgg gccccaacac 2520
tagcgtccgc tccactaccg ttcaagagtc ggttccgggg aggcccgtgc cccgccttgt 2580
tgagcgatgc ggcgtggagt cggacaacag caattcgccc ctggatttgt ctaaggcgca 2640
gaccccagac cggcccctgg acctatcttt agccgcttgg ccagtgaggg ctactgcgtc 2700
tgaccccggt tgggtcgacg gtaggcgcga acctgtcttc gttaagcctc gcggtgcctt 2760
ctctgacagc gagtcagtca ttcggtttgg gggggtttct gagactagct ctatcattga 2820
gtttgaccgg acagaagaaa ctccggtgac tgacgtcccc atcgacttaa caacttcaaa 2880
cgagactctt tccggggcag accccttcga acttgctgaa cctaagcgtc cgcgcctctc 2940
cgctcaagct ttgattgacc gaggtggccc acttgctgat gtccatgcaa aaataaaaaa 3000
tcgagtgtat gaacagtgcc tccaggcttg cgaacccggc agtcgtgcaa ccccagccac 3060
aaaggaatgg ctcgacaaaa tgtgggagag ggtcgatatg aagacctggc gttgtacctc 3120
gcagttccaa gcagcctaca tactcgggcc cctcaaattc cttccagata tgattcgtga 3180
cgcgccacct cctgtcccca ggaaggatcg ggcttgtgac agtgccagct tgaagcaatt 3240
agtggcacgg tgggagaaga gattgaatgc agtccctctt caaggaccgg ttgagccgga 3300
gcttggccgg accgctccct cgtccgtgaa tgcccagcca gaagaagcca tcccttccga 3360
tggaccacct caagcgccgg accctcctgg accaacaagt gctggtaggg gttttaaagg 3420
acttatatcc cccggcatcc gccttatagg gtccgctagc cagcgcttca tgacatgggt 3480
ttttgaaatt tactcccatc tcccagcttt tatgctcaca cttttctcgc cacggggctc 3540
tatggttaca agtgattggc tgtttgcagg tgttgtttta tttgctctcc tgttttgtcg 3600
ttcttgcccg atactcgggt gcctaccgct attgggtgtc ttttctggtt ctgtgcggtg 3660
tgttcgtctg ggcgtttttg gctcttggat ggcttttgct gtatttttat tctcgactcc 3720
aaccaatcca atcggttctt cttgtgacca cgattcgccg gagtgtcatg ctgagctttt 3780
ggctcttgag cagcgccaac tttgggaacc tgtgcgcagc cttgtggttg gcccctcagg 3840
cctctcatgc gtcattctgg gtaagctgct cggtgggtca cgttatctct ggcatgttgt 3900
cttacgttta tgcatgctcg cggacttggc cctttctctt atttatgtgg tgtcccaagg 3960
gcgttgttac aagtgttggg gaaagtgtat aaggacagct cctgcagagg tggccctcaa 4020
tgtgtttccc ttctcgcgcg ccactcgttc ttctcttgta tccttgtgcg atcggttcca 4080
ggcgccaaaa gaggttgacc ccgtgcactt ggcaacaggt tggcgcgggt gttggcgtgg 4140
tgagagtccc attcatcaag cgcaccagaa gcctatagct tacgccagcc tggatgaaaa 4200
gaagatatct gcccagacgg tggttgctgt gccgtacgat cctagtcagg ccgtcaaatg 4260
cttaaaggtt ttgcaggccg gtggagccat cgtggatcaa cctgttcctg aggtcatccg 4320
tgtgtccgaa gttcctttct cagccccatt ctttccaaag gttccagtca acccagattg 4380
tagggttgtg gtggattcgg acacctttgt ggccgcggtt cgctgcggtt actcgacggc 4440
acaactgatc ctaggtcgag gcaactttgc caagttaaac cagaccccac ccaagaactc 4500
catccccacc aagtcgaccg gtggggcctc ttacaccctt gccgtgaccc aagtgtctgt 4560
gtggactttg gtacacttca tcatcggcct ttggttgacg tcgcctcagg tgtgtggtcg 4620
gggaacctca gacccgtggt gttcaaatcc tttttcgtac cctacttatg gccctggagt 4680
tgtgtgctcc tctcgacttt gtgtgtctgc tgacggggtc accctaccgt tgttttcagc 4740
cgtggctcaa ctctctggca gagaggtggg ggtttttatt ttggtgctcg tctccttgat 4800
ctccttagcc catcgcctgg ctctcaaggc agatatgctg gtggtctttt cggcattttg 4860
tgcttacgcc tggcccatga gctcctggtt gatttgcttc tttcccatac tcctgaggtg 4920
ggtcaccctt caccctctca ctatgctttg ggtacattca tttctagtgt tttgcctgcc 4980
agctgccggc gtcctttcac tgggtatatc tggtttcctc tgggcagttg gccgtttcac 5040
tcaggttgcc ggaattataa caccttatga catccaccaa tatacttccg ggccgcgcgg 5100
cgcggccgct gtagcaacgg cccctgaagg cacctacatg gccgccgttc ggagagctgc 5160
cttgaccggt cggactttga ttttcacgcc atcagcagtt ggatccctcc ttgaaggtgc 5220
ttttaggact aataagccct gcctcaacac ggtgaatgtc gtaggttcct ctctcggctc 5280
cgggggtgtc ttcaccgtgg gtggcagtaa gataattatc acagccaccc acgtgctgaa 5340
cggtgatgca gctagggtca ccggcgactc ttacaatcgt atgcacactt ttaaaaccaa 5400
tggtgattat gcctggtccc gtgctgatga ctggcagggt gtcgctcctg ctgttaaagt 5460
cgcgaagagg taccgtggcc gtgcctactg gcaaacatca actggtgtcg agcccggcat 5520
cattggggag gggttcgcct tctgtttcac caactgtggc gactcaggat cacctgtcat 5580
ttcagagact ggtgacctca tcggggttca caccggctca aacaaacttg gttctggtct 5640
tgtaacgacc cctgaagggg agacctgctc catcaaagaa actaagctct ctgaactttc 5700
tagatacttt gcaggtccga gtgtccctct cggagacgtg aggttaagtc cggccattat 5760
ccctgatgtg gcgtttattc cgagtgattt agcatcgctc cttgcttctg tccctgtaat 5820
ggagggcggc ctctcaaccg tccaacttct atgtgttttc tttcttctct ggcgcatgat 5880
gggccatgct tggacaccca ttattgccgt aagcttcttt ttactgaatg aaattcttcc 5940
agcagttttg gtccgtgctg tattttcttt tgcacttttt gtgcttgcgt gggccacccc 6000
ttggtctgca caggtgttga tgataagact cctcactgcg gccctcaacc gtaacaggct 6060
ttctctagct ttttatgcac tcgggggtgt tgtcggctta gctgctgaga tcgggacttt 6120
tgctggtaaa ctgactgaat tgtcccaggt cttgtccaca tactgctttc tacccagggt 6180
cattgccatg actagttgtg tccccgtcat catcatcggt gggcttcacg ccctcggtgt 6240
aatcctatgg ctgttcaagc accgttgcct ccacaatatg ctggttggtg acgggagttt 6300
ctcaagcgcc ttcttcctgc ggtattttgc agaaggtaat cttaggaaag gcgtctcgca 6360
gtcttgtggc atgagtaacg aatccttaac ggctgctctg gcctgtaagt tgtcgcaggc 6420
tgaccttgat tttctatccg gcttgacgaa cttcaagtgc ttcgtgtccg cctcaaacat 6480
gaaaaatgct gctggccagt acatcgaagc agcgtacgcc aaagccctgc gtcaggagtt 6540
ggcctctcta gtccaagtcg acaaaatgaa aggggttctg tccaagctcg aagcttttgc 6600
tgagatggct actccatccc tggatacagg agatgtggtt gttctactcg ggcaacaccc 6660
tcacgggtcc attcttgaca tcaatgttgg gactgaaagg aagaccgtgt ctgtgcaaga 6720
aacccgaagc ctaggcgggt ccaaattcag tgtctgcacc gttgtgtcca acacgcccgt 6780
tgacgccctg accggcattc cacttcagac accgacccca ctctttgaga atggcccacg 6840
ccaccgcagc gaggatgatg atcttaaggt tgagaggatg aagaaacact gcgtctccct 6900
cggcttccat aatatcaatg gcaagattta ctgcaaggtc tgggacaagt caaccggtga 6960
caccttctac acggatgatt cccggtatac ccaagaccat gcctttcagg ataggtcagc 7020
tgattacaga gatagggact atgagggtgt gcaaatcgcc cctcaacaag gattcgaccc 7080
gatgtctgaa acccccgttg gcactgttgt aattggcggt atcacgtaca gtaggtacct 7140
agttaaaggc aaggaggtgt tgatccccaa acccgacaac cattttgaag ccgccaagct 7200
ttccctcgag caagccctcg ctgggatggg ccagacttgt gaccttacag ctgccgaggt 7260
ggagaagctg aagcgcatta tcagtcaact ccaaggccta accactgaac aggctttaaa 7320
ctgttagccg ccagcggttt gacccgctgt ggccgcggcg gcttggttgt gacagaaacg 7380
gcggtaaaaa ttgtgaaata ccacagtaga actttcactt taggccctct agacttaaaa 7440
gtcacttctg aggcggaagt aaagaaatca actgagcagg gccacgctgt tgtagcaaac 7500
ttatgctccg gtgtcgtctt aatgaggcct cacccgccat ctcttgttga tgttcttctg 7560
atacctggac ttgacacagc acccggcatt caaccagggc atggggccgg aaacatgggt 7620
gtgaacggtg ccatctggga tttcgaaact gcacccacta aggcagaact cgagttgtcc 7680
aagcaaataa ttcaggcctg tgaggttagg cgcggggacg ccccgaacct ccaactcccc 7740
tacaagctcc accctgttag gggagaccct gaacggcgca atggccgtct cattaacacc 7800
aggttcggag atttgcccta caagaccccc caggacacta ggtccgcgat tcacgcggct 7860
tgctgcctgc atcccaacgg ggtcccggtg tctgatggca aatctacatt aggcaccact 7920
ctccagcgtg gttttgagct ttacgttccc acagtacctt acagtgtctt agagtacctt 7980
gattcacgcc ctgatacccc cttcatgtgt actaaacatg gtacttctga ggctgctgca 8040
gaggacctcc aaaaatacaa cctgtccact caagggtttg tcctgcctgg agtcctccgc 8100
ctagttcgta gattcatctt tggccatatt ggaaaggcgc cgccattgta cctcccatca 8160
acttatcctg ccaaaaactc tatggcagga atcaatggcc aaaggttccc aacaaaggat 8220
gtccagagca tacctgaggt tgatgaaatg tgcgctcgcg ccgtcaaaga taattggcag 8280
actacgacgc cttgcaccct caagaaacag tactgttcca aacccaaaac taggactatc 8340
ctgggcacta ataacttcat tgccttggcc catagatcgg cactcagtgg tgtcacccag 8400
gcgttcatga agaaagcttg gaaatcccca attgccttgg ggaagaacaa attcaaggag 8460
ttgcactgcg ctgtcgctgg caggtgcctc gaggccgacc tggcctcctg tgatcgcagt 8520
accccagcca ttgtgaggtg gtttactgcc aatctcctgt atgaacttgc aggatgtgag 8580
gaatacttgc ctagctatgt gctcaactgc tgtcacgacc tcgtggcgac tcaggatggc 8640
gcttttacaa aacgcggtgg tctgtcgtct ggggaccccg tcaccagtgt gtctaacacc 8700
gtgtattcac tggtgattta tgcccagcac atggtgctgt cagccttgaa aatgggccac 8760
gaaattggcc ttaaattcct cgaggaacag cttagattcg aggacctcat tgaaatccag 8820
cccatgttgg tgtactccga tgaccttgtc ttgtatgctg agaagcccac ctttcccaat 8880
taccattggt gggtcgagca ccttgatttg atgctgggct tcaaaacgga cccgaaaaag 8940
accatcataa ctgataaacc cagcttcctc ggctgcagaa ttgaggcagg gcggcagtta 9000
gtccccaatc gcgaccgtat cctggccgct cttgcatacc acatgaaagc gcagaacgcc 9060
tcagagtatt acgcgtctgc tgccgcaatc ctcatggatt catgtgcttg cattgactat 9120
gaccctgagt ggtatgagga tctcatctgt ggtattgctc ggtgtgctcg tcaagatggc 9180
tatagttttc caggcccggc atttttcatg tccatgtggg agaagctgaa aagccacaat 9240
gaggggaaaa aattccgcca ctgcggcatc tgtgatgcta aggccgacca tgcgtccgcc 9300
tgtgggcttg acttgtgttt gttccactcg cattttcatc aacactgtcc cgttacactg 9360
agctgcggtc accatgctgg ttcaaaagag tgcccgcagt gtcagtcacc tgtcggggct 9420
ggcaagtccc ctcttgacac tgtgttgcag caaatcccgt ataaaccacc tcgcactgtc 9480
ataatgaagg tgaacaataa aacaacagcc cttgacccgg ggaggtacca gtcccgtcgg 9540
ggtcttgtcg cagtcaagag gggaattgca ggcaatgagg ttgatcttgc tgacggggac 9600
taccaggtgg tgcccctcct gccgacctgc aaagatataa acatggtaaa ggtggcttgc 9660
aatgtgttac tcagcaagtt catagtgggg ccgcccggct ccggaaaaac cacctggtta 9720
ctgaaccaag ttcaagagga tgttgtcatc tacacaccca cccatcaaac tatgttcgac 9780
atagtcagtg ccctcaaggt ttgcaggtat tcaatcccag gagcctcagg gctccccttc 9840
ccaccgcctg ccagatctgg accgtgggtc agacttgtcg ccagcgggca cattcctggc 9900
cgagtttcat accttgacga ggctgggtat tgcaaccatc tggacatcct cagactgctt 9960
tccaaaacac cccttgtgtg tttgggtgac cttcaacaac tccaccctgt tggctttgat 10020
tcctgctgtt atgtttttaa tcagatgcct cacaaacagc tgactaccat ttacaggttc 10080
ggccccaaca tctgtgctgc tatccagcct tgttacaagg agaaacttga atccaaggca 10140
aggaacacca gggtagtttt caccattcga cctgtggctt atggtcaagt gctgacacca 10200
tttcacaagg atcgcgttgg ctcagccata accatagatt catctcaggg ggctaccttt 10260
gatgttgtga cgctgcattt gccaacacca agatccctga ataaatcccg agcacttgta 10320
gccattactc gggcgaggca cgggttgttc atctacgatc cccacaacca actccaggag 10380
ttcttcaacc taacccctga gcgtactgat tgcaatctcg tgttcaaccg cgggggtgaa 10440
ctggtcgttc tgaattcaga taatgcagtc acaactgtag cgaaggtcct ggaggctggc 10500
ccgtctcaat ttcgggtatc ggacccgagg tgcaagtccc tcttggccgc ttgctcagtc 10560
agcctagaag ggagctgcat gccactaccg caagtggctc ataacttggg gttttacttt 10620
tccccagaca gtccggcgtt cgcacctctg ccaaaagaat tggcaccgca ttggccagtg 10680
gtcacctgcc agaacaacca agcatggcct gaccgactcg ttgccagcat gcgcccgatt 10740
gatgcccgtt acagcaagcc tatggttggt gcgggatacg ttgttggacc gtcaaccttt 10800
ctgggaactc ctggtgtggt gtcatactat ctcacactgt acattaaggg tgaaccccgg 10860
gccttgccag aaacactcgt ctcaacaggg cgcatagcca cagactgtcg ggagtacctt 10920
gatgcggcag aagaggaagc agccaaggaa ctcccccatg ctttcatagg tgatgtcaag 10980
ggtaccacag tgggggggtg tcatcacatc acatcaaagt atctacccag gtccctgccc 11040
aaggactctg ttgccgtggt tggggtaagt tcgcccggca aggctgctaa agccgtgtgc 11100
actctcactg atgtgtatct ccccgacctt cggccatatc tgcaaccaga gacagcatca 11160
aaatgctgga aactcaaatt ggacttcagg gacgtcagac tgatggtttg gaaaggggcc 11220
accgcctatt ttcagttgga agggcttaca tggtcggcac tacccgacta tgccaggttc 11280
attcagctgc ccaaagatgc tgttgtgtat attgacccgt gcataggacc ggcaacagcc 11340
aaccgcaagg tagtgcgaac cactgactgg cgagccgacc tggcagtaac gccatatgat 11400
tacggtgccc aaactatcct gacaacagct tggttcgagg acctcggacc gcaatggaaa 11460
atcctggggc tgcagccctt caagcgggca tttggcttcg aaaacactga ggactgggca 11520
atcctcgcgc gccgtatgaa tgacggcagg gattacaccg attataactg gacttgcgtc 11580
cgagaacgtc cgcacgctat ctacgggcgc gcccgtgacc acacttatca tttcgcccct 11640
ggtgcagaat tgcaggtaga gctgggcaaa ccccggctgc cgcctgagtg agtacagcgg 11700
ccctaaagca atgcaatggg gtcattgtgg agtaaaatca cccagctgtt tgtggatgcc 11760
tttactgagt tccttatcag tgtggttgac attatcatct ttcttgccat actgttcggg 11820
ttcaccgtcg caggatggtt actggtcttt ctactcagag tggtttgctc cgcgattctc 11880
cgttcgcgca ctgccgttca ctctcccgaa ttatcgaagg tcctatgaag gcttgctacc 11940
caattgcagg ccggatgtcc cacaattcgc aatcaaacac ccattgggca tactttggca 12000
tatgcgagtt tctcatctaa ttgatgagat ggtttctcgt cgtgtctacc aaaccatgga 12060
gcattctggc caagcggcct ggaagcaggt ggttgctgaa gccactctca caaagctatc 12120
gcagcttgac atagtcaccc acttccaaca tttagccgca gtggaggcgg attcttgccg 12180
cttcctcagc tcgcgactcg tgatgctgaa aaatcttgct gttggcaatg tgagtttgct 12240
gtacaacacc acgctggacc gtgttgaact catcttccct acaccaggta cgaggcccaa 12300
actgaccgat ttcagacaat ggctcatcag tgtgcacgcc tccatcttct cttctgtggc 12360
ctcgtcagtc actttgttcg tggtgctttg gcttcgggtc ccaattctac gctatgtttt 12420
tggtttccat tggcccacgg caacacgtcg tttgagttaa ctattaatta tactgtatgc 12480
aagccctgcc tcacccgcga tgcggctcga cagaggctcg aacccggtcg caacatgtgg 12540
tgcaagatag ggcatgatag gtgtgaggac cgtgaccatg atgagttgtc aatgaccatc 12600
ccacccgggt acgacaacct caaacttgag ggctattatg cttggctcgc tttcctgtcc 12660
ttttcctatg cagcccaatt ccatccggag ctgttcggga tagggaatgt gtcacgcgtc 12720
ttcgtggata aggtgcacca gtttgtttgt gccgtgcatg atggacagaa ttcaaccgtg 12780
tccaacgggc acaacatttc cgctttgtat gcggcatact atcatcacca aatagacggg 12840
ggcaattggt ttcatctaga atggttgcgg ccattctttt cctcctggct ggtgctcaac 12900
atttcatggt ttctgaggcg ttcgcctgca agccctgttt ctcgacacat ctatcagata 12960
ttaagaccaa cacgacagcg gctgccggtt tcatggtcct tcaagacatc agctgcctcc 13020
agcctcatgg gggttcagaa acgcaaggca ccagcattca tgggaagcca tctcaatgtc 13080
gtgtagctgt tggcatcccc cagtacatca cggtaactgc gaatgtgact gatgaatcat 13140
atttgtacaa tgctgacttg ctaatgcttt ctgcctgctt gttctacgcc tcagaaatga 13200
gcgaaaaagg cttcaaagtc atctttggga atgtctctgg cgttgtctct gcttgcgtta 13260
atttcacaga ttatgtggcc catgtgactc aacataccca acagcatcat ctggtaattg 13320
atcacgttcg gttgctgcac tttttgacac catccacgat gaggtgggct acaaccatcg 13380
cctgcttgtt cgccattctc ctggcgatat gagatgttct cacaaattgg ggtgtatctt 13440
gactccttat ccttgttgtt gctggctttt tttgttgtgt accggcttgt cttggtcctt 13500
tgccgatgga aacggcaaca gctcgacata ccaatacata tataacttga cgatatgcga 13560
gctgaatggg accgcctggc tgtccaatca ctttcaatgg gcagtcgaaa cctttgtgct 13620
ttacccggtg gtcactcata tcctctcact gggtttcctc acaacaagtc atttctttga 13680
cacgctcggc cttggagccg tgtccgtcac aggcttttgt cacacgcggt atgtgctcag 13740
cagtgtgtac ggcgtttgtg cattagcggc gttcatatgt tttaccatcc gtgccgctaa 13800
aaattgcatg gcatgccgct atgcccgcac ccggttcacc aatttcattg tggatgaccg 13860
ggggaggatc catcgatgga aatctccaat agttgtggag aagctgggca aagccgaaat 13920
cggcaatgat ctcatcacca tcaaacatgt tgtcctcgaa ggggtcaaag ctcaaccctt 13980
gacaaggacc tcggctgagc aatgggaggc atagatgatt tttgctatga ccctaccgcc 14040
acacagaaac ttgtgttagc tttcagcatc acatatacac ccatcatgat atacgccctt 14100
aaggtttcac gcggccgact tctggggctg ttgcacatcc tgatcttttt gaactgctcc 14160
ttcacgttcg ggtacatgac gtatgtgcat tttcagtcca ccaaccgcgt tgcacttacc 14220
atgggggccg ttgtcgccct cttgtggggc atttatagtt tcatagagtc atggaagttt 14280
atcacttcca gatgcagatt gtgttgccta ggccggcgat acattctggc ccctgcccac 14340
cacgtagaaa gtgctgcagg actccattca atcccagcgt ctggtaaccg agcatacgct 14400
gtgagaaagc ccggactaac ctcagtgaac ggcactctag taccagggct tcggagcctc 14460
gtgttgggcg gcaaaagagc tgttaagcga ggagtggtta acctcgtcaa gtatggccgg 14520
taataaccag agccaaagga agaagaaaaa tgcagctccc atggggaatg gccagtcagt 14580
caatcagctg tgtcagctgc tgggaacaat gatgaaatcc cagcgccagc ggtctagggg 14640
gggacaggcc aaaaggaaaa agcctgagaa gccacatttt cccctggctg ctgaagatga 14700
tgtccggcac cacctcactc aaaccgaacg ttccctttgc ttgcaatcga tccagacggc 14760
ttttaatcaa ggcgcaggaa ctgcgtcgct ttcacccagt gggaagatcg gttttcaggt 14820
cgagttcatg ctgccggtca ctcatacggt gcgtttgatt cgcgtgactt ctacatctgc 14880
tagtcaaggt gtgagttaat ttgatagtca ggtgaatggc cacgattggc gtgtggcctc 14940
tgagtcacct attcaattag ggcgatcaca tgggggttag acttaattgg cgagaaccat 15000
gtgaccgaaa tt 15012
<210> 2
<211> 2369
<212> БЕЛОК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 2
Met Ser Gly Thr Phe Ser Arg Cys Met Cys Thr Pro Ala Ala Arg Val
1 5 10 15
Phe Trp Asn Ala Gly Gln Val Phe Cys Thr Arg Cys Leu Ser Ala Arg
20 25 30
Pro Leu Leu Pro Pro Glu Leu Gln Asp Thr Asp Leu Gly Gly Ile Gly
35 40 45
Leu Phe Tyr Arg Pro Lys Asp Lys Leu Pro Trp Lys Val Pro Ile Gly
50 55 60
Ile Pro Gln Val Glu Cys Thr Pro Ser Gly Cys Cys Trp Leu Ser Ala
65 70 75 80
Val Phe Pro Leu Ala Arg Met Thr Ser Gly Asn His Asn Phe Val Gln
85 90 95
Arg Leu Val Lys Val Ala Asp Val Leu Tyr Arg Asp Gly Cys Leu Thr
100 105 110
Pro Arg His Leu Arg Glu Leu Gln Val Tyr Glu Arg Gly Cys Asn Trp
115 120 125
Tyr Pro Ile Thr Gly Pro Val Pro Gly Met Gly Leu Phe Ala Asn Ser
130 135 140
Met His Val Ser Asp Gln Pro Phe Pro Gly Ala Thr His Val Leu Thr
145 150 155 160
Asn Ser Pro Leu Pro Gln Gln Ala Cys Arg Gln Pro Phe Cys Pro Phe
165 170 175
Glu Glu Ala His Ser Asp Val Tyr Lys Trp Lys Glu Val Val Val Phe
180 185 190
Met Asp Ser Ser Pro Asn Gly Arg Ser Arg Met Met Trp Met Pro Glu
195 200 205
Ser Gly Asp Ser Ala Ala Leu Glu Ala Leu Pro Pro Glu Leu Glu Arg
210 215 220
Gln Val Glu Ile Leu Ile Arg Ser Phe Pro Ala His His Leu Val Asp
225 230 235 240
Leu Thr Asp Trp Glu Leu Thr Glu Ser Pro Glu His Gly Phe Ser Phe
245 250 255
Gly Thr Ser Tyr Pro Cys Gly Tyr Leu Ala Gln Asn Pro Tyr Gly Phe
260 265 270
Asp Gly Lys Cys Trp Leu Ser Cys Phe Leu Gly Leu Pro Thr Lys Val
275 280 285
Trp Arg His Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Ala Phe Gly Tyr Gln Thr Lys
290 295 300
Trp Gly Val His Gly Lys Tyr Leu Gln Arg Arg Leu Gln Ile Asn Gly
305 310 315 320
Val Arg Ala Ala Val Asp Pro Asp Gly Pro Ile His Val Glu Ala Leu
325 330 335
Ser Cys Pro Gln Ser Trp Ile Arg His Leu Thr Leu Asp Asp Asp Val
340 345 350
Thr Pro Gly Phe Val Arg Leu Met Ser Leu Arg Ile Val Pro Asn Thr
355 360 365
Glu Pro Thr Thr Leu Pro Ile Phe Arg Phe Gly Ala His Lys Trp Tyr
370 375 380
Gly Ala Ala Gly Lys Arg Ala Arg Ala Lys Arg Ala Ala Lys Gly Lys
385 390 395 400
Gly Asp Ser Asn Ser Thr Pro Glu Val Ala Arg Val Ala Pro Thr His
405 410 415
Gly Val Ile Thr Tyr Ser Pro Pro Ala Asp Gly Ser Cys Gly Trp His
420 425 430
Val Ile Ala Ala Val Met Asn His Met Met Asn Gly Glu Leu Thr Ser
435 440 445
Pro Leu Thr Pro Tyr Asn Arg Pro Glu Asp Asp Trp Ala Ser Asp Tyr
450 455 460
Asp Leu Val Lys Thr Ile Gln Tyr Leu Gln Leu Pro Ala Thr Val Val
465 470 475 480
Arg Ala Arg Ala Cys Pro Asn Ala Lys Tyr Leu Val Lys Leu Asn Gly
485 490 495
Val His Trp Glu Val Glu Met Arg Pro Gly Val Ala Pro Arg Ser Leu
500 505 510
Pro Arg Glu Cys Val Val Gly Val Cys Ser Glu Gly Cys Val Thr Pro
515 520 525
Pro Leu Ser Glu Arg Val Leu Pro Asp Arg Ala Leu Glu Ala Leu Ala
530 535 540
Ser Ala Tyr Arg Leu Pro Ser Asp Cys Val Cys Asp Ala Val Ala Asp
545 550 555 560
Phe Leu Ser Asn Pro Pro Ser Gln Gly Ser Trp Thr Leu Asp Arg Met
565 570 575
Leu Thr Ser Pro Ser Pro Glu Gln Ser Gly Phe Ser Ser Leu Tyr Arg
580 585 590
Leu Leu Leu Glu Val Val Pro Gln Lys Cys Gly Ala Thr Glu Gly Ala
595 600 605
Phe Val Tyr Ala Val Asp Arg Met Leu Lys Asp Cys Pro Ser Pro Lys
610 615 620
Gln Ala Met Ala Leu Leu Gly Lys Ile Lys Ile Pro Ser Ser Lys Ala
625 630 635 640
Ser Ser Val Ser Leu Asp Glu Cys Phe Pro Thr Asp Val Leu Thr Val
645 650 655
Pro Gly Ser Val Phe Gln Glu Glu Pro Gln Ser Phe Asp Asn Ala Ile
660 665 670
Ala Leu Cys Ser Leu Glu Lys Gln Lys Glu Thr Glu Gly Ala Ser Pro
675 680 685
Gly Lys Ala Gln Glu Ser Asp Cys Lys Thr Phe Arg Ser Val Val Pro
690 695 700
Ala Glu Lys Pro Asn Met Gln Gln Val Pro Leu Val Glu Asp Glu Gln
705 710 715 720
Leu Lys Leu Gly Gly Cys Asp Ser Ala Val Ala Thr Val Asp Ser Asp
725 730 735
Arg Gly Asn Glu Pro Leu Asp Leu Ser Arg Ser Ala Pro Thr Ala Thr
740 745 750
Thr Thr Ser Val Gly Gly Arg Ala Pro Asp Asn Pro Gly Pro Asn Thr
755 760 765
Ser Val Arg Ser Thr Thr Val Gln Glu Ser Val Pro Gly Arg Pro Val
770 775 780
Pro Arg Leu Val Glu Arg Cys Gly Val Glu Ser Asp Asn Ser Asn Ser
785 790 795 800
Pro Leu Asp Leu Ser Lys Ala Gln Thr Pro Asp Arg Pro Leu Asp Leu
805 810 815
Ser Leu Ala Ala Trp Pro Val Arg Ala Thr Ala Ser Asp Pro Gly Trp
820 825 830
Val Asp Gly Arg Arg Glu Pro Val Phe Val Lys Pro Arg Gly Ala Phe
835 840 845
Ser Asp Ser Glu Ser Val Ile Arg Phe Gly Gly Val Ser Glu Thr Ser
850 855 860
Ser Ile Ile Glu Phe Asp Arg Thr Glu Glu Thr Pro Val Thr Asp Val
865 870 875 880
Pro Ile Asp Leu Thr Thr Ser Asn Glu Thr Leu Ser Gly Ala Asp Pro
885 890 895
Phe Glu Leu Ala Glu Pro Lys Arg Pro Arg Leu Ser Ala Gln Ala Leu
900 905 910
Ile Asp Arg Gly Gly Pro Leu Ala Asp Val His Ala Lys Ile Lys Asn
915 920 925
Arg Val Tyr Glu Gln Cys Leu Gln Ala Cys Glu Pro Gly Ser Arg Ala
930 935 940
Thr Pro Ala Thr Lys Glu Trp Leu Asp Lys Met Trp Glu Arg Val Asp
945 950 955 960
Met Lys Thr Trp Arg Cys Thr Ser Gln Phe Gln Ala Ala Tyr Ile Leu
965 970 975
Gly Pro Leu Lys Phe Leu Pro Asp Met Ile Arg Asp Ala Pro Pro Pro
980 985 990
Val Pro Arg Lys Asp Arg Ala Cys Asp Ser Ala Ser Leu Lys Gln Leu
995 1000 1005
Val Ala Arg Trp Glu Lys Arg Leu Asn Ala Val Pro Leu Gln Gly
1010 1015 1020
Pro Val Glu Pro Glu Leu Gly Arg Thr Ala Pro Ser Ser Val Asn
1025 1030 1035
Ala Gln Pro Glu Glu Ala Ile Pro Ser Asp Gly Pro Pro Gln Ala
1040 1045 1050
Pro Asp Pro Pro Gly Pro Thr Ser Ala Gly Arg Gly Phe Lys Gly
1055 1060 1065
Leu Ile Ser Pro Gly Ile Arg Leu Ile Gly Ser Ala Ser Gln Arg
1070 1075 1080
Phe Met Thr Trp Val Phe Glu Ile Tyr Ser His Leu Pro Ala Phe
1085 1090 1095
Met Leu Thr Leu Phe Ser Pro Arg Gly Ser Met Val Thr Ser Asp
1100 1105 1110
Trp Leu Phe Ala Gly Val Val Leu Phe Ala Leu Leu Phe Cys Arg
1115 1120 1125
Ser Cys Pro Ile Leu Gly Cys Leu Pro Leu Leu Gly Val Phe Ser
1130 1135 1140
Gly Ser Val Arg Cys Val Arg Leu Gly Val Phe Gly Ser Trp Met
1145 1150 1155
Ala Phe Ala Val Phe Leu Phe Ser Thr Pro Thr Asn Pro Ile Gly
1160 1165 1170
Ser Ser Cys Asp His Asp Ser Pro Glu Cys His Ala Glu Leu Leu
1175 1180 1185
Ala Leu Glu Gln Arg Gln Leu Trp Glu Pro Val Arg Ser Leu Val
1190 1195 1200
Val Gly Pro Ser Gly Leu Ser Cys Val Ile Leu Gly Lys Leu Leu
1205 1210 1215
Gly Gly Ser Arg Tyr Leu Trp His Val Val Leu Arg Leu Cys Met
1220 1225 1230
Leu Ala Asp Leu Ala Leu Ser Leu Ile Tyr Val Val Ser Gln Gly
1235 1240 1245
Arg Cys Tyr Lys Cys Trp Gly Lys Cys Ile Arg Thr Ala Pro Ala
1250 1255 1260
Glu Val Ala Leu Asn Val Phe Pro Phe Ser Arg Ala Thr Arg Ser
1265 1270 1275
Ser Leu Val Ser Leu Cys Asp Arg Phe Gln Ala Pro Lys Glu Val
1280 1285 1290
Asp Pro Val His Leu Ala Thr Gly Trp Arg Gly Cys Trp Arg Gly
1295 1300 1305
Glu Ser Pro Ile His Gln Ala His Gln Lys Pro Ile Ala Tyr Ala
1310 1315 1320
Ser Leu Asp Glu Lys Lys Ile Ser Ala Gln Thr Val Val Ala Val
1325 1330 1335
Pro Tyr Asp Pro Ser Gln Ala Val Lys Cys Leu Lys Val Leu Gln
1340 1345 1350
Ala Gly Gly Ala Ile Val Asp Gln Pro Val Pro Glu Val Ile Arg
1355 1360 1365
Val Ser Glu Val Pro Phe Ser Ala Pro Phe Phe Pro Lys Val Pro
1370 1375 1380
Val Asn Pro Asp Cys Arg Val Val Val Asp Ser Asp Thr Phe Val
1385 1390 1395
Ala Ala Val Arg Cys Gly Tyr Ser Thr Ala Gln Leu Ile Leu Gly
1400 1405 1410
Arg Gly Asn Phe Ala Lys Leu Asn Gln Thr Pro Pro Lys Asn Ser
1415 1420 1425
Ile Pro Thr Lys Ser Thr Gly Gly Ala Ser Tyr Thr Leu Ala Val
1430 1435 1440
Thr Gln Val Ser Val Trp Thr Leu Val His Phe Ile Ile Gly Leu
1445 1450 1455
Trp Leu Thr Ser Pro Gln Val Cys Gly Arg Gly Thr Ser Asp Pro
1460 1465 1470
Trp Cys Ser Asn Pro Phe Ser Tyr Pro Thr Tyr Gly Pro Gly Val
1475 1480 1485
Val Cys Ser Ser Arg Leu Cys Val Ser Ala Asp Gly Val Thr Leu
1490 1495 1500
Pro Leu Phe Ser Ala Val Ala Gln Leu Ser Gly Arg Glu Val Gly
1505 1510 1515
Val Phe Ile Leu Val Leu Val Ser Leu Ile Ser Leu Ala His Arg
1520 1525 1530
Leu Ala Leu Lys Ala Asp Met Leu Val Val Phe Ser Ala Phe Cys
1535 1540 1545
Ala Tyr Ala Trp Pro Met Ser Ser Trp Leu Ile Cys Phe Phe Pro
1550 1555 1560
Ile Leu Leu Arg Trp Val Thr Leu His Pro Leu Thr Met Leu Trp
1565 1570 1575
Val His Ser Phe Leu Val Phe Cys Leu Pro Ala Ala Gly Val Leu
1580 1585 1590
Ser Leu Gly Ile Ser Gly Phe Leu Trp Ala Val Gly Arg Phe Thr
1595 1600 1605
Gln Val Ala Gly Ile Ile Thr Pro Tyr Asp Ile His Gln Tyr Thr
1610 1615 1620
Ser Gly Pro Arg Gly Ala Ala Ala Val Ala Thr Ala Pro Glu Gly
1625 1630 1635
Thr Tyr Met Ala Ala Val Arg Arg Ala Ala Leu Thr Gly Arg Thr
1640 1645 1650
Leu Ile Phe Thr Pro Ser Ala Val Gly Ser Leu Leu Glu Gly Ala
1655 1660 1665
Phe Arg Thr Asn Lys Pro Cys Leu Asn Thr Val Asn Val Val Gly
1670 1675 1680
Ser Ser Leu Gly Ser Gly Gly Val Phe Thr Val Gly Gly Ser Lys
1685 1690 1695
Ile Ile Ile Thr Ala Thr His Val Leu Asn Gly Asp Ala Ala Arg
1700 1705 1710
Val Thr Gly Asp Ser Tyr Asn Arg Met His Thr Phe Lys Thr Asn
1715 1720 1725
Gly Asp Tyr Ala Trp Ser Arg Ala Asp Asp Trp Gln Gly Val Ala
1730 1735 1740
Pro Ala Val Lys Val Ala Lys Arg Tyr Arg Gly Arg Ala Tyr Trp
1745 1750 1755
Gln Thr Ser Thr Gly Val Glu Pro Gly Ile Ile Gly Glu Gly Phe
1760 1765 1770
Ala Phe Cys Phe Thr Asn Cys Gly Asp Ser Gly Ser Pro Val Ile
1775 1780 1785
Ser Glu Thr Gly Asp Leu Ile Gly Val His Thr Gly Ser Asn Lys
1790 1795 1800
Leu Gly Ser Gly Leu Val Thr Thr Pro Glu Gly Glu Thr Cys Ser
1805 1810 1815
Ile Lys Glu Thr Lys Leu Ser Glu Leu Ser Arg Tyr Phe Ala Gly
1820 1825 1830
Pro Ser Val Pro Leu Gly Asp Val Arg Leu Ser Pro Ala Ile Ile
1835 1840 1845
Pro Asp Val Ala Phe Ile Pro Ser Asp Leu Ala Ser Leu Leu Ala
1850 1855 1860
Ser Val Pro Val Met Glu Gly Gly Leu Ser Thr Val Gln Leu Leu
1865 1870 1875
Cys Val Phe Phe Leu Leu Trp Arg Met Met Gly His Ala Trp Thr
1880 1885 1890
Pro Ile Ile Ala Val Ser Phe Phe Leu Leu Asn Glu Ile Leu Pro
1895 1900 1905
Ala Val Leu Val Arg Ala Val Phe Ser Phe Ala Leu Phe Val Leu
1910 1915 1920
Ala Trp Ala Thr Pro Trp Ser Ala Gln Val Leu Met Ile Arg Leu
1925 1930 1935
Leu Thr Ala Ala Leu Asn Arg Asn Arg Leu Ser Leu Ala Phe Tyr
1940 1945 1950
Ala Leu Gly Gly Val Val Gly Leu Ala Ala Glu Ile Gly Thr Phe
1955 1960 1965
Ala Gly Lys Leu Thr Glu Leu Ser Gln Val Leu Ser Thr Tyr Cys
1970 1975 1980
Phe Leu Pro Arg Val Ile Ala Met Thr Ser Cys Val Pro Val Ile
1985 1990 1995
Ile Ile Gly Gly Leu His Ala Leu Gly Val Ile Leu Trp Leu Phe
2000 2005 2010
Lys His Arg Cys Leu His Asn Met Leu Val Gly Asp Gly Ser Phe
2015 2020 2025
Ser Ser Ala Phe Phe Leu Arg Tyr Phe Ala Glu Gly Asn Leu Arg
2030 2035 2040
Lys Gly Val Ser Gln Ser Cys Gly Met Ser Asn Glu Ser Leu Thr
2045 2050 2055
Ala Ala Leu Ala Cys Lys Leu Ser Gln Ala Asp Leu Asp Phe Leu
2060 2065 2070
Ser Gly Leu Thr Asn Phe Lys Cys Phe Val Ser Ala Ser Asn Met
2075 2080 2085
Lys Asn Ala Ala Gly Gln Tyr Ile Glu Ala Ala Tyr Ala Lys Ala
2090 2095 2100
Leu Arg Gln Glu Leu Ala Ser Leu Val Gln Val Asp Lys Met Lys
2105 2110 2115
Gly Val Leu Ser Lys Leu Glu Ala Phe Ala Glu Met Ala Thr Pro
2120 2125 2130
Ser Leu Asp Thr Gly Asp Val Val Val Leu Leu Gly Gln His Pro
2135 2140 2145
His Gly Ser Ile Leu Asp Ile Asn Val Gly Thr Glu Arg Lys Thr
2150 2155 2160
Val Ser Val Gln Glu Thr Arg Ser Leu Gly Gly Ser Lys Phe Ser
2165 2170 2175
Val Cys Thr Val Val Ser Asn Thr Pro Val Asp Ala Leu Thr Gly
2180 2185 2190
Ile Pro Leu Gln Thr Pro Thr Pro Leu Phe Glu Asn Gly Pro Arg
2195 2200 2205
His Arg Ser Glu Asp Asp Asp Leu Lys Val Glu Arg Met Lys Lys
2210 2215 2220
His Cys Val Ser Leu Gly Phe His Asn Ile Asn Gly Lys Ile Tyr
2225 2230 2235
Cys Lys Val Trp Asp Lys Ser Thr Gly Asp Thr Phe Tyr Thr Asp
2240 2245 2250
Asp Ser Arg Tyr Thr Gln Asp His Ala Phe Gln Asp Arg Ser Ala
2255 2260 2265
Asp Tyr Arg Asp Arg Asp Tyr Glu Gly Val Gln Ile Ala Pro Gln
2270 2275 2280
Gln Gly Phe Asp Pro Met Ser Glu Thr Pro Val Gly Thr Val Val
2285 2290 2295
Ile Gly Gly Ile Thr Tyr Ser Arg Tyr Leu Val Lys Gly Lys Glu
2300 2305 2310
Val Leu Ile Pro Lys Pro Asp Asn His Phe Glu Ala Ala Lys Leu
2315 2320 2325
Ser Leu Glu Gln Ala Leu Ala Gly Met Gly Gln Thr Cys Asp Leu
2330 2335 2340
Thr Ala Ala Glu Val Glu Lys Leu Lys Arg Ile Ile Ser Gln Leu
2345 2350 2355
Gln Gly Leu Thr Thr Glu Gln Ala Leu Asn Cys
2360 2365
<210> 3
<211> 1460
<212> БЕЛОК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 3
Thr Gly Phe Lys Leu Leu Ala Ala Ser Gly Leu Thr Arg Cys Gly Arg
1 5 10 15
Gly Gly Leu Val Val Thr Glu Thr Ala Val Lys Ile Val Lys Tyr His
20 25 30
Ser Arg Thr Phe Thr Leu Gly Pro Leu Asp Leu Lys Val Thr Ser Glu
35 40 45
Ala Glu Val Lys Lys Ser Thr Glu Gln Gly His Ala Val Val Ala Asn
50 55 60
Leu Cys Ser Gly Val Val Leu Met Arg Pro His Pro Pro Ser Leu Val
65 70 75 80
Asp Val Leu Leu Ile Pro Gly Leu Asp Thr Ala Pro Gly Ile Gln Pro
85 90 95
Gly His Gly Ala Gly Asn Met Gly Val Asn Gly Ala Ile Trp Asp Phe
100 105 110
Glu Thr Ala Pro Thr Lys Ala Glu Leu Glu Leu Ser Lys Gln Ile Ile
115 120 125
Gln Ala Cys Glu Val Arg Arg Gly Asp Ala Pro Asn Leu Gln Leu Pro
130 135 140
Tyr Lys Leu His Pro Val Arg Gly Asp Pro Glu Arg Arg Asn Gly Arg
145 150 155 160
Leu Ile Asn Thr Arg Phe Gly Asp Leu Pro Tyr Lys Thr Pro Gln Asp
165 170 175
Thr Arg Ser Ala Ile His Ala Ala Cys Cys Leu His Pro Asn Gly Val
180 185 190
Pro Val Ser Asp Gly Lys Ser Thr Leu Gly Thr Thr Leu Gln Arg Gly
195 200 205
Phe Glu Leu Tyr Val Pro Thr Val Pro Tyr Ser Val Leu Glu Tyr Leu
210 215 220
Asp Ser Arg Pro Asp Thr Pro Phe Met Cys Thr Lys His Gly Thr Ser
225 230 235 240
Glu Ala Ala Ala Glu Asp Leu Gln Lys Tyr Asn Leu Ser Thr Gln Gly
245 250 255
Phe Val Leu Pro Gly Val Leu Arg Leu Val Arg Arg Phe Ile Phe Gly
260 265 270
His Ile Gly Lys Ala Pro Pro Leu Tyr Leu Pro Ser Thr Tyr Pro Ala
275 280 285
Lys Asn Ser Met Ala Gly Ile Asn Gly Gln Arg Phe Pro Thr Lys Asp
290 295 300
Val Gln Ser Ile Pro Glu Val Asp Glu Met Cys Ala Arg Ala Val Lys
305 310 315 320
Asp Asn Trp Gln Thr Thr Thr Pro Cys Thr Leu Lys Lys Gln Tyr Cys
325 330 335
Ser Lys Pro Lys Thr Arg Thr Ile Leu Gly Thr Asn Asn Phe Ile Ala
340 345 350
Leu Ala His Arg Ser Ala Leu Ser Gly Val Thr Gln Ala Phe Met Lys
355 360 365
Lys Ala Trp Lys Ser Pro Ile Ala Leu Gly Lys Asn Lys Phe Lys Glu
370 375 380
Leu His Cys Ala Val Ala Gly Arg Cys Leu Glu Ala Asp Leu Ala Ser
385 390 395 400
Cys Asp Arg Ser Thr Pro Ala Ile Val Arg Trp Phe Thr Ala Asn Leu
405 410 415
Leu Tyr Glu Leu Ala Gly Cys Glu Glu Tyr Leu Pro Ser Tyr Val Leu
420 425 430
Asn Cys Cys His Asp Leu Val Ala Thr Gln Asp Gly Ala Phe Thr Lys
435 440 445
Arg Gly Gly Leu Ser Ser Gly Asp Pro Val Thr Ser Val Ser Asn Thr
450 455 460
Val Tyr Ser Leu Val Ile Tyr Ala Gln His Met Val Leu Ser Ala Leu
465 470 475 480
Lys Met Gly His Glu Ile Gly Leu Lys Phe Leu Glu Glu Gln Leu Arg
485 490 495
Phe Glu Asp Leu Ile Glu Ile Gln Pro Met Leu Val Tyr Ser Asp Asp
500 505 510
Leu Val Leu Tyr Ala Glu Lys Pro Thr Phe Pro Asn Tyr His Trp Trp
515 520 525
Val Glu His Leu Asp Leu Met Leu Gly Phe Lys Thr Asp Pro Lys Lys
530 535 540
Thr Ile Ile Thr Asp Lys Pro Ser Phe Leu Gly Cys Arg Ile Glu Ala
545 550 555 560
Gly Arg Gln Leu Val Pro Asn Arg Asp Arg Ile Leu Ala Ala Leu Ala
565 570 575
Tyr His Met Lys Ala Gln Asn Ala Ser Glu Tyr Tyr Ala Ser Ala Ala
580 585 590
Ala Ile Leu Met Asp Ser Cys Ala Cys Ile Asp Tyr Asp Pro Glu Trp
595 600 605
Tyr Glu Asp Leu Ile Cys Gly Ile Ala Arg Cys Ala Arg Gln Asp Gly
610 615 620
Tyr Ser Phe Pro Gly Pro Ala Phe Phe Met Ser Met Trp Glu Lys Leu
625 630 635 640
Lys Ser His Asn Glu Gly Lys Lys Phe Arg His Cys Gly Ile Cys Asp
645 650 655
Ala Lys Ala Asp His Ala Ser Ala Cys Gly Leu Asp Leu Cys Leu Phe
660 665 670
His Ser His Phe His Gln His Cys Pro Val Thr Leu Ser Cys Gly His
675 680 685
His Ala Gly Ser Lys Glu Cys Pro Gln Cys Gln Ser Pro Val Gly Ala
690 695 700
Gly Lys Ser Pro Leu Asp Thr Val Leu Gln Gln Ile Pro Tyr Lys Pro
705 710 715 720
Pro Arg Thr Val Ile Met Lys Val Asn Asn Lys Thr Thr Ala Leu Asp
725 730 735
Pro Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Arg Gly Leu Val Ala Val Lys Arg Gly
740 745 750
Ile Ala Gly Asn Glu Val Asp Leu Ala Asp Gly Asp Tyr Gln Val Val
755 760 765
Pro Leu Leu Pro Thr Cys Lys Asp Ile Asn Met Val Lys Val Ala Cys
770 775 780
Asn Val Leu Leu Ser Lys Phe Ile Val Gly Pro Pro Gly Ser Gly Lys
785 790 795 800
Thr Thr Trp Leu Leu Asn Gln Val Gln Glu Asp Val Val Ile Tyr Thr
805 810 815
Pro Thr His Gln Thr Met Phe Asp Ile Val Ser Ala Leu Lys Val Cys
820 825 830
Arg Tyr Ser Ile Pro Gly Ala Ser Gly Leu Pro Phe Pro Pro Pro Ala
835 840 845
Arg Ser Gly Pro Trp Val Arg Leu Val Ala Ser Gly His Ile Pro Gly
850 855 860
Arg Val Ser Tyr Leu Asp Glu Ala Gly Tyr Cys Asn His Leu Asp Ile
865 870 875 880
Leu Arg Leu Leu Ser Lys Thr Pro Leu Val Cys Leu Gly Asp Leu Gln
885 890 895
Gln Leu His Pro Val Gly Phe Asp Ser Cys Cys Tyr Val Phe Asn Gln
900 905 910
Met Pro His Lys Gln Leu Thr Thr Ile Tyr Arg Phe Gly Pro Asn Ile
915 920 925
Cys Ala Ala Ile Gln Pro Cys Tyr Lys Glu Lys Leu Glu Ser Lys Ala
930 935 940
Arg Asn Thr Arg Val Val Phe Thr Ile Arg Pro Val Ala Tyr Gly Gln
945 950 955 960
Val Leu Thr Pro Phe His Lys Asp Arg Val Gly Ser Ala Ile Thr Ile
965 970 975
Asp Ser Ser Gln Gly Ala Thr Phe Asp Val Val Thr Leu His Leu Pro
980 985 990
Thr Pro Arg Ser Leu Asn Lys Ser Arg Ala Leu Val Ala Ile Thr Arg
995 1000 1005
Ala Arg His Gly Leu Phe Ile Tyr Asp Pro His Asn Gln Leu Gln
1010 1015 1020
Glu Phe Phe Asn Leu Thr Pro Glu Arg Thr Asp Cys Asn Leu Val
1025 1030 1035
Phe Asn Arg Gly Gly Glu Leu Val Val Leu Asn Ser Asp Asn Ala
1040 1045 1050
Val Thr Thr Val Ala Lys Val Leu Glu Ala Gly Pro Ser Gln Phe
1055 1060 1065
Arg Val Ser Asp Pro Arg Cys Lys Ser Leu Leu Ala Ala Cys Ser
1070 1075 1080
Val Ser Leu Glu Gly Ser Cys Met Pro Leu Pro Gln Val Ala His
1085 1090 1095
Asn Leu Gly Phe Tyr Phe Ser Pro Asp Ser Pro Ala Phe Ala Pro
1100 1105 1110
Leu Pro Lys Glu Leu Ala Pro His Trp Pro Val Val Thr Cys Gln
1115 1120 1125
Asn Asn Gln Ala Trp Pro Asp Arg Leu Val Ala Ser Met Arg Pro
1130 1135 1140
Ile Asp Ala Arg Tyr Ser Lys Pro Met Val Gly Ala Gly Tyr Val
1145 1150 1155
Val Gly Pro Ser Thr Phe Leu Gly Thr Pro Gly Val Val Ser Tyr
1160 1165 1170
Tyr Leu Thr Leu Tyr Ile Lys Gly Glu Pro Arg Ala Leu Pro Glu
1175 1180 1185
Thr Leu Val Ser Thr Gly Arg Ile Ala Thr Asp Cys Arg Glu Tyr
1190 1195 1200
Leu Asp Ala Ala Glu Glu Glu Ala Ala Lys Glu Leu Pro His Ala
1205 1210 1215
Phe Ile Gly Asp Val Lys Gly Thr Thr Val Gly Gly Cys His His
1220 1225 1230
Ile Thr Ser Lys Tyr Leu Pro Arg Ser Leu Pro Lys Asp Ser Val
1235 1240 1245
Ala Val Val Gly Val Ser Ser Pro Gly Lys Ala Ala Lys Ala Val
1250 1255 1260
Cys Thr Leu Thr Asp Val Tyr Leu Pro Asp Leu Arg Pro Tyr Leu
1265 1270 1275
Gln Pro Glu Thr Ala Ser Lys Cys Trp Lys Leu Lys Leu Asp Phe
1280 1285 1290
Arg Asp Val Arg Leu Met Val Trp Lys Gly Ala Thr Ala Tyr Phe
1295 1300 1305
Gln Leu Glu Gly Leu Thr Trp Ser Ala Leu Pro Asp Tyr Ala Arg
1310 1315 1320
Phe Ile Gln Leu Pro Lys Asp Ala Val Val Tyr Ile Asp Pro Cys
1325 1330 1335
Ile Gly Pro Ala Thr Ala Asn Arg Lys Val Val Arg Thr Thr Asp
1340 1345 1350
Trp Arg Ala Asp Leu Ala Val Thr Pro Tyr Asp Tyr Gly Ala Gln
1355 1360 1365
Thr Ile Leu Thr Thr Ala Trp Phe Glu Asp Leu Gly Pro Gln Trp
1370 1375 1380
Lys Ile Leu Gly Leu Gln Pro Phe Lys Arg Ala Phe Gly Phe Glu
1385 1390 1395
Asn Thr Glu Asp Trp Ala Ile Leu Ala Arg Arg Met Asn Asp Gly
1400 1405 1410
Arg Asp Tyr Thr Asp Tyr Asn Trp Thr Cys Val Arg Glu Arg Pro
1415 1420 1425
His Ala Ile Tyr Gly Arg Ala Arg Asp His Thr Tyr His Phe Ala
1430 1435 1440
Pro Gly Ala Glu Leu Gln Val Glu Leu Gly Lys Pro Arg Leu Pro
1445 1450 1455
Pro Glu
1460
<210> 4
<211> 249
<212> БЕЛОК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 4
Met Gln Trp Gly His Cys Gly Val Lys Ser Pro Ser Cys Leu Trp Met
1 5 10 15
Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Val Trp Leu Thr Leu Ser Ser Phe Leu
20 25 30
Pro Tyr Cys Ser Gly Ser Pro Ser Gln Asp Gly Tyr Trp Ser Phe Tyr
35 40 45
Ser Glu Trp Phe Ala Pro Arg Phe Ser Val Arg Ala Leu Pro Phe Thr
50 55 60
Leu Pro Asn Tyr Arg Arg Ser Tyr Glu Gly Leu Leu Pro Asn Cys Arg
65 70 75 80
Pro Asp Val Pro Gln Phe Ala Ile Lys His Pro Leu Gly Ile Leu Trp
85 90 95
His Met Arg Val Ser His Leu Ile Asp Glu Met Val Ser Arg Arg Val
100 105 110
Tyr Gln Thr Met Glu His Ser Gly Gln Ala Ala Trp Lys Gln Val Val
115 120 125
Ala Glu Ala Thr Leu Thr Lys Leu Ser Gln Leu Asp Ile Val Thr His
130 135 140
Phe Gln His Leu Ala Ala Val Glu Ala Asp Ser Cys Arg Phe Leu Ser
145 150 155 160
Ser Arg Leu Val Met Leu Lys Asn Leu Ala Val Gly Asn Val Ser Leu
165 170 175
Leu Tyr Asn Thr Thr Leu Asp Arg Val Glu Leu Ile Phe Pro Thr Pro
180 185 190
Gly Thr Arg Pro Lys Leu Thr Asp Phe Arg Gln Trp Leu Ile Ser Val
195 200 205
His Ala Ser Ile Phe Ser Ser Val Ala Ser Ser Val Thr Leu Phe Val
210 215 220
Val Leu Trp Leu Arg Val Pro Ile Leu Arg Tyr Val Phe Gly Phe His
225 230 235 240
Trp Pro Thr Ala Thr Arg Arg Leu Ser
245
<210> 5
<211> 70
<212> БЕЛОК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 5
Met Gly Ser Leu Trp Ser Lys Ile Thr Gln Leu Phe Val Asp Ala Phe
1 5 10 15
Thr Glu Phe Leu Ile Ser Val Val Asp Ile Ile Ile Phe Leu Ala Ile
20 25 30
Leu Phe Gly Phe Thr Val Ala Gly Trp Leu Leu Val Phe Leu Leu Arg
35 40 45
Val Val Cys Ser Ala Ile Leu Arg Ser Arg Thr Ala Val His Ser Pro
50 55 60
Glu Leu Ser Lys Val Leu
65 70
<210> 6
<211> 255
<212> БЕЛОК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 6
Met Ala His Gln Cys Ala Arg Leu His Leu Leu Phe Cys Gly Leu Val
1 5 10 15
Ser His Phe Val Arg Gly Ala Leu Ala Ser Gly Pro Asn Ser Thr Leu
20 25 30
Cys Phe Trp Phe Pro Leu Ala His Gly Asn Thr Ser Phe Glu Leu Thr
35 40 45
Ile Asn Tyr Thr Val Cys Lys Pro Cys Leu Thr Arg Asp Ala Ala Arg
50 55 60
Gln Arg Leu Glu Pro Gly Arg Asn Met Trp Cys Lys Ile Gly His Asp
65 70 75 80
Arg Cys Glu Asp Arg Asp His Asp Glu Leu Ser Met Thr Ile Pro Pro
85 90 95
Gly Tyr Asp Asn Leu Lys Leu Glu Gly Tyr Tyr Ala Trp Leu Ala Phe
100 105 110
Leu Ser Phe Ser Tyr Ala Ala Gln Phe His Pro Glu Leu Phe Gly Ile
115 120 125
Gly Asn Val Ser Arg Val Phe Val Asp Lys Val His Gln Phe Val Cys
130 135 140
Ala Val His Asp Gly Gln Asn Ser Thr Val Ser Asn Gly His Asn Ile
145 150 155 160
Ser Ala Leu Tyr Ala Ala Tyr Tyr His His Gln Ile Asp Gly Gly Asn
165 170 175
Trp Phe His Leu Glu Trp Leu Arg Pro Phe Phe Ser Ser Trp Leu Val
180 185 190
Leu Asn Ile Ser Trp Phe Leu Arg Arg Ser Pro Ala Ser Pro Val Ser
195 200 205
Arg His Ile Tyr Gln Ile Leu Arg Pro Thr Arg Gln Arg Leu Pro Val
210 215 220
Ser Trp Ser Phe Lys Thr Ser Ala Ala Ser Ser Leu Met Gly Val Gln
225 230 235 240
Lys Arg Lys Ala Pro Ala Phe Met Gly Ser His Leu Asn Val Val
245 250 255
<210> 7
<211> 183
<212> БЕЛОК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 7
Met Val Ala Ala Ile Leu Phe Leu Leu Ala Gly Ala Gln His Phe Met
1 5 10 15
Val Ser Glu Ala Phe Ala Cys Lys Pro Cys Phe Ser Thr His Leu Ser
20 25 30
Asp Ile Lys Thr Asn Thr Thr Ala Ala Ala Gly Phe Met Val Leu Gln
35 40 45
Asp Ile Ser Cys Leu Gln Pro His Gly Gly Ser Glu Thr Gln Gly Thr
50 55 60
Ser Ile His Gly Lys Pro Ser Gln Cys Arg Val Ala Val Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Tyr Ile Thr Val Thr Ala Asn Val Thr Asp Glu Ser Tyr Leu Tyr
85 90 95
Asn Ala Asp Leu Leu Met Leu Ser Ala Cys Leu Phe Tyr Ala Ser Glu
100 105 110
Met Ser Glu Lys Gly Phe Lys Val Ile Phe Gly Asn Val Ser Gly Val
115 120 125
Val Ser Ala Cys Val Asn Phe Thr Asp Tyr Val Ala His Val Thr Gln
130 135 140
His Thr Gln Gln His His Leu Val Ile Asp His Val Arg Leu Leu His
145 150 155 160
Phe Leu Thr Pro Ser Thr Met Arg Trp Ala Thr Thr Ile Ala Cys Leu
165 170 175
Phe Ala Ile Leu Leu Ala Ile
180
<210> 8
<211> 201
<212> БЕЛОК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 8
Met Arg Cys Ser His Lys Leu Gly Cys Ile Leu Thr Pro Tyr Pro Cys
1 5 10 15
Cys Cys Trp Leu Phe Leu Leu Cys Thr Gly Leu Ser Trp Ser Phe Ala
20 25 30
Asp Gly Asn Gly Asn Ser Ser Thr Tyr Gln Tyr Ile Tyr Asn Leu Thr
35 40 45
Ile Cys Glu Leu Asn Gly Thr Ala Trp Leu Ser Asn His Phe Gln Trp
50 55 60
Ala Val Glu Thr Phe Val Leu Tyr Pro Val Val Thr His Ile Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gly Phe Leu Thr Thr Ser His Phe Phe Asp Thr Leu Gly Leu Gly
85 90 95
Ala Val Ser Val Thr Gly Phe Cys His Thr Arg Tyr Val Leu Ser Ser
100 105 110
Val Tyr Gly Val Cys Ala Leu Ala Ala Phe Ile Cys Phe Thr Ile Arg
115 120 125
Ala Ala Lys Asn Cys Met Ala Cys Arg Tyr Ala Arg Thr Arg Phe Thr
130 135 140
Asn Phe Ile Val Asp Asp Arg Gly Arg Ile His Arg Trp Lys Ser Pro
145 150 155 160
Ile Val Val Glu Lys Leu Gly Lys Ala Glu Ile Gly Asn Asp Leu Ile
165 170 175
Thr Ile Lys His Val Val Leu Glu Gly Val Lys Ala Gln Pro Leu Thr
180 185 190
Arg Thr Ser Ala Glu Gln Trp Glu Ala
195 200
<210> 9
<211> 173
<212> БЕЛОК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 9
Met Gly Gly Ile Asp Asp Phe Cys Tyr Asp Pro Thr Ala Thr Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Leu Ala Phe Ser Ile Thr Tyr Thr Pro Ile Met Ile Tyr Ala
20 25 30
Leu Lys Val Ser Arg Gly Arg Leu Leu Gly Leu Leu His Ile Leu Ile
35 40 45
Phe Leu Asn Cys Ser Phe Thr Phe Gly Tyr Met Thr Tyr Val His Phe
50 55 60
Gln Ser Thr Asn Arg Val Ala Leu Thr Met Gly Ala Val Val Ala Leu
65 70 75 80
Leu Trp Gly Ile Tyr Ser Phe Ile Glu Ser Trp Lys Phe Ile Thr Ser
85 90 95
Arg Cys Arg Leu Cys Cys Leu Gly Arg Arg Tyr Ile Leu Ala Pro Ala
100 105 110
His His Val Glu Ser Ala Ala Gly Leu His Ser Ile Pro Ala Ser Gly
115 120 125
Asn Arg Ala Tyr Ala Val Arg Lys Pro Gly Leu Thr Ser Val Asn Gly
130 135 140
Thr Leu Val Pro Gly Leu Arg Ser Leu Val Leu Gly Gly Lys Arg Ala
145 150 155 160
Val Lys Arg Gly Val Val Asn Leu Val Lys Tyr Gly Arg
165 170
<210> 10
<211> 128
<212> БЕЛОК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 10
Met Ala Gly Asn Asn Gln Ser Gln Arg Lys Lys Lys Asn Ala Ala Pro
1 5 10 15
Met Gly Asn Gly Gln Ser Val Asn Gln Leu Cys Gln Leu Leu Gly Thr
20 25 30
Met Met Lys Ser Gln Arg Gln Arg Ser Arg Gly Gly Gln Ala Lys Arg
35 40 45
Lys Lys Pro Glu Lys Pro His Phe Pro Leu Ala Ala Glu Asp Asp Val
50 55 60
Arg His His Leu Thr Gln Thr Glu Arg Ser Leu Cys Leu Gln Ser Ile
65 70 75 80
Gln Thr Ala Phe Asn Gln Gly Ala Gly Thr Ala Ser Leu Ser Pro Ser
85 90 95
Gly Lys Ile Gly Phe Gln Val Glu Phe Met Leu Pro Val Thr His Thr
100 105 110
Val Arg Leu Ile Arg Val Thr Ser Thr Ser Ala Ser Gln Gly Val Ser
115 120 125
<210> 11
<211> 56
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 11
caggaaacag ctatgacacc tgatctctag aaacgttttt tttttttttt tttttt 56
<210> 12
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 12
tgatgtgtag ggtattcccc c 21
<210> 13
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 13
cgtgacccac cgagtaactt 20
<210> 14
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 14
tcttgagcag cgccaacttt 20
<210> 15
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 15
tcataccact cagggtcat 19
<210> 16
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 16
ccaggcgtty atgaagaaag c 21
<210> 17
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 17
aacaagcctt cataggacct tcg 23
<210> 18
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 18
tactgttcgg gttcaccgtc gc 22
<210> 19
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 19
aatttcggtc acatggttc 19
<210> 20
<211> 15111
<212> ДНК
<213> Вирус Lelystad
<400> 20
atgatgtgta gggtattccc cctacataca cgacacttct agtgtttgtg taccttggag 60
gcgtgggtac agccccgccc caccccttgg cccctgttct agcccaacag gtatccttct 120
ctctcggggc gagtgcgccg cctgctgctc ccttgcagcg ggaaggacct cccgagtatt 180
tccggagagc acctgcttta cgggatctcc accctttaac catgtctggg acgttctccc 240
ggtgcatgtg caccccggct gcccgggtat tttggaacgc cggccaagtc ttttgcacac 300
ggtgtctcag tgcgcggtct cttctctctc cagagcttca ggacactgac ctcggtgcag 360
ttggcttgtt ttacaagcct agggacaagc ttcactggaa agtccctatc ggcatccctc 420
aggtggaatg tactccatcc gggtgctgtt ggctctcagc tgttttccct ttggcgcgta 480
tgacctccgg caatcacaac ttcctccaac gacttgtgaa ggttgctgat gttttgtacc 540
gtgacggttg cttggcacct cgacaccttc gtgaactcca agtttacgag cgcggctgca 600
actggtaccc gatcacgggg cccgtgcccg ggatgggttt gtttgcgaac tccatgcacg 660
tatccgacca gccgttccct ggtgccaccc atgtgttgac taactcgcct ttgcctcaac 720
aggcttgtcg gcagccgttc tgtccatttg aggaggctca ttctagcgtg tacaggtgga 780
agaaatttgt ggttttcacg gactcctccc tcaacggtcg atctcgcatg atgtggacgc 840
cggaatccga tgattcagcc gccctggagg tactaccgcc tgagttagaa cgtcaggtcg 900
aaatcctcat tcggagtttt cctgctcatc accctgtcga cctggccgac tgggagctca 960
ctgagtcccc tgagaacggt ttttccttca acacgtctca ttcttgcggt caccttgtcc 1020
agaaccccga cgtgtttgat ggcaagtgct ggctctcctg ctttttgggc cagtcggtcg 1080
aagtgcgctg ccatgaggaa catctagctg acgccttcgg ttaccaaacc aagtggggcg 1140
tgcatggtaa gtacctccag cgcaggcttc aagttcgcgg cattcgtgct gtagtcgatc 1200
ctgatggtcc cattcacgtt gaagcgctgt cttgccccca gtcttggatc aggcacctga 1260
ctctggatga tgatgtcacc ccaggattcg ttcgcctgac atcccttcgc attgtgccga 1320
acacagagcc taccacttcc cggatctttc ggtttggagc gcataagtgg tatggcgctg 1380
ccggcaaacg ggctcgtgct aagcgtgccg ctaaaagtga gaaggattcg gctcccaccc 1440
ccaaggttgc cctgccggtc cccacctgtg gaattaccac ctactctcca ccgacagacg 1500
ggtcttgtgg ttggcatgtc cttgccgcca taatgaaccg gatgataaat ggtgacttca 1560
cgtcccctct gactcagtac aacagaccag aggatgattg ggcttctgat tatgatcttg 1620
ttcaggcgat tcaatgtcta cgactgcctg ctaccgtggt tcggaatcgc gcctgtccta 1680
acgccaagta ccttataaaa cttaacggag ttcactggga ggtagaggtg aggtctggaa 1740
tggctcctcg ctccctttct cgtgaatgtg tggttggcgt ttgctctgaa ggctgtgtcg 1800
caccgcctta tccagcagac gggctaccta aacgtgcact cgaggccttg gcgtctgctt 1860
acagactacc ctccgattgt gttagctctg gtattgctga ctttcttgct aatccacctc 1920
ctcaggaatt ctggaccctc gacaaaatgt tgacctcccc gtcaccagag cggtccggct 1980
tctctagttt gtataaatta ctattagagg ttgttccgca aaaatgcggt gccacggaag 2040
gggctttcat ctatgctgtt gagaggatgt tgaaggattg tccgagctcc aaacaggcca 2100
tggcccttct ggcaaaaatt aaagttccat cctcaaaggc cccgtctgtg tccctggacg 2160
agtgtttccc tacggatgtt ttagccgact tcgagccagc atctcaggaa aggccccaaa 2220
gttccggcgc tgctgttgtc ctgtgttcac cggatgcaaa agagttcgag gaagcagccc 2280
cggaagaagt tcaagagagt ggccacaagg ccgtccactc tgcactcctt gccgagggtc 2340
ctaacaatga gcaggtacag gtggttgccg gtgagcaact gaagctcggc ggttgtggtt 2400
tggcagtcgg gaatgctcat gaaggtgctc tggtctcagc tggtctaatt aacctggtag 2460
gcgggaattt gtccccctca gaccccatga aagaaaacat gctcaatagc cgggaagacg 2520
aaccactgga tttgtcccaa ccagcaccag cttccacaac gacccttgtg agagagcaaa 2580
cacccgacaa cccaggttct gatgccggtg ccctccccgt caccgttcga gaatttgtcc 2640
cgacggggcc tatactctgt catgttgagc actgcggcac ggagtcgggc gacagcagtt 2700
cgcctttgga tctatctgat gcgcaaaccc tggaccagcc tttaaatcta tccctggccg 2760
cttggccagt gagggccacc gcgtctgacc ctggctgggt ccacggtagg cgcgagcctg 2820
tctttgtaaa gcctcgaaat gctttctctg atggcgattc agcccttcag ttcggggagc 2880
tttctgaatc cagctctgtc atcgagtttg accggacaaa agatgctccg gtggttgacg 2940
cccctgtcga cttgacgact tcgaacgagg ccctctctgt agtcgatcct ttcgaatttg 3000
ccgaactcaa gcgcccgcgt ttctccgcac aagccttaat tgaccgaggc ggtccacttg 3060
ccgatgtcca tgcaaaaata aagaaccggg tatatgaaca gtgcctccaa gcttgtgagc 3120
ccggtagtcg tgcaacccca gccaccaggg agtggctcga caaaatgtgg gatagggtgg 3180
acatgaaaac ttggcgctgc acctcgcagt tccaagctgg tcgcattctt gcgtccctca 3240
aattcctccc tgacatgatt caagacacac cgcctcctgt tcccaggaag aaccgagcta 3300
gtgacaatgc cggcctgaag caactggtgg cacagtggga taggaaattg agtgtgaccc 3360
cccccccaaa accggttggg ccagtgcttg accagatcgt ccctccgcct acggatatcc 3420
agcaagaaga tgtcaccccc tccgatgggc caccccatgc gccggatttt cctagtcgag 3480
tgagcacggg cgggagttgg aaaggcctta tgctttccgg cacccgtctc gcggggtcta 3540
tcagccagcg ccttatgaca tgggtttttg aagttttctc ccacctccca gcttttatgc 3600
tcacactttt ctcgccgcgg ggctctatgg ctccaggtga ttggttgttt gcaggtgtcg 3660
ttttacttgc tctcttgctc tgtcgttctt acccgatact cggatgcctt cccttattgg 3720
gtgtcttttc tggttctttg cggcgtgttc gtctgggtgt ttttggttct tggatggctt 3780
ttgctgtatt tttattctcg actccatcca acccagtcgg ttcttcttgt gaccacgatt 3840
cgccggagtg tcatgctgag cttttggctc ttgagcagcg ccaactttgg gaacctgtgc 3900
gcggccttgt ggtcggcccc tcaggcctct tatgtgtcat tcttggcaag ttactcggtg 3960
ggtcacgtta tctctggcat gttctcctac gtttatgcat gcttgcagat ttggcccttt 4020
ctcttgttta tgtggtgtcc caggggcgtt gtcacaagtg ttggggaaag tgtataagga 4080
cagctcctgc ggaggtggct cttaatgtat ttcctttctc gcgcgccacc cgtgtctctc 4140
ttgtatcctt gtgtgatcga ttccaaacgc caaaaggggt tgatcctgtg cacttggcaa 4200
cgggttggcg cgggtgctgg cgtggtgaga gccccatcca tcaaccacac caaaagccca 4260
tagcttatgc caatttggat gaaaagaaaa tgtctgccca aacggtggtt gctgtcccat 4320
acgatcccag tcaggctatc aaatgcctga aagttctgca ggcgggaggg gccatcgtgg 4380
accagcctac acctgaggtc gttcgtgtgt ccgagatccc cttctcagcc ccatttttcc 4440
caaaagttcc agtcaaccca gattgcaggg ttgtggtaga ttcggacact tttgtggctg 4500
cggttcgctg cggttactcg acagcacaac tggttctggg ccggggcaac tttgccaagt 4560
taaatcagac cccccccagg aactctatct ccaccaaaac gactggtggg gcctcttaca 4620
cccttgctgt ggctcaagtg tctgcgtgga ctcttgttca tttcatcctc ggtctttggt 4680
tcacatcacc tcaagtgtgt ggccgaggaa ccgctgaccc atggtgttca aatccttttt 4740
catatcctac ctatggcccc ggagttgtgt gctcctctcg actttgtgtg tctgccgacg 4800
gggtcaccct gccattgttc tcagccgtgg cacaactctc cggtagagag gtggggattt 4860
ttattttggt gctcgtctcc ttgactgctt tggcccaccg catggctctt aaggcagaca 4920
tgttagtggt cttttcggct ttttgtgctt acgcctggcc catgagctcc tggttaatct 4980
gcttctttcc tatactcttg aagtgggtta cccttcaccc tcttactatg ctttgggtgc 5040
actcattctt ggtgttttgt ctgccagcag ccggcatcct ctcactaggg ataactggcc 5100
ttctttgggc aattggccgc tttacccagg ttgccggaat tattacacct tatgacatcc 5160
accagtacac ctctgggcca cgtggtgcag ctgctgtggc cacagcccca gaaggcactt 5220
atatggccgc cgtccggaga gctgctttaa ctgggcgaac tttaatcttc accccgtctg 5280
cagttggatc ccttctcgaa ggtgctttca ggactcataa accctgcctt aacaccgtga 5340
atgttgtagg ctcttccctt ggttccggag gggttttcac cattgatggc agaagaactg 5400
tcgtcactgc tgcccatgtg ttgaacggcg acacagctag agtcaccggc gactcctaca 5460
accgcatgca cactttcaag accaatggtg attatgcctg gtcccatgct gatgactggc 5520
agggcgttgc ccctgtggtc aaggttgcga aggggtaccg cggtcgtgcc tactggcaaa 5580
catcaactgg tgtcgaaccc ggtatcattg gggaagggtt cgccttctgt tttactaact 5640
gcggcgattc ggggtcaccc gtcatctcag aatctggtga tcttattgga atccacaccg 5700
gttcaaacaa acttggttct ggtcttgtga caacccctga aggggagacc tgcaccatca 5760
aagaaaccaa gctctctgac ctttccagac attttgcagg cccaagcgtt cctcttgggg 5820
acattaaatt gagtccggcc atcatccctg atgtaacatc cattccgagt gacttggcat 5880
cgctcctagc ctccgtccct gtagtggaag gcggcctctc gaccgttcaa cttttgtgtg 5940
tctttttcct tctctggcgc atgatgggcc atgcctggac acccattgtt gccgtgggct 6000
tctttttgct gaatgaaatt cttccagcag ttttggtccg agccgtgttt tcttttgcac 6060
tctttgtgct tgcatgggcc accccctggt ctgcacaggt gttgatgatt agactcctca 6120
cggcatctct caaccgcaac aagctttctc tggcgttcta cgcactcggg ggtgtcgtcg 6180
gtttggcagc tgaaatcggg acttttgctg gcagattgtc tgaattgtct caagctcttt 6240
cgacatactg cttcttacct agggtccttg ctatgaccag ttgtgttccc accatcatca 6300
ttggtggact ccataccctc ggtgtgattc tgtggttatt caaataccgg tgcctccaca 6360
acatgctggt tggtgatggg agtttttcaa gcgccttctt cctacggtat tttgcagagg 6420
gtaatctcag aaaaggtgtt tcacagtcct gtggcatgaa taacgagtcc ctaacggctg 6480
ctttagcttg caagttgtca caggctgacc ttgatttttt gtccagctta acgaacttca 6540
agtgctttgt atctgcttca aacatgaaaa atgctgccgg ccagtacatt gaagcagcgt 6600
atgccaaggc cctgcgccaa gagttggcct ctctagttca gattgacaaa atgaaaggag 6660
ttttgtccaa gctcgaggcc tttgctgaaa cagccacccc gtcccttgac ataggtgacg 6720
tgattgttct gcttgggcaa catcctcacg gatccatcct cgatattaat gtggggactg 6780
aaaggaaaac tgtgtccgtg caagagaccc ggagcctagg cggctccaaa ttcagtgttt 6840
gtactgtcgt gtccaacaca cccgtggacg ccttgaccgg catcccactc cagacaccaa 6900
cccctctttt tgagaatggt ccgcgtcatc gcagcgagga agacgatctt aaagtcgaga 6960
ggatgaagaa acactgtgta tccctcggct tccacaacat caatggcaaa gtttactgca 7020
aaatttggga caagtctacc ggtgacacct tttacacgga tgattcccgg tacacccaag 7080
accatgcttt tcaggacagg tcagccgact acagagacag ggactatgag ggtgtgcaaa 7140
ccacccccca acagggattt gatccaaagt ctgaaacccc tgttggcact gttgtgatcg 7200
gcggtattac gtataacagg tatctgatca aaggtaagga ggttctggtc cccaagcctg 7260
acaactgcct tgaagctgcc aagctgtccc ttgagcaagc tctcgctggg atgggccaaa 7320
cttgcgacct tacagctgcc gaggtggaaa agctaaagcg catcattagt caactccaag 7380
gtttgaccac tgaacaggct ttaaactgtt agccgccagc ggcttgaccc gctgtggccg 7440
cggcggccta gttgtgactg aaacggcggt aaaaattata aaataccaca gcagaacttt 7500
caccttaggc cctttagacc taaaagtcac ttccgaggtg gaggtaaaga aatcaactga 7560
gcagggccac gctgttgtgg caaacttatg ttccggtgtc atcttgatga gacctcaccc 7620
accgtccctt gtcgacgttc ttctgaaacc cggacttgac acaatacccg gcattcaacc 7680
agggcatggg gccgggaata tgggcgtgga cggttctatt tgggattttg aaaccgcacc 7740
cacaaaggca gaactcgagt tatccaagca aataatccaa gcatgtgaag ttaggcgcgg 7800
ggacgccccg aacctccaac tcccttacaa gctctatcct gttagggggg atcctgagcg 7860
gcataaaggc cgccttatca ataccaggtt tggagattta ccttacaaaa ctcctcaaga 7920
caccaagtcc gcaatccacg cggcttgttg cctgcacccc aacggggccc ccgtgtctga 7980
tggtaaatcc acactaggta ccactcttca acatggtttc gagctttatg tccctactgt 8040
gccctatagt gtcatggagt accttgattc acgccctgac acccctttta tgtgtactaa 8100
acatggcact tccaaggctg ctgcagagga cctccaaaaa tacgacctat ccacccaagg 8160
atttgtcctg cctggggtcc tacgcctagt acgcagattc atctttggcc atattggtaa 8220
ggcgccgcca ttgttcctcc catcaaccta tcccgccaag aactctatgg cagggatcaa 8280
tggccagagg ttcccaacaa aggacgttca gagcatacct gaaattgatg aaatgtgtgc 8340
ccgcgctgtc aaggagaatt ggcaaactgt gacaccttgc accctcaaga aacagtactg 8400
ttccaagccc aaaaccagga ccatcctggg caccaacaac tttattgcct tggctcacag 8460
atcggcgctc agtggtgtca cccaggcatt catgaagaag gcttggaagt ccccaattgc 8520
cttggggaaa aacaaattca aggagctgca ttgcactgtc gccggcaggt gtcttgaggc 8580
cgacttggcc tcctgtgacc gcagcacccc cgccattgta agatggtttg ttgccaacct 8640
cctgtatgaa cttgcaggat gtgaagagta cttgcctagc tatgtgctta attgctgcca 8700
tgacctcgtg gcaacacagg atggtgcctt cacaaaacgc ggtggcctgt cgtccgggga 8760
ccccgtcacc agtgtgtcca acaccgtata ttcactggta atttatgccc agcacatggt 8820
attgtcggcc ttgaaaatgg gtcatgaaat tggtcttaag ttcctcgagg aacagctcaa 8880
gttcgaggac ctccttgaaa ttcagcctat gttggtatac tctgatgatc ttgtcttgta 8940
cgctgaaaga cccacatttc ccaattacca ctggtgggtc gagcaccttg acctgatgct 9000
gggtttcaga acggacccaa agaaaaccgt cataactgat aaacccagct tcctcggctg 9060
cagaattgag gcagggcgac agctagtccc caatcgcgac cgcatcctgg ctgctcttgc 9120
atatcacatg aaggcgcaga acgcctcaga gtattatgcg tctgctgccg caatcctgat 9180
ggattcatgt gcttgcattg accatgaccc tgagtggtat gaggacctca tctgcggtat 9240
tgcccggtgc gcccgccagg atggttatag cttcccaggt ccggcatttt tcatgtccat 9300
gtgggagaag ctgagaagtc ataatgaagg gaagaaattc cgccactgcg gcatctgcga 9360
cgccaaagcc gactatgcgt ccgcctgtgg gcttgatttg tgtttgttcc attcgcactt 9420
tcatcaacac tgccctgtca ctctgagctg cggtcaccat gccggttcaa aggaatgttc 9480
gcagtgtcag tcacctgttg gggctggcag atcccctctt gatgccgtgc taaaacaaat 9540
tccatacaaa cctcctcgta ctgtcatcat gaaggtgggt aataaaacaa cggccctcga 9600
tccggggagg taccagtccc gtcgaggtct cgttgcagtc aagaggggta ttgcaggcaa 9660
tgaagttgat ctttctgatg gggactacca agtggtgcct cttttgccga cttgcaaaga 9720
cataaacatg gtgaaggtgg cttgcaatgt actactcagc aagttcatag tagggccacc 9780
aggttccgga aagaccacct ggctactgag tcaagtccag gacgatgatg tcatttacac 9840
acccacccat cagactatgt ttgatatagt cagtgctctc aaagtttgca ggtattccat 9900
tccaggagcc tcaggactcc ctttcccacc acctgccagg tccgggccgt gggttaggct 9960
tattgccagc gggcacgtcc ctggccgagt atcatacctc gatgaggctg gatattgtaa 10020
tcatctggac attcttagac tgctttccaa aacacccctt gtgtgtttgg gtgaccttca 10080
gcaacttcac cctgtcggct ttgattccta ctgttatgtg ttcgatcaga tgcctcagaa 10140
gcagctgacc actatttaca gatttggccc taacatctgc gcagccatcc agccttgtta 10200
cagggagaaa cttgaatcta aggctaggaa cactagggtg gtttttacca cccggcctgt 10260
ggcctttggt caggtgctga caccatacca taaagatcgc atcggctctg cgataaccat 10320
agattcatcc cagggggcca cctttgatat tgtgacattg catctaccat cgccaaagtc 10380
cctaaataaa tcccgagcac ttgtagccat cactcgggca agacacgggt tgttcattta 10440
tgaccctcat aaccagctcc aggagttttt caacttaacc cctgagcgca ctgattgtaa 10500
ccttgtgttc agccgtgggg atgagctggt agttctgaat gcggataatg cagtcacaac 10560
tgtagcgaag gcccttgaga caggtccatc tcgatttcga gtatcagacc cgaggtgcaa 10620
gtctctctta gccgcttgtt cggccagtct ggaagggagc tgtatgccac taccgcaagt 10680
ggcacataac ctggggtttt acttttcccc ggacagtcca acatttgcac ctctgccaaa 10740
agagttggcg ccacattggc cagtggttac ccaccagaat aatcgggcgt ggcctgatcg 10800
acttgtcgct agtatgcgcc caattgatgc ccgctacagc aagccaatgg tcggtgcagg 10860
gtatgtggtc gggccgtcca cctttcttgg tactcctggt gtggtgtcat actatctcac 10920
actatacatc aggggtgagc cccaggcctt gccagaaaca ctcgtttcaa cagggcgtat 10980
agccacagat tgtcgggagt atctcgacgc ggctgaggaa gaggcagcaa aagaactccc 11040
ccacgcattc attggcgatg tcaaaggtac cacggttggg gggtgtcatc acattacatc 11100
aaaataccta cctaggtccc tgcctaagga ctctgttgcc gtagttggag taagttcgcc 11160
cggcagggct gctaaagccg tgtgcactct caccgatgtg tacctccccg aactccggcc 11220
atatctgcaa cctgagacgg catcaaaatg ctggaaactc aaattagact tcagggacgt 11280
ccgactaatg gtctggaaag gagccaccgc ctatttccag ttggaagggc ttacatggtc 11340
ggcgctgccc gactatgcca ggtttattca gctgcccaag gatgccgttg tatacattga 11400
tccgtgtata ggaccggcaa cagccaaccg taaggtcgtg cgaaccacag actggcgggc 11460
cgacctggca gtgacaccgt atgattacgg tgcccagaac attttgacaa cagcctggtt 11520
cgaggacctc gggccgcagt ggaagatttt ggggttgcag ccctttaggc gagcatttgg 11580
ctttgaaaac actgaggatt gggcaatcct tgcacgccgt atgaatgacg gcaaggacta 11640
cactgactat aactggaact gtgttcgaga acgcccacac gccatctacg ggcgtgctcg 11700
tgaccatacg tatcattttg cccctggcac agaattgcag gtagagctag gtaaaccccg 11760
gctgccgcct gggcaagtgc cgtgaattcg gggtgatgca atggggtcac tgtggagtaa 11820
aatcagccag ctgttcgtgg acgccttcac tgagttcctt gttagtgtgg ttgatattgc 11880
cattttcctt gccatactgt ttgggttcac cgtcgcagga tggttactgg tctttcttct 11940
cagagtggtt tgctccgcgc ttctccgttc gcgctctgcc attcactctc ccgaactatc 12000
gaaggtccta tgaaggcttg ttgcccaact gcagaccgga tgtcccacaa tttgcagtca 12060
agcacccatt gggtatgttt tggcacatgc gagtttccca cttgattgat gagatggtct 12120
ctcgtcgcat ttaccagacc atggaacatt caggtcaagc ggcctggaag caggtggttg 12180
gtgaggccac tctcacgaag ctgtcagggc tcgatatagt tactcatttc caacacctgg 12240
ccgcagtgga ggcggattct tgccgctttc tcagctcacg actcgtgatg ctaaaaaatc 12300
ttgccgttgg caatgtgagc ctacagtaca acaccacgtt ggaccgcgtt gagctcatct 12360
tccccacgcc aggtacgagg cccaagttga ccgatttcag acaatggctc atcagtgtgc 12420
acgcttccat tttttcctct gtggcttcat ctgttacctt gttcatagtg ctttggcttc 12480
gaattccagc tctacgctat gtttttggtt tccattggcc cacggcaaca catcattcga 12540
gctgaccatc aactacacca tatgcatgcc ctgttctacc agtcaagcgg ctcgccaaag 12600
gctcgagccc ggtcgtaaca tgtggtgcaa aatagggcat gacaggtgtg aggagcgtga 12660
ccatgatgag ttgttaatgt ccatcccgtc cgggtacgac aacctcaaac ttgagggtta 12720
ttatgcttgg ctggcttttt tgtccttttc ctacgcggcc caattccatc cggagttgtt 12780
cgggataggg aatgtgtcgc gcgtcttcgt ggacaagcga caccagttca tttgtgccga 12840
gcatgatgga cacaattcaa ccgtatctac cggacacaac atctccgcat tatatgcggc 12900
atattaccac caccaaatag acgggggcaa ttggttccat ttggaatggc tgcggccact 12960
cttttcttcc tggctggtgc tcaacatatc atggtttctg aggcgttcgc ctgtaagccc 13020
tgtttctcga cgcatctatc agatattgag accaacacga ccgcggctgc cggtttcatg 13080
gtccttcagg acatcaattg tttccgacct cacggggtct cagcagcgca agagaaaatt 13140
tccttcggaa agtcgtccca atgtcgtgaa gccgtcggta ctccccagta catcacgata 13200
acggctaacg tgaccgacga atcatacttg tacaacgcgg acctgctgat gctttctgcg 13260
tgccttttct acgcctcaga aatgagcgag aaaggcttca aagtcatctt tgggaatgtc 13320
tctggcgttg tttctgcttg tgtcaatttc acagattatg tggcccatgt gacccaacat 13380
acccagcagc atcatctggt aattgatcac attcggttgc tgcatttcct gacaccatct 13440
gcaatgaggt gggctacaac cattgcttgt ttgttcgcca ttctcttggc aatatgagat 13500
gttctcacaa attggggcgt ttcttgactc cgcactcttg cttctggtgg ctttttttgc 13560
tgtgtaccgg cttgtcctgg tcctttgccg atggcaacgg cgacagctcg acataccaat 13620
acatatataa cttgacgata tgcgagctga atgggaccga ctggttgtcc agccattttg 13680
gttgggcagt cgagaccttt gtgctttacc cggttgccac tcatatcctc tcactgggtt 13740
ttctcacaac aagccatttt tttgacgcgc tcggtctcgg cgctgtatcc actgcaggat 13800
ttgttggcgg gcggtacgta ctctgcagcg tctacggcgc ttgtgctttc gcagcgttcg 13860
tatgttttgt catccgtgct gctaaaaatt gcatggcctg ccgctatgcc cgtacccggt 13920
ttaccaactt cattgtggac gaccggggga gagttcatcg atggaagtct ccaatagtgg 13980
tagaaaaatt gggcaaagcc gaagtcgatg gcaacctcgt caccatcaaa catgtcgtcc 14040
tcgaaggggt taaagctcaa cccttgacga ggacttcggc tgagcaatgg gaggcctaga 14100
cgatttttgc aacgatccta tcgccgcaca aaagctcgtg ctagccttta gcatcacata 14160
cacacctata atgatatacg cccttaaggt gtcacgcggc cgactcctgg ggctgttgca 14220
catcctaata tttctgaact gttcctttac attcggatac atgacatatg tgcattttca 14280
atccaccaac cgtgtcgcac ttaccctggg ggctgttgtc gcccttctgt ggggtgttta 14340
cagcttcaca gagtcatgga agtttatcac ttccagatgc agattgtgtt gccttggccg 14400
gcgatacatt ctggcccctg cccatcacgt agaaagtgct gcaggtctcc attcaatctc 14460
agcgtctggt aaccgagcat acgctgtgag aaagcccgga ctaacatcag tgaacggcac 14520
tctagtacca ggacttcgga gcctcgtgct gggcggcaaa cgagctgtta aacgaggagt 14580
ggttaacctc gtcaagtatg gccggtaaaa accagagcca gaagaaaaag aaaagtacag 14640
ctccgatggg gaatggccag ccagtcaatc aactgtgcca gttgctgggt gcaatgataa 14700
agtcccagcg ccagcaacct aggggaggac aggccaaaaa gaaaaagcct gagaagccac 14760
attttcccct ggctgctgaa gatgacatcc ggcaccacct cacccagact gaacgctccc 14820
tctgcttgca atcgatccag acggctttca atcaaggcgc aggaactgcg tcgctttcat 14880
ccagcgggaa ggtcagtttt caggttgagt ttatgctgcc ggttgctcat acagtgcgcc 14940
tgattcgcgt gacttctaca tccgccagtc agggtgcaag ttaatttgac agtcaggtga 15000
atggccgcga ttggcgtgtg gcctctgagt cacctattca attagggcga tcacatgggg 15060
gtcatactta atcaggcagg aaccatgtga ccgaaattaa aaaaaaaaaa a 15111
<210> 21
<211> 15411
<212> ДНК
<213> Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней
<400> 21
atgacgtata ggtgttggct ctatgccttg gcatttgtat tgtcaggagc tgtgaccatt 60
ggcacagccc aaaacttgct gcacagaaac acccttctgt gatagcctcc ttcaggggag 120
cttagggttt gtccctagca ccttgcttcc ggagttgcac tgctttacgg tctctccacc 180
cctttaacca tgtctgggat acttgatcgg tgcacgtgta cccccaatgc cagggtgttt 240
atggcggagg gccaagtcta ctgcacacga tgcctcagtg cacggtctct ccttcccctg 300
aacctccaag tttctgagct cggggtgcta ggcctattct acaggcccga agagccactc 360
cggtggacgt tgccacgtgc attccccact gttgagtgct cccccgccgg ggcctgctgg 420
ctttctgcaa tctttccaat cgcacgaatg accagtggaa acctgaactt ccaacaaaga 480
atggtacggg tcgcagctga gctttacaga gccggccagc tcacccctgc agtcttgaag 540
gctctacaag tttatgaacg gggttgccgc tggtacccca ttgttggacc tgtccctgga 600
gtggccgttt tcgccaattc cctacatgtg agtgataaac ctttcccggg agcaactcac 660
gtgttgacca acctgccgct cccgcagaga cccaagcctg aagacttttg cccctttgag 720
tgtgctatgg ctactgtcta tgacattggt catgacgccg tcatgtatgt ggccgaaagg 780
aaagtctcct gggcccctcg tggcggggat gaagtgaaat ttgaagctgt ccccggggag 840
ttgaagttga ttgcgaaccg gctccgcacc tccttcccgc cccaccacac agtggacatg 900
tctaagttcg ccttcacagc ccctgggtgt ggtgtttcta tgcgggtcga acgccaacac 960
ggctgccttc ccgctgacac tgtccctgaa ggcaactgct ggtggagctt gtttgacttg 1020
cttccactgg aagttcagaa caaagaaatt cgccatgcta accaatttgg ctaccagacc 1080
aagcatggtg tctctggcaa gtacctacag cggaggctgc aagttaatgg tctccgagca 1140
gtaactgacc taaacggacc tatcgtcgta cagtacttct ccgttaagga gagttggatc 1200
cgccatttga aactggcggg agaacccagc tactctgggt ttgaggacct cctcagaata 1260
agggttgagc ctaacacgtc gccattggct gacaaggaag aaaaaatttt ccggtttggc 1320
agtcacaagt ggtacggcgc tggaaagaga gcaagaaaag cacgctcttg tgcgactgct 1380
acagtcgctg gccgcgcttt gtccgttcgt gaaacccggc aggccaagga gcacgaggtt 1440
gccggcgcca acaaggctga gcacctcaaa cactactccc cgcctgccga agggaattgt 1500
ggttggcact gcatttccgc catcgccaac cggatggtga attccaaatt tgaaaccacc 1560
cttcccgaaa gagtgagacc tccagatgac tgggctactg acgaggatct tgtgaatgcc 1620
atccaaatcc tcagactccc tgcggcctta gacaggaacg gtgcttgtac tagcgccaag 1680
tacgtactta agctggaagg tgagcattgg actgtcactg tgacccctgg gatgtcccct 1740
tctttgctcc ctcttgaatg tgttcagggc tgttgtgggc acaagggcgg tcttggttcc 1800
ccagatgcag tcgaggtctc cggatttgac cctgcctgcc ttgaccggct ggctgaggtg 1860
atgcacctgc ctagcagtgc tatcccagcc gctctggccg aaatgtctgg cgattccgat 1920
cgttcggctt ctccggtcac caccgtgtgg actgtttcgc agttctttgc ccgtcacagc 1980
ggagggaatc accctgacca agtgcgctta gggaaaatta tcagcctttg tcaggtgatt 2040
gaggactgct gctgttccca gaacaaaacc aaccgggtca ccccggagga ggtcgcagca 2100
aagattgacc tgtacctccg tggtgcaaca aatcttgaag aatgcttggc caggcttgag 2160
aaagcgcgcc cgccacgcgt aatcgacacc tcctttgatt gggatgttgt gctccctggg 2220
gttgaggcgg caacccagac gatcaagctg ccccaggtca accagtgtcg tgctctggtc 2280
cctgttgtga ctcaaaagtc cttggacaac aactcggtcc ccctgaccgc cttttcactg 2340
gctaactact actaccgtgc gcaaggtgac gaagttcgtc accgtgaaag actaaccgcc 2400
gtgctctcca agttggaaaa ggttgttcga gaagaatatg ggctcatgcc aaccgagcct 2460
ggtccacggc ccacactgcc acgcgggctc gacgaactca aagaccagat ggaggaggac 2520
ttgctgaaac tggctaacgc ccagacgact tcggacatga tggcctgggc agtcgagcag 2580
gttgacctaa aaacttgggt caagaactac ccgcggtgga caccaccacc ccctccgcca 2640
aaagttcagc ctcgaaaaac gaagcctgtc aagagcttgc cggagagaaa gcctgtcccc 2700
gccccgcgca ggaaggttgg gtccgattgt ggcagcccgg tttcattagg cggcgatgtc 2760
cctaacagtt gggaagattt ggctgttagt agcccctttg atctcccgac cccacctgag 2820
ccggcaacac cttcaagtga gctggtgatt gtgtcctcac cgcaatgcat cttcaggccg 2880
gcgacaccct tgagtgagcc ggctccaatt cccgcacctc gcggaactgt gtctcgaccg 2940
gtgacaccct tgagtgagcc gatccctgtg cccgcaccgc ggcgtaagtt tcagcaggtg 3000
aaaagattga gttcggcggc ggcaatccca ccgtaccagg acgagcccct ggatttgtct 3060
gcttcctcac agactgaata tgaggcctct cccccagcac cgccgcagag cgggggcgtt 3120
ctgggagtag aggggcatga agctgaggaa accctgagtg aaatctcgga catgtcgggt 3180
aacattaaac ctgcgtccgt gtcatcaagc agctccttgt ccagcgtgag aatcacacgc 3240
ccaaaatact cagctcaagc catcatcgac tcgggcgggc cctgcagtgg gcatctccaa 3300
gaggtaaagg aaacatgcct tagtgtcatg cgcgaggcat gtgatgcgac taagcttgat 3360
gaccctgcta cgcaggaatg gctttctcgc atgtgggatc gggtggacat gctgacttgg 3420
cgcaacacgt ctgtttacca ggcgatttgc accttagatg gcaggttaaa gttcctccca 3480
aaaatgatac tcgagacacc gccgccctat ccgtgtgagt ttgtgatgat gcctcacacg 3540
cctgcacctt ccgtaggtgc ggagagcgac cttaccattg gctcagttgc tactgaagat 3600
gttccacgca tcctcgagaa aatagaaaat gtcggcgaga tggccaacca gggacccttg 3660
gccttctccg aggataaacc ggtagatgac caacttgtca acgacccccg gatatcgtcg 3720
cggaggcctg acgagagcac atcagctccg tccgcaggca caggtggcgc cggctctttt 3780
accgatttgc cgccttcaga tggcgcggat gcggacgggg gggggccgtt tcggacggta 3840
aaaagaaaag ctgaaaggct ctttgaccaa ctgagccgtc aggtttttga cctcgtctcc 3900
catctccctg ttttcttctc acgccttttc taccctggcg gtggttattc tccgggtgat 3960
tggggttttg cagcttttac tctattgtgc ctctttttat gttacagtta cccagccttt 4020
ggtattgctc ccctcttggg tgtgttttct gggtcttctc ggcgcgttcg aatgggggtt 4080
tttggctgct ggttggcttt tgctgttggt ctgttcaagc ctgtgtccga cccagtcggc 4140
gctgcttgtg agtttgactc gccagagtgt agaaacatcc ttcattcttt tgagcttctc 4200
aaaccttggg accctgttcg cagccttgtt gtgggccccg tcggtctcgg tcttgccatt 4260
cttggcaggt tactgggcgg ggcacgctgc atctggcact ttttgcttag gcttggcatt 4320
gttgcagact gtatcttggc tggagcttac gtgctttctc aaggtaggtg taaaaagtgc 4380
tggggatctt gtataagaac tgctcctaat gaggtcgctt ttaacgtgtt tcctttcaca 4440
cgtgcgacca ggtcgtcact tatcgacctg tgcgatcggt tttgtgcgcc aaaaggaatg 4500
gaccccattt ttctcgccac tgggtggcgc gggtgctggg ccggccgaag ccccattgag 4560
caaccctctg aaaaacccat cgcgtttgcc caattggatg aaaagaagat tacggctagg 4620
actgtggtcg cccagcctta tgaccccaac caagccgtaa agtgcttgcg ggtattgcag 4680
tcgggtgggg cgatggtggc taaggcggtc ccaaaagtgg tcaaggtttc cgctgttcca 4740
ttccgagccc ccttctttcc cactggagtg aaagttgacc ctgattgcag ggtcgtggtt 4800
gaccctgaca ctttcactgc agctctccgg tctggctact ccaccacaaa cctcgtcctt 4860
ggtgtagggg actttgccca gctgaatgga ttaaaaatca ggcaaatttc caagccttca 4920
gggggaggcc cacatctcat ggctgccctg catgttgcct gctcgatggc tctgcacatg 4980
cttgctggga tttatgtgac tgcggtgggt tcttgcggca ccggcaccaa cgacccgtgg 5040
tgcgctaacc cgtttgccgt ccctggctac ggacctggct ctctctgcac gtccaggttg 5100
tgcatttccc aacacggcct taccctgccc ttgacagcac ttgtggcggg attcggtatt 5160
caagaaattg ccttggtcgt tttgattttt gtttccatcg gaggcatggc tcataggttg 5220
agctgtaagg ctgacatgct gtgtgttttg cttgcaattg ccagctatgt ttgggtacct 5280
cttacctggt tgctttgtgt gtttccttgc tggttgcgct gtttttcttt gcaccccctc 5340
accatcctat ggttggtgtt tttcttgatt tctgtgaata tgccttcagg aatcttggcc 5400
atggtgttgt tggtttctct ttggcttctt ggtcgttata ctaatgttgc tggccttgtc 5460
accccctacg acattcatca ttacaccagt ggcccccgcg gtgttgccgc cttggctacc 5520
gcaccagatg ggacctactt ggccgctgtc cgccgcgctg cgttgactgg ccgcaccatg 5580
ctgtttaccc cgtcccagct tgggtctctt cttgagggtg ctttcagaac tcgaaagccc 5640
tcactgaaca ccgtcaatgt gatcgggtcc tccatgggct ctggcggggt gtttaccatc 5700
gacgggaaag tcaagtgcgt aactgccgca catgtcctta cgggcaattc agctcgggtt 5760
tccggggtcg gcttcaatca aatgcttgac tttgacgtaa agggagattt cgctatagct 5820
gattgcccga attggcaagg ggctgccccc aagacccaat tctgcacgga tggatggact 5880
ggccgtgcct attggctaac atcctctggc gtcgaacccg gcgtcattgg aaaaggattc 5940
gccttctgct tcaccgcatg tggcgattcc gggtccccag tgatcaccga ggccggtgag 6000
cttgtcggcg ttcacacggg atcgaataaa caaggggggg gcattgttac gcgcccctca 6060
ggccagtttt gtaatgtggc acccatcaag ctaagcgaat taagtgaatt ctttgctggg 6120
cctaaggtcc cgctcggtga tgtgaaggtc ggcagccaca taattaaaga cataagcgag 6180
gtgccttcag atctttgtgc cttgcttgct gccaaacctg aactggaagg aggcctctcc 6240
accgtccaac ttctttgtgt gttttttctc ctgtggagaa tgatgggaca tgcctggacg 6300
cccttggttg ctgtgagttt ctttattttg aatgaggttc tcccagccgt cctggtccgg 6360
agtgttttct cctttggaat gtttgtgcta tcctggctca cgccatggtc tgcgcaagtt 6420
ctgatgatca ggcttctgac agcagctctt aacaggaaca gatggtcact tgcctttttc 6480
agcctcggtg cagtgaccgg ttttgtcgca gatcttgcgg ccactcaggg gcatccgttg 6540
caggcagtga tgaatttgag cacctatgca ttcctgcctc ggatgatggt tgtgacctca 6600
ccagtcccag tgatcacgtg tggtgtcgtg cacctacttg ccatcatttt gtacttgttt 6660
aagtaccgtg gcccgcacca tatccttgtt ggcgatggag tgttctctgc ggctttcttc 6720
ttgagatact ttgccgaggg aaagttgagg gaaggggtgt cgcaatcctg cggaatgaat 6780
catgagtctc tgactggtgc cctcgctatg agactcaatg acgaggactt ggatttcctt 6840
atgaaatgga ctgattttaa gtgctttgtt tctgcgtcca acatgaggaa tgcagcgggt 6900
caatttatcg aggctgccta tgctaaagca cttagagtag aactggccca gttggtgcag 6960
gttgataaag ttcgaggtac tttggccaaa cttgaagctt ttgctgatac cgtggcacct 7020
caactctcgc ccggtgacat tgttgtcgct ctcggccaca cgcctgttgg cagtatcttc 7080
gacctaaagg ttggtagcac caagcatacc ctccaagcca ttgagaccag agtccttgct 7140
gggtccaaaa tgaccgtggc gcgcgtcgtc gacccgaccc ccacgccccc acccgcaccc 7200
gtgcccatcc ccctcccacc gaaagttctg gagaatggcc ccaacgcttg gggggatgag 7260
gaccgtttga ataagaagaa gaggcgcagg atggaagccc tcggcatcta tgttatgggc 7320
gggaaaaagt accagaaatt ttgggacaag aattccggtg atgtgtttta tgaggaggtc 7380
cataataaca cagatgagtg ggagtgtctc agagttggcg accctgccga ctttgaccct 7440
gagaagggaa ctctgtgtgg acatgtcacc attgaaaaca aggcttacca tgtttacacc 7500
tccccatctg gtaagaagtt cttggtcccc gtcaacccag agaatggaag agttcaatgg 7560
gaagctgcaa agctttccgt ggagcaggcc ctaggtatga tgaatgtcga cggcgaactg 7620
actgccaaag aactggagaa actgaaaaga ataattgaca aactccaggg cctgactaag 7680
gagcagtgtt taaactgcta gccgccagcg acttgacccg ctgtggtcgc ggcggcttgg 7740
ttgttactga aacagcggta aaaatagtca aatttcacaa ccggaccttc accctgggac 7800
ctgtgaattt aaaagtggcc agtgaggttg agctaaaaga cgcggttgag cacaaccaac 7860
acccggttgc gagaccgatc gatggtggag ttgtgctcct gcgttccgcg gttccttcgc 7920
ttatagacgt cttgatctcc ggtgctgatg catctcccaa gttacttgcc catcacgggc 7980
cgggaaacac tgggatcgat ggcacgctct gggattttga gtccgaagcc actaaagagg 8040
aagtcgcact cagtgcgcaa ataatacagg cttgtgacat taggcgcggc gacgctcctg 8100
aaattggtct cccttacaag ctgtaccctg ttaggggtaa ccctgagcgg gtgaaaggag 8160
ttctgcagaa tacaaggttt ggagacatac cttacaaaac ccccagtgac actggaagcc 8220
cagtgcacgc ggctgcctgc cttacgccca acgccactcc ggtgactgat gggcgctccg 8280
tcttggccac gaccatgccc cccgggtttg agttatatgt accgaccata ccagcgtctg 8340
tccttgatta ccttgactct aggcctgact gccctaaaca gctgacagag cacggctgcg 8400
aagatgccgc actgaaagac ctctctaaat atgacttgtc cacccaaggc tttgttttac 8460
ctggagttct tcgccttgtg cggaaatacc tgtttgccca tgtaggtaag tgcccacccg 8520
ttcatcggcc ttctacttac cctgctaaga attctatggc tggaataaat gggaacaggt 8580
tcccaaccaa ggacattcag agcgtccctg aaatcgacgt tctgtgcgca caggctgtgc 8640
gagaaaactg gcaaactgtc accccttgta ctcttaagaa acagtattgc gggaagaaga 8700
agactaggac catactcggc accaataact tcatcgcact agcccaccga gcagtgttga 8760
gtggtgttac ccagggcttc atgaaaaagg cgtttaactc gcccatcgcc ctcggaaaga 8820
acaagtttaa ggagctacag actccggtcc tgggcaggtg ccttgaagct gatctcgcat 8880
cctgcgatcg atccacgcct gcaattgtcc gctggtttgc cgccaacctt ctttatgaac 8940
ttgcctgtgc tgaagagcat ctaccgtcgt acgtgctgaa ctgctgccac gacttactgg 9000
tcacgcagtc cggcgcagtg actaagagag gtggcctgtc gtctggcgac ccgatcacct 9060
ctgtgtctaa caccatttat agtttggtga tctatgcaca gcatatggtg cttagttact 9120
tcaaaagtgg tcacccccat ggccttctgt tcttacaaga ccagctaaag tttgaggaca 9180
tgctcaaggt tcaacccctg atcgtctatt cggacgacct cgtgctgtat gccgagtctc 9240
ccaccatgcc aaactatcac tggtgggttg aacatctgaa tttgatgctg gggtttcaga 9300
cggacccaaa gaagacagca ataacagact cgccatcatt tctaggctgt agaataataa 9360
atgggcgcca gctagtcccc aaccgtgaca ggatcctcgc ggccctcgcc tatcacatga 9420
aggcgagtaa tgtttctgaa tactatgcct cagcggctgc aatactcatg gacagctgtg 9480
cttgtttgga gtatgatcct gaatggtttg aagaacttgt agttggaata gcgcagtgcg 9540
cccgcaagga cggctacagc tttcccggca cgccgttctt catgtccatg tgggaaaaac 9600
tcaggtccaa ttatgagggg aagaagtcga gagtgtgcgg gtactgcggg gccccggccc 9660
cgtacgctac tgcctgtggc ctcgacgtct gcatttacca cacccacttc caccagcatt 9720
gtccagtcac aatctggtgt ggccatccag cgggttctgg ttcttgtagt gagtgcaaat 9780
cccctgtagg gaaaggcaca agccctttag acgaggtgct ggaacaagtc ccgtataagc 9840
ccccacggac cgttatcatg catgtggagc agggtctcac cccccttgat ccaggtagat 9900
accaaactcg ccgcggatta gtctctgtca ggcgtggaat taggggaaat gaagttggac 9960
taccagacgg tgattatgct agcaccgcct tgctccctac ctgcaaagag atcaacatgg 10020
tcgctgtcgc ttccaatgta ttgcgcagca ggttcatcat cggcccaccc ggtgctggga 10080
aaacatactg gctccttcaa caggtccagg atggtgatgt tatttacaca ccaactcacc 10140
agaccatgct tgacatgatt agggctttgg ggacgtgccg gttcaacgtc ccggcaggca 10200
caacgctgca attccccgtc ccctcccgca ccggtccgtg ggttcgcatc ctagccggcg 10260
gttggtgtcc tggcaagaat tccttcctag atgaagcagc gtattgcaat caccttgatg 10320
ttttgaggct tcttagtaaa actaccctca cctgtctagg agacttcaag caactccacc 10380
cagtgggttt tgattctcat tgctatgttt ttgacatcat gcctcaaact caactgaaga 10440
ccatctggag gtttggacag aatatctgtg atgccattca gccagattac agggacaaac 10500
tcatgtccat ggtcaacaca acccgtgtga cctacgtgga aaaacctgtc aggtatgggc 10560
aggtcctcac cccctaccac agggaccgag aggacgacgc catcactatt gactccagtc 10620
aaggcgccac attcgatgtg gttacattgc atttgcccac taaagattca ctcaacaggc 10680
aaagagccct tgttgctatc accagggcaa gacacgctat ctttgtgtat gacccacaca 10740
ggcagctgca gggcttgttt gatcttcctg caaaaggcac gcccgtcaac ctcgcagtgc 10800
actgcgacgg gcagctgatc gtgctggata gaaataacaa agaatgcacg gttgctcagg 10860
ctctaggcaa cggggataaa tttagggcca cagacaagcg tgttgtagat tctctccgcg 10920
ccatttgtgc tgatctagaa gggtcgagct ctccgctccc caaggtcgca cacaacttgg 10980
gattttattt ctcacctgat ttaacacagt ttgctaaact cccagtagaa cttgcacctc 11040
actggcccgt ggtgtcaacc cagaacaatg aaaagtggcc ggatcggctg gttgccagcc 11100
ttcgccctat ccataaatac agccgcgcgt gcatcggtgc cggctatatg gtgggccctt 11160
cggtgtttct aggcactcct ggggtcgtgt catactatct cacaaaattt gttaagggcg 11220
gggctcaagt gcttccggag acggttttca gcaccggccg aattgaggta gactgccggg 11280
aatatcttga tgatcgggag cgagaagttg ctgcgtccct cccacacggt ttcattggcg 11340
acgtcaaagg cactaccgtt ggaggatgtc atcatgtcac ctccagatac ctcccgcgcg 11400
tccttcccaa ggaatcagtt gcggtagtcg gggtttcaag ccccggaaaa gccgcgaaag 11460
cattgtgcac actgacagat gtgtacctcc cagatcttga agcctatctc cacccggaga 11520
cccagtccaa gtgctggaaa atgatgttgg acttcaaaga agttcgacta atggtctgga 11580
aagacaaaac agcctatttc caacttgaag gtcgctattt cacctggtat cagcttgcca 11640
gctatgcctc gtacatccgt gttcccgtca actctacggt gtacttggac ccctgcatgg 11700
gccccgccct ttgcaacagg agagtcgtcg ggtccaccca ctggggggct gacctcgcgg 11760
tcacccctta tgattacggc gctaaaatta tcctgtctag cgcgtaccat ggtgaaatgc 11820
cccccggata caaaattctg gcgtgcgcgg agttctcgtt ggatgaccca gttaagtaca 11880
aacatacctg ggggtttgaa tcggatacag cgtatctgta tgagttcacc ggaaacggtg 11940
aggactggga ggattacaat gatgcgtttc gtgcgcgcca ggaagggaaa atttataagg 12000
ccactgccac cagcttgaag ttttattttc ccccgggccc tgtcattgaa ccaactttag 12060
gcctgaattg aaatgaaatg gggtccatgc aaagcctttt tgacaaaatt ggccaacttt 12120
ttgtggatgc tttcacggag ttcttggtgt ccattgttga tatcattata tttttggcca 12180
ttttgtttgg cttcaccatc gccggttggc tggtggtctt ttgcatcaga ttggtttgct 12240
ccgcgatact ccgtacgcgc cctgccattc actctgagca attacagaag atcttatgag 12300
gcctttcttt cccagtgcca agtggacatt cccacctggg gaactaaaca tcctttgggg 12360
atgctttggc accataaggt gtcaaccctg attgatgaaa tggtgtcgcg tcgaatgtac 12420
cgcatcatgg aaaaagcagg gcaggctgcc tggaaacagg tggtgagcga ggctacgctg 12480
tctcgcatta gtagtttgga tgtggtggct cattttcagc atctagccgc cattgaagcc 12540
gagacctgta aatatttggc ctcccggctg cccatgctac acaacctgcg catgacaggg 12600
tcaaatgtaa ccatagtgta taatagcact ttgaatcagg tgtttgctat ttttccaacc 12660
cctggttccc ggccaaagct tcatgatttt cagcaatggt taatagctgt acattcctcc 12720
atattttcct ctgttgcagc ttcttgtact ctttttgttg tgctgtggtt gcgggttcca 12780
atactacgta ctgtttttgg tttccgctgg ttaggggcaa tttttctttc gaactcacag 12840
tgaattacac ggtgtgtcca ccttgcctca cccggcaagc agccacagag atctacgaac 12900
ccggtaggtc tctttggtgc aggatagggt atgaccgatg tggggaggac gatcatgacg 12960
agctagggtt tatgataccg cctggcctct ccagcgaagg ccacttgact ggtgtttacg 13020
cctggttggc gttcttgtcc ttcagctaca cggcccagtt ccatcccgag atattcggga 13080
tagggaatgt gagtcgagtt tatgttgaca tcaaacatca actcatctgc gccgaacatg 13140
acgggcagaa caccaccttg cctcgtcatg acaacatttc agccgtgttt cagacctatt 13200
accaacatca agtcgacggc ggcaattggt ttcacctaga atggcttcgt cccttctttt 13260
cctcgtggtt ggttttaaat gtctcttggt ttctcaggcg ttcgcctgca aaccatgttt 13320
cagttcgagt cttgcagata ttaagaccaa caccaccgca gcggcaagct ttgctgtcct 13380
ccaagacatc agttgcctta ggcatcgcga ctcggcctct gaggcgattc gcaaaatccc 13440
tcagtgccgt acggcgatag ggacacccgt gtatgttacc atcacagcca atgtgacaga 13500
tgagaattat ttacattctt ctgatctcct catgctttct tcttgccttt tctatgcttc 13560
tgagatgagt gaaaagggat ttaaggtggt atttggcaat gtgtcaggca tcgtggctgt 13620
gtgtgtcaat tttaccagct acgtccaaca tgtcaaggag tttacccaac gctccctggt 13680
ggtcgaccat gtgcggttgc tccatttcat gacacctgag accatgaggt gggcaactgt 13740
tttagcctgt ctttttgcca ttctgttggc aatttgaatg tttaagtatg ttggagaaat 13800
gcttgaccgc gggctgttgc tcgcgattgc tttctttgtg gtgtatcgtg ccgttctgtt 13860
ttgctgtgct cgccaacgcc agcaacgaca gcagctccca tctacagctg atttacaact 13920
tgacgctatg tgagctgaat ggcacagatt ggctagctaa caaatttgat tgggcagtgg 13980
agagttttgt catctttccc gttttgactc acattgtctc ctatggtgcc ctcactacca 14040
gccatttcct tgacacagtc gctttagtca ctgtgtctac cgccgggttt gttcacgggc 14100
ggtatgtcct aagtagcatc tacgcggtct gtgccctggc tgcgttgact tgcttcgtca 14160
ttaggtttgc aaagaattgc atgtcctggc gctacgcgtg taccagatat accaactttc 14220
ttctggacac taagggcaga ctctatcgtt ggcggtcgcc tgtcatcata gagaaaaggg 14280
gcaaagttga ggtcgaaggt catctgatcg acctcaaaag agttgtgctt gatggttccg 14340
tggcaacccc tataaccaga gtttcagcgg aacaatgggg tcgtccttag atgacttctg 14400
tcatgatagc acggctccac aaaaggtgct tttggcgttt tctattacct acacgccagt 14460
gatgatatat gccctaaagg tgagtcgcgg ccgactgcta gggcttctgc accttttgat 14520
cttcctgaat tgtgctttca ccttcgggta catgactttc gcgcactttc agagtacaaa 14580
taaggtcgcg ctcactatgg gagcagtagt tgcactcctt tggggggtgt actcagccat 14640
agaaacctgg aaattcatca cctccagatg ccgtttgtgc ttgctaggcc gcaagtacat 14700
tctggcccct gcccaccacg ttgaaagtgc cgcacggttt catccgattg cggcaaatga 14760
taaccacgca tttgtcgtcc ggcgtcccgg ctccactacg gtcaacggca cattggtgcc 14820
cgggttaaaa agcctcgtgt tgggtggcag aaaagctgtt aaacagggag tggtaaacct 14880
tgtcaaatat gccaaataac aacggcaagc agcagaagag aaagaagggg gatggccagc 14940
cagtcaatca gctgtgccag atgctgggta agatcatcgc tcagcaaaac cagtccagag 15000
gcaagggacc gggaaagaaa aataagaaga aaaacccgga gaagccccat tttcctctag 15060
cgactgaaga tgatgtcaga catcacttta cccctagtga gcggcaattg tgtctgtcgt 15120
caatccagac cgcctttaat caaggcgctg ggacttgcac cctgtcagat tcagggagga 15180
taagttacac tgtggagttt agtttgccta cgcatcatac tgtgcgcctg atccgcgtca 15240
cagcatcacc ctcagcatga tgggctggca ttcttgaggc atctcagtgt ttgaattgga 15300
agaatgtgtg gtgaatggca ctgattgaca ttgtgcctct aagtcaccta ttcaattagg 15360
gcgaccgtgt gggggtgaga tttaattggc gagaaccatg cggccgaaat t 15411
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| НЕ ВСТРЕЧАЮЩИЙСЯ В ПРИРОДЕ ВИРУС РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ (BPPCC) И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2015 |
|
RU2687150C2 |
| ВЫДЕЛЕНИЕ НОВОГО ПЕСТИВИРУСА, ВЫЗЫВАЮЩЕГО ВРОЖДЕННЫЙ ТРЕМОР А | 2017 |
|
RU2765658C2 |
| БИСПЕЦИФИЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО ПРОТИВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2764740C1 |
| СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ АРЕНАВИРУСА, А ТАКЖЕ МУТАНТОВ АРЕНАВИРУСА С ПРОТИВООПУХОЛЕВЫМИ СВОЙСТВАМИ | 2019 |
|
RU2812046C2 |
| ПРОМОТОРЫ ДЛЯ УСИЛЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ В ПОКСВИРУСАХ | 2016 |
|
RU2753884C2 |
| МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СОБАК | 2020 |
|
RU2811752C2 |
| Вакцина на основе AAV5 для индукции специфического иммунитета к вирусу SARS-CoV-2 и/или профилактики коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2 | 2020 |
|
RU2760301C1 |
| САМОСОБИРАЮЩИЕСЯ НАНОСТРУКТУРНЫЕ ВАКЦИНЫ | 2019 |
|
RU2811439C2 |
| НОВЫЕ КАПСИДНЫЕ БЕЛКИ АДЕНО-АССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА | 2017 |
|
RU2779318C2 |
| Вакцина на основе AAV5 для индукции специфического иммунитета к вирусу SARS-CoV-2 и/или профилактики коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2 | 2020 |
|
RU2783313C1 |
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение относится к Аттенуированному штамму вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), к выделенному полинуклеотиду, содержащему молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду, имеющему последовательность SEQ ID NO: 1, или полинуклеотиду с SEQ ID NO: 1, к рекомбинантному экспрессионному вектору, содержащему полинуклеотид, к Клетке-хозяину для экспрессии полинуклеотида по п.2, содержащей рекомбинантный экспрессионный вектор по п.3 или содержащей полинуклеотид, к иммуногенной или вакцинальной композиции, содержащей эффективное количество штамма, или по меньшей мере одного полинуклеотида, или по меньшей мере одного вектора, или по меньшей мере одной клетки-хозяина и по меньшей мере один носитель и/или адъювант, подходящий для применения в ветеринарии, к применению штамма по п.1 или полинуклеотида, или вектора, или клетки-хозяина в качестве лекарственного средства, предпочтительно, в вакцинотерапии репродуктивно-респираторного синдрома свиней, к способу предотвращения заражения свиней вирусом РРСС или развития РРСС, включающему инокуляцию свиней штаммом или иммуногенной или вакцинальной композицией. Изобретение позволяет предотвратить заражение свиней вирусом РРСС или развитие РРСС. 8 н.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл.
1. Аттенуированный штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), депонированный под номером CNCM I-4859, для предотвращения заражения свиней вирусом РРСС или развития РРСС.
2. Выделенный полинуклеотид для использования в вакцинотерапии РРСС, содержащий молекулу РНК, соответствующую полинуклеотиду, имеющему последовательность SEQ ID NO: 1, или полинуклеотиду с SEQ ID NO: 1.
3. Рекомбинантный экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид по п.2.
4. Клетка-хозяин для экспрессии полинуклеотида по п.2, содержащая рекомбинантный экспрессионный вектор по п.3 или содержащая полинуклеотид по п.2, предпочтительно указанная клетка-хозяин выбрана из клеток животных, растений, дрожжей, бактерий или насекомых, предпочтительнее, чтобы клетка-хозяин была клеткой свиньи или поросенка.
5. Иммуногенная композиция, содержащая эффективное количество штамма по п.1, или по меньшей мере одного полинуклеотида по п.2, или по меньшей мере одного вектора по п.3, или по меньшей мере одной клетки-хозяина по п.4 и по меньшей мере один носитель и/или адъювант, подходящий для применения в ветеринарии.
6. Вакцинальная композиция, содержащая эффективное количество штамма по п.1, или по меньшей мере одного полинуклеотида по п.2, или по меньшей мере одного вектора по п.3, или по меньшей мере одной клетки-хозяина по п.4 и по меньшей мере один носитель и/или адъювант, подходящий для применения в ветеринарии.
7. Применение штамма по п.1, или полинуклеотида по п.2, или вектора по п.3, или клетки-хозяина по п.4 в качестве лекарственного средства, предпочтительно, в вакцинотерапии репродуктивно-респираторного синдрома свиней.
8. Способ предотвращения заражения свиней вирусом РРСС или развития РРСС, включающий инокуляцию свиней штаммом по п.1, иммуногенной композицией по п. 5 или вакцинальной композицией по п.6.
| ШТАММ "КПР-96" ВИРУСА РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И/ИЛИ ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ | 2005 |
|
RU2295567C1 |
| WASIN CHARENTANTANAKUL | |||
| Porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccines: Immunogenicity, efficacy and safety aspects, World Journal of Virology, 12.02.2012, (1), pp 23-30, http//www/wjgnet.com/2220-3249, doi 10/5501/wjv | |||
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
| WASIN CHARENTANTANAKUL | |||
| Adjuvants for porcine reproductive and respiratory | |||
