Вакцины против Chlamydia sp. Российский патент 2020 года по МПК C07K14/295 A61K39/118 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к полипептидам из повторяющихся единиц иммуногенных фрагментов, экспонированных на поверхности областей белков наружной мембраны Chlamydia sp., а также фармацевтическим композициям и вакцинам, содержащим данные белки слияния.

Предпосылки изобретения

Хламидии являются внутриклеточными бактериальными патогенами, являющимися причиной различных инфекций. Chlamydia pneumoniae является причиной острых респираторных инфекций человека и, как полагают, играет роль в ишемической болезни сердца. Chlamydia trachomatis является возбудителем заболеваний человека, передающихся половым путем, и глазных инфекций (Трахома). У животных также известно несколько инфекций, вызываемых Chlamydia sp. например, Chlamydia suis, инфицирующая свиней, и Chlamydiaphila abortus, которая вызывает выкидыши у мелкого рогатого скота (овец и коз).

По оценкам, во всем мире 92 миллиона человек инфицируются Chlamydia trachomatis (Ct) половым путем¹. Урогенитальные Ct инфекции являются угрозой общественному здоровью из-за их высокой распространенности и того, что они являются фактором риска для внематочной беременности и бесплодия². В дополнение к этому было показано, что Ct инфекции способствуют передаче HIV³ и выступают в качестве кофактора при HPV-индуцированной карциноме шейки матки⁴. Продолжительность Ct половой инфекции, не подвергающейся лечению, может быть долгой, и полное ее устранение часто не достигается в течение первых 12 месяцев⁵. В результате исследований на людях стало известно, что против повторных половых инфекций развивается некоторая степень защитного иммунитета, хотя, по-видимому, в лучшем случае она является лишь частичной⁶. Инфекция эффективно контролируется антибактериальной терапией; однако высокая распространенность бессимптомных случаев означает, что надежный контроль заболевания может предполагаться только в случае разработки эффективной вакцины против Chlamydia.

Вакцина против Ct должна вырабатывать защитный Т-клеточный и В-клеточный иммунитет в слизистых оболочках половых путей⁷. В многочисленных исследованиях были описаны иммунные механизмы устранения инфекции и резистентности к повторной инфекции. В попытках выявления защитных и повреждающих иммунных ответов применялись разнообразные модельные животные и виды хламидий. Возник общий консенсус, что у мышей иммунные ответы, опосредованные CD4+ Th1 клетками, играют важную роль в борьбе с Ct инфекцией^{8, 9, 10}, в то время как роль гуморального иммунитета в защите оставалась менее четко определенной. У морских свинок иммунитет к хламидийной инфекции по меньшей мере частично опосредован секреторным IgA на поверхности слизистой оболочки^{11, 12}, кроме того с использованием мышиной модели получают все больше фактов, свидетельствующих о роли антител в защитном иммунитете⁹. Данные модельных животных, которые появились в течение последних лет, ясно показывают, что если антитела образуются после инфицирования, установлено, что они играют минимальную роль, в то время как их наличие на момент инфицирования (например, при вторичном ответе) способствует значительному уровню защиты, эффект, который, тем не менее, усиливается в присутствии специфичных клеток CD4⁺ Chlamydia^{9, 13, 14}. Сильный клеточно-опосредованный иммунный ответ (CMI) без антител может, с другой стороны, контролировать репликацию бактерий, но в худшем случае, он может усугубить патологию, связанную с хламидийной инфекцией^{15 16}. Становится все более очевидным, что важность этого взаимодействия между клеточно-опосредованным иммунитетом и антителами поддерживает преимущественную роль нейтрализующих антител в начальной фазе инфицирования, тогда как CD4⁺ клетки являются основными эффекторами в ходе остального инфицирования^{17 18 19}. В целом, баланс иммунных эффекторных механизмов между антителами и Т-клетками, по-видимому, имеет решающее значение для исхода заболевания.

Нами и другими исследователями был выявлен ряд антигенов хламидий, распознаваемых во время естественного инфицирования на человеческих или животных моделях^{20, 21 22, 23 24 25, 26 27}. В первую очередь, к исследованию практически всего генома на 875 открытых рамках считывания привела публикация последовательности генома в 1998 году и современные высокопроизводительные методы²⁸. Важно отметить, что идентификация белков как антигенов во время инфицирования не обязательно означает, что они обеспечивают защиту в качестве вакцин²⁹ и, несмотря на установление характеристик такого большого количества антигенов, только для очень немногих из них было доказано, что они опосредуют защиту в качестве вакцин на животных моделях^{30 31, 32}. Более того, для большинства недавно описанных вакцин наблюдаемая частичная защита опосредована Т-клетками без каких-либо нейтрализующих антител. Таким образом, существует нехватка кандидатных вакцин, которые генерируют нейтрализующие антитела, которые могут справиться с инфекцией в начальной фазе, и создают сбалансированный иммунный ответ.

До сих пор убедительные данные существовали только о нейтрализующих антителах с тремя экспонированными на поверхности антигенами; PorB, локализоваными в наружной мембране хламидий и которые функционируют как порины³³. Было показано, что антитела к ним нейтрализуют хламидийную инфицирующую способность³⁴, ссылка на патент США 7105171. Другой, более новый антиген - это PmpD. Этот белок, как было показано, генерирует нейтрализующие антитела in vitro, однако значимость этих антител in vivo еще не была продемонстрирована³⁵.

МОМР является классическим антигеном-мишенью для нейтрализующих антител и одной из первых описанных антигенных молекул. Это трансмембранный белок, экспонированный на поверхности, который обладает структурными свойствами (порин)^{36, 37, 38}. МОМР представляет собой белок с мол. массой 40 кДа, составляющий примерно 60% белка в мембране Ct и который является мишенью для нейтрализующих антител с доказанной эффективностью как in vitro, так и in vivo. МОМР состоит из четырех вариабельных, экспонированных на поверхности, доменов (VD-1-VD-4), разделенных пятью константными сегментами^{36 39}, и является молекулярной основой группы серовара (~15) Chlamydia (Фиг. 1). В этих VD in vitro и in vivo были локализованы эпитопы нейтрализующих антител^{40 41 42 43 44}. Профиль распределения урогенитальных сероваров Ct был описан для областей по всему миру, предоставляя эпидемиологические данные по распространению серовара, необходимые для вакцины на основе МОМР. Во всем мире наиболее распространен серовар Е (22-49% случаев), затем серовары F и D (17-22% и 9-19% соответственно)^{43 46 47 48 49 50}, что означает, что вакцина, нацеленная на серовары Е, D и F, будет оказывать значительное воздействие и охватывать более 70% человеческого населения.

МОМР обладает высокой иммуногенностью у людей и животных, и поэтому изучался в мельчайших подробностях в качестве кандидата на роль вакцины, как в виде нативно, так и рекомбинантно очищенного белка, и в виде ДНК-вакцины. Эти попытки вакцинации дали различные результаты^{17, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 51}. Причина относительного несоответствия МОМР в качестве вакцины до конца не изучена, но тот факт, что синтетические иммуногены МОМР не имитируют нативную структуру белка, является главной проблемой⁵⁴. В связи с этим, структура этой мембраны, связанной с молекулой, богатой цистеином, и рефолдинг различных продуктов для достижения нативной структуры белка чрезвычайно трудновыполнимы и не подходят для крупно масштабного производства вакцины⁵⁸. Поэтому, хотя они очевидно и имеют вакцинный потенциал, полноразмерные МОМР до сих пор не стали вероятным кандидатом на роль вакцины, и в последующем было сделано несколько попыток сконструировать вакцину на основе выбранных эпитопов (например, высоко консервативных TTLNPTIAG в VD4^{36, 59}) или на основе выбранных областей, богатых нейтрализующими эпитопами-мишенями (например, VD) МОМР (WO 9406827, US 6384206)^{60, 61 62, 63 64 51, 65 66}.

Особое внимание уделялось VD1, VD2 и VD4, поскольку было показано, что нейтрализующие моноклональные антитела, используемые для серотипирования, локализуются в этих областях. На эти области VD нацеливаются антитела во время естественного инфицирования, и в соответствии с этим, данные области, естественно, находились в центре внимания при попытках разработать методы иммунодиагностики. Например, Mygind и соавт.в поисках средства диагностики, основанного на ELISA, конструировали различные полиантигены, содержащие области VD разных серовариантов⁶⁷. Этот анализ показал, что путем увеличения количества серовариантов и включения видоспецифичных TTLNPTIAG в один рекомбинантный полиантиген, возможно увеличить специфичность и чувствительность анализа по сравнению с анализом, основанным на антигене одного сероварианта.

Главным образом, VD4 вызвал интерес в качестве иммуногена, поскольку было показано, что эта область содержит высококонсервативный видоспецифичный эпитоп TTLNPTIAG, встроенный в вариабельную область. Важно, что этот консервативный эпитоп в области VD4 может вызвать широкий кроссреактивный иммунный ответ, который способен нейтрализовать несколько сероваров, среди которых самые распространенные - D, Е и F (Фиг. 2). Пептиды, представляющие область VD4 или консервативный эпитоп, полученный от этой области, применяли для иммунизации либо отдельно, в виде химерных пептидов, слитых с другими областями, такими как VD1, либо в смеси с Т-клеточными эпитопами для усиления гуморального иммунного ответа^{60, 68 51, 65 64 69}. Все эти конструкты образовывали антитела с некоторыми функциональными возможностями для нейтрализации инфекции in vitro, но в целом эти стратегии отличаются низкой иммуногенностью и титры не выражаются в защитной эффективности против генитального заражения хламидиозом in vivo.

Причины отсутствия защиты при использовании этих конструктов на основе пептидов могут быть многочисленными; включая способ введения, тип вызванного иммунного ответа, доза заражения, но, скорее всего, они отражают то, что молекула вакцины недостаточно иммуногенна для применения в качестве вакцины. Стратегия, основанная на VD4, кроме того, страдает от ограничения, что, за исключением эпитопа TTLNPTIAG, эти фрагменты, упомянутые выше, весьма специфичны для одного или двух серовариантов, и, чтобы охватить наиболее распространенные сероварианты, вызывающие заболевания человека, вакцина должна быть соответствующим образом составлена из нескольких компонентов.

В WO 2012172042 ранее раскрывалось, что В-клеточные эпитопы в пределах VD областей, в сочетании с определенными Т-клеточными эпитопами (Th1 и Th2) из невариабельных доменов МОМР, могут функционировать в качестве полиэпитопной вакцины против серовара D Chlamydia psitattci у кур; в примерах описывается комбинация вплоть до трех В-клеточных эпитопов, каждый из которых получен из VD области из разных вариабельных доменов одного и того же сероварианта вместе с несколькими Т-клеточными эпитопами. Применение повторов вариабельного домена, экспонированного на поверхности области МОМР, и применение различных серовариантов не предполагалось, и, следовательно, высокие титры и широкий ответ против различных серовариантов не получены.

Целью настоящего изобретения является приготовление рекомбинантных молекул слияния, которые способны вызывать ответ с высокими титрами нейтрализующих антител, который защищает от различных Ct сероваров in vivo. Кроме того, наше изобретение, описывает комбинацию данных антител, стимулирующих фрагменты с Ct антигенами, которые являются мишенями для Т-клеток, с целью получения вакцины, которая активирует оба механизма иммунной системы.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение раскрывает эффективную вакцину против патогена, например, Chlamydia trachomatis (Ct), которая включает в себя повторы экспонированных на поверхности фрагментов Ct антигенов (гомологичные иммуно-повторы) для максимальных гуморальных иммунных ответов. В одном варианте осуществления изобретения эти экспонированные на поверхности фрагменты удлиняют для охвата примыкающую область фрагментов, экспонированных на поверхности, которые могут содержать Т-клеточные эпитопы. Одним из примеров является определенный большой фрагмент, представляющий удлиненную версию VD1 или VD4 области Ct из МОМР антигена и в формате иммуно-повтора, обеспечивающий высокие уровни связывания с поверхностью и нейтрализующих антител к Ct. В другом важном варианте осуществления технологию иммуно-повторов применяют для получения высоких титров и широкого ответа на разные сероварианты путем слияния фрагментов, содержащих вариабельные В- и Т-клеточные эпитопы от разных серовариантов (гетерологичные иммуно-повторы). В еще одном варианте осуществления нашего изобретения эти экспонированные на поверхности повторы рекомбинантно сливают с фрагментами других экспонированных на поверхности антигенов, таких как РМР или ОМР. Наконец, наше изобретение раскрывает комбинации данных конструктов иммуно-повторов с сильными Т-клеточными антигенами, такими как МОМР (СТ681), СТ043 или СТ004 от Ct, которые вместе образуют весьма эффективную вакцину против различных этапов Ct инфицирования.

Детальное описание изобретения

Изобретение раскрывает полипептид, содержащий

a) аминокислотную последовательность, которая содержит один или несколько экспонированных на поверхности фрагментов одного и того же белка наружной мембраны, экспрессирующегося в серотипе Chlamydia sp.; и

b) две или более дополнительных аминокислотных последовательности, которые представляют собой или ту же последовательность, что определена в а), или соответствующие экспонированные на поверхности фрагменты из варианта указанного белка наружной мембраны, экспрессирующегося в серотипе Chlamydia. sp, отличном от серотипа из а).

Таким образом, настоящее изобретение раскрывает полипептиды, содержащие иммуно-повторы, представляющие собой 3 или более, например, 4 или более повторов аминокислотной последовательности, содержащей иммуногенную часть, экспонированную на поверхности области белка наружной мембраны Chlamydia sp. Следовательно, изобретение может описывать как полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, содержащую один или несколько экспонированных на поверхности фрагментов одного и того же белка наружной мембраны, экспрессирующегося в серотипе Chlamydia sp. и две или более, например, три или более дополнительных аминокислотных последовательности, которые являются или той же последовательностью, что определена в а), или соответствующими экспонированными на поверхности фрагментами из варианта указанного белка наружной мембраны, экспрессирующегося в серотипе Chlamydia sp., отличном от серотипа из а).

В предпочтительном варианте осуществления полипептид содержит 3 или более различные аминокислотные последовательности, где каждая из указанных аминокислотных последовательностей содержит один или несколько экспонированных на поверхности фрагментов из различных вариантов или изотипов одного и того же белка наружной мембраны, который варьирует в различных серотипах Chlamydia sp., при этом указанные аминокислотные последовательности получены из разных серотипов Chlamydia sp. (гетерологичные иммуно-повторы в нашей терминологии), однако изобретение также раскрывает полипептид, содержащий 3 или более повтора аминокислотной последовательности, где указанная аминокислотная последовательность содержит один или несколько экспонированных на поверхности фрагментов одного и того же белка наружной мембраны, который варьирует в различных серотипах Chlamydia sp., при этом указанные аминокислотные последовательности получены из одного и того же серотипа Chlamydia sp. (гомологичные иммуно-повторы в нашей терминологии).

Белок наружной мембраны, предпочтительно, представляет собой главный белок наружной мембраны (МОМР) из любого серотипа Chlamydia sp., и экспонированный на поверхности фрагмент, выбирают из: вариабельного домена 1 (VD1), вариабельного домена (2) VD2, вариабельного домена (3) VD3 или вариабельного домена 4 (VD4) МОМР. Экспонированный на поверхности фрагмент могут необязательно линеаризовать путем замены цистеина в аминокислотной последовательности для предотвращения дисульфидных связей.

Предпочтительный вариант осуществления изобретения представляет собой полипептиды, содержащие иммуно-повторы с 3 или более повторами вариабельного домена 4 (VD4) из МОМР из любого из сероваров D, Е, F, G, Ia и J Chlamydia trachomatis, где каждый вариабельный домен состоит из аминокислотной последовательности, которая соответствует позиции аминокислотных остатков №309-338 в МОМР-аминокислотной последовательности Chlamydia trachomatis серовара D (SvD) (SEQ ID NO.: 68), и где вариабельные домены в иммуно-повторе независимо выбирают из группы, состоящей из VD4 серовара D, VD4 серовара Е, VD4 серовара F, VD4 серовара G, VD4 серовара Ia и VD4 серовара J Chlamydia trachomatis, или которая характеризуется 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой.

Аминокислотная последовательность VD4 из сероваров D, Е, F, G, Ia и J соответствует SEQ ID NO 15-20, соответственно. Каждый вариабельный домен могут дополнительно фланкировать/удлинять со стороны N-конца либо

i) аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO 21) либо

ii) подпоследовательностью аминокислотной последовательности пункта i), при этом указанная подпоследовательность содержит 1 или более аминокислотных остатка.

На стороне С-конца вариабельный домен могут дополнительно фланкировать/удлинять

iii) аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO 22)

iv) подпоследовательностью аминокислотной последовательности пункта iv), при этом указанная подпоследовательность содержит 1 или более аминокислотных остатков,

или аминокислотной последовательностью, которая характеризуется по меньшей мере 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой.

Таким образом, предпочтительный вариант осуществления можно описать как полипептиды, содержащие 2-8 различных аминокислотных последовательностей, каждая из которых получена из МОМР Chlamydia trachomatis, который содержит аминокислотную последовательность, определенную в формуле I:

,

где

VD4 независимо выбирают из SEQ ID NO 15-20 или аминокислотной последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой,

и

xx₁ состоит из

i) аминокислотной последовательности (SEQ ID NO 21) или

ii) подпоследовательности аминокислотной последовательности из i), при этом указанная подпоследовательность содержит 1-38 аминокислотных остатков, начиная с K на C-конце в аминокислотной последовательности из i),

и

xx₂ состоит из

iii) аминокислотной последовательности (SEQ ID NO 22)

v) подпоследовательности аминокислотной последовательности из iii), при этом указанная подпоследовательность содержит 1-29 аминокислотных остатков, начиная с D на N-конце в аминокислотной последовательности из iii).

Примеры белков слияния, содержащих иммуно-повторы VD4 из МОМР, указаны в SEQ ID NO 49-59.

В другом варианте осуществления изобретения полипептид дополнительно содержит 3 или более иммуно-повторов вариабельных доменов 1 (VD1) из МОМР любого из сероваров D, Е, F, G, J и Ia Chlamydia trachomatis, при этом каждый вариабельный домен состоит из аминокислотной последовательности, которая соответствует позициям аминокислотных остатков №91-105 в аминокислотной последовательности МОМР Chlamydia trachomatis серовара D (SvD) (SEQ ID NO.: 68) и независимо выбрана из группы, состоящей из VD1 серовара D, VD1 серовара Е, VD1 серовара F, VD1 серовара G, VD1 серовара Ia и VD1 серовара J Chlamydia trachomatis, или которая характеризуется 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой.

Аминокислотная последовательность VD1 из серовара D, Е, F, G, Ia и J соответствует SEQ ID NO 1-6, соответственно. Каждый вариабельный домен могут дополнительно фланкировать/удлинять со стороны N-конца либо

vi) аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO 7)

vii) подпоследовательностью аминокислотной последовательности пункта v), при этом указанная подпоследовательность содержит 1 или более аминокислотных остатка.

На стороне С-конца вариабельный домен могут дополнительно фланкировать/удлинять

viii) аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO 8)

ix) подпоследовательностью аминокислотной последовательности пункта х), при этом указанная подпоследовательность содержит 1 или более аминокислотных остатка;

или аминокислотной последовательностью, которая характеризуется по меньшей мере 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой.

Таким образом, другой предпочтительный вариант осуществления можно описать как полипептиды, содержащие 2-8 различных аминокислотных последовательностей, каждая их которых получена из МОМР Chlamydia trachomatis, который содержит аминокислотную последовательность, определенную в формуле I и дополнительно содержит аминокислотную последовательность, определенную в формуле II:

,

где

VD1 независимо выбирают из SEQ ID NO 1-6 или аминокислотной последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой,

и

yy₁ состоит из

v) аминокислотной последовательности (SEQ ID NO 7) или

vi) подпоследовательности аминокислотной последовательности из v), при этом указанная подпоследовательность содержит 1-30 аминокислотных остатков, начиная с G на С-конце в аминокислотной последовательности из v),

и

yy₂ состоит из

vii) аминокислотной последовательности (SEQ ID NO 8) или

viii) подпоследовательности аминокислотной последовательности из vii), при этом указанная подпоследовательность содержит 1-18 аминокислотных остатков, начиная с N на N-конце в аминокислотной последовательности из vii).

Примеры полипептидов, содержащих иммуно-повторы VD1 указаны в SEQ ID NO 9-14 и 45-48.

Дальнейшие варианты осуществления изобретения дополнительно содержат фрагмент, содержащий вариабельные домены 2 (VD2) и/или вариабельные домены 3 (VD3) из МОМР, соответственно содержащие аминокислотную последовательность, определенную в формуле III и/или формуле IV:

,

,

где

VD2 независимо выбирают из SEQ ID NO 29-34 или аминокислотной последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой,

и

zz₁ состоит из

ix) аминокислотной последовательности (SEQ ID NO 35) или

x) подпоследовательности аминокислотной последовательности из ix), при этом указанная подпоследовательность содержит 1-23 аминокислотных остатков, начиная с G на С-конце в аминокислотной последовательности из ix),

и

zz₂ состоит из

xi) аминокислотной последовательности (SEQ ID NO 36) или

xii) подпоследовательности аминокислотной последовательности из xi), при этом указанная подпоследовательность содержит 1-22 аминокислотных остатков, начиная с V на N-конце в аминокислотной последовательности из xi),

и где

VD3 независимо выбирают из SEQ ID NO 37-42 или аминокислотной последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой,

и

qq₁ состоит из

xiii) аминокислотной последовательности

(SEQ ID NO 43) или

xiv) подпоследовательности аминокислотной последовательности из xiii), при этом указанная подпоследовательность содержит 1-22 аминокислотных остатков, начиная с G на С-конце в аминокислотной последовательности из xiii),

и

qq₂ состоит из

xv) аминокислотной последовательности (SEQ ID NO 44) или

xvi) подпоследовательности аминокислотной последовательности из xv), при этом указанная подпоследовательность содержит 1-35 аминокислотных остатков, начиная с Т на N-конце в аминокислотной последовательности из xv).

Иммуно-повторы могут быть гетерологичными, это означает, что вариабельный домен получен из различных серотипов, или они могут быть гомологичными, это означает, что вариабельный домен получен из одного серотипа. Предпочтительное количество повторов составляет 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 повторов.

Кроме того, иммуно-повторы в полипептидах могут быть линеаризованными, то есть заменять остатки цистеина на серии.

Полипептиды, содержащие иммуно-повторы, могут дополнительно содержать фрагмент, который способствует экспорту полипептида после того, как он получен рекомбинантно (например, сигнальные пептиды), фрагмент, который способствует очистке полипептида (например, гистидиновые метки), и/или фрагмент, который усиливает иммуногенность (например, Т-клеточный антиген). Т-клеточная мишень может быть выбрана из Ct антигена, такого как СТ043 СТ004, СТ414, СТ681 или его частей. Примеры таких белков слияния указаны в SEQ ID NO 60-67.

Полипептид, согласно изобретению, имеет следующие функциональные способности:

a) нейтрализовать серовар D С. trachomatis in vitro с 50% титром нейтрализации 10^-3 или менее при тестировании в постановке эксперимента, включающего введение гетерологичных иммуно-повторов;

b) нейтрализовать серовар D С. trachomatis in vivo по меньшей мере у 50% мышей на 7 сутки после инфицирования при тестировании на мышиной модели, включающем введение гетерологичных иммуно-повторов;

c) расширять иммунный ответ на несколько сероваров С. trachomatis in vitro при введении гетерологичных иммуно-повторов.

Настоящее изобретение также раскрывает нуклеиновые кислоты, кодирующие вышеописанные полипептиды.

Раскрытые полипептиды или нуклеиновые кислоты применяют для приготовления фармацевтической композиции, такой как вакцина. Вакцина может дополнительно содержать фармакологически приемлемый носитель (вирусоподобные частицы), вспомогательное средство, адъювант (например, DDA/TDB или квасцы) или иммуномодулятор. Фармацевтическую композицию могут применять для профилактического или терапевтического применения против инфекций Chlamydia sp., включая инфекции Chlamydia trachomatis или С. pneumoniae.

Также раскрывается способ предупреждения, лечения и/или снижения частоты возникновения инфекций Chlamydia sp., включая инфекции Chlamydia trachomatis или С. pneumoniae, путем введения данной фармацевтической композиции.

Далее изобретение будет описано более подробно и проиллюстрировано примерами.

Предпочтительный белок наружной мембраны представляет собой МОМР, однако может также включать другие экспонированные на поверхности антигены рода Chlamydia, являющиеся мишенями для гуморальных ответов.

Иммуно-повтор из экспонированной на поверхности области может происходить из одного и того же серотипа (гомологичные иммуно-повторы) или представлять собой фрагменты, содержащие вариабельные эпитопы и полученные из различных серотипов (гетерологичные иммуно-повторы). В предпочтительном варианте осуществления иммуно-повторы содержат расширенный фрагмент, содержащий как вариабельную, так и консервативную область, которая, как известно, богата Т-клеточными эпитопами.

Предпочтительную экспонированную на поверхности область белка наружной мембраны выбирают из VD1, VD2, VD3 и VD4 из МОМР.

Аминокислотные последовательности, применяемые для конструирования иммуно-повторов, описанные в примерах, выбирают из Таблиц 1, 2 и 3.

Вариабельный домен VD4 из МОМР можно описать как аминокислотные последовательности в соответствии с определением:

La1-Аа2-Aa1-Аа3-La2,

где

Aa1 состоит из аминокислотной последовательности (которая является консервативной для всех серотипов);

Аа2 выбирают из группы, состоящей: (из сероваров D и Е), (из серовара F), (из серовара G) и (из серовара Ia и J).

Если Аа2 является последовательностью из сероваров D или Е, то Аа3 выбирают из последовательностей, представленных в (из серовара D) и (серовар Е).

Если Аа2 является последовательностью из серовара F, то Аа3 является последовательностью (из серовара F).

Если Аа2 является последовательностью из серовара G, то Аа3 является последовательностью (из серовара G).

Если Аа2 является последовательностью из серовара Ia или J, то Аа3 выбирают из (из серовара Ia) и (из серовара J).

Вариабельный домен VD4 из МОМР изображен на Фигуре 2. Предпочтительно иммуно-повторы дополнительно содержат расширения на обоих концах, которые также изображены на Фигуре 2.

Сторону N-конца домена VD4 могут фланкировать или удлинять одной или более аминокислотами из более консервативной и богатой Т-клеточными эпитопами La1, где La1 является частью VD4 из МОМР, который погружен в мембрану и имеет аминокислотную последовательность или аминокислотную последовательность, характеризующуюся 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой.

Сторону С-конца домена VD4 могут соответственно фланкировать или удлинять одной или более аминокислотами из более консервативной и богатой Т-клеточными эпитопами La2, где La2 является частью VD4 из МОМР, который погружен в мембрану со стороны С-конца и имеет аминокислотную последовательность или аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 80% идентичностью последовательности по отношению к таковой.

Подобной иллюстрацией (см. Фигуру 1) можно описать иммуно-повторы, содержащие вариабельный домен 1 (VD1) из МОМР с вариабельными доменами (Аа2-Аа1-Аа3) различных сероваров, приведенные в SEQ ID NO 1-6 в Таблице 1. Подобные N-концевые и С-концевые удлинения (La1 и La2) имеют соответствующие аминокислотные последовательности (La1) и (La2), которые приведены в таблице 2, путем SEQ ID NO 7-8.

Иммуно-повторы, содержащие VD2 и VD3, можно аналогичным образом вывести из Фигуры 1 и Таблицы 1.

Таким образом, приведенный выше пример La1-Aa2-Aa1-Aa3-La2 определяет одну из единиц иммуно-повторов. Если, дополнительно, например VD1 добавить к VD4 единице, это можно описать как добавление еще одной последовательности с целью составления большей единицы иммуно-повтора. Таким образом, полипептид изобретения содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 повторов единиц иммуно-повторов.

Определения

Белки наружной мембраны

Наружную мембрану Chlamydia sp. можно выделить с помощью обработки интактных, очищенных элементарных телец детергентом, таким как 2% Саркозил с последующим ультрацентрифугированием (100000 g в течение одного часа), что приводит к образованию супернатанта с компонентами цитозоля и осадка, состоящего из наружной мембраны, как описано выше⁷⁰. Белки наружной мембраны можно идентифицировать с помощью стандартных методик определения белка, например, SDS-PAGE с последующей масс-спектрометрией.

Экспонированные на поверхности фрагменты или области

Бактериальные поверхностные или мембранные белки содержат трансмембранные белки, секреторные белки и липопротеины и незаякоренные поверхностные белки. Экспонированные на поверхности области на интактных бактериях являются доступными для антител. Способы идентификации экспонированных на поверхности областей белков ("сурфасеома") содержат, например, биотинилирование мембранных белков в интактных бактериях с последующим выделением из меченной биотином фракции с использованием стрептавидина. Выделенные белки можно идентифицировать с помощью масс-спектрометрии. Другой подход заключается в обработке интактной бактерии протеазой, например трипсином ("срезание"), для отщепления экспонированных на поверхности пептидов с последующим сбором высвобожденных пептидов для идентификации с помощью масс-спектрометрии.

Варианты

Варианты белков наружной мембраны, представленные в данном документе, описывают белки, кодируемые одним и тем же геном различных серотипов Chlamydia sp. Варианты белка имеют значительную гомологию с эталонным полипептидом.

Изоформа белка

В контексте настоящей заявки "изоформа" белка понимается как любая из нескольких различных форм одного и того же белка, например, белка, который имеет и ту же функцию, но кодируется другим геном и может иметь небольшие различия в своей последовательности или появляется по причине однонуклеотидных полиморфизмов, дифференциального сплайсинга мРНК или пост-трансляционных модификаций. Различные серотипы бактерий могут иметь различные изоформы определенных белков.

Роды Chlamydia

Под термином "роды Chlamydia" понимается бактерия, способная вызывать хламидийную инфекцию у животного или у человека. Примерами являются С. trachomatis, С. pneumoniae и С. muridarum. Также у животных известны несколько инфекций, вызываемых Chlamydia sp. например, Chlamydia suis, инфицирующая свиней, и Chlamydiaphila abortus, которая вызывает выкидыши у мелкого рогатого скота (овец и коз).

Сероварианты, серовары или серотипы

На основании реактивности по отношению к специфичным моноклональным антителам и детального анализа последовательностей вариабельных областей из МОМР, Ct можно разделить на 15 различных серовариантов и среди них сероварианты А, В, Ва и С вызывают трахому, D-K вызывают заболевание, передающееся половым путем (STD), L1-L3 вызывает венерический лимфогранулематоз, а MoPn (С. muridarum) заражает мышей. Сероварианты иногда упоминаются как сероварианты или серотипы с таким же значением.

Иммуно-повторы

Под иммуно-повторами понимаются: повторяющиеся единицы одной или нескольких аминокислотных последовательностей, включающих иммуногенную часть или фрагмент антигена. Повторяющиеся единицы можно описать как одну или несколько VD областей, которые необязательно могут быть вытянуты, как описано выше, которые повторяются, например, 4 примера с тремя повторами: VD4-VD4-VD4, VD4-VD1-VD4-VD1-VD4-VD1, VD4_D-VD4_D-VD4_D, VD4_D-VD4_F-VD4_G, VD4_D-VD3_E-VD4_D-VD3_E-VD4_D-VD3_E.

Гомологичный иммуно-повтор

Повторяющиеся единицы одной или нескольких аминокислотных последовательностей, включающие иммуногенную часть или фрагмент антигена только одного сероварианта (Фиг. 4)

Гетерологичный иммуно-повтор

Повторяющиеся единицы одной или нескольких аминокислотных последовательностей, включающие иммуногенную часть или фрагмент, кодирующий один и тот же антиген, происходящий от различных серовариантов (Фиг. 4)

Гетерологичное заражение

Относится к ситуации, когда белок, применяемый для вакцинации, произведен от иного сероварианта, нежели серовариант, применяемый для заражения.

Гомологичное заражение

Относится к ситуации, когда белок, применяемый для вакцинации, произведен от того же сероварианта, что и серовариант, применяемый для заражения.

МОМР

Главный белок наружной мембраны (МОМР) Ct экспрессируется на всех этапах развития жизненного цикла Ct и составляет примерно 60% от общего содержания белка в наружной мембране хламидий. МОМР можно разделить на консервативные домены, прерванные четырьмя высоко вариабельными доменами (VD1-4 или VS1-4)⁵⁹ (Фиг. 1.)

VD1

Вариабельный домен 1 (VD1) МОМР, согласно определению Baehr et al (1988)³⁶, который соответствует аминокислотам 91-105 и составляет высоко вариабельную область в МОМР из Ct (Seq NO 1-6 VD1 из SvD, E, F, G, Ia и J соответственно). Удлиненная область VD1 (VD1^ext) соответствует аминокислотам 57-115 и составляет упомянутую высоко вариабельную область, примыкающую к высоко консервативным областям в МОМР из Ct (Seq NO 9-14 VD1^ext из SvD, E, F, G, Ia и J соответственно) (Фиг. 3).

VD4

Вариабельный домен 4 (VD4) МОМР, согласно определению Baehr et al (1988)³⁶, который соответствует аминокислотам 309-338 и составляет высоко вариабельную область в МОМР из Ct (Seq NO 15-20 VD4 из SvD, Е, F, G, Ia и J соответственно). Удлиненная область VD4 (VD4^ext) соответствует аминокислотам 282-349 и составляет упомянутую высоко вариабельную область, примыкающую к высоко консервативным областям в МОМР из Ct (Seq NO 23-28 VD4^ext SvD, E, F, G, Ia и J соответственно).

Линеаризовании и

Слово "линеаризованный" в настоящем изобретении относится к аминокислотной цепи любой длины, в том числе первичному продукту трансляции, олигопептидам, коротким пептидам и их фрагментам, где аминокислота цистеин была замещена серином с целью препятствовать формированию дисульфидных связей между остатками цистеина.

Нейтрализующий эпитоп

Нейтрализующий эпитоп используется в данном документе предположительно для аминокислотной последовательности, которая определяет антигенную детерминанту, которая связана с антителом, и, в контексте инфекции, уменьшает инфекционность хламидийной нагрузки, например, путем блокирования взаимодействия бактерий с клетками-хозяевами, которое важно для развития бактериальной инфекции и заболевания, повышая бактериальный клиренс.

Нейтрализация

Нейтрализация охватывает любую биологическую активность бактерий, в том числе снижение эффективности или способности бактерий вызывать развитие инфекции или быть причиной заболевания или симптомов заболевания, подавления формирования ЕВ хламидий.

Нейтрализующие антитела

Антитела, которые связывают нейтрализующий эпитоп, описанный выше.

Полипептиды

Слово "полипептид" в настоящем изобретении должно иметь свое общепринятое значение. Оно означает аминокислотную цепь любой длины, в том числе первичный продукт трансляции, олигопептиды, короткие пептиды и их фрагменты, где аминокислотные остатки связаны ковалентными пептидными связями.

IFN-γ

Под выражением "IFN-γ" следует понимать гамма-интерферон. Измерение IFN-γ применяется в качестве показателя иммунологического Т-клеточного ответа.

Содержать

Везде в данном описании, если контекст не требует иного, выражение "содержать", или варианты его, такие как "содержит" или "содержащий", следует понимать как включение установленного элемента, или целого, или группы элементов или целых, но без исключения какого-либо другого элемента или целого, или группы элементов или целых.

Иммуногенная часть или фрагмент

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения полипептид включает иммуногенную часть или фрагмент полипептида, такую как эпитоп для В-клетки или Т-клетки.

Иммуногенная часть или фрагмент полипептида является частью полипептида, которая вызывает иммунный ответ у животного или человека, и/или в биологическом образце, определяемый с помощью любого из биологических анализов, описанных в данном документе. Иммуногенная часть или фрагмент полипептида может представлять собой Т-клеточный эпитоп или В-клеточный эпитоп.Иммуногенные части или фрагменты могут быть связаны с одной или несколькими относительно небольшими частями полипептида, они могут быть рассеяны по всей полипептидной последовательности или расположены в конкретных участках полипептида. Для нескольких полипептидов даже было показано, что эпитопы рассеяны по всему полипептиду, охватывая всю последовательность⁷¹.

Для того чтобы идентифицировать соответствующие Т-клеточные эпитопы, которые распознаются в ходе иммунного ответа, можно использовать способ "грубой силы": Поскольку Т-клеточные эпитопы являются линейными, делеционные мутанты полипептида будут, при систематическом их конструировании, указывать на то, какие области полипептида необходимы в иммунном распознавании, например, при подвержении этих делеционных мутантов, например, IFN-γ анализу, описанного в данном документе. Другой способ использует перекрывающиеся олигопептиды для обнаружения эпитопов МНС II класса, предпочтительно синтетических, имеющих длину, например, 20 аминокислотных остатков и произведенных из полипептида. Эти пептиды могут быть протестированы в биологических анализах (например, IFN-γ анализ, описанный в данном документе), и некоторые из них будут давать положительный ответ (и таким образом, будут иммуногенными) как доказательство присутствия в пептиде Т-клеточного эпитопа. Для обнаружения эпитопов МНС I класса является возможным прогнозировать какие пептиды будут связаны⁷² и затем производить эти пептиды синтетически и тестировать их с помощью соответствующих биологических анализов, например IFN-γ анализа, описанного в данном документе. Пептиды предпочтительно имеют длину, например, от 8 до 11 аминокислотных остатков, произведенных из полипептида. В-клеточные эпитопы могут быть определены путем анализа распознавания В-клетками перекрывающихся пептидов, охватывающих рассматриваемый полипептид, как, например, описано в Harboe et al⁷³.

Иммуногенный

Иммуногенный полипептид определяется как полипептид, который индуцирует иммунный ответ в биологическом образце или у особи, инфицированной в данное время или ранее хламидией.

Белки слияния

Под белком слияния следует понимать два или более полипептида, связанных между собой ковалентно. Белки слияния могут быть получены с улучшенными характеристиками полипептида. Например, все партнеры слияния, которые облегчают экспорт белка слияния при получении рекомбинантным способом (например, сигнальные пептиды), и партнеры слияния, которые облегчают очистку белка слияния (например, гистидиновые метки), и партнеры слияния, которые усиливают иммуногенность белка слияния, являются интересными вариантами. Партнером слияния, с целью усиления иммуногенности, может быть еще один полипептид, произведенный из С. trachomatis, такой как полипептид или фрагмент полипептида, или по меньшей мере один Т-клеточный эпитоп или В-клеточный эпитоп.

Фармацевтическая композиция

Фармацевтическая композиция определяется как любая вакцина (как терапевтическая, так и профилактическая) или любой диагностический реагент.

Вакцина, белок

Другая часть настоящего изобретения относится к вакцинной композиции, состоящей из белка слияния или нуклеиновой кислоты, кодирующей упомянутый белок слияния согласно настоящему изобретению. В целях обеспечения оптимальной эффективности такой вакцинной композиции, предпочтительно, чтобы она включала иммунологически и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или адъювант.

Эффективная вакцина, где белок слияния настоящего изобретения будет распознаваться организмом млекопитающего, включая человека, будет снижать бактериальную нагрузку в органах-мишенях, продлевать выживаемость и/или сокращать потерю веса после заражения вирулентными хламидийными бактериями по сравнению с не-вакцинированными особями.

Подходящие носители выбирают из группы, включающей полимер, с которым полипептид(ы) связан(ы) гидрофобным нековалентным взаимодействием, такой как пластик, например полистирол, или полимер, с которым полипептид(ы) связан(ы) ковалентно, такой как полисахарид или полипептид, например бычий сывороточный альбумин, овальбумин или гемоцианин фиссуреллы. Подходящие наполнители выбирают из группы, включающей разбавитель и суспендирующее средство. Адъювант предпочтительно выбирают из группы, включающей диметилдиоктадециламмония бромид (DDA), Quil А, поли 1:С, алюминия гидроксид, неполный адъювант Фрейнда, IFN-γ, IL-2, IL-12, монофосфорил липид A (MPL), трегалозы димиколат (TDM), трегалозы дибегенат (TDB) и мурамилдипептид (MDP), мономиколил глицерол (MMG) или их комбинацию. Предпочтительной комбинацией является катионная липосома, такая как DDA в сочетании с TDB и/или поли 1:С.

Приготовление вакцин, которые содержат пептидные последовательности в качестве активных ингредиентов в целом хорошо известно в данной области техники, о чем свидетельствуют патенты США 4608251; 4601903; 4599231 и 4599230, все они включены в данный документ посредством ссылки.

Терапевтическая вакцина

Изобретение также относится к применению полипептида или нуклеиновой кислоты настоящего изобретения для применения в качестве терапевтических вакцин, как было описано в литературных источниках, к примеру D. Lowry (Lowry et al 1999). Антигены с терапевтическими свойствами, могут быть идентифицированы на основании их способности уменьшать тяжесть Ct инфекции у экспериментальных животных или предотвращать реактивацию ранее перенесенной инфекции при введении в виде вакцины. Композицию, применяемую для терапевтических вакцин, могут получать согласно приведенному выше описанию для вакцин.

Настоящее изобретение описывает новые высоко иммуногенные вакцинные антигены с широкой нейтрализующей активностью на основе антител, которая защищает против различных серовариантов Chlamydia trachomatis. Нами показано, что повторяющиеся единицы определенных фрагментов из МОМР антигена обеспечивают высоко иммуногенные молекулы, которые мы обозначаем как иммуно-повторы. Вакцинация гомологическими иммуно-повторами, содержащими удлиненные фрагменты VD4 (охватывают вариабельный домен VD4 из МОМР и прилегающие консервативные примыкающие области) с различными адъювантами обеспечивает весьма высокие титры антител, и нами показано, что данные конструкты являются гораздо более эффективными, чем иммунизация одиночными единицами удлиненного фрагмента VD4. Усиленный эффект может наблюдаться одновременно в виде значительно повышенного титра, повышенной специфичности антител к поверхности бактерий, повышенной нейтрализующей активности, повышенного и расширенного Т-клеточного ответа и повышенной защиты от заражения гомологичным штаммом. Кроме того, нами показано, что технологию иммуно-повтора можно применять также для улучшения защиты от других серовариантов и их нейтрализации путем конструирования гетерологичных иммуно-повторов, основанных на удлиненных фрагментах VD4 разных серовариантов, таких как серовары D, Е, F и G (Фиг. 3).

Гетерологичные иммуно-повторы были высоко иммуногенными, и в дополнение увеличивали широту ответов антител, которая была связана с более широкой тонкой специфичностью ответа антител (измеряемого с помощью пептидного сканирования), который нацелен на более разнообразный спектр линейных эпитопов в области VD4, нежели гомологичные иммуно-повторы. Нами также показано, что высоко иммуногенные гетерологичные иммуно-повторы могут основываться на еще больших фрагментах, которые содержат в себе удлиненные фрагменты слияния VD1 и VD4 и мы подтвердили, что на животных моделях защита, активизированная данными гетерологичными иммуно-повторами, происходит преимущественно посредством антител. Так как существует общепризнанная необходимость в сильном компоненте CMI (например, Т-клеточном эпитопе) для эффективного защитного иммунного ответа против Ct, нами также было показано, что путем полного удлинения области VD4 с N-конца так, чтобы она включала область, богатую Т-клеточными эпитопами, мы можем создать иммуно-повторы, которые будут в одном конструкте сочетать способность вызывать выработку высокого титра нейтрализующих антител с сильным Т-клеточным ответом, устраняющим остаточную инфекцию. Нами также было показано, что иммуно-повторы можно сливать с антигенами Т-клеток, имеющими вакцинный потенциалом или смешивать с ними, и что эта комбинация обеспечивает как раннюю защиту против Ct, опосредованную антителами, так и эффективное устранение остаточных организмов, опосредованное CMI.

МОМР является важным защитным антигеном с общепризнанным потенциалом для Ct вакцин. Антиген МОМР, однако, является очень сложным антигеном для нацеливания на него вакцин, поскольку он имеет сложную структуру с многочисленными внутренними дисульфидными связями, где важные нейтрализующие эпитопы в рекомбинантных молекулах было чрезвычайно сложно вывести на поверхность. К тому же, антиген МОМР является высоко вариабельным и является основой для большинства серовариантов, обнаруженных в различных штаммах, вызывающих заболевания человека. Поэтому любая вакцина на основе интактного МОМР должна была бы включать ряд разных версий молекулы (по крайней мере, 4-5), чтобы охватить основные штаммы, вызывающие заболевания человека. Как описано выше, антиген МОМР включает 4 вариабельных области (VD1-4), из которых, в частности, VD1 и VD4 включают важные нейтрализующие эпитопы, но вакцины на основе фрагментов, представляющих эти области, были неспособны индуцировать достаточно высокие титры функциональных антител для оказания какого-либо влияния in vivo в исследованиях с заражением животных^{51 74}.

Технология иммуно-повторов настоящего изобретения решает эту проблему: Путем повтора важных вариабельных областей VD1 и/или VD4, примыкающих к консервативным последовательностям МОМР антигена, нами были получены иммуногены, стимулирующие образование экстраординарных уровней функциональных антител. Неожиданно мы также показали, что улучшенная иммуногенность может достигаться даже в гетерологичных конструктах иммуно-повторов, которые задействуют вариабельные области различных сероваров, отделенные промежутками между консервативными фрагментами, и эта стратегия обеспечивает широкий нейтрализующий ответ антител, который защищает от различных серовариантов. Более того, технология иммуно-повторов обеспечивает большое количество соответствующих Т-клеточных эпитопов, стимулирующих образование Т-клеток с прямой эффекторной функцией, а также способностью стимулировать усиленные вторичные иммунные ответы на прилегающие В-клеточные эпитопы.

Таким образом, наше изобретение показывает прорыв в разработке эффективных Ct вакцин с широким ответом и способностью нейтрализовать различные серовары.

Хорошо известно, что антигены с большим числом повторов и организованной структурой являются оптимальными для активации В-клеточного рецептора (BCR), приводят к повышению гуморального ответа и снижению зависимости от помощи Т-клеток. Об этом первоначально сообщалось для антигенов на основе натуральных полисахаридов различных патогенов (полисахарид пневмококка и полимеризованный флагеллин сальмонеллы), где предполагалось, что повторяющийся характер антигена запускает одновременно несколько BCR, тем самым снижая общий порог активации, который запускает производство антител плазматическими В-клетками без необходимости предварительной помощи Т-клеток. Такие антигены называются В-клеточными Т-независимыми антигенами 2 типа и в искусственных системах было показано, что они зависят от большого количества повторов (как правило, не менее 12-16⁷⁵), которые составляют минимальный эпитоп и которые расположены близко друг к другу. Это существенно отличается от нашей технологии повторов, в которой повторяются большие фрагменты (69 аминокислот, Mw>7 кДа) и эти фрагменты содержат как В-клеточные так и Т-клеточные эпитопы⁷⁶.

В отличие от предыдущих сведений⁷⁵, мы наблюдаем повышение всего с 4 повторами, которое не увеличивается далее с 8 повторами. Важно, что повторение консервативной последовательности с встроенными гипервариабельными областями усиливает ответы не только к повторяющемуся консервативному элементу, но, что важно, и к вариабельным вставкам. Молекулярный механизм, стоящий за этим неожиданным усилением, не совсем понятен, но, скорее всего, он связан с тем фактом, что многие важные эпитопы расположены на пересечениях вариабельных и консервативных областей, что, следовательно, может позволить одновременный запуск разных BCR, которые все возникают при некоторой степени распознавания общих консервативных частей эпитопа. Хотя данный механизм не полностью ясен, из него практически следует то, что технология гетерологичных иммуно-повторов позволяет осуществить синтез поливалентных иммуногенов, стимулирующих выработку разнообразного гуморального ответа, нацеленного на различные сероварианты.

Наши конструкты иммуно-повторов обеспечивают антигены с исключительной иммуногенностью по сравнению с предыдущими попытками применения вариабельных доменов МОМР Ct. Все предыдущие вакцины на основе VD из МОМР, несмотря на выработку антител с некоторыми функциональными возможностями, не могли вызвать выработку титров, которая бы конвертировалась в in vivo защиту против заражения хламидиями половым путем ^{51, 65 64}. В частности, стратегия гетерологичных иммуно-повторов решает очень фундаментальную проблему, встречающуюся у многих возбудителей, и дает возможность индуцировать разнообразные гуморальные ответы на разнообразные и вариабельные антигены.

Нуклеиновую кислоту настоящего изобретения, то есть нуклеиновую кислоту, кодирующую вышеупомянутые белки слияния, могут применять для осуществления in vivo экспрессии иммуногенных полипептидов, т.е. нуклеиновую кислоту могут применять в так называемых ДНК-вакцинах, рассмотренных в Ulmer et al, 1993, включенной в данный документ посредством ссылки.

При конструировании и подготовке плазмидной ДНК, кодирующей полипептид слияния, который будут применять определенно для ДНК-вакцинации, можно применять штамм-хозяин, такой как Е. coli. Плазмидную ДНК затем могут получать из суточных культур штамма-хозяина, несущего рассматриваемую плазмиду, и очищать ее с использованием, например, Qiagen Giga - набора для плазмидной колонки (Qiagen, Санта Кларита, Калифорния, США), включая этап очищения от эндотоксинов. Очень важно, чтобы плазмидная ДНК, применяемая для ДНК-вакцинации, не содержала эндотоксинов.

Следовательно, настоящее изобретение также относится к вакцине, содержащей нуклеиновую кислоту в соответствии с настоящим изобретением, вакцину обеспечивающую in vivo экспрессию иммуногенного полипептида у животного, в том числе человека, которому вводили вакцину, при этом количество экспрессированного полипептида является эффективным для придания существенно повышенной устойчивости к инфекциям, вызванным вирулентными бактериями у животного, в том числе человека.

Эффективность такой ДНК-вакцины можно усилить путем введения гена, кодирующего продукт экспрессии, вместе с фрагментом ДНК, кодирующим полипептид, который обладает способностью модулировать иммунный ответ.

Одну из возможностей для эффективной активации клеточного иммунного ответа можно реализовать путем экспрессии соответствующего иммуногенного полипептида в не патогенном микроорганизме или вирусе. Хорошо известными примерами таких микроорганизмов являются Mycobacterium bovis BCG, Salmonella и Pseudomonas, a примерами вирусов являются Vaccinia virus и Adenovirus.

Таким образом, еще одним важным аспектом настоящего изобретения является улучшение живой вакцины BCG, имеющейся в настоящее время, для которой одну или несколько копий последовательности ДНК, кодирующей один или несколько полипептидов слияния, определенных выше, включали в геном микроорганизма таким образом, чтобы позволить микроорганизму экспрессировать и секретировать полипептид слияния. Предполагается, что включение более одной копии последовательности нуклеиновой кислоты настоящего изобретения усиливает иммунный ответ.

Другая возможность заключается во включении ДНК, кодирующей полипептид слияния настоящего изобретения, в ослабленный вирус, такой как Vaccinia virus или Adenovirus (Rolph et al 1997). Рекомбинантный Vaccinia virus может быть введен в цитоплазму или ядро инфицированной клетки-хозяина и, следовательно, рассматриваемый полипептид слияния может индуцировать иммунный ответ, который, как предусматривается, индуцирует защиту против ТВ.

Хотя ДНК-вакцины были разработаны более 16 лет назад, клинические испытания, предшествующие фазе I и II с участием людей, редки. Тем не менее, были лицензированы две ветеринарные ДНК-вакцины; одна против вируса Западного Нила (у лошадей) и вторая против вируса инфекционного гематопоэтического некроза у лосося. Это показывает, что ДНК-вакцины, могут оказывать хорошие защитные эффекты, и что новые ДНК-вакцины не ограничены размером или видом животного. Большой успех ДНК-вакцин, наблюдаемый на мышиной модели для ДНК-вакцин первого поколения, плохо переносится на человека; тем не менее, исследователи недавно продемонстрировали защитные уровни антител, произведенные с помощью введения людям одной дозы ДНК-вакцины, кодирующей гемагглютинин, посредством генной пушки.

"Иммунизация нуклеиновой кислотой" или обычно предпочитаемое название "ДНК-вакцины" представляют собой инокуляцию антигена, кодирующего ДНК или РНК, в виде экспрессионных кассет или экспрессионных векторов, или включенными в вирусные векторы, с целью индукции иммунитета к генному продукту. Таким образом, в наше определение ДНК-вакцин мы включаем все типы систем доставки антигена, кодирующего ДНК или РНК. Ген вакцины может находиться в форме круглой плазмиды или линейной экспрессионной кассеты, только с ключевыми элементами, необходимыми для экспрессии (промотор, ген вакцины и сигнал полиаденилирования). Системы доставки могут чаще всего представлять собой депротеинизированную ДНК в буфере с адъювантом или без него, ДНК, связанную с наночастицами и/или в составе с соединениями, включающими адъювант, или вставленную в живые вирусные или бактериальные векторы, такие как Adenovirus, аденосателлитный вирус, альфавирус, поксвирусы, вирус герпеса и т.д. ДНК-вакцины являются весьма перспективными, так как они индуцируют как гуморальный, так и клеточный иммунитет без тех опасностей, что связаны с живыми вирусными вакцинами. В отличие от живых ослабленных вирусных вакцин, ДНК-вакцины могут быть доставлены в те же ткани или клетки, что и живой вирус, который должен связываться со специфическими рецепторами. Производство антигенов в их нативных формах улучшает подачу антигенов к иммунной системе хозяина. В отличие от живых ослабленных вакцин, ДНК-вакцины не инфекционны и не могут вернуться к вирулентности.

ДНК-вакцины имеют много преимуществ по сравнению с обычными вакцинами. Их можно производить в больших количествах за короткое время, что отменяет необходимость выращивания в яйцах, это экономически эффективно, воспроизводимо и конечный продукт не требует холодных условий хранения, поскольку ДНК стабильна и устойчива к перепадам температур. В настоящее время все лицензированные инактивированные вакцины являются эффективными для индукции гуморальных ответов антител, однако только живые ослабленные вирусные вакцины так эффективно индуцируют цитотоксический клеточный ответ.ДНК-вакцины также обладают этой способностью и, следовательно, индуцированный ответ может больше походить естественному ответу на вирусную инфекцию, чем у инактивированных вакцин в отношении специфичности и изотипов антител.

ДНК-вакцины индуцируют иммунный ответ, который сравним с приобретенным ответом на природную вирусную инфекцию, путем активации как гуморального, так и клеточного иммунитета. Широкий ответ на ДНК-вакцину является результатом кодируемых генов, экспрессирующихся в трансфицированной клетке-хозяине, индуцируя иммунный ответ как со стороны Th1, так и Th2. Производство антигенов в их нативной форме улучшает подход антигенов к иммунной системе хозяина.

Двумя наиболее распространенными типами введения ДНК-вакцины являются инъекция депротеинизированной ДНК в солевом растворе и инокуляции ДНК с помощью генной пушки (ДНК, нанесенную на твердые гранулы золота, вводят под давлением гелия). Внутримышечные инъекции ДНК в солевом растворе преимущественно вызывают ответ Th1 lgG2a, в то время как доставка с помощью генной пушки может запускать более значительный Th2 lgG1 ответ. Внутримышечно введенные плазмиды подвержены риску деградации под действием внеклеточных дезоксирибонуклеаз, однако, индуцированные ответы часто являются более долговечными, чем те, которые индуцировали способом генной пушки. Доказано, что вакцинация путем доставки ДНК в эпидермис с использованием генной пушки является наиболее эффективным способом иммунизации, вероятно, потому что кожа содержит все необходимые типы клеток, в том числе профессиональные антиген подходящие клетки (АРС), для запуска как гуморального, так и цитотоксического клеточного иммунного ответа (Лангерганса и дендритные клетки). У мышей полную защиту от летальной дозы вируса гриппа получили всего лишь с использованием 1 мкг ДНК. Стандартный вектор ДНК-вакцины состоит из рассматриваемого гена, клонированного в бактериальную плазмиду, сконструированную для оптимальной экспрессии в эукариотических клетках. Основные элементы включают: точку начала репликации, позволяющую продуцирование в бактериях, ген бактериальной устойчивости к антибиотикам, позволяющий проводить селекцию плазмиды в бактериальной культуре, сильный конструктивный промотор для оптимальной экспрессии в клетках млекопитающих (наиболее высокую экспрессию генов обеспечивают промоторы, произведенные из цитомегаловируса (CMV) или вируса обезьян), полиаденилированнная последовательность для стабилизации транскриптов мРНК, такая как бычий гормон роста (BHG) или обезьяний вирус полиаденилирования и сайт множественного клонирования для вставки гена антигена. Последовательность интрона А значительно улучшает экспрессию генов. Многие бактериальные векторы ДНК-вакцин содержат мотивы неметилированного цитидинфосфат-гуанозин (CpG) динуклеотида, которые могут запускать сильные врожденные иммунные ответы в организме хозяина. В последние годы было разработано несколько подходов к расширению и настройке иммунной реакции на конструкты ДНК-вакцин (ДНК-вакцины 2-го поколения). Например, для экспрессии двух генов одновременно применяли дицистронные векторы или плазмиды, экспрессирующие множественные гены. Были разработаны специфические промоторы, которые ограничивают экспрессию генов определенными тканями, и были сконструированы гены слияния цитокина/антигена для усиления иммунного ответа. Кроме того, гены могут быть кодон-оптимизированными для оптимальной экспрессии генов в хозяине, а интактные лидерные последовательности могут быть замещены оптимизированными лидерами, повышающими эффективность трансляции.

Введение ДНК-вакцины могут производить путем солевой или забуференной солевой инъекции депротеинизированной ДНК или РНК, или инъекции плазмидной ДНК или линейного гена, экспрессирующего ДНК-фрагменты, соединенные с частицами, или инокуляции с помощью генной пушки или доставки посредством вирусного вектора (вирусоподобной частицы), такого как Adenovirus, модифицированный вирус коровьей оспы Анкара (MVA), вирус коровьей оспы, аденосателлитный вирус (AAV), Alphavirus и т.д.

Подписи к фигурам:

Фигура 1. Модель МОМР (Серовар D, штамм: D/B-120) топологии мембраны основана на материалах Findlay et al⁷⁷. VD1, VD2, VD3 и VD4 отмечены черными линиями в последовательности АА и в изображенной линейной модели МОМР отделены промежутками с 5 постоянными сегментами (CS).

Фигура 2. Выравнивание аминокислотной последовательности Ct МОМР VD4^ext для сероваров D, Е, F, G, Ia и J. Последовательность серовара D была использована в качестве прототипа, а консервативные аминокислоты в других сероварах показаны как “.”. Вариабельный домен VD4, согласно Baehr et al (PNAS, 1988),³⁶ закрашен серым, а консервативный эпитоп TTLNPTIAG заключен в рамку.

Фигура 3. Модель МОМР (Серовар D, штамм: D/B-120) топологии мембраны основана на материалах Findlay et al. VD1^ext и VD4^ext, описанных в настоящем изобретении, показаны на фигуре закрашенными.

Фигура 4. Иллюстрация строения гомологичных и гетерологичных повторов. Иммуно-повторы представляют собой белки слияния, например, четырех VD4^ext областей, либо одного и того же серовара, гомологичные иммуно-повторы, либо разных сероваров, гетерологичные иммуно-повторы. Вариабельная VD4 область, в которой каждая VD4^ext область показана как заштрихованная.

Фигура 5. Усиленные и расширенные иммунные ответы после иммунизации гомологичными иммуно-повторами VD4^ext по сравнению с мономерной VD4^ext единицей.

Фигура 6. Конструкт, состоящий из гетерологичных иммуно-повторов SvD, Е, F и G, индуцирующий более сильный ответ на несколько сероваров по сравнению с гомологичными иммуно-повторами SvF.

Фигура 7. Тонкая специфичность ответов антител после иммунизации гетерологичным иммуно-повтором удлиненных VD4 единиц из SvD, Е и F (СТН89) по сравнению с конструктами, составленными из гомологичных иммуно-повторов (SvE^ext VD4)*4 и (SvF^ext.VD4)*4.

Фигура 8. Иммунизация гетерологичными иммуно-повторами, удлиненной VD4 из SvD, SvE и SvF (СТН89), вызывает раннюю Т-независимую защиту после заражения SvD.

Фигура 9. In vivo нейтрализация с использованием СТН89-специфической сыворотки.

Фигура 10. Связывание гетерологичных иммуно-повторов с рекомбинантным МОМР.

Фигура 11. Вакцинация гетерологичными иммуно-повторами VD1-VD4 областей из SvD, SvE и SVF (СТН88) по сравнению с вакцинацией одной VD1-VD4 единицей из SvD (СТН87)

Фигура 12. Связывание Т-клеточных антигенов с иммуно-повторами VD4

Фигура 13. Иммунизация коктейлем гетерологичного VD4 иммуно-повтора и молекулы слияния Т-клеточного антигена

Фигура 14. Сравнение CAF01 и квасцов в качестве адъювантной системы доставки.

Фигура 15. Вакцинация гетерологичными иммуно-повторами, состоящими из укороченных VD4^ext областей из SvD, SvE, SvF и SvG.

Фигура 16. Вакцинация гетерологичными иммуно-повторами, состоящими из удлиненных VD4^ext областей из SvD, SvE, SvF, SvG, SvIa и SvJ.

Материалы и методы

Культивирование С. trachomatis

Ct серовары D, E и F размножали в клетках Hela 229 (АТСС, Роквилл, Мэрилэнд, США). Клетки культивировали в среде RPMI 1640 (Gibco BRL, Гранд Айленд, Нью-Йорк, США), содержащей 5% фетальной телячьей сыворотки (Gibco BRL; инактивирована нагреванием), 1% об/об HEPES, 1% об/об L-глутамина, 1% об/об пирувата и 10 пг/мл гентамицина. Субконфлюэнтные монослои клеток Hela 229 в 6-луночных планшетах инфицировали 1,5 единицами, образующими включения, на клетку Ct серовара Е или F в 0,3 мл SPG-буфера/лунка. Планшеты центрифугировали в течение 1 ч в центрифуге Heraeus Multifuge 3S при 750 g и инкубировали на качалке в течение 2 ч при 35°C. Через 2 ч в каждую лунку добавляли 2 мл культивационной среды, обогащенной 5% глюкозы и 1 пг/мл циклогексимида и клетки дополнительно инкубировали в течение 72 ч при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в увлажненном воздухе.

Сбор Ct

Хламидий собирали через 72 ч после инфицирования. Клетки отделяли от лунок с помощью скребка для клеток и центрифугировали в течение 30 минут при 35000 g и 4°C. Осадок ресуспендировали в HBSS, обрабатывали ультразвуком на льду и центрифугировали при 500 g и 4°C в течение 15 минут. Супернатант собирали и хранили на льду, а осадок ресуспендировали до того же объема, как и раньше, и повторяли обработку ультразвуком и центрифугирование. Два супернатанта объединяли и центрифугировали в течение 30 минут при 30000 g и 4°C, а осадок ресуспендировали с помощью иглы и шприца в SPG-буфере (3 мл/планшет). После краткой обработки ультразвуком суспензию осторожно наслаивали на 30% раствор диатризоата (50 г меглюмина диатризоата, 7,7 г натрия диатризоата в 76 мл H₂O) и центрифугировали при 40000 g в течение 30 мин. После центрифугирования осадок ресуспендировали в SPG-буфере и хранили при -70°C. ВОЕ в сериях подсчитывали количественно путем титрования в клетках McCoy, а концентрацию в сериях определяли с помощью ВСА.

Методы подготовки антигена и слияния

Геномы сероваров D, Е, F и G С. trachomatis общедоступны (NCBI - GenBank). Все гены, кодирующие С. trachomatis, антигены и слияния получали синтетически клонированием в бактериальной системе экспрессии белка E.coli (ДНК 2.0). Вектор рЕТ411 был использован для экспрессии рекомбинантного С. trachomatis белка Е. coli с гистидиновой аффинной меткой. Бактериальным хозяином был BL21-STAR™. Е. coli выращивали при 37°C до достижения логарифмической фазы OD600 ~0,5, и экспрессию белка индуцировали в течение 4 часов и клетки собирали путем центрифугирования (6000 g в течение 15 мин). Е. coli лизировали с помощью реагента Bugbuster (Novagen), содержащего бензоназу, раствор rLysozyme и коктейль ингибиторов протеаз I (Calbiochem). Тельца включения выделяли с помощью центрифугирования (10000 g в течение 10 мин). Осадок растворяли в 50 mM NaH₂PO₄, 0,4 М NaCl, 8 М мочевины, 10 mM имидазола, pH 7,5 и помещали в колонку HisTrap HP (Amersham Biosciences) и связанные белки элюировали путем применения градиента от 50 до 500 mM имидазола. В зависимости от антигена и изоэлектрической точки слияния их далее очищали с помощью ионообменной хроматографии. Концентрации белка определяли с помощью анализа белка ВСА (Pierce).

Животные

Самки мышей B6C3F1, 8-12-недельного возраста, были получены из Harlan Laboratories. Животных содержали в стандартных условиях окружающей среды и снабжали стандартным кормом и водой без ограничений. Использование мышей регулируется правилами, установленными министерством юстиции Дании (Lov om , jvf lovbekendelser №726 af 9 сентября 1993 года), и комитетами по защите животных. Подробное описание экспериментов было утверждено на собрании регионального комитета по этической экспертизе (2012-15-2934-00100), проведенной заявителем.

Иммунизация

Мышей иммунизировали 3 раза с промежутками между иммунизациями в 14 суток. Полипептиды эмульгировали в CAF01 и вводили одновременно путем подкожного и интраназального введения. Вакцины, введенные обоими путями, включали 5 мкг пептида (см. выше), эмульгированного в 250 мкг DDA и 100 мкг TDB. В качестве отрицательного контроля вводили DDA/TDB отдельно, без пептида.

Хламидия-специфические клеточные ответы

Лимфоциты крови или спленоциты были очищены. Лимфоциты крови были отобраны у 8 мышей в каждой группе, а спленоциты культивировали отдельно (n=4) и выращивали в трех экземплярах в круглодонных микротитрационных планшетах (Nunc, Дания), содержащих 2×10⁵ клеток/лунка в объеме 200 мкл RPMI-1640, обогащенной 5×10^-5 М 2-меркаптоэтанола, 1 mM глутамина, 1% пирувата, 1% пенициллина-стрептомицина, 1% HEPES и 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS) (Invitrogen, Дания). Клетки повторно были стимулированы отдельными антигенами в 1-10 пг/мл или VD1 и VD4 пептидных пулов (2 пг/мл каждого пептида). Стимуляцию с конконовалином А (5 мкг/мл) или средой применяли в качестве положительного контроля жизнеспособности клеток и, соответственно, отрицательного контроля. После 72 ч инкубации при 37°C в 5% CO₂, супернатанты собирали и хранили при -20°C перед использованием. Количества секретированного IFN-γ определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).

Сывороточные антитела

В разные моменты времени после последней вакцинации у мышей брали кровь и отделяли сыворотку с помощью центрифугирования. С помощью ELISA сыворотку тестировали на реактивность на Ct поверхности (SvD, SvE и SvF), против SvE VD4 мономера и против пептидов (Таблица 4 и 5), охватывающих VD4 область SvD, SvE и SvF. Вкратце, планшеты покрывали антигеном (1 до 10 мкг/мл) при 4°C в карбонатном буфере в течение ночи, блокировали с помощью BSA и промывали. Планшеты затем инкубировали с предварительно разбавленными образцами при 4°C в течение ночи, промывали и инкубировали с вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой, в течение 1 часа. Реакции визуализировали с помощью инкубации с ТМВ субстратом и останавливали реакцию с помощью серной кислоты и измеряли при 450 нм.

На основании ELISA реактивность 9mer перекрывающегося с панелью пептидов, охватывающей VD4 область SvD (SvE) (Таблица 6) и SvF (Таблица 7), были произведены незначительные изменения. Вкратце, планшеты обрабатывали стрептавидином и покрывали биотинилированными пептидами, блокировали в течение 2 ч при комнатной температуре сухим обезжиренным молоком и промывали. Планшеты затем инкубировали с предварительно разбавленными (1:100) образцами сыворотки в течение 2 ч при комнатной температуре, промывали и инкубировали с вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой, в течение 1 часа. Реакции были визуализированы с помощью инкубации с ТМВ субстратом и реакцию останавливали с помощью серной кислоты и измеряли при 450 нм.

Анализ нейтрализации

Клетки HaK были выращены до степени смыкания монослоя в 96-луночных круглодонных микротитрационных планшетах в RPMI 1640, обогащенной 5% фетальной телячьей сыворотки (Gibco BRL; инактивирована нагреванием), 1% об./об. HEPES, % об./об. L-глутамина, 1% об./об. пирувата и 10 пг/мл гентамицина.

Исходные культуры Chlamydia были предварительно оттитрованы и разведены до 3×10⁶ IFU/мл для SvE, 2×10⁶ IFU/мл для SvD и 5×10⁶ IFU/мл для SvF. Сыворотка (объединенную), отделенная от вакцинированных мышей, была инактивирована нагреванием при 56°C в течение ч, разведена в 2-4 раза и 4-5-кратно оттитрована. 80 мкл бактериальной суспензии было смешано с 80 мкл сыворотки (+/- 20 г/мл пептида) и инкубировано в течение 30 мин при 37°C на медленно качающейся платформе и затем 50 мкл суспензии было инокулировано на предварительно подготовленные клетки HaK в двух параллелях. Чтобы это осуществить, из монослоев HaK удаляли среду и добавляли 100 мкл вышеуказанной среды, обогащенной 0,5% глюкозы и 10 пг/мл циклогексамида с последующим добавлением 50 мкл сыворотки/бактериальной суспензии. Планшеты были инкубированы при 35°C на медленно качающейся платформе, затем инокулят удаляли и добавляли 100 мкл вышеуказанной среды, обогащенной 0,5% глюкозы и 10 пг/мл циклогексимида. Затем планшеты были инкубированы в течение 24 ч при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в увлажненном воздухе. После инкубации среда была удалена и монослои были фиксированы 96% этанолом в течение 10 мин. Включения были визуализированы путем окрашивания поликлональной сывороткой кролика, содержащей антитела к СТ755, произведенной в нашей лаборатории, с последующей обработкой FITC-конъюгированным свиным анти-кроличьим иммуноглобулином (Dako). Фоновое окрашивание было выполнено с помощью пропидий иодида (Invitrogen).

Вагинальное заражение и вагинальная хламидийная нагрузка

За десять и за 3 суток до заражения Ct сероваром D, эстральный цикл был синхронизирован с помощью инъекции 2,5 мг медроксипрогестерона ацетата (Depo-Provera; Pfizer). Через шесть недель после окончательной вакцинации, мыши были заражены интравагинально с помощью 4-8×10⁵ IFU Ct серовара D в 10 мкл SPG-буфера. Вагинальные мазки были получены на 3, 7, 10 и 14 сутки после инфекции. Мазки встряхивали на вортексе со стеклянными шариками в 0,6 мл SPG-буфера и хранили при -80°C до анализа. Инфекционная нагрузка была определена согласно описанию в ¹⁷. Вкратце, монослои McCoy клеток были инфицированы с помощью титрованного объема суспензии мазка в двух параллелях. Планшеты были центрифугированы при 750×g в течение 1 ч при комнатной температуре с последующей инкубацией при 35°C в течение 2 ч. Затем инфекционная среда была заменена свежей средой и клетки инкубировали при 37°C в течение 30 ч. Включения были визуализированы путем окрашивания поликлональной сывороткой кролика, содержащей антитела к СТ681, произведенной в нашей лаборатории, с последующей обработкой FITC-конъюгированным свиным антикроличьим Ig (Dako, Глотструп, Дания). Фоновое окрашивание было выполнено с помощью пропидий иодида (Invitrogen, Таатструп, Дания). Включения были подсчитаны путем наблюдения с помощью флуоресцентной микроскопии по меньшей мере 20 отдельных полей зрения на каждую лунку.

Извлечение CD4+ и CD8+ Т-клеток

Моноклональные антимышиные CD4 (клон GK1.5) и антимышиные CD8 (клон YTS156 и YTS169 - подарок от Стивена Кобболда)^{78, 79} были очищены от гибридома супернатантов, произведенных в нашей лаборатории, с использованием колонок HiTrap protein G HP (GE-Healthcare Life Sciences, Дания). Очищенный IgG был диализирован против PBS, отфильтрован через фильтр 0,22 мкм и концентрация белка была определена с помощью OD 280 нм. У мышей были извлечены CD4+ или CD8+ Т-клетки с помощью 4 инъекций 250-300 пг очищенного анти-CD4 или смеси анти-CD8 антител на -7, -4, -1 и +2 и +6 день относительно дня инфицирования. Истощения CD4+ или CD8+ Т-клеток были верофицированы с помощью FACS-анализа на PBMCs через 1 день после инфицирования с использованием FITC-конъюгированного анти-CD4 антитела (клон RM4-4) и РЕ-конъюгированного анти-CD8 антитела (клон 53-6) (BD Biosciences, Дания).

In vivo истощение

Исходная культура Chlamydia серовара D предварительно была оттитрована и разведена до 8×10⁴ IFU/мкл, смешана 1:1 с сывороткой, взятой у мышей, иммунизированных гетерологичным VD4 иммуно-повтором SvD-SvE-SvF (СТН89). За десять и за 3 суток до заражения Ct сероваром D, астральный цикл был синхронизирован с помощью инъекции 2,5 мг медроксипрогестерона ацетата (Depo-Provera; Pfizer). Мыши были заражены интравагинально с помощью 10 мкл вышеупомянутой смеси (4×10⁵ IFU Ct серовара D). Вагинальные мазки были получены на 3, 7 и 10 день после заражения.

Статистический анализ

Статистический анализ был выполнен с использованием GraphPad Prism 4. Медианы вагинальной Chlamydia нагрузки были проанализированы с использованием Краскела-Уоллиса с последующей повторной проверкой Данна или Манна-Уитни.

Пример 1: Усиленные иммунные ответы после иммунизации гомологичными иммуно-повторами VD4^ext по сравнению с мономерной VD4^ext единицей.

Введение

В данном случае мы выбрали полипептидные единицы, содержащие удлиненные VD4 фрагменты серовара Е (последовательность см. на Фиг. 2) (SvE VD4^ext). Чтобы усилить иммунный ответ против этих доменов мы разработали рекомбинантные полипептиды, где SvE VD4^ext единица была представлена повторяющимся образом. Чтобы исследовать, может ли повторяющаяся форма конструкта повышать гуморальный ответ по сравнению с мономерной формой, мы разработали рекомбинантные полипептиды, в которых единицы были представлены или в виде одной единицы или повторяющимся образом. Для серовара Е (SvE) были сконструированы мономерная удлиненная единица VD4 (SvE VD4^ext)*l (CTH181), четыре ее иммуно-повтора (SvE VD4^ext)*4 (CTH527) и восемь ее иммуно-повторов (SvE VD4^ext)*8 (СТН526). Эти гомологичные иммуно-повторные конструкты были составлены с адъювантом CAF01 и применены для вакцинации мышей; каждая мышь была вакцинирована 2×5 пг пептида, так чтобы количество VD4 было одинаковым. Иммуногенность конструктов была изучена с помощью ELISA против SvE VD4^ext, пептидов, охватывающих SvE VD4^ext и бактериальной поверхности хламидий.

Результаты

Шесть мышей из группы были иммунизированы 2 раза с промежутками между иммунизациями в 14 дней. Вакцины (2×5 пг) были эмульгированы в CAF01 и введены одновременно подкожно и интраназально. В определенные моменты времени после последней вакцинации была взята кровь и уровни антител против удлиненных VD4 единиц из SvE и против бактериальной поверхности SvE были измерены с помощью ELISA. Вакцинация одной единицей VD4^ext (мономерный VD4^ext, СТН181) индуцировала более низкие уровни VD4^ext специфических антител по сравнению с уровнем, индуцированным после иммунизации гомологичными иммуно-повторами, состоящими из 4 VD4^ext повторов (SvE VD4^ext)*4 (Фиг. 5А). Более высокий гуморальный иммунный ответ наблюдался после иммунизации с (SvE VD4^ext)*4, приводил к более сильному распознаванию бактериальной поверхности по сравнению с сывороткой, взятой от мышей, иммунизированных (VD4^ext)*1 (Фиг. 5В). Ответ на 20 тег пептиды с перекрыванием 10аа, охватывающим удлиненную VD4 область (Таблица 4), также был усилен, обеспечивая расширенный характер распознавания эпитопа в (VD4^ext)*4 гомологичных иммуно-повторных группах по сравнению с группой мышей, иммунизированных мономерной VD4^ext единицей при испытании в разведении сыворотки 1:500 (Фиг. 5С). В группе, иммунизированной мономерным конструктом, ответ был нацелен исключительно на центральную область, содержащую эпитоп TTLNPTIAG, в связи с чем, иммунизация гомологичным иммуно-повтором экспонировала несколько В-клеточных эпитопов, расположенных как выше, так и ниже этого эпитопа, обеспечивая многообразный характер распознавания различных эпитопов. Мы продолжали, исследуя, были ли иммуно-повторы 8 (SvE VD4^ext)*8 (СТН526, SEQ NO 30) более иммуногенными, чем иммуно-повторы 4 (SvE VD4^ext)*4. Эти два конструкта индуцировали схожие уровни антител против удлиненной VD4 единицы и против бактериальной поверхности SvE.

Вывод

Нами показано, что путем иммунизации иммуно-повторами удлиненных VD4 единиц серовара Е мы можем значительно повысить гуморальный иммунный ответ, определяемый как титром (Фиг. 5 А&В), так и широтой ответа (Фиг. 5С), направленного против удлиненной VD4 единицы, который приводит к сильной реактивности по отношению к бактериальной поверхности. Нами не установлены повышенные титры антител и титры нейтрализации при возрастании числа повторов от 4 до 8.

Пример 2: Конструкт, состоящий из гетерологичных иммуно-повторов из SvD, Е, F и G (СТН518), индуцирующий сильный ответ на несколько сероваров по сравнению с гомологичными иммуно-повторами из SvF.

Введение

Мы исследовали на сколько иммунизация с гетерологичным иммуно-повтором, состоящим из удлиненных VD4 единиц из SvD, SvE, SvF и SvG (СТН518), сохраняющая сильную иммуногенность и была способна индуцировать более широкий гуморальный иммунный ответ с распознаванием поверхности многих сероваров по сравнению с иммунизацией гомологичным иммуно-повтором, составленным из удлиненных VD4 единиц SvF (SvF VD4^ext)*4, (СТН529). Эти иммуно-повторные конструкты были составлены с адъювантом CAF01 и применены для вакцинации мышей. Иммуногенность конструктов против бактериальной поверхности сероваров D, Е и F была изучена с помощью ELISA.

Результаты

Гетерологичные иммуно-повторы вызывали гуморальный иммунный ответ, который распознавал поверхность штамма серовара F на таком же высоком уровне, как ответ, обнаруженный с гомологичным иммуно-повтором из SvF. Тем не менее, при иммунизации гетерологичным иммуно-повтором, включающим удлиненные VD4 области из четырех серотипов (SvD, SvE, SvF, SvG), мы наблюдали значительно повышенный титр к D и Е серовариантам по сравнению с гомологичным иммуно-повтором из серовара F (Фиг. 6).

Вывод

Иммунизация конструктом, состоящим из иммуно-повторов гетерологичных удлиненных VD4, индуцировала широкий ответ, распознающий поверхность нескольких сероваров (D, Е и F), при этом сохраняя выраженную иммуногенность гомологичного иммуно-повтора.

Пример 3: Специфичность гуморальных иммунных ответов после иммунизации гетерологичным иммуно-повтором удлиненных VD4 единиц сероваров D, Е и F (СТН89) по сравнению с конструктами, состоящими из гомологичного иммуно-повтора (SvE^ext VD4)*4, (SvF^ext VD4)*4 и ранее опубликованного пептида A8-VD4⁶⁵.

Введение

Мы исследовали специфичность иммунного ответа после иммунизации гетерологичным повтором удлиненных VD4 доменов из SvD, SvE, SvF (СТН89) по сравнению с иммунизацией гомологичными иммуно-повторами, состоящими из удлиненных VD4 повторов серовара Е (SvE^extVD4)*4 (СТН527), SvF (SvF^extVD4)*4 повторов (СТН524) и A8-VD4 пептида. Эти конструкты были составлены с адъювантом CAF01 и применены для вакцинации мышей. Иммуногенность конструктов была изучена с помощью ELISA против пептидной панели (длиной 9 и 20 АА), охватывающей VD4 область D, Е и F (Таблицы 4-7). Сыворотку (от 6-8 мышей) была протестирована и ответ выше фонового, но ниже OD=1,0 обозначался открытым прямоугольником, ответы выше 1,0 обозначались закрашенным прямоугольником. Длина прямоугольника обозначает область, распознаваемую антителами.

Результаты

Все конструкты индуцировали высокие уровни гуморального иммунного ответа на консервативную TTLNPTIAG часть VD4^ext, расположенную в вариабельном домене (VD). В целом антитела, вырабатываемые с помощью гомологичных иммуно-повторов, были превосходящими в распознавании их репрезентативной гомологической VD4^{ext области, в то время как было очевидно, что, когда эти конструкты были протестированы против пептидов, охватывающих VD4ext из другого серовара, их спектр распознавания эпитопов был ограничен, например, распознаванием VD4 области серовара Е сывороткой животных, иммунизированных конструктом (SvFext VD4)*4 (Фиг. 7А и С) (и наоборот) (Фиг. 7В и С). Антитела, выработанные после иммунизации гетерологичными иммуно-повторами (СТН89), распознавали гораздо более широкий спектр эпитопов, нежели сыворотки животных, иммунизированных гомологичными иммуно-повторами и A8-VD4 (7А, В, С и D). Данный конструкт был способен охватывать спектр эпитопов, охватывающий как серовар Е, так и F, на уровне (или лучшем), чем достигался посредством иммунизации гомологичными иммуно-повторами.}

Чтобы продемонстрировать, был ли способен пептид из 17 АА, представляющий центральный VD4 пептид , конкурировать с организмами С. trachomatis за специфическое СТН89 связывание антител, был проведен сравнительный анализ нейтрализации. Различные концентрации СТН89 и А8-VD4 специфичной сыворотки были смешаны с пептидом в концентрации 20 пг/мл (Фиг. 7D). Результаты показывают, что в отличие от A8-VD4 специфичной сыворотки, пептид был не способен полностью элиминировать нейтрализующую способность СТН89 специфичной сыворотки, указывая на то, что эта сыворотка нацелена на более широкий спектр нейтрализующих эпитопов.

Вывод

Иммунизация иммуно-повторами гетерологичных удлиненных VD4 индуцировала широкий ответ, распознающий как консервативные, так и серовар специфические части VD4 области, транслируясь в более широкий спектр нейтрализующих эпитопов.

Пример 4: Иммунизация гетерологичными иммуно-повторами удлиненной VD4 из SvD, SvE и SvF (СТН89) вызывает раннюю Т-клеточную независимую защиту после SvD заражения.

Введение

С целью изучения эффекторных механизмов, отвечающих за раннюю защиту, наблюдаемую после вакцинации VD4 повторяющимися единицами, мыши вакцинировались СТН89 будучи истощенными Т-клетками до заражения и способность индуцировать раннюю защиту была сравнена с истощенными и не истощенными мышами.

Результаты

Восемь мышей из группы были иммунизированы 3 раза с промежутками между иммунизациями в 14 дней. Вакцину (2×5 пг) были эмульгированы в CAF01 и вводились одновременно подкожно и интраназально. В определенные моменты времени после последней вакцинации у мышей была взята кровь и были измеряны гуморальные иммунные ответы против хламидий, титр нейтрализации и in vivo защита при истощении Т-клеток и без него. Истощение субпопуляции Т-клеток устраняло Т-клеточный ответ на СТН89 (Фиг. 8А). СТН89 вызвала сильный гуморальный иммунный ответ (Фиг. 8В), который распознавал поверхность серовара D (Фиг. 8С) и был способен нейтрализовать бактерии in vitro с 50% титром нейтрализации, равным примерно 1:10³ (Фиг 8D). Тем не менее, мы все же обнаружили значительную защиту на 3 день после заражения в истощенных Т-клетках мышей (Рис. 8Е), указывающую на in vivo роль для антител, распознающих VD4 единицу в ранней защите от хламидий. Наконец, нами было показано, что СТН89 сыворотка также была способна нейтрализовать SvE и SvF инфекцию с очень высокими 50% титрами нейтрализации на уровне, достигнутом с SvD (Фиг. 8D).

Выводы

Иммуно-повтор генерирует Т-клеточную независимую раннюю защиту против вагинального заражения сероваром D, указывая на in vivo роль VD4 специфических антител.

Пример 5: In vivo нейтрализация с использованием СТН89-специфической сыворотки

Введение

С целью исследовать, может ли in vitro нейтрализация быть транслированной для защитного эффекта, опосредованного сывороткой in vivo, мы затем исследовали могут ли SvD бактерии, покрытые антителами, генерируемыми после СТН89 иммунизации, нейтрализовывать/подавлять инфекцию in vivo по сравнению с сывороткой интактных мышей.

Результаты

Бактерии SvD были смешаны с сывороткой, полученной от мышей, иммунизированных СТН89, или сывороткой, полученной из интактных мышей. Depro-provera обработанные мыши затем были инфицированы с помощью 4×10⁵ бактерий. Мыши, инфицированные SvD, покрытые СТН89 сывороткой, эффективно сдерживали репликацию бактерий по сравнению с мышами, зараженными SvD, покрытыми интактной сывороткой. У шести из 8 мышей инфекция была устранена на 7 и 10 день по сравнению с 2 и 3 соответственно в контрольной группе (Фиг. 9).

Вывод

Сыворотка, выработанная после иммунизации гетерологичным VD4 иммуно-повтором, эффективно блокирует инфицирование мышей SvD по сравнению с сывороткой, полученной от интактных мышей.

Пример 6. Слияние рекомбинантного МОМР с иммуно-повторами гетерологичных удлиненных VD4.

Введение

МОМР является целью как для гуморального, так и клеточного иммунного ответа, однако, несмотря на относительный успех рефолдинговых нативных МОМР вакцин в выработке нейтрализующих антител и защите против инфекции^{54, 56}, экспериментальные вакцины на основе рекомбинантного МОМР (rMOMP) не дали результатов. Мы разработали рекомбинантный МОМР, охватывающий от 56 до 349 аминокислот, включающий все вариабельные домены (СТН521). Мы также выбрали единицы полипептида, состоящие из удлиненных фрагментов VD4 (охватывающие вариабельный домен VD4 МОМР и смежные консервативные фланкирующие области) серовара D, Е, F и G (СТ518). В итоге был сконструирован гибрид, в котором СТН521 был слит с СТН518 (СТ522) (Фиг. 10).

Результаты

Восемь мышей на группу иммунизировали 3 раза с промежутками между иммунизациями в 14 суток. Вакцины эмульгировали в CAF01 и вводили одновременно путем подкожного (5 мкг) и интраназального (5 мкг) введения. После вакцинации отбирали образцы крови и измеряли уровни антител против единицы VD4^ext, рекомбинантного МОМР и против бактериальной поверхности. Антитела, выработанные после иммунизации СТ522 и СТ518, распознавали область VD4 (Фиг. 10A) и бактериальную поверхность (Фиг. 10С) на гораздо более высоком уровне по сравнению с сывороткой, полученной после иммунизации СТ521. Более того, антитела после СТН518 и СТН522 были способны нейтрализовать инфекцию SvD на таком же уровне, что и СТН521, или намного более высоком (Фиг. 10D).

Вывод

Слияние рекомбинантного МОМР с иммуно-повторами гетерологичных удлиненных VD4 приводит к образованию молекулы, которая вызывает такой же ответ со стороны функциональных антител, что и иммуно-повтор сам по себе.

Пример 7: Вакцинация гетерологичными иммуно-повторами областей VD1^ext-VD4^ext из SvD, SvE и SvF (СТН88) по сравнению с вакцинацией одной единицей VD1-VD4 из SvD (СТН87).

Введение

Затем мы проводили изучение того, возможно ли слить другую область VD с удлиненной областью VD4 и по-прежнему сохранять способность индуцировать нейтрализующие антитела. Поэтому были разработаны конструкты, где удлиненная версия области VD1 была связана с удлиненной областью VD4. Мы произвели как гомологичную единицу, составленную из удлиненных единиц VD1 и VD4 из SvD (СТН87), так и гетерологичный иммуно-повтор, состоящий из удлиненных единиц VD1 и VD4 из разных сероваров (D, Е и F, СТН88).

Результаты

12 мышей на группу иммунизировали 3 раза с промежутками между иммунизациями в 14 суток. Вакцины эмульгировали в CAF01 и вводили одновременно путем подкожного (5 мкг) и интраназального (5 мкг) введения. Антитела от мышей, иммунизированных СТН87, распознавали бактериальную поверхность как SvD, SvE, так и SvF (Фиг. 11А); при этом наиболее высокие титры наблюдались против гомологичного штамма SvD, а наиболее низкие титры - против самого отдаленного SvF. Иммунизация иммуно-повторами гетерологичных единиц VD1^ext-VD4^ext привела к значительно более высоким уровням антител против бактериальной поверхности по сравнению с мономерным конструктом и расширила ответ, приведя к повышению титров в 6-12 раз против SvD и SvE и почти в 25 раз против SvF (Фиг. 11А). Способность этих антител нейтрализовать инфекцию при анализе нейтрализации in vitro была еще более улучшенной, поскольку сыворотка животных, иммунизированных мономерным конструктом VD1^ext-VD4^ext от серовара D, имела лишь минимальную способность к нейтрализации по сравнению с гетерологичным конструктом иммуно-повтора VD1-VD4 с титром нейтрализации 1:2000 (Фиг. 11В.). В итоге вакцинация гетерологичным конструктом иммуно-повтора VD1^ext-VD4^ext весьма эффективно защищала от заражения SvD в модели вагинального заражения (Фиг. 11С).

Вывод

Нами показано, что путем иммунизации иммуно-повторами гетерологичных единиц VD1^ext-VD4^ext из сероваров D, Е и F, мы можем значительно повысить гуморальный иммунный ответ, нацеленный против бактериальной поверхности всех трех серовариантов. Важно отметить, что нами также показано, что при вакцинации гетерологичным иммуно-повтором, мы наблюдаем избирательно повышенное увеличение распознавания поверхности для серовара F (в 25 раз против 6-12 раз для сероваров D и Е), которое указывает на то, что гетерологичные иммуно-повторы не только увеличивают уровни антител против общих эпитопов, но и против специфических эпитопов серовара F. Нами показано, что антитела, индуцированные иммуно-повторами гетерологичных областей VD1-VD4 (СТН88) генерировали in vitro титры нейтрализации, которые приводили к ранней защите in vivo по сравнению с одной единицей VD1-VD4 из SvD (СТН87) (Фиг. 11С).

Пример 8: Связывание Т-клеточных антигенов с иммуно-повторами VD4

Введение

Поскольку существует общепризнанная необходимость в CMI-компоненте эффективного защитного иммунного ответа против Chlamydia trachomatis, впоследствии мы проводили исследование того, возможно ли гетерологичные иммуно-повторы слить с Т-клеточными антигенами с вакцинным потенциалом. Наша задача заключалась в том, чтобы обеспечить как раннюю защиту против Ct, опосредованную антителами, так и эффективное CMI-опосредованное устранение остаточных организмов. Конструкты, состоящие из СТ043 и частей СТ414 и СТ681, сливали с иммуно-повторами гетерологичных VD1-VD4 (СТН91).

Результаты

12 мышей на группу иммунизировали 3 раза с промежутками между иммунизациями в 14 суток. Вакцины (2×5 мкг) эмульгировали в CAF01 и вводили путем подкожного и интраназального введения. В определенные моменты времени после последней вакцинации у мышей брали кровь и измеряли гуморальные иммунные ответы и титры нейтрализации. Антитела, выработанные после иммунизации СТН91 и СТН88, распознавали область VD4^ext на подобном уровне (Фиг. 12А), а сыворотка, выделенная из обеих групп, могла нейтрализовать инфекцию SvD (Фиг. 12В). По сравнению с мышами, иммунизированными СТН88, Т-клеточный ответ на СТН91 был более сильным, с распознаванием как СТ414, так и СТ043 (Фиг. 12С). Этот Т- и В-клеточный ответ приводил к значительной защите на 3 сутки после заражения для обеих групп, но на 7 и 10 сутки после инфицирования группа, вакцинированная слитыми мишенями для Т- и В-клеток (СТН91), индуцировала более высокие уровни защиты по сравнению с СТН88 (Фиг. 12D).

Вывод

Мы смогли слить Т-клеточные антигены с повторяющимися областями VD и по-прежнему поддерживать способность индуцировать раннюю защиту и, более того, эти конструкты индуцировали эффективное CMI-опосредованное устранение остаточных организмов, приводя к высоким уровням защиты на 7 сутки после инфицирования.

Пример 9: Иммунизация коктейлем гетерологичного иммуно-повтора VD4 и молекулы слияния Т-клеточного антигена

Введение

Затем мы проводили исследование того, возможно ли иммуно-повторы смешать с Т-клеточными антигенами с вакцинным потенциалом и по-прежнему обеспечивать как раннюю, опосредованную антителами, защиту против Ct, так и эффективное CMI-опосредованное устранение остаточных организмов. Поэтому мы проводили исследование того, возможно ли смешать сильный Т-клеточный гибрид, составленный из СТ043, части СТ414 и СТ681 (СТН93), с СТН89 (Фиг. 13А) и по-прежнему поддерживать способность нейтрализовать бактерии SvD in vitro и индуцировать раннюю защиту против вагинального заражения.

Результаты

12 мышей на группу иммунизировали 3 раза с промежутками между иммунизациями в 14 суток. Вакцину (2×5 мкг) эмульгировали в CAF01 и вводили одновременно путем подкожного и интраназального введения (Фиг. 13). Антитела, выработанные после иммунизации СТН89 или смесью СТН89 и СТН93, интенсивно распознавали области VD4 (Фиг. 13В) и нейтрализовали бактерии с подобными 50% титрами нейтрализации (Фиг. 13С). Намного меньшие уровни распознавания VD4 и нейтрализации отмечались после вакцинации слиянием с Т-клеточным антигеном (СТН93, Фиг. 13D), хотя эти молекулы также состояли из МОМР (СТ681) и, следовательно, потенциально - из тех же нейтрализующих эпитопов. Эта молекула также производила очень низкие уровни распознавания эпитопа TTLNPTIAG (данные не показаны). Это явно подчеркивает ограниченность полноразмерной рекомбинантной МОМР в качестве вакцинного антигена для индукции нейтрализующих антител, как сообщалось ранее. Как СТН89, так и коктейль вакцин СТН89 и СТН93 индуцировали защиту на 3 сутки после инфицирования (Фиг. 13Е). В отличие от этого, мыши, вакцинированные СТН93, не индуцировали значительной защиты на 3-й сутки после инфицирования. На 7 сутки после инфицирования обе вакцины, в том числе сильная, нацеленная на Т-клетки (СТН93), индуцировали значительный уровень защиты (Фиг. 13D и Е).

Выводы

Мы смогли смешать гетерологичные повторы VD4 с сильными Т-клеточными антигенами без потери нейтрализации in vitro и ранней защиты in vivo от заражения сероваром D. Кроме того, смесь В- и Т-клеточных мишеней индуцировала эффективное CMI-опосредованное устранение остаточных организмов, что приводило к высоким уровням защиты на 7 сутки после инфицирования.

Пример 10: Тестирование влияния различных адъювантных систем

Введение

Для того, чтобы изучить, наблюдается ли высокий гуморальный иммунный ответ против гетерологичных иммуно-повторов, видимый только при введении вакцины в CAF01, мы сравнили гуморальный иммунный ответ и титр нейтрализации после иммунизации СТН527 (SvE VD4^ext)*4 в CAF01 или в квасцах.

Результаты

Обе адьювантные системы индуцировали высокий гуморальный иммунный ответ против поверхности SvE при совместном введении с СТН527, и антитела из обеих групп способны были нейтрализовать SvE in vitro (Фиг. 14).

Пример 11: Вакцинация гетерологичными иммуно-повторами, состоящие из укороченных областей VD4^ext из SvD, SvE, SvF и SvG

Введение

Далее мы сравнивали гетерологичные конструкты иммуно-повторов, состоящие из укороченной области VD4 (СТН285, SEQ ID NO 69 и СТН286 SEQ ID NO 70), по сравнению с конструктом СТН518 (СТН518 SEQ ID NO 53) (Фиг 15А).

Результаты

4 мышей на группу иммунизировали 3 раза с промежутками между иммунизациями в 14 суток. Вакцины эмульгировали в CAF01 и вводили одновременно путем подкожного (5 мкг) и интраназального (5 мкг) введения. У 4 мышей на группу выделяли спленоциты и исследовали Т-клеточные ответы на перекрывающиеся пептиды, представляющие область VD4^ext (Фиг. 15В), и способность сыворотки нейтрализовать инфекцию серовара D и F (Фиг. 15С). Наблюдалось значительное снижение уровней распознавания VD4 Т-клетками и нейтрализации после вакцинации СТН285, в котором области VD4^ext из разных сероваров были сокращены на 38аа. С другой стороны, СТН286 (каждая VD4^ext область уменьшена на 24аа) индуцировал подобные уровни Т-клеточных ответов и имел такую же способность нейтрализовать инфекцию серовара D, как и СТН518.

Вывод

Мы показали, что путем уменьшения длины областей VD4^ext на 38аа, мы уменьшили как Т-клеточные ответы, так и способность нейтрализовать инфекции серовара D и F.

Пример 12: Вакцинация гетерологичными иммуно-повторами, состоящими из удлиненных областей VD4^ext из SvD, SvE, SvF, SvG, SvIa и SvJ.

Введение

Затем мы проводили исследование того, возможно ли с помощью увеличения длины области VD4^ext повышать Т-клеточный ответ к конструктам иммуно-повтора. Мы разработали два конструкта СТН69 (SEQ ID NO 47) и СТН72 (SEQ ID NO 48). CTH69 был подобен СТН88, но области VD4^ext SvD, SvE и SvF были удлинены на 12аа на N-конце (Фиг. 16В). СТН72 также состоял из области VD1 и VD4^ext из SvG, SvIa и SvJ.

Результаты

Мышей иммунизировали 3 раза с промежутками между иммунизациями в 14 суток. Вакцины эмульгировали в CAF01 и вводили одновременно путем подкожного (5 мкг) и интраназального (5 мкг) введения. Изучали Т-клеточные ответы на антиген, применяемый для иммунизации, и на пептидные пулы, представляющие области VD1 и VD4 различных сероваров (Фиг. 16). Удлинение областей VD4^ext вызывало значительно более высокий Т-клеточный ответ (>40,000 пг/мл) по сравнению с Т-клеточным ответом, полученным с использованием СТН88 (<20,000 пг/мл) (Фиг. 16В). Важно отметить, что оба удлиненных конструкта сохраняли способность нейтрализовать инфекцию серовара D in vitro (Фиг. 16С). Если сравнивать защитную эффективность вакцин, то СТН69 и СТН72 индуцировали значительный уровень защиты на 7 сутки после инфицирования, что возможно объясняется более сильным Т-клеточным ответом, индуцированным этими вакцинами, по сравнению с СТН88 (Фиг. 16D).

Вывод

Удлинение области VD4^ext усиливало Т-клеточный ответ по сравнению с СТН88, что приводило к усиленной защите на 7 сутки после инфицирования.

Ссылки:

1. WHO. Global Prevalence and Incidence of selected Curable Sexually Transmitted Infections: Overview and Estimates. World Health Organization, Geneva, Switzerland; 2001.

2. Paavonen J, Eggert-Kruse W. Chlamydia trachomatis: impact on human reproduction. Hum Reprod Update 1999, 5(5): 433-447.

3. Plummer FA, Simonsen JN, Cameron DW, Ndinya-Achola JO, Kreiss JK, Gakinya MN, et al. Cofactors in male-female sexual transmission of human immunodeficiency virus type 1. J Infect Dis 1991, 163(2): 233-239.

4. Anttila T, Saikku P, Koskela P, Bloigu A, Dillner J, Ikaheimo I, et al. Serotypes of Chlamydia trachomatis and risk for development of cervical squamous cell carcinoma. Jama 2001, 285(1): 47-51.

5. Golden MR, Schillinger JA, Markowitz L, St Louis ME. Duration of untreated genital infections with chlamydia trachomatis: a review of the literature. Sex Transm Dis 2000, 27(6): 329-337.

6. Batteiger BE, Xu F, Johnson RE, Rekart ML. Protective immunity to Chlamydia trachomatis genital infection: evidence from human studies. J Infect Dis, 201 Suppl 2: S178-189.

7. Brunham RC, Rey-Ladino J. Immunology of Chlamydia infection: implications for a Chlamydia trachomatis vaccine. Nat Rev Immunol 2005, 5(2): 149-161.

8. Su H, Caldwell HD. CD4+T cells play a significant role in adoptive immunity to Chlamydia trachomatis infection of the mouse genital tract. Infect Immun 1995, 63(9): 3302-3308.

9. Morrison SG, Su H, Caldwell HD, Morrison RP. Immunity to murine Chlamydia trachomatis genital tract reinfection involves В cells and CD4(+) T cells but not CD8(+) T cells. Infect Immun 2000, 68(12): 6979-6987.

10. Morrison RP, Caldwell HD. Immunity to murine chlamydial genital infection. Infect Immun 2002, 70(6): 2741-2751.

11. Rasmussen SJ. Chlamydia immunology. Curr Opin Infect Dis 1998, 11(1): 37-41.

12. Rank R. In: Chlamydia Intracellular Biology, Pathogenesis and Immunity. Washington DC. ASM Press 1999: Pp. 239-296.

13. Morrison SG, Morrison RP. Resolution of secondary Chlamydia trachomatis genital tract infection in immune mice with depletion of both CD4+ and CD8+ T cells. Infect Immun 2001, 69(4): 2643-2649.

14. Moore T, Ekworomadu CO, Eko FO, MacMillan L, Ramey K, Ananaba GA, et al. Fc receptor-mediated antibody regulation of T cell immunity against intracellular pathogens. J Infect Dis 2003, 188(4): 617-624.

15. Pal S, Rangel J, Peterson EM, de la Maza LM. Immunogenic and protective ability of the two developmental forms of Chlamydiae in a mouse model of infertility. Vaccine 1999, 18(7-8): 752-761.

16. Darville T, Hiltke TJ. Pathogenesis of genital tract disease due to Chlamydia trachomatis. J Infect Dis 2010, 201 Suppl 2: S114-125.

17. Hansen J, Jensen KT, Follmann F, Agger EM, Theisen M, Andersen P. Liposome Delivery of Chlamydia muridarum Major Outer Membrane Protein Primes a Th1 Response That Protects against Genital Chlamydial Infection in a Mouse Model. J Infect Dis 2008, 198(5): 758-767.

18. Olsen AW, Theisen M, Christensen D, Follmann F, Andersen P. Protection against Chlamydia promoted by a subunit vaccine (CTH1) compared with a primary intranasal infection in a mouse genital challenge model. PLoS One, 5(5): e10768.

19. Li W, Murthy AK, Guentzel MN, Chambers JP, Forsthuber TG, Seshu J, et al. Immunization with a combination of integral chlamydial antigens and a defined secreted protein induces robust immunity against genital chlamydial challenge. Infect Immun 2010, 78(9): 3942-3949.

20. Olsen AW, Follmann F, P, Leah R, Sand C, Andersen P, et al. Identification of human T-cell targets recognized during the Chlamydia trachomatis genital infection. J Infect Dis 2007, 196: 1546-1552.

21. Olsen AW, Follmann F, Jensen K, Hojrup P, Leah R, Sorensen H, et al. Identification of CT521 as a frequent target of Thl cells in patients with urogenital Chlamydia trachomatis infection. J Infect Dis 2006, 194(9): 1258-1266.

22. Follmann F, Olsen AW, Jensen KT, Hansen PR, Andersen P, Theisen M. Antigenic profiling of a Chlamydia trachomatis gene-expression library. J Infect Dis 2008, 197 897-905.

23. Sharma J, Zhong Y, Dong F, Piper JM, Wang G, Zhong G. Profiling of human antibody responses to Chlamydia trachomatis urogenital tract infection using microplates arrayed with 156 chlamydial fusion proteins. Infect Immun 2006, 74(3): 1490-1499.

24. Coler RN, Bhatia A, Maisonneuve JF, Probst P, Barth B, Ovendale P, et al. Identification and characterization of novel recombinant vaccine antigens for immunization against genital Chlamydia trachomatis. FEMS Immunol Med Microbiol 2009, 55(2): 258-270.

25. Karunakaran KP, Rey-Ladino J, Stoynov N, Berg K, Shen C, Jiang X, et al Immunoproteomic discovery of novel T cell antigens from the obligate intracellular pathogen Chlamydia. J Immunol 2008, 180(4): 2459-2465.

26. Yu H, Jiang X, Shen C, Karunakaran KP, Brunham RC. Novel Chlamydia muridarum T cell antigens induce protective immunity against lung and genital tract infection in murine models. J Immunol 2009, 182(3): 1602-1608.

27. Molina DM, Pal S, Kayala MA, Teng A, Kim PJ, Baldi P, et al. Identification of immunodominant antigens of Chlamydia trachomatis using proteome microarrays. Vaccine 2010, 28(17): 3014-3024.

28. Stephens RS, Kalman S, Lammel C, Fan J, Marathe R, Aravind L, et al. Genome sequence of an obligate intracellular pathogen of humans: Chlamydia trachomatis. Science 1998, 282(5389): 754-759.

29. Sette A, Rappuoli R. Reverse vaccinology: developing vaccines in the era of genomics. Immunity 2010, 33(4): 530-541.

30. Igietseme JU, Eko FO, Black CM. Chlamydia vaccines: recent developments and the role of adjuvants in future formulations. Expert Rev Vaccines 2011, 10(11): 1585-1596.

31. Rockey DD, Wang J, Lei L, Zhong G. Chlamydia vaccine candidates and tools for chlamydial antigen discovery. Expert Rev Vaccines 2009, 8(10): 1365-1377.

32. Farris CM, Morrison RP. Vaccination against Chlamydia genital infection utilizing the murine C. muridarum model. Infect Immun 2011, 79(3): 986-996.

33. Kubo A, Stephens RS. Characterization and functional analysis of PorB, a Chlamydia porin and neutralizing target. MolMicrobiol 2000, 38(4): 772-780.

34. Kawa DE, Schachter J, Stephens RS. Immune response to the Chlamydia trachomatis outer membrane protein PorB. Vaccine 2004, 22(31-32): 4282-4286.

35. Crane DD, Carlson JH, Fischer ER, Bavoil P, Hsia RC, Tan C, et al. Chlamydia trachomatis polymorphic membrane protein D is a species-common pan-neutralizing antigen. Proc Natl Acad Sci USA 2006, 103(6): 1894-1899.

36. Baehr W, Zhang YX, Joseph T, Su H, Nano FE, Everett KD, et al. Mapping antigenic domains expressed by Chlamydia trachomatis major outer membrane protein genes. ProcNatlAcadSciUSA 1988, 85(11): 4000-4004.

37. Bavoil P, Ohlin A, Schachter J. Role of disulfide bonding in outer membrane structure and permeability in Chlamydia trachomatis. Infect Immun 1984, 44(2): 479-485.

38. Hatch TP, Allan I, Pearce JH. Structural and polypeptide differences between envelopes of infective and reproductive life cycle forms of Chlamydia spp. J Bacteriol 1984, 157(1): 13-20.

39. Stephens RS, Sanchez-Pescador R, Wagar EA, Inouye C, Urdea MS. Diversity of Chlamydia trachomatis major outer membrane protein genes. J Bacteriol 1987, 169(9): 3879-3885.

40. Caldwell HD, Perry LJ. Neutralization of Chlamydia trachomatis infectivity with antibodies to the major outer membrane protein. Infect Immun 1982, 38(2): 745-754.

41. Peeling R, Maclean IW, Brunham RC. In vitro neutralization of Chlamydia trachomatis with monoclonal antibody to an epitope on the major outer membrane protein. Infect Immun 1984, 46(2): 484-488.

42. Zhang YX, Stewart S, Joseph T, Taylor HR, Caldwell HD. Protective monoclonal antibodies recognize epitopes located on the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis. J Immunol 1987, 138(2): 575-581.

43. Zhang YX, Stewart SJ, Caldwell HD. Protective monoclonal antibodies to Chlamydia trachomatis serovar- and serogroup-specific major outer membrane protein determinants. Infect Immun 1989, 57(2): 636-638.

44. Cotter TW, Meng Q, Shen ZL, Zhang YX, Su H, Caldwell HD. Protective efficacy of major outer membrane protein-specific immunoglobulin A (IgA) and IgG monoclonal antibodies in a murine model of Chlamydia trachomatis genital tract infection. Infectlmmun 1995, 63(12): 4704-4714.

45. Bandea CI, Debattista J, Joseph K, Igietseme J, Timms P, Black CM. Chlamydia trachomatis serovars among strains isolated from members of rural indigenous communities and urban populations in Australia. J Clin Microbiol 2008, 46(1): 355-356.

46. Hsu MC, Tsai PY, Chen KT, Li LH, Chiang CC, Tsai JJ, et al. Genotyping of Chlamydia trachomatis from clinical specimens in Taiwan. J Med Microbiol 2006, 55(Pt 3): 301-308.

47. Jonsdottir K, Kristjansson M, Hjaltalin Olafsson J, Steingrimsson O. The molecular epidemiology of genital Chlamydia trachomatis in the greater Reykjavik area, Iceland. Sex Transm Dis 2003, 30(3): 249-256.

48. Lysen M, Osterlund A, Rubin CJ, Persson T, Persson I, Herrmann B. Characterization of ompA genotypes by sequence analysis of DNA from all detected cases of Chlamydia trachomatis infections during 1 year of contact tracing in a Swedish County. J Clin Microbiol 2004, 42(4): 1641-1647.

49. Millman K, Black CM, Johnson RE, Stamm WE, Jones RB, Hook EW, et al. Population-based genetic and evolutionary analysis of Chlamydia trachomatis urogenital strain variation in the United States. J Bacteriol 2004, 186(8): 2457-2465.

50. Millman K, Black CM, Stamm WE, Jones RB, Hook EW, 3rd, Martin DH, et al. Population-based genetic epidemiologic analysis of Chlamydia trachomatis serotypes and lack of association between ompA polymorphisms and clinical phenotypes. Microbes Infect 2006, 8(3): 604-611.

51. Su H, Parnell M, Caldwell HD. Protective efficacy of a parenterally administered MOMP-derived synthetic oligopeptide vaccine in a murine model of Chlamydia trachomatis genital tract infection: serum neutralizing IgG antibodies do not protect against chlamydial genital tract infection. Vaccine 1995, 13(11): 1023-1032.

52. Pal S, Barnhart KM, Wei Q, Abai AM, Peterson EM, de la Maza LM. Vaccination of mice with DNA plasmids coding for the Chlamydia trachomatis major outer membrane protein elicits an immune response but fails to protect against a genital challenge. Vaccine 1999, 17(5): 459-465.

53. Zhang DJ, Yang X, Shen C, Brunham RC. Characterization of immune responses following intramuscular DNA immunization with the MOMP gene of Chlamydia trachomatis mouse pneumonitis strain. Immunology 1999, 96(2): 314-321.

54. Pal S, Theodor I, Peterson EM, de la Maza LM. Immunization with the Chlamydia trachomatis mouse pneumonitis major outer membrane protein can elicit a protective immune response against a genital challenge. Infect Immun 2001, 69(10): 6240-6247.

55. Shaw J, Grand V, Durling L, Crane D, Caldwell HD. Dendritic cells pulsed with a recombinant chlamydial major outer membrane protein antigen elicit a CD4(+) type 2 rather than type 1 immune response that is not protective. Infect Immun 2002, 70(3): 1097-1105.

56. Kari L, Whitmire WM, Crane DD, Reveneau N, Carlson JH, Goheen MM, et al. Chlamydia trachomatis native major outer membrane protein induces partial protection in nonhuman primates: implication for a trachoma transmission-blocking vaccine. J Immunol 2009, 182(12): 8063-8070.

57. Carmichael JR, Pal S, Tifrea D, de la Maza LM. Induction of protection against vaginal shedding and infertility by a recombinant Chlamydia vaccine. Vaccine 2011, 29(32): 5276-5283.

58. Yen TY, Pal S, de la Maza LM. Characterization of the disulfide bonds and free cysteine residues of the Chlamydia trachomatis mouse pneumonitis major outer membrane protein. Biochemistry 2005, 44(16): 6250-6256.

59. Stephens RS, Wagar EA, Schoolnik GK. High-resolution mapping of serovar-specific and common antigenic determinants of the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis. J Exp Med 1988, 167(3): 817-831.

60. Murdin AD, Su H, Klein MH, Caldwell HD. Poliovirus hybrids expressing neutralization epitopes from variable domains I and IV of the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis elicit broadly cross-reactive C. trachomatis-neutralizing antibodies. Infect Immun 1995, 63(3): 1116-1121.

61. Murdin AD, Su H, Manning DS, Klein MH, Parnell MJ, Caldwell HD. A poliovirus hybrid expressing a neutralization epitope from the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis is highly immunogenic. Infect Immun 1993, 61(10): 4406-4414.

62. Villeneuve A, Brossay L, Paradis G, Hebert J. Determination of neutralizing epitopes in variable domains I and IV of the major outer-membrane protein from Chlamydia trachomatis serovar K. Microbiology 1994, 140 (Pt 9): 2481-2487.

63. Villeneuve A, Brossay L, Paradis G, Hebert J. Characterization of the humoral response induced by a synthetic peptide of the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis serovar B. Infect Immun 1994, 62(8): 3547-3549.

64. Motin VL, de la Maza LM, Peterson EM. Immunization with a peptide corresponding to chlamydial heat shock protein 60 increases the humoral immune response in C3H mice to a peptide representing variable domain 4 of the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis. Clin Diagn Lab Immunol 1999, 6(3): 356-363.

65. Su H, Caldwell HD. Immunogenicity of a synthetic oligopeptide corresponding to antigenically common T-helper and B-cell neutralizing epitopes of the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis. Vaccine 1993, 11(11): 1159-1166.

66. Toye B, Zhong GM, Peeling R, Brunham RC. Immunologic characterization of a cloned fragment containing the species-specific epitope from the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis. Infect Immun 1990, 58(12): 3909-3913.

67. Mygind P, Christiansen G, Persson K, Birkelund S. Detection of Chlamydia trachomatis-specific antibodies in human sera by recombinant major outer-membrane protein polyantigens. J Med Microbiol 2000, 49(5): 457-465.

68. Qu Z, Cheng X, de la Maza LM, Peterson EM. Analysis of the humoral response elicited in mice by a chimeric peptide representing variable segments I and IV of the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis. Vaccine 1994, 12(6): 557-564.

69. Peterson EM, Cheng X, Qu Z, de la Maza LM. The effect of orientation within a chimeric peptide on the immunogenicity of Chlamydia trachomatis epitopes. Mol Immunol 1996, 33(4-5): 335-339.

70. Caldwell HD, Kromhout J, Schachter J. Purification and partial characterization of the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis. Infect Immun 1981, 31(3): 1161-1176.

71. Ravn P, Demissie A, Eguale T, Wondwosson H, Lein D, Amoudy HA, et al. Human T cell responses to the ESAT-6 antigen from Mycobacterium tuberculosis. J Infect Dis 1999, 179(3): 637-645.

72. Stryhn A, Pedersen LO, Romme T, Holm CB, Holm A, Buus S. Peptide binding specificity of major histocompatibility complex class I resolved into an array of apparently independent subspecificities: quantitation by peptide libraries and improved prediction of binding. Eur J Immunol 1996, 26(8): 1911-1918.

73. Harboe M, Oettinger T, Wiker HG, Rosenkrands I, Andersen P. Evidence for occurrence of the ESAT-6 protein in Mycobacterium tuberculosis and virulent Mycobacterium bovis and for its absence in Mycobacterium bovis BCG. Infect Immun 1996, 64(1): 16-22.

74. Volp K, Mathews S, Timms P, Hafner L. Peptide immunization of guinea pigs against Chlamydia psittaci (GPIC agent) infection induces good vaginal secretion antibody response, in vitro neutralization and partial protection against live challenge. Immunol Cell Biol 2001, 79(3): 245-250.

75. Hinton HJ, Jegerlehner A, Bachmann MF. Pattern recognition by В cells: the role of antigen repetitiveness versus Toll-like receptors. Current topics in microbiology and immunology 2008, 319: 1-15.

76. Kim SK, DeMars R. Epitope clusters in the major outer membrane protein of Chlamydia trachomatis. Curr Opin Immunol 2001, 13(4): 429-436.

77. Findlay HE, McClafferty H, Ashley RH. Surface expression, single-channel analysis and membrane topology of recombinant Chlamydia trachomatis Major Outer Membrane Protein. BMC Microbiol 2005, 5:5.

78. Cobbold SP, Jayasuriya A, Nash A, Prospero TD, Waldmann H. Therapy with monoclonal antibodies by elimination of T-cell subsets in vivo. Nature 1984, 312(5994): 548-551.

79. Qin S, Cobbold S, Tighe H, Benjamin R, Waldmann H. CD4 monoclonal antibody pairs for immunosuppression and tolerance induction. Eur J Immunol 1987, 17(8): 1159-1165.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

110 Statens Serum Institut

120 Вакцины против Chlamydia sp.

130 15049

160 75

170 PatentIn версии 3.5

210 1

211 20

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 1

Ala Lys Pro Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu

1 5 10 15

Thr Ala Arg Glu

20

210 2

211 20

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 2

Asp Lys Pro Thr Ser Thr Thr Gly Asn Ala Thr Ala Pro Thr Thr Leu

1 5 10 15

Thr Ala Arg Glu

20

210 3

211 21

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 3

Glu Ala Leu Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr Leu Ser Lys

1 5 10 15

Leu Val Glu Arg Thr

20

210 4

211 21

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 4

Glu Ala Leu Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr Leu Ser Lys

1 5 10 15

Leu Val Glu Arg Thr

20

210 5

211 22

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 5

Ala Ala Pro Thr Thr Lys Asp Ile Ala Gly Leu Glu Asn Asp Pro Thr

1 5 10 15

Thr Asn Val Ala Arg Pro

20

210 6

211 22

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 6

Ala Ala Pro Thr Thr Ser Asp Val Ala Gly Leu Gln Asn Asp Pro Thr

1 5 10 15

Thr Asn Val Ala Arg Pro

20

210 7

211 30

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 7

Asp Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp

1 5 10 15

Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly

20 25 30

210 8

211 18

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 8

Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn

1 5 10 15

Ala Ala

210 9

211 59

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 9

Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro

20 25 30

Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala Arg

35 40 45

Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp

50 55

210 10

211 59

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 10

Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Asp Lys Pro

20 25 30

Thr Ser Thr Thr Gly Asn Ala Thr Ala Pro Thr Thr Leu Thr Ala Arg

35 40 45

Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp

50 55

210 11

211 60

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 11

Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Glu Met Gly Glu Ala Leu

20 25 30

Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr Leu Ser Lys Leu Val Glu

35 40 45

Arg Thr Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met Gln Asp

50 55 60

210 12

211 60

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 12

Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Glu Met Gly Glu Ala Leu

20 25 30

Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr Leu Ser Lys Leu Val Glu

35 40 45

Arg Thr Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met Gln Asp

50 55 60

210 13

211 61

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 13

Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Ala Pro

20 25 30

Thr Thr Lys Asp Ile Ala Gly Leu Glu Asn Asp Pro Thr Thr Asn Val

35 40 45

Ala Arg Pro Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met Gln Asp

50 55 60

210 14

211 61

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 14

Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Ala Pro

20 25 30

Thr Thr Ser Asp Val Ala Gly Leu Gln Asn Asp Pro Thr Thr Asn Val

35 40 45

Ala Arg Pro Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met Gln Asp

50 55 60

210 15

211 30

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 15

Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly

20 25 30

210 16

211 30

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 16

Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly

20 25 30

210 17

211 31

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 17

Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Gly Cys Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser

20 25 30

210 18

211 31

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 18

Leu Ala Lys Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Gly Cys Gly Ser Val Val Ala Ala Asn Ser Glu Gly Gln Ile Ser

20 25 30

210 19

211 31

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 19

Leu Ala Glu Ala Ile Leu Asp Val Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Gly Lys Gly Thr Val Val Ala Ser Gly Ser Asp Asn Asp Leu Ala

20 25 30

210 20

211 31

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 20

Leu Ala Glu Ala Ile Leu Asp Val Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Gly Lys Gly Thr Val Val Ala Ser Gly Ser Glu Asn Asp Leu Ala

20 25 30

210 21

211 39

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 21

Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr

1 5 10 15

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

20 25 30

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys

35

210 22

211 30

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 22

Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Lys Met Lys Ser Arg

1 5 10 15

Lys Ser Cys Gly Ile Ala Val Gly Thr Thr Ile Val Asp Ala

20 25 30

210 23

211 68

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 23

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile

20 25 30

Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val

35 40 45

Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

50 55 60

Leu Gln Leu Asn

65

210 24

211 68

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 24

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile

20 25 30

Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val

35 40 45

Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

50 55 60

Leu Gln Leu Asn

65

210 25

211 69

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 25

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val

20 25 30

Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val

35 40 45

Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val

50 55 60

Ser Leu Gln Leu Asn

65

210 26

211 69

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 26

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ser Asn Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val

20 25 30

Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val

35 40 45

Val Ala Ala Asn Ser Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val

50 55 60

Ser Leu Gln Leu Asn

65

210 27

211 69

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 27

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Val Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Glu Ala Ile

20 25 30

Leu Asp Val Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val

35 40 45

Val Ala Ser Gly Ser Asp Asn Asp Leu Ala Asp Thr Met Gln Ile Val

50 55 60

Ser Leu Gln Leu Asn

65

210 28

211 69

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 28

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Val Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Glu Ala Ile

20 25 30

Leu Asp Val Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val

35 40 45

Val Ala Ser Gly Ser Glu Asn Asp Leu Ala Asp Thr Met Gln Ile Val

50 55 60

Ser Leu Gln Leu Asn

65

210 29

211 21

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 29

Asp Asn Glu Asn Gln Lys Thr Val Lys Ala Glu Ser Val Pro Asn Met

1 5 10 15

Ser Phe Asp Gln Ser

20

210 30

211 21

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 30

Asp Asn Glu Asn Gln Ser Thr Val Lys Thr Asn Ser Val Pro Asn Met

1 5 10 15

Ser Leu Asp Gln Ser

20

210 31

211 21

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 31

Asp Gly Val Asn Ala Thr Lys Pro Ala Ala Asp Ser Ile Pro Asn Val

1 5 10 15

Gln Leu Asn Gln Ser

20

210 32

211 21

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 32

Asp Ser Glu Asn Ala Thr Gln Pro Ala Ala Thr Ser Ile Pro Asn Val

1 5 10 15

Gln Leu Asn Gln Ser

20

210 33

211 22

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 33

Thr Lys Thr Gln Ser Ser Asn Phe Asn Thr Ala Lys Leu Ile Pro Asn

1 5 10 15

Ala Ala Leu Asn Gln Ala

20

210 34

211 22

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 34

Thr Lys Thr Gln Ala Ser Ser Phe Asn Thr Ala Asn Leu Phe Pro Asn

1 5 10 15

Thr Ala Leu Asn Gln Ala

20

210 35

211 23

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 35

Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asn Leu Val Gly Leu Phe Gly

20

210 36

211 22

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 36

Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Thr Phe Ala Trp Ser Val Gly Ala

1 5 10 15

Arg Ala Ala Leu Trp Glu

20

210 37

211 14

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 37

Lys Glu Phe Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr Asp Ala Ala

1 5 10

210 38

211 14

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 38

Gln Glu Phe Pro Leu Ala Leu Ile Ala Gly Thr Asp Ala Ala

1 5 10

210 39

211 14

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 39

Lys Glu Phe Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr Asp Ala Ala

1 5 10

210 40

211 14

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 40

Gln Glu Phe Pro Leu Ala Leu Thr Ala Gly Thr Asp Ala Ala

1 5 10

210 41

211 14

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 41

Ala Glu Phe Pro Leu Asp Ile Thr Ala Gly Thr Glu Ala Ala

1 5 10

210 42

211 14

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 42

Ala Glu Phe Pro Leu Asp Ile Thr Ala Gly Thr Glu Ala Ala

1 5 10

210 43

211 38

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 43

Ala Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val

1 5 10 15

Glu Glu Leu Asn Val Leu Cys Asn Ala Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys

20 25 30

Pro Lys Gly Tyr Val Gly

35

210 44

211 35

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 44

Thr Gly Thr Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp Gln Ala Ser

1 5 10 15

Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val

20 25 30

Lys Trp Ser

35

210 45

211 127

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 45

Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro

20 25 30

Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala Arg

35 40 45

Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Asn Met Phe Thr Pro

50 55 60

Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile

65 70 75 80

Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr

85 90 95

Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu

100 105 110

Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

115 120 125

210 46

211 383

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 46

Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro

20 25 30

Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala Arg

35 40 45

Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Asn Met Phe Thr Pro

50 55 60

Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile

65 70 75 80

Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr

85 90 95

Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu

100 105 110

Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Ala

115 120 125

Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val

130 135 140

Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Asp Lys Pro Thr

145 150 155 160

Ser Thr Thr Gly Asn Ala Thr Ala Pro Thr Thr Leu Thr Ala Arg Glu

165 170 175

Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Asn Met Phe Thr Pro Tyr

180 185 190

Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg

195 200 205

Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu

210 215 220

Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly

225 230 235 240

Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Ala Ile

245 250 255

Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu

260 265 270

Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Glu Met Gly Glu Ala Leu Ala Gly

275 280 285

Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr Leu Ser Lys Leu Val Glu Arg Thr

290 295 300

Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met Gln Asp Asn Met Phe Thr Pro Tyr

305 310 315 320

Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg

325 330 335

Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu

340 345 350

Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu

355 360 365

Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

370 375 380

210 47

211 419

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 47

Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro

20 25 30

Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala Arg

35 40 45

Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Glu Trp Gln Ala Ser

50 55 60

Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val

65 70 75 80

Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln

85 90 95

Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr

100 105 110

Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly

115 120 125

Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Ala Ile Ser Met Arg

130 135 140

Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp

145 150 155 160

Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Asp Lys Pro Thr Ser Thr Thr Gly

165 170 175

Asn Ala Thr Ala Pro Thr Thr Leu Thr Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr

180 185 190

Gly Arg His Met Gln Asp Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr

195 200 205

Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala

210 215 220

Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr

225 230 235 240

Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly

245 250 255

Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile

260 265 270

Val Ser Leu Gln Leu Asn Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly

275 280 285

Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe

290 295 300

Glu Met Gly Glu Ala Leu Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr

305 310 315 320

Leu Ser Lys Leu Val Glu Arg Thr Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met

325 330 335

Gln Asp Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met

340 345 350

Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser

355 360 365

Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp

370 375 380

Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly

385 390 395 400

Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu

405 410 415

Gln Leu Asn

210 48

211 844

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 48

Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

1 5 10 15

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro

20 25 30

Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala Arg

35 40 45

Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Glu Trp Gln Ala Ser

50 55 60

Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val

65 70 75 80

Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln

85 90 95

Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr

100 105 110

Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly

115 120 125

Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Ala Ile Ser Met Arg

130 135 140

Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp

145 150 155 160

Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Asp Lys Pro Thr Ser Thr Thr Gly

165 170 175

Asn Ala Thr Ala Pro Thr Thr Leu Thr Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr

180 185 190

Gly Arg His Met Gln Asp Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr

195 200 205

Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala

210 215 220

Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr

225 230 235 240

Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly

245 250 255

Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile

260 265 270

Val Ser Leu Gln Leu Asn Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly

275 280 285

Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe

290 295 300

Glu Met Gly Glu Ala Leu Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr

305 310 315 320

Leu Ser Lys Leu Val Glu Arg Thr Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met

325 330 335

Gln Asp Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met

340 345 350

Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser

355 360 365

Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp

370 375 380

Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly

385 390 395 400

Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu

405 410 415

Gln Leu Asn Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val

420 425 430

Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Glu Met Gly

435 440 445

Glu Ala Leu Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr Leu Ser Lys

450 455 460

Leu Val Glu Arg Thr Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met Gln Asp Glu

465 470 475 480

Trp Gln Ala Ser Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro

485 490 495

Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asn Thr Ile

500 505 510

Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val Val Asp Ile Thr Thr

515 520 525

Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Val Ala Ala Asn Ser

530 535 540

Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

545 550 555 560

Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

565 570 575

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Ala Pro

580 585 590

Thr Thr Lys Asp Ile Ala Gly Leu Glu Asn Asp Pro Thr Thr Asn Val

595 600 605

Ala Arg Pro Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met Gln Asp Glu Trp Gln

610 615 620

Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile

625 630 635 640

Gly Val Lys Trp Ser Arg Val Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile

645 650 655

Ala Gln Pro Lys Leu Ala Glu Ala Ile Leu Asp Val Thr Thr Leu Asn

660 665 670

Pro Thr Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val Val Ala Ser Gly Ser Asp Asn

675 680 685

Asp Leu Ala Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Ala Ile

690 695 700

Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu

705 710 715 720

Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Ala Pro Thr Thr

725 730 735

Ser Asp Val Ala Gly Leu Gln Asn Asp Pro Thr Thr Asn Val Ala Arg

740 745 750

Pro Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met Gln Asp Glu Trp Gln Ala Ser

755 760 765

Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val

770 775 780

Lys Trp Ser Arg Val Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln

785 790 795 800

Pro Lys Leu Ala Glu Ala Ile Leu Asp Val Thr Thr Leu Asn Pro Thr

805 810 815

Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val Val Ala Ser Gly Ser Glu Asn Asp Leu

820 825 830

Ala Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

835 840

210 49

211 205

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 49

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile

20 25 30

Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val

35 40 45

Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

50 55 60

Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser

65 70 75 80

Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser

85 90 95

Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly

100 105 110

Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met

115 120 125

Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly

130 135 140

Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala

145 150 155 160

Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro

165 170 175

Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln

180 185 190

Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

195 200 205

210 50

211 68

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 50

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile

20 25 30

Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val

35 40 45

Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

50 55 60

Leu Gln Leu Asn

65

210 51

211 69

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 51

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val

20 25 30

Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val

35 40 45

Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val

50 55 60

Ser Leu Gln Leu Asn

65

210 52

211 69

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 52

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val

20 25 30

Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val

35 40 45

Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val

50 55 60

Ser Leu Gln Leu Asn

65

210 53

211 274

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 53

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile

20 25 30

Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val

35 40 45

Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

50 55 60

Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser

65 70 75 80

Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser

85 90 95

Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly

100 105 110

Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met

115 120 125

Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly

130 135 140

Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala

145 150 155 160

Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro

165 170 175

Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln

180 185 190

Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe

195 200 205

Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asn

210 215 220

Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val Val Asp Ile

225 230 235 240

Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Val Ala Ala

245 250 255

Asn Ser Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln

260 265 270

Leu Asn

210 54

211 322

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 54

Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr

1 5 10 15

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

20 25 30

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

35 40 45

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala

50 55 60

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

65 70 75 80

Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr

85 90 95

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

100 105 110

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

115 120 125

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala

130 135 140

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

145 150 155 160

Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr

165 170 175

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr

180 185 190

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr

195 200 205

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn

210 215 220

Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu

225 230 235 240

Asn Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe

245 250 255

Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asn

260 265 270

Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val Val Asp Ile

275 280 285

Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Val Ala Ala

290 295 300

Asn Ser Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln

305 310 315 320

Leu Asn

210 55

211 484

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 55

Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr

1 5 10 15

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

20 25 30

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

35 40 45

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala

50 55 60

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

65 70 75 80

Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr

85 90 95

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

100 105 110

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

115 120 125

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala

130 135 140

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

145 150 155 160

Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr

165 170 175

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr

180 185 190

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr

195 200 205

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn

210 215 220

Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu

225 230 235 240

Asn Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe

245 250 255

Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asn

260 265 270

Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val Val Asp Ile

275 280 285

Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Val Ala Ala

290 295 300

Asn Ser Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln

305 310 315 320

Leu Asn Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met

325 330 335

Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Val Ser Phe Asp Ala

340 345 350

Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Glu Ala Ile Leu Asp

355 360 365

Val Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val Val Ala

370 375 380

Ser Gly Ser Asp Asn Asp Leu Ala Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu

385 390 395 400

Gln Leu Asn Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn

405 410 415

Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Val Ser Phe Asp

420 425 430

Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Glu Ala Ile Leu

435 440 445

Asp Val Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val Val

450 455 460

Ala Ser Gly Ser Glu Asn Asp Leu Ala Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

465 470 475 480

Leu Gln Leu Asn

210 56

211 276

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 56

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val

20 25 30

Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val

35 40 45

Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val

50 55 60

Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp

65 70 75 80

Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg

85 90 95

Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala

100 105 110

Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp

115 120 125

Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr

130 135 140

Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg

145 150 155 160

Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu

165 170 175

Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu

180 185 190

Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn

195 200 205

Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp

210 215 220

Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val

225 230 235 240

Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala

245 250 255

Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

260 265 270

Leu Gln Leu Asn

275

210 57

211 544

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 57

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile

20 25 30

Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val

35 40 45

Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

50 55 60

Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser

65 70 75 80

Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser

85 90 95

Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly

100 105 110

Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met

115 120 125

Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly

130 135 140

Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala

145 150 155 160

Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro

165 170 175

Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu

180 185 190

Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr

195 200 205

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

210 215 220

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

225 230 235 240

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala

245 250 255

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

260 265 270

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

275 280 285

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile

290 295 300

Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val

305 310 315 320

Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

325 330 335

Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser

340 345 350

Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser

355 360 365

Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly

370 375 380

Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met

385 390 395 400

Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly

405 410 415

Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala

420 425 430

Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro

435 440 445

Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu

450 455 460

Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr

465 470 475 480

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

485 490 495

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

500 505 510

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala

515 520 525

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

530 535 540

210 58

211 272

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 58

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile

20 25 30

Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val

35 40 45

Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

50 55 60

Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser

65 70 75 80

Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser

85 90 95

Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly

100 105 110

Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met

115 120 125

Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly

130 135 140

Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala

145 150 155 160

Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro

165 170 175

Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu

180 185 190

Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr

195 200 205

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

210 215 220

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

225 230 235 240

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala

245 250 255

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

260 265 270

210 59

211 276

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 59

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

1 5 10 15

Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val

20 25 30

Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val

35 40 45

Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val

50 55 60

Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp

65 70 75 80

Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg

85 90 95

Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala

100 105 110

Gly Cys Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp

115 120 125

Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr

130 135 140

Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg

145 150 155 160

Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu

165 170 175

Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu

180 185 190

Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn

195 200 205

Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp

210 215 220

Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val

225 230 235 240

Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val Ala

245 250 255

Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

260 265 270

Leu Gln Leu Asn

275

210 60

211 785

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 60

Ser Arg Gln Asn Ala Glu Glu Asn Leu Lys Asn Phe Ala Lys Glu Leu

1 5 10 15

Lys Leu Pro Asp Val Ala Phe Asp Gln Asn Asn Thr Cys Ile Leu Phe

20 25 30

Val Asp Gly Glu Phe Ser Leu His Leu Thr Tyr Glu Glu His Ser Asp

35 40 45

Arg Leu Tyr Val Tyr Ala Pro Leu Leu Asp Gly Leu Pro Asp Asn Pro

50 55 60

Gln Arg Arg Leu Ala Leu Tyr Glu Lys Leu Leu Glu Gly Ser Met Leu

65 70 75 80

Gly Gly Gln Met Ala Gly Gly Gly Val Gly Val Ala Thr Lys Glu Gln

85 90 95

Leu Ile Leu Met His Cys Val Leu Asp Met Lys Tyr Ala Glu Thr Asn

100 105 110

Leu Leu Lys Ala Phe Ala Gln Leu Phe Ile Glu Thr Val Val Lys Trp

115 120 125

Arg Thr Val Cys Ser Asp Ile Ser Ala Gly Arg Glu Pro Thr Val Asp

130 135 140

Thr Met Pro Gln Met Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ile Gln Pro Pro

145 150 155 160

Pro Ala Gly Ile Arg Ala Thr Val Lys Ala Ile Val Glu Ser Thr Pro

165 170 175

Glu Ala Pro Glu Glu Ile Pro Pro Val Glu Gly Glu Glu Ser Thr Ala

180 185 190

Thr Glu Asp Pro Asn Ser Asn Thr Glu Gly Ser Ser Ala Asn Thr Asn

195 200 205

Leu Glu Gly Ser Gln Gly Asp Thr Ala Asp Thr Gly Thr Gly Asp Val

210 215 220

Asn Asn Glu Ser Gln Asp Thr Ser Asp Thr Gly Asn Ala Glu Ser Glu

225 230 235 240

Glu Gln Leu Gln Asp Ser Thr Gln Ser Asn Glu Glu Asn Thr Leu Pro

245 250 255

Asn Ser Asn Ile Asp Gln Ser Asn Glu Asn Thr Asp Glu Ser Ser Asp

260 265 270

Ser His Thr Glu Glu Ile Thr Asp Glu Ser Val Ser Ser Ser Ser Glu

275 280 285

Ser Gly Ser Ser Thr Pro Gln Asp Gly Gly Ala Ala Ser Ser Gly Ala

290 295 300

Pro Ser Gly Asp Gln Ser Ile Ser Ala Asn Ala Cys Leu Ala Lys Ser

305 310 315 320

Tyr Ala Ala Ser Thr Asp Ser Ser Pro Val Ser Asn Ser Ser Gly Ser

325 330 335

Glu Glu Pro Val Thr Ser Ser Ser Asp Ser Asp Val Thr Ala Ser Ser

340 345 350

Asp Asn Pro Asp Ser Ser Ser Ser Gly Asp Ser Ala Gly Asp Ser Glu

355 360 365

Glu Pro Thr Glu Pro Glu Ala Gly Ser Thr Thr Glu Thr Leu Thr Leu

370 375 380

Ile Gly Gly Gly Ala Ile Tyr Gly Glu Thr Val Lys Ile Glu Asn Phe

385 390 395 400

Ser Gly Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe

405 410 415

Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala

420 425 430

Lys Pro Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr

435 440 445

Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Asn Met Phe

450 455 460

Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp

465 470 475 480

Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr

485 490 495

Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly

500 505 510

Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu

515 520 525

Asn Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp

530 535 540

Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Asp Lys

545 550 555 560

Pro Thr Ser Thr Thr Gly Asn Ala Thr Ala Pro Thr Thr Leu Thr Ala

565 570 575

Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Asn Met Phe Thr

580 585 590

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

595 600 605

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

610 615 620

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala

625 630 635 640

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

645 650 655

Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg

660 665 670

Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Glu Met Gly Glu Ala Leu

675 680 685

Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr Ser Thr Leu Ser Lys Leu Val Glu

690 695 700

Arg Thr Asn Pro Ala Tyr Gly Lys His Met Gln Asp Asn Met Phe Thr

705 710 715 720

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr

725 730 735

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr

740 745 750

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn

755 760 765

Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu

770 775 780

Asn

785

210 61

211 740

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 61

Ser Arg Gln Asn Ala Glu Glu Asn Leu Lys Asn Phe Ala Lys Glu Leu

1 5 10 15

Lys Leu Pro Asp Val Ala Phe Asp Gln Asn Asn Thr Cys Ile Leu Phe

20 25 30

Val Asp Gly Glu Phe Ser Leu His Leu Thr Tyr Glu Glu His Ser Asp

35 40 45

Arg Leu Tyr Val Tyr Ala Pro Leu Leu Asp Gly Leu Pro Asp Asn Pro

50 55 60

Gln Arg Arg Leu Ala Leu Tyr Glu Lys Leu Leu Glu Gly Ser Met Leu

65 70 75 80

Gly Gly Gln Met Ala Gly Gly Gly Val Gly Val Ala Thr Lys Glu Gln

85 90 95

Leu Ile Leu Met His Cys Val Leu Asp Met Lys Tyr Ala Glu Thr Asn

100 105 110

Leu Leu Lys Ala Phe Ala Gln Leu Phe Ile Glu Thr Val Val Lys Trp

115 120 125

Arg Thr Val Cys Ser Asp Ile Ser Ala Gly Arg Glu Pro Thr Val Asp

130 135 140

Thr Met Pro Gln Met Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ile Gln Pro Pro

145 150 155 160

Pro Ala Gly Ile Arg Ala Thr Val Lys Ala Ile Val Glu Ser Thr Pro

165 170 175

Glu Ala Pro Glu Glu Ile Pro Pro Val Glu Gly Glu Glu Ser Thr Ala

180 185 190

Thr Glu Asp Pro Asn Ser Asn Thr Glu Gly Ser Ser Ala Asn Thr Asn

195 200 205

Leu Glu Gly Ser Gln Gly Asp Thr Ala Asp Thr Gly Thr Gly Asp Val

210 215 220

Asn Asn Glu Ser Gln Asp Thr Ser Asp Thr Gly Asn Ala Glu Ser Glu

225 230 235 240

Glu Gln Leu Gln Asp Ser Thr Gln Ser Asn Glu Glu Asn Thr Leu Pro

245 250 255

Asn Ser Asn Ile Asp Gln Ser Asn Glu Asn Thr Asp Glu Ser Ser Asp

260 265 270

Ser His Thr Glu Glu Ile Thr Asp Glu Ser Val Ser Ser Ser Ser Glu

275 280 285

Ser Gly Ser Ser Thr Pro Gln Asp Gly Gly Ala Ala Ser Ser Gly Ala

290 295 300

Pro Ser Gly Asp Gln Ser Ile Ser Ala Asn Ala Cys Leu Ala Lys Ser

305 310 315 320

Tyr Ala Ala Ser Thr Asp Ser Ser Pro Val Ser Asn Ser Ser Gly Ser

325 330 335

Glu Glu Pro Val Thr Ser Ser Ser Asp Ser Asp Val Thr Ala Ser Ser

340 345 350

Asp Asn Pro Asp Ser Ser Ser Ser Gly Asp Ser Ala Gly Asp Ser Glu

355 360 365

Glu Pro Thr Glu Pro Glu Ala Gly Ser Thr Thr Glu Thr Leu Thr Leu

370 375 380

Ile Gly Gly Gly Ala Ile Tyr Gly Glu Thr Val Lys Ile Glu Asn Phe

385 390 395 400

Ser Gly Asp Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val

405 410 415

Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly

420 425 430

Ala Lys Pro Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu

435 440 445

Thr Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Ala Glu

450 455 460

Met Phe Thr Asn Ala Ala Ser Met Ala Leu Asn Ile Trp Asp Arg Phe

465 470 475 480

Asp Val Phe Ser Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly Tyr Leu Lys Gly Asn

485 490 495

Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe Gly Asp Asn Glu Asn Gln

500 505 510

Lys Thr Val Lys Ala Glu Ser Val Pro Asn Met Ser Phe Asp Gln Ser

515 520 525

Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Thr Phe Ala Trp Ser Val Gly Ala

530 535 540

Arg Ala Ala Leu Trp Glu Ser Gly Ser Ala Thr Leu Gly Ala Ser Phe

545 550 555 560

Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val Glu Glu Leu Asn Val Leu Ser

565 570 575

Asn Ala Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys

580 585 590

Glu Phe Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr Asp Ala Ala Thr Gly Thr

595 600 605

Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu

610 615 620

Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser

625 630 635 640

Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser

645 650 655

Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly

660 665 670

Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met

675 680 685

Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Lys Met Lys Ser Arg Lys Ser Ser

690 695 700

Gly Ile Ala Val Gly Thr Thr Ile Val Asp Ala Asp Lys Tyr Ala Val

705 710 715 720

Thr Val Glu Thr Arg Leu Ile Asp Glu Arg Ala Ala His Val Asn Ala

725 730 735

Gln Phe Arg Phe

740

210 62

211 294

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 62

Asp Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp

1 5 10 15

Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys

20 25 30

Pro Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala

35 40 45

Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Ala Glu Met Phe

50 55 60

Thr Asn Ala Ala Cys Met Ala Leu Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val

65 70 75 80

Phe Cys Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala

85 90 95

Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe Gly Asp Asn Glu Asn Gln Lys Thr

100 105 110

Val Lys Ala Glu Ser Val Pro Asn Met Ser Phe Asp Gln Ser Val Val

115 120 125

Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Thr Phe Ala Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala

130 135 140

Ala Leu Trp Glu Cys Gly Cys Ala Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr

145 150 155 160

Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val Glu Glu Leu Asn Val Leu Cys Asn Ala

165 170 175

Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu Phe

180 185 190

Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr Asp Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp

195 200 205

Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr

210 215 220

Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala

225 230 235 240

Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr

245 250 255

Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly

260 265 270

Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile

275 280 285

Val Ser Leu Gln Leu Asn

290

210 63

211 294

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 63

Asp Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp

1 5 10 15

Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys

20 25 30

Pro Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala

35 40 45

Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Ala Glu Met Phe

50 55 60

Thr Asn Ala Ala Ser Met Ala Leu Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val

65 70 75 80

Phe Ser Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala

85 90 95

Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe Gly Asp Asn Glu Asn Gln Lys Thr

100 105 110

Val Lys Ala Glu Ser Val Pro Asn Met Ser Phe Asp Gln Ser Val Val

115 120 125

Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Thr Phe Ala Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala

130 135 140

Ala Leu Trp Glu Ser Gly Ser Ala Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr

145 150 155 160

Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val Glu Glu Leu Asn Val Leu Ser Asn Ala

165 170 175

Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu Phe

180 185 190

Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr Asp Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp

195 200 205

Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr

210 215 220

Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala

225 230 235 240

Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr

245 250 255

Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly

260 265 270

Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile

275 280 285

Val Ser Leu Gln Leu Asn

290

210 64

211 500

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 64

Asp Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp

1 5 10 15

Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys

20 25 30

Pro Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala

35 40 45

Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His Met Gln Asp Ala Glu Met Phe

50 55 60

Thr Asn Ala Ala Ser Met Ala Leu Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val

65 70 75 80

Phe Ser Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala

85 90 95

Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe Gly Asp Asn Glu Asn Gln Lys Thr

100 105 110

Val Lys Ala Glu Ser Val Pro Asn Met Ser Phe Asp Gln Ser Val Val

115 120 125

Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Thr Phe Ala Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala

130 135 140

Ala Leu Trp Glu Ser Gly Ser Ala Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr

145 150 155 160

Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val Glu Glu Leu Asn Val Leu Ser Asn Ala

165 170 175

Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu Phe

180 185 190

Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr Asp Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp

195 200 205

Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr

210 215 220

Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala

225 230 235 240

Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr

245 250 255

Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly

260 265 270

Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile

275 280 285

Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys

290 295 300

Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro

305 310 315 320

Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile

325 330 335

Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp

340 345 350

Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr

355 360 365

Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg

370 375 380

Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu

385 390 395 400

Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu

405 410 415

Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn

420 425 430

Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp

435 440 445

Ser Asn Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val Val

450 455 460

Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Val

465 470 475 480

Ala Ala Asn Ser Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

485 490 495

Leu Gln Leu Asn

500

210 65

211 1068

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 65

Thr Val Lys Ala Ile Val Glu Ser Thr Pro Glu Ala Pro Glu Glu Ile

1 5 10 15

Pro Pro Val Glu Gly Glu Glu Ser Thr Ala Thr Glu Asp Pro Asn Ser

20 25 30

Asn Thr Glu Gly Ser Ser Ala Asn Thr Asn Leu Glu Gly Ser Gln Gly

35 40 45

Asp Thr Ala Asp Thr Gly Thr Gly Asp Val Asn Asn Glu Ser Gln Asp

50 55 60

Thr Ser Asp Thr Gly Asn Ala Glu Ser Glu Glu Gln Leu Gln Asp Ser

65 70 75 80

Thr Gln Ser Asn Glu Glu Asn Thr Leu Pro Asn Ser Asn Ile Asp Gln

85 90 95

Ser Asn Glu Asn Thr Asp Glu Ser Ser Asp Ser His Thr Glu Glu Ile

100 105 110

Thr Asp Glu Ser Val Ser Ser Ser Ser Glu Ser Gly Ser Ser Thr Pro

115 120 125

Gln Asp Gly Gly Ala Ala Ser Ser Gly Ala Pro Ser Gly Asp Gln Ser

130 135 140

Ile Ser Ala Asn Ala Cys Leu Ala Lys Ser Tyr Ala Ala Ser Thr Asp

145 150 155 160

Ser Ser Pro Val Ser Asn Ser Ser Gly Ser Glu Glu Pro Val Thr Ser

165 170 175

Ser Ser Asp Ser Asp Val Thr Ala Ser Ser Asp Asn Pro Asp Ser Ser

180 185 190

Ser Ser Gly Asp Ser Ala Gly Asp Ser Glu Glu Pro Thr Glu Pro Glu

195 200 205

Ala Gly Ser Thr Thr Glu Thr Leu Thr Leu Ile Gly Gly Gly Ala Ile

210 215 220

Tyr Gly Glu Thr Val Lys Ile Glu Asn Phe Ser Gly Ser Arg Gln Asn

225 230 235 240

Ala Glu Glu Asn Leu Lys Asn Phe Ala Lys Glu Leu Lys Leu Pro Asp

245 250 255

Val Ala Phe Asp Gln Asn Asn Thr Cys Ile Leu Phe Val Asp Gly Glu

260 265 270

Phe Ser Leu His Leu Thr Tyr Glu Glu His Ser Asp Arg Leu Tyr Val

275 280 285

Tyr Ala Pro Leu Leu Asp Gly Leu Pro Asp Asn Pro Gln Arg Arg Leu

290 295 300

Ala Leu Tyr Glu Lys Leu Leu Glu Gly Ser Met Leu Gly Gly Gln Met

305 310 315 320

Ala Gly Gly Gly Val Gly Val Ala Thr Lys Glu Gln Leu Ile Leu Met

325 330 335

His Cys Val Leu Asp Met Lys Tyr Ala Glu Thr Asn Leu Leu Lys Ala

340 345 350

Phe Ala Gln Leu Phe Ile Glu Thr Val Val Lys Trp Arg Thr Val Cys

355 360 365

Ser Asp Ile Ser Ala Gly Arg Glu Pro Thr Val Asp Thr Met Pro Gln

370 375 380

Met Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ile Gln Pro Pro Pro Ala Gly Ile

385 390 395 400

Arg Ala Ser Arg Gln Asn Ala Glu Glu Asn Leu Lys Asn Phe Ala Lys

405 410 415

Glu Leu Lys Leu Pro Asp Val Ala Phe Asp Gln Asn Asn Thr Cys Ile

420 425 430

Leu Phe Val Asp Gly Glu Phe Ser Leu His Leu Thr Tyr Glu Glu His

435 440 445

Ser Asp Arg Leu Tyr Val Tyr Ala Pro Leu Leu Asp Gly Leu Pro Asp

450 455 460

Asn Pro Gln Arg Arg Leu Ala Leu Tyr Glu Lys Leu Leu Glu Gly Ser

465 470 475 480

Met Leu Gly Gly Gln Met Ala Gly Gly Gly Val Gly Val Ala Thr Lys

485 490 495

Glu Gln Leu Ile Leu Met His Cys Val Leu Asp Met Lys Tyr Ala Glu

500 505 510

Thr Asn Leu Leu Lys Ala Phe Ala Gln Leu Phe Ile Glu Thr Val Val

515 520 525

Lys Trp Arg Thr Val Cys Ser Asp Ile Ser Ala Gly Arg Glu Pro Thr

530 535 540

Val Asp Thr Met Pro Gln Met Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ile Gln

545 550 555 560

Pro Pro Pro Ala Gly Ile Arg Ala Asp Ala Ile Ser Met Arg Val Gly

565 570 575

Tyr Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn

580 585 590

Lys Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser

595 600 605

Ala Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg

610 615 620

His Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn Ala Ala Ser Met Ala Leu

625 630 635 640

Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Ser Thr Leu Gly Ala Thr Ser

645 650 655

Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe

660 665 670

Gly Asp Asn Glu Asn Gln Lys Thr Val Lys Ala Glu Ser Val Pro Asn

675 680 685

Met Ser Phe Asp Gln Ser Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Thr Phe

690 695 700

Ala Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala Ala Leu Trp Glu Ser Gly Ser Ala

705 710 715 720

Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val Glu

725 730 735

Glu Leu Asn Val Leu Ser Asn Ala Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro

740 745 750

Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu Phe Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr

755 760 765

Asp Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp

770 775 780

Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr

785 790 795 800

Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg

805 810 815

Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu

820 825 830

Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly

835 840 845

Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met

850 855 860

Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala

865 870 875 880

Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp

885 890 895

Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala

900 905 910

Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln

915 920 925

Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala

930 935 940

Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr

945 950 955 960

Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly

965 970 975

Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln

980 985 990

Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val

995 1000 1005

Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asn Thr Ile Arg Ile Ala

1010 1015 1020

Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn

1025 1030 1035

Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Val Ala Ala Asn Ser Glu

1040 1045 1050

Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

1055 1060 1065

210 66

211 606

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 66

Ser Arg Gln Asn Ala Glu Glu Asn Leu Lys Asn Phe Ala Lys Glu Leu

1 5 10 15

Lys Leu Pro Asp Val Ala Phe Asp Gln Asn Asn Thr Cys Ile Leu Phe

20 25 30

Val Asp Gly Glu Phe Ser Leu His Leu Thr Tyr Glu Glu His Ser Asp

35 40 45

Arg Leu Tyr Val Tyr Ala Pro Leu Leu Asp Gly Leu Pro Asp Asn Pro

50 55 60

Gln Arg Arg Leu Ala Leu Tyr Glu Lys Leu Leu Glu Gly Ser Met Leu

65 70 75 80

Gly Gly Gln Met Ala Gly Gly Gly Val Gly Val Ala Thr Lys Glu Gln

85 90 95

Leu Ile Leu Met His Cys Val Leu Asp Met Lys Tyr Ala Glu Thr Asn

100 105 110

Leu Leu Lys Ala Phe Ala Gln Leu Phe Ile Glu Thr Val Val Lys Trp

115 120 125

Arg Thr Val Cys Ser Asp Ile Ser Ala Gly Arg Glu Pro Thr Val Asp

130 135 140

Thr Met Pro Gln Met Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ile Gln Pro Pro

145 150 155 160

Pro Ala Gly Ile Arg Ala Ser Arg Gln Asn Ala Glu Glu Asn Leu Lys

165 170 175

Asn Phe Ala Lys Glu Leu Lys Leu Pro Asp Val Ala Phe Asp Gln Asn

180 185 190

Asn Thr Cys Ile Leu Phe Val Asp Gly Glu Phe Ser Leu His Leu Thr

195 200 205

Tyr Glu Glu His Ser Asp Arg Leu Tyr Val Tyr Ala Pro Leu Leu Asp

210 215 220

Gly Leu Pro Asp Asn Pro Gln Arg Arg Leu Ala Leu Tyr Glu Lys Leu

225 230 235 240

Leu Glu Gly Ser Met Leu Gly Gly Gln Met Ala Gly Gly Gly Val Gly

245 250 255

Val Ala Thr Lys Glu Gln Leu Ile Leu Met His Cys Val Leu Asp Met

260 265 270

Lys Tyr Ala Glu Thr Asn Leu Leu Lys Ala Phe Ala Gln Leu Phe Ile

275 280 285

Glu Thr Val Val Lys Trp Arg Thr Val Cys Ser Asp Ile Ser Ala Gly

290 295 300

Arg Glu Pro Thr Val Asp Thr Met Pro Gln Met Pro Gln Gly Gly Gly

305 310 315 320

Gly Gly Ile Gln Pro Pro Pro Ala Gly Ile Arg Ala Asn Met Phe Thr

325 330 335

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr

340 345 350

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

355 360 365

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala

370 375 380

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

385 390 395 400

Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe

405 410 415

Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile

420 425 430

Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val

435 440 445

Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser

450 455 460

Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser

465 470 475 480

Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu

485 490 495

Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly

500 505 510

Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr

515 520 525

Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile

530 535 540

Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asn Thr Ile Arg Ile

545 550 555 560

Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn

565 570 575

Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Val Ala Ala Asn Ser Glu Gly

580 585 590

Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

595 600 605

210 67

211 1093

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 67

Ser Arg Gln Asn Ala Glu Glu Asn Leu Lys Asn Phe Ala Lys Glu Leu

1 5 10 15

Lys Leu Pro Asp Val Ala Phe Asp Gln Asn Asn Thr Cys Ile Leu Phe

20 25 30

Val Asp Gly Glu Phe Ser Leu His Leu Thr Tyr Glu Glu His Ser Asp

35 40 45

Arg Leu Tyr Val Tyr Ala Pro Leu Leu Asp Gly Leu Pro Asp Asn Pro

50 55 60

Gln Arg Arg Leu Ala Leu Tyr Glu Lys Leu Leu Glu Gly Ser Met Leu

65 70 75 80

Gly Gly Gln Met Ala Gly Gly Gly Val Gly Val Ala Thr Lys Glu Gln

85 90 95

Leu Ile Leu Met His Cys Val Leu Asp Met Lys Tyr Ala Glu Thr Asn

100 105 110

Leu Leu Lys Ala Phe Ala Gln Leu Phe Ile Glu Thr Val Val Lys Trp

115 120 125

Arg Thr Val Cys Ser Asp Ile Ser Ala Gly Arg Glu Pro Thr Val Asp

130 135 140

Thr Met Pro Gln Met Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ile Gln Pro Pro

145 150 155 160

Pro Ala Gly Ile Arg Ala Ser Arg Gln Asn Ala Glu Glu Asn Leu Lys

165 170 175

Asn Phe Ala Lys Glu Leu Lys Leu Pro Asp Val Ala Phe Asp Gln Asn

180 185 190

Asn Thr Cys Ile Leu Phe Val Asp Gly Glu Phe Ser Leu His Leu Thr

195 200 205

Tyr Glu Glu His Ser Asp Arg Leu Tyr Val Tyr Ala Pro Leu Leu Asp

210 215 220

Gly Leu Pro Asp Asn Pro Gln Arg Arg Leu Ala Leu Tyr Glu Lys Leu

225 230 235 240

Leu Glu Gly Ser Met Leu Gly Gly Gln Met Ala Gly Gly Gly Val Gly

245 250 255

Val Ala Thr Lys Glu Gln Leu Ile Leu Met His Cys Val Leu Asp Met

260 265 270

Lys Tyr Ala Glu Thr Asn Leu Leu Lys Ala Phe Ala Gln Leu Phe Ile

275 280 285

Glu Thr Val Val Lys Trp Arg Thr Val Cys Ser Asp Ile Ser Ala Gly

290 295 300

Arg Glu Pro Thr Val Asp Thr Met Pro Gln Met Pro Gln Gly Gly Gly

305 310 315 320

Gly Gly Ile Gln Pro Pro Pro Ala Gly Ile Arg Ala Gly Ile Ala His

325 330 335

Thr Glu Trp Glu Ser Val Ile Gly Leu Glu Val His Val Glu Leu Asn

340 345 350

Thr Glu Ser Lys Leu Phe Ser Pro Ala Arg Asn His Phe Gly Asp Glu

355 360 365

Pro Asn Thr Asn Ile Ser Pro Val Cys Thr Gly Met Pro Gly Ser Leu

370 375 380

Pro Val Leu Asn Lys Asp Ala Val Arg Lys Ala Val Leu Phe Gly Cys

385 390 395 400

Ala Val Glu Gly Asp Val Ala Leu Phe Ser Arg Phe Asp Arg Lys Ser

405 410 415

Tyr Phe Tyr Pro Asp Ser Pro Arg Asn Phe Gln Ile Thr Gln Tyr Glu

420 425 430

His Pro Ile Val Arg Gly Gly Cys Ile Arg Ala Val Val Glu Gly Glu

435 440 445

Glu Lys Thr Phe Glu Leu Ala Gln Thr His Leu Glu Asp Asp Ala Gly

450 455 460

Met Leu Lys His Phe Gly Asp Phe Ala Gly Val Asp Tyr Asn Arg Ala

465 470 475 480

Gly Val Pro Leu Ile Glu Ile Val Ser Lys Pro Cys Met Phe Ser Ala

485 490 495

Glu Asp Ala Val Ala Tyr Ala Asn Ala Leu Val Ser Ile Leu Gly Tyr

500 505 510

Ile Gly Ile Ser Asp Cys Asn Met Glu Glu Gly Ser Ile Arg Phe Asp

515 520 525

Val Asn Ile Ser Val Arg Pro Arg Gly Ser Arg Glu Leu Arg Asn Lys

530 535 540

Val Glu Ile Lys Asn Met Asn Ser Phe Thr Phe Met Ala Gln Ala Leu

545 550 555 560

Glu Ala Glu Lys Arg Arg Gln Ile Glu Glu Tyr Leu Ser Tyr Pro Asn

565 570 575

Glu Asp Pro Lys Lys Val Val Pro Ala Ala Thr Tyr Arg Trp Asp Pro

580 585 590

Glu Lys Lys Lys Thr Val Leu Met Arg Leu Lys Glu Arg Ala Glu Asp

595 600 605

Tyr Met Tyr Phe Val Glu Pro Asp Leu Pro Val Leu Gln Ile Thr Glu

610 615 620

Thr Tyr Ile Asp Glu Val Arg Gln Thr Leu Pro Glu Leu Pro His Ser

625 630 635 640

Lys Tyr Met Arg Tyr Ile Thr Asp Phe Asp Ile Ala Glu Asp Leu Ala

645 650 655

Met Ile Leu Val Gly Asp Arg His Thr Ala His Phe Phe Glu Thr Ala

660 665 670

Thr Met Ser Cys Lys Asn Tyr Arg Ala Leu Ser Asn Trp Ile Thr Val

675 680 685

Glu Phe Ala Gly Arg Cys Lys Ala Arg Gly Lys Thr Leu Pro Phe Thr

690 695 700

Gly Ile Leu Pro Glu Trp Val Ala Gln Leu Val Asn Phe Ile Asp Arg

705 710 715 720

Gly Val Ile Thr Gly Lys Ile Ala Lys Glu Ile Ala Asp Arg Met Val

725 730 735

Ser Ser Phe Gly Glu Ser Pro Glu Asp Ile Leu Arg Arg His Pro Ser

740 745 750

Leu Leu Pro Met Thr Asp Asp His Ala Leu Arg Ala Ile Val Lys Glu

755 760 765

Val Val Ala Gln Asn Thr Ala Ser Val Ala Asp Tyr Lys Asn Gly Lys

770 775 780

Ala Lys Ala Leu Gly Phe Leu Val Gly Gln Ile Met Lys Arg Thr Glu

785 790 795 800

Gly Lys Ala Pro Pro Lys Arg Val Asn Glu Leu Leu Leu Ala Ala Met

805 810 815

Arg Asp Met Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg

820 825 830

Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala

835 840 845

Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala

850 855 860

Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln

865 870 875 880

Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val

885 890 895

Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln

900 905 910

Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr

915 920 925

Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly

930 935 940

Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Asn Met Phe Thr Pro

945 950 955 960

Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile

965 970 975

Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr

980 985 990

Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr

995 1000 1005

Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu

1010 1015 1020

Asn Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala

1025 1030 1035

Ser Phe Asp Ser Asn Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala

1040 1045 1050

Lys Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly

1055 1060 1065

Ser Gly Ser Val Val Ala Ala Asn Ser Glu Gly Gln Ile Ser Asp

1070 1075 1080

Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn

1085 1090

210 68

211 393

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 68

Met Lys Lys Leu Leu Lys Ser Val Leu Val Phe Ala Ala Leu Ser Ser

1 5 10 15

Ala Ser Ser Leu Gln Ala Leu Pro Val Gly Asn Pro Ala Glu Pro Ser

20 25 30

Leu Met Ile Asp Gly Ile Leu Trp Glu Gly Phe Gly Gly Asp Pro Cys

35 40 45

Asp Pro Cys Ala Thr Trp Cys Asp Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr

50 55 60

Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys

65 70 75 80

Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala

85 90 95

Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His

100 105 110

Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn Ala Ala Cys Met Ala Leu Asn

115 120 125

Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly

130 135 140

Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe Gly

145 150 155 160

Asp Asn Glu Asn Gln Lys Thr Val Lys Ala Glu Ser Val Pro Asn Met

165 170 175

Ser Phe Asp Gln Ser Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Thr Phe Ala

180 185 190

Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala Ala Leu Trp Glu Cys Gly Cys Ala Thr

195 200 205

Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val Glu Glu

210 215 220

Leu Asn Val Leu Cys Asn Ala Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro Lys

225 230 235 240

Gly Tyr Val Gly Lys Glu Phe Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr Asp

245 250 255

Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp Gln

260 265 270

Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile

275 280 285

Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile

290 295 300

Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn

305 310 315 320

Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln

325 330 335

Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Lys Met Lys

340 345 350

Ser Arg Lys Ser Cys Gly Ile Ala Val Gly Thr Thr Ile Val Asp Ala

355 360 365

Asp Lys Tyr Ala Val Thr Val Glu Thr Arg Leu Ile Asp Glu Arg Ala

370 375 380

Ala His Val Asn Ala Gln Phe Arg Phe

385 390

210 69

211 122

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 69

Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Ser Ala

20 25 30

Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala

35 40 45

Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu Gly Leu Val Thr Pro

50 55 60

Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser

65 70 75 80

Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Leu Ala Lys Pro Val

85 90 95

Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser Val

100 105 110

Val Ala Ala Asn Ser Glu Gly Gln Ile Ser

115 120

210 70

211 178

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 70

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr

1 5 10 15

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala

20 25 30

Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Ile Arg Ile Ala

35 40 45

Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro

50 55 60

Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln Leu

65 70 75 80

Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Ile Arg Ile Ala Gln Pro Arg Leu

85 90 95

Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly

100 105 110

Ser Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr

115 120 125

Met Gln Ile Val Ser Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro

130 135 140

Val Val Asp Ile Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ser

145 150 155 160

Val Val Ala Ala Asn Ser Glu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile

165 170 175

Val Ser

210 71

211 393

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 71

Met Lys Lys Leu Leu Lys Ser Val Leu Val Phe Ala Ala Leu Ser Ser

1 5 10 15

Ala Ser Ser Leu Gln Ala Leu Pro Val Gly Asn Pro Ala Glu Pro Ser

20 25 30

Leu Met Ile Asp Gly Ile Leu Trp Glu Gly Phe Gly Gly Asp Pro Cys

35 40 45

Asp Pro Cys Thr Thr Trp Cys Asp Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr

50 55 60

Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys

65 70 75 80

Glu Phe Gln Met Gly Asp Lys Pro Thr Ser Thr Thr Gly Asn Ala Thr

85 90 95

Ala Pro Thr Thr Leu Thr Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His

100 105 110

Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn Ala Ala Cys Met Ala Leu Asn

115 120 125

Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala Ser Ser Gly

130 135 140

Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe Gly

145 150 155 160

Asp Asn Glu Asn Gln Ser Thr Val Lys Thr Asn Ser Val Pro Asn Met

165 170 175

Ser Leu Asp Gln Ser Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Ala Phe Ser

180 185 190

Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala Ala Leu Trp Glu Cys Gly Cys Ala Thr

195 200 205

Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val Glu Glu

210 215 220

Leu Asn Val Leu Cys Asn Ala Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro Lys

225 230 235 240

Gly Tyr Val Gly Gln Glu Phe Pro Leu Ala Leu Ile Ala Gly Thr Asp

245 250 255

Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp Gln

260 265 270

Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile

275 280 285

Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile

290 295 300

Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn

305 310 315 320

Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Ala Ser Ala Glu Gly Gln

325 330 335

Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Lys Met Lys

340 345 350

Ser Arg Lys Ser Cys Gly Ile Ala Val Gly Thr Thr Ile Val Asp Ala

355 360 365

Asp Lys Tyr Ala Val Thr Val Glu Thr Arg Leu Ile Asp Glu Arg Ala

370 375 380

Ala His Val Asn Ala Gln Phe Arg Phe

385 390

210 72

211 395

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 72

Met Lys Lys Leu Leu Lys Ser Val Leu Val Phe Ala Ala Leu Ser Ser

1 5 10 15

Ala Ser Ser Leu Gln Ala Leu Pro Val Gly Asn Pro Ala Glu Pro Ser

20 25 30

Leu Met Ile Asp Gly Ile Leu Trp Glu Gly Phe Gly Gly Asp Pro Cys

35 40 45

Asp Pro Cys Thr Thr Trp Cys Asp Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr

50 55 60

Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys

65 70 75 80

Glu Phe Glu Met Gly Glu Ala Leu Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr

85 90 95

Ser Thr Leu Ser Lys Leu Val Glu Arg Thr Asn Pro Ala Tyr Gly Lys

100 105 110

His Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn Ala Ala Cys Met Thr Leu

115 120 125

Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala Thr Ser

130 135 140

Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe

145 150 155 160

Gly Asp Gly Val Asn Ala Thr Lys Pro Ala Ala Asp Ser Ile Pro Asn

165 170 175

Val Gln Leu Asn Gln Ser Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Thr Phe

180 185 190

Ala Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala Ala Leu Trp Glu Cys Gly Cys Ala

195 200 205

Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys Ile Glu

210 215 220

Glu Leu Asn Val Leu Cys Asn Ala Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro

225 230 235 240

Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu Phe Pro Leu Asp Leu Thr Ala Gly Thr

245 250 255

Asp Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp

260 265 270

Gln Ala Ser Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr

275 280 285

Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asp Thr Ile Arg

290 295 300

Ile Ala Gln Pro Arg Leu Val Thr Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu

305 310 315 320

Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val Ala Gly Ala Asn Thr Glu

325 330 335

Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Lys

340 345 350

Met Lys Ser Arg Lys Ser Cys Gly Ile Ala Val Gly Thr Thr Ile Val

355 360 365

Asp Ala Asp Lys Tyr Ala Val Thr Val Glu Thr Arg Leu Ile Asp Glu

370 375 380

Arg Ala Ala His Val Asn Ala Gln Phe Arg Phe

385 390 395

210 73

211 393

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 73

Met Lys Lys Leu Leu Lys Ser Val Leu Val Phe Ala Ala Leu Ser Ser

1 5 10 15

Ala Ser Ser Leu Gln Ala Leu Pro Val Gly Asn Pro Ala Glu Pro Ser

20 25 30

Leu Met Ile Asp Gly Ile Leu Trp Glu Gly Phe Gly Gly Asp Pro Cys

35 40 45

Asp Pro Cys Thr Thr Trp Cys Asp Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr

50 55 60

Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys

65 70 75 80

Glu Phe Glu Met Gly Glu Ala Leu Ala Gly Ala Ser Gly Asn Thr Thr

85 90 95

Ser Thr Leu Ser Lys Leu Val Glu Arg Thr Asn Pro Ala Tyr Gly Lys

100 105 110

His Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn Ala Ala Cys Met Ala Leu

115 120 125

Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala Thr Ser

130 135 140

Gly Tyr Leu Arg Gly Asn Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe

145 150 155 160

Gly Asp Ser Glu Asn Ala Thr Gln Pro Ala Ala Thr Ser Ile Pro Asn

165 170 175

Val Gln Leu Asn Gln Ser Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr Ala Phe

180 185 190

Ala Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala Ala Leu Trp Glu Cys Gly Cys Ala

195 200 205

Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys Val Glu

210 215 220

Glu Leu Asn Val Leu Cys Asn Ala Ala Glu Phe Thr Ile Asn Lys Pro

225 230 235 240

Lys Gly Tyr Val Gly Gln Glu Phe Pro Leu Ala Leu Thr Ala Gly Thr

245 250 255

Asp Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His Glu Trp

260 265 270

Gln Ala Ser Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr Pro Tyr

275 280 285

Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ser Asn Thr Ile Arg

290 295 300

Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Lys Pro Val Val Asp Ile Thr Thr Leu

305 310 315 320

Asn Pro Thr Ile Ala Gly Cys Gly Ser Val Val Ala Ala Asn Ser Glu

325 330 335

Gly Gln Ile Ser Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Lys

340 345 350

Met Lys Ser Arg Lys Ser Cys Gly Ile Ala Val Gly Thr Thr Ile Val

355 360 365

Asp Ala Asp Lys Tyr Ala Val Thr Val Glu Thr Arg Leu Ile Asp Glu

370 375 380

Arg Ala Ala His Val Asn Ala Gln Phe

385 390

210 74

211 389

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 74

Met Lys Lys Leu Leu Lys Ser Val Leu Val Phe Ala Ala Leu Ser Ser

1 5 10 15

Ala Ser Ser Leu Gln Ala Leu Pro Val Gly Asn Pro Ala Glu Pro Ser

20 25 30

Leu Met Ile Asp Gly Ile Leu Trp Glu Gly Phe Gly Gly Asp Pro Cys

35 40 45

Asp Pro Cys Thr Thr Trp Cys Asp Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr

50 55 60

Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys

65 70 75 80

Glu Phe Gln Met Gly Ala Ala Pro Thr Thr Lys Asp Ile Ala Gly Leu

85 90 95

Glu Asn Asp Pro Thr Thr Asn Val Ala Arg Pro Asn Pro Ala Tyr Gly

100 105 110

Lys His Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn Ala Ala Tyr Met Ala

115 120 125

Leu Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala Thr

130 135 140

Thr Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu

145 150 155 160

Phe Gly Thr Lys Thr Gln Ser Ser Asn Phe Asn Thr Ala Lys Leu Ile

165 170 175

Pro Asn Ala Ala Leu Asn Gln Ala Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr

180 185 190

Thr Phe Ala Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala Ala Leu Trp Glu Cys Gly

195 200 205

Cys Ala Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys

210 215 220

Val Glu Glu Leu Asn Val Leu Cys Asn Ala Ser Glu Phe Thr Ile Asn

225 230 235 240

Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Ala Glu Phe Pro Leu Asp Ile Thr Ala

245 250 255

Gly Thr Glu Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His

260 265 270

Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr

275 280 285

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Val Ser Phe Asp Ala Asp Thr

290 295 300

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Glu Ala Ile Leu Asp Val Thr

305 310 315 320

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val Val Ala Ser Gly

325 330 335

Ser Asp Asn Asp Leu Ala Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu

340 345 350

Asn Lys Met Lys Ser Arg Lys Ser Cys Gly Ile Ala Val Gly Thr Thr

355 360 365

Ile Val Asp Ala Asp Lys Tyr Ala Val Thr Val Glu Thr Arg Leu Ile

370 375 380

Asp Glu Arg Ala Ala

385

210 75

211 397

212 БЕЛОК

213 Chlamydia trachomatis

400 75

Met Lys Lys Leu Leu Lys Ser Val Leu Val Phe Ala Ala Leu Ser Ser

1 5 10 15

Ala Ser Ser Leu Gln Ala Leu Pro Val Gly Asn Pro Ala Glu Pro Ser

20 25 30

Leu Met Ile Asp Gly Ile Leu Trp Glu Gly Phe Gly Gly Asp Pro Cys

35 40 45

Asp Pro Cys Thr Thr Trp Cys Asp Ala Ile Ser Met Arg Met Gly Tyr

50 55 60

Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys

65 70 75 80

Glu Phe Gln Met Gly Ala Ala Pro Thr Thr Ser Asp Val Ala Gly Leu

85 90 95

Gln Asn Asp Pro Thr Thr Asn Val Ala Arg Pro Asn Pro Ala Tyr Gly

100 105 110

Lys His Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn Ala Ala Tyr Met Ala

115 120 125

Leu Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala Thr

130 135 140

Thr Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu

145 150 155 160

Phe Gly Thr Lys Thr Gln Ala Ser Ser Phe Asn Thr Ala Asn Leu Phe

165 170 175

Pro Asn Thr Ala Leu Asn Gln Ala Val Val Glu Leu Tyr Thr Asp Thr

180 185 190

Thr Phe Ala Trp Ser Val Gly Ala Arg Ala Ala Leu Trp Glu Cys Gly

195 200 205

Cys Ala Thr Leu Gly Ala Ser Phe Gln Tyr Ala Gln Ser Lys Pro Lys

210 215 220

Val Glu Glu Leu Asn Val Leu Cys Asn Ala Ser Glu Phe Thr Ile Asn

225 230 235 240

Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Ala Glu Phe Pro Leu Asp Ile Thr Ala

245 250 255

Gly Thr Glu Ala Ala Thr Gly Thr Lys Asp Ala Ser Ile Asp Tyr His

260 265 270

Glu Trp Gln Ala Ser Leu Ala Leu Ser Tyr Arg Leu Asn Met Phe Thr

275 280 285

Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Val Ser Phe Asp Ala Asp Thr

290 295 300

Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Leu Ala Glu Ala Ile Leu Asp Val Thr

305 310 315 320

Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Lys Gly Thr Val Val Ala Ser Gly

325 330 335

Ser Glu Asn Asp Leu Ala Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu

340 345 350

Asn Lys Met Lys Ser Arg Lys Ser Cys Gly Ile Ala Val Gly Thr Thr

355 360 365

Ile Val Asp Ala Asp Lys Tyr Ala Val Thr Val Glu Thr Arg Leu Ile

370 375 380

Asp Glu Arg Ala Ala His Val Asn Ala Gln Phe Arg Phe

385 390 395

<---

Изобретение относится к области биохимии, в частности к полипептиду для индуцирования иммунного ответа против Chlamydia trachomatis, а также к нуклеиновой кислоте, его кодирующей. Также раскрыта фармацевтическая композиция для профилактического или терапевтического применения против инфекций С.trachomatis, содержащая вышеуказанный полипептид или нуклеиновую кислоту. Изобретение также относится к способу предупреждения или лечения инфекции Chlamydia trachomatis, предусматривающего использование вышеуказанной композиции. Изобретение позволяет эффективно индуцировать иммунный ответ против Chlamydia trachomatis. 4 н. и 15 з.п. ф-лы, 16 ил., 8 табл., 12 пр.

1. Полипептид для индуцирования иммунного ответа против Chlamydia trachomatis, содержащий 3 или более единиц иммуноповтора, экспонированных на поверхности фрагментов МОМР-белка любого из серотипов D, Е, F, G, Ia, или J Chlamydia trachomatis, где иммуноповтор состоит из:

а) одной единицы иммуноповтора, представляющей собой аминокислотную последовательность, определенную в формуле I:

xx₁-VD4-xx₂ (формула I),

где

VD4 независимо выбран из SEQ ID NO: 15-20, и

xx₁ состоит из

i) аминокислотной последовательности EWQASLALSYRLNMFTPYIGVKWSRASFDADTIRIAQPK (SEQ ID NO: 21) или

ii) подпоследовательности аминокислотной последовательности из i), при этом указанная подпоследовательность характеризуется 1-38 аминокислотными остатками, начиная с K на С-конце в аминокислотной последовательности из i),

и

xx₂ состоит из

iii) аминокислотной последовательности DTMQIVSLQLNKMKSRKSCGIAVGTTIVDA (SEQ ID NO: 22) или

iv) подпоследовательности аминокислотной последовательности из iii), при этом указанная подпоследовательность характеризуется 1-29 аминокислотными остатками, начиная с D на N-конце в аминокислотной последовательности из iii), и

б) двух или более дополнительных единиц иммуноповтора, представляющих собой аминокислотную последовательность, которая представляет собой ту же последовательность, что определена в а), или аминокислотную последовательность, определенную в формуле II:

yy1-VD1-yy2 (формула II),

где

VD1 независимо выбран из SEQ ID NO: 1-6, и

yy1 состоит из

v) аминокислотной последовательности DAISMRVGYYGDFVFDRVLKTDVNKEFQMG (SEQ ID NO: 7) или

vi) подпоследовательности аминокислотной последовательности из v), при этом указанная подпоследовательность характеризуется 1-30 аминокислотными остатками, начиная с G на С-конце в аминокислотной последовательности из v), и

yy2 состоит из

vii) аминокислотной последовательности NPAYGRHMQDAEMFTNAA (SEQ ID NO: 8) или

viii) подпоследовательности аминокислотной последовательности из vii), при этом указанная подпоследовательность характеризуется 1-18 аминокислотными остатками, начиная с N на N-конце в аминокислотной последовательности из vii).

2. Полипептид по п. 1, где иммуноповторы являются гомологичными или гетерологичными.

3. Полипептид по п. 1, где аминокислотные последовательности необязательно линеаризованы.

4. Полипептид по п. 1, где аминокислотные последовательности, содержащие вариабельные домены 4 (VD4) из МОМР, находятся рядом друг с другом или разделены линкером.

5. Полипептид по п. 4, где указанные полипептиды выбраны из SEQ ID NO: 49-59, и аминокислотные последовательности формулы I выбраны из SEQ ID NO: 23-28.

6. Полипептид по п. 1, где аминокислотные последовательности, определенные в формуле II, находятся рядом друг с другом или разделены линкером.

7. Полипептид по п. 6, где указанные полипептиды выбраны из SEQ ID NO: 45-48, и аминокислотные последовательности формулы II выбраны из SEQ ID NO: 9-14.

8. Полипептид по п. 1, содержащий фрагмент, который способствует экспорту полипептида после того, как он получен рекомбинантно, фрагмент, который способствует очистке белка слияния, и/или фрагмент, который усиливает иммуногенность.

9. Полипептид по п. 8, где фрагментом, который усиливает иммуногенность, является дополнительная Т-клеточная мишень, которая выбрана из антигена С.trachomatis, такого как СТ043, СТ004, СТ414, СТ681, или его части.

10. Полипептид по п. 9, где указанные полипептиды имеют последовательности, выбранные из SEQ ID NO: 60-68.

11. Полипептид по п. 1, который обладает способностью

a) нейтрализовать серовар D С.trachomatis in vitro с 50% титром нейтрализации 10^-3 или менее при тестировании в постановке эксперимента, включающего введение гетерологичных иммуноповторов;

b) нейтрализовать серовар D С.trachomatis in vivo по меньшей мере у 50% мышей на 7 сутки после инфицирования при тестировании на мышиной модели, включающем введение гетерологичных иммуноповторов;

c) расширять иммунный ответ на несколько сероваров С.trachomatis in vitro при введении гетерологичных иммуноповторов.

12. Полипептид по п. 11, имеющий последовательность SEQ ID NO: 64.

13. Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по любому из предыдущих пунктов.

14. Фармацевтическая композиция для профилактического или терапевтического применения против инфекций С.trachomatis, содержащая полипептид по любому из пп. 1-12 или нуклеиновую кислоту по п. 13 в эффективном количестве.

15. Фармацевтическая композиция по п. 14, представляющая собой вакцину.

16. Фармацевтическая композиция по п. 15, дополнительно содержащая фармакологически приемлемый носитель, вспомогательное средство, адъювант или иммуномодулятор.

17. Фармацевтическая композиция по п. 16, где адъювант представляет собой DDA/TDB или квасцы.

18. Фармацевтическая композиция по п. 16, где носитель представляет собой вирусоподобную частицу.

19. Способ предупреждения или лечения инфекции Chlamydia trachomatis, при этом указанный способ включает введение фармацевтической композиции по п. 14.