ИНДУЦИБЕЛЬНЫЕ ХИМЕРНЫЕ ЦИТОКИНОВЫЕ РЕЦЕПТОРЫ Российский патент 2024 года по МПК C07K14/715 C12N15/62 C12N5/78 A61K38/17 A61P35/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Данная заявка заявляет приоритет по предварительной заявке США №62/637,600, поданной 2 марта 2018 года, содержание которой включено в данный документ в полном объеме посредством ссылки.

ССЫЛКА НА СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0002] Данная заявка подается в электронном виде через EFS-Web и содержит список последовательностей в электронном виде в формате.txt. Файл .txt содержит список последовательностей, озаглавленный «ALGN_016_01WO_SeqList_ST25», созданный 27 февраля 2019 года и имеющий размер ~ 814 КБ. Список последовательностей, содержащийся в этом файле.txt, является частью данного описания изобретения и полностью включен в данное описание посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] Данное изобретение в целом относится к индуцибельным химерным цитокиновым рецепторам для использования с иммунными клетками (например, Т-клетками) для лечения заболевания.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0004] Т-клетки с химерными антигенными рецепторами (CAR-T - Chimeric Antigen Receptor Т cells) поступили в клинику и продемонстрировали очень многообещающие результаты (Maus, М. et al., 2014, Blood 123, 2625-35). Хотя большинство субъектов подвергались лечению аутологичными CAR-T-клетками, которые получены из собственных Т-клеток субъекта, аллогенные CAR-T-клетки, полученные от здоровых доноров, предлагают коммерчески более рентабельный готовый вариант терапии с потенциалом для лечения более широкого круга субъектов.

[0005] Аллогенные CAR-T-клетки генерируются путем предоставления от здоровых доноров Т-клеток с CAR, которые специфически активируются антигенами, ассоциированными с опухолью. Аллогенные CAR-T-клетки, которые не экспрессируют функциональный ТКР (Т-клеточный рецептор) (например, посредством нокаута или нокдауна), являются дефицитными в базальной передаче сигналов ТКР. Базальная передача сигналов ТКР увеличивает устойчивость. ТКР мобилизует Са²⁺, что в конечном итоге приводит к активации NFAT и NFkB. Хотя цитокины могут увеличивать устойчивость через STAT5, это не воспроизводит нативную передачу сигналов ТКР. Таким образом, существует потребность в композициях и способах для улучшения устойчивости аллогенных CAR-T-клеток.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0006] В данном изобретении предложены индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, чувствительные к лиганду, например, небольшой молекуле или белку, использование таких рецепторов для улучшения функциональной активности генетически модифицированных Т-клеток (например, генно-модифицированных антиген-специфических Т-клеток, таких как Т-клетки с химерными антигенными рецепторами (CAR-T)), клетки, содержащие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, и композиции, содержащие такие клетки. В частности, в данном изобретении предложены способы и композиции для повышения терапевтической эффективности CAR-T-клеток.

[0007] В одном аспекте в данном изобретении предложен индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, содержащий: домен димеризации; домен активации тирозинкиназы; и эффекторный тирозиновый домен.

[0008] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы, содержит или получен из связывающего Янус-киназу (JAK-связывающего) домена белка. В некоторых из этих вариантов реализации данного изобретения, домен активации тирозинкиназы дополнительно содержит трансмембранный домен.

[0009] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит или получен из тирозинкиназного домена рецепторной тирозинкиназы (РТК, RTK). В некоторых из этих вариантов реализации данного изобретения, домен активации тирозинкиназы дополнительно содержит трансмембранный домен.

[0010] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из STAT-активирующего домена, по меньшей мере, одного рецептора. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из, по меньшей мере, двух STAT-активирующих доменов двух рецепторов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из STAT-активирующего домена, по меньшей мере, трех, четырех или более рецепторов.

[0011] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из части цитоплазматического хвоста, по меньшей мере, одной рецепторной тирозинкиназы (РТК).

[0012] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации связывается с лигандом, таким как АР1903, АР20187, димерным FK506 или димерным FK506-подобным аналогом.

[0013] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации содержит полипептид FKBP. В некоторых вариантах реализации данного изобретения полипептид FKBP представляет собой полипептид FKBP12. В некоторых вариантах реализации данного изобретения полипептид FKBP12 содержит аминокислотную замену F36V (SEQ ID NO: 218).

[0014] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (i) полипептида FKBP, содержащего одну или более аминокислотных замен, (ii) двух или трех тандемных повторов немодифицированного полипептида FKBP и (iii) двух или трех тандемных повторов полипептида FKBP, содержащего одну или более аминокислотных замен.

[0015] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации содержит последовательность домена димеризации, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 69-87.

[0016] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации содержит последовательность домена димеризации FKBP, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 69-73.

[0017] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации содержит или получен из аминокислотной последовательности полипептида, выбранного из группы, состоящей из: FKBP12, FKBP12 (F36V), внеклеточного домена ОХ-40 и внеклеточного домена рецепторов суперсемейства TNFR2. В иллюстративных вариантах реализации данного изобретения, рецептор суперсемейства TNFR2 представляет собой ВСМА, TACI или BAFFR.

[0018] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации связывает малую молекулу. В иллюстративных вариантах реализации данного изобретения малая молекула представляет собой АР1903, АР20187, димерный FK506 или димерный FK506-подобный аналог. В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации связывает белок.

[0019] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации содержит или получен из аминокислотной последовательности белка, выбранного из группы, состоящей из: FKBP, циклофилина, стероид-связывающего белка, эстроген-связывающего белка, глюкокортикоид-связывающего белка, белка, связывающего витамин D, тетрациклин-связывающего белка, внеклеточного домена цитокинового рецептора, рецепторной тирозинкиназы, рецептора семейства TNFR и иммунного корецептора.

[0020] В некоторых вариантах реализации изобретения иммунный корецептор, из которого получен домен димеризации, выбран из группы, состоящей из: рецептора эритропоэтина, рецептора пролактина, рецептора гормона роста, рецептора тромбопоэтина, рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, GP130, рецептора, содержащего общую гамма-цепь, рецептора, содержащего общую бета-цепь, рецептора IFN-альфа, рецептора IFN-гамма, рецептора IFN-лямбда, рецептора IL2/IL15, рецептора IL3, рецептора IL4, рецептора IL5, рецептора IL7, рецептора IL9, рецептора IL10, рецептора IL12, рецептора IL13, Рецептора IL20, рецептора IL21, рецептора IL22, рецептора IL23, рецептора IL27, рецептора TSLP, рецептора G-CSF, рецептора GM-CSF, рецептора CNTF, рецептора OSF, рецептора LIF, рецептора СТ-1, TGFBR1/ALKL5, TGFBR2, EGFR/HER1, ERBB2/HER2, ERBB3/HER3, ERRB4/HER4, INSR, IGF-1R, IRR, PDGFRA, PDGFRB, CSF-1R, KIT/SCFR, FLK2/FLT3, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3, FGFR-4, ССК4, TRKA, TRKB, TRKC, MET, RON, ЕРНА1, ЕРНА2, ЕРНА3, ЕРНА4, ЕРНА5, ЕРНА6, ЕРНА7, ЕРНА8, ЕРНВ1, ЕРНВ2, ЕРНВ3, ЕРНВ4, ЕРНВ5, ЕРНВ6, AXL, MER, TYR03, TIE, ТЕК, RYK, DDR1, DDR2, RET, ROS, LTK, ALK, ROR1, ROR2, MUSK, AATYK, AATYK2, AATYK3, RTK106, TNFR1, Fas, TRAILR1, TRAILR2, NGFR, DR3, DR6, EDAR, TNFR2, LTbR, OX40, CD40, CD27, CD30, 4-1BB, RANK, Fn14, TACI, BAFFR, HVEM, BCMA, GITR, TROY, RELT, XEDAR, TRAILR3, TRAILR4, OPG, DcR3, PD-1, CD80, CD86, ICOS-L, ICOS, CTLA-4, BTLA, CD160, LAG3, и TIM3.

[0021] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит или получен из JAK-связывающего домена рецептора. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения рецептор представляет собой гормональный рецептор.

[0022] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит или получен из JAK-связывающего домена белка или рецептора, выбранных из группы, состоящей из EPOR, GP130, PRLR, GHR, GCSFR и TPOR/MPLR.

[0023] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит или получен из тирозинкиназного домена РТК, при этом РТК выбрана из группы, состоящей из: EGFR/HER1, ERBB2/HER2, ERBB3/HER3, ERRB4/HER4, INSR, IGF-1R, IRR, PDGFRA, PDGFRB, CSF-1R, KIT/SCFR, FLK2/FLT3, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3, FGFR-4, ССК4, TRKA, TRKB, TRKC, MET, RON, ЕРНА1, ЕРНА2, ЕРНА3, ЕРНА4, ЕРНА5, ЕРНА6, ЕРНА7, ЕРНА8, ЕРНВ1, ЕРНВ2, ЕРНВ3, ЕРНВ4, ЕРНВ5, ЕРНВ6, AXL, MER, TYR03, TIE, ТЕК, RYK, DDR1, DDR2, RET, ROS, LTK, ALK, ROR1, ROR2, MUSK, AATYK, AATYK2, AATYK3 и RTK106. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения РТК представляет собой EGFR.

[0024] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит последовательность домена активации тирозинкиназы, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 88-133.

[0025] В некоторых вариантах реализации данного изобретения трансмембранный домен, присутствующий в домене активации тирозинкиназы, содержит или получен из трансмембранного домена белка, выбранного из группы, состоящей из: EPOR, GP130, PRLR, GHR, GCSFR, PD-1 и TPOR/MPLR.

[0026] В некоторых вариантах реализации данного изобретения трансмембранный домен содержит трансмембранный домен, полученный из TPOR/MPLR. В некоторых вариантах реализации данного изобретения трансмембранный домен получен из аминокислот 478-582 встречающейся в природе последовательности TPOR/MPLR SEQ ID NO: 64.

[0027] В некоторых вариантах реализации данного изобретения трансмембранный домен содержит вариант делеции аминокислотной области 478-582 встречающейся в природе последовательности TPOR/MPLR SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариант с делецией содержит делецию от 1 до 18 аминокислот из области 478-582 встречающейся в природе последовательности TPOR/MPLR SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариант с делецией содержит делецию от 1 до 18 аминокислот из области 489-510 встречающейся в природе последовательности TPOR/MPLR SEQ ID NO: 64.

[0028] В некоторых вариантах реализации данного изобретения трансмембранный домен содержит вариант со вставкой в аминокислотную область 478-582 встречающейся в природе последовательности TPOR/MPLR SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариант со вставкой содержит вставку от 1 до 8 аминокислот в области 478-582 встречающейся в природе последовательности TPOR/MPLR SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариант со вставкой содержит вставку от 1 до 8 аминокислот в области 489-510 встречающейся в природе последовательности TPOR/MPLR SEQ ID NO: 64. В иллюстративных вариантах реализации данного изобретения аминокислоты, вставленные в вариант со вставкой, выбраны из группы, состоящей из лейцина, валина и изолейцина.

[0029] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из, по меньшей мере, одного STAT-активирующего домена рецептора. В некоторых вариантах реализации изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит, по меньшей мере, два STAT-активирующего домена двух рецепторов или STAT-активирующие домены полученные из двух рецепторов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из STAT-активирующего домена, по меньшей мере, трех, четырех или более рецепторов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения рецепторы представляют собой гормональные рецепторы и/или цитокиновые рецепторы.

[0030] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из STAT-активирующего домена, по меньшей мере, трех, четырех или более рецепторов, при этом рецепторы выбраны из группы, состоящей из: BLNK, IL2RG, EGFR, EpoR, GHR, IFNAR1, IFNAR2, IFNAR1/2, IFNLR1, IL10R1, IL12RM, IL12Rb2, IL21R, IL2Rb, IL2small, IL7R, IL7Ra, IL9R, IL15R и IL21R.

[0031] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из цитоплазматического хвоста (части цитоплазматического хвоста рецептора, содержащего один или более тирозиновых остатков, которые могут быть фосфорилированными), по меньшей мере, трех, четырех или более рецепторов, при этом рецептор представляет собой цитокиновый рецептор, гормональный рецептор и/или РТК.

[0032] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор содержит домен димеризации; домен активации тирозинкиназы, содержащий трансмембранный домен и JAK-связывающий домен; и эффекторный тирозиновый домен, который содержит или получен из, по меньшей мере, одного STAT-активирующего домена рецептора. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен может содержать или быть полученным из STAT-активирующих доменов, по меньшей мере, двух, трех, четырех или более рецепторов.

[0033] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор содержит домен димеризации; домен активации тирозинкиназы, содержащий трансмембранный домен и JAK-связывающий домен; и эффекторный тирозиновый домен, содержащий или полученный из, по меньшей мере, одного цитоплазматического хвоста рецептора. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен может содержать или происходить из цитоплазматических хвостов, по меньшей мере, двух, трех, четырех или более рецепторов.

[0034] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор содержит домен димеризации, содержащий полипептид FKBP; домен активации тирозинкиназы, содержащий трансмембранный домен и JAK-связывающий домен, при этом трансмембранный домен содержит или получен из трансмембранного домена белка, выбранного из группы, состоящей из: EPOR, GP130, PRLR, GHR, GCSFR, PD-1 и TPOR, и JAK-связывающий домен содержит или получен из JAK-связывающего домена белка, выбранного из группы, состоящей из: EPOR, GP130, PRLR, GHR, GCSFR и TPOR; и эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из, по меньшей мере, одного STAT-активирующего домена рецептора, выбранного из группы, состоящей из: BLNK, IL2RG, EGFR, EpoR, GHR, IFNAR1, IFNAR2, IFNAR1/2, IFNLR1, IL10R1, IL12RM, IL12Rb2, IL21R, IL2Rb, IL2small, IL7R, IL7Ra, IL9R, IL15R и IL21R. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из STAT-активирующих доменов, по меньшей мере, двух, трех, четырех или более рецепторов.

[0035] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит или получен из последовательности эффекторного тирозинового домена, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 134-176.

[0036] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации расположен на N-конце индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0037] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации расположен на С-конце индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0038] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, содержит мембранно-направленный мотив. В иллюстративных вариантах реализации данного изобретения мембранно-направленный мотив содержит мотив миристоилирования.

[0039] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, является миристоилированным.

[0040] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор содержит последовательность, описанную в Таблицах 2А или 2В. В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор содержит последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 1-58, 187-215 и 225-311.

[0041] В другом аспекте, в данном раскрытии предложены полинуклеотиды, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, описанные в данном документе. В другом аспекте, в данном раскрытии предложен вектор экспрессии, содержащий полинуклеотиды.

[0042] В другом аспекте, в данном раскрытии предложена сконструированная иммунная клетка, содержащая, по меньшей мере, один индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, описанный в данном документе. В некоторых вариантах реализации данного изобретения сконструированная иммунная клетка содержит, по меньшей мере, два индуцибельных химерных цитокиновых рецептора. В некоторых вариантах реализации данного изобретения сконструированная иммунная клетка содержит, по меньшей мере, три или четыре индуцибельных химерных цитокиновых рецептора, описанных в данном документе. Когда в иммунных клетках присутствует более одного индуцибельного химерного цитокинового рецептора, то домен димеризации, домен активации тирозинкиназы и эффекторный тирозиновый домен каждого рецептора могут быть одинаковыми или разными.

[0043] В другом аспекте, в данном раскрытии предложена сконструированная иммунная клетка, содержащая, по меньшей мере, один полинуклеотид, кодирующий индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, описанный в данном документе.

[0044] В некоторых вариантах реализации данного изобретения сконструированная иммунная клетка дополнительно содержит химерный антигенный рецептор (CAR) или полинуклеотид, кодирующий CAR.

[0045] В некоторых вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка выбрана из группы, состоящей из: Т-клетки, дендритной клетки, дендритной клетки-киллера, тучной клетки, NK-клетки, макрофага, моноцита и В-клетки.

[0046] В некоторых вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка получена из стволовой клетки. В иллюстративных вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка получена из стволовых клеток взрослого организма, стволовых клеток нечеловеческого происхождения, стволовых клеток пуповинной крови, клеток-предшественников, стволовых клеток костного мозга, индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, тотипотентных стволовых клеток или гемопоэтических стволовых клеток.

[0047] В некоторых вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка представляет собой Т-клетку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка представляет собой аутологичную Т-клетку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка представляет собой аллогенную Т-клетку.

[0048] В другом аспекте, в данном раскрытии предложен способ модуляции сконструированной иммунной клетки у субъекта, способ включает введение лиганда субъекту, которому ранее была введена сконструированная иммунная клетка, описанная в данном документе, при этом димерный лиганд связывается с доменом димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения лиганд представляет собой АР1903.

[0049] В другом аспекте, в данном документе предложен способ получения сконструированной иммунной клетки, при этом способ включает введение полинуклеотида или вектора экспрессии, содержащего полинуклеотид, кодирующий индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, в иммунную клетку. В иллюстративных вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка выбрана из группы, состоящей из: Т-клетки, дендритной клетки, дендритной клетки-киллера, тучной клетки, NK-клетки, макрофага, моноцита, В-клетки и иммунной клетки, полученной из стволовой клетки. В иллюстративных вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка представляет собой Т-клетку.

[0050] В другом аспекте, в данном раскрытии предложена выделенная иммунная клетка, содержащая: (i) по меньшей мере, один индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, содержащий домен димеризации, домен активации тирозинкиназы и эффекторный тирозиновый домен, как описано в данном документе; и (ii) химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий внеклеточный лиганд-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен.

[0051] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка содержит, по меньшей мере, два индуцибельных химерных цитокиновых рецептора. В некоторых других вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка содержит три или четыре индуцибельных химерных цитокиновых рецептора.

[0052] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка по данному раскрытию демонстрирует улучшенную устойчивость при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с устойчивостью выделенной иммунной клетки, которая не экспрессирует индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0053] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка по данному раскрытию демонстрирует повышенную активацию STAT при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с активацией STAT, проявляемой выделенной иммунной клеткой, которая не экспрессирует индуцибельный химерный цитокиновый рецептор. Активированный в клетке STAT может представлять собой STAT1, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5, STAT6 или их комбинацию.

[0054] В некоторых вариантах реализации данного изобретения активация STAT выделенной иммунной клеткой по данному раскрытию при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, увеличивается с дозой лиганда по сравнению с активацией STAT, проявляемой выделенной иммунной клеткой, которая не экспрессируют индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0055] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка по данному раскрытию проявляет повышенную цитотоксичность при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с цитотоксичностью, проявляемой выделенной иммунной клеткой, которая не экспрессирует индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0056] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка по данному раскрытию разрастается (пролиферирует) при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с выделенной иммунной клеткой, которая не экспрессирует индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0057] В некоторых вариантах реализации данного изобретения уровень клеточных маркеров для стволовых Т-клеток памяти (Tscm - stem cell memory) и/или центральных Т-клеток памяти (Tcm - central memory) на выделенной иммунной клетке по данному раскрытию увеличивается или сохраняется при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с уровнем этих маркеров на выделенной иммунной клетке, которая не экспрессирует индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0058] В одном аспекте в данном документе предложен способ получения выделенной иммунной клетки, содержащей индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, описанный в данном документе, при этом способ включает этапы: (а) получение иммунной клетки; (b) введение в иммунную клетку полинуклеотида, который кодирует химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий внеклеточный лиганд-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен; и (с) введение в иммунную клетку полинуклеотида, который кодирует индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0059] В некоторых вариантах реализации данного изобретения этап с) вышеуказанного способа включает стабильную экспрессию индуцибельного химерного цитокинового рецептора в клетке.

[0060] В некоторых вариантах реализации данного изобретения на этапе с) вышеуказанного способа полинуклеотид, кодирующий индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, вводится в клетку с помощью системы транспозон/транспозаза, системы переноса генов на основе вируса или электропорации.

[0061] В некоторых вариантах реализации данного изобретения на этапе b) вышеуказанного способа полинуклеотид, кодирующий химерный антигенный рецептор, вводится в клетку с помощью системы транспозон/транспозаза или системы переноса генов на основе вируса.

[0062] В некоторых вариантах реализации данного изобретения система переноса генов на основе вирусов включает рекомбинантный ретровирус или лентивирус.

[0063] В некоторых вариантах реализации вышеуказанного способа этап (b) происходит до этапа (с), или этап (с) происходит до этапа (b).

[0064] В одном аспекте, в данном раскрытии предложена фармацевтическая композиция, содержащая выделенную иммунную клетку, описанную в данном документе.

[0065] В одном аспекте, в данном раскрытии предложен способ лечения заболевания у субъекта, при этом способ включает введение выделенной иммунной клетки, содержащей индуцибельный цитокиновый рецептор, описанный в данном документе, или введение фармацевтической композиции, содержащей такие иммунные клетки.

[0066] В другом аспекте, в данном раскрытии предложено применение выделенной иммунной клетки, описанной в данном документе, или фармацевтической композиции, содержащей выделенную иммунную клетку, для лечения заболевания.

[0067] В некоторых вариантах реализации данного изобретения клетки или фармацевтическая композиция предоставляются субъекту более одного раза.

[0068] В некоторых вариантах реализации данного изобретения клетки или фармацевтическая композиция предоставляются субъекту с интервалом, по меньшей мере, около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или более суток.

[0069] В некоторых вариантах реализации данного изобретения субъект ранее лечился терапевтическим агентом перед введением выделенной иммунной клетки или фармацевтической композиции. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения терапевтический агент представляет собой антитело или химиотерапевтический агент.

[0070] В некоторых вариантах реализации данного изобретения заболевание, которое лечат с использованием способов по данному раскрытию, представляет собой вирусное заболевание, бактериальное заболевание, онкологическое заболевание, воспалительное заболевание, иммунное заболевание или заболевание, связанное со старением. Онкологическое заболевание может представлять гемобластоз или солидный рак.

[0071] В некоторых вариантах реализации данного изобретения гемобластоз, который лечат с использованием данных способов, выбран из острого лимфобластного лейкоза (ALL), острого миелоидного лейкоза (AML), хронического миелогенного лейкоза (CML), хронического эозинофильного лейкоза (CEL), миелодиспластического синдрома (MDS), неходжкинской лимфомы (NHL) или множественной миеломы (ММ).

[0072] В некоторых вариантах реализации данного изобретения солидный рак, который лечат с использованием данных способов, выбран из рака желчных путей, рака мочевого пузыря, карциномы костей и мягких тканей, рака головного мозга, рака груди, рака шейки матки, рака толстой кишки, колоректальной аденокарциномы, коло ректального рака, десмоидной опухоли, эмбрионального рака, рака эндометрия, рака пищевода, рака желудка, аденокарциномы желудка, мультиформной глиобластомы, гинекологических раковых заболеваний, плоскоклеточного рака органов головы и шеи, рака печени, рака легких, злокачественной меланомы, остеосаркомы, рака яичников, рака поджелудочной железы, аденокарциномы протоков поджелудочной железы, первичной астроцитарной опухоли, первичного рака щитовидной железы, рака простаты, рака почек, почечно-клеточной карцинома, рабдомиосаркомы, рака кожи, саркомы мягких тканей, опухоли мужских половых клеток, уротелиального рака, саркомы матки или рака матки.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0073] На Фиг. 1 изображена упрощенная схема иллюстративного индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0074] На Фиг. 2А изображена упрощенная схема связывания FKBP с рапамицином с целью ингибирования mTOR.

[0075] НА Фиг. 2В изображена упрощенная схема связывания FKBP^F36V с рапамициноподобными соединениями.

[0076] На Фиг. 2С изображена упрощенная схема димеризации FKBP^F36V АР1903.

[0077] На Фиг. 3 изображена упрощенная схема иллюстративного индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0078] На Фиг. 4 представлена гистограмма, обобщающая результаты анализа STAT5 тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов.

[0079] На Фиг. 5А представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0080] На Фиг. 5В представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0081] На Фиг. 6 представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0082] На Фиг. 7 представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0083] На Фиг. 8 представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанного индуцибельного химерного цитокинового рецептора путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0084] На Фиг. 9 представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0085] На Фиг. 10А представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0086] На Фиг. 10В представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0087] На Фиг. 10С изображена упрощенная схема традиционного подхода к конструированию химерных цитокиновых рецепторов.

[0088] На Фиг. 10D изображена упрощенная схема подхода, который используется в данном раскрытие для конструирования химерных цитокиновых рецепторов.

[0089] На Фиг. 10Е изображена схема химерных рецепторов, протестированных путем клеточного анализа по гену-репортеру в Примере 5С.

[0090] На Фиг. 10F представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0091] На Фиг. 11 представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0092] На Фиг. 12 представлено схематическое изображение NFAT со связыванием АР-1 с промоторной последовательностью.

[0093] На Фиг. 13 изображена упрощенная схема пути MEK/ERK, ведущего к усилению регуляции Fos посредством Мус/Мах.

[0094] На Фиг. 14 представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0095] На Фиг. 15 изображена упрощенная схема пути BTK.

[0096] На Фиг. 16 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на рост клеток.

[0097] На Фиг. 17 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на выживание клеток.

[0098] На Фиг. 18 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на клеточный фенотип.

[0099] На Фиг. 19 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на клеточный фенотип.

[0100] На Фиг. 20 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на высвобождение цитокинов.

[0101] На Фиг. 21 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на высвобождение цитокинов.

[0102] На Фиг. 22 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на пролиферацию при отсутствии передачи сигналов.

[0103] На Фиг. 23 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на высвобождение цитокинов при отсутствии передачи сигналов.

[0104] На Фиг. 24 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на высвобождение цитокинов при отсутствии передачи сигналов.

[0105] На Фиг. 25 представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на рост клеток.

[0106] На Фиг. 26 изображена схема иллюстративных индуцибельных цитокиновых рецепторов с двойными эффекторными тирозиновыми доменами.

[0107] На Фиг. 27А представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0108] На Фиг. 27В представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0109] На Фиг. 28А изображена схема иллюстративной конструкции, содержащей CAR и индуцибельный цитокиновый рецептор.

[0110] На Фиг. 28В изображена эффективность трансдукции Т-клеток с помощью вектора, который содержит конструкцию, приведенную на Фиг. 28А.

[0111] На Фиг. 28С представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем FACS-анализа.

[0112] На Фиг. 29 представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем FACS-анализа.

[0113] На Фиг. 30А изображена схема иллюстративной конструкции, содержащей CAR и индуцибельный цитокиновый рецептор.

[0114] На Фиг. 30В представлен график, обобщающий результаты тестирования цитотоксичности указанных CAR-T-клеток путем анализа in vitro.

[0115] На Фиг. 30С представлен график, обобщающий результаты тестирования цитотоксичности указанных CAR-T-клеток путем анализа in vitro.

[0116] На Фиг. 30D представлен график, обобщающий результаты тестирования цитотоксичности указанных CAR-T-клеток путем анализа in vitro.

[0117] На Фиг. 30Е представлен график, обобщающий результаты тестирования цитотоксичности указанных CAR-T-клеток путем анализа in vitro.

[0118] На Фиг. 31А представлен график, обобщающий результаты анализа объема опухоли для указанных групп воздействия.

[0119] На Фиг. 31В представлен график, обобщающий результаты анализа объема опухоли для указанной группы воздействия.

[0120] На Фиг. 31С представлен график, обобщающий результаты анализа объема опухоли для указанной группы воздействия.

[0121] На Фиг. 31D представлен график, обобщающий результаты анализа объема опухоли для указанной группы воздействия.

[0122] На Фиг. 31Е представлен график, обобщающий результаты анализа объема опухоли для указанной группы воздействия.

[0123] На Фиг. 31F представлен график, обобщающий результаты анализа объема опухоли для указанной группы воздействия.

[0124] На Фиг. 31G представлен график, обобщающий результаты анализа объема опухоли для указанной группы воздействия.

[0125] На Фиг. 31Н представлен график, обобщающий общую выживаемость для указанных групп воздействия.

[0126] На Фиг. 32А представлен график, обобщающий размножение указанных CAR-T-клеток.

[0127] На Фиг. 32В представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на клеточный фенотип.

[0128] На Фиг. 33А представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0129] На Фиг. 33В представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0130] На Фиг. 33С представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0131] На Фиг. 33D представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0132] На Фиг. 34А изображена схема иллюстративных конструкций, содержащих CAR и индуцибельный цитокиновый рецептор.

[0133] На Фиг. 34В представлен график, обобщающий результаты тестирования цитотоксичности указанных CAR-T-клеток путем анализа in vitro.

[0134] На Фиг. 34С представлен график, обобщающий результаты тестирования цитотоксичности указанных CAR-T-клеток путем анализа in vitro.

[0135] На Фиг. 34D представлен график, обобщающий результаты тестирования цитотоксичности указанных CAR-T-клеток путем анализа in vitro.

[0136] На Фиг. 34Е представлен график, обобщающий результаты анализа, тестирующего размножение указанных CAR-T-клеток.

[0137] На Фиг. 34F представлен график, обобщающий результаты анализа, тестирующего размножение указанных CAR-T-клеток.

[0138] На Фиг. 35А изображена схема иллюстративных конструкций, содержащих CAR и индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0139] На Фиг. 35В представлен график, демонстрирующий размножение контрольных CAR-T-клеток, содержащих указанные индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы.

[0140] На Фиг. 35С представлен график, демонстрирующий размножение CAR-T-клеток, содержащих указанные индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы.

[0141] На Фиг. 35D представлен график, демонстрирующий размножение CAR-T-клеток, содержащих указанные индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы.

[0142] На Фиг. 35Е представлен график, демонстрирующий размножение CAR-T-клеток, содержащих указанные индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы.

[0143] На Фиг. 36А изображена схема иллюстративного индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0144] На Фиг. 36В представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0145] На Фиг. 36С представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0146] На Фиг. 37А изображена схема иллюстративных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов.

[0147] На Фиг. 37В представляет собой схему взаимодействий между рецепторами ВСМА, TACI и BAFFR с их лигандами BAFF и APRIL.

[0148] На Фиг. 37С представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0149] На Фиг. 37D представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0150] На Фиг. 38А изображены аминокислотные последовательности для TpoR дикого типа и различных вариантов с трансмембранной делецией.

[0151] На Фиг. 38В изображены аминокислотные последовательности для TpoR дикого типа и различных вариантов с трансмембранной вставкой.

[0152] На Фиг. 38С представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0153] На Фиг. 36А изображена схема иллюстративного индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0154] На Фиг. 39В представлен график, обобщающий результаты тестирования функции указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов путем клеточного анализа по гену-репортеру.

[0155] На Фиг. 40А представлен график, обобщающий результаты анализа цитотоксичности in vitro для CAR-T-клеток, содержащих указанный индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0156] На Фиг. 40В представлен график, обобщающий результаты анализа цитотоксичности in vitro для CAR-T-клеток, содержащих указанный индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0157] На Фиг. 40С представлен график, обобщающий результаты анализа цитотоксичности in vitro для CAR-T-клеток, содержащих указанный индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0158] На Фиг. 40D представлен график, обобщающий результаты анализа цитотоксичности in vitro для CAR-T-клеток, содержащих указанный индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0159] На Фиг. 40Е представлен график, обобщающий результаты анализа цитотоксичности in vitro для CAR-T-клеток, содержащих указанный индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0160] На Фиг. 40F представлен график, обобщающий результаты анализа цитотоксичности in vitro для CAR-T-клеток, содержащих указанный химерный рецептор.

[0161] На Фиг. 41А представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на высвобождение цитокинов.

[0162] На Фиг. 41В представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на высвобождение цитокинов.

[0163] На Фиг. 42А представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на высвобождение цитокинов.

[0164] На Фиг. 42В представлен график, обобщающий влияние указанных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на высвобождение цитокинов.

[0165] На Фиг. 43 представлен график, обобщающий насыщение CAR-T-клеток, содержащих указанные химерные цитокиновые рецепторы.

[0166] На Фиг. 44А представлен график, обобщающий распределение субпопуляции CAR-T-клеток памяти, содержащих указанный химерный цитокиновый рецептор.

[0167] На Фиг. 44В представлен график, обобщающий распределение субпопуляции CAR-T-клеток памяти, содержащих указанный химерный цитокиновый рецептор.

[0168] На Фиг. 44С представлен график, обобщающий распределение субпопуляции CAR-T-клеток памяти, содержащих указанный химерный цитокиновый рецептор.

[0169] На Фиг. 44D представлен график, обобщающий распределение субпопуляции CAR-T-клеток памяти, содержащих указанный химерный цитокиновый рецептор.

[0170] На Фиг. 44Е представлен график, обобщающий распределение субпопуляции CAR-T-клеток памяти, содержащих указанный химерный цитокиновый рецептор.

[0171] На Фиг. 44F представлен график, обобщающий распределение субпопуляции CAR-T-клеток памяти, содержащих указанный химерный цитокиновый рецептор.

[0172] На Фиг. 44G представлен график, обобщающий распределение субпопуляции CAR-T-клеток памяти, содержащих указанный химерный цитокиновый рецептор.

[0173] На Фиг. 45А представлен график, обобщающий влияние указанного индуцибельного химерного цитокинового рецептора на клеточный фенотип.

[0174] На Фиг. 45В представлен график, обобщающий влияние указанного индуцибельного химерного цитокинового рецептора на клеточный фенотип.

[0175] На Фиг. 45С представлен график, обобщающий влияние указанного индуцибельного химерного цитокинового рецептора на клеточный фенотип.

[0176] На Фиг. 45D представлен график, обобщающий влияние указанного индуцибельного химерного цитокинового рецептора на клеточный фенотип.

[0177] На Фиг. 45Е представлен график, обобщающий влияние указанного индуцибельного химерного цитокинового рецептора на клеточный фенотип.

[0178] На Фиг. 45F представлен график, обобщающий влияние указанного индуцибельного химерного цитокинового рецептора на клеточный фенотип.

[0179] На Фиг. 45G представлен график, обобщающий влияние указанного индуцибельного химерного цитокинового рецептора на клеточный фенотип.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0180] В данном изобретении предложены химерные рецепторы и их применение для улучшения устойчивости и терапевтической эффективности иммунных клеток in vivo. В данном документе предложены рецепторы, реагирующие на лиганд, такой как малая молекула (например, АР1903) или белок (например, Еро, Тро или PD-L1). Также предложены клетки, содержащие такие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, композиции, содержащие такие клетки, и способы улучшения функциональной активности выделенных Т-клеток, таких как CAR-T-клетки. В данном документе также предложены CAR-T-клетки, обладающие улучшенной устойчивостью, и способы использования таких CAR-T-клеток для лечения заболеваний.

Общие способы

[0181] При практическом применении данного изобретения будут использоваться, если не указано иное, обычные способы молекулярной биологии (включая рекомбинантные способы), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, которые находятся в пределах компетенции специалистов в данной области техники. Такие способы полностью описаны в литературе, например, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); ПЦР: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995).

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

[0182] Используемый в контексте данного документа термин «аутологичный» означает, что клетки, линия клеток или популяция клеток, используемые для лечения субъектов, получены от указанного субъекта или от донора, совместимого по Антигену Лейкоцитов Человека (HLA).

[0183] Используемый в контексте данного документа термин «аутологичный» означает, что клетки, линия клеток или популяция клеток, используемые для лечения субъектов, получены от указанного субъекта или от донора, совместимого по Антигену Лейкоцитов Человека (HLA).

[0184] Используемый в контексте данного документа термин «эндогенный» относится к любому веществу, полученному из или вырабатываемому внутри организма, клетки, ткани или системы.

[0185] Используемый в контексте данного документа термин «экзогенный» относится к любому веществу, вводимому в организм, клетку, ткань или систему, или вырабатываемому вне организма, клетки, ткани или системы.

[0186] Используемый в контексте данного документа термин «иммунная клетка» относится к клетке гемопоэтического происхождения, функционально вовлеченной в инициацию и/или осуществление врожденного и/или адаптивного иммунного ответа. Примеры иммунных клеток включают Т-клетки, например, альфа/бета-Т-клетки и гамма/дельта-Т-клетки, В-клетки, естественные киллеры (NK-клетки), естественные киллерные Т-клетки (NKT-клетки), инвариантные NKT-клетки, тучные клетки, фагоциты миелоидного происхождения, дендритные клетки, дендритные клетки-киллеры, макрофаги и моноциты. Используемый в контексте данного документа термин «иммунная клетка» также относится к клеткам, полученным из, например, но не ограничиваясь этим, стволовой клетки. Стволовые клетки могут быть стволовыми клетками взрослого организма, эмбриональными стволовыми клетками нечеловеческого происхождения, более конкретно - стволовыми клетками нечеловеческого происхождения, стволовыми клетками пуповинной крови, клетками-предшественниками, стволовыми клетками костного мозга, индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками, тотипотентными стволовыми клетками или гемопоэтическими стволовыми клетками.

[0187] Термины «полипептид», «олигопептид», «пептид» и «белок» используются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения аминокислотных цепей любой длины, предпочтительно, относительно коротких цепей (например, 10-100 аминокислот), а также более длинных цепей, содержащих около 10-250, 10-500, 10-1000, 50-200, 50-500 или 50-1000 аминокислот. Цепь может быть линейной или разветвленной, она может содержать модифицированные аминокислоты и/или может прерываться не аминокислотами. Термины также охватывают аминокислотную цепь, которая была модифицирована естественным путем или путем вмешательства; например, образование дисульфидной связи, гликозилирование, липидирование, ацетилирование, фосфорилирование или любые другие манипуляции или модификации, такие как конъюгирование с метящим компонентом. В определение также включены, например, полипептиды, содержащие один или более аналогов аминокислоты (включая, например, не встречающиеся в природе аминокислоты и т.д.), а также другие модификации, известные в данной области техники. Понятно, что полипептиды могут существовать как одиночные цепи или связанные цепи.

[0188] Используемый в контексте данного документа термин «экспрессия» относится к транскрипции и/или трансляции конкретной нуклеотидной последовательности, управляемой промотором.

[0189] Используемый в контексте данного документа термин «вектор экспрессии» относится к вектору, содержащему рекомбинантный полинуклеотид, содержащий последовательности контроля экспрессии, функционально связанные с нуклеотидной последовательностью, которая должна быть экспрессирована. Векторы экспрессии включают все известные в данной области техники, включая космиды, плазмиды (например, «голые» или содержащиеся в липосомах) и вирусы (например, лентивирусы, ретровирусы, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы), которые включают рекомбинантный полинуклеотид.

[0190] Используемый в контексте данного документа термин «функционально связанный» относится к ассоциации нуклеотидных последовательностей на одном фрагменте нуклеиновой кислоты, таким образом, что функция одной зависит от другой. Например, промотор функционально связан с кодирующей последовательностью, если он способен влиять на экспрессию этой кодирующей последовательности (т.е. когда кодирующая последовательность находится под транскрипционным контролем промотора).

[0191] Используемый в контексте данного документа термин «последовательность контроля экспрессии» означает последовательность нуклеиновой кислоты, которая управляет транскрипцией нуклеиновой кислоты. Последовательность контроля экспрессии может быть промотором, таким как конститутивный или индуцибельный промотор, или энхансером. Последовательность контроля экспрессии функционально связана с транскрибируемой последовательностью нуклеиновой кислоты.

[0192] «Промотор» и «промоторная последовательность» используются взаимозаменяемо и относятся к последовательности ДНК, способной контролировать экспрессию кодирующей последовательности или функциональной РНК. Как правило, кодирующая последовательность расположена на 3'-конце от промоторной последовательности. Специалистам в данной области техники понятно, что разные промоторы могут управлять экспрессией гена в разных тканях или типах клеток, или на разных стадиях развития, или в ответ на разные окружающие или физиологические условия.

[0193] В любом из векторов по данному изобретению вектор необязательно содержит промотор, описанный в данном документе.

[0194] «Клетка-хозяин» включает индивидуальную клетку или клеточную культуру, которая может быть или была реципиентом вектора(ов) для включения полинуклеотидных вставок. Клетки-хозяева включают потомство одной клетки-хозяина, и это потомство не обязательно может быть полностью идентичным (по морфологии или набору геномной ДНК) исходной родительской клетке из-за естественной, случайной или преднамеренной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные in vivo с использованием полинуклеотида(ов) по данному изобретению.

[0195] Используемый в контексте данного документа термин «внеклеточный лиганд-связывающий домен» относится к олиго- или полипептиду, который способен связывать лиганд. Предпочтительно домен будет способен взаимодействовать с молекулой клеточной поверхности. Например, внеклеточный лиганд-связывающий домен может быть выбран для распознавания лиганда, который действует как маркер клеточной поверхности на клетках-мишенях, связанных с конкретным болезненным состоянием.

[0196] Термин «стержневой домен» или «шарнирный домен» используются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения любого олиго- или полипептида, который функционирует для связывания трансмембранного домена с внеклеточным лиганд-связывающим доменом. В частности, стержневые домены используются для обеспечения большей гибкости и доступности внеклеточного лиганд-связывающего домена.

[0197] Термин «внутриклеточный сигнальный домен» относится к части белка, которая трансдуцирует сигнал эффекторной сигнальной функции и направляет клетку на выполнение специальной функции.

[0198] Используемый в контексте данного документа термин «костимулирующая молекула» относится к родственному партнеру по связыванию на Т-клетке, который специфически связывается с костимулирующим лигандом, таким образом опосредуя костимулирующий ответ клетки, такой как, но не ограничиваясь этим, пролиферация. Костимулирующие молекулы включают, но не ограничиваются ими, молекулу ГКГС (МНС) класса I, BTLA и лиганд Toll-подобдного рецептора. Примеры костимулирующих молекул включают CD27, CD28, CD8, 4-1ВВ (CD137), ОХ40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, функционально-связанный антиген лимфоцитов 1-го типа (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, В7-Н3 и лиганд, который специфически связывается с CD83 и т.п.

[0199] «Костимулирующий лиганд» относится к молекуле на антигенпрезентирующей клетке, которая специфически связывает родственную костимулирующую сигнальную молекулу на Т-клетке, тем самым обеспечивая сигнал, который в дополнение к первичному сигналу, обеспечиваемому, например, связыванием комплекса TCR/CD3 с молекулой ГКГС, нагруженной пептидом, опосредует Т-клеточный ответ, включая, но не ограничиваясь этим, активацию пролиферации, дифференциацию и т.п. Костимулирующий лиганд может включать, но не ограничивается ими, CD7, В7-1 (CD80), В7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, индуцибельный костимулирующий лиганд (ICOS-L), молекула межклеточной адгезии (ICAM, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, М1СВ, HVEM, рецептор лимфотоксина β, 3/TR6, ILT3, ILT4, агонист или антитело, которое связывает Toll-подобный рецептор и лиганд, который специфически связывается с В7-Н3. Костимулирующий лиганд также включает, среди прочего, антитело, которое специфически связывается с костимулирующей молекулой, присутствующей на Т-клетке, такой как, но не ограничиваясь ими, CD27, CD28, 4-1ВВ, ОХ40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, функционально-связанный антиген лимфоцитов 1-го типа (LFA-1), CD2, CD7, LTGHT, NKG2C, В7-Н3, лиганд, который специфически связывается с CD83.

[0200] «Антитело» представляет собой молекулу иммуноглобулина, способную специфически связываться с мишенью, такой как углевод, полинуклеотид, липид, полипептид и т.д., по меньшей мере, через один сайт распознавания антигена, расположенный в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. Используемый в контексте данного документа термин охватывает не только интактные поликлональные или моноклональные антитела, но также их антигенсвязывающие фрагменты (такие как Fab, Fab', F(ab')₂ и Fv) и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая содержит сайт распознавания антигена, включая, например, но не ограничиваясь этим, одноцепочечные (scFv) и доменные антитела (включая, например, антитела акул и верблюдовых), и слитые белки, содержащие антитело, миметик антитела или любой белок, который обеспечивает специфическое белок-белковое взаимодействие.

[0201] Термин «антигенсвязывающий фрагмент» или «антигенсвязывающая часть» антитела в контексте данного документа относится к одному или нескольким фрагментам интактного антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с данным антигеном. Антигенсвязывающие функции антитела могут выполняться фрагментами интактного антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином «антигенсвязывающий фрагмент» антитела, включают Fab'; F(ab')₂; фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и СН1; фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела; фрагмент однодоменного антитела (dAb) (Ward et al., Nature 341:544-546, 1989) и изолированную область, определяющую комплементарность (CDR).

[0202] Антитело, конъюгат на основе антитела или полипептид, который «преимущественно связывается» или «специфически связывается» (используется в данном документе взаимозаменяемо) с мишенью (например, белком ВСМА) представляет собой термин, хорошо понятный в данной области техники, и способы определения такой специфичности или предпочтительного связывания также хорошо известны в данной области техники. Говорят, что молекула демонстрирует «специфическое связывание» или «предпочтительное связывание», если она реагирует или связывается чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или с большим сродством с конкретной клеткой или веществом, чем с альтернативными клетками или веществами. Антитело «специфически связывается» или «предпочтительно связывается» с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, легче и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими веществами. Также понятно, что при чтении этого определения, например, антитело (или фрагмент, или эпитоп), которое специфически или предпочтительно связывается с первой мишенью, может связываться или не связываться специфически или предпочтительно со второй мишенью. Соответственно, «специфическое связывание» или «предпочтительное связывание» не обязательно требует (хотя оно может включать) полного связывания. Обычно, но не обязательно, ссылка на связывание означает предпочтительное связывание.

[0203] Как известно в данной области техники, термины «полинуклеотид» или «нуклеиновая кислота», используемые в контексте данного документа взаимозаменяемо, относятся к цепям нуклеотидов любой длины и включают ДНК и РНК. Нуклеотиды могут быть дезоксирибонуклеотидами, рибонуклеотидами, модифицированными нуклеотидами или основаниями и/или их аналогами, или любым субстратом, который может быть включен в цепь ДНК или РНК-полимеразой. Полинуклеотид может содержать модифицированные нуклеотиды, такие как метилированные нуклеотиды и их аналоги. Если имеется модификация, то модификация нуклеотидной структуры может быть внесена до или после сборки цепи. Последовательность нуклеотидов может прерываться не нуклеотидными компонентами. Полинуклеотид можно дополнительно модифицировать после полимеризации, например, путем конъюгирования с метящим компонентом. Другие типы модификаций включают, например, «кэпы», замену одного или более встречающихся в природе нуклеотидов аналогом, межнуклеотидные модификации, такие как, например, модификации с незаряженными связями (например, метилфосфонаты, фосфотриэфиры, фосфоамидаты, карбаматы и т.д.) и модификации с заряженными связями (например, фосфоротиоаты, фосфородитиоаты и т.д.), модификации, содержащие боковые фрагменты макромолекулы, такие как, например, белки (например, нуклеазы, токсины, антитела, сигнальные пептиды, поли-L-лизин и т.д.), модификации с интеркаляторами (например, акридином, псораленом и т.д.), модификации, содержащие хелаторы (например, металлы, радиоактивные металлы, бор, окислительные металлы и т.д.), модификации, содержащие алкилирующие агенты, модификации с модифицированными связями (например, альфа-аномерные нуклеиновые кислоты и т.д.), а также немодифицированные формы полинуклеотида(ов). Кроме того, любые гидроксильные группы, обычно присутствующие всахарах, могут быть заменены, например, фосфонатными группами, фосфатными группами, защищены стандартными защитными группами или активированы для получения дополнительных связей с дополнительными нуклеотидами, или могут быть конъюгированы с твердыми подложками. 5'- и 3'-концевые ОН-группы могут быть фосфорилированы или замещены аминами или органическими кэп-фрагментами из от 1 до 20 атомов углерода. Другие гидроксилы также могут быть дериватизированы в стандартные защитные группы. Полинуклеотиды могут также содержать аналогичные формы Сахаров рибозы или дезоксирибозы, которые обычно известны в данной области техники, включая, например, 2'-O-метил-, 2'-O-аллил, 2'-фтор- или 2''-азидо-рибозу, карбоциклические аналоги Сахаров, альфа- или бета-аномерные сахара, эпимерные сахара, такие как арабиноза, ксилозы или ликсозы, пиранозные сахара, фуранозные сахара, седогептулозы, ациклические аналоги и аналоги нуклеозидов без оснований, такие как метилрибозид. Одна или более фосфодиэфирных связей могут быть заменены альтернативными связывающими группами. Эти альтернативные связывающие группы включают, но не ограничиваются ими, варианты реализации, в которых фосфат заменен на Р(O)S(«тиоат»), P(S)S(«дитиоат»), (О)NR₂ («амидат»), P(O)R, P(O)OR' СО или CH₂ («формацеталь»), в которых каждый R или R' независимо представляет собой Н или замещенный или незамещенный алкил (1-20 С), необязательно содержащий простую эфирную связь (-О-), арил, алкенил, циклоалкил, циклоалкенил или аралкил. Нет необходимости в том, чтобы все связи в полинуклеотиде были идентичными. Предыдущее описание применимо ко всем полинуклеотидам, упомянутым в данном документе, включая РНК и ДНК.

[0204] Используемый в контексте данного документа термин «трансфекция» относится к поглощению клеткой экзогенной или гетерологичной РНК или ДНК. Клетка считается «трансфицированной» экзогенной или гетерологичной РНК или ДНК тогда, когда такая РНК или ДНК была введена внутрь клетки. Клетка считается «трансформированной» экзогенной или гетерологичной РНК или ДНК тогда, когда трансфицированная РНК или ДНК вызывает фенотипическое изменение. Трансформирующие РНК или ДНК могут быть интегрированы (ковалентно связаны) в хромосомную ДНК, составляющую геном клетки.

[0205] Используемый в контексте данного документа термин «трансформация» относится к переносу фрагмента нуклеиновой кислоты в геном организма-хозяина, что приводит к генетически стабильному наследованию. Организмы-хозяева, содержащие трансформированные фрагменты нуклеиновой кислоты, называются «трансгенными», «рекомбинантными» или «трансформированными» организмами.

[0206] Используемый в контексте данного документа термин «по существу чистый» относится к веществу, степень чистоты которого составляет, по меньшей мере, 50% (то есть свободному от загрязнений), более предпочтительно, по меньшей мере, 90%, более предпочтительно, по меньшей мере, 95%, более предпочтительно, по меньшей мере, 98%, более предпочтительно, по меньшей мере, 99%.

[0207] Используемый в контексте данного документа термин «лечение» представляет собой подход к достижению полезных или желаемых клинических результатов. Для целей данного изобретения полезные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются этим, одно или более из следующего: уменьшение пролиферации (или разрушение) неопластических или раковых клеток, ингибирование метастазирования неопластических клеток, сокращение или уменьшение размера опухоли, ремиссию заболевания (например, онкологического заболевания), уменьшение симптомов, возникающих в результате заболевания (например, онкологического заболевания), повышение качества жизни людей, страдающих заболеванием (например, онкологическим заболеванием), уменьшение дозы других лекарств, необходимых для лечения заболевания (например, онкологического заболевания), замедление прогрессирования заболевания (например, онкологического заболевания), излечение от заболевания (например, онкологического заболевания) и/или продление выживаемости субъектов, страдающих заболеванием (например, онкологическим заболеванием).

[0208] «Улучшение состояния» означает уменьшение или улучшение одного или более симптомов по сравнению с состояние при отсутствии лечения. «Улучшение состояния» также включает сокращение или уменьшение продолжительности симптома.

[0209] Используемый в контексте данного документа термин «эффективная доза» или «эффективное количество» лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для достижения любого одного или более полезных или желаемых результатов. Для профилактического применения полезные или желаемые результаты включают устранение или снижение риска, уменьшение тяжести или задержка начала заболевания, включая биохимические, гистологические и/или поведенческие симптомы заболевания, его осложнения и промежуточные патологические фенотипы, возникающие при развитии заболевания. Для терапевтического применения полезные или желаемые результаты включают клинические результаты, такие как снижение частоты или улучшение одного или более симптомов различных заболеваний или состояний (например, онкологического заболевания), снижение дозы других лекарств, необходимых для лечения заболевания, усиление эффекта другого лекарства и/или задержка прогрессирования заболевания. Эффективная доза может быть введена одним или более введениями. Для целей данного изобретения эффективная доза лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для осуществления профилактического или терапевтического лечения, непосредственно или косвенно. В клиническом контексте подразумевают, что эффективная доза лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции может быть достигнута или может не быть достигнута в сочетании с другим лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, «эффективную дозу» можно рассматривать в контексте введения одного или более терапевтических агентов, и можно считать, что один агент вводят в эффективном количестве, если в сочетании с одним или более другими агентами это приводит к возможности достижения или достижению желаемого результата.

[0210] Используемый в контексте данного документа термин «субъект» относится к любому позвоночному, включая, но не ограничиваясь ими, людей и других приматов (например, шимпанзе, яванских макак и другие виды обезьян и макак), сельскохозяйственных животных (например, крупный рогатый скот, овец, свиней, коз и лошадей), спортивных животных, домашних животных, включая домашних млекопитающих (например, собак и кошек), лабораторных животных (например, кроликов, грызунов, таких как мыши, крысы и морские свинки) и птиц (например, домашних, диких и промысловых птиц, таких как куры, индейки и другие Куриные, утки, гуси и т.д.). В некоторых вариантах реализации субъект представляет собой млекопитающее. В иллюстративных вариантах реализации изобретения, субъект представляет собой человека.

[0211] Используемый в контексте данного документа термин «вектор» означает конструкцию, которая способна доставлять и предпочтительно экспрессировать один или более интересующих генов или последовательностей в клетке-хозяине. Примеры векторов включают, но не ограничиваются ими, вирусные векторы, векторы экспрессии на основе «голой» ДНК или РНК, плазмидные, космидные или фаговые векторы, ДНК- или РНК-векторы экспрессии, связанные с катионными конденсирующими агентами, ДНК- или РНК-векторы экспрессии, инкапсулированные в липосомы, и определенные эукариотические клетки, такие как клетки-продуценты.

[0212] Используемый в контексте данного документа термин «фармацевтически приемлемый носитель» или «фармацевтически приемлемый эксципиент» включает любое вещество, которое в комбинации с активным ингредиентом позволяет сохранять биологическую активность данного ингредиента и не взаимодействует с иммунной системой субъекта. Примеры включают, но не ограничиваются ими, любые стандартные фармацевтические носители, такие как забуференный фосфатом физиологический раствор, воду, эмульсии, такие как эмульсия типа масло/вода, и различные типы смачивающих агентов. Предпочтительными разбавителями для аэрозольного или парентерального введения являются забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS) или обычный (0,9%) физиологический раствор. Композиции, содержащие такие носители, изготавливают хорошо известными обычными способами (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; и Remington, The Science and Practice of Pharmacy 21st Ed. Mack Publishing, 2005).

[0213] Ссылка на значение или параметр с выражением «около» в данном документе включает (и описывает) варианты реализации данного изобретения, которые направлены на это значение или параметр как таковые. Например, описание, относящееся к «около X», включает описание «X». Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон.

[0214] Следует понимать то, что везде, где варианты реализации данного изобретения описаны в данном документе выражением «содержащий», также предусмотрены аналогичные варианты реализации данного изобретения, описанные в терминах «состоящий из» и/или «состоящий по существу из».

[0215] В тех случаях, когда аспекты или варианты реализации данного изобретения описаны в терминах группы Маркуша или другой группировки альтернатив, изобретение охватывает не только всю группу, перечисленную в целом, но и каждого представителя группы индивидуально и все возможные подгруппы основной группы, однако также в основной группе не было одного или более представителей группы. Изобретение также предусматривает явное исключение одного или более представителей группы в заявленном изобретении.

[0216] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимают специалисты в области техники, к которой относится это изобретение. В случае противоречия преимущественную силу имеет данное описание, включая определения. В данном описании и формуле изобретения слово «содержат» или варианты, такие как «содержит» или «содержащий», будут пониматься как подразумевающие включение указанного целого числа или группы целых чисел, но не исключение любого другого целого числа или группы целых чисел. Если из контекста не следует иное, то термины в единственном числе должны включать множественное число, а термины во множественном числе должны включать единственное число.

[0217] В данном документе описаны иллюстративные способы и материалы, хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, также могут быть использованы на практике или при испытании изобретения. Материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения.

Индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы и улучшенные выделенных иммунных клеток

[0218] В данном документе предложены индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, клетки, содержащие такие рецепторы, и способы, включающие такие клетки. Также предложено применение таких индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов для улучшения функциональной активности выделенных иммунных клеток, например, выделенных Т-клеток, таких как выделенные Т-клетки, содержащие химерный антигенный рецептор (CAR). Способы и композиции, представленные в данном документе, полезны для улучшения в условиях in vivo и in vitro устойчивости, цитотоксичности, фенотипа памяти и/или терапевтической эффективности иммунных клеток, содержащих CAR, таких как CAR-T-клетки.

[0219] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, содержит в любом порядке: домен димеризации, домен активации тирозинкиназы и эффекторный тирозиновый домен. Необязательно, индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, может включать мембранно-направленный мотив. Опосредованная лигандом димеризация индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, индуцирует опосредованные рецептором сигнальные явления в клетках-хозяевах, содержащих индуцибельный химерный цитокиновый рецептор. В некоторых вариантах реализации данного изобретения передача сигналов может приводить к улучшенной жизнестойкости. Например, в иллюстративном варианте реализации данного изобретения димеризация индуцируемого химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, лигандом, будет активировать путь JAK-STAT и имитировать передачу сигналов, индуцированную природным цитокиновым рецептором. Под «имитацией» подразумевается, что сигнальный каскад, активируемый индуцибельным химерным цитокиновым рецептором по данному изобретению, будет аналогичен сигнальному каскаду, активируемому природным цитокиновым рецептором, в то время как сила активации, индуцированная химерными цитокиновыми рецепторами по данному описанию может отличаться от силы активации, индуцированной природным цитокиновым рецептором. Например, если и индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по данному изобретению и природный цитокиновый рецептор активируют фактор транскрипции STAT; возможно, что уровень активации STAT двумя рецепторами может быть одинаковым или различным.

[0220] «Домен димеризации» индуцибельного химерного цитокинового рецептора может быть любой аминокислотной последовательностью, которая может быть индуцирована к димеризации или даже тримеризации или мультимеризации лигандом, который может связываться с доменом димеризации. Соответственно, домен димеризации представляет собой домен связывания лиганда. В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, может присутствовать вне клеточной мембраны. В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора может присутствовать внутри клетки.

[0221] В некоторых вариантах реализации данного изобретения лиганд, который связывается с доменом димеризации, представляет собой димерный лиганд. Например, домен димеризации может содержать аминокислотную последовательность FK506-связывающего белка («FKBP»). Белок FKBP специфически связывается с препаратом FK506. Лиганды, которые являются мультимерными аналогами FK506 (т.е. лиганды, которые содержат, по меньшей мере, две копии FK506 или его производные), могут индуцировать димеризацию первого и второго белка, каждый из которых содержит аминокислотную последовательность FKBP, путем связывания лиганда как с первым белком, так и со вторым белком, тем самым сводя их вместе. Первый и второй белок могут быть одинаковыми или разными. Таким образом, индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, предложенные в данном документе, могут индуцироваться для димеризации путем воздействия на индуцибельный химерный цитокиновый рецептор пригодным димерным лигандом, который связывается с доменом димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0222] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, может содержать аминокислотные последовательности или происходить из, например, FKBP, циклофилинов, стероид-связывающих белков, эстроген-связывающих белков, глюкокортикоид-связывающих белков, белков, связывающих витамин D или тетрациклин-связывающих белков. Используемый в контексте данного документа термин «полипептид FKBP», «полипептид циклофилина» или тому подобное относится к полипептиду, имеющему аминокислотную последовательность соответствующего белка, или его части, или его варианта, при этом данная часть или вариант сохраняет способность связываться с соответствующим лигандом (например, для полипептида FKBP, лиганд FK506 и родственные молекулы) с высоким сродством.

[0223] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, может содержать или полученным из аминокислотных последовательностей внеклеточных доменов цитокинового рецептора, такого как, например, но не ограничиваясь ими, рецептора эритропоэтина, рецептора пролактина, рецептора гормона роста, рецептора тромбопоэтина, рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, GP130, рецептора, содержащего общую гамма-цепь, рецептора, содержащего общую бета-цепь, рецептора IFN-альфа, рецептора IFN-гамма, рецептора IFN-лямбда, рецептора IL2/IL15, рецептора IL3, рецептора IL4, рецептора IL5, рецептора IL7, рецептора IL9, рецептора IL10, рецептора IL12, рецептора IL13, Рецептора IL20, рецептора IL21, рецептора IL22, рецептора IL23, рецептора IL27, рецептора TSLP, рецептора G-CSF, рецептора GM-CSF, рецептора CNTF, рецептора OSF, рецептора LIF, рецептора СТ-1, TGFBR1/ALKL5 и TGFBR2. В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, может содержать или быть полученным из аминокислотных последовательностей внеклеточных доменов рецепторных тирозинкиназ (РТК), таких как EGFR/HER1, ERBB2/HER2, ERBB3/HER3, ERRB4/HER4, INSR, IGF-1R, IRR, PDGFRA, PDGFRB, CSF-1R, KIT/SCFR, FLK2/FLT3, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3, FGFR-4, ССK4, TRKA, TRKB, TRKC, МЕТ, RON, ЕРНА1, ЕРНА2, ЕРНА3, ЕРНА4, ЕРНА5, ЕРНА6, ЕРНА7, ЕРНА8, ЕРНВ1, ЕРНВ2, ЕРНВ3, ЕРНВ4, ЕРНВ5, ЕРНВ6, AXL, MER, TYR03, TIE, ТЕК, RYK, DDR1, DDR2, RET, ROS, LTK, ALK, ROR1, ROR2, MUSK, AATYK, AATYK2, AATYK3 и RTK106. Внеклеточные домены цитокиновых рецепторов и РТК могут быть димеризованы соответствующим лигандом или агонистом (например, для полипептида рецептора тромбопоэтина, включая соответствующие лиганды, например, ТРО, элтромбопаг и родственные молекулы).

[0224] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, может содержать или быть полученным из аминокислотных последовательностей, например, внеклеточных доменов рецепторов семейства TNFR, таких как TNFR1, Fas, TRAILR1, TRAILR2, NGFR, DR3, DR6, EDAR, TNFR2, LTbR, ОХ40, CD40, CD27, CD30, 4-1ВВ, RANK, Fn14, TACI, BAFFR, HVEM, BCMA, GITR, TROY, RELT, XEDAR, TRAILR3, TRAILR4, OPG, DcR3. Внеклеточный домен рецепторов семейства TNFR мультимеризуется при связывании с тримерным лигандом TNFR. Иллюстративная аминокислотная последовательность домена димеризации, которая получена из рецептора семейства TNFR (содержащего внеклеточный домен ВСМА), представляет собой: MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNA (SEQ ID NO: 216). В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, может содержать или быть полученным из аминокислотных последовательностей, например, внеклеточных доменов иммунных корецепторов или лигандов, таких как PD-1, CD80, CD86, ICOS-L, ICOS, CTLA-4, BTLA, CD160, LAG3 или TIM3. Внеклеточные домены иммунных корецепторов объединяются при связывании клетки, предоставляющей соответствующий лиганд. Иллюстративная аминокислотная последовательность домена димеризации, которая получена из иммунного корецептора (содержащего внеклеточный PD-1), представляет собой:

[0225] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации может содержать аминокислотную последовательность полипептида FKBP. FKBP представляет собой группу белков, которые обладают пролил-изомеразной активностью и связываются с препаратом FK506 и другими родственными препаратами.

[0226] Необязательно, FKBP может быть FKBP12 человека (также известным как FKBP1A; GenBank: CAG46965.1). Необязательно, полипептид FKBP12 может содержать мутацию F36V. FKBP12, содержащий мутацию F36V, с высокой аффинностью связывается с димерным лигандом АР1903 (Jemal, A. et al., СА Cancer J. Clinic. 58, 71-96 (2008); Scher, H. I. and Kelly, W. K., Journal of Clinical Oncology 11, 1566-72 (1993)). Кроме того, FKBP12, содержащий мутацию F36V, связывается с АР1903 с гораздо более высокой аффинностью, чем FKBP12 дикого типа связывает АР1903.

[0227] Иллюстративная аминокислотная последовательность домена димеризации (содержащая полипептид FKBP12 с мутацией F36V) представляет собой:

[0228] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора может содержать аминокислотную последовательность FKBP, содержащую модификацию, выбранную из группы, состоящей из: (i) полипептида FKBP, содержащего одну или более аминокислотных замен, (ii) двух или трех тандемных повторов немодифицированной (встречающейся в природе) аминокислотной последовательности FKBP и (iii) двух или трех тандемных повторов полипептида FKBP, содержащего одну или более аминокислотных замен. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок FKBP представляет собой белок FKBP человека (GenBank: CAG46965.1), и описанные в данном документе модификации FKBP выполнены для белка FKBP человека. В некоторых вариантах реализации данного изобретения одна или более аминокислотных замен в FKBP включают одну или более из: F36V, L106P, E31G, R71G и K105E, остатки относительно белка FKBP человека (GenBank: CAG46965.1). В вариантах реализации изобретения, в которых домен димеризации содержит два или три тандемных повтора последовательностей домена димеризации, описанных в данном документе, каждый повтор может содержать различные мутации этой последовательности. Например, в иллюстративном варианте реализации изобретения домен димеризации содержит три тандемных повтора последовательности FKBP, где один из повторов содержит природную последовательность FKBP, второй повтор содержит последовательность FKBP, содержащую замену F36V, а третий повтор содержит последовательность FKBP, содержащую F36V и L106P замены в любом порядке.

[0229] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора может содержать аминокислотную последовательность FKBP, содержащую модификацию, выбранную из группы, состоящей из: (i) полипептида FKBP, содержащего замену F36V, (ii) полипептида FKBP, содержащего замены F36V и L106P, (iii) полипептида FKBP, содержащего замены E31G, F36V, R71G и K105E, и (iv) двух или трех тандемных повтора любого из этих полипептидов FKBP.

[0230] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации может представлять собой аминокислотную последовательность полипептида циклофилина. Циклофилины представляют собой белки, которые связываются с циклоспорином (циклоспорином А). Циклофилины включают, например, циклофилин А и циклофилин D.

[0231] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации может обладать любыми характеристиками области связывания лиганда, описанной в патенте США №9434935, который включен в данный документ посредством ссылки для всех целей.

[0232] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора по данному раскрытию может содержать аминокислотную последовательность полипептида, выбранного из группы, состоящей из: FKBP12 (F36V), внеклеточного домена ОХ-40 и внеклеточного домена рецепторов суперсемейства TNFR2 (например, ВСМА, TACI, BAFFR).

[0233] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, содержит аминокислотную последовательность домена димеризации, описанную в Таблице 1 В.

[0234] Используемый в контексте данного документа «димерный» лиганд может необязательно содержать более двух копий подходящей связывающей молекулы (т.е. лиганд может быть мультимерным); однако такие лиганды могут все еще считаться «димерными», как используется в данном документе, на основании способности таких лигандов димеризовать соответствующие связывающие молекулы. Аналогичным образом, в некоторых вариантах реализации данного изобретения «домен димеризации», как предложено в данном документе, может быть способен поддерживать мультимеризацию (например, в случае, если несколько копий домена димеризации предоставлены в одной и той же молекуле); однако такие домены также могут рассматриваться как «домены димеризации», как используется в данном документе, на основании способности таких доменов димеризоваться. Как правило, передача сигнала каспазы-9 может быть эффективно индуцирована при димеризации молекул каспазы-9 (т.е. тримеризация или другая мультимеризация не требуется). Кроме того, ссылки в данном документе на «лиганд» относятся к димерному лиганду (например, при ссылке на «лиганд», который индуцирует димеризацию химерного белка каспазы-9, предложенного в данном документе), если в контексте явно не указано иное.

[0235] В контексте данного документа домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, может включать трансмембранный домен, за которым следует связывающий Янус-киназу (JAK-связывающий) домен или тирозинкиназа РТК. JAK- и РТК-киназы активируются посредством мультимеризации. JAK включают JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2 и связываются с соседним мотивом мембраны, состоящим из мотива Box 1 и Box 2. Иллюстративная аминокислотная последовательность домена активации тирозинкиназы, которая активирует киназу JAK2 (содержащую трансмембранный рецептор эритропоэтина, мотивы Box 1 и Box 2), представляет собой:

В некоторых вариантах реализации данного изобретения трансмембранный домен может содержать мутации, которые снижают лиганд-независимую димеризацию.

[0236] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, содержит или получен из JAK-связывающего домена белка. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок представляет собой рецептор. В некоторых вариантах реализации данного изобретения белок представляет собой гормональный рецептор или цитокиновый рецептор.

[0237] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит или получен из JAK-связывающего домена белка, выбранного из рецептора пролактина (PRLR), рецептора гормона роста (GHR), рецептора тромбопоэтина/белка миелопролиферативного лейкоза (TPOR/MPLR), рецептора эритропоэтина (EPOR), рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (GCSFR) или GP130. Термин «полученный из» означает одну или более модификаций природной последовательности. Например, может использоваться только часть природной последовательности, или природная последовательность может быть модифицирована, чтобы содержать мутации замены, вставки и/или делеции, или комбинацию этих модификаций. В некоторых вариантах реализации данного изобретения JAK-связывающий домен содержит или получен из JAK-связывающего домена TPOR или EPOR.

[0238] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, содержит или получен из трансмембранного домена белка, выбранного из PRLR, GHR, TPOR/MPLR, EPOR, GCSFR и GP130.

[0239] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, содержит или получен из трансмембранного домена PD-1. В данных вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы дополнительно содержит или получен из JAK-связывающего домена или тирозинкиназного домена рецептора, как описано в данном документе.

[0240] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, содержит трансмембранный домен и JAK-связывающий домен или трансмембранный домен и тирозинкиназный домен, при этом трансмембранный домен получен из цитокинового/гормонального рецептора (например, TpoR), мономеризованного цитокинового/гормонального рецептора (например, EpoR L241G L242P) или мономерных рецепторов (например, PD1). «Мономеризованный цитокиновый/гормональный рецептор » в контексте данного документа относится к цитокиновому рецептору или гормональному рецептору, который является гомодимером или гетеродимером в природной форме, но мутирован, чтобы существовать в качестве мономерного рецептора.

[0241] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, содержит или получен из трансмембранного домена TPOR/MPLR. Иллюстративная полноразмерная последовательность встречающегося в природе TPOR/MPLR представлена в Таблице 1A (SEQ ID NO: 64). В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит или получен из трансмембранного домена последовательности TPOR/MPLR, представленной в Таблице 1А. Например, в некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит аминокислоты 478-582 последовательности TPOR/MPLR, представленной в Таблице 1А (эта последовательность также представлена как «TPOR/MPLR (478-582) (последовательность дикого типа)» в Таблице 1С).

[0242] В некоторых других вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит последовательность, полученную из аминокислот 478-582 последовательности TPOR/MPLR, представленную в Таблице 1А. В данных вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора, содержит последовательность, полученную из аминокислот 478-582 TPOR/MPLR, представленную в Таблице 1А, при этом последовательность содержит одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из замены, делеции, вставки и их комбинации. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит вариант с делецией аминокислотной последовательности 478-582 TPOR/MPLR, представленной в Таблице 1А. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариант с делецией содержит делецию 1, от 1 до 20, от 1 до 19, от 1 до 18, от 1 до 17, от 1 до 16, от 1 до 15, от 1 до 14, от 1 до 13, от 1 до 12, 1 до 11, от 1 до 10, от 1 до 9, от 1 до 8, от 1 до 7, от 1 до 6, от 1 до 5, от 1 до 4, от 1 до 3, от 1 до 2, аминокислот из области 478-582 последовательности TPOR/MPLR, представленной в Таблице 1А. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариант с делецией содержит делецию 1, от 1 до 20, от 1 до 19, от 1 до 18, от 1 до 17, от 1 до 16, от 1 до 15, от 1 до 14, от 1 до 13, от 1 до 12, 1 до 11, от 1 до 10, от 1 до 9, от 1 до 8, от 1 до 7, от 1 до 6, от 1 до 5, от 1 до 4, от 1 до 3, от 1 до 2 аминокислот из области 489-510 последовательности TPOR/MPLR, представленной в Таблице 1А. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит вариант с делецией аминокислотной последовательности 478-582 TPOR/MPLR, представленной в Таблице 1С.

[0243] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит вариант со вставкой в аминокислотную последовательность 478-582 TPOR/MPLR, представленную в Таблице 1А. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вариант со вставкой содержит вставку 1, от 1 до 10, от 1 до 9, от 1 до 8, от 1 до 7, от 1 до 6, от 1 до 5, от 1 до 4, от 1 до 3, от 1 до 2 аминокислот в области 478-582 TPOR/MPLR, представленной в Таблице 1А. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит вариант со вставкой в аминокислотную последовательность 478-582 TPOR/MPLR, представленную в Таблице 1С. В некоторых вариантах реализации данного изобретения аминокислоты, которые вставляют в варианты со вставкой, выбирают из группы, состоящей из: лейцина, валина и изолейцина.

[0244] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора, содержит последовательность, полученную из аминокислот 478-582 последовательности TPOR/MPLR, показанной в Таблице 1А, при этом последовательность содержит комбинацию делеций и вставок аминокислот в этой области. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит последовательность, полученную из аминокислот 478-582 TPOR/MPLR, представленную в Таблице 1А, при этом последовательность содержит делецию от 1 до 18 аминокислот из области 478-582 и вставку от 1 до 8 аминокислот в область 478-582. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит последовательность, полученную из аминокислот 489-510 TPOR/MPLR, представленную в Таблице 1А, при этом последовательность содержит делецию от 1 до 18 аминокислот из области 489-510 и вставку от 1 до 8 аминокислот в область 489-510. В некоторых вариантах реализации данного изобретения аминокислоты, которые вставляют в варианты со вставкой, выбирают из группы, состоящей из: лейцина, валина и изолейцина.

[0245] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит последовательность, описанную в Таблице 1С.

[0246] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит вариант с делецией и/или вставкой трансмембранного домена PRLR, GHR, EPOR, GCSFR или GP130. Примеры полноразмерных, встречающихся в природе последовательностей PRLR, GHR, EPOR, GCSFR и GP130 описаны в Таблице 1А вместе с их номерами доступа. В соответствии с этим раскрытием трансмембранные домены PRLR, GHR, EPOR, GCSFR и GP130 могут быть локализованы, и могут быть получены варианты этих трансмембранных доменов со вставкой и/или делецией.

[0247] В некоторых вариантах реализации данного изобретения трансмембранный и/или JAK-связывающий домен домена активации тирозинкиназы может быть получен из, например, рецептора, содержащего общую гамма-цепь, рецептора, содержащего общую бета-цепь, рецептора IFN-альфа (IFNAR), рецептора IFN-гамма (IFNGR), рецептора IFN-лямбда (IFNLR), рецептора IL2/IL15 (IL2R/IL15R), рецептора IL3 (IL3R), рецептора IL4 (IL4R), рецептора IL5 (IL5R), рецептора IL7 (IL7R), рецептора IL9 (IL9R), рецептора IL10 (IL10R), рецептора IL12 (IL12R), рецептора IL13 (IL13R), рецептора IL20 (IL20R), рецептора IL21 (IL21R), рецептора IL22 (IL22R), рецептора IL23 (IL23R), рецептора IL27 (IL27R), рецептора TSLP (TSLPR), рецептора G-CSF (GCSFR), рецептора GM-CSF (GMCSFR), рецептора CNTF (CNTFR), рецептора OSF (OSMR), рецептора LIF (LIFR) или рецептора СТ-1 (CT1R).

[0248] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, содержит или получен из тирозинкиназного домена рецепторной тирозинкиназы (РТК). Иллюстративный домен активации тирозинкиназы из РТК, который активирует РТК-киназу (содержащий трансмембранный и киназный домены рецептора эпидермального фактора роста) представляет собой:

В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит трансмембранный домен и тирозинкиназный домен, полученные из других РТК, таких как, например, EGFR/HER1, ERBB2/HER2, ERBB3/HER3, ERRB4/HER4, INSR, IGF-1R, IRR, PDGFRA, PDGFRB, CSF-1R, KIT/SCFR, FLK2/FLT3, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3, FGFR-4, ССК4, TRKA, TRKB, TRKC, MET, RON, ЕРНА1, ЕРНА2, ЕРНА3, ЕРНА4, ЕРНА5, ЕРНА6, ЕРНА7, ЕРНА8, ЕРНВ1, ЕРНВ2, ЕРНВ3, ЕРНВ4, ЕРНВ5, ЕРНВ6, AXL, MER, TYR03, TIE, ТЕК, RYK, DDR1, DDR2, RET, ROS, LTK, ALK, ROR1, ROR2, MUSK, AATYK, AATYK2, AATYK3 или RTK106.

[0249] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит или получен из тирозинкиназного домена EGFR.

[0250] В некоторых вариантах реализации данного изобретения домен активации тирозинкиназы содержит последовательность домена активации тирозинкиназы, представленную в Таблице 1В.

[0251] В некоторых вариантах реализации данного изобретения тирозиновый эффекторный домен может содержать часть цитоплазматического хвоста («цитохвоста»), по меньшей мере, одного рецептора, такого как цитокинового рецептора, гормонального рецептора или РТК, или адаптерного белка тирозинкиназы. Используемый в контексте данного документа термин «цитоплазматический хвост» представляет собой часть, которая содержит один или более остатков тирозина, которые способны фосфорилироваться киназой при активации. Тирозины в цитоплазматическом хвосте или адаптерном белке фосфорилируются активированной тирозинкиназой. Фосфорилированные тирозиновые мотивы привлекают факторы передачи сигнала. Иллюстративная аминокислотная последовательность эффекторного тирозинового домена из цитокинового рецептора (содержащего дистальный цитоплазматический хвост IL2Rb) представляет собой:

[0252] Цитоплазматические хвосты некоторых рецепторов, таких как цитокиновые рецепторы и гормональные рецепторы, содержат STAT-активирующие домены (также могут называться в данном документе STAT-связывающими доменами). В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, предложенных в данном документе, содержит или получен из, по меньшей мере, одного STAT-активирующего домена рецептора. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, предложенных в данном документе, содержит или получен из, по меньшей мере, двух, трех, четырех или более STAT-активирующих доменов двух, трех, четырех или более рецепторов. Рецепторами могут быть цитокиновые рецепторы и/или гормональные рецепторы.

[0253] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит или получен из цитоплазматического хвоста (части цитоплазматического хвоста, которая содержит один или более остатков тирозина, которые способны фосфорилироваться киназой), по меньшей мере, одного, двух, трех, четырех или более рецепторов (например, цитокинового рецептора, гормонального рецептора или РТК) или адаптерных белков тирозинкиназы. В иллюстративном варианте реализации изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит цитоплазматический хвост цитокинового рецептора, или получен из него, или цитоплазматический хвост гормонального рецептора, или получен из него. В другом иллюстративном варианте реализации изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит цитоплазматический хвост цитокинового рецептора, или получен из него, или цитоплазматический хвост РТК, или получен из него. В еще другом иллюстративном варианте реализации изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит цитоплазматический хвост гормонального рецептора, или получен него, или цитоплазматический хвост РТК, или получен него. В еще другом иллюстративном варианте реализации изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит цитоплазматический хвост гормонального рецептора, или получен из него; цитоплазматический хвост РТК, или получен из него; и цитоплазматический хвост цитокинового рецептора, или получен него. Предусмотрены аналогичные комбинации цитоплазматических хвостов, в которых, по меньшей мере, один из цитоплазматических хвостов содержит фосфорилируемую тирозинсодержащую часть адапторного белка тирозинкиназы. Когда эффекторный тирозиновый домен индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит более одного цитоплазматического хвоста, цитоплазматические хвосты могут присутствовать в любом порядке.

[0254] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов содержит или получен из STAT-активирующего домена двух цитокиновых рецепторов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов содержит или получен из STAT-активирующего домена, по меньшей мере, одного рецептора, выбранного из группы, состоящей из: BLNK (линкерный белок В-клеток), IL2RG, EGFR, EpoR, GHR, IFNAR1, IFNAR2, IFNAR1/2, IFNLR1, IL10R1, IL12Rb1, IL12Rb2, IL21R, IL2Rb, IL2small, IL7R, IL7Ra, IL9R, IL15R и IL21R. Когда эффекторный тирозиновый домен тирозина содержит более одного STAT-активирующего домена, STAT-активирующие домены находятся в тандеме, при этом один домен является мембранно-проксимальным, а другой домен(ы) является мембранно-дистальным.

[0255] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов содержит или получен из цитоплазматического хвоста первого рецептора, выбранного из группы, состоящей из: BLNK, IL2RG, EGFR, EpoR, GHR, IFNAR1, IFNAR2, IFNAR1/2, IFNLR1, IL10R1, IL12Rb1, IL12Rb2, IL21R, IL2Rb, IL2small, IL7R, IL7Ra, IL9R, IL15R и IL21R, и цитоплазматического хвоста второго рецептора, выбранного из группы, состоящей из: BLNK, IL2RG, EGFR, EpoR, GHR, IFNAR1, IFNAR2, IFNAR1/2, IFNLR1, IL10R1, IL12Rb1, IL12Rb2, IL21R, IL2Rb, IL2small, IL7R, IL7Ra, IL9R, IL15R и IL21R. В данных вариантах реализации данного изобретения цитоплазматический хвост от первого рецептора может быть мембранно-проксимальным, а цитоплазматический хвост от второго рецептора может быть мембранно-дистальным, или наоборот. Подобные варианты реализации изобретения, в которых эффекторный тирозиновый домен индуцибельного химерного цитокинового рецептора содержит более двух, в частности три, четыре или более, цитоплазматических хвостов от рецепторов, описанные в данном пункте, охватываются данным раскрытием.

[0256] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов содержит, по меньшей мере, одну последовательность эффекторного тирозинового домена, описанную в Таблице 1В. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит, по меньшей мере, две последовательности эффекторного тирозинового домена, описанных в Таблице 1В. Когда присутствует более чем одна последовательность эффекторного тирозинового домена, описанная в Таблице 1В, любая из этих последовательностей может быть мембранно-проксимальной, а другая(ие) последовательность(и) может быть мембранно-дистальной.

[0257] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит последовательности из цитоплазматического хвоста цитокинового рецептора, такого как рецептора, содержащего общую гамма-цепь, рецептора, содержащего общую бета-цепь, рецептора IFN-альфа, рецептора IFN-гамма, рецептора IFN-лямбда, рецептора IL2/IL15, рецептора IL3, рецептора IL4, рецептора IL5, рецептора IL7, рецептора IL9, рецептора IL10, рецептора IL12, рецептора IL13, Рецептора IL20, рецептора IL21, рецептора IL22, рецептора IL23, рецептора IL27, рецептора TSLP, рецептора G-CSF, рецептора GM-CSF, рецептора CNTF, рецептора OSF, рецептора LIF, рецептора СТ-1, рецептора эритропоэтина, рецептора гормона роста, рецептора пролактина, рецептора тромбопоэтина или GP130. Иллюстративная аминокислотная последовательность эффекторного тирозинового домена из РТК (содержащего дистальный цитоплазматический хвост EGFR) представляет собой: VIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLL SSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYI NQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCV NSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQ SSEFIGA (SEQ ID NO: 222). В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит последовательности из цитоплазматического хвоста РТК, такой как EGFR/HER1, ERBB2/HER2, ERBB3/HER3, ERRB4/HER4, INSR, IGF-1R, IRR, PDGFRA, PDGFRB, CSF-1R, KIT/SCFR, FLK2/FLT3, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3, FGFR-4, ССК4, TRKA, TRKB, TRKC, MET, RON, ЕРНА1, ЕРНА2, ЕРНА3, ЕРНА4, ЕРНА5, ЕРНА6, ЕРНА7, ЕРНА8, ЕРНВ1, ЕРНВ2, ЕРНВ3, ЕРНВ4, ЕРНВ5, ЕРНВ6, AXL, MER, TYRO3, TIE, TEK, RYK, DDR1, DDR2, RET, ROS, LTK, ALK, ROR1, ROR2, MUSK, AATYK, AATYK2, AATYK3 или RTK106. Иллюстративная аминокислотная последовательность эффекторного тирозинового домена из адаптерного белка тирозинкиназы (содержащего тирозиновый домен BLNK) представляет собой: ASESPADEEEQWSDDFDSDYENPDEHSDSEMYVMPAEENADDSYEPPPVEQETR PVHPALPFARGEYIDNRSSQRHSPPFSKTLPSKPSWPSEKARLTSTLPALTALQKPQ VPPKPKGLLEDEADYVVPVEDNDENYIHPTESSSPPPEKAPMVNR (SEQ ID NO: 223). В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен содержит последовательности из адаптерных белков, таких как ALX, BLNK, Grb7, Nsp, SLP-76, SOCS, TSAd, APS, Bam32, Crk, Gads, Grb2, Nek, SLAP, She, FRS2, Dab, Dok, IRS, eps8, AFAP110, Gab, ADAP, Carma1, Cas, CIN85, Cortactin, E3B1, Vinexin, SKAP-55, BANK, BCAP, Dof, Paxillin, LAT, LAX, LIME, NTAL, PAG, SIT или TRIM, или последовательности, связывающиеся с данными адаптерными белками.

[0258] В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен индуцируемого химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, может содержать последовательности из одного или более цитокиновых рецепторов, РТК и/или адаптерных белков. В некоторых вариантах реализации данного изобретения последовательности могут в тандеме. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен может содержать, например, более короткие тирозинсодержащие пептиды из цитокинового рецептора, РТК или адаптерного белка тирозинкиназы. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффекторный тирозиновый домен может представлять собой синтетическую последовательность, способную связывать один или более белков, содержащих, например, домены фосфор-тирозинсвязывающего белка (РТВ), Src-гомологичные домены 2 (SH2-домены), домены С2 и/или Src-гомологичные домены 3 (SH3-домены).

[0259] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, содержит домен димеризации; домен активации тирозинкиназы, содержащий трансмембранный домен и JAK-связывающий домен; и эффекторный тирозиновый домен, содержащий или полученный из домена STAT-активации рецептора. В некоторых из данных вариантов реализации данного изобретения домен димеризации содержит полипептид FKBP; трансмембранный домен содержит или получен из трансмембранного домена белка, выбранного из группы, состоящей из: EPOR, GP130, PRLR, GHR, GCSFR, PD-1 и TPOR; JAK-связывающий домен содержит или получен из JAK-связывающего домена белка, выбранного из группы, состоящей из: EPOR, GP130, PRLR, GHR, GCSFR и TPOR; и STAT-активирующий домен содержит или получен из STAT-активирующего домена по меньшей мере одного рецептора, выбранного из группы, состоящей из: BLNK, IL2RG, EGFR, EpoR, GHR, IFNAR1, IFNAR2, IFNAR1/2, IFNLR1, IL10R1, IL12Rb1, IL12Rb2, IL21R, IL2Rb, IL2small, IL7R, IL7Ra, IL9R, IL15R и IL21R.

[0260] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, содержит домен димеризации, выбранный из Таблицы 1В, домен активации тирозинкиназы, выбранный из Таблицы 1В или Таблицы 1С, и эффекторный тирозиновый домен, выбранный из Таблицы 1В.

[0261] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, содержит последовательность, выбранную из Таблицы 2А или Таблицы 2В. В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1-58, 187-215 и 225-311.

[0262] В таблице 1А предложены иллюстративные полноразмерные последовательности встречающихся в природе рецепторов, предложенных в данном раскрытии, из которых получены трансмембранные белки. Последовательности, предложенные в Таблице 1А, являются эталонными последовательностями, в отношении которых отражены более поздние мутации, например, в Таблицах 1В и 1С.

[0263] Иллюстративные аминокислотные последовательности, используемые в индуцибельных химерных рецепторах цитокинов, представленных в данном документе, представлены в Таблице 1В.

[0264] Примеры трансмембранных и JAK-связывающих последовательностей TPOR/MPLR или трансмембранных и JAK-связывающих последовательностей, полученных из TPOR/MPLR, которые используются в индуцибельных химерных цитокиновых рецепторах, предложенных в данном документе, представлены в Таблице 1С.

[0265] В другом аспекте, в данном документе предложены выделенные иммунные клетки, содержащие один или более индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, описанных в данном документе. В других вариантах реализации данного изобретения выделенные иммунные клетки, предложенные в данном документе, содержат (i) один или более индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, описанных в данном документе, и (ii) химерный антигенный рецептор (CAR). Предпочтительно, выделенные иммунные клетки, предложенные в данном документе, демонстрируют улучшенную устойчивость при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с клетками, которые не экспрессируют индуцибельный химерный цитокиновый рецептор. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенные иммунные клетки, предложенные в данном документе, демонстрируют улучшенную цитотоксичность, повышенное размножение и/или повышенные уровни маркеров фенотипа памяти при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с клетками, которые не экспрессируют индуцибельный химерный цитокиновый рецептор. Улучшение устойчивости, цитотоксичности, размножения и/или уровня маркеров фенотипа памяти, проявляемое выделенными иммунными клетками, содержащими индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, описанные в данном документе, может происходить в условиях in vitro или in vivo. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка выбрана из группы, состоящей из: Т-клетки, дендритной клетки, дендритной клетки-киллера, тучной клетки, NK-клетки, макрофага, моноцита и В-клетки.

[0266] В некоторых вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка представляет собой выделенную Т-клетку. В других вариантах реализации данного изобретения выделенные Т-клетки, предложенные в данном документе, содержат один или более индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, описанных в данном документе. В других вариантах реализации данного изобретения выделенные Т-клетки, предложенные в данном документе, содержат (i) один или более индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, описанных в данном документе, и (ii) химерный антигенный рецептор (CAR). Предпочтительно, выделенные Т-клетки, предложенные в данном документе, демонстрируют улучшенную устойчивость в условиях in vivo при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с клетками, которые не экспрессируют индуцибельный химерный цитокиновый рецептор. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенные Т-клетки, предложенные в данном документе, демонстрируют улучшенную цитотоксичность, повышенное размножение и/или повышенные уровни маркеров фенотипа памяти при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с клетками, которые не экспрессируют индуцибельный химерный цитокиновый рецептор. Улучшение одного или более из этих свойств может происходить в условиях in vitro или in vivo.

[0267] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка, содержащая один или более индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, описанных в данном документе, демонстрирует (i) повышенную устойчивость в условиях in vivo, (ii) повышенную активацию STAT, (iii) повышенную цитотоксичность, (iv) повышенные уровни маркеров фенотипа памяти, (v) повышенное размножение (пролиферацию) или комбинацию этих функциональных характеристик при контакте с лигандом, который связывается с доменом димеризации, по сравнению с выделенной иммунной клеткой, которая не экспрессирует индуцибельный химерный цитокиновый рецептор. В некоторых вариантах реализации данного изобретения улучшение одного или более функциональных признаков, описанных в данном документе, зависит от дозы, т.е. функциональная активность иммунной клетки, содержащей индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, увеличивается при контакте с увеличивающимися дозами лиганда, который связывается с доменом димеризации. В некоторых вариантах реализации данного изобретения STAT, активируемые индуцибельными химерными цитокиновыми рецепторами, включают STAT1, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5, STAT6 или их комбинации. Активация STAT включает рекрутинг STAT, фосфорилирование STAT и/или димеризацию STAT или транслокацию STAT. В некоторых вариантах реализации данного изобретения маркеры фенотипа памяти, увеличенные в количестве или поддерживаемые иммунной клеткой, содержащей индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, включают маркер стволовых Т-клеток памяти (Tscm) и маркер центральных Т-клеток памяти (Tcm).

[0268] В некоторых вариантах реализации данного изобретения улучшение одной или более функциональных характеристик иммунной клетки, содержащей индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, составляет, по меньшей мере, в около 2 раза, 2,5 раза, 3 раза, 3,5 раза, 4 раза, 4,5 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 15 раз, 20 раз, 25 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 60 раз, 70 раз, 80 раз, 90 раз, 100 раз, 125 раз, 150 раз, 200 раз, 250 раз, 300 раз, 350 раз, 400 раз, 450 раз или даже в около 500 раз, включая значения и диапазоны между ними, по сравнению с иммунной клеткой, которая не экспрессирует индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0269] В некоторых вариантах реализации данного изобретения улучшение одной или более функциональных характеристик иммунной клетки, содержащей индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, составляет, по меньшей мере, в около 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 200%, 250%, 300%, 350%, 400% или даже в около 500%, включая значения и диапазоны между ними, по сравнению с иммунной клеткой, которая не экспрессирует индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0270] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка, такая как выделенная Т-клетка, по данному изобретению содержит индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, представленный в Таблице 2А.

[0271] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка, такая как выделенная Т-клетка, по данному изобретению содержит индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, представленный в Таблице 2В.

[0272] Данное изобретение охватывает модификации индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов вариантов реализации данного изобретения, представленные в Таблицах 2А и 2В, включая функционально эквивалентные белки, имеющие модификации, которые существенно не влияют на их свойства, и варианты, которые обладают повышенной или пониженной активностью и/или аффинностью. Модификация полипептидов является обычной практикой в данной области техники и нет необходимости в подробном ее описании в данном документе. Примеры модифицированных полипептидов включают полипептиды с консервативными заменами аминокислотных остатков, одну или более делеций или добавлений аминокислот, которые существенно не изменяют функциональную активность или которые приводят к созреванию (повышению) аффинности полипептида к его лиганду, или использование химических аналогов.

[0273] Вставки аминокислотной последовательности включают амино- и/или карбокси-концевые слияния в диапазоне длины от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или более остатков, а также вставки внутри последовательности одного или более аминокислотных остатков. Примеры вставок в концевой участок последовательности включают антитело с метионильным остатком на N-конце или антитело, слитое с эпитопной меткой. [0274] В вариантах с заменой, по меньшей мере, один аминокислотный остаток в индуцибельном химерном цитокиновом рецепторе удален и на его место вставлен другой остаток. Консервативные замены представлены в Таблице 3 под заголовком «консервативные замены». Если такие замены приводят к изменению биологической активности, тогда могут быть внесены более существенные изменения, названные «иллюстративными заменами» в Таблице 3 или как дополнительно описано ниже в отношении классов аминокислот, и проведен скрининг продуктов.

[0275] В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы могут быть синтезированы in situ в выделенной иммунной клетке, такой как CAR-T-клетка, после введения в клетку полинуклеотидов, кодирующих индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы. Альтернативно, индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы можно получить вне клеток, а затем ввести в клетки. Способы введения полинуклеотидной конструкции в клетки известны в данной области техники. В некоторых вариантах реализации данного изобретения можно использовать способы стабильной трансформации для интеграции полинуклеотидной конструкции в геном клетки. В других вариантах реализации данного изобретения могут быть использованы способы транзиентной трансформации для транзиентной экспрессии полинуклеотидной конструкции, и полинуклеотидная конструкция не будет интегрирована в геном клетки. В других вариантах реализации данного изобретения можно использовать вирус-опосредованные способы. Полинуклеотиды можно вводить в клетку любыми подходящими способами, такими как, например, с использованием рекомбинантных вирусных векторов (например, ретровирусов, аденовирусов), липосом и тому подобного. Способы транзиентной трансформации включают, например, но не ограничиваются ими, микроинъекцию, электропорацию или бомбардировку частицами. Полинуклеотиды могут быть включены в векторы, такие как, например, плазмидные векторы или вирусные векторы.

[0276] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка, такая как выделенная Т-клетка, по данному изобретению может содержать, по меньшей мере, один индуцибельный химерный цитокиновый рецептор и, по меньшей мере, один CAR. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка, такая как выделенная Т-клетка, может содержать, по меньшей мере, популяцию различных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов и, по меньшей мере, один CAR. Например, популяция различных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, присутствующих в выделенной иммунной клетке, может содержать рецепторы с одинаковым доменом димеризации, но разными доменами активации тирозинкиназы, и разными эффекторными тирозиновыми доменами, или рецепторы с одинаковыми доменами димеризации, одинаковыми доменами активации тирозинкиназы, но разными эффекторными тирозиновыми доменами, или рецепторы, в которых все три домена отличаются друг от друга и т.п. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка, такая как выделенная Т-клетка, может содержать, по меньшей мере, один индуцибельный химерный цитокиновый рецептор и популяцию CAR, в которой каждый CAR содержит различные внеклеточные лиганд-связывающие домены.

[0277] Введение в иммунную клетку популяции различных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов может позволить манипулировать функциональным результатом и/или фенотипом клетки. Например, различные индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, присутствующие в выделенной иммунной клетке, могут активировать различные внутриклеточные сигнальные явления, каждое из которых приводит к определенному функциональному результату и/или направляет клетку к определенному фенотипу. Путем манипулирования популяцией индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, введенных в клетку, можно изменять функциональный результат и/или фенотип клетки. Например, популяцией индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, введенных в иммунную клетку, можно манипулировать, чтобы включить большее количество рецепторов, которые активируют один фактор транскрипции STAT, по сравнению с другими факторами транскрипции STAT, тем самым искажая функциональный результат клетки и/или фенотип по отношению к тому, который регулируется этим STAT.

[0278] В некоторых вариантах реализации выделенной иммунной клетки, такой как выделенная Т-клетка, предложенной в данном документе, CAR может содержать внеклеточный лиганд-связывающий домен (например, вариабельный фрагмент одной цепи (scFv)), трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых вариантах реализации данного изобретения внеклеточный лиганд-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен находятся в одном полипептиде, т.е. в одной цепи. В данном документе также предложены мультицепочечные CAR и полипептиды. В некоторых вариантах реализации данного изобретения мультицепочечные CAR содержат: первый полипептид, содержащий трансмембранный домен и, по меньшей мере, один внеклеточный лиганд-связывающий домен, и второй полипептид, содержащий трансмембранный домен и, по меньшей мере, один внутриклеточный сигнальный домен, при этом полипептиды собираются вместе с образованием мультицепи CAR.

[0279] Внеклеточный лиганд-связывающий домен CAR специфически связывается с целевой мишенью. Целевой мишенью может быть любая представляющая интерес молекула, включая, например, но не ограничиваясь ими, ВСМА, EGFRvIII, FIt-3, WT-1, CD20, CD23, CD30, CD38, CD70, CD33, CD133, LeY, NKG2D, CS1, CD44v6, ROR1, CD19, клаудин-18.2 (клаудин-18А2, или клаудин-18 изоформа 2), DLL3 (дельта-подобный белок 3, дельта-гомолог 3 дрозофилы, Delta3), Mud 7 (Mucin17, Muc3, Мис3), ФАБ-альфа (фибробласт-активирующий белок альфа, FAR alpha), Ly6G6D (белок локуса G6d лимфоцитарного антигенного комплекса 6, G6d, c6orf23, G6D, MEGT1, NG25), RNF43 (Е3 убиквитин-протеинлигаза RNF43, RING finger protein 43).

[0280] В некоторых вариантах реализации данного изобретения внеклеточный лиганд-связывающий домен CAR содержит scFv, содержащий вариабельную область легкой цепи (VL) и вариабельную область тяжелой цепи (VH) целевого антиген-специфического моноклонального антитела, соединенных гибким линкером. Фрагменты одноцепочечной вариабельной области получают путем связывания вариабельной области легкой и/или тяжелой цепи с использованием короткого связывающего пептида (Bird et al., Science 242:423-426, 1988). Примером связывающего пептида является линкер GS, имеющий аминокислотную последовательность (GGGGS)₃ (SEQ ID NO: 224), который образует мостик приблизительно 3,5 нм между карбокси-концом одной вариабельной области и амино-концом другой вариабельной области. Были сконструированы и использованы линкеры других последовательностей (Bird et al., 1988, см. ссылку выше). Как правило, линкеры могут быть короткими, гибкими полипептидами и предпочтительно содержат около 20 или меньше аминокислотных остатков. Линкеры, в свою очередь, можно модифицировать для выполнения дополнительных функций, таких как прикрепление лекарственных препаратов или прикрепление к твердым носителям. Одноцепочечные варианты могут быть получены либо рекомбинантно, либо синтетически. Для синтетического производства scFv можно использовать автоматический синтезатор. Для рекомбинантного продуцирования scFv подходящая плазмида, содержащая полинуклеотид, кодирующий scFv, может быть введена в подходящую клетку-хозяин, либо эукариотическую, такую как клетки дрожжей, растений, насекомых или млекопитающих, либо прокариотическую, такую как Е. coli. Полинуклеотиды, кодирующие интересующий scFv, можно получить обычными манипуляциями, такими как лигирование полинуклеотидов. Полученный scFv можно выделить с использованием стандартных способов очистки белка, известных в данной области техники.

[0281] Внутриклеточный сигнальный домен CAR по данному изобретению отвечает за внутриклеточную передачу сигналов после связывания внеклеточного лиганд-связывающего домена с мишенью, что приводит к активации иммунной клетки и иммунного ответа. Внутриклеточный сигнальный домен обладает способностью активировать, по меньшей мере, одну из нормальных эффекторных функций иммунной клетки, в которой экспрессируется CAR. Например, эффекторная функция Т-клетки может представлять собой цитолитическую активность или вспомогательную активность, включая секрецию цитокинов.

[0282] В некоторых вариантах реализации данного изобретения внутриклеточный сигнальный домен для использования в CAR может представлять собой цитоплазматические последовательности, например, но не ограничиваясь ими, Т-клеточного рецептора и корецепторов, которые действуют совместно, инициируя передачу сигнала после взаимодействия с антигенным рецептором, а также любое производное или вариант этих последовательностей и любая синтетическая последовательность, которая имеет такие же функциональные возможности. Внутриклеточные сигнальные домены содержат два различных класса цитоплазматических сигнальных последовательностей: те, которые инициируют антиген-зависимую первичную активацию, и те, которые действуют антиген-независимым образом, обеспечивая вторичный или костимуляторный сигнал. Первичные цитоплазматические сигнальные последовательности могут содержать сигнальные мотивы, которые известны как иммунорецепторные тирозиновые активирующие мотивы (ITAM). ITAM представляют собой четко определенные сигнальные мотивы, обнаруженные во внутрицитоплазматическом хвосте множества рецепторов, которые служат сайтами связывания для тирозинкиназ класса syk/zap70. Примеры ITAM, используемые в изобретении, могут включать в качестве неограничивающих примеров те, которые получены из TCRζ, FcRγ, FcRβ, FcRε, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD5, CD22, CD79a, CD79b и CD66d. В некоторых вариантах реализации данного изобретения внутриклеточный сигнальный домен CAR может содержать сигнальный домен CD3ζ. В некоторых вариантах реализации данного изобретения внутриклеточный сигнальный домен CAR по данному изобретению содержит домен костимулирующей молекулы.

[0283] В некоторых вариантах реализации данного изобретения внутриклеточный сигнальный домен CAR по данному изобретению содержит часть костимулирующей молекулы, выбранной из группы, состоящей из фрагмента 41ВВ (GenBank: AAA53133.) и CD28 (NP_006130.1).

[0284] CAR экспрессируются на поверхностной мембране клетки. Таким образом, CAR может содержать трансмембранный домен. Подходящие трансмембранные домены для CAR, описанного в данном документе, обладают способностью (а) экспрессироваться на поверхности клеток, предпочтительно иммунных клеток, таких как, например, но не ограничиваясь этим, лимфоцитарных клеток или натуральных киллерах (NK-клетках), и (b)

взаимодействовать с лиганд-связывающим доменом и внутриклеточным сигнальным доменом для управления клеточным ответом иммунной клетки против заранее определенной клетки-мишени. Трансмембранный домен может быть получен либо из природного, либо из синтетического источника. Трансмембранный домен может быть получен из любого мембрано-связанного или трансмембранного белка. В качестве неограничивающих примеров, трансмембранный полипептид может представлять собой субъединицу Т-клеточного рецептора, такую как α, β, γ или δ, полипептид, составляющий комплекс CD3, рецептор IL-2 р55 (а цепь), р75 (β цепь) или γ цепь, цепь, субъединицы цепи Fc-рецепторов, в частности, Fcγ-рецептор III или белки CD. Альтернативно, трансмембранный домен может быть синтетическим и может содержать преимущественно гидрофобные остатки, такие как лейцин и валин. В некоторых вариантах реализации данного изобретения указанный трансмембранный домен получен из цепи CD8a человека (например, NP_001139345.1). Трансмембранный домен может дополнительно содержать стержневой домен между внеклеточным лиганд-связывающим доменом и указанным трансмембранным доменом. Стержневой домен может содержать до 300 аминокислот, предпочтительно от 10 до 100 аминокислот и наиболее предпочтительно от 25 до 50 аминокислот. Стеблевая область может быть получена из всех или части встречающихся в природе молекул, например, из всей или части внеклеточной области CD8, CD4 или CD28, или из всей или части константной области антитела. Альтернативно, стержневой домен может быть синтетической последовательностью, которая соответствует встречающейся в природе последовательности стержневого домена, или может быть полностью синтетической последовательностью стержневого домена. В некоторых вариантах реализации данного изобретения указанный стержневой домен является частью цепи CD8a человека (например, NP_001139345.1). В другом конкретном варианте реализации данного изобретения, указанные трансмембранный и шарнирный домены содержат часть цепи CD8a человека. В некоторых вариантах реализации данного изобретения CAR, описанные в данном документе, могут содержать внеклеточный лиганд-связывающий домен, который специфически связывает ВСМА, шарнирный и трансмембранный домены CD8α человека, сигнальный домен CD3ζ и сигнальный домен 4-1ВВ. В некоторых вариантах реализации изобретения, CAR можно ввести в иммунную клетку в виде трансгена с помощью плазмидного вектора. В некоторых вариантах реализации данного изобретения плазмидный вектор может также содержать, например, селективный маркер, который обеспечивает идентификацию и/или селекцию клеток, которые получили вектор.

[0285] В Таблице 4 представлены иллюстративные последовательности компонентов CAR, которые могут быть использованы в описанных в данном документе CAR.

[0286] Полипептиды CAR могут быть синтезированы in situ в клетке после введения в клетку полинуклеотидов, кодирующих полипептиды CAR. Альтернативно, полипептиды CAR можно продуцировать вне клеток, а затем вводить в клетки. Способы введения полинуклеотидной конструкции в клетки известны в данной области техники. В некоторых вариантах реализации данного изобретения можно использовать способы стабильной трансформации для интеграции полинуклеотидной конструкции в геном клетки. В других вариантах реализации данного изобретения могут быть использованы способы транзиентной трансформации для транзиентной экспрессии полинуклеотидной конструкции, и полинуклеотидная конструкция не будет интегрирована в геном клетки. В других вариантах реализации данного изобретения можно использовать вирус-опосредованные способы. Полинуклеотиды можно вводить в клетку любыми подходящими способами, такими как, например, с использованием рекомбинантных вирусных векторов (например, ретровирусов, аденовирусов), липосом и тому подобного. Способы транзиентной трансформации включают, например, но не ограничиваются ими, микроинъекцию, электропорацию или бомбардировку частицами. Полинуклеотиды могут быть включены в векторы, такие как, например, плазмидные векторы или вирусные векторы.

[0287] В данном документе также предложены выделенные иммунные клетки, содержащие, по меньшей мере, один индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, описанный в данном документе. Выделенные иммунные клетки могут дополнительно содержать химерный антигенный рецептор (CAR). Выделенные иммунные клетки, модифицированные для экспрессии индуцибельного химерного цитокинового рецептора и/или CAR, как указанно в данном документе, также взаимозаменяемо называют сконструированными иммунными клетками. Данные выделенные иммунные клетки можно получить любым из описанных в данном документе способов. Любая иммунная клетка, способная экспрессировать гетерологичные ДНК, может быть использована с целью экспрессии индуцибельного химерного цитокинового рецептора и представляющего интерес CAR. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка представляет собой Т-клетку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения иммунная клетка может быть получена, например, но не ограничиваясь ею, из стволовой клетки. Стволовые клетки могут быть стволовыми клетками взрослого организма, эмбриональными стволовыми клетками нечеловеческого происхождения, более конкретно - стволовыми клетками нечеловеческого происхождения, стволовыми клетками пуповинной крови, клетками-предшественниками, стволовыми клетками костного мозга, индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками, тотипотентными стволовыми клетками или гемопоэтическими стволовыми клетками. Репрезентативными человеческими клетками являются клетки CD34+. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка может представлять собой дендритную клетку, дендритную клетку-киллер, тучную клетку, NK-клетку, макрофаг, моноцит, В-клетку или Т-клетку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка может быть Т-клеткой, выбранной из группы, состоящей из воспалительных Т-лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфоцитов, регуляторных Т-лимфоцитов или хелперных Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения клетка может происходить из группы, состоящей из CD4+ Т-лимфоцитов и CD8+ Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка представляет собой аутологичную Т-клетку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка представляет собой аллогенную Т-клетку.

[0288] В некоторых вариантах реализации данного изобретения CAR-иммунная клетка (например, CAR-T-клетка) содержит полинуклеотид, кодирующий суицидный полипептид, такой как, например, RQR8. См., например, WO 2013153391А, которая полностью включена в данный документ посредством ссылки. В некоторых вариантах реализации данного изобретения суицидный полипептид, экспрессируется на поверхности клетки. В некоторых вариантах реализации данного изобретения в конструкцию CAR включен суицидный полипептид. В некоторых вариантах реализации данного изобретения суицидный полипептид не является частью конструкции CAR.

[0289] В некоторых вариантах реализации данного изобретения внеклеточный домен любого из CAR, описанных в данном документе, может содержать один или более эпитопов, специфичных для (специфически распознаваемых) моноклонального антитела. Эти эпитопы также называются в данном документе мАТ-специфическими эпитопами. Иллюстративные мАТ-специфические эпитопы описаны в международной патентной публикации № WO 2016/120216, которая включена в данный документ в полном объеме. В данных вариантах реализации изобретения внеклеточный домен CAR содержит антигенсвязывающие домены, которые специфически связываются с интересующей мишенью, и один или более эпитопов, которые связываются с одним или более моноклональными антителами (мАТ). CAR, содержащие мАТ-специфические эпитопы, могут быть одноцепочечными или многоцепочечными.

[0290] Включение эпитопов, специфичных для моноклональных антител, во внеклеточный домен CAR, описанных в данном документе, позволяет сортировать и истощать сконструированные иммунные клетки, экспрессирующие CAR. В некоторых вариантах реализации данного изобретения возможность истощения обеспечивает аварийный выключатель в случае вредных эффектов, например, при введении субъекту.

[0291] Перед размножением и генетической модификацией источник клеток может быть получен от субъекта с помощью множества неограничивающих способов. Клетки могут быть получены из ряда неограничивающих источников, включая мононуклеарные клетки периферической крови, костный мозг, ткань лимфатических узлов, пуповинную кровь, ткань тимуса, ткань из очага инфекции, асцит, плевральный выпот, ткань селезенки и опухоли. В некоторых вариантах реализации данного изобретения можно использовать любое количество линий иммунных клеток, таких как линии Т-клеток, доступных и известных специалистам в данной области. В некоторых вариантах реализации данного изобретения клетки могут быть получены от здорового донора, от субъекта, у которого диагностирован рак, или от субъекта, у которого диагностирована инфекция. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки могут быть частью смешанной популяции клеток, которые обладают разными фенотипическими характеристиками.

[0292] В данном документе также предложены клеточные линии, полученные из трансформированной иммунной клетки, такой как трансформированная Т-клетка, в соответствии с любым из способов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка, такая как выделенная Т-клетка по изобретению, содержит полинуклеотид, кодирующий индуцибельный химерный цитокиновый рецептор. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка, такая как выделенная Т-клетка по изобретению, содержит полинуклеотид, кодирующий индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, и полинуклеотид, кодирующий CAR. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка, такая как выделенная Т-клетка по изобретению, содержит полинуклеотид, кодирующий индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, полинуклеотид, кодирующий CAR, и полинуклеотид, кодирующий антагонист NK-клеток.

[0293] Выделенные иммунные клетки, такие как выделенные Т-клетки по изобретению, могут быть активированы и размножены либо до, либо после генетической модификации Т-клеток, с использованием способов, которые в целом описаны, например, но не ограничиваясь ими, в патентах США 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; и публикации заявки на патент США №20060121005. Иммунные клетки можно размножать в условиях in vitro или in vivo. Как правило, Т-клетки по изобретению могут быть размножены, например, путем контакта с агентом, который стимулирует комплекс ТКР CD3 и костимулирующую молекулу на поверхности Т-клеток, чтобы создать сигнал активации для Т-клетки. Например, химические вещества, такие как ионофор кальция А23187, форбол 12-миристат 13-ацетат (РМА) или митогенные лектины, такие как фитогемагглютинин (РНА), могут быть использованы для создания сигнала активации для Т-клетки. [0294] В некоторых вариантах реализации данного изобретения популяцию иммунных клеток можно стимулировать в условиях in vitro путем контакта с подходящим антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. Например, популяции Т-клеток можно стимулировать в условиях in vitro путем контакта, например, с антителом против CD3 или его антигенсвязывающим фрагментом, или с антителом против CD28, иммобилизованным на поверхности, или путем контакта с активатором протеинкиназы С (например, бриостатином) в сочетании с ионофором кальция. Для совместной стимуляции вспомогательной молекулы на поверхности Т-клеток используется лиганд, который связывает вспомогательную молекулу. Например, популяция Т-клеток может контактировать с антителом против CD3 и антителом против CD28 в условиях, подходящих для стимуляции пролиферации Т-клеток. Условия, подходящие для культуры Т-клеток, включают подходящую среду (например, Minimal Essential Media или RPMI Media 1640 или, X-vivo 5, (Lonza)), которая может содержать факторы, необходимые для пролиферации и жизнеспособности, включая сыворотку (например, эмбриональную телячью сыворотку или сыворотку крови человека), интерлейкин-2 (IL-2), инсулин, IFN-γ, IL-4, IL-7, GM-CSF, IL-10, IL-2, IL-15, TGFp и TNF или любую другую добавку для роста клеток, известные специалисту в данной области. Другие добавки для роста клеток включают, но не ограничиваются ими, поверхностно-активное вещество, плазманат и восстанавливающие агенты, такие как N-ацетилцистеин и 2-меркаптоэтанол. Среда может включать RPMI 1640, A1M-V, DMEM, MEM, а-МЕМ, F-12, X-Vivo 1 и X-Vivo 20, Optimizer с добавленными аминокислотами, пируватом натрия и витаминами, либо без сыворотки или с добавлением соответствующего количества сыворотки (или плазмы), или определенного набора гормонов, и/или количества цитокина(ов), достаточного для роста и размножения Т-клеток. Антибиотики, например пенициллин и стрептомицин, включаются только в экспериментальные культуры, но не в культуры клеток, которые должны быть введены субъекту. Клетки-мишени поддерживаются в условиях, необходимых для поддержания роста, например, при соответствующей температуре (например, 37°С) и атмосфере (например, воздух плюс 5% СО₂). Т-клетки, подвергавшиеся стимуляции разного количества времени, могут обладать разными характеристиками.

[0295] В некоторых вариантах реализации данного изобретения клетки по данному изобретению можно размножить путем совместного культивирования с тканью или клетками. Клетки также можно размножать в условиях in vivo, например, в крови субъекта после введения клетки субъекту.

[0296] В другом аспекте, в данном изобретении предложены композиции (такие как фармацевтические композиции), содержащие любые из клеток по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиция содержит выделенную Т-клетку, содержащую полинуклеотид, кодирующий любой из индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, описанных в данном документе, и полинуклеотид, кодирующий CAR.

[0297] Векторы экспрессии и введение полинуклеотидных композиций дополнительно описаны в данном документе.

[0298] В другом аспекте, в данном изобретении предложен способ получения любого из полинуклеотидов, описанных в данном документе.

[0299] Полинуклеотиды, комплементарные любым таким последовательностям, также охватываются данным изобретением. Полинуклеотиды могут быть одноцепочечными (кодирующими или антисмысловыми) или двухцепочечными, и могут быть молекулами ДНК (геномной, кДНК или синтетической) или РНК. Молекулы РНК включают молекулы гяРНК, которые содержат интроны и соответствуют молекуле ДНК взаимно однозначно, и молекулы мРНК, которые не содержат интронов. Дополнительные кодирующие или некодирующие последовательности могут, но не обязательно, присутствовать в полинуклеотиде по данному изобретению, и полинуклеотид может, но не обязательно, быть связанным с другими молекулами и/или веществами носителя.

[0300] Полинуклеотиды могут содержать нативную последовательность (т.е. эндогенную последовательность, кодирующую антитело или его часть) или могут содержать вариант такой последовательности. Варианты полинуклеотидов содержат одну или более замен, добавлений, делеций и/или вставок таким образом, что иммунореактивность кодируемого полипептида не снижается по сравнению с нативной иммунореактивной молекулой. Влияние на иммунореактивность кодируемого полипептида обычно можно оценить, как описано в данном документе. Варианты предпочтительно демонстрируют идентичность, по меньшей мере, около 70%, более предпочтительно идентичность, по меньшей мере, около 80%, еще более предпочтительно идентичность, по меньшей мере, около 90% и наиболее предпочтительно, идентичность, по меньшей мере, около 95% с полинуклеотидной последовательностью, которая кодирует нативное антитело или его часть.

[0301] Две полинуклеотидные или полипептидные последовательности называются «идентичными», если последовательность нуклеотидов или аминокислот в этих двух последовательностях одинакова при выравнивании для максимального соответствия, как описано ниже. Сравнения двух последовательностей обычно выполняются путем сравнения последовательностей в окне сравнения для идентификации и сравнения локальных областей сходства последовательностей. «Окно сравнения», используемое в данном документе, относится к сегменту, по меньшей мере, из около 20 смежных положений, обычно от 30 до около 75, или от 40 до около 50, в котором последовательность может сравниваться с эталонной последовательностью с таким же количеством смежных позиции после оптимального выравнивания двух последовательностей.

[0302] Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения может быть проведено с использованием программы Megalign из комплекта программного обеспечения биоинформатики Lasergene (DNASTAR, Inc., Мадисон, Висконсин) с использованием параметров по умолчанию. В этой программе реализовано несколько схем выравнивания, описанных в следующих ссылках: Dayhoff, М.О., 1978, A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships. In Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol.5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp.626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers, E.W. and MullerW., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730.

[0303] Предпочтительно, «процент идентичности последовательностей» определяется путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей в окне сравнения, по меньшей мере, из 20 положений, при этом часть полинуклеотидной или полипептидной последовательности в окне сравнения может содержать добавления или делеции (т.е. пропуски), составляющие 20 процентов или менее, обычно от 5 до 15 процентов, или от 10 до 12 процентов, по сравнению с эталонными последовательностями (которые не содержат добавлений или делеций) для оптимального выравнивания двух последовательностей. Процент рассчитывается путем определения количества положений, в которых идентичные основания нуклеиновых кислот или аминокислотные остатки встречаются в обеих последовательностях, чтобы получить количество совпадающих положений, путем деления количества совпадающих положений на общее количество положений в эталонной последовательности (т.е. размер окна) и умножением результатов на 100, чтобы получить процент идентичности последовательностей.

[0304] Варианты также, или альтернативно, могут быть по существу гомологичными нативному гену или его части или комплементу. Такие варианты полинуклеотидов способны гибридизоваться в умеренно строгих условиях с природной последовательностью ДНК, кодирующей нативное антитело (или комплементарную последовательность).

[0305] Подходящие «умеренно жесткие условия» включают предварительную промывку в растворе 5 X SSC, 0,5% ДСН, 1,0 мМ ЭДТА (рН 8,0); гибридизацию при 50°С-65°С, 5 X SSC в течение ночи; с последующей промывкой два раза при 65°С в течение 20 минут каждым из 2Х, 0,5Х и 0,2Х SSC, содержащих 0,1% ДСН.

[0306] В контексте данного документа «очень жесткие условия» или «условия высокой жесткости» означают такие, при которых: (1) используют для промывания низкую ионную силу и высокую температуру, например 0,015 М хлорид натрия/0,0015 М цитрат натрия/0,1% додецилсульфат натрия при 50°С; (2) используют во время гибридизации денатурирующий агент, такой как формамид, например, 50% (об./об.), формамид с 0,1% бычьим сывороточным альбумином/0,1% фиколлом/0,1% поливинилпирролидоном/50 мМ натрий-фосфатным буфером при рН 6,5 с 750 мМ хлорида натрия, 75 мМ цитрата натрия при 42°С; или (3) используют 50% формамид, 5 × SSC (0,75 М NaCl, 0,075 М цитрат натрия), 50 мМ фосфат натрия (рН 6,8), 0,1% пирофосфат натрия, 5 × раствор Денхардта, обработанную ультразвуком ДНК сперму лосося (50 мкг/мл), 0,1% ДСН и 10% сульфат декстрана при 42°С, с промывками при 42°С в 0,2 × SSC (хлорид натрия/цитрат натрия) и 50% формамиде при 55°С, с последующей промывкой высокой жесткости, состоящей из 0,1 × SSC, содержащего ЭДТА, при 55°С.Специалист в данной области техники поймет, как регулировать температуру, ионную силу и т.д., если необходимо, с учетом таких факторов, как длина зонда и т.п.

[0307] Специалистам в данной области техники будет понятно, что в результате вырожденности генетического кода существует множество нуклеотидных последовательностей, которые кодируют полипептид, как описано в данном документе. Некоторые из этих полинуклеотидов имеют минимальную гомологию с нуклеотидной последовательностью любого природного гена. Тем не менее, полинуклеотиды, которые варьируются из-за различий в использовании кодонов, конкретно рассматриваются в данном изобретении. Кроме того, аллели генов, содержащих предложенные в данном документе полинуклеотидные последовательности, входят в объем данного изобретения. Аллели представляют собой эндогенные гены, которые изменяются в результате одной или более мутаций, таких как делеции, вставки и/или замены нуклеотидов. Полученные мРНК и белок могут, но не обязательно, иметь измененную структуру или функцию. Аллели можно идентифицировать с использованием стандартных способов (таких как гибридизация, амплификация и/или сравнение последовательностей в базе данных).

[0308] Полинуклеотиды по данному изобретению можно получить с помощью химического синтеза, рекомбинантных способов или ПЦР. Способы химического синтеза полинуклеотидов хорошо известны в данной области техники и не нуждаются в подробном описании в данном документе. Специалист в данной области техники может использовать предложенные в данном документе последовательности и коммерческий синтезатор ДНК для получения желаемой последовательности ДНК.

[0309] Для получения полинуклеотидов с использованием рекомбинантных способов полинуклеотид, содержащий желаемую последовательность, может быть вставлен в подходящий вектор, и этот вектор, в свою очередь, может быть введен в подходящую клетку-хозяин для репликации и амплификации, как дополнительно обсуждается в данном документе. Полинуклеотиды можно вставлять в клетки-хозяева любыми способами, известными в данной области техники. Клетки трансформируются путем введения экзогенного полинуклеотида путем прямого захвата, эндоцитоза, трансфекции, F-спаривания или электропорации. После введения экзогенный полинуклеотид может поддерживаться внутри клетки в виде неинтегрированного вектора (такого как плазмида) или интегрироваться в геном клетки-хозяина. Амплифицированный таким образом полинуклеотид можно выделить из клетки-хозяина способами, хорошо известными в данной области техники. См., например, Sambrook et al., 1989.

[0310] Альтернативно, ПЦР позволяет воспроизводить последовательности ДНК. Технология ПЦР хорошо известна в данной области техники и описана в патентах США №4,683,195, 4,800,159, 4,754,065 и 4,683,202, а также в PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mulliset al. eds., Birkauswer Press, Boston, 1994.

[0311] РНК можно получить, используя выделенную ДНК в соответствующем векторе и вставляя ее в подходящую клетку-хозяин. Когда клетка реплицируется и ДНК транскрибируется в РНК, эта РНК затем может быть выделена с использованием способов, хорошо известных специалистам в данной области техники, как, например, изложено в Sambrook et al., 1989, цитировано выше.

[0312] Подходящие векторы для клонирования могут быть сконструированы в соответствии со стандартными способами или могут быть выбраны из большого числа векторов клонирования, доступных в данной области техники. Хотя выбранный вектор клонирования может варьироваться в зависимости от клетки хозяина, которую предполагается использовать, пригодные векторы клонирования, как правило, будут обладать способностью к саморепликации, могут иметь единственную мишень для конкретной эндонуклеазы рестрикции и/или могут нести гены маркера, который можно использовать при отборе клонов, содержащих вектор. Подходящие примеры включают плазмиды и бактериальные вирусы, например, pUC18, pUC19, Bluescript (например, pBS SK+) и его производные, глр18, тр19, pBR322, рМВ9, ColE1, pCR1, RP4, фаговые ДНК и челночные векторы, такие как pSA3 и рАТ28. Эти и многие другие векторы клонирования доступны от коммерческих поставщиков, таких как BioRad, Strategene и Invitrogen.

[0313] Векторы экспрессии обычно представляют собой реплицируемые полинуклеотидные конструкции, которые содержат полинуклеотид по данному изобретению. Подразумевается, что вектор экспрессии должен реплицироваться в клетках-хозяевах либо как эписомы, либо как неотъемлемая часть хромосомной ДНК. Подходящие векторы экспрессии включают, но не ограничиваются ими, плазмиды, вирусные векторы, включая аденовирусы, аденоассоциированные вирусы, ретровирусы, космиды и вектор(ы) экспрессии, описанные в публикации РСТ № WO 87/04462. Компоненты вектора могут обычно включать, но не ограничиваются ими, одно или более из следующего: сигнальную последовательность; точку начала репликации; один или более маркерных генов; подходящие элементы, контролирующие транскрипцию (такие как промоторы, энхансеры и терминатор). Для экспрессии (т.е. трансляции) обычно также требуются один или более элементов, контролирующих трансляцию, таких как сайты связывания рибосом, сайты инициации трансляции и стоп-кодоны.

[0314] Векторы, содержащие интересующие полинуклеотиды, могут быть введены в клетку-хозяина любым из ряда подходящих способов, включая электропорацию, трансфекцию с использованием хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, DEAE-декстрана или других веществ; бомбардировку микрочастицами; липофекцию; и инфицирование (например, когда вектор представляет собой инфекционный агент, такой как вирус осповакцины). Выбор вводимых векторов или полинуклеотидов часто зависит от характеристик клетки-хозяина.

[0315] Полинуклеотид, кодирующий индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, или CAR, описанный в данном документе, может существовать в кассете экспрессии или векторе экспрессии (например, плазмиде для введения в бактериальную клетку-хозяин или вирусном векторе, таком какбакуловирусный вектор, для трансфекции клетки-хозяина насекомого, или плазмидном или вирусном векторе, таком как лентивирус, для трансфекции клетки-хозяина млекопитающего). В некоторых вариантах реализации данного изобретения полинуклеотид, кодирующий индуцибельный химерный цитокиновый рецептор и/или CAR, вводят в выделенную иммунную клетку с использованием невирусного вектора. Примеры невирусных векторов, которые могут быть использованы в способах по данному раскрытию, включают, но не ограничиваются ими, векторы на основе транспозонов, такие как piggyBac™, Frog Prince, Sleeping Beauty (например, вектор SB100X) и т.п. В некоторых вариантах реализации данного изобретения полинуклеотид, кодирующий индуцибельный химерный цитокиновый рецептор и/или CAR, интегрирован в геном клетки. В некоторых вариантах реализации изобретения интеграция является сайт-специфической. Иллюстративные способы обеспечения сайт-специфической интеграции включают способы, использующие нуклеазы, редактирующие геном, такие как мегануклеазы, нуклеазы «цинковые пальцы» (ZFN), эффекторные нуклеазы, подобные активаторам транскрипции (TALEN), и кластерные, регулярно расположенные, короткие нуклеазы, связанные с палиндромными повторами (CRISPR), такие как эндонуклеаза Cas9.

[0316] В некоторых вариантах реализации данного изобретения полинуклеотид или вектор может включать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую последовательности рибосомных проскоков, такие как, например, но не ограничиваясь этим, последовательность, кодирующую пептид 2А. Пептиды 2А, которые были идентифицированы в подгруппе Автовиросов семейства пикорнавирусов, вызывают рибосомный «пропуск» от одного кодона к другому без образования пептидной связи между двумя аминокислотами, кодируемыми кодонами (см. (Donnelly and Elliott 2001; Atkins, Wills et al. 2007; Doronina, Wu et al. 2008)). Под «кодоном» подразумеваются три нуклеотида на мРНК (или на смысловой цепи молекулы ДНК), которые транслируются рибосомой в один аминокислотный остаток. Таким образом, два, три, четыре или более полипептидов могут быть синтезированы из одной непрерывной открытой рамки считывания в имРНК, когда полипептиды разделены олигопептидной последовательностью 2А, которая находится в рамке. Такие механизмы пропуска рибосом хорошо известны в данной области техники и, как известно, используются несколькими векторами для экспрессии нескольких белков, кодируемых одной информационной РНК.

[0317] Чтобы направить трансмембранные полипептиды в секреторный путь клетки-хозяина, в некоторых вариантах реализации изобретения секреторная сигнальная последовательность (также известная как лидерная последовательность, препро-последовательность или пре-последовательность) предоставляется в полинуклеотидной последовательности или векторной последовательности. Секреторная сигнальная последовательность функционально связана с трансмембранной последовательностью нуклеиновой кислоты, т.е. две последовательности соединены в правильной рамке считывания и расположены так, чтобы направлять вновь синтезированный полипептид в секреторный путь клетки-хозяина. Секреторные сигнальные последовательности обычно располагаются на 5'-конце относительно последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей представляющий интерес полипептид, хотя некоторые секреторные сигнальные последовательности могут быть расположены в другом месте в представляющей интерес последовательности нуклеиновой кислоты (см., например, Welch et al., Патент США №5,037,743; Holland et al., Патент США №5,143,830). В некоторых вариантах реализации сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 318 или 329. Специалисты в данной области техники поймут, что ввиду вырожденности генетического кода между этими полинуклеотидными молекулами возможны значительные вариации последовательности. В некоторых вариантах реализации данного изобретения последовательности нуклеиновых кислот по данному изобретению кодон-оптимизированы для экспрессии в клетках млекопитающих, предпочтительно для экспрессии в клетках человека. Кодон-оптимизация относится к замене в интересующей последовательности кодонов, которые являются обычно редкими в высокоэкспрессируемых генах данного вида, кодонами, которые обычно часто встречаются в высокоэкспрессируемых генах таких видов, например, кодонами, кодирующими аминокислоты как кодоны, которые замещаются.

[0318] В данном документе предложены способы подготовки иммунных клеток для использования в иммунотерапии. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способы включают введение индуцибельного химерного цитокинового рецептора и CAR в иммунные клетки и размножение клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения, изобретение относится к способу конструирования иммунной клетки, включающему: получение клетки и экспрессию индуцибельного химерного цитокинового рецептора, и экспрессию на поверхности клетки, по меньшей мере, одного CAR. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ включает: трансфекцию клетки, по меньшей мере, одним полинуклеотидом, кодирующим индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, и, по меньшей мере, одним полинуклеотидом, кодирующим CAR, и экспрессию полинуклеотидов в клетке. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ включает: трансфекцию клетки, по меньшей мере, одним полинуклеотидом, кодирующим индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, по меньшей мере, одним полинуклеотидом, кодирующим CAR, и экспрессию полинуклеотидов в клетке.

[0319] В некоторых вариантах реализации данного изобретения полинуклеотиды, кодирующие индуцибельный химерный цитокиновый рецептор и CAR, присутствуют в одном или более векторах экспрессии для стабильной экспрессии в клетках. В некоторых вариантах реализации данного изобретения полинуклеотиды присутствуют в вирусных векторах для стабильной экспрессии в клетках. В некоторых вариантах реализации данного изобретения вирусные векторы могут быть, например, лентивирусными векторами или аденовирусными векторами.

[0320] В некоторых вариантах реализации данного изобретения полинуклеотиды, кодирующие полипептиды по данному изобретению, могут представлять собой мРНК, которая вводится непосредственно в клетки, например, путем электропорации. В некоторых вариантах реализации данного изобретения технология cytoPulse, такая как PulseAgile, может использоваться для транзиентной проницаемости живых клеток для доставки генетического материала в клетки (например, http://cytopulse.com; патент США 6,078,490; PCT/US 2011/000827; и PCT/US 2004/005237). Параметры могут быть изменены для определения условий высокой эффективности трансфекции с минимальной смертностью.

[0321] В данном документе также предложены способы трансфекции иммунной клетки, такой как Т-клетка. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ включает: контактирование иммунной клетки с РНК и применение к иммунной клетке быстрой последовательности импульсов, состоящей из: (а) электрического импульса с диапазоном напряжений от около 2250 до 3000 В на сантиметр; (б) импульса длительностью 0,1 мс; (с) интервал от около 0,2 до 10 мс между электрическими импульсами этапа (а) и (b); (d) электрический импульс с диапазоном напряжения от около 2250 до 3000 В с длительностью импульса около 100 мс и интервалом около 100 мс между электрическим импульсом этапа (b) и первым электрическим импульсом этапа (с); и (е) четыре электрических импульса с напряжением около 325 В с длительностью импульса около 0,2 мс и интервалом 2 мс между каждым из 4 электрических импульсов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ трансфекции иммунной клетки включает контактирование указанной иммунной клетки с РНК и применение к иммунной клетке быстрой последовательности импульсов, состоящей из: (а) электрического импульса с напряжением около 2250, 2300, 2350, 2400, 2450, 2500, 2550, 2400, 2450, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900 или 3000 В на сантиметр; (б) импульса длительностью 0,1 мс; (с) и интервала в около 0,2, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мс между электрическими импульсами на этапах (а) и (b); (d) одного электрического импульса с диапазоном напряжения от около 2250, 2250, 2300, 2350, 2400, 2450, 2500, 2550, 2400, 2450, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900 или 3000 В и с длительностью импульса 100 мс и интервала в 100 мс между электрическим импульсом этапа (b) и первого электрического импульса этапа (с); и (е) 4 электрических импульсов с напряжением около 325 В с длительностью импульса около 0,2 мс и интервалом в около 2 мс между каждым из 4 электрических импульсов. Любые значения, включенные в вышеописанный диапазон значений, раскрыты в данной заявке. Среда для электропорации может быть любой подходящей средой, известной в данной области техники. В некоторых вариантах реализации данного изобретения среда для электропорации имеет проводимость в диапазоне от около 0,01 до около 1,0 миллиСименс.

[0322] В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ может дополнительно включать этап генетической модификации клетки путем инактивации, по меньшей мере, одного гена, экспрессирующего, например, но не ограничиваясь ими, компонент ТКР, мишень для иммуносупрессивного агента, ген HLA и/или белок иммунной контрольной точки, такой как, например, PDCD1 или CTLA-4. Под инактивацией гена подразумевается, что интересующий ген не экспрессируется в функциональной белковой форме. В некоторых вариантах реализации данного изобретения ген, который необходимо инактивировать, выбран из группы, состоящей, например, но не ограничиваясь ею, из TCRα, TCRβ, CD52, GR, дезоксицитидинкиназы (DCK), PD-1 и CTLA-4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ включает инактивацию одного или более генов путем введения в клетки редкощепящей эндонуклеазы, способной селективно инактивировать ген путем селективного расщепления ДНК. В некоторых вариантах реализации редкощепящая эндонуклеаза может представлять собой, например, нуклеазу эффектора, подобного активаторам транскрипции (TALE-нуклеазу) или эндонуклеазу Cas9.

[0323] В другом аспекте стадия генетической модификации клеток может включать: модификацию иммунных клеток путем инактивации, по меньшей мере, одного гена, экспрессирующего мишень для иммунодепрессивного агента, и; размножение клеток, необязательно в присутствии иммунодепрессанта. Иммунодепрессивный агент представляет собой агент, подавляющий иммунную функцию с помощью одного из более механизмов действия. Иммунодепрессивный агент может уменьшить степень и/или «жадность» иммунного ответа. Неограничивающие примеры иммунодепрессантов включают ингибиторы кальциневрина, мишени рапамицина, блокаторы α-цепи интерлейкина-2, ингибиторы инозинмонофосфатдегидрогеназы, ингибиторы редуктазы дигидрофолиевой кислоты, кортикостероиды и иммуносупрессивные антиметаболиты. Некоторые цитотоксические иммунодепрессанты действуют путем ингибирования синтеза ДНК. Другие могут действовать через активацию Т-клеток или ингибируя активацию Т-хелперов. Способы согласно данному изобретению позволяют придавать иммунодепрессивную резистентность Т-клеткам для иммунотерапии путем инактивации мишени иммунодепрессивного агента в Т-клетках. В качестве неограничивающих примеров, мишени для иммунодепрессивного агента могут быть рецептором для иммунодепрессивного агента, такого как, например, но не ограничиваясь этим, CD52, рецептор глюкокортикоидов (GR), представители семейства генов FKBP и представители семейства генов циклофилинов.

Способы лечения

[0324] Выделенные иммунные клетки, полученные описанными выше способами, или клеточные линии, полученные из таких выделенных иммунных клеток, можно вводить нуждающемуся в этом субъекту и использовать в качестве лекарственного средства. В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка представляет собой Т-клетку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения такое лекарственное средство можно использовать для лечения заболевания, такого как, например, вирусное заболевание, бактериальное заболевание, онкологическое заболевание, воспалительное заболевание, иммунное заболевание или заболевание, связанное со старением. В некоторых вариантах реализации данного изобретения онкологическое заболевание может быть выбрано из группы, состоящей из рака желудка, саркомы, лимфомы, лейкоза, рака головы и шеи, рака тимуса, эпителиального рака, рака слюнной железы, рака печени, рака желудка, рака щитовидной железы, рака легких, рака яичников, рака молочной железы, рака простаты, рака пищевода, рака поджелудочной железы, глиомы, лейкоза, множественной миеломы, почечно-клеточной карциномы, рака мочевого пузыря, рака шейки матки, хориокарциномы, рака толстой кишки, рака полости рта, рака кожи и меланомы. В некоторых вариантах реализации данного изобретения субъект представляет собой ранее лечившегося взрослого субъекта с местнораспространенной или метастатической меланомой, плоскоклеточным раком головы и шеи (SCHNC), карциномой яичников, саркомой или рецидивирующей или рефрактерной классической лимфомой Ходжкина (cHL).

[0325] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенные иммунные клетки, такие как выделенные Т-клетки, в соответствии с изобретением, или клеточная линия, полученная из выделенных иммунных клеток, могут быть использованы при производстве лекарственного средства для лечения заболевания у субъекта, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах реализации данного изобретения заболевание может представлять собой, например, онкологическое заболевание, аутоиммунное заболевание или инфекционное заболевание.

[0326] В данном документе также предложены способы лечения субъектов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ включает предоставление выделенной иммунной клетки, содержащей индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по изобретению, субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ включает стадию введения выделенных иммунных клеток по изобретению нуждающемуся в этом субъекту. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения способ включает предоставление выделенной Т-клетки, содержащей индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по изобретению, субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах реализации данного изобретения способ включает стадию введения выделенных Т-клеток по изобретению нуждающемуся в этом субъекту.

[0327] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенные иммунные клетки по изобретению могут подвергаться устойчивому клеточному размножению в условиях in vivo и могут сохраняться в течение продолжительного периода времени.

[0328] Способы могут дополнительно включать введение одного или более терапевтических агентов субъекту перед введением сконструированных иммунных клеток, несущих CAR и индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе. В некоторых вариантах реализации данного изобретения агент представляет собой элемент режима лимфодеплеции (прекондиционирования). Например, способы лимфодеплеции субъекта, нуждающегося в такой терапии, включают введение субъекту определенных полезных доз циклофосфамида (от 200 мг/м²/сутки до 2000 мг/м²/сутки, от около 100 мг/м²/сутки и до около 2000 мг/м²/сутки; например, около 100 мг/м²/сутки, около 200 мг/м²/сутки, около 300 мг/м²/сутки, около 400 мг/м²/сутки, около 500 мг/м²/сутки, около 600 мг/м²/сутки, около 700 мг/м²/сутки, около 800 мг/м²/сутки, около 900 мг/м²/сутки, около 1000 мг/м²/сутки, около 1500 мг/м²/сутки или около 2000 мг/м²/сутки) и указанных доз флударабина (от 20 мг/м²/сутки до 900 мг/м²/сутки, от около 10 мг/м²/сутки и до около 900 мг/м²/сутки; например, около 10 мг/м²/сутки, около 20 мг/м²/сутки, около 30 мг/м²/сутки, около 40 мг/м²/сутки, около 40 мг/м²/сутки, около 50 мг/м²/сутки, около 60 мг/м²/сутки, около 70 мг/м²/сутки, около 80 мг/м²/сутки, около 90 мг/м²/сутки, около 100 мг/м²/сутки, около 500 мг/м²/сутки или около 900 мг/м²/сутки). Иллюстративный режим дозирования включает лечение субъекта, включающее ежедневное введение пациенту около 300 мг/м²/сутки циклофосфамида в комбинации или до или после введения около 30 мг/м²/сутки флударабина в течение трех суток до введения терапевтически эффективного количества сконструированных иммунных клеток пациенту.

[0329] В некоторых вариантах реализации данного изобретения, особенно в случае, когда сконструированные клетки, предложенные в данном документе, были подвергнуты редактированию генов для устранения или минимизации поверхностной экспрессии CD52, лимфодеплеция дополнительно включает введение антитела против CD52, такого как алемтузумаб. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против CD52 вводят в дозе около 1-20 мг/сутки внутривенно, например, около 13 мг/сутки внутривенно в течение 1, 2, 3 или более суток. Антитело можно вводить в сочетании с, до или после введения других элементов режима лимфодеплеции (например, циклофосфамида и/или флударабина).

[0330] В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиции, содержащие CAR-экспрессирующие иммунные эффекторные клетки, описанные в данном документе, можно вводить в сочетании с любым количеством химиотерапевтических агентов.

[0331] Способы лечения по изобретению могут быть улучшающими, лечебными или профилактическими. Способ по изобретению может быть либо частью аутологичной иммунотерапии, либо частью лечения аллогенной иммунотерапией. Изобретение особенно подходит для аллогенной иммунотерапии. В иллюстративном варианте реализации данного изобретения Т-клетки от доноров можно трансформировать в неаллореактивные клетки с использованием стандартных протоколов и воспроизводить при необходимости, тем самым получая CAR-T-клетки, которые можно вводить одному или более субъектам. Такая терапия CAR-T-клетками может быть доступна в виде готового терапевтического препарата.

[0332] В другом аспекте, в данном изобретении предложен способ ингибирования роста или прогрессирования опухоли у субъекта, у которого есть опухоль, включающий введение субъекту эффективного количества выделенных иммунных клеток, как описано в данном документе. В другом аспекте, в данном изобретении предложен способ ингибирования или предотвращения метастазирования раковых клеток у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества выделенных иммунных клеток, как описано в данном документе. В другом аспекте, в данном изобретении предложен способ индукции регрессии опухоли у субъекта, у которого есть опухоль, включающий введение субъекту эффективного количества выделенных иммунных клеток, как описано в данном документе. В иллюстративных вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка представляет собой Т-клетку.

[0333] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выделенные иммунные клетки можно вводить субъекту парентерально. В некоторых вариантах реализации данного изобретения субъект представляет собой человека.

[0334] Также предложено использование любых выделенных иммунных клеток, предложенных в данном документе, в производстве лекарственного препарата для лечения онкологического заболевания или для ингибирования роста или прогрессирования опухоли у субъекта, нуждающегося в этом. В иллюстративных вариантах реализации данного изобретения выделенная иммунная клетка представляет собой Т-клетку.

[0335] В некоторых вариантах реализации данного изобретения лечение может быть назначено субъектам, подвергающимся иммуносупрессивному лечению. Действительно, изобретение предпочтительно опирается на клетки или популяцию клеток, которые стали устойчивыми, по меньшей мере, к одному иммунодепрессивному агенту из-за инактивации гена, кодирующего рецептор такого иммунодепрессивного агента. В этом аспекте иммуносупрессивное лечение должно способствовать отбору и размножению иммунных клеток по изобретению у субъекта. Введение клеток или популяции клеток в соответствии с изобретением может осуществляться любым удобным способом, включая ингаляцию аэрозолем, инъекцию, прием внутрь, переливание, имплантацию или трансплантацию. Композиции, описанные в данном документе, можно вводить субъекту подкожно, внутрикожно, внутритуморально, внутринодально, внутримедуллярно, внутримышечно, внутривенной или внутрилимфатической инъекцией, или внутрибрюшинно. В некоторых вариантах реализации данного изобретения клеточные композиции по изобретению предпочтительно вводят с помощью внутривенной инъекции.

[0336] В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение клеток или популяции клеток может включать введение, например, от около 10⁴ до около 10⁹ клеток на кг веса тела, включая все целые значения числа клеток в этих диапазонах. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение клеток или популяции клеток может включать введение от около 10⁵ до 10⁶ клеток на кг веса тела, включая все целые значения числа клеток в этих диапазонах. Клетки или популяция клеток можно вводить одной или более дозами. В некоторых вариантах реализации данного изобретения указанное эффективное количество клеток можно вводить в виде разовой дозы. В некоторых вариантах реализации данного изобретения указанное эффективное количество клеток можно вводить в виде более чем одной дозы в течение определенного периода времени. Время введения определяется лечащим врачом и зависит от клинического состояния пациента. Клетки или популяция клеток могут быть получены из любого источника, такого как банка крови или донора. Хотя индивидуальные потребности могут меняться, определение оптимальных диапазонов эффективных количеств данного типа клеток для конкретного заболевания или состояния находится в пределах компетенции специалистов в данной области техники. Эффективное количество означает количество, которое обеспечивает терапевтический или профилактический эффект. Вводимая доза будет зависеть от возраста, состояния здоровья и веса реципиента, вида сопутствующего лечения, если таковое имеется, частоты лечения и характера желаемого эффекта. В некоторых вариантах реализации данного изобретения эффективное количество клеток или композиции, содержащей эти клетки, вводится парентерально. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение может быть внутривенным. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение можно осуществлять непосредственно путем инъекции внутрь опухоли.

Наборы

[0337] Изобретение также предлагает наборы для использования в способах, не требующих много времени. Наборы по изобретению включают одну или более емкостей, содержащих выделенную иммунную клетку, содержащую один или более полинуклеотидов, кодирующих индуцибельный химерный цитокиновый рецептор и CAR, как описано в данном документе, и инструкции по применению в соответствии с любым из способов изобретения, описанным в данном документе. Обычно эти инструкции содержат описание введения выделенной иммунной клетки для описанных выше терапевтических процедур. В иллюстративном варианте реализации изобретения наборы могут содержать выделенную Т-клетку.

[0338] Инструкции, относящиеся к применению выделенных иммунных клеток, как описано в данном документе, обычно включают информацию о дозировке, графике дозирования и пути введения для предполагаемого лечения. Емкости могут представлять собой упаковки со стандартными дозами, упаковки с большим количеством препарата (например, многодозовые упаковки) или упаковки с субъединичными дозами. Инструкции, поставляемые в наборах по изобретению, обычно представляют собой письменные инструкции на этикетке или вкладыше в упаковке (например, на листе бумаги, входящем в комплект), но машиночитаемые инструкции (например, инструкции, хранящиеся на магнитном или оптическом запоминающем диске) также допустимы.

[0339] Наборы по данному изобретению находятся в подходящей упаковке. Подходящая упаковка включает, но не ограничивается ими, флаконы, бутылки, сосуды, гибкую упаковку (например, герметичные пакеты Майлара или пластиковые пакеты) и т.п. Также предусмотрены упаковки для использования в сочетании с конкретным устройством, таким как ингалятор, устройство для назального введения (например, распылитель) или устройство для инфузии, такое как мининасос. Набор может иметь стерильный порт доступа (например, емкость может представлять собой пакет с раствором для внутривенного введения или флакон, имеющий пробку, которую можно проткнуть иглой для подкожных инъекций). Емкость также может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет с раствором для внутривенного введения или флакон, имеющий пробку, которую можно проткнуть иглой для подкожных инъекций). По крайней мере, один активный агент в композиции представляет собой выделенную иммунную клетку, содержащую индуцибельный химерный цитокиновый рецептор и CAR. Емкость может дополнительно содержать второй фармацевтически активный агент.

[0340] Наборы могут дополнительно предоставлять дополнительные компоненты, такие как буферы и интерпретирующая информация. Обычно набор включает емкость и этикетку или вкладыш(и) на емкости, или связанные с емкостью.

[0341] Следующие ниже примеры предлагаются только для иллюстративных целей и никоим образом не предназначены для ограничения объема изобретения. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые показаны и описаны в данном документе, станут очевидны специалистам в данной области техники из предшествующего описания и подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения.

ПРОНУМЕРОВАННЫЕ ВАРИАНТЫ РЕАЛИЗАЦИИ ДАННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0342] Изобретения, описанные в данном документе, могут быть определены посредством ссылки на следующие пронумерованные иллюстративные варианты реализации данного изобретения.

[0343] Вариант реализации 1. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, содержащий:

домен димеризации;

домен активации тирозинкиназы; и

эффекторный тирозиновый домен.

[0344] Вариант реализации 2. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 1, при этом домен димеризации связывает малую молекулу.

[0345] Вариант реализации 3. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 1 или 2, при этом домен димеризации связывается с лигандом, таким как АР1903, АР20187, димерным FK506 или димерным РК506-подобным аналогом.

[0346] Вариант реализации 4. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-3, при этом домен димеризации содержит полипептид FKBP12.

[0347] Вариант реализации 5. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 4, при этом полипептид FKBP12 содержит аминокислотную замену F36V.

[0348] Вариант реализации 6. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 1, при этом домен димеризации связывает белок.

[0349] Вариант реализации 7. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 1, при этом домен димеризации содержит полипептид белка, выбранного из группы, состоящей из: FKBP, циклофилина, стероид-связывающего белка, эстроген-связывающего белка, глюкокортикоид-связывающего белка, белка, связывающего витамин D, тетрациклин-связывающего белка, внеклеточного домена цитокинового рецептора, рецепторной тирозинкиназы, рецептора семейства TNFR и иммунного корецептора.

[0350] Вариант реализации 8. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 7, при этом иммунный корецептор выбран из группы, состоящей из: рецептора эритропоэтина, рецептора пролактина, рецептора гормона роста, рецептора тромбопоэтина, рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, GP130, рецептора, содержащего общую гамма-цепь, рецептора, содержащего общую бета-цепь, рецептора IFN-альфа, рецептора IFN-гамма, рецептора IFN-лямбда, рецептора IL2/IL15, рецептора IL3, рецептора IL4, рецептора IL5, рецептора IL7, рецептора IL9, рецептора IL10, рецептора IL12, рецептора IL13, Рецептора IL20, рецептора IL21, рецептора IL22, рецептора IL23, рецептора IL27, рецептора TSLP, рецептора G-CSF, рецептора GM-CSF, рецептора CNTF, рецептора OSF, рецептора LIF, рецептора СТ-1, TGFBR1/ALKL5, TGFBR2, EGFR/HER1, ERBB2/HER2, ERBB3/HER3, ERRB4/HER4, INSR, IGF-1R, IRR, PDGFRA, PDGFRB, CSF-1R, KIT/SCFR, FLK2/FLT3, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3, FGFR-4, ССК4, TRKA, TRKB, TRKC, MET, RON, ЕРНА1, ЕРНА2, ЕРНАЗ, ЕРНА4, ЕРНА5, ЕРНА6, ЕРНА7, ЕРНА8, ЕРНВ1, ЕРНВ2, ЕРНВЗ, ЕРНВ4, ЕРНВ5, ЕРНВ6, AXL, MER, TYR03, TIE, ТЕК, RYK, DDR1, DDR2, RET, ROS, LTK, ALK, ROR1, R0R2, MUSK, AATYK, AATYK2, AATYK3, RTK106, TNFR1, Fas, TRAILR1, TRAILR2, NGFR, DR3, DR6, EDAR, TNFR2, LTbR, OX40, CD40, CD27, CD30, 4-1BB, RANK, Fn14, TACI, BAFFR, HVEM, BCMA, GITR, TROY, RELT, XEDAR, TRAILR3, TRAILR4, OPG, DcR3, PD-1, CD80, CD86, ICOS-L, ICOS, CTLA-4, ВТ LA, CD160, LAG3 и TIM3.

[0351] Вариант реализации 9. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-8, при этом домен активации тирозинкиназы получен из или содержит полипептид белка, выбранного из группы, состоящей из: рецептора, содержащего общую гамма-цепь, рецептора, содержащего общую бета-цепь, рецептора IFN-альфа, рецептора IFN-гамма, рецептора IFN-лямбда, рецептора IL2/IL15, рецептора IL3, рецептора IL4, рецептора IL5, рецептора IL7, рецептора IL9, рецептора IL10, рецептора IL12, рецептора IL13, Рецептора IL20, рецептора IL21, рецептора IL22, рецептора IL23, рецептора IL27, рецептора TSLP, рецептора G-CSF, рецептора GM-CSF, рецептора CNTF, рецептора OSF, рецептора LIF, рецептора СТ-1, EGFR/HER1, ERBB2/HER2, ERBB3/HER3, ERRB4/HER4, INSR, IGF-1R, IRR, PDGFRA, PDGFRB, CSF-1 R, KIT/SCFR, FLK2/FLT3, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3, FGFR-4, ССК4, TRKA, TRKB, TRKC, MET, RON, ЕРНА1, ЕРНА2, ЕРНАЗ, ЕРНА4, ЕРНА5, ЕРНА6, ЕРНА7, ЕРНА8, ЕРНВ1, ЕРНВ2, ЕРНВЗ, ЕРНВ4, ЕРНВ5, ЕРНВ6, AXL, MER, TYR03, TIE, ТЕК, RYK, DDR1, DDR2, RET, ROS, LTK, ALK, ROR1, ROR2, MUSK, AATYK, AATYK2, AATYK3 и рецептора RTK106.

[0352] Вариант реализации 10. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-9, при этом эффекторный тирозиновый домен получен из или содержит полипептид белка, выбранного из группы, состоящей из: рецептора, содержащего общую гамма-цепь, рецептора, содержащего общую бета-цепь, рецептора IFN-альфа, рецептора IFN-гамма, рецептора IFN-лямбда, рецептора IL2/IL15, рецептора IL3, рецептора IL4, рецептора IL5, рецептора IL7, рецептора IL9, рецептора IL10, рецептора IL12, рецептора IL13, Рецептора IL20, рецептора IL21, рецептора IL22, рецептора IL23, рецептора IL27, рецептора TSLP, рецептора G-CSF, рецептора GM-CSF, рецептора CNTF, рецептора OSF, рецептора LIF, рецептора СТ-1, EGFR/HER1, ERBB2/HER2, ERBB3/HER3, ERRB4/HER4, INSR, IGF-1R, IRR, PDGFRA, PDGFRB, CSF-1 R, KIT/SCFR, FLK2/FLT3, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3, FGFR-4, CCK4, TRKA, TRKB, TRKC, MET, RON, EPHA1, EPHA2, ЕРНАЗ, EPHA4, EPHA5, EPHA6, EPHA7, EPHA8, EPHB1, EPHB2, ЕРНВЗ, EPHB4, EPHB5, EPHB6, AXL, MER, TYR03, TIE, ТЕК, RYK, DDR1, DDR2, RET, ROS, LTK, ALK, ROR1, ROR2, MUSK, AATYK, AATYK2, AATYK3, RTK106, ALX, BLNK, Grb7, Nsp, SLP-76, SOCS, TSAd, APS, Bam32, Crk, Gads, Grb2, Nek, SLAP, She, FRS2, Dab, Dok, IRS, eps8, AFAP110, Gab, ADAP, Carma1, Cas, CIN85, Кортактина, E3B1, Винексина, SKAP-55, BANK, BCAP, Dof, Паксиллина, LAT, LAX, LIME, NTAL, PAG, SIT и TRIM.

[0353] Вариант реализации 11. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-10, при этом домен димеризации расположен на N-конце индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0354] Вариант реализации 12. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-10, при этом домен димеризации расположен на С-конце индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0355] Вариант реализации 13. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-12, при этом индуцибельный химерный цитокиновый рецептор содержит трансмембранный домен.

[0356] Вариант реализации 14. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-13, при этом индуцибельный химерный цитокиновый рецептор содержит мембранно-направленный мотив.

[0357] Вариант реализации 15. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 14, при этом мембранно-направленный мотив содержит сигнальную последовательность CD8 или миристоил.

[0358] Вариант реализации 16. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-15, при этом рецептор является миристоилированным.

[0359] Вариант реализации 17. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 1, при этом домен димеризации содержит полипептид FKBP, домен активации тирозинкиназы содержит полипептид EpoR или TpoR, а эффекторный тирозиновый домен содержит полипептид рецептора IL7 (IL7R).

[0360] Вариант реализации 18. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 17, при этом эффекторный тирозиновый домен дополнительно содержит полипептид EGFR.

[0361] Вариант реализации 19. Индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по варианту реализации данного изобретения 17, при этом эффекторный тирозиновый домен содержит IL7R(316-459), IL12Rb2(775-825), и/или EGFR(1122-1165).

[0362] Вариант реализации 20. Полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-19.

[0363] Вариант реализации 21. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по варианту реализации данного изобретения 20.

[0364] Вариант реализации 22. Сконструированная иммунная клетка, содержащая индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1 -19 или полинуклеотид по варианту реализации данного изобретения 20.

[0365] Вариант реализации 23. Сконструированная иммунная клетка по варианту реализации данного изобретения 22, при этом клетка дополнительно содержит химерный антигенный рецептор (CAR) или полинуклеотид, кодирующий CAR.

[0366] Вариант реализации 24. Сконструированная иммунная клетка по варианту реализации данного изобретения 22 или 23, при этом иммунная клетка представляет собой Т-клетку.

[0367] Вариант реализации 25. Способ модуляции сконструированной иммунной клетки у субъекта, способ, включающий введение димерного лиганда субъекту, которому ранее была введена сконструированная иммунная клетка по любому из вариантов реализации данного изобретения 22-24, при этом димерный лиганд связывается с доменом димеризации индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0368] Вариант реализации 26. Способ по варианту реализации данного изобретения 25, в котором лиганд представляет собой АР1903.

[0369] Вариант реализации 27. Способ получения сконструированной иммунной клетки, способ, включающий введение полинуклеотида по варианту реализации данного изобретения 20 или вектора экспрессии по варианту реализации данного изобретения 21 в иммунную клетку.

[0370] Вариант реализации 28. Выделенная Т-клетка, содержащая

(i) индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, содержащий домен димеризации, домен активации тирозинкиназы и эффекторный тирозиновый домен тирозинкиназы; и

(ii) химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий внеклеточный лиганд-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен.

[0371] Вариант реализации 29. Выделенная Т-клетка по варианту реализации данного изобретения 28, при этом индуцибельный химерный цитокиновый рецептор представляет собой индуцибельный химерный цитокиновый рецептор по любому из вариантов реализации данного изобретения 1-19.

[0372] Вариант реализации 30. Выделенная Т-клетка по варианту реализации данного изобретения 28 или 29, при этом выделенная Т-клетка демонстрирует улучшенную устойчивость в условиях in vivo по сравнению с устойчивостью в условиях in vivo второй выделенной Т-клетки, при этом вторая выделенная Т-клетка содержит все компоненты выделенной Т-клетки, за исключением того, что она не содержит индуцибельный химерный цитокиновый рецептор.

[0373] Вариант реализации 31. Способ создания выделенной Т-клетки, при этом способ включает этапы:

(a) получение Т-клетки;

(b) модификация Т-клетки для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR), содержащего внеклеточный лиганд-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен; и

(c) модификация Т-клетки для экспрессии индуцибельного химерного цитокинового рецептора.

[0374] Вариант реализации 32. Способ по варианту реализации данного изобретения 31, в котором этап с) включает стабильное введение индуцибельного химерного цитокинового рецептора в клетке.

[0375] Вариант реализации 33. Способ по варианту реализации данного изобретения 31 или 32, в котором этап с) включает введение полинуклеотида, кодирующего индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, в клетку с помощью системы транспозон/транспозазы, системы переноса генов на основе вируса или электропорации.

[0376] Вариант реализации 34. Способ по любому варианту реализации данного изобретения 31-33, в котором этап b) включает введение полинуклеотида, кодирующего индуцибельный химерный антигенный рецептор, в клетку с помощью системы транспозон/транспозазы или системы переноса генов на основе вируса.

[0377] Вариант реализации 35. Способ по варианту реализации данного изобретения 34, в котором система переноса генов на основе вирусов содержит рекомбинантный ретровирус или лентивирус.

[0378] Вариант реализации 36. Способ по любому из вариантов реализации данного изобретения 31-35, в котором этап (b) выполняется перед этапом (с).

[0379] Вариант реализации 37. Способ по любому из вариантов реализации данного изобретения 31-35, в котором этап (с) выполняется перед этапом (b).

[0380] Вариант реализации 38. Фармацевтическая композиция, содержащая выделенную иммунную клетку по любому из вариантов реализации данного изобретения 28-30 для лечения заболевания.

[0381] Вариант реализации 39. Фармацевтическая композиция по варианту реализации данного изобретения 38, при этом заболевание представляет собой онкологическое заболевание, аутоиммунное заболевание или инфекцию.

[0382] Вариант реализации 40. Фармацевтическая композиция по варианту реализации данного изобретения 38 или 39, при этом клетки должны быть предоставлены более одного раза.

[0383] Вариант реализации 41. Фармацевтическая композиция по варианту реализации данного изобретения 40, при этом клетки должны быть предоставлены индивиду с интервалом, по меньшей мере, около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или более суток.

[0384] Вариант реализации 42. Фармацевтическая композиция по варианту реализации данного изобретения 41, при этом заболевание представляет собой вирусное заболевание, бактериальное заболевание, онкологическое заболевание, воспалительное заболевание, иммунное заболевание или заболевание, связанное со старением.

[0385] Вариант реализации 43. Способ лечения заболевания у субъекта, при этом способ включает введение субъекту выделенной Т-клетки по любому из вариантов реализации данного изобретения 28-30.

[0386] Вариант реализации 44. Способ по варианту реализации данного изобретения 43, в котором клетки предоставляются субъекту более одного раза.

[0387] Вариант реализации 45. Способ по варианту реализации данного изобретения 43 или 44, в котором субъект ранее лечился терапевтическим агентом перед введением выделенной Т-клетки.

[0388] Вариант реализации 46. Способ по варианту реализации данного изобретения 45, в котором терапевтический агент представляет собой антитело или химиотерапевтический агент.

[0389] Вариант реализации 47. Способ по любому из вариантов реализации данного изобретения 43-46, в котором заболевание представляет собой вирусное заболевание, бактериальное заболевание, онкологическое заболевание, воспалительное заболевание, иммунное заболевание или заболевание, связанное со старением.

[0390] Вариант реализации 48. Способ по варианту реализации данного изобретения 47, в котором онкологическое заболевание представляет собой гемобластоз или солидный рак.

[0391] Вариант реализации 49. Способ по варианту реализации данного изобретения 48, в котором гемобластоз выбран из острого лимфобластного лейкоза (ALL), острого миелоидного лейкоза (AML), хронического миелогенного лейкоза (CML), хронического эозинофильного лейкоза (CEL), миелодиспластического синдрома (MDS), неходжкинской лимфомы (NHL) или множественной миеломы (ММ).

[0392] Вариант реализации 50. Способ по варианту реализации данного изобретения 49, в котором солидный рак выбран из рака желчных путей, рака мочевого пузыря, карциномы костей и мягких тканей, рака головного мозга, рака груди, рака шейки матки, рака толстой кишки, колоректальной аденокарциномы, колоректального рака, десмоидной опухоли, эмбрионального рака, рака эндометрия, рака пищевода, рака желудка, аденокарциномы желудка, мультиформной глиобластомы, гинекологических раковых заболеваний, плоскоклеточного рака органов головы и шеи, рака печени, рака легких, злокачественной меланомы, остеосаркомы, рака яичников, рака поджелудочной железы, аденокарциномы протоков поджелудочной железы, первичной астроцитарной опухоли, первичного рака щитовидной железы, рака простаты, рака почек, почечно-клеточной карцинома, рабдомиосаркомы, рака кожи, саркомы мягких тканей, опухоли мужских половых клеток, уротелиального рака, саркомы матки или рака матки.

ПРИМЕРЫ

Пример 1А: Индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы

[0393] Цитокины, которые, как известно, повышают устойчивость и функцию Т-клеток, такие как IL-2, IL-7 и IL-15, передают сигнал через природные гетеродимерные цитокиновые рецепторы, которые, в свою очередь, активируют киназы JAK1 и JAK3 (иллюстративная активация JAK-киназ представлена на Фиг. 1). Были разработаны индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы (Фиг. 1) и продемонстрирована их эффективность в регулировании передачи цитокиновых сигналов в CAR-T-клетках (примеры приведены ниже). АР1903-индуцибельный химерный цитокиновый рецептор представляет собой АР1903-чувствительный слитый белок FKBP^F36V. Эндогенный FKBP связывает рапамицин, ингибируя mTOR (Фиг. 2А). FKBP^F36V связывается с рапамициноподобными соединениями (рапалогами) (Фиг. 2В). АР1903 представляет собой клинически безопасный димер рапалога, который димеризует FKBP^F36V (Фиг. 2С).

[0394] Из более чем сорока известных цитокиновых рецепторов, пять представляют собой гомодимеры. Эти пять гомодимеров соединяются с JAK2. JAK2 активируется как гомодимер. Один иллюстративный вариант реализации индуцибельного химерного цитокинового рецептора, предложенного в данном документе, представлен на Фиг. 3.

[0395] Чтобы применить АР1903 со множеством различных рецепторов, гетеродимерные цитокиновые рецепторы видоизменяют в гомодимеры.

[0396] В некоторых вариантах реализации данного изобретения FKBP расположен на N-конце индуцибельного химерного цитокинового рецептора. В других вариантах реализации данного изобретения FKBP расположен на С-конце индуцибельного химерного цитокинового рецептора. В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, имеет трансмембранный домен. В других вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, лишен трансмембранного домена. В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, является миристоилированным. В других вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, предложенный в данном документе, является не миристоилированным.

Пример 2: Сравнение низ ко молекулярных индуцибельных рецепторов Еро.

[0397] Данный пример иллюстрирует эффективность различных индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов, предложенных в данном документе.

[0398] В данном исследовании на активность проверяли следующие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы:

a. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-508;L241G,L242P)-V5 (SEQ ID NO: 1)

b. V5-EpoR(273-508)

c. V5-EpoR(273-508)-FKBP(F36V)

d. V5-EpoR(273-508)-FKBP(E31G,F36V,R71G,K105E)

e. MnpncTonn-V5-EpoR(273-508)-FKBP(F36V)

f. MnpncTonn-V5-EpoR(273-508)-FKBP(E31G,F36V,R71G,K105E)

g. V5-EpoR(273-508)-FKBP(F36V)-FKBP(F36V) (SEQ ID NO 2)

h. V5-EpoR(273-508)-FKBP(E31G,F36V,R71G,K105E)-FKBP(E31G,F36V,R71G,K105E) (SEQ ID NO: 3)

i. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-CD8(138-206)-EpoR(273-508)-V5

j. FKBP(F36V,L106P)-FKBP(F36V,L106P)-EpoR(273-508)-V5

k. FKBP(F36V,L106P)-EpoR(273-508)-V5

l. FKBP(F36V)-EpoR(273-508)-V5

m. FKBP(F36V)-FKBP(F36V)-EpoR(273-508)-V5

[0399] Согласно названию конструкции, рецепторы содержат мембранно-направленный мотив (сигнальная последовательность CD8 (CD8 SS) или миристоил), домен димеризации (FKBP (F36V) или его мутанты), часть EpoR, которая содержит трансмембранный домен (EpoR (237-272)), JAK2-связывающий мотив (EpoR (273-338)) и/или эффекторный тирозиновый домен (EpoR (339-508)). Конструкции могут также включать эпитопные метки (Мус или V5) для вестерн-блоттинга или проточного анализа.

[0400] Векторы, кодирующие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, трансфицировали в клетки НЕК293Т вместе с репортером люциферазы для фактора транскрипции STAT5 (Promega Е4651). Репортерный вектор состоит из люфицеразы светлячка, экспрессируемой под контролем чувствительного к STAT5 элемента ДНК. При добавлении эритропоэтина (Еро) рецептор эритропоэтина (EpoR) активирует киназу JAK2, которая затем фосфорилирует тирозины в цитоплазматическом хвосте EpoR, создавая сайты связывания для STAT5. Затем связанный STAT5 фосфорилируется, активируя STAT5, чтобы задействовать мотивы ДНК и вызвать транскрипцию. Еро добавляли к образцам с клетками, трансфицированными EpoR, и АР1903 добавляли к образцам с клетками, трансфицированными слияниями EpoR с FKBP. Ни Еро, ни АР1903 не добавляли к образцам для оценки исходных сигналов. Результаты анализа STAT5 обобщали на Фиг. 4. На Фиг. 4 «лиганд» представляет собой либо Еро, либо АР1903.

[0401] Передача сигнала CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-508;L241G,L242P)-V5, was the closest to the EpoR(1-508) была наиболее близкой к положительному контролю EpoR (1-508) (Фиг. 4).

[0402] Эти результаты демонстрируют, что некоторые АР1903-индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы могут эффективно передавать сигнал при димеризации с помощью АР1903 для активации репортера. Конструкция АР1903-индуцибельного химерного цитокинового рецептора CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-508;L241 G,L242P)-V5 продемонстрировала высокую активность.

Пример 3А: Химерные низкомолекулярные индуцибельные рецепторы Еро для генерации сигналов IL2, IL7, IL12, IL21 и IFNa/b.

[0403] Изменяя эффекторный тирозиновый домен (цитоплазматический хвост) химерного цитокинового рецептора (например, CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-Cytotail XYZ), рецептор может быть перенаправлен на передачу сигнала выбора. В исследуемых индуцибельных химерных цитокиновых рецепторах использовался мембранно-направленный мотив CD8 SS, домен димеризации FKBP (F36V), домен активации тирозинкиназы EpoR (237-338; L241G, L242P) и эффекторные тирозиновые домены из рецепторов EpoR, GHR, IL2Rb, IL7R, IL12Rb2, IL21R, IFNAR2 или IFNLR1. Отрицательный контроль, в котором отсутствуют МК2-связывающие мотивы и эффекторный тирозиновый хвост, включает CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-282;L241 G,L242P). В данном исследовании были протестированы следующие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы:

a. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-EpoR(339-508)-V5 (SEQ ID NO 1)

b. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-GHR(353-638) (SEQ ID NO 4)

c. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL2Rb(333-551) (SEQ ID NO 5)

d. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(316-459) (SEQ ID NO 6)

e. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL12Rb2(714-862) (SEQ ID NO 7)

f. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 8)

g. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL21 R(322-538) (SEQ ID NO 9)

h. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IFNAR2(310-515) (SEQ ID NO 410)

i. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IFNLR1 (300-520) (SEQ ID NO 11)

[0404] Клетки HEK293 транзиентно трансфицировали конструкциями, кодирующими указанные выше индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, и репортер люциферазы для указанного сигнального пути. Клетки подвергали воздействию лиганда в течение 24 часов. Обобщенные результаты представлены на Фиг. 5А. В данном исследовании «контрольный димеризатор» представляет собой конструкцию без цитоплазматического хвоста.

[0405] На Фиг. 5А, черные квадраты представляют индукцию >5 раз. Все эксперименты с STAT4 проводились с котрансфекцией STAT4.

Пример 3В: Интактный JAK-связывающий домен и фосфорилируемые тирозины в домене цитоплазматического хвоста необходимы для передачи сигналов

[0406] Чтобы идентифицировать компоненты, необходимые для передачи сигнала индуцибельным химерным цитокиновым рецептором, мы генерировали FKBP-переключатели, у которых отсутствовали JAK-связывающие домены или остатки тирозина в домене цитоплазматического хвоста. В частности, один или оба JAK-связывающих мотива из TpoR (478-582) были заменены глициновыми линкерами, или все или один (т.е. Y449) тирозиновый остаток(и) в цитоплазматическом хвосте IL7R (316-459) были изменены на фенилаланин. Термин «переключатель», используемый в разделе «Примеры», относится к индуцибельному химерному цитокиновому рецептору. Например, используемый в контексте данного документа термин «FKBP-переключатель» означает индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, содержащий FKBP в качестве домена димеризации.

[0407] Анализ репортерных клеток НЕК293Т использовали для проверки того, как каждый из этих доменов влияет на передачу цитокиновых сигналов. Вкратце, 20,000 клеток НЕК293Т помещали в каждую лунку 96-луночного планшета с плоским дном, покрытым поли-L-лизином, и оставляли для прикрепления на ночь. Химерный цитокиновый рецептор (2,5 нг), элемент ответа Stat, который управляет люциферазой светлячка (100 нг; Promega) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla (1 нг; Promega) были смешаны в конечном объеме 5 мкл в Opti-MEM (Gibco) («смесь ДНК»). 0,3 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 5 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 10 мкл добавляли в каждую лунку, содержащую НЕК-293Т. Через 24 часа после трансфекции клетки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию указанными концентрациями АР1903 (Apex Bio), разведенными в бессывороточной среде, и репортерная активность Stat определяли через 5 часов после воздействия с использованием системы люциферазного анализа «Dual-Glo» (Promega). FKBP-переключатель, несущий два интактных JAK-связывающих мотива из TpoR (478-582) и немутантный IL7R (316-459), использовали в качестве положительного контроля. В качестве отрицательного контроля (т.е. ложно трансфицированные) клетки трансфицировали всеми компонентами, за исключением химерного цитокинового рецептора. Кратность индукции репортерной активности Stat была нормализована относительно таковой для клеток НЕК293Т, трансфицированных всеми векторами, за исключением индуцибельного цитокинового рецептора, и которые не подвергались воздействию. Для каждого условия было использовано по три лунки.

[0408] На Фиг. 5В представлена репортерная активность Stat5 FKBP-переключателя без указанных доменов после воздействия АР1903. По сравнению с положительным контролем, удаление одного (т.е. Без JAK 2; IL7) или обоих (т.е. без JAK 1,2; IL7) JAK-связывающих мотивов аннулировало АР1903-индуцированную репортерную активность StatS. Подобным образом, мутация всех 3 остатков тирозина в цитоплазматическом хвосте IL7R (317-459) в фенилаланин аннулировала АР1903-индуцированную репортерную активность StatS. В данном примере Y499 в цитоплазматическом хвосте IL7R (317-459) был идентифицирован как ключевой остаток тирозина, опосредовавший активацию StatS.

Пример 4: Мышиные рецепторы для сингенных исследований

[0409] Были созданы мышиные версии сконструированных индуцибельных рецепторов. Поскольку FKBP является высококонсервативным, последовательность FKBP (F36V) не изменилась. Однако использовали трансмембранные и JAK2-связывающие части EpoR мыши и эффекторные тирозиновые домены рецепторов IL2Rb и IL7R мыши. В данном исследовании были протестированы следующие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы:

a. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-muEpoR(236-337;L264G,L265P)-mulL2Rb(337-539) (SEQ ID NO 12)

b. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-muEpoR(236-337;L264G,L265P)-mulL7R(316-459) (SEQ ID NO 13)

[0410] Векторы, кодирующие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, трансфицировали в клетки НЕК293Т вместе с репортером люциферазы для STAT5, и добавляли димеризатор для указанного сигнального пути. Обобщенные результаты представлены на Фиг. 6.

[0411] Мышиные конструкции были способны передавать сигнал (6 ч воздействия лигандов на транзиентно трансфицированные клетки НЕК293) (Фиг. 6).

Пример 5А: Индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы с улучшенной передачей сигналов

[0412] В другом исследовании часть EpoR предыдущей конструкции (FKBP-EpoRm TM-EpoR JAK блок-цитоплазматический хвост) была заменена сопоставимыми доменами других гомодимерных цитокиновых рецепторов. Чтобы идентифицировать трансмембранные домены, которые демонстрируют более сильную и/или более быструю передачу сигналов, была выбран ранний контрольный момент времени, когда димеризатор EpoR слабо передает сигнал (6-8 ч, правое изображение).

[0413] Для данного исследования сравнивали несколько доменов активации тирозинкиназы с использованием в остальном идентичной конструкции индуцибельного цитокинового рецептора. Эффекторный тирозиновый домен состоит из STAT5-активирующей последовательности из IL7R, слитой с STAT4-активирующей последовательностью из IL12Rb2. Каждая конструкция содержит мембранно-направленный мотив (CD8 SS), домен димеризации (FKBP (F36V)), домен активации тирозинкиназы, полученный из рецепторов EpoR, GP130, PrIR, GHR, GCSFR или TPOR/MPLR, а также эффекторный тирозиновый домен, состоящий из цитоплазматического хвоста IL7R (316-459), слитого с пептидом IL12Rb2 (775-825). Химерные цитокиновые рецепторы также включают эпитопную метку для обнаружения (Мус). В данном исследовании были протестированы следующие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы:

a. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 14)

b. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-GP130(609-700)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 15)

c. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-PrlR(221-319)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 16)

d. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-GHR(251-352)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 17)

e. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-GCSFR(614-710)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 18)

f. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-TPOR/MPLR(478-582)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 19)

[0414] Клетки HEK293 трансфицировали конструкциями, кодирующими указанные выше индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы и репортер люциферазы для STAT4 или STAT5. Репортеры люциферазы (Promega) кодировали люциферазу под контролем либо STAT4-, либо STAT5-чувствительного элемента. Поскольку в клетках НЕК293 отсутствует STAT4, в лунки, трансфицированные репортером STAT4, также была добавлена плазмида, кодирующая конститутивно-экспрессируемый STAT4. Трансфицированный EpoR, GHR и IL12Rb1+IL12Rb2 (рецептор IL12) использовали в качестве положительного контроля. Обобщенные результаты представлены на Фиг. 7, 8, 9 и 10А. Лиганд, добавленный к индуцибельным химерным цитокиновым рецепторам, представлял собой АР1903. Еро добавляли к клеткам, трансфицированным EpoR, Гормон Роста к клеткам, трансфицированным GHR, и IL-12 к клеткам, трансфицированным рецептором IL12.

[0415] Домен активации тирозинкиназы с компонентами EpoR, был самой слабой сигнальной конструкцией (Фиг. 7). Наибольшая кратность индукции как STAT5, так и STAT4 была достигнута с помощью димеризатора на основе TPOR/MPLR: CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-TPOR/MPLR(478-582)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 19) (Фиг. 7).

[0416] Цитокиновый рецептор на основе EpoR (CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 14)) продемонстрировал самую низкую базальную передачу сигналов (по существу эквивалентна одному репортеру). Конструкция GCSFR(CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-GCSFR(614-710)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) (SEQ ID NO 18)) имела самую сильную передачу сигналов для STAT4 (Фиг. 9), но имела базальную передачу сигналов.

Пример 5В: Оптимизация эффективности передачи выходного сигнала путем модуляции аффинности эктодомена

[0417] Чтобы определить, можно ли настраивать реактивность/чувствительность индуцибельного химерного цитокинового рецептора путем модуляции аффинности эктодомена к его лиганду, мы создали FKBP-переключатели, которые передавали сигналы через те же JAK-связывающие домены и цитоплазматические хвосты, но с вариантами эктодомена FKBP, которые имели сниженную аффинность к АР1903.

[0418] Анализ по гену-репортеру клеток НЕК293Т использовали для проверки того, как каждый из этих доменов влияет на передачу цитокиновых сигналов. Вкратце, 20,000 клеток НЕК293Т помещали в каждую лунку 96-луночного планшета с плоским дном, покрытым поли-L-лизином, и оставляли для прикрепления на ночь. Химерный цитокиновый рецептор (2,5 нг), элемент ответа Stat, который управляет люциферазой светлячка (100 нг; Promega) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla (1 нг; Promega) были смешаны в конечном объеме 5 мкл в Opti-MEM (Gibco) («смесь ДНК»). 0,3 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 5 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 10 мкл добавляли в каждую лунку, содержащую НЕК-293Т. Через 24 часа после трансфекции клетки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию указанными концентрациями АР1903 (Apex Bio), разведенными в бессывороточной среде, и репортерная активность Stat определяли через 5 часов после воздействия с использованием системы люциферазного анализа «Dual-Glo» (Promega). Кратность индукции репортерной активности Stat была нормализована относительно таковой для клеток НЕК293Т, трансфицированных всеми векторами, за исключением индуцибельного цитокинового рецептора, и которые не подвергались воздействию. Для каждого условия было использовано по три лунки.

[0419] На Фиг. 10В представлена репортерная активность Stat5 вариантов эктодомена FKBP в ответ на АР1903. По сравнению с высокоаффинными мутантами FKBP (F36V) другие варианты FKBP, которые ослабляли аффинность FKBP КАР1903, также увеличивали ЕС50 для индукции Stat5.

Пример 5С: Альтернативный подход к конструированию химерных цитокиновых рецепторов с улучшенными возможностями передачи сигнала

[0420] Традиционные подходы к созданию химерных цитокиновых рецепторов включают слияние внеклеточного лиганд-связывающего домена одного рецептора с трансмембранным и внутриклеточным сигнальным доменами второго рецептора (Mol Ther. 2014 Jun; 22(6):1211-1220; Mol Ther. 2017 Jan 4; 25(1): 249-258; Nat Commun. 2018 May 23;9(1):2034.). Мы разработали альтернативный подход, в котором мы задействуем трансмембранные и JAK-связывающие домены, полученные из некоторых цитокиновых рецепторов, которые (i) передают сигнал как гомодимеры в их естественной форме и (ii) сохраняют способность передавать сигналы, как химера, при соединении с разными эктодоменами (т.е. те, что описаны на Фиг. 7). В нашем подходе трансмембранный и внутриклеточный JAK-связывающий домен одного рецептора сливается с «цитохвостом» (т.е. областью после JAK-связывающего домена) второго рецептора.

[0421] На Фиг. 7 ТМ- и JAK-связывающий домен TpoR генерировал самый сильный выходной сигнал «сигнал к шуму». Таким образом, мы создали химеры цитокиновых рецепторов на основе TpoR, используя традиционный подход путем слияния внеклеточного домена TpoR (TpoR/MPLR (1-478)) с трансмембранным и внутриклеточным доменом другого цитокинового рецептора. Мы также создали аналогичные химеры, используя наш подход, путем слияния области, включающей трансмембранный и JAK2-связывающие домены TpoR (т.е. TpoR (478-582)), перед слиянием с цитоплазматическими хвостами другого цитокинового рецептора. В качестве положительного контроля мы использовали вектор, кодирующий полноразмерный (ПР) TpoR.

[0422] Анализ по гену-репортеру клеток НЕК293Т использовали для проверки индуцибельности и величины передачи цитокиновых сигналов. Вкратце, 20,000 клеток НЕК293Т помещали в каждую лунку 96-луночного планшета с плоским дном, покрытым поли-L-лизином, и оставляли для прикрепления на ночь. Химерный цитокиновый рецептор (2,5 нг), элемент ответа Stat, который управляет люциферазой светлячка (100 нг; Promega) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla (1 нг; Promega) были смешаны в конечном объеме 5 мкл в Opti-MEM (Gibco) («смесь ДНК»). 0,3 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 5 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 10 мкл добавляли в каждую лунку, содержащую НЕК-293Т. Через 24 часа после трансфекции клетки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию 100 нг/мл ТРО или 10 мкг/мл АР1903 (Apex Bio), разведенными в бессывороточной среде. Кратность индукции репортерной активности Stat была нормализована относительно таковой для клеток НЕК293Т, трансфицированных всеми векторами, за исключением индуцибельного цитокинового рецептора, и которые не подвергались воздействию. Для каждого условия было использовано по три лунки.

[0423] На Фиг. 10С и 10D представлено схематическое сравнение и противопоставление традиционного и нашего подхода конструирования химерных цитокиновых рецепторов. В то время как традиционный подход (Фиг. 10С) подразумевает слияние только эктодомена Рецептора А с трансмембранным доменом, JAK-связывающим доменом и цитоплазматическим хвостом Рецептора В, наш подход (Фиг. 10D) подразумевает слияние эктодомена, трансмембранного домена и JAK-связывающего домена Рецептора А с цитоплазматическим хвостом Рецептора В.

[0424] На Фиг. 10Е изображена схема химерных рецепторов, испытанных на Фиг. 10F.

[0425] На Фиг. 10F изображена тепловая карта, обобщающая результаты анализа репортера Stat. В каждой строке представлен соответствующего партнера по слиянию; в каждом столбце представлен соответствующий Stat-чувствительный репортер люциферазы светлячка. Каждый прямоугольник отображает кратность индукции, каждый столбец нормализован относительно максимальной кратности индукции соответствующего репортера Stat: 2,75 раза для STAT1, 13,5 раза для STAT1/2, 354 раз для STAT3, 38 раз для STAT4, 173 раз для STAT5 и 10,5 раза для STAT6. По сравнению с химерными цитокиновыми рецепторами, основанными на традиционной схеме, те рецепторы, которые были разработаны с использованием нашего подхода, продемонстрировали большую величину нисходящей передачи сигналов в ответ на индуктор АР1903.

Пример 6: Индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы

[0426] Данный пример иллюстрирует индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы с улучшенными и специализированными функциями.

[0427] В некоторых вариантах реализации данного изобретения цитокиновые хвосты могут быть связаны в тандеме для стимуляции множества путей передачи сигналов (например, слияние фрагментов IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825) для обеспечения устойчивости сигнального пути STAT5 и провоспалительной передачи сигнала STAT4). То есть в данном варианте реализации изобретения использовались цитокиновые хвосты, по меньшей мере, от двух рецепторов. В некоторых других вариантах реализации данного изобретения использовали цитокиновый хвост от одного рецептора.

Минимальные эффекторные тирозиновые домены с выходами сигналами STAT5 или АР-1

[0428] В каждом цитоплазматическом хвосте малые тирозиновые пептиды ответственны за обеспечение сигнального пути. Соответствующие мотивы были идентифицированы для разработки существенно меньших конструкций с улучшенной передачей сигналов. Например, пептид IL12Rb2(775-825), содержащий Y800, был определен как достаточный для обеспечения передачи сигнала STAT4 при использовании в качестве эффекторного тирозинового домена (см. Примеры 3 и 5).

[0429] В данном исследовании цитоплазматические хвосты IL2Rb, IL7R и EGFR были проанализированы для идентификации тирозинов, достаточных для ключевых аспектов передачи сигналов. Например, сегмент IL2Rb, содержащий STAT5-взаимодействующие тирозины Y418 и Y436, может сохранять передачу сигналов STAT5, но может терять передачу сигналов PI3K, поскольку для этого требуется Y364 цитоплазматического хвоста IL2Rb. Индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, содержащие хвосты IL7R, IL2Rb и IFNAR2, могут включать один или более тирозиновых мотивов внутри цитоплазматических хвостов. Удаление одной или более частей хвоста (например, хвоста IL12Rb2) в некоторых случаях приводит к удалению негативных регуляторных мотивов и усилению передачи сигналов.

[0430] В данном исследовании была исследована передача сигналов различными фрагментами, полученными из IL7Ra и IL2Rb, с использованием домена активации тирозинкиназы на основе EpoR. В данном исследовании были протестированы следующие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы:

a. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(316-459) (SEQ ID NO 6)

b. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(376-416) (SEQ ID NO 20)

c. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL7R(424-459) (SEQ ID NO 21)

d. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(376-416,424-459) (SEQ ID NO 22)

e. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(424-459;Y456F) (SEQ ID NO 23)

f. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(376-416,424-459;Y456F) (SEQ ID NO 24)

g. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL2Rb(333-551) (SEQ ID NO 5)

h. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL2Rb(393-433) (SEQ ID NO 25)

i. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL2Rb(518-551) (SEQ ID NO 26)

j. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL2Rb(339-379,393-433) (SEQ ID NO 27)

k. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL2Rb(339-379,518-551) (SEQ ID NO 28)

l. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL2Rb(393-433,518-551) (SEQ ID NO 29)

m. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL2Rb(339-379,393-433,518-551) (SEQ ID NO 30)

[0431] Были исследованы конструкции IFNAR2, но они не инициировали существенных сигналов при коротком (8 часов) воздействии АР1903 с использованием мамбранно-направленного мотива CD8 SS, домена димеризации FKBP (F36V) и домена активации тирозинкиназы EpoR (237-339;L241 G,L242P). Конструкции, представленные на графике, включают эффекторные тирозиновые домены, полученные из цитоплазматических хвостов IL7R и IL2Rb.

[0432] Передача сигналов IL7 через STAT5 была полностью воссоздана двумя фрагментами, содержащими Y401 и Y449, но без отрицательного регуляторного Y456 (IL7R (376-416,424-459; Y456F); SEQ ID NO: 24; Фиг. 11). Передача сигналов IL2 STAT5 была воссоздана двумя фрагментами, содержащими Y364, Y418 и Y436, но гораздо большая передача сигналов наблюдалась с меньшей конструкцией, лишенной Y364, (IL2Rb (393-433,518-551); SEQ ID NO: 29; Фиг. 11). Сообщается, что Y364 активирует PI3K, который способствует дифференциации и пролиферации Т-клеток и реорганизует актиновый скелет, способствуя интернализации рецептора. Таким образом, Y364 является одновременно отрицательным регуляторным мотивом для передачи сигналов STAT5 и ключевым положительным регуляторным мотивом для оси PI3K/AKT/TORC. Y364 может быть включен или исключен в зависимости от желаемого функционального выходного сигнала.

Нецитокиновые рецепторы

[0433] После активации TCR мобилизация Са+ приводит к активации NFAT и активации провоспалительных мишеней (IL2, GzmB и т.д.). Многие из этих промоторов активируются не одним NFAT, а скорее гетеротримером NFAT с АР-1 (суперспиралью Fos и Jun) (Фиг. 12). Истощение происходит при чрезмерной стимуляции антигеном и, как предполагается, происходит, когда количество активированного NFAT превышает количество АР-1, что приводит к гомодимерам NFAT и активации различных промоторов. Одним из способов предотвращения истощения является увеличение количества АР-1 (Fos/Jun) (Фиг. 13). Цитокиновые рецепторы, такие как IL2R и IL7R, активируют JNK (Jun-киназы), которые фосфорилируют и активируют c-Jun. Однако одного этого недостаточно для активации АР-1, поскольку Fos также должен быть активирован и фосфорилирован. Параллельный путь MEK/ERK приводит к усилению регуляции Fos через Мус/Max, а также к прямому фосфорилированию Fos.

[0434] АР-1 индуцируется скоординированной передачей сигналов JNK и ERK. В некоторых вариантах реализации изобретения, в данном документе предложены индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, способные активировать JNK и/или MEK/ERK. В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор может сильно индуцировать АР-1 для предотвращения истощения.

[0435] Конструкции, кодирующие следующие индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, тестировали на активность. Каждая конструкция содержит мембранно-направленный мотив (CD8 SS), домен димеризации (FKBP(F36V)), домен активации тирозинкиназы (EpoR (237-338;L241 G.L242P)) и эффекторный тирозиновый домен, полученный из цитоплазматического хвоста RTK EGFR или цитокинового рецептора. Химерные цитокиновые рецепторы также включают эпитопную метку для обнаружения (Мус):

a. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-EGFR(955-1186) (SEQ ID NO 31)

b. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(955-1044,1058-1186;Y974F) (SEQ ID NO 32)

c. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(955-1009;Y974F) (SEQ ID NO 33)

d.

e. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1019-1085) (SEQ ID NO 34)

f. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1037-1044,1058-1103;Y1068/1101 F) (SEQ ID NO 35)

g. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1066-1118;Y1068/1086F) (SEQ ID NO 36)

h. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1122-1165) (SEQ ID NO 37)

i. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1133-1186;Y1148F) (SEQ ID NO 38)

j. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL2Rb(333-551) (SEQ ID NO 5)

k. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(316-459) (SEQ ID NO 6)

l. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-IL12Rb2(714-862) (SEQ ID NO 7)

m. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL21 R(322-538) (SEQ ID NO 9)

n. CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IFNAR2(310-515) (SEQ ID NO 410)

[0436] Клетки HEK293 транзиентно трансфицировали указанными выше конструкциями репортера люциферазы для указанного пути. Была измерена передача сигналов STAT5. Обобщенные результаты представлены на Фиг. 14. Лигандом для всех химерных антигенных рецепторов является АР1903. Самые темные квадраты представляют индукцию >10 раз. Лиганд FLT добавляли к трансфицированному тирозинкиназному рецептору Flt3. Трансфицированный рецептор Flt3 использовали в качестве контроля вместо EGFR, поскольку клетки НЕК293 экспрессируют эндогенный рецептор EGFR.

Рецепторы, активирующие PLC-> NFkB

[0437] Одним из недостатков аллогенных CAR-T-клеток является то, что нокаут или нокдаун ТКР (для предотвращения GvHD) приводит к потере базальной передачи сигналов ТКР. Базальная передача сигналов ТКР увеличивает устойчивость ТКР. Хотя цитокины могут увеличивать устойчивость посредством STAT5, это не воспроизводит ТКР точно. ТКР мобилизует Са²⁺ для активации PLC, что приводит к NFAT и NFkB.

[0438] Предложенные в данном документе низкомолекулярные химерные цитокиновые рецепторы были сконструированы для мобилизации кальция и активации NFATn NFkB.

[0439] В-клеточный рецептор активирует тирозинкиназу Брутона (ВТК), которая затем активирует PLCy2->PKC->NFAT и NFkB. В этом контексте ВТК распознает мишени через тирозины на адаптерном белке тирозинкиназы BLNK (Фиг. 15).

[0440] Были созданы (SEQ ID NOS: 39, 40 и 41) индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы, содержащие слияние BLNK с доменом активации тирозинкиназы, заменяющим эндогенную BLNK-фосфорилирующую киназу ВТК (например, "CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241 G,L242P)-XYZ Цитоплазматический хвост") В некоторых вариантах реализации данного изобретения индуцибельный химерный цитокиновый рецептор содержит тандемные эффекторные тирозиновые домены, такие как цитоплазматический хвост цитокинового рецептора и адаптерный белок тирозинкиназы.

Пример 7: Влияние димеризации индуцибельных химерных цитокиновых рецепторов на устойчивость CAR-T-клеток по сравнению с GoCART

[0441] В данном исследовании были созданы лентивирусные (pLVX) конструкции, содержащие промотор SFFV, за которым следует последовательность kozak, индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, последовательность Т2А и химерный антигенный рецептор. Химерный антигенный рецептор был направлен на клетки, экспрессирующие EGFRvIII. Для сравнения использовали лентивирусные конструкции либо с TagBFP, либо с GoCART вместо индуцибельного химерного цитокинового рецептора. GoCART состоит из последовательности миристоилирования, за которой следует часть MyD88 и CD40, слитых с двумя повторами FKBP (F36V).

[0442] CD3 + Т-клетки выделяли из мононуклеарных клеток периферической крови человека и культивировали с IL-2. Через 2 дня после выделения Т-клетки трансдуцировали с использованием лентивируса, а через 3 дня отсортировывали на FACS путем связывания АРС-меченного EGFRvIII. Отсортированные клетки EGFRvIII+культивировали до 14 сутокпосле выделения.

[0443] На 14 день 0.5е6 клеток ресуспендировали в 24-луночном планшете и выращивали либо с, либо без воздействия IL2, АР1903 в течение 8 сутокпосле продуцирования цитокинов. Обобщенные результаты подсчета живых клеток представлены на Фиг. 16 и Фиг. 17.

[0444] Несколько конструкций, содержащих АР1903-индуцибельные рецепторы, способствовали слабому росту (например, CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338; L241G, L242P)-IL2Rb(333-551) (SEQ ID NO 5) и GoCART (ранее описанный мультимеризатор, миристоил-Myd88-CD40-FKBP(F36V)x2, но только CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338; L241G, L242P)-IL7R(316-469) (SEQ NO 6) способствовал устойчивому росту (Фиг. 16). Рецептор, содержащий цитоплазматический хвост IL7R (316-469) и хвосты GoCART сохраняют более высокую жизнеспособность с АР1903, сопоставимую с жизнеспособностью при воздействии IL2 (Фиг. 17).

[0445] На 8 день после роста с АР1903 или IL2 клетки фенотипировали. Обобщенные результаты представлены на Фиг. 18 и Фиг. 19. Индуцибельный рецептор, содержащий IL7R (316-469), демонстрирует наличие у большего количества стволовых клеток памяти, тогда как GoCART демонстрирует наличие у меньшего количества стволовых клеток памяти и большего количества эффекторных клеток памяти. Жизнеспособность всех клеток оказалась сопоставимой при дальнейшем росте с IL2; однако GoCART выглядели несколько более дифференцированными. Результаты демонстрируют, что низкомолекулярный индуцибельный рецептор IL7R (316-469) способствует пролиферации, сохраняя при этом менее дифференцированное состояние.

[0446] Цитокины измеряли на 2 и 8 день. Данные АР1903 представлены на Фиг. 20 и Фиг. 21. Все значения были нормализованы относительно CAR-Т-клеток, экспрессирующих TagBFP, которые не подвергали воздействию. Поскольку GoCART активирует путь NFkB, это приводит к устойчивому высвобождению цитокинов, тогда как другие этого не делают. IFN-связанные хвосты действительно вызывают высвобождение некоторого количества цитокинов.

[0447] Без передачи сигналов все конструкции обеспечивают сравнимый рост (~ удвоение за неделю), с некоторым меньшим ростом клеток, содержащих индуцибельные химерные цитокиновые рецепторы с хвостом IFNAR2 (Фиг. 22).

[0448] Индукцию цитокинов измеряли на 2-й и 8-й день после продуцирования цитокинов без какого-либо воздействия. Обобщенные результаты представлены на Фиг. 23 и Фиг. 24. CAR-T-клетки, экспрессирующие низкомолекулярную индуцибельную конструкцию IFNAR2 (310-515), конститутивно высвобождают небольшие количества IL5, в то время как CAR-T-клетки, экспрессирующие низкомолекулярную индуцибельную конструкцию IL2Rb (333-551), высвобождают IL13 и некоторое количество TNFa (день 2, Фиг. 23), при этом данное высвобождение уменьшается к 8-му дню (день 8, Фиг. 24). GoCART-клетки экспрессируют GM-CSF, IL5, IL13, IL22 и MIP1a на 2-й день и даже больше в контрольные временные точки 8-го дня. Результаты демонстрируют, что хвосты IFNAR2 (310-515) и IL2Rb (333-551) умеренно автоактивируются, в то время как GoCART интенсивно автоактивируются. Не наблюдалось высвобождения цитокинов из конструкции хвоста IL7R (316-459), и минимальное высвобождение цитокинов наблюдалось для всех конструкций индуцибельного химерного цитокинового рецептора при отсутствии активации малых молекул.

[0449] На Фиг. 25 представлен график, обобщающий подсчет CAR-T-клеток на 5-й и 8-й день после продуцирования для CAR-T-клеток, трансдуцированных индуцибельными химерными цитокиновыми рецепторами, имеющими разные хвосты, GoCART, индуцибельный цитокиновый рецептор без JAK2 связывающего мотива или тирозинового эффекторного домена (CD8 SS-Myc-FKBP (F36V)- EpoR(237-282; L241G, L242P) или TagBFP. Наименьший рост наблюдался для хвоста IFNAR2; из измерений количества цитокинов на 8-й день было замечено, что эти CAR-T-клетки не потребляли столько IL-2.

[0450] Предложенный в данном документе АР1903-индуцибельный цитокиновый рецептор представляет собой надежную платформу для инициирования передачи сигналов на основе IFN, IL2, IL7, IL12, IL21, EGFR и других тирозинкиназ в CAR-T-клетках. EpoR привлекает киназу, которая активируется при гомодимеризации (JAK2), и фосфорилирует сигнальные эффекторы, полностью зависящие от прикрепленного цитоплазматического хвоста. В зависимости от желаемой функции в CAR-T-клетке сконструированные цитоплазматические хвосты (например, цитоплазматический хвост IL7, слитый с IL12Rb2 (775-825) или части цитоплазматического хвоста EGFR) могут быть использованы для достижения желаемого эффекта. Силу сигнала системы также можно регулировать, используя различные домены активации тирозинкиназы. Например, силу сигнала можно регулировать с использованием доменов активации тирозинкиназы, содержащих различные трансмембранные варианты, как описано в данном документе.

[0451] Тирозиновый эффекторный домен IL7 (316-450) обеспечивает передачу сигналов STAT5 с минимальным PI3K, которого достаточно для стимулирования роста без стимуляции дифференциации или высвобождения цитокинов. Кроме того, хвост IL7 также меньше поглощается клеткой и деградирует.

Пример 8: Конструирование индуцибельных цитокиновых рецепторов со множественными выходными сигналами

[0452] Анализ по гену-репортеру клеток HEK293T использовали для проверки индуцибельности и величины передачи цитокиновых сигналов. Вкратце, 20,000 клеток HEK293T помещали в каждую лунку 96-луночного планшета с плоским дном, покрытым поли-L-лизином, и оставляли для прикрепления на ночь. Индуцибельный цитокиновый рецептор (2,5 нг), элемент ответа Stat, который управляет люциферазой светлячка (100 нг; Promega) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla (1 нг; Promega) были смешаны в конечном объеме 5 мкл в Opti-MEM (Gibco) («смесь ДНК»). 0,3 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 5 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 10 мкл добавляли в каждую лунку, содержащую HEK-293Т. Через 24 часа после трансфекции клетки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию 1 мкг/мл АР1903 (Apex Bio), разведенным в бессывороточной среде. Кратность индукции репортерной ативности Stat5 была нормализована относительно таковой для клеток HEK293T, трансфицированных всеми векторами, за исключением индуцибельного цитокинового рецептора, и которые не подвергались воздействию.

[0453] На Фиг. 26 изображен схематический пример индуцибельных цитокиновых рецепторов с двойным выходным сигналом IL-7R и IL-21R. Поскольку цитокины часто обладают синергетическим действием на усиление Т-клеточных ответов (например, IL-7 с IL-21; IL-2 с IL-21), способность имитировать множественные выходные сигналы цитокинов может быть полезной. Для генерации множественных выходных сигналов цитокинов два цитоплазматических хвоста были соединены в тандеме на внутриклеточном С-конце химерного рецептора.

[0454] При генерировании множественных выходных сигналов близость отдельных цитоплазматических хвостов к клеточной мембране может влиять на силу передачи их соответствующих выходных сигналов. В Таблице 5 ниже представлены примеры индуцибельных цитокиновых рецепторов с двойными выходными сигналами, где каждый выходной сигнал был размещен проксимально или дистально по отношению к клеточной мембране.

[0455] На Фиг. 27 представлены результаты люциферазного анализа для определения репортерной активности Stat в клетках HEK293T. Мембранно-дистальное расположение цитоплазматического хвоста IL-21R привело к большей репортерной активности Stat5 (Фиг. 27а) и Stat3 (Фиг. 27b). Следовательно, максимальная сила передачи сигналов различных цитоплазматических хвостов может дополнительно регулироваться их относительным расположением на клеточной мембране.

[0456] Чтобы оценить эти индуцибельные цитокиновые рецепторы с двойным выходным сигналом в контексте первичных CAR Т-клеток человека, индуцибельные цитокиновые рецепторы были клонированы в лентивирусный вектор, кодирующий EGFRvIII-специфический CAR (2173 scFv; описанный в Sci Transl Med. 2015 Feb 18; 7(275): 275ra22.), чтобы обеспечить стехиометрическую коэкспрессию. Чтобы облегчить обнаружение трансдуцированных клеток, эпитопная метка v5 (KPIPNPLLGLDST) была вставлена между scFv и шарнирным доменом CD8. Чтобы получить лентивирус, кодирующий FKBP-переключатель CAR, клетки HEK293T высевали из расчета 0,45 миллиона клеток на мл в 2 мл DMEM (Gibco) с добавлением 10% FBS (Hyclone) на лунку 6-луночного планшета в День -1. В День 0 лентивирус получали путем смешивания 1,5 мкг лентивирусных упаковочных векторов psPAX2, 0,5 мкг pMD2G и 0,5 мкг соответствующего вектора для переноса CAR в 250 мкл Opti-MEM (Gibco) на лунку 6-луночного планшета («ДНК смесь»). 10 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 250 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 500 мкл медленно добавляли по бокам лунок, содержащих HEK293T. В День 0 очищенные Т-клетки активировали в среде X-Vivo-15 (Lonza) с добавлением 100 МЕ/мл IL-2 человека (Miltenyi Biotec), 10% FBS (Hyclone) и T TransAct человека (Miltenyi Biotec, № по каталогу 130-111-160, разведение 1:100) в планшете Grex-24 (Wilson Wolf, №по каталогу 80192М). В День 1 среду из каждой лунки с клетками HEK293T в 6-луночном планшете заменяли 2 мл на лунку среды для трансдукции Т-клеток, т.е. X-Vivo-15 с добавлением 10% FBS. В День 2 Т-клетки ресуспендировали в количестве 0,5 миллиона клеток на мл в 1 мл среды для трансдукции Т-клеток на лунку планшета Grex-24. Лентивирусные супернатанты из клеток HEK293T собирали и пропускали через фильтр 0,45 микрон (EMD Millipore) для удаления клеточного дебриса, а затем добавляли к Т-клеткам вместе со 100 МЕ/мл IL-2 человека. В День 5 в каждую лунку планшета Grex-24 добавляли 4,5 мл среды для размножения Т-клеток, то есть X-Vivo-15 с добавлением 5% сыворотки АВ человека (Gemini Bio) и 100 МЕ/мл IL-2 человека. При необходимости клетки размножали в более крупных сосудах G-Rex (Wilson Wolf), используя среду для размножения Т-клеток. В День 13 или День 14 определяли эффективность трансдукции путем определения процента Т-клеток, которые связывались с FITC-конъюгированным моноклональным антителом к метке v5 (Thermo Fisher), с помощью проточной цитометрии. В День 14 или День 15 продукты CAR-T клеток криоконсервировали и размораживали по мере необходимости для дальнейших анализов.

[0457] Для определения процента Т-клеток, которые были успешно трансдуцированы, Т-клетки сначала инкубировали с FITC-конъюгированным моноклональным антителом к метке v5 (Thermo Fisher) в PBS+1% BSA в течение 20 минут при 4°С. Затем клетки промывали PBS+1% BSA и анализировали с помощью проточной цитометрии.

[0458] На Фиг. 28А изображена схема вектора FKBP-переключателя CAR, содержащего цитоплазматические хвосты, указанные на Фиг. 28В и 28С.

[0459] На Фиг. 28В показана эффективность трансдукции CAR-T-клеток с FKBP-переключателем, определенная путем окрашивания по метке v5.

[0460] Для определения индуцибельности и интенсивности передачи цитокиновых сигналов в FKBP-переключателе CAR-T-клеток, размороженный продукт CAR-T-клеток подвергали нехватке сыворотки в 100 мкл бессывороточной среде RPMI (Corning) в течение 4 часов во влажной камере при 37°С с 5% CO2, а затем подвергали воздействию 1 мкг/мл АР1903 в течение 1 часа. Через 40 минут после воздействия АР1903 смесь антител, содержащую BUV395-конъюгированное антитело против CD3 человека (Biolegend) и FITC-конъюгированное моноклональное антитело к метке v5 (Thermo Fisher), добавляли к клеткам и продолжали инкубацию в течение последних 20 минут. После 1 часа воздействия АР1903 клетки фиксировали добавлением 35 мкл 16% параформальдегида к каждым 100 мкл образца и продолжали инкубацию в течение 15 минут при 37°С. Затем клетки трижды промывали PBS и пермеабилизировали в 100% холодном метаноле в течение 1 или 2 ночей при -20°С. В день FACS-анализа клетки трижды промывали PBS, блокировали Fc и окрашивали с использованием AlexaFluor647-конъюгированного антитела против Stat5 (pY694) мыши/человека (BD Biosciences), разведенным в PBS+1% BSA. После 1 часа инкубации при комнатной температуре в темноте клетки промывали три раза перед FACS-анализом.

[0461] На Фиг. 28С, внизу слева представлено окрашивание АР1903-индуцированного pStat5 путем проведения FACS-анализа. В соответствии с анализом по гену-репортеру HEK293T полученные результаты на первичных CAR-T-клетках человека продемонстрировали, что мембранно-дистальный цитоплазматический хвост IL-21R приводит к большей индукции pStat5.

Пример 9: FKBP-переключатель позволяет настраивать передачу сигналов цитокинов в CAR-T-клетках

[0462] Для определения возможности настраивания передачи цитокиновых сигналов в FKBP-переключателе CAR-T-клеток в ответ на АР1903, FKBP-переключатели CAR-T-клеток, несущих цитоплазматический хвост IL-7R (316-459), подвергали нехватке сыворотки в 100 мкл бессывороточной среды RPMI (Corning) в течение 4 часов во влажной камере при 37°С с 5% CO2, и затем подвергали воздействию АР1903 в указанных рабочих концентрациях в течение 1 часа. Через 40 минут после воздействия АР1903 смесь антител, содержащую BUV395-конъюгированное антитело против CD3 человека (Biolegend) и FITC-конъюгированное моноклональное антитело к метке v5 (Thermo Fisher), добавляли к клеткам и продолжали инкубацию в течение последних 20 минут. После 1 часа воздействия АР1903 клетки фиксировали добавлением 35 мкл 16% параформальдегида к каждым 100 мкл образца и продолжали инкубацию в течение 15 минут при 37°С. Затем клетки трижды промывали PBS и пермеабилизировали в 100% холодном метаноле в течение 1 или 2 ночей при -20°С. В день FACS-анализа клетки трижды промывали PBS, блокировали Fc и окрашивали с использованием AlexaFluor647-конъюгированного антитела против Stat5 (pY694) мыши/человека (BD Biosciences), разведенным в PBS+1% BSA. После 1 часа инкубации при комнатной температуре в темноте клетки промывали три раза перед FACS-анализом.

[0463] На Фиг. 29 показано, что активация Stat5 в FKBP-переключателе CAR+ Т-клетках увеличивается с АР1903 в зависимости от дозы. Кроме того, передача цитокиновых сигналов была клетка-специфической в FKBP-переключателе CAR+ Т-клетках, поскольку pStat5 индуцировался специфически в FKBP-переключателе CAR+ Т-клетках, но не в CAR- Т-клетках в той же культуре. Это говорит о том, что FKBP-переключатель доставляет цитокиновые сигналы специфически терапевтическим CAR+ Т-клеткам, при этом (i) предотвращая активацию иммунной системы, которая ускоряет отторжение аллогенных CAR Т-клеток, и (ii) избегая токсичности, связанной с системным введением цитокинов.

Пример 10: АР1903-индуцированная активация FKBP-переключателя усиливает противоопухолевую активность CAR-T-клеток

[0464] Клетки WM266.4 и DMS 273 представляют собой линии клеток-мишеней DLL3+, которые были приобретены у Sigma. Чтобы облегчить визуализацию клеток-мишеней с помощью системы анализа живых клеток «IncuCyte», клетки WM266.4 и DMS 273 были стабильно помечены ядерным GFP с помощью лентивирусной трансдукции с реагентом IncuCyte NucLight Green Lentivirus (Sartorius) для получения WM266.4-nucGFP и DMS 273-nucGFP соответственно. FKBP-переключатель был клонирован в CAR DLL3 (26С8 scFv), чтобы обеспечить стехиометрическую коэкспрессию.

[0465] Чтобы проверить, демонстрирует ли CAR-T-клетки с FKBP-переключателем повышенные лизис и активность клеток-мишеней после повторного воздействия на клетки-мишени в присутствии АР1903, мы использовали серийный киллинг-анализ в условиях in vitro, в котором небольшое количество CAR-T-клеток культивировали совместно с избытком мишеней. Эти суровые условия требовали, чтобы отдельные CAR-T-клетки последовательно лизировали несколько клеток-мишеней; в свою очередь, клетки CAR-T будут подвергаться пролиферации и, в конечном итоге, дифференциации и истощению. 5,000 клеток-мишеней WM266.4-nucGFP высевали и предоставляли им возможность прикрепиться к 96-луночным планшетам с черными стенками и плоским прозрачным дном в 50 мкл RPMI, содержащем 10% FBS (Hyclone), заменимые аминокислоты, пируват натрия и 20-25 мМ HEPES. CAR-T-клетки DLL3, несущие FKBP-переключатель, или контрольные CAR-T-клетки размораживали и добавляли к высеянным клеткам-мишеням в соотношении эффектор:мишень (Э:М) 1:9.

[0466] На Фиг. 30А изображена схема CAR DLL3, несущего FKBP-переключатель с двойными выходными сигналами (цитоплазматические хвосты IL7Ra(316-459)/IL12Rb2(775-825)), который был использован.

[0467] На Фиг. 30В и Фиг. 30С представлена цитотоксичность в условиях in vitro CAR-T-клеток DLL3 в сравнении с цитотоксичностью клеток-мишеней DLL3+. В то время как контрольные CAR-T-клетки, лишенные FKBP-переключателя, не могли эффективно лизировать клетки-мишени при данном низком, неоптимальном соотношении Э:М (Фиг. 30В), АР1903-индуцированая активация FKBP-переключателя резко усилила цитотоксичность CAR-T-клеток (Фиг. 30С). Следовательно, АР1903 увеличивает эффективность FKBP-переключателя CAR-T-клеток.

[0468] Проблемой в терапии CAR-T-клетками являются низкие уровни экспрессии опухолевых мишеней, что приводит к неоптимальной активации CAR и цитотоксичности. Чтобы проверить, увеличивает ли активация FKBP-переключателя чувствительность CAR-T-клеток к клеткам с низкой экспрессией-мишени, мы использовали линию клеток-мишеней DMS 273-nucGFP, которая имеет низкую экспрессию DLL3 на поверхности (400 DLL3/клетку). 5,000 клеток-мишеней DMS 273-nucGFP высевали и предоставляли им возможность прикрепиться к 96-луночным планшетам с черными стенками и плоским прозрачным дном в 50 мкл RPMI, содержащем 10% FBS (Hyclone), заменимые аминокислоты, пируват натрия и 20-25 мМ HEPES. CAR-T-клетки DLL3, несущие FKBP-переключатель, или контрольные CAR-T-клетки размораживали и добавляли к высеянным клеткам-мишеням в соотношении эффектор:мишень (Э:М) 1:1.

[0469] На Фиг. 30D и Фиг. 30Е представлена цитотоксичность в условиях in vitro CAR-T-клеток DLL3 в сопоставлении с цитотоксичностью клеток-мишеней, экспрессирующих низкие уровни DLL3. На Фиг. 30D показано, что контрольные CAR-T-клетки были неэффективны даже при более высоком соотношении Э:М - 1:1. В противоположность этому, Фиг. 30Е показывает, что активация FKBP-переключателя усиливала цитотоксичность CAR-T-клеток и повышала их чувствительность по отношению к клеткам с низкой экспрессией мишени.

[0470] Затем мы исследовали активность FKBP-переключателя CAR-T-клеток в условиях in vivo, используя ксенотрансплантатную модель опухоли у человека. LN229-EGFRvIII был получен из линии клеток глиобластомы человека LN229 (АТСС) путем стабильной трансдукции полноразмерным EGFRvIII человека. 3 миллиона клеток LN229-EGFRvIII в 200 мкл бессывороточной среды RPMI имплантировали подкожно мышам NSG. Рост опухоли контролировали с помощью штангенциркуля с использованием цифрового штангенциркуля, начиная с Дня 21 после имплантации. Размер опухоли рассчитывали по формуле: объем опухоли=(ширина^∧2 × длина/2). Мышей рандомизировали в группы по 8 особей на основании объема опухоли на День 24 после имплантации, и средний объем опухоли на группу составил 200 мм³. В День 25 после имплантации нетрансдуцированные Т-клетки (НТД), контрольные CAR-T-клетки и FKBP-переключатели CAR-T-клеток, несущие цитоплазматические хвосты IL7Ra (316-459)/IL12Rb2 (775-825), размораживали и подсчитывали в соответствии со стандартной процедурой. Клетки ресуспендировали в бессывороточной среде RPMI и 3 миллиона CAR+ клеток/мышь вводили внутривенно в объеме 100 мкл/мышь. На следующий день после инфузии Т-клеток и еженедельно после этого каждая группа также получала внутрибрюшинные инфузии либо 5 мг/кг АР1903, либо контрольного носителя (n=8 на группу). Затем опухоли контролировали каждые 3-4 дня до конца исследования.

[0471] На Фиг. 31А-31Н представлено прогрессирование опухоли и общую выживаемость в каждой группе мышей, которые поддавались воздействию. По сравнению с контрольными CAR-T-клетками и FKBP-переключателем CAR-T-клеток, которые вводились вместе с контролем-носителем, активация FKBP-переключателя с помощью АР1903 привела к значительному усилению контроля над опухолью (Фиг. 31А), что позволило получить более длительный и полный противоопухолевый ответ (Фиг. 31B-31G) и увеличенной общей выживаемости (Фиг. 31Н).

Пример 11: АР1903-индуцированная активация FKBP-переключателя усиливает противоопухолевую активность CAR-T-клеток

[0472] Клинические испытания показали, что реакция пациента на терапию CAR-T-клетками CD19 коррелирует с высокими уровнями гомеостатических цитокинов (например, IL-15) в сыворотке крови, которые имеют решающее значение для запуска начального всплеска размножения и приживления CAR-T-клеток (J Clin Oncol. 2017 Jun 1; 35(16): 1803-1813.). Более того, в отличие от гемобластозов, когда клетки-мишени в кровотоке легко доступны для CAR-T-клеток, лечение солидных опухолей, вероятно, потребует, чтобы CAR-T-клетки находились в кровообращении более длительное время, прежде чем экстравазировать и проникнуть в солидную опухоль; поэтому независимые от мишени, поддерживаемые цитокинами размножение и выживание CAR-T-клеток будут особенно важны. Таким образом, мы исследовали, достаточно ли одного АР1903 для управления независимыми от мишени размножением и устойчивостью CAR-T-клеток.

[0473] Контрольные CAR-T-клетки или FKBP-переключатели CAR-T-клеток, несущие цитоплазматические хвосты IL7R(316-459)/IL12Rb2(775-825), культивировали с указанными концентрациями АР1903 и при отсутствии экзогенных цитокинов (если не указано иное в случае положительного контроля) или клеток-мишеней в течение 2 недель. В качестве положительного контроля к CAR-T-клеткам в качестве альтернативы добавляли экзогенный рекомбинантный IL-7(10 нг/мл; Miltenyi) и IL-12р70 (10 нг/мл; Biolegend) для имитации двойных выходных сигналов IL-7R/IL12Rb2, передаваемых при активации FKBP-переключателя. В конце 2-недельного культивирования определяли количество и качество выживших CAR-T-клеток. Вкратце, дублированные образцы из клеток каждого условия культивирования собирали и окрашивали с использованием набора Zombie NIR Fixable Viability Kit (Biolegend). Образцы промывали PBS, блокировали Fc, затем окрашивали следующей смесью антител, разведенных в PBS+1% BSA: BUV395-конъюгированное антитело против CD3 человека, BV510-конъюгированное антитело против CD8 человека, BV605-конъюгированное антитело против CD4 человека и FITC-конъюгированное антитело к метке v5 (для обнаружения CAR), РЕ/Су7-конъюгированное антитело против CD62L человека (Biolegend) и BV785-конъюгированное антитело против CD45RO человека (Biolegend). В конце, образцы были промыты в PBS и клеточные осадки ресуспендировали в 130 мкл PBS+1% BSA, содержащем счетные микросферы 123count eBeads (Thermo Fisher) (10 мкл счетных микросфер в 120 мкл PBS+1% BSA) перед FACS-анализом.

[0474] На Фиг. 32А представлено АР1903-обусловленное размножение CAR-T-клеток; пунктирная линия указывает кратность увеличения CAR-T-клеток, дополненных экзогенными IL7 и IL12p70. В отличие от контрольных CAR-T-клеток, у которых отсутствует FKBP-переключатель, количество которых снижалось, CAR-T-клетки с FKBP-переключателем, которые подвергали воздействию АР1903, эффективно размножались. Примечательно, что всего 1 нг/мл АР1903 было достаточно для достижения уровня размножения, достигнутого добавлением экзогенных цитокинов.

[0475] На Фиг. 32В представлено абсолютное количество и фенотипы Т-клеток памяти выживших CAR-T-клеток в конце 2-недельного культивирования. Помимо увеличения количества CAR-T-клеток, активация FKBP-переключателя также улучшала качество CAR-T-клеток, о чем свидетельствует поддержание и размножение стволовых Т-клеток памяти (Tscm) и центральных Т-клеток памяти (Tcm) CAR+ Т-клеток, которые представляют собой долгоживущие, самообновляющиеся популяции, обеспечивающие длительную противоопухолевую защиту.

Пример 12: Конструирование индуцибельных цитокиновых рецепторов с пониженной базальной передачей сигналов

[0476] В присутствии лиганда гомодимерные рецепторы цито кино в/факторов роста (например, EpoR и TpoR) в их естественных формах зависят от двух требований для активации JAK2: (i) гомодимеризация рецептора и (ii) вращение рецептора, опосредованное трансмембранной областью, которая сближает два JAK2 достаточно близко для транс-фосфорилирования и активации. Было показано, что прекращение вращения рецептора путем мутации ключевых аминокислотных остатков в трансмембранной области отменяет передачу сигналов рецептора даже в присутствии лиганда. В действительности индуцибельный рецептор требует чистого ВЫКЛЮЧЕНИЯ (отсутствия базальной активности) при отсутствии индуктора и широкого динамического диапазона лиганд-индуцированного ВКЛЮЧЕНИЯ для максимальной настраиваемости. Тирозиновые домены активации из гомодимерных рецепторов цитокинов/факторов роста продемонстрировали разную степень базальной передачи сигналов (Фиг. 9). Было показано, что EpoR и TpoR существуют в равновесии между мономерной и гомодимерной формами при отсутствии лиганда, и было обнаружено, что эта спонтанная гомодимеризация опосредуется их трансмембранными доменами; следовательно, мы предположили, что проницаемость, наблюдаемая в наших химерных цитокиновых рецепторах, которые не подвергали воздействию, была обусловлена их спонтанной лиганд-независимой гомодимеризацией, опосредованной их трансмембранными доменами.

[0477] Чтобы уменьшить базальную передачу сигналов в наших химерных цитокиновых рецепторах, мы заменили трансмембранную область EpoR/TpoR на область PD-1, которая существует в природе в виде мономера. Анализ по гену-репортеру клеток HEK293T использовали для оценки базальной передачи сигналов при отсутствии АР1903, а также индуцибельности и силы передачи цитокиновых сигналов в присутствии АР1903. Вкратце, 20,000 клеток HEK293T помещали в каждую лунку 96-луночного планшета с плоским дном, покрытым поли-L-лизином, и оставляли для прикрепления на ночь. Индуцибельный цитокиновый рецептор (2,5 нг), элемент ответа Stat, который управляет люциферазой светлячка (100 нг; Promega) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla (1 нг; Promega) были смешаны в конечном объеме 5 мкл в Opti-MEM (Gibco) («смесь ДНК»). 0,3 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 5 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 10 мкл добавляли в каждую лунку, содержащую HEK-293Т. Через 24 часа после трансфекции клетки либо оставляли без воздействия для оценки АР1903-независимой базальной передачи сигналов, либо подвергали воздействию указанными концентрациями АР1903 (Apex Bio), разведенными в бессывороточной среде. Кратность индукции репортерной активности Stat5 была нормализована относительно таковой для клеток HEK293T, трансфицированных всеми векторами, за исключением индуцибельного цитокинового рецептора, и которые не подвергались воздействию.

[0478] На Фиг. 33А и 33В представлена базальная передача сигналов при отсутствии АР1903 каждым химерным рецептором, как было определено по репортерной активности Stat5 и Stat4, соответственно. По сравнению с химерными рецепторами, несущими трансмембранную область TpoR, которые проявляли значительную базальную активность Stat при отсутствии АР1903, замена на трансмембранную область PD-1 аннулировала базальную активность Stat до уровней, сопоставимых с конструкцией, содержащей только эктодомен FKBP и не содержащей JAK-активирующие домены и цитоплазматические хвосты. В некоторых вариантах реализации данного изобретения базальная передача сигналов индуцибельного химерного цитокинового рецептора может быть дополнительно оптимизирована с использованием мутаций, вставки и/или делеции, трансмембранных доменов, как проиллюстрировано на Фиг. 38С.

[0479] На Фиг. 33С и 33D представлен ответ каждого химерного рецептора на указанные концентрации АР1903, как определено по репортерной активности Stat5 и Stat4, соответственно. По сравнению с их аналогами с трансмембранным доменом TpoR, вариант FKBP-переключателя, несущий трансмембранную область PD1, отвечал сопоставимо по величине при воздействии АР1903. Хотя трансмембранный домен также считается критическим для активации вращения рецептора, замена трансмембранной области TpoR на область PD-1 сохранила АР1903-индуцированную активацию Stat. В целом, мы демонстрируем, что трансмембранная область PD-1 может использоваться в комбинации с тирозиновыми доменами активации из гомодимерных рецепторов цитокинов/факторов роста для снижения базальной передачи сигналов при сохранении лиганд-индуцированной активации рецептора.

[0480] Чтобы проверить, сохраняет ли замена трансмембранной областью PD1 цитотоксическую активность химерного рецептора, мы сравнили цитотоксическую активность и АР1903-обусловленное размножение CAR-T-клеток, коэкспрессирующих любой вариант рецептора. Для анализа цитотоксичности в условиях in vitro, 5,000 клеток-мишеней U87KO-EGFRvIII-nucGFP засевали и позволили прикрепиться к 96-луночным планшетам с черными стенками и плоским прозрачным дном в 50 мкл RPMI, содержащем 10% FBS (Hyclone), заменимые аминокислоты, пируват натрия и 20-25 мМ HEPES. U87KO-EGFRvIII был любезно подарен компанией Cellectis SA (Париж, Франция). U87KO-EGFRvIII был получен из исходной клеточной линии, U87MG (АТСС), сначала путем нокаута эндогенного EGFR дикого типа с использованием эффекторных нуклеаз, подобных активатору транскрипции (TALEN), а затем стабильной сверхэкспрессии полноразмерного EGFRvIII человека посредством лентивирусной трансдукции. Для облегчения визуализации клеток-мишеней с помощью системы анализа живых клеток «IncuCyte», клетки-мишени U87KO-EGFRvIII-nucGFP были получены из U87KO-EGFRvIII посредством второй лентивирусной трансдукции с помощью реагента IncuCyte NucLight Green Lentivirus (Sartorius). CAR (2173 scFv)-T-клетки EGFRvIII, несущие FKBP-переключатель с TpoR или PD1 TM, размораживали и добавляли к высеянным клеткам-мишеням в соотношении эффектор:мишень (Э:М) 1:4. АР1903 в указанных концентрациях добавляли в каждую лунку. Для каждого условия лунки были продублированы.

[0481] На Фиг. 34А представлена схема FKBP-переключателей CAR, несущих цитоплазматические хвосты IL7R (316-459)/IL12Rb2 (775-825) либо с ТМ доменом TpoR, либо с ТМ доменом PD1; CAR-T-клетки, коэкспрессирующие эктодомен FKBP (FKBP только контролируют CAR) и без JAK-активирующего домена и цитоплазматических хвостов, использовали в качестве контроля.

[0482] На Фиг. 34B-34D продемонстрировано, что, хотя контрольные CAR-T-клетки не были усилены при воздействии АР1903, FKBP-переключатели, несущие либо ТМ домен TpoR, либо ТМ домен PD1, были сравнительно усилены в присутствии АР1903. Следовательно, замена на ТМ домен PD1 может снизить базальную активность FKBP-переключателя, сохраняя при этом активацию и перечу сигнала АР1903-индуцибельного рецептора переключения.

[0483] Затем мы проверили, сохраняет ли замена трансмембранной области PD1 АР1903-обусловленное размножение клеток с химерным рецептором. Контрольные CAR-T-клетки или CAR-T-клетки с FKBP-переключателем, несущие трансмембранные варианты, культивировали с указанными концентрациями АР1903 и при отсутствии экзогенных цитокинов (если не указано иное в случае положительных контролей) или клеток-мишеней в течение 2 недель. В качестве положительного контроля к CAR-T-клеткам в качестве альтернативы добавляли экзогенный рекомбинантный IL-7 (10 нг/мл; Miltenyi) и IL-12р70 (10 нг/мл; Biolegend) для имитации двойных выходных сигналов IL-7R/IL12Rb2, передаваемых при активации FKBP-переключателя. В конце 2-недельного культивирования определяли количество и качество выживших CAR-T-клеток. Вкратце, дублированные образцы из клеток каждого условия культивирования собирали и окрашивали с использованием набора «Zombie NIR Fixable Viability Kit» (Biolegend). Образцы промывали PBS, блокировали Fc, затем окрашивали следующей смесью антител, разведенных в PBS+1% BSA: BUV395-конъюгированное антитело против CD3 человека, BV510-конъюгированное антитело против CD8 человека, BV605-конъюгированное антитело против CD4 человека и FITC-конъюгированное антитело к метке v5 (для обнаружения CAR), РЕ/Су7-конъюгированное антитело против CD62L человека (Biolegend) и BV785-конъюгированное антитело против CD45RO человека (Biolegend). В конце, образцы были промыты в PBS и клеточные осадки ресуспендировали в 130 мкл PBS+1% BSA, содержащем счетные микросферы 123count eBeads (Thermo Fisher) (10 мкл счетных микросфер в 120 мкл PBS+1% BSA) перед FACS-анализом.

[0484] На Фиг. 34Е представлено количество живых CAR + Т-клеток после 2 недель культивирования в указанных концентрациях АР1903 или в экзогенно добавленных IL-7 и IL-12р70. Как и ожидалось, АР1903 не поддерживал размножение и выживание контрольных CAR-T-клеток, а экзогенные IL7 и IL12p70 поддерживали размножение и выживаемость контрольных CAR-T-клеток с FKBP-переключателем. В присутствии АР1903 CAR-T-клетки с FKBP-переключателем с трансмембранным доменом PD1, размножаются равносильно или лучше, чем их аналоги, несущие трансмембранную область TpoR.

[0485] На Фиг. 34F представлено количество CAR + Т-клеток в каждой группе клеток памяти. По сравнению со своими аналогами, несущими трансмембранную область TpoR, CAR-T-клетки с FKBP-переключателем с трансмембранным доменом PD1, равносильно или лучше поддерживают Tscm и Tcm CAR+ клетки в ответ на АР1903. Эти данные демонстрируют, что трансмембранный вариант PD1, который имеет пониженную базальную передачу сигналов, сохраняет индуцибельность и функциональность рецептора переключения в контексте первичных CAR-T-клеток человека.

Пример 13: Улучшение производства CAR-T-клеток с помощью АР1903-обусловленного размножения CAR-T-клеток

[0486] Хотя лентивирусы обладают способностью доставлять относительно большие грузы, увеличение полезной нагрузки - например, за счет коэкспрессии FKBP-переключателя - неизбежно снижает титр вируса и последующую эффективность трансдукции. Обычные способы производства CAR-T-клеток влекут за собой увеличение трансдуцированных Т-клеток в присутствии высоких доз добавленных цитокинов (например, IL-2, IL-7 и/или IL-15), которые могут увеличивать как трансдуцированные (CAR+), так и нетрансдуцированные (CAR-) Т-клетки в той же культуре. Поскольку активация FKBP-переключателя может передавать цитокиновый сигнал, способный управлять размножением и насыщением CAR-T-клеток, мы использовали это и предположили, что замена АР1903 на добавленные цитокины может преодолеть низкую эффективность трансдукции во время производства CAR-T-клеток с FKBP-переключателем.

[0487] В День 0 Очищенные Т-клетки активировали в среде X-Vivo-15 (Lonza) с добавлением 100 МЕ/мл IL-2 человека (Miltenyi Biotec), 10% FBS (Hyclone) и T TransAct человека (Miltenyi Biotec, №по каталогу 130-111-160, разведение 1:100) в планшете Grex-24 (Wilson Wolf, № по каталогу 80192М). В День 2 Т-клетки ресуспендировали в количестве 0,5 миллиона клеток на мл в 1 мл среды для трансдукции Т-клеток на лунку планшета Grex-24 (Wilson Wolf, № по каталогу 80192М). Лентивирусные супернатанты готовили, как описано выше, и трансдукцию проводили в День 2. В День 5, когда трансдукция была завершена, клетки промывали для удаления остаточного IL-2 человека, ресуспендировали в свежей среде для размножения Т-клеток, то есть X-Vivo-15 с добавлением 5% сыворотки АВ человека (Gemini Bio), и размножали при либо 20 нг/мл IL-2 человека, или указанных концентрации АР1903 в планшетах с лунками Grex-24. При необходимости клетки размножали в более крупных сосудах G-Rex (Wilson Wolf), используя среду для размножения Т-клеток. В Дни 5, 9 и 15 насыщение CAR+ Т-клеток определяли путем определения процента Т-клеток, которые связывались с FITC-конъюгированным моноклональным антителом к метке v5 (Thermo Fisher), с использованием проточной цитометрии.

[0488] На Фиг. 35А изображена схема контрольных CAR с BFP и CAR с FKBP-переключателем с различными используемыми цитоплазматическими хвостами. На Фиг. 35В-Е представлен процент CAR+Т-клеток, которые размножались при IL-2 или AP1903, как определено FACS-анализом в указанные дни. Как и ожидалось, размножение при 20 нг/мл IL-2 человека поддерживало стабильный процент CAR+Т-клеток из-за равносильного размножения как CAR+, так и CAR-Т-клеточных популяций в культуре. С другой стороны, хотя АР1903 не насыщал CAR-T-клетки с BFP (Фиг. 35В), использование АР1903 вместо IL-2, постепенно насыщало CAR-T-клетки с FKBP-переключателем в зависимости от дозы между Днями 5 и 14 (Фиг. 35С-Е); кроме того, эффективное насыщение CAR-T-клеток может быть достигнуто с помощью FKBP-переключателей, передающих различные выходные сигналы через IL7Ra(316-459)/IL12Rb2(775-825) (Фиг. 35С), IL2Rb(393-433, 518-551)/IL21R(322-538) (Фиг. 35D) и IL7Ra(316-459)/IL21R(322-538) (Фиг. 35Е).

Пример 14: Индуцирование передачи цитокиновых сигналов в ответ на антитела и другие мультимеризационные лиганды/индукторы

[0489] Поскольку димеризация может активировать индуцибельный химерный цитокиновый рецептор, разумно, что подходящие эктодомен, антитела (или молекулы, полученные от антител) и мультимеризационные лиганды/индукторы также могут активировать передачу сигналов.

[0490] Чтобы оценить активацию антителом, мы создали химерный цитокиновый рецептор, несущий эктодомен OX40 (1-214) человека, и протестировали его способность передавать сигнал в ответ на клиническое антитело против ОХ40 (GSK109) в анализе клеток HEK293T по гену-репортеру Stat. Вкратце, 20,000 клеток HEK293T помещали в каждую лунку 96-луночного планшета с плоским дном, покрытым поли-L-лизином, и оставляли для прикрепления на ночь. Цитокиновый рецептор с эктодоменом ОХ40 (2,5 нг), элемент ответа Stat, который управляет люциферазой светлячка (100 нг; Promega) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla (1 нг; Promega) были смешаны в конечном объеме 5 мкл в Opti-MEM (Gibco) («смесь ДНК»). 0,3 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 5 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 10 мкл добавляли в каждую лунку, содержащую HEK-293Т. Через 24 часа после трансфекции клетки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию антителом против ОХ40, GSK109, разведенным в бессывороточной среде, и активность Stat-репортера определяли через 5 часов после воздействия с использованием системы люциферазного анализа «Dual-Glo» (Promega). Кратность индукции репортерной активности Stat была нормализована относительно таковой для клеток HEK293T, трансфицированных всеми векторами, за исключением цитокинового рецептора с эктодоменом ОХ40, и которые не подвергались воздействию. Для каждого условия было создано по 4 лунки.

[0491] На Фиг. 36А представлена схема химерного цитокинового рецептора, несущего эктодомен ОХ40. На Фиг. 36В-36С представлена активацию передачи цитокиновых сигналов в ответ на антитело. На Фиг. 36В-36С представлена репортерная активность Stat5 (36В) и Stat4 (36С) при отсутствии и в присутствии антитела против ОХ40, GSK109. Опосредованная антителами димеризация эктодомена ОХ40 индуцировала передачу нисходящих цитокиновых сигналов, что отражалось в повышении репортерной активности Stat5 и Stat4.

[0492] Чтобы проверить, может ли панель лигандов/индукторов и эктодоменов быть расширена за пределы пары АР1903-FKBP(F36V), мы исследовали передачу сигналов в ответ на другие мультимерные лиганд-индукторы. Поскольку лиганды суперсемейства фактора некроза опухоли (ФНО, TNF) являются тримерами, то данные лиганды взаимодействуют со своими соответствующими рецепторами мультимерным образом. Поэтому мы слили эктодомены, полученные из рецепторов суперсемейства TNFR2, такие как ВСМА(1-54), TACI(1 -165) и BAFFR (1-78), с трансмембранными и сигнальными доменами наших химерных цитокиновых рецепторов и исследовали передачу сигналов в ответ на растворимый тримерный лиганд. Вкратце, 20,000 клеток HEK293T помещали в каждую лунку 96-луночного планшета с плоским дном, покрытым поли-L-лизином, и оставляли для прикрепления на ночь. Химерный цитокиновый рецептор (2,5 нг), элемент ответа Stat, который управляет люциферазой светлячка (100 нг; Promega) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla (1 нг; Promega) были смешаны в конечном объеме 5 мкл в Opti-MEM (Gibco) («смесь ДНК»). 0,3 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 5 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 10 мкл добавляли в каждую лунку, содержащую HEK-293Т. Через 24 часа после трансфекции клетки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию растворимых тримеров BAFF или APRIL9, разведенных в бессывороточной среде, и репортерную активность Stat5 определяли через 5 часов после воздействия с использованием системы люциферазного анализа «Dual-Glo» (Promega). Кратность индукции репортерной активности Stat была нормализована относительно таковой для клеток HEK293T, трансфицированных всеми векторами, за исключением цитокинового рецептора с эктодоменом ОХ40, и которые не подвергались воздействию. Для каждого условия было создано по 4 лунки.

[0493] На Фиг. 37А представлена схема различных эктодоменов, полученных из исследуемого суперсемейства TNFR2. Фиг. 37В представляет собой схему взаимодействий между рецепторами ВСМА, TACI и BAFFR с их лигандами BAFF и APRIL (Drug Des Devel Ther. 2015 Jan 7; 9:333-47). На Фиг. 37C-37D представлена активация передачи цитокиновых сигналов в ответ на мультимерные лиганд-индукторы. На Фиг. 37C-37D показана активность репортеров Stat5 (37С) и Stat4 (37D) в ответ на растворимые тримеры BAFF и APRIL. Мультимеризация соответствующих химерных цитокиновых рецепторов растворимыми тримерами BAFF индуцировала активацию Stat5 и Stat4, а мультимеризация цитокинового рецептора с эктодоменом ВСМА растворимыми тримерами APRIL индуцировала нисходящую активацию Stat.

Пример 15: Оптимизация силы и чувствительности сигнала FKBP-переключателя путем изменения спирали TPOR ТМ

[0494] Хорошо известно, что спиральная трансмембранная (ТМ) область TpoR является критической для лиганд-индуцированной передачи сигналов рецептора путем контроля активации JAK2. Мы предположили, что в химерном цитокиновом переключателе, где другой эктодомен (например, FKBP) слит с TM/JAK2-активирующим доменом TpoR, оптимальная структурная конформация для активации рецептора может быть нарушена. Используя важность ТМ области в активности TpoR, мы стремились повысить чувствительность FKBP-переключения путем модификации ТМ области TpoR. С этой целью мы создали варианты FKBP-переключателя с делециями или вставками в ТМ области TpoR и протестировали их в анализе клеток HEK293T по гену-репортеру.

[0495] Вкратце, 20,000 клеток HEK293T помещали в каждую лунку 96-луночного планшета с плоским дном, покрытым поли-L-лизином, и оставляли для прикрепления на ночь. FKBP-переключатель (2,5 нг), элемент ответа Stat, который управляет люциферазой светлячка (100 нг; Promega) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla (1 нг; Promega) были смешаны в конечном объеме 5 мкл в Opti-MEM (Gibco) («смесь ДНК»). В качестве компаратора использовали FKBP-переключатель, несущий трансмембранный домен TpoR дикого типа. 0,3 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 5 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 10 мкл добавляли в каждую лунку, содержащую HEK-293Т. Через 24 часа после трансфекции клетки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию указанными концентрациями АР1903 (APEX Bio), разведенными в бессывороточной среде. Через 24 часа после воздействия репортерную активность Stat5 оценивали с использованием системы люциферазного анализа «Dual-Glo» (Promega). Кратность индукции репортерной активности Stat5 была нормализована относительно таковой для клеток HEK293T, трансфицированных всеми векторами, за исключением рецептора-переключателя, и которые не подвергались воздействию.

[0496] На Фиг. 38А-38С представлено влияние модификаций трансмембранного домена TpoR на силу и чувствительность передачи сигналов FKBP-переключателем.

[0497] На Фиг. 38А-38В представлены аминокислотные последовательности для TpoR дикого типа и различных вариантов с ТМ делецией (Фиг. 38А) или вставкой (Фиг. 38В).

[0498] На Фиг. 38С представлен ответ вариантов FKBP-переключателя, несущих ТМ делеции (Фиг. 38А) и вставки (Фиг. 38В) TpoR при отсутствии или присутствии АР1903. Прямоугольной рамкой выделен FKBP-переключатель, несущий ТМ домен TpoR дикого типа, из которого были получены ТМ варианты. По сравнению с FKBP-переключателем, несущим ТМ домен TpoR дикого типа (т.е. FKBP-переключатель), варианты с ТМ делецией TpoR, такие как TpoR(478-582; N-3), TpoR(478-582; N-5), TpoR(478-582; N-6) и TpoR(478-582; N-7) увеличивали силу АР1903-индуцированной активности Stat5. Кроме того, несколько ТМ вариантов TpoR также увеличивали чувствительность в ответ на очень низкие концентрации АР1903 (т.е. 1 нг/мл или 0,1 нг/мл), при этом TpoR(478-582; N-7) и TpoR(478-582; N-9) были наиболее чувствительными. Это демонстрируют, что модуляция ТМ области TpoR увеличивает реактивность и чувствительность FKBP-переключателя к АР1903.

Пример 16: Управление дифференциацией CAR-T-клеток с помощью отдельных и комбинаторных выходных сигналов цитоплазматического хвоста А. Комбинирование цитоплазматических хвостов для активации дополнительных сигнальных путей

[0499] После активации TCR мобилизация Са+ приводит к активации NFAT и активации провоспалительных мишеней (IL2, GzmB и т.д.). Многие из этих промоторов активируются не одним NFAT, а скорее гетеротримером NFAT с АР-1 (суперспиралью Fos и Jun). Истощение происходит при чрезмерной стимуляции антигеном и, как предполагается, происходит, когда количество активированного NFAT превышает количество АР-1, что приводит к гомодимерам NFAT и активации различных промоторов. Одним из способов предотвращения истощения является увеличение количества АР-1 (Fos/Jun). Цитокиновые рецепторы, такие как IL2R и IL7R, активируют JNK (Jun-киназы), которые фосфорилируют и активируют c-Jun. Однако одного этого недостаточно для активации АР-1, поскольку Fos также должен быть активирован и фосфорилирован. Параллельный путь MEK/ERK приводит к усилению регуляции Fos через Мус/Max, а также к прямому фосфорилированию Fos. Таким образом, гипотетический рецептор, который активирует как JNK, так и MEK/ERK, приведет к чрезмерному количеству АР-1. Рецептор EGF (EGFR) является одной из рецепторных тирозинкиназ, хорошо известных при активации сигнального пути MEK/ERK. Используя цитоплазматический хвост EGFR, мы демонстрируем способность сильно активировать Мус/Max и, следовательно, Fos. Комбинируя цитоплазматический хвост EGFR и IL7R, мы демонстрируем успешную индукцию сигнальных путей АР-1 и Мус/Max, которые предотвращают терминальную дифференциацию и истощение CAR-T-клеток.

[0500] Чтобы проверить сигнальные пути, активируемые разными цитоплазматическими хвостами, мы использовали анализ клеток HEK293T по гену-репортеру. Вкратце, 20,000 клеток HEK293T помещали в каждую лунку 96 луночного планшета с плоским дном, покрытым поли-L-лизином, и оставляли для прикрепления на ночь. Индуцибельный цитокиновый рецептор (2,5 нг), соответствующий элемент ответа фактора транскрипции, который управляет люциферазой светлячка (100 нг; Promega) и контрольный репортерный вектор люциферазы Renilla (1 нг; Promega) были смешаны в конечном объеме 5 мкл в Opti-MEM (Gibco) («смесь ДНК»). 0,3 мкл Липофектамина 2000 (Invitrogen) в 5 мкл Opti-MEM инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем добавляли к смеси ДНК. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, и общий объем 10 мкл добавляли в каждую лунку, содержащую HEK-293Т. В качестве отрицательного контроля эктодомен FKBP был соединен с трансмембранной и короткой внутриклеточной областью TpoR(478-528), в которой отсутствовали JAK-связывающий домен и цитоплазматический хвост (т.е. CTRL TpoR). Для сравнения эктодомен FKBP был связан с сигнальными доменами MyD88/CD40 (далее именуемыми «FKBP-MyD88-CD40»). Через 24 часа после трансфекции клетки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию 1 мкг/мл АР1903 (Apex Bio), разведенным в бессывороточной среде. Через 6 часов после воздействия АР1903 репортерную активность оценивали с использованием системы люциферазного анализа «Dual-Glo» (Promega). Кратность индукции репортерной ативности Stat5 была нормализована относительно таковой для клеток HEK293T, трансфицированных всеми векторами, за исключением индуцибельного цитокинового рецептора, и которые не подвергались воздействию.

[0501] На Фиг. 39А изображена схема исследованных химерных рецепторов.

[0502] На Фиг. 39В представлены результаты люциферазного анализа для определения репортерной активности Stat в клетках HEK293T, использующих один цитоплазматических хвост и комбинации цитоплазматических хвостов. В каждой строке представлен соответствующий репортер люциферазы светлячка, чувствительный к фактору транскрипции; в каждом столбце представлен химерный рецептор, несущий соответствующие домены цитоплазматического хвоста/сигнальные домены. Каждый прямоугольник представляет кратность индукции, каждый ряд нормализован относительно максимальной кратности индукции соответствующего репортера люциферазы светлячка. Как и ожидалось, одиночные выходные сигналы цитоплазматического хвоста активировали необходимые сигнальные пути, при этом IL7R(316-459) активирует Stat5, IL12Rb2small(775-825) активирует Stat4, a EGFR(1122-1165) активирует пути AP-1 и Мус/Max. Когда отдельные цитоплазматические хвосты, которые сами по себе активировали отдельные сигнальные пути, были объединены, возник аддитивный эффект - в присутствии АР1903 цитоплазматические хвосты IL7R(316-459)/IL12Rb2small (775-825) индуцировали активацию Stat5 и Stat4, тогда как цитоплазматические хвосты IL7R(316-459)/EGFR(1122-1165) индуцировали активацию Stat5 (хотя и в меньшей степени), АР-1 и Мус/Max. По сравнению с индуцибельными природными рецепторами с FKBP-цитоплазматическим хвостом, рецептор FKBP-MyD88-CD40 продемонстрировал высокую базальную передачу сигналов при отсутствии АР1903.

В. Искажение цитотоксической эффекторной активности Т-клеток и дифференциация клеток памяти посредством отдельных выходных сигналов цитоплазматического хвоста

[0503] Передача сигналов IL-12 хорошо известна своей способностью стимулировать цитотоксичность и эффекторную дифференциацию Т-клеток; с другой стороны, Фиг. Fb предполагает, что передача сигналов EGFR может предотвращать истощение Т-клеток и способствовать генерации Т-клеток памяти. Чтобы проверить, могут ли отдельные сигнальные пути, активируемые разными цитоплазматическими хвостами, контролировать эффекторную функцию CAR-T-клеток и дифференциацию клеток памяти, мы коэкспрессировали FKBP-переключатели, несущие один и тот же трансмембранный и JAK2-связывающий домен с разными цитоплазматическими хвостами, по отдельности или спарено в тандеме.

[0504] Чтобы проверить, влияет ли различный выходной сигнал цитоплазматического хвоста на эффекторную функцию CAR-T-клеток, мы провели 4-дневный анализ цитотоксичности в условиях in vitro. Вкратце, 30,000 клеток-мишеней U87KO-EGFRvIII-nucRFP высевали и предоставляли им возможность прикрепиться к 96-луночным планшетам с черными стенками и плоским прозрачным дном в 50 мкл RPMI, содержащем 10% FBS (Hyclone), заменимые аминокислоты, пируват натрия и 20-25 мМ HEPES. U87KO-EGFRvIII был любезно подарен компанией Cellectis SA (Париж, Франция). U87KO-EGFRvIII был получен из исходной клеточной линии, U87MG (АТСС), сначала путем нокаута эндогенного EGFR дикого типа с использованием эффекторных нуклеаз, подобных активатору транскрипции (TALEN), а затем стабильной сверхэкспрессии полноразмерного EGFRvIII человека посредством лентивирусной трансдукции. Для облегчения визуализации клеток-мишеней с помощью системы анализа живых клеток «IncuCyte», клетки-мишени U87KO-EGFRvIII-nucRFP были получены из U87KO-EGFRvIII посредством второй лентивирусной трансдукции с помощью Реагента IncuCyte NucLight Red Lentivirus (Sartorius). CAR (2173 scFv)-T-клетки EGFRvIII, несущие FKBP-переключатель с соответствующими цитоплазматическими хвостами, размораживали и добавляли к высеянным клеткам-мишеням в соотношении эффектор:мишень (Э:М) 1:8. Для сравнения были включены CAR-T-клетки, коэкспрессирующие FKBP-MyD88-CD40. Лунки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию 500 нг/мл АР1903 (ApexBio). Число живых клеток-мишеней в каждый момент времени определяли путем подсчета количества живых nuclearRFP+ клеток с помощью системы анализа живых клеток «IncuCyte». Для каждого условия лунки были продублированы.

[0505] В конце 4-дневного анализа цитотоксичности планшеты центрифугировали и собирали супернатанты для анализа высвобождения цитокинов с помощью MSD-анализа (Meso Scale Discovery).

[0506] На Фиг. 40A-40F представлены результаты анализа цитотоксичности в условиях in vitro FKBP-переключателей, несущих разные цитоплазматические хвосты отдельно или спарено в тандеме, при отсутствии или присутствии АР1903.

[0507] На Фиг. 40А-40С представлена цитотоксическая активность исследуемых цитоплазматических хвостов, стимулирующих стволовые/центральные Т-клетки памяти (Tscm/Tcm), то есть IL7R(316-459) и EGFR(1122-1165). В течение относительно короткого периода времени (4 дня) IL7R(316-459) и EGFR(1122-1165) - по отдельности или совместно - не усиливали цитотоксичность CAR-T-клеток в присутствии АР1903. Этого можно было ожидать, потому что, хотя Т-клетки с фенотипом памяти Tscm/Tcm действительно самообновляются в течение длительного времени и выживают дольше, но также проявляют задержку в выполнении цитотоксических эффекторных функций.

[0508] На Фиг. 40D-40E представлена цитотоксическая активность цитоплазматического хвоста IL12Rb2small(775-825), который имитирует передачу сигналов IL-12, способствуя дифференциации эффекторных клеток памяти/ эффекторных терминально-дифференцированных клеток памяти (Tem/Temra). Цитоплазматический хвост IL12Rb2small(775-825)-либо отдельно, либо в сочетании с IL7R(316-459) - усиливает цитотоксическую активность CAR-T-клеток в присутствии АР1903.

[0509] На Фиг. 40F представлена цитотоксическая активность CAR-T-клеток, несущих FKBP-MyD88-CD40. В отличие от цитоплазматических хвостов, представленных на Фиг. 40А-40Е, CAR-T-клетки, несущие FKBP-MyD88-CD40, проявляли повышенную киллерную активность при отсутствии АР1903. Более того, добавление АР1903 не привело к дальнейшему усилению цитотоксичности, что позволяет предположить, что рецептор FKBP-MyD88-CD40 является рецептором с высокой базальной активностью и не обладает индуцибельностью. [0510] На Фиг. 41А-41В представлены уровни цитокинов в супернатантах культур в конце 4-дневного анализа цитотоксичности при отсутствии и присутствии АР1903. Каждая строка представляет соответствующий цитоплазматический хвост при отсутствии или присутствии АР1903, каждый столбец представляет соответствующий анализируемый цитокин. Каждая колонка нормализована относительно наивысшей концентрации соответствующего проанализированного цитокина, которая была принята за 100%.

[0511] На Фиг. 41А представлено высвобождение цитокинов всеми цитоплазматическими хвостами, за исключением рецептора FKBP-MyD88-CD40. В присутствии АР1903 FKBP-переключатели, содержащие эффектор-стимулирующий цитоплазматический хвост IL12Rbsmall(775-825), высвобождают повышенные количества про воспалительных цитокинов, включая IL-17A/F, IL-21, TNFa и IFNg. Интересно, что цитоплазматический хвост IL12Rbsmall(775-825) также приводит к повышенной секреции IL-10, которая, вероятно, является результатом механизма отрицательной обратной связи в ответ на сильные воспалительные сигналы.

[0512] На Фиг. 41В представлено высвобождение цитокинов всеми цитоплазматическими хвостами, а также рецептором FKBP-MyD88-CD40. По сравнению с FKBP-переключателями, несущими цитоплазматические хвосты, рецептор FKBP-MyD88-CD40 секретировал повышенные уровни цитокинов даже при отсутствии АР1903, что соответствует его высокой базальной активности.

[0513] Чтобы проверить, влияют ли различные выходные сигналы цитоплазматического хвоста на дифференциацию памяти и долгосрочную выживаемость CAR-T-клеток, мы провели анализ АР1903-обусловленного роста. CAR-T-клетки, несущие указанные химерные рецепторы, размораживали, и процентное содержание CAR+ клеток нормализовали относительно образца с наименьшей эффективностью трансдукции (т.е. 20% CAR+) путем добавления нетрансдуцированных Т-клеток. Клетки либо оставляли без воздействия, либо подвергали воздействию 500 нг/мл АР1903 и при отсутствии экзогенных цитокинов (если не указано иное в случае положительных контролей) или клеток-мишеней в течение 2 недель. В качестве положительного контроля в CAR-T-клетки альтернативно добавляли экзогенный рекомбинантный IL-7 или IL-2 (10 нг/мл каждого; Miltenyi). В День 5 анализа АР1903-обусловленного роста, супернантенты отбирали для анализа высвобождения цитокинов с помощью MSD-анализа (Meso Scale Discovery). В конце 2-недельного культивирования определяли фенотипы памяти и истощения выживших CAR-T-клеток. Вкратце, дублированные образцы из клеток каждого условия культивирования собирали и окрашивали с использованием набора Zombie NIR Fixable Viability Kit (Biolegend). Образцы промывали PBS, блокировали Fc, затем окрашивали следующей смесью антител, разведенных в PBS+1% BSA: BU\/395-конъюгированное антитело против CD3 человека, В\/510-конъюгированное антитело против CD8 человека, BV605-конъюгированное антитело против CD4 человека и FITC-конъюгированное антитело к метке v5 (для обнаружения CAR), РЕ/Су7-конъюгированное антитело против CD62L человека (Biolegend) и BV785-конъюгированное антитело против CD45RO человека (Biolegend), АРС-конъюгированное антитело против PD-1 человека (Biolegend), BV711-конъюгированное антитело против Tim-3 человека (Biolegend) и PerCP/eFluor710-конъюгированное антитело против Lag-3 человека (eBioscience). В конце, образцы были промыты в PBS и клеточные осадки ресуспендировали в 130 мкл PBS+1% BSA для FACS-анализа.

[0514] На Фиг. 42А-42В представлены уровни цитокинов в супернатантах культур на День 5 АР1903-обусловленого роста в присутствии АР1903. Каждая строка представляет соответствующий сигнальный домен в присутствии АР1903, каждый столбец представляет соответствующий анализируемый цитокин. Каждая колонка нормализована относительно наивысшей концентрации соответствующего проанализированного цитокина, которая была принята за 100%.

[0515] На Фиг. 42А представлено высвобождение цитокинов всеми цитоплазматическими хвостами, за исключением рецептора FKBP-MyD88-CD40. Цитоплазматические хвосты, содержащие IL12Rbsmall(775-825), секретируют повышенное количество провоспалительных цитокинов, включая IL-17A/F, IL-21, TNFa и особенно IFNg.

[0516] На Фиг. 42В представлено высвобождение цитокинов всеми цитоплазматическими хвостами, а также рецептором FKBP-MyD88-CD40. По сравнению с рецептором FKBP-MyD88-CD40 высвобождение цитокинов химерными рецепторами с FKBP-цитоплазматическими хвостами во время АР1903-обусловленого роста.

[0517] На Фиг. 43 представлено АР1903-обусловленное насыщение CAR-T-клеток, несущих цитоплазматический хвост.Пунктирная линия указывает процент клеток CAR+, высеянных в начале анализа (т.е. 20%). Как и ожидалось, воздействие экзогенным рекомбинантным IL-7 или IL-2 способствовала размножению и выживанию как CAR+, так и CAR- Т-клеток в одной и той же культуре, что приводило к стабильному поддержанию клеток CAR+ на уровне ~20%. И напротив, предполагается, что при воздействии АР1903 на отобранные и насыщенные CAR-T-клетки, экспрессирующие рецепторы с FKBP-цитоплазматическим хвостом, преимущество роста и выживания является специфическим для CAR+ Т-клеток.

[0518] На Фиг. 44A-44G представлено распределение подмножества CAR-T-клеток памяти в День 14 АР1903-обусловленного роста. По сравнению с цитоплазматическим хвостом IL7R(424-459; Y456F), который аннулирует активность Stat5 (Фиг. 5В), цитоплазматический хвост Stat5-компетентного IL7R(316-459) способствовал насыщению Tscm CAR+ Т-клеток в равной или большей степени, чем экзогенный рекомбинантный IL-7. Кроме того, по сравнению с воздействием экзогенным рекомбинантным IL-7 или IL-2, АР1903-индуцированная активация цитоплазматического хвоста EGFR(1122-1165) - отдельно или в комбинации с IL7R (316-459) - приводила к увеличению популяции Tem CAR+ Т-клеток, предполагается, что передача сигналов цитоплазматического хвоста EGFR (1122-1165) способствует дифференциации Tcm.

[0519] На Фиг. 45A-45G представлен фенотип истощения CAR+ Т-клеток на День 14 АР1903-обусловленного размножения. По сравнению с цитоплазматическим хвостом IL7R (424-459; Y456F), который аннулирует активность Stat5 (Фиг. 5В), Stat5-компетентный цитоплазматический хвост IL7R(316-459) эффективно подавлял экспрессию PD-1, Tim-3 и Lag-3 в равной или большей степени, чем экзогенный рекомбинантный IL-7. Кроме того, по сравнению с воздействием экзогенным рекомбинантным IL-7 или IL-2, АР1903-индуцированная активация цитоплазматического хвоста EGFR(1122-1165) - отдельно или в комбинации с IL7R(316-459) - подавляла экспрессию Tim-3 и Lag-3.

[0520] В целом, насыщение долгоживущих CAR-T-клеток может быть достигнуто путем включения стимулирующих память и предотвращающих истощение цитоплазматических хвостов, таких как IL7R(316-459) и/или EGFR (1122-1165); а CAR-T-клетки с сильными и быстрыми цитотоксическими функциями могут получить преимущество за счет включения эффектор-стимулирующих цитоплазматических хвостов, таких как II12Rb2smaII(775-825).

[0521] Хотя раскрытые в данном документе идеи были описаны со ссылкой на различные применения, способы, наборы и композиции, следует принимать во внимание, что различные изменения и модификации могут быть осуществлены без отступления от идей, описанных в данном документе, и приведенной ниже формулы изобретения. Вышеупомянутые примеры предложены для лучшей иллюстрации раскрытых в данном документе идей и не предназначены для ограничения объема идей, представленных в данном документе. Хотя данные идеи были описаны в терминах данных иллюстративных вариантов реализации данного изобретения, специалист в данной области техники легко поймет, что без проведения излишних экспериментов возможны многочисленные вариации и модификации данных иллюстративных вариантов реализации данного изобретения. Все такие вариации и модификации находятся в пределах объема текущих идей.

[0522] Все ссылки, процитированные в данном документе, включая патенты, заявки на патенты, статьи, учебники и т.п., а также ссылки, цитируемые в них, в той степени, в которой они еще не сообщались, включены в данный документ в полном объеме посредством ссылки. В случае, если один или более включенных литературных источников и подобных материалов отличаются от данной заявки или противоречат ей, включая, но не ограничиваясь ими, определенные термины, использование терминов, описанные способы и т.п., то данная заявка имеет преимущественную силу.

[0523] Вышеприведенное описание и примеры подробно описывают некоторые конкретные варианты реализации данного изобретения и описывают лучший вариант реализации изобретения, предусмотренный изобретателями. Однако следует понимать, что независимо от того, насколько подробно изложенное выше может быть представлено в тексте, изобретение может быть реализовано на практике многими способами, и изобретение следует толковать в соответствии с прилагаемой формулой изобретения и любыми ее эквивалентами.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> АЛЛОДЖЕН ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК.

<120> ИНДУЦИБЕЛЬНЫЕ ХИМЕРНЫЕ ЦИТОКИНОВЫЕ РЕЦЕПТОРЫ

<130> ALGN-016/01WO 333466-2243

<150> US 62/637,600

<151> 2018-03-02

<160> 311

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 422

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-508;L241G,L242P)-V5

<400> 1

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Trp Gly Thr Met Gln Ala Val Glu Pro Gly Thr Asp Asp Glu Gly

245 250 255

Pro Leu Leu Glu Pro Val Gly Ser Glu His Ala Gln Asp Thr Tyr Leu

260 265 270

Val Leu Asp Lys Trp Leu Leu Pro Arg Asn Pro Pro Ser Glu Asp Leu

275 280 285

Pro Gly Pro Gly Gly Ser Val Asp Ile Val Ala Met Asp Glu Gly Ser

290 295 300

Glu Ala Ser Ser Cys Ser Ser Ala Leu Ala Ser Lys Pro Ser Pro Glu

305 310 315 320

Gly Ala Ser Ala Ala Ser Phe Glu Tyr Thr Ile Leu Asp Pro Ser Ser

325 330 335

Gln Leu Leu Arg Pro Trp Thr Leu Cys Pro Glu Leu Pro Pro Thr Pro

340 345 350

Pro His Leu Lys Tyr Leu Tyr Leu Val Val Ser Asp Ser Gly Ile Ser

355 360 365

Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Asp Ser Gln Gly Ala Gln Gly Gly Leu Ser

370 375 380

Asp Gly Pro Tyr Ser Asn Pro Tyr Glu Asn Ser Leu Ile Pro Ala Ala

385 390 395 400

Glu Pro Leu Pro Pro Ser Tyr Val Ala Cys Ser Ile Pro Asn Pro Leu

405 410 415

Leu Gly Leu Asp Ser Thr

420

<210> 2

<211> 461

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> V5-EpoR(273-508)-FKBP(F36V)-FKBP(F36V)

<400> 2

Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr Ser His Arg Arg Ala

1 5 10 15

Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro Glu Ser Glu Phe

20 25 30

Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln Leu Trp Leu Tyr

35 40 45

Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr Pro Phe Thr Glu

50 55 60

Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg Cys Trp Gly Thr

65 70 75 80

Met Gln Ala Val Glu Pro Gly Thr Asp Asp Glu Gly Pro Leu Leu Glu

85 90 95

Pro Val Gly Ser Glu His Ala Gln Asp Thr Tyr Leu Val Leu Asp Lys

100 105 110

Trp Leu Leu Pro Arg Asn Pro Pro Ser Glu Asp Leu Pro Gly Pro Gly

115 120 125

Gly Ser Val Asp Ile Val Ala Met Asp Glu Gly Ser Glu Ala Ser Ser

130 135 140

Cys Ser Ser Ala Leu Ala Ser Lys Pro Ser Pro Glu Gly Ala Ser Ala

145 150 155 160

Ala Ser Phe Glu Tyr Thr Ile Leu Asp Pro Ser Ser Gln Leu Leu Arg

165 170 175

Pro Trp Thr Leu Cys Pro Glu Leu Pro Pro Thr Pro Pro His Leu Lys

180 185 190

Tyr Leu Tyr Leu Val Val Ser Asp Ser Gly Ile Ser Thr Asp Tyr Ser

195 200 205

Ser Gly Asp Ser Gln Gly Ala Gln Gly Gly Leu Ser Asp Gly Pro Tyr

210 215 220

Ser Asn Pro Tyr Glu Asn Ser Leu Ile Pro Ala Ala Glu Pro Leu Pro

225 230 235 240

Pro Ser Tyr Val Ala Cys Ser Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser

245 250 255

Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val

260 265 270

His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg

275 280 285

Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile

290 295 300

Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala

305 310 315 320

Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro

325 330 335

Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu

340 345 350

Lys Leu Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr

355 360 365

Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu

370 375 380

Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe

385 390 395 400

Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly

405 410 415

Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro

420 425 430

Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His

435 440 445

Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu

450 455 460

<210> 3

<211> 461

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> V5-EpoR(273-508)-FKBP(E31G,36V,R71G,K105E)-FKBP(E31G,36V,R71G,K10

5E)

<400> 3

Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr Ser His Arg Arg Ala

1 5 10 15

Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro Glu Ser Glu Phe

20 25 30

Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln Leu Trp Leu Tyr

35 40 45

Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr Pro Phe Thr Glu

50 55 60

Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg Cys Trp Gly Thr

65 70 75 80

Met Gln Ala Val Glu Pro Gly Thr Asp Asp Glu Gly Pro Leu Leu Glu

85 90 95

Pro Val Gly Ser Glu His Ala Gln Asp Thr Tyr Leu Val Leu Asp Lys

100 105 110

Trp Leu Leu Pro Arg Asn Pro Pro Ser Glu Asp Leu Pro Gly Pro Gly

115 120 125

Gly Ser Val Asp Ile Val Ala Met Asp Glu Gly Ser Glu Ala Ser Ser

130 135 140

Cys Ser Ser Ala Leu Ala Ser Lys Pro Ser Pro Glu Gly Ala Ser Ala

145 150 155 160

Ala Ser Phe Glu Tyr Thr Ile Leu Asp Pro Ser Ser Gln Leu Leu Arg

165 170 175

Pro Trp Thr Leu Cys Pro Glu Leu Pro Pro Thr Pro Pro His Leu Lys

180 185 190

Tyr Leu Tyr Leu Val Val Ser Asp Ser Gly Ile Ser Thr Asp Tyr Ser

195 200 205

Ser Gly Asp Ser Gln Gly Ala Gln Gly Gly Leu Ser Asp Gly Pro Tyr

210 215 220

Ser Asn Pro Tyr Glu Asn Ser Leu Ile Pro Ala Ala Glu Pro Leu Pro

225 230 235 240

Pro Ser Tyr Val Ala Cys Ser Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser

245 250 255

Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val

260 265 270

His Tyr Thr Gly Met Leu Gly Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg

275 280 285

Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile

290 295 300

Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Gly Ala

305 310 315 320

Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro

325 330 335

Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu

340 345 350

Glu Leu Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr

355 360 365

Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu

370 375 380

Gly Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe

385 390 395 400

Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly

405 410 415

Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Gly Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro

420 425 430

Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His

435 440 445

Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Glu Leu Glu

450 455 460

<210> 4

<211> 527

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-GHR(353-638)

<400> 4

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Pro Asp Glu Lys Thr Glu Glu Ser Asp Thr Asp Arg Leu Leu Ser

245 250 255

Ser Asp His Glu Lys Ser His Ser Asn Leu Gly Val Lys Asp Gly Asp

260 265 270

Ser Gly Arg Thr Ser Cys Cys Glu Pro Asp Ile Leu Glu Thr Asp Phe

275 280 285

Asn Ala Asn Asp Ile His Glu Gly Thr Ser Glu Val Ala Gln Pro Gln

290 295 300

Arg Leu Lys Gly Glu Ala Asp Leu Leu Cys Leu Asp Gln Lys Asn Gln

305 310 315 320

Asn Asn Ser Pro Tyr His Asp Ala Cys Pro Ala Thr Gln Gln Pro Ser

325 330 335

Val Ile Gln Ala Glu Lys Asn Lys Pro Gln Pro Leu Pro Thr Glu Gly

340 345 350

Ala Glu Ser Thr His Gln Ala Ala His Ile Gln Leu Ser Asn Pro Ser

355 360 365

Ser Leu Ser Asn Ile Asp Phe Tyr Ala Gln Val Ser Asp Ile Thr Pro

370 375 380

Ala Gly Ser Val Val Leu Ser Pro Gly Gln Lys Asn Lys Ala Gly Met

385 390 395 400

Ser Gln Cys Asp Met His Pro Glu Met Val Ser Leu Cys Gln Glu Asn

405 410 415

Phe Leu Met Asp Asn Ala Tyr Phe Cys Glu Ala Asp Ala Lys Lys Cys

420 425 430

Ile Pro Val Ala Pro His Ile Lys Val Glu Ser His Ile Gln Pro Ser

435 440 445

Leu Asn Gln Glu Asp Ile Tyr Ile Thr Thr Glu Ser Leu Thr Thr Ala

450 455 460

Ala Gly Arg Pro Gly Thr Gly Glu His Val Pro Gly Ser Glu Met Pro

465 470 475 480

Val Pro Asp Tyr Thr Ser Ile His Ile Val Gln Ser Pro Gln Gly Leu

485 490 495

Ile Leu Asn Ala Thr Ala Leu Pro Leu Pro Asp Lys Glu Phe Leu Ser

500 505 510

Ser Cys Gly Tyr Val Ser Thr Asp Gln Leu Asn Lys Ile Met Pro

515 520 525

<210> 5

<211> 460

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL2Rb(333-551)

<400> 5

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Val Thr Gln Leu Leu Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala

245 250 255

Ser Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly

260 265 270

Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln

275 280 285

Val Tyr Phe Thr Tyr Asp Pro Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asp Glu Gly

290 295 300

Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu

305 310 315 320

Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu

325 330 335

Leu Leu Phe Ser Pro Ser Leu Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro Ser Thr

340 345 350

Ala Pro Gly Gly Ser Gly Ala Gly Glu Glu Arg Met Pro Pro Ser Leu

355 360 365

Gln Glu Arg Val Pro Arg Asp Trp Asp Pro Gln Pro Leu Gly Pro Pro

370 375 380

Thr Pro Gly Val Pro Asp Leu Val Asp Phe Gln Pro Pro Pro Glu Leu

385 390 395 400

Val Leu Arg Glu Ala Gly Glu Glu Val Pro Asp Ala Gly Pro Arg Glu

405 410 415

Gly Val Ser Phe Pro Trp Ser Arg Pro Pro Gly Gln Gly Glu Phe Arg

420 425 430

Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu

435 440 445

Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

450 455 460

<210> 6

<211> 385

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(316-459)

<400> 6

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln

245 250 255

Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser

260 265 270

Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly

275 280 285

Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp

290 295 300

Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly

305 310 315 320

Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr

325 330 335

Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu

340 345 350

Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly

355 360 365

Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn

370 375 380

Gln

385

<210> 7

<211> 390

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL12Rb2(714-862)

<400> 7

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Val Thr Pro Val Phe Arg His Pro Pro Cys Ser Asn Trp Pro Gln

245 250 255

Arg Glu Lys Gly Ile Gln Gly His Gln Ala Ser Glu Lys Asp Met Met

260 265 270

His Ser Ala Ser Ser Pro Pro Pro Pro Arg Ala Leu Gln Ala Glu Ser

275 280 285

Arg Gln Leu Val Asp Leu Tyr Lys Val Leu Glu Ser Arg Gly Ser Asp

290 295 300

Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly

305 310 315 320

Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile Asp Asp Leu

325 330 335

Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro

340 345 350

Gln His Ile Ser Leu Ser Val Phe Pro Ser Ser Ser Leu His Pro Leu

355 360 365

Thr Phe Ser Cys Gly Asp Lys Leu Thr Leu Asp Gln Leu Lys Met Arg

370 375 380

Cys Asp Ser Leu Met Leu

385 390

<210> 8

<211> 292

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL12Rb2(775-825)

<400> 8

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu

245 250 255

Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile

260 265 270

Asp Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu

275 280 285

Leu Glu Pro Gln

290

<210> 9

<211> 458

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL21R(322-538)

<400> 9

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Pro Arg Ser Pro Ala Lys Arg Leu Gln Leu Thr Glu Leu Gln Glu

245 250 255

Pro Ala Glu Leu Val Glu Ser Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp

260 265 270

Pro Thr Ala Gln Asn Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp

275 280 285

Arg Pro Tyr Gly Leu Val Ser Ile Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala

290 295 300

Glu Gly Pro Cys Thr Trp Pro Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro

305 310 315 320

Ala Leu Asp Leu Asp Ala Gly Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp

325 330 335

Pro Leu Leu Asp Ala Gly Thr Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser

340 345 350

Ala Gly Ser Pro Gly Leu Gly Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg

355 360 365

Leu Lys Pro Pro Leu Ala Asp Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro

370 375 380

Trp Gly Gly Arg Ser Pro Gly Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser

385 390 395 400

Pro Leu Ala Gly Leu Asp Met Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly

405 410 415

Ser Asp Cys Ser Ser Pro Val Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp

420 425 430

Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr Leu Arg Gln Trp Val Val Ile Pro Pro

435 440 445

Pro Leu Ser Ser Pro Gly Pro Gln Ala Ser

450 455

<210> 10

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IFNAR2(310-515)

<400> 10

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Lys Lys Lys Val Trp Asp Tyr Asn Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Ser

245 250 255

Asp Thr Glu Ala Ala Pro Arg Thr Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Met His

260 265 270

Gly Leu Thr Val Arg Pro Leu Gly Gln Ala Ser Ala Thr Ser Thr Glu

275 280 285

Ser Gln Leu Ile Asp Pro Glu Ser Glu Glu Glu Pro Asp Leu Pro Glu

290 295 300

Val Asp Val Glu Leu Pro Thr Met Pro Lys Asp Ser Pro Gln Gln Leu

305 310 315 320

Glu Leu Leu Ser Gly Pro Cys Glu Arg Arg Lys Ser Pro Leu Gln Asp

325 330 335

Pro Phe Pro Glu Glu Asp Tyr Ser Ser Thr Glu Gly Ser Gly Gly Arg

340 345 350

Ile Thr Phe Asn Val Asp Leu Asn Ser Val Phe Leu Arg Val Leu Asp

355 360 365

Asp Glu Asp Ser Asp Asp Leu Glu Ala Pro Leu Met Leu Ser Ser His

370 375 380

Leu Glu Glu Met Val Asp Pro Glu Asp Pro Asp Asn Val Gln Ser Asn

385 390 395 400

His Leu Leu Ala Ser Gly Glu Gly Thr Gln Pro Thr Phe Pro Ser Pro

405 410 415

Ser Ser Glu Gly Leu Trp Ser Glu Asp Ala Pro Ser Asp Gln Ser Asp

420 425 430

Thr Ser Glu Ser Asp Val Asp Leu Gly Asp Gly Tyr Ile Met Arg

435 440 445

<210> 11

<211> 462

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IFNAR1(300-520)

<400> 11

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Arg Gly Val Arg Pro Thr Pro Arg Val Arg Ala Pro Ala Thr Gln

245 250 255

Gln Thr Arg Trp Lys Lys Asp Leu Ala Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp

260 265 270

Glu Glu Asp Thr Glu Asp Gly Val Ser Phe Gln Pro Tyr Ile Glu Pro

275 280 285

Pro Ser Phe Leu Gly Gln Glu His Gln Ala Pro Gly His Ser Glu Ala

290 295 300

Gly Gly Val Asp Ser Gly Arg Pro Arg Ala Pro Leu Val Pro Ser Glu

305 310 315 320

Gly Ser Ser Ala Trp Asp Ser Ser Asp Arg Ser Trp Ala Ser Thr Val

325 330 335

Asp Ser Ser Trp Asp Arg Ala Gly Ser Ser Gly Tyr Leu Ala Glu Lys

340 345 350

Gly Pro Gly Gln Gly Pro Gly Gly Asp Gly His Gln Glu Ser Leu Pro

355 360 365

Pro Pro Glu Phe Ser Lys Asp Ser Gly Phe Leu Glu Glu Leu Pro Glu

370 375 380

Asp Asn Leu Ser Ser Trp Ala Thr Trp Gly Thr Leu Pro Pro Glu Pro

385 390 395 400

Asn Leu Val Pro Gly Gly Pro Pro Val Ser Leu Gln Thr Leu Thr Phe

405 410 415

Cys Trp Glu Ser Ser Pro Glu Glu Glu Glu Glu Ala Arg Glu Ser Glu

420 425 430

Ile Glu Asp Ser Asp Ala Gly Ser Trp Gly Ala Glu Ser Thr Gln Arg

435 440 445

Thr Glu Asp Arg Gly Arg Thr Leu Gly His Tyr Met Ala Arg

450 455 460

<210> 12

<211> 444

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8

SS-Myc-FKBP(F36V)-muEpoR(236-337;L264G,L265P)-muIL2Rb(337-539)

<400> 12

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Ala Ser

130 135 140

Leu Leu Thr Ala Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Leu Ile Ser Leu Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Thr Leu Gln Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Leu Gln Arg Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Gly Ser

210 215 220

Ser Phe Pro Glu Asp Pro Pro Ala His Leu Glu Val Leu Ser Glu Pro

225 230 235 240

Arg Ala Val Gln Leu Leu Leu Leu Gln Lys Asp Ser Ala Pro Leu Pro

245 250 255

Ser Pro Ser Gly His Ser Gln Ala Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr

260 265 270

Phe Phe Phe His Leu Pro Asn Ala Leu Glu Ile Glu Ser Cys Gln Val

275 280 285

Tyr Phe Thr Tyr Asp Pro Cys Val Glu Glu Glu Val Glu Glu Asp Gly

290 295 300

Ser Arg Leu Pro Glu Gly Ser Pro His Pro Pro Leu Leu Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Glu Gln Asp Asp Tyr Cys Ala Phe Pro Pro Arg Asp Asp Leu Leu

325 330 335

Leu Phe Ser Pro Ser Leu Ser Thr Pro Asn Thr Ala Tyr Gly Gly Ser

340 345 350

Arg Ala Pro Glu Glu Arg Ser Pro Leu Ser Leu His Glu Gly Leu Pro

355 360 365

Ser Leu Ala Ser Arg Asp Leu Met Gly Leu Gln Arg Pro Leu Glu Arg

370 375 380

Met Pro Glu Gly Asp Gly Glu Gly Leu Ser Ala Asn Ser Ser Gly Glu

385 390 395 400

Gln Ala Ser Val Pro Glu Gly Asn Leu His Gly Gln Asp Gln Asp Arg

405 410 415

Gly Gln Gly Pro Ile Leu Thr Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu

420 425 430

Gln Glu Leu Gln Ala Gln Asp Ser Val His Leu Ile

435 440

<210> 13

<211> 385

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-muEpoR(236-337;L264G,L265P)-muIL7R(316-459)

<400> 13

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Ala Ser

130 135 140

Leu Leu Thr Ala Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Leu Ile Ser Leu Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Thr Leu Gln Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Leu Gln Arg Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Gly Ser

210 215 220

Ser Phe Pro Glu Asp Pro Pro Ala His Leu Glu Val Leu Ser Glu Pro

225 230 235 240

Arg Ala Arg Asp Glu Val Glu Ser Phe Leu Pro Asn Asp Leu Pro Ala

245 250 255

Gln Pro Glu Glu Leu Glu Thr Gln Gly His Arg Ala Ala Val His Ser

260 265 270

Ala Asn Arg Ser Pro Glu Thr Ser Val Ser Pro Pro Glu Thr Val Arg

275 280 285

Arg Glu Ser Pro Leu Arg Cys Leu Ala Arg Asn Leu Ser Thr Cys Asn

290 295 300

Ala Pro Pro Leu Leu Ser Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Arg Asp Gly Asp

305 310 315 320

Arg Asn Arg Pro Pro Val Tyr Gln Asp Leu Leu Pro Asn Ser Gly Asn

325 330 335

Thr Asn Val Pro Val Pro Val Pro Gln Pro Leu Pro Phe Gln Ser Gly

340 345 350

Ile Leu Ile Pro Val Ser Gln Arg Gln Pro Ile Ser Thr Ser Ser Val

355 360 365

Leu Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn

370 375 380

Lys

385

<210> 14

<211> 436

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8

SS-Myc-FKBP(F36V)-EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(316-459)-IL12Rb2

(775-825)

<400> 14

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln

245 250 255

Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser

260 265 270

Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly

275 280 285

Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp

290 295 300

Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly

305 310 315 320

Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr

325 330 335

Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu

340 345 350

Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly

355 360 365

Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn

370 375 380

Gln Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu

385 390 395 400

Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile

405 410 415

Asp Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu

420 425 430

Leu Glu Pro Gln

435

<210> 15

<211> 426

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8

SS-Myc-FKBP(F36V)-GP130(609-700)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825)

<400> 15

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Thr Thr Pro Lys Phe

130 135 140

Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro Val Cys Leu Ala Phe

145 150 155 160

Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys Phe Asn Lys Arg Asp

165 170 175

Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro Asp Pro Ser Lys Ser

180 185 190

His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro Arg His Asn Phe Asn

195 200 205

Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe Thr Asp Val Ser Val

210 215 220

Val Glu Ile Glu Ala Asn Asp Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu

225 230 235 240

Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu

245 250 255

Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile

260 265 270

Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly

275 280 285

Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu

290 295 300

Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu

305 310 315 320

Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser

325 330 335

Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro

340 345 350

Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met

355 360 365

Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala

370 375 380

Cys Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly

385 390 395 400

Tyr Leu Pro Ser Asn Ile Asp Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu

405 410 415

Ala Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gln

420 425

<210> 16

<211> 433

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-PrlR(221-319)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825)

<400> 16

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ala Thr Phe Ile Gln

130 135 140

Ile Pro Ser Asp Phe Thr Met Asn Asp Thr Thr Val Trp Ile Ser Val

145 150 155 160

Ala Val Leu Ser Ala Val Ile Cys Leu Ile Ile Val Trp Ala Val Ala

165 170 175

Leu Lys Gly Tyr Ser Met Val Thr Cys Ile Phe Pro Pro Val Pro Gly

180 185 190

Pro Lys Ile Lys Gly Phe Asp Ala His Leu Leu Glu Lys Gly Lys Ser

195 200 205

Glu Glu Leu Leu Ser Ala Leu Gly Cys Gln Asp Phe Pro Pro Thr Ser

210 215 220

Asp Tyr Glu Asp Leu Leu Val Glu Tyr Leu Glu Val Asp Asp Ala Arg

225 230 235 240

Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu

245 250 255

Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys

260 265 270

Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser

275 280 285

Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile

290 295 300

Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly

305 310 315 320

Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser

325 330 335

Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn

340 345 350

Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln

355 360 365

Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln Ser Asp

370 375 380

Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly

385 390 395 400

Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile Asp Asp Leu

405 410 415

Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro

420 425 430

Gln

<210> 17

<211> 436

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-GHR(251-352)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825)

<400> 17

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Leu Pro Gln Met Ser

130 135 140

Gln Phe Thr Cys Glu Glu Asp Phe Tyr Phe Pro Trp Leu Leu Ile Ile

145 150 155 160

Ile Phe Gly Ile Phe Gly Leu Thr Val Met Leu Phe Val Phe Leu Phe

165 170 175

Ser Lys Gln Gln Arg Ile Lys Met Leu Ile Leu Pro Pro Val Pro Val

180 185 190

Pro Lys Ile Lys Gly Ile Asp Pro Asp Leu Leu Lys Glu Gly Lys Leu

195 200 205

Glu Glu Val Asn Thr Ile Leu Ala Ile His Asp Ser Tyr Lys Pro Glu

210 215 220

Phe His Ser Asp Asp Ser Trp Val Glu Phe Ile Glu Leu Asp Ile Asp

225 230 235 240

Glu Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln

245 250 255

Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser

260 265 270

Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly

275 280 285

Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp

290 295 300

Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly

305 310 315 320

Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr

325 330 335

Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu

340 345 350

Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly

355 360 365

Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn

370 375 380

Gln Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu

385 390 395 400

Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile

405 410 415

Asp Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu

420 425 430

Leu Glu Pro Gln

435

<210> 18

<211> 431

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-GCSFR(614-710)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825)

<400> 18

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Leu Thr Leu Met Thr

130 135 140

Leu Thr Pro Glu Gly Ser Glu Leu His Ile Ile Leu Gly Leu Phe Gly

145 150 155 160

Leu Leu Leu Leu Leu Thr Cys Leu Cys Gly Thr Ala Trp Leu Cys Cys

165 170 175

Ser Pro Asn Arg Lys Asn Pro Leu Trp Pro Ser Val Pro Asp Pro Ala

180 185 190

His Ser Ser Leu Gly Ser Trp Val Pro Thr Ile Met Glu Glu Asp Ala

195 200 205

Phe Gln Leu Pro Gly Leu Gly Thr Pro Pro Ile Thr Lys Leu Thr Val

210 215 220

Leu Glu Glu Asp Glu Lys Lys Pro Val Pro Trp Glu Ala Arg Asp Glu

225 230 235 240

Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser

245 250 255

Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser

260 265 270

Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu

275 280 285

Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser

290 295 300

Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His

305 310 315 320

Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu

325 330 335

Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val

340 345 350

Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu

355 360 365

Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln Ser Asp Pro Lys

370 375 380

Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp Leu

385 390 395 400

Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile Asp Asp Leu Pro Ser

405 410 415

His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gln

420 425 430

<210> 19

<211> 439

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-TPOR/MPLR(478-582)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825)

<400> 19

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Asp Pro Thr Arg

130 135 140

Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile Ser Leu Val Thr Ala Leu

145 150 155 160

His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg

165 170 175

Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro

180 185 190

Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr

195 200 205

Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu

210 215 220

Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr

225 230 235 240

Pro Leu Pro Leu Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr

245 250 255

Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp

260 265 270

Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu

275 280 285

Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser

290 295 300

Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg

305 310 315 320

Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser

325 330 335

Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser

340 345 350

Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr

355 360 365

Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe

370 375 380

Tyr Gln Asn Gln Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp

385 390 395 400

Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro

405 410 415

Ser Asn Ile Asp Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser

420 425 430

Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gln

435

<210> 20

<211> 282

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(376-416)

<400> 20

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys

245 250 255

Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu

260 265 270

Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro

275 280

<210> 21

<211> 277

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(424-459)

<400> 21

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu

245 250 255

Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser

260 265 270

Phe Tyr Gln Asn Gln

275

<210> 22

<211> 309

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(376-416,424-459)

<400> 22

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys

245 250 255

Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu

260 265 270

Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Gln Gly Gln Pro Ile Leu

275 280 285

Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser

290 295 300

Phe Tyr Gln Asn Gln

305

<210> 23

<211> 277

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(424-459;Y456F)

<400> 23

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu

245 250 255

Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser

260 265 270

Phe Phe Gln Asn Gln

275

<210> 24

<211> 309

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL7R(376-416,424-459;Y456F)

<400> 24

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys

245 250 255

Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu

260 265 270

Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Gln Gly Gln Pro Ile Leu

275 280 285

Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser

290 295 300

Phe Phe Gln Asn Gln

305

<210> 25

<211> 282

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL2Rb(393-433)

<400> 25

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro

245 250 255

Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser

260 265 270

Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser

275 280

<210> 26

<211> 275

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL2Rb(518-551)

<400> 26

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn

245 250 255

Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr

260 265 270

His Leu Val

275

<210> 27

<211> 323

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL2Rb(339-379,393-433)

<400> 27

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His

245 250 255

Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu

260 265 270

Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Asp Glu Gly Val Ala Gly

275 280 285

Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu

290 295 300

Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe

305 310 315 320

Ser Pro Ser

<210> 28

<211> 316

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL2Rb(339-379,518-551)

<400> 28

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His

245 250 255

Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu

260 265 270

Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Gly Gln Gly Glu Phe Arg

275 280 285

Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu

290 295 300

Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

305 310 315

<210> 29

<211> 316

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL2Rb(393-433,518-551)

<400> 29

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro

245 250 255

Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser

260 265 270

Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg

275 280 285

Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu

290 295 300

Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

305 310 315

<210> 30

<211> 357

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-

EpoR(237-338;L241G,L242P)-IL2Rb(339-379,393-433,518-551)

<400> 30

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His

245 250 255

Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu

260 265 270

Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Asp Glu Gly Val Ala Gly

275 280 285

Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu

290 295 300

Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe

305 310 315 320

Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro

325 330 335

Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp

340 345 350

Pro Thr His Leu Val

355

<210> 31

<211> 472

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(955-1186)

<400> 31

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro Thr Asp

245 250 255

Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp Asp Val

260 265 270

Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe Ser Ser

275 280 285

Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Ala Thr Ser

290 295 300

Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln Ser Cys

305 310 315 320

Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Tyr Ser Ser Asp Pro Thr

325 330 335

Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp Asp Thr Phe Leu Pro Val Pro

340 345 350

Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Ser Val Gln

355 360 365

Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg Asp

370 375 380

Pro His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro Glu Tyr

385 390 395 400

Leu Asn Thr Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro

405 410 415

Ala His Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro

420 425 430

Asp Tyr Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile

435 440 445

Phe Lys Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro

450 455 460

Gln Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala

465 470

<210> 32

<211> 459

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-

EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(955-1044,1058-1186;Y974F)

<400> 32

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro Thr Asp

245 250 255

Ser Asn Phe Phe Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp Asp Val

260 265 270

Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe Ser Ser

275 280 285

Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Ala Thr Ser

290 295 300

Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln Ser Cys

305 310 315 320

Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Ile Asp Asp Thr Phe Leu

325 330 335

Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly

340 345 350

Ser Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro

355 360 365

Ser Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn

370 375 380

Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe

385 390 395 400

Asp Ser Pro Ala His Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu

405 410 415

Asp Asn Pro Asp Tyr Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro

420 425 430

Asn Gly Ile Phe Lys Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg

435 440 445

Val Ala Pro Gln Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala

450 455

<210> 33

<211> 295

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-

EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(955-1009;Y974F)

<400> 33

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro Thr Asp

245 250 255

Ser Asn Phe Phe Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp Asp Val

260 265 270

Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe Ser Ser

275 280 285

Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro

290 295

<210> 34

<211> 295

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1019-1085)

<400> 34

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln Ser

245 250 255

Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Ile Asp Asp Thr Phe

260 265 270

Leu Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala

275 280 285

Gly Ser Val Gln Asn Pro Val

290 295

<210> 35

<211> 295

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-

EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1037-1044,1058-1103;Y1068/1101F)

<400> 35

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Ile Asp Asp Thr Phe Leu Pro

245 250 255

Val Pro Glu Phe Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Ser

260 265 270

Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser

275 280 285

Arg Asp Pro His Phe Gln Asp

290 295

<210> 36

<211> 295

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-

EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1066-1118;Y1068/1086F)

<400> 36

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Val Pro Glu Phe Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly

245 250 255

Ser Val Gln Asn Pro Val Phe His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro

260 265 270

Ser Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn

275 280 285

Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val

290 295

<210> 37

<211> 295

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-

EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1122-1165)

<400> 37

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr

245 250 255

Phe Asp Ser Pro Ala His Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser

260 265 270

Leu Asp Asn Pro Asp Tyr Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys

275 280 285

Pro Asn Gly Ile Phe Lys Gly

290 295

<210> 38

<211> 295

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-

EpoR(237-338;L241G,L242P)-EGFR(1133-1186;Y1148F)

<400> 38

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp

245 250 255

Phe Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe

260 265 270

Lys Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln

275 280 285

Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala

290 295

<210> 39

<211> 397

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-BLNK(53-208)

<400> 39

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Ala Ser Glu Ser Pro Ala Asp Glu Glu Glu Gln Trp Ser Asp Asp

245 250 255

Phe Asp Ser Asp Tyr Glu Asn Pro Asp Glu His Ser Asp Ser Glu Met

260 265 270

Tyr Val Met Pro Ala Glu Glu Asn Ala Asp Asp Ser Tyr Glu Pro Pro

275 280 285

Pro Val Glu Gln Glu Thr Arg Pro Val His Pro Ala Leu Pro Phe Ala

290 295 300

Arg Gly Glu Tyr Ile Asp Asn Arg Ser Ser Gln Arg His Ser Pro Pro

305 310 315 320

Phe Ser Lys Thr Leu Pro Ser Lys Pro Ser Trp Pro Ser Glu Lys Ala

325 330 335

Arg Leu Thr Ser Thr Leu Pro Ala Leu Thr Ala Leu Gln Lys Pro Gln

340 345 350

Val Pro Pro Lys Pro Lys Gly Leu Leu Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Val

355 360 365

Val Pro Val Glu Asp Asn Asp Glu Asn Tyr Ile His Pro Thr Glu Ser

370 375 380

Ser Ser Pro Pro Pro Glu Lys Ala Pro Met Val Asn Arg

385 390 395

<210> 40

<211> 397

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)- EpoR(237-338;L241G,L242P)-BLNK(53-208;Y72F)

<400> 40

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Ala Ser Glu Ser Pro Ala Asp Glu Glu Glu Gln Trp Ser Asp Asp

245 250 255

Phe Asp Ser Asp Phe Glu Asn Pro Asp Glu His Ser Asp Ser Glu Met

260 265 270

Tyr Val Met Pro Ala Glu Glu Asn Ala Asp Asp Ser Tyr Glu Pro Pro

275 280 285

Pro Val Glu Gln Glu Thr Arg Pro Val His Pro Ala Leu Pro Phe Ala

290 295 300

Arg Gly Glu Tyr Ile Asp Asn Arg Ser Ser Gln Arg His Ser Pro Pro

305 310 315 320

Phe Ser Lys Thr Leu Pro Ser Lys Pro Ser Trp Pro Ser Glu Lys Ala

325 330 335

Arg Leu Thr Ser Thr Leu Pro Ala Leu Thr Ala Leu Gln Lys Pro Gln

340 345 350

Val Pro Pro Lys Pro Lys Gly Leu Leu Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Val

355 360 365

Val Pro Val Glu Asp Asn Asp Glu Asn Tyr Ile His Pro Thr Glu Ser

370 375 380

Ser Ser Pro Pro Pro Glu Lys Ala Pro Met Val Asn Arg

385 390 395

<210> 41

<211> 397

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-Myc-FKBP(F36V)-

EpoR(237-338;L241G,L242P)-BLNK(53-208;Y72F,Y96F)

<400> 41

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Met

20 25 30

Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro

35 40 45

Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp

50 55 60

Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe

65 70 75 80

Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala

85 90 95

Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr

100 105 110

Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr

115 120 125

Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Glu Pro Val Ser

130 135 140

Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser Leu

145 150 155 160

Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val Leu Ala Leu Leu Ser

165 170 175

His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser Pro

180 185 190

Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe Gln

195 200 205

Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys Thr

210 215 220

Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu Arg

225 230 235 240

Cys Ala Ser Glu Ser Pro Ala Asp Glu Glu Glu Gln Trp Ser Asp Asp

245 250 255

Phe Asp Ser Asp Phe Glu Asn Pro Asp Glu His Ser Asp Ser Glu Met

260 265 270

Tyr Val Met Pro Ala Glu Glu Asn Ala Asp Asp Ser Phe Glu Pro Pro

275 280 285

Pro Val Glu Gln Glu Thr Arg Pro Val His Pro Ala Leu Pro Phe Ala

290 295 300

Arg Gly Glu Tyr Ile Asp Asn Arg Ser Ser Gln Arg His Ser Pro Pro

305 310 315 320

Phe Ser Lys Thr Leu Pro Ser Lys Pro Ser Trp Pro Ser Glu Lys Ala

325 330 335

Arg Leu Thr Ser Thr Leu Pro Ala Leu Thr Ala Leu Gln Lys Pro Gln

340 345 350

Val Pro Pro Lys Pro Lys Gly Leu Leu Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Val

355 360 365

Val Pro Val Glu Asp Asn Asp Glu Asn Tyr Ile His Pro Thr Glu Ser

370 375 380

Ser Ser Pro Pro Pro Glu Lys Ala Pro Met Val Asn Arg

385 390 395

<210> 42

<211> 378

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)- TPOR/MPLR(478-582)-IL7R(316-459)

<400> 42

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Ala Arg Asp Glu Val Glu

225 230 235 240

Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys

245 250 255

Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp

260 265 270

Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser

290 295 300

Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr

305 310 315 320

Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro

325 330 335

Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln

340 345 350

Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr

355 360 365

Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln

370 375

<210> 43

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)- TPOR/MPLR(478-582)-IL2Rb(333-551)

<400> 43

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Val Thr Gln Leu Leu Leu

225 230 235 240

Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser

245 250 255

Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro

260 265 270

Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Val Tyr Phe Thr Tyr Asp Pro

275 280 285

Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly

290 295 300

Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr

305 310 315 320

Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Leu

325 330 335

Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro Ser Thr Ala Pro Gly Gly Ser Gly Ala

340 345 350

Gly Glu Glu Arg Met Pro Pro Ser Leu Gln Glu Arg Val Pro Arg Asp

355 360 365

Trp Asp Pro Gln Pro Leu Gly Pro Pro Thr Pro Gly Val Pro Asp Leu

370 375 380

Val Asp Phe Gln Pro Pro Pro Glu Leu Val Leu Arg Glu Ala Gly Glu

385 390 395 400

Glu Val Pro Asp Ala Gly Pro Arg Glu Gly Val Ser Phe Pro Trp Ser

405 410 415

Arg Pro Pro Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro

420 425 430

Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp

435 440 445

Pro Thr His Leu Val

450

<210> 44

<211> 309

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)- TPOR/MPLR(478-582)-IL2Rbsmall(393-433,518-551)

<400> 44

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Asp Glu Gly Val Ala Gly

225 230 235 240

Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu

245 250 255

Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe

260 265 270

Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro

275 280 285

Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp

290 295 300

Pro Thr His Leu Val

305

<210> 45

<211> 350

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-

TPOR/MPLR(478-582)-IL2Rbsmall(339-379,393-433,518-551)

<400> 45

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro

225 230 235 240

Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr

245 250 255

Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu

260 265 270

Ala Cys Gln Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro

275 280 285

Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe

290 295 300

Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu

305 310 315 320

Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu

325 330 335

Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

340 345 350

<210> 46

<211> 429

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)- TPOR/MPLR(478-582)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825)

<400> 46

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Ala Arg Asp Glu Val Glu

225 230 235 240

Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys

245 250 255

Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp

260 265 270

Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser

290 295 300

Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr

305 310 315 320

Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro

325 330 335

Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln

340 345 350

Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr

355 360 365

Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln Ser Asp Pro Lys Pro Glu

370 375 380

Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr

385 390 395 400

His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile Asp Asp Leu Pro Ser His Glu

405 410 415

Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gln

420 425

<210> 47

<211> 595

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)- TPOR/MPLR(478-582)-IL7R(316-459)-IL21R(322-538)

<400> 47

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Ala Arg Asp Glu Val Glu

225 230 235 240

Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys

245 250 255

Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp

260 265 270

Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser

290 295 300

Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr

305 310 315 320

Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro

325 330 335

Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln

340 345 350

Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr

355 360 365

Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln Pro Arg Ser Pro Ala Lys

370 375 380

Arg Leu Gln Leu Thr Glu Leu Gln Glu Pro Ala Glu Leu Val Glu Ser

385 390 395 400

Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp Pro Thr Ala Gln Asn Ser Gly

405 410 415

Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg Pro Tyr Gly Leu Val Ser

420 425 430

Ile Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala Glu Gly Pro Cys Thr Trp Pro

435 440 445

Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala Leu Asp Leu Asp Ala Gly

450 455 460

Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp Pro Leu Leu Asp Ala Gly Thr

465 470 475 480

Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Ala Gly Ser Pro Gly Leu Gly

485 490 495

Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu Lys Pro Pro Leu Ala Asp

500 505 510

Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro Trp Gly Gly Arg Ser Pro Gly

515 520 525

Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro Leu Ala Gly Leu Asp Met

530 535 540

Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly Ser Asp Cys Ser Ser Pro Val

545 550 555 560

Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr

565 570 575

Leu Arg Gln Trp Val Val Ile Pro Pro Pro Leu Ser Ser Pro Gly Pro

580 585 590

Gln Ala Ser

595

<210> 48

<211> 595

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)- TPOR/MPLR(478-582)- IL21R(322-538)-IL7R(316-459)

<400> 48

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Pro Arg Ser Pro Ala Lys

225 230 235 240

Arg Leu Gln Leu Thr Glu Leu Gln Glu Pro Ala Glu Leu Val Glu Ser

245 250 255

Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp Pro Thr Ala Gln Asn Ser Gly

260 265 270

Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg Pro Tyr Gly Leu Val Ser

275 280 285

Ile Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala Glu Gly Pro Cys Thr Trp Pro

290 295 300

Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala Leu Asp Leu Asp Ala Gly

305 310 315 320

Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp Pro Leu Leu Asp Ala Gly Thr

325 330 335

Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Ala Gly Ser Pro Gly Leu Gly

340 345 350

Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu Lys Pro Pro Leu Ala Asp

355 360 365

Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro Trp Gly Gly Arg Ser Pro Gly

370 375 380

Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro Leu Ala Gly Leu Asp Met

385 390 395 400

Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly Ser Asp Cys Ser Ser Pro Val

405 410 415

Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr

420 425 430

Leu Arg Gln Trp Val Val Ile Pro Pro Pro Leu Ser Ser Pro Gly Pro

435 440 445

Gln Ala Ser Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe

450 455 460

Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val

465 470 475 480

Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser

485 490 495

Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala

500 505 510

Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu

515 520 525

Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu

530 535 540

Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly

545 550 555 560

Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser

565 570 575

Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr

580 585 590

Gln Asn Gln

595

<210> 49

<211> 526

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-

TPOR/MPLR(478-582)-IL2Rbsmall(393-433,518-551)-IL21R(322-538)

<400> 49

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Asp Glu Gly Val Ala Gly

225 230 235 240

Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu

245 250 255

Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe

260 265 270

Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro

275 280 285

Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp

290 295 300

Pro Thr His Leu Val Pro Arg Ser Pro Ala Lys Arg Leu Gln Leu Thr

305 310 315 320

Glu Leu Gln Glu Pro Ala Glu Leu Val Glu Ser Asp Gly Val Pro Lys

325 330 335

Pro Ser Phe Trp Pro Thr Ala Gln Asn Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Ser

340 345 350

Glu Glu Arg Asp Arg Pro Tyr Gly Leu Val Ser Ile Asp Thr Val Thr

355 360 365

Val Leu Asp Ala Glu Gly Pro Cys Thr Trp Pro Cys Ser Cys Glu Asp

370 375 380

Asp Gly Tyr Pro Ala Leu Asp Leu Asp Ala Gly Leu Glu Pro Ser Pro

385 390 395 400

Gly Leu Glu Asp Pro Leu Leu Asp Ala Gly Thr Thr Val Leu Ser Cys

405 410 415

Gly Cys Val Ser Ala Gly Ser Pro Gly Leu Gly Gly Pro Leu Gly Ser

420 425 430

Leu Leu Asp Arg Leu Lys Pro Pro Leu Ala Asp Gly Glu Asp Trp Ala

435 440 445

Gly Gly Leu Pro Trp Gly Gly Arg Ser Pro Gly Gly Val Ser Glu Ser

450 455 460

Glu Ala Gly Ser Pro Leu Ala Gly Leu Asp Met Asp Thr Phe Asp Ser

465 470 475 480

Gly Phe Val Gly Ser Asp Cys Ser Ser Pro Val Glu Cys Asp Phe Thr

485 490 495

Ser Pro Gly Asp Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr Leu Arg Gln Trp Val

500 505 510

Val Ile Pro Pro Pro Leu Ser Ser Pro Gly Pro Gln Ala Ser

515 520 525

<210> 50

<211> 526

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-

TPOR/MPLR(478-582)- IL21R(322-538)-IL2Rbsmall(393-433,518-551)

<400> 50

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Pro Arg Ser Pro Ala Lys

225 230 235 240

Arg Leu Gln Leu Thr Glu Leu Gln Glu Pro Ala Glu Leu Val Glu Ser

245 250 255

Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp Pro Thr Ala Gln Asn Ser Gly

260 265 270

Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg Pro Tyr Gly Leu Val Ser

275 280 285

Ile Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala Glu Gly Pro Cys Thr Trp Pro

290 295 300

Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala Leu Asp Leu Asp Ala Gly

305 310 315 320

Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp Pro Leu Leu Asp Ala Gly Thr

325 330 335

Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Ala Gly Ser Pro Gly Leu Gly

340 345 350

Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu Lys Pro Pro Leu Ala Asp

355 360 365

Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro Trp Gly Gly Arg Ser Pro Gly

370 375 380

Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro Leu Ala Gly Leu Asp Met

385 390 395 400

Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly Ser Asp Cys Ser Ser Pro Val

405 410 415

Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr

420 425 430

Leu Arg Gln Trp Val Val Ile Pro Pro Pro Leu Ser Ser Pro Gly Pro

435 440 445

Gln Ala Ser Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro

450 455 460

Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe

465 470 475 480

Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu

485 490 495

Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu

500 505 510

Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

515 520 525

<210> 51

<211> 567

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-

TPOR/MPLR(478-582)-IL2Rbsmall(339-379,393-433,518-551)-IL21R(322-538)

<400> 51

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro

225 230 235 240

Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr

245 250 255

Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu

260 265 270

Ala Cys Gln Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro

275 280 285

Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe

290 295 300

Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu

305 310 315 320

Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu

325 330 335

Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val Pro Arg

340 345 350

Ser Pro Ala Lys Arg Leu Gln Leu Thr Glu Leu Gln Glu Pro Ala Glu

355 360 365

Leu Val Glu Ser Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp Pro Thr Ala

370 375 380

Gln Asn Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg Pro Tyr

385 390 395 400

Gly Leu Val Ser Ile Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala Glu Gly Pro

405 410 415

Cys Thr Trp Pro Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala Leu Asp

420 425 430

Leu Asp Ala Gly Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp Pro Leu Leu

435 440 445

Asp Ala Gly Thr Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Ala Gly Ser

450 455 460

Pro Gly Leu Gly Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu Lys Pro

465 470 475 480

Pro Leu Ala Asp Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro Trp Gly Gly

485 490 495

Arg Ser Pro Gly Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro Leu Ala

500 505 510

Gly Leu Asp Met Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly Ser Asp Cys

515 520 525

Ser Ser Pro Val Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp Glu Gly Pro

530 535 540

Pro Arg Ser Tyr Leu Arg Gln Trp Val Val Ile Pro Pro Pro Leu Ser

545 550 555 560

Ser Pro Gly Pro Gln Ala Ser

565

<210> 52

<211> 567

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-

TPOR/MPLR(478-582)- IL21R(322-538)-IL2Rbsmall(339-379,393-433,518-551)

<400> 52

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Pro Arg Ser Pro Ala Lys

225 230 235 240

Arg Leu Gln Leu Thr Glu Leu Gln Glu Pro Ala Glu Leu Val Glu Ser

245 250 255

Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp Pro Thr Ala Gln Asn Ser Gly

260 265 270

Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg Pro Tyr Gly Leu Val Ser

275 280 285

Ile Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala Glu Gly Pro Cys Thr Trp Pro

290 295 300

Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala Leu Asp Leu Asp Ala Gly

305 310 315 320

Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp Pro Leu Leu Asp Ala Gly Thr

325 330 335

Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Ala Gly Ser Pro Gly Leu Gly

340 345 350

Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu Lys Pro Pro Leu Ala Asp

355 360 365

Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro Trp Gly Gly Arg Ser Pro Gly

370 375 380

Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro Leu Ala Gly Leu Asp Met

385 390 395 400

Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly Ser Asp Cys Ser Ser Pro Val

405 410 415

Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr

420 425 430

Leu Arg Gln Trp Val Val Ile Pro Pro Pro Leu Ser Ser Pro Gly Pro

435 440 445

Gln Ala Ser Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser

450 455 460

Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe

465 470 475 480

His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Asp Glu Gly Val

485 490 495

Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser

500 505 510

Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu

515 520 525

Leu Phe Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg

530 535 540

Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly

545 550 555 560

Gln Asp Pro Thr His Leu Val

565

<210> 53

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-

TPOR/MPLR(478-582)-IL2Rbsmall(393-433,518-551)-IL7R(316-459)

<400> 53

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Asp Glu Gly Val Ala Gly

225 230 235 240

Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu

245 250 255

Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe

260 265 270

Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro

275 280 285

Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp

290 295 300

Pro Thr His Leu Val Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp

305 310 315 320

Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly

325 330 335

Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro

340 345 350

Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val

355 360 365

Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys

370 375 380

Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu

385 390 395 400

Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln

405 410 415

Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu

420 425 430

Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser

435 440 445

Phe Tyr Gln Asn Gln

450

<210> 54

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-

TPOR/MPLR(478-582)-IL7R(316-459)-IL2Rbsmall(393-433,518-551)

<400> 54

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Ala Arg Asp Glu Val Glu

225 230 235 240

Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys

245 250 255

Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp

260 265 270

Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser

290 295 300

Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr

305 310 315 320

Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro

325 330 335

Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln

340 345 350

Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr

355 360 365

Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln Asp Glu Gly Val Ala Gly

370 375 380

Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu

385 390 395 400

Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe

405 410 415

Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro

420 425 430

Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp

435 440 445

Pro Thr His Leu Val

450

<210> 55

<211> 494

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-

TPOR/MPLR(478-582)- IL2Rbsmall(339-379,393-433,518-551)-IL7R(316-459)

<400> 55

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro

225 230 235 240

Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr

245 250 255

Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu

260 265 270

Ala Cys Gln Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro

275 280 285

Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe

290 295 300

Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu

305 310 315 320

Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu

325 330 335

Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val Ala Arg

340 345 350

Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu

355 360 365

Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys

370 375 380

Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser

385 390 395 400

Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile

405 410 415

Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly

420 425 430

Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser

435 440 445

Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn

450 455 460

Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln

465 470 475 480

Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln

485 490

<210> 56

<211> 494

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-

TPOR/MPLR(478-582)-IL7R(316-459)- IL2Rbsmall(339-379,393-433,518-551)

<400> 56

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Ala Arg Asp Glu Val Glu

225 230 235 240

Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys

245 250 255

Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp

260 265 270

Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser

290 295 300

Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr

305 310 315 320

Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro

325 330 335

Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln

340 345 350

Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr

355 360 365

Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln Gln Gln Asp Lys Val Pro

370 375 380

Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr

385 390 395 400

Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu

405 410 415

Ala Cys Gln Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro

420 425 430

Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe

435 440 445

Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu

450 455 460

Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu

465 470 475 480

Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

485 490

<210> 57

<211> 429

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)-PD1(156-191)-TPOR/MPLR

(514-582)-IL7R(316-459)-IL12Rb2(775-825)

<400> 57

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val

130 135 140

Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp

145 150 155 160

Val Leu Ala Val Ile Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Ala Arg Asp Glu Val Glu

225 230 235 240

Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys

245 250 255

Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp

260 265 270

Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser

290 295 300

Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr

305 310 315 320

Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro

325 330 335

Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln

340 345 350

Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr

355 360 365

Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln Ser Asp Pro Lys Pro Glu

370 375 380

Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr

385 390 395 400

His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile Asp Asp Leu Pro Ser His Glu

405 410 415

Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gln

420 425

<210> 58

<211> 288

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 SS-FKBP(F36V)- TPOR/MPLR(478-582)-EGFR(1122-1165)

<400> 58

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly

20 25 30

Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr

35 40 45

Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg

50 55 60

Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile

100 105 110

Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu

115 120 125

Glu Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile

130 135 140

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

145 150 155 160

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

165 170 175

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

180 185 190

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

195 200 205

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

210 215 220

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Pro Glu Tyr Leu Asn Thr

225 230 235 240

Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro Ala His Trp

245 250 255

Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp Tyr Gln

260 265 270

Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe Lys Gly

275 280 285

<210> 59

<211> 508

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 59

Met Asp His Leu Gly Ala Ser Leu Trp Pro Gln Val Gly Ser Leu Cys

1 5 10 15

Leu Leu Leu Ala Gly Ala Ala Trp Ala Pro Pro Pro Asn Leu Pro Asp

20 25 30

Pro Lys Phe Glu Ser Lys Ala Ala Leu Leu Ala Ala Arg Gly Pro Glu

35 40 45

Glu Leu Leu Cys Phe Thr Glu Arg Leu Glu Asp Leu Val Cys Phe Trp

50 55 60

Glu Glu Ala Ala Ser Ala Gly Val Gly Pro Gly Asn Tyr Ser Phe Ser

65 70 75 80

Tyr Gln Leu Glu Asp Glu Pro Trp Lys Leu Cys Arg Leu His Gln Ala

85 90 95

Pro Thr Ala Arg Gly Ala Val Arg Phe Trp Cys Ser Leu Pro Thr Ala

100 105 110

Asp Thr Ser Ser Phe Val Pro Leu Glu Leu Arg Val Thr Ala Ala Ser

115 120 125

Gly Ala Pro Arg Tyr His Arg Val Ile His Ile Asn Glu Val Val Leu

130 135 140

Leu Asp Ala Pro Val Gly Leu Val Ala Arg Leu Ala Asp Glu Ser Gly

145 150 155 160

His Val Val Leu Arg Trp Leu Pro Pro Pro Glu Thr Pro Met Thr Ser

165 170 175

His Ile Arg Tyr Glu Val Asp Val Ser Ala Gly Asn Gly Ala Gly Ser

180 185 190

Val Gln Arg Val Glu Ile Leu Glu Gly Arg Thr Glu Cys Val Leu Ser

195 200 205

Asn Leu Arg Gly Arg Thr Arg Tyr Thr Phe Ala Val Arg Ala Arg Met

210 215 220

Ala Glu Pro Ser Phe Gly Gly Phe Trp Ser Ala Trp Ser Glu Pro Val

225 230 235 240

Ser Leu Leu Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile Leu Thr Leu Ser

245 250 255

Leu Ile Leu Val Val Ile Leu Val Leu Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu

260 265 270

Ser His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser

275 280 285

Pro Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe

290 295 300

Gln Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys

305 310 315 320

Thr Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu

325 330 335

Arg Cys Trp Gly Thr Met Gln Ala Val Glu Pro Gly Thr Asp Asp Glu

340 345 350

Gly Pro Leu Leu Glu Pro Val Gly Ser Glu His Ala Gln Asp Thr Tyr

355 360 365

Leu Val Leu Asp Lys Trp Leu Leu Pro Arg Asn Pro Pro Ser Glu Asp

370 375 380

Leu Pro Gly Pro Gly Gly Ser Val Asp Ile Val Ala Met Asp Glu Gly

385 390 395 400

Ser Glu Ala Ser Ser Cys Ser Ser Ala Leu Ala Ser Lys Pro Ser Pro

405 410 415

Glu Gly Ala Ser Ala Ala Ser Phe Glu Tyr Thr Ile Leu Asp Pro Ser

420 425 430

Ser Gln Leu Leu Arg Pro Trp Thr Leu Cys Pro Glu Leu Pro Pro Thr

435 440 445

Pro Pro His Leu Lys Tyr Leu Tyr Leu Val Val Ser Asp Ser Gly Ile

450 455 460

Ser Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Asp Ser Gln Gly Ala Gln Gly Gly Leu

465 470 475 480

Ser Asp Gly Pro Tyr Ser Asn Pro Tyr Glu Asn Ser Leu Ile Pro Ala

485 490 495

Ala Glu Pro Leu Pro Pro Ser Tyr Val Ala Cys Ser

500 505

<210> 60

<211> 918

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 60

Met Leu Thr Leu Gln Thr Trp Leu Val Gln Ala Leu Phe Ile Phe Leu

1 5 10 15

Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr Ile Ser

20 25 30

Pro Glu Ser Pro Val Val Gln Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys

35 40 45

Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr

50 55 60

Ile Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr Ile Pro Lys Glu Gln Tyr Thr

65 70 75 80

Ile Ile Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp Ile Ala Ser

85 90 95

Leu Asn Ile Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu Thr Phe Gly Gln Leu Glu

100 105 110

Gln Asn Val Tyr Gly Ile Thr Ile Ile Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys

115 120 125

Pro Lys Asn Leu Ser Cys Ile Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys

130 135 140

Glu Trp Asp Arg Gly Arg Glu Thr His Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu

145 150 155 160

Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg

165 170 175

Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val

180 185 190

Asn Ile Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr

195 200 205

Ser Asp His Ile Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro

210 215 220

Pro His Asn Leu Ser Val Ile Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu

225 230 235 240

Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser Ile Lys Ser Val Ile Ile Leu Lys

245 250 255

Tyr Asn Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gln Ile

260 265 270

Pro Pro Glu Asp Thr Ala Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Val Gln Asp

275 280 285

Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg Ile Arg Cys Met Lys Glu

290 295 300

Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Ile

305 310 315 320

Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys Ile

325 330 335

Asp Pro Ser His Thr Gln Gly Tyr Arg Thr Val Gln Leu Val Trp Lys

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys Ile Leu Asp Tyr Glu Val

355 360 365

Thr Leu Thr Arg Trp Lys Ser His Leu Gln Asn Tyr Thr Val Asn Ala

370 375 380

Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Val Ala Thr Leu

385 390 395 400

Thr Val Arg Asn Leu Val Gly Lys Ser Asp Ala Ala Val Leu Thr Ile

405 410 415

Pro Ala Cys Asp Phe Gln Ala Thr His Pro Val Met Asp Leu Lys Ala

420 425 430

Phe Pro Lys Asp Asn Met Leu Trp Val Glu Trp Thr Thr Pro Arg Glu

435 440 445

Ser Val Lys Lys Tyr Ile Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala

450 455 460

Pro Cys Ile Thr Asp Trp Gln Gln Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr

465 470 475 480

Tyr Leu Arg Gly Asn Leu Ala Glu Ser Lys Cys Tyr Leu Ile Thr Val

485 490 495

Thr Pro Val Tyr Ala Asp Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser Ile Lys Ala

500 505 510

Tyr Leu Lys Gln Ala Pro Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys

515 520 525

Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp Gln Leu Pro Val

530 535 540

Asp Val Gln Asn Gly Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Arg Thr

545 550 555 560

Ile Ile Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu

565 570 575

Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met

580 585 590

Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe

595 600 605

Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro

610 615 620

Val Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys

625 630 635 640

Phe Asn Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro

645 650 655

Asp Pro Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro

660 665 670

Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe

675 680 685

Thr Asp Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala Asn Asp Lys Lys Pro Phe

690 695 700

Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys Ile Asn

705 710 715 720

Thr Glu Gly His Ser Ser Gly Ile Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser

725 730 735

Ser Arg Pro Ser Ile Ser Ser Ser Asp Glu Asn Glu Ser Ser Gln Asn

740 745 750

Thr Ser Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg

755 760 765

His Gln Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gln

770 775 780

Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gln Leu Val Asp

785 790 795 800

His Val Asp Gly Gly Asp Gly Ile Leu Pro Arg Gln Gln Tyr Phe Lys

805 810 815

Gln Asn Cys Ser Gln His Glu Ser Ser Pro Asp Ile Ser His Phe Glu

820 825 830

Arg Ser Lys Gln Val Ser Ser Val Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu

835 840 845

Lys Gln Gln Ile Ser Asp His Ile Ser Gln Ser Cys Gly Ser Gly Gln

850 855 860

Met Lys Met Phe Gln Glu Val Ser Ala Ala Asp Ala Phe Gly Pro Gly

865 870 875 880

Thr Glu Gly Gln Val Glu Arg Phe Glu Thr Val Gly Met Glu Ala Ala

885 890 895

Thr Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gln Thr Val Arg Gln

900 905 910

Gly Gly Tyr Met Pro Gln

915

<210> 61

<211> 622

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 61

Met Lys Glu Asn Val Ala Ser Ala Thr Val Phe Thr Leu Leu Leu Phe

1 5 10 15

Leu Asn Thr Cys Leu Leu Asn Gly Gln Leu Pro Pro Gly Lys Pro Glu

20 25 30

Ile Phe Lys Cys Arg Ser Pro Asn Lys Glu Thr Phe Thr Cys Trp Trp

35 40 45

Arg Pro Gly Thr Asp Gly Gly Leu Pro Thr Asn Tyr Ser Leu Thr Tyr

50 55 60

His Arg Glu Gly Glu Thr Leu Met His Glu Cys Pro Asp Tyr Ile Thr

65 70 75 80

Gly Gly Pro Asn Ser Cys His Phe Gly Lys Gln Tyr Thr Ser Met Trp

85 90 95

Arg Thr Tyr Ile Met Met Val Asn Ala Thr Asn Gln Met Gly Ser Ser

100 105 110

Phe Ser Asp Glu Leu Tyr Val Asp Val Thr Tyr Ile Val Gln Pro Asp

115 120 125

Pro Pro Leu Glu Leu Ala Val Glu Val Lys Gln Pro Glu Asp Arg Lys

130 135 140

Pro Tyr Leu Trp Ile Lys Trp Ser Pro Pro Thr Leu Ile Asp Leu Lys

145 150 155 160

Thr Gly Trp Phe Thr Leu Leu Tyr Glu Ile Arg Leu Lys Pro Glu Lys

165 170 175

Ala Ala Glu Trp Glu Ile His Phe Ala Gly Gln Gln Thr Glu Phe Lys

180 185 190

Ile Leu Ser Leu His Pro Gly Gln Lys Tyr Leu Val Gln Val Arg Cys

195 200 205

Lys Pro Asp His Gly Tyr Trp Ser Ala Trp Ser Pro Ala Thr Phe Ile

210 215 220

Gln Ile Pro Ser Asp Phe Thr Met Asn Asp Thr Thr Val Trp Ile Ser

225 230 235 240

Val Ala Val Leu Ser Ala Val Ile Cys Leu Ile Ile Val Trp Ala Val

245 250 255

Ala Leu Lys Gly Tyr Ser Met Val Thr Cys Ile Phe Pro Pro Val Pro

260 265 270

Gly Pro Lys Ile Lys Gly Phe Asp Ala His Leu Leu Glu Lys Gly Lys

275 280 285

Ser Glu Glu Leu Leu Ser Ala Leu Gly Cys Gln Asp Phe Pro Pro Thr

290 295 300

Ser Asp Tyr Glu Asp Leu Leu Val Glu Tyr Leu Glu Val Asp Asp Ser

305 310 315 320

Glu Asp Gln His Leu Met Ser Val His Ser Lys Glu His Pro Ser Gln

325 330 335

Gly Met Lys Pro Thr Tyr Leu Asp Pro Asp Thr Asp Ser Gly Arg Gly

340 345 350

Ser Cys Asp Ser Pro Ser Leu Leu Ser Glu Lys Cys Glu Glu Pro Gln

355 360 365

Ala Asn Pro Ser Thr Phe Tyr Asp Pro Glu Val Ile Glu Lys Pro Glu

370 375 380

Asn Pro Glu Thr Thr His Thr Trp Asp Pro Gln Cys Ile Ser Met Glu

385 390 395 400

Gly Lys Ile Pro Tyr Phe His Ala Gly Gly Ser Lys Cys Ser Thr Trp

405 410 415

Pro Leu Pro Gln Pro Ser Gln His Asn Pro Arg Ser Ser Tyr His Asn

420 425 430

Ile Thr Asp Val Cys Glu Leu Ala Val Gly Pro Ala Gly Ala Pro Ala

435 440 445

Thr Leu Leu Asn Glu Ala Gly Lys Asp Ala Leu Lys Ser Ser Gln Thr

450 455 460

Ile Lys Ser Arg Glu Glu Gly Lys Ala Thr Gln Gln Arg Glu Val Glu

465 470 475 480

Ser Phe His Ser Glu Thr Asp Gln Asp Thr Pro Trp Leu Leu Pro Gln

485 490 495

Glu Lys Thr Pro Phe Gly Ser Ala Lys Pro Leu Asp Tyr Val Glu Ile

500 505 510

His Lys Val Asn Lys Asp Gly Ala Leu Ser Leu Leu Pro Lys Gln Arg

515 520 525

Glu Asn Ser Gly Lys Pro Lys Lys Pro Gly Thr Pro Glu Asn Asn Lys

530 535 540

Glu Tyr Ala Lys Val Ser Gly Val Met Asp Asn Asn Ile Leu Val Leu

545 550 555 560

Val Pro Asp Pro His Ala Lys Asn Val Ala Cys Phe Glu Glu Ser Ala

565 570 575

Lys Glu Ala Pro Pro Ser Leu Glu Gln Asn Gln Ala Glu Lys Ala Leu

580 585 590

Ala Asn Phe Thr Ala Thr Ser Ser Lys Cys Arg Leu Gln Leu Gly Gly

595 600 605

Leu Asp Tyr Leu Asp Pro Ala Cys Phe Thr His Ser Phe His

610 615 620

<210> 62

<211> 638

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 62

Met Asp Leu Trp Gln Leu Leu Leu Thr Leu Ala Leu Ala Gly Ser Ser

1 5 10 15

Asp Ala Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala Ala Ile Leu Ser Arg Ala

20 25 30

Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser

35 40 45

Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe

50 55 60

Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His Gly Thr Lys Asn Leu Gly

65 70 75 80

Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln

85 90 95

Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys

100 105 110

Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys

115 120 125

Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp

130 135 140

Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu

145 150 155 160

Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu

165 170 175

Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr

180 185 190

Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr Lys Trp Lys Met Met Asp

195 200 205

Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys

210 215 220

Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr

225 230 235 240

Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr Leu Pro Gln Met Ser Gln

245 250 255

Phe Thr Cys Glu Glu Asp Phe Tyr Phe Pro Trp Leu Leu Ile Ile Ile

260 265 270

Phe Gly Ile Phe Gly Leu Thr Val Met Leu Phe Val Phe Leu Phe Ser

275 280 285

Lys Gln Gln Arg Ile Lys Met Leu Ile Leu Pro Pro Val Pro Val Pro

290 295 300

Lys Ile Lys Gly Ile Asp Pro Asp Leu Leu Lys Glu Gly Lys Leu Glu

305 310 315 320

Glu Val Asn Thr Ile Leu Ala Ile His Asp Ser Tyr Lys Pro Glu Phe

325 330 335

His Ser Asp Asp Ser Trp Val Glu Phe Ile Glu Leu Asp Ile Asp Glu

340 345 350

Pro Asp Glu Lys Thr Glu Glu Ser Asp Thr Asp Arg Leu Leu Ser Ser

355 360 365

Asp His Glu Lys Ser His Ser Asn Leu Gly Val Lys Asp Gly Asp Ser

370 375 380

Gly Arg Thr Ser Cys Cys Glu Pro Asp Ile Leu Glu Thr Asp Phe Asn

385 390 395 400

Ala Asn Asp Ile His Glu Gly Thr Ser Glu Val Ala Gln Pro Gln Arg

405 410 415

Leu Lys Gly Glu Ala Asp Leu Leu Cys Leu Asp Gln Lys Asn Gln Asn

420 425 430

Asn Ser Pro Tyr His Asp Ala Cys Pro Ala Thr Gln Gln Pro Ser Val

435 440 445

Ile Gln Ala Glu Lys Asn Lys Pro Gln Pro Leu Pro Thr Glu Gly Ala

450 455 460

Glu Ser Thr His Gln Ala Ala His Ile Gln Leu Ser Asn Pro Ser Ser

465 470 475 480

Leu Ser Asn Ile Asp Phe Tyr Ala Gln Val Ser Asp Ile Thr Pro Ala

485 490 495

Gly Ser Val Val Leu Ser Pro Gly Gln Lys Asn Lys Ala Gly Met Ser

500 505 510

Gln Cys Asp Met His Pro Glu Met Val Ser Leu Cys Gln Glu Asn Phe

515 520 525

Leu Met Asp Asn Ala Tyr Phe Cys Glu Ala Asp Ala Lys Lys Cys Ile

530 535 540

Pro Val Ala Pro His Ile Lys Val Glu Ser His Ile Gln Pro Ser Leu

545 550 555 560

Asn Gln Glu Asp Ile Tyr Ile Thr Thr Glu Ser Leu Thr Thr Ala Ala

565 570 575

Gly Arg Pro Gly Thr Gly Glu His Val Pro Gly Ser Glu Met Pro Val

580 585 590

Pro Asp Tyr Thr Ser Ile His Ile Val Gln Ser Pro Gln Gly Leu Ile

595 600 605

Leu Asn Ala Thr Ala Leu Pro Leu Pro Asp Lys Glu Phe Leu Ser Ser

610 615 620

Cys Gly Tyr Val Ser Thr Asp Gln Leu Asn Lys Ile Met Pro

625 630 635

<210> 63

<211> 863

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 63

Met Ala Arg Leu Gly Asn Cys Ser Leu Thr Trp Ala Ala Leu Ile Ile

1 5 10 15

Leu Leu Leu Pro Gly Ser Leu Glu Glu Cys Gly His Ile Ser Val Ser

20 25 30

Ala Pro Ile Val His Leu Gly Asp Pro Ile Thr Ala Ser Cys Ile Ile

35 40 45

Lys Gln Asn Cys Ser His Leu Asp Pro Glu Pro Gln Ile Leu Trp Arg

50 55 60

Leu Gly Ala Glu Leu Gln Pro Gly Gly Arg Gln Gln Arg Leu Ser Asp

65 70 75 80

Gly Thr Gln Glu Ser Ile Ile Thr Leu Pro His Leu Asn His Thr Gln

85 90 95

Ala Phe Leu Ser Cys Cys Leu Asn Trp Gly Asn Ser Leu Gln Ile Leu

100 105 110

Asp Gln Val Glu Leu Arg Ala Gly Tyr Pro Pro Ala Ile Pro His Asn

115 120 125

Leu Ser Cys Leu Met Asn Leu Thr Thr Ser Ser Leu Ile Cys Gln Trp

130 135 140

Glu Pro Gly Pro Glu Thr His Leu Pro Thr Ser Phe Thr Leu Lys Ser

145 150 155 160

Phe Lys Ser Arg Gly Asn Cys Gln Thr Gln Gly Asp Ser Ile Leu Asp

165 170 175

Cys Val Pro Lys Asp Gly Gln Ser His Cys Cys Ile Pro Arg Lys His

180 185 190

Leu Leu Leu Tyr Gln Asn Met Gly Ile Trp Val Gln Ala Glu Asn Ala

195 200 205

Leu Gly Thr Ser Met Ser Pro Gln Leu Cys Leu Asp Pro Met Asp Val

210 215 220

Val Lys Leu Glu Pro Pro Met Leu Arg Thr Met Asp Pro Ser Pro Glu

225 230 235 240

Ala Ala Pro Pro Gln Ala Gly Cys Leu Gln Leu Cys Trp Glu Pro Trp

245 250 255

Gln Pro Gly Leu His Ile Asn Gln Lys Cys Glu Leu Arg His Lys Pro

260 265 270

Gln Arg Gly Glu Ala Ser Trp Ala Leu Val Gly Pro Leu Pro Leu Glu

275 280 285

Ala Leu Gln Tyr Glu Leu Cys Gly Leu Leu Pro Ala Thr Ala Tyr Thr

290 295 300

Leu Gln Ile Arg Cys Ile Arg Trp Pro Leu Pro Gly His Trp Ser Asp

305 310 315 320

Trp Ser Pro Ser Leu Glu Leu Arg Thr Thr Glu Arg Ala Pro Thr Val

325 330 335

Arg Leu Asp Thr Trp Trp Arg Gln Arg Gln Leu Asp Pro Arg Thr Val

340 345 350

Gln Leu Phe Trp Lys Pro Val Pro Leu Glu Glu Asp Ser Gly Arg Ile

355 360 365

Gln Gly Tyr Val Val Ser Trp Arg Pro Ser Gly Gln Ala Gly Ala Ile

370 375 380

Leu Pro Leu Cys Asn Thr Thr Glu Leu Ser Cys Thr Phe His Leu Pro

385 390 395 400

Ser Glu Ala Gln Glu Val Ala Leu Val Ala Tyr Asn Ser Ala Gly Thr

405 410 415

Ser Arg Pro Thr Pro Val Val Phe Ser Glu Ser Arg Gly Pro Ala Leu

420 425 430

Thr Arg Leu His Ala Met Ala Arg Asp Pro His Ser Leu Trp Val Gly

435 440 445

Trp Glu Pro Pro Asn Pro Trp Pro Gln Gly Tyr Val Ile Glu Trp Gly

450 455 460

Leu Gly Pro Pro Ser Ala Ser Asn Ser Asn Lys Thr Trp Arg Met Glu

465 470 475 480

Gln Asn Gly Arg Ala Thr Gly Phe Leu Leu Lys Glu Asn Ile Arg Pro

485 490 495

Phe Gln Leu Tyr Glu Ile Ile Val Thr Pro Leu Tyr Gln Asp Thr Met

500 505 510

Gly Pro Ser Gln His Val Tyr Ala Tyr Ser Gln Glu Met Ala Pro Ser

515 520 525

His Ala Pro Glu Leu His Leu Lys His Ile Gly Lys Thr Trp Ala Gln

530 535 540

Leu Glu Trp Val Pro Glu Pro Pro Glu Leu Gly Lys Ser Pro Leu Thr

545 550 555 560

His Tyr Thr Ile Phe Trp Thr Asn Ala Gln Asn Gln Ser Phe Ser Ala

565 570 575

Ile Leu Asn Ala Ser Ser Arg Gly Phe Val Leu His Gly Leu Glu Pro

580 585 590

Ala Ser Leu Tyr His Ile His Leu Met Ala Ala Ser Gln Ala Gly Ala

595 600 605

Thr Asn Ser Thr Val Leu Thr Leu Met Thr Leu Thr Pro Glu Gly Ser

610 615 620

Glu Leu His Ile Ile Leu Gly Leu Phe Gly Leu Leu Leu Leu Leu Thr

625 630 635 640

Cys Leu Cys Gly Thr Ala Trp Leu Cys Cys Ser Pro Asn Arg Lys Asn

645 650 655

Pro Leu Trp Pro Ser Val Pro Asp Pro Ala His Ser Ser Leu Gly Ser

660 665 670

Trp Val Pro Thr Ile Met Glu Glu Leu Pro Gly Pro Arg Gln Gly Gln

675 680 685

Trp Leu Gly Gln Thr Ser Glu Met Ser Arg Ala Leu Thr Pro His Pro

690 695 700

Cys Val Gln Asp Ala Phe Gln Leu Pro Gly Leu Gly Thr Pro Pro Ile

705 710 715 720

Thr Lys Leu Thr Val Leu Glu Glu Asp Glu Lys Lys Pro Val Pro Trp

725 730 735

Glu Ser His Asn Ser Ser Glu Thr Cys Gly Leu Pro Thr Leu Val Gln

740 745 750

Thr Tyr Val Leu Gln Gly Asp Pro Arg Ala Val Ser Thr Gln Pro Gln

755 760 765

Ser Gln Ser Gly Thr Ser Asp Gln Val Leu Tyr Gly Gln Leu Leu Gly

770 775 780

Ser Pro Thr Ser Pro Gly Pro Gly His Tyr Leu Arg Cys Asp Ser Thr

785 790 795 800

Gln Pro Leu Leu Ala Gly Leu Thr Pro Ser Pro Lys Ser Tyr Glu Asn

805 810 815

Leu Trp Phe Gln Ala Ser Pro Leu Gly Thr Leu Val Thr Pro Ala Pro

820 825 830

Ser Gln Glu Asp Asp Cys Val Phe Gly Pro Leu Leu Asn Phe Pro Leu

835 840 845

Leu Gln Gly Ile Arg Val His Gly Met Glu Ala Leu Gly Ser Phe

850 855 860

<210> 64

<211> 635

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 64

Met Pro Ser Trp Ala Leu Phe Met Val Thr Ser Cys Leu Leu Leu Ala

1 5 10 15

Pro Gln Asn Leu Ala Gln Val Ser Ser Gln Asp Val Ser Leu Leu Ala

20 25 30

Ser Asp Ser Glu Pro Leu Lys Cys Phe Ser Arg Thr Phe Glu Asp Leu

35 40 45

Thr Cys Phe Trp Asp Glu Glu Glu Ala Ala Pro Ser Gly Thr Tyr Gln

50 55 60

Leu Leu Tyr Ala Tyr Pro Arg Glu Lys Pro Arg Ala Cys Pro Leu Ser

65 70 75 80

Ser Gln Ser Met Pro His Phe Gly Thr Arg Tyr Val Cys Gln Phe Pro

85 90 95

Asp Gln Glu Glu Val Arg Leu Phe Phe Pro Leu His Leu Trp Val Lys

100 105 110

Asn Val Phe Leu Asn Gln Thr Arg Thr Gln Arg Val Leu Phe Val Asp

115 120 125

Ser Val Gly Leu Pro Ala Pro Pro Ser Ile Ile Lys Ala Met Gly Gly

130 135 140

Ser Gln Pro Gly Glu Leu Gln Ile Ser Trp Glu Glu Pro Ala Pro Glu

145 150 155 160

Ile Ser Asp Phe Leu Arg Tyr Glu Leu Arg Tyr Gly Pro Arg Asp Pro

165 170 175

Lys Asn Ser Thr Gly Pro Thr Val Ile Gln Leu Ile Ala Thr Glu Thr

180 185 190

Cys Cys Pro Ala Leu Gln Arg Pro His Ser Ala Ser Ala Leu Asp Gln

195 200 205

Ser Pro Cys Ala Gln Pro Thr Met Pro Trp Gln Asp Gly Pro Lys Gln

210 215 220

Thr Ser Pro Ser Arg Glu Ala Ser Ala Leu Thr Ala Glu Gly Gly Ser

225 230 235 240

Cys Leu Ile Ser Gly Leu Gln Pro Gly Asn Ser Tyr Trp Leu Gln Leu

245 250 255

Arg Ser Glu Pro Asp Gly Ile Ser Leu Gly Gly Ser Trp Gly Ser Trp

260 265 270

Ser Leu Pro Val Thr Val Asp Leu Pro Gly Asp Ala Val Ala Leu Gly

275 280 285

Leu Gln Cys Phe Thr Leu Asp Leu Lys Asn Val Thr Cys Gln Trp Gln

290 295 300

Gln Gln Asp His Ala Ser Ser Gln Gly Phe Phe Tyr His Ser Arg Ala

305 310 315 320

Arg Cys Cys Pro Arg Asp Arg Tyr Pro Ile Trp Glu Asn Cys Glu Glu

325 330 335

Glu Glu Lys Thr Asn Pro Gly Leu Gln Thr Pro Gln Phe Ser Arg Cys

340 345 350

His Phe Lys Ser Arg Asn Asp Ser Ile Ile His Ile Leu Val Glu Val

355 360 365

Thr Thr Ala Pro Gly Thr Val His Ser Tyr Leu Gly Ser Pro Phe Trp

370 375 380

Ile His Gln Ala Val Arg Leu Pro Thr Pro Asn Leu His Trp Arg Glu

385 390 395 400

Ile Ser Ser Gly His Leu Glu Leu Glu Trp Gln His Pro Ser Ser Trp

405 410 415

Ala Ala Gln Glu Thr Cys Tyr Gln Leu Arg Tyr Thr Gly Glu Gly His

420 425 430

Gln Asp Trp Lys Val Leu Glu Pro Pro Leu Gly Ala Arg Gly Gly Thr

435 440 445

Leu Glu Leu Arg Pro Arg Ser Arg Tyr Arg Leu Gln Leu Arg Ala Arg

450 455 460

Leu Asn Gly Pro Thr Tyr Gln Gly Pro Trp Ser Ser Trp Ser Asp Pro

465 470 475 480

Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile Ser Leu Val Thr

485 490 495

Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu

500 505 510

Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu

515 520 525

Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg

530 535 540

Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys

545 550 555 560

Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu

565 570 575

Arg Thr Pro Leu Pro Leu Cys Ser Ser Gln Ala Gln Met Asp Tyr Arg

580 585 590

Arg Leu Gln Pro Ser Cys Leu Gly Thr Met Pro Leu Ser Val Cys Pro

595 600 605

Pro Met Ala Glu Ser Gly Ser Cys Cys Thr Thr His Ile Ala Asn His

610 615 620

Ser Tyr Leu Pro Leu Ser Tyr Trp Gln Gln Pro

625 630 635

<210> 65

<211> 21

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8 signal peptide

<400> 65

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro

20

<210> 66

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> Myristoylation Motif

<400> 66

Met Gly Ser Ser Lys Ser Lys Pro Lys Asp Pro Ser Gln Arg

1 5 10

<210> 67

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> Myc epitope tag

<400> 67

Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu

1 5 10

<210> 68

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> V5 epitope tag

<400> 68

Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr

1 5 10

<210> 69

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> FKBP(F36V) dimerization domain

<400> 69

Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe

1 5 10 15

Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu

20 25 30

Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys

35 40 45

Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val

50 55 60

Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp

65 70 75 80

Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala

85 90 95

Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu

100 105

<210> 70

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> FKBP(F36V)-FKBP(F36V) dimerization domain

<400> 70

Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe

1 5 10 15

Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu

20 25 30

Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys

35 40 45

Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val

50 55 60

Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp

65 70 75 80

Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala

85 90 95

Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Gly Val Gln Val Glu

100 105 110

Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr

115 120 125

Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp

130 135 140

Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln

145 150 155 160

Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly

165 170 175

Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr

180 185 190

Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val

195 200 205

Glu Leu Leu Lys Leu Glu

210

<210> 71

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> FKBP(F36V,L106P) dimerization domain

<400> 71

Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe

1 5 10 15

Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu

20 25 30

Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys

35 40 45

Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val

50 55 60

Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp

65 70 75 80

Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala

85 90 95

Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Pro

100 105

<210> 72

<211> 213

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> FKBP(F36V,L106P)-FKBP(F36V,L106P) dimerization domain

<400> 72

Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe

1 5 10 15

Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu

20 25 30

Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys

35 40 45

Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val

50 55 60

Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp

65 70 75 80

Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala

85 90 95

Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Pro Gly Val Gln Val Glu

100 105 110

Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr

115 120 125

Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp Lys Lys Val Asp Ser

130 135 140

Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu

145 150 155 160

Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln

165 170 175

Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly

180 185 190

His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu

195 200 205

Leu Leu Lys Pro Glu

210

<210> 73

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> FKBP(E31G,36V,R71G,K105E)-FKBP(E31G,36V,R71G,K105E)

dimerization domain

<400> 73

Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe

1 5 10 15

Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Gly

20 25 30

Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys

35 40 45

Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val

50 55 60

Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Gly Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp

65 70 75 80

Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala

85 90 95

Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Glu Leu Gly Val Gln Val Glu

100 105 110

Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr

115 120 125

Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Gly Asp Gly Lys Lys Val Asp

130 135 140

Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln

145 150 155 160

Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly

165 170 175

Gln Gly Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr

180 185 190

Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val

195 200 205

Glu Leu Leu Glu Leu Glu

210

<210> 74

<211> 126

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> ALK5/TGFBR1(1-126) dimerization domain

<400> 74

Met Glu Ala Ala Val Ala Ala Pro Arg Pro Arg Leu Leu Leu Leu Val

1 5 10 15

Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr

20 25 30

Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys

35 40 45

Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys

50 55 60

Val Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg

65 70 75 80

Asp Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr

85 90 95

Thr Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro

100 105 110

Thr Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu

115 120 125

<210> 75

<211> 166

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TGFBR2(1-166) dimerization domain

<400> 75

Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu

1 5 10 15

Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

20 25 30

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

35 40 45

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

50 55 60

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

65 70 75 80

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

85 90 95

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

100 105 110

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

115 120 125

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

130 135 140

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu

145 150 155 160

Leu Leu Val Ile Phe Gln

165

<210> 76

<211> 236

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EpoR(1-236) dimerization domain

<400> 76

Met Asp His Leu Gly Ala Ser Leu Trp Pro Gln Val Gly Ser Leu Cys

1 5 10 15

Leu Leu Leu Ala Gly Ala Ala Trp Ala Pro Pro Pro Asn Leu Pro Asp

20 25 30

Pro Lys Phe Glu Ser Lys Ala Ala Leu Leu Ala Ala Arg Gly Pro Glu

35 40 45

Glu Leu Leu Cys Phe Thr Glu Arg Leu Glu Asp Leu Val Cys Phe Trp

50 55 60

Glu Glu Ala Ala Ser Ala Gly Val Gly Pro Gly Asn Tyr Ser Phe Ser

65 70 75 80

Tyr Gln Leu Glu Asp Glu Pro Trp Lys Leu Cys Arg Leu His Gln Ala

85 90 95

Pro Thr Ala Arg Gly Ala Val Arg Phe Trp Cys Ser Leu Pro Thr Ala

100 105 110

Asp Thr Ser Ser Phe Val Pro Leu Glu Leu Arg Val Thr Ala Ala Ser

115 120 125

Gly Ala Pro Arg Tyr His Arg Val Ile His Ile Asn Glu Val Val Leu

130 135 140

Leu Asp Ala Pro Val Gly Leu Val Ala Arg Leu Ala Asp Glu Ser Gly

145 150 155 160

His Val Val Leu Arg Trp Leu Pro Pro Pro Glu Thr Pro Met Thr Ser

165 170 175

His Ile Arg Tyr Glu Val Asp Val Ser Ala Gly Asn Gly Ala Gly Ser

180 185 190

Val Gln Arg Val Glu Ile Leu Glu Gly Arg Thr Glu Cys Val Leu Ser

195 200 205

Asn Leu Arg Gly Arg Thr Arg Tyr Thr Phe Ala Val Arg Ala Arg Met

210 215 220

Ala Glu Pro Ser Phe Gly Gly Phe Trp Ser Ala Trp

225 230 235

<210> 77

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> PrlR(1-220) dimerization domain

<400> 77

Met Lys Glu Asn Val Ala Ser Ala Thr Val Phe Thr Leu Leu Leu Phe

1 5 10 15

Leu Asn Thr Cys Leu Leu Asn Gly Gln Leu Pro Pro Gly Lys Pro Glu

20 25 30

Ile Phe Lys Cys Arg Ser Pro Asn Lys Glu Thr Phe Thr Cys Trp Trp

35 40 45

Arg Pro Gly Thr Asp Gly Gly Leu Pro Thr Asn Tyr Ser Leu Thr Tyr

50 55 60

His Arg Glu Gly Glu Thr Leu Met His Glu Cys Pro Asp Tyr Ile Thr

65 70 75 80

Gly Gly Pro Asn Ser Cys His Phe Gly Lys Gln Tyr Thr Ser Met Trp

85 90 95

Arg Thr Tyr Ile Met Met Val Asn Ala Thr Asn Gln Met Gly Ser Ser

100 105 110

Phe Ser Asp Glu Leu Tyr Val Asp Val Thr Tyr Ile Val Gln Pro Asp

115 120 125

Pro Pro Leu Glu Leu Ala Val Glu Val Lys Gln Pro Glu Asp Arg Lys

130 135 140

Pro Tyr Leu Trp Ile Lys Trp Ser Pro Pro Thr Leu Ile Asp Leu Lys

145 150 155 160

Thr Gly Trp Phe Thr Leu Leu Tyr Glu Ile Arg Leu Lys Pro Glu Lys

165 170 175

Ala Ala Glu Trp Glu Ile His Phe Ala Gly Gln Gln Thr Glu Phe Lys

180 185 190

Ile Leu Ser Leu His Pro Gly Gln Lys Tyr Leu Val Gln Val Arg Cys

195 200 205

Lys Pro Asp His Gly Tyr Trp Ser Ala Trp Ser Pro

210 215 220

<210> 78

<211> 250

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> GHR(1-250) dimerization domain

<400> 78

Met Asp Leu Trp Gln Leu Leu Leu Thr Leu Ala Leu Ala Gly Ser Ser

1 5 10 15

Asp Ala Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala Ala Ile Leu Ser Arg Ala

20 25 30

Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser

35 40 45

Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe

50 55 60

Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His Gly Thr Lys Asn Leu Gly

65 70 75 80

Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln

85 90 95

Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys

100 105 110

Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys

115 120 125

Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp

130 135 140

Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu

145 150 155 160

Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu

165 170 175

Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr

180 185 190

Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr Lys Trp Lys Met Met Asp

195 200 205

Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys

210 215 220

Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr

225 230 235 240

Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr

245 250

<210> 79

<211> 477

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(1-478) dimerization domain

<400> 79

Met Pro Ser Trp Ala Leu Phe Met Val Thr Ser Cys Leu Leu Leu Ala

1 5 10 15

Pro Gln Asn Leu Ala Gln Val Ser Ser Gln Asp Val Ser Leu Leu Ala

20 25 30

Ser Asp Ser Glu Pro Leu Lys Cys Phe Ser Arg Thr Phe Glu Asp Leu

35 40 45

Thr Cys Phe Trp Asp Glu Glu Glu Ala Ala Pro Ser Gly Thr Tyr Gln

50 55 60

Leu Leu Tyr Ala Tyr Pro Arg Glu Lys Pro Arg Ala Cys Pro Leu Ser

65 70 75 80

Ser Gln Ser Met Pro His Phe Gly Thr Arg Tyr Val Cys Gln Phe Pro

85 90 95

Asp Gln Glu Glu Val Arg Leu Phe Phe Pro Leu His Leu Trp Val Lys

100 105 110

Asn Val Phe Leu Asn Gln Thr Arg Thr Gln Arg Val Leu Phe Val Asp

115 120 125

Ser Val Gly Leu Pro Ala Pro Pro Ser Ile Ile Lys Ala Met Gly Gly

130 135 140

Ser Gln Pro Gly Glu Leu Gln Ile Ser Trp Glu Glu Pro Ala Pro Glu

145 150 155 160

Ile Ser Asp Phe Leu Arg Tyr Glu Leu Arg Tyr Gly Pro Arg Asp Pro

165 170 175

Lys Asn Ser Thr Gly Pro Thr Val Ile Gln Leu Ile Ala Thr Glu Thr

180 185 190

Cys Cys Pro Ala Leu Gln Arg Pro His Ser Ala Ser Ala Leu Asp Gln

195 200 205

Ser Pro Cys Ala Gln Pro Thr Met Pro Trp Gln Asp Gly Pro Lys Gln

210 215 220

Thr Ser Pro Ser Arg Glu Ala Ser Ala Leu Thr Ala Glu Gly Gly Ser

225 230 235 240

Cys Leu Ile Ser Gly Leu Gln Pro Gly Asn Ser Tyr Trp Leu Gln Leu

245 250 255

Arg Ser Glu Pro Asp Gly Ile Ser Leu Gly Gly Ser Trp Gly Ser Trp

260 265 270

Ser Leu Pro Val Thr Val Asp Leu Pro Gly Asp Ala Val Ala Leu Gly

275 280 285

Leu Gln Cys Phe Thr Leu Asp Leu Lys Asn Val Thr Cys Gln Trp Gln

290 295 300

Gln Gln Asp His Ala Ser Ser Gln Gly Phe Phe Tyr His Ser Arg Ala

305 310 315 320

Arg Cys Cys Pro Arg Asp Arg Tyr Pro Ile Trp Glu Asn Cys Glu Glu

325 330 335

Glu Glu Lys Thr Asn Pro Gly Leu Gln Thr Pro Gln Phe Ser Arg Cys

340 345 350

His Phe Lys Ser Arg Asn Asp Ser Ile Ile His Ile Leu Val Glu Val

355 360 365

Thr Thr Ala Pro Gly Thr Val His Ser Tyr Leu Gly Ser Pro Phe Trp

370 375 380

Ile His Gln Ala Val Arg Leu Pro Thr Pro Asn Leu His Trp Arg Glu

385 390 395 400

Ile Ser Ser Gly His Leu Glu Leu Glu Trp Gln His Pro Ser Ser Trp

405 410 415

Ala Ala Gln Glu Thr Cys Tyr Gln Leu Arg Tyr Thr Gly Glu Gly His

420 425 430

Gln Asp Trp Lys Val Leu Glu Pro Pro Leu Gly Ala Arg Gly Gly Thr

435 440 445

Leu Glu Leu Arg Pro Arg Ser Arg Tyr Arg Leu Gln Leu Arg Ala Arg

450 455 460

Leu Asn Gly Pro Thr Tyr Gln Gly Pro Trp Ser Ser Trp

465 470 475

<210> 80

<211> 631

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(1-631) dimerization domain

<400> 80

Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala

1 5 10 15

Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln

20 25 30

Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe

35 40 45

Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn

50 55 60

Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys

65 70 75 80

Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val

85 90 95

Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr

100 105 110

Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn

115 120 125

Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu

130 135 140

His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu

145 150 155 160

Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met

165 170 175

Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro

180 185 190

Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln

195 200 205

Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg

210 215 220

Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys

225 230 235 240

Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp

245 250 255

Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro

260 265 270

Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly

275 280 285

Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His

290 295 300

Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu

305 310 315 320

Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val

325 330 335

Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn

340 345 350

Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp

355 360 365

Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr

370 375 380

Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu

385 390 395 400

Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp

405 410 415

Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln

420 425 430

His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu

435 440 445

Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser

450 455 460

Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu

465 470 475 480

Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu

485 490 495

Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro

500 505 510

Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn

515 520 525

Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly

530 535 540

Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro

545 550 555 560

Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro

565 570 575

Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val

580 585 590

Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp

595 600 605

Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys

610 615 620

Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro

625 630

<210> 81

<211> 362

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> FGFR1(1-362) dimerization domain

<400> 81

Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala

1 5 10 15

Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln

20 25 30

Pro Trp Gly Ala Pro Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly

35 40 45

Asp Leu Leu Gln Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile

50 55 60

Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg

65 70 75 80

Ile Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser

85 90 95

Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr

100 105 110

Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp

115 120 125

Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr

130 135 140

Lys Pro Asn Arg Met Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys

145 150 155 160

Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe

165 170 175

Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys

180 185 190

Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val

195 200 205

Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp

210 215 220

Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn

225 230 235 240

His Thr Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile

245 250 255

Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn

260 265 270

Val Glu Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln

275 280 285

Trp Leu Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn

290 295 300

Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp

305 310 315 320

Lys Glu Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala

325 330 335

Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His

340 345 350

Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu

355 360

<210> 82

<211> 514

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> PDGFRA(1-514) dimerization domain

<400> 82

Met Gly Thr Ser His Pro Ala Phe Leu Val Leu Gly Cys Leu Leu Thr

1 5 10 15

Gly Leu Ser Leu Ile Leu Cys Gln Leu Ser Leu Pro Ser Ile Leu Pro

20 25 30

Asn Glu Asn Glu Lys Val Val Gln Leu Asn Ser Ser Phe Ser Leu Arg

35 40 45

Cys Phe Gly Glu Ser Glu Val Ser Trp Gln Tyr Pro Met Ser Glu Glu

50 55 60

Glu Ser Ser Asp Val Glu Ile Arg Asn Glu Glu Asn Asn Ser Gly Leu

65 70 75 80

Phe Val Thr Val Leu Glu Val Ser Ser Ala Ser Ala Ala His Thr Gly

85 90 95

Leu Tyr Thr Cys Tyr Tyr Asn His Thr Gln Thr Glu Glu Asn Glu Leu

100 105 110

Glu Gly Arg His Ile Tyr Ile Tyr Val Pro Asp Pro Asp Val Ala Phe

115 120 125

Val Pro Leu Gly Met Thr Asp Tyr Leu Val Ile Val Glu Asp Asp Asp

130 135 140

Ser Ala Ile Ile Pro Cys Arg Thr Thr Asp Pro Glu Thr Pro Val Thr

145 150 155 160

Leu His Asn Ser Glu Gly Val Val Pro Ala Ser Tyr Asp Ser Arg Gln

165 170 175

Gly Phe Asn Gly Thr Phe Thr Val Gly Pro Tyr Ile Cys Glu Ala Thr

180 185 190

Val Lys Gly Lys Lys Phe Gln Thr Ile Pro Phe Asn Val Tyr Ala Leu

195 200 205

Lys Ala Thr Ser Glu Leu Asp Leu Glu Met Glu Ala Leu Lys Thr Val

210 215 220

Tyr Lys Ser Gly Glu Thr Ile Val Val Thr Cys Ala Val Phe Asn Asn

225 230 235 240

Glu Val Val Asp Leu Gln Trp Thr Tyr Pro Gly Glu Val Lys Gly Lys

245 250 255

Gly Ile Thr Met Leu Glu Glu Ile Lys Val Pro Ser Ile Lys Leu Val

260 265 270

Tyr Thr Leu Thr Val Pro Glu Ala Thr Val Lys Asp Ser Gly Asp Tyr

275 280 285

Glu Cys Ala Ala Arg Gln Ala Thr Arg Glu Val Lys Glu Met Lys Lys

290 295 300

Val Thr Ile Ser Val His Glu Lys Gly Phe Ile Glu Ile Lys Pro Thr

305 310 315 320

Phe Ser Gln Leu Glu Ala Val Asn Leu His Glu Val Lys His Phe Val

325 330 335

Val Glu Val Arg Ala Tyr Pro Pro Pro Arg Ile Ser Trp Leu Lys Asn

340 345 350

Asn Leu Thr Leu Ile Glu Asn Leu Thr Glu Ile Thr Thr Asp Val Glu

355 360 365

Lys Ile Gln Glu Ile Arg Tyr Arg Ser Lys Leu Lys Leu Ile Arg Ala

370 375 380

Lys Glu Glu Asp Ser Gly His Tyr Thr Ile Val Ala Gln Asn Glu Asp

385 390 395 400

Ala Val Lys Ser Tyr Thr Phe Glu Leu Leu Thr Gln Val Pro Ser Ser

405 410 415

Ile Leu Asp Leu Val Asp Asp His His Gly Ser Thr Gly Gly Gln Thr

420 425 430

Val Arg Cys Thr Ala Glu Gly Thr Pro Leu Pro Asp Ile Glu Trp Met

435 440 445

Ile Cys Lys Asp Ile Lys Lys Cys Asn Asn Glu Thr Ser Trp Thr Ile

450 455 460

Leu Ala Asn Asn Val Ser Asn Ile Ile Thr Glu Ile His Ser Arg Asp

465 470 475 480

Arg Ser Thr Val Glu Gly Arg Val Thr Phe Ala Lys Val Glu Glu Thr

485 490 495

Ile Ala Val Arg Cys Leu Ala Lys Asn Leu Leu Gly Ala Glu Asn Arg

500 505 510

Glu Leu

<210> 83

<211> 518

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> PDGFRB(1-518) dimerization domain

<400> 83

Met Arg Leu Pro Gly Ala Met Pro Ala Leu Ala Leu Lys Gly Glu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Ser Leu Leu Leu Leu Leu Glu Pro Gln Ile Ser Gln Gly

20 25 30

Leu Val Val Thr Pro Pro Gly Pro Glu Leu Val Leu Asn Val Ser Ser

35 40 45

Thr Phe Val Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg

50 55 60

Met Ser Gln Glu Pro Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Gly Thr

65 70 75 80

Phe Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly

85 90 95

Glu Tyr Phe Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu

100 105 110

Arg Lys Arg Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asp Pro Thr Val Gly Phe Leu

115 120 125

Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu Thr Glu Ile Thr Glu

130 135 140

Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln Leu Val Val Thr Leu

145 150 155 160

His Glu Lys Lys Gly Asp Val Ala Leu Pro Val Pro Tyr Asp His Gln

165 170 175

Arg Gly Phe Ser Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser Tyr Ile Cys Lys Thr

180 185 190

Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala Tyr Tyr Val Tyr Arg

195 200 205

Leu Gln Val Ser Ser Ile Asn Val Ser Val Asn Ala Val Gln Thr Val

210 215 220

Val Arg Gln Gly Glu Asn Ile Thr Leu Met Cys Ile Val Ile Gly Asn

225 230 235 240

Glu Val Val Asn Phe Glu Trp Thr Tyr Pro Arg Lys Glu Ser Gly Arg

245 250 255

Leu Val Glu Pro Val Thr Asp Phe Leu Leu Asp Met Pro Tyr His Ile

260 265 270

Arg Ser Ile Leu His Ile Pro Ser Ala Glu Leu Glu Asp Ser Gly Thr

275 280 285

Tyr Thr Cys Asn Val Thr Glu Ser Val Asn Asp His Gln Asp Glu Lys

290 295 300

Ala Ile Asn Ile Thr Val Val Glu Ser Gly Tyr Val Arg Leu Leu Gly

305 310 315 320

Glu Val Gly Thr Leu Gln Phe Ala Glu Leu His Arg Ser Arg Thr Leu

325 330 335

Gln Val Val Phe Glu Ala Tyr Pro Pro Pro Thr Val Leu Trp Phe Lys

340 345 350

Asp Asn Arg Thr Leu Gly Asp Ser Ser Ala Gly Glu Ile Ala Leu Ser

355 360 365

Thr Arg Asn Val Ser Glu Thr Arg Tyr Val Ser Glu Leu Thr Leu Val

370 375 380

Arg Val Lys Val Ala Glu Ala Gly His Tyr Thr Met Arg Ala Phe His

385 390 395 400

Glu Asp Ala Glu Val Gln Leu Ser Phe Gln Leu Gln Ile Asn Val Pro

405 410 415

Val Arg Val Leu Glu Leu Ser Glu Ser His Pro Asp Ser Gly Glu Gln

420 425 430

Thr Val Arg Cys Arg Gly Arg Gly Met Pro Gln Pro Asn Ile Ile Trp

435 440 445

Ser Ala Cys Arg Asp Leu Lys Arg Cys Pro Arg Glu Leu Pro Pro Thr

450 455 460

Leu Leu Gly Asn Ser Ser Glu Glu Glu Ser Gln Leu Glu Thr Asn Val

465 470 475 480

Thr Tyr Trp Glu Glu Glu Gln Glu Phe Glu Val Val Ser Thr Leu Arg

485 490 495

Leu Gln His Val Asp Arg Pro Leu Ser Val Arg Cys Thr Leu Arg Asn

500 505 510

Ala Val Gly Gln Asp Thr

515

<210> 84

<211> 54

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> BCMA (1-54) dimerization domain

<400> 84

Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser

1 5 10 15

Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr

20 25 30

Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser

35 40 45

Val Lys Gly Thr Asn Ala

50

<210> 85

<211> 78

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> BAFF-R (1-78) dimerization domain

<400> 85

Met Arg Arg Gly Pro Arg Ser Leu Arg Gly Arg Asp Ala Pro Ala Pro

1 5 10 15

Thr Pro Cys Val Pro Ala Glu Cys Phe Asp Leu Leu Val Arg His Cys

20 25 30

Val Ala Cys Gly Leu Leu Arg Thr Pro Arg Pro Lys Pro Ala Gly Ala

35 40 45

Ser Ser Pro Ala Pro Arg Thr Ala Leu Gln Pro Gln Glu Ser Val Gly

50 55 60

Ala Gly Ala Gly Glu Ala Ala Leu Pro Leu Pro Gly Leu Leu

65 70 75

<210> 86

<211> 165

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TACI (1-165) dimerization domain

<400> 86

Met Ser Gly Leu Gly Arg Ser Arg Arg Gly Gly Arg Ser Arg Val Asp

1 5 10 15

Gln Glu Glu Arg Phe Pro Gln Gly Leu Trp Thr Gly Val Ala Met Arg

20 25 30

Ser Cys Pro Glu Glu Gln Tyr Trp Asp Pro Leu Leu Gly Thr Cys Met

35 40 45

Ser Cys Lys Thr Ile Cys Asn His Gln Ser Gln Arg Thr Cys Ala Ala

50 55 60

Phe Cys Arg Ser Leu Ser Cys Arg Lys Glu Gln Gly Lys Phe Tyr Asp

65 70 75 80

His Leu Leu Arg Asp Cys Ile Ser Cys Ala Ser Ile Cys Gly Gln His

85 90 95

Pro Lys Gln Cys Ala Tyr Phe Cys Glu Asn Lys Leu Arg Ser Pro Val

100 105 110

Asn Leu Pro Pro Glu Leu Arg Arg Gln Arg Ser Gly Glu Val Glu Asn

115 120 125

Asn Ser Asp Asn Ser Gly Arg Tyr Gln Gly Leu Glu His Arg Gly Ser

130 135 140

Glu Ala Ser Pro Ala Leu Pro Gly Leu Lys Leu Ser Ala Asp Gln Val

145 150 155 160

Ala Leu Val Tyr Ser

165

<210> 87

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> OX40 (1-214) dimerization domain

<400> 87

Met Cys Val Gly Ala Arg Arg Leu Gly Arg Gly Pro Cys Ala Ala Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Gly Leu Gly Leu Ser Thr Val Thr Gly Leu His Cys Val

20 25 30

Gly Asp Thr Tyr Pro Ser Asn Asp Arg Cys Cys His Glu Cys Arg Pro

35 40 45

Gly Asn Gly Met Val Ser Arg Cys Ser Arg Ser Gln Asn Thr Val Cys

50 55 60

Arg Pro Cys Gly Pro Gly Phe Tyr Asn Asp Val Val Ser Ser Lys Pro

65 70 75 80

Cys Lys Pro Cys Thr Trp Cys Asn Leu Arg Ser Gly Ser Glu Arg Lys

85 90 95

Gln Leu Cys Thr Ala Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg Cys Arg Ala Gly

100 105 110

Thr Gln Pro Leu Asp Ser Tyr Lys Pro Gly Val Asp Cys Ala Pro Cys

115 120 125

Pro Pro Gly His Phe Ser Pro Gly Asp Asn Gln Ala Cys Lys Pro Trp

130 135 140

Thr Asn Cys Thr Leu Ala Gly Lys His Thr Leu Gln Pro Ala Ser Asn

145 150 155 160

Ser Ser Asp Ala Ile Cys Glu Asp Arg Asp Pro Pro Ala Thr Gln Pro

165 170 175

Gln Glu Thr Gln Gly Pro Pro Ala Arg Pro Ile Thr Val Gln Pro Thr

180 185 190

Glu Ala Trp Pro Arg Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Arg Pro Val Glu

195 200 205

Val Pro Gly Gly Arg Ala

210

<210> 88

<211> 69

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> CD8(138-206) tyrosine kinase activating domain

<400> 88

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

35 40 45

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

50 55 60

Ile Thr Leu Tyr Cys

65

<210> 89

<211> 102

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EpoR(237-338;L241G,L242P) tyrosine kinase activating domain

<400> 89

Ser Glu Pro Val Ser Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Ser Leu Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val

20 25 30

Leu Ala Leu Leu Ser His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro

35 40 45

Gly Ile Pro Ser Pro Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His

50 55 60

Lys Gly Asn Phe Gln Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp

65 70 75 80

Trp Ser Pro Cys Thr Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu

85 90 95

Val Leu Ser Glu Arg Cys

100

<210> 90

<211> 102

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EpoR(237-338) tyrosine kinase activating domain

<400> 90

Ser Glu Pro Val Ser Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Ser Leu Ile Leu Val Val Ile Leu Val Leu Leu Thr Val

20 25 30

Leu Ala Leu Leu Ser His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro

35 40 45

Gly Ile Pro Ser Pro Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His

50 55 60

Lys Gly Asn Phe Gln Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp

65 70 75 80

Trp Ser Pro Cys Thr Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu

85 90 95

Val Leu Ser Glu Arg Cys

100

<210> 91

<211> 46

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EpoR(237-282;L241G,L242P) tyrosine kinase activating domain

<400> 91

Ser Glu Pro Val Ser Gly Pro Thr Pro Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Ser Leu Ile Leu Val Val Ile Leu Val Gly Pro Thr Val

20 25 30

Leu Ala Leu Leu Ser His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile

35 40 45

<210> 92

<211> 92

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> GP130(609-700) tyrosine kinase activating domain

<400> 92

Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro

1 5 10 15

Val Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys

20 25 30

Phe Asn Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro

35 40 45

Asp Pro Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro

50 55 60

Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe

65 70 75 80

Thr Asp Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala Asn Asp

85 90

<210> 93

<211> 99

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> PrlR(221-319) tyrosine kinase activating domain

<400> 93

Ala Thr Phe Ile Gln Ile Pro Ser Asp Phe Thr Met Asn Asp Thr Thr

1 5 10 15

Val Trp Ile Ser Val Ala Val Leu Ser Ala Val Ile Cys Leu Ile Ile

20 25 30

Val Trp Ala Val Ala Leu Lys Gly Tyr Ser Met Val Thr Cys Ile Phe

35 40 45

Pro Pro Val Pro Gly Pro Lys Ile Lys Gly Phe Asp Ala His Leu Leu

50 55 60

Glu Lys Gly Lys Ser Glu Glu Leu Leu Ser Ala Leu Gly Cys Gln Asp

65 70 75 80

Phe Pro Pro Thr Ser Asp Tyr Glu Asp Leu Leu Val Glu Tyr Leu Glu

85 90 95

Val Asp Asp

<210> 94

<211> 102

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> GHR(251-352) tyrosine kinase activating domain

<400> 94

Leu Pro Gln Met Ser Gln Phe Thr Cys Glu Glu Asp Phe Tyr Phe Pro

1 5 10 15

Trp Leu Leu Ile Ile Ile Phe Gly Ile Phe Gly Leu Thr Val Met Leu

20 25 30

Phe Val Phe Leu Phe Ser Lys Gln Gln Arg Ile Lys Met Leu Ile Leu

35 40 45

Pro Pro Val Pro Val Pro Lys Ile Lys Gly Ile Asp Pro Asp Leu Leu

50 55 60

Lys Glu Gly Lys Leu Glu Glu Val Asn Thr Ile Leu Ala Ile His Asp

65 70 75 80

Ser Tyr Lys Pro Glu Phe His Ser Asp Asp Ser Trp Val Glu Phe Ile

85 90 95

Glu Leu Asp Ile Asp Glu

100

<210> 95

<211> 97

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> GCSFR(614-710) tyrosine kinase activating domain

<400> 95

Leu Thr Leu Met Thr Leu Thr Pro Glu Gly Ser Glu Leu His Ile Ile

1 5 10 15

Leu Gly Leu Phe Gly Leu Leu Leu Leu Leu Thr Cys Leu Cys Gly Thr

20 25 30

Ala Trp Leu Cys Cys Ser Pro Asn Arg Lys Asn Pro Leu Trp Pro Ser

35 40 45

Val Pro Asp Pro Ala His Ser Ser Leu Gly Ser Trp Val Pro Thr Ile

50 55 60

Met Glu Glu Asp Ala Phe Gln Leu Pro Gly Leu Gly Thr Pro Pro Ile

65 70 75 80

Thr Lys Leu Thr Val Leu Glu Glu Asp Glu Lys Lys Pro Val Pro Trp

85 90 95

Glu

<210> 96

<211> 105

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(478-582) tyrosine kinase activating domain

<400> 96

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile Ser

1 5 10 15

Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly

20 25 30

Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg

35 40 45

His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser

65 70 75 80

Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys

85 90 95

Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105

<210> 97

<211> 51

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(478-528) tyrosine kinase activating domain

<400> 97

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile Ser

1 5 10 15

Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly

20 25 30

Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg

35 40 45

His Ala Leu

50

<210> 98

<211> 348

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(632-979) tyrosine kinase activating domain

<400> 98

Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala

1 5 10 15

Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly

20 25 30

Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu

35 40 45

Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser

50 55 60

Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu

65 70 75 80

Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr

85 90 95

Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu Lys Val Lys Ile Pro Val Ala

100 105 110

Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile

115 120 125

Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser Val Asp Asn Pro His Val Cys

130 135 140

Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln

145 150 155 160

Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp Tyr Val Arg Glu His Lys Asp

165 170 175

Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys

180 185 190

Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala

195 200 205

Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro Gln His Val Lys Ile Thr Asp

210 215 220

Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala

225 230 235 240

Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu

245 250 255

His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr

260 265 270

Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro

275 280 285

Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln

290 295 300

Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp

305 310 315 320

Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu

325 330 335

Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Tyr Leu

340 345

<210> 99

<211> 405

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> FGFR1(363-767) tyrosine kinase activating domain

<400> 99

Glu Glu Arg Pro Ala Val Met Thr Ser Pro Leu Tyr Leu Glu Ile Ile

1 5 10 15

Ile Tyr Cys Thr Gly Ala Phe Leu Ile Ser Cys Met Val Gly Ser Val

20 25 30

Ile Val Tyr Lys Met Lys Ser Gly Thr Lys Lys Ser Asp Phe His Ser

35 40 45

Gln Met Ala Val His Lys Leu Ala Lys Ser Ile Pro Leu Arg Arg Gln

50 55 60

Val Thr Val Ser Ala Asp Ser Ser Ala Ser Met Asn Ser Gly Val Leu

65 70 75 80

Leu Val Arg Pro Ser Arg Leu Ser Ser Ser Gly Thr Pro Met Leu Ala

85 90 95

Gly Val Ser Glu Tyr Glu Leu Pro Glu Asp Pro Arg Trp Glu Leu Pro

100 105 110

Arg Asp Arg Leu Val Leu Gly Lys Pro Leu Gly Glu Gly Cys Phe Gly

115 120 125

Gln Val Val Leu Ala Glu Ala Ile Gly Leu Asp Lys Asp Lys Pro Asn

130 135 140

Arg Val Thr Lys Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Asp Ala Thr Glu

145 150 155 160

Lys Asp Leu Ser Asp Leu Ile Ser Glu Met Glu Met Met Lys Met Ile

165 170 175

Gly Lys His Lys Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Gln Asp

180 185 190

Gly Pro Leu Tyr Val Ile Val Glu Tyr Ala Ser Lys Gly Asn Leu Arg

195 200 205

Glu Tyr Leu Gln Ala Arg Arg Pro Pro Gly Leu Glu Tyr Cys Tyr Asn

210 215 220

Pro Ser His Asn Pro Glu Glu Gln Leu Ser Ser Lys Asp Leu Val Ser

225 230 235 240

Cys Ala Tyr Gln Val Ala Arg Gly Met Glu Tyr Leu Ala Ser Lys Lys

245 250 255

Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Thr Glu Asp

260 265 270

Asn Val Met Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile His His

275 280 285

Ile Asp Tyr Tyr Lys Lys Thr Thr Asn Gly Arg Leu Pro Val Lys Trp

290 295 300

Met Ala Pro Glu Ala Leu Phe Asp Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp

305 310 315 320

Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Phe Thr Leu Gly Gly

325 330 335

Ser Pro Tyr Pro Gly Val Pro Val Glu Glu Leu Phe Lys Leu Leu Lys

340 345 350

Glu Gly His Arg Met Asp Lys Pro Ser Asn Cys Thr Asn Glu Leu Tyr

355 360 365

Met Met Met Arg Asp Cys Trp His Ala Val Pro Ser Gln Arg Pro Thr

370 375 380

Phe Lys Gln Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg Ile Val Ala Leu Thr Ser

385 390 395 400

Asn Gln Glu Tyr Leu

405

<210> 100

<211> 440

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> PDGFRA(515-954) tyrosine kinase activating domain

<400> 100

Lys Leu Val Ala Pro Thr Leu Arg Ser Glu Leu Thr Val Ala Ala Ala

1 5 10 15

Val Leu Val Leu Leu Val Ile Val Ile Ile Ser Leu Ile Val Leu Val

20 25 30

Val Ile Trp Lys Gln Lys Pro Arg Tyr Glu Ile Arg Trp Arg Val Ile

35 40 45

Glu Ser Ile Ser Pro Asp Gly His Glu Tyr Ile Tyr Val Asp Pro Met

50 55 60

Gln Leu Pro Tyr Asp Ser Arg Trp Glu Phe Pro Arg Asp Gly Leu Val

65 70 75 80

Leu Gly Arg Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Lys Val Val Glu Gly

85 90 95

Thr Ala Tyr Gly Leu Ser Arg Ser Gln Pro Val Met Lys Val Ala Val

100 105 110

Lys Met Leu Lys Pro Thr Ala Arg Ser Ser Glu Lys Gln Ala Leu Met

115 120 125

Ser Glu Leu Lys Ile Met Thr His Leu Gly Pro His Leu Asn Ile Val

130 135 140

Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Lys Ser Gly Pro Ile Tyr Ile Ile Thr

145 150 155 160

Glu Tyr Cys Phe Tyr Gly Asp Leu Val Asn Tyr Leu His Lys Asn Arg

165 170 175

Asp Ser Phe Leu Ser His His Pro Glu Lys Pro Lys Lys Glu Leu Asp

180 185 190

Ile Phe Gly Leu Asn Pro Ala Asp Glu Ser Thr Arg Ser Tyr Val Ile

195 200 205

Leu Ser Phe Glu Asn Asn Gly Asp Tyr Met Asp Met Lys Gln Ala Asp

210 215 220

Thr Thr Gln Tyr Val Pro Met Leu Glu Arg Lys Glu Val Ser Lys Tyr

225 230 235 240

Ser Asp Ile Gln Arg Ser Leu Tyr Asp Arg Pro Ala Ser Tyr Lys Lys

245 250 255

Lys Ser Met Leu Asp Ser Glu Val Lys Asn Leu Leu Ser Asp Asp Asn

260 265 270

Ser Glu Gly Leu Thr Leu Leu Asp Leu Leu Ser Phe Thr Tyr Gln Val

275 280 285

Ala Arg Gly Met Glu Phe Leu Ala Ser Lys Asn Cys Val His Arg Asp

290 295 300

Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Leu Ala Gln Gly Lys Ile Val Lys Ile

305 310 315 320

Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile Met His Asp Ser Asn Tyr Val

325 330 335

Ser Lys Gly Ser Thr Phe Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser

340 345 350

Ile Phe Asp Asn Leu Tyr Thr Thr Leu Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly

355 360 365

Ile Leu Leu Trp Glu Ile Phe Ser Leu Gly Gly Thr Pro Tyr Pro Gly

370 375 380

Met Met Val Asp Ser Thr Phe Tyr Asn Lys Ile Lys Ser Gly Tyr Arg

385 390 395 400

Met Ala Lys Pro Asp His Ala Thr Ser Glu Val Tyr Glu Ile Met Val

405 410 415

Lys Cys Trp Asn Ser Glu Pro Glu Lys Arg Pro Ser Phe Tyr His Leu

420 425 430

Ser Glu Ile Val Glu Asn Leu Leu

435 440

<210> 101

<211> 444

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> PDGFRB(519-962) tyrosine kinase activating domain

<400> 101

Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu Pro Phe Lys Val Val Val

1 5 10 15

Ile Ser Ala Ile Leu Ala Leu Val Val Leu Thr Ile Ile Ser Leu Ile

20 25 30

Ile Leu Ile Met Leu Trp Gln Lys Lys Pro Arg Tyr Glu Ile Arg Trp

35 40 45

Lys Val Ile Glu Ser Val Ser Ser Asp Gly His Glu Tyr Ile Tyr Val

50 55 60

Asp Pro Met Gln Leu Pro Tyr Asp Ser Thr Trp Glu Leu Pro Arg Asp

65 70 75 80

Gln Leu Val Leu Gly Arg Thr Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Gln Val

85 90 95

Val Glu Ala Thr Ala His Gly Leu Ser His Ser Gln Ala Thr Met Lys

100 105 110

Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala Arg Ser Ser Glu Lys Gln

115 120 125

Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser His Leu Gly Pro His Leu

130 135 140

Asn Val Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Lys Gly Gly Pro Ile Tyr

145 150 155 160

Ile Ile Thr Glu Tyr Cys Arg Tyr Gly Asp Leu Val Asp Tyr Leu His

165 170 175

Arg Asn Lys His Thr Phe Leu Gln His His Ser Asp Lys Arg Arg Pro

180 185 190

Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ser Asn Ala Leu Pro Val Gly Leu Pro Leu

195 200 205

Pro Ser His Val Ser Leu Thr Gly Glu Ser Asp Gly Gly Tyr Met Asp

210 215 220

Met Ser Lys Asp Glu Ser Val Asp Tyr Val Pro Met Leu Asp Met Lys

225 230 235 240

Gly Asp Val Lys Tyr Ala Asp Ile Glu Ser Ser Asn Tyr Met Ala Pro

245 250 255

Tyr Asp Asn Tyr Val Pro Ser Ala Pro Glu Arg Thr Cys Arg Ala Thr

260 265 270

Leu Ile Asn Glu Ser Pro Val Leu Ser Tyr Met Asp Leu Val Gly Phe

275 280 285

Ser Tyr Gln Val Ala Asn Gly Met Glu Phe Leu Ala Ser Lys Asn Cys

290 295 300

Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Ile Cys Glu Gly Lys

305 310 315 320

Leu Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile Met Arg Asp

325 330 335

Ser Asn Tyr Ile Ser Lys Gly Ser Thr Phe Leu Pro Leu Lys Trp Met

340 345 350

Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asn Ser Leu Tyr Thr Thr Leu Ser Asp Val

355 360 365

Trp Ser Phe Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile Phe Thr Leu Gly Gly Thr

370 375 380

Pro Tyr Pro Glu Leu Pro Met Asn Glu Gln Phe Tyr Asn Ala Ile Lys

385 390 395 400

Arg Gly Tyr Arg Met Ala Gln Pro Ala His Ala Ser Asp Glu Ile Tyr

405 410 415

Glu Ile Met Gln Lys Cys Trp Glu Glu Lys Phe Glu Ile Arg Pro Pro

420 425 430

Phe Ser Gln Leu Val Leu Leu Leu Glu Arg Leu Leu

435 440

<210> 102

<211> 102

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> murine EpoR(236-337;L264G,L265P) tyrosine kinase activating domain

<400> 102

Ser Glu Pro Ala Ser Leu Leu Thr Ala Ser Asp Leu Asp Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Thr Leu Ser Leu Ile Leu Val Leu Ile Ser Leu Gly Pro Thr Val

20 25 30

Leu Ala Leu Leu Ser His Arg Arg Thr Leu Gln Gln Lys Ile Trp Pro

35 40 45

Gly Ile Pro Ser Pro Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His

50 55 60

Lys Gly Asn Phe Gln Leu Trp Leu Leu Gln Arg Asp Gly Cys Leu Trp

65 70 75 80

Trp Ser Pro Gly Ser Ser Phe Pro Glu Asp Pro Pro Ala His Leu Glu

85 90 95

Val Leu Ser Glu Pro Arg

100

<210> 103

<211> 236

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EpoR(273-508) tyrosine kinase activating domain

<400> 103

Ser His Arg Arg Ala Leu Lys Gln Lys Ile Trp Pro Gly Ile Pro Ser

1 5 10 15

Pro Glu Ser Glu Phe Glu Gly Leu Phe Thr Thr His Lys Gly Asn Phe

20 25 30

Gln Leu Trp Leu Tyr Gln Asn Asp Gly Cys Leu Trp Trp Ser Pro Cys

35 40 45

Thr Pro Phe Thr Glu Asp Pro Pro Ala Ser Leu Glu Val Leu Ser Glu

50 55 60

Arg Cys Trp Gly Thr Met Gln Ala Val Glu Pro Gly Thr Asp Asp Glu

65 70 75 80

Gly Pro Leu Leu Glu Pro Val Gly Ser Glu His Ala Gln Asp Thr Tyr

85 90 95

Leu Val Leu Asp Lys Trp Leu Leu Pro Arg Asn Pro Pro Ser Glu Asp

100 105 110

Leu Pro Gly Pro Gly Gly Ser Val Asp Ile Val Ala Met Asp Glu Gly

115 120 125

Ser Glu Ala Ser Ser Cys Ser Ser Ala Leu Ala Ser Lys Pro Ser Pro

130 135 140

Glu Gly Ala Ser Ala Ala Ser Phe Glu Tyr Thr Ile Leu Asp Pro Ser

145 150 155 160

Ser Gln Leu Leu Arg Pro Trp Thr Leu Cys Pro Glu Leu Pro Pro Thr

165 170 175

Pro Pro His Leu Lys Tyr Leu Tyr Leu Val Val Ser Asp Ser Gly Ile

180 185 190

Ser Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Asp Ser Gln Gly Ala Gln Gly Gly Leu

195 200 205

Ser Asp Gly Pro Tyr Ser Asn Pro Tyr Glu Asn Ser Leu Ile Pro Ala

210 215 220

Ala Glu Pro Leu Pro Pro Ser Tyr Val Ala Cys Ser

225 230 235

<210> 104

<211> 105

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> PD1(156-191)-TPOR/MPLR (514-582) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 104

Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val

1 5 10 15

Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val

20 25 30

Leu Ala Val Ile Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg

35 40 45

His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser

65 70 75 80

Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys

85 90 95

Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105

<210> 105

<211> 105

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(478-582) (wildtype sequence) TpoR tyrosine kinase

activating domain with transmembrane domain variant

<400> 105

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile Ser

1 5 10 15

Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly

20 25 30

Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg

35 40 45

His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser

65 70 75 80

Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys

85 90 95

Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105

<210> 106

<211> 104

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-1) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 106

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Trp Ile Ser Leu

1 5 10 15

Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu

20 25 30

Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His

35 40 45

Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp

65 70 75 80

Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser

85 90 95

Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100

<210> 107

<211> 103

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-2) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 107

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ile Ser Leu Val

1 5 10 15

Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu

20 25 30

Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala

35 40 45

Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr

65 70 75 80

Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser

85 90 95

Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100

<210> 108

<211> 104

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-2+1) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 108

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Leu Ile Ser Leu

1 5 10 15

Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu

20 25 30

Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His

35 40 45

Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp

65 70 75 80

Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser

85 90 95

Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100

<210> 109

<211> 102

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-3) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 109

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ser Leu Val Thr

1 5 10 15

Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu

20 25 30

Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu

35 40 45

Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg

50 55 60

Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys

65 70 75 80

Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu

85 90 95

Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100

<210> 110

<211> 101

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-4) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 110

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Leu Val Thr Ala

1 5 10 15

Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu

20 25 30

Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp

35 40 45

Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp

50 55 60

Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu

65 70 75 80

Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg

85 90 95

Thr Pro Leu Pro Leu

100

<210> 111

<211> 102

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-4+1) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 111

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ile Leu Val Thr

1 5 10 15

Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu

20 25 30

Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu

35 40 45

Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg

50 55 60

Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys

65 70 75 80

Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu

85 90 95

Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100

<210> 112

<211> 100

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-5) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 112

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Val Thr Ala Leu

1 5 10 15

His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg

20 25 30

Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro

35 40 45

Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr

50 55 60

Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu

65 70 75 80

Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr

85 90 95

Pro Leu Pro Leu

100

<210> 113

<211> 99

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-6) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 113

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Thr Ala Leu His

1 5 10 15

Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp

20 25 30

Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser

35 40 45

Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala

50 55 60

Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val

65 70 75 80

Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro

85 90 95

Leu Pro Leu

<210> 114

<211> 98

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-7) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 114

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Leu His Leu

1 5 10 15

Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln

20 25 30

Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu

35 40 45

Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala

50 55 60

Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu

65 70 75 80

Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu

85 90 95

Pro Leu

<210> 115

<211> 97

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-8) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 115

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Leu His Leu Val

1 5 10 15

Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe

20 25 30

Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro

35 40 45

Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu

50 55 60

Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro

65 70 75 80

Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro

85 90 95

Leu

<210> 116

<211> 96

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-9) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 116

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr His Leu Val Leu

1 5 10 15

Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro

20 25 30

Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp

35 40 45

Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser

50 55 60

Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser

65 70 75 80

Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85 90 95

<210> 117

<211> 95

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-10) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 117

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Leu Val Leu Gly

1 5 10 15

Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala

20 25 30

His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu

35 40 45

His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro

50 55 60

Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu

65 70 75 80

Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85 90 95

<210> 118

<211> 94

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-11) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 118

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Val Leu Gly Leu

1 5 10 15

Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His

20 25 30

Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His

35 40 45

Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro

50 55 60

Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu

65 70 75 80

Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85 90

<210> 119

<211> 93

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-12) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 119

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Leu Gly Leu Ser

1 5 10 15

Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr

20 25 30

Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg

35 40 45

Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys

50 55 60

Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu

65 70 75 80

Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85 90

<210> 120

<211> 92

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-13) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 120

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Gly Leu Ser Ala

1 5 10 15

Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg

20 25 30

Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val

35 40 45

Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala

50 55 60

Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile

65 70 75 80

Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85 90

<210> 121

<211> 91

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-14) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 121

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Leu Ser Ala Val

1 5 10 15

Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg

20 25 30

Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu

35 40 45

Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr

50 55 60

Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu

65 70 75 80

Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85 90

<210> 122

<211> 90

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-15) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 122

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ser Ala Val Leu

1 5 10 15

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

20 25 30

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

35 40 45

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

50 55 60

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

65 70 75 80

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85 90

<210> 123

<211> 89

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-16) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 123

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Val Leu Gly

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg

20 25 30

His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln

35 40 45

Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys

65 70 75 80

Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85

<210> 124

<211> 88

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-17) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 124

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Val Leu Gly Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His

20 25 30

Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr

35 40 45

Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp

50 55 60

Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser

65 70 75 80

Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85

<210> 125

<211> 87

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N-18) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 125

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Leu Gly Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala

20 25 30

Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu

35 40 45

Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr

50 55 60

Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser

65 70 75 80

Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

85

<210> 126

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N+1) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 126

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Leu Ile

1 5 10 15

Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu

20 25 30

Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu

35 40 45

Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val

65 70 75 80

Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro

85 90 95

Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105

<210> 127

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N+2) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 127

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Val Leu

1 5 10 15

Ile Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala Val

20 25 30

Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg Arg

35 40 45

Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val Leu

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala Thr

65 70 75 80

Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile Leu

85 90 95

Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105

<210> 128

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N+3) TpoR tyrosine kinase activating

domain with transmembrane domain variant

<400> 128

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Leu Val

1 5 10 15

Leu Ile Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser Ala

20 25 30

Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr Arg

35 40 45

Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg Val

50 55 60

Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys Ala

65 70 75 80

Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu Ile

85 90 95

Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105

<210> 129

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N+4) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 129

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Ile Leu

1 5 10 15

Val Leu Ile Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu Ser

20 25 30

Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His Tyr

35 40 45

Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His Arg

50 55 60

Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro Lys

65 70 75 80

Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu Glu

85 90 95

Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105

<210> 130

<211> 110

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N+5) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 130

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Leu Ile

1 5 10 15

Leu Val Leu Ile Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly Leu

20 25 30

Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala His

35 40 45

Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu His

50 55 60

Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro Pro

65 70 75 80

Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu Leu

85 90 95

Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105 110

<210> 131

<211> 111

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N+6) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 131

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Leu Leu

1 5 10 15

Ile Leu Val Leu Ile Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu Gly

20 25 30

Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro Ala

35 40 45

His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp Leu

50 55 60

His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser Pro

65 70 75 80

Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser Leu

85 90 95

Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105 110

<210> 132

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N+7) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 132

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Val Leu

1 5 10 15

Leu Ile Leu Val Leu Ile Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val Leu

20 25 30

Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe Pro

35 40 45

Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro Asp

50 55 60

Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu Ser

65 70 75 80

Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro Ser

85 90 95

Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro Leu

100 105 110

<210> 133

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TPOR/MPLR(N+8) TpoR tyrosine kinase activating domain

with transmembrane domain variant

<400> 133

Ser Asp Pro Thr Arg Val Glu Thr Ala Thr Glu Thr Ala Trp Leu Val

1 5 10 15

Leu Leu Ile Leu Val Leu Ile Ser Leu Val Thr Ala Leu His Leu Val

20 25 30

Leu Gly Leu Ser Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Arg Trp Gln Phe

35 40 45

Pro Ala His Tyr Arg Arg Leu Arg His Ala Leu Trp Pro Ser Leu Pro

50 55 60

Asp Leu His Arg Val Leu Gly Gln Tyr Leu Arg Asp Thr Ala Ala Leu

65 70 75 80

Ser Pro Pro Lys Ala Thr Val Ser Asp Thr Cys Glu Glu Val Glu Pro

85 90 95

Ser Leu Leu Glu Ile Leu Pro Lys Ser Ser Glu Arg Thr Pro Leu Pro

100 105 110

Leu

<210> 134

<211> 144

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL7R(316-459) tyrosine kinase effector domains

<400> 134

Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln

1 5 10 15

Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro

20 25 30

Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg

35 40 45

Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala

50 55 60

Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys

65 70 75 80

Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr

85 90 95

Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr

100 105 110

Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser

115 120 125

Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln

130 135 140

<210> 135

<211> 219

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL2Rb(333-551) tyrosine kinase effector domains

<400> 135

Val Thr Gln Leu Leu Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser

1 5 10 15

Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr

20 25 30

Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Val

35 40 45

Tyr Phe Thr Tyr Asp Pro Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asp Glu Gly Val

50 55 60

Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser

65 70 75 80

Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu

85 90 95

Leu Phe Ser Pro Ser Leu Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro Ser Thr Ala

100 105 110

Pro Gly Gly Ser Gly Ala Gly Glu Glu Arg Met Pro Pro Ser Leu Gln

115 120 125

Glu Arg Val Pro Arg Asp Trp Asp Pro Gln Pro Leu Gly Pro Pro Thr

130 135 140

Pro Gly Val Pro Asp Leu Val Asp Phe Gln Pro Pro Pro Glu Leu Val

145 150 155 160

Leu Arg Glu Ala Gly Glu Glu Val Pro Asp Ala Gly Pro Arg Glu Gly

165 170 175

Val Ser Phe Pro Trp Ser Arg Pro Pro Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala

180 185 190

Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln

195 200 205

Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

210 215

<210> 136

<211> 50

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IFNAR1(508-557) tyrosine kinase effector domains

<400> 136

Ile Ser Thr Ile Ala Thr Val Glu Glu Thr Asn Gln Thr Asp Glu Asp

1 5 10 15

His Lys Lys Tyr Ser Ser Gln Thr Ser Gln Asp Ser Gly Asn Tyr Ser

20 25 30

Asn Glu Asp Glu Ser Glu Ser Lys Thr Ser Glu Glu Leu Gln Gln Asp

35 40 45

Phe Val

50

<210> 137

<211> 206

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IFNAR2(310-515) tyrosine kinase effector domains

<400> 137

Lys Lys Lys Val Trp Asp Tyr Asn Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Ser Asp

1 5 10 15

Thr Glu Ala Ala Pro Arg Thr Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Met His Gly

20 25 30

Leu Thr Val Arg Pro Leu Gly Gln Ala Ser Ala Thr Ser Thr Glu Ser

35 40 45

Gln Leu Ile Asp Pro Glu Ser Glu Glu Glu Pro Asp Leu Pro Glu Val

50 55 60

Asp Val Glu Leu Pro Thr Met Pro Lys Asp Ser Pro Gln Gln Leu Glu

65 70 75 80

Leu Leu Ser Gly Pro Cys Glu Arg Arg Lys Ser Pro Leu Gln Asp Pro

85 90 95

Phe Pro Glu Glu Asp Tyr Ser Ser Thr Glu Gly Ser Gly Gly Arg Ile

100 105 110

Thr Phe Asn Val Asp Leu Asn Ser Val Phe Leu Arg Val Leu Asp Asp

115 120 125

Glu Asp Ser Asp Asp Leu Glu Ala Pro Leu Met Leu Ser Ser His Leu

130 135 140

Glu Glu Met Val Asp Pro Glu Asp Pro Asp Asn Val Gln Ser Asn His

145 150 155 160

Leu Leu Ala Ser Gly Glu Gly Thr Gln Pro Thr Phe Pro Ser Pro Ser

165 170 175

Ser Glu Gly Leu Trp Ser Glu Asp Ala Pro Ser Asp Gln Ser Asp Thr

180 185 190

Ser Glu Ser Asp Val Asp Leu Gly Asp Gly Tyr Ile Met Arg

195 200 205

<210> 138

<211> 256

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IFNAR1/2(IFNAR1 residues 508-557-IFNAR2 residues 310-515) tyrosine

kinase effector domains

<400> 138

Ile Ser Thr Ile Ala Thr Val Glu Glu Thr Asn Gln Thr Asp Glu Asp

1 5 10 15

His Lys Lys Tyr Ser Ser Gln Thr Ser Gln Asp Ser Gly Asn Tyr Ser

20 25 30

Asn Glu Asp Glu Ser Glu Ser Lys Thr Ser Glu Glu Leu Gln Gln Asp

35 40 45

Phe Val Lys Lys Lys Val Trp Asp Tyr Asn Tyr Asp Asp Glu Ser Asp

50 55 60

Ser Asp Thr Glu Ala Ala Pro Arg Thr Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Met

65 70 75 80

His Gly Leu Thr Val Arg Pro Leu Gly Gln Ala Ser Ala Thr Ser Thr

85 90 95

Glu Ser Gln Leu Ile Asp Pro Glu Ser Glu Glu Glu Pro Asp Leu Pro

100 105 110

Glu Val Asp Val Glu Leu Pro Thr Met Pro Lys Asp Ser Pro Gln Gln

115 120 125

Leu Glu Leu Leu Ser Gly Pro Cys Glu Arg Arg Lys Ser Pro Leu Gln

130 135 140

Asp Pro Phe Pro Glu Glu Asp Tyr Ser Ser Thr Glu Gly Ser Gly Gly

145 150 155 160

Arg Ile Thr Phe Asn Val Asp Leu Asn Ser Val Phe Leu Arg Val Leu

165 170 175

Asp Asp Glu Asp Ser Asp Asp Leu Glu Ala Pro Leu Met Leu Ser Ser

180 185 190

His Leu Glu Glu Met Val Asp Pro Glu Asp Pro Asp Asn Val Gln Ser

195 200 205

Asn His Leu Leu Ala Ser Gly Glu Gly Thr Gln Pro Thr Phe Pro Ser

210 215 220

Pro Ser Ser Glu Gly Leu Trp Ser Glu Asp Ala Pro Ser Asp Gln Ser

225 230 235 240

Asp Thr Ser Glu Ser Asp Val Asp Leu Gly Asp Gly Tyr Ile Met Arg

245 250 255

<210> 139

<211> 221

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IFNLR1(300-520) tyrosine kinase effector domains

<400> 139

Arg Gly Val Arg Pro Thr Pro Arg Val Arg Ala Pro Ala Thr Gln Gln

1 5 10 15

Thr Arg Trp Lys Lys Asp Leu Ala Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu

20 25 30

Glu Asp Thr Glu Asp Gly Val Ser Phe Gln Pro Tyr Ile Glu Pro Pro

35 40 45

Ser Phe Leu Gly Gln Glu His Gln Ala Pro Gly His Ser Glu Ala Gly

50 55 60

Gly Val Asp Ser Gly Arg Pro Arg Ala Pro Leu Val Pro Ser Glu Gly

65 70 75 80

Ser Ser Ala Trp Asp Ser Ser Asp Arg Ser Trp Ala Ser Thr Val Asp

85 90 95

Ser Ser Trp Asp Arg Ala Gly Ser Ser Gly Tyr Leu Ala Glu Lys Gly

100 105 110

Pro Gly Gln Gly Pro Gly Gly Asp Gly His Gln Glu Ser Leu Pro Pro

115 120 125

Pro Glu Phe Ser Lys Asp Ser Gly Phe Leu Glu Glu Leu Pro Glu Asp

130 135 140

Asn Leu Ser Ser Trp Ala Thr Trp Gly Thr Leu Pro Pro Glu Pro Asn

145 150 155 160

Leu Val Pro Gly Gly Pro Pro Val Ser Leu Gln Thr Leu Thr Phe Cys

165 170 175

Trp Glu Ser Ser Pro Glu Glu Glu Glu Glu Ala Arg Glu Ser Glu Ile

180 185 190

Glu Asp Ser Asp Ala Gly Ser Trp Gly Ala Glu Ser Thr Gln Arg Thr

195 200 205

Glu Asp Arg Gly Arg Thr Leu Gly His Tyr Met Ala Arg

210 215 220

<210> 140

<211> 35

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> Common Gamma Chain(335-369) tyrosine kinase effector domains

<400> 140

Ile Pro Pro Lys Gly Gly Ala Leu Gly Glu Gly Pro Gly Ala Ser Pro

1 5 10 15

Cys Asn Gln His Ser Pro Tyr Trp Ala Pro Pro Cys Tyr Thr Leu Lys

20 25 30

Pro Glu Thr

35

<210> 141

<211> 166

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL9R(356-521) tyrosine kinase effector domains

<400> 141

Thr Ala Leu Leu Thr Cys Gly Pro Ala Arg Pro Trp Lys Ser Val Ala

1 5 10 15

Leu Glu Glu Glu Gln Glu Gly Pro Gly Thr Arg Leu Pro Gly Asn Leu

20 25 30

Ser Ser Glu Asp Val Leu Pro Ala Gly Cys Thr Glu Trp Arg Val Gln

35 40 45

Thr Leu Ala Tyr Leu Pro Gln Glu Asp Trp Ala Pro Thr Ser Leu Thr

50 55 60

Arg Pro Ala Pro Pro Asp Ser Glu Gly Ser Arg Ser Ser Ser Ser Ser

65 70 75 80

Ser Ser Ser Asn Asn Asn Asn Tyr Cys Ala Leu Gly Cys Tyr Gly Gly

85 90 95

Trp His Leu Ser Ala Leu Pro Gly Asn Thr Gln Ser Ser Gly Pro Ile

100 105 110

Pro Ala Leu Ala Cys Gly Leu Ser Cys Asp His Gln Gly Leu Glu Thr

115 120 125

Gln Gln Gly Val Ala Trp Val Leu Ala Gly His Cys Gln Arg Pro Gly

130 135 140

Leu His Glu Asp Leu Gln Gly Met Leu Leu Pro Ser Val Leu Ser Lys

145 150 155 160

Ala Arg Ser Trp Thr Phe

165

<210> 142

<211> 217

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL21R(322-538) tyrosine kinase effector domains

<400> 142

Pro Arg Ser Pro Ala Lys Arg Leu Gln Leu Thr Glu Leu Gln Glu Pro

1 5 10 15

Ala Glu Leu Val Glu Ser Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp Pro

20 25 30

Thr Ala Gln Asn Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg

35 40 45

Pro Tyr Gly Leu Val Ser Ile Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala Glu

50 55 60

Gly Pro Cys Thr Trp Pro Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala

65 70 75 80

Leu Asp Leu Asp Ala Gly Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp Pro

85 90 95

Leu Leu Asp Ala Gly Thr Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Ala

100 105 110

Gly Ser Pro Gly Leu Gly Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu

115 120 125

Lys Pro Pro Leu Ala Asp Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro Trp

130 135 140

Gly Gly Arg Ser Pro Gly Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro

145 150 155 160

Leu Ala Gly Leu Asp Met Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly Ser

165 170 175

Asp Cys Ser Ser Pro Val Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp Glu

180 185 190

Gly Pro Pro Arg Ser Tyr Leu Arg Gln Trp Val Val Ile Pro Pro Pro

195 200 205

Leu Ser Ser Pro Gly Pro Gln Ala Ser

210 215

<210> 143

<211> 286

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> GHR(353-638) tyrosine kinase effector domains

<400> 143

Pro Asp Glu Lys Thr Glu Glu Ser Asp Thr Asp Arg Leu Leu Ser Ser

1 5 10 15

Asp His Glu Lys Ser His Ser Asn Leu Gly Val Lys Asp Gly Asp Ser

20 25 30

Gly Arg Thr Ser Cys Cys Glu Pro Asp Ile Leu Glu Thr Asp Phe Asn

35 40 45

Ala Asn Asp Ile His Glu Gly Thr Ser Glu Val Ala Gln Pro Gln Arg

50 55 60

Leu Lys Gly Glu Ala Asp Leu Leu Cys Leu Asp Gln Lys Asn Gln Asn

65 70 75 80

Asn Ser Pro Tyr His Asp Ala Cys Pro Ala Thr Gln Gln Pro Ser Val

85 90 95

Ile Gln Ala Glu Lys Asn Lys Pro Gln Pro Leu Pro Thr Glu Gly Ala

100 105 110

Glu Ser Thr His Gln Ala Ala His Ile Gln Leu Ser Asn Pro Ser Ser

115 120 125

Leu Ser Asn Ile Asp Phe Tyr Ala Gln Val Ser Asp Ile Thr Pro Ala

130 135 140

Gly Ser Val Val Leu Ser Pro Gly Gln Lys Asn Lys Ala Gly Met Ser

145 150 155 160

Gln Cys Asp Met His Pro Glu Met Val Ser Leu Cys Gln Glu Asn Phe

165 170 175

Leu Met Asp Asn Ala Tyr Phe Cys Glu Ala Asp Ala Lys Lys Cys Ile

180 185 190

Pro Val Ala Pro His Ile Lys Val Glu Ser His Ile Gln Pro Ser Leu

195 200 205

Asn Gln Glu Asp Ile Tyr Ile Thr Thr Glu Ser Leu Thr Thr Ala Ala

210 215 220

Gly Arg Pro Gly Thr Gly Glu His Val Pro Gly Ser Glu Met Pro Val

225 230 235 240

Pro Asp Tyr Thr Ser Ile His Ile Val Gln Ser Pro Gln Gly Leu Ile

245 250 255

Leu Asn Ala Thr Ala Leu Pro Leu Pro Asp Lys Glu Phe Leu Ser Ser

260 265 270

Cys Gly Tyr Val Ser Thr Asp Gln Leu Asn Lys Ile Met Pro

275 280 285

<210> 144

<211> 170

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EpoR(339-508) tyrosine kinase effector domains

<400> 144

Trp Gly Thr Met Gln Ala Val Glu Pro Gly Thr Asp Asp Glu Gly Pro

1 5 10 15

Leu Leu Glu Pro Val Gly Ser Glu His Ala Gln Asp Thr Tyr Leu Val

20 25 30

Leu Asp Lys Trp Leu Leu Pro Arg Asn Pro Pro Ser Glu Asp Leu Pro

35 40 45

Gly Pro Gly Gly Ser Val Asp Ile Val Ala Met Asp Glu Gly Ser Glu

50 55 60

Ala Ser Ser Cys Ser Ser Ala Leu Ala Ser Lys Pro Ser Pro Glu Gly

65 70 75 80

Ala Ser Ala Ala Ser Phe Glu Tyr Thr Ile Leu Asp Pro Ser Ser Gln

85 90 95

Leu Leu Arg Pro Trp Thr Leu Cys Pro Glu Leu Pro Pro Thr Pro Pro

100 105 110

His Leu Lys Tyr Leu Tyr Leu Val Val Ser Asp Ser Gly Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Tyr Ser Ser Gly Asp Ser Gln Gly Ala Gln Gly Gly Leu Ser Asp

130 135 140

Gly Pro Tyr Ser Asn Pro Tyr Glu Asn Ser Leu Ile Pro Ala Ala Glu

145 150 155 160

Pro Leu Pro Pro Ser Tyr Val Ala Cys Ser

165 170

<210> 145

<211> 203

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> murine IL2Rb(337-539) tyrosine kinase effector domains

<400> 145

Ala Val Gln Leu Leu Leu Leu Gln Lys Asp Ser Ala Pro Leu Pro Ser

1 5 10 15

Pro Ser Gly His Ser Gln Ala Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe

20 25 30

Phe Phe His Leu Pro Asn Ala Leu Glu Ile Glu Ser Cys Gln Val Tyr

35 40 45

Phe Thr Tyr Asp Pro Cys Val Glu Glu Glu Val Glu Glu Asp Gly Ser

50 55 60

Arg Leu Pro Glu Gly Ser Pro His Pro Pro Leu Leu Pro Leu Ala Gly

65 70 75 80

Glu Gln Asp Asp Tyr Cys Ala Phe Pro Pro Arg Asp Asp Leu Leu Leu

85 90 95

Phe Ser Pro Ser Leu Ser Thr Pro Asn Thr Ala Tyr Gly Gly Ser Arg

100 105 110

Ala Pro Glu Glu Arg Ser Pro Leu Ser Leu His Glu Gly Leu Pro Ser

115 120 125

Leu Ala Ser Arg Asp Leu Met Gly Leu Gln Arg Pro Leu Glu Arg Met

130 135 140

Pro Glu Gly Asp Gly Glu Gly Leu Ser Ala Asn Ser Ser Gly Glu Gln

145 150 155 160

Ala Ser Val Pro Glu Gly Asn Leu His Gly Gln Asp Gln Asp Arg Gly

165 170 175

Gln Gly Pro Ile Leu Thr Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln

180 185 190

Glu Leu Gln Ala Gln Asp Ser Val His Leu Ile

195 200

<210> 146

<211> 144

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> murine IL7Ra(316-459) tyrosine kinase effector domains

<400> 146

Ala Arg Asp Glu Val Glu Ser Phe Leu Pro Asn Asp Leu Pro Ala Gln

1 5 10 15

Pro Glu Glu Leu Glu Thr Gln Gly His Arg Ala Ala Val His Ser Ala

20 25 30

Asn Arg Ser Pro Glu Thr Ser Val Ser Pro Pro Glu Thr Val Arg Arg

35 40 45

Glu Ser Pro Leu Arg Cys Leu Ala Arg Asn Leu Ser Thr Cys Asn Ala

50 55 60

Pro Pro Leu Leu Ser Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Arg Asp Gly Asp Arg

65 70 75 80

Asn Arg Pro Pro Val Tyr Gln Asp Leu Leu Pro Asn Ser Gly Asn Thr

85 90 95

Asn Val Pro Val Pro Val Pro Gln Pro Leu Pro Phe Gln Ser Gly Ile

100 105 110

Leu Ile Pro Val Ser Gln Arg Gln Pro Ile Ser Thr Ser Ser Val Leu

115 120 125

Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Lys

130 135 140

<210> 147

<211> 231

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(955-1186) tyrosine kinase effector domains

<400> 147

Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro Thr Asp Ser

1 5 10 15

Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp Asp Val Val

20 25 30

Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe Ser Ser Pro

35 40 45

Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Ala Thr Ser Asn

50 55 60

Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln Ser Cys Pro

65 70 75 80

Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Tyr Ser Ser Asp Pro Thr Gly

85 90 95

Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp Asp Thr Phe Leu Pro Val Pro Glu

100 105 110

Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Ser Val Gln Asn

115 120 125

Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg Asp Pro

130 135 140

His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro Glu Tyr Leu

145 150 155 160

Asn Thr Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro Ala

165 170 175

His Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp

180 185 190

Tyr Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe

195 200 205

Lys Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln

210 215 220

Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala

225 230

<210> 148

<211> 218

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(955-1186;Y974F,d1045-1057) tyrosine kinase effector domains

<400> 148

Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro Thr Asp Ser

1 5 10 15

Asn Phe Phe Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp Asp Val Val

20 25 30

Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe Ser Ser Pro

35 40 45

Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Ala Thr Ser Asn

50 55 60

Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln Ser Cys Pro

65 70 75 80

Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Ile Asp Asp Thr Phe Leu Pro

85 90 95

Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Ser

100 105 110

Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser

115 120 125

Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro

130 135 140

Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp

145 150 155 160

Ser Pro Ala His Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp

165 170 175

Asn Pro Asp Tyr Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn

180 185 190

Gly Ile Phe Lys Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val

195 200 205

Ala Pro Gln Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala

210 215

<210> 149

<211> 54

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(955-1009;Y974F) tyrosine kinase effector domains

<400> 149

Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro Thr Asp Ser

1 5 10 15

Asn Phe Phe Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp Asp Val Val

20 25 30

Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe Ser Ser Pro

35 40 45

Ser Thr Ser Arg Thr Pro

50

<210> 150

<211> 54

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(1019-1085) tyrosine kinase effector domains

<400> 150

Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln Ser Cys

1 5 10 15

Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Ile Asp Asp Thr Phe Leu

20 25 30

Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly

35 40 45

Ser Val Gln Asn Pro Val

50

<210> 151

<211> 54

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(1037-1103;Y1068/1101F,d1045-1057) tyrosine kinase effector domains

<400> 151

Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Ile Asp Asp Thr Phe Leu Pro Val

1 5 10 15

Pro Glu Phe Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Ser Val

20 25 30

Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg

35 40 45

Asp Pro His Phe Gln Asp

50

<210> 152

<211> 54

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(1066-1118;Y1068/1086F) tyrosine kinase effector domains

<400> 152

Val Pro Glu Phe Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Ser

1 5 10 15

Val Gln Asn Pro Val Phe His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser

20 25 30

Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro

35 40 45

Glu Tyr Leu Asn Thr Val

50

<210> 153

<211> 54

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(1122-1165) tyrosine kinase effector domains

<400> 153

Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe

1 5 10 15

Asp Ser Pro Ala His Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu

20 25 30

Asp Asn Pro Asp Tyr Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro

35 40 45

Asn Gly Ile Phe Lys Gly

50

<210> 154

<211> 54

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EGFR(1133-1186;Y1148F) tyrosine kinase effector domains

<400> 154

Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp Phe

1 5 10 15

Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe Lys

20 25 30

Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln Ser

35 40 45

Ser Glu Phe Ile Gly Ala

50

<210> 155

<211> 51

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL12Rb2(775-825) tyrosine kinase effector domains

<400> 155

Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu Pro

1 5 10 15

Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile Asp

20 25 30

Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu Leu

35 40 45

Glu Pro Gln

50

<210> 156

<211> 41

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL7R(376-416) tyrosine kinase effector domains

<400> 156

Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg

1 5 10 15

Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser

20 25 30

Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro

35 40

<210> 157

<211> 36

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL7R(424-459) tyrosine kinase effector domains

<400> 157

Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr

1 5 10 15

Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe

20 25 30

Tyr Gln Asn Gln

35

<210> 158

<211> 68

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL7R(376-416,424-459) tyrosine kinase effector domains

<400> 158

Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg

1 5 10 15

Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser

20 25 30

Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr

35 40 45

Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe

50 55 60

Tyr Gln Asn Gln

65

<210> 159

<211> 36

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL7R(424-459;Y456F) tyrosine kinase effector domains

<400> 159

Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr

1 5 10 15

Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe

20 25 30

Phe Gln Asn Gln

35

<210> 160

<211> 68

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL7R(376-416,424-459,Y456F) tyrosine kinase effector domains

<400> 160

Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg

1 5 10 15

Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser

20 25 30

Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr

35 40 45

Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe

50 55 60

Phe Gln Asn Gln

65

<210> 161

<211> 75

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL2small(393-433) tyrosine kinase effector domains

<400> 161

Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu

1 5 10 15

Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg

20 25 30

Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala

35 40 45

Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln

50 55 60

Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

65 70 75

<210> 162

<211> 34

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL2small(518-551) tyrosine kinase effector domains

<400> 162

Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr

1 5 10 15

Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His

20 25 30

Leu Val

<210> 163

<211> 82

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL2small(339-379,393-433) tyrosine kinase effector domains

<400> 163

Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser

1 5 10 15

Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro

20 25 30

Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala

35 40 45

Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp

50 55 60

Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser

65 70 75 80

Pro Ser

<210> 164

<211> 75

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL2small(339-379,518-551) tyrosine kinase effector domains

<400> 164

Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser

1 5 10 15

Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro

20 25 30

Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala

35 40 45

Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln

50 55 60

Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

65 70 75

<210> 165

<211> 75

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL2small(393-433,518-551) tyrosine kinase effector domains

<400> 165

Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu

1 5 10 15

Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg

20 25 30

Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala

35 40 45

Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln

50 55 60

Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val

65 70 75

<210> 166

<211> 116

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL2small(339-379,393-433,518-551) tyrosine kinase effector domains

<400> 166

Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser

1 5 10 15

Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro

20 25 30

Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln Asp Glu Gly Val Ala Gly Ala

35 40 45

Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu Ser Gly Glu Asp

50 55 60

Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu Leu Leu Phe Ser

65 70 75 80

Pro Ser Gly Gln Gly Glu Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu

85 90 95

Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro

100 105 110

Thr His Leu Val

115

<210> 167

<211> 43

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IFNAR2small(310-352) tyrosine kinase effector domains

<400> 167

Lys Lys Lys Val Trp Asp Tyr Asn Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Ser Asp

1 5 10 15

Thr Glu Ala Ala Pro Arg Thr Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Met His Gly

20 25 30

Leu Thr Val Arg Pro Leu Gly Gln Ala Ser Ala

35 40

<210> 168

<211> 29

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IFNAR2small(486-515) tyrosine kinase effector domains

<400> 168

Glu Gly Leu Trp Ser Glu Asp Ala Pro Ser Asp Gln Ser Asp Thr Ser

1 5 10 15

Glu Ser Asp Val Asp Leu Gly Asp Gly Tyr Ile Met Arg

20 25

<210> 169

<211> 72

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IFNAR2small(310-352,486-515) tyrosine kinase effector domains

<400> 169

Lys Lys Lys Val Trp Asp Tyr Asn Tyr Asp Asp Glu Ser Asp Ser Asp

1 5 10 15

Thr Glu Ala Ala Pro Arg Thr Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Met His Gly

20 25 30

Leu Thr Val Arg Pro Leu Gly Gln Ala Ser Ala Glu Gly Leu Trp Ser

35 40 45

Glu Asp Ala Pro Ser Asp Gln Ser Asp Thr Ser Glu Ser Asp Val Asp

50 55 60

Leu Gly Asp Gly Tyr Ile Met Arg

65 70

<210> 170

<211> 156

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> BLNK(53-208) tyrosine kinase effector domains

<400> 170

Ala Ser Glu Ser Pro Ala Asp Glu Glu Glu Gln Trp Ser Asp Asp Phe

1 5 10 15

Asp Ser Asp Tyr Glu Asn Pro Asp Glu His Ser Asp Ser Glu Met Tyr

20 25 30

Val Met Pro Ala Glu Glu Asn Ala Asp Asp Ser Tyr Glu Pro Pro Pro

35 40 45

Val Glu Gln Glu Thr Arg Pro Val His Pro Ala Leu Pro Phe Ala Arg

50 55 60

Gly Glu Tyr Ile Asp Asn Arg Ser Ser Gln Arg His Ser Pro Pro Phe

65 70 75 80

Ser Lys Thr Leu Pro Ser Lys Pro Ser Trp Pro Ser Glu Lys Ala Arg

85 90 95

Leu Thr Ser Thr Leu Pro Ala Leu Thr Ala Leu Gln Lys Pro Gln Val

100 105 110

Pro Pro Lys Pro Lys Gly Leu Leu Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Val Val

115 120 125

Pro Val Glu Asp Asn Asp Glu Asn Tyr Ile His Pro Thr Glu Ser Ser

130 135 140

Ser Pro Pro Pro Glu Lys Ala Pro Met Val Asn Arg

145 150 155

<210> 171

<211> 156

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> BLNK(53-208;Y72F) tyrosine kinase effector domains

<400> 171

Ala Ser Glu Ser Pro Ala Asp Glu Glu Glu Gln Trp Ser Asp Asp Phe

1 5 10 15

Asp Ser Asp Phe Glu Asn Pro Asp Glu His Ser Asp Ser Glu Met Tyr

20 25 30

Val Met Pro Ala Glu Glu Asn Ala Asp Asp Ser Tyr Glu Pro Pro Pro

35 40 45

Val Glu Gln Glu Thr Arg Pro Val His Pro Ala Leu Pro Phe Ala Arg

50 55 60

Gly Glu Tyr Ile Asp Asn Arg Ser Ser Gln Arg His Ser Pro Pro Phe

65 70 75 80

Ser Lys Thr Leu Pro Ser Lys Pro Ser Trp Pro Ser Glu Lys Ala Arg

85 90 95

Leu Thr Ser Thr Leu Pro Ala Leu Thr Ala Leu Gln Lys Pro Gln Val

100 105 110

Pro Pro Lys Pro Lys Gly Leu Leu Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Val Val

115 120 125

Pro Val Glu Asp Asn Asp Glu Asn Tyr Ile His Pro Thr Glu Ser Ser

130 135 140

Ser Pro Pro Pro Glu Lys Ala Pro Met Val Asn Arg

145 150 155

<210> 172

<211> 156

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> BLNK(53-208;Y72F,Y96F) tyrosine kinase effector domains

<400> 172

Ala Ser Glu Ser Pro Ala Asp Glu Glu Glu Gln Trp Ser Asp Asp Phe

1 5 10 15

Asp Ser Asp Phe Glu Asn Pro Asp Glu His Ser Asp Ser Glu Met Tyr

20 25 30

Val Met Pro Ala Glu Glu Asn Ala Asp Asp Ser Phe Glu Pro Pro Pro

35 40 45

Val Glu Gln Glu Thr Arg Pro Val His Pro Ala Leu Pro Phe Ala Arg

50 55 60

Gly Glu Tyr Ile Asp Asn Arg Ser Ser Gln Arg His Ser Pro Pro Phe

65 70 75 80

Ser Lys Thr Leu Pro Ser Lys Pro Ser Trp Pro Ser Glu Lys Ala Arg

85 90 95

Leu Thr Ser Thr Leu Pro Ala Leu Thr Ala Leu Gln Lys Pro Gln Val

100 105 110

Pro Pro Lys Pro Lys Gly Leu Leu Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Val Val

115 120 125

Pro Val Glu Asp Asn Asp Glu Asn Tyr Ile His Pro Thr Glu Ser Ser

130 135 140

Ser Pro Pro Pro Glu Lys Ala Pro Met Val Asn Arg

145 150 155

<210> 173

<211> 170

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> EpoR(339-508) tyrosine kinase effector domains

<400> 173

Trp Gly Thr Met Gln Ala Val Glu Pro Gly Thr Asp Asp Glu Gly Pro

1 5 10 15

Leu Leu Glu Pro Val Gly Ser Glu His Ala Gln Asp Thr Tyr Leu Val

20 25 30

Leu Asp Lys Trp Leu Leu Pro Arg Asn Pro Pro Ser Glu Asp Leu Pro

35 40 45

Gly Pro Gly Gly Ser Val Asp Ile Val Ala Met Asp Glu Gly Ser Glu

50 55 60

Ala Ser Ser Cys Ser Ser Ala Leu Ala Ser Lys Pro Ser Pro Glu Gly

65 70 75 80

Ala Ser Ala Ala Ser Phe Glu Tyr Thr Ile Leu Asp Pro Ser Ser Gln

85 90 95

Leu Leu Arg Pro Trp Thr Leu Cys Pro Glu Leu Pro Pro Thr Pro Pro

100 105 110

His Leu Lys Tyr Leu Tyr Leu Val Val Ser Asp Ser Gly Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Tyr Ser Ser Gly Asp Ser Gln Gly Ala Gln Gly Gly Leu Ser Asp

130 135 140

Gly Pro Tyr Ser Asn Pro Tyr Glu Asn Ser Leu Ile Pro Ala Ala Glu

145 150 155 160

Pro Leu Pro Pro Ser Tyr Val Ala Cys Ser

165 170

<210> 174

<211> 149

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL12Rb2(714-862) tyrosine kinase effector domains

<400> 174

Val Thr Pro Val Phe Arg His Pro Pro Cys Ser Asn Trp Pro Gln Arg

1 5 10 15

Glu Lys Gly Ile Gln Gly His Gln Ala Ser Glu Lys Asp Met Met His

20 25 30

Ser Ala Ser Ser Pro Pro Pro Pro Arg Ala Leu Gln Ala Glu Ser Arg

35 40 45

Gln Leu Val Asp Leu Tyr Lys Val Leu Glu Ser Arg Gly Ser Asp Pro

50 55 60

Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp

65 70 75 80

Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr Leu Pro Ser Asn Ile Asp Asp Leu Pro

85 90 95

Ser His Glu Ala Pro Leu Ala Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gln

100 105 110

His Ile Ser Leu Ser Val Phe Pro Ser Ser Ser Leu His Pro Leu Thr

115 120 125

Phe Ser Cys Gly Asp Lys Leu Thr Leu Asp Gln Leu Lys Met Arg Cys

130 135 140

Asp Ser Leu Met Leu

145

<210> 175

<211> 40

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL12Rb1(622-662) tyrosine kinase effector domains

<400> 175

Trp Asp Lys Gly Glu Arg Thr Glu Pro Leu Glu Lys Thr Glu Leu Pro

1 5 10 15

Glu Gly Ala Pro Glu Leu Ala Leu Asp Thr Glu Leu Ser Leu Glu Asp

20 25 30

Gly Asp Arg Cys Lys Ala Lys Met

35 40

<210> 176

<211> 275

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> IL10R1(304-578) tyrosine kinase effector domains

<400> 176

Val Ser Pro Glu Leu Lys Asn Leu Asp Leu His Gly Ser Thr Asp Ser

1 5 10 15

Gly Phe Gly Ser Thr Lys Pro Ser Leu Gln Thr Glu Glu Pro Gln Phe

20 25 30

Leu Leu Pro Asp Pro His Pro Gln Ala Asp Arg Thr Leu Gly Asn Arg

35 40 45

Glu Pro Pro Val Leu Gly Asp Ser Cys Ser Ser Gly Ser Ser Asn Ser

50 55 60

Thr Asp Ser Gly Ile Cys Leu Gln Glu Pro Ser Leu Ser Pro Ser Thr

65 70 75 80

Gly Pro Thr Trp Glu Gln Gln Val Gly Ser Asn Ser Arg Gly Gln Asp

85 90 95

Asp Ser Gly Ile Asp Leu Val Gln Asn Ser Glu Gly Arg Ala Gly Asp

100 105 110

Thr Gln Gly Gly Ser Ala Leu Gly His His Ser Pro Pro Glu Pro Glu

115 120 125

Val Pro Gly Glu Glu Asp Pro Ala Ala Val Ala Phe Gln Gly Tyr Leu

130 135 140

Arg Gln Thr Arg Cys Ala Glu Glu Lys Ala Thr Lys Thr Gly Cys Leu

145 150 155 160

Glu Glu Glu Ser Pro Leu Thr Asp Gly Leu Gly Pro Lys Phe Gly Arg

165 170 175

Cys Leu Val Asp Glu Ala Gly Leu His Pro Pro Ala Leu Ala Lys Gly

180 185 190

Tyr Leu Lys Gln Asp Pro Leu Glu Met Thr Leu Ala Ser Ser Gly Ala

195 200 205

Pro Thr Gly Gln Trp Asn Gln Pro Thr Glu Glu Trp Ser Leu Leu Ala

210 215 220

Leu Ser Ser Cys Ser Asp Leu Gly Ile Ser Asp Trp Ser Phe Ala His

225 230 235 240

Asp Leu Ala Pro Leu Gly Cys Val Ala Ala Pro Gly Gly Leu Leu Gly

245 250 255

Ser Phe Asn Ser Asp Leu Val Thr Leu Pro Leu Ile Ser Ser Leu Gln

260 265 270

Ser Ser Glu

275

<210> 177

<211> 461

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> Myristoyl-Myd88-CD40-FKBP(F36V)x2 (GoCART) construct

<400> 177

Met Gly Ser Ser Lys Ser Lys Pro Lys Asp Pro Ser Gln Arg Met Ala

1 5 10 15

Ala Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Ala Ala Pro Val Ser Ser Thr Ser

20 25 30

Ser Leu Pro Leu Ala Ala Leu Asn Met Arg Val Arg Arg Arg Leu Ser

35 40 45

Leu Phe Leu Asn Val Arg Thr Gln Val Ala Ala Asp Trp Thr Ala Leu

50 55 60

Ala Glu Glu Met Asp Phe Glu Tyr Leu Glu Ile Arg Gln Leu Glu Thr

65 70 75 80

Gln Ala Asp Pro Thr Gly Arg Leu Leu Asp Ala Trp Gln Gly Arg Pro

85 90 95

Gly Ala Ser Val Gly Arg Leu Leu Glu Leu Leu Thr Lys Leu Gly Arg

100 105 110

Asp Asp Val Leu Leu Glu Leu Gly Pro Ser Ile Glu Glu Asp Cys Gln

115 120 125

Lys Tyr Ile Leu Lys Gln Gln Gln Glu Glu Ala Glu Lys Pro Leu Gln

130 135 140

Val Ala Ala Val Asp Ser Ser Val Pro Arg Thr Ala Glu Leu Ala Gly

145 150 155 160

Ile Thr Thr Leu Asp Asp Pro Leu Gly His Met Pro Glu Arg Phe Asp

165 170 175

Ala Phe Ile Cys Tyr Cys Pro Ser Asp Ile Lys Lys Val Ala Lys Lys

180 185 190

Pro Thr Asn Lys Ala Pro His Pro Lys Gln Glu Pro Gln Glu Ile Asn

195 200 205

Phe Pro Asp Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr Ala Ala Pro Val Gln Glu

210 215 220

Thr Leu His Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln Glu Asp Gly Lys Glu Ser

225 230 235 240

Arg Ile Ser Val Gln Glu Arg Gln Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser

245 250 255

Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val

260 265 270

His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg

275 280 285

Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile

290 295 300

Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala

305 310 315 320

Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro

325 330 335

Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu

340 345 350

Lys Leu Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr

355 360 365

Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu

370 375 380

Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe

385 390 395 400

Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly

405 410 415

Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro

420 425 430

Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His

435 440 445

Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu

450 455 460

<210> 178

<211> 233

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> TagBFP construct

<400> 178

Met Ser Glu Leu Ile Lys Glu Asn Met His Met Lys Leu Tyr Met Glu

1 5 10 15

Gly Thr Val Asp Asn His His Phe Lys Cys Thr Ser Glu Gly Glu Gly

20 25 30

Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Thr Met Arg Ile Lys Val Val Glu Gly

35 40 45

Gly Pro Leu Pro Phe Ala Phe Asp Ile Leu Ala Thr Ser Phe Leu Tyr

50 55 60

Gly Ser Lys Thr Phe Ile Asn His Thr Gln Gly Ile Pro Asp Phe Phe

65 70 75 80

Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Val Thr Thr Tyr

85 90 95

Glu Asp Gly Gly Val Leu Thr Ala Thr Gln Asp Thr Ser Leu Gln Asp

100 105 110

Gly Cys Leu Ile Tyr Asn Val Lys Ile Arg Gly Val Asn Phe Thr Ser

115 120 125

Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Thr Leu Gly Trp Glu Ala Phe Thr

130 135 140

Glu Thr Leu Tyr Pro Ala Asp Gly Gly Leu Glu Gly Arg Asn Asp Met

145 150 155 160

Ala Leu Lys Leu Val Gly Gly Ser His Leu Ile Ala Asn Ile Lys Thr

165 170 175

Thr Tyr Arg Ser Lys Lys Pro Ala Lys Asn Leu Lys Met Pro Gly Val

180 185 190

Tyr Tyr Val Asp Tyr Arg Leu Glu Arg Ile Lys Glu Ala Asn Asn Glu

195 200 205

Thr Tyr Val Glu Gln His Glu Val Ala Val Ala Arg Tyr Cys Asp Leu

210 215 220

Pro Ser Lys Leu Gly His Lys Leu Asn

225 230

<210> 179

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> V5 epitope tag

<400> 179

Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr

1 5 10

<210> 180

<211> 246

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> 2173 scFv domain

<400> 180

Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Phe Asn Ile Glu Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Asp Glu Thr Lys Tyr Gly Pro Ile Phe

50 55 60

Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Ile Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Phe Arg Gly Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser

130 135 140

Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160

Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu Ile Ser Leu Val Ser Lys

180 185 190

Leu Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val

210 215 220

Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Gly Thr Phe Gly Gly Gly

225 230 235 240

Thr Lys Val Glu Ile Lys

245

<210> 181

<211> 241

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>

<223> 26C8 scFv domain

<400> 181

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Asn Ser Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Gln Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Val Phe His Trp Gly Phe Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu

130 135 140

Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

145 150 155 160

Arg Val Ser Asn Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Gln

165 170 175

Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile

180 185 190

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

195 200 205

Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

210 215 220

Tyr Gly Thr Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

225 230 235 240

Lys

<210> 182

<211> 69

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная Последовательность

<220>