Способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro Российский патент 2020 года по МПК A01H1/04 

Описание патента на изобретение RU2729461C1

Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к культивированию тканей и органов растений и может быть использовано в сельском хозяйстве для повышения эффективности работы с растениями сои in vitro в селекции растений.

Известен способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, включающий получение бобов, их стерилизацию 10 минут в 70%-этане, промывку 5 минут в дистиллированной воде и 10 минут в 0,1%-м растворе диацида, выделение эксплантов, культивирование на питательной среде и учет. (см. например: Хохлова Н.И, Фисенко П.П. Культура незрелых зародышей диких австралийских видов сои // Некоторые вопросы селекции и технологии возделывания сельскохозяйственных культур в Приморье, 1994. - С. 10-17.)

Недостатком данного способа поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, является:

- использование диацида - высокотоксичного ртуть содержащего соединения (1 класс опасности), оказывающего мутагенное и канцерогенное действие;

- большая трудоемкость при промывке после стерилизации бобов сои.

Известен способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, включающий получение бобов, их стерилизацию 48 часов отбеливателем с содержанием хлора 8-12% с добавлением 3,5 мл концентрированной серной кислоты, 5 кратную промывку стерильной дистиллированной водой, выделение эксплантов, культивирование на питательной среде и учет. (см. например: Raza G, Singh MB, Bhalla HL. In Vitro. Plant Regeneration from Commercial Cultivars of Soybean // Biomed Research Internatuonal. - 2017. - Vol. 2017(1). - P. 1-9.)

Недостатком способа поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, является:

- получение и использование высокотоксичного газообразного хлора;

- продолжительное время проведения стерилизации бобов сои;

- большое количество промывок после поверхностной стерилизации бобов сои.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, включающий получение бобов, их стерилизацию в течении 2 минут в 70% 2-пропанолом и помещением в 1% раствор гипохлорита натрия (20% отбеливатель Clorox) на 10 минут, 4-х кратное промывание стерильной водой, выделение эксплантов, культивирование на питательной среде, учет, (см.например: Wennuan L., Patricia J.M., Glenn B.C. Somatic embryogenesis in soybean via somatic embryo cycling. //In Vitro Cell. Dev. Biol. - 1992. - Vol. 28. - P. 153-160.)

Недостатком способа поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, является:

- затрата продолжительного времени на стерилизацию бобов сои;

- большое количество промываний после воздействия стерилизующего агента на бобы сои.

Цель изобретения - упрощение способа поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, повышение выхода стерильных и жизнеспособных эксплантов сои in vitro, ускорение селекционного процесса в селекции, сведение до минимума вредного воздействия стерилизующего агента.

Указанная цель достигается тем, что в способе поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, включающем получение бобов, их стерилизацию агентом, промывку, выделение эксплантов, культивирование на питательной среде и учет, согласно изобретению стерилизацию бобов сои осуществляют в растворе агента «АХД-2000 экспресс» в течении 1,5 минут, с последующей 2-х кратной промывкой стерильной дистиллированной водой, при этом раствор агента используют многократно до семи раз.

По сравнению с прототипом признаками изобретательского уровня предлагаемого способа поверхностной стерилизации бобов сои in vitro является следующее:

1. «стерилизацию бобов осуществляют в растворе агента «АХД-2000 экспресс» в течение 1,5 минут…», что позволяет:

- отказаться от использования токсичных стерилизующих агентов, что снизить вредоносное воздействие его на персонал;

- сократить время стерилизации, что ускорит селекционный процесс в селекции растений;

- повысить выход стерильных и жизнеспособных эксплантов сои in vitro;

- использовать данный стерилизующий агент впервые в культуре тканей и органов растений.

2. «…с последующей 2-х кратной промывкой стерильной дистиллированной водой…», что позволяет:

- сократить время промывки стерильной дистиллированной водой, что ускорит селекционный процесс;

- уменьшить количество используемой стерильной дистиллированной воды.

3. «…при этом раствор агента используют многократно до семи раз», что позволяет:

- сэкономить стерилизующий агент в количественном и стоимостном выражении;

- получать высокую долю асептических жизнеспособных эксплантов.

Признаки, указанные в отличительной части описания достижения цели доказывают, что заявляемый способ обладает новизной. Совокупность признаков, приведенных в сравнении свойств заявляемого и известного решений, дает основание сделать вывод, что заявляемый способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro имеет изобретательский уровень.

Предлагаемый способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro осуществляется следующим образом. В подготовленную почву высаживают семена сои на полевых делянках и культуральной комнате. В июле, августе месяце собирают незрелые бобы сои с растений размером семян 4-7 мм, как с опытных полей, так и в культуральной комнате. Поверхностную стерилизацию осуществляют в условиях ламинар-бокса путем погружения бобов сои в готовый раствор дезинфицирующего средства «АХД-2000 экспресс» [действующие вещества: N-пропанол (пропанол-1) 40%; Алкилдим тилбензиламмоний хлорид (АДБАХ) 0,15%; Изопропиловый спирт (пропанол-2) 35%]. Процесс стерилизации длиться 1,5 минуты.

Из таблицы 1 видно, что эффективным стерилизующим агентом является АХД-2000 экспресс для бобов сои генотипа 1Н. При экспозиции 1,5 мин. выход жизнеспособных эксплантов составляет 100%.

Из таблицы 2 видно, что эффективным стерилизующим агентом является АХД-2000 экспресс для бобов сои генотипа 1Н. При экспозиции 1,5 мин. выход жизнеспособных эксплантов составляет 100%.

Данные таблицы 3 показывают, что эффективным стерилизующим агентом является АХД-2000 экспресс для бобов сои генотипа 2Н. При экспозиции 1,5 мин. выход жизнеспособных эксплантов составляет 100%.

Данные таблицы 4 показывают, что эффективным стерилизующим агентом является АХД-2000 экспресс для бобов сои генотипа 2Н. При экспозиции 1,5 мин. выход жизнеспособных эксплантов составляет 100%.

Данные таблицы 5 показывают, что эффективным стерилизующим агентом является АХД-2000 экспресс для бобов сои генотипа 3Н. При экспозиции 1,5 мин. выход жизнеспособных эксплантов составляет 100%.

Данные таблицы 6 показывают, что эффективным стерилизующим агентом является АХД-2000 экспресс для бобов сои генотипа 3Н. При экспозиции 1,5 мин. выход жизнеспособных эксплантов составляет 100%.

Далее следует 2-х кратная промывка стерильной дистиллированной водой бобов сои генотипов 1Н, 2Н, 3Н.

Из таблица 7 видно, что оптимальным количеством промывок стерилизованных бобов сои in vitro генотипов 1Н, 2Н, 3Н составляет две, при 1,5 минуты воздействия агента АХД-2000 экспресс.

Данные таблицы 8 показывают, что эффективным количеством повторностей применения стерилизующего агента АХД-2000 экспресс по разным генотипам, выращенных в различных условиях, составляет до 7 раз.

Стерильные бобы сои помещают в чашки Петри, извлекают недозрелые зародыши длиной 4-7 мм. Экспланты отчленяют и помещают по одной в пробирку диаметром 18 мм для культивирования на питательную среду, содержащую: соли MS (Murashige and Skoog, 1962), витамины B5 (Gamborg et al., 1968), 3% сахарозы, 0,65% агара, при рН 5,9 до автоклавирования, 5 мг/л 2,4-D. Учет эффективности применения стерилизующего агента проводят через четыре недели после посадки.

Применение предлагаемого изобретения позволит упростить способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, повысить выход стерильных и жизнеспособных эксплантов сои in vitro, ускорить селекционный процесс в селекции, свести до минимума вредного воздействия стерилизующего агента.

Похожие патенты RU2729461C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕГЕНЕРАНТОВ РИСА В КУЛЬТУРЕ ПЫЛЬНИКОВ IN VITRO 2018
  • Ромашова Марина Викторовна
  • Илюшко Марина Владиславовна
  • Компаниец Светлана Васильевна
RU2681339C1
Способ микроклонального размножения гречихи in vitro 2022
  • Боровая Светлана Александровна
  • Богинская Наталья Геннадьевна
RU2783357C1
Способ получения новых генотипов гречихи in vitro 2022
  • Боровая Светлана Александровна
  • Клыков Алексей Григорьевич
  • Барсукова Елена Николаевна
  • Фисенко Пётр Викторович
RU2789885C1
Способ повышения флавоноид-образующей способности тканевой культуры in vitro гречихи посевной 2023
  • Боровая Светлана Александровна
  • Клыков Алексей Григорьевич
  • Барсукова Елена Николаевна
RU2811024C1
Питательная среда для микроклонального размножения гречихи посевной 2022
  • Боровая Светлана Александровна
  • Богинская Наталья Геннадьевна
RU2789883C1
Способ оздоровления картофеля от вирусных инфекций in vitro 2023
  • Шищенко Елена Васильевна
  • Чибизова Алёна Сергеевна
  • Собко Ольга Абдулалиевна
  • Барсукова Елена Николаевна
  • Ким Ирина Вячеславовна
  • Клыков Алексей Григорьевич
  • Кравченко Анна Олеговна
  • Ермак Ирина Михайловна
RU2805356C1
Средство защиты растений от инфекционных болезней сельскохозяйственных культур 2021
  • Боровая Светлана Александровна
  • Собко Ольга Абдулалиевна
  • Мацишина Наталия Валериевна
RU2767330C1
Способ микроклонального размножения жимолости in vitro 2023
  • Боровая Светлана Александровна
  • Хоружева Тамара Ивановна
  • Богинская Наталья Геннадьевна
  • Кухтина София Игоревна
RU2807118C1
Способ предпосевной обработки семян вики яровой 2021
  • Боровая Светлана Александровна
  • Теличко Ольга Николаевна
RU2775314C1
Способ повышения жизнеспособности и плодовитости плодовой мушки дрозофилы (Drosophila melanogaster) 2021
  • Боровая Светлана Александровна
  • Мацишина Наталия Валериевна
  • Собко Ольга Абдулалиевна
RU2776012C1

Реферат патента 2020 года Способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, включающий получение бобов, их стерилизацию агентом, промывку, выделение эксплантов, культивирование на питательной среде и учет. Отличительной особенностью способа является то, что стерилизацию бобов осуществляют в растворе агента «АХД-2000 экспресс» в течении 1,5 минут с последующей 2-х кратной промывкой стерильной дистиллированной водой, при этом раствор агента используют многократно до семи раз. Предлагаемое изобретение позволяет повысить выход стерильных и жизнеспособных эксплантов сои, ускорить селекционный процесс в селекции, свести до минимума вредное воздействие стерилизующего агента, что упростит способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro. 8 табл.

Формула изобретения RU 2 729 461 C1

Способ поверхностной стерилизации бобов сои in vitro, включающий их стерилизацию агентом, промывку, выделение эксплантов, культивирование на питательной среде и учет, отличающийся тем, что стерилизацию бобов осуществляют в растворе агента «АХД-2000 экспресс» в течение 1,5 минут, с последующей 2-кратной промывкой стерильной дистиллированной водой, при этом раствор агента используют многократно до семи раз.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2020 года RU2729461C1

WENNUAN L., et al, Somatic embryogenesis in soybean via somatic embryo cycling
// In Vitro Cell
Dev
Biol
Пуговица для прикрепления ее к материи без пришивки 1921
  • Несмеянов А.Д.
SU1992A1
- Vol
Видоизменение прибора с двумя приемами для рассматривания проекционные увеличенных и удаленных от зрителя стереограмм 1919
  • Кауфман А.К.
SU28A1
- P
Паровозный золотник (байпас) 1921
  • Трофимов И.О.
SU153A1
RAZA G, et al, In Vitro
Plant Regeneration from Commercial Cultivars of Soybean // Biomed Research Internatuonal
Автомобиль-сани, движущиеся на полозьях посредством устанавливающихся по высоте колес с шинами 1924
  • Ф.А. Клейн
SU2017A1
- Vol
Автомобиль-сани, движущиеся на полозьях посредством устанавливающихся по высоте колес с шинами 1924
  • Ф.А. Клейн
SU2017A1
- P
Печь для непрерывного получения сернистого натрия 1921
  • Настюков А.М.
  • Настюков К.И.
SU1A1
ХОХЛОВА Н.И
и др
Культура незрелых зародышей

RU 2 729 461 C1

Авторы

Злобнова Нина Владимировна

Даты

2020-08-06Публикация

2020-01-24Подача