Способ экспресс-диагностики Escherichia coli и бактерий группы кишечной палочки в ротовой полости Российский патент 2020 года по МПК G01N33/48 G01N33/50 C12Q1/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и стоматологии, может быть использовано для своевременной диагностики дисбиотических состояний и факторов риска воспалительных заболеваний ротовой полости, обусловленных Escherichia coli (Е. Coli) и бактериями группы кишечной палочки (БГКП).

Микробиота полости рта представлена более чем 700 видами различных микроорганизмов, среди которых весомую часть составляют резидентные таксоны. К факторам, влияющим на резидентную микрофлору полости рта, относятся: плохая гигиена, иммунодефицитные состояния, изменение микробиоты другой близлежащей области (носоглотки, пищеварительного тракта и др). Известно, что среди микроорганизмов полости рта здоровых людей практически не встречаются грамотрицательные энтеробактерии. Присутствие Escherichia coli и бактерий группы кишечной палочки (микроорганизмы родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter) ассоциировано не только с развитием дисбиотических состояний, но и ряда воспалительных заболеваний.

В клинической практике достаточно часто встречаются ситуации, когда при наличии стойких жалоб у пациента отсутствуют видимые проявления болезни. В таких ситуациях решающее место отводится дополнительным методам исследования, в том числе лабораторным, которые должны быть информативными, относительно простыми в исполнении и быстрыми.

Из существующих лабораторных микробиологических тестов представляет интерес метод газовой хроматографии - масс-спектрометрии, который основан на методике извлечения из биологических проб (выдыхаемый воздух) маркерных веществ микроорганизмов (жирных кислот, альдегидов, спиртов и стеринов) [Сурдина Э.Д., Родионов Г.Г., Силин А.В., Плавинский С.Л., Каспина А.И., Болотова М.Е., Ворошилова Т.М. Оценка микробиоты полости рта, тонкой и толстой кишки у больных красным плоским лишаем слизистой оболочки рта // Пародонтология. 2017. Т. 22. №2 (83). С. 47-52.].

Недостатки прототипа: высокая стоимость; необходимость специфического оборудования (газовый хроматограф с время-пролетной масс-спектрометрией) и персонала, обладающего навыками работы с газовым спектрометром; отсутствие корреляции детектируемых метаболитов с конкретным видом микроорганизмов; невозможность топической диагностики.

Технический результат: ускорение топической детекции не типичных представителей микробиоты полости рта, а именно Е. coli и бактерий группы кишечной палочки, сокращение сроков детекции БГКП при воспалительных заболеваниях, снижение затрат на диагностику, возможность исследования любого биологического материала из ротовой полости (ротовая и десневая жидкости, зубная бляшка, отпечаток со слизистой оболочки рта, кровь).

Указанный результат достигается путем посева биологического материала, взятого из ротовой полости пациента, в селективную питательную среду Кода для культивирования Е. coli и БГКП в исследуемом материале, без выделения чистой культуры и идентификации микроорганизмов.

Способ осуществляется следующим образом: у пациента проводят забор биологического материала из ротовой полости: ротовую и десневую жидкости с помощью микропипетки, мазок-отпечаток со слизистой оболочки рта - стерильным ватным тампоном, зубную биопленку с помощью экскаватора (Экрадент, Россия). Биоматериалы помещают в питательную среду Кода (per. удостоверение РЗН 2013/699, ТУ 20.59.52-222-19862939-2018), разлитую по микропробиркам типа Эппендорф, в объеме 1,8 мл. Микропробирки инкубируют в термостате ТС-80 (Анкар, Россия) в течение 24 ч при температуре 37°С. После этого оценивают изменение цвета и мутности питательной среды Кода. В случае сохранения исходного зеленого цвета и прозрачности среды Е. coli и БГКП в пробе отсутствуют. Изменение цвета на интенсивный желтый с образованием пузырьков газа и помутнения среды в пробе свидетельствуют о присутствии Е. coli и БГКП.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1.

У пациента получили десневую жидкость микропипеткой. Биоматериал поместили в ранее подготовленную микропробирку с 1,8 мл средой Кода. Микропробирку поместили в термостат и инкубировали при температуре 37°С в течение 24 ч. После инкубации пробирку извлекли из термостата и наблюдали отсутствие изменения цвета и прозрачности ранее зеленой и прозрачной среды Кода, что свидетельствует об отсутствии Е. coli и БГКП в десневой жидкости пациента.

Пример 2.

У пациента получили ротовую жидкость микропипеткой. Биоматериал поместили в ранее подготовленную микропробирку с 1,8 мл среды Кода. Микропробирку поместили в термостат и инкубировали при температуре 37°С в течение 24 ч. После инкубации пробирку извлекли из термостата и наблюдали изменение цвета на интенсивный желтый и помутнение ранее зеленой и прозрачной среды Кода, что свидетельствует о наличии Е. coli и БГКП в ротовой жидкости пациента.

Пример 3.

У пациента с поверхности слизистой оболочки щеки в области первого правого моляра верхней челюсти получили мазок-отпечаток ватным тампоном. Биоматериал поместили в ранее подготовленную микропробирку с 1,8 мл среды Кода. Микропробирку поместили в термостат и инкубировали при температуре 37°С в течение 24 ч. После инкубации пробирку извлекли из термостата и наблюдали изменение цвета на интенсивный желтый и помутнение ранее зеленой и прозрачной среды Кода, что свидетельствует о наличии Е. coli и БГКП в этом образце.

Пример 4.

У пациента с вестибулярной поверхности резца нижней челюсти в пришеечной области получили биопленку с помощью экскаватора. Биоматериал поместили в ранее подготовленную микропробирку с 1,8 мл среды Кода. Микропробирку поместили в термостат и инкубировали при температуре 37°С в течение 24 ч. После инкубации пробирку извлекли из термостата и наблюдали изменение цвета на интенсивный желтый и помутнение ранее зеленой и прозрачной среды Кода, что свидетельствует о наличии Е. coli и БГКП в этом образце.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет своевременно и в короткие сроки определить не типичных представителей микробиоты полости рта, провести топическую детекцию Е. coli и БГКП, как критериев дисбиоза полости рта, с целью коррекции медикаментозной терапии и последующей оценки ее эффективности.

Изобретение относится к способу экспресс-диагностики Escherichia coli и бактерий группы кишечной палочки (БГКП) в ротовой полости. Способ включает забор биологического материала из ротовой полости пациента для культивирования Е. coli и БГКП. Биологический материал помещают в селективную питательную среду Кода, инкубируют в течение 24 ч при температуре 37°С, далее визуально проводят регистрацию наличия в питательной среде Е. coli и БГКП по изменению цвета питательной среды и ее помутнению в пробирке. При выявлении исходной зеленой окраски и прозрачной среды диагностируют отсутствие Е. coli и БГКП, желтая окраска с образованием пузырьков газа и помутнение среды указывают на присутствие в пробе Е. coli и БГКП. Предлагаемый способ позволяет ускорить детекцию Е. coli и БГКП и снизить затраты на диагностику, а также дает возможность исследовать любой биологический материал из ротовой полости (ротовая и десневая жидкость, зубная бляшка, отпечаток со слизистой оболочки рта, кровь). 4 пр.

Способ экспресс-диагностики Escherichia coli и бактерий группы кишечной палочки (БГКП) в ротовой полости, включающий забор биологического материала из ротовой полости пациента для культивирования Е. coli и БГКП, отличающийся тем, что биологический материал помещают в селективную питательную среду Кода, инкубируют в течение 24 ч при температуре 37°С, далее визуально проводят регистрацию наличия в питательной среде Е. coli и БГКП по изменению цвета питательной среды и ее помутнению в пробирке и при выявлении исходной зеленой окраски и прозрачной среды диагностируют отсутствие Е. coli и БГКП, желтая окраска с образованием пузырьков газа и помутнение среды указывают на присутствие в пробе Е. coli и БГКП.