СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПИРЕОЗИДА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИДЕПРЕССАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2020 года по МПК C07D311/28 B01D11/02 A61K131/00 A61P25/24 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к производству лекарственных средств в виде субстанций и индивидуальных биологически активных соединений, и касается способа получения спиреозида из плодов лабазника вязолистного (Filipendula ulmaria (L.) Maxim.).

В настоящее время в мировой практике применяются трава и цветки лабазника вязолистного, однако перспективным видом лекарственного растительного сырья являются плоды растения ввиду их богатого химического состава (1).

Известен способ выделения спиреозида из надземной части лабазника вязолистного (Filipendula ulmaria (L.) Maxim.) (2). Согласно данной методике проводится: измельчение пробы воздушно-сухого сырья собранного в фазу цветения надземной части лабазника вязолистного до состояния прохождения сквозь сито 2-5 мм, экстрагирование 70% спиртом этиловом в соотношении 1:10 при температуре 80-85°С в течение 30 мин. Полученное извлечение объединяют и упаривают под вакуумом при температуре 60°С. Фракционирование водного раствора экстракта осуществляют исчерпывающей экстракцией хлороформом, этилацетатом и бутанолом-1 в делительной воронке. Полученные фракции упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С. Первоначальное разделение фракции осуществляют методом флэш-хроматографии на полиамиде «Woelm», элюируя хлороформом, смесью хлороформ -этанол (с возрастающим градиентом последнего) и этанолом. В результате получают 4 подфракции (A-D). Колоночному разделению на силикагеле подвергают доминирующие подфракции В и С. Подфракцию С, элюированную системой растворителей хлороформ - этанол 4:6 - 2:8, подвергают разделению с использованием колоночной хроматографии на силикагеле (L 40/100 Lachema) при соотношении образец - сорбент 1:13, элюент - этилацетат и смесь этилацетат - этанол с возрастанием градиента последнего.

В бутанольной фракции из экстракта лабазника выявлено (хлороформ-метанол-бутанол-1-вода (10:10:1:6) из верхней фазы выделяют спиреозид. Выход вещества 0,02 г, т.е. 0,02% (2).

Данный метод взят нами в качестве прототипа. Недостатками этого метода являются низкий выход целевого вещества - спиреозида (0,02 г, что составляет 0,02% от массы воздушно-сухого сырья), продолжительность и многостадийность фракционирования хроматографической очистки с использованием различных сорбентов и элюента, представляющего собой смесь сложных систем растворителей.

Таким образом, целью изобретения является разработка способа получения вещества, обладающего антидепрессантной активностью.

Техническим результатом является создание способа получения спиреозида, с антидепрессантной активностью, из плодов лабазника вязолистного методом колоночной хроматографии.

Технический результат достигается тем, что извлечение получают из плодов лабазника вязолистного с помощью спирта этилового 70%, затем целевое вещество элюируют на хроматографической колонке со слоем силикагеля смесью хлороформ (чда) : этиловый спирт 96% в соотношении 50:50.

Способ реализуется следующим образом.

Измельченные воздушно-сухие плоды лабазника вязолистного (200,0 г) экстрагируют 70% спиртом этиловом в соотношении «сырье:экстрагент» 1:1 до полного истощения сырья методом перколяции. Водно-спиртовое извлечение упаривают под вакуумом до густого остатка (около 100 мл), полученный упаренный экстракт смешивают с 60 г силикагеля (L 40/100), высушивают и вносят на колонку (8×10 см), заполненную силикагелем в виде взвеси в хлороформе. Целевое вещество элюируют хлороформом (чда) и смесью хлороформ (чда) - этиловый спирт 96% в различных соотношениях. Содержащий спиреозид получали из фракции хлороформ (чда) : этиловый спирт 96% в соотношении 50:50 (1500 мл). Контроль за разделением веществ осуществляют хроматографированием на пластинках "Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ-254" в системе растворителей хлороформ: этиловый спирт: вода в соотношении 26:16:3. Полученный осадок после отделения от маточного раствора представляет собой готовый продукт спиреозида.

Предлагаемый способ поясняется следующим примером.

Пример 1

Измельченные воздушно-сухие плоды лабазника вязолистного (200,0 г) экстрагируют 70% спиртом этиловым в соотношении «сырье : экстрагент» 1:1 до полного истощения сырья. Водно-спиртовое извлечение упаривают под вакуумом до густого остатка (около 100 мл), полученный упаренный экстракт смешивают с 60 г силикагеля (L 40/100), высушивают и вносят на колонку (8×10 см), заполненную силикагелем в виде взвеси в хлороформе. Целевое вещество элюируют хлороформом (чда) и смесью хлороформ (чда) - этиловый спирт 96% в различных соотношениях. Содержащий спиреозид получали из фракции хлороформ (чда) : этиловый спирт 96% в соотношении 50:50 (1500 мл). Контроль за разделением веществ осуществляют хроматографированием на пластинках "Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ-254" в системе растворителей хлороформ: этиловый спирт: вода в соотношении 26:16:3. Полученный осадок после отделения от маточного раствора представляет собой готовый продукт спиреозида с выходом 0,5 г, что составляет 0,25% от массы воздушно-сухого сырья.

Химическая структура спиреозида представлена в Приложении 1 на фигуре 1.

Спектральные и физико-химические свойства спиреозида (4'-O-β-D-глюкозида кверцетина). Светло-желтое кристаллическое вещество состава С₂₁Н₂₂О₁₂ с т.пл. 228-230°С (водный спирт).

УФ-спектр: λ_max EtOH 260 нм, 274 нм (пл), 372 нм; + NaOAc 276 нм, 384 нм; + NaOAc + Н₃ВО₃ 276 нм, 384 нм; +AlCl₃ 265 нм, 274, 424 нм; +AlCl₃ + HCl 265 нм, 274, 424 нм.

¹Н-ЯМР-спектр: (300 МГц, DMSO-d₆, δ, м.д., J/Гц): 12,39 (1Н, с, 5-ОН), 9,50 (1Н, с, 7-ОН), 9,03 (1H, с, 3-ОН), 7,68 (1Н, д, 2.5 Гц, Н-2¹), 7,63 (1Н, дд, 2,5 и 9 Гц, Н-6¹), 7,24 (1Н, д, 9 Гц, Н-5¹), 6,43 (1Н, д, 2.5 Гц, Н-8), 6,20 (1H, д, 2.5 Гц, Н-6), 4,86 (1H, д, 7 Гц, Н-1¹¹ глюкозы), 3.2-4,7 (м, 6Н глюкозы).

¹³С-ЯМР спектр (126,76 МГц, ДМСО-d₆, δ_С, м.д.): С-4 (176,05), С-7 (164,09), С-5 (160,73), С-9 (156,26), С-2 (156,26), С-4¹ (146,79), С-3¹ (148,38), С-3 (136,41), С-1¹ (125,16), С-6¹ (121,97), С-2¹ (115,68), С-5¹ (115,28), С-10 (103,92), С-1¹¹ глюкозы (101,40), С-8 (98,28), С-6 (93,53), С-3¹¹ (77,28), С-4¹¹ (75,97), С-5¹¹ (75,84), С-2¹¹ (73,28), С-6¹¹ (60,76).

Масс-спектр: (ESI-MS, 180°С, m/z): М⁺465 (564 + Н), М⁺ 487 (464 + Na), М⁺ 503 (464 + K).

Спиреозид (4'-O-β-D-глюкозид кверцетина), полученный разработанным способом, исследовали на наличие антидепрессантной активности.

Исследования антидепрессантной активности проводили на белых беспородных крысах обоего пола массой 200-250 г. Животные содержались в условиях вивария на обычном рационе при свободном доступе к воде. Каждая группа состояла из десяти животных. Исследуемые препараты вводили внутрижелудочно через зонд в дозе 5 мг/кг. Контролем служила вода очищенная. В качестве синтетического препарата сравнения использовался амитриптилин в дозе 5 мг/кг. Все препараты вводили однократно на фоне аналогичной водной нагрузки, эксперимент проводили через 1 час после введения препарата. Исследование антидепрессантной активности проводили с использованием теста «Отчаяния» (3). При этом в течение пяти минут фиксировали индивидуальное время активных попыток животных выбраться из воды. Полученные данные обрабатывали статистически по критерию Манна-Уитни. Результаты исследования влияния препарата плодов лабазника вязолистного и препарата сравнения амитриптилина на двигательную активность крыс в методике теста «Отчаяние» представлены в таблице 1.

В ходе опыта были получены следующие результаты. Спиреозид в дозе 5 мг/кг при однократном внутрижелудочном введении способствовал повышению двигательной активности животных в опытной группе на 59% по отношению к водному контролю, действуя аналогично амитриптилину в пороговой дозе 5 мг/кг, который способствовал повышению двигательной активности животных на 54% по отношению к контролю.

Таким образом, предлагаемый способ получения спиреозида из плодов лабазника вязолистного методом колоночной хроматографии разработан впервые для плодов для данного вида растения и обладает следующими преимуществами:

1. Разработанный способ позволяет получать более высокий выход вещества спиреозида - 0,25% вместо 0,02% у прототипа, то есть в 12,5 раз выше по сравнению с прототипом.

2. Разработанный способ менее трудоемок, поскольку включает однократную хроматографическую очистку на силикагеле с использованием элюента, представляющего собой смесь двух растворителей (хлороформ и этиловый спирт) вместо многократного фракционирования извлечения различными растворителями (хлороформ, этилацетат, бутанол-1), двухкратной хроматографической очистки в прототипе с использованием различных сорбентов и элюента, представляющего собой смесь сложных систем растворителей.

3. Целевой продукт - спиреозид, полученный разработанным способом, обладает выраженной антидепрессантной активностью.

Разработанный способ может применяться в химико-фармацевтической промышленности для получения субстанций для производства лекарственных препаратов с антидепрессантным действием.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Величко Н.А. Биологически активные вещества лабазника вязолистного // Н.А. Величко, З.Н. Берикашвили // Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: Материалы IV Всероссийской конференции. Книга 2. - Барнаул: Издательство Алтайского государственного университета. - 2009. - С. 275-276.

2. Шилова И.В. Химический состав и биологическая активность фракций экстракта лабазника вязолистного / И.В. Шилова, А.А. Семенов, Н.И. Суслов и др. // Хим.-фарм. журн. - 2009. - Т. 43. - №4. - С. 7-11.

3. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 2005. 832 с.

Изобретение относится к способу получения спиреозида, обладающего антидепрессантной активностью, с предварительным получением водно-спиртового извлечения на основе 70% спирта этилового из лекарственного растительного сырья лабазника вязолистного с использованием метода колоночной хроматографии, при этом извлечение получают из плодов лабазника вязолистного в соотношении «сырье-экстрагент» 1:1, целевое вещество элюируют смесью хлороформ (чда) : этиловый спирт 96% в объемном соотношении 50:50 с выходом вещества 0,25%. 1 табл., 1 пр., 1 ил.

Способ получения спиреозида, обладающего антидепрессантной активностью, с предварительным получением водно-спиртового извлечения на основе 70% спирта этилового из лекарственного растительного сырья лабазника вязолистного с использованием метода колоночной хроматографии, отличающийся тем, что извлечение получают из плодов лабазника вязолистного в соотношении «сырье-экстрагент» 1:1, целевое вещество элюируют смесью хлороформ (чда) : этиловый спирт 96% в объемном соотношении 50:50 с выходом вещества 0,25%.