КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ НИКОТИНОВОЙ ЗАВИСИМОСТИ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ ЭКСТРАКТ Liriope platyphylla В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО ИНГРЕДИЕНТА Российский патент 2021 года по МПК A61K36/896 A61P25/30 

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к композиции для профилактики или лечения никотиновой зависимости, включающей экстракт Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента

2. Уровень техники

Согласно докладу Министерства здравоохранения и благосостояния, 22,6% взрослых людей (мужчины: 39,3%, женщины: 5,5%) в Корее известны как постоянно курящие. Воздействие вредных веществ при курении вызывает сокращение средней вероятной продолжительности жизни примерно на 8-10 лет, и в настоящее время курение рассматривается как основная причина рака. По статистике один человек из трех, который умер от рака, являлся курильщиком. В частности, как известно, 90 процентов рака легких у мужчин в Корее обусловлены курением. Кроме того, известно непосредственное или косвенное содействие курения развитию различных видов рака, таких как рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы, рак носоглотки, рак шейки матки и рак пищевода.

Несмотря на негативные влияния курения, причиной продолжения курения является вызывающая зависимость природа никотина (Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci, 2008). Никотиновая зависимость проявляет такие симптомы, как привыкание, тяга, абстиненция, неспособность бросить, и упадок социальных и профессиональных способностей. Никотиновая абстиненция вызывает появление таких симптомов, как депрессия, бессонница, тревога, страх, беспокойство, прирост веса и сокращение частоты пульса.

При курении никотин поглощается непосредственно через любую часть тела, достигая мозга в течение около семи секунд и действуя быстро, и это быстрое действие никотина положительно влияет на поведение курильщика. Никотин, когда достигает мозга, действует на никотиновый ацетилхолиновый рецептор, повышая холинэргическую нейротрансмиссию. В частности, никотин стимулирует выделение допамина из вентральной тегментальной области в прилежащие ядра, непосредственно действуя на никотиновый ацетилхолиновый рецептор в мезолимбической дофаминовой системе, и индуцирует поощрительное и эйфорическое состояние настроения. Согласно ряду экспериментальных фактов, никотин проявляет нейрохимический и функциональный эффект, подобный действию других вызывающих привыкание лекарственных препаратов. В частности, усиление дофаминэргической нейротрансмиссии никотином играет важную роль в развитии симптомов никотиновой зависимости.

Допамин (4-(2-аминоэтил)бензол-1,2-диол) представляет собой органическое соединение на основе катехоламина, которое является нейромедиатором, присутствующим в центральной нервной системе. Допамин главным образом синтезируется в нейронах и клетках мозгового вещества надпочечников. В допамине L-ДОФА синтезируется с использованием тирозингидроксилазы (TH) из тирозина, и затем допамин образуется с использованием ДОФА-декарбоксилазы. Образованный в нейронах допамин переносится в нервное окончание синаптическим пузырьковым носителем и хранится в нем. Когда допамин высвобождается под действием надлежащего электрического стимула, он связывается с допаминовым рецептором, находящимся в постсинаптических нейронах, приводя к опосредуемой допаминовым рецептором сигнальной трансдукции. Выделившийся допамин повторно поглощается пресинаптическими нейронами посредством транспортного белка (DAT) допамина. Такие вещества, как никотин, стимулируют синтез допамина тирозингидроксилазой (TH) и подавляют действие транспортера (DAT) допамина, тем самым повышая концентрацию допамина в синаптической щели и проявляя эффект активности ЦНС.

Liriope platyphylla представляет собой многолетнее растение, принадлежащее к семейству лилейных (Liliaceae), и является растением, которое выращивают корневищами и семенами. В Корее оно распространено главным образом в районах с высотой 500 м или менее над уровнем моря, и листья остаются зелеными весь год (Huh, M. K., H. W. Huh, J. S. Choi, и B. K. Lee. 2007. Genetic diversity and population structure of Liriope platyphylla (Liliaceae) in Korea («Генетическое разнообразие и структура популяции Liriope platyphylla (Liliaceae) в Корее»). J. Life Sci., том 17, стр. 328-333.). Растение Liriope platyphylla было давно известно в Корее и Китае как проявляющее жаропонижающее, мочегонное, тонизирующее, противовоспалительное, противокашлевое и отхаркивающее действие, и главным образом использовалось в качестве лекарственного препарата растительного происхождения для лечения таких заболеваний, как простуда. Растение Liriope platyphylla было известно как имеющее такие функции, как лечение диабета, улучшение памяти, подавление развития микроорганизмов, и подавление воспалений, и недавно были проведены многочисленные исследования. Среди этих эффектов такая функция, как противомикробное средство и противовоспалительное средство, представляет собой область, в которой исследования проводились на протяжении самого длительного времени. На мышиной модели астмы Liriope platyphylla проявляла эффект ингибирования воспаления дыхательных путей и гиперчувствительности, и было известно действие в качестве иммуномодулятора, который регулирует дисбаланс Th1/Th2-цитокинов (Krentz, A. J., M. B Patel, и C. J. Bailey. 2008. New drugs for type 2 diabetes mellitus: what is their place in therapy («Новые лекарственные препараты для сахарного диабета 2-ого типа: каково их место в терапии»), Drugs, том 68, стр. 2131-2162.). В дополнение, Liriope platyphylla вызывает активацию нейронов, стимулируя секрецию факторов роста нервов (Hur и др., 2004. Induction of nerve growth factor by butanol fraction of Liriope platyphylla in C6 and primary astrocyte cells («Индукция фактора роста нервов бутанольной фракцией Liriope platyphylla в С6 и первичных астроглиальных клетках»). Biological and Pharmaceutical Bulletin, стр. 1257-1260). Патенты, относящиеся к профилактике и лечению симптомов никотиновой зависимости, являются следующими: Композиция, включающая экстракт Rubia akane Nakai для профилактики и лечения никотиновой зависимости и симптомов абстиненции (Патент Кореи № 10-0676403), Композиция, включающая экстракт Zizyphi spinosi Semen для профилактики и лечения никотиновой зависимости и симптомов абстиненции (Патент Кореи № 10-0663181), Фармацевтическая композиция, включающая растворимый в низших спиртах экстракт или фракцию эфирного масла, выделенные из Angelica sinensis, для профилактики и лечения никотиновой зависимости и симптомов абстиненции (Патент Кореи № 10-0571852), Фармацевтическая композиция, включающая растворимый в низших спиртах экстракт, выделенный из Angelica gigas Nakai, для профилактики и лечения никотиновой зависимости и симптомов абстиненции (Патент Кореи № 10-0571853), Фармацевтическая композиция, включающая растворимый в низших спиртах экстракт или фракцию эфирного масла, выделенные Angelica acutloba, для профилактики и лечения никотиновой зависимости и симптомов абстиненции (Патент Кореи № 10-0571851), и Композиция для детоксификации никотинсодержащего экстракта зеленого чая и экстракта черного чая, и способ ее получения (Патент Кореи № 10-1900304).

Однако в литературе до сих пор не было опубликовано, что было открыто действие Liriope platyphylla в плане уменьшения интенсивности симптомов никотиновой зависимости. Кроме того, до сих пор неизвестна патентная литература в отношении композиции для профилактики или лечения никотиновой зависимости и функциональных оздоровительных продуктов, связанных с Liriope platyphylla.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Цель настоящего изобретения состоит в создании фармацевтической композиции, включающей экстракт Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента, применяемой для профилактики или лечения никотиновой зависимости.

Еще одной целью настоящего изобретения является создание функционального оздоровительного продукта, включающего экстракт Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента, применяемого для профилактики или смягчения никотиновой зависимости.

Для достижения вышеуказанных целей настоящее изобретение представляет фармацевтическую композицию, включающую экстракт Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента, для применения в профилактике или лечении никотиновой зависимости.

Настоящее изобретение также представляет фармацевтическую композицию, включающую экстракт Liriope platyphylla, экстрагированный с использованием воды, низшего С1-С4-спирта или их смеси в качестве растворителя, как активный ингредиент для профилактики или лечения никотиновой зависимости.

Кроме того, настоящее изобретение представляет фармацевтическую композицию, включающую экстракт Liriope platyphylla, экстрагированный с использованием любого компонента, выбранного из группы, состоящей из цветков, листьев, стеблей, плодов и корней Liriope platyphylla, в качестве активного ингредиента, для профилактики или лечения никотиновой зависимости.

В дополнение, настоящее изобретение представляет функциональный оздоровительный продукт, включающий экстракт Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента, для профилактики или смягчения никотиновой зависимости.

ПРЕИМУЩЕСТВЕННЫЙ РЕЗУЛЬТАТ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к применению фармацевтической композиции для профилактики или лечения никотиновой зависимости, включающей экстракт Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента. Экстракт Liriope platyphylla снижает повышенную никотином экспрессию белка тирозингидроксилазы (TH) до нормальных уровней, повышает снижаемую никотином экспрессию транспортного белка (DAT) допамина до нормальных уровней, и проявляет эффект значительного подавления локомоторной активности, повышенной в результате никотиновой зависимости. Поэтому экстракт Liriope platyphylla может быть эффективно использован в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции для профилактики и лечения никотиновой зависимости.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1 представляет изображение, показывающее результаты MTT-анализа, выполненного для подтверждения жизнеспособности PC-12-клеток сообразно концентрации при обработке экстрактом Liriope platyphylla.

Фигура 2a представляет график, показывающий жизнеспособность клеток после обработки PC-12-клеток экстрактом Liriope platyphylla в зависимости от концентрации.

0: группа, не обработанная экстрактом Liriope platyphylla

1: PC-12-клетки, обработанные экстрактом Liriope platyphylla при концентрации 1 мкг/мл

10: PC-12-клетки, обработанные экстрактом Liriope platyphylla при концентрации 10 мкг/мл

100: PC-12-клетки, обработанные экстрактом Liriope platyphylla при концентрации 100 мкг/мл

1000: PC-12-клетки, обработанные экстрактом Liriope platyphylla при концентрации 1000 мкг/мл

Фигура 2b представляет график, показывающий жизнеспособность клеток после обработки PC-12-клеток никотином в зависимости от концентрации.

0: группа, не обработанная никотином

1: PC-12-клетки, обработанные никотином при концентрации 1 мкМ

10: PC-12-клетки, обработанные никотином при концентрации 10 мкМ

100: PC-12-клетки, обработанные никотином при концентрации 100 мкМ

1000: PC-12-клетки, обработанные никотином при концентрации 1000 мкМ

Фигура 3 представляет изображение, показывающее уровень экспрессии белка тирозингидроксилазы (TH) и транспортного белка (DAT) допамина в PC-12-клетках, обработанных экстрактом Liriope platyphylla.

Фигура 4 представляет график, показывающий эффект восстановления, проявляемый экстрактом Liriope platyphylla, экспрессии белка тирозингидроксилазы (TH), повышенной в результате обработки никотином.

Фигура 5 представляет график, показывающий эффект восстановления, проявляемый экстрактом Liriope platyphylla, экспрессии транспортного белка (DAT) допамина, сниженной после обработки никотином.

Фигура 6 представляет график, показывающий проявляемый экстрактом Liriope platyphylla эффект снижения локомоторной активности, повышенной в результате обработки никотином.

0+SAL: крысы с введением физиологического раствора

200+SAL: крысы с введением 200 мг/мл экстракта Liriope platyphylla и 1 мл/кг физиологического раствора

400+SAL: крысы с введением 400 мг/мл экстракта Liriope platyphylla и 1 мл/кг физиологического раствора

0+NIC: крысы с введением 1 мл/кг 0,4 мг/мл никотина

200+NIC: крысы с введением 200 мг/мл экстракта Liriope platyphylla и 1 мл/кг 0,4 мг/мл никотина

400+NIC: крысы с введением 400 мг/мл экстракта Liriope platyphylla и 1 мл/кг 0,4 мг/мл никотина

Фигура 7 представляет график, показывающий проявляемый экстрактом Liriope platyphylla эффект снижения локомоторной активности у крыс с никотиновой зависимостью измерением локомоторной активности у крыс каждые 10 минут.

ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Далее описываются используемые в этом изобретении термины.

Термин «зависимость», применяемый в настоящем изобретении, означает, что симптомы привыкания, тяги и абстиненции вызваны вредными веществами.

Термин «привыкание», применяемый в настоящем изобретении, означает, что, чтобы испытывать такое же удовлетворение, как раньше в состоянии зависимости, требуется более высокая интенсивность или более длительная продолжительность стимуляции.

Термин «тяга», применяемый в настоящем изобретении, означает мотивированное состояние, которое в состоянии зависимости приводит к конкретному целевому действию или намерению.

Термин «абстиненция», применяемый в настоящем изобретении, означает невыносимый болезненный симптом, который возникает, когда в состоянии зависимости прекращается его навязчивое поведение.

Термин «профилактика», применяемый в настоящем изобретении, означает любое действие во избежание или для минимизации никотиновой зависимости введением композиции согласно настоящему изобретению.

Термины «лечение» и «смягчение», применяемые в настоящем изобретении, подразумевают все действия, в которых симптомы зависимости улучшаются или изменяются в благоприятную сторону введением композиции согласно настоящему изобретению.

Термин «введение», применяемый в настоящем изобретении, означает прием композиции согласно настоящему изобретению любым подходящим способом.

Далее настоящее изобретение описывается подробно.

Настоящее изобретение представляет фармацевтическую композицию, включающую экстракт Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента для применения в профилактике или лечении никотиновой зависимости.

Экстракт Liriope platyphylla предпочтительно получают способом получения, включающим следующие стадии, но не всегда ограниченные этим:

1) экстрагирование Liriope platyphylla добавлением экстрагирующего растворителя;

2) фильтрованием экстракта стадии 2); и

3) получения экстракта Liriope platyphylla концентрированием отфильтрованного экстракта стадии 3) при пониженном давлении и высушиванием его.

В вышеуказанном способе получения Liriope platyphylla стадии 1) получают либо выращиванием, либо покупают.

В вышеуказанном способе получения Liriope platyphylla стадии 1) может представлять собой любые одну или многие части, выбранные из группы, состоящей из цветков, листьев, стеблей, плодов и корней, но не всегда ограниченных этим.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, предпочтительным является корень Liriope platyphylla.

В вышеуказанном способе получения экстрагирующий растворитель стадии 1) может представлять собой воду, спирт, или их смесь. Указанный спирт предпочтительно представляет собой низший С₁~С₄-спирт. Низший спирт здесь предпочтительно представляет собой метанол или этанол. Этанол может быть синтетическим этиловым спиртом или этанолом. В дополнение, этанол может представлять собой этанол с концентрацией от 20% до 70%, но не всегда ограниченной этим.

В вышеуказанном способе получения способ экстрагирования стадии 1) может представлять собой экстракцию с встряхиванием, экстракцию в приборе Сокслета или экстракцию при кипячении с обратным холодильником. В это время температура при экстракции может составлять 40~95°С, предпочтительно 50~90°С, и более предпочтительно 60~80°С, но не всегда ограниченную этим. Продолжительность экстрагирования составляет 1~20 часов, предпочтительно 2~10 часов, и более предпочтительно 4~8 часов, но не всегда ограниченная этим. Экстрагирование предпочтительно повторяют 1~5 раз, и более предпочтительно повторяют 1~3 раза, но не всегда с ограничением этим. В диапазоне вне условий температуры экстрагирования, продолжительности экстракции или числа циклов экстрагирования экстракция не может быть выполнена в достаточной мере, так что содержание активного ингредиента в экстракте Liriope platyphylla может быть снижено. Или же, выход экстрагирования уже больше не повышается, что может сокращать эффективность экстракции.

В вышеуказанном способе получения концентрирование при пониженном давлении в стадии 3) предпочтительно проводят с использованием вакуумного концентратора или вакуумного роторного испарителя. Высушивание предпочтительно выполняют сушкой при пониженном давлении, вакуумной сушкой, выпариванием досуха, распылительной сушкой или лиофильной сушкой вымораживанием, но не всегда с ограничением этим. Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, высушивание предпочтительно проводят в условиях сушки вымораживанием.

Симптом зависимости может быть любым, выбранным из группы, состоящей из привыкания, тяги и абстиненции, но не всегда ограниченным этим.

Абстиненция может быть любой, выбранной из группы, состоящей из депрессии, беспокойства, бессонницы и прироста веса, но не всегда ограниченной этим.

Экстракт снижает экспрессию белка тирозингидроксилазы (TH).

Белок тирозингидроксилазы (TH) представляет собой фермент, который действует на L-тирозин и вызывает гидроксилирование. Когда L-тирозин подвергается гидроксилированию, генерируется L-ДОФА, который является прекурсором допамина, из которого допамин получается с использованием ДОФА-декарбоксилазы. Никотин повышает экспрессию тирозингидроксилазы (TH), вызывая зависимость на основе механизма, который стимулирует образование допамина. Таким образом, экстракт Liriope platyphylla может проявлять эффект ослабления никотиновой зависимости снижением экспрессии белка тирозингидроксилазы (TH).

Экстракт повышает экспрессию транспортного белка (DAT) допамина.

Образованный в нейронах допамин переносится в нервное окончание синаптическим пузырьковым носителем и хранится в нем. Когда допамин высвобождается под действием надлежащего электрического стимула, он связывается с допаминовым рецептором, находящимся в постсинаптических нейронах, приводя к сигнальной трансдукции. Использованный допамин опять поглощается пресинаптическими нейронами посредством транспортного белка (DAT) допамина. Никотин ингибирует действие транспортного белка (DAT) допамина, подавляя повторное поглощение допамина, тем самым повышая концентрацию допамина в синаптической щели. Поэтому экстракт Liriope platyphylla может повышать экспрессию транспортера (DAT) допамина, и тем самым может проявлять эффект смягчения никотиновой зависимости.

Экстракт подавляет локомоторную активность, повышенную никотином.

Повторяющийся прием никотина вызывает поведенческую сенсибилизацию, обусловленную повышением локомоторной активности. Поведенческая сенсибилизация представляет собой явление, в котором локомоторная активность и стереотипическая активность грызунов постепенно возрастают, когда им неоднократно и периодически вводят малое количество вызывающих привыкание лекарственных средств. Она состоит из развития, состояния, в котором индуцируется постепенное возрастание активности, и экспрессии, состояния, в котором высокий уровень активности, будучи однажды достигнутым, сохраняется в течение относительно длительного времени. Поведенческая сенсибилизация используется как индикатор развития привыкания к лекарственному препарату и вызванного лекарственным средством психоневроза. Является общеизвестным, что нейронный субстрат, ответственный за поведенческую сенсибилизацию вызывающими привыкание лекарственными препаратами, представляет собой центральные допаминовые нейроны и их целевые области, прилежащие ядра и полосатое тело. Поведенческая сенсибилизация никотином главным образом является опосредованной двумя системами, в частности, мезолимбической допаминовой системой, которая возникает в вентральной тегментальной области (VTA), и завершается в мишенях бокового ядра и обонятельного бугорка.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения корни Liriope platyphylla высушили, и добавили 2,1 л воды к 300 г высушенных корней Liriope platyphylla, которые дважды экстрагировали в приборе для кипячения с обратным холодильником при 80°С в течение 4 часов. После кипячения с обратным холодильником и фильтрования экстракт высушили вымораживанием при пониженном давлении. В результате из горячей воды получили 197 г экстракта Liriope platyphylla с выходом 65%.

С другой стороны, корни Liriope platyphylla высушили, и добавили 2,1 л 30%-ного этанола (в объемном отношении) к 300 г высушенных корней Liriope platyphylla, которые дважды экстрагировали в приборе для кипячения с обратным холодильником при 70°С в течение 4 часов. После кипячения с обратным холодильником и фильтрования экстракт высушили вымораживанием при пониженном давлении. В результате из горячего 30%-ного этанола получили 191 г экстракта Liriope platyphylla с выходом 63%.

Между тем, корни Liriope platyphylla высушили, и добавили 2,1 л 50%-ного этанола (в объемном отношении) к 300 г высушенных корней Liriope platyphylla, которые дважды экстрагировали в приборе для кипячения с обратным холодильником при 60°С в течение 4 часов. После кипячения с обратным холодильником и фильтрования экстракт высушили вымораживанием при пониженном давлении. В результате из горячего 50%-ного этанола получили 171 г экстракта Liriope platyphylla с выходом 57%.

Авторы настоящего изобретения подтвердили, что экспрессия белка тирозингидроксилазы (TH) в группе, обработанной экстрактом Liriope platyphylla, была снижена сравнительно с группой, обработанной никотином, тем самым восстанавливая повышенный никотином уровень экспрессия белка тирозингидроксилазы (TH) до нормального уровня (смотри Фигуры 3 и 4).

Авторы настоящего изобретения также подтвердили, что экспрессия транспортного белка (DAT) допамина в группе, обработанной экстрактом Liriope platyphylla, была повышена по сравнению с группой, обработанной никотином, тем самым восстанавливая пониженный никотином уровень экспрессия транспортного белка (DAT) допамина до нормального уровня (смотри Фигуры 3 и 5).

В дополнение, авторы настоящего изобретения подтвердили, что локомоторная активность была значительно снижена в группе с введением одновременно никотина и экстракта Liriope platyphylla, по сравнению с группой, в которой локомоторная активность была повышена введением никотина, и тем самым экстракт Liriope platyphylla мог бы смягчать признаки никотиновой зависимости.

Экстракт Liriope platyphylla снижал повышенную никотином экспрессию белка тирозингидроксилазы (TH) до нормальных уровней, повышал сниженную никотином экспрессию транспортного белка (DAT) допамина до нормальных уровней, и проявлял эффект значительного подавления локомоторной активности, повышенной у крыс с никотиновой зависимостью. Поэтому экстракт Liriope platyphylla может быть эффективно использован в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции для профилактики и лечения никотиновой зависимости (смотри Фигуры 6 и 7).

Композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно включать подходящие носители, эксципиенты и разбавители, обычно применяемые для получения фармацевтических композиций.

Композиция согласно настоящему изобретению может быть введена перорально или парентерально, и парентеральное введение включает наружное применение, внутрибрюшинную инъекцию, интраректальную инъекцию, подкожную инъекцию, внутривенную инъекцию, внутримышечную инъекцию или интраторакальную инъекцию, но не всегда ограниченные этим.

Композиция согласно настоящему изобретению может быть составлена для перорального введения, например, в форме порошков, гранул, таблеток, капсул, суспензий, эмульсий, сиропов и аэрозолей, и для парентерального введения, например, для наружного применения, суппозиториев и стерильных инъекций, и т.д. Примерами носителей, эксципиентов и разбавителей, которые могут быть включены в вышеуказанные композиции, являются лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлоза, метилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, вода, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, и минеральное масло. Композиции могут быть получены с использованием обычно применяемых эксципиентов или разбавителей, таких как наполнители, разрыхлители, связующие материалы, смачиватели, дезинтеграторы и поверхностно-активное вещество. Твердые композиции для перорального введения представляют собой таблетки, пилюли, порошки, гранулы и капсулы. Эти твердые композиции получают смешением одного или многих подходящих эксципиентов, таких как крахмал, карбонат кальция, сахароза или лактоза, желатин, и т.д. За исключением простых эксципиентов могут быть использованы смазывающие агенты, например, такие как стеарат магния, тальк, и т.д. Жидкие композиции для перорального введения представляют собой суспензии, растворы, эмульсии и сиропы, и вышеупомянутые составы могут содержать различные эксципиенты, такие как смачивающие агенты, подсластители, ароматизаторы и консерванты, в дополнение к обычно применяемым простым разбавителям, таким как вода и жидкий парафин. Составы для парентерального введения представляют собой стерилизованные водные растворы, водонерастворимые эксципиенты, суспензии, эмульсии, лиофилизированные препараты, суппозитории и инъекции. Водорастворимые эксципиенты и суспензии могут содержать, в дополнение к активному соединению или соединениям, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительное масло типа оливкового масла, пригодный для инъекции сложный эфир, такой как этилолеат, и т.д. Суппозитории могут содержать, в дополнение к активному соединению или соединениям, витепсол, макрогол, Твин-61, какао-масло, лавровое масло, глицерин с желатином, и т.д.

Композиция согласно настоящему изобретению может быть введена перорально или парентерально, и парентеральное введение включает внутрибрюшинную инъекцию, интраректальную инъекцию, подкожную инъекцию, внутривенную инъекцию, внутримышечную инъекцию или интраторакальную инъекцию.

Предпочтительная доза композиции согласно настоящему изобретению может быть определена сообразно состоянию и весу пациента, серьезности заболевания, лекарственной форме, пути введения и длительности их действия. Эффективная доза композиции согласно настоящему изобретению предпочтительно составляет 0,0001-1 г/кг в день, и более предпочтительно 0,001-200 мг/кг в день, но не всегда ограниченная этим. Частота введения может быть один раз в день или несколько раз в день. Частота введения составляет один раз в день или несколько раз в день. Дозировка никоим образом не должна ограничивать область настоящего изобретения.

Композиция согласно настоящему изобретению может вводиться отдельно или в комбинации с другими терапевтическими средствами. При комбинированном введении прием может быть последовательным или одновременным.

В дополнение, настоящее изобретение представляет применение функционального оздоровительного продукта, включающего экстракт Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента для профилактики и смягчения никотиновой зависимости.

Экстракт предпочтительно представляет собой экстракт любого компонента, выбранного из группы, состоящей из цветков, листьев, стеблей, плодов и корней Liriope platyphylla, в качестве активного ингредиента, но не всегда ограниченных этим.

Зависимость может быть любой, выбранной из группы, состоящей из привыкания, тяги и абстиненции, но не всегда ограниченных этим.

Абстиненция может быть любой, выбранной из группы, состоящей из депрессии, беспокойства, бессонницы и прироста веса, но не всегда ограниченных этим.

Экстракт снижает повышенную никотином экспрессию белка тирозингидроксилазы (TH).

Экстракт повышает сниженную никотином экспрессию транспортного белка (DAT) допамина.

Экстракт подавляет локомоторную активность, повышенную никотином.

Экстракт Liriope platyphylla снижает повышенную никотином экспрессию белка тирозингидроксилазы (TH) до нормальных уровней, повышает сниженную никотином экспрессию транспортного белка (DAT) допамина до нормальных уровней, и проявляет эффект значительного подавления повышенной никотином локомоторной активности у крыс с никотиновой зависимостью. Поэтому экстракт Liriope platyphylla может быть эффективно использован в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции для профилактики и лечения никотиновой зависимости (смотри Фигуры 6 и 7).

В этом описании «функциональный оздоровительный продукт» обозначает пищевой продукт, полученный дополнением таких питательных веществ, которые часто отсутствуют в ежедневной диете или в исходных материалах или компонентах, имеющих полезную функцию для тела человека. Этим подразумевается пищевой продукт, который помогает поддерживать здоровье человеческого тела, но не всегда с ограничением этим, и может быть включен любой общеизвестный оздоровительный продукт.

Форма и тип функционального оздоровительного продукта не являются конкретно ограниченными. Более конкретно, функциональный оздоровительный продукт может быть в форме таблеток, капсул, порошков, гранул, жидкостей или пилюль. Функциональный оздоровительный продукт может дополнительно включать различные вкусо-ароматические добавки, подсластители или натуральные углеводы. Подсластители могут представлять собой натуральные подсластители, такие как тауматин и экстракт стевии, или синтетические подсластители, такие как сахарин и аспартам. Вышеуказанные натуральные углеводы могут представлять собой моносахариды, дисахариды, полисахариды, олигосахариды и многоатомные спирты.

В дополнение к упомянутым выше ингредиентам, функциональный оздоровительный продукт согласно настоящему изобретению может включать разнообразные питательные вещества, витамины, минералы, ароматизаторы, окрашивающие агенты, пектиновую кислоту и ее соли, альгиновую кислоту и ее соли, органическую кислоту, защитные коллоидные загустители, регуляторы рН, стабилизаторы, антисептики, глицерин, спирты, и т.д. Все указанные ингредиенты может быть добавлены по отдельности или совместно. Смесевое соотношение этих ингредиентов может быть выбрано от 0,01 до 0,1 весовой части на 100 весовых частей композиции согласно настоящему изобретению.

Экстракт Liriope platyphylla согласно настоящему изобретению может быть добавлен как есть, или как смешанный с другим пищевым продуктом или компонентами пищевого продукта. Содержание активных ингредиентов может быть отрегулировано сообразно цели применения. Как правило, содержание в функциональном оздоровительном продукте может быть от 0,01 до 90 весовых частей от всего веса пищевого продукта. Однако, если требуется долговременное введение для здоровья и гигиены, или для регулирования состояния здоровья, содержание может быть более низким, чем указано выше, но также может быть допустимым более высокое содержание, а также потому, что природный фермент arazyme был признан как весьма безопасный.

Далее настоящее изобретение будет описано подробно нижеследующими примерами и экспериментальными примерами.

Однако нижеследующие примеры и экспериментальные примеры приведены только для иллюстрирования настоящего изобретения, и содержание настоящего изобретения ими не ограничивается.

Пример 1: получение экстракта Liriope platyphylla в горячей воде

Корни Liriope platyphylla высушили, и добавили 2,1 л воды к 300 г высушенных корней Liriope platyphylla, которые дважды экстрагировали в приборе для кипячения с обратным холодильником при 80°С в течение 4 часов. После кипячения с обратным холодильником и фильтрования экстракт высушили вымораживанием при пониженном давлении. В результате из горячей воды получили 197 г экстракта Liriope platyphylla с выходом 65%.

Пример 2: получение экстракта Liriope platyphylla в этаноле

<2-1> Получение экстракта Liriope platyphylla в 30%-ном этаноле

Корни Liriope platyphylla высушили, и добавили 2,1 л 30%-ного этанола (в объемном отношении) к 300 г высушенных корней Liriope platyphylla, которые дважды экстрагировали в приборе для кипячения с обратным холодильником при 70°С в течение 4 часов. После кипячения с обратным холодильником и фильтрования экстракт высушили вымораживанием при пониженном давлении. В результате из горячего 30%-ного этанола получили 191 г экстракта Liriope platyphylla с выходом 63%.

<2-2> Получение экстракта Liriope platyphylla в 50%-ном этаноле

Корни Liriope platyphylla высушили, и добавили 2,1 л 50%-ного этанола (в объемном отношении) к 300 г высушенных корней Liriope platyphylla, которые дважды экстрагировали в приборе для кипячения с обратным холодильником при 60°С в течение 4 часов. После кипячения с обратным холодильником и фильтрования экстракт высушили вымораживанием при пониженном давлении. В результате из горячего 50%-ного этанола получили 171 г экстракта Liriope platyphylla с выходом 57%.

Экспериментальный Пример 1: измерение жизнеспособности линии нервных клеток (линии PC-12-клеток) согласно концентрации никотина и экстракта Liriope platyphylla

Жизнеспособность линии нервных клеток (линии PC-12-клеток) в обработке согласно концентрации никотина и экстракта Liriope platyphylla измеряли с использованием MTT-анализа.

Более конкретно, PC-12-клетки культивировали в среде Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM), дополненной 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Fetal Bovine Serum (FBS)), 5% лошадиной сыворотки и 1% антибиотиков (Thermo fisher, каталожный номер 15140122) в инкубаторе при 37°С с 5% СО₂. Культивированные PC-12-клетки распределили в 96-луночный планшет при плотности 1×10⁴ клеток/лунку, и дополнительно культивировали в той же среде и при тех же условиях в течение 24 часов. Затем PC-12-клетки обработали никотином (1, 10, 100 и 1000 мкМ/мл) и экстрактом Liriope platyphylla (1, 10, 100 и 1000 мкг/мл) из Примера 1 в течение 24 часов, соответственно. После этого добавили 20 мкл раствора красителя (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2H-тетразолия, внутренняя соль; MTS) в каждую лунку планшета, который был культивирован при 37°С в течение 1 часа. Для прекращения реакции в каждую лунку планшета добавили 25 мкл 10%-ного додецилсульфата натрия (SDS) (стоп-раствор), и измеряли OD (оптическую плотность) при 490 нм. Жизнеспособность клеток согласно концентрации была выражена как концентрация в % относительно контрольной группы, и результаты показаны в Фигурах 2а и 2b.

В результате, как показано в Фигуре 2а, было подтверждено, что цитотоксичность не проявлялась, пока действующая концентрация экстракта Liriope platyphylla составляла мкг/мл.

В дополнение, как показано в Фигуре 2b, было подтверждено, что цитотоксичность не проявлялась, даже когда действующая концентрация никотина возрастала.

Экспериментальный Пример 2: измерение уровней экспрессии белка тирозингидроксилазы (TH) и транспортного белка (DAT) допамина согласно действующей концентрации экстракта Liriope platyphylla

Чтобы подтвердить действие экстракта Liriope platyphylla на экспрессию белка тирозингидроксилазы (TH) и транспортного белка (DAT) допамина, контролируемую никотином в PC-12-клетках, провели Вестерн-блот-анализ.

Более конкретно, PC-12-клетки культивировали в среде Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM), дополненной 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Fetal Bovine Serum (FBS)), 5% лошадиной сыворотки и 1% антибиотиков (Thermo fisher, каталожный номер 15140122) в инкубаторе при 37°С с 5% СО₂. Культивированные PC-12-клетки распределили в 6-луночный планшет при плотности 1×10⁴ клеток/лунку, и дополнительно культивировали в той же среде и при тех же условиях в течение 24 часов. PC-12-клетки обработали 10 мкг/мл никотина, экстрактом Liriope platyphylla, или обоими, и оставили стоять в течение 24 часов. Линию нервных клеток (линию PC-12-клеток), обработанную никотином или экстрактом Liriope platyphylla, обработали RIPA-буфером при 4°С в течение 30 минут, и белки отделили от надосадочной жидкости центрифугированием при 13000 об/мин в течение 30 минут. Затем образец количественно оценивали с использованием набора BCA protein quantification kit (Thermo fisher, каталожный номер 23225). Образец подвергли электрофорезу на 10% SDS-PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия), и белки во влажном состоянии перенесли на PVDF-мембрану. Мембрану поместили в блокирующий раствор 5% бычьего сывороточного альбумина (BSA) и вводили в реакцию при комнатной температуре в течение 1 часа. После удаления блокирующего раствора на мембрану воздействовали тирозингидроксилазой, транспортером допамина и в-актином (1:1000 в TBS-T) при 4°С в течение ночи. Мембрану вводили в реакцию с вторичным антителом при комнатной температуре в течение 1 часа, и наблюдали экспрессию белка с использованием набора ECL Western Blotting Substrate (Thermo fisher, каталожный номер 32209). Уровни экспрессии тирозингидроксилазы и транспортера допамина в зависимости от концентрации никотина и/или экстракта Liriope platyphylla выражали как % экспрессии относительно контрольной группы (Таблицы 1 и 2), и результаты показаны в Фигурах 4 и 5.

В результате, как показано в Фигуре 4, экспрессия белка тирозингидроксилазы (TH) снизилась в группе, обработанной экстрактом Liriope platyphylla, по сравнению с результатами группы, обработанной никотином, и возвратилась к нормальному уровню. Уровень экспрессии транспортного белка (DAT) допамина повысился в группе, обработанной экстрактом Liriope platyphylla, по сравнению с результатами группы, обработанной никотином, и возвратился к нормальному уровню (Фигура 5)

[Таблица 1]

Относительный уровень экспрессии TH с необработанной группой (%) Необработанная группа 100 Обработанная никотином группа 166,178 Обработанная экстрактом Liriope platyphylla группа 105,304 Обработанная никотином и экстрактом Liriope platyphylla группа 100,5909

[Таблица 2]

Относительный уровень экспрессии TH с необработанной группой (%) Необработанная группа 100 Обработанная никотином группа 50,49249 Обработанная экстрактом Liriope platyphylla группа 107,6518 Обработанная никотином и экстрактом Liriope platyphylla группа 110,7362

Пример 3: подготовка экспериментальных животных

Были приобретены (Orient Bio) самцы крыс Sprague-Dawley весом 230-260 г. Крыс поместили в помещение с контролируемыми условиями (температура: 23±3°С, влажность: 30-70%, цикл свет/темнота: 12/12 часов) в виварии Корейского института токсикологии. Крысы были достаточно обеспечены пищей и водой, чтобы свободно принимать пищу и воду до начала эксперимента. Кроме того, чтобы свести к минимуму переменные факторы окружающей среды, такие как стресс от воздействия в камере измерительного устройства, самцы крыс Sprague-Dawley были акклиматизированы в течение 30 минут каждый день в камере с устройством для измерения локомоторной активности в течение по меньшей мере 3 дней перед началом эксперимента.

Экспериментальный Пример 3: измерение локомоторной активности

Было исследовано, может ли экстракт Liriope platyphylla подавлять явление никотиновой зависимости, которое повышает локомоторную активность.

Локомоторную активность количественно оценивали с помощью пакета программ Ethovision XT14 (Nodlus, Нидерланды) для видеовизирования и анализа после записи инфракрасной цифровой камерой (Med associates, США).

Более конкретно, перорально вводили 0, 200 и 400 мг/мл экстракта Liriope platyphylla при концентрации 1 мл/кг за 1 час до измерения локомоторной активности. Через тридцать минут после перорального введения самцов крыс Sprague-Dawley Примера 3 поместили в полупрозрачный акриловый бокс (43,38 см×43,38 см×30,28 см), имеющий освещенность 3 люкс, с последующей выдержкой для привыкания в течение 30 минут. После привыкания внутрибрюшинно вводили 0,4 мг/мл никотина при концентрации 1 мл/кг, и регистрировали движение экспериментального животного посредством инфракрасной цифровой камеры в течение 60 минут. С использованием принципа контрастности белого объекта на черном фоне регистрировали траекторию локомоторной активности с выявлением центрального пункта белого изображения экспериментального животного несколько раз в секунду с использованием пакета программ Ethovision XT14 (Nodlus, Нидерланды). Затем количественно оценивали дистанцию движения (см) крысы (Таблица 3).

В результате повышенная никотином локомоторная активность значительно подавлялась у крыс, которым был введен экстракт Liriope platyphylla (Фигура 6). Более конкретно, группа получивших никотин крыс показала локомоторную активность приблизительно 6000 см в час, то есть, локомоторная активность значительно возросла по сравнению с активностью контрольной группы, принимавшей только физиологический раствор, которая составляла 3000 см. С другой стороны, локомоторная активность крыс в группе, получившей 400 мг/кг никотина и 200 мг/кг экстракта Liriope platyphylla Примера 1, снизилась до около 2000 см и 3300 см, соответственно. Результаты приводят к выводу, что экстракт Liriope platyphylla может смягчать признаки никотиновой зависимости.

[Таблица 3]

Локомоторная активность (см/час) Физиологический раствор 3174,98±362,11 200 мг/мл Liriope platyphylla экстракта+физиологический раствор 3030,23±756,37 400 мг/мл Liriope platyphylla экстракта+физиологический раствор 1942,89±330,01 0,4 мг/мл никотина 5811,41±1029,40 200 мг/мл Liriope platyphylla экстракта+0,4 мг/мл никотина 3872,93±706,60 400 мг/мл Liriope platyphylla экстракта+0,4 мг/мл никотина 2670,44±215,12

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению фармацевтической композиции, включающей экстракт корней Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента для профилактики, лечения или смягчения никотиновой зависимости, а также к применению функционального оздоровительного продукта, включающего экстракт корней Liriope platyphylla в качестве активного ингредиента для профилактики, лечения или смягчения никотиновой зависимости. Вышеописанные применения фармацевтической композиции позволяют снизить экспрессию белка тирозингидроксилазы (TH) и вернуть к нормальному уровню, повысить уровень экспрессии транспортного белка (DAT) допамина и возвратить к нормальному уровню, подавить явление никотиновой зависимости, которое повышает локомоторную активность. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр., 8 ил.

1. Применение фармацевтической композиции, включающей экстракт корней Liriope platyphylla, экстрагированный с использованием воды, в качестве активного ингредиента для профилактики, лечения или смягчения никотиновой зависимости.

2. Применение по п. 1, в котором зависимость является любой, выбранной из группы, состоящей из привыкания, тяги и абстиненции.

3. Применение по п. 2, в котором абстиненция является любой, выбранной из группы, состоящей из депрессии, беспокойства, бессонницы и прироста веса.

4. Применение по п. 1, в котором экстракт снижает экспрессию белка тирозингидроксилазы (TH).

5. Применение по п. 1, в котором экстракт повышает экспрессию транспортного белка (DAT) допамина.

6. Применение по п. 1, в котором экстракт подавляет локомоторную активность, повышенную никотином.

7. Применение функционального оздоровительного продукта, включающего экстракт корней Liriope platyphylla, экстрагированный с использованием воды, в качестве активного ингредиента для профилактики, лечения или смягчения никотиновой зависимости.