ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к области применения в фармацевтике, а конкретно к использованию карримицина и его фармацевтически приемлемых солей для получения медицинского препарата для лечения и/или профилактики опухолей.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Опухоль распространенное и часто встречающееся заболевание, относящееся к новообразованиям, или неоплазмам, образующимся посредством клональной атипической пролиферации и дифференциации по причине генетической мутации и утраты нормальной регуляции роста и дифференциации гистиоцита организма при продолжительном воздействии онкогенных факторов in vivo и in vitro. Опухоли подразделяют на доброкачественные и злокачественные. Злокачественные опухоли дополнительно разделяются на три вида: карциномы, возникающие в эпителиальных тканях, саркомы, возникающие в мезенхиме, и карциносаркомы. В отношении всех злокачественных опухолей в целом используется термин «рак».
Злокачественные опухоли - одно из основных опасных заболеваний, угрожающих здоровью человека, и причина смертности номер один в мире. Согласно новейшим статистическим данным в 2007 году около 7,9 миллионов человек в мире умерли от различных видов рака, что составило 13% от всех летальных исходов, а также были диагностированы более 12 миллионов случаев заболевания раком, причем 72% или более пациентов с опухолями и летальных исходов пришлись на развивающиеся страны, и это число постоянно растет. В 2015 году от опухолей в мире умерли 9 миллионов человек, и ожидается, что еще свыше 12 миллионов людей умрут от опухолей в 2030 году. В настоящее время ежегодное количество случаев заболевания раком в Китае составляет около 2,8 миллионов, а количество смертей от рака превышает 400000, занимая первое место среди всех заболеваний в Китае и демонстрируя тенденцию к возрастанию. По мере ускорения социальной жизни, возрастания конкурентного давления и изменений человеческого образа жизни и окружающей среды случаи возникновения опухолей и летальных исходов растут от года к году, и опухоли стали распространенным и часто встречаемым заболеванием в современном обществе, не только оказывая серьезное влияние на качество жизни пациентов, но также ложась тяжелым экономическим и моральным бременем на семьи пациентов и общество. Также опухоли - важная общественная проблема в мире. Лечение и профилактика рака всегда были одними из наиболее сложных проблем в мире. В настоящее время химиотерапия основное средство борьбы с опухолями. Несмотря на то, что химиотерапия обеспечивает лучшее лечебное воздействие, она часто провоцирует возникновение побочных эффектов, таких как миелосупрессия и снижение иммунитета, усложняя прохождение лечения для пациентов. Также резистентность к препаратам в процессе лечения посредством химиотерапии стала одной из наиболее сложных проблем клинического лечения в настоящий момент. В последние годы мировой рынок противоопухолевых препаратов быстро рос. Согласно статистике Управления по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США общий объем продаж противораковых препаратов в мире вырос с 24 миллиардов в 2004 году до 39,6 миллиардов долларов США в 2007. Несмотря на ежегодное появление в мире новых противоопухолевых препаратов, на данный момент эффективные средства борьбы с раком у людей отсутствуют. В то же время, постоянно открывают новые виды рака, и выработка опухолевой резистентности/резистентности к препаратам делает необходимость поиска новых эффективных противораковых препаратов все более срочной.
Карримицин это новый вид антибиотика, в качестве основного компонента включающий 4''-изовалерил-спирамицин, который образуется посредством клонирования 4''-о-ацил-трансферазы штамма-продуцента карбомицина в штамме-продуценте спирамицина посредством технологии генной модификации, направленного ацилирования спирамицина 4''-ОН и добавления боковой цепи в положение 4''.
Карримицин состоит из множества производных спирамицина, основной активный компонент которого, изовалерил-спирамицин (I+II+III), занимает не менее 60% и является фармацевтически приемлемой композицией. Центральная структура основного компонента представляет собой 16-членное лактоновое кольцо, и это кольцо включает в себя одну молекулу форозамина, одну молекулу микаминозы и одну молекулу микарозы. Его основной компонент, изовалерил-спирамицин I, II, III, отличается от строения спирамицина тем, что группа, объединенная с положением 4' микарозы, представлена изовалерилом, а не гидроксилом. Компанией Tonglian Shengyang Group препарат коллективно объявлен новым видом типа 1.1.
Химическое строение основного компонента карримицина приведено в формуле (I):
где при R=H, R'=СОСН2СН(СН3)2 основной компонент - изовалерил-спирамицин I;
при R=COCH3, R'=СОСН2СН(СН3)2 основной компонент - изовалерил-спирамицин II;
при R=COCH2CH3, R'=COCH2CH(CH3)2 основной компонент изовалерил-спирамицин III;
Карримицин относится к 16-членным макролидным антибиотикам, имеет активные группы, такие как карбоксильная, алкоксильная, эпокси-группа, кетонная и альдегидная группы, а также пару сопряженных С=С, и обладает молекулярной массой приблизительно от 884 до 982. Благодаря своему химическому строению карримицин и макролидные антибиотики имеют много общего: они легкорастворимы в большинстве органических растворителей, таких как сложные эфиры, ацетон, хлороформ, спирты и т.д., слаборастворимы в петролейном эфире и нерастворимы в воде. Вследствие наличия двух диметиламинных групп в молекулярном строении карримицин представляет собой слабую щелочь и легко растворяется в кислом водном растворе. Карримицин обладает «отрицательной растворимостью», при которой с повышением температуры растворимость падает. Поскольку изовалерил-спирамицин, главный компонент карримицина, обладает более длинной углеродной цепью в положении 4" и слабой гидрофильностью, растворимость карримицина в воде меньше, чем у спирамицина и 4"- ацетилспир амицина.
Карримицин белый некристаллический порошок со слабой гигроскопичностью и удельным вращением около -80,8°, с максимальной длиной волны ультрафиолетовой абсорбции, равной 231-232 нм. Карримицин содержит слабо флуоресцирующие хромофоры и выдает реакцию фиолетового цвета, светясь насыщенным фиолетовым цветом в случае использования концентрированной серной или соляной кислоты, а также обладает максимумом поглощения при 231-232 нм.
Препарат обладает хорошей липофильностью, хорошей проникаемостью в ткани, быстрой оральной абсорбцией, долгой сохраняемостью в организме и устойчивым постантибиотическим эффектом. В соответствии с отношением фармакодинамики и химической конформации, после положения 4'' при ацеляции макролидных антибиотиков у последних улучшилась липофильность и специфическая активность in vivo, а также значительно улучшились противобактериальная активность in vivo и клинические терапевтические эффекты; при этом стабильность антибиотиков in vivo возрастает по мере роста углеродной цепи 4''-сложного гидроксиэфира, то есть, изовалерил-спирамицин > бутирил-спирамицин > пропионил-спирамицин > ацетил-спирамицин.
Предварительные фармакодинамические испытания in vitro и in vivo показали, что препарат не только обладает хорошей противобактериальной активностью против большинства грамположительных бактерий (G+), но также оказывают определенное воздействие на грамотрицательные бактерии (G-), а его технические показатели явно превосходят азитромицин, эритромицин, ацетил-спирамицин и медемецин. Он обладает наибольшей противомикробной активностью, особенно против микоплазмы пневмонии, а также некоторой противомикробной активностью против бактерий, резистентных к эритромицину, против гонококка, пневмококка, золотистого стафилококка, синегнойной палочки, гемофильной палочки, бактероидов фрагилис, легионеллы, мультилинейной бациллы и палочки газовой гангрены, а также обладает слабой перекрестной резистентностью к золотистому стафилококку с клинической устойчивостью к эритромицину. В основном, карримицин будет применяться в лечении грамположительных инфекций, особенно инфекций верхних дыхательных путей, а также может применяться против инфекций мочевыводящих путей.
В недавнем исследовании заявитель установил, что при оценке карримицина относительно антипролиферативной активности человеческих клеток рака молочной железы in vitro MCF-7 и MDA-MB-231, человеческих клеток гепатомы HepG2 или мышиных клеток гепатомы Н22, человеческих немелкоклеточных клеток рака легких А549, клеток карциномы легкого Льюиса, человеческих крупноклеточных клеток рака легких Н460 и Н1299, человеческих прозрачных клеток почечного эпителия аденокарциномы 786-0, человеческих клеток почечного эпителия аденокарциномы 769-Р, человеческих клеток глиомы U251, человеческих клеток глиобластомы А172, человеческих клеток ткани лимфомы U937, человеческих клеток рака шейки матки HeLa, человеческих клеток рака предстательной железы РС3, человеческих клеток рака поджелудочной железы PANC-1, человеческих клеток рака пищевода ТЕ-1, человеческих клеток аденокарциномы желудка SGC7901, человеческих клеток рака толстой кишки НТ-29 и человеческих клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60 образцы показали хорошую антипролиферативную активность на испытуемых клетках, указывая на то, что ожидается, что карримицин станет новым препаратом для лечения опухолей, тем самым достигая цели настоящего изобретения.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Цель настоящего изобретения заключается в предложении использования карримицина и его фармацевтически приемлемых солей для получения медицинского препарата для лечения и/или профилактики опухолей.
Чтобы реализовать вышеуказанную цель, в настоящем изобретении применяется следующее техническое решение:
настоящее изобретение относится к использованию карримицина и его фармацевтически приемлемых солей для изготовления препарата для лечения и/или профилактики опухолей.
В рамках настоящего изобретения опухоль включает в себя солидную и несолидную опухоли.
В частности, солидная опухоль включает в себя доброкачественную и злокачественную опухоли;
Несолидные опухоли - это лимфома или лейкоз.
Кроме того, злокачественная солидная опухоль представлена раком молочной железы, раком печени, раком легких, раком почек, опухолью мозга, раком шейки матки, раком предстательной железы, раком поджелудочной железы, раком пищевода, раком желудка или раком толстой кишки.
Опухоль головного мозга представлена глиомой или менингиомой, а рак желудка аденокарциномой желудка.
Препарат по настоящему изобретению представлен в различных лекарственных формах, состоящих из карримицина и его фармацевтически приемлемых солей, а также фармацевтически приемлемых вспомогательных лекарственных средств.
Препарат по настоящему изобретению также представлен в различных лекарственных формах, состоящих из карримицина и его фармацевтически приемлемых солей, а также противоопухолевыми препаратами и фармацевтически приемлемыми вспомогательными лекарственными средствами.
Из карримицина и его фармацевтически приемлемых солей по настоящему изобретению в сочетании с противоопухолевыми препаратами предыдущего уровня техники могут быть получены различные сложные препараты, такие как оксалиплатин, и фармацевтически приемлемые вспомогательные лекарственные средства.
В настоящем изобретении медицинский препарат дополнительно представляет собой сочетание первого и второго веществ, причем первое вещество содержит карримицин и его фармацевтически приемлемые соли, а второе вещество - противоопухолевый препарат.
Согласно настоящему изобретению противоопухолевый препарат представлен препаратом, известным из предыдущего уровня техники, и при лечении опухолей первое вещество, содержащее карримицин и его фармацевтически приемлемые соли, может быть использовано в сочетании с этими противоопухолевыми веществами. При лечении опухолей способом сочетания сначала может быть использовано первое вещество, содержащее карримицин и его фармацевтически приемлемые соли, или второе вещество, содержащее противоопухолевый препарат, известный из предыдущего уровня техники, либо же они могут быть использованы одновременно.
Противоопухолевый препарат по настоящему изобретению представлен одним или несколькими препаратами, подобранными из группы, содержащей препарат для химиотерапии, препарат для радиационной терапии, препарат для прицельной терапии и иммунотерапевтический препарат.
В настоящем описании демонстрируется, что первое вещество, содержащее карримицин и его фармацевтически приемлемые соли, оказывает хороший терапевтический эффект на различные виды рака, включая рак легких, рак печени, рак шейки матки и т.д., и его использование в сочетании с противоопухолевым препаратом, известным из предыдущего уровня техники, таким как циклофосфамид, хлорамбуцил, нитрокафан, ломустин, тиотепа, бусульфан и цисплатин, может оказывать синергическое действие и оказывает лучший терапевтический эффект на пациентов с опухолями.
Пациенты со злокачественными опухолями, проходящие различные инвазивные процедуры и принимающие противоопухолевые препараты, в целом обладают пониженным иммунитетом вследствие повторяющегося лечения в виде радиационной терапии, химиотерапии, хирургической операции и иммунологических препаратов, и для них существует высокий риск заражения во время пребывания в больнице, а также они могут легко заразиться разными способами. Посредством анализа было установлено, что частота возникновения внутрибольничных инфекций у пациентов с опухолями была значительно выше, чем у выписанных пациентов в той же больнице. Факторы риска возникновения внутрибольничной инфекции у пациентов с опухолями, в основном, сводятся к пожилому возрасту, продолжительной госпитализации, инвазивным процедурам и радиационной терапии и химиотерапии, причем эти виды терапии важный особый фактор снижения иммунитета среди пациентов с опухолями. Вследствие дегенеративных изменений в тканях и органах пожилых больных действие их иммунной защиты уменьшается, а их резистентность низка, что сопровождается различными сопутствующими заболеваниями, и вероятность развития внутрибольничных инфекций среди них выше. Пребывание в больнице и внутрибольничная инфекция взаимообусловлены, и по мере увеличения пребывания в больнице риск развития инфекции возрастает.
Среди всех инфекций наиболее распространены респираторные, за ними идут кожные инфекции, инфекции ЖКТ и мочевыводящих путей. Инфекции крови редки, но они более опасны и приводят к повышенной смертности. Взаимосвязь места возникновения опухоли и уровня заболеваемости: несмотря на высокую частоту возникновения опухолей легких, желудка и крови, уровень заболеваемости в таких случаях не самый высокий около 20%; несмотря на то, что количество больных с опухолями поджелудочной железы, пищевода, гепатобилиарными и отоларингологическими опухолями меньше, уровень заболеваемости среди них выше и достигает 40% или более. Уровень заболеваемости среди больных раком молочной железы и щитовидной железы составляет приблизительно 10%. Уровень заболеваемости среди больных с опухолями мочевыделительной системы самый низкий - всего около 5%.
Патогены инфекции преимущественно включают грамотрицательные бактериальные (около 45-55%) и грибковые инфекции (30% или более) (результаты основываются преимущественно на образцах, полученных из мазков из зева и мокроты, и т.п.). Среди грамотрицательных бактерий преобладают кишечная палочка, клебсиелла пневмонии, синегнойная палочка и акинетобактерия Баумана. В некоторых больницах наиболее вероятно возникновение грибковых инфекций, потому что злокачественная опухоль сама по себе является истощающей болезнью, а радиационная терапия и химиотерапия, а также инвазионные процедуры снижают гематопоэтическую функцию костного мозга, ослабляя защитную способность моноцитарно-фагоцитарной системы организма и разрушая его иммунный барьер. В дополнение к этому широкое применение большого спектра противобактериальных препаратов и иммуносупрессантов может повлиять на белковый обмен веществ человека и даже привести к нарушению функций печени, почек и костного мозга, давая возможность грибку обойти или нарушить защиту хозяина, что является основной причиной заражения больных со злокачественными опухолями грибковой инфекцией.
Карримицин по настоящему изобретению обладает превосходным противоинфекционным эффектом, полезен для помощи в избавлении больного от инфекции и при восстановлении иммунной функции, тем самым обеспечивая лучший терапевтический эффект в сочетании с противоопухолевым препаратом.
Первое вещество по настоящему изобретению, содержащее карримицин и его фармацевтически приемлемые соли, представляет собой фармацевтически приемлемую лекарственную форму, например, таблетки, капсулы в кишечнорастворимой оболочке и инъекции, приготовленные из карримицина и фармацевтически приемлемых вспомогательных лекарственных средств.
Используемые вспомогательные средства и методы приготовления различных лекарственных форм можно получить в соответствии с предыдущим уровнем техники.
Кроме того, доза медицинского препарата колеблется в диапазоне от 5 до 1500 мг; предпочтительно - в диапазоне от 50 до 1000; еще более предпочтительно - в диапазоне от 100 до 400 мг.
В альтернативном варианте доза первого вещества колеблется в диапазоне от 5 до 1500 мг; предпочтительно - в диапазоне от 50 до 1000; еще более предпочтительно - в диапазоне от 100 до 400 мг.
Экспериментальным путем в настоящем изобретении приводится, что карримицин и его фармацевтически приемлемые соли демонстрируют хорошую антипролиферативную активность относительно человеческих клеток рака молочной железы MCF-7 и MDA-MB-231, человеческих клеток гепатомы HepG2 или мышиных клеток гепатомы Н22, человеческих немелко клеточных клеток рака легких А549, человеческих крупноклеточных клеток рака легких Н460 и HI299, человеческих прозрачных клеток почечного эпителия аденокарциномы 786-0, человеческих клеток почечного эпителия аденокарциномы 769-Р, человеческих клеток глиомы U251, человеческих клеток глиобластомы А172, человеческих клеток ткани лимфомы U937, человеческих клеток рака шейки матки HeLa, человеческих клеток рака предстательной железы РС3 человеческих клеток рака поджелудочной железы PANC-1, человеческих клеток рака пищевода ТЕ-1, человеческих клеток аденокарциномы желудка SGC7901, человеческих клеток рака толстой кишки НТ-29 и человеческих клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60, что подтверждает, что карримицин может быть использован для лечения опухолей или раковых заболеваний, провоцируемых этими клетками.
Экспериментальным путем способом in vivo в настоящем изобретении дополнительно приводится, что карримицин и его фармацевтически приемлемые соли обладают очевидным подавляющим действием на разрастание человеческих клеток рака молочной железы MCF-7 и MDA-MB-231, человеческих клеток гепатомы HepG2 или мышиных клеток гепатомы Н22, человеческих немелкоклеточных клеток рака легких А549, человеческих крупноклеточных клеток рака легких Н460 и Н1299, человеческих прозрачных клеток почечного эпителия аденокарциномы 786-0, человеческих клеток почечного эпителия аденокарциномы 769-Р, человеческих клеток глиомы U251, человеческих клеток глиобластомы А172, человеческих клеток ткани лимфомы U937, человеческих клеток рака шейки матки HeLa, человеческих клеток рака предстательной железы РС3 человеческих клеток рака поджелудочной железы PANC-1, человеческих клеток рака пищевода ТЕ-1, человеческих клеток аденокарциномы желудка SGC7901, человеческих клеток рака толстой кишки НТ-29 и человеческих клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60.
В то же время, испытания на ряде пациентов с различными опухолями или раковыми заболеваниями указывают на то, что карримицин и его фармацевтически приемлемые соли оказывают хорошие терапевтические эффекты на различные опухоли или виды раковых заболеваний, такие как рак легких, рак шейки матки и рак матки.
Согласно настоящему изобретению медицинский препарат может быть приготовлен в разных фармацевтически приемлемых лекарственных формах, таких как таблетки и капсулы, по методу, стандартному для этой области техники.
Согласно настоящему изобретению карримицин состоит из нескольких производных спирамицина, а его основные активные компоненты представлены изовалерил-спирамицином I, II и III, причем содержание изовалерил-спирамицина (I+II+III) должно составлять не менее 60%.
Кроме того, содержание изовалерил-спирамицина III в карримицине по настоящему изобретению должно составлять не менее 30%.
Кроме того, общая концентрация ацилированного спирамицина в карримицине по настоящему изобретению должна составлять не менее 80%.
Кроме того, суммарное количество других неизвестных компонентов не должно превышать 5,0%.
В дополнение к этому, общая концентрация спирамицина III в карримицине по настоящему изобретению должна составлять не менее 1,0%.
Типовая хроматограмма карримицина также включает пики (изо-)бутирил-спирамицина II и/или (изо-)бутирил-спирамицина III в дополнение к пикам изовалерил-спирамицина I, II и III.
Предпочтительно, чтобы типовая хроматограмма карримицина дополнительно включала один или несколько элементов, подобранных в группе, состоящей из пиков спирамицина III, моноацетил-спирамицина II, моноацетил-спирамицина III, пропионил-спирамицина II, пропионил-спирамицина III, (изо-)бутирил-спирамицина II и (изо-)бутирил-спирамицина III.
Положительные эффекты настоящего изобретения следующие: по настоящему изобретению приводятся доказательства того, что карримицин и его фармацевтически приемлемые соли обеспечивают хорошее противоопухолевое действие, а в особенности обладают хорошими лечебными эффектами при лечении рака молочной железы, рака печени, рака легких, аденокарциномы прозрачных клеток почечного эпителия, опухоли головного мозга, рака шейки матки, аденокарциномы желудка, рака толстой кишки, лимфомы или лейкоза и других опухолей. В настоящем изобретении не только предлагается теоретическое обоснование применения и клинического продвижения карримицина и его фармацевтически приемлемых солей при приготовлении противоопухолевых препаратов, но также оно обеспечивает важные экономические и социальные полезные эффекты.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1 фотография опухолей в каждой группе введения при испытании подавляющего действия карримицина на человеческие немелкоклеточные клетки рака легких в модели с «голой» мышью способом in vivo.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Для пояснения целей, технических решений и преимуществ вариантов осуществления настоящего изобретения ниже будет приведено четкое и полное описание технических решений по настоящему изобретению в сочетании с вариантами его осуществления. Для демонстрации настоящего изобретения, но не для ограничения объема его правовой охраны применяются следующие варианты осуществления.
В приведенных далее вариантах осуществления карримицин состоит из нескольких производных спирамицина, а его основные активные компоненты представлены изовалерил-спирамицином I, II и III, причем содержание изовалерил-спирамицина (I+II+III) должно составлять не менее 60%.
Кроме того, содержание изовалерил-спирамицина III в карримицине по настоящему изобретению должно составлять не менее 30%.
Кроме того, общая концентрация ацилированного спирамицина в карримицине по настоящему изобретению должна составлять не менее 80%.
Кроме того, суммарное количество других неизвестных компонентов не должно превышать 5,0%.
В дополнение к этому, общая концентрация спирамицина III в карримицине по настоящему изобретению должна составлять не менее 1,0%.
Типовая хроматограмма карримицина также включает пики (изо-)бутирил-спирамицина II и/или (изо-)бутирил-спирамицина III в дополнение к пикам изовалерил-спирамицина I, II и III.
Предпочтительно, чтобы типовая хроматограмма карримицина дополнительно включала один или несколько элементов, подобранных в группе, состоящей из пиков спирамицина III, моноацетил-спирамицина II, моноацетил-спирамицина III, ропионил-спирамицина II, пропионил-спирамицина III, (изо-)бутирил-спирамицина II и (изо-)бутирил-спирамицина III.
Также на разных партиях карримицина были проведены следующие испытания, и полученные результаты аналогичны.
Вариант осуществления 1. Таблетированный карримицин
Характеристики: 200/350 мг
Рецептура ядра таблетки:
Рецептура жидкости для оболочки:
Процесс приготовления:
Приготовление ядра таблетки: основной препарат и вспомогательные лекарственные средства в соответствующем порядке пропускались через сито 100 меш, а затем выполнялось перемешивание рецептурного количества карримицина, рецептурного количества микрокристаллической целлюлозы и 1/2 рецептурного количества кар боксиметил крахмал а натрия до однородного состояния, после чего добавлялся водный раствор повидона K30 5% для получения мягкого материала. Для гранулирования использовалось сито 18 меш, и влажные гранулы просушивались в условиях обдува при температуре 60°С в течение 2 часов. После сушки влажных гранул для рассеивания гранул использовалось сито 18 меш, после чего добавлялось 1/2 рецептурного количества кар боксиметил крахмал а натрия и рецептурное количество стеарата магния. После равномерного перемешивания материалов смесь таблетировалась с помощью узкого вогнутого штампа диаметром 11 мм для получения ядра таблетки, содержащего препараты, причем масса таблетки составляла 350 мг, а твердость - 6,5 кг.
Приготовление жидкости для оболочки: было проведено взвешивание Opadry II (белого), в емкость для приготовления жидкостей было добавлено необходимое количество воды и партия Opadry II. После добавления всего количества Opadry II скорость перемешивания была снижена до исчезновения завихрения, и для получения жидкости для оболочки перемешивание продолжалось в течение 30 мин.
Приготовление таблеток с тонкопленочной оболочкой: ядро таблетки размещали на установке для нанесения оболочки, устанавливались условия нанесения оболочки и производилось ее нанесение с частотой 20 об/мин при температуре воздуха на входе 40°С и 30°С на выходе, давлении распыла 0,02 МПа и расходом жидкого раствора 1 мл/мин. По достижении стабильного состояния оболочка распылялась в течение 1,5 часов до тех пор, пока поверхность таблеток не становилась гладкой и не приобретала однородный цвет, причем производился приемочный контроль на соответствие по нормативу контроля относительно пленочных оболочек. Оболочка прибавляет приблизительно 5% массы.
Вариант осуществления 2. Таблетированный карримицин (из расчета на 10000 таблеток)
Рецептура:
Процесс приготовления: соответствующее количество крахмала было взвешено, разбавлено до концентрации 15% и нагрето до образования пасты для получения вяжущего вещества; основной материал карримицин, а также вспомогательные материалы в виде крахмала, гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения, кар боксиметил крахмал а натрия и стеарата магния были пропущены через сито 100 меш в соответствующем порядке, и затем необходимые основной и вспомогательные материалы были взвешены согласно количеству, указанному в рецептуре. После полного смешивания карримицина, крахмала и гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения до однородного состояния была использована крахмальная паста с концентрацией крахмала 15% для преобразования смеси в мягкий материал, который был гранулирован посредством сита 14 меш, и затем эти гранулы были высушены при температуре 50-60°С до получения влажности 3-5%. Для рассеивания гранул использовалось сито 14 меш, после чего для смешивания были добавлены карбоксиметилкрахмал натрия и стеарат магния, и была измерена концентрация гранул. Согласно концентрации гранул была вычислена масса таблетки, и смесь была таблетирована (посредством узкого вогнутого штампа диаметром 9 мм), после чего была проведена проверка на разность массы таблеток. После прохождения проверки таблетки были упакованы.
Вариант осуществления 3. Капсулированный карримицин (из расчета на 10000 гранул)
Рецептура:
Процесс приготовления: основной материал в виде карримицина и вспомогательный материал в виде медицинского крахмала были по-отдельности взвешены согласно количеству по формуле для данного процесса, а затем полностью перемешаны в миксере в течение 1,5-2 часов. Данные, полученные при отборе образцов и проверке концентраций, в целом должны были совпадать с теоретическими данными (масса каждой капсулы составляла приблизительно 0,105 г), и затем сертифицированные лекарственные капсулы №3 и смешанное сырье для загрузки были помещены в приспособление для заполнения в соответствии с требованиями автоматической капсюлировочной машины, после чего заполненные капсулы подверглись испытанию на различие образцов (±10% или менее, <0,3 г) для определения соответствия скорости растворения требованиям. Капсулы, соответствовавшие требованиям после испытания, были помещены в глянцовочную машину для глянцевания в течение 15-20 минут с добавлением вазелинового масла, после чего они были извлечены для проверки их соответствия упаковке для готовой продукции.
Вариант осуществления 4. Карримицин в форме сухого сиропа (из расчета на 10000 упаковок)
Рецептура:
Процесс приготовления: порошок-сырец карримицина, лимонная кислота и сахароза были в соответствующем порядке измельчены до получения гранул посредством скоростной вихревой мельницы, и 85% гранул были пропущены через сито 300 меш, а 15% - через сито 180 меш. Затем мелкоизмельченный порошок был отвешен в количестве, предусмотренном рецептурой, и полностью перемешивался в течение 1-1,5 часов, были измерены значения концентрации, рассчитана норма загрузки (теоретическая норма загрузки составила 500 мг на пакет). После этого смесь была помещена в машину для упаковки в пакеты, была установлена бумага с алюминиевой фольгой и проведено заполнение в соответствии с требованиями машины для заполнения. Допуск по расхождениям находился в пределах ±5%, и после заполнения и прохождения осмотра изготавливалась наружная упаковка.
Вариант осуществления 5. Гранулированный карримицин (из расчета на 10000 упаковок)
Рецептура:
Процесс приготовления: порошок-сырец карримицина, сахарную пудру и декстрин были пропущены через сито 120 меш, а затем отвешены в количестве, предусмотренном рецептурой, и равномерно перемешаны. Вышеприведенные смешанные материалы были преобразованы в мягкий материал с помощью повидона K30 5% в виде клейкого вещества, после чего этот мягкий материал был гранулирован с помощью колебательного гранулятора, высушен при 70°С, а гранулы были распределены и предварительно упакованы после прохождения проверки.
Вариант осуществления 6. Карримицин в форме лиофилизированного порошка для инъекций
500 мг порошка-сырца карримицина были перемешаны до однородного состояния с равномолярным количеством пропиленгликоля, и эта смесь была растворена в 5 мл воды для получения светло-желтого прозрачного раствора со значением рН от 4,6 до 5,6 единиц. Далее в форме лиофилизированного пропанта в светло-желтый прозрачный раствор были добавлены 40 г маннитола, и после быстрой заморозки при низкой температуре в течение 9 часов материал был лиофилизирован для получения рыхлого вещества светло-желтого цвета, которое перед использованием было растворено в 10 мл стерилизованной воды.
Пример испытания 1. Биопроба на противоопухолевую активность
Цель анализа оценка ингибирования пролиферации или цитотоксической активности клетки испытуемого образца способом in vitro.
Клеточные штаммы:
человеческие клетки рака молочной железы MCF-7 и MDA-MB-231, человеческие клетки гепатомы HepG2, человеческие не мелкоклеточные клетки рака легких А549, человеческие крупноклеточные клетки рака легких Н460 и H1299, человеческие прозрачные клетки почечного эпителия аденокарциномы 786-0, человеческие клетки почечного эпителия аденокарциномы 769-Р, человеческие клетки глиомы U251, человеческие клетки глиобластомы А172, клетки человеческой ткани лимфомы U937, человеческие клетки рака шейки матки HeLa, человеческие клетки рака предстательной железы РС3, человеческие клетки рака поджелудочной железы PANC-1, человеческие клетки рака пищевода ТЕ-1, человеческие клетки аденокарциномы желудка SGC7901, человеческие клетки рака толстой кишки НТ-29 и человеческие клетки промиелоцитарного лейкоза HL-60.
Реагенты:
среда RPMI1640, среда MEM, среда DMEM с пониженным содержанием сахара, эмбриональная телячья сыворотка, приобретенная у компании Gibco, США, трипсин, глютамин, пенициллин, стрептомицин, диметилсульфоксид (ДМСО) и метил-тиазол-тетразолий (МТТ), приобретенный у компании Sigma, США.
Инструменты:
углекислотный инкубатор (Sanyo, Япония), анализатор иммуносорбентов с иммобилизированными ферментами (Tecan, Австрия), 96-луночный культуральный планшет (Corning, США), инвертированный микроскоп (Motic, Китай).
Этапы процедуры следующие:
адгезивные клетки:
MCF-7, MDA-MB-231, HepG2, А549, Н460, Н1299, 786-0, 769-Р, U251, А172, HeLa, РС3, PANC-1, ТЕ-1, SGC7901 и НТ-29 опухолевые адгезивные клетки. Были отобраны и подкормлены трипсином адгезивные опухолевые клетки в фазе логарифмического роста, после чего они были преобразованы во взвесь отмытых клеток с концентрацией от 4 до 5×104/мл с помощью среды, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки.
Взвесь отмытых клеток была посеяна на 96-луночный культуральный планшет, и каждая лунка вмещала 100 мкл. При температуре 37°С и концентрации СО2 в течение 24 часов проводилась культивация на 96-луночном планшете. Группа сравнения была заменена новой культурной средой с другой концентрацией образцов для испытания, а именно карримицином, в то время как контрольная группа была заменена культурной средой, содержащей аналогичный объем растворителя. Также каждая группа получила 3 параллельных лунки, культивация которых проводилась при 37°С и концентрации СО2 5% в течение 48 часов. После удаления супернатанта лунки были трижды тщательно промыты фосфатно-солевым буферным раствором. Также в каждую лунку были добавлены 100 мкл свежеприготовленной культурной среды с концентрацией МТТ 0,5 мг/мл для непрерывной инкубации в течение 4 часов при 37°С. После тщательного удаления супернатанта в каждую лунку были добавлены 150 мкл ДМСО, и после смешивания материала в течение 10 минут посредством микроосциллятора с помощью микропланшетного ридера было измерено значение оптической плотности при длине волны 492 нм.
Клетки во взвеси:
клетками во взвеси выступали U937 и HL-60. В фазе логарифмического роста клетки были отобраны и преобразованы во взвесь отмытых клеток 2×105/мл с помощью культурной среды RPMI 1640, содержащей 10%эмбриональной телячьей сыворотки. Взвесь отмытых клеток была посеяна на 96-луночный культуральный планшет, и каждая лунка вмещала 50 мкл. При температуре 37°С и концентрации СО2 в течение 24 часов проводилась культивация на 96-луночном планшете. В группу сравнения были добавлены 50 мкл культурной среды с разной концентрацией испытуемого образца карримицина, в то время как в контрольную группу была добавлена культурная среда, содержащая такой же объем растворителя. Каждая группа получила 3 параллельных лунки, культивация которых проводилась при 37°С и концентрации СО2 5% в течение 48 часов. Также в каждую лунку были добавлены 10 мкл свежеприготовленной культурной среды с концентрацией МТТ 5 мг/мл для непрерывной инкубации в течение 4 часов при 37°С. Кристаллы были растворены в 100 мкл тройного раствора (10 г додедилсульфата натрия, 0,1 мл НСl 10 моль, 5 мл изобутанола, разбавленного 100 мг дистиллированной воды) и инкубированы при 37°С в течение 12 часов. С помощью микропланшетного ридера было измерено значение оптической плотности при длине волны 492 нм.
Оценка результатов:
степень ингибирования роста опухолевых клеток медицинского препарата рассчитывается по следующей формуле:
степень ингибирования роста опухолевой клетки (%) = [А492 (негативный контроль) - А492 (дозовая группа)]/А492 (негативный контроль) × 100%
С ее помощью определяется концентрация полумаксимального ингибирования (IC50) образца.
Результаты:
результаты оценки антипролиферативной активности in vitro образцов, подобранных из человеческих клеток рака молочной железы MCF-7 и MDA-MB-231, человеческих клеток гепатомы HepG2, человеческих немелко клеточных клеток рака легких А549, человеческих крупноклеточных клеток рака легких Н460 и Н1299, человеческих прозрачных клеток почечного эпителия аденокарциномы 786-0, человеческих клеток почечного эпителия аденокарциномы 769-Р, человеческих клеток глиомы U251, человеческих клеток глиобластомы А172, человеческих клеток ткани лимфомы U937, человеческих клеток рака шейки матки HeLa, человеческих клеток рака предстательной железы РС3, человеческих клеток рака поджелудочной железы PANC-1, человеческих клеток рака пищевода ТЕ-1, человеческих клеток аденокарциномы желудка SGC-7901, человеческих клеток рака толстой кишки НТ-29 и человеческих клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60 приведены в таблице 1:
Имеющиеся результаты показывают, что образцы демонстрируют хорошую антипролиферативную активность в отношении испытуемых клеток.
Пример испытания 2. Испытание способом in vivo
1. Ингибирование карримицином в человеческих немелкоклеточных клетках рака легких на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки А549 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой. Карримицин в дозах 12,5, 25 и 50 мг/кг были введены в 3 группах соответственно. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%)=RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%)=(1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. фиг. 1, таблицы 2 и 3).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 54,46%, 66,07% и 75,89% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 54,55%, 45,57% и 29,21% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
2. Ингибирование карримицином в человеческих клетках рака молочной железы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки MCF-7 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) ×100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 4 и 5).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 11,73%, 25,13% и 45,55% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 57,37%, 47,65% и 33,46% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
3. Ингибирование карримицином в человеческих клетках лимфомы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки U937 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (м), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 6 и 7).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 61,08%, 65,94% и 70,50% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 52,37%, 47,31% и 39,95% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
4. Ингибирование карримицином в человеческих клетках рака шейки матки на
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки HeLa в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%. Затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 8 и 9).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 28,75%, 46,28% и 56,18% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 61,04%, 53,27% и 40,40% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
5. Ингибирование карримицином в человеческих клетках рака предстательной железы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки РС3 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 10 и 11).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 25,92%, 34,67% и 60,32% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 55,93%, 43,45% и 30,02% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
6. Ингибирование карримицином в человеческих клетках рака толстой кишки на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки НТ-29 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 12 и 13).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 40,55%, 60, 68% и 73,16% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 49,31%, 42,30% и 30,96% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
7. Ингибирование карримицином в человеческих клетках лейкоза на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки HL-60 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант .Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%. Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 14 и 15).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 40,26%, 70,92% и 83,35% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 58,63%, 49,26% и 38,33% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
8. Ингибирование карримицином в человеческих клетках гепатоцеллюлярного рака на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки HepG-2 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 16 и 17).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 37,79%, 51,92% и 61,11% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 65,55%, 53,58% и 39,33% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
9. Ингибирование карримицином в человеческих клетках рака молочной железы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки MDA-MB-231 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 18 и 19).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 46,96%, 58,88% и 72,55% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 59,42%, 48,69% и 35,78% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
10. Ингибирование карримицином в человеческих крупноклеточных клетках рака легких на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышином модели
Были отобраны клетки Н460 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%)=(1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 20 и 21).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 37,79%, 51,92% и 61,11% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 73,83%, 61,83% и 49,82% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
11. Ингибирование карримицином в человеческих крупноклеточных клетках рака легких на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки Н1299 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%. Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 22 и 23).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 19,57%, 49,58% и 59,65% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 78,57%, 63,62% и 49,71% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
12. Ингибирование карримицином в человеческих прозрачных клетках почечного эпителия аденокарциномы на модели с голой мышью Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки 786-0 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) ×100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 24 и 25).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 30,32%, 47,24% и 63,71% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 80,81%, 67,16% и 42,82% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
13. Ингибирование карримицином в человеческих клетках почечного эпителия аденокарциномы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки 769-Р в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 26 и 27).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 38,40%, 53,67% и 69,53% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 62,29%, 43,16% и 31,34% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
14. Ингибирование карримицином в человеческих клетках глиомы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки U251 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 28 и 29).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 66,51%, 79,59% и 81,82% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 84,81%, 56,30% и 35,90% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
15. Ингибирование карримицином в человеческих клетках глиобластомы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки А172 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 30 и 31).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 46,95%, 66,84% и 76,26% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 68,62%, 55,91% и 38,53% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
16. Ингибирование карримицином в человеческих клетках рака поджелудочной железы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки PANC-1 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 32 и 33).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 56,27%, 62,66% и 75,94% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 74,10%, 47,01% и 35,55% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
17. Ингибирование карримицином в человеческих клетках рака пищевода на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки ТЕ-1 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с эталонной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 34 и 35).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 46,71%, 61,48% и 70,41% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 64,79%, 46,03% и 37,02% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
18. Ингибирование карримицином в человеческих клетках аденокарциномы желудка на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки SGC7901 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3 мыши были произвольным образом разделены на 5 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную и карримициновую группы с полученными дозами 12,5, 25 и 50 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительная скорость ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы ×100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 36 и 37).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 42,51%, 68,92% и 74,49% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, составляет 69,12%, 47,88% и 38,35% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших карримицин в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
19. Ингибирование пересаженных опухолей мышиных клеток Н22 рака печени и карциномы легкого Льюиса
Установление солидной опухоли на мышиной модели:
Криоконсервированные в жидком азоте штаммы клеток Н22 были реанимированы в куныминских мышах. Спустя 3 поколения асциты куныминских мышей были отобраны и помещены в центрифужную пробирку объемом 50 мл, в которую были добавлены 10 мл раствора хлорида натрия 0,9%, после чего в течение 5 мин выполнялось центрифугирование со скоростью 1000 об/мин при комнатной температуре с последующим удалением супернатанта. Затем в пробирку был добавлен раствор хлорида натрия 0,9% для качественной продувки и смешивания, а смесь была разбавлена до концентрации 5×106 живых клеток/мл раствором хлорида натрия после подсчета. Пробирка хранилась в ледяной воде, и для дезинфекции кожи в подмышечных впадинах мышей был использован этиловый спирт 75%. Вскоре каждой куныминской мыши в подмышечную впадину правой передней конечности было подкожно введено 0,2 мл клеток.
Клетки карциномы легкого Льюиса были культивированы в культурной среде RPMI 1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, при температуре 37°С в инкубаторе с 5% СО2. Клетки в логарифмической фазе роста были обработаны трипсином 0,25%, после чего они были собраны для центрифугирования с целью удаления полученного супернатанта, а затем дважды промыты стерильным раствором хлорида натрия. После этого клетки были суспендированы в растворе хлорида натрия для проведения анализа окрашивания трипановым синим, который показал, что жизнеспособность клеток превысила 95%, после чего был произведен подсчет клеток. Концентрация клеток карциномы легкого Льюиса была доведена до 1×107/мл, и они были сохранены в ледяной воде. Для дезинфекции кожи в подмышечных впадинах мышей использовался этиловый спирт 75%, и вскоре каждой мыши C57BL/6 в правую подмышечную впадину было подкожно введено 0,2 мл клеток.
Метод группирования мышей и введения
В модели с мышами с клетками рака печени Н22 мыши, которым была введена опухоль, на следующий день после введения были в произвольном порядке разделены на группы по 10 особей в каждой. Группы состояли из: эталонной контрольной группы, положительной контрольной циклофосфамидной группы с введением препарата (СТХ, 26 мг/кг) и трех карримициновых групп с дозами в объеме 13, 26 и 53 мг/кг. В каждой группе в течение 7 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг.
В модели с мышами с клетками карциномы легкого Льюиса мыши, которым была введена опухоль, на следующий день после введения были в произвольном порядке разделены на группы по 10 особей в каждой. Группы состояли из: эталонной контрольной группы, положительной контрольной циклофосфамидной группы с введением препарата (СТХ, 30 мг/кг) и трех карримициновых групп с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг. В каждой группе в течение 15 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг.
Расчет степени ингибирования опухоли:
Мыши с опухолями были взвешены и умерщвлены на следующий день после последнего приема препарата. Подкожные опухоли были препарированы и взвешены. В каждой группе была вычислена средняя масса опухоли, а также степень ее ингибирования.
Степень ингибирования опухоли = (1-Т/С) × 100%
Т - средняя масса опухоли группы, получавшей препарат; С - средняя масса опухоли контрольной группы без введения препарата. Результаты:
1. Ингибирование карримицином в пересаженных мышиных опухолевых клетках рака печени Н22
По результатам в таблице 38 видно, что в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата степень ингибирования опухолей клеток рака печени Н22 куныминских мышей составляет 47,25%. В карримициновых группах с дозами 26 и 52 мг/кг наблюдалось значительное ингибирование роста мышиных клеток рака печени Н22 со степенью ингибирования 50,67 и 79,50% соответственно. Степень ингибирования опухоли в карримициновой группе с дозой 52 мг/кг значительно ниже, чем в положительной контрольной группе (Р<0,05).
В положительной циклофосфамидной группе с введением препарата наблюдается незначительное увеличение массы в сравнении с нормальной контрольной группой. Масса мышей в каждой карримициновой группе возросла по сравнению с моментом до введения препарата, но в сравнении с эталонной контрольной группой эта разница незначительна.
2. Ингибирование карримицином в пересаженных мышиных опухолевых клетках карциномы легкого Льюиса
По результатам в таблице 39 видно, что в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата степень ингибирования опухолей клеток карциномы легкого Льюиса куныминских мышей составляет 49,14%. В карримициновых группах с дозами 13, 26 и 52 мг/кг наблюдалось значительное ингибирование роста мышиных клеток карциномы легкого Льюиса со степенью ингибирования 50,30, 55,88 и 76,23% соответственно. Степень ингибирования опухоли в карримициновой группе с дозой 52 мг/кг значительно ниже, чем в положительной контрольной группе (Р<0,05). Масса мышей в каждой карримициновой группе возросла по сравнению с моментом до введения препарата, но в сравнении с эталонной контрольной группой эта разница незначительна.
20. Воздействие карримицина на иммунную функцию мышей с опухолями
Метод
1. Воздействие на тимический и селезеночный индексы мышей с опухолями
После умерщвления мышей с опухолями проводится взвешивание селезенки и тимуса и вычисление селезеночного и тимического индексов.
2. Воздействие на пролиферативную активность лимфоцитов и активность клеток-естественных киллеров (NK-клеток) мышей с опухолями
2.1 Подготовка лимфоцитов селезенки
В чашку была помещена бессывороточная среда RPMI 1640, после чего чашка была помещена на лед. Селезенка была стерильным способом извлечена и помещена на стерильное предметное стекло для приготовления суспензии отдельных клеток. Суспензия отдельных клеток была отфильтрована через двухслойную фильтровальную сетку, дважды промыта бессывороточной средой RPMI 1640, а затем подвергнута центрифугированию в течение 5 мин со скоростью 1500 об/мин для удаления полученного супернатанта. В обработанную суспензию были добавлены 2 мл лизата эритроцитов, смесь была отстояна в течение 2 мин, после чего были добавлены 8 мл среды RPMI 1640, проведено центрифугирование в течение 5 мин со скоростью 1500 об/мин для удаления полученного супернатанта, а затем двукратное промывание средой RPMI 1640. Для подсчета количества живых клеток был проведен анализ окрашивания трипановым синим, и жизнеспособность клеток превысила 95%. Посредством использования среды RPMI 1640 с содержанием 10% эмбриональной телячьей сыворотки была приготовлена суспензия отдельных клеток.
2.2 Анализ пролиферативной активности лимфоцитов
Была взята суспензия клеток селезенки, а плотность клеток была доведена до 1 × 107/мл. Для каждой мыши были предоставлены: А. контрольная лунка: были добавлены 100 мкл среды RPMI 1640; В. лунка стимуляции с конкавалином А (КонА): были добавлены 100 мкл (10 мг/л) раствора конкавалина А (КонА); и С.лунка стимуляции с бактериальным эндотоксином (ЛПС): были добавлены 100 мкл (20 мг/л) раствора бактериального эндотоксина (ЛПС). Вышеприведенные клетки были помещены на 96-луночный планшет, после чего в каждую из лунок были добавлены 100 мкл суспензии клеток селезенки. После помещения культурального планшета в условия насыщенной влажности с объемной долей СО2 5% при температуре 37°С с целью инкубации в течение 72 ч в каждую лунку были добавлены 10 мкл раствора МТТ (5 г/л), а инкубация была продолжена еще на 4 часа в тех же условиях, после чего культивирование было остановлено. Были добавлены 100 мкл тройного раствора (10 г додедилсульфата натрия, 0,1 мл НСl 10 моль, 5 мл изобутанола, разбавленных 100 мл дистиллированной воды), и планшет подвергался встряхиванию в течение 10 мин для полного растворения кристаллов. При длине волны 570 нм была измерена оптическая плотность (ОП) каждой лунки и была вычислена скорость пролиферации лимфоцитов. Скорость пролиферации лимфоцитов (%) = [(Т-С)/С] × 100%, где Т - оптическая плотность лунки стимуляции, а С оптическая плотность контрольной лунки.
2.3 Анализ активности клеток-естественных киллеров (NK-клеток)
Была взята суспензия клеток селезенки, а плотность клеток была доведена до 1×107/мл (эффекторные клетки). Была приготовлена суспензия клеток K562 с плотностью 1×105/мл (клетки-мишени). Для каждой мыши были предоставлены: А. эффекторные клетки: лунка клеток-мишеней (количественное соотношение 20:1), в которую были добавлены 20 мкл суспензии клеток селезенки и 100 мкл суспензии клеток K562; В. контрольная лунка эффекторных клеток, в которую были добавлены 100 мкл суспензии клеток селезенки и 100 мкл среды RPMI 1640; и С.контрольная лунка клеток-мишеней, в которую были добавлены 100 мкл суспензии клеток K562 и 100 мкл среды RPMI 1640. Вышеприведенные клетки были помещены на 96-луночный планшет. После помещения 96-луночного планшета в условия насыщенной влажности с объемной долей СО2 5% при температуре 37°С с целью инкубации в течение 22 ч в каждую лунку были добавлены 10 мкл раствора МТТ (5 г/л), а инкубация была продолжена еще на 4 часа в тех же условиях, после чего культивирование было остановлено. Были добавлены 100 мкл тройного раствора (10 г додедилсульфата натрия, 0,1 мл НСl 10 моль, 5 мл изобутанола, разбавленных 100 мл дистиллированной воды), и планшет подвергался встряхиванию в течение 10 мин для полного растворения кристаллов, а затем при длине волны 490 нм была измерена оптическая плотность (ОП) каждой лунки и вычислена активность NK-клеток. Активность NK-клеток (%) = [TO-(S-E)]/TO ×100%, где ТО - оптическая плотность контрольной лунки клеток-мишеней, S оптическая плотность контрольной лунки эффекторных клеток, а Е оптическая плотность эффекторной клетки. Результаты:
1. Воздействие на тимический и селезеночный индексы мышей с опухолями клеток рака печени Н22
По результатам в таблице 40 видно, что тимический и селезеночный индексы в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ниже, чем в контрольной группе (Р<0,01). Тимические индексы мышей в карримициновых группах с дозами 13, 26 и 52 мг/кг в сравнении с таковыми в контрольной группе значительных различий не имеют. Селезеночный индекс в карримициновой группе с дозой 52 мг/кг значительно возрастает в сравнении с контрольной группой (Р<0,05).
2. Воздействие на тимический и селезеночный индексы мышеи с опухолями клеток карциномы легкого Льюиса
По результатам в таблице 41 видно, что селезеночный индекс в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ниже, чем в контрольной группе (Р<0,01). Селезеночный и тимический индексы мышей в карримициновых группах с дозами 13, 26 и 52 мг/кг в сравнении с таковыми в контрольной группе значительных различий не имеют.
3. Воздействие на активность NK-клеток мышей с опухолями клеток карциномы легкого Льюиса
По результатам в таблице 42 видно, что активность NK-клеток в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ниже, чем в контрольной группе (Р<0,05). Активность NK-клеток в карримициновых группах с дозами 13 и 52 мг/кг значительно возрастает в сравнении с контрольной группой (Р<0,01).
4. Воздействие на пролиферативную активность лимфоцитов мышей с опухолями клеток карциномы легкого Льюиса
По результатам в таблице 43 видно, что активность лимфоцитов в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ингибирована (Р<0,05). Активность лимфоцитов в карримициновых группах с дозами 13 и 26 мг/кг значительно возрастает в сравнении с контрольной группой (Р<0,05, Р<0,01).
5. Воздействие на селезеночный индекс мышей с опухолями клеток рака легких А549
По результатам в таблице 44 видно, что селезеночный индекс в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ниже, чем в контрольной группе (Р<0,01). Селезеночные индексы мышей в карримициновых группах с дозами 13, 26 и 52 мг/кг в сравнении с таковыми в контрольной группе значительных различий не имеют.
Пример испытания 3.
Клиническое исследование
В настоящем изобретении подобраны несколько клинических случаев, в которых у некоторых больных имелось заболевание раком молочной железы, приводившее к сильным болям. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 2 курсов (30 суток на 1 курс, прием перорально по 2 таблетки в сутки) лечащий врач установил уменьшение опухоли. Сама больная почувствовала ослабление боли и пребывала в лучшем умственном состоянии.
Один больной страдал аденокарциномой прозрачных клеток почечного эпителия, и томографическое исследование показало затемнение почки с опухолями в размере двух третей ее площади. Патологическим результатом являлась аденокарцинома прозрачных клеток почечного эпителия на ранней стадии. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 2 курсов (30 суток на 1 курс, прием перорально по 2 таблетки в сутки) лечащий врач установил уменьшение площади опухоли почки и значительное улучшение.
Один больной страдал глиомой, и у него было диагностировано проникновение в ткани мозга и его разрушение, а также значительный периферийный отек мозга. Этот больной также страдал такими симптомами, как головная боль и потеря зрения. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 2 курсов (30 суток на 1 курс, прием перорально по 2 таблетки в сутки) лечащий врач установил ослабление отека мозга, а пациент почувствовал ослабление симптомов и значительное улучшение.
Один больной страдал лимфомой, и у него было диагностировано увеличение лимфоузлов в шее, размер которых достигал размера плода зизифуса со средней твердостью, и они были относительно солидными. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 3 курсов (30 суток на 1 курс, прием перорально по 2 таблетки в сутки) лечащий врач установил ослабление роста лимфоузлов, и их размер уменьшился до размера соевого боба, и больной также почувствовал облегчение в плане уменьшения твердости лимфоузлов, причем симптоматические проявления у больного явным образом улучшились.
Один больной страдал раком толстой кишки, и он был диагностирован как опухоль или масса, которая могла проникнуть в сальник и окружающие его ткани. Опухоль или масса была твердой и имела неправильную форму. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 1 курса (30 суток на 1 курс, прием перорально по 2 таблетки в сутки) лечащий врач установил уменьшение массы, а пациент почувствовал значительное улучшение.
Один больной страдал лейкемией с различными степенями анемии, кровотечением, заражением лихорадкой, увеличением печени, селезенки и лимфоузлов, а также болями в костях. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 3 курсов (30 суток на 1 курс, прием перорально по 2 таблетки в сутки) лечащий врач установил ослабление симптомов, а больной почувствовал явное улучшение.
Один больной страдал аденокарциномой желудка. Сначала у него были желудочные боли, сопровождавшиеся ощущением вздутия, как будто что-то внутри него бродило. Также желудочный сок время от времени попадал в глотку, вызывая ее жжение и неприятные ощущения. Больного также бросало в жар и наблюдалось холодное потоотделение. Больничное исследование показало наличие аденокарциномы желудка. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 3 курсов (30 суток на 1 курс, прием перорально по 2 таблетки в сутки) лечащий врач установил ослабление симптомов, а больной почувствовал значительное улучшение.
Один больной страдал раком пищевода. При рентгеновском исследовании пищевода с использованием бариевой взвеси обнаружилась стриктура пищевода, шероховатость его стенок и разрушение слизистой. Больному также становилось все труднее глотать. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 2 курсов (30 суток на 1 курс, прием перорально по 2 таблетки в сутки) лечащий врач установил ослабление симптомов, а больной почувствовал значительное улучшение.
У одного больного был диагностирован рак поджелудочной железы, сопровождавшийся слабостью конечностей, потерей аппетита, тошнотой, рвотой и диареей. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 2 курсов (30 суток на 1 курс, прием перорально по 2 таблетки в сутки) лечащий врач установил ослабление симптомов, а больной почувствовал значительное улучшение.
У одного больного был диагностирован рак предстательной железы. Постепенно растущая предстательная железа давила на мочевыводящие пути больного и привела к прогрессирующему расстройству мочеиспускания, что выражалось тонкой струей мочи, слабым напором, медленным потоком мочи, его прерывистостью, током мочи после мочеиспускания, неполнотой процесса мочеиспускания и его сложностью. В дополнение к этому, происходило частое мочеиспускание, ургентное мочеиспускание, никтурия и даже недержание мочи. Давление опухоли на прямую кишку могло вызывать проблемы с кишечником или его непроходимость. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 2 курсов лечащий врач установил ослабление симптомов, а больной почувствовал значительное улучшение.
Один больной страдал раком легких, печени и метастазами с переходом в рак костей. Больной был госпитализирован вследствие рвоты, кашля или болей в костях. После приема 4 упаковок каррмицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) при больничном обследовании была установлена кальцинация опухоли, и опухоль в легких исчезла.
Один больной страдал раком легких с очаговым поражением вокруг верхней доли правого легкого и пришел на прием к врачу из-за затруднения дыхания и сильного кашля. КТ-исследование: периферическое поражение правой верхней доли, затемнения в виде округлой массы 4,3*4,6; расширенное КТ-исследование: размер массы 4,0*4,4, другие изменения были незначительны. Больной принимал карримицин (полученный в варианте осуществления 1) с дозировкой по 2 таблетки в сутки в течение 14 суток, затем по 1 таблетке в сутки до указанного времени со вспомогательным лекарственным средством в виде тимозина с дозировкой 6 капсул в сутки. КТ-исследование показало, что затемнения в виде округлой массы значительно уменьшились, умственное состояние больного улучшилось, и дискомфорт отсутствовал.
Один больной страдал раком шейки матки, который распространился на другие части - легкие, кости и кишечник. КТ-исследование показало, что в легких наблюдался плевральный выпот и множественные узелки. Больному было трудно дышать, его лихорадило, и он проходил лечение на основе химиотерапии и радиационной терапии. После приема больным карримицина в таблетках (полученного в варианте осуществления 1) в течение 2 курсов новое КТ-исследование показало, что плевральный выпот исчез, а узелки уменьшились в размерах.
Пример испытания 4. Токсикологический анализ
1. Испытание на острую токсичность
1.1 Цель испытания
Целью испытания является установление степени токсичности, летальной и полулетальной доз LD50 для собак при однократном приеме карримицина путем перфузии, а также получение данных для проведения испытания на долговременную токсичность.
1.2 Испытуемый препарат:
Наименование: карримицин
Удельная активность: 927 МЕ/мг
Метод приготовления: соответствующее количество карримицина было взвешено, а затем перетерто в порошок. После этого в порошок было добавлено соответствующее количество раствора карбоксиметилцеллюлозы 0,5%, смесь была дополнительно перемешана и приготовлена для перорального приема в концентрации 100 мг/мл.
Растворитель: раствор карбоксиметилцеллюлозы 0,5%
1.3 Животное: собака
Источник: откормочная ферма для животных, больница сердечно-сосудистых заболеваний «Фувай», Китайская академия медицинских наук
Вид: гибрид
Сертификат №: Jing Dong Guan Quan Zi (96) №024 Масса: 15-20 кг
Пол: кобель
Время без приема пищи: 12 часов
Количество животных в группе: 1-2
1.4 Метод проведения эксперимента
После проведения предварительного испытания собакам перорально была введена доза 2000 и 3000 мг/кг карримицина, и летальный исход или серьезная токсичность не наблюдались. Согласно новым руководящим указаниям по препаратам доза была увеличена на 50%, то есть, до 4500 мг/кг. Карримицин был отвешен согласно массе собак и полностью суспендирован с помощью KMX 0,5% перед пероральным введением собакам через желудочный зонд (без приема пищи ночью перед испытанием). Токсичность и летальный исход наблюдались в течение одной недели после приема.
1.5 Острая пероральная токсичность на собаках
1.5.1 Токсическая реакция
При предварительном испытании собакам внутрижелудочно ввели дозы 2000 и 3000 мг/кг карримицина, и у них проявилась только кратковременная реакция в виде рвоты, выхода остатков препарата, желудочного сока и остатков пищи. Кроме реакции в виде рвоты других признаков токсичности замечено не было. При официальном испытании двум собакам была перорально введена доза 4 500 мг/кг соответственно, и токсическая реакция так же проявилась в виде таких желудочно-кишечных симптомов, как рвота. Диарея и наличие мягкого стула не наблюдались, так же как и другие явные симптомы токсичности после рвоты.
1.5.2 Полулетальная доза
После предварительного испытания при введении доз 2000 и 3000 мг/кг у собак проявились только такие желудочно-кишечные симптомы, как рвота. Согласно руководящим указаниям по утверждению новых препаратов доза при официальном испытании по методу ее увеличения на 50% составляет 4500 мг/кг. У обеих собак при внутрижелудочном введении проявилась реакция в виде рвоты, и другие токсические реакции не наблюдались. Доза LD50 у собак, перорально получивших карримицин, составляет >4 500 мг/кг.
2. Микроядерный тест карримицина на грызунах
2.1 Цель испытания
Целью испытания является проверка мутагенного потенциала препаратов на соматических клетках млекопитающих и предоставление обоснований для клинического применения препарата.
2.2 Испытуемый препарат
Наименование: карримицин
Содержание: удельная активность 927 МЕ/мг
Метод приготовления: соответствующее количество мелкого порошка карримицина было взвешено в соответствии с дозой и перетерто в ступке. Для приготовления суспензии было добавлено соответствующее количество раствора карбоксиметилцеллюлозы натрия 0,5%, и суспензия хранилась в холодильной камере при 4°С. Негативный контроль осуществлялся с равным количеством раствора карбоксиметлилцеллюлозы 0,5%. Были проведены следующие приготовления к положительному контролю: соответствующее количество циклофосфамида, используемого для инъекции, было отвешено и растворено в растворе хлорида натрия на момент использования для приготовления раствора с концентрацией 60 мг/кг.
Растворитель, эксципиент: раствор хлорида натрия, раствор карбоксиметилцеллюлозы натрия 0,5%
Контроль: положительный контроль: раствор циклофосфамида 60 мг/кг
негативный контроль: кар боксиметил целлюлоза натрия 0,5%
2.3 Животные
Половозрелые самцы мыши NIH были отобраны и предоставлены Национальным институтом контроля фармацевтической и биологической продукции Китая.
2.4 Метод проведения эксперимента
6 мышей в группе. Дозы, количество введений и время отбора образцов костного мозга выбирались при предварительном испытании.
Стандартно доза понижалась на 1/2 LD50, а количество введений составило единицу. Согласно результатам предварительных испытаний время отбора образцов костного мозга составило 24 часа после введения.
2.4.1 Доза
Не менее трех групп дозировки по порядку: 2000, 1000, 500 мг/кг
Коэффициент уменьшения дозы: 0,5
Количество введений: однократное пероральное введение.
2.4.2 Способ введения
Пероральное (внутрижелудочное) введение.
2.4.3 Время отбора образцов костного мозга: 24 часа после введения.
2.4.4 Получение образцов: умерщвление животных, мазки, фиксация и окрашивание.
2.4.5 Метод:
Мыши были умерщвлены путем цервикальной дислокации. Затем были отобраны грудины для удаления мышц на них, а места прикрепления были протерты фильтровальной сеткой. Использовался прямой мазок костного мозга: грудины были разрезаны для оголения медуллярной полости, и костный мозг был выдавлен и хорошо перемешан с каплей телячьей сыворотки в качестве катализатора. После высыхания предметное стекло фиксировалось в метаноле на 10 минут и, по окончании сушки, подвергалось окрашиванию по Гимза. Около 1000 полихромных эритроцитов с цельными контурами эритроцитов каждой мыши были изучены под микроскопом, а также были подсчитаны встречаемость микроядер и соотношение полихромных эритроцитов с обыкновенными эритроцитами.
2.5 Результаты относительно карримицина при микроядерном тесте мышиных полихромных эритроцитов приведены в таблице ниже.
2.5.1 Встречаемость полихромных эритроцитов
2.5.2 Соотношение полихромных и нормальных эритроцитов
2.5.3 Воздействие карримицина на микроядра полихромных эритроцитов мышиного костного мозга
В работе Хеддля и соавт. сообщается о спонтанном соотношении микроядер полихромных эритроцитов мышиного костного мозга, равном 3,1%. Среднее значение в группе негативного контроля при исследовании по настоящему изобретению составляет 2,63%. В сравнении с группой негативного контроля в трех группах, получивших дозы карримицина, не наблюдался значительный рост соотношения количества микроядер полихромных эритроцитов (Р>0,05). Соотношение полихромных и нормальных эритроцитов значительно не уменьшилось, а колебания значений находились в рамках нормы. В сравнении с группой негативного контроля в положительной циклофосфамидной контрольной группе наблюдался весьма значительный рост количества микроядер полихромных эритроцитов (Р<0,01), а соотношение микроядер было в 16,85 раз выше, чем в группе негативного контроля.
2.6 Вывод
Вышеприведенные результаты показывают, что карримицин не является хромосомным расщепляющим агентом. Также при введении карримицина в примененной дозе он не оказывает отрицательного воздействия на нормальный митоз клеток и не имеет ингибирующего эффекта на костный мозг.
Вышеприведенное представляет собой исключительно предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, и они не предназначены для ограничения объема последнего в какой-либо форме. Несмотря на то, что настоящее изобретение было раскрыто в вышеприведенных предпочтительных вариантах осуществления, оно не ограничивается последними. Любой технический специалист, ознакомившийся с настоящим изобретением, может вносить незначительные изменения или модификации в эквивалентные варианты осуществления с эквивалентными изменениями, используя техническое содержание вышеприведенных вариантов без отступления от объема технического решения по настоящему изобретению. В случае отсутствия отклонений от технического содержания относительно технического решения по настоящему изобретению любые незначительные, эквивалентные изменения и модификации, вносимые в вышеприведенные варианты осуществления согласно технической сущности настоящего изобретения, по-прежнему остаются в рамках объема настоящего изобретения.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ПРИМЕНЕНИЕ ИЗОВАЛЕРИЛ-СПИРАМИЦИНА I, II И/ИЛИ III ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И/ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ ОПУХОЛИ И ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА | 2018 |
|
RU2766176C2 |
| ИНГИБИТОР МИШЕНИ РАПАМИЦИНА В КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2768583C2 |
| ПРИМЕНЕНИЕ КАРРИМИЦИНА ИЛИ ЕГО АКТИВНЫХ ИНГРЕДИЕНТОВ | 2019 |
|
RU2771046C2 |
| ЛЕВОВРАЩАЮЩИЕ ИЗОВАЛЕРИЛ-СПИРАМИЦИНЫ 1, II, III, ИХ ПРЕПАРАТЫ, СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ И УПОТРЕБЛЕНИЕ | 2011 |
|
RU2593498C2 |
| РЕКОМБИНАНТНЫЙ БЕЛОК, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОРАКОВЫМ ДЕЙСТВИЕМ, КОДИРУЮЩИЙ ЕГО ГЕН И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2003 |
|
RU2333221C2 |
| ПЕПТИДЫ ИЗ ЯДА СКОРПИОНА Rhopalurus junceus И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ | 2011 |
|
RU2563348C2 |
| СЕЛЕКТИВНЫЙ ИНГИБИТОР МУТАНТА EGFR СО ВСТАВКОЙ В ЭКЗОНЕ 20 | 2017 |
|
RU2774629C2 |
| ВИДЫ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА | 2016 |
|
RU2727474C2 |
| КОНЪЮГАТ АНТИТЕЛО ПРОТИВ C-MET-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2021 |
|
RU2822497C1 |
| МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К ФАКТОРУ РОСТА ГЕПАТОЦИТОВ | 2004 |
|
RU2361879C2 |
Изобретение относится к применению карримицина и его фармацевтически приемлемых солей для изготовления медицинского препарата для лечения и/или профилактики опухолей. Карримицин представляет собой композицию из производных спирамицина, а его основные активные компоненты представлены изовалерил-спирамицином I, II и III. Содержание изовалерил-спирамицина (I+II+III) составляет не менее 60 мас.%, содержание изовалерил-спирамицина III составляет не менее 30 мас.%. Кроме того, общая концентрация ацилированного спирамицина составляет не менее 80 мас.%, а суммарное количество других неизвестных компонентов не превышает 5,0 мас.%. В дополнение к этому общая концентрация спирамицина III составляет не менее 1,0 мас.%. Карримицин и его фармацевтически приемлемые соли обладают хорошими лечебными эффектами при лечении рака молочной железы, рака печени, рака легких, рака почек, опухолей мозга, рака шейки матки, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы, рака пищевода, рака желудка, рака толстой кишки, а также лимфомы или лейкоза. 8 з.п. ф-лы, 49 табл., 1 ил., 4 пр.
1. Применение карримицина и его фармацевтически приемлемых солей для изготовления медицинского препарата для лечения и/или профилактики опухолей, отличающееся тем, что карримицин представляет собой композицию из производных спирамицина, а его основные активные компоненты представлены изовалерил-спирамицином I, II и III, причем содержание изовалерил-спирамицина (I+II+III) составляет не менее 60 мас.%, содержание изовалерил-спирамицина III составляет не менее 30 мас.%, кроме того, общая концентрация ацилированного спирамицина составляет не менее 80 мас.%, а суммарное количество других неизвестных компонентов не превышает 5,0 мас.%, в дополнение к этому общая концентрация спирамицина III составляет не менее 1,0 мас.%.
2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что опухоль включает в себя солидную и несолидную опухоли.
3. Применение по п. 2, отличающееся тем, что солидная опухоль включает в себя доброкачественную и злокачественную солидные опухоли; и несолидные опухоли представлены лимфомой или лейкозом.
4. Применение по п. 3, отличающееся тем, что злокачественная солидная опухоль представлена раком молочной железы, раком печени, раком легких, раком почек, опухолью мозга, раком шейки матки, раком предстательной железы, раком поджелудочной железы, раком пищевода, раком желудка или раком толстой кишки.
5. Применение по любому из пп. 1-4, отличающееся тем, что препарат представлен в различных лекарственных формах, состоящих из карримицина и его фармацевтически приемлемых солей, а также фармацевтически приемлемых вспомогательных лекарственных средств.
6. Применение по п. 5, отличающееся тем, что доза медицинского препарата колеблется в диапазоне от 5 до 1500 мг.
7. Применение по п. 5, отличающееся тем, что доза медицинского препарата колеблется в диапазоне от 50 до 1000 мг.
8. Применение по п. 5, отличающееся тем, что доза медицинского препарата колеблется в диапазоне от 100 до 400 мг.
9. Применение по п. 4, отличающееся тем, что опухоль головного мозга представлена глиомой или менингиомой, а рак желудка - аденокарциномой желудка.
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЧЕТВЕРТИЧНЫХ ФОСФОНИЙХЛО1-Втт^'-''«ИУ-TCXF/g^rCi^Ag J8. ^^^5ЛЛОТЕ(^Л | 0 |
|
SU250134A1 |
| M | |||
| KAWADA ET AL., Circumvention of Multidrug Resistance in Human Carcinoma Kb Cells by Polyether Antibiotics, THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS, 1992, vol | |||
| Железобетонный фасонный камень для кладки стен | 1920 |
|
SU45A1 |
| Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды | 1921 |
|
SU4A1 |
| Скрипка | 1923 |
|
SU556A1 |
| V | |||
| M | |||
| DEMBITSKY, Astonishing diversity of natural surfactants: 2 | |||
| Polyether glycosidic ionophores and macrocyclic glycosides, 2005, vol | |||
| Приспособление с иглой для прочистки кухонь типа "Примус" | 1923 |
|
SU40A1 |
| Переносная печь для варки пищи и отопления в окопах, походных помещениях и т.п. | 1921 |
|
SU3A1 |
