IL-17A-связывающие полипептиды Российский патент 2021 года по МПК C07K14/315 C07K14/54 C07K19/00 C12N15/09 A61K38/16 G01N33/53 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к классу сконструированных полипептидов, обладающих аффинностью связывания с интерлейкином-17А (далее обозначаемым как IL-17A). Настоящее изобретение также относится к применению такого интерлейкин-17А-связывающего полипептида в качестве диагностического, прогностического и/или терапевтического агента.

Предшествующий уровень техники

Семейство интерлейкинов-17 (IL-17) представляет собой семейство провоспалительных цитокинов, которое вносит вклад в патогенез некоторых воспалительных заболеваний. Основным источником IL-17 является линия Т-клеток, известных как Т-хелперные клетки 17 типа (Th17 cells), которые отличаются от классических подгрупп Th1- и Th2-клеток. По результатам исследований на мышиных моделях и на людях идентифицирована ключевая роль IL-17 и Th17-клеток в патогенезе воспаления и аутоиммунной реакции, а также в иммунной защите организма от некоторых патогенов. С учетом этих фактов считается, что IL-17 и Th17-клетки представляют собой примечательные мишени для лечения некоторых хронических воспалительных заболеваний, таких как псориаз, ревматоидный артрит (RA), анкилозирующий спондилит (AS), системная красная волчанка (SLE) и рассеянный склероз (MS) (Miossec and Kolls, 2012, Nat. Rev. Drug Discov., 11: 763-7).

Имеющий в своей структуре дисульфидные связи гомодимерный цитокин IL-17A является представителем семейства IL-17, которое также включает в себя IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E и IL-17F. Внутри данного семейства IL-17A и IL-17F демонстрируют самую высокую степень гомологии аминокислотных последовательностей друг с другом (50%), и они связываются с одними и теми же рецепторами: рецептором A IL-17 (IL-17RA) и рецептором С IL-17 (IL-17RC). Кроме того, IL-17A может экспрессироваться вместе с IL-17F в виде гетеродимера. Несмотря на то, что IL-17A и IL-17F имеют высокую гомологию аминокислотных последовательностей, они выполняют разные функции. IL-17A вовлечен в развитие аутоиммунной реакции, воспаления и опухолей и также играет важную роль в иммунной защите организма от бактериальных и грибковых инфекций. IL-17F, с другой стороны, вовлечен главным образом в механизмы мукозального иммунитета (Iwakura et al., 2011, Immunity, 34: 149-62).

Когда IL-17A секретируется, он стимулирует продуцирование ряда провоспалительных цитокинов, хемокинов, антимикробных пептидов и металлопротеиназ (ММР) фибробластными, эндотелиальными и эпителиальными клетками. Одно из важных действий IL-17A заключается в индуцировании гранулопоэза и рекрутмента нейтрофилов в очагах воспаления. Однако в случае неконтролируемости процесса эта реакция может привести к хроническому воспалению с разрушением и неоваскуляризацией тканей (Iwakura et al. 2008, Immunol. Rev., 226: 57-79; Reynolds et al., 2010, Cytokine Growth Factor Rev., 21: 413-23). IL-17A играет центральную роль в патогенезе псориаза, широко распространенного хронического воспалительного кожного заболевания, поражающего примерно 2,5% всей мировой популяции (обзор приведен в Chiricozzi and Krueger, 2013, Expert Opin. Investig. Drug, 22(8): 993-1005). Исследования на пациентах с RA показали, что в воспаленной синовиальной оболочке присутствуют IL-17А-положительные клетки. В мышиной модели RA клинические показатели сильно усугублялись в результате введения IL-17A посредством внутрисуставного переноса гена (Lubberts et al., 2002, Inflamm. Res., 51: 102-4). В противоположность этому, ингибирование IL-17A моноклональными антителами к лиганду или рецептору защищало от развития и последствий артрита (Lubberts et al., 2004, Arthritis Rheum., 50: 650-9). Имеются сообщения, что у пациентов с MS ген IL-17A сверхэкспрессирован (Lock et al., 2002, Nat. Med., 8: 500-8), и IL-17A и Th17-клетки явно задействованы в мышиной модели экспериментального аутоиммунного энцефалита (Cua et al. 2003, Nature, 421: 744-8; Uyttenhove and Van Snick, 2006, Eur. J. Immunol., 36: 2868-74). Показано, что повышенные уровни IL-17A клинически коррелируют с различными глазными воспалительными заболеваниями, такими как увеит, склерит и синдром сухого глаза (DED), у пациентов, страдающих от артрита (Kang et al., 2011, J. Korean Med. Sci., 26: 938-44). Недавние исследования продемонстрировали наличие клеток, положительных в отношении IL-17 и интерферона-γ (IFNγ), в клинических образцах коронарного атеросклероза, что предполагает оказание местного эффекта на сосудистую дисфункцию (Eid et al., 2009, J. Cardiothorac. Surg., 4: 58). IL-17A также может представлять интерес при хронической обструктивной болезни легких (COPD). Число IL-17А-положительных клеток в тканях печени пациентов с COPD является повышенным (Chu et al., 2011, Int. Immunopharmacol., 11: 1780-8; Di Stefano et al., 2009, Clin. Exp. Immunol., 157: 316-24). Дефицитные по IL-17RA мыши устойчивы к развитию эмфиземы в мышиной модели COPD, в то время как сверхэкспрессия IL-17A ускоряет развитие эмфиземы, и это позволяет предположить, что присутствия IL-17A достаточно для опосредования этого ответа (Chen et al., 2011, PLoS One 6: e20333; Shan et al., 2012, Sci. Transl. Med., 4: 117ra9). Таким образом, вовлечение IL-17A в некоторые различные аутоиммунные и воспалительные заболевания предполагает широкую применимость терапевтических средств, направленно воздействующих на IL-17A.

Направленное воздействие на IL-17A или его рецепторы представляет собой самый прямой путь блокирования IL-17А-опосредуемых функций. В настоящее время на стадии клинической разработки находятся несколько биологических препаратов, которые нейтрализуют IL-17А-опосредованную передачу сигнала, в том числе моноклональные антитела к IL-17A секукинумаб и иксекизумаб (Patel et al., 2013, Ann. Rheum. Dis., 72 Suppl. 2: ii116-23). Получено разрешение к применению секукинумаба для лечения псориаза, и в настоящее время проходят исследования в отношении его применимости для лечения псориатического артрита (PsA) и AS. В настоящее время проходят клинические испытания иксекизумаба в отношении псориаза, PsA и RA. Также в клинике проходит исследование блокирования передачи сигнала, опосредуемой рецептором IL-17, с использованием человеческого моноклонального антитела к IL-17RA бродалумаба для лечения псориаза, RA и астмы (Hu et al., 2011, Ann. NY Acad. Sci., 1217: 60-76). Таким образом, доказана клиническая эффективность ингибирования IL-17A при различных заболеваниях, особенно при псориазе, и профиль безопасность, в том числе данные фазы II и фазы III испытаний, показывают хорошую переносимость ингибиторов IL-17A (Genovese et al., 2010, Arthritis Rheum., 62: 929-39 и Hueber et al., 2010, Sci. Transl. Med., 2: 52ra72).

Непредсказуемая и хроническая природа псориаза и других воспалительных заболеваний, а также большая неудовлетворенная медицинская потребность обуславливают разработку новых способов лечения.

Поскольку скорость проникновения через ткани обратно пропорциональна размеру молекулы, то относительно большая молекула антитела по своей природе обладает плохим распределением в тканях и плохой проникающей способностью. Более того, несмотря на то, что антитела широко используются в ряде обычных ситуаций брагодаря высокой аффинности и специфичности ко множеству возможных антигенов, например, для аналитических целей, для очистки, для диагностических и терапевтических целей, у них по-прежнему имеется ряд недостатков. Такие недостатки включают потребность в сложных системах экспрессии млекопитающих, тенденцию к агрегации, ограниченную растворимость, необходимость образования и стабильного поддержания дисульфидных связей и риск нежелательных иммунных реакций.

Таким образом, применение моноклональных антител не всегда является оптимальным решением для терапии, и продолжает сохраняться потребность в предоставлении агентов с высокой аффинностью к IL-17A. Большой интерес также представляет собой разработка способов применения таких молекул для лечения, диагностики и прогнозирования заболевания.

Краткое изложение сущности изобретения

Цель настоящего изобретения заключается в разработке новых IL-17A-связывающих агентов, которые можно было бы использовать, например, для диагностических, прогностических и терапевтических применений.

Цель настоящего изобретения заключается в разработке новых IL-17A-связывающих агентов, которые можно использовать в качестве доменов в слитых белках, содержащих один или несколько дополнительных доменов, выполняющих аналогичные или другие функции.

Цель настоящего изобретения заключается в разработке молекулы с возможностью осуществления эффективной терапии, направленной на различные формы воспалительного и аутоиммунного заболевания при одновременном уменьшении вышеупомянутых и других недостатков существующих в настоящее время способов лечения.

Еще одна цель настоящего изобретения заключается в разработке молекулы, подходящей для прогностических и диагностических применений.

Эти и другие цели, которые очевидны специалисту из описания настоящего изобретения, достигаются посредством различных аспектов изобретения, которые заявлены в прилагаемой формуле изобретения и которые в целом изложены в данном описании.

Таким образом, согласно первому аспекту изобретения предложен IL-17А-связывающий полипептид, содержащий IL-17А-связывающий мотив ВМ, где указанный мотив состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из:

1) EX₂DX₄AX₆X₇EIX₁₀X₁₁LPNL X₁₆X₁₇X₁₈QX₂₀X₂₁AFIX₂₅X₂₆LX₂₈X₂₉,

где независимо друг от друга

Х₂ выбран из А, Н, М и Y;

Х₄ выбран из A, D, Е, F, K, L, М, N, Q, R, S и Y;

Х₆ выбран из A, Q и W;

Х₇ выбран из F, I, L, М, V, W и Y;

Х₁₀ выбран из А и W;

Х₁₁ выбран из A, D, Е, F, G, L, М, N, Q, S, Т и Y;

X₁₆ выбран из N и Т;

X₁₇ выбран из Н, W и Y;

X₁₈ выбран из A, D, Е, Н и V;

Х₂₀ выбран из A, G, Q, S и W;

Х₂₁ выбран из A, D, Е, F, Н, K, N, R, Т, V, W и Y;

Х₂₅ выбран из A, D, Е, G, Н, I, L, М, N, Q, R, S, Т и V;

Х₂₆ выбран из K и S;

Х₂₈ выбран из I, L, N и R; и

Х₂₉ выбран из D и R;

и

2) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (1).

Приведенное выше определение класса IL-17А-связывающих полипептидов со схожими последовательностями (sequence-related) основано на статистическом анализе ряда случайных полипептидных вариантов родительской каркасной структуры, которые были выбраны с учетом их взаимодействия с IL-17A в нескольких разных связанных с отбором экспериментах. Идентифицированный IL-17А-связывающий мотив или «ВМ» соответствует участку связывания с мишенью в родительской каркасной структуре, причем этот участок представляет собой две альфа-спирали в пределах белкового домена в виде трехспирального пучка. В родительской каркасной структуре разнообразные аминокислотные остатки двух спиралей ВМ составляют связывающую поверхность для взаимодействия с константой Fc-частью антител. В настоящем изобретении посредством случайной вариации остатков на связывающей поверхности и последующего отбора вариантов способность взаимодействия с Fc-частью была изменена на способность к взаимодействию с IL-17A.

Как будет понятно специалисту, функция любого полипептида, например, способность полипептида по настоящему изобретению связываться с IL-17A, зависит от третичной структуры данного полипептида. Следовательно, существует возможность внесения незначительных изменений в последовательность аминокислот в полипептиде, не затрагивая его функции. Таким образом, данное изобретение охватывает модифицированные варианты IL-17А-связывающего полипептида, которые являются вариантами с сохраненными характеристиками в отношении связывания с IL-17A.

Вследствие этого, настоящее изобретение также охватывает IL-17A-связывающий полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую 89% или более высокий процент идентичности с полипептидом, определенным в (1). В некоторых воплощениях полипептид может содержать последовательность, по меньшей мере на 93%, например, по меньшей мере на 96% идентичную полипептиду, определенному в (1). Например, существует возможность того, чтобы аминокислотный остаток, принадлежащий определенной функциональной группировке аминокислотных остатков (например, гидрофобных, гидрофильных, полярных и т.д.), мог быть заменен на другой аминокислотный остаток из той же функциональной группы.

В некоторых воплощениях такие изменения могут быть выполнены в любом положении последовательности IL-17А-связывающего полипептида, как раскрыто здесь. В других воплощениях такие изменения могут быть выполнены только в невариабельных положениях, также обозначаемых как аминокислотные остатки каркасной структуры. В таких случаях не допустимы изменения в вариабельных положениях, т.е. положениях, обозначенных как «X» в последовательности (1).

Термин «% идентичности», использованный по всему описанию, можно определить, например так, как приведено ниже. Искомую последовательность выравнивают относительно последовательности-мишени, используя алгоритм CLUSTAL W (Thompson et al., Nucleic Acids Research, 22: 4673-4680 (1994)). Сравнение выполняют в окне, соответствующем самой короткой из выравненных последовательностей. Самая короткая из выравненных последовательностей в некоторых случаях может представлять собой последовательность-мишень. В других случаях искомая последовательность может составлять самую короткую из выравненных последовательностей. Сравнивают аминокислотные остатки в каждом положении и процентную долю положений в искомой последовательности, которые имеют идентичные совпадения в последовательности-мишени, обозначают как % идентичности.

В одном из конкретных воплощений по первому аспекту предложен полипептид, определенный выше, где в последовательности (1)

Х₂ выбран из А, Н и М;

Х₄ выбран из A, D, Е, F, L, М, N, Q, R и Y;

Х₁₁ выбран из A, D, Е, F, G, L, М, N, S, Т и Y;

X₁₈ выбран из A, D, Е и V;

Х₂₀ выбран из A, G, Q и W;

Х₂₁ выбран из Е, F, Н, N, R, Т, V, W и Y;

Х₂₅ выбран из A, D, Е, G, Н, I, L, N, Q, R, S, Т и V; и

Х₂₈ выбран из I, N и R.

В другом конкретном воплощении по первому аспекту предложен полипептид, определенный в идущем непосредственно выше абзаце, при этом, помимо всего прочего, в последовательности (1)

X₁₆ представляет собой Т;

Х₁₇ представляет собой W;

Х₂₁ выбран из Е, F, Н, W, Т и Y;

Х₂₅ выбран из A, D, Е, G, Н, I, L, N, Q, R, S и Т;

Х₂₆ представляет собой K; и

Х₂₉ представляет собой D.

«X_n» и «X_m» используются в данном описании для обозначения аминокислот в положениях n и m в последовательности (1), определенной выше, при этом n и m представляют собой целые числа, означающие положение аминокислоты в последовательности (1), которое отсчитывается с N-конца. Например, Х₃ и Х₇ означают аминокислоты в положениях «три» и «семь», соответственно, начиная от N-конца последовательности (1).

В воплощениях по первому аспекту предложены полипептиды, где X_n в последовательности (1) независимо выбран из группы возможных остатков, которые перечислены в Таблице 1. Специалисту будет очевидно, что X_n может быть выбран из любого остатка из перечисленных групп возможных остатков, и что это выбор не зависит от выбора аминокислот в X_m, при этом n не равно m. Таким образом, любой из перечисленных возможных остатков в положении X_n в Таблице 1 можно независимо комбинировать с любым из перечисленных возможных остатков в любом другом вариабельном положении в Таблице 1.

Специалисту будет очевидно, что Таблицу 1 следует интерпретировать так, как приведено ниже. В одном из воплощений по первому аспекту предложен полипептид, где аминокислотный остаток «X_n» в последовательности (1) выбран из «возможных остатков». Таким образом, в Таблице 1 описаны несколько специальных и индивидуально подобранных воплощений первого аспекта настоящего изобретения. Например, в одном из воплощений по первому аспекту предложен полипептид, где остаток Х₄ в последовательности (1) выбран из A, D, Е, F, L, N, Q, R и Y, а в другом воплощении по первому аспекту, предложен полипептид, где Х₄ в последовательности (1) выбран из D, Е, N и Y. Во избежании сомнений отметим, что перечисленные воплощения можно свободно комбинировать в следующих воплощениях. Например, одним из таких комбинированных воплощений является полипептид, в котором Х₄ выбран из D, Е, F, N, Q, R и Y, в то время как Х₇ выбран из F, V и W, а Х₁₈ выбран из A, D, Е и Н, и так далее.

В более конкретном воплощении, определяющем подкласс IL-17A-связывающих полипептидов, последовательность (1) удовлетворяет по меньшей мере шести из одиннадцати условий I-XI:

I. Х₂ представляет собой А;

II. Х₄ выбран из D, Е и Q;

III. Х₆ представляет собой А;

IV. Х₇ выбран из F и V;

V. X₁₆ представляет собой Т;

VI. X₁₇ представляет собой W;

VII. X₁₈ выбран из А и D;

VIII. Х₂₀ представляет собой W;

IX. Х₂₆ представляет собой K;

X. Х₂₈ представляет собой R; и

XI. Х₂₉ представляет собой D.

В некоторых примерах IL-17А-связывающего полипептида по первому аспекту последовательность (1) удовлетворяет по меньшей мере семи из одиннадцати условий I-XI. Более конкретно, последовательность (1) может удовлетворять по меньшей мере восьми из одиннадцати условий I-XI, например, по меньшей мере девяти из одиннадцати условий I-XI, например, по меньшей мере десяти из одиннадцати условий I-XI, например, всем одиннадцати условиям I-XI.

В некоторых воплощениях IL-17А-связывающего полипептида по первому аспекту Х₂Х₆, Х₂Х₁₀ или Х₆Х₁₀ представляет собой АА. В некоторых воплощениях X₂X₁₇, Х₂Х₂₀, Х₆Х₁₇, Х₆Х₂₀, Х₁₀Х₁₇ или Х₁₀Х₂₀ представляет собой AW. В некоторых воплощениях Х₂Х₂₈, Х₆Х₂₈ или Х₁₀Х₂₈ представляет собой AR. В некоторых воплощениях X₁₇X₂₈ или Х₂₀Х₂₈ представляет собой WR. В некоторых воплощениях X₁₇X₂₀ представляет собой WW.

Как описано подробно в следующем ниже экспериментальном разделе, выбор вариантов IL-17А-связывающего полипептида привел к идентификации ряда последовательностей индивидуальных IL-17А-связывающих мотивов (ВМ). Эти последовательности составляют отдельные воплощения последовательности (1) по этому аспекту. Последовательности индивидуальных IL-17А-связывающих мотивов соответствуют аминокислотным положениям 8-36 в SEQ ID NO: 1-1216, представленным на Фиг. 1. Таким образом, в одном из воплощений IL-17А-связывающего полипептида по этому аспекту последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-1216. В одном из воплощений последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66, 1200, 1206 и 1214. В одном из воплощений последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66. В одном из воплощений последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-35. В одном из воплощений последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-27. В одном из воплощений последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10. В одном из воплощений последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-7. В одном из воплощений последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4. В одном из воплощений последовательность (1) соответствует последовательности от положения 8 до положения 36 в SEQ ID NO: 1.

В некоторых воплощениях настоящего изобретения ВМ, который определен выше, «образует часть» белкового домена, представляющего собой трехспиральный пучок. Под этим понимается, что последовательность ВМ «встроена» или «привита» в последовательность первоначального домена, представляющего собой трехспиральный пучок, таким образом, что ВМ заменяет похожий структурный мотив в первоначальном домене. Например, без связи с теорией полагают, что ВМ составляет две из трех спиралей трехспирального пучка и поэтому может заменять такой двухспиральный мотив в пределах любого трехспирального пучка. Каск будет понятно специалисту, замена двух спиралей домена в виде трехспирального пучка на две спирали ВМ должна быть выполнена так, чтобы основная структура полипептида оказалась незатронутой. То есть, сворачивание в целом Сα-остова полипептида по этому воплощению изобретения по существу является таким же, что и у белкового домена, представляющего собой трехспиральный пучок, часть которого он (мотив) образует, например, имея те же элементы вторичной структуры в том же порядке и т.д. Таким образом, ВМ по изобретению «образует часть» домена, представляющего собой трехспиральный пучок, если полипептид по этому воплощению аспекта имеет такую же укладку, что и первоначальный домен, что подразумевает наличие у них общих основных структурных свойств, и эти свойства, например, выражаются в аналогичных спектрах кругового дихроизма (CD). Специалист осведомлен и о других параметрах, являющихся релевантными.

Таким образом, в конкретных воплощениях IL-17А-связывающий мотив (ВМ) образует часть белкового домена, представляющего собой трехспиральный пучок. Например, ВМ по существу может составлять две альфа-спирали с соединяющей петлей в пределах указанного белкового домена в виде трехспирального пучка. В конкретных воплощениях указанный белковый домен в виде трехспирального пучка выбран из доменов рецепторных белков бактерий. Неограничивающими примерами таких доменов являются пять разных трехспиральных доменов белка А из Staphylococcus aureus, таких как домен В и его производные. В некоторых воплощениях белковый домен в виде трехспирального пучка представляет собой вариант белка Z, который происходит из домена В стафилококкового белка А.

В некоторых воплощениях, где IL-17А-связывающий полипептид, описанный в данной заявке, образует часть белкового домена, представляющего собой трехспиральный пучок, IL-17А-связывающий полипептид может содержать связывающий модуль (BMod) с аминокислотной последовательностью, выбранной из:

3) K-[BM]-DPSQS X_aX_bLLX_c EAKKL X_dX_eX_fQ;

где

[ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, как определено в данном описании, при условии, что Х₂₉ представляет собой D;

Х_а выбран из А и S;

X_b выбран из N и Е;

Х_с выбран из A, S и С;

X_d выбран из Е, N и S;

Х_е выбран из D, Е и S;

X_f выбран из А и S; и

4) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 85% идентичность последовательности, определенной в (3).

В некоторых воплощениях может быть целесообразно, чтобы указанные полипептиды демонстрировали высокую структурную стабильность, например, устойчивость к химическим модификациям, изменениям физических условий и протеолизу, в процессе получения или хранения, а также in vivo. Таким образом, в других воплощениях, где IL-17А-связывающий полипептид, описанный в данной заявке, образует часть белкового домена, представляющего собой трехспиральный пучок, IL-17А-связывающий полипептид может содержать связывающий модуль (BMod) с аминокислотной последовательностью, выбранной из:

5) K-[BM]-QPEQS X_aX_bLLX_c EAKKL X_dX_eX_fQ,

где

[ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, который определен в данном описании, при условии, что Х₂₉ представляет собой R;

Х_а выбран из А и S;

X_b выбран из N и Е;

Х_с выбран из A, S и С;

X_d выбран из Е, N и S;

Х_е выбран из D, Е и S;

X_f выбран из А и S; и

6) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 85% идентичность последовательности, определенной в (5).

Как обсуждалось выше, полипептиды, содержащие незначительные изменения по сравнению с приведенными выше аминокислотными последовательностями, которые практически не влияют на третичную структуру или функцию полипептида, также включены в объем настоящего изобретения. Таким образом, в некоторых воплощениях последовательности (4) и (6) имеют по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 97% идентичность последовательности, определенной в (3) или (5), соответственно.

В одном из воплощений Х_а в последовательности (3) или (5) представляет собой А.

В одном из воплощений Х_а в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

В одном из воплощений X_b в последовательности (3) или (5) представляет собой N.

В одном из воплощений X_b в последовательности (3) или (5) представляет собой Е.

В одном из воплощений X_c в последовательности (3) или (5) представляет собой А.

В одном из воплощений X_c в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

В одном из воплощений X_c в последовательности (3) или (5) представляет собой С.

В одном из воплощений X_d в последовательности (3) или (5) представляет собой Е.

В одном из воплощений X_d в последовательности (3) или (5) представляет собой N.

В одном из воплощений X_d в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

В одном из воплощений Х_е в последовательности (3) или (5) представляет собой D.

В одном из воплощений Х_е в последовательности (3) или (5) представляет собой Е.

В одном из воплощений Х_е в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

В одном из воплощений X_dX_e в последовательности (3) или (5) выбран из ЕЕ, ES, SD, SE и SS.

В одном из воплощений X_dX_e в последовательности (3) или (5) представляет собой ES.

В одном из воплощений X_dX_e в последовательности (3) или (5) представляет собой SE.

В одном из воплощений X_dX_e в последовательности (3) или (5) представляет собой SD.

В одном из воплощений X_f в последовательности (3) или (5) представляет собой А.

В одном из воплощений X_f в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой А; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой А; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой А; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой ND4 и X_f пре X_dX_e представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой А; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой А.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой S.

В одном из воплощений, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой S.

В еще одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-1216. В одном из воплощений последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66, 1200, 1206 и 1214. В одном из воплощений последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66. В одном из воплощений последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-35. В другом воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-27. В одном из воплощений последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10. В еще одном воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-7. В одном из воплощений последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4, а в другом воплощении последовательность (3) соответствует последовательности от положения 7 до положения 55 в SEQ ID NO: 1.

Кроме того, в следующем воплощении предложен IL-17А-связывающий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

7) YA-[BMod]-АР;

где [BMod] представляет собой IL-17А-связывающий модуль, который определен выше; и

8) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (7).

В альтернативном следующем воплощении предложен IL-17A-связывающий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

9) FA-[BMod]-AP;

где [BMod] представляет собой IL-17А-связывающий модуль, который определен выше; и

10) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (9).

Альтернативно, предложен IL-17А-связывающий полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

11) FN-[BMod]-AP;

где [BMod] представляет собой IL-17А-связывающий модуль, который определен выше; и

12) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (11).

Как обсуждалось выше, полипептиды, содержащие незначительные изменения по сравнению с приведенными выше аминокислотными последовательностями, практически без влияния на их третичную структуру и функцию, также попадают в объем настоящего изобретения. Таким образом, в некоторых воплощениях IL-17А-связывающие полипептиды, определенные выше, могут иметь, например, последовательность, которая по меньшей мере на 88%, например, по меньшей мере на 90%, например, по меньшей мере на 92%, например, по меньшей мере на 94%, например, по меньшей мере на 96%, например, по меньшей мере на 98% идентична последовательности, определенной в (7), (9) или (11).

В некоторых воплощениях IL-17А-связывающий мотив может образовывать часть полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, выбранную из

SEQ ID NO:

где [ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, который определен выше.

В одном из воплощений IL-17А-связывающий полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

13)

где [ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, который определен выше; и

14) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (13).

И вновь, полипептиды, содержащие незначительные изменения по сравнению с приведенными выше аминокислотными последовательностями, практически без влияния на их третичную структуру и функцию, также включены в объем настоящего изобретения. Таким образом, в некоторых воплощениях IL-17А-связывающие полипептиды, определенные выше, могут иметь, например, последовательность, которая по меньшей мере на 87%, например, по меньшей мере на 89%, например, по меньшей мере на 91%, например, по меньшей мере на 93%, например, по меньшей мере на 94%, например, по меньшей мере на 96%, например, по меньшей мере на 98% идентична последовательности, определенной в (13).

Последовательность (13) в таком полипептиде может быть выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-1216. В одном из воплощений последовательность (13) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66, 1200, 1206 и 1214. В одном из воплощений последовательность (13) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66. В одном из воплощений последовательность (13) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-35. В другом воплощении последовательность (13) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-27. В одном из воплощений последовательность (13) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10. В одном из воплощений последовательность (13) выбрана из SEQ ID NO: 1-7. В одном из воплощений последовательность (13) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4. В одном из воплощений последовательность (13) представляет собой SEQ ID NO: 1.

В одном из воплощений IL-17А-связывающий полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

15)

где [ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, который определен выше; и

16) аминокислотной последовательности, которая имеет по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (xv).

И вновь, полипептиды, содержащие незначительные изменения по сравнению с приведенными выше аминокислотными последовательностями, практически без влияния на их третичную структуру и функцию, также включены в объем настоящего изобретения. Таким образом, в некоторых воплощениях IL-17А-связывающие полипептиды, определенные выше, могут иметь, например, последовательность, которая по меньшей мере на 87%, например, по меньшей мере на 89%, например, по меньшей мере на 91%, например, по меньшей мере на 93%, например, по меньшей мере на 94%, например, по меньшей мере на 96%, например, по меньшей мере на 98% идентична последовательности, определенной в (15).

Последовательность (15) в таком полипептиде может быть выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1217-1222. В одном из воплощений последовательность (15) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1218-1222. В одном из воплощений последовательность (xv) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1219-1222. В другом воплощении последовательность (15) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1219 и SEQ ID NO: 1222. В одном из воплощений последовательность (15) представляет собой SEQ ID NO: 1219.

Небольшой размер и устойчивость IL-17А-связывающих доменов по настоящему изобретению обеспечивают некоторые преимущества по сравнению с традиционными терапиями на основе моноклональных антител. Такие преимущества включают возможность осуществления подкожного (п.к.) введения в более высоких дозах по сравнению с антителами, альтернативные пути введения, гибкость в придании форм с целью достижения наилучшей эффективности и отсутствие Fc-опосредуемых побочных эффектов. Небольшой размер в сочетании с возможностью получения очень высокой растворимости (более 100 мг/мл) и стабильности способствует достижению очень высоких молярных количеств лекарственного средства в небольшом объеме для п.к. инъекций. В случае системного введения это означает амбулаторное лечение «на дому» с использованием удобных небольших по размеру предварительно заполненных шприцев или устройств для автоматического ввода проб с небольшим объемом и хорошо переносимое введение доз. Помимо этого, возможность иметь высокие молярные концентрации в лекарственных препаратах в сочетании со способностью сохранять функциональную стабильность в разнообразных композициях делает доступным способы местного (на кожу, в глаз, в легкое) введения. Псориаз, астма, увеит и синдром сухого глаза являются примерами показаний, при которых альтернативные пути введения могут быть особенно релевантными для IL-17А-опосредуемого заболевания.

Термины «связывание с IL-17А» и «аффинность связывания с IL-17А», использованные в этом описании, относятся к свойству полипептида, который может быть протестирован, например, посредством иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA), путем применения технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR) или путем применения анализа кинетического исключения (KinExA^®). Например, как описано ниже в примерах, аффинность связывания с IL-17A можно протестировать в эксперименте, в котором образцы полипептида захватывают на покрытых антителами ELISA-планшетах и добавляют биотинилированный IL-17A, затем конъюгированную со стрептавидином пероксидазу хрена (HRP). Добавляют субстрат тетраметилбензидин (ТМВ) и измеряют поглощение при 450 нм, используя многолуночный планшетный ридер, такой как Victor³ (Perkin Elmer). Затем специалист может интерпретировать результаты, полученные в таких экспериментах, для установления по меньшей мере качественной меры аффинности связывания полипептида с IL-17A. Если желательна количественная мера, например, чтобы определить значение ЕС₅₀ (полумаксимальная эффективная концентрация) для взаимодействия, то также можно применять ELISA. Ответ полипептидов на серию разведений биотинилированного IL-17A измеряют, используя ELISA, как описано выше. Затем специалист может интерпретировать результаты, полученные в таких экспериментах, и на основании этих результатов можно рассчитать значения ЕС₅₀, используя, например, GraphPad Prism 5 и метод нелинейной регрессии.

Аффинность связывания с IL-17A также можно протестировать в эксперименте, в котором IL-17A или его фрагмент иммобилизуют на сенсорном чипе прибора для проведения поверхностного плазмонного резонанса (SPR) и образец, в котором содержится полипептид, подлежащий тестированию, пропускают над поверхностью этого чипа. Альтернативно, на сенсорный чип этого прибора иммобилизуют подлежащий тестированию полипептид, и над поверхностью этого чипа пропускают образец, содержащий IL-17A или его фрагмент. Затем специалист может интерпретировать результаты, полученные в таких экспериментах, для установления по меньшей мере качественной меры аффинности связывания полипептида с IL-17A. Если желательна количественная мера, например, чтобы определить значение К_D для взаимодействия, то также можно применять методы поверхностного плазмонного резонанса. Характеризующие связывание величины можно определить, например, на приборе Biacore (GE Healthcare) или ProteOn XPR 36 (Bio-Rad). IL-17A подходящим образом иммобилизуют на сенсорном чипе данного прибора, и образцы полипептида, аффинность которого подлежит определению, готовят путем серийного разведения и вводят в произвольном порядке. Затем на основании этих результатов можно рассчитать значения K_D, используя, например, модель связывания 1:1 по Ленгмюру из программного обеспечения BIAevaluation 4.1 или другого подходящего программного обеспечения, предоставляемого производителем прибора.

Другим методом определения аффинности связывания в отношении IL-17А является анализ кинетического исключения (KinExA^®; Sapidyne Instruments Inc, Boise, USA; Darling and Brault, 2004. Assay and Drug Dev. Tech., 2(6): 647-657) для измерений аффинности равновесного связывания и кинетических параметров взаимодействия немодифицированных молекул в растворе. В случае анализа аффинности равновесную константу диссоциации, K_D, и константу скорости ассоциации, k_a, определяют экспериментально, в то время как константа скорости диссоциации, k_d, может быть рассчитана на основании уравнения k_d=K_D*k_a.

Для определения K_D с использованием анализа KinExA^® необходима иммобилизация одного из взаимодействующих партнеров (например, титруемого связывающего партнера) с твердой фазой, который затем используют в качестве зонда для захвата другого взаимодействующего партнера (например, связывающего партнера «в неизменной концентрации»), находящегося в свободном состоянии в растворе, как только достигается равновесие. В каждом эксперименте в состояние равновесия приводят серию растворов с постоянной концентрацией одного связывающего партнера и титра другого связывающего партнера. Затем растворы непродолжительное время инкубируют с твердой фазой, и часть свободного связывающего партнера «в неизменной концентрации» захватывают и метят флуоресцентной вторичной молекулой. Небольшая продолжительность контакта с твердой фазой меньше времени, необходимого для диссоциации образованного ранее комплекса в растворе, и это означает, что конкуренция между титруемым связывающим партнером в растворе и твердой фазе «кинетически исключается». Поскольку твердую фазу используют только для создания зонда для свободного связывающего партнера «в неизменной концентрации» в каждом образце, то равновесие в растворе не изменяется в процессе измерений. Значение K_D рассчитывают на основании сигналов, генерируемых от захваченного свободного связывающего партнера «в неизменной концентрации», которые прямо пропорциональны концентрации свободного связывающего партнера «в неизменной концентрации» в уравновешенном образце. Анализ данных может быть выполнен с использованием программного обеспечения KinExA^® Pro и анализа методом наименьших квадратов с целью подгонки оптимальных решений для K_D и концентрации активных сайтов связывания (ABC) к кривой репрезентативной стехиометрически релевантной модели, например, обратимому бимолекулярному взаимодействию по типу 1:1.

Определение параметров кинетики связывания может быть выполнено в том же формате, что и равновесный анализ, с тем исключением, что измерения осуществляют в состоянии «предравновесия», а сигналы связывания представляют собой функцию от времени и общей концентрации титруемого связывающего партнера. Существуют два метода, которые можно использовать для определения k_a. В случае «прямого метода (direct method)» концентрации титруемого связывающего партнера и связывающего партнера «в неизменной концентрации» сохраняют фиксированными, и раствор исследуют в течение некоторого периода времени. Количество свободного связывающего партнера «в неизменной концентрации» в растворе будет уменьшаться по мере приближения образца к состоянию равновесия. В случае «метода с добавлением (inject method)» фиксированными сохраняют продолжительность инкубации и концентрацию одного из партнеров, титруя при этом концентрации другого партнера. По мере увеличения концентрации титруемого связывающего партнера количество свободного связывающего партнера «в неизменной концентрации» будет уменьшаться по мере образования все большего количества комплексов.

В одном из воплощений IL-17А-связывающий полипептид способен связываться с IL-17A так, что значение K_D для данного взаимодействия составляет не более 1×10^-6 М, как например, не более 1×10^-7 М, как например, не более 1×10^-8 М, как например, не более 1×10^-9 М.

В одном из воплощений IL-17А-связывающий полипептид по любому аспекту, описанному в данной заявке, способен связываться с молекулой IL-17А, выбранной из группы, состоящей из человеческого IL-17A и мышиного IL-17А. В одном из воплощений IL-17А-связывающий полипептид обладает способностью связываться с человеческим IL-17A. В одном из воплощений IL-17А-связывающий полипептид обладает способностью связываться с мышиным IL-17A. В одном из воплощений IL-17А-связывающий полипептид обладает способностью связываться с человеческим IL-17A и с мышиным IL-17А. При этом человеческий IL-17A может содержать аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1226 или его антигенно эффективный фрагмент.Аналогичным образом, мышиный IL-17A может содержать аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1227 или его антигенно эффективный фрагмент.

Специалисту будет понятно, что могут быть выполнены различные модификации и/или дополнения IL-17А-связывающего полипептида по любому аспекту, изложенному в данном описании, с тем, чтобы адаптировать данный полипептид к конкретному применению без отклонения от объема настоящего изобретения.

Например, в одном из воплощений предложен IL-17А-связывающий полипептид, описанный в данной заявке, при этом данный полипептид удлинен дополнительными аминокислотами и/или содержит такие кислоты на С-конце и/или N-конце. Такой полипептид следует интерпретировать как полипептид, имеющий один или более чем один дополнительный аминокислотный остаток в самом первом и/или самом последнем положении в полипептидной цепи, т.е. на N- и/или С-конце последовательности (1) или (2). Таким образом, IL-17A-связывающий полипептид может содержать любое подходящее количество дополнительных аминокислотных остатков, например, по меньшей мере один дополнительный аминокислотный остаток. Каждый дополнительный аминокислотный остаток может быть добавлен по отдельности или совместно для того, чтобы, например, улучшить и/или упростить процесс получения, очистки, стабилизации in vivo или in vitro, связывания или детекции полипептида. Такие дополнительные аминокислотные остатки могут содержать один или более аминокислотных остатков, добавленных для осуществления химического связывания. Одним из примеров этого является присоединение остатка цистеина. Кроме того, в дополнительных аминокислотных остатках может быть предусмотрена «метка» для очистки или детекции полипептида, такая как метка His₆, метка (HisGlu)₃ (метка «НЕНЕНЕ») или метка «myc» (с-myc), либо метка «FLAG» для взаимодействия с антителами, обладающими специфичностью к данной метке, или His₆-метка для очистки посредством аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом (IMAC).

Другие аминокислоты, как обсуждалось выше, могут быть соединены с IL-17А-связывающим полипептидом посредством химического конъюгирования (с использованием известных методов органической химии) или любым другим способом, таким как экспрессия IL-17А-связывающего полипептида в виде слитого белка, или присоединены любым другим образом, либо непосредственно, либо через линкер, например, аминокислотный линкер.

Другие аминокислоты, как обсуждалось выше, могут составлять, например, один домен или несколько полипептидных доменов. Другой полипептидный домен может предоставлять IL-17А-связывающий полипептид с другой функцией, такой как, например, еще одна ассоциированная со связыванием функция, ферментативное действие, токсическое действие, функция передачи флуоресцентного сигнала или их комбинации.

Кроме того, другой полипептидный домен может обеспечивать другую IL-17А-связывающую группировку с такой же IL-17А-связывающей функцией. Таким образом, в следующем воплощении предложен IL-17А-связывающий полипептид в мультимерной форме. Понятно, что указанный мультимер содержит по меньшей мере два IL-17А-связывающих полипептида, описанных в данной заявке, в качестве мономерных единиц, аминокислотные последовательности которых могут быть одинаковыми или разными. Мультимерные формы этих полипептидов могут содержать подходящее количество доменов, каждый из которых имеет IL-17А-связывающий мотив и каждый из которых образует мономер в пределах данного мультимера. Эти домены могут иметь одинаковую аминокислотную последовательность, но альтернативно, они могут иметь разные аминокислотные последовательности. Другими словами, IL-17А-связывающий полипептид по изобретению может образовывать гомо- или гетеромультимеры, например, гомо- или гетеродимеры. В одном из воплощений предложен IL-17А-связывающий полипептид, при этом указанные мономерные единицы связаны друг с другом ковалентно. В другом воплощении указанные мономерные единицы IL-17A-связывающего полипептида экспрессируются в виде слитого белка. В одном из воплощений предложен IL-17А-связывающий полипептид в димерной форме.

Кроме того, «гетерогенные» слитые полипептиды или белки либо конъюгаты, в которых IL-17А-связывающий полипептид, описанный в данной заявке, или его мультимер, составляет первый домен или первую группировку, а вторая и последующие группировки имеют функции, отличающиеся от связывания с IL-17A, также охвачены и попадают в объем настоящего изобретения. Вторая и последующая/ие группировка/группировки слитого полипептида или конъюгата в таком белке имеют соответственно желаемую биологическую активность.

Таким образом, согласно второму аспекту настоящего изобретения предложен слитый белок или конъюгат, содержащий первую группировку, состоящую из IL-17А-связывающего полипептида по первому аспекту, и вторую группировку, состоящую из полипептида, имеющего желаемую биологическую активность. В другом воплощении указанный слитый белок или конъюгат помимо этого могут содержать дополнительные группировки, имеющие желаемые биологические активности, которые могут быть либо такими же, либо отличаться от биологической активности второй группировки.

Неограничивающие примеры желаемой биологической активности включают терапевтическую активность, связывающую активность и ферментативную активность.

В одном из воплощений вторая группировка, имеющая желаемую биологическую активность, представляет собой терапевтически активный полипептид.

Неограничивающими примерами терапевтически активных полипептидов являются биомолекулы, как например, молекулы, выбранные из группы, состоящей из человеческих эндогенных ферментов, гормонов, факторов роста, хемокинов, цитокинов и лимфокинов. Неограничивающими примерами охваченных цитокинов являются IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-11, IL-13, IL-21, IL-27, IL-35, IFNβ и TGFβ (трансформирующий фактор роста β). Неограничивающими примерами охваченных хемокинов являются SDF-1/CXCL12 (фактор-1 стромальных клеток/СХС-хемокиновый лиганд 12), BCL(хемоаттрактант В-лимфоцитов)/ВСА(аттрактирующий В-клетки хемокин)-1/CXCL13, CXCL16, HCC1/CCL14 (гемофильтрат СС хемокина 1 (hemofiltrate СС chemokine 1)/СС-хемокиновый лиганд 14), TARC(хемокин, регулируемый тимусом и активацией)/CCL17, PARC(хемокин, регулируемый легкими и активацией)/CCL18, MIP(макрофагальный воспалительный белок)-3β/ELC(EBL-1 хемокиновый лиганд)/CCL19, SLC(хемокин вторичной лимфоидной ткани)/CCL21, CCL25/TECK (экспрессируемый в тимусе хемокин) и CCL27/CTACK (кожный притягивающий Т-клетки хемокин (cutaneous Т cell-attracting chemokine)).

Неограничивающими примерами связывающих активностей являются такие связывающие активности, которые приводят к повышению полупериода существования in vivo слитого белка или конъюгата. В одном из конкретных воплощений указанная связывающая активность представляет собой альбумин-связывающую активность, благодаря чему увеличивается полупериод существования in vivo слитого белка или конъюгата. В одном из воплощений указанная альбумин-связывающая активность обеспечивается присутствием альбумин-связывающего домена стрептококкового белка G или его производного. В другом конкретном воплощении указанная связывающая активность представляет собой активность по связыванию с неонатальным Fc-рецептором (FcRn), благодаря чему увеличивается полупериод существования in vivo слитого белка или конъюгата.

В одном из воплощений слитый белок или конъюгат по данному второму аспекту содержит два мономера IL-17А-связывающего полипептида по первому аспекту, чьи аминокислотные последовательности могут быть одинаковыми или разными, присоединенные через альбумин-связывающую группировку. В конкретном воплощении этой конструкции слитый белок или конъюгат содержит два IL-17А-связывающих мономера с альбумин-связывающей группировкой между ними. Указанная альбумин-связывающая группировка может представлять собой, например, альбумин-связывающий «GA» домен из стрептококкового белка G, такой как «GA3» или его производное, как описано в любой из заявок WO 2009/016043, WO 2012/004384, WO 2014/048977 и WO 2015/091957.

В одном из воплощений форматом такого слитого белка или конъюгата является «Z-A-Z», где каждый «Z» по отдельности представляет собой IL-17A-связывающий полипептид, который описан в данной заявке, и «А» представляет собой альбумин-связывающий домен. В одном из воплощений такой IL-17А-связывающий полипептид в формате «Z-A-Z» способен связываться с IL-17A так, что значение K_D для данного взаимодействия составляет не более 1×10^-10 М, как например, не более 1×10^-11 М, как например, не более 1×10^-12 М, как например, не более 1×10^-13 М. В одном из воплощений такой «Z-A-Z» полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1233-1247, например, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1236, 1237 и 1242-1247, как например, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1236, 1244 и 1247, или группы, состоящей из SEQ ID NO: 1237, 1244 и 1247. В еще более конкретном воплощении «Z-A-Z» полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1244 и 1245. В одном из воплощений «Z-A-Z» полипептид содержит SEQ ID NO: 1244.

В одном из воплощений указанная связывающая активность относится к связыванию с фактором, ассоциированным с ангиогенезом. Неограничивающие примеры факторов, ассоциированных с ангиогенезом, включают фактор роста фибробластов (FGF), фактор роста фибробластов 1 (FGF-1), основный FGF, ангиогенин 1 (Ang-1), ангиогенин 2 (Ang-2), ангиопоэтин 1 (Angpt-1), ангиопоэтин 2 (Angpt-2), ангиопоэтин 3 (Angpt-3), ангиопоэтин 4 (Angpt-4), тирозинкиназу с иммуноглобулин-подобными доменами 1 (TIE-1), тирозинкиназу с иммуноглобулин-подобными доменами 2 (TIE-2), рецептор 1 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR-1), рецептор 2 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR-2), рецептор 3 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR-3), сосудистый эндотелиальный фактор роста A (VEGF-A), сосудистый эндотелиальный фактор роста В (VEGF-В), сосудистый эндотелиальный фактор роста С (VEGF-C), сосудистый эндотелиальный фактор роста D (VEGF-D), сосудистый эндотелиальный фактор роста Е (VEGF-E), плацентарный фактор роста (PIGF), трансформирующий фактор роста β1 (TGF-β1), трансформирующий фактор роста β2 (TGF-β2), рецепторы трансформирующего фактор роста β (типа I, типа II и типа III), матриксную металлопротеиназу (ММР), рецепторную тирозинкиназу МЕТ (также обозначаемую как сМЕТ и рецептор фактора роста гепатоцитов (HGFR)), члены семейства рецепторов Notch и бета-катенин.

В одном из воплощений указанная связывающая активность относится к связыванию с фактором, ассоциированным с иммунным ответом. Неограничивающие примеры факторов, ассоциированных с иммунным ответом, включают

- Т-клеточные регуляторные факторы, такие как (кластеры дифференцировки) CD3, CD4, CD6, CD28, Т-клеточный рецептор α (TCRα), Т-клеточный рецептор β (TCRβ), цитотоксический Т-лимфоцитарный антиген 4 (CTLA-4) и белок 1 программируемой клеточной смерти (PD-1), лиганд 1 белка программируемой (клеточной) смерти (PD-L1), лиганд 2 белка программируемой (клеточной) смерти 2 (PD-L2), гомолог 3 семейства В7 (В7-Н3), гомолог 4 семейства В7 (В7-Н4), медиатор проникновения вируса герпеса (HVEM)/B- и Т-лимфоцитарный аттенюатор (BTLA), ингибирующий рецептор киллерных клеток (KIR), ген активации лимфоцитов 3 (LAG3), галектин-9 (Cal9)/молекула 3, содержащая Т-клеточный иммуноглобулиновый и муциновый домены, (TIM3) и аденозиновые/альфа-2-адренергические рецепторы (A2aR);

- факторы рекрутинга природных киллерных (NK) клеток, такие как CD16, 2D продукт гена лектиноподобных рецепторов природных киллерных клеток (NKG2D), антиген 1, ассоциированный с функцией лимфоцитов, (LFA1) и рецепторы естественной цитотоксичности NKp30 и NKp40;

- ассоциированные с воспалением факторы, такие как

цитокины и их рецепторы, включая факторы некроза опухоли (TNF); члены суперсемейства лигандов фактора некроза опухоли (TNFSF) TNFSF11/RANKL(лиганд рецептора-активатора NF-kB (ядерного фактора каппа-В)), TNFSF12/TWEAK(TNF-подобный слабый индуктор апоптоза), TNFSF13, TNFSF13B/BAFF(фактор активации В-клеток)/BLyS(стимулятор В-лимфоцитов), TNFSF14, TNFSF15; интерлейкины (IL) IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, IL-17F, IL-18, IL-22, IL-23, IL-26, IL-32, IL33 и IL-34; интерфероны INFα и INFγ; гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (GCSF), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF); и

воспалительные хемокины и их рецепторы, включая IL-8/CXCL8, ENA-78(эпителиальный нейтрофильный активатор-78)/CXCL5, GROα(регулирующий рост онкоген альфа)/CXCL1, СТАР(активирующий соединительную ткань пептид)-III/CXCL7, IP(индуцируемый интерфероном белок)-10/CXCL10, MIG(монокин, индуцируемый интерфероном-гамма)/CXCL9, PF4(тромбоцитарный фактор 4)/CXCL4, GCP(гранулоцитарный хемотаксический белок)-2/CXCL6, МСР(моноцитарный хемоаттрактантный белок)-1/CCL2, MIP-1α/CCL3, MIP-3α/CCL20, RANTES(молекулы, экспрессируемые и секретируемые нормальными Т-лимфоцитами и регулируемые при их активации)/CCL5, лимфотактин/XCL1(ХС-хемокиновый лиганд 1) и фракталкин/CX3CL1(СХ3С-хемокиновый лиганд 1).

В конкретно выбранных воплощениях связывающая активность указанной второй группировки относится к связыванию с мишенью, выбранной из группы, состоящей из TNF, IL-1β, IL-6, IL-17F и IL-23.

В одном из воплощений согласно либо первому, либо второму аспекту настоящего изобретения предложен IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок или конъюгат, который содержит агент, модифицирующий иммунный ответ.Неограничивающие примеры таких агентов, модифицирующих иммунный ответ, включают иммуносупрессивные или иммуномодулирующие агенты либо другие противовоспалительные агенты. Например, IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок или конъюгат, описанный в данной заявке, может содержать агент, выбранный из группы, состоящей из модифицирующих заболевание противоревматических лекарственных средств (DMARD), таких как соли золота, азатиоприн, метотрексат и лефлуномид; ингибиторов кальциневрина, таких как циклоспорин А или FK 506 (такролимус); модуляторов рециркуляции лимфоцитов; ингибиторов mTOR (мишень рапамицина у млекопитающих), таких как рапамицин; аскомицина, имеющего иммуносупрессивные свойства; глюкокортикоидов; кортикостероидов; циклофосфамида; иммуносупрессивных моноклональных антител, например, моноклональных антител с аффинностью к рецепторам лейкоцитов, таким как МНС (главный комплекс гистосовместимости), CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD58, CD80, CD86 или их лиганды; ингибиторов молекул адгезии, таких как антагонисты LFA-1, антагонисты ICAM-1 или -3 (молекула межклеточной адгезии), антагонисты VCAM-4 (молекула адгезии сосудистых клеток 4) или антагонисты VLA-4 (очень поздний антиген-4); анти-TNF агентов, таких как этанерцепт и моноклональные антитела к TNF, такие как инфликсимаб и адалимумаб; ингибиторов провоспалительных цитокинов; блокаторов IL-1, таких как анакинра или «ловушка» IL-1; блокаторов IL-6; ингибиторов хемокиновых рецепторов; нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (NSAID), таких как аспирин; и противоинфекционных агентов и других агентов, модулирующих иммунный ответ; а также комбинаций любых двух или более из приведенного выше списка.

В одном из воплощений согласно либо первому, либо второму аспекту настоящего изобретения предложен IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок или конъюгат, который содержит токсическое соединение. Неограничивающие примеры таких токсических соединений включают калихеамицин, майтанзиноид, неокарциностатин, эсперамицин, динемицин, кедарцидин, мадуропептин, доксорубицин, даунорубицин, ауристатин, А-цепь рицина, модессин, укороченный экзотоксин А из Pseudomonas, дифтерийный токсин и рекомбинантный гелонин.

В последнее время был достигнут значительный прогресс в разработке мультиспецифичных агентов, таких как антитела, обладающие способностью связываться с более чем одним антигеном, например, путем создания определяющих комплементарность участков (CDR), направленных на два антигена, в одном комбинированном сайте антитела (Bostrom et al., 2009, Science, 323(5921): 1610-1614; Schaefer et al., 2011, Cancer Cell, 20(4): 472-486), путем конструирования гетеродимерных антител с использованием разработанных структурных единиц Fc (Carter, 2001, J. Immunol. Methods, 248(1-2): 7-15; Schaefer et al., 2011, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108(27): 11187-11192) и путем генетического слияния и путем генетического слияния вспомогательных распознающих структурных единиц с N- или С-концами легких или тяжелых цепей полноразмерных антител (Kanakaraj et al., 2012, MAbs, 4(5): 600-613; LaFleur et al., 2013, MAbs, 5(2): 208-218).

Как обсуждалось выше, может быть полезно, чтобы полипептид с аффинностью к IL-17A, описанный в данной заявке, также проявлял аффинность к другому фактору, такому как фактор, ассоциированный с иммунным ответом, например, ассоциированный с воспалением фактор.

Таким образом, согласно третьему аспекту настоящего изобретения предложен комплекс, содержащий по меньшей мере один IL-17А-связывающий полипептид, определенный в данном описании, и по меньшей мере одно антитело или его антиген-связывающий фрагмент.

При использовании в данном описании для указания на третий аспект изобретения подразумевается, что термин «комплекс» относится к двум или более связанным друг с другом полипептидным цепям, одна из которых обладает аффинностью к IL-17A благодаря наличию своего IL-17A-связывающего мотива, который определен выше, а другая представляет собой антитело или его антиген-связывающий фрагмент.Каждая из этих полипептидных цепей может содержать разные белковые домены, как описано подробно выше для IL-17А-связывающего полипептида по первому и второму аспектам, и полученный мультибелковый комплекс может обладать множественными функциями. Подразумевается, что «комплекс» относится к двум или более полипептидам, которые определены в данном описании, соединенным ковалентными связями, например, двум или более полипептидным цепям, соединенным ковалентными связями в результате экспрессии их в виде рекомбинантного слитого белка, или ассоциированным с использованием химического конъюгирования.

Согласно третьему аспекту предложен комплекс, содержащий антитело или его антиген-связывающий фрагмент.Хорошо известно, что антитела представляют собой молекулы иммуноглобулина, способные к специфическому связыванию с мишенью (антигеном), такой как углевод, полинуклеотид, липид, полипептид или другая мишень, посредством по меньшей мере одного антиген-распознающего сайта, локализованного в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. Использованный в данном описании термин «антитело или его антиген-связывающий фрагмент» охватывает не только полноразмерные или интактные поликлональные или моноклональные антитела, но также и их антиген-связывающие фрагменты, такие как Fab, Fab', F(ab')₂, Fab₃, Fv и их варианты, слитые белки, содержащие одну или более частей антитела, гуманизированные антитела, химерные антитела, миниантитела, диатела, триотела, тетратела, линейные антитела, одноцепочечнные антитела, мультиспецифичные антитела (например, биспецифичные антитела) и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая содержит антиген-распознающий сайт необходимой специфичности, включая гликозилированные варианты антител, антитела с изменениями в аминокислотной последовательности и ковалентно модифицированные антитела. Другие примеры модифицированных антител и их антиген-связывающих фрагментов включают нанотела, AlbudAb (альбумин-связывающие однодоменные антитела), DART (перенацеленные антитела с двойной аффинностью, BiTE (биспецифичные Т-клеточные рекрутеры), TandAb (тандемные диатела), DAF (Fab двойного действия), антитела «два-в-одном», SMIP (малые модульные иммунофармацевтические средства), FynomAb (финомеры, слитые с антителами), DVD-Ig (конструкции иммуноглобулина с двумя вариабельными доменами), антитела, полученные с использованием технологии CovX-body (модифицированные пептидом антитела), антитела, полученные с использованием технологии DuoBody (duobodies) и трифункциональные антитела Triomabs. Этот список вариантов антител и их антиген-связывающих фрагментов не следует рассматривать как ограничение, и специалист осведомлен и о других подходящих вариантах.

Полноразмерное антитело содержит две тяжелые цепи и две легкие цепи. Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (V_H) и первую, вторую и третью константные области тяжелой цепи (C_H1, C_H2 и C_H3). Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (V_L) и константную область легкой цепи (C_L). В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена своих тяжелых цепей антитела распределяют на разные классы. Существует шесть основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG, IgM и IgY, и некоторые из них могут быть подразделены далее на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Термин «полноразмерное антитело», использованный в данном описании, относится к антителу любого класса, такого как IgD, IgE, IgG, IgA, IgM или IgY (или любого их подкласса). Субъединичные структуры и пространственные конфигурации антител разных классов хорошо известны.

«Антиген-связывающий фрагмент» представляет собой часть или участок молекулы антитела или его производного, который сохраняет всю или значительную часть способности связываться с антигеном соответствующего полноразмерного антитела. Антиген-связывающий фрагмент может содержать вариабельную область тяжелой цепи (V_H), вариабельную область легкой цепи (V_L) или и ту, и другую. Каждая из V_H и V_L обычно содержит три определяющих комплементарность участка CDR1, CDR2 и CDR3. Эти три CDR в V_H или V_L фланкированы каркасными областями (FR1, FR2, FR3 и FR4). Как кратко приведено выше, примеры антиген-связывающих фрагментов включают, но не ограничиваются этим: (1) Fab фрагмент, который представляет собой одновалентный фрагмент, имеющий цепь V_L-C_L и цепь V_H-C_H1; (2) Fab' фрагмент, который представляет собой Fab фрагмент с шарнирной областью тяжелой цепи, (3) F(ab')₂ фрагмент, который представляет собой димер Fab' фрагментов, соединенных посредством шарнирной области тяжелой цепи, например, соединенных дисульфидным мостиком в шарнирной области; (4) Fc фрагмент; (5) Fv фрагмент, который представляет собой минимальный фрагмент антитела, имеющий V_L- и V_H-домены одного плеча антитела; (6) одноцепочечный Fv (scFv) фрагмент, который представляет собой одну полипептидную цепь, где V_H- и V_L-домены в scFv связаны посредством пептидного линкера; (7) (scFv)₂, содержащий два V_H-домена и два V_L-домена, которые связаны посредством двух V_H-доменов через дисульфидные мостики, и (8) однодоменные антитела, которые могут представлять собой полипептиды одного вариабельного домена (V_H или V_L) антитела, специфически связывающиеся с антигенами.

Антиген-связывающие фрагменты могут быть получены рутинными методами. Например, F(ab')₂ фрагменты можно получить посредством расщепления молекулы полноразмерного антитела пепсином, a Fab фрагменты могут быть образованы в результате восстановления дисульфидных мостиков в F(ab')₂ фрагментах. Альтернативно, фрагменты могут быть получены с использованием рекомбинантной технологии посредством экспрессии фрагментов тяжелой и легкой цепи в подходящих клетках хозяина (например, Е. coli, дрожжах, клетках млекопитающих, растений или насекомых) и осуществления их сборки с образованием желаемых антиген-связывающих фрагментов либо in vivo, либо in vitro. Одноцепочечное антитело может быть получено с использованием рекомбинантной технологии путем связывания нуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеотидной последовательности, кодирующей вариабельную область легкой цепи. Например, между двумя вариабельными областями можно встроить гибкий линкер. Специалист осведомлен о способах получения как полноразмерных антител, так и их антиген-связывающих фрагментов.

Таким образом, в одном из воплощений согласно этому аспекту изобретения предложен комплекс, определенный в данном описании, где указанное по меньшей мере одно антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из полноразмерных антител, Fab фрагментов, Fab' фрагментов, F(ab')₂ фрагментов, Fc фрагментов, Fv фрагментов, одноцепочечных Fv фрагментов, (scFv)₂ и однодоменных антител. В одном из воплощений указанное по меньшей мере одно антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбраны из полноразмерных антител, Fab фрагментов и scFv фрагментов. В одном из конкретных воплощений указанное по меньшей мере одно антитело или его антиген-связывающий фрагмент представляют собой полноразмерное антитело.

В одном из воплощений указанного комплекса, определенного в данном описании, антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из моноклональных антител, человеческих антител, гуманизированных антител, химерных антител и их антиген-связывающих фрагментов.

Термин «моноклональные антитела», использованный в данном описании, относится к антителам, имеющим одновалентную аффинность, и это означает, что каждая молекула антитела в образце моноклонального антитела связывается с одним и тем же эпитопом на антигене, в то время как термин «поликлональные антитела», использованный в данном описании, относится к совокупности антител, которые взаимодействуют со специфическим антигеном, но среди этой совокупности могут быть молекулы разных антител, например, распознающие разные эпитопы на антигене. Поликлональные антитела обычно получают посредством инокуляции подходящего млекопитающего и очищают из сыворотки крови млекопитающего. Моноклональные антитела получают с использованием идентичных иммунных клеток, представляющих собой клоны уникальной родительской клетки (например, гибридомной клеточной линии). Термин «человеческое антитело», использованный в данном описании, относится к антителам, имеющим вариабельные и константные области, по существу соответствующие антителам, полученным из являющихся человеком субъектов, или происходящие из таких антител. Термин «химерные антитела», использованный в данном описании, относится к рекомбинантным или генетически сконструированным антителам, таким как, например, мышиные моноклональные антитела, которые содержат полипептиды или домены из антитела другого вида, например, человека, введенные для ослабления иммуногенности антител. Термин «гуманизированные антитела» относится к антителам из не относящегося к человеку вида, белковые последовательности которых были модифицированы для повышения их сходства с вариантами антител, образующимися у людей естественным путем, с целью ослабления иммуногенности.

Может быть целесообразно, чтобы комплекс, определенный в данном описании, помимо способности связываться с IL-17A, направленно воздействовал по меньшей мере на один дополнительный антиген, например, антиген, выбранный из группы, состоящей из антигена, ассоциированного с расстройством, связанным с ангиогенезом, и антигена, ассоциированного с иммунным ответом. В одном из воплощений указанный дополнительный антиген ассоциирован с ангиогенезом. В одном из воплощений указанный дополнительный антиген ассоциирован с иммунным ответом.

В одном из воплощений антиген ассоциирован с ангиогенезом и выбран из группы, состоящей из фактора роста фибробластов (FGF), фактора роста фибробластов 1 (FGF-1), основного FGF, ангиогенина 1 (Ang-1), ангиогенина 2 (Ang-2), ангиопоэтина 1 (Angpt-1), ангиопоэтина 2 (Angpt-2), ангиопоэтина 3 (Angpt-3), ангиопоэтина 4 (Angpt-4), тирозинкиназы с иммуноглобулин-подобными доменами 1 (TIE-1), тирозинкиназы с иммуноглобулин-подобными доменами 2 (TIE-2), рецептора 1 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR-1), рецептора 2 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR-2), рецептора 3 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR-3), сосудистого эндотелиального фактора роста A (VEGF-A), сосудистого эндотелиального фактора роста В (VEGF-B), сосудистого эндотелиального фактора роста С (VEGF-C), сосудистого эндотелиального фактора роста D (VEGF-D), сосудистого эндотелиального фактора роста Е (VEGF-E), плацентарного фактора роста (PIGF), трансформирующего фактора роста β1 (TGF-β1), трансформирующего фактора роста β2 (TGF-β2), рецепторов трансформирующего фактор роста β (типа I, типа II и типа III), матриксной металлопротеиназы (ММР), рецепторной тирозинкиназы МЕТ (также обозначаемой как сМЕТ и рецептор фактора роста гепатоцитов (HGFR)), членов семейства рецепторов Notch и бета-катенина. В одном из воплощений указанные антитело или его фрагмент выбраны из группы, состоящей из AMG 780, AMG 386, MEDI-3617, несвакумаба, CVX-241, бевацизумаба, ранибизумаба, VGX100, CVX-241, АВР 215, PF-06439535, фрезолимумаба, метелимумаба, онартузумаба (onartuzumab), эмибетузумаба (emibetuzumab) и тарекстумаба.

В одном из воплощений антиген ассоциирован с иммунным ответом или расстройством иммунной системы и выбран из группы, состоящей из

- Т-клеточных регуляторных факторов, таких как CD3, CD4, CD6, CD28, Т-клеточный рецептор α (TCRα), Т-клеточный рецептор β (TCRβ), цитотоксический Т-лимфоцитарный антиген 4 (CTLA-4) и белок 1 программируемой клеточной смерти (PD-1), лиганд программируемой (клеточной) смерти 1 (PD-L1), лиганд программируемой (клеточной) смерти 2 (PD-L2), гомолог 3 семейства В7 (В7-Н3), гомолог 4 семейства В7 (В7-Н4), медиатор проникновения вируса герпеса (HVEM)/B- и Т-лимфоцитарный аттенюатор (BTLA), ингибирующий рецептор киллерных клеток (KIR), ген активации лимфоцитов 3 (LAG3), галектин-9 (Cal9)/молекула 3, содержащая Т-клеточный иммуноглобулиновый и муциновый домены, (TIM3) и аденозиновые/альфа-2-адренергические рецепторы (A2aR);

- факторов рекрутинга NK клеток, таких как CD16, 2D продукт гена лектиноподобных рецепторов природных киллерных клеток (NKG2D), антиген 1, ассоциированный с функцией лимфоцитов, (LFA1) и рецепторы естественной цитотоксичности NKp30 и NKp40;

- ассоциированных с воспалением факторов, таких как:

цитокины и их рецепторы, включая факторы некроза опухоли (TNF); члены суперсемейства лигандов фактора некроза опухоли (TNFSF) TNFSF11/RANKL, TNFSF12/TWEAK, TNFSF13, TNFSF13B/BAFF/BLyS, TNFSF14, TNFSF15; интерлейкины (IL) IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, IL-17F, IL-18, IL-22, IL-23, IL-26, IL-32, IL33 и IL-34; интерфероны INFα и INFγ; гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (GCSF), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF); и

воспалительные хемокины и их рецепторы, включая IL-8/CXCL8, ENA-78/CXCL5, GROα/CXCL1, CTAP-III/CXCL7, IP-10/CXCL10, Mig/CXCL9, PF4/CXCL4, GCP-2/CXCL6, MCP-1/CCL2, MIP-1α/CCL3, MIP-3α/CCL20, RANTES/CCL5, лимфотактин/XCL1 и фракталкин/CX3CL1.

В одном из воплощений антиген выбран из группы, состоящей из TNF, IL-1β, IL-6, IL-17F и IL-23.

В одном из воплощений указанное антитело или его фрагмент выбраны из группы, состоящей из визилизумаба, отеликсизумаба, ипилимумаба, тремелимумаба, пембролизумаба, ниволумаба, пидилизумаба, TMDL3280A, MEDI-4736, TMDL3280A и лирилумаба и их антиген-связывающих фрагментов.

В одном из конкретных воплощений указанным антигеном является TNF. В одном из воплощений указанное антитело или его фрагмент выбраны из группы, состоящей из адалимумаба, инфликсимаба, голимумаба, цертолизумаба пегола и их антиген-связывающих фрагментов. В другом воплощении указанное антитело или его фрагмент представляет собой полноразмерное антитело, выбранное из группы, состоящей из адалимумаба, инфликсимаба, голимумаба и цертолизумаба пегола. В одном из конкретных воплощений указанное антитело или его антиген-связывающий фрагмент представляет собой адалимумаб или его антиген-связывающий фрагмент, например полноразмерный адалимумаб.

Комплекс, описанный в данной заявке, может быть представлен, например, в форме слитого белка или конъюгата. Таким образом, указанный по меньшей мере один IL-17А-связывающий полипептид и указанное по меньшей мере одно антитело или его антиген-связывающий фрагмент могут быть соединены посредством химического конъюгирования (с использованием известных методов органической химии) или любым другим способом, таким как экспрессия данного комплекса в виде слитого белка, или присоединены любым другим образом, либо непосредственно, либо через линкер, например аминокислотный линкер.

Таким образом, в одном из воплощений предложен комплекс, определенный в данном описании, при этом указанный комплекс представляет собой слитый белок или конъюгат.В одном из воплощений указанный комплекс представляет собой слитый белок. В другом воплощении указанный комплекс представляет собой конъюгат.В одном из воплощений указанного комплекса указанный IL-17А-связывающий полипептид присоединен к N-концу или С-концу тяжелой цепи указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента. В другом воплощении указанный IL-17А-связывающий полипептид присоединен к N-концу или С-концу легкой цепи указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента. В одном из воплощений указанный IL-17A-связывающий полипептид присоединен к N-концу и/или С-концу легкой цепи и тяжелой цепи указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента. Например, IL-17А-связывающий полипептид может быть присоединен только к N-концу тяжелой(ых) цепи(ей), только к N-концу легкой(их) цепи(ей), только к С-концу тяжелой(ых) цепи(ей), только к С-концу легкой(их) цепи(ей), как к N-концу, так и к С-концу тяжелой(ых) цепи(ей), как к N-концу, так и к С-концу легкой(их) цепи(ей), только к С-концу легкой(их) цепи(ей) и N-концу тяжелой(ых) цепи(ей), только к С-концу тяжелой(ых) цепи(ей) и N-концу легкой(их) цепи(ей) указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента.

Как будет понятно специалисту, конструирование слитого белка зачастую включает использование линкеров между подлежащими слиянию функциональными группировками. Специалист осведомлен о разных видах линкеров с разными свойствами, таких как гибкие аминокислотные линкеры, жесткие аминокислотные линкеры и расщепляемые аминокислотные линкеры. Линкеры использовали, например, для повышения стабильности или улучшения сворачивания слитых белков, для усиления экспрессии, улучшения биологической активности, аффинности и/или связывания, обеспечения направленного воздействия и изменения фармакокинетических параметров слитых белков. Таким образом, в одном из воплощений IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, определенный в данном описании, дополнительно содержит по меньшей мере один линкер. Линкер может быть выбран, например, из группы, состоящей из гибких аминокислотных линкеров, жестких аминокислотных линкеров и расщепляемых аминокислотных линкеров. Альтернативно, линкером может быть непептидный линкер. В одном из воплощений слитого белка или конъюгата, описанного в данной заявке, указанный линкер размещен между первой группировкой, состоящей из IL-17A-связывающего полипептида, определенного в данном описании, и второй группировкой, состоящей из полипептида, имеющего желаемую биологическую активность. В одном из воплощений комплекса, описаного в данной заявке, указанный линкер размещен между указанным IL-17А-связывающим полипептидом и указанным антителом или его антиген-связывающим фрагментом. Специалисту будет очевидно, что присутствие линкера, размещенного в любом из вышеупомянутых положений, не исключает присутствия дополнительных линкеров в таком же или любом другом положении.

Гибкие линкеры зачастую используют тогда, когда соединенные вместе домены требуют определенной степени свободы для движения или взаимодействия, и они могут быть особенно полезны в некоторых воплощениях IL-17А-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата или комплекса, определенного в данном описании. Такие линкеры обычно состоят из небольших, неполярных (например, G) или полярных (например, S или Т) аминокислот.Некоторые гибкие линкеры состоят главным образом из отрезков, содержащих остатки G и S, например (GGGGS)_p и (SSSSG)_p. Корректировка количества копий «р» позволяет оптимизировать линкер на предмет получения соответствующего расстояния между функциональными группировками или поддержания необходимого взаимодействия между группировками. Помимо G-и S-содержащих линкеров в данной области техники известны и другие гибкие линкеры, как например, G- и S-линкеры, содержащие дополнительные аминокислотные остатки, такие как Т, А, K и Е, для поддержания гибкости, а также полярные аминокислотные остатки для улучшения растворимости.

В одном из воплощений указанный линкер представляет собой гибкий линкер, содержащий остатки глицина (G), серина (S) и/или треонина (Т). В одном из воплощений указанный линкер содержит последовательность с общей формулой выбранной из (G_nS_m)_p и (S_nG_m)_p, где независимо n равно 1-7, m равно 0-7, n+m не более 8, и р равно 1-10. В одном из воплощений n равно 1-5. В одном из воплощений m равно 0-5. В одном из воплощений р равно 1-5. В более конкретном воплощении n равно 4, m равно 1, и р равно 1-4.

В одном из воплощений указанный линкер содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из G₄S, (G₄S)₂, (G₄S)₃ и (G₄S)₄.

В одном из воплощений указанный линкер содержит последовательность с общей формулой GT(G_nS_m)_p, где независимо n равно 1-7, m равно 0-7, n+m не более 8, и р равно 1-10. В одном из воплощений n равно 1-5. В одном из воплощений m равно 0-5. В одном из воплощений р равно 1-5. В более конкретном воплощении n равно 4, m равно 1, и р равно 1-4. Так, в одном из воплощений, где n равно 4, указанный линкер содержит GT(G₄S)_p. В одном из конкретных воплощений n равно 4, и р равно 1, вследствие чего указанный линкер представляет собой GTG₄S. В одном из воплощений указанный линкер содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GT(G₄S)_pTS, GT(G₄S)_pPR и GT(G₄S)_pPK.

В одном из воплощений указанный линкер содержит последовательность с общей формулой GAP(G_nS_m)_p, где независимо n равно 1-7, m равно 0-7, n+m не более 8, и р равно 1-10. В одном из воплощений n равно 1-5. В одном из воплощений m равно 0-5. В одном из воплощений р равно 1-5. В более конкретном воплощении n равно 4, m равно 1, и р равно 1-4. Так, в одном из воплощений, где n равно 4, указанный линкер содержит GAP(G₄S)_p. В одном из конкретных воплощений n равно 4, и р равно 1, вследствие чего указанный линкер представляет собой GAPG₄S. В одном из воплощений указанный линкер содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из GAP(G₄S)_pTS, GAP(G₄S)_pPR и GAP(G₄S)_pPK.

В одном из воплощений указанный линкер содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из KL(G₄S)_p, LQ(G₄S)_p и YV(G₄S)_pPK. В одном из воплощений указанный линкер содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из S₄G, (S₄G)₃, (S₄G)₄ и (S₄G)₈. В одном из воплощений указанный линкер содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из VDGS, ASGS и VEGS. В конкретном воплощении указанный линкер содержит ASGS.

Что касается приведенного выше описания слитых белков, конъюгатов или комплексов, включающих в себя IL-17А-связывающий полипептид по изобретению, то следует отметить, что обозначение первой, второй и следующих группировок дается для наглядности, чтобы провести разграничение между IL-17А-связывающим(ими) полипептидом или полипептидами по изобретению, с одной стороны, и группировками, демонстрирующими другие функции, с другой стороны. Подразумевается, что эти обозначения не относятся к действительному порядку различных доменов в полипептидной цепи слитого белка, конъюгата или комплекса. Так, например, указанная первая группировка может без ограничения находиться на N-конце, в середине или на С-конце слитого белка, конъюгата или комплекса.

Кроме того, данное изобретение охватывает полипептиды, в которых IL-17А-связывающий полипептид по первому аспекту, IL-17А-связывающий полипептид, который содержится в слитом белке или конъюгате по второму аспекту или в комплексе по третьему аспекту, дополнительно содержит метку, например, метку, выбранную из группы, состоящей из флуоресцентных красителей и металлов, красителей с хромофорной системой, хемилюминесцентных соединений и биолюминесцентных белков, ферментов, радионуклидов и частиц. Такие метки могут быть использованы, например, для детекции данного полипептида.

В тех воплощениях, где меченый IL-17А-связывающий полипептид содержит IL-17А-связывающий полипептид по первому аспекту изобретения и метку, такой меченый полипептид может быть использован для опосредованного мечения IL-17А-экспрессирующих клеток, например, клеток из ассоциированных с воспалением раковых опухолей. Неограничивающие примеры типов ассоциированного с воспалением рака включают рак желудка, колоректальный рак, немелкоклеточный рак легкого, гепатоклеточные карциномы и аденокарциномы (Wu et al., 2014, Tumour Biol., 35(6): 5347-56; Wu et al., 2012, PLoS One, 7(12); Zhang et al., 2012, Asian Рас. J. Cancer Prev., 13(8): 3955-60; Liu et al., 2011, Biochem. Biophys. Res. Commun., 407(2): 348-54).

В других воплощениях меченый IL-17А-связываюиций полипептид представлен в виде группировки в слитом белке, конъюгате или комплексе, также содержащем вторую и возможно еще одну группировку, имеющую желаемую биологическую активность. В некоторых случаях метка может быть присоединена только к IL-17А-связывающему полипептиду, а в некоторых случаях как к IL-17А-связывающему полипептиду, так и ко второй группировке слитого белка или конъюгата и/или к антителу или антиген-связывающему фрагменту комплекса. Кроме того, также имеется возможность, чтобы метка могла быть присоединена только ко второй группировке либо антителу или его антиген-связывающему фрагменту, а не к IL-17А-связывающей группировке. Таким образом, в еще одном воплощении предложен IL-17А-связывающий полипептид, содержащий вторую группировку, при этом указанная метка присоединена только во второй группировке. В другом воплощении предложен комплекс, определенный в данном описании, при этом указанная метка присоединена только антителу или его антиген-связывающему фрагменту.

В одном из воплощений указанный IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, описанный в данной заявке, содержит хелатирующее окружение, что обеспечивается посредством полиаминополикарбоксилатного хелатора, конъюгированного с IL-17A-связывающим полипептидом через тиольную группу остатка цистеина или аминогруппу остатка лизина.

В тех воплощениях, где IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс помечен радиоактивной меткой, такой меченный радиоактивной меткой полипептид может содержать радионуклид. Большинство радионуклидов по своей природе являются металлами, а металлы обычно не способны к образованию стабильных ковалентных связей с элементами, присутствующими в белках и пептидах. По этой причине мечение белков и пептидов радиоактивными металлами осуществляют, применяя хелаторы, т.е. мультидентатные лиганды, которые образуют нековалентно связанные соединения, называемые хелатами, с ионами металла. В одном из воплощений IL-17А-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата или комплекса включение радионуклида обеспечивается благодаря наличию хелатирующего окружения, посредством которого радионуклид может находиться в координированном, хелатированном состоянии по отношению к полипептиду или образовывать с ним комплекс.

Одним из примеров хелатора является хелатор полиаминополикарбоксилатного типа. Можно отметить два класса таких полиаминополикарбоксилатных хелаторов: макроциклические и ациклические хелаторы.

В одном из воплощений IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок или конъюгат содержит хелатирующее окружение, что обеспечивается посредством полиаминополикарбоксилатного хелатора, конъюгированного с IL-17А-связывающим полипептидом через тиольную группу остатка цистеина или эпсилон-аминогруппу остатка лизина.

Наиболее часто используемыми макроциклическими хелаторами для радиоактивных изотопов индия, галлия, иттрия, висмута, радиоастинидов и радиолантанидов являются различные производные DOTA (1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислоты). В одном из воплощений хелатирующее окружение IL-17А-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата или комплекса обеспечивается присутствием DOTA или его производного. Более конкретно, в одном из воплощений включенные в настоящее изобретение хелатированные полипептиды получают посредством взаимодействия производного DOTA 10-малеимидоэтилацетамида 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-трис-уксусной кислоты (малеимидомоноамид-DOTA) с указанным полипептидом.

Кроме того, в качестве хелаторов можно использовать 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-триуксусную кислоту (NOTA) и ее производные. Таким образом, в одном из воплощений предложен IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, при этом полиаминополикарбоксилатный хелатор представляет собой 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-триуксусную кислоту или ее производное.

Наиболее часто используемыми ациклическими полиаминополикарбоксилатными хелаторами являются различные производные DTPA (диэтилентриамин-пентауксусной кислоты). Таким образом, полипептиды, имеющие хелатирующее окружение, обеспечиваемое присутствием диэтилентриаминпентауксусной кислоты или ее производных, также включены в настоящее изобретение.

В одном из воплощений указанный IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, описанный в данной заявке, дополнительно содержит одну или более группировок полиэтиленгликоля (ПЭГ), например, с целью улучшения фармакокинетических свойств данной молекулы.

Согласно четвертому аспекту настоящего изобретения предложены полинуклеотид, кодирующий IL-17А-связывающий полипептид или слитый белок, который описан в данной заявке; экспрессирующий вектор, содержащий указанный полинуклеотид; и клетка-хозяин, содержащая указанный экспрессирующий вектор.

Настоящее изобретение также раскрывает способ получения полипептида или слитого белка, описанного выше, включающий культивирование указанной клетки хозяина в условиях, разрешающих экспрессию указанного полипептида из экспрессирующего его вектора, и выделение полипептида.

Альтернативно, IL-17А-связывающий полипептид по настоящему изобретению может быть получен в результате небиологического синтеза пептидов с использованием аминокислот и/или производных аминокислот, имеющих защищенные реакционноспособные боковые цепи, при этом такой небиологический синтез пептидов включает:

- пошаговое сочетание аминокислот и/или производных аминокислот с образованием полипептида по первому аспекту, имеющего защищенные реакционноспособные боковые цепи,

- удаление защитных групп из реакционноспособных боковых цепей полипептида, и

- фолдинг полипептида в водном растворе.

Следует понимать, что IL-17А-связывающий полипептид по настоящему изобретению может быть полезен в качестве терапевтического, диагностического или прогностического агента сам по себе или как средство для направленного воздействия других терапевтических или диагностических агентов, например, обладающих прямыми или опосредованными воздействиями на IL-17A. Прямой терапевтический эффект может быть осуществлен, например, путем ингибирования IL-17А-опосредованной передачи сигнала, как например, посредством блокирования связывания IL-17A с одним или более чем одним из его рецепторов.

Согласно другому аспекту предложена композиция, содержащая IL-17A-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, описанный в данной заявке, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель. В одном из воплощений указанная композиция дополнительно содержит по меньшей мере один дополнительный активный агент, например, по меньшей мере два дополнительных активных агента, например, по меньшей мере три дополнительных активных агента. Неограничивающими примерами дополнительных активных агентов, которые могут оказаться полезными в такой композиции, являются терапевтически активные полипептиды, агенты, модифицирующие иммунный ответ, и токсические соединения, описанные в данной заявке.

Специалисту будет очевидно, что указанный IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс либо указанную фармацевтическую композицию, содержащую анти-IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс, описанный в данной заявке, можно вводить субъекту, используя стандартные методы введения, как например, методы, включающие пероральное, местное, внутривенное, внутрибрюшинное, подкожное, легочное, трансдермальное, внутримышечное, интраназальное, трансбуккальное, сублингвальное введение или введение посредством суппозиториев. Таким образом, в одном из воплощений предложены IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс либо фармацевтическая композиция, описанные в данной заявке, для перорального, местного, внутривенного, внутрибрюшинного, подкожного, легочного, трансдермального, внутримышечного, интраназального, трансбуккального, сублингвального введения или введения посредством суппозиториев. В одном из конкретных воплощений предложены IL-17A-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс либо фармацевтическая композиция, описанные в данной заявке, для перорального введения. В другом конкретном воплощении предложены IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс либо фармацевтическая композиция, описанные в данной заявке, для местного введения, например, местного введения в глаз.

Кроме того, IL-17A может служить в качестве маркера, полезного для диагностики и прогнозирования некоторых типов рака, таких как ассоциированный с воспалением рак, например, рак желудка, колоректальный рак, немелкоклеточный рак легкого, гепатоклеточные карциномы и аденокарциномы. Например, IL-17 связан с прогнозированием и низкой выживаемостью пациентов, страдающих от колоректальной карциномы и гепатоклеточной карциномы.

Таким образом, согласно другому аспекту настоящего изобретения предложены IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция, описанные в данной заявке, для применения в качестве лекарственного средства, диагностического агента или прогностического агента.

В одном из воплощений предложены IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция, описанные в данной заявке, для применения в качестве лекарственного средства с целью модулирования функции IL-17A in vivo. Использованный в данном описании термин «модулировать» относится к изменению активности, например, к приданию гипоморфу функции IL-17A, частичному ингибированию или полному ингибированию функции IL-17A.

Неограничивающие примеры IL-17А-ассоциированных состояний или заболеваний, для лечения, прогнозирования и/или диагностики которых могут быть полезны IL-17А-связывающие полипептиды, включают артрит, такой как ревматоидный артрит, артрит хронический прогрессирующий, деформирующий артрит и ревматические заболевания, заболевания с потерей костной массы, воспалительную боль, спондилоартропатии, в том числе анкилозирующий спондилит, синдром Рейтера, реактивный артрит, псориатический артрит, энтеропатический артрит, олигоартикулярный ревматоидный артрит, полиартикулярный ревматоидный артрит, ревматоидный артрит с системным началом, остеоартрит; состояния гиперчувствительности, такие как гиперчувствительность (включая гиперчувствительность дыхательных путей и кожи), аллергии и ответные реакции на воздействие аллергенов; желудочно-кишечные состояния или заболевания, такие как аутоиммунное воспалительное заболевание кишечника (включая, например, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона и синдром раздраженного кишечника), глютеновая болезнь (идиопатическая спру), внутрибрюшинные абсцессы и адгезии, первичный склероз желчных путей, склерозирующий холангит, аутоиммунный гепатит, вирусный гепатит, хронический активный гепатит и гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori; офтальмические состояния и заболевания, такие как эндокринная офтальмопатия, болезнь Грейвса, увеит (передний и задний), сухой кератоконъюнктивит (синдром сухого глаза), весенний кератоконъюнктивит, герпетический стромальный кератит и синдром сухого глаза; нефрологические состояния и заболевания, такие как гломерулонефрит (с нефротическим синдромом и без него, например, включая идиопатический нефротический синдром или нефропатию с минимальными изменениями); острые состояния и заболевания, такие как острые и гиперострые воспалительные реакции, септический шок (например, эндотоксический шок и респираторный дистресс-синдром взрослых), менингит, пневмония, тяжелые ожоги, острые инфекции, септицемия, инсульт и ишемия; кахексию (синдром истощения), такую как кахексия, ассоциированная с патологическим высвобождением TNF, кахексия после инфекции, кахексия, ассоциированная с раком, кахексия, ассоциированная с органной дисфункцией и связанная с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД) кахексия; состояния и заболевания костей, такие как нарушения метаболизма костной ткани, включая остеоартрит, остеопороз, воспалительные артриты, потерю костной массы, как например, возрастную потерю костной массы, парадонтоз, расшатывание (loosening) костных имплантатов и эрозию кости; ювенильные состояния и заболевания, такие как ювенильный ревматоидный артрит, олигоартикулярный ювенильный ревматоидный артрит, полиартикулярный ювенильный ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит с системным началом, ювенильный анкилозирующий спондилит, ювенильный энтеропатический артрит, ювенильный реактивный артрит, ювенильный синдром Рейтера, SEA синдром (синдром серонегативной энтезопатии и артропатии), ювенильный дерматомиозит, ювенильный псориатический артрит, ювенильная склеродермия, ювенильная системная красная волчанка и ювенильный васкулит; васкулит, включая васкулит крупных сосудов, такой как ревматическая полимиалгия, артериит Такаясу и височный артериит, васкулит средних сосудов, такой как болезнь Бюргера, кожный васкулит, болезнь Кавасаки и нодозный полиартериит, васкулит мелких сосудов, такой как синдром Бехчета, синдром Черджа-Стросса, кожный васкулит, пурпура Шенлейна-Геноха, микроскопический полиангиит, гранулематоз Вегенера и васкулит игрока в гольф, васкулит различных сосудов и артериит; дерматологические состояния или заболевания, такие как псориаз, бляшковидный псориаз, каплевидный псориаз, обратный псориаз, пустулезный псориаз, эритродермический псориаз, дерматит и атопический дерматит; легочные состояния и заболевания, такие как обструктивные или воспалительные заболевания дыхательных путей, астма, бронхит, COPD, пневмокониоз, легочная эмфизема, острые и гиперострые воспалительные реакции, интерстициальный фиброз легких, воспаление дыхательных путей и бронхиальная астма; метаболические состояния и заболевания, такие как атеросклероз, дислипидемия и сахарный диабет I типа; а также другие системные аутоиммунные состояния и заболевания, такие как системная красная волчанка (SLE), волчаночный нефрит, полихондрит, тяжелая миастения, синдром Стивенса-Джонсона, опухоли, миозит, дерматомиозит, болезнь Стилла взрослых, ревматическая полимиалгия, саркоидоз, склеродермия, склероз, системный склероз, синдром Шегрена, рассеянный склероз (MS), болезнь Гийена-Барре, болезнь Аддисона и феномен Рейно.

IL-17А-связывающие полипептиды, описанные в данной заявке, помимо этого могут быть полезны для лечения реципиентов трансплантатов сердца, легкого, совместно сердца и легкого, печени, почки, поджелудочной железы, кожи или роговицы, включая лечение отторжения аллотрансплантата или отторжения ксенотрансплантата, и для предупреждения заболевания трансплантат-против-хозяина, как например, после трансплантации костного мозга и трансплантации органов, связанной с артериосклерозом.

IL-17А-связывающие полипептиды, описанные в данной заявке, могут также быть полезны для лечения, диагностики или прогнозирования ассоциированных с воспалением типов рака. Термин «рак», как он использован в данном описании, относится к опухолевым заболеваниям и/или раку, таким как метастатические или инвазивные формы рака, например, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого (NSCL), бронхоальвеолярный рак легкого, рак кости, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы или шеи, кожная или интраокулярная меланома, рак прямой кишки, рак анальной области, рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта, рак толстой кишки, колоректальный рак, рак тонкого кишечника, рак пищевода, рак печени, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, рак яичников, рак матки, карцинома фаллопиевых труб, карцинома эндометрия, карцинома шейки матки, карцинома влагалища, карцинома вульвы, болезнь Ходжкина, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак надпочечника, саркома мягкой ткани, рак уретры, рак пениса, рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, рак почки или мочеточника, почечноклеточная карцинома, карцинома почечной лоханки, мезотелиома, гепатоклеточная карцинома, билиарный рак, опухоли центральной нервной системы (ЦНС), опухоли спинного мозга, глиома ствола головного мозга, мультиформная глиобластома, астроцитомы, шванномы, эпендимомы, медуллобластомы, менингиомы, плоскоклеточные карциномы, аденома гипофиза, аденокарциномы, лимфома, лимфоцитарный лейкоз или рак неизвестного происхождения, либо другое гиперплазированное или неопластическое IL-17А-ассоциированное состояние, включая плохо поддающиеся лечению варианты любого из приведенных выше типов рака или комбинацию одного или более чем одного из приведенных выше типов рака или гиперпролиферативных расстройств.

Неограничивающие примеры типов ассоциированного с воспалением рака включают рак желудка, колоректальный рак, немелкоклеточный рак легкого, гепатоклеточные карциномы и аденокарциномы.

В одном из воплощений предложены IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения в лечении, диагностике или прогнозировании IL-17А-ассоциированного состояния, такого как состояние, выбранное из группы, состоящей из воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний и рака, например, воспалительных заболеваний и аутоиммунных заболеваний. В одном из воплощений указанное состояние выбрано из группы, состоящей из воспалительных состояний, аллергических состояний, реакций гиперчувствительности, аутоиммунных заболеваний, тяжелых инфекций и отторжений трансплантатов.

В одном из конкретных воплощений указанное IL-17А-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита, псориаза, рассеянного склероза, системной красной волчанки, увеита и синдрома сухого глаза.

В еще более конкретном воплощении указанное IL-17А-ассоциированное состояние представляет собой псориаз.

В другом воплощении указанное IL-17А-ассоциированное состояние представляет собой ассоциированный с воспалением рак, как например, рак, выбранный из группы, состоящей из рака желудка, колоректального рака, немелкоклеточного рака легкого, гепатоклеточных карцином и аденокарцином.

Согласно родственному аспекту предложен способ детекции IL-17A, включающий обеспечение образца, который предположительно содержит IL-17А, приведение в контакт указанного образца с IL-17А-связывающим полипептидом, слитым белком, конъюгатом, комплексом или композицией, которые описаны в данной заявке, и детектирование связывания IL-17A-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции для указания присутствия IL-17A в образце. В одном из воплощений указанный способ дополнительно включает промежуточную стадию промывки для удаления несвязавшегося полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции после приведения в контакт с данным образцом.

В одном из воплощений указанный способ представляет собой диагностический или прогностический способ для определения присутствия IL-17А у субъекта, включающий стадии:

- приведения в контакт субъекта или образца, выделенного из данного субъекта, с IL-17А-связывающим полипептидом, слитым белком, конъюгатом, комплексом или композицией, которые описаны в данной заявке, и

- получения численного значения, соответствующего количеству IL-17A-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, которое находится в связанном состоянии в указанном субъекте или с указанным образцом.

В одном из воплощений указанный способ дополнительно включает промежуточную стадию промывки для удаления несвязавшегося полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции после приведения в контакт субъекта или образца и до получения численного значения.

В одном из воплощений указанный способ дополнительно включает стадию сравнения указанной величины с референсным значением. Указанное референсное значение может быть оценено по численному значению, порогу или визуальному индикатору, например, на основе цветной реакции. Специалисту будет очевидно, что для применения могут быть приемлемы разные способы сравнения с референсным значением, известные в данной области техники.

В одном из воплощений такого способа указанным субъектом является млекопитающее, такое как человек.

В одном из воплощений указанный способ осуществляют in vivo.

В одном из воплощений указанный способ осуществляют in vitro.

Согласно родственному аспекту предложен способ лечения IL-17A-ассоциированного состояния, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества IL-17А-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, которые описаны в данной заявке. В более конкретном воплощении указанного способа IL-17A-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция, описанные в данной заявке, модулирует функцию IL-17A in vivo.

В одном из воплощений указанное IL-17А-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний и рака, например, из группы, состоящей из воспалительных заболеваний и аутоиммунных заболеваний. В одном из конкретных воплощений указанного аспекта IL-17А-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из воспалительных состояний, аллергических состояний, реакций гиперчувствительности, аутоиммунных заболеваний, тяжелых инфекций и отторжений трансплантатов. В одном из воплощений указанное IL-17A-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита, псориаза, рассеянного склероза, системной красной волчанки, увеита и синдрома сухого глаза. В более конкретном воплощении указанное IL-17А-ассоциированное состояние представляет собой псориаз. В другом воплощении указанное IL-17А-ассоциированное состояние представляет собой рак, как например, рак, выбранный из группы, состоящей из рака желудка, колоректального рака, немелкоклеточного рака легкого, гепатоклеточных карцином и аденокарцином.

Целесообразным может оказаться введение терапевтически эффективного количества IL-17А-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, описанных в данной заявке, вместе по меньшей мере с одним вторым лекарственным веществом, таким как агент, модифицирующий иммунный ответ, токсическое соединение или противораковое средство.

Использованный в данном описании термин «совместное введение» охватывает одновременное введение и последовательное введение. Таким образом, в одном из воплощений предложен способ, определенный выше, дополнительно включающий совместное введение с агентом, модулирующим иммунный ответ.В другом воплощении предложен способ, определенный выше, дополнительно включающий совместное введение с дополнительным противовоспалительным агентом. В другом воплощении предложен способ, определенный выше, дополнительно включающий совместное введение с токсическим соединением. В другом воплощении предложен способ, определенный выше, дополнительно включающий совместное введение с противораковым средством.

Неограничивающие примеры агентов, модулирующих иммунный ответ, и токсических соединений приведены выше. Неограничивающие примеры противораковых средств включают агенты, выбранные из группы, состоящей из ауристатина, антрациклина, калихеамицина, комбретастатина, доксорубицина, дуокармицина, противоопухолевого антибиотика СС-1065, эктеинасцидина, гелданамицина, майтанзиноида, метотрексата, микотоксина, таксола, рицина, буганина, гелонина, экзотоксина 38 из Pseudomonas (РЕ38), дифтерийного токсина (DT) и их аналогов, и их производные, и их комбинации. Специалисту будет очевидно, что неограничивающие примеры цитотоксических агентов включают любой возможный вариант указанных агентов, например, агент ауристатин включает, например, ауристатин Е, ауристатин F, ауристатин РЕ и их производные.

Хотя данное изобретение описано со ссылкой на разные типичные аспекты и воплощения, специалистам в данной области техники будет понятно, что могут быть внесены различные изменения и могут быть выполнены эквивалентные замены для его элементов без отклонения от объема данного изобретения. Помимо этого, могут быть выполнены многочисленные модификации с целью адаптации конкретной ситуации или молекулы к рекомендациям данного изобретения без отклонения от его сущности. Таким образом, подразумевается, что данное изобретение не ограничивается каким-либо конкретным включенным в него воплощением, а что данное изобретение будет включать все воплощения, попадающие в объем прилагаемой формулы изобретения.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1 представляет собой перечень аминокислотных последовательностей примеров IL-17А-связывающих полипептидов по настоящему изобретению (SEQ ID NO: 1-1222), контрольного полипептида (SEQ ID NO: 1223), альбумин-связывающих полипептидов РР013 (SEQ ID NO: 1224) и РЕР07843 (SEQ ID NO: 1225), а также аминокислотных последовательностей человеческого IL-17A (SEQ ID NO: 1226), мышиного IL-17A (SEQ ID NO: 1227), IL-17A яванского макака (SEQ ID NO: 1229), IL-17A макака-резус (SEQ ID NO: 1230) и человеческого IL-17F (SEQ ID NO: 1228), использованных для проведения отбора, скрининга и/или определения характеристик с целью иллюстрации изобретения. В IL-17А-связывающих полипептидах по настоящему изобретению установленные IL-17А-связывающие мотивы (ВМ) простираются от 8-ого остатка до 36-ого остатка в каждой последовательности. Аминокислотные последовательности полипептидов длиной 49 аминокислотных остатков (BMod), предсказанные как образующие полный трехспиральный пучок в пределах каждого из этих Z вариантов, включают от 7-ого остатка до 55-ого остатка.

На Фиг. 2 показано ингибирование IL-17А-индуцированного образования IL-6, оцененное посредством анализа с использованием нормальных фибробластов кожи человека (NHDF), описанного в примере 3. (A) His₆-Z06260 (незакрашенные ромбы), His₆-Z06282 (незакрашенные квадраты) и His₆-Z06455 (незакрашенные кружки) титровали в среде, содержащей IL-17A. (В) Z06260-ABD (альбумин-связывающий домен) (закрашенные ромбы), His₆-Z06282 (незакрашенные квадраты), Z06282-ABD (закрашенные квадраты), His₆-Z06455 (незакрашенные кружки) и Z06455-ABD (закрашенные кружки) титровали в среде, содержащей IL-17A и HSA (сывороточный альбумин человека).

На Фиг. 3 показана IL-17A связывающая способность набора Z вариантов из библиотеки первого и второго созревания аффинности (first and second maturation library), проанализированная посредством ELISA так, как описано в примере 8. Результаты показаны в виде процента связывающей способности по сравнению с IL-17А-связывающим вариантом Z10241 (SEQ ID NO: 11).

На Фиг. 4 показан результат анализа специфичности связывания, выполненного на приборе Biacore так, как описано в примере 8. Сенсограммы получали после пропускания 20 нМ растворов His₆-меченных Z вариантов Z10508 (SEQ ID NO: 2) (A), Z10532 (SEQ ID NO: 1) (В) и Z15167 (SEQ ID NO: 4) (С) над поверхностью СМ5 чипа (чипа с карбоксиметилированным декстраном) с иммобилизованными на нем человеческим IL-17A (черная линия), человеческим IL-17A/F (темно-серая линия) и человеческим IL-17F (светлосерая линия), соответственно.

На Фиг. 5 показано ингибирование IL-17А-индуцированного образования IL-6 с целью отбора Z вариантов, полученных в результате первого отбора с созреванием аффинности, (сплошные линии) по сравнению с одним из связывающих веществ из первичного отбора (пунктирная линия), проанализированное так, как описано в примере 8. Все связывающие вещества ингибировали IL-17A дозозависимым образом, и подвергнутые созреванию аффинности связывающие вещества обладали повышенной блокирующей способностью по сравнению с первичным отобранным связывающим веществом.

На Фиг. 6 показано связывание человеческого IL-17A (серая линия) и IL-17А яванского макака (черная линия) с (A) ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244), (В) ZAZ3364 (SEQ ID NO: 1245) и (С) ZAZ3365 (SEQ ID NO: 1246), проанализированное на приборе Biacore так, как описано в примере 11. Полученные кривые, из данных для которых вычитали ответы от поверхности с холостой пробой, соответствуют пропусканиям соответствующего белка IL-17A в концентрациях 2,5, 10 и 40 нМ.

На Фиг. 7 показано ингибирование IL-17А-индуцированного образования IL-6 в анализе с использованием NHDF, описанном в примере 14. На Фиг. 7А показана превосходная эффективность в отношении ингибирования при использовании димерного полипептида Z-ABD-Z ZAZ3220 (SEQ ID NO: 1236; сплошная черная линия) по сравнению с соответствующим мономерным Z вариантом Z10241 (SEQ ID NO: 11; пунктирная черная линия). На Фиг. 7В показана оценка линкеров разной длины между Z и группировками ABD в полипептидах Z-ABD-Z, содержащих Z вариант Z06282 (SEQ ID NO: 1206). Сравнивали полипептиды Z-ABD-Z: ZAZ3174 (SEQ ID NO: 1233), ZAZ3176 (SEQ ID NO: 1235), ZAZ3234 (SEQ ID NO: 1238), ZAZ3235 (SEQ ID NO: 1239), ZAZ3236 (SEQ ID NO: 1240) и ZAZ3237 (SEQ ID NO: 1241), содержащие различные количества повторов G₄S или минимальные линкеры, с каждой стороны ABD.

На Фиг. 8 показано дозозависимое ингибирование полипептидами Z-ABD-Z в модели индуцированных человеческим IL-17A (hIL-17A) KC, описанной в примере 15. (А) Полное ингибирование образования КС под действием ZAZ3174 (SEQ ID NO: 1233) получали в дозе 2,5 мг/кг.(В) Полного ингибирования образования КС под действием ZAZ3220 (SEQ ID NO: 1236) достигали в дозе 0,4 мг/кг. Дозы, указанные на оси х, приведены в мг/кг, а соответствующая доза - в пикомолях. Числа над поперечной полосой указывают процент ингибирования для каждой получающей дозу группы; при использовании ZAZ3220 в дозе 0,1 мг/кг получали 72% ингибирования. LOQ означает предел количественного определения.

На Фиг. 9 показаны фармакокинетические профили полипептидов Z-ABD-Z: (A) ZAZ3220 (SEQ ID NO: 1236) и (В) ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244) после однократного внутривенного (в.в.) (черная линия) или п.к. (серая пунктирная линия) введения крысам Sprague Dawley (SD), как описано в примере 16. Показана зависимость средних концентраций в сыворотке крови от времени.

На Фиг. 10 показан результат местного введения в глаза кроликам, выполненного так, как описано в примере 17. Было продемонстрировано накопление Z варианта Z10199 (SEQ ID NO: 1217) и полипептида Z-ABD-Z ZAZ3174 (SEQ ID NO: 1233) как во внутриглазной жидкости, так и в стекловидном теле, в то время как контрольное IgG антитело не проникало в область глаза.

На Фиг. 11 показана активность полипептида ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244), приготовленного в OAF1 и OAF2, соответственно, по сравнению с таковым приготовленным в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS), и оцененного в анализе с использованием NHDF, описанном в примере 18. А) OAF1 (закрашенные кружки), PBS (крестики) и OAF1 без ZAZ3363 (незакрашенные ромбы). В) OAF2 (незакрашенные треугольники), PBS (крестики) и OAF2 без ZAZ3363 (незакрашенные ромбы).

На Фиг. 12 показан фармакокинетический профиль после индрадуоденального введения ZAZ3363, приготовленного в OAF1 (закрашенные кружки), OAF2 (незакрашенные треугольники) и PBS (крестики), выполненного так, как описано в примере 18.

На Фиг. 13 показана оценка комплексов HC_Ada-Z14253 и LC_Ada-Z14253 в анализе с использованием NHDF, описанном в примере 19. (А) Схематичное представление комплексов HC_Ada-Z14253 (слева) и LC_Ada-Z14253 (справа). (В) Ингибирование IL-17А-индуцированного образования IL-6. (С) Ингибирование TNF-индуцированного образования IL-8. (D) Ингибирование TNF- и IL-17A-индуцированного образования IL-8. Z04726-ABD представляет собой отрицательный контроль, включенный во все три анализа.

На Фиг. 14 показаны фармакокинетические профили для полипептида Z-ABD-Z ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244) на яванских макаках после в.в. введения в дозе 20 мг/кг (черная линия) или 40 мг/кг (серая линия) на 1-е, 4-е, 7-е и 10-е сутки, как описано в примере 20. Показан анализ зависимости средней концентрации в плазме крови от времени после (А) первой инъекции на 1-е сутки и (В) четвертой инъекции на 10-е сутки. Величины ошибки представляют стандартное отклонение.

На Фиг. 15 показаны фармакокинетические профили для полипептида Z-ABD-Z ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244) на отдельных собаках породы бигль после перорального введения. В 0-е сутки вводили 150 мг ZAZ3363 в виде капсул с энтеросолюбильным покрытием.

Примеры

Краткое описание

В следующих далее примерах описана разработка новых молекул Z вариантов, направленных на интерлейкин 17А (IL-17A), на основе метода фагового дисплея. IL-17А-связывающие полипептиды, описанные в данной заявке, секвенировали, и их аминокислотные последовательности приведены на Фиг. 1 с идентификаторами последовательностей SEQ ID NO: 1-1222. В данных примерах также описывается определение характеристик IL-17A-связывающих полипептидов и функциональность указанных полипептидов in vitro и in vivo.

Пример 1

Отбор и скрининг IL-17А-связывающих Z вариантов

Материалы и методы

Биотинилирование целевого белка. Биотинилирование человеческого IL-17А (hIL-17A, Peprotech, № по каталогу 200-17; SEQ ID NO: 1226) и мышиного IL-17A (mIL-17A, Peprotech, № по каталогу 210-17; SEQ ID NO: 1227) проводили согласно рекомендациям производителя при комнатной температуре (КТ) в течение 30 мин, используя No-Weigh EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotin (Thermo Scientific, № по каталогу 21327) в 20-кратном молярном избытке. Последующую замену буфера на забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS; 10 мМ фосфат, 137 мМ NaCl, 2,68 мМ KCl, рН 7,4) проводили, используя кассету для диализа (Slide-a-lyzer 3,5 К; отсечение по молекулярной массе (MWCO) 3500, Thermo Scientific, № по каталогу 66333) согласно инструкциям производителя.

Отбор IL-17А-связывающих Z вариантов методом фагового дисплея.

Библиотеку случайных вариантов белка Z, проявляемого на бактериофаге, сконструированного в фагмиде pAY02592 по существу так, как описано в et al., (2007) J. Biotechnol., 128: 162-183, использовали для отбора IL-17А-связывающих Z вариантов. В этой библиотеке альбумин-связывающий домен (сокращенно ABD, соответствующий GA3 для белка G из штамма G148 Streptococcus) используют в качестве партнера слияния для таких Z вариантов. Данная библиотека обозначена как Zlib006Naive.II и имеет размер 1,5×10¹⁰ членов библиотеки (Z вариантов). Клетки Е. coli RRIΔM15 ( et al., (1982) Nucleic Acids Res., 10: 5765-5772) из концентрированной суспензии в глицерине, содержащей фагмидную библиотеку Zlib006Naive.II, инокулировали в 20 л определенной не содержащей пролина среды (КН₂РО₄ - 3 г/л, K₂HPO₄ - 2 г/л, урацил - 0,02 г/л, YNB (основа азотного агара для дрожжей Difco™ без аминокислот, Becton Dickinson) - 6,7 г/л, моногидрат глюкозы - 5,5 г/л, L-аланин - 0,3 г/л, моногидрохлорид L-аргинина - 0,24 г/л, моногидрат L-аспарагина - 0,11 г/л, L-цистеин - 0,1 г/л, L-глутаминовая кислота - 0,3 г/л, L-глутамин - 0,1 г/л, глицин - 0,2 г/л, L-гистидин - 0,05 г/л, L-изолейцин - 0,1 г/л, L-лейцин - 0,1 г/л, моногидрохлорид L-лизина - 0,25 г/л, L-метионин - 0,1 г/л, L-фенилаланин - 0,2 г/л, L-серин - 0,3 г/л, L-треонин - 0,2 г/л, L-триптофан - 0,1 г/л, L-тирозин - 0,05 г/л, L-валин - 0,1 г/л), дополненной ампициллином в концентрации 100 мкг/мл. Культивируемые смеси выращивали при 37 С в ферментере (Belach Bioteknik, BR20). Когда оптическая плотность суспензии клеток при 600 нм (OD₆₀₀) достигала значения 0,75, приблизительно 2,6 л культивируемой смеси инфицировали, используя 10-кратный молярный избыток хелперного фага М13К07 (New England Biolabs, № по каталогу N0315S). Клетки инкубировали в течение 30 мин, после чего ферментер заполняли до 20 л средой для культивирования ((NH₄)₂SO₄ - 2,5 г/л, дрожжевой экстракт (Merck, 1.03753.0500) - 5,0 г/л; пептон (Scharlau, 07-119) - 25 г/л; K₂HPO₄ - 2 г/л, KH₂PO₄ - 3 г/л, Na₃C₆H₅O₇⋅2H₂O - 1,25 г/л, противовспенивающее средство Breox FMT30 - 0,1 мл/л), дополненной 100 мкМ изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозидом (IPTG) для индуцирования экспрессии и ампициллином в концентрации 50 мкг/мл, карбенициллином в концентрации 12,5 мкг/мл, канамицином в концентрации 25 мкг/мл, 35 мл/л 1,217 М раствора MgSO₄ и 10 мл раствора микроэлементов (129 мМ FeCl₃; 36,7 мМ ZnSO₄; 10,6 мМ CuSO₄; 78,1 мМ MnSO₄; 94,1 мМ CaCl₂, растворенных в 1,2 М HCl). Началом периодического культивирования с подпиткой и ограничением глюкозы считался момент, когда в реактор начинал поступать раствор глюкозы в концентрации 600 г/л (15 г/ч в начале, 40 г/ч в конце ферментации через 17 ч). Посредством автоматического добавления 25%-ного раствора NH₄OH значение рН регулировали при 7. Добавляли подачу воздуха (10 л/мин) и мешалку настраивали так, чтобы поддерживать уровень растворенного кислорода выше 30%. Клетки, находящиеся в культивируемой смеси, удаляли тангенциально-поточным фильтрованием.

Фаговые частицы дважды осаждали из супернатанта в смесь ПЭГ/NaCI (полиэтиленгликол/хлорид натрия), фильтровали и растворяли в PBS и глицерине, как описано в и др., выше. Концентрированные суспензии фагов хранили при -80°С до применения.

Отборы с использованием биотинилированного hIL-17А (b-hIL-17А) или биотинилированного mIL-17A (b-mIL-17A) осуществляли за четыре цикла, поделенных на шесть различных путей (tracks) (Таблица 2). Приготовление концентрированной суспензии фагов, процедуру отбора и амплификацию фага между циклами отбора проводили по существу так, как описано в WO 2009/077175 для отбора с использованием другой мишени со следующими исключениями. Исключение 1: в качестве буфера для отбора использовали PBS, дополненный 3% бычьего сывороточного альбумина (BSA, Sigma, № по каталогу А3059) и 0,1% твина 20 (Acros Organics, № по каталогу 233362500). Исключение 2: предварительный отбор осуществляли, проводя циклы 1-3 с инкубированием концентрированной суспензии фагов со стрептавидином в виде Dynabeads^® М-280 (со стрептавидиновыми (SA) гранулами, Invitrogen, № по каталогу 11206D). Исключение 3: все флаконы и гранулы, использованные в этих процедурах отбора, предварительно блокировали PBS, дополненным 5% BSA и 0,1% твина 20. Исключение 4: процедуры отбора проводили в растворе при комнатной температуре (KT), и время, необходимое для отбора, составляло 200 мин в первом цикле и 120 мин в последующих циклах. Исключение 5: за этим следовал захват комплексов мишень-фаг на SA-гранулах с использованием 1 мг гранул на 6,4 мкг b-hIL-17A или b-mIL-17A. Исключение 6: для инфицирования использовали клетки Е. coli штамма XL1-Blue (Agilent Technologies, № по каталогу 200268), выращенные в среде, дополненной тетрациклином в концентрации 10 мкг/мл (исключение 7). Исключение 8: для размножения бактерий использовали чашки с триптоно-дрожжевым экстрактом (агар - 15 г/л, триптоновая вода (Merck) - 10 г/л, дрожжевой экстракт - 5 г/л, NaCl - 3 г/л, 2% глюкозы), дополненным ампициллином в концентрации 0,1 г/л и тетрациклином в концентрации 0,01 г/л. Исключение 9: использование 10-кратного избытка хелперного фага М13К07 по сравнению с бактериями позволило осуществить заражение бактерий, находящихся в логарифмической фазе роста.

Обзор стратегии отбора с описанием условий повышенной жесткости на последующих циклах, полученных с использованием сниженной концентрации мишени и увеличенного числа промывок, показан в Таблице 2.

Путь 1 подразделяли со второго по четвертый циклы с получением в общей сложности четырех путей (от 1-1 до 1-4) в цикле 2, пяти путей (от 1-1-1 до 1-4-2) в цикле 3 и шести путей (от 1-1-1-1 до 1-4-2-1) в цикле 4. Количество фаговых частиц, использованных для отборов, превышало примерно в 2000 раз количество элюированных фаговых частиц в предшествующем цикле, но наибольшее количество использовали в путях отбора 1-1, 1-1-1 и 1-1-1-1.

Промывки проводили в течение 1 мин, используя PBST, 0,1% (PBS, дополненный 0,1% твина-20), и элюирование осуществляли так, как описано в WO 2009/077175.

Получение Z вариантов для ELISA. Z варианты получали посредством инокулирования индивидуальных колоний из отборов в 1 мл среды TSB-YE (триптический соевый бульон с дрожжевым экстрактом), дополненной ампициллином в концентрации 100 мкг/мл и 0,1 мМ IPTG, в планшетах с глубокими лунками (Nunc, № по каталогу 278752). Планшеты инкубировали в течение 18-24 ч при 37°С. Клетки собирали центрифугированием, ресуспендировали в 400 мкл PBST, 0,05%, и замораживали при -80°С для высвобождения периплазматической фракции клеток. Замороженные образцы размораживали на водяной бане и процедуру замораживания-размораживания повторяли шесть раз. К размороженным образцам добавляли по 400 мкл PBST, 0,05%, и клетки собирали центрифугированием.

Конечный супернатант периплазматического экстракта содержал Z варианты в форме слитых конструкции с ABD, экспрессированные в виде AQHDEALE-[Z#####]-VDYV-[ABD]-YVPG ( и др., выше). Z##### означает отдельные Z варианты из 58 аминокислотных остатков.

ELISA-скрининг Z вариантов. Связывание Z вариантов с человеческим IL-17А оценивали в ELISA анализах. На 96-луночные планшеты для ELISA с половинным объемом лунок (Costar, № по каталогу 3690) в течение ночи при 4°С наносили козье антитело к ABD (собственного изготовления) в концентрации 2 мкг/мл, разбавленное в буфере для нанесения покрытия (50 мМ карбонат натрия, рН 9,6; Sigma, № по каталогу С3041). Раствор антитела сливали, лунки промывали водой и блокировали, используя по 100 мкл PBSC (PBS, дополненный 0,5% казеина) в течение 1-3 ч при КТ. Блокирующий раствор отбрасывали, в лунки добавляли по 50 мкл растворов периплазмы и инкубировали в течение 1,5 ч при КТ при медленном перемешивании. В качестве холостого контроля добавляли PBST, 0,05%, вместо образца периплазмы. Супернатанты сливали и лунки 4 раза промывали, используя PBST, 0,05%. Далее в каждую лунку добавляли по 50 мкл b-hIL-17A в концентрации 6,5 нМ в PBSC. Планшеты инкубировали в течение 1,5 ч при КТ, затем промывали, как описано выше. Конъюгированную со стрептавидином HRP (Thermo Scientific, № по каталогу N100), разбавленную 1:30000 в PBSC, добавляли в лунки и планшеты инкубировали в течение 1 ч. После промывания так, как описано выше, в лунки добавляли по 50 мкл субстрата ImmunoPure ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) (Thermo Scientific, № по каталогу 34021) и планшеты обрабатывали согласно рекомендациям производителя. Поглощение при 450 нм измеряли, используя многолуночный планшетный ридер Victor³ (Perkin Elmer).

Секвенирование. Параллельно с ELISA-скринингом все клоны отбирали для секвенирования. Фрагменты, полученные с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), амплифицировали из единичных колоний, секвенировали и анализировали по существу так, как описано в WO 2009/077175.

Результаты

Отбор IL-17А-связывающих Z вариантов методом фагового дисплея. Индивидуальные клоны получали после четырех циклов процедур отбора методом фагового дисплея в отношении b-hIL-17A и b-mIL-17A.

ELISA-скрининг Z вариантов. Клоны, полученные после четырех циклов процедуры отбора, подращивали в 96-луночных планшетах и проводили скрининг на hIL-17А-связывающую активность в ELISA. Было обнаружено, что 42 Z варианта дают 4-кратный или более сильный ответ по сравнению с холостым контролем (0,43-3,2 единицы оптической плотности (AU)) в отношении hIL-17A в концентрации 6,5 нМ. Никакого ответа не было получено для холостого контроля.

Секвенирование. Секвенирование осуществляли для клонов, полученных после четырех циклов процедуры отбора. Каждому варианту присваивали уникальный идентификационный номер #####, и отдельные варианты обозначали как Z#####. Аминокислотные последовательности Z вариантов длиной 58 аминокислотных остатков приведены на Фиг. 1 и в перечне последовательностей как SEQ ID NO: 1200-1216. Установленные IL-17A-связывающие мотивы простирались от 8-ого остатка до 36-ого остатка в каждой последовательности. Аминокислотные последовательности полипептидов длиной 49 аминокислотных остатков, предсказанные как образующие полный трехспиральный пучок в пределах каждого из этих Z вариантов, составляют от 7-ого остатка до 55-ого остатка.

Пример 2

Получение мономерных IL-17А-связывающих Z вариантов

В этом примере описывается общая методика субклонирования и получения His-меченных Z вариантов и Z вариантов в составе слитой конструкции с ABD, которые использовали повсеместно в описанных ниже экспериментах для определения характеристик.

Материалы и методы

Субклонирование Z вариантов с His-меткой. ДНК соответствующего Z варианта амплифицировали из библиотеки на основе вектора pAY02592. Для конструирования мономерных молекул Z варианта с N-концевой меткой His₆ применяли стратегию субклонирования, используя стандартные методы молекулярной биологии (по существу так, как описано в WO 2009/077175 для Z вариантов, связывающихся с другой мишенью). Фрагменты Z гена субклонировали в экспрессирующий вектор pAY01448, в результате получая кодируемую последовательность MGSSHHHHHHLQ-[Z#####]-VD.

Субклонирование Z вариантов в форме слитой с ABD конструкции. ДНК соответствующего Z варианта амплифицировали из библиотеки на основе вектора pAY02592. ПЦР проводили, используя подходящие пары праймеров, полученные генные фрагменты расщепляли ферментами рестрикции PstI и AccI и лигировали в экспрессирующий вектор pAY03362, расщепленный теми же ферментами, в результате получая слитый с ABD белок, при этом вариант ABD представляет собой РР013 (SEQ ID NO: 1224). Конструкции, кодируемые этими экспрессирующими векторами, представляли собой MGSSLQ-[Z#####]-VDSS-РР013.

Культивирование. Клетки Е. coli BL21(DE3) (Novagen) трансформировали плазмидами, содержащими генный фрагмент каждого соответствующего IL-17А-связывающего Z варианта, и культивировали при 37°С в 800 или 1000 мл среды TSB-YE, дополненной канамицином в концентрации 50 мкг/мл. Чтобы индуцировать экспрессию белка, добавляли IPTG в конечной концентрацим 0,2 мМ при OD₆₀₀, равной 2, и культивируемую смесь инкубировали при 37°С в течение еще 5 ч. Клетки собирали путем центрифугирования.

Очистка IL-17А-связывающих Z вариантов с меткой His₆. Приблизительно по 2-5 г каждого клеточного осадка после центрифугирования ресуспендировали в 30 мл буфера для связывания (20 мМ фосфат натрия; 0,5 М NaCl; 20 мМ имидазол, рН 7,4), дополненного Benzonase^® (Merck) до концентрации 15 ед./мл. После разрушения клеток клеточный дебрис удаляли центрифугированием и каждый супернатант наносили на 1-мл колонку для IMAC His-GraviTrap (GE Healthcare). Примеси удаляли, промывая буфером для промывки (20 мМ фосфат натрия; 0,5 М NaCl, 60 мМ имидазол, рН 7,4) и IL-17A-связывающие Z варианты далее элюировали элюирующим буфером (20 мМ фосфат натрия; 0,5 М NaCl; 500 мМ имидазол, рН 7,4).

Очистка IL-17А-связывающих Z вариантов в форме слитой с ABD конструкции. Приблизительно 1-2 г каждого клеточного осадка после центрифугирования ресуспендировали в 30 мл TST-буфера (25 мМ Трис-HCl, 1 мМ EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота), 200 мМ NaCl; 0,05% твина 20, рН 8,0), дополненного Benzonase^® (Merck). После разрушения клеток ультразвуковой обработкой и осветления центрифугированием каждый супернатант наносили самотеком на колонку с 1 мл агарозы с иммобилизованным лигандом - антителом к ABD (собственного изготовления). После промывания TST-буфером и 5 мМ NH₄Ac-буфером, рН 5,5, слитые с ABD Z варианты элюировали 0,1 М раствором НАс. К фракциям, элюируемым на стадии очистки аффинной хроматографией на агарозе с иммобилизованным антителом к ABD, добавляли ацетонитрил (ACN) до конечной концентрации 10% и образец загружали на 1-мл колонку с сорбентом Resource 15RPC для обращенно-фазовой хроматографии (RPC) (GE Healthcare), предварительно уравновешенную растворителем А для RPC (0,1% TFA (трифторуксусная кислота), 10% ACN, 90% воды). После промывания колонки растворителем А для RPC связавшиеся белки элюировали линейным градиентом 0-50% растворителя В для RPC (0,1% TFA, 80% ACN, 20% воды) в объеме 20 мл. Фракции, содержащие чистые слитые с ABD Z варианты, идентифицировали посредством анализа с использованием электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додеци л сульфата натрия (SDS-PAGE) и объединяли. После очистки посредством RPC буферный раствор в объединенном пуле заменяли на PBS (2,68 мМ KCl; 137 мМ NaCl; 1,47 мМ KH₂PO₄; 8,1 мМ Na₂HPO₄, рН 7,4), используя колонки PD-10 (GE Healthcare). В конце, слитые с ABD Z варианты очищали на 1-мл колонках EndoTrap^® red (Hyglos), для обеспечения низкого содержания эндотоксинов.

Концентрации белка определяли путем измерения поглощения при 280 нм, используя спектрофотометр NanoDrop^® ND-1000 и значение коэффициента экстинкции для соответствующего белка. Чистоту анализировали посредством SDS-PAGE с окрашиванием кумасси голубым, а идентичность каждого очищенного Z варианта подтверждали, используя анализ с применением жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (LC/MS).

Результаты

Культивирование и очистка. IL-17А-связывающие Z варианты с меткой His₆, а также Z варианты, слитые по своему С-концу с ABD, экспрессировали в виде растворимых генных продуктов в Е. coli. Количество очищенного белка из приблизительно 1-5 г осадка бактерий после центрифугирования определяли спектрофотометрически путем измерения поглощения при 280 нм, и оно составляло от приблизительно 5 мг до 20 мг для разных IL-17А-связывающих Z вариантов. SDS-PAGE-анализ каждого конечного препарата белка показал, что в большинстве случаев они содержали IL-17А-связывающий Z вариант. Точную идентичность и молекулярную массу каждого Z варианта подтверждали с использованием HPLC-MS анализа.

Пример 3

Оценка блокирующей способности первичных IL-17А-связывающих Z вариантов

Нормальные фибробласты кожи человека (NHDF) продуцируют IL-6 после стимулирования под действием IL-17A (Chang and Dong, 2007, Cell Research, 17: 435-440), и количество высвободившегося в супернатант IL-6 коррелирует с концентрацией добавленного IL-17A. Таким образом, блокирование IL-17A приводит к снижению содержания IL-6 в супернатанте, что можно определить количественно. В этом примере данный анализ использовали для оценки блокирующей способности IL-17А-связывающих Z вариантов Z06260 (SEQ ID NO: 1200), Z06282 (SEQ ID NO: 1206) и Z06455 (SEQ ID NO: 1214), как таковых или в виде конструкции, слитой с ABD (РР013; SEQ ID NO: 1224).

Материалы и методы

Анализ His₆-меченных Z-вариантов с использованием NHDF. Клетки NHDF (Lonza, № по каталогу СС-2511) культивировали в основной питательной среде для культивирования фибробластов (Lonza, № по каталогу СС-3132), дополненной стимуляторами роста (Lonza, № по каталогу СС-5034). За один день до проведения эксперимента 10⁵ клеток рассевали в объеме 100 мкл из расчета на одну лунку в 96-луночные культуральные планшеты (Greiner, № по каталогу 655180). В день проведения эксперимента готовили разведения IL-17А-специфичных Z вариантов His₆-Z06260, His₆-Z06282 и His₆-Z06455 в отдельном 96-луночном планшете. Z варианты титровали, используя постадийное трехкратное разведение, от 3130 нМ до 0,2 нМ в среде, содержащей 0,031 нМ hIL-17A. Кроме этого получали стандартную кривую для hIL-17A (0,002-31 нМ), а также готовили контроли, содержащие среду с 0,031 нМ nIL-17A или одну только среду. Среду в планшете с культивированными в течение ночи клетками NHDF отбрасывали. Тестируемые образцы, образцы для стандартной кривой и контроли переносили в содержащий клетки планшет.Клетки NHDF стимулировали в течение 18-24 ч при 37°С и после этого определяли количественное содержание IL-6 в супернатантах, используя IL-6-специфичный ELISA, описанный ниже.

Анализ His₆-меченных и слитых с ABD Z вариантов с использованием NHDF. Клетки NHDF готовили так, как описано выше. В день проведения эксперимента в отдельном 96-луночном планшете готовили разведения IL-17A-специфичных конструкций Z вариантов His₆-Z06282, His₆-Z06455, Z06260-ABD, Z06282-ABD и Z06455-ABD. Данные конструкции Z вариантов титровали, используя постадийное четырехкратное разведение, от 780 нМ до 0,2 нМ в среде, содержащей 0,031 нМ IL-17A и 8 мкМ HSA. Получение стандартной кривой для IL-17A и контролей, а также последующий анализ проводили так, как описано выше.

ELISA для IL-6. На 96-луночные планшеты с половинным объемом лунок (Costar, № по каталогу 3690) наносили моноклональное антитело к IL-6 МАВ206 (R&D Systems) в концентрации 4 мкг/мл в PBS (50 мкл/лунка) и инкубировали в течение ночи при 4°С. На следующий день планшеты дважды промывали в водопроводной воде и блокировали смесью PBS + 2% BSA (Sigma) в течение 2 ч. Стандарт IL-6 (R&D Systems, № по каталогу 206-IL-50), оттитрованный в серии 2-кратных разведений (0,2-50 нг/мл), и супернатанты из используемого в анализе планшета для клеток добавляли в покрытые планшеты для ELISA (50 мкл/лунка) и инкубировали в течение 1,5 ч при КТ. Планшеты промывали 4 раза в автоматизированном промывочном аппарате для ELISA и добавляли биотинилированное поликлональное антитело к IL-6 (R&D Systems, BAF206) в концентрации 0,25 мкг/мл (50 мкл/лунка). После инкубации в течение 1 ч планшет промывали и в каждую лунку добавляли по 50 мкл раствора стрептавидина-HRP (Thermo Fisher, № по каталогу N100), разведенного в 8000 раз. Через еще один дополнительный час инкубации и последующей промывки в планшет добавляли 50 мкл ТМВ (Thermo Fisher, № по каталогу 34021) из расчета на одну лунку для развития окраски, и реакции останавливали добавлением 50 мкл 2 М раствора H₂SO₄. Поглощение при 450 нм измеряли в 96-луночном планшетном ридере (Victor³) и рассчитывали концентрацию IL-6 в каждом образце. Результаты представлены в виде процента от максимального образования IL-6, рассчитанного как:

где ABS означает поглощение.

Результаты

Результаты, полученные в первом анализе с использованием NHDF, показали, что все три Z варианта His₆-Z06260, His₆-Z06282 и His₆-Z06455 блокировали IL-17А-индуцированное образование IL-6 дозозависимым образом (Фиг. 2А). Значения IC₅₀ составляли приблизительно 40-140 нМ.

Анализ с использованием NHDF повторяли с теми же Z вариантами, слитыми с ABD, а также с добавление в анализ HSA, чтобы убедиться, что связывание с антигеном сохраняется при имитации условий in vivo. In vivo, ABD будет связываться с альбумином и приводить к более длительному полупериоду существования в кровотоке. Результаты показали, что все три связывающих вещества в составе слитой конструкции с ABD блокировали IL-17А-индуцированное образование IL-6 одинаково хорошо или лучше, чем His₆-меченные Z варианты (Фиг. 2В). Значения IC₅₀ из второго анализа суммированы в Таблице 3.

Пример 4

Проектирование и конструирование библиотеки первого созревания аффинности для IL-17А-связывающих Z вариантов

В этом примере проектировали и конструировали библиотеку созревания аффинности. Библиотеку использовали для отбора дополнительных IL-17A-связывающих Z вариантов. Обычно ожидается, что отборы из библиотек созревания аффинности приводят к получению связывающих веществ с повышенной аффинностью (Orlova et al., (2006) Cancer Res., 66(8): 4339-48). В этом исследовании создавали случайные одноцепочечные линкеры, используя синтез ДНК методом смешения-разделения, позволяющим осуществлять встраивание определенных кодонов в желаемые положения в ходе синтеза.

Материалы и методы

Проектирование библиотеки. Библиотека была основана на последовательностях IL-17А-связывающих Z вариантов, идентифицированных так, как описано в примере 1. В новой библиотеке 13 вариабельных положений в каркасе Z молекулы были смещены в сторону определенных аминокислотных остатков в соответствии со стратегией, основанной на последовательностях Z вариантов, определенных в SEQ ID NO: 1200-1216. По заказу, в DNA 2.0 (Menlo Park, СА, USA) с использованием синтеза ДНК методом смешения-разделения был создан ДНК линкер, содержащий следующую последовательность из 147 п.о.: (SEQ ID NO: 1248; рандомизированные кодоны обозначены NNN), содержащий кодирующую последовательность для частично рандомизированных спиралей 1 и 2 в соответствующей аминокислотной последовательности, фланкированную сайтами рестрикции для XhoI и SacI. Теоретическое распределение аминокислотных остатков в новой библиотеке, включающей 13 вариабельных Z положений (9, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 24, 25, 27, 28, 32 и 35) в каркасе Z молекулы, приведено в Таблице 4. Полученный теоретический размер библиотеки составляет 6,1×10⁹ вариантов.

Конструирование библиотеки. Библиотеку амплифицировали, используя полимеразу AmpliTaq Gold (Applied Biosystems, № по каталогу 4311816) в течение 12 циклов ПЦР, и объединенные продукты очищали, используя набор для ПЦР-очистки QIAquick (QIAGEN, № по каталогу 28106) в соответствии с рекомендациями поставщика. Очищенный пул рандомизированных фрагментов библиотеки расщепляли, используя ферменты рестрикции XnoI и SacI-HF (New England Biolabs, № по каталогу R0146L и № по каталогу R3156M, соответственно), и концентрировали, используя набор для ПЦР-очистки QIAquick. Далее, продукт подвергали гель-электрофорезу с использованием препаративного 2,5%-ного агарозного геля (агароза Nuisieve GTC, Cambrex, Invitrogen) и очищали из указанного геля, используя набор для экстракции из геля фирмы QIAGEN (QIAGEN, № по каталогу 28706) в соответствии с рекомендациями поставщика.

Фагмидный вектор pAY02592 (по существу такой, как pAffi1, описанный у et al., выше) подвергали рестрикции с использованием тех же ферментов, очищали, используя экстракцию смесью фенол/хлороформ и осаждение этанолом. Подвергнутые рестрикции фрагменты и подвергнутый рестрикции вектор лигировали в молярном соотношении 5:1, используя ДНК-лигазу Т4 (Fermentas, № по каталогу EL0011) в течение 2 ч при КТ, после чего инкубировали в течение ночи при 4°С. Лигированную ДНК извлекали, используя экстракцию смесью фенол/хлороформ и осаждение этанолом, после чего растворяли в 10 мМ Трис-HCl, рН 8,5. Таким образом, в полученной библиотеке на основе вектора pAY02592 были закодированы Z варианты, каждый из которых был слит с альбумин-связывающим доменом (ABD), происходящим из стрептококкового белка G.

Реакционные смеси после лигирования (приблизительно 160 нг ДНК/трансформация) использовали для электропорации электрокомпетентных клеток Е. coli ER2738 (Lucigen, Middleton, WI, USA; 50 мкл). Сразу же после проведения электропорации добавляли приблизительно 1 мл среды для извлечения (поставляемой вместе с клетками Е. coli ER2738). Трансформированные клетки инкубировали при 37°С в течение 60 мин. Отбирали образцы для титрования и для определения числа трансформантов. После этого клетки объединяли и культивировали в течение ночи при 37°С в 1 л среды TSB-YE, дополненной 2% глюкозы, тетрациклином в концентрации 10 мкг/мл и ампициллином в концентрации 100 мкг/мл. Клетки собирали центрифугированием в течение 15 мин при 4000 g и ресуспендировали в растворе PBS/глицерин (приблизительно 40% глицерина). Отбирали аликвоты клеток и хранили при -80°С. Клоны из библиотеки Z вариантов секвенировали для проверки содержимого и оценки результатов конструирования библиотеки по сравнению с проектом библиотеки. Секвенирование выполняли так, как описано в примере 1, и подтверждали расположение аминокислот.

Приготовление концентрированной суспензии фагов. Концентрированную суспензию фагов, содержащую фагмидную библиотеку, готовили в ферментере емкостью 20 л (Belach Bioteknik). Клетки из концентрированной суспензии в глицерине, содержащей фагмидную библиотеку, инокулировали в 10 л среды TSB-YE, дополненной глюкозой в концентрации 1 г/л, ампициллином в концентрации 100 мг/л и тетрациклином в концентрации 10 мг/л. Когда оптическая плотность суспензии клеток при 600 нм (OD₆₀₀) достигала значения 0,52, приблизительно 1,7 л культивируемой смеси инфицировали, используя 5-кратный молярный избыток хелперного фага М13К07. Клетки инкубировали в течение 30 мин, после чего ферментер заполняли до 10 л многокомпонентной средой для ферментации ((NH₄)₂SO₄ - 2,5 г/л; дрожжевой экстракт - 5,0 г/л; триптон - 30 г/л; K₂HPO₄ - 2 г/л; KH₂PO₄ - 3 г/л; Na₃C₆H₅O₇⋅2 H₂O - 1,25 г/л; противовспенивающее средство Breox FMT30 - 0,1 мл/л). Добавляли следующие компоненты: 10 мл карбенициллина, 25 мг/мл; 5 мл канамицина, 50 мг/мл; 1 мл 1 М IPTG, 17,5 мл/л 1,217 М MgSO₄ и 5 мл раствора микроэлементов (129 мМ FeCl₃; 36,7 мМ ZnSO₄; 10,6 мМ CuSO₄; 78,1 мМ MnSO₄; 94,1 мМ CaCl₂, растворенных в 1,2 М HCl). Началом периодического культивирования с подпиткой и ограничением глюкозы считался момент, когда в реактор начинал поступать раствор глюкозы в концентрации 600 г/л (3,5 г/ч в начале, 37,5 г/ч в конце культивирования через 20 ч). Посредством автоматического добавления 25%-ного раствора NH₄OH значение рН поддерживали при 7. Добавляли подачу воздуха (5 л/мин) и мешалку настраивали на 500 об./мин. Через 24 ч периодического культивирования с подпиткой значение OD₆₀₀ составляло 19,4. Клетки, находящиеся в культивируемой смеси, собирали центрифугированием при 15900 g. Фаговые частицы дважды осаждали из супернатанта в смеси ПЭГ/NaCl, фильтровали и растворяли в PBS и глицерине, как описано в примере 1. Концентрированные суспензии фагов хранили при -80°С до применения при проведении отбора.

Результаты

Конструирование библиотеки. Новую библиотеку проектировали на основе набора IL-17А-связывающих Z вариантов с проверенными связывающими свойствами (пример 1 и 3). Теоретический размер спроектированной библиотеки составлял 6,1×10⁹ Z вариантов. Фактический размер библиотеки, определенный посредством титрования после трансформации клеток Е. coli ER2738, составлял 4,5×10⁹ трансформантов.

Качество библиотеки тестировали посредством секвенирования 96 трансформантов и путем сравнения их фактических последовательностей с теоретически спроектированными. Было показано, что содержание фактической библиотеки по сравнению со спроектированной библиотекой является удовлетворительным. Таким образом, была успешно сконструирована библиотека созревания аффинности потенциальных IL-17А-связывающих веществ.

Пример 5

Отбор, скрининг и определение характеристик Z вариантов библиотеки первого созревания аффинности

Материалы и методы

Отбор IL-17А-связывающих Z вариантов методом фагового дисплея. Биотинилирование целевых белков hIL-17А и mIL-17A проводили так, как описано в примере 1. Отборы методом фагового дисплея с использованием новой библиотеки молекул Z вариантов, сконструированной так, как описано в примере 4, осуществляли за четыре цикла в отношении hIL-17A и mIL-17A по существу так, как описано в примере 1, со следующими исключениями. Исключение 1: в качестве буфера для отбора использовали PBST, 0,1%. Для проведения отбора в буфер для отбора добавляли фетальную телячью сыворотку (FCS, Gibco, № по каталогу 10108-165) и сывороточный альбумин человека (HSA, Albucult, Novozymes, № по каталогу 230-005) до конечной концентрации 10% и 1,5 мкМ, соответственно. Исключение 2: стадию предварительного отбора осуществляли в цикле 1 с инкубированием концентрированной суспензии фагов с SA-гранулами Исключение 3: все флаконы и гранулы, использованные в процедуре отбора, предварительно блокировали PBS, дополненным 3% BSA и 0,1% твина 20. Исключение 4: промежуток времени для отбора составлял 140, 70, 60 и 50 мин в циклах 1, 2, 3 и 4, соответственно.

Обзор стратегии отбора с описанием условий повышенной жесткости на последующих циклах, полученных с использованием сниженной концентрации мишени и увеличенного числа промывок, показан в Таблице 5.

Пути 1-3 в цикле 1 подразделяли со второго по четвертый циклы с получением в общей сложности шести путей (от 1-1 до 3-3) в цикле 2, шести шести путей (от 1-1-1 до 3-3-1) в цикле 3 и 24 путей (от 1-1-1-1а до 3-3-1-2b) в цикле 4. Промывки проводили в течение 1 мин, используя PBST, 0,1%. Однако, для путей 1-3 в цикле 3 одна из промывок длилась 10 мин.

По окончании последней промывки в цикле 4 комплексы мишень-фаг на SA-гранулах из всех путей разделяли на две равные части. Связавшиеся фаговые частицы из первой части незамедлительно элюировали, в то время как вторую часть обрабатывали путем промывания в течение ночи, после чего фаговые частицы элюировали. Связавшиеся фаговые частицы элюировали, применяя две разные методики: 1) с использованием раствора глицина-HCl, рН 2,2, как в примере 1, или 2) 500 мкл раствора, содержащего 100 мМ фосфат натрия, 150 мМ хлорид натрия, рН 5,5, и нейтрализации с использованием 500 мкл PBS.

Амплификация фаговых частиц. Амплификацию фаговых частиц между циклами 1 и 2 отбора проводили по существу так, как описано в примере 1, со следующими тремя исключениями. Исключение 1: для амплификации фагов использовали Е. coli ER2738. Исключение 2: хелперный фаг М13К07 использовали в 5-кратном избытке. Исключение 3: амплификацию фаговых частиц между циклами 2 и 4 отбора осуществляли так, как приведено ниже: после инфицирования Е. coli ER2738 в логарифмической фазе фаговыми частицами, добавляли раствор TSB, дополненный 2% глюкозы, тетрациклином в концентрации 10 мкг/мл и ампициллином в концентрации 100 мкг/мл, и затем инкубировали с вращением в течение 30 мин при 37°С. Далее бактерии инфицировали хелперным фагом М13K07. Инфицированные бактерии собирали центрифугированием, ресуспендировали в среде TSB-YE, дополненной 100 мкМ IPTG, канамицином в концентрации 25 мкг/мл и ампициллином в концентрации 100 мкг/мл, и выращивали в течение ночи при 30°С. Культивируемые в течение ночи смеси центрифугировали и фаговые частицы в супернатанте дважды осаждали, используя буферный раствор ПЭГ/NaCl. Напоследок фаги ресуспендировали в буфере для отбора, после чего начинали следующий цикл отбора.

На заключительном цикле отбора бактерии, находящиеся в логарифмической фазе роста, инфицировали элюатом и разбавляли, после чего рассевали на чашках с ТВАВ (30 г/л; триптозный кровяной агар, основа; Oxoid, № по каталогу СМ0233 В), дополненным ампициллином в концентрации 0,2 г/л, с целью образования отдельных колоний для использования в скрининге посредством ELISA.

Секвенирование потенциальных связывающих веществ. На секвенирование отбирали индивидуальные клоны из разных путей отбора. Амплификацию генных фрагменты и анализ последовательностей генных фрагментов проводили по существу так, как описано в примере 1.

ELISA-скрининг Z вариантов. Отдельные колонии, содержащие Z варианты (экспрессированные в виде белков, представляющих собой слитые с ABD конструкции Z вариантов, которые описаны в примере 1), отбирали случайным образом из отобранных клонов библиотеки созревания аффинности и выращивали, культивируя по существу так, как описано в примере 1. Приготовление супернатантов периплазмы и ELISA-скрининги также проводили по существу так, как описано в примере 1, со следующими двумя исключениями. Исключение 1: биотинилированный hIL-17A использовали в концентрации 0,4 нМ. Исключение 2: периплазматическую фракцию Z варианта Z06282 (SEQ ID NO: 1206) из первичного отбора использовали в качестве положительного контроля.

Анализ EC₅₀ для Z вариантов. Отобранные IL-17А-связывающие Z варианты подвергали анализу на взаимодействие с b-hIL-17А в серийных разведениях, используя ELISA, как описано выше. Биотинилированный целевой белок добавляли в концентрации 6 нМ и разбавляли постадийно 1:3 до 8 пМ. С целью контроля фона, Z варианты также анализировали без добавления целевого белка. Образцы периплазмы, содержащие первичное IL-17A-связывающее вещество Z06282 (SEQ ID NO: 1206), включали в качестве положительного контроля. Анализ данных проводили, используя GraphPad Prism 5 и метод нелинейной регрессии, и рассчитывали значения ЕС₅₀ (полумаксимальная эффективная концентрация).

Результаты

Отбор подвергнутых созреванию аффинности IL-17А-связывающих Z вариантов методом фагового дисплея. Отбор проводили в общей сложности для 24 параллельных путей, содержащих по четыре цикла каждый. Разные пути отбора отличались по концентрации мишени, видовому происхождению мишени (человеческий IL-17A или мышиный IL-17A), продолжительности отбора, условиям промывки и рН элюирующего буфера. Было показано, что клоны, происходящие из путей отбора с использованием только человеческого IL-17 и элюирования при рН 2,2, демонстрировали наилучшую эффективность при скрининге с использованием ELISA.

Секвенирование. Отобранные случайным образом клоны секвенировали. Каждому отдельному Z варианту присваивали идентификационный номер, Z#####, как описано в примере 1. В общей сложности идентифицировали 932 новых уникальных молекул Z вариантов. Для 494 вариантов с наилучшей эффективностью при ELISA-скрининге ниже приведены аминокислотные последовательности для Z вариантов длиной 58 аминокислотных остатков на Фиг. 1 как SEQ ID NO: 1-3, SEQ ID NO: 11-16, SEQ ID NO: 28-31, SEQ ID NO: 36-63 и SEQ ID NO: 67-519. Установленные IL-17А-связывающие мотивы составляют от 8-ого остатка до 36-ого остатка в каждой последовательности. Аминокислотные последовательности полипептидов длиной 49 аминокислотных остатков, предсказанные как образующие полный трехспиральный пучок в пределах каждого из этих Z вариантов, составляют от 7-ого остатка до 55-ого остатка.

ELISA-скрининг Z вариантов. Клоны, полученные после четырех циклов процедуры отбора, подращивали в 96-луночных планшетах и проводили скрининг по связывающей активности с человеческим IL-17A, используя ELISA. Анализировали все отобранные случайным образом клоны. Было обнаружено, что 494 из 932 уникальных Z вариантов дают 2-кратный или более сильный ответ по сравнению с холостым контролем (0,15-2,0 AU) в отношении hIL-17А в концентрации 0,4 нМ. Положительные сигналы были продемонстрированы для клонов, происходящих из всех путей отбора. Холостые контроли имели поглощение, соответствующее 0,055-0,075 AU.

Анализ ЕС₅₀ для Z вариантов. Подгруппу Z вариантов отбирали на основании описанного выше эксперимента с ELISA-скринингом (поглощение более 1,25 AU) или на основании разнообразия аминокислотной последовательности и подвергали титрованию с мишенью в формате ELISA. Образцы периплазмы инкубировали с b-hIL-17A в серийных разведениях в диапазоне от 6 нМ до 8 пМ. Образец периплазмы, содержащий Z06282 (SEQ ID NO: 1206), идентифицированный в ходе первичного отбора, включали в качестве положительного контроля. Полученные значения анализировали и рассчитывали соответствующие значения ЕС₅₀ (Таблица 6).

Пример 6

Проектирование и конструирование библиотеки второго созревания аффинности IL-17А-связывающих Z вариантов

В этом примере библиотеку второго созревания аффинности конструировали по существу так, как описано в примере 4. Эту библиотеку использовали для процедур отбора дополнительных IL-17А-связывающих Z вариантов.

Материалы и методы

Проектирование библиотеки. Библиотека была основана на последовательностях IL-17А-связывающих Z вариантов, отобранных и охарактеризованных в примере 5. В новой библиотеке 13 положений в каркасе Z молекулы, которые варьировали в библиотеке созревания аффинности, описанной в примерах 4 и 5, были смещены в сторону определенных аминокислотных остатков в соответствии со стратегией, основанной на последовательностях Z вариантов для 37 вариантов с наилучшей эффективностью в анализе ЕС₅₀ (Таблица 6). По заказу, в DNA 2.0 с использованием синтеза ДНК методом смешения-разделения был создан ДНК линкер. Он содержал следующие 147 п.о., кодирующие частично рандомизированные спирали 1 и 2 в аминокислотной последовательности: 5'- (SEQ ID NO: 1249; рандомизированные кодоны обозначаются NNN), фланкированной сайтами рестрикции XnoI и SacI. Теоретическое распределение аминокислотных остатков в новой библиотеке, включающей шесть вариабельных аминокислотных положений (11, 14, 18, 25, 28 и 32) и семь постоянных аминокислотных положений (9, 10, 13, 17, 24, 27 и 35) в каркасе Z молекулы, приведено в Таблице 7. Полученный теоретический размер библиотеки составляет 3,9×10⁶ вариантов.

Конструирование библиотеки. Библиотеку конструировали по существу так, как описано в примере 4, со следующим исключением: клетки культивировали в течение ночи в 0,5 л среды TSB-YE, дополненной 2% глюкозы, тетрациклином в концентрации 10 мкг/мл и ампициллином в концентрации 100 мкг/мл.

Приготовление концентрированной суспензии фагов. Концентрированную суспензию фагов, содержащих фагмидную библиотеку, готовили во встряхиваемых колбах. Клетки из концентрированной суспензии в глицерине, содержащие фагмидную библиотеку, инокулировали в 0,5 л среды TSB-YE, дополненной 2% глюкозы, тетрациклином в концентрации 10 мкг/мл и ампициллином в концентрации 100 мкг/мл. Культивируемые смеси выращивали при 37°С до достижения значения OD₆₀₀, равного 0,6, затем приблизительно 83 мл культивируемой смеси инфицировали, используя 5-кратный молярный избыток хелперного фага М13К07, и инкубировали в течение 40 мин при 37°С. Клетки в культивируемых смесях собирали центрифугированием, суспендировали в среде TSB-YE, дополненной ампициллином в концентрации 100 мкг/мл, канамицином в концентрации 25 мкг/мл и 0,1 мМ IPTG, и выращивали при 30°С в течение 18 ч. После проведения культивирования клетки собирали центрифугированием при 4000 g и фаговые частицы, остающиеся в среде, после этого дважды осаждали в ПЭГ/NaCl, фильтровали и суспендировали в PBS и глицерине, как описано в примере 1. Концентрированные суспензии фагов хранили при -80°С до применения при проведении отбора.

Результаты

Конструирование библиотеки. Новую библиотеку проектировали на основе набора IL-17А-связывающих Z вариантов с проверенными связывающими свойствами (пример 5). Теоретический размер спроектированной библиотеки составлял 3,9×10⁶ Z вариантов. Фактический размер библиотеки, определенный посредством титрования после трансформации клеток Е. coli ER2738, составлял 1,4×10⁹ трансформантов.

Качество библиотеки тестировали посредством секвенирования 96 трансформантов и путем сравнения их фактических последовательностей с теоретически спроектированными. Было показано, что содержание фактической библиотеки по сравнению со спроектированной библиотекой является удовлетворительным. Таким образом, была успешно сконструирована библиотека созревания аффинности потенциальных IL-17А-связывающих веществ.

Пример 7

Отбор, скрининг и определение характеристик Z вариантов из библиотеки второго созревания аффинности

Материалы и методы

Отбор IL-17А-связывающих Z вариантов методом фагового дисплея. Биотинилирование целевого белка hIL-17A проводили так, как описано в примере 1. Отборы методом фагового дисплея с использованием библиотеки второго созревания аффинности молекул Z вариантов, сконструированной так, как описано в примере 6, в отношении hIL-17A, проводили по существу так, как описано в примере 5, со следующими исключениями. Исключение 1: процедуры отбора проводили в растворе или на твердой фазе при КТ. Исключение 2: время, необходимое для отбора, составляло 60 мин, 10 мин или 1 мин в цикле 1 и 30 мин, 4 мин или 10 с в циклах 2, 3 и 4. После отбора в растворе следовал захват комплексов мишень-фаг на SA-гранулах, как описано в примере 1. Исключение 3: во время отбора на твердой фазе мишень захватывали на SA-гранулах до отбора.

Обзор стратегии отбора, обобщающий различия между отбором в растворе и отбором на твердой фазе, а также условия повышенной жесткости в последующих циклах, полученные с использованием сниженной концентрации мишени и увеличенного числа промывок, показан в Таблице 8.

Пути 1-6 в цикле 1 подразделяли со второго по четвертый циклы с получением в общей сложности семи путей (от 1-1 до 6-1) в цикле 2, восьми путей (от 1-1-1 до 6-1-1) в цикле 3 и 16 путей (от 1-1-1-1 до 6-1-1-1) в цикле 4. Промывки проводили в течение 1 мин, используя PBST, 0,1%. Однако, для путей 2-1-1, 3-1-1 и 5-1-1 в цикле 3 одна из промывок длилась 15 мин.

По окончании последней промывки в цикле 4 комплексы мишень-фаг на SA-гранулах из пяти путей (1-1-1-1, 1-2-1-2, 3-1-1-1, 4-1-1-1 и 5-1-1-2) были разделены на две одинаковых части. Связанные фаговые частицы из первой части незамедлительно элюировали, в то время как вторую часть подвергали промывке в течение приблизительно 65 ч, после чего проводили элюирование фаговых частиц. Связанный фаг элюировали, используя раствор глицина-HCl, рН 2,2, как описано в примере 1.

Амплификацию фаговых частиц между циклами отбора проводили по существу так, как описано в примере 1.

Секвенирование потенциальных связывающих веществ. Индивидуальные клоны из различных путей отбора отбирали для секвенирования. Амплификацию и анализ последовательностей генных фрагментов проводили по существу так, как описано в примере 1.

ELISA-скрининг Z вариантов. Отдельные колонии, содержащие Z варианты (экспрессированные в виде белков, представляющих собой слитые с ABD конструкции Z вариантов, которые описаны в примере 1), отбирали случайным образом из отобранных клонов IL-17A библиотеки второго созревания аффинности и выращивали, культивируя по существу так, как описано в примере 1. Приготовление супернатантов периплазмы и ELISA-скрининги проводили по существу так, как описано в примере 1, со следующими двумя исключениями. Исключение 1: биотинилированный hIL-17A использовали в концентрации 0,2 или 0,33 нМ. Исключение 2: периплазматическую фракцию Z варианта Z10241 (SEQ ID NO: 11), идентифицированного в отборах из библиотеки первого созревания аффинности, использовали в качестве положительного контроля, а холостой контроль создавали путем замены стадии с использованием периплазмы на добавление PBST, 0,05%.

Анализ ЕС₅₀ для Z вариантов. Отобранные IL-17А-связывающие Z варианты подвергали анализу на взаимодействие с b-hIL-17А в серийных разведениях, используя ELISA, как описано в примере 5. Биотинилированный белок добавляли в концентрации 10 нМ, восемь раз разбавляли постадийно 1:2, затем один раз в отношении 1:5 до 8 пМ. С целью контроля фона Z варианты также анализировали без добавления целевого белка. Образец периплазмы, содержащий подвергнутый созреванию аффинности Z вариант Z10241 (SEQ ID NO: 11), включали в качестве положительного контроля. Анализ данных проводили, используя GraphPad Prism 5 и метод нелинейной регрессии, и рассчитывали значения ЕС₅₀.

Результаты

Отбор IL-17А-связывающих Z вариантов из библиотеки второго созревания аффинности методом фагового дисплея. Отбор проводили в общей сложности из 16 параллельных путей, каждый из которых содержал четыре цикла. Пути отбора отличались концентрацией мишени, продолжительностью отбора, условиями промывки и тем, что отбор проводили в растворе или на твердой фазе.

Секвенирование. Отобранные случайным образом клоны секвенировали. Каждому отдельному Z варианту присваивали идентификационный номер, Z#####, как описано в примере 1. В общей сложности идентифицировали 759 новых уникальных молекул Z вариантов.

Для 704 вариантов с наилучшей эффективностью при ELISA-скрининге ниже приведены аминокислотные последовательности для Z вариантов длиной 58 аминокислотных остатков на Фиг. 1 как SEQ ID NO: 5-10, SEQ ID NO: 17-27, SEQ ID NO: 32-35, SEQ ID NO: 64-66 и SEQ ID NO: 520-1199. Установленные IL-17А-связывающие мотивы составляют от 8-ого остатка до 36-ого остатка в каждой последовательности. Аминокислотные последовательности полипептидов длиной 49 аминокислотных остатков, предсказанные как образующие полный трехспиральный пучок в пределах каждого из этих Z вариантов, составляют от 7-ого остатка до 55-ого остатка.

ELISA-скрининг Z вариантов. Клоны, полученные после четырех циклов процедуры отбора, подращивали в 96-луночных планшетах и проводили скрининг по связывающей активности с hIL-17A, используя ELISA. Анализировали все отобранные случайным образом клоны. Было обнаружено, что 704 из 759 уникальных Z вариантов дают 2-кратный или более сильный ответ по сравнению с холостыми контролями (0,22-2,2 AU) в отношении hIL-17A в концентрации 0,2 или 0,33 нМ. Положительные сигналы были получены для клонов, происходящих из всех путей отбора. Средний ответ от холостых контролей составлял 0,11 AU, на основании репрезентативного набора планшетов.

Анализ EC₅₀ для Z вариантов. Подгруппу IL-17А-связывающих Z вариантов отбирали на основании результатов описанного выше эксперимента с ELISA (Z вариантов с поглощением, превышающим ответ от положительного контроля Z10241, SEQ ID NO: 11) и подвергали титрованию с мишенью в формате ELISA, как описано в примере 5. Полученные значения анализировали и рассчитывали соответствующие значения ЕС₅₀ (Таблица 9).

Пример 8

Определение характеристик in vitro в подгруппе подвергнутых созреванию аффинности IL-17А-связывающих Z вариантов

Материалы и методы

Субклонирование и получение Z вариантов с N-концевой меткой His₆ выполняли так, как описано в примере 2. Один дополнительный вариант, His₆-Z15167 (SEQ ID NO: 4), создавали с использованием сайт-специфического мутагенеза в отношении His₆-Z10532 (SEQ ID NO: 1) с замещением D в положении 25 на А. Получение His₆-Z15167 осуществляли так, как описано выше для других Z вариантов.

Анализ с использованием спектроскопии кругового дихроизма (CD). Очищенные His₆-меченные Z варианты разбавляли до концентрации 0,5 мг/мл в PBS. Для каждого разбавленного Z варианта получали спектр CD при 250-195 нм и 20°С. Помимо этого, для определения температуры плавления (Т_пл) проводили измерения при варьируемой температуре (VTM). При проведении VTM измеряли поглощение при 221 нм, при этом температуру поднимали от 20 до 90°С со скоростью изменения температуры 5°С/мин. Чтобы изучить способность Z вариантов к рефолдингу, после процедуры нагревания получали новый спектр CD при 20°С. Измерения CD проводили на спектрополяриметре Jasco J-810 (Jasco Scandinavia АВ), используя ячейку с длиной оптического пути 1 мм.

ELISA-скрининг связывания с IL-17. На 96-луночные планшеты с половинным объемом лунок (Costar, 3690) наносили в течение ночи при 4°С hIL-17А в концентрации 1 мкг/мл в PBS в объеме 50 мкл/лунка. В день проведения анализа планшет дважды промывали водопроводной водой и затем блокировали смесью PBS + 2% BSA (Sigma) в течение 2 ч. Z10241 (SEQ ID NO: 11) использовали в качестве стандарта и титровали в сериях с 3-кратным разведеним (300-0,005 нг/мл), другие Z варианты добавляли в четырех разных разведениях в покрытый планшет для ELISA (50 мкл/лунка) и инкубировали в течение 1,5 ч при КТ. Планшет промывали 4 раза в автоматизированном промывочном аппарате для ELISA и добавляли козье антитело к Z варианту в концентрации 2 мкг/мл (50 мкл/лунка). Через 1 ч инкубации планшет промывали, и в каждую лунку добавляли по 50 мкл разбавленного в 5000 раз конъюгированного с HRP антитела к IgG козы (DAKO). После еще 1 ч инкубации, для развития окраски планшет промывали 50 мкл ТМВ (Thermo Fisher, 34021) из расчета на одну лунку и реакцию останавливали, добавляя 50 мкл 2 М раствора H₂SO₄. Измерения в планшетах проводили, используя многолуночный планшетный ридер Victor³ (Perkin Elmer).

Кинетический анализ с использованием Biacore. Кинетические константы (k_on и k_off) и характеризующую аффинность константу (K_D) для человеческого IL-17А определяли для 27 His₆-меченных Z вариантов. hIL-17А иммобилизовали в проточной ячейке на слое карбоксилированного декстрана на поверхности СМ5 чипа (GE Healthcare, № по каталогу BR100012). Иммобилизацию проводили, используя для сочетания реакции с участием аминогрупп в соответствии с протоколом производителя и используя HBS-EP (0,01 М HEPES (2-гидроксиэтил-пиперазин-2-этансульфоновая кислота), рН 7,4; 0,15 М NaCl, 3 мМ EDTA; 0,005% (об./об.) поверхностно-активного вещества Р20; GE Healthcare, № по каталогу BR100188) в качестве рабочего буфера. Поверхность одной проточной ячейки чипа была активирована и дезактивирована для применения в качестве холостой пробы в процессе пропусканий аналита. В кинетическом эксперименте в качестве рабочего буфера использовали HBS-EP, и скорость потока составляла 50 мкл/мин. Каждый из аналитов, т.е. Z вариантов, разбавляли в HBS-EP буфере до конечных концентраций 100 нМ, 20 нМ и 4 нМ и вводили в течение 4 мин с последующей диссоциацией в рабочем буфере в течение 8 мин. Через 8 минут диссоциации поверхности регенерировали, применяя два пропускания 10 мМ раствора HCl. Кинетические константы рассчитывали из сенсограмм, используя модель 1:1 Ленгмюра в программном обеспечении BiaEvaluation 4.1 (GE Healthcare).

Анализ специфичности связывания с использованием Biacore. Взаимодействия трех His₆-меченных IL-17А-связывающих Z вариантов (Z10508 (SEQ ID NO: 2), Z10532 (SEQ ID NO: 1) и Z15167 (SEQ ID NO: 4)) с hIL-17A (SEQ ID NO: 1226), hIL-17F (SEQ ID NO: 1228; R&D Systems, № по каталогу 1335-IL/CF) и гетеродимером человеческого IL-17A/F (R&D Systems, № по каталогу 5194-IL-025/CF) анализировали на приборе Biacore 2000. Три разных IL-17-связывающих варианта иммобилизовали в проточных ячейках на слое карбоксилированного декстрана на поверхности СМ5 чипа. Иммобилизацию проводили, используя для сочетания реакции с участием аминогрупп в соответствии с протоколом производителя и используя HBS-EP в качестве рабочего буфера. Поверхность одной проточной ячейки чипа была активирована и дезактивирована для применения в качестве холостой пробы в процессе пропускания аналита. В эксперименте по связыванию HBS-EP использовали в качестве рабочего буфера, и скорость потока составляла 50 мкл/мин. Каждый из аналитов, т.е. Z вариантов, разбавляли в рабочем HBS-EP буфере до конечных концентраций 4, 20, 100 и 500 нМ и вводили в течение 4 мин. После 15 мин диссоциации, поверхности регенерировали, используя четыре пропускания 10 мМ раствора HCl. Результаты анализировали, используя программное обеспечение BiaEvaluation.

Блокирование IL-17А-индуцированного образования IL-6 в анализе с использованием NHDF. Анализ и количественное определение с использованием NHDF проводили с примененим IL-6-специфичного ELISA по существу так, как описано в примере 3. Кратко, за один день до проведения эксперимента по 5000 клеток из расчета на одну лунку рассевали в 96-луночные культуральные планшеты с половинным объемом лунок в объеме 100 мкл. В день проведения эксперимента в отдельном 96-луночном планшете готовили разведения 36 IL-17А-специфичных Z вариантов. Данные Z варианты титровали, используя постадийное трехкратное разведение от 4690 нМ до 0,08 нМ в среде, содержащей 0,9 нМ hIL-17А. Получали стандартную кривую для hIL-17A (6,2-0,0001 нМ), а также готовили контроли, содержащие среду с 0,9 нМ NL-17A или одну только среду.

Результаты

Анализ с использованием CD. Спектры CD, полученные для IL-17A-связывающих Z вариантов с меткой His₆, показали, что каждый из них имеет α-спиральную структуру при 20°С. Результаты измерений с варьируемой температурой, где определяли температуры плавления (Т_пл), показаны в Таблице 10. Для всех IL-17А-связывающих Z вариантов наблюдали обратимый фолдинг при наложении спектров, полученных до и после нагревания до 90°С.

Анализ IL-17А-связывающей способности с использованием ELISA. Очищенные молекулы His₆-меченных Z вариантов после первого и второго раунда созревания аффинности подвергали скринингу по их способности связывать IL-17A в анализе с использованием ELISA. Результаты показаны на Фиг. 3 в виде процента связывающей способности по сравнению с вариантом Z10241.

Кинетический анализ с использованием Biacore. Взаимодействия 28 His₆-меченных IL-17А-связывающих Z вариантов с hIL-17А анализировали на приборе Biacore, пропуская Z варианты в различной концентрации над поверхностью, содержащей иммобилизованный IL-17A. Обобщенные данные, касающиеся кинетических параметров (K_D, k_a (k_on) и k_d (k_off)) для связывания Z вариантов с hIL-17A с использованием модели взаимодействия 1:1 приведены в Таблице 11.

Анализ специфичности связывания с использованием Biacore. Связывание трех His₆-меченных IL-17А-связывающих Z вариантов (Z10508, Z10532 и Z15167) с hIL-17A, hIL-17F и hIL-17A/F тестировали на приборе Biacore, пропуская Z варианты над поверхностями, содержащими варианты IL-17. Уровни иммобилизации лиганда на поверхностях составляли 657 RU, 977 RU и 770 RU для IL-17A, IL-17F и IL-17A/F, соответственно. Все протестированные Z варианты демонстрировали связывание с человеческим IL-17A и более слабое связывание с IL-17A/F, тогда как связывания с IL-17F обнаружено не было. Полученные кривые, из данных для которых вычитали ответы от поверхности с холостой пробой, представлены на Фиг. 4. Z15167 показал кривую с самой высокой скоростью ассоциации с человеческим IL-17A.

Блокирование IL-17А-индуцированного образования IL-6 в анализе с использованием NHDF. Проводили скрининг очищенных His₆-меченных Z вариантов после первого и второго раунда созревания аффинности на предмет их способности блокировать IL-17А-индуцированное образование IL-6 в анализе с использованием NHDF. Результаты анализа с использованием NHDF показали, что все тестируемые подвергнутые созреванию аффинности связывающие вещества обладали повышенной специфичной в отношении IL-17А способностью к блокированию по сравнению с первичным связывающим веществом His₆-Z06282. Графики, показывающие типичные профили ингибирования для отобранных связывающих веществ из библиотеки первого созревания аффинности, показаны на Фиг. 5, а рассчитанные значения IC₅₀ для всех проанализированных связывающих веществ показаны в Таблице 12.

Пример 9

Получение IL-17-связывающих полипептидов Z-ABD-Z

IL-17A представляет собой гомодимерный цитокин, обладающий двумя сайтами связывания с рецептором. Делались предположения, что полипептид, содержащий две группировки IL-17А-связывающего Z варианта по настоящему изобретению, будет блокировать IL-17A более эффективно, чем полипептид, содержащий одну такую группировку. Этот пример описывает общую методику субклонирования и получения полипептидов, содержащих два Z варианта в составе слитой конструкции с вариантом альбумин-связывающего домена РР013 (SEQ ID NO: 1224) общей формулы Z-[L1]-ABD-[L2]-Z, где [L1] и [L2] представляют собой линкеры, разделяющие группировки Z и ABD.

Материалы и методы

Субклонирование полипептидов Z-[L1]-ABD-[L2]-Z с линкерами разной длины [L1] и [L2]. ДНК для Z06282 (SEQ ID NO: 1206), Z10241 (SEQ ID NO: 11) и Z10532 (SEQ ID NO: 1) амплифицировали из библиотеки на основе вектора pAY02592 посредством ПЦР с использованием ДНК-полимеразы Pfu Turbo (Agilent Technologies, № по каталогу 600254) вместе с подходящими парами праймеров. Конструкции Z-[L1]-ABD-[L2]-Z создавали путем лигирования ДНК, кодирующей каждую группировку, в экспрессирующем векторе pET26b(+) (Novagen, Madison.WI), в трех последовательных стадиях клонирования с использованием ДНК-лигазы Т4 (Fermentas, № по кат. EL0011). ДНК, кодирующая данные три группировки, была разделена участками ДНК, кодирующей гибридизованные линкеры с разным числом повторов (GGGGS)_n, фланкированными сайтами для ферментов рестрикции. Конструкции, кодируемые экспрессирующими векторами, представляли собой Z#####-[GAP-(G₄S)_n-TS]-PP013-[GT-(G₄S)_n-PR]-Z#####, где каждое значение п в отдельности равно 1-4, которые дополнительно указаны в Таблице 13.

Сайты рестрикции (1)-(IV) в ДНК, кодирующей Z#####-[(1)-(G₄S)_n-(II)]-PP013-[(III)-(G₄S)_n-(IV)]-Z#####, расщепляют ферментами рестрикции Ascl (1), Spel (II), Kpnl (III) и Sacll (IV), соответственно.

Субклонирование полипептидов Z-[L1]-ABD-[L2]-Z с линкером минимальной длины [L1]. ДНК, кодирующую дополнительные димерные Z варианты, содержащие Z06282 (SEQ ID NO: 1206), но с минимальным линкером [L1], получали, используя стандартные методы молекулярной биологии. Конструкции, кодируемые экспрессирующими векторами, представляли собой Z06282-VDGS-PP013-GT-(G₄S)_n-PR-Z06282, которые дополнительно указаны в Таблице 14.

Гены, кодирующие Z12876 (SEQ ID NO: 1218), Z14253 (SEQ ID NO: 1219), Z14254 (SEQ ID NO: 1220) и Z14255 (SEQ ID NO: 1221) (соответствующие Z10241 (SEQ ID NO: 11), Z10532 (SEQ ID NO: 1), Z10508 (SEQ ID NO: 2) и Z10863 (SEQ ID NO: 3), соответственно, но начинающиеся с кодонов для аминокислотных остатков АЕ вместо VD), амплифицировали посредством ПЦР, используя ДНК-полимеразу Pfu Turbo вместе с подходящими парами праймеров. Конструкции Z-[L1]-ABD-[L2]-Z создавали путем лигирования каждого фрагмента в экспрессирующий вектор pET26b(+) в трех последовательных стадиях клонирования с использованием ДНК-лигазы Т4. ДНК, кодирующая эти три группировки, была разделена линкерами, дополнительно модифицированными посредством сайт-специфического мутагенеза с использованием стандартных методов молекулярной биологии. Конструкции, кодируемые этими экспрессирующими векторами, представляли собой Z####-[VDGS]-PP013-[GT-G₄S-PK]-Z#### и Z#####-[ASGS]-PP013-[GT-G₄S]-Z##### и конструкции, которые дополнительно указаны в Таблице 14.

Δ: делеция указанного аминокислотного остатка.

Культивирование. Клетки Е. coli BL21(DE3) (Novagen) трансформировали плазмидами, содержащими генный фрагмент каждого соответствеующего полипептида Z-ABD-Z, и культивировали при 37°С в 800 или 1000 мл среды TSB-YE, дополненной канамицином в концентрации 50 мкг/мл. Чтобы индуцировать экспрессию белка, добавляли IPTG до конечной концентрации 0,2 мМ при значении OD₆₀₀, равном 2, и культивируемую смесь инкубировали при 37°С в течение еще 5 ч. Клетки собирали центрифугированием.

Очистка IL-17А-связывающих полипептидов Z-ABD-Z. Клеточные осадки после центрифугирования ресуспендировали в TST-буфере (25 мМ Трис-HCl; 1 мМ EDTA; 200 мМ NaCl; 0,05% твина 20, рН 8,0), дополненном Benzonase^® (Merck). После разрушения клеток ультразвуковой обработкой и осветления центрифугированием каждый супернатант наносили на колонку, упакованную агарозой с иммобилизованный лигандом - антителом к ABD (собственного изготовления). После промывания TST-буфером и 5 мМ NH₄Ac-буфером, рН 5,5, полипептиды Z-ABD-Z элюировали 0,1 М раствором НАс.В элюированные фракции добавляли ацетонитрил (ACN) до конечной концентрации 10% и образцы загружали на колонки SOURCE 15RPC (GE Healthcare), предварительно уравновешенные растворителем А для RPC (0,1% TFA, 10% ACN, 90% воды). После промывания колонки растворителем А для RPC связавшиеся белки элюировали линейным градиентом от растворителя А для RPC до растворителя В для RPC (0,1% TFA, 80% ACN, 20% воды). Фракции, содержащие чистые полипептиды Z-ABD-Z, идентифицировали в анализе посредством SDS-PAGE и объединяли. После очистки посредством RPC буферный раствор в объединенном пуле заменяли на PBS (2,68 мМ KCl; 137 мМ NaCl; 1,47 мМ КН₂РО₄; 8,1 мМ Na₂HPO₄, рН 7,4), используя колонки с Сефадексом G-25 (GE Healthcare). В конце, варианты Z-ABD-Z очищали на колонках EndoTrap^® Red (Hyglos), чтобы убедиться в низком содержании эндотоксинов.

Концентрации белка определяли путем измерения поглощения при 280 нм, используя спектрофотометр NanoDrop^® ND-1000 и значение коэффициента экстинкции для соответствующего белка. Чистоту анализировали посредством SDS-PAGE с окрашиванием кумасси голубым, а идентичность каждого очищенного варианта Z-ABD-Z подтверждали, используя HPLC-MS анализ.

Результаты

Культивирование и очистка. IL-17А-связывающие Z варианты в форме слитой с ABD конструкции экспрессировали в виде растворимых генных продуктов в Е. coli. SDS-PAGE-анализ каждого конечного препарата белка показал, что в них преимущественно содержится желаемый IL-17A-связывающий полипептид Z-ABD-Z. Точную идентичность и молекулярную массу каждого полипептида Z-ABD-Z подтверждали с использованием HPLC-MS анализа.

Пример 10

Растворимость полипептидов Z-ABD-Z

Растворимость трех полипептидов Z-ABD-Z в физиологическом буфере изучали, осуществляя последовательное концентрирование образцов с использованием ультрафильтрации, с последующими измерениями концентрации по показаниям поглощения при 280 нм и визуальным обследованием образцов.

Материалы и методы

Полипептиды Z-ABD-Z - ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244), ZAZ3364 (SEQ ID NO: 1245) и ZAZ3422 (SEQ ID NO: 1247) разбавляли в PBS, рН 7,4, до концентрации 2,5 мг/мл. 12 фильтровальных ячеек для ультрацентрифугирования фирмы Amicon с порогом отсечения 3 кДа (Millipore, № по каталогу UFC800324) предварительно промывали PBS посредством центрифугирования при 4000 g в течение 10 мин в бакет-роторе центрифуги. Концентраторы опорожняли и по 4 мл раствора каждого полипептида Z-ABD-Z добавляли в первый набор из трех разных центрифужных фильтровальных ячеек. Центрифугирование проводили при 4000 g и 20°С в течение 13-16 мин, получая приблизительно по 1 мл концентрата. Из каждого концентрата извлекали по 20 мкл образца (ультрафильтрационный (UF) образец 1) для дальнейшего анализа, а оставшиеся объемы образца переносили во второй набор из трех центрифужных фильтровальных ячеек. Центрифугирование и извлечение образца повторяли три раза с продолжительностью центрифугирования 8-10 мин, 7 мин и 13 мин, соответственно (UF образцы 2, 3 и 4, соответственно). Измерения поглощения проводили, используя спектрофотометр NanoDrop^® ND-1000 и выполняя разведение UF образцов 1-4 в PBS в 3, 6, 12 и 24 раза, соответственно. Концентрации рассчитывали с использованием теоретического коэффициента экстинкции: 1 единица Abs₂₈₀ соответствует 0,612 мг/мл (одинакового для всех трех полипептидов Z-ABD-Z). Кроме этого проводили измерения поглощения неразбавленных фильтратов.

Результаты

Концентрации, определенные в результате измерений поглощения при 280 нм после каждой стадии центрифугирования, показаны в Таблице 15. Не зафиксировано образования каких-либо агрегатов в результате визуального обследования концентрированных растворов. Таким образом, было установлено, что растворимость ZAZ3363, ZAZ3364 и ZAZ3422 составляет по меньшей мере 60 мг/мл в PBS, рН 7,4. Измерения поглощения неразбавленных фильтратов показали концентрации, очень близкие к 0 мг/мл.

Пример 11

Анализ межвидового связывания с использованием Biacore

Материалы и методы

Взаимодействие полипептидов Z-ABD-Z - ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244), ZAZ3364 (SEQ ID NO: 1245) и ZAZ3365 (SEQ ID NO: 1246) с hIL-17A и IL-17A яванского макака (cIL-17A, SEQ ID NO: 1229; Evitria, индивидуальный заказ), a также взаимодействие ZAZ3220 (SEQ ID NO: 1236) с hIL-17A и IL-17A макака-резус (rmIL-17-A, SEQ ID NO: 1230; Cusabio, № по каталогу CSB-EP011597MOV) анализировали на Biacore 2000. HSA иммобилизовали в проточной ячейке на слое карбоксилированного декстрана на поверхности СМ5 чипа. Иммобилизацию проводили, используя для сочетания реакции с участием аминогрупп в соответствии с протоколом производителя и используя HBS-EP в качестве рабочего буфера. Уровни иммобилизации HSA на поверхностях составляли 953 RU (используемые для ZAZ3363, ZAZ3364 и ZAZ3365) и 493 RU (используемые для ZAZ3220), соответственно. Поверхность одной проточной ячейки чипа была активирована и дезактивирована для применения в качестве холостой пробы в процессе пропусканий аналита. В экспериментах по связыванию в качестве рабочего буфера использовали HBS-EP, и скорость потока составляла 30 мкл/мин. ZAZ3363, ZAZ3364 и ZAZ3365 разбавляли в рабочем буфере HBS-EP до конечной концентрации 200 нМ и вводили в течение 5 мин, после чего осуществляли введение вариантов IL-17A. ZAZ3220 разбавляли в рабочем буфере HBS-EP до конечной концентрации 500 нМ и вводили в течение 4 мин, после чего осуществляли введение вариантов IL-17A. Каждый из образцов hIL-17A и CIL-17A разбавляли в рабочем буфере HBS-EP до конечных концентраций 2,5, 10 и 40 нМ и пропускали в течение 5 мин над поверхностями с ZAZ3363, ZAZ3364 и ZAZ3365, захваченными на HSA. Через 10 мин диссоциации поверхность регенерировали, применяя два пропускания 10 мМ раствора HCl. hIL-17A и rmIL-17A разбавляли в рабочем буфере HBS-EP до конечных концентраций 0,1, 0,3, 0,9, 2,7 и 8,1 нМ и 2,7, 8,1, 24,3, 72 и 216 нМ, соответственно, и пропускали в течение 6 мин над поверхностями с ZAZ3220, захваченным на HSA. Через 5 мин диссоциации поверхность регенерировали, применяя два пропускания 10 мМ раствора HCl. Результаты анализировали, используя программное обеспечение BiaEvaluation.

Результаты

Связывание hIL-17А и cIL-17A с ZAZ3363, ZAZ3364 и ZAZ3365, и связывание hIL-17A и rmIL-17A с ZAZ3220 тестировали на приборе Biacore, пропуская полипептиды Z-ABD-Z над поверхностью, содержащей HSA, с последующим пропусканием вариантов IL-17A. Все протестированные Z варианты демонстрировали связывание с тестируемыми вариантами IL-17A, т.е. ZAZ3363, ZAZ3364 и ZAZ3365 демонстрировали связывание с IL-17A человека и яванского макака (Фиг. 6), a ZAZ3220 с IL-17A человека и макака-резус.

Пример 12

Анализ специфичности связывания с использованием Biacore

В этом примере специфичности двух полипептидов Z-ABD-Z тестировали, анализируя их возможное взаимодействие с набором белков из семейства IL-17, с другими интерлейкинами и с другими многочисленными белками плазмы крови. Этот же набор белков-аналитов также анализировали по их возможному взаимодействию с ABD-вариантом РЕР07843.

Материалы и методы

Взаимодействие ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244) или ZAZ3422 (SEQ ID NO: 1247) с панелями из 24 или 12 разных белков (конкретизированных в Таблице 16), соответственно, анализировали на приборе Biacore 2000. HSA и ABD-вариант РЕР07843 (SEQ ID NO: 1225; соответствующий РР013 (SEQ ID NO: 1224) с N-концевой добавкой GSS) иммобилизовали на поверхности СМ5 чипа и поверхность с холостой пробой получали так, как описано в примере 11. Уровни иммобилизации лигандов на поверхностях составляли 1315 RU и 99 RU для HSA и РЕР07843, соответственно, в случае чипа, использованного для пропусканий ZAZ3363, и 791 RU и 100 RU для HSA и РЕР07843, соответственно, в случае чипа, использованного для пропусканий ZAZ3422. В эксперименте по связыванию в качестве рабочего буфера использовали HBS-EP, и скорость потока составляла 30 мкл/мин. ZAZ3363 и ZAZ3422 разбавляли в HBS-EP или HBS-EP, дополненном 500 мМ NaCl, до конечной концентрации 200 нМ и вводили в течение 7 мин с последующими пропусканиями аналитов. Каждый из аналитов, т.е. панели из 24 или 12 разных белков, разбавляли в HBS-EP или HBS-EP, дополненном 500 мМ NaCl, до конечных концентраций от 0,4 до 250 нМ и вводили в течение 5 мин. Через 7 (ZAZ3363) или 10 (ZAZ3422) мин диссоциации поверхности регенерировали посредством четырех (ZAZ3363) или пяти пропусканий (ZAZ3422) 10 мМ раствора NaOH и двух пропусканий 10 мМ раствора HCl. Результаты анализировали, используя программное обеспечение BiaEvaluation.

Поставщики: ¹Peprotech; ²R&D Systems; ³Roche/Apoteket AB; ⁴Bethyl; ⁵ProSpec; ⁶Sino Biological Inc.; ⁷Sigma.

Результаты

Специфичность ZAZ3363 и ZAZ3422 тестировали на приборе Biacore, изучая их взаимодействие с 24 или 12 белками-аналитами, соответственно. Полипептиды Z-ABD-Z вводили над поверхностями, содержащими HSA, после чего осуществляли пропускания белков-аналитов. Единственными видами взаимодействий, обнаруженными для ZAZ3363 и ZAZ3422, было сильное связывание с hIL-17А и слабое связывание с hIL-17A/F, как и ожидалось в соответствии с результатами, представленными в примере 8. Белки-аналиты также оценивали по их возможному взаимодействию с ABD-вариантом РЕР07843, но никаких взаимодействии обнаружено не было. Таким образом, полипептиды Z-ABD-Z, по всей видимости, являются высокоспецифичными.

Пример 13

Кинетические измерения для комплексов на основе Z-ABD-Z, IL-17A и HSA с использованием KinExA^®

Технические ограничения SPR в отношении точного определения кинетических параметров высокоаффинных взаимодействий и большая сложность определения аффинности связывания между двумя димерными мишенями с использованием SPR является основанием для применения технологии анализа кинетического исключения (KinExA^®) для дальнейшего анализа связывания полипептидов Z-ABD-Z, находящихся в комплексе с HSA, с IL-17A, а также связывания полипептидов Z-ABD-Z по отдельности или находящихся в комплексе с IL-17A, с HSA. В анализе KinExA^® измеряют аффинность равновесного связывания и кинетические константы взаимодействия немодифицированных молекул в жидкой фазе (Darling and Brault, 2004, Assay and Drug Dev. Tech., 2(6): 647-657).

Материалы и методы

Полипептиды Z-ABD-Z - ZAZ3220 (SEQ ID NO: 1236), ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244) и ZAZ3422 (SEQ ID NO: 1247), а также HSA (Novozymes, № по каталогу 230-005), человеческий IL-17A (Peprotech, № по каталогу 200-17), биотинилированный (как описано в примере 1) человеческий IL-17A, мышиное моноклональное антитело к HSA (Abeam, № по каталогу 10241) и козье поликлональное антитело к Z собстенного приготовления отправляли в Sapidyne Instruments Inc. (Boise, Idaho, USA), где проводили измерения и анализ KinExA^®.

Связывание Z-ABD-Z/HSA с IL-17A. Для определения аффинности, т.е. KD, соответствующий полипептид Z-ABD-Z, в комплексе с HSA, использовали в качестве связывающего партнера «в неизменной концентрации» (СВР), a IL-17A использовали в качестве титранта. Анализ данных проводили, используя программное обеспечение KinExA^® Pro и применяя анализ методом наименьших квадратов для подгонки оптимальных решений для K_D и концентрации активных сайтов связывания (ABC) к кривой, отражающей обратимое бимолекулярное взаимодействие с соотношением 1:1.

Для определения k_а применяли прямой анализ кривой связывания, используя тот же самый иммобилизованный IL-17A в качестве захватывающего реагента для кинетических экспериментов, как и в случае равновесных экспериментов. Количество свободного Z-ABD-Z/HSA в образце измеряли до установления равновесия, получая опорные точки, с помощью которых регистрировали уменьшение свободного Z-ABD-Z/HSA по мере приближения образца к равновесию.

Связывание Z-ABD-Z и Z-ABD-Z/IL-17A с HSA. Полипептид Z-ABD-Z - ZAZ3363 далее анализировали в отношении связывания с HSA в присутствии или в отсутствие IL-17A. Чтобы определить K_D, ZAZ3363, в свободном виде или в комплексе с IL-17A, использовали в качестве связывающего партнера «в неизменной концентрации» (СВР), a HSA использовали в качестве титранта. Анализ данных проводили, используя программное обеспечение KinExA^® Pro, как описано выше.

Для определения k_a, использовали прямой анализ кривой связывания, используя тот же самый иммобилизованный HSA в качестве захватывающего реагента для кинетических экспериментов, как и в случае равновесных экспериментов. Количество свободного ZAZ3363/IL-17A в образце измеряли до установления равновесия, получая опорные точки, с помощью которых регистрировали уменьшение свободного ZAZ3363/IL-17A по мере приближения образца к равновесию.

Результаты

В первой серии измерений с использованием KinExA^® было показано, что полипептиды Z-ADB-Z - ZAZ3220, ZAZ3363 и ZAZ3422, соответственно, в комплексе с HSA, связывались с IL-17A с исключительно высокой аффинностью со значениями K_D в субпикомолярном-фемтомолярном диапазоне. Рассчитанные кинетические параметры, в предположении одновалентного связывания между этими полипептидами Z-ABD-Z и димерным IL-17A, показаны в Таблице 17.

Во второй серии измерений с использованием KinExA^® оценивали взаимодействие между ZAZ3363, в свободном состоянии или в комплексе с IL-17А, и HSA. Рассчитанные по результатам этих анализов кинетические параметры показаны в Таблице 18. Аффинность ZAZ3363 в отношении HSA не изменялась значительно в присутствии IL-17A.

Резюмируя, измерения с использованием технологии KinExA^® показали исключительно высокую аффинность полипептидов Z-ABD-Z в отношении IL-17А. Измеренное значение K_D (меньше 0,33 пМ) лучше, чем сообщаемые аффинности для двух клинически наиболее современных препаратов сравнения секукинумаба (значение K_D равно 122 пМ; WO 2006/013107 и WO 2012/125680) и иксекизумаба (значение K_D равно 2 пМ; WO 2007/070750). Помимо этого было продемонстрировано одновременное связывание как с IL-17А, так и с альбумином, т.е. обе ассоциированные со связыванием функции остаются незатронутыми в слитом белке Z-ABD-Z.

* 95%-ный доверительный интервал.

** 95%-ный доверительный интервал для K_D не был определен.

* 95%-ный доверительный интервал.

n.d. означает «не определяли».

Пример 14

Определение характеристик полипептидов Z-ABD-Z в анализе с использованием NHDF

Материалы и методы

Блокирование IL-17А-индуцированного образования IL-6 в анализе с использованием клеток NHDF. Клетки NHDF (Lonza, № по каталогу СС-2511) культивировали в основной питательной среде для культивирования фибробластов (Lonza, № по каталогу СС-3132), дополненной стимуляторами роста (Lonza, № по каталогу СС-5034). За один день до проведения эксперимента 5000 клеток из расчета на одну лунку рассевали в 96-луночные культуральные планшеты с половинным объемом лунок (Greiner, № по каталогу 675180) в 100 мкл. В день проведения эксперимента в отдельном 96-луночном планшете готовили разведения IL-17А-специфичных полипептидов Z-ABD-Z с линкерами разной длины между группировками Z и ABD (ZAZ3174 (SEQ ID NO: 1233), ZAZ3175 (SEQ ID NO: 1234), ZAZ3176 (SEQ ID NO: 1235), ZAZ3220 (SEQ ID NO: 1236), ZAZ3221 (SEQ ID NO: 1237), ZAZ3234 (SEQ ID NO: 1238), ZAZ3235 (SEQ ID NO: 1239), ZAZ3236 (SEQ ID NO: 1240), ZAZ3237 (SEQ ID NO: 1241), ZAZ3269 (SEQ ID NO: 1242) и ZAZ3270 (SEQ ID NO: 1243)). Полипептиды Z-ABD-Z титровали, используя постадийное трехкратное разведение от 190 нМ до 0,003 нМ в среде, содержащей 0,9 нМ hIL-17A и 8 мкМ HSA. Помимо этого получали стандартную кривую для IL-17A (6,2-0,0001 нМ), а также контроли, содержащие среду с 0,9 нМ IL-17A или только одну среду. Среду в планшете с клетками NHDF культивировали в течение ночи, отбрасывали и образец переносили в планшет для клеток из расчета 100 мкл/лунка, который помещали в инкубатор при 37°С на 18-24 ч. На следующий день выполняли количественное определение содержания IL-6 в супернатантах, используя IL-6-специфичную ELISA, как описано в примере 3. Дополнительные полипептиды Z-ABD-Z (ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244), ZAZ3364 (SEQ ID NO: 1245), ZAZ3365 (SEQ ID NO: 1246) и ZAZ3422 (SEQ ID NO: 1247)) анализировали в последующих анализах с использованием NHDF по существу так, как описано выше, но используя линию клеток NHDF из АТСС (Американская коллекция типовых культур) (№ по каталогу PSC-201-012). Блокирующие способности этих полипептидов Z-ABD-Z также анализировали после инкубации полипептидов при 40°С в течение 2 и 4 недель.

Результаты

Полипептиды Z-ABD-Z исследовали в отношении их способности блокировать IL-17А-индуцированное образование IL-6 в анализе с использованием NHDF. Во-первых, было видно, что формат Z-ABD-Z значительно повышал блокирующую способность по сравнению с мономерным His₆-Z форматом, как показано на Фиг. 7А, где представлены кривые ингибирования для His₆-Z10241 и ZAZ3220 (содержащего Z10241). Форма кривой для ZAZ3220 позволяет предположить, что достигается предел обнаружения для этого клеточного анализа, с эффектом ингибирования для ZAZ3220 с соотношением один к одному, и вероятно, что полипептид Z-ABD-Z проявляет даже еще более сильный ингибирующий эффект, чем можно оценить из этого эксперимента. Подразумевается, что эффективность ZAZ3220 возрастает до предела обнаружения в этом анализе из-за эффекта, связанного с сильной авидностью, получаемого в результате связывания гомодимерного IL-17A. Во-вторых, сравнение полипептидов Z-ABD-Z, имеющих линкеры разной длины и содержащих Z варианты Z06282 (SEQ ID NO: 1206) и Z12876 (SEQ ID NO: 1218), выявило, что длина линкера оказывала незначительное влияние на блокирующую способность. Набор полипептидов Z-ABD-Z, содержащих Z06282 с линкерами разной длины, представлен на Фиг. 7В. Дополнительные полипептиды Z-ABD-Z - ZAZ3363, ZAZ3364, ZAZ3365 и ZAZ3422 анализировали в последующих анализах с использованием NHDF, также после инкубации полипептидов Z-ABD-Z при 40°С в течение двух и четырех недель. IL-17A-ингибирующая способность сохранялась даже после инкубации в течение четырех недель при 40°С. Расчитанные значения IC₅₀, отражающие способность разных полипептидов Z-ABD-Z ингибировать IL-17A, суммированы в Таблице 19. Эти значения IC₅₀ более чем в три раза ниже, чем сообщаемая нейтрализующая образование hIL-6 активность (IC₅₀ составляет 2,1±0,1 нМ) IL-17А-ингибирующего моноклонального антитела секукинумаба, AIN457, (WO 2006/013107 и WO 2012/125680), проходящего в настоящее время клинические испытания.

n.а. означает «данные отсутствуют».

Пример 15 Нейтрализация hIL-17A in vivo

Человеческий IL-17A способен связываться с рецептором IL-17 мыши и стимулировать его, что приводит к повышению уровней и последующей секреции КС хемокина мыши (CXCL1).

Материалы и методы

Нейтрализация hIL-17A in vivo в мышиной модели КС. Для идентификации оптимальной дозы человеческого IL-17A, необходимой для индукции КС мыши, проводили эксперименты по определению диапазона дозирования. Согласно этим экспериментам было выявлено, что человеческий IL-17A в дозе 150 мкг/кг индуцировал подходящий уровень КС в сыворотке крови мышей, собранной через 2 ч после введения IL-17A. ZAZ3174 (SEQ ID NO: 1233) и ZAZ3220 (SEQ ID NO: 1236) анализировали в этой модели в двух разных случаях. В первом эксперименте мышам п. к. вводили ZAZ3174 в трех разных дозах: 0,25, 2,5 и 25 мг/кг, за 9 ч до подкожной инъекции человеческого IL-17A. Мышей умерщвляли через 2 ч после введения человеческого IL-17A, и уровни КС определяли посредством ELISA, используя имеющийся в продаже набор в соответствии с инструкцией производителя (КС Quantikine; R&D Systems, № по каталогу D1700). Во втором эксперименте мышам п.к. вводили ZAZ3220 в трех разных дозах: 0,05, 0,1 и 0,4 мг/кг, за 9 ч до подкожной инъекции человеческого IL-17A. Мышей умерщвляли через 2 ч после введения человеческого IL-17A, и уровни КС определяли посредством ELISA так, как указано выше.

Результаты

Нейтрализация hIL-17A in vivo в мышиной модели КС. Анализируемые полипептиды Z-ABD-Z блокируют способность человеческого IL-17A стимулировать рецептор IL-17 мыши, приводя к ингибированию повышения уровня КС мыши дозозависимым образом. ZAZ3174 в дозе 2,5 мг/кг в описанных условиях полностью блокировал индукцию КС, как показано на Фиг. 8А. Согласно второму эксперименту было выявлено, что полипептид Z-ABD-Z ZAZ3220, содержащий Z вариант со зрелой аффинность, полностью блокировал IL-17А-индуцированный КС-ответ в дозе 0,4 мг/кг (Фиг. 8В). Это соответствует 6-кратному усилению эффекта блокирования in vivo по сравнению с ZAZ3174. С использованием ZAZ3220 в дозе 0,1 мг/кг получали 72% ингибирования.

Пример 16

Анализ фармакокинетики полипептидов Z-ABD-Z in vivo на крысах

В этом примере описаны два отдельных эксперимента, в которых фармакокинетические параметры определяли на крысах для двух разных полипептидов Z-ABD-Z после подкожных (п.к.) и/или внутривенных (в.в.) инъекций.

Материалы и методы

В первом эксперименте ZAZ3220 (SEQ ID NO: 1236), приготовленный в PBS, вводили в.в. (n=3) самцам крыс Sprague Dawley (SD) (Charles River, Germany) в дозе 1,2 мг/кг, соответствующей 57 нмоль/кг.Образцы крови отбирали из хвостовой вены каждой крысы в моменты времени 0,08, 8, 24, 48, 72, 120, 168, 240, 336, 408 и 504 ч после введения.

Во втором эксперименте ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244), приготовленный в PBS, вводили в.в. (n=5) или п.к. (n=6) самцам крыс SD в дозе 1,2 мг/кг, соотвествующей 64 нмоль/кг. Образцы крови отбирали из хвостовой вены каждой крысы в моменты времени 0, 0,08, 0,5, 1, 3, 8, 24, 72, 120, 168, 216, 264, 336, 408, 456 и 504 ч после в.в. введения или в моменты времени 0, 0,08, 0,5, 1, 3, 8, 24, 72, 120 и 168 ч после п.к. введения.

Сыворотку готовили из образцов крови и хранили при -20°С до проведения анализа. Количественное определение ZAZ3220 и ZAZ3363 в сыворотке крови крыс проводили, используя ELISA-анализ фармакокинетики (PK-ELISA).

PK-ELISA. 96-луночные планшеты с половинным объемом лунок (50 мкл/лунка) покрывали козьим Ig к Z (4 мкг/лунка) собственного приготовления в буфере для нанесения покрытия (Sigma, № по каталогу С3041) в течение ночи при 4°С. На следующий день планшеты блокировали смесью PBS + 0,5% казеина в течение 1,5 ч. В каждый планшет добавляли сыворотку крови индивидуальной крысы, минимально разбавленную в 10 раз в смеси PBS-казеин + 10% сыворотки крови из общего пула для всех крыс (среда для анализа (assay matrix)) и титровали в сериях с 2-кратным разведением. В один планшет вносили стандарт каждого полипептида Z-ABD-Z (разведенный от 300 нг/мл до 3 пг/мл) и в каждый планшет вносили по четыре контроля каждого полипептида Z-ABD-Z, разбавленного до концентрации, попадающей в линейный диапазон данного анализа. Стандарт и контроли разбавляли в среде для анализа. В отдельных планшетах готовили разбавленные растворы стандартов, контролей и образцов и переносили в планшеты для ELISA с нанесенным покрытием. Планшеты инкубировали в течение 1,5 ч при КТ, затем инкубировали в течение 1,5 ч с изготовленным на заказ детектирующим Ig кролика к ABD (4 мкг/мл, CUV002) и инкубировали в течение 1 ч с IgG-HRP осла к Ig кролика (Jackson Immunoresearch, № по каталогу 711-035-152). Для развития окраски реакционной смеси использовали ТМВ (Thermo Fisher) и развитие окраски останавливали через 15 мин 2 М раствором H₂SO₄. Поглощение считывали при 450 нм, используя ридер для ELISA (Victor³, Perkin Elmer). Концентрации соответствующего варианта Z-ABD-Z в образцах рассчитывали из стандартной кривой, полученной с использованием GraphPad Prism5 и подбора с использованием четырехпараметрической логистической (4-PL) модели.

Фармакокинетический анализ. Фармакокинетический анализ был основан на измерении концентрации в сыворотке крови индивидуальной крысы во времени. Конечный период полувыведения и биодоступность оценивали, используя Microsoft Excel и GraphPad Prism и применяя двухкомпонентную модель.

Результаты

Профили зависимости средней концентрации в сыворотке крови от времени для полипептидов Z-ABD-Z ZAZ3220 и ZAZ3363 после однократных введений в дозе 1,2 мг/кг крысам SD показаны на Фиг. 9А и Фиг. 9В, соответственно, а рассчитанные с использованием двухкомпонентного анализа фармакокинетические параметры суммированы в Таблице 20. Расчетный период полувыведения составил приблизительно 49 ч как для ZAZ3220, так и для ZAZ3363 после в.в. введения. для ZAZ3363, введенного п.к., составляло 45 ч, а рассчитанная биодоступность составляла до 45%.

C_max: максимальная концентрация в сыворотке крови; T_max: время достижения максимальной концентрации в сыворотке крови; AUC_0-t: площадь под кривой «концентрация-время» от нуля до времени достижения последней концентрации, поддающейся количественному определению; Т_1/2: период полувыведения; MRT: среднее время удержания (препарата); CL: выведение; F: абсолютная биодоступность в процентах, рассчитанная как

F=[(средняя AUC_n.к.×доза_в.в.)/(средняя AUC_в.в.×доза_п.к.)]×100.

Пример 17

Местное введение Z варианта в глаза кроликов

Местное введение в глаз является целесообразным при офтальмологических расстройствах, например, увейте или синдромах сухого глаза. Местное введение позволяет применять чрезвычайно высокие локальные концентрации лекарственного средства с минимальным риском системных побочных эффектов. В этом примере возможность местного введения молекул Z вариантов в глаза исследовали на кроликах. Концентрацию молекулы Z варианта и контрольного IgG измеряли в передней камере (глаза) (внутриглазной жидкости), в стекловидном теле и в сыворотке крови после введения четырех повторных местных доз.

Материалы и методы

Получение Z варианта. Z вариант Z10199 (SEQ ID NO: 1217), происходящий из Z06282 (SEQ ID NO: 1206), но начинающийся с AE, субклонировали без какой-либо метки, но с присоединением на С-конец аминокислотных остатков VD. Экспрессию проводили по существу так, как описано в примере 2, и очистку осуществляли посредством анионного обмена и обращенно-фазовой хроматографии. Буфер в образце заменяли на PBS, рН 7,2, и эндотоксины удаляли, используя колонку EndoTrap^® Red10 (Hyglos).

Исследование на животных. Кроликам местно в каждый глаз (n равно 2, из расчета на молекулу) вводили по 48 нмоль (1 каплю, 50 мкл) Z10199 и ZAZ3174 (SEQ ID NO: 1233), соответственно, в моменты времени 0, 1, 2 и 3 часа. Контрольное человеческое IgG антитело (ксолар; Novartis) вводили тем же путем двум разным кроликам. Одному кролику вводили только PBS в качестве отрицательного контроля. После каждого введения веки держали закрытыми в течение приблизительно 30 с для сохранения образца на роговице. Через 4 ч собирали образцы стекловидного тела, внутриглазной жидкости и сыворотки крови. Образцы центрифугировали для удаления тканевого дебриса и агрегатов и посредством ELISA проводили количественное определение уровней Z10199, ZAZ3174 и антитела, соответственно.

Количественное определение посредством ELISA. Концентрацию Z10199 и ZAZ3174, соответственно, в отобранных образцах анализировали посредством сэндвич-ELISA, используя поликлональное, собственного изготовления, козье антитело (иммуноглобулин) к белку Z для захвата, поликлональное, собственного изготовления, кроличье антитело (иммуноглобулин) к белку Z в качестве первичного антитела и IgG-HRP козы к иммуноглобулину кролика (Dako, № по каталогу Р0448) в качестве вторичного антитела. Детекцию осуществляли посредством инкубирования с ImmunoPure ТМВ в течение 15 мин при КТ и реакцию останавливали, добавляя 2 М раствор H₂SO₄. Поглощение при 450 нм измеряли с использованием микропланшетного ридера Victor³. Концентрацию Z10199 рассчитывали из стандартной кривой, полученной для этой же молекулы, и с использованием GraphPad Prism 5 и формулы метода нелинейной регрессии.

Анализ концентрации IgG в отобранных образцах проводили, используя набор для определения IgG посредством ELISA (Abcam, 100547), и выполняли так, как описано производителем, используя полученную стандартную кривую и анализ методом нелинейной регрессии, как указано выше.

Результаты

На Фиг. 10 показано, что и Z10199, и ZAZ3174 проникали в глаз после местного введения и присутствовали во внутриглазной жидкости и в стекловидном теле в низких наномолярных (нМ) концентрациях. В противоположность этому, контрольное антитело, IgG, не детектировали ни во внутриглазной жидкости, ни в стекловидном теле. Образцы сыворотки крови можно считать отрицательными как в отношении Z варианта, так и IgG. Таким образом, молекулы Z варианта по настоящему изобретению можно доставлять таким альтернативным путем введения, который неприменим для антител, и можно достичь местного эффекта, который невозможен при системном воздействии.

Пример 18

Фармакокинетический анализ ZAZ3363 после дуоденального введения крысам

Материалы и методы

Тестируемый препарат.ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244) готовили 1) в OAF1: 0,12 М хенодезоксихолат натрия (Sigma, № по каталогу С8261) и 0,12 М пропилгаллат (Sigma, № по каталогу Р3130), рН 7,4; 2) в OAF2: капрат натрия в концентрации 50 мг/мл (Sigma, № по каталогу С4151); или 3) в 50 мМ растворе фосфата натрия (PBS), рН 7,0, в концентрации 50 мг/мл (OAF1 и OAF2) или 100 мг/мл (PBS).

Анализ с использованием клеток NHDF. Активность ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244), приготовленного в OAF1, OAF2 или PBS, проверяли в IL-17-зависимом анализе с использованием клеток NHDF, описанном в примере 14.

Дуоденальное введение. Самцов крыс Sprague Dawley (Charles River) анестезировали изофлураном и выполняли небольшой разрез для локализации двенадцатиперстной кишки. В двенадцатиперстную кишку хирургическим путем вставляли полостной катетер (R-DUOD, от AgnTho, Sweden) на расстоянии 20 мм от ее начала в область с минимальным присутствием сосудистой сети. Катетер туннелировали подкожно к спине животных. Брюшную мускулатуру закрывали швами, в то время как разрез на коже живота и субскапулярный участок экстернализации закрывали с помощью зажимов из нержавеющей стали. Животных оставляли для восстановления в течение 5-6 суток, после чего использовали в исследовании. Послеоперационную аналгезию вводили п.к. перед хирургическим вмешательством (карпрофен, 5 мг/кг, и бупренорфин, 0,05 мг/кг). Карпрофен кроме этого вводили один раз в сутки в течение двух суток после операции. При необходимости вводили дополнительные дозы бупренорфина. Антибиотики (энрофлоксацин, 03 мг/мл) вводили с питьевой водой в процессе периода восстановления (3-5 суток), а также в ходе эксперимента. Чтобы замаскировать горький вкус энрофлоксацина, к 500 мл питьевой воды добавляли один кусок сахара. Для обеспечения поддерживаемой проходимости катетер в двенадцатиперстной кишке промывали сильной струей стерильной воды (0,2-0,5 мл) один раз в сутки.

ZAZ3363 в дозе 5,4 мкмоль/кг массы тела, приготовленный в OAF1 или OAF2 (n=2), или в дозе 10,8 мкмоль/кг, приготовленный в PBS (n=2), вводили в объеме 0,5 мл непосредственно в двенадцатиперстную кишку в нулевой момент времени. Отбирали образцы крови под анестезией изофлураном через 1, 3, 8, 24, 72, 120 и 168 ч после введения и готовили сыворотку крови, применяя стандартные методики. Концентрацию ZAZ3363 в сыворотке крови измеряли с использованием количественного PK-ELISA, описанного в примере 16, но применяя титрование стандарта ZAZ3363 в диапазоне от 70 до 1 нг/мл.

Фармакокинетический анализ. В основе фармакокинетического анализа лежало определение зависимости концентрации в сыворотке крови индивидуальной крысы от времени. Конечный период полувыведения и биодоступность оценивали, используя Microsoft Excel и GraphPad Prism.

Результаты

Активность приготовленного препарата ZAZ3363. Активность ZAZ3363, приготовленного в OAF1 и OAF2, соответственно, сравнивали с таковым, приготовленным в PBS, в анализе с использованием клеток NHDF. На Фиг. 11 показаны кривые титрования ZAZ3363, приготовленного в OAF1, по сравнению с приготовленным в РВS (Фиг. 11А), и приготовленного в OAF2 по сравнению с приготовленным в PBS (Фиг. 11В). Данный эксперимент показал, что активность ZAZ3363 в составе этих двух препаратов идентична таковой в случае использования PBS, т.е. разные эксципиенты не оказывали влияния на биологическую активность ZAZ3363.

Интрадуоденальное всасывание ZAZ3363. Всасывание в кишечнике ZAZ3363, приготовленного в OAF1, OAF2 и PBS, изучали в крысиной модели индрадуоденального введения (и.д.). Эксперимент показал усиленное всасывание в случаях препаратов, приготовленных в OAF1 и OAF2, по сравнению с приготовленным в PBS (Фиг. 12). Значения биодоступности составляли 0,2, 0,8 и 0,0007 в случае OAF1, OAF2 и PBS, соответственно, как показано в Таблице 21. ZAZ3363, приготовленный в OAF2, показал наилучшее всасывание, в среднем в 1160 раз лучше по сравнению с препаратом в PBS, хотя наблюдались большие индивидуальные вариации. Этот показатель у препарата ZAZ3363 в OAF1 в среднем в 260 раз превышал таковой у препарата в PBS.

Пример 19

Определение характеристик комплексов анти-IL-17A/анти-TNF в анализе с использованием NHDF

Материалы и методы

Получение комплексов и контрольного антитела. Конструировали два разных комплекса, направленно воздействующих на IL-17A и TNF, а также антитело с аффинностью к TNF. Антитело, обозначенное «Ada», имеющее те же последовательности CDR и ту же специфичность, что и имеющееся в продаже моноклональное антитело адалимумаб, конструировали, используя последовательности тяжелой цепи (НС) и легкой цепи (LC) HC_Ada (SEQ ID NO: 1231) и LC_Ada (SEQ ID NO: 1232). Осуществляли слияние на генетическом уровне IL-17А-направленной группировки Z варианта Z14253 (SEQ ID NO: 1219) через гибкий, состоящий из 15 остатков линкер (GGGGS)₃, с С-концами HC_Ada или LC_Ada с образованием в результате этого комплексов HC_Ada-Z14253 и LC_Ada-Z14253, соответственно. Схематическое представление сконструированных комплексов показано на Фиг. 13А. Синтез гена, клонирование, продуцирование в клетках яичников китайского хомячка (СНО) с использованием временной генной экспрессии и очистку аффинной хроматографией на белке А проводили в Evitria AG (Switzerland).

Блокирование IL-17А-индуцированного образования IL-6 в анализе с использованием NHDF. Анализ с использованием NHDF проводили по существу так, как описано в примере 14, титруя исследуемые образцы HC_Ada-Z14253 и LC_Ada-Z14253 и соответствующих препаратов сравнения с использованием постадийного трехкратного разведения от 63 нМ до 0,003 нМ в среде, содержащей 0,9 нМ rhIL-17A. В качестве препаратов сравнения использовали ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244), антитело Ada к TNF, а также, в качестве отрицательного контроля, Z вариант Z04726 (SEQ ID NO: 1223; направленный на taq полимеразу), рекомбинантно слитый с ABD вариантом РР013 (SEQ ID NO: 1224) через линкер VDSS (обозначенный как Z04726-РР013), как описано в примере 2. Кроме этого, получали стандартную кривую для IL-17A (6,2-0,0001 нМ), а также готовили контроли, содержащие среду с 0,9 нМ IL-17A или одну только среду. Выполняли количественное определение содержания IL-6 в супернатантах с использованием IL-6-специфичного ELISA, описанного в примере 3.

Блокирование TNF- или TNF/IL-17A-индуцированного образования IL-8 в анализе с использованием NHDF. Клетки NHDF (Lonza, № по каталогу СС-2511) культивировали в основной питательной среде для культивирования фибробластов (Lonza, № по каталогу СС-3132), дополненной стимуляторами роста (Lonza, № по каталогу СС-5034). За один день до проведения эксперимента 5000 клеток из расчета на одну лунку рассевали в 96-луночные культуральные планшеты с половинным объемом лунок (Greiner, № по каталогу 675180) в объеме 100 мкл. В день эксперимента в отдельном 96-луночном планшете готовили разведения растворов HC_Ada-Z14253 и LC_Ada-Z14253 и препаратов сравнения, описанных выше. Комплексы и препараты сравнения титровали, используя постадийное трехкратное разведение от 5 нМ до 0,0007 нМ в среде, содержащей 0,1 нМ TNF человека (R&D Systems, № по каталогу 2210-TA/CF) или смесь 0,05 нМ и 0,1 нМ раствора rhIL-17A. Кроме этого готовили контроли, содержащие среду с 0,1 нМ TNF или смесь 0,05 нМ и 0,1 нМ раствора rhIL-17A или только среду. Среду из планшета с культивированными в течение ночи клетками NHDF отбрасывали и образец в количестве 100 мкл/лунка переносили в планшет для клеток. Планшет помещали в инкубатор при 37°С на 18-24 ч. На следующий день выполняли количественное определение содержания IL-8 в супернатантах, используя IL-8-специфичный ELISA.

ELISA для IL-8. Выполняли количественное определение IL-8, используя набор DuoSet ELISA (R&D Systems, № по каталогу DY208). Планшеты с половинным объемом лунок (Costar, № по каталогу 3690) покрывали захватывающим антителом к IL-8, 4 мкг/мл в PBS, 50 мкл/лунка, в течение ночи при 4°С. В день проведения анализа планшет дважды промывали в водопроводной воде и затем блокировали смесью PBS + 1% BSA в течение 2 ч. Стандарт IL-8 (R&D Systems, № по каталогу 890806), оттитрованный в серии 2-кратных разведений (20-0,01 нг/мл), и супернатанты из используемого в анализе планшета для клеток добавляли в покрытый планшет для ELISA (50 мкл/лунка) и инкубировали в течение 1,5 ч при КТ. Планшет промывали 4 раза в автоматизированном промывочном аппарате для ELISA и добавляли биотинилированное детектирующее антитело к IL-8 в концентрации 20 нг/мл (50 мкл/лунка). Через еще 1 ч инкубации планшет промывали и добавляли по 50 мкл конъюгата стрептавидин-HRP (Thermo Fisher, № по каталогу N100), разбавленного в 8000 раз, из расчета на одну лунку. После инкубации в течение одного дополнительного часа и промывки осуществляли развитие окраски в планшете с использованием 50 мкл ТМВ (Thermo Fisher, № по каталогу 34021) из расчета на одну лунку и реакцию останавливали, используя 50 мкл 2 М раствора H₂SO₄. Величины поглощения прочитывали на многолуночном планшетном ридере (Victor³, Perkin Elmer).

Результаты

Блокирование IL-17А-индуцированного образования IL-6 в анализе с использованием NHDF. Исследовали два комплекса HC_Ada-Z14253 и LC_Ada-Z14253 в отношении их способности блокировать IL-17А-индуцированное образование IL-6 в анализе с использованием NHDF. Результаты анализа с использованием NHDF представлены на Фиг. 13В. Как HC_Ada-Z14253, так и LC_Ada-Z14253 обладает схожей с ZAZ3363 способностью блокировать IL-17A. Как и ожидалось, никакого ингибирования не наблюдали в случае Ada или отрицательного контроля Z04726-PP013.

Блокирование TNF- или TNF/IL-17А-индуцированного образования IL-8 в анализе с использованием NHDF. Исследовали два комплекса HC_Ada-Z14253 и LC_Ada-Z14253 в отношении их способности блокировать индуцированное TNF или индуцированное смесью TNF/IL-17A образование IL-8 в анализе с использованием NHDF. Результаты анализа с использованием NHDF показали, что HC_Ada-Z14253 и LC_Ada-Z14253 обладают ингибирующими профилями, схожими с антителом к TNF Ada, касающимися специфической блокирующей способности в отношении TNF (Фиг. 13С). Однако, HC_Ada-Z14253 и LC_Ada-Z14253 обладали превосходящими ингибирующими профилями по сравнению с Ada и ZAZ3363 в комбинированном анализе, в котором исследовали блокирующий эффект как в отношении TNF, так и IL-17 (Фиг. 13D).

Пример 20

Анализ фармакокинетики полипептидов Z-ABD-Z in vivo на обезьянах

В этом примере описывается исследование с повторным введением дозы, выполненное в течение 10 суток на яванских макаках, которым вводили полипептид Z-ABD-Z ZAZ3363. Результаты использовали для оценки периода полувыведения ZAZ3363 у яванских макак.

Материалы и методы

ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244) вводили в дозе 20 мг/кг (n=2; 1 самцу и 1 самке) и 40 мг/кг (n=4; 2 самцам и 2 самкам) в виде непродолжительной в.в. инфузии в 1-е, 4-е, 7-е и 10-е сутки. Образцы плазмы крови для определения концентрации ZAZ3363 собирали вместе с введением первой дозы на 1-е сутки (в моменты времени 0 (перед введением), через 5 мин, 0,5, 1, 2, 6, 24 и 48 ч после введения) и последней дозы на 10-е сутки (в моменты времени 0 (перед введением), через 5 мин, 0,5, 1, 2, 6, 24, 48 ч, 5, 7, 10, 12, 14 суток и 21 сутки после введения). Количественное определение ZAZ3363 в образцах плазмы крови проводили методом LC-MS/MS, беря за основу пептиды, полученные после триптического расщепления ZAZ3363. Профили «концентрация-время» оценивали с использованием как некомпартментных методов с отдельными анализами для 1-х суток и 10-х суток, так и компартментных методов оценки данных для 1-х суток и 10-х суток, объединенных для каждого животного.

Результаты

Профили зависимости средней концентрации в плазме крови от времени для ZAZ3363 после введения в 1-е сутки и 10-е сутки показаны на Фиг. 14А и Фиг. 14В, соответственно. Несмотря на то, что ZAZ3363 не вводили в виде разовой дозы с полной РK оценкой, имеющиеся в наличии результаты после повторных введений дозы позволяют предсказать профиль «концентрация-время» после введения разовых доз. Концентрации в плазме крови уменьшались, демонстрируя две фазы в соответствии с двухкомпартментной моделью (two-compartment behavior). второй фазы, оцененный на основании этого исследования и второго исследования с повторным введением дозы (данные не показаны), составлял приблизительно 4-7,5 суток, что находится в соответствии с приводимым в литературе значением для альбумина у обезьян (Deo et al., 1974, J. Nutr., 104: 858-64). Никаких существенных связанных с полом различий не наблюдалось.

Пример 21

Пероральное введение полипептида Z-ABD-Z собакам

Материалы и методы

Приготовление капсул. ZAZ3363 (SEQ ID NO: 1244) готовили в OAF1 (см. пример 18) в концентрации 100 мг/мл. Данный препарат лиофилизировали и вносили в капсулы с твердой оболочкой, с последующим нанесением энтеросолюбильного покрытия (выполненным в Catalent Pharma Solutions, Beinheim, France). Каждая капсула содержала приблизительно 25 мг ZAZ3363.

Исследование на животных. Исследование на животных проводили в Huntingdon Life Science (Cambridgeshire, UK). Каждая из подвергнутых голоданию собак породы бигль (n равно 3; самки) получала шесть капсул, содержащих ZAZ3363 (приблизительно 150 мг). Образцы сыворотки крови отбирали через 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 и 96 ч после введения.

Количественное определение. Концентрацию ZAZ3363 в образцах сыворотки крови определяли количественно, используя РК-сэндвич-ELISA по существу так, как описано в примере 16, но используя моноклональный IgG к Z варианту, собственного приготовления, на первой стадии сенсибилизации.

Результаты

Профили зависимости концентраций ZAZ3363 в сыворотке крови от времени для индивидуальных собак показаны на Фиг. 15. Результаты показали наличие всасывания ZAZ3363 в кишечнике для всех трех животных, но с некоторыми вариациями между отдельными животными. Концентрация ZAZ3363 в сыворотке крови достигала максимума, равного 2-30 нМ. То, что уровни ZAZ3363 в сыворотке крови остаются неизменными по меньшей мере до 96 ч, приписывается взаимодействию альбумина собаки с ABD группировкой РР013 (SEQ ID NO: 1223), входящей в состав ZAZ3363. Способность РР013 связываться с альбумином собаки была продемонстрирована ранее (WO 2012/004384).

СПИСОК ВОПЛОЩЕНИЙ ПО ПУНКТАМ

1. IL-17А-связывающий полипептид, содержащий IL-17А-связывающий мотив, ВМ, где указанный мотив состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из:

1)

где независимо друг от друга

Х₂ выбран из А, Н, М и Y;

Х₄ выбран из A, D, Е, F, К, L, М, N, Q, R, S и Y;

Х₆ выбран из A, Q и W;

Х₇ выбран из F, I, L, М, V, W и Y;

Х₁₀ выбран из А и W;

Х₁₁ выбран из A, D, Е, F, G, L, М, N, Q, S, Т и Y;

X₁₆ выбран из N и Т;

Х₁₇ выбран из Н, W и Y;

X₁₈ выбран из A, D, Е, Н и V;

Х₂₀ выбран из A, G, Q, S и W;

Х₂₁ выбран из A, D, Е, F, Н, К, N, R, Т, V, W и Y;

Х₂₅ выбран из A, D, Е, G, Н, I, L, М, N, Q, R, S, Т и V;

Х₂₆ выбран из К и S;

Х₂₈ выбран из I, L, N и R; и

Х₂₉ выбран из D и R;

и

2) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 89% идентичность последовательности, определенной в (1).

2. IL-17А-связывающий полипептид по п. 1, при этом в последовательности (1)

Х₂ выбран из А, Н и М;

Х₄ выбран из A, D, Е, F, L, М, N, Q, R и Y;

Х₁₁ выбран из A, D, Е, F, G, L, М, N, S, Т и Y;

X₁₈ выбран из A, D, Е и V;

Х₂₀ выбран из A, G, Q и W;

Х₂₁ выбран из Е, F, Н, N, R, Т, V, W и Y;

Х₂₅ выбран из A, D, Е, G, Н, I, L, N, Q, R, S, Т и V; и

Х₂₈ выбран из I, N и R.

3. IL-17А-связывающий полипептид по п. 2, при этом в последовательности (1)

X₁₆ представляет собой Т;

Х₁₇ представляет собой W;

Х₂₁ выбран из Е, F, Н, W, Т и Y;

Х₂₅ выбран из A, D, Е, G, Н, I, L, N, Q, R, S и Т;

Х₂₆ представляет собой К; и

Х₂₉ представляет собой D.

4. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-3, где последовательность (1) удовлетворяет по меньшей мере шести из одиннадцати условий I-XI:

I. Х₂ представляет собой А;

II. Х₄ выбран из D, Е и Q;

III. Х₆ представляет собой А;

IV. Х₇ выбран из F и V;

V. Х₁₆ представляет собой Т;

VI. Х₁₇ представляет собой W;

VII. X₁₈ выбран из А и D;

VIII. Х₂₀ представляет собой W;

IX. Х₂₆ представляет собой K;

X. Х₂₈ представляет собой R; и

XI. X₂₉ представляет собой D.

5. IL-17А-связывающий полипептид по п. 4, где последовательность (1) удовлетворяет по меньшей мере семи из одиннадцати условий I-XI.

6. IL-17А-связывающий полипептид по п. 5, где последовательность (1) удовлетворяет по меньшей мере восьми из одиннадцати условий I-XI.

7. IL-17А-связывающий полипептид по п. 6, где последовательность (1) удовлетворяет по меньшей мере девяти из одиннадцати условий I-XI.

8. IL-17А-связывающий полипептид по п. 7, где последовательность (1) удовлетворяет по меньшей мере десяти из одиннадцати условий I-XI.

9. IL-17А-связывающий полипептид по п. 8, где последовательность (1) удовлетворяет всем одиннадцати условиям I-XI.

10. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-9, где Х₂Х₆, Х₂Х₁₀ или Х₆Х₁₀ представляет собой АА.

11. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-10, где Х₂Х₁₇, Х₂Х₂₀, X₆X₁₇, Х₆Х₂₀, X₁₀X₁₇ или Х₁₀Х₂₀ представляет собой AW.

12. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-11, где Х₂Х₂₈, Х₆Х₂₈ или Х₁₀Х₂₈ представляет собой AR.

13. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-12, где X₁₇X₂₈ или Х₂₀Х₂₈ представляет собой WR.

14. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-13, где X₁₇X₂₀ представляет собой WW.

15. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-14, где последовательность (1) представляет собой последовательность от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-1216.

16. IL-17А-связывающий полипептид по п. 15, где последовательность (1) представляет собой последовательность от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66, 1200, 1206 и 1214.

17. IL-17А-связывающий полипептид по п. 16, где последовательность (1) представляет собой последовательность от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66.

18. IL-17А-связывающий полипептид по п. 17, где последовательность (1) представляет собой последовательность от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-35.

19. IL-17А-связывающий полипептид по п. 18, где последовательность (1) представляет собой последовательность от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-27.

20. IL-17А-связывающий полипептид по п. 19, где последовательность (1) представляет собой последовательность от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10.

21. IL-17А-связывающий полипептид по п. 20, где последовательность (1) представляет собой последовательность от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-7.

22. IL-17А-связывающий полипептид по п. 21, где последовательность (1) представляет собой последовательность от положения 8 до положения 36 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4.

23. IL-17А-связывающий полипептид по п. 22, где последовательность (1) представляет собой последовательность от положения 8 до положения 36 в SEQ ID NO: 1.

24. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-23, где указанный IL-17А-связывающий мотив образует часть белкового домена в виде трехспирального пучка.

25. IL-17А-связывающий полипептид по п. 24, где указанный IL-17A-связывающий мотив по существу образует часть двух спиралей с соединяющей петлей в пределах указанного белкового домена в виде трехспирального пучка.

26. IL-17А-связывающий полипептид по п. 25, где указанный белковый домен в виде трехспирального пучка выбран из доменов рецепторов бактерий.

27. IL-17А-связывающий полипептид по п. 26, где указанный белковый домен в виде трехспирального пучка выбран из доменов белка А из Staphylococcus aureus или его производных.

28. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-27, который содержит связывающий модуль, BMod, с аминокислотной последовательностью, выбранной из:

3)

где

[ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, который определен в любом из п.п. 1-23, при условии, что Х₂₉ представляет собой D;

Х_а выбран из А и S;

X_b выбран из N и Е;

X_c выбран из A, S и С;

X_d выбран из Е, N и S;

Х_е выбран из D, Е и S;

X_f выбран из А и S; и

4) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 85% идентичность последовательности, определенной в (3).

29. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-27, который содержит связывающий модуль, BMod, с аминокислотной последовательностью, выбранной из:

v)

где

[ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, который определен в любом из п.п. 1-23, при условии, что Х₂₉ представляет собой R;

Х_а выбран из А и S;

X_b выбран из N и Е;

X_c выбран из A, S и С;

X_d выбран из Е, N и S;

Х_е выбран из D, Е и S;

X_f выбран из А и S; и

6) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 85% идентичность последовательности, определенной в (5).

30. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28 или 29, где Х_а в последовательности (3) или (5) представляет собой А.

31. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28 или 29, где Х_а в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

32. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-31, где X_b в последовательности (3) или (5) представляет собой N.

33. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-31, где X_b в последовательности (3) или (5) представляет собой Е.

34. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-33, где X_c в последовательности (3) или (5) представляет собой А.

35. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-33, где X_c в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

36. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-33, где X_c в последовательности (3) или (5) представляет собой С.

37. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-36, где X_d в последовательности (3) или (5) представляет собой Е.

38. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-36, где X_d в последовательности (3) или (5) представляет собой N.

39. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-36, где X_d в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

40. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-39, где Х_е в последовательности (3) или (5) представляет собой D.

41. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-39, где Х_е в последовательности (3) или (5) представляет собой Е.

42. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-39, где Х_е в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

43. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 37 и 39-42, где X_dX_e в последовательности (3) или (5) выбран из ЕЕ, ES, SD, SE и SS.

44. IL-17А-связывающий полипептид по п. 43, где X_dX_e в последовательности (3) или (5) представляет собой ES.

45. IL-17А-связывающий полипептид по п. 43, где X_dX_e в последовательности (3) или (5) представляет собой SE.

46. IL-17А-связывающий полипептид по п. 43, где X_dX_e в последовательности (3) или (5) представляет собой SD.

47. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-46, где X_f в последовательности (3) или (5) представляет собой А.

48. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 28-46, где X_f в последовательности (3) или (5) представляет собой S.

49. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28 или 29, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой А; и X_f представляет собой А.

50. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28 или 29, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой А; и X_f представляет собой А.

51. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28 или 29, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; и X_f представляет собой А.

52. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28 или 29, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; и X_f представляет собой S.

53. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28 или 29, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; и X_f представляет собой А.

54. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28 или 29, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой А; и X_f представляет собой S.

55. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28 или 29, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; и X_f представляет собой S.

56. IL-17А-связывающий полипептид по п. 49, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой А.

57. IL-17А-связывающий полипептид по п. 50, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой А.

58. IL-17А-связывающий полипептид по п. 51, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой А.

59. IL-17А-связывающий полипептид по п. 52, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой S.

60. IL-17А-связывающий полипептид по п. 53, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой А.

61. IL-17А-связывающий полипептид по п. 55, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой ND; и X_f представляет собой S.

62. IL-17А-связывающий полипептид по п. 49, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой А.

63. IL-17А-связывающий полипептид по п. 50, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой А.

64. IL-17А-связывающий полипептид по п. 51, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой А.

65. IL-17А-связывающий полипептид по п. 52, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой S.

66. IL-17А-связывающий полипептид по п. 54, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой S.

67. IL-17А-связывающий полипептид по п. 55, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой SE; и X_f представляет собой S.

68. IL-17А-связывающий полипептид по п. 49, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой А.

69. IL-17А-связывающий полипептид по п. 50, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой А.

70. IL-17А-связывающий полипептид по п. 51, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой А.

71. IL-17А-связывающий полипептид по п. 52, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой S.

72. IL-17А-связывающий полипептид по п. 55, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой ES; и X_f представляет собой S.

73. IL-17А-связывающий полипептид по п. 49, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой А.

74. IL-17А-связывающий полипептид по п. 50, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой А.

75. IL-17А-связывающий полипептид по п. 51, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой А; X_b представляет собой N; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой А.

76. IL-17А-связывающий полипептид по п. 52, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой S; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой S.

77. IL-17А-связывающий полипептид по п. 54, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой A; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой S.

78. IL-17А-связывающий полипептид по п. 55, где, в последовательности (3) или (5), Х_а представляет собой S; X_b представляет собой Е; X_c представляет собой С; X_dX_e представляет собой SD; и X_f представляет собой S.

79. IL-17А-связывающий полипептид по п. 28, где указанная последовательность (3) представляет собой последовательность от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-1216.

80. IL-17А-связывающий полипептид по п. 79, где последовательность (3) представляет собой последовательность от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66, 1200, 1206 и 1214.

81. IL-17А-связывающий полипептид по п. 80, где последовательность (3) представляет собой последовательность от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-66.

82. IL-17А-связывающий полипептид по п. 81, где последовательность (3) представляет собой последовательность от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-35.

83. IL-17А-связывающий полипептид по п. 82, где последовательность (3) представляет собой последовательность от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-27.

84. IL-17А-связывающий полипептид по п. 83, где последовательность (3) представляет собой последовательность от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10.

85. IL-17А-связывающий полипептид по п. 84, где последовательность (3) представляет собой последовательность от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-7.

86. IL-17А-связывающий полипептид по п. 85, где последовательность (3) представляет собой последовательность от положения 7 до положения 55 в последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4.

87. IL-17А-связывающий полипептид по п. 86, где последовательность (3) представляет собой последовательность от положения 7 до положения 55 в SEQ ID NO: 1.

88. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-87, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

7) YA-[BMod]-AP;

где [BMod] представляет собой IL-17А-связывающий модуль, который определен в любом из п.п. 28-87; и

8) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (7).

89. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-87, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

9) FA-[BMod]-AP;

где [BMod] представляет собой IL-17А-связывающий модуль, который определен в любом из п.п. 28-87; и

10) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (9).

90. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-87, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

11) FN-[SMod]-AP;

где [BMod] представляет собой IL-17А-связывающий модуль, который определен в любом из п.п. 28-87; и

12) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (11).

91. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-90, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

где [ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, который определен в любом из п.п. 1-23.

92. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-92, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

13) VDAKYAK-[BM]-DPSQSSELLSEAKKLNDSQAPK;

где [ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, который определен в любом из п.п. 1-23; и

14) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (13).

93. IL-17А-связывающий полипептид по п. 92, где последовательность (13) выбрана из SEQ ID NO: 1-1216.

94. IL-17А-связывающий полипептид по п. 93, где последовательность (13) выбрана из SEQ ID NO: 1-66, 1200, 1206 и 1214.

95. IL-17А-связывающий полипептид по п. 94, где последовательность (13) выбрана из SEQ ID NO: 1-66.

96. IL-17А-связывающий полипептид по п. 95, где последовательность (13) выбрана из SEQ ID NO: 1-35.

97. IL-17А-связывающий полипептид по п. 96, где последовательность (13) выбрана из SEQ ID NO: 1-27.

98. IL-17А-связывающий полипептид по п. 97, где последовательность (13) выбрана из SEQ ID NO: 1-10.

99. IL-17А-связывающий полипептид по п. 98, где последовательность (13) выбрана из SEQ ID NO: 1-7.

100. IL-17А-связывающий полипептид по п. 99, где последовательность (13) выбрана из SEQ ID NO: 1-4.

101. IL-17А-связывающий полипептид по п. 100, где последовательность (13) представляет собой SEQ ID NO: 1.

102. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-91, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

15) AEAKYAK-[BM]-DPSQSSELLSEAKKLNDSQAPK;

где [ВМ] представляет собой IL-17А-связывающий мотив, который определен в любом из п.п. 1-23; и

16) аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 86% идентичность последовательности, определенной в (15).

103. IL-17А-связывающий полипептид по п. 102, где последовательность (15) выбрана из SEQ ID NO: 1217-1222.

104. IL-17А-связывающий полипептид по п. 103, где последовательность (15) выбрана из SEQ ID NO: 1218-1222.

105. IL-17А-связывающий полипептид по п. 104, где последовательность (15) выбрана из SEQ ID NO: 1219-1222.

106. IL-17А-связывающий полипептид по п. 105, где последовательность (15) выбрана из SEQ ID NO: 1219 и SEQ ID NO: 1222.

107. IL-17А-связывающий полипептид по п. 106, где последовательность (15) представляет собой SEQ ID NO: 1219.

108. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-107, который способен связываться с IL-17A так, что значение K_D для данного взаимодействия составляет не более 1×10^-6 М, например не более 1×10^-7 М, например не более 1×10^-8 М, например не более 1×10^-9 М.

109. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-108, который способен связываться с молекулой IL-17A, выбранной из группы, состоящей из человеческого IL-17A и мышиного IL-17A.

110. IL-17А-связывающий полипептид по п. 109, который способен связываться с человеческим IL-17A.

111. IL-17А-связывающий полипептид по п. 109, который способен связываться с мышиным IL-17A.

112. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 109-111, который способен связываться с человеческим IL-17A и с мышиным IL-17A.

113. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 109, 110 и 112, где указанный человеческий IL-17A содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1226 или ее антигенно эффективный фрагмент.

114. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 109, 111 и 112, где указанный мышиный IL-17A содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 1227 или ее антигенно эффективный фрагмент.

115. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-114, который содержит дополнительные аминокислоты на С-конце и/или N-конце.

116. IL-17А-связывающий полипептид по п. 115, где указанная(ые) дополнительная(ые) аминокислота(ы) улучшает(ют) и/или упрощает/упрощают получение, очистку, стабилизацию in vivo или in vitro, связывание или детекцию полипептида.

117. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-116 в мультимерной форме, содержащей по меньшей мере две мономерные единицы IL-17А-связывающего полипептида, аминокислотные последовательности которых могут быть одинаковыми или разными.

118. IL-17А-связывающий полипептид по п. 117, где указанные мономерные единицы IL-17А-связывающего полипептида связаны друг с другом ковалентно.

119. IL-17А-связывающий полипептид по п. 118, где мономерные единицы IL-17А-связывающего полипептида экспрессированы в виде слитого белка.

120. IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 117-119 в димерной форме.

121. Слитый белок или конъюгат, содержащий

- первую группировку, состоящую из IL-17А-связывающего полипептида по любому из п.п. 1-120; и

- вторую группировку, состоящую из полипептида, имеющего желаемую биологическую активность.

122. Слитый белок или конъюгат по п. 121, где указанная желаемая биологическая активность представляет собой терапевтическую активность.

123. Слитый белок или конъюгат по п. 121, где указанная желаемая биологическая активность представляет собой связывающую активность.

124. Слитый белок или конъюгат по п. 123, где указанная связывающая активность представляет собой альбумин-связывающую активность, которая увеличивает полупериод существования in vivo слитого белка или конъюгата.

125. Слитый белок или конъюгат по п. 124, содержащий два IL-17A-связывающих полипептида, каждый из которых определен в любом из п.п. 1-116, с альбумин-связывающей группировкой между ними.

126. Слитый белок или конъюгат по п. 125, который способен связываться с IL-17A так, что значение K_D для данного взаимодействия составляет не более 1×10^-10 М, например не более 1×10^-11 М, например не более 1×10^-12 М, например не более 1×10^-13 М.

127. Слитый белок или конъюгат по любому из п.п. 124-126, где указанная вторая группировка содержит альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G или его производное.

128. Слитый белок или конъюгат по п. 123, где действие указанной связывающей активности заключается в ингибировании биологической активности.

129. Слитый белок или конъюгат по п. 123, где действие указанной связывающей активности заключается в стимулировании биологической активности.

130. Слитый белок или конъюгат по п. 121, где указанная желаемая биологическая активность представляет собой ферментативную активность.

131. Слитый белок или конъюгат по п. 122, где вторая группировка представляет собой терапевтически активный полипептид.

132. Слитый белок или конъюгат по п. 131, где вторая группировка представляет собой агент, модифицирующий иммунный ответ, например, противовоспалительный агент.

133. Слитый белок или конъюгат по любому из п.п. 121-122 и 130-132, где вторая группировка выбрана из группы, состоящей из человеческих эндогенных ферментов, гормонов, факторов роста, хемокинов, цитокинов и лимфокинов и их агонистов, антагонистов и ингибиторов.

134. Слитый белок или конъюгат по п. 131, где вторая группировка представляет собой токсическое соединение.

135. Слитый белок или конъюгат по п. 123, где указанная связывающая активность относится к связыванию с фактором, ассоциированным с иммунным ответом, например, с ассоциированным с воспалением фактором.

136. Комплекс, содержащий по меньшей мере один IL-17А-связывающий полипептид по любому из п.п. 1-117 или по меньшей мере один слитый белок или конъюгат по любому из п.п. 121-135 и по меньшей мере одно антитело или его антиген-связывающий фрагмент.

137. Комплекс по п. 136, где указанное по меньшей мере одно антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из полноразмерных антител, Fab фрагментов, Fab' фрагментов, F(ab')₂ фрагментов, Fc фрагментов, Fv фрагментов, одноцепочечных Fv (scFv) фрагментов, (scFv)₂ и однодоменных антител.

138. Комплекс по п. 137, где указанное по меньшей мере одно антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из полноразмерных антител, Fab фрагментов и scFv фрагментов.

139. Комплекс по п. 138, где указанное по меньшей мере одно антитело или его антиген-связывающий фрагмент представляет собой полноразмерное антитело.

140. Комплекс по любому из п.п. 136-139, где указанное антитело или его антиген-связывающий фрагмент представляет собой моноклональное антитело или его антиген-связывающий фрагмент.

141. Комплекс по любому из п.п. 136-140, где указанное антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из человеческих антител, гуманизированных антител и химерных антител и их антиген-связывающих фрагментов.

142. Комплекс по п. 141, где указанное антитело или его антиген-связывающий фрагмент представляет собой человеческое или гуманизированное антитело или его антиген-связывающий фрагмент.

143. Комплекс по любому из п.п. 136-142, где указанное антитело или его антиген-связывающий фрагмент обладает аффинностью к антигену, такому как антиген, выбранный из группы, состоящей из антигена, ассоциированного с расстройством, связанным с ангиогенезом, и антигена, ассоциированного с иммунным ответом или с расстройством иммунной системы.

144. Комплекс по п. 143, где указанный антиген ассоциирован с расстройством, связанным с ангиогенезом.

145. Комплекс по п. 143, где указанный антиген ассоциирован с иммунным ответом или с расстройством иммунной системы, например, ассоциирован с воспалением.

146. Комплекс по любому из п.п. 136-145, представляющий собой слитый белок или конъюгат.

147. Комплекс по любому из п.п. 136-146, где указанный IL-17A-связывающий полипептид присоединен к N-концу или С-концу тяжелой цепи указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента.

148. Комплекс по любому из п.п. 136-146, где указанный IL-17A-связывающий полипептид присоединен к N-концу или С-концу легкой цепи указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента.

149. Комплекс по любому из п.п. 136-146, где указанный IL-17A-связывающий полипептид присоединен к N-концу и/или С-концу легкой цепи и тяжелой цепи указанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента.

150. Комплекс по любому из п.п. 146-149, представляющий собой слитый белок.

151. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 1-150, дополнительно содержащий по меньшей мере один линкер, например, выбранный из группы, состоящей из непептидных линкеров, гибких аминокислотных линкеров, жестких аминокислотных линкеров и расщепляемых аминокислотных линкеров.

152. Слитый белок или конъюгат по п. 151, где указанный линкер размещен между указанной первой группировкой и указанной второй группировкой.

153. Комплекс по п. 151, где указанный линкер размещен между указанным IL-17А-связывающим полипептидом и указанным антителом или его антиген-связывающим фрагментом.

154. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 151-153, где указанный линкер представляет собой гибкий линкер, содержащий аминокислотные остатки, выбранные из группы, состоящей из глицина, серина и треонина.

155. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по п. 154, где указанный линкер содержит последовательность общей формулы, выбранной из

(G_nS_m)_p и (S_nG_m)_p,

где независимо

n равно 1-7,

m равно 0-7,

n+m не больше 8, и

р равно 1-10.

156. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по п. 155, где n равно 1-5.

157. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 155-156, где m равно 0-5.

158. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 155-157, где р равно 1-5.

159. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 156-158, где n равно 4, m равно 1, и р равно 1-4.

160. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по п. 159, где указанный линкер содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из G₄S, (G₄S)₂, (G₄S)₃ и (G₄S)₄.

161. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по п. 160, где указанный линкер содержит последовательность G₄S.

162. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 155-159, где указанная общая формула представляет собой GT(G_nS_m)_p.

163. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по п. 162, где указанный линкер содержит последовательность GTG₄S.

164. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 1-163, дополнительно содержащий метку.

165. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по п. 164, где указанная метка выбрана из группы, состоящей из флуоресцентных красителей и металлов, красителей с хромофорной системой, хемилюминесцентных соединений и биолюминесцентных белков, ферментов, радионуклидов и частиц.

166. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 1-165, содержащий хелатирующее окружение, что обеспечивается посредством полиаминополикарбоксилатного хелатора, конъюгированного с IL-17А-связывающим полипептидом через тиольную группу остатка цистеина или аминогруппу остатка лизина.

167. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 1-166, содержащий одну или более группировок полиэтиленгликоля.

168. Полинуклеотид, кодирующий полипептид по любому из п.п. 1-163.

169. Экспрессирующий вектор, содержащий полинуклеотид по п. 168.

170. Клетка-хозяин, содержащая экспрессирующий вектор по п. 169.

171. Способ получения полипептида по любому из п.п. 1-163, включающий

- культивирование клетки хозяина по п. 170 в условиях, разрешающих экспрессию указанного полипептида из указанного экспрессирующего вектора, и

- выделение указанного полипептида.

172. Композиция, содержащая IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 1-167 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель.

173. Композиция по п. 172, дополнительно содержащая по меньшей мере один дополнительный активный агент, такой как агент, выбранный из группы, состоящей из терапевтически активных полипептидов, агентов, модифицирующих иммунный ответ, противовоспалительных агентов и токсических соединений.

174. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 1-167 либо композиция по любому из п.п. 172-173 для перорального, местного, внутривенного, внутрибрюшинного, подкожного, легочного, трансдермального, внутримышечного, интраназального, трансбуккального, сублингвального введения или введения посредством суппозиториев, например, для перорального введения или, например, для местного введения.

175. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс по любому из п.п. 1-167 или композиция по любому из п.п. 172-173 для применения в качестве лекарственного средства, диагностического агента или прогностического агента.

176. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по п. 175, где указанный полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция модулирует функцию IL-17A in vivo.

177. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по любому из п.п. 175-176, где указанный полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция ингибирует IL-17А-опосредованную передачу сигнала.

178. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по любому из п.п. 175-177, где указанный полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция блокирует связывание IL-17A по меньшей мере с одним из своих рецепторов.

179. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по любому из п.п. 175-178 в лечении, диагностике или прогнозировании IL-17А-ассоциированного состояния.

180. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по п. 179, где указанное IL-17A-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний и рака.

181. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по п. 180, где указанное IL-17A-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из воспалительных заболеваний и аутоиммунных заболеваний.

182. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по п. 181, где указанное IL-17A-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из воспалительных состояний, аллергических состояний, реакций гиперчувствительности, аутоиммунных заболеваний, тяжелых инфекций и отторжений трансплантата.

183. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по п. 182, где указанное IL-17A-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита, псориаза, рассеянного склероза, системной красной волчанки, увеита и синдрома сухого глаза.

184. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат, комплекс или композиция для применения по п. 183, где указанное IL-17A-ассоциированное состояние представляет собой псориаз.

185. IL-17А-связывающий полипептид, слитый белок, конъюгат или комплекс для применения в прогнозировании по п. 179, где указанное IL-17A-ассоциированное состояние представляет собой рак, например, рак, выбранный из группы, состоящей из рака желудка, колоректального рака, немелкоклеточного рака легкого, гепатоклеточных карцином и аденокарцином.

186. Способ детекции IL-17A, включающий обеспечение образца с подозрением на присутствие в нем IL-17A, приведение в контакт указанного образца с IL-17А-связывающим полипептидом, слитым белком, конъюгатом или комплексом по любому из п.п. 1-167 или композицией по любому из п.п. 172-173 и детектирование связывания IL-17А-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, свидетельствующего о присутствии IL-17A в образце.

187. Способ определения присутствия IL-17A у субъекта, включающий стадии:

- приведения в контакт субъекта или образца, выделенного из этого субъекта, с IL-17А-связывающим полипептидом, слитым белком, конъюгатом или комплексом по любому из п.п. 1-167 или композицией по любому из п.п. 172-173, и

- получения численного значения, соответствующего количеству IL-17A-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата, комплекса или композиции, которое находится в связанном состоянии в указанном субъекте или с указанным образцом.

188. Способ по п. 187, дополнительно включающий стадию сравнения указанного значения с референсным.

189. Способ по п. 187 или 188, где указанный субъект представляет собой млекопитающее, такое как человек.

190. Способ по любому из п.п. 187-189, осуществляемый in vivo.

191. Способ по любому из п.п. 187-189, осуществляемый in vitro.

192. Способ лечения IL-17А-ассоциированного состояния, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества IL-17A-связывающего полипептида, слитого белка, конъюгата или комплекса по любому из п.п. 1-167 или композиции по любому из п.п. 172-173.

193. Способ по п. 192, где указанное IL-17А-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний и рака.

194. Способ по п. 193, где указанное IL-17А-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из воспалительных заболеваний и аутоиммунных заболеваний.

195. Способ по п. 194, где указанное IL-17А-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из воспалительных состояний, аллергических состояний, реакций гиперчувствительности, аутоиммунных заболеваний, тяжелых инфекций и отторжений трансплантата.

196. Способ по п. 195, где указанное IL-17А-ассоциированное состояние выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита, псориаза, рассеянного склероза, системной красной волчанки, увеита и синдрома сухого глаза.

197. Способ по п. 196, где указанное IL-17А-ассоциированное состояние представляет собой псориаз.

--->

SEQUENCE LISTING

<110> AFFIBODY AB

<120> NEW POLYPEPTIDE

<130> 21079404

<150> EP15150786.0

<151> 2015-01-12

<160> 1294

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 1

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 2

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 2

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 3

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 3

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 4

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 4

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 5

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 5

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Ala Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Asn

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 6

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 6

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Leu Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 7

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 7

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Arg Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Glu

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 8

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 8

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Ala Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Thr

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 9

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 9

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Ala Phe Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Asn

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 10

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 10

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Ala Phe Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 11

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 11

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 12

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 12

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 13

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 13

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 14

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 14

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Ile Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 15

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 15

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 16

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 16

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 17

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 17

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Ala Phe Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 18

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 18

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Thr

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 19

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 19

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Leu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 20

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 20

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Ala Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 21

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 21

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 22

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 22

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Asn

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 23

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 23

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 24

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 24

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Asn

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 25

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 25

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Ala Phe Leu Pro Asn Leu Thr Trp Glu Gln Trp Phe Ala Phe Ile Asp

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 26

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 26

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Tyr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 27

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 27

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Leu

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 28

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 28

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 29

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 29

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 30

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 30

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Leu Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 31

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 31

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 32

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 32

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Glu Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 33

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 33

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Ala Gly Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Glu

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 34

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 34

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Tyr Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 35

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 35

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Arg Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Glu

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 36

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 36

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 37

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 37

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 38

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 38

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 39

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 39

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 40

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 40

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 41

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 41

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 42

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 42

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 43

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 43

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 44

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 44

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 45

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 45

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 46

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 46

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 47

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 47

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 48

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 48

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Arg Ala Ala Met Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 49

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 49

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 50

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 50

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 51

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 51

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 52

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 52

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 53

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 53

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 54

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 54

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 55

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 55

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 56

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 56

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 57

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 57

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 58

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 58

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 59

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 59

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 60

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 60

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Met Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 61

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 61

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 62

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 62

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 63

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 63

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 64

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 64

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Asn

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 65

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 65

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Leu Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asn Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Trp Ala Phe Ile Thr

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 66

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 66

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Met Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Glu Gln Trp Trp Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 67

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 67

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp His Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 68

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 68

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Trp Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 69

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 69

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Arg Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp His Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 70

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 70

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Met Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Asn Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 71

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 71

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Ser Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 72

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 72

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 73

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 73

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 74

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 74

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 75

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 75

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Ile Glu Ile

1 5 10 15

Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Trp His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 76

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 76

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Met Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 77

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 77

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 78

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 78

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Leu Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 79

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 79

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 80

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 80

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Ser Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 81

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 81

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 82

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 82

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 83

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 83

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 84

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 84

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp His Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 85

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 85

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 86

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 86

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 87

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 87

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 88

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 88

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Met Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Ser Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 89

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 89

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Ile Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 90

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 90

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Ser Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 91

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 91

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Met Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 92

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 92

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 93

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 93

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp His Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 94

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 94

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Arg Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 95

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 95

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 96

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 96

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Met Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Trp Ser Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 97

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 97

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 98

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 98

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp His Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 99

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 99

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 100

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 100

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Leu Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 101

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 101

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 102

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 102

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Arg Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 103

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 103

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 104

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 104

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 105

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 105

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Met Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 106

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 106

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Arg Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 107

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 107

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Trp Asn Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 108

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 108

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Arg Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 109

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 109

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Trp His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 110

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 110

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Trp His Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 111

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 111

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Thr Ala Gln Trp Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 112

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 112

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Ala Val Glu Ile

1 5 10 15

Ala Asp Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp His Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 113

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 113

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp Phe Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 114

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 114

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Ala Phe Glu Ile

1 5 10 15

Ala Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Trp His Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Arg Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 115

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 115

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 116

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 116

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 117

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 117

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 118

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 118

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Asn Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 119

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 119

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Lys Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 120

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 120

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Trp Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 121

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 121

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Ala Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Gly Asn Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 122

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 122

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Ser His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 123

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 123

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Ala Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 124

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 124

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Val Gln Gln Val Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 125

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 125

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 126

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 126

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 127

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 127

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Trp Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 128

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 128

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 129

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 129

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 130

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 130

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 131

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 131

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 132

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 132

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 133

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 133

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Ser His Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 134

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 134

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 135

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 135

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Gln Thr Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 136

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 136

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 137

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 137

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gly Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 138

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 138

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Ser Arg Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 139

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 139

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Phe Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 140

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 140

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Lys Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 141

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 141

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 142

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 142

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 143

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 143

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Gly Tyr Ala Gln Leu Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 144

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 144

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Thr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 145

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 145

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 146

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 146

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 147

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 147

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 148

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 148

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 149

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 149

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Ser His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 150

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 150

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Gln Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Arg Gln Gln Arg Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 151

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 151

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asn Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 152

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 152

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 153

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 153

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Ile Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Gly His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 154

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 154

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gly Thr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 155

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 155

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 156

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 156

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 157

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 157

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 158

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 158

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 159

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 159

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 160

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 160

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Gln Asn Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 161

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 161

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Gly Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 162

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 162

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln Asn Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 163

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 163

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asn Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Gly His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 164

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 164

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Gln Asn Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 165

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 165

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 166

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 166

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 167

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 167

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Ala Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Tyr Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 168

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 168

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 169

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 169

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 170

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 170

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 171

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 171

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Gln Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 172

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 172

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 173

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 173

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 174

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 174

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His His Gln Ala Lys Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 175

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 175

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 176

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 176

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gly Lys Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 177

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 177

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 178

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 178

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Gln Ser Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 179

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 179

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 180

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 180

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 181

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 181

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 182

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 182

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 183

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 183

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Lys Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 184

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 184

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 185

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 185

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Asn Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 186

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 186

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Thr Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 187

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 187

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ser Arg Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 188

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 188

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His His Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 189

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 189

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 190

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 190

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asn Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 191

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 191

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His His Gln Gln Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 192

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 192

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 193

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 193

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Arg Ala Gln Ala Thr Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 194

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 194

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 195

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 195

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Gly Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Arg Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 196

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 196

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Gly Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 197

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 197

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gly Lys Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 198

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 198

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 199

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 199

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 200

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 200

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser Arg Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 201

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 201

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Val Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 202

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 202

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ser Lys Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 203

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 203

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 204

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 204

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Leu Tyr Ala Trp Met Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 205

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 205

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gly Lys Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 206

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 206

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 207

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 207

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 208

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 208

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 209

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 209

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Trp Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 210

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 210

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 211

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 211

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 212

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 212

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Lys Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 213

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 213

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 214

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 214

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Asp Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 215

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 215

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 216

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 216

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 217

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 217

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 218

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 218

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Tyr Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 219

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 219

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 220

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 220

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Asp Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 221

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 221

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 222

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 222

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Thr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 223

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 223

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 224

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 224

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 225

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 225

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Gly Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 226

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 226

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Asn Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 227

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 227

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 228

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 228

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Leu Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Gly His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 229

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 229

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Thr Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 230

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 230

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Gln Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Ser His Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 231

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 231

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 232

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 232

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 233

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 233

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 234

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 234

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 235

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 235

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 236

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 236

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 237

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 237

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 238

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 238

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 239

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 239

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 240

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 240

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gly Thr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 241

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 241

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 242

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 242

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 243

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 243

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Arg Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 244

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 244

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 245

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 245

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Gln Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 246

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 246

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 247

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 247

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 248

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 248

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Arg Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 249

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 249

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 250

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 250

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asn Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 251

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 251

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Gly Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 252

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 252

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Thr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 253

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 253

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 254

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 254

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asn Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 255

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 255

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 256

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 256

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gly His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 257

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 257

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Gln Arg Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 258

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 258

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Gln Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 259

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 259

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asn Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 260

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 260

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 261

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 261

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 262

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 262

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln Asn Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 263

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 263

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Thr Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 264

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 264

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Ala Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 265

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 265

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 266

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 266

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 267

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 267

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 268

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 268

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Gly Glu Ala Gln Leu Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 269

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 269

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gly Thr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 270

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 270

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Gly Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 271

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 271

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Lys Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 272

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 272

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 273

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 273

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 274

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 274

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 275

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 275

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Ser Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 276

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 276

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Gly Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln Asn Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 277

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 277

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 278

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 278

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 279

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 279

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Asn Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 280

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 280

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ser Arg Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 281

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 281

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 282

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 282

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 283

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 283

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Ala Glu Ala Gln Leu Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 284

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 284

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Ala Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 285

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 285

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asn Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 286

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 286

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Gln Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 287

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 287

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Trp Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 288

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 288

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 289

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 289

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 290

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 290

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 291

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 291

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 292

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 292

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 293

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 293

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 294

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 294

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 295

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 295

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Ser His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 296

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 296

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Gln Arg Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 297

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 297

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Ala Asn Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 298

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 298

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Asn Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala Thr Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 299

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 299

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Trp Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Arg Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 300

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 300

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 301

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 301

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 302

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 302

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 303

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 303

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Lys Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 304

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 304

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 305

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 305

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 306

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 306

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Gly Glu Ala Gln Ile Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 307

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 307

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 308

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 308

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 309

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 309

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Gln Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Lys Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 310

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 310

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 311

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 311

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 312

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 312

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 313

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 313

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Thr Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 314

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 314

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 315

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 315

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Ala Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 316

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 316

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Phe Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 317

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 317

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Asn Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 318

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 318

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 319

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 319

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 320

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 320

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 321

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 321

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 322

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 322

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 323

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 323

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Leu Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 324

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 324

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Arg Asp Gln Gln Thr Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 325

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 325

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 326

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 326

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Val Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 327

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 327

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Arg Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 328

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 328

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Arg Asp Gln Ala Ser Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 329

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 329

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Ala Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Val Gln Ala Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 330

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 330

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Thr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 331

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 331

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Thr Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 332

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 332

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Glu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Thr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 333

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 333

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Thr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 334

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 334

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 335

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 335

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Val Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 336

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 336

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Val Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 337

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 337

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 338

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 338

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 339

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 339

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His His Gln Ala Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 340

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 340

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ala His Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 341

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 341

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 342

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 342

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Lys Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 343

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 343

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Gly Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Lys Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 344

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 344

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Val Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 345

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 345

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gly Arg Ala Phe Ile Gly

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 346

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 346

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Val Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 347

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 347

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 348

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 348

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gly Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 349

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 349

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Ala Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 350

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 350

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 351

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 351

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Asp Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Arg Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 352

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 352

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Arg Gln Gln Val Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 353

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 353

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Thr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 354

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 354

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 355

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 355

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His His Gln Ala Val Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 356

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 356

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 357

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 357

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 358

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 358

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Trp Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gly Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 359

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 359

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ser Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 360

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 360

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gln Lys Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 361

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 361

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 362

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 362

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 363

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 363

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 364

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 364

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Gln Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 365

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 365

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gln Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 366

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 366

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Val Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 367

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 367

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 368

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 368

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Leu Asp Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gly His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 369

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 369

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asn Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Gln His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 370

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 370

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Lys Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 371

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 371

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Gln Ile Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Gly Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 372

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 372

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asn Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Ala

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 373

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 373

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 374

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 374

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 375

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 375

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Gln Thr Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 376

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 376

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Gly Thr Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 377

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 377

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala His Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 378

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 378

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 379

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 379

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Gln Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Gln Val Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 380

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 380

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Glu Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Lys Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 381

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 381

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Ala Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile His

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 382

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 382

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Val Gln Gln Arg Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 383

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 383

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Gln Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Ala Arg Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 384

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 384

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 385

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 385

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Tyr Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala Val Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 386

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 386

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Gln Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Ala Arg Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 387

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 387

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp His Gln Ser Asn Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 388

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 388

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Phe Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser Asn Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 389

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 389

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asn Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Ala Gln Gln Asn Ala Phe Ile Arg

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 390

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 390

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Met Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ala Phe Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 391

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 391

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Val Gln Ser His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 392

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 392

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ala Leu Pro Asn Leu Thr His Val Gln Ala Lys Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 393

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 393

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Tyr Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Trp Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 394

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 394

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Phe Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr His Asp Gln Ala Tyr Ala Phe Ile Val

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 395

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 395

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Asn Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Ala Gln Gln His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 396

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 396

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Ser Leu Pro Asn Leu Thr His Val Gln Ala Arg Ala Phe Ile Ile

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 397

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 397

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu His Asp Glu Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Thr Leu Pro Asn Leu Thr His Ala Gln Ala Arg Ala Phe Ile Ser

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 398

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 398

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Ala Asp Tyr Ala Trp Phe Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Gln Tyr Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Asn Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 399

<211> 58

<212> PRT

<213> ARTIFICIAL SEQUENCE

<220>

<223> Engineered IL-17A binding polypeptide

<400> 399

Val Asp Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Asp Arg Ala Gln Trp Glu Ile

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Asn Leu Thr Tyr Asp Gln Ser His Ala Phe Ile Gln

20 25 30

Lys Leu Leu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala

35 40 45

Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys

50 55

<210> 400

<211> 58