АНТИТЕЛА К PD-1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2021 года по МПК C07K16/28 C12N15/13 C12N15/63 A61K39/395 A61P35/00 A61P37/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] В заявке испрашивается приоритет по предварительной патентной заявке США № 62/416,602, поданной 2 ноября 2016 года, которая включена посредством ссылки во всей ее полноте с любой целью.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0002] Предлагаются антитела, которые связываются с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1). Также предлагаются способы лечения, включающие введение анти-PD-1 антител.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0003] Белок запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1) является ингибирующим членом семейства рецепторов CD28, которое также включает CD28, CTLA-4, ICOS и BTLA. PD-1 экспрессируется на поверхности активированных В-клеток, Т-клеток и миелоидных клеток. PD-1 содержит мембранопроксимальный иммунорецепторный ингибирующий мотив на основе тирозина (ITIM) и мембранодистальный мотив переключения на основе тирозина (ITSM). PD-1, хотя и является структурно сходным с CTLA-4, лишен мотива MYPPY, который является критическим для связывания В7-1 и В7-2. Кроме того, хотя CD28, ICOS и CTLA-4 (другие члены семейства CD28) все имеют неспаренный остаток цистеина, дающий возможность гомодимеризации, предполагается, что PD-1 существует в виде мономера, не имея неспаренного остатка цистеина, характерного для других членов семейства CD28. Рецептор PD-1 имеет два лиганда, PD-лиганд-1 (PD-L1) и PD-L2. Термин «PD-L1» относится к лиганду рецептора PD-1, также известному как CD274 и B7H1. PD-L1 представляет собой белок из 290 аминокислот с внеклеточным IgV-подобным доменом, внеклеточным IgC-подобным доменом, трансмембранным доменом и высококонсервативным внутриклеточным доменом из приблизительно 30 аминокислот. PD-L1 конститутивно экспрессируется на многих клетках, например антигенпрезентирующих клетках (например, дендритных клетках, макрофагах и В-клетках), а также на гемопоэтических и негемопоэтических клетках (например, эндотелиальных клетках сосудов, островках Лангерганса и иммунологически привилегированных областях). Термин «PD-L2» относится к лиганду рецептора PD-1, также известному как CD273 и B7-DC. У людей PD-L2 имеет внеклеточный IgV-подобный домен, внеклеточный IgC-подобный домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен из приблизительно 30 аминокислот. PD-L2 имеет более ограниченную экспрессию, чем PD-L1, с его экспрессией в значительной степени ограниченной гемопоэтическими клетками, включая макрофаги, дендритные клетки, некоторые субпопуляции В-клеток и тучные клетки костного мозга.

[0004] PD-1 функционирует как иммунная контрольная точка и предотвращает активацию Т-клеток. Антагонисты PD-1 активируют иммунную систему для атаки опухолей и продемонстрировали успех в лечении рака, а в некоторых случаях и с меньшей токсичностью, чем другие химиотерапевтические лекарственные средства. Антагонисты PD-1 могут также использоваться в схемах лечения в комбинации с другими химиотерапевтическими агентами. Одобренные в настоящее время антагонисты PD-1 включают анти-PD-1 антитела, Opdivo^® и Keytruda^®, и анти-PD-1 антитело, Tecentriq™.

[0005] Сохраняется необходимость в дополнительных антагонистах PD-1 для лечения рака и других заболеваний и расстройств.

Сущность изобретения

[0006] Предлагаются антитела, которые связываются с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитела связываются с PD-1 человека и PD-1 мыши, и при этом антитела блокируют связывание PD-L1 и/или PD-L2 с PD-1.

[0007] В некоторых вариантах осуществления предлагается выделенное антитело, которое связывается с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитело связывается с эпитопом, содержащим аминокислоты с 126 по 136 PD-1 человека. В некоторых вариантах осуществления аминокислоты с 126 по 136 пронумерованы в соответствии с SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с PD-1 человека с SEQ ID NO: 382 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с одним или более вариантами PD-1, выбранными из I126A, L128A, A132L, I134A и E136A.

[0008] В некоторых вариантах осуществления антитело:

a) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 I126A ECD-Fc (SEQ ID NO: 389); и/или

b) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 L128A ECD-Fc (SEQ ID NO: 390); и/или

c) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 A132L ECD-Fc (SEQ ID NO: 391); и/или

d) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 I134A ECD-Fc (SEQ ID NO: 392); и/или

e) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 E136A ECD-Fc (SEQ ID NO: 393).

[0009] В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с ECD-Fc PD-1 мыши с SEQ ID NO: 403. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с ECD-Fc PD-1 мыши с SEQ ID NO: 403 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с PD-1 мыши H129P ECD-Fc (SEQ ID NO: 394). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с ECD-Fc варианта PD-1 крысы P129H (SEQ ID NO: 397) с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с PD-1 крысы ECD-Fc (SEQ ID NO: 405).

[0010] В различных вариантах осуществления аффинность определяется биослойной интерферометрией.

[0011] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (V_H), которая идентична на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, и вариабельную область легкой цепи (V_L), которая идентична на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.

[0012] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывается с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитело содержит:

i) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11; или

ii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19; или

iii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27; или

iv) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35; или

v) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43; или

vi) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123; или

vii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, и 290; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291; или

viii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.

[0013] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывает PD-1, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи (V_H) и вариабельную область легкой цепи (V_L), причем:

i) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8; или

ii) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16; или

iii) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24; или

iv) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32; или

v) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 36 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 40; или

vi) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108 и 116; и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112 и 120; или

vii) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, и 284; и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280 и 288; или

viii) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 292, 300, 308 и 316; и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 296, 304, 312 и 320.

[0014] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывает PD-1, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи (V_H) и вариабельную область легкой цепи (V_L), причем:

i) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или

ii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; или

iii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24; или

iv) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32; или

v) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40; или

vi) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48; или

vii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56; или

viii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64; или

ix) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72; или

x) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80; или

xi) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88; или

xii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96; или

xiii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; или

xiv) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112; или

xv) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120; или

xvi) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 124 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128; или

xvii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 132 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 136; или

xviii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 144; или

xix) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 152; или

xx) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160; или

xxi) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168; или

xxii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 172 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176; или

xxiii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 180 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184; или

xxiv) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192; или

xxv) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 196 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 200; или

xxvi) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 204 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208; или

xxvii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 212 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 216; или

xxviii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 220 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 224; или

xxix) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 228 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 232; или

xxx) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 236 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 240; или

xxxi) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 248; или

xxxii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 252 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 256; или

xxxiii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 260 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264; или

xxxiv) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 268 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 272; или

xxxv) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 276 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 280; или

xxxvi) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 284 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 288; или

xxxvii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 292 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 296; или

xxxviii) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 300 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 304; или

xxxix) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 308 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 312; или

xl) V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 316 и V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 320.

[0015] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое конкурирует с антителом, представленным в настоящем документе, за связывание с PD-1 человека, причем антитело связывается с PD-1 человека и PD-1 мыши, и при этом антитело ингибирует связывание PD-1 человека с PD-L1 человека, ингибирует связывание PD-1 человека с PD-L2 человека, ингибирует связывание PD-1 мыши с PD-L1 мыши и ингибирует связывание PD-1 мыши с PD-L2 мыши.

[0016] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывается с PD-1 человека с аффинностью (K_D) менее чем 5 нМ. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывается с PD-1 мыши с аффинностью (K_D) менее чем 10 нМ. В некоторых вариантах осуществления аффинность определяют с использованием биослойной интерферометрии.

[0017] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой антитело человека, химерное антитело или гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой фрагмент антитела, выбранный из фрагмента Fab, Fab', Fv, scFv или (Fab')₂. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой антитело IgG1 или IgG4.

[0018] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывает PD-1 человека. В некоторых вариантах осуществления PD-1 человека содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 382. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывает PD-1 мыши. В некоторых вариантах осуществления PD-1 мыши содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 383. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывает PD-1 яванского макака. В некоторых вариантах осуществления PD-1 яванского макака содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 384.

[0019] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L2. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L2.

[0020] В некоторых вариантах осуществления введение антитела, представленного в настоящем документе, млекопитающему повышает уровень по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, повышает уровень по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2 по меньшей мере в 2 раза. В некоторых вариантах осуществления уровень цитокина измеряется через 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 14 часов, 16 часов, 18 часов, 20 часов, 22 часа, 24 часа, 36 часов или 48 часов после введения антитела. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IFNγ. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IL-2. В некоторых вариантах осуществления уровень хемокина измеряется через 24 часа после введения антитела.

[0021] В некоторых вариантах осуществления введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе, усиливает иммунный ответ у млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе, приводит к активации Т-клеток у млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе, уменьшает размер опухоли у млекопитающего с раковым заболеванием. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления человек болен раком. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).

[0022] В некоторых вариантах осуществления предлагается выделенная нуклеиновая кислота, которая кодирует антитело, представленное в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления предлагается вектор, который содержит нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах осуществления предлагается клетка-хозяин, которая содержит вектор. В некоторых вариантах осуществления предлагается клетка-хозяин, которая продуцирует антитело, представленное в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления предлагается способ получения анти-PD-1 антитела, включающий культивирование клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии антитела. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает выделение антитела, продуцируемого клеткой-хозяином.

[0023] В некоторых вариантах осуществления предложена фармацевтическая композиция, содержащая анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.

[0024] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, предоставленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).

[0025] В некоторых вариантах осуществления предложен способ усиления иммунного ответа у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.

[0026] В некоторых вариантах осуществления предложен способ увеличения активации Т-клетки у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, предоставленного в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.

[0027] В некоторых вариантах осуществления предложен способ уменьшения размера опухоли у млекопитающего с раковым заболеванием, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.

[0028] В любом из представленных в настоящем документе вариантов осуществления млекопитающее может быть человеком.

[0029] В некоторых вариантах осуществления млекопитающему вводят по меньшей мере одно дополнительное лекарственное средство. В некоторых таких вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство вводят одновременно или последовательно с анти-PD-1-антителом. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS-антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.

[0030] В некоторых вариантах осуществления предлагается использование антитела, представленного в настоящем документе, для изготовления лекарственного средства для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство предназначено для введения с по меньшей мере одним дополнительным лекарственным средством. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS-антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.

[0031] В некоторых вариантах осуществления в настоящем раскрытии предлагается применение антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).

[0032] В некоторых вариантах осуществления в настоящем раскрытии для лечения рака предлагается применение антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, и по меньшей мере одного дополнительного лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS-антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).

[0033] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, предоставленное в настоящем документе, или фармацевтическая композиция, содержащая антитело, представленное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель для применения при лечении рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).

[0034] В некоторых вариантах осуществления предлагается способ повышения уровня по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2 у млекопитающего, включающий введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления уровень цитокина измеряется через 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 14 часов, 16 часов, 18 часов, 20 часов, 22 часа, 24 часа, 36 часов или 48 часов после введения антитела. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IFNγ. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IL-2. В некоторых вариантах осуществления уровень цитокина измеряется через 24 после введения антитела. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления человек болен раком. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).

[0035] В некоторых вариантах осуществления иммунный ответ усиливается после введения анти-PD-1 антитела. В некоторых вариантах осуществления активация Т-клеток увеличивается после введения анти-PD-1 антитела. В некоторых вариантах осуществления размер опухоли уменьшается после введения анти-PD-1 антитела.

[0036] В некоторых вариантах осуществления млекопитающему вводят по меньшей мере одно дополнительное лекарственное средство. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство вводят одновременно или последовательно с анти-PD-1 антителом. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.

[0037] В некоторых вариантах осуществления образец рака, полученный от млекопитающего, был определен как экспрессирующий PD-1. В некоторых вариантах осуществления образец демонстрирует 1+, 2+ или 3+ окрашивание PD-1 иммуногистохимическим (ИГХ) анализом. В некоторых вариантах осуществления было определено, что образец имеет повышенный уровень PD-L1. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-L1 определяют с использованием ИГХ.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0038] На фиг. 1 проиллюстрированы концентрации IFNγ после того, как спленоцитарные Т-клетки мыши, активированные анти-CD3 и анти-CD28-антителами, приводили в контакт с анти-PD-1-антителами. IgG1 мыши и IgG2a крысы использовали в качестве контролей. RMP1-14 использовали в качестве положительного контроля анти-PD-1-антитела.

[0039] На фиг. 2 проиллюстрирована EC₅₀ увеличения IL-2 в образцах цельной крови, активированных стафилококковым энтеротоксином B (СЭВ) после инкубации с анти-PD1 антителами. Ниволумаб (Ниво) и пембролизумаб (Пембро) использовали в качестве контрольных анти-PD1 антител. Проиллюстрированы эффекты антител 12228 (28), 13406 (6), 13407 (7), 13408 (8) и 13409 (9).

[0040] На фиг. 3А-3В проиллюстрирована способность анти-PD-1-антител, раскрытых в настоящем документе, блокировать связывание мышиных лигандов с PD-1 мыши. Для оценки влияния антител на взаимодействие между PD-L1 мыши и PD-L2 мыши с PD-1 мыши был использован анализ Octet на приборе Forte-Bio.

[0041] На фиг. 4A-1, 4A-2, 4B-1, 4B-2 и 4C проиллюстрирована способность анти-PD-1-антител, раскрытых в настоящем документе, блокировать связывание лигандов человека с PD-1 человека. Для оценки влияния антител на взаимодействие между PD-L1 человека и PD-L2 человека с PD-1 человека был использован анализ Octet на приборе Forte-Bio.

[0042] На фиг. 5 показано уменьшение размеров опухолей на мышиной модели опухоли при введении анти-PD-1-антитела, раскрытого в настоящем документе. Мышам C57BL6/J подкожно в бок инъецировали клетки MC38. IgG1 мыши (MOPC-21) и IgG2a крысы (2A3) использовали в качестве контролей. RMP1-14 использовали в качестве положительного контроля анти-PD1-антитела.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НЕКОТОРЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

[0043] Предлагаются антитела, которые связывают PD-1. Также предлагаются тяжелые цепи и легкие цепи антител, которые способны образовывать антитела, связывающие PD-1. Кроме того, предлагаются антитела, тяжелые цепи и легкие цепи, содержащие одну или более конкретных определяющих комплементарность областей (CDR). Предлагаются полинуклеотиды, кодирующие антитела к PD-1. Также предлагаются полинуклеотиды, кодирующие тяжелые цепи или легкие цепи антител. Предлагаются способы получения и/или очистки антител к PD-1. Предлагаются способы лечения с использованием антител к PD-1. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, способы лечения рака. Предлагаются способы обнаружения PD-1. Такие способы включают способы идентификации индивидуума, которому может получать пользу от лечения анти-PD-1 антителом, мониторинга лечения индивидуума анти-PD-1 антителом и улучшения терапевтической эффективности анти-PD-1 антитела у индивидуума.

[0044] Заголовки разделов, используемые в настоящем документе, предназначены только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие предмет изобретения.

[0045] Все ссылки, цитируемые в настоящем документе, включая патентные заявки, патентные публикации и учетные номера базы данных Genbank, включены в настоящий документ посредством ссылки, как если бы каждая отдельная ссылка была специально и индивидуально указана для включения посредством ссылки во всей ее полноте.

[0046] Описанные способы и процедуры, или на которые в настоящем документе делается ссылка, как правило, широко распространены и обычно используются с использованием обычной методологии специалистами в данной области техники, например широко используемые методологии, описанные в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3^rd edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel, et al. eds., (2003)); серия METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames и G. R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow и D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti и J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); и Cancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993); и их обновленные версии.

I. Определения

[0047] Если не указано иное, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим описанием, имеют значения, которые традиционно подразумеваются средними специалистами в данной области техники. Кроме того, если контекст не требует иного или контекстом явно не указано, термины в единственном числе включают множественное число, а термины во множественном числе включают единственное число. В случае любого противоречия в определениях между различными источниками или ссылками, будет главенствующим определение, представленное в данном документе.

[0048] Понятно, что варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, включают «состоящий» и/или «состоящие по существу из» вариантов осуществления. В контексте данного документа слова в единственном числе означают также и множественное число, если не указано иное. Применение термина «или» в данном документе не означает представления, что альтернативные варианты являются взаимоисключающими.

[0049] В данной заявке использование «или» означает «и/или», если это особо не оговорено или подразумевается специалистом в данной области техники. В контексте пункта патентной формулы, зависящего от другого зависимого пункта, использование «или» относится к более чем одному предшествующему независимому или зависимому пункту.

[0050] Как понятно специалисту в данной области техники, упоминание «около» со значением или параметром в данном документе включает (и описывает) варианты осуществления, относятся к этому значению или параметру, как таковые. Например, описание, относящееся к «около X», включает описание «X».

[0051] Термины «молекула нуклеиновой кислоты», «нуклеиновая кислота» и «полинуклеотид» могут использоваться взаимозаменяемо и относятся к полимеру нуклеотидов. Такие полимеры нуклеотидов могут включать природные и/или искусственные нуклеотиды и включать в себя, но не ограничиваться ими, ДНК, РНК и ПНК. «Нуклеотидная последовательность» относится к линейной последовательности нуклеотидов, которые включают в себя молекулу нуклеиновой кислоты или полинуклеотид.

[0052] Термины «полипептид» и «белок» используются взаимозаменяемо для обозначения полимера аминокислотных остатков и не ограничены минимальной длиной. Такие полимеры аминокислотных остатков могут содержать природные или искусственные аминокислотные остатки и включают в себя, но не ограничиваются ими, пептиды, олигопептиды, димеры, тримеры и мультимеры аминокислотных остатков. В определение включены как полноразмерные белки, так и их фрагменты. Термины также включают пост-экспрессионные модификации полипептида, например гликозилирование, сиалирование, ацетилирование, фосфорилирование и тому подобное. Кроме того, для целей настоящего изобретения термин «полипептид» относится к белку, который включает в себя модификации, такие как делеции, добавления и замены (обычно консервативные по природе), в нативной последовательности, при условии, что белок поддерживает желаемую активность. Эти модификации могут быть преднамеренными, например путем сайт-направленного мутагенеза, или могут быть случайными, например в результате мутаций хозяев, которые продуцируют белки, или ошибок вследствие ПЦР-амплификации.

[0053] «PD-1» и «белок запрограммированной смерти клетки 1», в контексте настоящего описания, относятся к любому нативному PD-1, который является результатом экспрессии и процессинга PD-1 в клетке. Термин включает PD-1 из любого источника позвоночных, включая млекопитающих, например приматы (например, люди и яванские макаки) и грызуны (например, мыши и крысы), если не указано иное. Термин также включает встречающиеся в природе варианты PD-1, например сплайс-варианты или аллельные варианты. Аминокислотная последовательность типичного белка-предшественника PD-1 человека (с сигнальной последовательностью, аминокислоты 1-20) показана в SEQ ID NO: 1. Аминокислотная последовательность типового зрелого PD-1 человека приведена в SEQ ID NO: 382. Аминокислотная последовательность типового белка-предшественника PD-1 мыши (с сигнальной последовательностью, аминокислоты 1-20) приведена в SEQ ID NO: 2. Аминокислотная последовательность типового зрелого PD-1 мыши приведена в SEQ ID NO: 383. Аминокислотная последовательность типового белка-предшественника PD-1 яванского макака (с сигнальной последовательностью, аминокислоты 1-20) приведена в SEQ ID NO: 3. Аминокислотная последовательность типового зрелого PD-1 яванского макака приведена в SEQ ID NO: 384.

[0054] Термин «специфически связывается» с антигеном или эпитопом является термином, который хорошо известен в данной области техники, и способы определения такого специфического связывания также хорошо известны в данной области техники. Термин применим, когда говорят, что молекула проявляет «специфическое связывание» или «преимущественное связывание», если она реагирует или ассоциируется чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или с большей аффинностью с конкретной клеткой или веществом, чем с альтернативными клетками или веществами. Антитело «специфически связывается» или «предпочтительно связывается» с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, более легко и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими веществами. Например, антитело, которое специфически или предпочтительно связывается с эпитопом PD-1, представляет собой антитело, которое связывает этот эпитоп с большей аффинностью, авидностью, более легко и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими эпитопами PD-1 или эпитопами не-PD-1. Понятно также, что после прочтения этого определения, например, антитело (или фрагмент или эпитоп), которое специфически или предпочтительно связывается с первой мишенью, может или не может специфически или предпочтительно связываться со второй мишенью. В частности, термин «специфическое связывание» или «предпочтительное связывание» не обязательно включает (хотя может включать) исключительное связывание. В большинстве случаев, но не обязательно, ссылка на связывание означает предпочтительное связывание. Термин «специфичность» относится к способности связывающего белка селективно связывать антиген.

[0055] Термин «по существу чистый», в контексте настоящего документа, относится к веществу, которое по меньшей мере на 50% является чистым (то есть не содержит загрязнений), более предпочтительно по меньшей мере на 90% является чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 95% является чистым, еще более предпочтительно по меньшей мере на 98% является чистым и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 99% является чистым.

[0056] Термин «эпитоп», в контексте настоящего документа, относится к сайту на целевой молекуле (например, антигене, таком как белок, нуклеиновой кислоте, углеводе или липиде), с которым связывается антигенсвязывающая молекула (например, антитело, фрагмент антитела или каркасный белок, содержащий области связывания антител). Эпитопы часто включают в себя химически активную поверхностную группировку молекул, например боковые цепи аминокислот, полипептидов или углеводов, и имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также характеристики удельного заряда. Эпитопы могут быть образованы как из смежных, так и/или расположенных рядом несмежных остатков (например, аминокислот, нуклеотидов, сахаров, липидного фрагмента) целевой молекулы. Эпитопы, образованные из смежных остатков (например, аминокислот, нуклеотидов, сахаров, липидного фрагмента), обычно сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные третичным складыванием, обычно теряются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп может включать, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере 3, по меньшей мере 5 или 8-10 остатков (например, аминокислот или нуклеотидов). В некоторых примерах эпитоп имеет в длину менее чем 20 остатков (например, аминокислот или нуклеотидов), менее чем 15 остатков или менее чем 12 остатков. Два антитела могут связывать один и тот же эпитоп в антигене, если они демонстрируют конкурентное связывание с антигеном. В некоторых вариантах осуществления эпитоп может быть идентифицирован по определенному минимальному расстоянию до остатка CDR на антигенсвязывающей молекуле. В некоторых вариантах осуществления эпитоп может быть идентифицирован по указанному выше расстоянию и дополнительно ограничен теми остатками, которые вовлечены в образование связи (например, водородной связи) между остатком антитела и остатком антигена. Эпитоп также может быть идентифицирован с помощью различных сканирований, например сканирование аланином или аргинином может указывать на один или более остатков, с которыми может взаимодействовать антигенсвязывающая молекула. Если явно не обозначено, набор остатков в качестве эпитопа не исключает других остатков из того, чтобы быть частью эпитопа для конкретного антитела. Скорее присутствие такого набора обозначает минимальный ряд (или набор видов) эпитопов. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления набор остатков, идентифицированных как эпитоп, обозначает минимальный эпитоп релевантности для антигена, а не исключительный список остатков для эпитопа на антигене.

[0057] «Нелинейный эпитоп» или «конформационный эпитоп» содержит несмежные полипептиды, аминокислоты и/или сахара в пределах антигенного белка, с которым связывается антитело, специфическое к эпитопу. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из остатков будет несмежным с другими отмеченными остатками эпитопа; однако, один или более остатков также могут быть смежными с другими остатками.

[0058] «Линейный эпитоп» содержит смежные полипептиды, аминокислоты и/или сахара в пределах антигенного белка, с которым связывается антитело, специфическое к эпитопу. Следует отметить, что в некоторых вариантах осуществления не каждый из остатков в пределах линейного эпитопа должен быть непосредственно связан (или вовлечен в связь) с антителом. В некоторых вариантах осуществления линейные эпитопы могут возникать вследствие иммунизаций пептидом, который эффективно состоит из последовательности линейного эпитопа, или из структурных участков белка, которые относительно отделены от остальной части белка (так что антитело может взаимодействовать по меньшей мере преимущественно), только с этой секцией последовательности.

[0059] Термин «антитело» в данном документе используется в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая, но не ограничиваясь ими, моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифичные (например, привлекающие T-клетки биспецифические активаторы) и триспецифичные антитела) и фрагменты антител при условии, что они проявляют желаемую антигенсвязывающую активность.

[0060] Термин антитело включает, но не ограничивается ими, фрагменты, которые способны связываться с антигеном, такие как Fv, одноцепочечный Fv (scFv), Fab, Fab', ди-scFv, sdAb (однодоменное антитело) и (Fab')₂ (включая химически связанный F(ab')₂). При расщеплении антител папаином образуются два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, называемых «Fab»-фрагментами, каждый из которых имеет один антигенсвязывающий участок, и остаточный «Fc»-фрагмент, название которого отражает его способность легко кристаллизоваться. Обработка пепсином дает фрагмент F(ab')₂, который имеет два антигенсвязывающих участка и все еще способен к перекрестному связыванию антигена. Термин антитело также включает, но не ограничивается ими, химерные антитела, гуманизированные антитела и антитела различных видов, таких как мышь, человек, яванский макак и т.д. Кроме того, для всех конструкций антител, представленных в настоящем документе, также рассматриваются варианты, имеющие последовательности, полученные от других организмов. Таким образом, если раскрыта версия антитела человека, специалист в данной области поймет, как преобразовать антитело на основе человеческой последовательности в последовательность мыши, крысы, кошки, собаки, лошади и т.д. Фрагменты антител также включают либо ориентацию одноцепочечного scFv, тандемного ди-scFv, диател, тандемного три-sdcFv, минител и т.д. Фрагменты антител также включают нанотела (sdAb, антитело, имеющее один мономерный домен, такой как пара вариабельных доменов тяжелых цепей без легкой цепи). Фрагмент антитела может относиться к специфическим видам в некоторых вариантах осуществления (например, scFv человека или scFv мыши), что обозначает последовательности по меньшей мере части областей, не относящихся к CDR, а не источника конструкции.

[0061] Термин «моноклональное антитело» относится к антителу по существу гомогенной популяции антител, то есть составляющие популяцию отдельные антитела, являются идентичными, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными и направлены против одного антигенного сайта. Кроме того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают в себя разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. Таким образом, образец моноклонального антитела может связываться с одним и тем же эпитопом на антигене. Модификатор «моноклональный» указывает на характер антитела, получаемого из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела могут быть получены гибридомным способом, впервые описанным Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495, или могут быть получены способами рекомбинантной ДНК, например, описанными в патенте США № 4816567. Моноклональные антитела также могут быть выделены из фаговых библиотек, полученных с использованием методик, описанных, например, в McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554.

[0062] Термин «CDR» обозначает определяющую комплементарность область, как определено по меньшей мере одним способом идентификации для специалиста в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления CDR могут быть определены в соответствии с любой из номенклатур Чотиа, Кабата, комбинации номенклатур Кабата и Чотиа, определения AbM, определения контакта и/или комбинации определений Кабата, Чотиа, AbM и/или контактной области. Иллюстративные CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) встречаются в аминокислотных остатках 24-34 L1, 50-56 L2, 89-97 L3, 31-35В Н1, 50-65 Н2 и 95-102 Н3. (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). Определение AbM может включать, например, CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) в аминокислотных остатках 24-34 L1, 50-56 L2, 89-97 L3, H26-H35B H1, 50-58 H2 и 95-102 H3. Определение контакта может включать, например, CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) в аминокислотных остатках 30-36 L1, 46-55 L2, 89-96 L3, 30-35 H1, 47-58 H2 и 93-101 H3. Определение Чотиа может включать, например, CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) в аминокислотных остатках 24-34 L1, 50-56 L2, 89-97 L3, 26-32…34 H1, 52-56 H2 и 95-102 H3. CDR также могут быть предоставлены в том виде, как показано на одной или более сопровождающих фигурах. За исключением CDR1 в V_H, CDR обычно содержат аминокислотные остатки, которые образуют гипервариабельные петли. Различные CDR в пределах антитела могут быть обозначены их соответствующим числом и типом цепи, включая, без ограничения, следующие: a) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3; b) CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 и CDRH3; c) LCDR-1, LCDR-2, LCDR-3, HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3; или d) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 и HCDR3; т.д. Термин «CDR» используется в данном документе также с целью охватывать HVR или «гипервариабельную область», включая гипервариабельные петли. Типовые гипервариабельные петли встречаются у аминокислотных остатков 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) и 96-101 (H3). (Chothia и Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987).)

[0063] Термин «вариабельная область тяжелой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей по меньшей мере три CDR тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи содержит три CDR и по меньшей мере FR2 и FR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи содержит по меньшей мере HCDR1 тяжелой цепи, (FR) 2 каркаса, HCDR2, FR3 и HCDR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи также содержит по меньшей мере часть FR1 и/или по меньшей мере часть FR4.

[0064] Термин «константная область тяжелой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей по меньшей мере три константных домена тяжелой цепи, C_H1, C_H2 и C_H3. Конечно, неизменяющие функции делеции и изменения в пределах доменов включены в объем термина «константная область тяжелой цепи», если не указано иное. Неограничивающие типовые константные области тяжелой цепи включают γ, δ и α. Неограничивающие типовые константные области тяжелой цепи также включают ε и μ. Каждая тяжелая константная область соответствует изотипу антитела. Например, антитело, содержащее константную область γ, представляет собой антитело IgG, антитело, содержащее константную область δ, представляет собой антитело IgD и антитело, содержащее константную область α, представляет собой антитело IgA. Кроме того, антитело, содержащее константную область μ, представляет собой антитело IgM, и антитело, содержащее константную область ε, представляет собой антитело IgE. Определенные изотипы могут быть далее подразделены на подклассы. Например, антитела IgG включают, но не ограничиваются ими, антитела IgG1 (содержащие константную область γ₁), IgG2 (содержащие константную область γ₂), IgG3 (содержащие константную область γ₃) и IgG4 (содержащие константную область γ₄); антитела IgA включают, но не ограничиваются ими, антитела IgA1 (содержащие константную область α₁) и антитела IgA2 (содержащие константную область α₂); и антитела IgM включают, но не ограничиваются ими, IgM1 и IgM2.

[0065] Термин «тяжелая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему по меньшей мере вариабельную область тяжелой цепи, с лидерной последовательностью или без нее. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь содержит по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи. Термин «полноразмерная тяжелая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и константную область тяжелой цепи, с лидерной последовательностью или без нее.

[0066] Термин «вариабельная область легкой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей по меньшей мере три легких цепи CDR. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи содержит три CDR и по меньшей мере FR2 и FR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи содержит по меньшей мере легкую цепь LCDR1, каркас (FR) 2, LCDR2, FR3 и LCDR3. Например, вариабельная область легкой цепи может содержать легкую цепь CDR1, каркас (FR) 2, CDR2, FR3 и CDR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи также содержит по меньшей мере часть FR1 и/или по меньшей мере часть FR4.

[0067] Термин «константная область легкой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей константный домен легкой цепи C_L. Неограничивающие типовые константные области легкой цепи включают λ и κ. Конечно, не изменяющие функции делеции и изменения в пределах доменов включены в объем термина «константная область легкой цепи», если не указано иное.

[0068] Термин «легкая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему по меньшей мере вариабельную область легкой цепи, с лидерной последовательностью или без нее. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь содержит по меньшей мере часть константной области легкой цепи. Термин «полноразмерная легкая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему вариабельную область легкой цепи и константную область легкой цепи, с лидерной последовательностью или без нее.

[0069] «Акцепторный человеческий каркас» для целей настоящего изобретения представляет собой каркас, содержащий аминокислотную последовательность каркаса вариабельного домена легкой цепи (V_L) или каркас вариабельного домена тяжелой цепи (V_H), полученный из каркаса иммуноглобулина человека или консенсусного человеческого каркаса, как определено ниже. Акцепторный человеческий каркас, полученный из каркаса иммуноглобулина человека или консенсусного человеческого каркаса, может содержать такую же аминокислотную последовательность или может содержать изменения аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления число замен аминокислот составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее, или 2 или менее. В некоторых вариантах осуществления акцепторный человеческий каркас V_L идентичен по последовательности каркасной последовательности иммуноглобулина человека V_L или консенсусной каркасной последовательности человека.

[0070] «Аффинность» относится к силе общей суммы нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, антителом) и его партнером по связыванию (например, антигеном). Аффинность молекулы X к ее партнеру Y обычно может быть представлена константой диссоциации (K_D). Аффинность может быть измерена общепринятыми способами, известными в данной области техники (такими как, например, ELISA K_D, KinExA, интерферометрией биослоя (BLI) и/или устройства поверхностного плазмонного резонанса (например, устройство BIAcore®), включая те, которые описаны в настоящем документе).

[0071] Термин «K_D», в контексте настоящего документа, относится к константе равновесной диссоциации взаимодействия антитело-антиген.

[0072] В некоторых вариантах осуществления «K_D», «K_d», «Kd» или «значение Kd» антитела измеряется с использованием анализов поверхностного плазмонного резонанса с использованием BIACORE®-2000 или BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., г. Пискатауэй, штат Нью-Джерси, США) при 25°С с чипами CM5 с иммобилизованными антигенами при ~10 единицах ответа (response units - RU). Вкратце, биосенсорные чипы с карбоксиметилированным декстраном (CM5, BIACORE, Inc.) активируют гидрохлоридом N-этил-N’-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антиген разбавляют 10 мМ ацетатом натрия, рН 4,8, до 5 мкг/мл (~0,2 мкМ) перед инъекцией со скоростью потока 5 мкл/минуту, чтобы получить приблизительно 10 единиц ответа (RU) связанного белка. После инъекции антигена вводят 1 М этаноламин для блокировки непрореагировавших групп. Для измерения кинетики серийные разведения полипептида, например полноразмерного антитела, вводят в PBS с 0,05% поверхностно-активным веществом TWEEN-20™ (PBST) при 25°C при скорости потока приблизительно 25 мкл/мин. Скорости ассоциации (k_on) и скорости диссоциации (k_off) рассчитываются с использованием простой мономолекулярной модели связывания Ленгмюра (BIACORE^® Evaluation версия программы 3.2) путем одновременного подбора сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесная константа диссоциации (K_d) рассчитывается как соотношение k_off/k_on. См., например, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999). Если скорость ассоциации превышает 10⁶ M^-1с^-1 с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса, описанного выше, то скорость ассоциации может быть определена с помощью методики гашения флуоресценции, который измеряет увеличение или уменьшение интенсивности флуоресцентного излучения (возбуждение = 295 нм; испускание = 340 нм, полоса пропускания 16 нм) при 25°С 20 нМ антиантигенного антитела в PBS, pH 7,2, в присутствии возрастающих концентраций антигена, измеренных в спектрометре, таком как спектрофотометр, оборудованный установкой для метода остановленного потока (Aviv Instruments) или спектрофотометр SLM-AMINCO™ серии 8000 (ThermoSpectronic) с кюветой с мешалкой.

[0073] В некоторых вариантах осуществления разница между упомянутыми двумя значениями (например, значениями K_d) является по существу одинаковой, например, менее чем около 50%, менее чем около 40%, менее чем около 30%, менее чем около 20% и/или менее чем около 10% в зависимости от эталонного/компараторного значения.

[0074] В некоторых вариантах осуществления разница между упомянутыми двумя значениями (например, значениями K_d) существенно отличается, например, на более чем около 10%, более чем около 20%, более чем около 30%, более чем около 40% и/или более чем около 50% в зависимости от значения для эталонной/компараторной молекулы.

[0075] «Поверхностный плазмонный резонанс» обозначает оптическое явление, которое позволяет анализировать биоспецифические взаимодействия в реальном времени путем обнаружения изменений концентрации белка в матрице биосенсора, например, с использованием системы BIAcore™ (BIAcore International AB, компания GE Healthcare, г. Упсала, Швеция и г. Пискатауэй, штат Нью-Джерси, США). Для дальнейших описаний см. Jonsson et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26.

[0076] «Биослойная интерферометрия» относится к оптическому аналитическому способу, который анализирует интерферограмму света, отраженного от слоя иммобилизованного белка на кончике биосенсора и внутреннего слоя сравнения. Изменения в количестве молекул, связанных с кончиком биосенсора, вызывают сдвиги в интерферограмме, которые могут быть измерены в режиме реального времени. Неограничивающим примером устройства для биослойной интерферометрии является система ForteBio Octet® RED96 (Pall Corporation). См., например, Abdiche et al., 2008, Anal. Biochem. 377: 209-277.

[0077] Термин «k_on», в контексте настоящего документа, относится к константе скорости ассоциации антитела с антигеном. В частности, константы скорости (k_on и k_off) и равновесные константы диссоциации измеряют с использованием IgG (двухвалентных) с одновалентным антигеном PD-1. «K_on», «k_on», «константа скорости ассоциации» или «ka» используются в настоящем документе взаимозаменяемо. Значение указывает на скорость связывания связывающего белка с его антигеном-мишенью или скорость образования комплекса между антителом и антигеном, представленную уравнением: Антитело(«Ab»)+Антиген(«Ag»)→Ab-Ag. Термин «k_off», в контексте настоящего документа, относится к константе скорости диссоциации антитела из комплекса антитело/антиген. K_off также обозначается как «k_off» или «константа скорости диссоциации». Это значение указывает на скорость диссоциации антитела от его антигена-мишени или разделения комплекса Ab-Ag с течением времени на свободные антитело и антиген, как показано уравнением:

Ab+Ag←Ab-Ag.

[0078] Термин «биологическая активность» относится к любому одному или более биологическим свойствам молекулы (независимо от того, представлены ли они в естественном виде так, как были обнаружены in vivo, или предоставлены или включены рекомбинантным способом). Биологические свойства включают, но не ограничиваются ими, связывание рецептора, индукцию пролиферации клеток, ингибирование роста клеток, индукцию других цитокинов, индукцию апоптоза и ферментативную активность. В некоторых вариантах осуществления биологическая активность белка PD-1 включает, например, стимулирование апоптоза в антиген-специфических Т-клетках, уменьшение апоптоза в регуляторных Т (Treg) клетках, ингибирование активации Т-клеток, ингибирование пролиферации Т-клеток и облегчение Т-клеточной анергии или истощение.

[0079] Антитело «с созревшей аффинностью» относится к антителу с одним или более изменениями в одной или более CDR по сравнению с родительским антителом, которое не обладает такими изменениями, такими изменениями, приводящими к улучшению аффинности антитела к антигену.

[0080] Термин «химерное антитело», в контексте настоящего документа, относится к антителу, в котором участок тяжелой и/или легкой цепи получен из конкретного источника или вида, в то время как по меньшей мере часть остатка тяжелой и/или легкой цепи получены из другого источника или вида. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело относится к антителу, содержащему по меньшей мере одну вариабельную область от первого вида (такого как мышь, крыса, яванский макак и т.д.) и по меньшей мере одну константную область от второго вида (такого как человек, яванский макак и т.д.). В некоторых вариантах осуществления химерное антитело содержит по меньшей мере одну вариабельную область мыши и по меньшей мере одну константную область человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело содержит по меньшей мере одну вариабельную область яванского макака и по меньшей мере константную область человека. В некоторых вариантах осуществления все вариабельные области химерного антитела относятся к первому виду и все константные области химерного антитела относятся ко второму виду. Химерная конструкция также может представлять собой функциональный фрагмент, как отмечено выше.

[0081] Термин «гуманизированное антитело», в контексте настоящего документа, относится к антителу, в котором по меньшей мере одна аминокислота в каркасной области нечеловеческой вариабельной области была заменена соответствующей аминокислотой из вариабельной области человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело содержит по меньшей мере одну человеческую константную область или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как Fab, scFv, (Fab')₂ и т.д. Термин гуманизированный также обозначает формы нечеловеческих (например, мышиных) антител, которые представляют собой химерные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулинов или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab')₂ или другие антигенсвязывающие подпоследовательности антител), которые содержат минимальную последовательность иммуноглобулина, не относящегося к человеку. Гуманизированные антитела могут включать иммуноглобулин человека (реципиентное антитело), в которых остатки определяющей комплементарность области (CDR) реципиента замещены остатками из CDR вида, не относящегося к человеку (донорское антитело), такого как мышь, крыса или кролик, имеющий желаемую специфичность, аффинность и способность. В некоторых случаях остатки каркасной области Fv (FR) иммуноглобулина человека заменены соответствующими остатками, не относящимися к человеку. Кроме того, гуманизированное антитело может содержать остатки, которые не обнаружены ни в реципиентном антителе, ни в импортированных CDR или каркасных последовательностях, но включены для дальнейшего уточнения и оптимизации характеристик антитела. В общем, гуманизированное антитело может содержать по существу все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все области CDR соответствуют доменам иммуноглобулина, не относящегося к человеку, и все или по существу все области FR являются последовательностями консенсусной последовательности иммуноглобулина человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело также может содержать по меньшей мере часть константной области или домена (Fc) иммуноглобулина, обычно иммуноглобулина человека. Другие формы гуманизированных антител имеют одну или более CDR (CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 и/или CDR H3), которые изменены по отношению к исходному антителу, которые также называются одной или более CDR «полученными из» одной или более CDR из исходного антитела. Следует иметь в виду, что гуманизированная последовательность может быть идентифицирована по ее первичной последовательности и необязательно обозначает способ, с помощью которого было создано антитело.

[0082] Термин «CDR-привитое антитело», в контексте настоящего документа, относится к гуманизированному антителу, в котором одна или более определяющих комплементарность областей (CDR) первого (не принадлежащего человеку) вида, были привиты к каркасным областям (FR) второго (принадлежащего человеку) вида.

[0083] Термин «антитело человека», в контексте настоящего документа, охватывает антитела, продуцируемые у людей, антитела, продуцируемые у животных, отличных от человека, которые содержат гены иммуноглобулина человека, например мыши XenoMouse^®, и антитела, отобранные с использованием методов in vitro, например с использованием фагового дисплея (Vaughan et al., 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581), причем репертуар антител основан на последовательности иммуноглобулина человека. Термин «антитело человека» обозначает семейство последовательностей, которые являются последовательностями человека. Таким образом, этот термин обозначает не способ, с помощью которого было создано антитело, а семейство родственных последовательностей.

[0084] «Функциональная Fc-область» обладает «эффекторной функцией» нативной последовательности Fc-области. Типовые «эффекторные функции» включают связывание с Fc-рецептором; связывание C1q; CDC (комплементзависимая цитотоксичность); АЗКЦ (ADCC); фагоцитоз; подавление рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора; BCR) и т.д. Такие эффекторные функции обычно требуют, чтобы Fc-область была объединена с доменом связывания (например, вариабельным доменом антитела), и может быть оценена с использованием различных анализов.

[0085] «Нативная последовательность Fc-области» включает аминокислотную последовательность идентичную аминокислотной последовательности Fc-области, встречающейся в природе. Нативные последовательности Fc-областей человека включают нативную последовательность Fc-области IgG1 человека (аллотипы не A и A); нативную последовательность Fc-области IgG2 человека; нативную последовательность Fc-области IgG3 человека и нативную последовательность Fc-области IgG4 человека, а также существующие в природе варианты указанных последовательностей.

[0086] «Вариантная Fc-область» содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности Fc-области благодаря по меньшей мере одной модификации аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления «вариантная Fc-область» содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности Fc-области благодаря по меньшей мере одной модификации аминокислоты, но при этом сохраняет по меньшей мере одну эффекторную функцию нативной последовательности Fc-области. В некоторых вариантах осуществления вариантная Fc-область имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с нативной последовательностью Fc-области или с Fc-областью родительского полипептида, например от около одной до около десяти аминокислотных замен и, предпочтительно, от около одной до около пяти аминокислотных замен в нативной последовательности Fc-области или в последовательности Fc-области родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариантная Fc-область в данном документе будет иметь по меньшей мере на около 80% идентичности с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида, по меньшей мере на около 90% идентичности с указанной последовательностью, по меньшей мере на около 95%, по меньшей мере на около 96%, по меньшей мере на около 97%, по меньшей мере на около 98% или по меньшей мере на около 99% идентичности с указанной последовательностью.

[0087] Термины «Fc-рецептор» или «FcR» используются для описания рецептора, который связывается с Fc-областью антитела. В некоторых вариантах осуществления FcγR представляет собой нативный FcR человека. В некоторых вариантах осуществления FcR представляет собой рецептор, который связывает антитело IgG (гамма-рецептор) и включает рецепторы подклассов FcγRI, FcγRII и FcγRIII, в том числе аллельные варианты и формы данных рецепторов, которые подверглись альтернативному сплайсингу. Рецепторы FcγRII включают FcγRIIA («активирующий рецептор») и FcγRIIB («ингибирующий рецептор»), которые содержат аналогичные аминокислотные последовательности, отличающиеся преимущественно цитоплазматическими доменами. Активирующий рецептор FcγRIIA содержит в цитоплазматическом домене иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM). Ингибирующий рецептор FcγRIIB содержит в цитоплазматическом домене иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив (ITIM). (См., например, Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). Обзор FcR приведен в публикациях Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994) и de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995). Другие FcR, в том числе те из них, которые будут обнаружены в будущем, охватываются в настоящей заявке термином «FcR».

[0088] Термин «Fc-рецептор» или «FcR» также включает неонатальный рецептор, FcRn, отвечающий за перенос материнских IgG в плод (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) и Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)) и регуляция гомеостаза иммуноглобулинов. Способы измерения связывания с FcRn являются известными (см., например, Ghetie and Ward., Immunol. Today 18(12):592-598 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15(7):637-640 (1997); Hinton et al., J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216 (2004); WO 2004/92219 (Hinton et al.).

[0089] «Эффекторные функции» относятся к биологической активности, присущей Fc-области антитела, которая варьируется в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антитела включают: связывание с C1q и комплементзависимую цитотоксичность (CDC); связывание с Fc-рецептором; антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность АЗКЦ (ADCC); фагоцитоз; отрицательную регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора) и активацию B-клеток.

[0090] «Эффекторные клетки человека» представляют собой лейкоциты, которые экспрессируют один или более FcR и осуществляют эффекторные функции. В некоторых вариантах осуществления такие клетки экспрессируют по меньшей мере FcγRIII и осуществляют эффекторную (-ые) функцию (-и) АЗКЦ (ADCC). Примеры лейкоцитов человека, которые опосредуют АЗКЦ (ADCC), включают мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), клетки естественные киллеры (NK), моноциты, цитотоксические Т-клетки и нейтрофилы. Эффекторные клетки могут быть выделены из нативного источника, например из крови.

[0091] «Антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность» или «ADCC» относится к форме цитотоксичности, при которой секретированный Ig, связанный с Fc-рецепторами (FcR), присутствующими на определенных цитотоксических клетках (например, клетках NK, нейтрофилах и макрофагах), позволяет этим цитотоксическим эффекторным клеткам специфически связываться с антиген-несущей клеткой-мишенью, а затем убивают клетку-мишень цитотоксинами. Первичные клетки для опосредования АЗКЦ (ADCC), клетки NK, экспрессируют только FcγRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Экспрессия FcR на гемопоэтических клетках суммирована в таблице 3 на странице 464 публикации Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991). Для оценки активности АЗКЦ (ADCC) интересующей молекулы можно проводить анализ АЗКЦ (ADCC) in vitro, описанный в патенте США № 5500362 или 5821337 или патенте США № 6737056 (Presta). Пригодные эффекторные клетки для таких анализов включают МКПК и клетки NK. Альтернативно или дополнительно, активность АЗКЦ (ADCC) интересующей молекулы может быть оценена in vivo, например, на модели животного, как, например, раскрыто в Clynes et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656 (1998). Дополнительные варианты полипептидов с измененными аминокислотными последовательностями Fc-области (полипептиды с вариантной Fc-областью) и повышенной или пониженной активностью АЗКЦ (ADCC) описаны, например, в патенте США № 7923538 и патенте США 7994290.

[0092] «Комплементзависимая цитотоксичность» или «CDC» относится к лизису клетки-мишени в присутствии комплемента. Активация классического пути комплемента инициируется связыванием первого компонента системы комплемента (C1q) с антителами (соответствующего подкласса), которые связаны с их распознаваемым антигеном. Для оценки активации комплемента может быть выполнен анализ CDC, например, как описано в Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996). Полипептидные варианты с измененными аминокислотными последовательностями Fc-области (полипептиды с вариантной Fc-областью) и повышенной или пониженной способностью связывания C1q описаны, например, в патенте США № 6194551 B1, в патенте США № 7923538, в патенте США № 7994290 и WO 1999/51642. Также, см., например, Idusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).

[0093] Полипептидный вариант с «измененной» аффинностью связывания FcR или активностью АЗКЦ (ADCC) представляет собой вариант, который имеет либо повышенную, либо пониженную активность связывания FcR и/или активность АЗКЦ (ADCC) по сравнению с родительским полипептидом или с полипептидом, содержащим нативную последовательность Fc-области. Полипептидный вариант который «демонстрирует повышенное связывание» с FcR, связывает по меньшей мере один FcR с лучшей аффинностью, чем родительский полипептид. Полипептидный вариант, который «демонстрирует пониженное связывание» с FcR, связывает по меньшей мере один FcR с более низкой аффинностью, чем родительский полипептид. Такие варианты, которые демонстрируют пониженное связывание с FcR, могут обладать незначительным или не обладать заметным связыванием с FcR, например, 0-20% связывания с FcR по сравнению с нативной последовательностью Fc-области IgG.

[0094] Полипептидный вариант, который «опосредует антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность АЗКЦ (ADCC) в присутствии эффекторных клеток человека более эффективно», чем родительское антитело, представляет собой полипептидный вариант, который более эффективно опосредует АЗКЦ (ADCC) in vitro или in vivo, когда количества полипептидного варианта и родительского антитела, применяемые в анализе, по существу одинаковы. Как правило, такие полипептиды можно обнаружить с применением анализа АЗКЦ (ADCC) in vitro, раскрытого в настоящем документе, однако можно также применять другие анализы или методы определения активности АЗКЦ (ADCC), например модель на животных и т.д.

[0095] Термин «по существу аналогичный» или «по существу одинаковый», в контексте настоящего документа, обозначает достаточно высокую степень сходства между двумя или более числовыми значениями, так что специалист в данной области техники будет рассматривать разницу между этими двумя или более значениями как малую или нулевую биологическую и/или статистическую значимость в контексте биологической характеристики, измеряемой указанным значением. В некоторых вариантах осуществления два или более по существу одинаковых значения отличаются не более чем на около любое из 5%, 10%, 15%, 20%, 25% или 50%.

[0096] Фраза «существенно различающийся», в контексте настоящего документа, обозначает достаточно высокую степень различия между двумя числовыми значениями, так что специалист в данной области техники будет считать, что различие между этими двумя значениями имеет статистическую значимость в контексте биологической характеристики, измеренной указанными значениями. В некоторых вариантах осуществления два по существу различных числовых значения отличаются более чем на около любое из 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%.

[0097] Термин «существенно уменьшенный», в контексте настоящего документа, обозначает достаточно высокую степень уменьшения между числовым значением и эталонным числовым значением, так что специалист в данной области техники сочтет, что разница между этими двумя значениями имеет статистическую значимость в пределах контекста биологической характеристики, измеренной указанными значениями. В некоторых вариантах осуществления существенно уменьшенные числовые значения уменьшаются более чем на около любое из 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% по сравнению с эталонным значением.

[0098] Термин «лидерная последовательность» относится к последовательности аминокислотных остатков, расположенных на N-конце полипептида, которая облегчает секрецию полипептида из клетки млекопитающего. Лидерная последовательность может быть отщеплена при экспорте полипептида из клетки млекопитающего, образуя зрелый белок. Лидерные последовательности могут быть природными или синтетическими, и могут быть гетерологичными или гомологичными белку, к которому они присоединены.

[0099] Полипептид с «нативной последовательностью» включает полипептид, имеющий ту же аминокислотную последовательность, что и полипептид, встречающийся в природе. Таким образом, полипептид с нативной последовательностью может иметь аминокислотную последовательность встречающегося в природе полипептида от любого млекопитающего. Такой полипептид с нативной последовательностью может быть выделен из природного источника или может быть получен рекомбинантным или синтетическим путем. Термин полипептид «с нативной последовательностью», в частности, охватывает встречающиеся в природе укороченные или секретируемые формы полипептида (например, последовательность внеклеточного домена), встречающиеся в природе вариантные формы (например, которые подверглись альтернативному сплайсингу) и встречающиеся в природе аллельные варианты полипептида.

[00100] «Вариант» полипептида означает биологически активный полипептид, имеющий по меньшей мере около 80% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом с нативной последовательностью после выравнивания последовательностей и введения гэпов, если необходимо, для достижения максимальной процентной идентичности последовательности и без учета каких-либо консервативных замен, как части идентичности последовательности. Такие варианты включают, например, полипептиды, в которых один или более аминокислотных остатков добавлены или удалены на N- или C-конце полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант будет иметь по меньшей мере около 80% идентичности аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления вариант будет иметь по меньшей мере около 90% идентичности аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления вариант будет иметь по меньшей мере около 95% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом с нативной последовательностью.

[00101] В контексте настоящего документа, термины «процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» и «гомология» в отношении последовательности пептида, полипептида или антитела определяется как процент аминокислотных остатков в кандидатной последовательности, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретной пептидной или полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введения гэпов, если необходимо, для достижения наибольшего процента идентичности последовательности и не принимая во внимание какие-либо консервативные замены как часть идентичной последовательности. Выравнивание с целью определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть выполнено различными способами, известными специалисту в данной области техники, например, с помощью общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как BLAST, BLAST-2, ALIGN или MEGALIGN™ (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут выбрать подходящие параметры для определения выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.

[00102] Замена аминокислоты может включать, но не ограничивается этим, замену одной аминокислоты в полипептиде другой аминокислотой. Иллюстративные замены приведены в таблице 1. Аминокислотные замены могут быть введены в интересующее антитело, и продукты подвергнутые скринингу для желаемой активности, например, сохраненного/улучшенного связывания антигена, пониженной иммуногенности или улучшенной АЗКЦ (ADCC) или CDC.

ТАБЛИЦА 1

Исходный остаток Типовые замещения Ala (A) Val; Leu; Ile Arg (R) Lys; Gln; Asn Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Asp (D) Glu; Asn Cys (C) Ser; Ala Gln (Q) Asn; Glu Glu (E) Asp; Gln Gly (G) Ala His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; Норлейцин Leu (L) Норлейцин; Ile; Val; Met; Ala; Phe Lys (K) Arg; Gln; Asn Met (M) Leu; Phe; Ile Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Pro (P) Ala Ser (S) Thr Thr (T) Val; Ser Trp (W) Tyr; Phe Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Норлейцин

[00103] Аминокислоты могут быть сгруппированы в соответствии с общими свойствами боковой цепи:

(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) кислотные: Asp, Glu;

(4) основные: His, Lys, Arg;

(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;

(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.

[00104] Неконсервативные замены влекут за собой замену представителя одного из данных классов на представителя другого класса.

[00105] Термин «вектор» используется для описания полинуклеотида, который может быть сконструирован таким образом, чтобы содержать клонированный полинуклеотид или полинуклеотиды, которые могут реплицироваться в клетке-хозяине. Вектор может включать один или более из следующих элементов: точку начала репликации, одну или более регуляторных последовательностей (таких как, например, промоторы и/или энхансеры), которые регулируют экспрессию интересующего полипептида, и/или один или более селективные маркерные гены (такие как, например, гены устойчивости к антибиотикам и гены, которые могут быть использованы в колориметрических анализах, например, β-галактозидаза). Термин «экспрессионный вектор» относится к вектору, который используется для экспрессии интересующего полипептида в клетке-хозяине.

[00106] «Клетка-хозяин» относится к клетке, которая может быть или стала реципиентом вектора или выделенного полинуклеотида. Клетки-хозяева могут быть прокариотическими клетками или эукариотическими клетками. Типовые эукариотические клетки включают клетки млекопитающих, такие как клетки приматов или клетки животных, не относящихся к приматам; клетки грибов, таких как дрожжи; растительные клетки; и клетки насекомых. Неограничивающие типовые клетки млекопитающих включают, но не ограничиваются ими, клетки NSO, клетки PER.C6^® (Crucell), клетки 293 и CHO и их производные, например клетки 293-6E и DG44, соответственно. Клетки-хозяева включают потомство одной клетки-хозяина, и потомство необязательно может быть полностью идентичным (по морфологии или по комплементарности геномной ДНК) исходной родительской клетке из-за естественной, случайной или преднамеренной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные in vivo полинуклеотидом (-ами), представленным (-и) в настоящем документе.

[00107] Термин «выделенный», в контексте настоящего документа, относится к молекуле, которая была отделена по меньшей мере от некоторых компонентов, с которыми она обычно встречается или продуцируется в природе. Например, полипептид называется «выделенным», когда он отделен по меньшей мере от некоторых компонентов клетки, в которой он был продуцирован. В случае, когда полипептид секретируется клеткой после экспрессии, физическое отделение супернатанта, содержащего полипептид, от клетки, которая его продуцирует, считается «выделением» полипептида. Подобным образом, полинуклеотид называют «выделенным», когда он не является частью более крупного полинуклеотида (такого как, например, геномная ДНК или митохондриальная ДНК, в случае ДНК-полинуклеотида), в котором он обычно находится в природе, или отделен по меньшей мере от некоторых компонентов клетки, в которой он был продуцирован, например в случае полинуклеотида РНК. Таким образом, ДНК-полинуклеотид, который содержится в векторе внутри клетки-хозяина, может называться «выделенным».

[00108] Термины «индивидуум» или «субъект» используются в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения животного; например млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления предлагаются способы лечения млекопитающих, включая, но не ограничиваясь ими, людей, грызунов, обезьян, кошачьих, собак, лошадей, крупный рогатый скот, свиней, овец, коз, лабораторных животных-млекопитающих, сельскохозяйственных животных-млекопитающих, спортивных животных-млекопитающих и домашних животных-млекопитающих. В некоторых примерах «индивидуум» или «субъект» относится к индивидууму или субъекту, нуждающемуся в лечении заболевания или расстройства. В некоторых вариантах осуществления субъектом, который должен получать лечение, может быть пациент, определяющий тот факт, что субъект был идентифицирован как имеющий расстройство, относящееся к лечению, или имеющий достаточный риск заболевания данным расстройством.

[00109] Термин «заболевание» или «расстройство», в контексте настоящего документа, относится к состоянию, при котором лечение необходимо и/или желательно.

[00110] «Рак» и «опухоль», в контексте настоящего документа, являются взаимозаменяемыми терминами, которые относятся к любому аномальному росту клеток или тканей или пролиферации у животного. Термины «рак» и «опухоль», в контексте настоящего документа, охватывают солидную и гематологическую злокачественную/лимфатическую опухоль, а также охватывают злокачественный, предзлокачественный и доброкачественный рост, такой как дисплазия. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз. Более конкретные неограничивающие примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак, мелкоклеточный рак легкого, рак гипофиза, рак пищевода, астроцитому, саркому мягких тканей, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого, плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или матки, карциному слюнной железы, рак почки, рак печени, рак простаты, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, рак головного мозга, рак эндометрия, рак яичка, холангиокарциному, карциному желчного пузыря, рак желудка, меланому, мезотелиому и различные типы рака головы и шеи.

[00111] Термин «лечение», в контексте настоящего документа, относится к подходу для получения полезных или желаемых клинических результатов. Термин «лечение», в контексте настоящего документа, охватывает любое введение или применение лекарственного средства для лечения заболевания у млекопитающего, включая человека. Для целей настоящего раскрытия полезные или желательные клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, любое одно или более из: ослабление одного или более симптомов, уменьшение степени заболевания, предотвращение или задержку распространения (например, метастазирования, например, метастазирования в легкое или в лимфатический узел) заболевания, предотвращение или задержка рецидива заболевания, задержка или замедление прогрессирования заболевания, ослабление болезненного состояния, ингибирование заболевания или прогрессирования заболевания, ингибирование или замедление заболевания или его прогрессирования, задержка его развития и ремиссию (частичную или полную). Термин «лечение» также включает уменьшение патологических последствий пролиферативного заболевания. Способы, представленные в настоящем документе, предусматривают любой один или более из этих аспектов лечения. В соответствии с вышеизложенным, термин «лечение» не требует стопроцентного устранения всех аспектов расстройства.

[00112] «Улучшение» означает уменьшение или улучшение одного или более симптомов по сравнению со случаем отсутствия введения анти-PD-1 антитела. «Улучшение» также включает сокращение или уменьшение продолжительности симптома.

[00113] В контексте рака термин «лечение» включает любое или все из: ингибирования роста раковых клеток, ингибирования репликации раковых клеток, уменьшения общей опухолевой нагрузки и ослабления одного или более симптомов, связанных с заболеванием.

[00114] Термин «биологический образец» означает количество вещества из живого или ранее живого существа. Такие вещества включают, но не ограничиваются ими, кровь (например, цельную кровь), плазму, сыворотку, мочу, амниотическую жидкость, синовиальную жидкость, клетки эндотелия, лейкоциты, моноциты, другие клетки, органы, ткани, костный мозг, лимфоузлы и селезенку.

[00115] Образец, который имеет «повышенный уровень PD-1» или «экспрессирует PD-1 на повышенном уровне» или имеет значение «PD-1^HIGH», означает, что уровень PD-1 таков, что специалист в данной области техники может сделать вывод о том, что рак можно лечить с помощью анти-PD-1-терапевтического средства, такого как антитело, представленное в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления «повышенный уровень PD-1» представляет собой уровень, при котором 1% клеток в образце опухоли демонстрируют окрашивание на PD-1. В некоторых вариантах осуществления «высокий уровень» в отношении PD-1 составляет 1% или более окрашивания, например 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% клеток в образце опухоли демонстрируют окрашивание. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-1 могут быть измерены с помощью хромогенного ИГХ анализа или иммунофлуоресцентного ИГХ анализа (показатель Aqua).

[00116] Образец, который «экспрессирует PD-1» или имеет «позитивное окрашивание на PD-1» или является «PD-1 позитивным», означает, что 1% или более клеток в образце демонстрируют окрашивание на PD-1. В некоторых вариантах осуществления образец, который является PD-1 позитивным, проявляет по меньшей мере слабое, умеренное и/или сильное окрашивание клеток (на основе мембранной экспрессии PD-1). Образец с умеренным или сильным окрашиванием клеток для PD-1 также рассматривается как «PD-1^HIGH».

[00117] Образец, который имеет «низкий уровень PD-L1» или экспрессирует «PD-L1 на низком уровне» или имеет значение «PD-L1^LOW», означает, что уровень PD-L1 ниже порогового уровня экспрессии рака, который обычно указывается для лечения с помощью терапии PD-1. В некоторых вариантах осуществления «низкий уровень PD-L1» представляет собой уровень, при котором менее чем 5% клеток в опухоли демонстрируют окрашивание мембран на PD-L1. В некоторых вариантах осуществления «низкий уровень» в отношении PD-L1 составляет менее 5% окрашивания, например, 4%, 3%, 2%, 1% или 0% клеток опухоли демонстрируют окрашивание. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-L1 могут быть измерены с помощью хромогенного ИГХ анализа или иммунофлуоресцентного ИГХ анализа (показатель Aqua). Можно также сказать, что образец, который не экспрессирует обнаруживаемый PD-L1, «экспрессирует низкий уровень PD-L1». Таким образом, отсутствие детектируемого PD-L1 охвачено термином «низкий».

[00118] Образец, который имеет «повышенный уровень PD-L1» или «экспрессирует PD-L1 на повышенном уровне» или имеет значение «PD-L1^HIGH», означает, что уровень PD-L1 является таким, что специалист в данной области техники сможет сделать вывод о том, что рак можно лечить с помощью терапии PD-1. В некоторых вариантах осуществления «повышенный уровень PD-L1» представляет собой уровень, при котором 50% клеток в опухоли или более имеют мембранное окрашивание PD-L1, например, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% клеток опухоли демонстрируют окрашивание мембраны. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-L1 могут быть измерены с помощью хромогенного ИГХ анализа или иммунофлуоресцентного ИГХ анализа (показатель AQUA).

[00119] Образец, который «экспрессирует PD-L1» или имеет «позитивное окрашивание на PD-L1» или является «PD-L1 позитивным», означает, что 1% или более клеток имеют окрашивание мембраны на PD-L1. В некоторых вариантах осуществления образец, который является PD-L1 позитивным, проявляет по меньшей мере слабое, умеренное и/или сильное окрашивание клеток (на основе мембранной экспрессии PD-L1).

[00120] Образец, который «не имеет экспрессии PD-L1» или имеет «отрицательное окрашивание на PD-L1» или является «PD-L1 отрицательным », означает, что экспрессия PD-L1 на поверхности клеток образца не обнаруживается с помощью ИГХ, такого как хромогенный ИГХ анализ или иммунофлуоресцентный ИГХ анализ (показатель Aqua). Отрицательный PD-L1 образец также рассматривается как «PD-L1^LOW».

[00121] В некоторых вариантах осуществления может быть использован любой способ измерения уровня PD-L1. В некоторых вариантах осуществления это может включать использование теста PD-L1 ИГХ 22C3 pharmDx (Dako, Inc., г. Карпинтерия, штат Калифорния, США), который является клинически подтвержденным и одобренным FDA тестом для оценки экспрессии PD-L1 в НМРЛ. ИГХ PD-L1 22C3 pharmDx представляет собой качественный иммуногистохимический анализ с использованием моноклонального анти-PD-L1 антитела мыши (клон 22C3), который может быть использован для обнаружения белка PD-L1 в зафиксированных в формалине и залитых парафином (FFPE) тканях немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ). Анализ может быть выполнен в системе Autostainer Link 48 и визуализирован с использованием системы EnVision FLEX. Экспрессия белка PD-L1 определяется с использованием пропорционального опухолевого показателя (TPS), который представляет собой процент жизнеспособных опухолевых клеток, демонстрирующих частичное или полное окрашивание мембран. В некоторых вариантах осуществления образец считается PD-L1 позитивным, если TPS ≥1% жизнеспособных опухолевых клеток проявляет окрашивание мембраны с любой интенсивностью. В некоторых вариантах осуществления образец считается PD-L1^HIGH, если TPS ≥50% жизнеспособных опухолевых клеток демонстрирует окрашивание мембраны с любой интенсивностью. ИГХ PD-L1 22C3 pharmDx указывается в качестве средства при идентификации пациентов с НМРЛ для лечения с помощью KEYTRUDA^® (пембролизумаб). Дополнительные подробности о системе оценки и ответа на пембролизумаб описаны Garon et al. (N Engl J Med 2015;372:2018-28).

[00122] Термин «контроль» относится к композиции, которая, как известно, не содержит аналит («отрицательный контроль») или содержащей аналит («положительный контроль»). Положительный контроль может содержать известную концентрацию аналита. «Контроль», «положительный контроль» и «калибратор» могут использоваться в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения композиции, содержащей известную концентрацию аналита. «Положительный контроль» может использоваться для определения характеристик анализа и является полезным индикатором пригодности реагентов (например, аналитов).

[00123] «Предварительно определенный предел» и «предварительно определенный уровень» обычно относятся к граничному значению анализа, которое используется для оценки результатов диагностической/прогностической/терапевтической эффективности путем сравнения результатов анализа с предварительно определенным пределом/уровнем, где предварительно определенный предел/уровень уже связан или ассоциирован с различными клиническими параметрами (например, тяжесть заболевания, прогрессия/отсутствие прогрессии/улучшение и т.д.). Хотя настоящее раскрытие может обеспечить примерные заранее определенные уровни, хорошо известно, что граничные значения могут варьироваться в зависимости от природы иммуноанализа (например, используемых антител и т.д.). Кроме того, специалист в данной области техники может приспособить раскрытие, приведенное в настоящем документе, для других иммуноанализов для получения специфичных для иммуноанализа предельных значений для данных других иммуноанализов на основе настоящего раскрытия. Принимая во внимание, что точное значение предварительно определенного предела/уровня может варьироваться между анализами, корреляции, как описано в настоящем документе (если таковые имеются), могут быть в целом применимы.

[00124] Термины «ингибирование» или «ингибировать» относятся к уменьшению или прекращению любого фенотипического свойства или к снижению или прекращению частоты возникновения, степени или вероятности этого свойства. «Снизить» или «ингибировать» означает уменьшить, снизить или остановить активность, функцию и/или количество по сравнению с эталоном. В некоторых вариантах осуществления «снизить» или «ингибировать» означает способность вызывать общее уменьшение на 20% или более. В некоторых вариантах осуществления «снизить» или «ингибировать» означает способность вызывать общее уменьшение на 50% или более. В некоторых вариантах осуществления «снизить» или «ингибировать» означает способность вызывать общее уменьшение на 75%, 85%, 90%, 95% или более. В некоторых вариантах осуществления количество, указанное выше, ингибируется или уменьшается в течение периода времени относительно контрольной дозы (такой как плацебо) в течение того же периода времени. Термин «эталонный», в контексте настоящего документа, относится к любому образцу, стандарту или уровню, которые используются для целей сравнения. Эталонный образец может быть получен из здорового и/или нездорового образца. В некоторых примерах эталонный образец может быть получен из необработанного образца. В некоторых примерах эталонный образец получен от не заболевшего необработанного образца индивидуума-субъекта. В некоторых примерах эталонный образец получен от одного или более здоровых индивидуумов, которые не являются субъектом или пациентом.

[00125] Термин «задержка развития заболевания», в контексте настоящего документа, означает задержку, препятствование, замедление, торможение, стабилизацию, подавление и/или откладывание развития заболевания (такого как рак). Эта задержка может быть различной продолжительности, в зависимости от истории болезни и/или индивидуума, который подлежит лечению. Как очевидно для специалиста в данной области техники, достаточная или значительная задержка может, по сути, включать предотвращение, поскольку у индивидуума не развивается заболевание. Например, поздняя стадия рака, такая как развитие метастазирования, может быть отсрочена.

[00126] «Предотвращение», в контексте настоящего документа, включает предоставление профилактических мероприятий в отношении возникновения или рецидива заболевания у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию, но заболевание еще не было диагностировано. Если не указано иное, термины «уменьшить», «ингибировать» или «предотвратить» не обозначают и не требуют полного предотвращения в течение всего времени.

[00127] В контексте настоящего документа термин «подавлять» функцию или действие означает уменьшение функции или активности по сравнению с другими такими же условиями, за исключением интересующего условия или параметра или, альтернативно, по сравнению с другим условием. Например, антитело, которое подавляет рост опухоли, снижает скорость роста опухоли по сравнению со скоростью роста опухоли в отсутствие антитела.

[00128] «Терапевтически эффективное количество» вещества/молекулы, агониста или антагониста может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст, пол и вес индивидуума, а также способность вещества/молекулы, агониста или антагониста вызывать желаемый ответ у индивидуума. Терапевтически эффективное количество также является таким, при котором любые токсичные или вредные эффекты вещества/молекулы, агониста или антагониста перевешиваются терапевтически полезными эффектами. Терапевтически эффективное количество может быть доставлено за одно или более введений. Терапевтически эффективное количество относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого терапевтического и/или профилактического результатов.

[00129] «Профилактически эффективное количество» относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого профилактического результата. Как правило, но не обязательно, поскольку профилактическая доза используется у субъектов до или на более ранней стадии заболевания, профилактически эффективное количество будет меньше чем терапевтически эффективного количества.

[00130] Термины «фармацевтический состав» и «фармацевтическая композиция» относятся к препарату, который находится в такой форме, которая позволяет биологической активности активного(-ых) ингредиента(-ов) быть эффективной, и которая не содержит никаких дополнительных компонентов, которые неприемлемо токсичны для субъекта, которому будет вводиться состав. Такие составы могут быть стерильными.

[00131] «Фармацевтически приемлемый носитель» относится к нетоксичному твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему материалу, вспомогательному составу или носителю, общепринятому в данной области техники для применения с терапевтическим агентом, которые вместе составляют «фармацевтическую композицию» для введения субъекту. Фармацевтически приемлемый носитель нетоксичен для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и совместим с другими ингредиентами состава. Фармацевтически приемлемый носитель подходит для используемого состава.

[00132] «Стерильная» композиция является асептической или практически не содержит живых микроорганизмов и их спор.

[00133] Термин «IDO-ингибитор» относится к агенту, способному ингибировать активность индоламин 2,3-диоксигеназы (IDO) и, таким образом, обращать IDO-опосредованную иммуносупрессию. IDO-ингибитор может ингибировать IDO1 и/или IDO2 (INDOL1). IDO-ингибитор может быть обратимым или необратимым IDO-ингибитором. «Обратимый IDO-ингибитор» представляет собой соединение, которое обратимо ингибирует активность фермента IDO на каталитическом сайте или на некаталитическом сайте, а «необратимый IDO-ингибитор» представляет собой соединение, которое необратимо ингибирует активность фермента IDO путем образования ковалентной связи с ферментом. Неограничивающие типовые IDO-ингибиторы включают индоксимод (New Link Genetics), INCB024360 (Incyte Corp.), 1-метил-D-триптофан (New Link Genetics) и GDC-0919 (Genentech, Inc.).

[00134] «Т-клеточная терапия с химерным антигенным рецептором» или «CAR-T-терапия» относится к терапевтическому агенту, содержащему генетически модифицированную Т-клетку для экспрессии рецептора, который распознает антиген, экспрессируемый опухолевой клеткой. Антиген может представлять собой антиген, специфически экспрессируемый опухолью, или антиген, экспрессируемый как раковыми клетками, так и здоровой тканью. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-терапия представляет собой адоптивную CAR-T-терапию, в которой Т-клетки пациента удаляются и модифицируются для экспрессии химерного антигенного рецептора, а затем возвращаются пациенту. См., например, Dai et al., 2016, J Natl Cancer Inst, 108 (7): djv439, doi: 10.1093/jnci/djv439; Gill et al., 2015, Blood Rev, pii: S0268-960X(15)00080-6, doi: 10.1016/j.blre.2015.10.003; Gill et al., 2015, Immunol Rev, 263(1):68-89. doi: 10.1111/imr.12243.

[00135] Введение «в сочетании с» одним или более дополнительными терапевтическими агентами включает одновременное (совместное) и последующее или последовательное введение в любом порядке.

[00136] Термин «одновременно» используется в данном документе для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, когда по меньшей мере часть введения перекрывается во времени или когда введение одного терапевтического агента происходит в течение короткого периода времени относительно введения другого терапевтического агента. Например, два или более терапевтических агентов вводят с временным интервалом не более чем около определенного количества минут.

[00137] Термин «последовательно» используется в данном документе для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, когда введение одного или более агентов продолжается после прекращения введения одного или более других агентов, или когда введение одного или более агентов начинается до введения одного или более других агентов. Например, введение двух или более терапевтических агентов вводят с временным разделением, превышающим определенное количество минут.

[00138] Термин «в сочетании с», в контексте настоящего документа, относится к применению одного способа лечения в дополнение к другому способу лечения. Таким образом, «в сочетании с» относится к применению одного способа лечения до, во время или после применения другого способа лечения для индивидуума.

[00139] Термин «листок-вкладыш» используется для обозначения инструкций, обычно включаемых в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или предупреждениях относительно использования таких терапевтических продуктов.

[00140] «Готовое изделие» представляет собой любое изделие (например, упаковку или контейнер) или набор, содержащий по меньшей мере один реагент, например лекарственное средство для лечения заболевания или расстройства (например, рака), или зонд для специфического обнаружение биомаркера, описанного в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления готовое изделие или набор рекламируются, распространяются или продаются как единица для выполнения способов, описанных в настоящем документе.

[00141] Термины «метка» и «детектируемая метка» обозначают фрагмент, присоединенный к антителу или его аналиту для обнаружения взаимодействия (например, связывания) между членами пары специфического связывания. Меченый член пары специфического связывания относится к «обнаруживаемо меченному». Таким образом, термин «меченый связывающий белок» относится к белку с внедренной меткой, которая обеспечивает идентификацию связывающего белка. В некоторых вариантах осуществления метка представляет собой обнаруживаемый маркер, который может продуцировать сигнал, который можно обнаружить с помощью визуальных или инструментальных средств, например, включения радиоактивно меченной аминокислоты или присоединения к полипептиду биотинильных фрагментов, которые могут быть обнаружены с помощью маркированного авидина (например, стрептавидин, содержащий флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которые могут быть обнаружены оптическими или колориметрическими методами). Примеры меток для полипептидов включают, но не ограничиваются ими, следующие: радиоизотопы или радионуклиды (например, ³H, ¹⁴C, ³⁵S, ⁹⁰Y, ⁹⁹Tc, ¹¹¹In, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁷⁷Lu, ¹⁶⁶Ho или ¹⁵³Sm); хромогены, флуоресцентные метки (например, FITC, родамин, лантаноидные люминофоры), ферментативные метки (например, пероксидаза хрена, люцифераза, щелочная фосфатаза); хемилюминесцентные маркеры; биотинильные группы; предварительно определенные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, последовательности пар лейциновой молнии, сайты связывания для вторичных антител, домены связывания металлов, эпитопные метки) и магнитные агенты, такие как хелаты гадолиния. Типичные примеры меток, обычно используемых для иммуноанализов, включают фрагменты, которые продуцируют свет, например, соединения акридиния, и фрагменты, которые продуцируют флуоресценцию, например флуоресцеин. В связи с этим сам фрагмент может быть не детектируемо мечен, но может стать обнаруживаемым при реакции с еще одним фрагментом.

[00142] Термин «конъюгат» относится к антителу, которое химически связано со вторым химическим фрагментом, таким как терапевтический или цитотоксический агент. Термин «агент» включает химическое соединение, смесь химических соединений, биологическую макромолекулу или экстракт, полученный из биологических материалов. В некоторых вариантах осуществления терапевтические или цитотоксические агенты включают, но не ограничиваются ими, коклюшный токсин, таксол, цитохалазин B, грамицидин D, бромид этидия, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, дауномицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин, и их аналоги или гомологи. При использовании в контексте иммуноанализа конъюгатное антитело может представлять собой детектируемо меченое антитело, используемое в качестве детектирующего антитела.

II. Анти-PD-1 антитела

[00143] Предлагаются новые антитела, направленные против PD-1. Анти-PD-1 антитела включают, но не ограничиваются ими, гуманизированные антитела, химерные антитела, мышиные антитела, человеческие антитела и антитела, содержащие CDR тяжелой цепи и/или легкой цепи, обсуждаемые в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления предлагается выделенное антитело, которое связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления предлагается моноклональное антитело, которое связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело представляет собой анти-PD-1 антитело-антагонист. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления введение анти-PD-1-антител, описанных в настоящем документе, усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта.

[00144] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.

[00145] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.

[00146] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.

[00147] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.

[00148] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.

[00149] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.

[00150] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.

[00151] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.

[00152] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.

[00153] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.

[00154] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.

[00155] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь, содержащую вариабельную область тяжелой цепи и по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи, и по меньшей мере одну легкую цепь, содержащую вариабельную область легкой цепи и по меньшей мере часть константной области легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит две тяжелые цепи, причем каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи и по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи, и две легкие цепи, причем каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи и по меньшей мере часть константной области легкой цепи. В контексте настоящего описания считается, что одноцепочечное Fv (scFv) или любое другое антитело, которое содержит, например, одну полипептидную цепь, содержащую все шесть CDR (три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи), имеет тяжелую цепь и легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь представляет собой область анти-PD-1 антитела, которое содержит три тяжелых цепи CDR. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь представляет собой область анти-PD-1 антитела, которое содержит три легких цепи CDR.

[00156] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.

[00157] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.

[00158] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.

[00159] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.

[00160] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.

[00161] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86,94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.

[00162] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.

[00163] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.

[00164] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.

[00165] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.

[00166] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.

[00167] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.

[00168] В некоторых вариантах осуществления предлагается анти-PD-1 антитело, которое конкурирует с анти-PD-1 антителом, описанным в настоящем документе, за связывание с PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое конкурирует за связывание с любым из антител, представленных в настоящем документе, может быть получено и/или использовано.

[00169] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.

[00170] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.

[00171] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.

[00172] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:31.

[00173] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39.

[00174] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62; и (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63.

[00175] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119.

[00176] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287.

[00177] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271.

[00178] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231.

[00179] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183.

[00180] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319.

[00181] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.

[00182] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.

[00183] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.

[00184] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.

[00185] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.

[00186] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.

[00187] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.

[00188] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.

[00189] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.

[00190] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.

[00191] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.

[00192] В некоторых вариантах осуществления любой из шести CDR, представленных в настоящем документе, может быть объединен в качестве составных участков с любым из других CDR, предоставленных в настоящем документе, для получения в конструкции в общей сложности шести CDR. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления два CDR из первого антитела (например, HCDR1 и HCDR2) могут быть скомбинированы с четырьмя CDR из второго антитела (HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3). В некоторых вариантах осуществления два или менее остатка в одной или более CDR могут быть заменены для получения их варианта. В некоторых вариантах осуществления два или менее остатка могут быть заменены в 1, 2, 3, 4, 5 или 6 CDR.

[00193] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.

[00194] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.

[00195] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.

[00196] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.

[00197] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.

[00198] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.

[00199] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.

[00200] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263, и 271; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.

[00201] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.

[00202] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, и 183; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.

[00203] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.

[00204] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющего по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316. В некоторых вариантах осуществления последовательность VH, идентичная на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но анти-PD-1 антитело, содержащее эту последовательность, сохраняет способность связываться с PD-1. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами CDR (то есть в FR). Необязательно, анти-PD-1-антитело содержит последовательность VH в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316, включая посттрансляционные модификации этой последовательности.

[00205] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.

[00206] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.

[00207] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.

[00208] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31.

[00209] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39.

[00210] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119.

[00211] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287.

[00212] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271.

[00213] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231.

[00214] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183.

[00215] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319.

[00216] В некоторых вариантах осуществления предлагается анти-PD-1 антитело, причем антитело содержит вариабельный домен легкой цепи (VL), имеющий по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления последовательность VL, идентичная на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но анти-PD-1 антитело, содержащее эту последовательность, сохраняет способность связываться с PD-1. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами CDR (то есть в FR). Необязательно, анти-PD-1-антитело содержит последовательность VL в SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320, включая посттрансляционные модификации этой последовательности.

[00217] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.

[00218] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.

[00219] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.

[00220] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.

[00221] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.

[00222] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.

[00223] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.

[00224] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.

[00225] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.

[00226] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.

[00227] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.

[00228] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124 , 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316, и последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотой последовательность SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления последовательность VH, имеющая идентичность по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, и последовательность VL, имеющая идентичность, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но анти-PD-1-антитело, содержащее данную последовательность, сохраняет способность связываться с PD-1. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами CDR (то есть в FR). Необязательно, анти-PD-1-антитело содержит последовательность VH в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316 и последовательность VL SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320, включая посттрансляционные модификации одной или обеих последовательностей.

[00229] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.

[00230] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.

[00231] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.

[00232] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.

[00233] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.

[00234] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.

[00235] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.

[00236] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.

[00237] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.

[00238] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.

[00239] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.

[00240] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит VH, как в любом из вариантов осуществления предложенных в данном документе, и VL, как в любом из вариантов осуществления предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 8, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 16, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 24 соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 32, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 40, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 44 и SEQ ID NO: 48, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 52 и SEQ ID NO: 56, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 60 и SEQ ID NO: 64, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 72, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 80, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 84 и SEQ ID NO: 88, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 92 и SEQ ID NO: 96, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 104, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 108 и SEQ ID NO: 112, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 116 и SEQ ID NO: 120, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 124 и SEQ ID NO: 128, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 132 и SEQ ID NO: 136, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 140 и SEQ ID NO: 144, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 148 и SEQ ID NO: 152, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 156 и SEQ ID NO: 160, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 164 и SEQ ID NO: 168, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 176, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 180 и SEQ ID NO: 184, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 188 и SEQ ID NO: 192, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 196 и SEQ ID NO: 200, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 204 и SEQ ID NO: 208, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 212 и SEQ ID NO: 216, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 220 и SEQ ID NO: 224, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 228 и SEQ ID NO: 232, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 236 и SEQ ID NO: 240, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 248, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 252 и SEQ ID NO: 256, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 260 и SEQ ID NO: 264, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 268 и SEQ ID NO: 272, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 276 и SEQ ID NO: 280, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 284 и SEQ ID NO: 288, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 292 и SEQ ID NO: 296, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 300 и SEQ ID NO: 304, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 308 и SEQ ID NO: 312, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 316 и SEQ ID NO: 320, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей.

[00241] В некоторых вариантах осуществления изобретения предлагаются антитела, которые конкурируют с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, за связывание с PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитела конкурируют с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, за связывание с эпитопом на PD-1.

[00242] В некоторых вариантах осуществления конкурентные анализы могут использоваться для идентификации моноклонального антитела, которое конкурирует с анти-PD-1-антителом, описанным в данном документе (таким как 12228, 13406, 13407, 13408 и 13409) за связывание с PD-1. Конкурентные анализы можно использовать для определения того, связывают ли два антитела один и тот же эпитоп, распознавая идентичные или стерически перекрывающиеся эпитопы, или одно антитело конкурентно ингибирует связывание другого антитела с антигеном. В некоторых вариантах осуществления такое конкурирующее антитело связывается с тем же эпитопом, который связан антителом, описанным в данном документе. Типичные конкурентные анализы включают, но не ограничиваются ими, обычные анализы, такие как те, которые представлены в Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.). Подробные иллюстративные способы картирования эпитопа, с которым связывается антитело, представлены в Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” в Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, N.J.). В некоторых вариантах осуществления считается, что два антитела связываются с одним и тем же эпитопом, если каждое блокирует связывание другого на 50% или более. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое конкурирует с анти-PD-1-антителом, описанным в данном документе, представляет собой химерное, гуманизированное или человеческое антитело. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует с химерным, гуманизированным или человеческим анти-PD-1-антителом, как описано в данном документе.

[00243] В некоторых вариантах осуществления изобретения предлагаются антитела, которые связываются с любым одним или более эпитопами, которые представлены в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предложены антитела, которые связывают и перекрывают эпитоп, с которым связываются настоящие антитела. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует по меньшей мере с одним из антител, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует по меньшей мере с двумя из антител, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует по меньшей мере с тремя из антител, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с перекрывающимся эпитопом в качестве антитела, описанного в приведенных в данном документе примерах. В некоторых вариантах осуществления весь эпитоп связан и/или заблокирован конкурирующим антителом. В некоторых вариантах осуществления часть эпитопа связана и/или заблокирована конкурирующим антителом. В некоторых вариантах осуществления паратоп конкурирующего антитела связывается по меньшей мере с частью эпитопа антитела, представленного в данном документе. В некоторых вариантах осуществления паратоп конкурирующего антитела связывает мишень, а другой участок структуры конкурирующего антитела препятствует по меньшей мере части эпитопа антитела, представленного в данном документе.

Иллюстративные химерные антитела

[00244] В некоторых вариантах осуществления антитело, предложенное в данном документе, представляет собой химерное антитело. Некоторые химерные антитела описаны, например, в патенте США № 4816567 и Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984)). В одном примере химерное антитело содержит вариабельную область, не являющуюся человеческой (например, вариабельную область, полученную от мыши, крысы, хомяка, кролика или не являющегося человеком примата, такого как обезьяна) и человеческую константную область. В дополнительном примере химерное антитело представляет собой антитело с «переключенным классом», в котором класс или подкласс был изменен по сравнению с родительским антителом. Химерные антитела включают их антигенсвязывающие фрагменты.

[00245] Неограничивающие иллюстративные химерные антитела включают химерные антитела, содержащие вариабельные области тяжелой и/или легкой цепи антитела, выбранного из, например, антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190, как описано в данном документе. Дополнительные неограничивающие примерные химерные антитела включают химерные антитела, содержащие тяжелую цепь CDR1, CDR2 и CDR3 и/или легкую цепь CDR1, CDR2 и CDR3 антитела, выбранного из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, и связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту. В некоторых вариантах осуществления введение анти-PD-1-антител, описанных в данном документе, стимулирует активность иммунной клетки, уменьшает подавление модуляции иммунной клетки или увеличивает ответ Т-клеток у субъекта.

[00246] В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220,228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316, причем антитело связывает PD-1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192. 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320, причем антитело связывает PD-1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или, по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316; и легкую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320; причем антитело связывает PD-1.

[00247] Иллюстративные химерные анти-PD-1-антитела также включают в себя химерные антитела, которые конкурируют за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, описанным в данном документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено химерное анти-PD-1-антитело, которое конкурирует за связывание с PD-1 антителом, выбранным из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190 или его фрагмента. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.

[00248] В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит одну или более константных областей человека. В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи человека имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления константная область легкой цепи человека имеет изотип, выбранный из κ и λ. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG4 человека и легкую цепь к человека.

[00249] Как отмечено выше, желательна ли эффекторная функция или нет, может зависеть от конкретного способа лечения, для которого предназначено антитело. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают химерное анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают химерное анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека.

Иллюстративные гуманизированные антитела

[00250] В некоторых вариантах осуществления предложены гуманизированные антитела, которые связывают PD-1. Гуманизированные антитела полезны в качестве терапевтических молекул, потому что гуманизированные антитела уменьшают или устраняют иммунный ответ человека по сравнению с нечеловеческими антителами, что может приводить к иммунному ответу на терапевтическое антитело (такое как ответная реакция в виде антител человека против антител мыши (HAMA)) и снижению эффективности терапии.

[00251] В некоторых вариантах осуществления химерное антитело представляет собой гуманизированное антитело. Как правило, не относящееся к человеку антитело гуманизируют для снижения иммуногенности для людей, сохраняя при этом специфичность и аффинность родительского не относящегося к человеку антитела. Обычно гуманизированное антитело содержит один или более вариабельных доменов, в которых CDR (или их части) получены из не относящегося к человеку антитела, а FR (или их части) получены из последовательностей антител человека. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть человеческой константной области. В некоторых вариантах осуществления некоторые остатки FR в гуманизированном антителе заменены соответствующими остатками не относящегося к человеку антитела (например, антитела, из которого получены остатки CDR), например, для восстановления или улучшения специфичности или аффинности антитела.

[00252] Гуманизированные антитела и способы их получения рассматриваются, например, в Almagro and Fransson, (2008) Front. Biosci. 13: 1619-1633, и дополнительно описаны, например, в Riechmann et al., (1988) Nature 332:323-329; Queen et al., (1989) Proc. Natl Acad. Sci. USA 86: 10029-10033; патентах США № 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321 и 7087409; Kashmiri et al., (2005) Methods 36:25-34; Padlan, (1991) Mol. Immunol. 28:489-498 (описание «изменение поверхности»); Dall'Acqua et al., (2005) Methods 36:43-60 (описание «перестановки FR»); и Osbourn et al., (2005) Methods 36:61-68 и Klimka et al., (2000) Br. J. Cancer, 83:252-260 (описание подхода «управляемого отбора» к перестановке FR).

[00253] Каркасные области человека, которые могут быть использованы для гуманизации, включают, но не ограничиваются ими: каркасные области, выбранные с использованием способа «наилучшего соответствия» (см., например, Sims et al. (1993) J. Immunol. 151:2296); каркасные области, полученные из консенсусной последовательности антител человека определенной подгруппы вариабельных областей легкой или тяжелой цепи (см., например, Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; и Presta et al. (1993) J. Immunol, 151:2623); зрелые каркасные области человека (соматически мутированные) или каркасные области зародышевой линии человека (см., например, Almagro and Fransson, (2008) Front. Biosci. 13:1619-1633) и каркасные области, полученные при скрининге FR-библиотек (см., например, Baca et al., (1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684 и Rosok et al., (1996) J. Biol. Chem. 271 :22611-22618).

[00254] Иллюстративные гуманизированные анти-PD-1-антитела, включают в себя антитела, которые конкурируют за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, описанным в данном документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено гуманизированное анти-PD-1-антитело, которое конкурирует за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, выбранным из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.

Иллюстративные антитела человека

[00255] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, предложенное в данном документе, представляет собой антитело человека. Антитела человека могут быть получены с использованием различных методик, известных в данной области техники. Антитела человека описаны в основном в van Dijk and van de Winkel, (2001) Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-374 и Lonberg, (2008) Curr. Opin. Immunol. 20:450-459. В некоторых вариантах осуществления антитело человека не является встречающимся в природе антителом. В некоторых вариантах осуществления антитело человека представляет собой моноклональное антитело; таким образом, в некоторых вариантах осуществления каждое из антител человека в наборе может связываться с одним и тем же эпитопом на антигене.

[00256] Антитела человека могут быть получены введением иммуногена трансгенному животному, которое было модифицировано для продукции интактных антител человека или интактных антител с вариабельными областями человека в ответ на антигенную стимуляцию. Такие животные обычно содержат все или часть локусов иммуноглобулинов человека, которые заменяют эндогенные локусы иммуноглобулинов или которые присутствуют внехромосомно или случайным образом интегрированы в хромосомы животного. У таких трансгенных мышей эндогенные локусы иммуноглобулина обычно инактивированы. Обзор способов получения антител человека от трансгенных животных см. в Lonberg, (2005) Nat. Biotech. 23: 1117-1125. См. также, например, патенты США № 6075181 и 6150584, описывающие технологию XENOMOUSE™; патент США № 5770429, описывающий технологию HUMAB^®; патент США № 7041870, описывающий технологию K-M MOUSE^®, и публикацию заявки на патент США № US 2007/0061900, описывающую технологию VELOCIMOUSE^®. Вариабельные области человека из интактных антител, генерируемых такими животными, можно дополнительно модифицировать, например, путем объединения с другой константной областью человека.

[00257] Антитела человека также могут быть получены с помощью гибридомных способов. Описаны клеточные линии миеломы человека и гетеромиеломы человека-мыши для продуцирования моноклональных антител человека. (См., например, Kozbor (1984) J. Immunol, 133: 3001; Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987) и Boerner et al, (1991) J. Immunol., 147:86). Антитела человека, полученные с помощью технологии гибридомных B-клеток человека, также описаны в Li et al., (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562. Дополнительные способы включают способы, описанные, например, в патенте США № 7,189,926 (описывающем получение моноклональных антител-IgM человека из линий гибридомных клеток) и Ni, (2006) Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (описывающей гибридомы человек-человек). Технология гибридом человека (технология Триома) также описана Vollmers and Brandlein, (2005) Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) и Vollmers and Brandlein, (2005) Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3): 185-191.

[00258] Антитела человека также могут быть получены путем выделения последовательностей клона вариабельного домена Fv, выбранного из библиотек фагового дисплея, полученных от человека. Такие последовательности вариабельного домена затем можно комбинировать с желаемым константным доменом человека. Методики отбора антител человека из библиотек антител описаны ниже.

[00259] Антитела могут быть выделены путем скрининга комбинаторных библиотек на наличие антител с желаемой активностью или активностями. Например, в данной области техники известны различные способы создания библиотек фагового дисплея и скрининга таких библиотек на наличие антител, обладающих желаемыми характеристиками связывания. Такие способы рассмотрены, например, в Hoogenboom et al. в Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) и дополнительно описаны, например, в McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554; Clackson et al., (1991) Nature 352: 624-628; Marks et al., (1992) J. Mol. Biol 222: 581-597; Marks and Bradbury, в Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., (2004) J. Mol. Biol. 338(2): 299-310; Lee et al., (2004) J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093; Fellouse, (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472; и Lee et al., (2004) J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 и PCT публикации WO 99/10494.

[00260] В некоторых способах фагового дисплея репертуары генов V_H и V_L по отдельности клонируют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и случайным образом рекомбинируют в фаговых библиотеках, которые затем могут быть подвергнуты скринингу на антигенсвязывающий фаг, как описано в Winter et al., (1994) Ann. Rev. Immunol., 12:433-455. Фаг обычно содержит фрагменты антител, либо в виде одноцепочечных фрагментов Fv (scFv), либо в виде фрагментов Fab. Библиотеки из иммунизированных источников предоставляют высокоаффинные антитела к иммуногену без необходимости конструирования гибридом. Альтернативно, наивный репертуар может быть клонирован (например, от человека), чтобы обеспечить единый источник антител к широкому спектру неаутоантигенов, а также аутоантигенов без какой-либо иммунизации, как описано в Griffiths et al., (1993) EMBO J 12:725-734. Наконец, наивные библиотеки также могут быть созданы синтетически путем клонирования неупорядоченных сегментов V-гена из стволовых клеток и использования ПЦР-праймеров, содержащих случайную последовательность, для кодирования высоко вариабельных областей CDR3 и для осуществления перегруппировки in vitro, как описано в Hoogenboom and Winter (1992), J. Mol. Biol, 227:381-388. Патентные публикации, описывающие фаговые библиотеки антител человека, включают в себя, например: патент США № 5750373 и патентные публикации США № 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 и 2009/0002360.

[00261] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с полипептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 1, 2, 3, 382, 383 или 384. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.

[00262] Типичные анти-PD-1-антитела человека также включают антитела, которые конкурируют за связывание с PD-1 с антителом человека или его фрагментом, описанными в данном документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено анти-PD-1-антитело человека, которое конкурирует за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, выбранным из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.

[00263] В некоторых вариантах осуществления предложено химерное анти-PD-1-антитело человека, причем антитело содержит вариабельную область из антитела человека, которая связывает PD-1, и константную область из другого антитела человека. В некоторых вариантах осуществления предложено химерное анти-PD-1-антитело человека, причем антитело содержит CDR из антитела человека, которое связывает PD-1, и каркас из другого антитела человека. В некоторых вариантах осуществления антитело не является встречающимся в природе антителом человека.

[00264] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека содержит одну или более константных областей человека. В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи человека имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления константная область легкой цепи человека имеет изотип, выбранный из κ и λ. В некоторых вариантах осуществления антитело человека, описанное в данном документе, содержит константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления антитело человека, описанное в данном документе, содержит константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления антитело человека, описанное в данном документе, содержит константную область IgG4 человека и легкую цепь к человека.

[00265] В некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают анти-PD-1-антитело человека, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают анти-PD-1-антитело человека, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека.

[00266] Как отмечено в данном документе, термин «антитело человека» обозначает род возможных последовательностей для конструкции антитела, а не источник антитела.

Иллюстративные константные области антител

[00267] В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит одну или более константных областей человека. В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи человека имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека. В некоторых вариантах осуществления константная область легкой цепи человека имеет изотип, выбранный из κ и λ. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG4 человека и легкую цепь κ человека.

[00268] В настоящем описании и формуле изобретения, если явно не указано или не известно специалисту в данной области, нумерация остатков в тяжелой цепи иммуноглобулина соответствует индексу ЕС, как в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), специально включенному в данный документ посредством ссылки. «Индекс EU, как у Кабата» относится к нумерации остатков антитела IgG1 EU человека.

[00269] Как отмечено выше, желательна ли эффекторная функция или нет, может зависеть от конкретного способа лечения, для которого предназначено антитело. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека.

[00270] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариант Fc-области, имеющий по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с Fc-областью IgG дикого типа или антитела дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области имеет две или более аминокислотных замен в Fc-области антитела дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области имеет три или более аминокислотных замен в Fc-области антитела дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области имеет по меньшей мере одну, две или три или более аминокислотных замен Fc-области, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области в данном документе будет иметь по меньшей мере около 80% гомологию с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области в данном документе будет иметь по меньшей мере около 90% гомологию с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области в данном документе будет иметь по меньшей мере около 95% гомологию с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления в константной области тяжелой цепи отсутствует C-концевой остаток лизина (K). В некоторых таких вариантах осуществления тяжелая цепь или константная область тяжелой цепи может называться «desK». В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи, в которой отсутствует С-концевой лизин, представляет собой IgG, такой как IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.

[00271] В некоторых вариантах осуществления антитело, предложенное в данном документе, изменено для увеличения или уменьшения степени, до которой антитело является гликозилированным. Добавление или удаление сайтов гликозилирования антитела может быть удобно осуществлено путем изменения аминокислотной последовательности так, что один или более сайтов гликозилирования создаются или удаляются.

[00272] Когда антитело содержит область Fc, присоединенный к ней углевод может быть изменен. Нативные антитела, продуцируемые клетками млекопитающих, обычно содержат разветвленный двухантенный олигосахарид, который обычно присоединяется посредством N-связи к Asn297 домена CH2 области Fc. См., например, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). Олигосахарид может включать в себя различные углеводы, например маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, присоединенную к GlcNAc в «стволе» структуры двухантенного олигосахарида. В некоторых вариантах осуществления могут быть выполнены модификации олигосахарида в антителе для создания вариантов антитела с определенными улучшенными свойствами.

[00273] В некоторых вариантах осуществления предлагаются варианты антител, имеющие углеводную структуру, в которой отсутствует фукоза, присоединенная (прямо или косвенно) к области Fc. Например, количество фукозы в таких антителах может составлять от 1 до 80%, от 1 до 65%, от 5 до 65% или от 20 до 40%. Количество фукозы определяется путем расчета среднего количества фукозы в углеводной цепи при Asn297 относительно суммы всех гликоструктур, связанных с Asn 297 (например, сложных, гибридных и содержащих повышенное количество маннозы структур), измеренных путем MALDI-TOF масс-спектрометрии, как описано, например, в WO 2008/077546. Asn297 относится к остатку аспарагина, расположенному около положения 297 в области Fc (нумерация остатков в области Fc согласно EU); однако Asn297 также может быть расположен около на ±3 аминокислоты выше или ниже положения 297, то есть между положениями 294 и 300, из-за незначительных вариаций последовательности в антителах. Такие варианты фукозилирования могут иметь улучшенную функцию ADCC. См., например, патентные публикации США US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Примеры публикаций, относящихся к «дефукозилированным» или «фукозо-дефицитным» вариантам антител, включают в себя: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO 2005/053742; WO 2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Примеры клеточных линий, способных продуцировать дефукозилированные антитела, включают в себя клетки Lec13 CHO с дефицитом фукозилирования белка (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); заявка на патент США US 2003/0157108 A1, Presta, L; и WO 2004/056312 A1, Adams et al., особенно в примере 11), и нокаутные клеточные линии, такие как нокаутные клетки СНО по гену альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8, (см., например, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); и WO 2003/085107).

[00274] Варианты антител дополнительно снабжают разделенными пополам олигосахаридами, например, в которых двухантенный олигосахарид, присоединенный к области Fc антитела, делится пополам с помощью GlcNAc. Такие варианты антител могут иметь пониженное фукозилирование и/или улучшенную функцию ADCC. Примеры таких вариантов антител описаны, например, в WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); патенте США № 6602684 (Umana et al.) и US 2005/0123546 (Umana et al.). Также предлагаются варианты антител с по меньшей мере одним остатком галактозы в олигосахариде, присоединенном к области Fc. Такие варианты антител могут иметь улучшенную функцию CDC. Такие варианты антител описаны, например, в WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.) и WO 1999/22764 (Raju, S.).

[00275] Варианты антител также снабжены лидерными дополнениями на аминоконце цепи. Например, один или более аминокислотных остатков лидерной аминоконцевой последовательности присутствуют на аминоконце любой одной или более тяжелых или легких цепей антитела. Типичное лидерное дополнение на аминоконце цепи включает в себя или состоит из трех аминокислотных остатков, VHS, присутствующих в одной или обеих легких цепях варианта антитела.

[00276] Время полужизни in vivo или в сыворотке крови человека полипептидов, связывающих с высокой аффинностью FcRn, можно анализировать, например, у трансгенных мышей, людей или приматов, не являющихся человеком, которым вводят полипептиды с вариантом области Fc. См. также, например, Petkova et al. International Immunology 18(12):1759-1769 (2006).

[00277] В некоторых вариантах осуществления вариант антитела опосредует ADCC в присутствии эффекторных клеток человека более эффективно, чем родительское антитело. В некоторых вариантах осуществления вариант антитела существенно более эффективен при опосредовании ADCC in vitro, когда количества варианта полипептида и родительского антитела, использованные в анализе, по существу одинаковы. В некоторых вариантах осуществления вариант антитела существенно более эффективен при опосредовании ADCC in vivo, когда количества варианта полипептида и родительского антитела, использованные в анализе, по существу одинаковы. Как правило, такие полипептиды можно обнаружить с применением анализа ADCC in vitro, раскрытого в настоящем документе, однако можно также применять другие анализы или методы определения активности ADCC, например модель на животных и т.д.

Иллюстративные конъюгаты антител

[00278] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело конъюгировано с другой молекулой. В некоторых вариантах осуществления дополнительная молекула может быть детектируемым маркером, таким как метка. В некоторых вариантах дополнительная молекула может представлять собой терапевтическую молекулу, такую как цитотоксическое средство. В некоторых вариантах осуществления метка и/или цитотоксическое средство могут быть конъюгированы с антителом. В данном документе метка представляет собой фрагмент, который облегчает обнаружение антитела и/или облегчает обнаружение молекулы, с которой связывается антитело. Неограничивающие иллюстративные метки включают, но не ограничиваются ими, радиоизотопы, флуоресцентные группы, ферментные группы, хемилюминесцентные группы, биотин, эпитопные метки, металлсвязывающие метки и т.д. Специалист в данной области техники может выбрать подходящую метку в соответствии с конкретным применением.

[00279] Используемое в данном документе цитотоксическое средство представляет собой фрагмент, который уменьшает пролиферативную способность одной или более клеток. Клетка обладает пониженной пролиферативной способностью, когда клетка становится менее способной к пролиферации, например, потому что клетка подвергается апоптозу или иным образом умирает, клетка не проходит через клеточный цикл и/или не может делиться, клетка дифференцируется и т.д. Неограничивающие типичные цитотоксические средства включают в себя, но не ограничиваются ими, радиоизотопы, токсины и химиотерапевтические средства. Специалист в данной области техники может выбрать подходящее цитотоксическое средство в соответствии с предполагаемым применением. В некоторых вариантах осуществления цитотоксическое средство представляет собой по меньшей мере одно из антиметаболитов, алкилирующих агентов, антибиотиков, факторов роста, цитокинов, антиангиогенных средств, антимитотических средств, антрациклинов, токсинов или апоптотического средства.

[00280] В некоторых вариантах осуществления метка и/или цитотоксическое средство конъюгированы с антителом с использованием химических способов in vitro. Неограничивающие иллюстративные химические способы конъюгации известны в данной области техники и включают услуги, методы и/или реагенты, коммерчески доступные, например, от Thermo Scientific Life Science Research Productions (ранее Pierce; г. Рокфорд, штат Иллинойс, США), Prozyme (г. Хэйворд, Калифорния, США), SACRI Antibody Services (г. Калгари, Канада), AbD Serotec (г. Роли, штат Северная Каролина, США) и т.п. В некоторых вариантах осуществления когда метка и/или цитотоксическое средство представляют собой полипептид, метка и/или цитотоксическое средство могут быть экспрессированы из одного и того же экспрессионного вектора по меньшей мере с одной цепью антитела для получения полипептида, содержащего метку и/или цитотоксическое средство, слитое с цепью антитела. Специалист в данной области техники может выбрать подходящий способ конъюгирования метки и/или цитотоксического средства с антителом в соответствии с предполагаемым применением.

[00281] В некоторых вариантах осуществления конъюгация может быть ковалентной. В некоторых вариантах осуществления конъюгация может быть нековалентной. В некоторых вариантах осуществления конъюгирование может осуществляться посредством специфического связывающего взаимодействия, например посредством связывания вторичного антитела.

Иллюстративные лидерные последовательности

[00282] Для того чтобы некоторые секретируемые белки экспрессировались и секретировались в больших количествах, может быть желательным использование лидерной последовательности из гетерологичного белка. В некоторых вариантах осуществления использование гетерологичных лидерных последовательностей может быть выгодным тем, что полученный зрелый полипептид может оставаться неизменным, поскольку лидерная последовательность удаляется в ER во время процесса секреции. Добавление гетерологичной лидерной последовательности может быть полезным для экспрессии и секреции некоторых белков.

[00283] Некоторые иллюстративные лидерные последовательности описаны, например, в онлайн базе данных лидерных последовательностей, поддерживаемой факультетом биохимии Национального университета Сингапура. См. Choo et al., BMC Bioinformatics, 6: 249 (2005) и публикацию РСТ № WO 2006/081430.

III. Экспрессия и продуцирование антител

Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие анти-PD-1-антитела

[00284] В данном документе представлены молекулы нуклеиновых кислот, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют одну или более цепей анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит как полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, так и полинуклеотид, который кодирует легкую цепь, анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления первая молекула нуклеиновой кислоты содержит первый полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, а вторая нуклеиновая кислота содержит второй полинуклеотид, который кодирует легкую цепь.

[00285] В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются из одной молекулы нуклеиновой кислоты или из двух отдельных молекул нуклеиновых кислот в виде двух отдельных полипептидов. В некоторых вариантах, например, когда антитело представляет собой scFv, один полинуклеотид кодирует один полипептид, содержащий как тяжелую цепь, так и легкую цепь, связанные вместе.

[00286] В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере один из CDR, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере 3 из CDR, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере 6 из CDR, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует лидерную последовательность, которая при трансляции находится на N-конце тяжелой цепи или легкой цепи. Как обсуждалось выше, лидерная последовательность может быть нативной лидерной последовательностью тяжелой или легкой цепи, или может быть другой гетерологичной лидерной последовательностью.

[00287] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту, которая кодирует любую из аминокислотных последовательностей для антител в приведенной в данном документе таблице последовательностей. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой кислоту, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеиновой кислоте, кодирующей любую из аминокислотных последовательностей для антител в таблице последовательностей, приведенной в данном документе, например идентична по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99%. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой кислоту, которая гибридизуется с любой одной или более последовательностями нуклеиновой кислоты, представленными в данном документе. В некоторых вариантах осуществления гибридизация происходит в нормальных условиях. В некоторых вариантах осуществления гибридизация происходит в очень жестких условиях, таких как: по меньшей мере около 6X SSC и 1% SDS при 65°C, с первой промывкой в течение 10 минут при около 42°C с около 20% (об./об.) формамида в 0,1X SSC и с последующей промывкой 0,2X SSC и 0,1% SDS при 65°C.

[00288] Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть сконструированы с использованием методов рекомбинантной ДНК, известных в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой экспрессионный вектор, который подходит для экспрессии в выбранной клетке-хозяине.

[00289] Предложены векторы, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела. Также предложены векторы, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела. Такие векторы включают, но не ограничиваются ими, ДНК-векторы, фаговые векторы, вирусные векторы, ретровирусные векторы и т.д. В некоторых вариантах осуществления вектор содержит первую полинуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь, и вторую полинуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются из вектора в виде двух отдельных полипептидов. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются как часть одного полипептида, такого как, например, когда антитело является scFv.

[00290] В некоторых вариантах осуществления первый вектор содержит полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, и второй вектор содержит полинуклеотид, который кодирует легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления первый вектор и второй вектор трансфицируют в клетки-хозяева в близких количествах (таких как близкие молярные количества или близкие массовые количества). В некоторых вариантах осуществления мольное или массовое соотношение находятся между 5:1 и 1:5 первого вектора и второго вектора трансфицируемых в клетки-хозяева. В некоторых вариантах осуществления используется массовое соотношение между 1:1 и 1:5 для вектора, кодирующего тяжелую цепь, и вектора, кодирующего легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления используется массовое соотношение 1:2 для вектора, кодирующего тяжелую цепь, и вектора, кодирующего легкую цепь.

[00291] В некоторых вариантах осуществления выбран вектор, который оптимизирован для экспрессии полипептидов в клетках СНО или СНО-производных, или в клетках NSO. Типичные векторы описаны, например, в Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004).

Клетки-хозяева

[00292] В некоторых вариантах осуществления тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела могут экспрессироваться в клетках прокариотов, таких как клетки бактерий; или в клетках эукариотов, таких как клетки грибов (такие как дрожжи), клетки растений, клетки насекомых и клетки млекопитающих. Такая экспрессия может быть выполнена, например, в соответствии с процедурами, известными в данной области техники. Иллюстративные клетки эукариотов, которые можно использовать для экспрессии полипептидов, включают, но не ограничиваются ими, клетки COS, включая клетки COS 7; клетки 293, включая клетки 293-6E; клетки CHO, включая CHO-S, DG44, клетки СНО Lec13 и клетки СНО FUT8; клетки PER.C6^® (Crucell) и клетки NSO. В некоторых вариантах осуществления тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела могут экспрессировать в дрожжах. См., например, патентную публикацию США № US 2006/0270045 A1. В некоторых вариантах осуществления конкретная эукариотическая клетка-хозяин выбирается на основании ее способности производить желательные посттрансляционные модификации тяжелых цепей анти-PD-1-антитела и/или легких цепей анти-PD-1-антитела. Например, в некоторых вариантах осуществления клетки СНО продуцируют полипептиды, которые имеют более высокий уровень сиалилирования, чем тот же полипептид, продуцируемый в клетках 293.

[00293] Введение одной или более нуклеиновых кислот в желаемую клетку-хозяина может быть осуществлено любым способом, включая, но не ограничиваясь ими, трансфекцию, опосредованную фосфатом кальция, трансфекцию, опосредованную DEAE-декстраном, трансфекцию, опосредованную катионными липидами, электропорацию, трансдукцию, инфекцию и т.д. Неограничивающие иллюстративные способы описаны, например, в Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3^rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001). Нуклеиновые кислоты могут быть временно или стабильно трансфицированы в желаемых клетках-хозяевах в соответствии с любым подходящим способом.

[00294] Также предусмотрены клетки-хозяева, содержащие любой из полинуклеотидов или векторов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предоставляется клетка-хозяин, содержащая анти-PD-1-антитело. Любые клетки-хозяева, способные сверхэкспрессировать гетерологичные ДНК, могут быть использованы с целью выделения генов, кодирующих антитело, полипептид или интересующий белок. Неограничивающие примеры клеток-хозяев млекопитающих включают, но не ограничиваются ими, клетки COS, HeLa и CHO. См. также публикацию PCT № WO 87/04462. Подходящие клетки-хозяева немлекопитающих включают прокариоты (такие как E. coli или B. subtillis) и дрожжи (такие как S. cerevisae, S. pombe или K. lactis).

Очистка антител

[00295] Анти-PD-1-антитела могут быть очищены любым подходящим способом. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, использование аффинных матриц или хроматографию гидрофобного взаимодействия. Подходящие аффинные лиганды включают ECD ROR1 и лиганды, которые связывают константные области антител. Например, для связывания константной области и очистки анти-PD-1-антитела можно использовать колонку с белком A, белком G, белком A/G или аффинную колонку с антителом. Гидрофобная интерактивная хроматография, например бутильная или фенильная колонка, также может подходить для очистки некоторых полипептидов, таких как антитела. Ионообменная хроматография (например, анионообменная хроматография и/или катионообменная хроматография) также может подходить для очистки некоторых полипептидов, таких как антитела. Хроматография в смешанном режиме (например, обращенная фаза/анионный обмен, обращенная фаза/катионный обмен, гидрофильное взаимодействие/анионный обмен, гидрофильное взаимодействие/катионный обмен и т.д.) также может подходить для очистки некоторых полипептидов, таких как антитела. В данной области техники известны многие способы очистки полипептидов.

Бесклеточное продуцирование антител

[00296] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело продуцируется в бесклеточной системе. Неограничивающие иллюстративные бесклеточные системы описаны, например, в Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003).

Композиции

[00297] В некоторых вариантах осуществления изобретения предлагаются антитела, полученные способами, описанными выше. В некоторых вариантах осуществления антитело получают в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления антитело получают в бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления антитело является очищенным. В некоторых вариантах осуществления антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, представляет собой химерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, представляет собой антитело человека. В некоторых вариантах предлагается среда для культивирования клеток, содержащая анти-PD-1-антитело. В некоторых вариантах осуществления предлагается жидкость для культивирования клеток-хозяина, содержащая анти-PD-1-антитело.

[00298] В некоторых вариантах осуществления предлагаются композиции, содержащие антитела, полученные способами, описанными выше. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело, полученное в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело, полученное в бесклеточной системе. В некоторых вариантах композиция содержит очищенное антитело. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит химерное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит гуманизированное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело человека, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе.

[00299] В некоторых вариантах осуществления предлагается композиция, содержащая анти-PD-1-антитело в концентрации более чем около любая из 10 мг/мл, 20 мг/мл, 30 мг/мл, 40 мг/мл, 50 мг/мл, 60 мг/мл, 70 мг/мл, 80 мг/мл, 90 мг/мл, 100 мг/мл, 125 мг/мл, 150 мг/мл, 175 мг/мл, 200 мг/мл, 225 мг/мл или 250 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит химерное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит гуманизированное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело человека, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе.

IV. Терапевтические композиции и способы

Способы лечения заболеваний с использованием анти-PD-1-антител

[00300] Предложены антитела и композиции, содержащие антитела, для использования в способах лечения человека или животных. Также предложены способы лечения заболевания, включающие введение анти-PD-1-антител. Неограничивающие иллюстративные заболевания, которые можно лечить анти-PD-1-антителами, включают, но не ограничиваются раком.

[00301] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака, причем клетки в образце опухоли экспрессируют PD-L1. В некоторых таких вариантах осуществления опухоль может считаться PD-L1-положительной или экспрессировать PD-L1. Экспрессия PD-L1 может быть определена с помощью ИГХ анализа, например, как обсуждено в данном документе. В некоторых вариантах осуществления считается, что опухоль экспрессирует PD-L1, когда образец опухоли демонстрирует окрашивание 1+, 2+ или 3+ PD-L1 посредством ИГХ. В некоторых вариантах осуществления образец опухоли демонстрирует 2+ или 3+ окрашивание PD-L1 посредством ИГХ. В некоторых вариантах осуществления образец опухоли субъекта анализируют на экспрессию PD-L1, и субъекта отбирают для лечения антителом, описанным в данном документе, если образец опухоли демонстрирует экспрессию PD-L1. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают, если образец опухоли демонстрирует повышенную экспрессию PD-L1.

[00302] В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-L1^HIGH. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-L1^LOW. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-1^HIGH/PD-L1^LOW. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-1^HIGH/PD-L1^HIGH.

[00303] Анти-PD-1-антитело можно вводить субъектам при необходимости. Специалисты в данной области техники могут определить частоту введения, например, лечащий врач, на основании соображений о состоянии, которое лечат, возраста субъекта, которого лечат, тяжести состояния, которое лечат, общего состояния здоровья субъекта, которого лечат и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза анти-PD-1-антитела вводится субъекту один или более раз. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза анти-PD-1-антитела вводится субъекту один раз в месяц, реже одного раза в месяц, например, каждые два месяца или каждые три месяца. В некоторых вариантах осуществления эффективную дозу анти-PD-1-антитела вводят менее одного раза в месяц, например, один раз каждые три недели, один раз каждые две недели или один раз каждую неделю. Эффективная доза анти-PD-1-антитела вводится субъекту по меньшей мере один раз. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза анти-PD-1-антитела может вводиться большее количество раз, в том числе в течение периодов по меньшей мере одного месяца, по меньшей мере шести месяцев или по меньшей мере года.

[00304] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для лечения (включая профилактику) рака. Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса субъекта, которого лечат, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени распространенности состояния, которое лечат, или возраста субъекта, которого лечат. В общем, анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу.

[00305] Фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для усиления иммунного ответа и/или увеличения активации Т-клеток у субъекта.

[00306] Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса субъекта, которого лечат, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени распространенности состояния, которое лечат, или возраста субъекта, которого лечат. В общем, анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу.

Фармацевтические композиции

[00307] В некоторых вариантах осуществления композиции, содержащие анти-PD-1-антитела, предложены в композициях с широким разнообразием фармацевтически приемлемых носителей (см., например, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20^th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7^th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3^rd ed., Pharmaceutical Press (2000)). Доступны различные фармацевтически приемлемые носители, которые включают носители, адъюванты и разбавители. Кроме того, также доступны различные фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как регуляторы рН и буферные агенты, регуляторы тоничности, стабилизаторы, смачивающие агенты и тому подобное. Неограничивающие типичные носители включают физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу, воду, глицерин, этанол и их комбинации.

[00308] В некоторых вариантах осуществления предлагается фармацевтическая композиция, содержащая анти-PD-1-антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит химерное антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель.

[00309] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для лечения (включая профилактику) рака. Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса субъекта, которого лечат, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени распространенности состояния, которое лечат, или возраста субъекта, которого лечат. В общем, анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,05 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,05 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,05 мг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне около 5 мг/кг массы тела или ниже, например менее 4, менее 3, менее 2 или менее 1 мг/кг.

[00310] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела могут присутствовать в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. Например, в некоторых вариантах осуществления доза для человека весом 20 кг может находиться в диапазоне от около 1 мг до около 100 мг. В некоторых вариантах осуществления доза может находиться в диапазоне от 2 мг до 200 мг анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления доза может находиться в диапазоне от 10 мг до 400 мг анти-PD-1-антитела.

Способы введения

[00311] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить in vivo различными способами, включая, но не ограничиваясь ими, внутривенный, внутриартериальный, парентеральный, внутриопухолевый, внутрибрюшинный или подкожный. Соответствующий состав и способ введения могут быть выбраны в соответствии с предполагаемым применением

Комбинированная терапия

[00312] Анти-PD-1-антитела можно вводить отдельно или с другими способами лечения. Они могут быть введены до, по существу одновременно и/или после других способов лечения, например хирургического вмешательства, химиотерапии, лучевой терапии или введения биологического средства, такого как другое терапевтическое антитело. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят в комбинации с другим противораковым средством.

[00313] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят одновременно со вторым терапевтическим средством. Например, два или более терапевтических средства вводят с временным интервалом не более около 60 минут, например не более около 30, 15, 10, 5 или 1 минуты. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят последовательно со вторым терапевтическим средством. Например, два или более терапевтических средств вводят с временным разделением более чем около 15 минут, например около 20, 30, 40, 50 или 60 минут, 1 день, 2 дня, 3 дня 1 неделя, 2 недели или 1 месяц или дольше.

[00314] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят со вторым терапевтическим способом лечения. Таким образом, введение антитела, представленного в данном документе, может производиться в сочетании с другой системой лечения.

[00315] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с анти-ICOS-терапией. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с антителом, которое связывает индуцибельный Т-клеточный костимулятор (ICOS). В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с выделенным антителом, которое связывает ICOS, причем анти-ICOS-антитело является агонистом CD4+ T-клеток (таких как CD4+ T эффекторные (Teff) клетки). В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывает ICOS, является агонистом CD4+ T-клеток (таких как CD4+ Teff) и истощает T-регуляторные (Treg) клетки. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывает ICOS, истощает клетки Treg, но не истощает клетки Teff. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывает ICOS, индуцирует передачу сигнала pAKT на CD4+ T-клетки. В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывает ICOS, индуцирует передачу сигнала pAKT на CD4+ T-клетки и истощает клетки Treg. В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывает ICOS, содержит:

i) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 326; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 327; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 328; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 329; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 330; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 331; или

ii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 334; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 335; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 336; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 337; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 338; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 339; или

iii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 343; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 344; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 345; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 346; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 347; или

iv) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 350; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 351; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 352; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 353; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 354; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 355; или

v) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 358; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 359; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 360; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 361; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 362; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 363; или

vi) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 366; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 367; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 368; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 369; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 370; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 371; или

vii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 376; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 377; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379.

В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывается с ICOS, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (V_H) и вариабельную область легкой цепи (V_L), при этом:

i) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 324 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 325; или

ii) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 332 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 333; или

iii) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 340 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 341; или

iv) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 348 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 349; или

v) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 356 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 357; или

vi) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 364 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 365; или

vii) V_H идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 372 и V_L идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 373.

[00316] Обычно анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу.

[00317] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с агонистическим анти-OX40-антителом (таким как Medi6469, MedImmune; MOXR0916/RG7888, Roche). В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с анти-CTLA4-антителом (таким как ипилимумаб, YERVOY^®, BMS).

[00318] В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство. Типичные химиотерапевтические средства, которые могут быть скомбинированы с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, капецитабин, циклофосфамид, дакарбазин, темозоломид, циклофосфамид, доцетаксел, доксорубицин, даунорубицин, цисплатин, карбоплатин, эпирубицин, эрибулин, 5-ФУ, гемцитабин, иринотекан, иксабепилон, метотрексат, митоксантрон, оксалиплатин, паклитаксел, наб-паклитаксел, ABRAXANE^® (связанный с белками паклитаксел), пеметрексед, винорелбин и винкристин. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят по меньшей мере с одним ингибитором киназы. Неограничивающие типичные ингибиторы киназы включают эрлотиниб, афатиниб, гефитиниб, кризотиниб, дабрафениб, траметиниб, вемурафениб и кобиметаниб.

[00319] В некоторых вариантах осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой ингибитор IDO. Неограничивающие иллюстративные ингибиторы IDO описаны, например, в US 2016/0060237 и US 2015/0352206. Неограничивающие иллюстративные ингибиторы IDO включают индоксимод (New Link Genetics), INCB024360 (Incyte Corp), 1-метил-D-триптофан (New Link Genetics) и GDC-0919 (Genentech).

[00320] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят в комбинации с иммуномодулирующим лекарственным средством (IMiD). Неограничивающие иллюстративные IMiD включают талидомид, леналидомид и помалидомид.

[00321] В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой противораковую вакцину. Противораковые вакцины были исследованы как потенциальный подход для переноса антигена и активации дендритных клеток. В частности, вакцинация в сочетании с иммунологическими контрольными точками или агонистами для костимуляторных путей показала доказательства преодоления толерантности и генерирования повышенного противоопухолевого ответа. Был протестирован ряд противораковых вакцин, в которых используются различные подходы для стимулирования иммунного ответа против опухоли (см., например, Emens LA, Expert Opin Emerg Drugs 13(2): 295-308 (2008)). Были разработаны подходы для усиления ответа В-клеток, Т-клеток или профессиональных антигенпрезентирующих клеток против опухолей. Иллюстративные типы противораковых вакцин включают, но не ограничиваются ими, вакцины на основе пептидов, в которых применяют нацеливание на отдельные опухолевые антигены, которые могут доставляться в виде пептидов/белков или в виде генно-инженерных ДНК-векторов, вирусов, бактерий или тому подобного; и подходы клеточной биологии, например, для разработки противораковых вакцин против менее четко определенных мишеней, включая, но не ограничиваясь ими, вакцины, разработанные из дендритных клеток, полученных от пациентов, аутологичных опухолевых клеток или лизатов опухолевых клеток, аллогенных опухолевых клеток и тому подобное.

[00322] Таким образом, в определенных вариантах осуществления анти-PD-1-антитела, представленные в данном документе, можно использовать в комбинации с противораковой вакциной. Типичные противораковые вакцины включают, но не ограничиваются ими, вакцины из дендритных клеток, онколитические вирусы, вакцины из опухолевых клеток и т.д. В некоторых вариантах осуществления такие вакцины усиливают противоопухолевый ответ. Примеры противораковых вакцин, которые можно использовать в комбинации с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, вакцину MAGE3 (например, для лечения меланомы и рака мочевого пузыря), вакцину MUC1 (например, для лечения рака молочной железы), EGFRv3 (например, Rindopepimut, например, для лечения рака головного мозга, включая мультиформную глиобластому), или ALVAC-CEA (например, для лечения рака CEA+).

[00323] Неограничивающие типичные противораковые вакцины также включают Sipuleucel-T, который получают из аутологичных мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК), которые включают в себя антигенпрезентирующие клетки (см., например, Kantoff PW et al., N Engl J Med 363:411-22 (2010)). В поколении Sipuleucel-T МКПК пациента активируются ex vivo с помощью PA2024, рекомбинантного белка слияния фосфатазы простатической кислоты (антиген простаты) и колониестимулирующего фактора гранулоцитов-макрофагов (активатор иммунных клеток). Другой подход к потенциальной противораковой вакцины заключается в создании иммунного ответа против специфических пептидов, мутированных в опухолевой ткани, такой как меланома (см., например, Carreno BM et al., Science 348:6236 (2015)). Такие мутированные пептиды могут в некоторых вариантах осуществления называться неоантигенами. В качестве неограничивающего примера использования неоантигенов в противоопухолевых вакцинах, неоантигены в опухоли, для которых предсказано связывание с основным белком комплекса гистосовместимости HLA-A*02:01, идентифицированы для отдельных пациентов с раковым заболеванием, таким как меланома. Дендритные клетки пациента созревают ex vivo, затем инкубируются с неоантигенами. Затем активированные дендритные клетки вводят пациенту. В некоторых вариантах осуществления после введения противораковой вакцины обнаруживается устойчивый Т-клеточный иммунитет против неоантигена.

[00324] В некоторых таких вариантах осуществления противораковая вакцина разработана с использованием неоантигена. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина представляет собой ДНК-вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина представляет собой сконструированный вирус, содержащий раковый антиген, такой как PROSTVAC (рилимоген галвасирепвек/рилимоген глафоливек). В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина, такая как GVAX, включает в себя сконструированные опухолевые клетки, и представляет собой вакцину с опухолевыми клетками трансфицированными геном гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) (см., например, Nemunaitis, 2005, Expert Rev Vaccines, 4: 259-74).

[00325] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, описанное в данном документе, вводят до, одновременно и/или после противораковой вакцины. В некоторых вариантах осуществления противораковые вакцины, разработанные с использованием неоантигенов, используют в комбинации с анти-PD-1-антителами, описанными в данном документе. В некоторых таких вариантах осуществления комбинация используется для лечения рака с высокой мутационной нагрузкой, такого как меланома, рак легких, рак мочевого пузыря или колоректальный рак.

[00326] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят в сочетании с терапией химерным антигенным рецептором с Т-клетками (терапия CAR-T).

Диагностическое использование

[00327] В данном документе представлены способы использования анти-PD-1-антител, полипептидов и полинуклеотидов для выявления, диагностики и мониторинга заболевания, расстройства или состояния, связанного с экспрессией эпитопа анти-PD-1-антитела (либо увеличенной, либо уменьшенной относительно нормального образца и/или несоответствующей экспрессией, такой как наличие экспрессии в ткани(-ях) и/или клетке(-ах), в которых обычно отсутствует экспрессия эпитопа). В данном документе представлены способы определения того, будет ли пациент отвечать на терапию анти-PD-1-антителом.

[00328] В некоторых вариантах осуществления способ включает определение наличия у пациента клеток, которые экспрессируют PD-1, с использованием анти-PD-1-антител. В некоторых вариантах осуществления способ обнаружения включает приведение в контакт образца с антителом, полипептидом или полинуклеотидом и определение того, отличается ли уровень связывания от уровня эталонного или сравнительного образца (такого как контроль). В некоторых вариантах осуществления способ может быть полезен для определения, являются ли антитела или полипептиды, описанные в данном документе, подходящим лечением для субъекта.

[00329] В некоторых вариантах осуществления клетки или лизат клетки/ткани приводят в контакт с анти-PD-1-антителом, и определяют связывание между антителом и клеткой. Когда тестируемые клетки проявляют активность связывания по сравнению с контрольной клеткой того же типа ткани, это может указывать на то, что субъект получит пользу от лечения анти-PD-1-антителом. В некоторых вариантах осуществления тестируемые клетки взяты из тканей человека. В некоторых вариантах осуществления тестируемые клетки взяты из крови человека.

[00330] Могут быть использованы различные способы, известные в данной области техники, для выявления специфического связывания антитело-антиген. Типичные иммуноанализы, которые могут быть проведены, включают флуоресцентный поляризационный иммуноанализ (FPIA), флуоресцентный иммуноанализ (FIA), иммуноферментный анализ (EIA), нефелометрический иммуноферментный анализ ингибирования(NIA), иммуноферментный твердофазный анализ (ELISA) и радиоиммуноанализ (RIA). Индикаторный фрагмент или группа-метка может быть присоединена к рассматриваемым антителам и выбирается так, чтобы удовлетворить потребности различных применений способа, которые часто продиктованы наличием оборудования для анализа и совместимых процедур иммуноанализа. Подходящие метки включают, без ограничения, радионуклиды (например, ¹²⁵I, ¹³¹I, ³⁵S, ³H или ³²P), ферменты (например, щелочную фосфатазу, пероксидазу хрена, люциферазу или β-галактозидазу), флуоресцентные фрагменты или белки (например флуоресцеин, родамин, фикоэритрин, GFP или BFP) или люминесцентные фрагменты (например, наночастицы Qdot™, поставляемые Quantum Dot Corporation, г. Пало-Альто, Калифорния, США). Общие методики, которые должны использоваться при выполнении различных иммуноанализов, отмеченных выше, известны средним специалистам в данной области техники.

[00331] В целях диагностики включающий антитела полипептид может быть мечен детектируемым фрагментом, включая, но не ограничиваясь ими, радиоизотопы, флуоресцентные метки и различные фермент-субстратные метки, известные в данной области техники. Способы конъюгирования меток с антителами известны в данной области техники.

[00332] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела не нужно метить, и их присутствие можно обнаружить с использованием второго меченого антитела, которое связывается с первым анти-PD-1-антителом.

[00333] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело можно использовать в любом известном способе анализа, таком как анализах конкурентного связывания, прямом и непрямом сэндвич-анализах и анализах иммунопреципитации. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987).

[00334] Антитела и полипептиды против PD-1 также можно использовать для диагностических анализов in vivo, таких как визуализация in vivo. Как правило, антитело или полипептид метят радионуклидом (таким как ¹¹¹In, ⁹⁹Tc, ¹⁴C, ¹³¹I, ¹²⁵I, ³H или любой другой радионуклидной меткой, включая те, что указаны в данном документе), так что интересующие клетки или ткани могут быть локализованы с использованием иммуносцинтиграфии.

[00335] Антитело также можно использовать в качестве окрашивающего реагента в лаборатории патологии с использованием методик, хорошо известных в данной области техники.

[00336] В некоторых вариантах осуществления первое антитело используется для диагностики, а второе антитело используется в качестве терапевтического. В некоторых вариантах осуществления первое и второе антитела являются разными. В некоторых вариантах осуществления первое антитело является нечеловеческим антителом, а терапевтическое антитело является антителом человека. В некоторых вариантах осуществления первое и второе антитела могут одновременно связываться с антигеном посредством связывания с отдельными эпитопами.

Наборы/Готовые изделия

[00337] В данном документе также представлены наборы, лекарственные средства, композиции и стандартные лекарственные формы для использования в любом из способов, описанных в данном документе.

[00338] Наборы могут включать один или более контейнеров, содержащих анти-PD-1-антитело (или стандартные лекарственные формы и/или изделия). В некоторых вариантах осуществления предложена стандартная дозировка, причем стандартная дозировка содержит заранее определенное количество композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, с одним или более дополнительными агентами или без них. В некоторых вариантах осуществления такая стандартная дозировка поставляется в одноразовом предварительно заполненном шприце для инъекции. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащаяся в стандартной дозировке, может включать физиологический раствор, сахарозу или тому подобное; буфер, такой как фосфат или тому подобное; и/или быть составлена в стабильном и эффективном диапазоне рН. В некоторых вариантах осуществления композиция может быть представлена в виде лиофилизированного порошка, который может быть восстановлен после добавления подходящей жидкости, например стерильной воды. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит одно или более веществ, которые ингибируют агрегацию белка, включая, но не ограничиваясь ими, сахарозу и аргинин. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит гепарин и/или протеогликан.

[00339] В некоторых вариантах осуществления количество анти-PD-1-антитела, используемого в стандартной дозе, может быть любым из количеств, предложенных в данном документе для различных описанных способов и/или композиций.

[00340] В некоторых вариантах осуществления наборы дополнительно содержат инструкции по применению для лечения рака в соответствии с любым из способов, описанных в данном документе. Набор может дополнительно содержать описание выбора подходящего индивидуума или лечения. Инструкции, поставляемые в наборах, обычно представляют собой письменные инструкции на этикетке или вкладыше в упаковку (например, лист бумаги, входящий в комплект), но машиночитаемые инструкции (например, инструкции, хранящиеся на магнитном или оптическом диске) также приемлемы. В некоторых вариантах осуществления набор дополнительно содержит другое терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой анти-ICOS-антитело, например, как описано в данном документе, или анти-CTLA4-антитело.

[00341] Наборы находятся в подходящей упаковке. Подходящая упаковка включает, но не ограничивается ими, флаконы, бутылки, банки, гибкую упаковку (например, герметичные майларовые или пластиковые пакеты) и тому подобное. Наборы могут дополнительно содержать дополнительные компоненты, такие как буферы и интерпретирующая информация. Таким образом, настоящая заявка также предлагает изделия, которые включают флаконы (такие как герметичные флаконы), бутылки, банки, гибкую упаковку и тому подобное.

ПРИМЕРЫ

[00342] Приведенные ниже примеры предназначены исключительно для иллюстрации изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом. Примеры не предназначены для представления того, что приведенные ниже эксперименты являются всеми или единственными проведенными экспериментами. Были предприняты усилия для обеспечения точности в отношении используемых чисел (например, количеств, температуры и т.д.), но следует учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, части представляют собой части по массе, молекулярная масса представляет собой средневесовую молекулярную массу, температура выражена в градусах Цельсия, а давление равно атмосферному давлению или близко к нему.

Пример 1. Получение анти-PD-1-антител

[00343] Восемь наивных синтетических дрожжевых библиотек человека, каждая из которых имеет ~10⁹ разнообразия, были сконструированы, созданы и размножены, как описано ранее (see, e.g., WO2009036379; WO2010105256; WO2012009568; Xu et al., Protein Eng Des Sel. 2013 Oct;26(10):663-70) В течение первых 2 этапов отбора была проведена методика сортировки магнитными гранулами с использованием системы Miltenyi MAC, по существу как описано (Siegel et al., J Immunol Methods. 2004 Mar;286(1-2):141-53) Вкратце, дрожжевые клетки (~10¹⁰ клеток/библиотеку) инкубировали с 3 мл 10 нМ биотинилированного антигена слияния человеческого PD-1-Fc в течение 15 минут при комнатной температуре в промывочном буфере PBS для FACS с 0,1% BSA (биотинилирование проводили с использованием набора EZ-Link сульфо-NHS-биотинилирования, Thermo Scientific, кат. №21425). После однократной промывки 50 мл ледяного промывочного буфера осадок клеток ресуспендировали в 40 мл промывочного буфера и 500 мкл стрептавидиновых микроносителей (Miltenyi Biotec, г. Бергиш-Гладбах, Германия, кат. № 130-048-101) добавляли к дрожжам и выдерживали в течение 15 мин при 4°С. Затем дрожжи осаждали, ресуспендировали в 5 мл промывочного буфера и загружали на колонку MACS LS (Miltenyi Biotec, г. Бергиш-Гладбах, Германия, кат. № 130-042-401). После загрузки 5 мл на колонку, ее промывали 3 раза 3 мл промывочного буфера FACS. Колонку затем удаляли из магнитного поля и дрожжи элюировали 5 мл питательной среды и затем выращивали в течение ночи. Следующие три раунда сортировки были выполнены с использованием проточной цитометрии. Приблизительно 1×10⁸ дрожжей осаждали, трижды промывали промывочным буфером и инкубировали с 200, 100 или 10 нМ биотинилированного PD-1 человека или 10 нМ или 1 нМ биотинилированного антигена слияния человека PD-1-Fc от 10 минут до 2 часов при комнатной температуре. Время инкубации зависит от концентрации антигена. Затем дрожжи дважды промывали и окрашивали козьим анти-человеческим F(ab')₂ каппа-FITC, разведенным 1:100 (Southern Biotech, г. Бирмингем, штат Алабама, США, кат. № 2062-02) и либо стрептавидином-Alexa Fluor 633 (Life Technologies, Гранд Айленд, г. Нью-Йорк, США, кат. № S21375), разведенным 1:500, или экстравидином-фикоэртирином (Sigma-Aldrich, г. Сент-Луис, кат. № E4011), разведенным 1:50, вторичными реагентами в течение 15 мин при 4°C. После промывки дважды ледяным промывочным буфером клеточные осадки ресуспендировали в 0,4 мл промывочного буфера и переносили в сортировочные пробирки с крышками-фильтрами. Сортировку проводили с использованием сортировщика FACS ARIA (BD Biosciences) и определяли сортировочные гейты для отбора только клонов, связывающих PD-1, для двух раундов. В зависимости от популяций третий раунд был отрицательной сортировкой, чтобы уменьшить количество связующих реагентов или дальнейшее положительное обогащение. После последнего раунда сортировки дрожжи высевали и отбирали отдельные колонии для определения характеристик.

[00344] Популяция связывания раунда 5 или раунда 6 использовалась для диверсификации легкой цепи. Плазмиду тяжелой цепи экстрагировали и трансформировали в библиотеку легкой цепи с разнообразием 1×10⁶. Отборы осуществляли, как описано выше, с одним раундом сортировки MACS и тремя раундами сортировки FACS с использованием различных концентраций биотинилированного антигена.

Созревание аффиности

[00345] Оптимизацию связывания наивных пробных перестановочных клонов легкой цепи проводили с использованием диверсификации CDRH1 и CDRH2.

[00346] Отбор CDRH1 и CDRH2: CDRH3 из клонов, отобранных в результате процедуры диверсификации легких цепей (пробные перестановочные клоны легкой цепи), были рекомбинированы в предварительно созданную библиотеку с вариантами CDRH1 и CDRH2 с разнообразием 1×10⁸, и отбор проводился с использованием антигена PD-1, как описано выше. Давление аффинности применяли путем титрования биотинилированного антигена до субнаномолярных концентраций и инкубации с дрожжами, презентующими антитела.

Продуцирование и очистка антител

[00347] Клоны дрожжей выращивали до насыщения и затем индуцировали в течение 48 ч при 30°С при встряхивании. После индукции дрожжевые клетки осаждали и супернатанты собирали для очистки. IgG очищали с использованием колонки с белком А и элюировали уксусной кислотой, рН 2,0. Fab-фрагменты были получены путем расщепления папаином и очищены на KappaSelect (GE Healthcare LifeSciences, кат. № 17-5458-01).

Измерения аффинности анти-PD-1-антител

[00348] Аффинность антител к PD-1 определяли путем измерения их K_D с помощью ForteBio или MSD-SET. Измерения аффинности ForteBio выполняли, в целом, как описано ранее (Estep et al., MAbs. 2013 Mar-Apr; 5(2):270-8). Вкратце, измерения аффинности ForteBio выполняли, нагружая IgG онлайн на сенсоры AHQ. Сенсоры уравновешивали офлайн в буфере для анализа в течение 30 минут и затем контролировали в режиме онлайн в течение 60 секунд для установления исходного уровня. Сенсоры с нагруженными IgG подвергали воздействию 100 нМ антигена в течение 5 минут, после чего их переносили в буфер для анализа на 5 минут для измерения скорости диссоциации. Кинетику анализировали с использованием модели связывания 1:1.

[00349] Измерения равновесной аффинности выполняли, как описано ранее (Estep et al., 2013). Равновесное титрование в растворе (SET) проводили в PBS + 0,1% BSA, не содержащем IgG (PBSF), с постоянно поддерживаемой концентрацией антигена на уровне 50 пМ и инкубировали с 3-5-кратными серийными разведениями антител, начиная с 10 нМ. Антитела (20 нМ в PBS) наносили на стандартные планшеты для связывания MSD-ECL в течение ночи при 4°C или при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем планшеты блокировали в течение 30 минут при встряхивании при 700 об/мин, после чего трижды промывали промывочным буфером (PBSF + 0,05% Tween 20). Образцы SET наносили и инкубировали на планшетах в течение 150 секунд при встряхивании при 700 об/мин с последующей одной промывкой. Антиген, захваченный на планшете, детектировали с меченным сульфотагом стрептавидином в концентрации 250 нг/мл в PBSF путем инкубации на планшете в течение 3 минут. Планшеты трижды промывали промывочным буфером и затем считывали на приборе MSD Sector Imager 2400, используя 1x считывающий буфер T с поверхностно-активным веществом. Процент свободного антигена наносили на график как функцию титрованного антитела в Prism и подбирали квадратное уравнение для определения K_D. Для повышения производительности в ходе экспериментов MSD-SET, включая подготовку образцов SET, использовались роботы для работы с жидкостями. В таблице 1 приведены результаты измерений аффинности с помощью ForteBio.

Таблица 1

Антитело PD-1 человека моновалентная аффиность (K_D) PD-1 мыши моновалентная аффиность (K_D) mAb 1 (12228) 49 нМ 6,3 нМ mAb 2 (13405) 73 нМ 7,2 нМ mAb 3 (13406) 3,2 нМ 3,5 нМ mAb 4 (13407) 3,9 нМ 3,2 нМ mAb 5 (13408) 1,2 нМ 5,3 нМ

Пример 2. Ответ активированных спленоцитов мыши на анти-PD-1-антитела

[00350] Когда Т-клетки мыши, полученные из спленоцитов, активируются анти-CD3-антителами и анти-CD28-антителами, они экспрессируют молекулу клеточной поверхности и секретируют растворимую молекулу интерферона-гамма (IFNγ). Блокирующие антитела к PD-1 вызывают увеличение выработки IFNγ. Спленоциты мыши были получены и инкубированы с растворимыми анти-CD3 и анти-CD28 антителами. Через 5 дней их смешивали с равным количеством Т-клеток, очищенных из свежеприготовленных спленоцитов и анти-PD-1-антител в различных концентрациях. Положительные и отрицательные контрольные антитела RMP1-14, 2A3 и C1.18.4 были приобретены у BioXCell. Через 24 часа супернатанты собирали и концентрации IFNγ измеряли мультиплексным анализом с гранулами для определения цитокинов. Анти-PD-1-антитела, раскрытые в данном документе, были способны увеличивать выработку IFNγ аналогично эталонным антителам. См. Фиг 1. По меньшей мере антитела 12191, 13396, 13398, 13399, 12195, 13406, 13407, 13408 и 13409 значительно повышали экспрессию IFNγ. Антитела 13396, 13399, 12195, 13406, 13407 и 13408 вызывали наибольшее увеличение экспрессии IFNγ.

Пример 3. Активированные периферические мононуклеарные клетки крови человека отвечают на анти-PD-1-антитела

[00351] Было показано, что образцы цельной крови, активированные стафилококковым энтеротоксином B (SEB), реагируют на блокаду иммунной контрольной точки с использованием анти-PD-1-антитела, что измерено по увеличению секреции IL-2 (см., например, EP2170959B1). Анти-PD-1-антитела готовили в диапазоне концентраций и добавляли в лунки 96-луночных планшетов. Цельную кровь от четырех доноров разводили 1:10 в полной среде RPMI и добавляли в те же лунки. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут перед добавлением 50 мкл SEB на лунку в концентрации 40 мкг/мл до конечной концентрации 10 мкг/мл. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 4 дней и супернатанты собирали для измерения секретируемого IL-2 мультиплексным анализом с гранулами для определения цитокинов (CBA). Анти-PD-1-антитела, раскрытые в данном документе, были способны увеличивать выработку IL-2 из данных культур до того же уровня, что и контрольные анти-PD-1-антитела. На Фиг. 2 показано значение EC₅₀ данного увеличения для каждого протестированного антитела в четырех образцах, взятых у здоровых доноров.

Пример 4. Блокирование антителами связывания мышиного PD-L1 и мышиного PD-L2 с мышиным PD-1

[00352] PD-L1 и PD-L2 являются двумя природными лигандами для PD-1, и взаимодействие любого лиганда с PD-1 может подавлять активирующий ответ в Т-клетках. Было показано, что одобренные терапевтические антитела, такие как ниволумаб и пембролизумаб, блокируют это взаимодействие и подавляют ответы Т-клеток человека, хотя ни одно это антитело не связывается с PD-1 мыши, ни блокирует взаимодействие PD-1 мыши с PD-L1 мыши или PD-L2 мыши. Анализ Octet на приборе Forte-Bio был использован для оценки влияния анти-PD-1-антител, раскрытых в данном документе, на взаимодействие между PD-L1 мыши и PD-1 мыши и между PD-L2 мыши и PD-1 мыши. Антитела разбавляли до 10 мкг/мл, включая антитело изотипического контроля для использования в вычитании фона. Слияние PD-1-Fc мыши разбавляли до желаемых концентраций (например, 100 нМ). Растворимое изотипическое антитело мыши для использования в качестве блокирующего реагента разбавляли до 250 мкг/мл. PD-1 мыши был нанесен на сенсоры, затем был нанесен Fc человека. Добавляли анти-PD-1-антитела и, наконец, измеряли связывание либо PD-L1 мыши, либо PD-L2 мыши. На фиг. 3 показано, что протестированные анти-PD-1-антитела были способны блокировать связывание обоих лигандов мыши с PD-1 мыши. Напротив, ни пембролизумаб, ни ниволумаб не связывались с PD-1 мыши и не блокировали связывание лиганда мыши с PD-1 мыши.

Пример 5. Блокирование антителами связывания PD-L1 человека и PD-L2 человека с PD-1 человека

[00353] PD-L1 и PD-L2 являются двумя природными лигандами для PD-1, и взаимодействие любого лиганда с PD-1 может подавлять активирующий ответ в Т-клетках. Было показано, что одобренные терапевтические антитела, такие как ниволумаб и пембролизумаб, блокируют это взаимодействие и подавляют ответы Т-клеток человека. Анализ Octet на приборе Forte-Bio был использован для оценки влияния анти-PD-1-антител, раскрытых в данном документе, на взаимодействие между PD-L1 человека и PD-1 человека и между PD-L2 человека и PD-1 человека. Антитела разбавляли до 10 мкг/мл, включая антитело изотипического контроля для использования в вычитании фона. Слияние PD-1-Fc человека разбавляли до желаемых концентраций (например, 100 нМ). Растворимый Fc человека, предназначенный для использования в качестве блокирующего реагента, разбавляли до 250 мкг/мл. PD-1 человека был нанесен на сенсоры, и затем был нанесен Fc человека. Добавляли анти-PD-1-антитела и, наконец, измеряли связывание PD-L1 человека или PD-L2 человека. На фиг. 4 показано, что протестированные анти-PD-1-антитела были способны блокировать связывание обоих лигандов человека с PD-1 человека, подобно пембролизумабу и ниволумабу.

Пример 6. Прививание опухолей in vivo

[00354] Способность анти-PD-1-антител снижать рост опухоли на мышиной модели исследовали путем подкожной инъекции клеток MC38 в бока мышей C57BL6/J. Мышей рандомизировали в группы со средним размером опухоли приблизительно 100 мм³ на день 11 и внутрибрюшинно инъецировали 200 мкг анти-PD-1-антитела 13407. Повторные дозы вводили в дни 14, 18 и 21. Контрольные антитела, IgG1 мыши (MOPC-21), IgG2a крысы (2A3) и положительный контрольный антитело крысы против PD-1 (RMP1-14) были приобретены у BioXcell. Размеры опухолей измеряли два раза в неделю, и эксперимент прекращали через 24 дня. Масса опухолей в конце эксперимента показана на фиг. 5 и указывает, что анти-PD-1-антитело 13407 снижало рост опухоли у мышей в той же степени, что и эталонное анти-PD-1-антитело.

Пример 7. Картирование эпитопов антител

[00355] Гены, кодирующие различные варианты PD-1, фрагменты PD-L1, PD-L2 и Fab антител, были синтезированы и оптимизированы по кодонам Atum inc. Сигнальная последовательность легкой цепи каппа человека (MGTPAQLLFLLLLWLPDTTG; SEQ ID NO: 400) была присоединена на 5'-конец всех генов. Гены были клонированы в экспрессионный вектор млекопитающих, а последовательность проверена до экспрессии белка.

[00356] Рекомбинантные белки экспрессировали в экспрессионной системе Expi293™ (Thermo Fisher Scientific) с использованием набора производителя для сред, трансфекционного реагента, питающих слоев и клеток. Клетки трансфицировали в соотношении 1 мкг/мл плазмидной ДНК к среде с использованием Expifectamine™ в соответствии с протоколом производителя. Клетки культивировали во встряхиваемых колбах в инкубаторе, который поддерживали при температуре 37°С и 5% СО₂. Через 5 дней культуры собирали центрифугированием при 3000 об/мин в течение 15 минут с последующей фильтрацией с использованием фильтра 0,2 мкм.

[00357] Собранные супернатанты подвергали аффинной очистке. Белки содержали либо гексагистидиновый маркер, либо Fc маркер, который обеспечивал либо аффинную очистку Ni, либо аффинную очистку белком А.

[00358] Аффинную очистку с Ni осуществляли на колонках HisTrap™ Excel IMAC (GE Healthcare Life Sciences) с использованием 43 мМ фосфата натрия, 0,5 М хлорида натрия, рН 7,4 в качестве связующего буфера. Связанный белок промывали связывающим буфером с последующим промыванием связывающим буфером, содержащим 20 мМ имидазол. Стадии элюирования осуществляли с помощью связывающего буфера, содержащего 90 мМ, 150 мМ и 250 мМ имидазол. Аффинную очистку с белком A проводили на колонках HiTrap MabSelect Sure (GE Healthcare Life Sciences) с использованием PBS, pH 7,4 в качестве связующего буфера. Стадии элюирования проводили для элюирования связанного белка с использованием 0,1 М цитратного буфера при рН 4,0, рН 3,5 и рН 2,0. Все кислотные элюируемые фракции нейтрализовали 1М Tris, рН 9,0, используя 20% об./об. Все элюированные фракции анализировали с помощью SEC-ВЭЖХ для определения фракций выше целевой чистоты (> 90% мономеров). Для результатов очистки, которые не давали фракций выше целевой чистоты, проводили препаративную эксклюзионную хроматографию с использованием хроматографической колонки Superdex200 для достижения целевой чистоты. Перед замораживанием очищенные белки обменивали в конечный буфер (либо 20 мМ гистидин, 150 мМ NaCl, pH 6,0, либо 20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, pH 7,5), сохраняя их при pH по меньшей мере на 1 единицу отклоняясь от предсказанного pI целевого белка.

[00359] Все белковые взаимодействия оценивали на приборе ForteBio OctetRED96. Белки разводили в буферном составе (PBS + 0,1% BSA, 0,02% Tween 20, 0,05% азида натрия) для кинетических исследований с объемом образца 220 мкл/лунку. Концентрации лигандов были нормализованы до 10 мкг/мл, а концентрации аналитов - до 100 нМ. Блокирующий реагент использовали в концентрации 250 мкг/мл. Время уравновешивания сенсора было установлено на 60 секунд, а время загрузки образца было установлено на 300 секунд. Время блокировки Fc человека было установлено на 300 с. Анализ времени ассоциации был установлен на 300 с, а времени диссоциации - на 600 с.

[00360] в данном методе представляющие интерес антитела ориентируют и захватывают на биосенсорах, дериватизированных античеловеческими (антимышиными) антителами к Fc. Затем анализируют связывание представляющих интерес белков-мишеней в растворе с нагруженными антителами сенсорами.

[00361] Для взаимодействий, в которых белки содержат домены Fc сходных видов, включена дополнительная стадия блокирования, чтобы минимизировать прямое связывание белка-мишени с биосенсором, не зависимым от захваченного антитела.

[00362] События связывания были подтверждены с помощью Y (да), если аффинность к варианту PD-1 или PD-1 другого вида была в пределах приблизительно 5-кратного увеличения по сравнению с аффинностью к PD-1 человека дикого типа. Аффинность, которая была уменьшена >10 раз и <100 раз, обозначена как «Уменьшенная». Аффинность, уменьшенная >100 раз, обозначена как N (нет). Взаимодействия, которые не были оценены, указаны как НО (не определены).

[00363] Варианты PD-1 человека получали в виде слияний внеклеточного домена (ECD)-Fc с C-концевыми метками His₆ и использовали для анализа связывания лигандов PD-1, а также Fab-фрагментов ниволумаба, пембролизумаба и 13407. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2. Обобщенные данные связывания PD-1

Виды PD-1 Вариант PD-1 (слияния ECD-Fc) Слияние PD-L1 Fc Слияние PD-L2 Fc Fab ниво Fab пембро 13407 Fab Человек Дикий тип Да Да Да Да Да D85G НО НО Да Нет Да R86L НО НО Да Да Да D85G/R86L НО НО Да Нет Да N33-Q167 Да Да Нет Да Да K78A Нет Нет Да Да Да I126A Нет Да Да Да Уменьшенная L128A Уменьшенная Да Да Да Уменьшенная A132L Да Да Да Да Нет I134A Нет Да Да Да Нет E136A Нет Да Да Да Уменьшенная Мышь Дикий тип Да Да Нет Нет Да H129P НО НО Нет Нет Нет Крыса Дикий тип НО НО Нет Нет Нет P129H НО НО Нет Нет Да Собака Дикий тип НО НО Нет Нет Нет Яванский макак Дикий тип Да Да Да Да Да

[00364] Аминокислотные замены, о которых сообщалось, что они влияют на связывание пембролизумаба, были оценены на связывание с панелью молекул (Na et al., 2017, Cell Res., 27: 147-150). Связывание пембролизумаба с PD-1 устраняется заменой D85G, тогда как связывание ниволумаба и 13407 не затрагивается. Связывание ниволумаба с PD-1 также уменьшается при оценке по сравнению с усеченным по N-концу вариантом N33-Q167. Данные результаты показывают, что 13407 вступает в контакт с аминокислотами, которые значительно отличаются от тех, с которыми связываются пембролизумаб и ниволумаб.

[00365] Были получены дополнительные варианты, которые были предварительно оценены для лигандов PD-L1 и PD-L2 ( et al., 2008, PNAS, 105: 10483-10488). Данные аминокислотные замены в основном не влияли на связывание ниволумаба и пембролизумаба, в то время как аффинность связывания 13407 была значительно снижена заменами I126A, L128A и E136A и устранена заменами A132L и I134A. Данные показывают профиль связывания для 13407, аналогичный профилю PD-L1.

[00366] Панель Fab-фрагментов также оценивали на связывание с дополнительными видами PD-1. Пембролизумаб и ниволумаб не связываются с PD-1 мыши, крысы или собаки. Напротив, 13407 связывается с мышиным PD-1. Удивительно, но 13407 не связывается с PD-1 крысы, несмотря на высокую гомологию между PD-1 крысы и мыши. Был создан вариант PD-1 мыши, в котором остаток 129 заменен соответствующим остатком из последовательности крысы (H129P), и было обнаружено, что это устраняет связывание 13407. Когда в последовательность крысы была введена реципрокная мутация, P129H, то 13407 связался с вариантом. Примечательно, что в последовательности PD-1 собаки, с которой 13407 не связывается, в этой позиции отсутствует пролин.

[00367] Таким образом, 13407 связывает эпитоп PD-1, отличный от эпитопов, связываемых с ниволумабом и пембролизумабом.

[00368] Данное раскрытие может быть воплощено в других конкретных формах без отклонения от его сущности или существенных характеристик. Таким образом, вышеприведенные варианты осуществления следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не как ограничивающие раскрытие. Объем раскрытия, таким образом, обозначен прилагаемой формулой изобретения, а не вышеприведенным описанием, и поэтому все изменения, которые входят в содержание и диапазон эквивалентности формулы изобретения, следовательно, предназначены для охвата данным документом.

Таблица последовательностей

SEQ ID NO Описание Последовательность 1 PD-1 человека, аминокислотная последовательность; UniProtKB/Swiss-Prot: Q15116;01-AUG-2016 MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL 382 Зрелый PD-1 человека, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности) PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL 401 PD-1 человека, внеклеточный домен (ECD)-Fc-His₆ ldspdrpwnp ptfspallvv tegdnatftc sfsntsesfv lnwyrmspsn qtdklaafpe drsqpgqdcr frvtqlpngr dfhmsvvrar rndsgtylcg aislapkaqi keslraelrv terraevpta hpspsprpag qfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH 385 PD-1 человека D85G ECD-Fc-His₆ dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafpeG rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH 386 PD-1 человека R86L ECD-Fc-His₆ dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped Lsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH 402 PD-1 человека D85G/R86L ECD-Fc-His₆ dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafpeG Lsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH 387 PD-1 человека N33-Q167 ECD-Fc-His₆ npptfspall vvtegdnatf tcsfsntses fvlnwyrmsp snqtdklaaf pedrsqpgqd crfrvtqlpn grdfhmsvvr arrndsgtyl cgaislapka qikeslrael rvterraevp tahpspsprp agqfqggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH 388 PD-1 человека K78A ECD-Fc-His₆ dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdAlaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH 389 PD-1 человека I126A ECD-Fc-His₆ dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga Aslapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH 390 PD-1 человека L128A ECD-Fc-His₆ dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga isAapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH 391 PD-1 человека A132L ECD-Fc-His₆ dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkLqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH 392 PD-1 человека I134A ECD-Fc-His₆ dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqAk eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH 393 PD-1 человека EI136A ECD-Fc-His₆ dttgdspdrp wnpptfspal lvvtegdnat ftcsfsntse sfvlnwyrms psnqtdklaa fpedrsqpgq dcrfrvtqlp ngrdfhmsvv rarrndsgty lcgaislapk aqikAslrae lrvterraev ptahpspspr pagqfqtlvg gsggDKTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG KGSGHHHHHH 2 PD-1 мыши; UniProtKB/Swiss-Prot: Q02242;01-AUG-2016 MWVRQVPWSF TWAVLQLSWQ SGWLLEVPNG PWRSLTFYPA WLTVSEGANA TFTCSLSNWS EDLMLNWNRL SPSNQTEKQA AFCNGLSQPV QDARFQIIQL PNRHDFHMNI LDTRRNDSGI YLCGAISLHP KAKIEESPGA ELVVTERILE TSTRYPSPSP KPEGRFQGMV IGIMSALVGI PVLLLLAWAL AVFCSTSMSE
ARGAGSKDDT LKEEPSAAPV PSVAYEELDF QGREKTPELP TACVHTEYAT IVFTEGLGAS AMGRRGSADG LQGPRPPRHE DGHCSWPL 383 Зрелый PD-1 мыши, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности) SGWLLEVPNG PWRSLTFYPA WLTVSEGANA TFTCSLSNWS EDLMLNWNRL SPSNQTEKQA AFCNGLSQPV QDARFQIIQL PNRHDFHMNI LDTRRNDSGI YLCGAISLHP KAKIEESPGA ELVVTERILE TSTRYPSPSP KPEGRFQGMV IGIMSALVGI PVLLLLAWAL AVFCSTSMSE ARGAGSKDDT LKEEPSAAPV PSVAYEELDF QGREKTPELP TACVHTEYAT IVFTEGLGAS AMGRRGSADG LQGPRPPRHE DGHCSWPL 403 PD-1 мыши ECD-Fc-His₆ levpngpwrs ltfypawltv seganatftc slsnwsedlm lnwnrlspsn qtekqaafcn glsqpvqdar fqiiqlpnrh dfhmnildtr rndsgiylcg aislhpkaki eespgaelvv teriletstr ypspspkpeg rfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH 394 PD-1 мыши H129P ECD-Fc-His₆ levpngpwrs ltfypawltv seganatftc slsnwsedlm lnwnrlspsn qtekqaafcn glsqpvqdar fqiiqlpnrh dfhmnildtr rndsgiylcg aislPpkaki eespgaelvv teriletstr ypspspkpeg rfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH 3 PD-1 яванского макака; UniProtKB/Swiss-Prot: B0LAJ3;01-AUG-2016 MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA
TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL
PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE
VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI
GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL 384 Зрелый PD-1 яванского макака (без сигнальной последовательности) PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
404 PD-1 яванского макака ECD-Fc-His₆ LESPDR PWNAPTFSPA LLLVTEGDNA TFTCSFSNAS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTRL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQGGS GGDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGKG SGHHHHHH 395 PD-1 крысы; NCBI Ref. NP_001100397.1; 02-OCT-2017 MWVQQVPWSF TWAVLQLSWQ SGWLLEVLNK PWRPLTFSPT WLTVSEGANA TFTCSFSNWS EDLKLNWYRL SPSNQTEKQA AFCNGYSQPV RDARFQIVQL PNGHDFHMNI LDARRNDSGI YLCGAISLPP KAQIKESPGA ELVVTERILE TPTRYPRPSP KPEGQFQGLV IVIMSVLVGI PVLLLLAWAL AAFCSTGMSE AREAGRKEDP PKEAHAAAPV PSVAYEELDF QGREKTPEPA PCVHTEYATI VFTEGLDASA IGRRGSADGP QGPRPPRHED GHCSWPL 396 Зрелый PD-1 крысы, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности) LEVLNKPWRP LTFSPTWLTV SEGANATFTC SFSNWSEDLK LNWYRLSPSN QTEKQAAFCN GYSQPVRDAR FQIVQLPNGH DFHMNILDAR RNDSGIYLCG AISLPPKAQI KESPGAELVV TERILETPTR YPRPSPKPEG QFQGLVIVIM SVLVGIPVLL LLAWALAAFC STGMSEAREA GRKEDPPKEA HAAAPVPSVA YEELDFQGRE KTPEPAPCVH TEYATIVFTE GLDASAIGRR GSADGPQGPR PPRHEDGHCS WPL 405 PD-1 крысы ECD-Fc-His₆ levlnkpwrp ltfsptwltv seganatftc sfsnwsedlk lnwyrlspsn qtekqaafcn gysqpvrdar fqivqlpngh dfhmnildar rndsgiylcg aislppkaqi kespgaelvv teriletptr yprpspkpeg qfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH 397 PD-1 крысы P129H ECD-Fc-His₆ levlnkpwrp ltfsptwltv seganatftc sfsnwsedlk lnwyrlspsn qtekqaafcn gysqpvrdar fqivqlpngh dfhmnildar rndsgiylcg aislHpkaqi kespgaelvv teriletptr yprpspkpeg qfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH 398 PD-1 собаки, аминокислотная последовательность; NCBI Ref. NP_001301026.1 MGSRRGPWPL VWAVLQLGWW PGWLLDSPDR PWSPLTFSPA QLTVQEGENA TFTCSLADIP DSFVLNWYRL SPRNQTDKLA AFQEDRIEPG RDRRFRVTRL PNGRDFHMSI VAARLNDSGI YLCGAIYLPP NTQINESPRA ELSVTERTLE PPTQSPSPPP RLSGQLQGLV IGVTSVLVGV LLLLLLTWVL AAVFPRATRG ACVCGSEDEP LKEGPDAAPV FTLDYGELDF QWREKTPEPP APCAPEQTEY ATIVFPGRPA SPGRRASASS LQGAQPPSPE DGPGLWPP 399 Зрелый PD-1 собаки, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности) LDSPDRPWSP LTFSPAQLTV QEGENATFTC SLADIPDSFV LNWYRLSPRN QTDKLAAFQE DRIEPGRDRR FRVTRLPNGR DFHMSIVAAR LNDSGIYLCG AIYLPPNTQI NESPRAELSV TERTLEPPTQ SPSPPPRLSG QLQGLVIGVT SVLVGVLLLL LLTWVLAAVF PRATRGACVC GSEDEPLKEG PDAAPVFTLD YGELDFQWRE KTPEPPAPCA PEQTEYATIV FPGRPASPGR RASASSLQGA QPPSPEDGPG LWPP 406 PD-1 собаки ECD-Fc-His₆ LDSPDR PWSPLTFSPA QLTVQEGENATFTCSLADIP DSFVLNWYRL SPRNQTDKLA AFQEDRIEPG RDRRFRVTRL PNGRDFHMSI VAARLNDSGI YLCGAIYLPP NTQINESPRA ELSVTERTLE PPTQSPSPPP RLSGQLQGGS GGDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGKG SGHHHHHH 4 12228
Последовательность VH QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYYMHWVRQA PGQGLEWMGI INPSGGSTSY AQKFQGRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARGG TYYDYTYWGQ GTLVTVSS 5 12228
HCDR1 YTFTSYYMH 6 12228
HCDR2 IINPSGGSTSYAQKFQG 7 12228
HCDR3 ARGGTYYDYTY 8 12228
Последовательность VL DIQMTQSPST LSASVGDRVT ITCRASQSIS SWLAWYQQKP GKAPKLLIYE ASSLESGVPS RFSGSGSGTE FTLTISSLQP DDFATYYCQQ YNSFPPTFGG GTKVEIK 9 12228
LCDR1 RASQSISSWLA 10 12228
LCDR2 EASSLES 11 12228
LCDR3 QQYNSFPPT 12 13406
Последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDQYYMH
WVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTAYAQKFQGRVT
MTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS 13 13406
HCDR1 YTFDQYYMH 14 13406
HCDR2 IINPSGGSTAYAQKFQG 15 13406
HCDR3 ARGGTYYDYTY 16 13406
Последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGK
APKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYY
CQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 17 13406
LCDR1 RASQSISSWLA 18 13406
LCDR2 EASSLES 19 13406
LCDR3 QQYNSFPPT 20 13407
Последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPSYYMHWVRQAPGQGL
EWMGIINPEGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDT
AVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS 21 13407
HCDR1 YTFPSYYMH 22 13407
HCDR2 IINPEGGSTAYAQKFQG 23 13407
HCDR3 ARGGTYYDYTY 24 13407
Последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKP
GKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDF
ATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 25 13407
LCDR1 RASQSISSWLA 26 13407
LCDR2 EASSLES 27 13407
LCDR3 QQYNSFPPT 28 13408
Последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQ
APGQGLEWMGIINPSGGVTAYAQKFQGRVTMTRDTSTST
VYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS 29 13408
HCDR1 YTFSDYYMH 30 13408
HCDR2 IINPSGGVTAYAQKFQG 31 13408
HCDR3 ARGGTYYDYTY 32 13408
Последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQ
QKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS
LQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 33 13408
LCDR1 RASQSISSWLA 34 13408
LCDR2 EASSLES 35 13408
LCDR3 QQYNSFPPT 36 13409
Последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFESYYMHWVRQ
APGQGLEWMGIINPSGGVTAYAQKFQGRVTMTRDTSTST
VYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS 37 13409
HCDR1 YTFESYYMH 38 13409
HCDR2 IINPSGGVTAYAQKFQG 39 13409
HCDR3 ARGGTYYDYTY 40 13409
Последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQ
QKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS
LQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 41 13409
LCDR1 RASQSISSWLA 42 13409
LCDR2 EASSLES 43 13409
LCDR3 QQYNSFPPT 44 13396 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPDAGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS 45 13396
HCDR1 YTFTSYYMH 46 13396
HCDR2 IINPDAGSTAYAQKFQG 47 13396 HCDR3 ARDQGHYYGMGV
48 13396 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK 49 13396 LCDR1 RASQSISSWLA 50 13396 LCDR2 EASSLES 51 13396 LCDR3 QQHNSYPPT 52 13398 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGEYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSEGSTGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS 53 13398
HCDR1 YTFGEYYMH 54 13398
HCDR2 IINPSEGSTGYAQKFQG 55 13398 HCDR3 ARDQGHYYGMGV 56 13398 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK 57 13398 LCDR1 RASQSISSWLA 58 13398 LCDR2 EASSLES 59 13398 LCDR3 QQHNSYPPT 60 13399 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSAGSTGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS 61 13399
HCDR1 YTFSDYYMH 62 13399
HCDR2 IINPSAGSTGYAQKFQG 63 13399 HCDR3 ARDQGHYYGMGV 64 13399 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK 65 13399 LCDR1 RASQSISSWLA 66 13399 LCDR2 EASSLES 67 13399 LCDR3 QQHNSYPPT 68 13401 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIDPSKGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS 69 13401
HCDR1 YTFNSYYMS 70 13401
HCDR2 IIDPSKGSTAYAQKFQG 71 13401 HCDR3 ARHEYGMDV 72 13401 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 73 13401 LCDR1 RASQSISSWLA 74 13401 LCDR2 EASSLES 75 13401 LCDR3 QQYNSFPPT 76 13402 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTHYYMSWVRQAPGQGLEWMGMINPEGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS 77 13402
HCDR1 YTFTHYYMS 78 13402
HCDR2 MINPEGGSTAYAQKFQG 79 13402 HCDR3 ARHEYGMDV 80 13402 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 81 13402 LCDR1 RASQSISSWLA 82 13402 LCDR2 EASSLES 83 13402 LCDR3 QQYNSFPPT 84 13403 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDSYYMSWVRQAPGQGLEWMGMINPSVGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS 85 13403
HCDR1 YTFDSYYMS 86 13403
HCDR2 MINPSVGSTAYAQKFQG 87 13403 HCDR3 ARHEYGMDV 88 13403 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 89 13403 LCDR1 RASQSISSWLA 90 13403 LCDR2 EASSLES 91 13403 LCDR3 QQYNSFPPT 92 13404 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFASYAMSWVRQAPGQGLEWMGIIFPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS 93 13404
HCDR1 YTFASYAMS 94 13404
HCDR2 IIFPGGGSTSYAQKFQG 95 13404 HCDR3 ARHEYGMDV 96 13404 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 97 13404 LCDR1 RASQSISSWLA 98 13404 LCDR2 EASSLES 99 13404 LCDR3 QQYNSFPPT 100 13405 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFASYYMGWVRQAPGQGLEWMGIINPAGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS 101 13405
HCDR1 YTFASYYMG 102 13405
HCDR2 IINPAGGSTAYAQKFQG 103 13405 HCDR3 ARHEYGMDV 104 13405 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 105 13405 LCDR1 RASQSISSWLA 106 13405 LCDR2 EASSLES 107 13405 LCDR3 QQYNSFPPT 108 12191 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS 109 12191
HCDR1 YTFTSYYMH 110 12191
HCDR2 IINPGGGSTSYAQKFQG 111 12191 HCDR3 ARDQGHYYGMGV 112 12191 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK 113 12191 LCDR1 RASQSISSWLA 114 12191 LCDR2 EASSLES 115 12191 LCDR3 QQHNSYPPT 116 12195 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS 117 12195
HCDR1 YTFTSYYMS 118 12195
HCDR2 IINPSGGSTSYAQKFQG 119 12195 HCDR3 ARHEYGMDV 120 12195 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK 121 12195 LCDR1 RASQSISSWLA 122 12195 LCDR2 EASSLES 123 12195 LCDR3 QQYNSFPPT 124 12535 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGKSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS 125 12535
HCDR1 FTFSHYLMS 126 12535
HCDR2 AISGSGKSTYYADSVKG 127 12535 HCDR3 AKVYYGMPY 128 12535 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK 129 12535 LCDR1 RASQGIDSWLA 130 12535 LCDR2 AASSLQS 131 12535 LCDR3 QQASDVPWT 132 12536 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYLMSWVRQAPGKGLEWVSAIGGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS 133 12536
HCDR1 FTFSQYLMS 134 12536
HCDR2 AIGGSGASTYYADSVKG 135 12536 HCDR3 AKVYYGMPY 136 12536 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK 137 12536 LCDR1 RASQGIDSWLA 138 12536 LCDR2 AASSLQS 139 12536 LCDR3 QQASDVPWT 140 12541 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSYMMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGRDTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS 141 12541
HCDR1 FTFRSYMMS 142 12541
HCDR2 AISGSGRDTYYADSVKG 143 12541 HCDR3 AKVYYGMPY 144 12541 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK 145 12541 LCDR1 RASQGIDSWLA 146 12541 LCDR2 AASSLQS 147 12541 LCDR3 QQASDVPWT 148 12543 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYMMSWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS 149 12543
HCDR1 FTFSQYMMS 150 12543
HCDR2 GISGSGGETYYADSVKG 151 12543 HCDR3 AKVYYGMPY 152 12543 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK 153 12543 LCDR1 RASQGIDSWLA 154 12543 LCDR2 AASSLQS 155 12543 LCDR3 QQASDVPWT 156 12544 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYLMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS 157 12544
HCDR1 FTFSSYLMS 158 12544
HCDR2 AISGSGSSTYYADSVKG 159 12544 HCDR3 AKVYYGMPY 160 12544 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK 161 12544 LCDR1 RASQGIDSWLA 162 12544 LCDR2 AASSLQS 163 12544 LCDR3 QQASDVPWT 164 12545 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGQTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS 165 12545
HCDR1 FTFSHYLMS 166 12545
HCDR2 AISGSGGQTYYADSVKG 167 12545 HCDR3 AKVYYGMPY 168 12545 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK 169 12545 LCDR1 RASQGIDSWLA 170 12545 LCDR2 AASSLQS 171 12545 LCDR3 QQASDVPWT 172 12549 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYSMSWVRQAPGKGLEWVSAISGGGGQTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS 173 12549
HCDR1 FTFSQYSMS 174 12549
HCDR2 AISGGGGQTYYADSVKG 175 12549 HCDR3 AKVYYGMPY 176 12549 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK 177 12549 LCDR1 RASQGIDSWLA 178 12549 LCDR2 AASSLQS 179 12549 LCDR3 QQASDVPWT 180 12550 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSLYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGQTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS 181 12550
HCDR1 FTFSLYAMS 182 12550
HCDR2 AISGSGGQTYYADSVKG 183 12550 HCDR3 AKVYYGMPY 184 12550 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK 185 12550 LCDR1 RASQGIDSWLA 186 12550 LCDR2 AASSLQS 187 12550 LCDR3 QQASDVPWT 188 12553 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGEYAISWVRQAPGQGLEWMGLIIPIFGTAQYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS 189 12553
HCDR1 GTFGEYAIS 190 12553
HCDR2 LIIPIFGTAQYAQKFQG 191 12553 HCDR3 ARGASDGETGRLDL 192 12553 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK 193 12553 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA 194 12553 LCDR2 WASTRES 195 12553 LCDR3 QQSYSLPFT 196 12554 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGLIIPAFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS 197 12554
HCDR1 GTFSSYAIS 198 12554
HCDR2 LIIPAFGTANYAQKFQG 199 12554 HCDR3 ARGASDGETGRLDL 200 12554 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK 201 12554 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA 202 12554 LCDR2 WASTRES 203 12554 LCDR3 QQSYSLPFT 204 12562 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGVIIPIFGEANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS 205 12562
HCDR1 GTFSSYAIS 206 12562
HCDR2 VIIPIFGEANYAQKFQG 207 12562 HCDR3 ARGASDGETGRLDL 208 12562 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK 209 12562 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA 210 12562 LCDR2 WASTRES 211 12562 LCDR3 QQSYSLPFT 212 12563 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGSYAISWVRQAPGQGLEWMGVIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS 213 12563
HCDR1 GTFGSYAIS 214 12563
HCDR2 VIIPIFGTANYAQKFQG 215 12563 HCDR3 ARGASDGETGRLDL 216 12563 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK 217 12563 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA 218 12563 LCDR2 WASTRES 219 12563 LCDR3 QQSYSLPFT 220 12564 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSQYAISWVRQAPGQGLEWMGVIIPSFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS 221 12564
HCDR1 GTFSQYAIS 222 12564
HCDR2 VIIPSFGTANYAQKFQG 223 12564 HCDR3 ARGASDGETGRLDL 224 12564 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK 225 12564 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA 226 12564 LCDR2 WASTRES 227 12564 LCDR3 QQSYSLPFT 228 12565 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGEYAISWVRQAPGQGLEWMGLIIPIFGTAQYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS 229 12565
HCDR1 GTFGEYAIS 230 12565
HCDR2 LIIPIFGTAQYAQKFQG 231 12565 HCDR3 ARGASDGETGRLDL 232 12565 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK 233 12565 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA 234 12565 LCDR2 WASTRES 235 12565 LCDR3 QQSYSLPFT 236 12571 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGSSAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPLFGTAAYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS 237 12571
HCDR1 GTFGSSAIS 238 12571
HCDR2 GIIPLFGTAAYAQKFQG 239 12571 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV 240 12571 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK 241 12571 LCDR1 RASQSVSSYLA 242 12571 LCDR2 DASNRAT 243 12571 LCDR3 QQGYALPIT 244 12572 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSEYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAVYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS 245 12572
HCDR1 GTFSEYAIS 246 12572
HCDR2 GIIPIFGTAVYAQKFQG 247 12572 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV 248 12572 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK 249 12572 LCDR1 RASQSVSSYLA 250 12572 LCDR2 DASNRAT 251 12572 LCDR3 QQGYALPIT 252 12576 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAVYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS 253 12576
HCDR1 GTFSSYAIS 254 12576
HCDR2 GIIPIFGTAVYAQKFQG 255 12576 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV 256 12576 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK 257 12576 LCDR1 RASQSVSSYLA 258 12576 LCDR2 DASNRAT 259 12576 LCDR3 QQGYALPIT 260 12583 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSSVISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTATYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS 261 12583
HCDR1 GTFSSSVIS 262 12583
HCDR2 GIIPIFGTATYAQKFQG 263 12583 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV 264 12583 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK 265 12583 LCDR1 RASQSVSSYLA 266 12583 LCDR2 DASNRAT 267 12583 LCDR3 QQGYALPIT 268 12584 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFDSYVISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGFGVANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS 269 12584
HCDR1 GTFDSYVIS 270 12584
HCDR2 GIIPGFGVANYAQKFQG 271 12584 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV 272 12584 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK 273 12584 LCDR1 RASQSVSSYLA 274 12584 LCDR2 DASNRAT 275 12584 LCDR3 QQGYALPIT 276 11613 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS 277 11613
HCDR1 FTFSSYAMS 278 11613
HCDR2 AISGSGGSTYYADSVKG 279 11613 HCDR3 AKVYYGMPY 280 11613 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK 281 11613 LCDR1 RASQGIDSWLA 282 11613 LCDR2 AASSLQS 283 11613 LCDR3 QQASDVPWT 284 11645 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTASYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS 285 11645
HCDR1 GTFSSYAIS 286 11645
HCDR2 GIIPIFGTASYAQKFQG 287 11645 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV 288 11645 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK 289 11645 LCDR1 RASQSVSSYLA 290 11645 LCDR2 DASNRAT 291 11645 LCDR3 QQGYALPIT 292 11606 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAGGYSYSWGGSNIWGQGTMVTVSS 293 11606
HCDR1 YTFTSYYMH 294 11606
HCDR2 IINPSGGSTSYAQKFQG 295 11606 HCDR3 ARAGGYSYSWGGSNI 296 11606 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDGSFPYTFGGGTKVEIK 297 11606 LCDR1 RASQSISSWLA 298 11606 LCDR2 KASSLES 299 11606 LCDR3 QQDGSFPYT 300 12220 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDPRYTTLTGSYYYGMDVWGQGTTVTVSS 301 12220
HCDR1 YTFTSYYMH 302 12220
HCDR2 IINPGGGSTSYAQKFQG 303 12220 HCDR3 ARDPRYTTLTGSYYYGMDV 304 12220 последовательность VL DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAVNFPPITFGGGTKVEIK 305 12220 LCDR1 RASQDISSWLA 306 12220 LCDR2 AASSLQS 307 12220 LCDR3 QQAVNFPPIT 308 11624 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREASWLPGSLDVWGKGTTVTVSS 309 11624
HCDR1 YTFTGYYMH 310 11624
HCDR2 WINPNSGGTKYAQKFQG 311 11624 HCDR3 AREASWLPGSLDV 312 11624 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYDNFPITFGGGTKVEIK 313 11624 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA 314 11624 LCDR2 WASTRES 315 11624 LCDR3 QQYDNFPIT 316 12190 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDPRYTTLTGSYYYGMDVWGQGTTVTVSS 317 12190
HCDR1 YTFTSYYMH 318 12190
HCDR2 IINPGGGSTSYAQKFQG 319 12190 HCDR3 ARDPRYTTLTGSYYYGMDV 320 12190 последовательность VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSANTPPWTFGGGTKVEIK 321 12190 LCDR1 RASQSISSYLN 322 12190 LCDR2 AASSLQS 323 12190 LCDR3 QQSANTPPWT 324 37A10 вариабельная область тяжелой цепи E V Q L V E S G G G L V K P G G S L K L S C A A S G F T F S D Y W M D W V R Q A P G K G L E W V G N I D E D G S I T E Y S P F V K G R F T I S R D N V K N T L Y L Q M N S V K S E D T A T Y Y C T R W G R F G F D S W G Q G T L V T V S S 325 37A10 вариабельная область легкой цепи D I V M T Q S P S S L A V S A G D R V T I N C K S S Q S L L S G S F N Y L T W Y Q Q K T G Q A P K L L I F Y A S T R H T G V P D R F M G S G S G T D F T L T I N S F Q T E D L G D Y Y C H H H Y N A P P T F G P G T K L E L R 326 37A10 VH CDR1 G F T F S D Y W M D 327 37A10 VH CDR2 N I D E D G S I T E Y S P F V K G 328 37A10 VH CDR3 W G R F G F D S 329 37A10 VL CDR1 K S S Q S L L S G S F N Y L T 330 37A10 VL CDR2 Y A S T R H T 331 37A10 VL CDR3 H H H Y N A P P T 332 37A10S713 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS 333 37A10S713 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K 334 37A10S713 VH CDR1 GFTFSDYWMD 335 37A10S713 VH CDR2 NIDEDGSITEYSPFVKG 336 37A10S713 VH CDR3 WGRFGFDS 337 37A10S713 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT 338 37A10S713 VL CDR2 YASTRHT 339 37A10S713 VL CDR3 HHHYNAPPT 340 37A10S714 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS 341 37A10S714 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRET GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K 342 37A10S714 VH CDR1 GFTFSDYWMD 343 37A10S714 VH CDR2 NIDEDGSITEYSPFVKG 344 37A10S714 VH CDR3 WGRFGFDS 345 37A10S714 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT 346 37A10S714 VL CDR2 YASTRET 347 37A10S714 VL CDR3 HHHYNAPPT 348 37A10S715 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS 349 37A10S715 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRQT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K 350 37A10S715 VH CDR1 GFTFSDYWMD 351 37A10S715 VH CDR2 NIDEDGSITEYSPFVKG 352 37A10S715 VH CDR3 WGRFGFDS 353 37A10S715 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT 354 37A10S715 VL CDR2 YASTRQT 355 37A10S715 VL CDR3 HHHYNAPPT 356 37A10S716 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDESGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS 357 37A10S716 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K 358 37A10S716 VH CDR1 GFTFSDYWMD 359 37A10S716 VH CDR2 NIDESGSITEYSPFVKG 360 37A10S716 VH CDR3 WGRFGFDS 361 37A10S716 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT 362 37A10S716 VL CDR2 YASTRHT 363 37A10S716 VL CDR3 HHHYNAPPT 364 37A10S717 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDESGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS 365 37A10S717 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRET GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K 366 37A10S717 VH CDR1 GFTFSDYWMD 367 37A10S717 VH CDR2 NIDESGSITEYSPFVKG 368 37A10S717 VH CDR3 WGRFGFDS 369 37A10S717 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT 370 37A10S717 VL CDR2 YASTRET 371 37A10S717 VL CDR3 HHHYNAPPT 372 37A10S718 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDESGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS 373 37A10S718 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRQT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K 374 37A10S718 VH CDR1 GFTFSDYWMD 375 37A10S718 VH CDR2 NIDESGSITEYSPFVKG 376 37A10S718 VH CDR3 WGRFGFDS 377 37A10S718 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT 378 37A10S718 VL CDR2 YASTRQT 379 37A10S718 VL CDR3 HHHYNAPPT 380 37A10S713 тяжелая цепь IgG1 человека EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK 381 37A10S713 легкая цепь κ человека DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> JOUNCE THERAPEUTICS, INC.

<120> АНТИТЕЛА К PD-1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

<130> 01140-0006-00PCT

<150> США 62/416 602

<151> 02.11.2016

<160> 406

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 288

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly

165 170 175

Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys

180 185 190

Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro

195 200 205

Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly

210 215 220

Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro

225 230 235 240

Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly

245 250 255

Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg

260 265 270

Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 2

<211> 288

<212> Белок

<213> Mus musculus

<400> 2

Met Trp Val Arg Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp

20 25 30

Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met

50 55 60

Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala

65 70 75 80

Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln

85 90 95

Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp

100 105 110

Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val

130 135 140

Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Lys Pro Glu Gly Arg Phe Gln Gly Met Val Ile Gly Ile Met Ser Ala

165 170 175

Leu Val Gly Ile Pro Val Leu Leu Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Val

180 185 190

Phe Cys Ser Thr Ser Met Ser Glu Ala Arg Gly Ala Gly Ser Lys Asp

195 200 205

Asp Thr Leu Lys Glu Glu Pro Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala

210 215 220

Tyr Glu Glu Leu Asp Phe Gln Gly Arg Glu Lys Thr Pro Glu Leu Pro

225 230 235 240

Thr Ala Cys Val His Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly

245 250 255

Leu Gly Ala Ser Ala Met Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Leu Gln

260 265 270

Gly Pro Arg Pro Pro Arg His Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 3

<211> 288

<212> Белок

<213> Macaca fascicularis

<400> 3

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly

165 170 175

Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys

180 185 190

Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro

195 200 205

Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly

210 215 220

Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro

225 230 235 240

Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly

245 250 255

Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg

260 265 270

Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 4

<211> 118

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 4

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 5

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 5

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 6

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 6

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 7

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 7

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr

1 5 10

<210> 8

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 9

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 10

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 10

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 11

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 12

<211> 118

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 12

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Gln Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 13

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 13

Tyr Thr Phe Asp Gln Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 14

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 14

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 15

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 15

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr

1 5 10

<210> 16

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 16

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 17

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 17

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 18

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 18

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 19

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 19

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 20

<211> 118

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 20

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Pro Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 21

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 21

Tyr Thr Phe Pro Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 22

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 22

Ile Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 23

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 23

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr

1 5 10

<210> 24

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 24

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 25

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 25

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 26

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 26

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 27

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 27

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 28

<211> 118

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 28

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 29

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 29

Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 30

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 30

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 31

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 31

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr

1 5 10

<210> 32

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 32

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 33

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 33

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 34

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 34

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 35

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 35

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 36

<211> 118

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 36

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Glu Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 37

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 37

Tyr Thr Phe Glu Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 38

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 38

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 39

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 39

Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr

1 5 10

<210> 40

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 40

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 41

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 41

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 42

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 42

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 43

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 43

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 44

<211> 119

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 44

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Asp Ala Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 45

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 45

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 46

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 46

Ile Ile Asn Pro Asp Ala Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 47

<211> 12

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 47

Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val

1 5 10

<210> 48

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 48

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 49

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 49

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 50

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 50

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 51

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 51

Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr

1 5

<210> 52

<211> 119

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 52

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Glu Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Glu Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 53

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 53

Tyr Thr Phe Gly Glu Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 54

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 54

Ile Ile Asn Pro Ser Glu Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 55

<211> 12

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 55

Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val

1 5 10

<210> 56

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 56

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 57

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 57

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 58

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 58

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 59

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 59

Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr

1 5

<210> 60

<211> 119

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 60

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Ala Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 61

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 61

Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 62

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 62

Ile Ile Asn Pro Ser Ala Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 63

<211> 12

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 63

Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val

1 5 10

<210> 64

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 64

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 65

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 65

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 66

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 66

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 67

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 67

Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr

1 5

<210> 68

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 68

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asp Pro Ser Lys Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 69

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 69

Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 70

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 70

Ile Ile Asp Pro Ser Lys Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 71

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 71

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 72

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 72

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 73

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 73

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 74

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 74

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 75

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 75

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 76

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 76

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 77

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 77

Tyr Thr Phe Thr His Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 78

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 78

Met Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 79

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 79

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 80

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 80

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 81

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 81

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 82

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 82

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 83

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 83

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 84

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 84

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile Asn Pro Ser Val Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 85

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 85

Tyr Thr Phe Asp Ser Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 86

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 86

Met Ile Asn Pro Ser Val Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 87

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 87

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 88

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 88

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 89

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 89

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 90

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 90

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 91

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 91

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 92

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 92

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 93

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 93

Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 94

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 94

Ile Ile Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 95

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 95

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 96

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 96

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 97

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 97

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 98

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 98

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 99

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 99

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 100

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 100

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ala Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 101

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 101

Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr Tyr Met Gly

1 5

<210> 102

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 102

Ile Ile Asn Pro Ala Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 103

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 103

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 104

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 104

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 105

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 105

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 106

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 106

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 107

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 107

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 108

<211> 119

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 108

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 109

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 109

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 110

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 110

Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 111

<211> 12

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 111

Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val

1 5 10

<210> 112

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 112

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 113

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 113

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 114

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 114

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 115

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 115

Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr

1 5

<210> 116

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 116

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 117

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 117

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 118

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 118

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 119

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 119

Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 120

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 120

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 121

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 121

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 122

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 122

Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 123

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 123

Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 124

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 124

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr

20 25 30

Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 125

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 125

Phe Thr Phe Ser His Tyr Leu Met Ser

1 5

<210> 126

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 126

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 127

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 127

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr

1 5

<210> 128

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 128

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 129

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 129

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 130

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 130

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 131

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 131

Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 132

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 132

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr

20 25 30

Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gly Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 133

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 133

Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Leu Met Ser

1 5

<210> 134

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 134

Ala Ile Gly Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 135

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 135

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr

1 5

<210> 136

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 136

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 137

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 137

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 138

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 138

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 139

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 139

Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 140

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 140

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr

20 25 30

Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 141

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 141

Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Met Met Ser

1 5

<210> 142

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 142

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 143

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 143

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr

1 5

<210> 144

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 144

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 145

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 145

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 146

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 146

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 147

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 147

Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 148

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 148

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr

20 25 30

Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 149

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 149

Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Met Met Ser

1 5

<210> 150

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 150

Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 151

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 151

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr

1 5

<210> 152

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 152

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 153

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 153

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 154

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 154

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 155

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 155

Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 156

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 156

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 157

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 157

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Leu Met Ser

1 5

<210> 158

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 158

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 159

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 159

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr

1 5

<210> 160

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 160

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 161

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 161

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 162

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 162

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 163

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 163

Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 164

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 164

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr

20 25 30

Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 165

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 165

Phe Thr Phe Ser His Tyr Leu Met Ser

1 5

<210> 166

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 166

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 167

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 167

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr

1 5

<210> 168

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 168

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 169

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 169

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 170

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 170

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 171

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 171

Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 172

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 172

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 173

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 173

Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Ser Met Ser

1 5

<210> 174

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 174

Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 175

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 175

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr

1 5

<210> 176

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 176

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 177

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 177

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 178

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 178

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 179

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 179

Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 180

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 180

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Leu Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 181

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 181

Phe Thr Phe Ser Leu Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 182

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 182

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 183

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 183

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr

1 5

<210> 184

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 184

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 185

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 185

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 186

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 186

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 187

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 187

Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 188

<211> 121

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 188

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Glu Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 189

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 189

Gly Thr Phe Gly Glu Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 190

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 190

Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 191

<211> 14

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 191

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu

1 5 10

<210> 192

<211> 113

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 192

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 193

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 193

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 194

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 194

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 195

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 195

Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 196

<211> 121

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 196

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 197

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 197

Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 198

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 198

Leu Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 199

<211> 14

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 199

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu

1 5 10

<210> 200

<211> 113

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 200

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 201

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 201

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 202

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 202

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 203

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 203

Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 204

<211> 121

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 204

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 205

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 205

Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 206

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 206

Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 207

<211> 14

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 207

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu

1 5 10

<210> 208

<211> 113

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 208

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 209

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 209

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 210

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 210

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 211

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 211

Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 212

<211> 121

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 212

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 213

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 213

Gly Thr Phe Gly Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 214

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 214

Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 215

<211> 14

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 215

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu

1 5 10

<210> 216

<211> 113

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 216

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 217

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 217

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 218

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 218

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 219

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 219

Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 220

<211> 121

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 220

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gln Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 221

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 221

Gly Thr Phe Ser Gln Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 222

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 222

Val Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 223

<211> 14

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 223

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu

1 5 10

<210> 224

<211> 113

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 224

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 225

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 225

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 226

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 226

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 227

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 227

Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 228

<211> 121

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 228

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Glu Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 229

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 229

Gly Thr Phe Gly Glu Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 230

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 230

Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 231

<211> 14

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 231

Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu

1 5 10

<210> 232

<211> 113

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 232

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 233

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 233

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 234

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 234

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 235

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 235

Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 236

<211> 122

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 236

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Ser

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Ala Ala Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 237

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 237

Gly Thr Phe Gly Ser Ser Ala Ile Ser

1 5

<210> 238

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 238

Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Ala Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 239

<211> 15

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 239

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val

1 5 10 15

<210> 240

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 240

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 241

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 241

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 242

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 242

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 243

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 243

Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 244

<211> 122

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 244

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Glu Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 245

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 245

Gly Thr Phe Ser Glu Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 246

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 246

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 247

<211> 15

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 247

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val

1 5 10 15

<210> 248

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 248

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 249

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 249

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 250

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 250

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 251

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 251

Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 252

<211> 122

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 252

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 253

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 253

Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 254

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 254

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 255

<211> 15

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 255

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val

1 5 10 15

<210> 256

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 256

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 257

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 257

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 258

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 258

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 259

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 259

Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 260

<211> 122

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 260

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ser

20 25 30

Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 261

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 261

Gly Thr Phe Ser Ser Ser Val Ile Ser

1 5

<210> 262

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 262

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 263

<211> 15

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 263

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val

1 5 10 15

<210> 264

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 264

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 265

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 265

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 266

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 266

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 267

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 267

Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 268

<211> 122

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 268

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asp Ser Tyr

20 25 30

Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Gly Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 269

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 269

Gly Thr Phe Asp Ser Tyr Val Ile Ser

1 5

<210> 270

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 270

Gly Ile Ile Pro Gly Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 271

<211> 15

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 271

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val

1 5 10 15

<210> 272

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 272

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 273

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 273

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 274

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 274

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 275

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 275

Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 276

<211> 116

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 276

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 277

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 277

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 278

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 278

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 279

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 279

Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr

1 5

<210> 280

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 280

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 281

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 281

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 282

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 282

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 283

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 283

Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 284

<211> 122

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 284

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 285

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 285

Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 286

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 286

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 287

<211> 15

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 287

Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val

1 5 10 15

<210> 288

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 288

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 289

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 289

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 290

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 290

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 291

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 291

Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 292

<211> 122

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 292

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Asn Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 293

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 293

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 294

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 294

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 295

<211> 15

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 295

Ala Arg Ala Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Asn Ile

1 5 10 15

<210> 296

<211> 107

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 296

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Gly Ser Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 297

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 297

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 298

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 298

Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 299

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 299

Gln Gln Asp Gly Ser Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 300

<211> 126

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 300

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 301

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 301

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 302

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 302

Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 303

<211> 19

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 303

Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly

1 5 10 15

Met Asp Val

<210> 304

<211> 108

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 304

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Val Asn Phe Pro Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 305

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 305

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 306

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 306

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 307

<211> 10

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 307

Gln Gln Ala Val Asn Phe Pro Pro Ile Thr

1 5 10

<210> 308

<211> 120

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 308

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ala Ser Trp Leu Pro Gly Ser Leu Asp Val Trp Gly Lys

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 309

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 309

Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 310

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 310

Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 311

<211> 13

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 311

Ala Arg Glu Ala Ser Trp Leu Pro Gly Ser Leu Asp Val

1 5 10

<210> 312

<211> 113

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 312

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Asp Asn Phe Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 313

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 313

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 314

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 314

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 315

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 315

Gln Gln Tyr Asp Asn Phe Pro Ile Thr

1 5

<210> 316

<211> 126

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 316

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 317

<211> 9

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 317

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 318

<211> 17

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 318

Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 319

<211> 19

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 319

Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly

1 5 10 15

Met Asp Val

<210> 320

<211> 108

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 320

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Asn Thr Pro Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 321

<211> 11

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 321

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 322

<211> 7

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 322

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 323

<211> 10

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 323

Gln Gln Ser Ala Asn Thr Pro Pro Trp Thr

1 5 10

<210> 324

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 324

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Val Lys Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 325

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 325

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly

20 25 30

Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Met Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Ser Phe Gln Thr Glu Asp Leu Gly Asp Tyr Tyr Cys His His His Tyr

85 90 95

Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg

100 105 110

<210> 326

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 326

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp

1 5 10

<210> 327

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 327

Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 328

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 328

Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser

1 5

<210> 329

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 329

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr

1 5 10 15

<210> 330

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 330

Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr

1 5

<210> 331

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 331

His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr

1 5

<210> 332

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 332

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 333

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 333

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly

20 25 30

Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr

85 90 95

Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

<210> 334

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 334

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp

1 5 10

<210> 335

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 335

Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 336

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 336

Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser

1 5

<210> 337

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 337

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr

1 5 10 15

<210> 338

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 338

Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr

1 5

<210> 339

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 339

His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr

1 5

<210> 340

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 340

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 341

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 341

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly

20 25 30

Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr

85 90 95

Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

<210> 342

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 342

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp

1 5 10

<210> 343

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 343

Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 344

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 344

Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser

1 5

<210> 345

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 345

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr

1 5 10 15

<210> 346

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 346

Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr

1 5

<210> 347

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 347

His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr

1 5

<210> 348

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 348

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 349

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 349

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly

20 25 30

Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr

85 90 95

Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

<210> 350

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 350

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp

1 5 10

<210> 351

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 351

Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 352

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 352

Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser

1 5

<210> 353

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 353

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr

1 5 10 15

<210> 354

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 354

Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr

1 5

<210> 355

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 355

His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr

1 5

<210> 356

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 356

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 357

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 357

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly

20 25 30

Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr

85 90 95

Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

<210> 358

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 358

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp

1 5 10

<210> 359

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 359

Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 360

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 360

Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser

1 5

<210> 361

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 361

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr

1 5 10 15

<210> 362

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 362

Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr

1 5

<210> 363

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 363

His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr

1 5

<210> 364

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 364

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 365

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 365

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly

20 25 30

Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr

85 90 95

Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

<210> 366

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 366

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp

1 5 10

<210> 367

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 367

Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 368

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 368

Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser

1 5

<210> 369

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 369

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr

1 5 10 15

<210> 370

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 370

Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr

1 5

<210> 371

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 371

His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr

1 5

<210> 372

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 372

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 373

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 373

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly

20 25 30

Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr

85 90 95

Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

<210> 374

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 374

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp

1 5 10

<210> 375

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 375

Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 376

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 376

Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser

1 5

<210> 377

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 377

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr

1 5 10 15

<210> 378

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 378

Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr

1 5

<210> 379

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 379

His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr

1 5

<210> 380

<211> 447

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 380

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 381

<211> 218

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированное антитело

<400> 381

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly

20 25 30

Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr

85 90 95

Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 382

<211> 268

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 382

Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr

1 5 10 15

Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe

20 25 30

Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr

35 40 45

Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu

50 55 60

Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu

65 70 75 80

Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn

85 90 95

Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala

100 105 110

Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg

115 120 125

Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly

130 135 140

Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser

145 150 155 160

Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala

165 170 175

Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp

180 185 190

Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe

195 200 205

Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu

210 215 220

Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser

225 230 235 240

Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro

245 250 255

Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

260 265

<210> 383

<211> 268

<212> Белок

<213> Mus musculus

<400> 383

Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr

1 5 10 15

Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe

20 25 30

Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn

35 40 45

Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn

50 55 60

Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln Ile Ile Gln Leu

65 70 75 80

Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Thr Arg Arg Asn

85 90 95

Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu His Pro Lys Ala

100 105 110

Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile

115 120 125

Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly

130 135 140

Arg Phe Gln Gly Met Val Ile Gly Ile Met Ser Ala Leu Val Gly Ile

145 150 155 160

Pro Val Leu Leu Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Val Phe Cys Ser Thr

165 170 175

Ser Met Ser Glu Ala Arg Gly Ala Gly Ser Lys Asp Asp Thr Leu Lys

180 185 190

Glu Glu Pro Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala Tyr Glu Glu Leu

195 200 205

Asp Phe Gln Gly Arg Glu Lys Thr Pro Glu Leu Pro Thr Ala Cys Val

210 215 220

His Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly Leu Gly Ala Ser

225 230 235 240

Ala Met Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Leu Gln Gly Pro Arg Pro

245 250 255

Pro Arg His Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

260 265

<210> 384

<211> 268

<212> Белок

<213> Macaca fascicularis

<400> 384

Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr

1 5 10 15

Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe

20 25 30

Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr

35 40 45

Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu

50 55 60

Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu

65 70 75 80

Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn

85 90 95

Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala

100 105 110

Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg

115 120 125

Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly

130 135 140

Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser

145 150 155 160

Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala

165 170 175

Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp

180 185 190

Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe

195 200 205

Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu

210 215 220

Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser

225 230 235 240

Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro

245 250 255

Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

260 265

<210> 385

<211> 386

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 человека D85G ECD-Fc-His6

<400> 385

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

1 5 10 15

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

20 25 30

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

35 40 45

Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Gly Arg Ser Gln Pro

50 55 60

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

65 70 75 80

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

85 90 95

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser

100 105 110

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

115 120 125

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu

130 135 140

Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

145 150 155 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

165 170 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

180 185 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

195 200 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

210 215 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

225 230 235 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

245 250 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

260 265 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

275 280 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

290 295 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305 310 315 320

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

325 330 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

340 345 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

355 360 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His

370 375 380

His His

385

<210> 386

<211> 386

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 человека R86L ECD-Fc-His6

<400> 386

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

1 5 10 15

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

20 25 30

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

35 40 45

Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Leu Ser Gln Pro

50 55 60

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

65 70 75 80

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

85 90 95

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser

100 105 110

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

115 120 125

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu

130 135 140

Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

145 150 155 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

165 170 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

180 185 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

195 200 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

210 215 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

225 230 235 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

245 250 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

260 265 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

275 280 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

290 295 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305 310 315 320

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

325 330 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

340 345 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

355 360 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His

370 375 380

His His

385

<210> 387

<211> 376

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 человека N33-Q167 ECD-Fc-His6

<400> 387

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

1 5 10 15

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

35 40 45

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

50 55 60

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

65 70 75 80

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

85 90 95

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

100 105 110

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

115 120 125

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His

130 135 140

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

145 150 155 160

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

165 170 175

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

180 185 190

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

195 200 205

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

210 215 220

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

225 230 235 240

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

245 250 255

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

260 265 270

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

275 280 285

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

290 295 300

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

305 310 315 320

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

325 330 335

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

340 345 350

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly

355 360 365

Ser Gly His His His His His His

370 375

<210> 388

<211> 386

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 человека K78A ECD-Fc-His6

<400> 388

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

1 5 10 15

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

20 25 30

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

35 40 45

Asn Gln Thr Asp Ala Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

50 55 60

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

65 70 75 80

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

85 90 95

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser

100 105 110

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

115 120 125

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu

130 135 140

Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

145 150 155 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

165 170 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

180 185 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

195 200 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

210 215 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

225 230 235 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

245 250 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

260 265 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

275 280 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

290 295 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305 310 315 320

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

325 330 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

340 345 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

355 360 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His

370 375 380

His His

385

<210> 389

<211> 386

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 человека I126A ECD-Fc-His6

<400> 389

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

1 5 10 15

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

20 25 30

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

35 40 45

Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

50 55 60

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

65 70 75 80

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

85 90 95

Leu Cys Gly Ala Ala Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser

100 105 110

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

115 120 125

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu

130 135 140

Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

145 150 155 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

165 170 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

180 185 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

195 200 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

210 215 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

225 230 235 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

245 250 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

260 265 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

275 280 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

290 295 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305 310 315 320

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

325 330 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

340 345 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

355 360 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His

370 375 380

His His

385

<210> 390

<211> 386

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 человека L128A ECD-Fc-His6

<400> 390

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

1 5 10 15

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

20 25 30

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

35 40 45

Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

50 55 60

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

65 70 75 80

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

85 90 95

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Ala Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser

100 105 110

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

115 120 125

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu

130 135 140

Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

145 150 155 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

165 170 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

180 185 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

195 200 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

210 215 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

225 230 235 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

245 250 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

260 265 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

275 280 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

290 295 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305 310 315 320

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

325 330 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

340 345 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

355 360 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His

370 375 380

His His

385

<210> 391

<211> 386

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 человека A132L ECD-Fc-His6

<400> 391

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

1 5 10 15

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

20 25 30

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

35 40 45

Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

50 55 60

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

65 70 75 80

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

85 90 95

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Leu Gln Ile Lys Glu Ser

100 105 110

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

115 120 125

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu

130 135 140

Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

145 150 155 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

165 170 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

180 185 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

195 200 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

210 215 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

225 230 235 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

245 250 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

260 265 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

275 280 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

290 295 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305 310 315 320

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

325 330 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

340 345 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

355 360 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His

370 375 380

His His

385

<210> 392

<211> 386

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 человека I134A ECD-Fc-His6

<400> 392

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

1 5 10 15

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

20 25 30

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

35 40 45

Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

50 55 60

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

65 70 75 80

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

85 90 95

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ala Lys Glu Ser

100 105 110

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

115 120 125

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu

130 135 140

Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

145 150 155 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

165 170 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

180 185 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

195 200 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

210 215 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

225 230 235 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

245 250 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

260 265 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

275 280 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

290 295 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305 310 315 320

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

325 330 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

340 345 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

355 360 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His

370 375 380

His His

385

<210> 393

<211> 390

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 человека E136A ECD-Fc-His6

<400> 393

Asp Thr Thr Gly Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe

1 5 10 15

Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr

20 25 30

Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg

35 40 45

Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp

50 55 60

Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro

65 70 75 80

Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp

85 90 95

Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln

100 105 110

Ile Lys Ala Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala

115 120 125

Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln

130 135 140

Phe Gln Thr Leu Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys

145 150 155 160

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

165 170 175

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

180 185 190

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

195 200 205

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

210 215 220

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

225 230 235 240

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

245 250 255

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

260 265 270

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

275 280 285

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

290 295 300

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

305 310 315 320

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

325 330 335

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

340 345 350

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

355 360 365

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly

370 375 380

His His His His His His

385 390

<210> 394

<211> 384

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 мыши H129P ECD-Fc-His6

<400> 394

Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala

1 5 10 15

Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu

20 25 30

Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro

35 40 45

Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln

50 55 60