Штамм Streptomyces mirabilis KB13 - продуцент дутомицина Российский патент 2023 года по МПК C12N1/20 

Область техники

Изобретение относится к микробной биотехнологии, микробиологической промышленности и касается штамма микроорганизма Streptomyces mirabilis KB13, продуцирующего дутомицин - антибиотик из группы антрациклинов, обладающий значительной антибактериальной и подтвержденной противоопухолевой активностью.

Изобретение может быть использовано для получения антибиотика дутомицина, обладающего, с одной стороны, значительной антибактериальной активностью, в частности, в отношении метициллин-устойчивого Staphylococcus aureus, а с другой - способностью стимулировать клеточную аутофагию и апоптоз, что может быть использовано в противоопухолевой терапии.

Уровень техники

Дутомицин (CAS#146663-67-4) относится к группе антрациклинов, его структура состоит из тетрацикличного хромофора, соединенного гликозидной связью с остатками сахаров (Фиг. 1). Природные антрациклиновые антибиотики, открытые в 1960-х годах, являются продуктами жизнедеятельности стрептомицетов, и многие из них, такие как даунорубицин, доксорубицин, митомицин С и т.д., до сих пор остаются одними из основных препаратов для химиотерапии широкого спектра онкологических заболеваний [1]. Механизм действия данной группы препаратов связан с их способностью оказывать цитостатическое действие за счет ингибирования синтеза нуклеиновых кислот, нарушения транспорта ионов через клеточную мембрану и ряда других важных функций клетки. Все это обеспечивает высокую антимитотическую активность антрациклинов и вместе с тем низкую избирательность их действия. Именно низкая избирательность действия данных препаратов обуславливает выраженные побочные эффекты: эмбриотоксические, мутагенные, тератогенные и кардиотоксические.

Впервые дутомицин был обнаружен в 1992 году в культуральной жидкости Streptomyces sp. 1725, выделенного из образца почв, отобранного в китайской провинции Хуннань [2]. Тогда же было показано, что данное соединение проявляет сильную цитотоксичность in vitro против клеточных линий лимфоидной лейкемии Р388, а позднее это подтвердилось и на гепатоклеточных карциномах Smmc-7721 и HepG2 [3].

В 2016 году был охарактеризован биосинтетический кластер генов, участвующих в синтезе дутомицина, установлены функции многих составляющих его генов и описан основой путь биосинтеза дутомицина. Был также описан аналог дутомицина, SW91, характеризующийся отсутствием метальной группы при 12-м атоме углерода. Было установлено, что оба вещества проявляют сильную антибактериальную активность в отношении Staphylococcus aureus, в том числе и против метициллин-резистентного штамма MRSA: однако, минимальная ингибирующая концентрация дутомицина была выше (0,250 мкг/мл), чем у деметилированного производного (0,125 мкг/мл) [4].

Позднее было показано, что наличие метальной группы при 12-м атоме углерода придает дутомицину большее сродство к ДНК по сравнению с деметилированным производным SW91 и тем самым делает его более эффективным в подавлении клеточной пролиферации опухолевых клеток [3].

Более детальные исследования влияния дутомицина на клеточную линию неинвазивного рака кишечника НСТ-15 показали, что данный антибиотик также является усилителем аутофагии, которая в конечном итоге ведет к клеточному апоптозу. Причина такого эффекта в том, что дутомицин непосредственно связывает белок SERPINB6 - ингибитор сериновой протеазы человека В6, а затем активирует внутриклеточные сериновые протеазы, что приводит к индукции аутофагии. В модельных экспериментах было показано значительное уменьшение площади опухоли у рыбок Danio rerio, которым были введены ксенотрансплантаты клеток колоректального рака человека [5].

Известен продуцент дутомицина, принадлежащий к роду Streptomyces: штамм, описанный Nishimura в 1961 как «Streptomyces minoensis» I-523 [6], однако он официально не признан представителем нового вида и хранится в коллекциях микроорганизмов под номерами: DSM 40031, АТСС 19787, CBS 539.68, IFO 12798, ISP 5031, JCM 4399, NBRC 12798, RIA 1066, BCRC 13646, BCRC 13690, IFO 15797, KCTC 9114, NBRC 15797, NRRL В-5482, VKM Ас-744. Продуктивность данного штамма составляет 48,7±1,8 мг/л дутомицина за 10 суток [4].

Однако, к серьезным недостаткам известного штамма продуцента дутомицина, можно отнести малую продуктивность при выработке целевого антибиотика.

Технической задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение, является решение как минимум одной из вышеуказанных в уровне техники проблем.

Сущность изобретения

Техническим решением является использование описанного признаками в пунктах формулы изобретения.

Одной из возможных технических задач, на решение которой может быть направлено настоящее изобретение, являлось получение бактериального штамма, способного продуцировать ферментационную жидкость с высоким содержанием антибиотика дутомицина (не менее 100 мг/л).

Задача может решаться тем, что выделен и охарактеризован штамм Streptomyces mirabilis KB13, способный продуцировать антибиотик дутомицин.

Штамм Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ ВКМ Ac-2938D был выделен при поверхностном посеве на минеральный агар 1 [10] из образца верхнего горизонта почвы (0-5 см), отобранного под кленом остролистным Acer platanoides L. в июне 2021 года в Ботаническом саду МГУ имени М. В. Ломоносова (55.7077 с. ш. 37.52919 в.д).

Штамм депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов ФГБУ «ФИЦ «Пущинский Научный Центр Биологических Исследований Российской Академии Наук» (Россия, 142290, Московская обл., Пущино, пр. Науки, 5, ИБФМ) под регистрационным номером Ac-2938D.

Идентификация штамма Streptomyces mirabilis KB13 основывалась на методологии полифазной таксономии, сочетающей анализ данных секвенирования нуклеотидных последовательностей гена 16s рРНК и сопоставления этих данных с последовательностями, депонированными в базу GenBank (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank, дата обращения 25.10.2022), наряду с изучением фенотипических признаков (культуральных, морфологических и физиологических). Данный подход в настоящее время считается абсолютно надежным для идентификации мицелиальных актинобактерий на уровне рода, и в большинстве случаев, достаточным для определения видовой принадлежности.

Штамм Streptomyces mirailis KB13 ВКМ Ac-2938D характеризуется молекулярно-генетическими, культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками, согласующимися с таковыми, приведенными для представителей данного вида [Bergey's Manual of Systematics of Archaea and Bacteria, 2015, DOI: 10.1002/9781118960608].

Анализ нуклеотидной последовательности фрагмента гена 16S рРНК

Амплификация гена, кодирующего 16S рРНК малой субъединицы рибосомы, проводилась с использованием двух пар праймеров и термическим режимам согласно тому, как описано ранее [7]. ПЦР-продукты были переданы на секвенирование в НКП «Геном» (НИИ молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардта РАН, Москва). Полученные прочтения были выровнены, верифицированы и объединены с помощью программного пакета Unipro Ugene ver. 43.0 [8] в итоговую последовательность (1344 п.н.), которая была депонирована в базу данных GenBank под номером ОР077089.

Сравнение полученной нуклеотидной последовательности с аналогичными последовательностями типовых штаммов из GenBank показало, что штамм KB13 принадлежит к роду Streptomyces, причем ближайшим родственным типовым штаммом, входящим в таксономическую базу данных LPSN (List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature, https://lpsn.dsmz.de/) является Streptomyces mirabilis NBRC 13450^T (уровень сходства 99,26%). Наибольшее сходство (99,78%) обнаружено между КВ13 и продуцентом дутомицина «Streptomyces minoensis» NBRC 12798, однако в настоящее время данный вид не рассматривается как признанный (Nomenclatural status: not validly published) и сам нуждается в реклассификации.

Культурально-морфологические признаки

Культуральные характеристики штамма Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ac-2938D описаны на спектре твердых питательных сред (Фиг. 8), рекомендованных для фенотипического описания актиномицетов в рамках Международного проекта по изучению стрептомицетов - International Streptomyces Project [9].

Изучение морфологии Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ac-2938D на 14 сутки роста на овсяном агаре с помощью сканирующего электронного микроскопа (Фиг. 2) позволило установить, что штамм образует хорошо развитый разветвленный воздушный мицелий, на котором формируются длинные спиральные цепочки из цилиндрических спор с гладкой поверхностью (0,8-0,9×1,2-1,4 мкм).

Физиолого-биохимические признаки

Штамм растет в аэробных условиях, в диапазоне температуры от +10 до +40°С, с оптимумом роста при 24±2°С.

Способен образовывать кислоту при росте на арабинозе, фруктозе, лактозе, мальтозе, сахарозе, маннозе; слабо утилизирует: рамнозу, галактозу, глюкозу, инозитол, маннитол. Не использует сорбитол (Фиг. 3).

Способен к гидролизу казеина, крахмала, карбоксиметилцеллюлозы.

В качестве источника азота использует нитратные, аммонийные соединения, гидролизаты белков, аминокислоты.

Чувствителен к антибиотикам: эритромицину (5 мкг), левофлоксацину (5 мкг), ванкомицину (5 мкг) и амоксициллину (20 мкг).

Штамм Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ac-2938D не патогенен.

Хранение и поддержание жизнеспособности штамма

Штамм можно хранить при +4°С и поддерживать путем пересева раз в 3-4 недели в пробирки со скошенным овсяным агаром.

Длительное хранение штамма при температуре от -20 до -80°С может быть обеспечено культивированием в жидкой питательной среде, содержащей глюкозу, гидролизат белков, дрожжевой экстракт, минеральные соли в течение 3-5 суток, разлив культуральной жидкости в специальные емкости для хранения при низких температурах с добавлением веществ-криопротекторов, соблюдая условия стерильности.

Изобретение иллюстрируется следующими графическими материалами:

На Фиг. 1 изображена структурная формула молекулы дутомицина.

На Фиг. 2 представлена электронная микрофотография мицелия и спор штамма Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ac-2938D, сделанная на 14-е сутки роста культуры на овсяном агаре при 28°С (Cambridge Instruments CamScan S2).

На Фиг. 3 отражена способность штамма Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ac-2938D образовывать кислоту при росте на среде с единственным источником углерода: верхний ряд слева направо: арабиноза, фруктоза, лактоза, мальтоза, манноза, сахароза; средний ряд: галактоза, глюкоза, инозитол, маннит, рамноза; нижний ряд: сорбитол, минеральная основа без источника углерода.

На Фиг. 4 представлены результаты тестирования культуральной жидкости Streptomyces mirabilis KB13 на репортерных тест-организмах: E.coli dtolC JW5503 (1) и E.coli BW25113 с частичной делецией в гене lptD (2), в качестве референсных антибиотиков использованы кларитромицин (Klar) и налидиксовая кислота (Nal).

На Фиг. 5 представлены результаты ВЭЖХ-анализа активной фракции (красный пик), извлеченной 100% ацетонитрилом из культуральной жидкости Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ac-2938D.

На Фиг. 6 представлен спектр оптического поглощения активного компонента (дутомицина) в ультрафиолетовой и видимой областях.

На Фиг. 7 представлены культуральные характеристики штамма Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ac-2938D.

На Фиг. 8 представлены результаты ВЭЖХ-анализа образца чистого дутомицина (пик на 11, 014 мин) при длинах волн 205 нм, 254 нм, 360 нм и 500 нм.

Примеры осуществления изобретения

Сущность и практическая применимость настоящего изобретения поясняется следующими примерами:

Пример 1. Выделение и культивирование Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ас-2938D

Для исследования отбирали образец верхнего горизонта почвы (с глубины 0-5 см) под кленом остролистным Acer platanoides L. в июне 2021 года в Ботаническом саду МГУ имени М.В. Ломоносова (55.7077 с.ш. 37.52919 в.д.), помещали в стерильный контейнер и транспортировали в лабораторию. Почвенный образец освобождали от корней и просеивали через сито с диаметром пор 1 мм. Навеску массой 1 г использовали для приготовления серии последовательных десятикратных разведений с использованием стерильной воды, затем из суспензий 1:1000 и 1:100000 производили высев по 50 мкл на минеральный агар 1 (г/л): крахмал растворимый - 20,0; K₂HPO₄ - 0,5; MgSO₄×7H₂O - 0,5; KNO₃ - 1,0; NaCl - 0,5; FeSO₄×7H₂O - 0,01; агар - 20 [10]. Для ограничения роста грибов и грамотрицательных бактерий в среду перед разливом добавляли антибиотики: нистатин (250 мкг/мл) и налидиксовую кислоту (10 мкг/мл) соответственно. Засеянные чашки Петри инкубировали при 28°С.

По истечении двух недель выросшие колонии мицелиальных прокариот выделяли в отдельные изоляты, среди которых проводили скрининг по антагонистической активности

в отношении специально сконструированного репортерного штамма JW5503 ΔtolC -pDualrep2 [11].

Разработанная репортерная конструкция представляет собой штамм грамотрицательной бактерии Е. coli JW5503 с инактивированным геном tolC, который кодирует один из компонентов AcrAB-TolC системы, ответственной за откачку из клетки различных ксенобиотиков. Модифицированные таким образом клетки лишены способности к синтезу белка TolC, а значит, являются значительно более чувствительными ко многим антибиотикам, в том числе к тем, которые подавляют рост только грамположительных бактерий. Кроме того, данный штамм трансформирован плазмидой pDualrep2, несущей гены для синтеза двух флюоресцентных белков TurboRFP и Katushka2S, которые позволяют определять два из возможных механизмов ингибирующего действия исследуемого агента на репортерные клетки. В случае попадания в клетку веществ, вызывающих повреждения ДНК, в ней активируется синтез белков, необходимых для репарации ДНК (так называемый SOS-ответ), однако, в репортерной системе в этом случае происходит увеличение экспрессии флюоресцентного белка TurboRFP, который можно детектировать при 553/574 нм. Если сублетальные концентрации тестируемого вещества нарушают процесс синтеза белка в клетках репортерного штамма, то под действием генетически измененного аттенюатора триптофанового оперона в них вырабатывается другой флюоресцентный белок - Katushka2S (максимумы поглощения/испускания составляют 588/633 нм).

С помощью данной репортерной системы среди выделенных культур мицелиальных прокариот был выявлен штамм KB13, вызывавший ингибирование роста репортерной системы, но слабо инициирующий выработку флюоресцентного белка TurboRFP (Фиг. 4).

Пример 2. Получение дутомицина с использованием нового штамма-продуцента

Пример 2.1. Культивирование штамма-продуцента

Клетки Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ac-2938D выращивали в 100 мл жидкой питательной среды следующего состава (г/л): глюкоза - 10, пептон - 10, дрожжевой экстракт - 2, гидролизат казеина - 2, NaCl - 6,0, вода - остальное (рН после автоклавирования при 0,5 атм составляет 7,0-7,2). Культивирование производили в 250 мл конических колбах при 28°С и перемешивании на орбитальном шейкере в течение 3 суток. Полученную ферментационную жидкость с клетками продуцента в концентрации 10⁶ кл/мл использовали как посевной материал, засевая им в объеме внесения 5-10% пять конических колб общим объемом 750 мл, содержащие по 100 мл жидкой овсяной среды. Для приготовления жидкой овсяной среды 50 г овсяных хлопьев «Геркулес» замачивали на 8-10 часов в 1 л водопроводной воды, затем автоклавировали 20 минут при 121°С, фильтровали через 4 слоя марли, отжимали, доливали воды до прежнего объема, доводили рН до 7,0 и вновь автоклавировали в том же режиме.

Засеянные колбы в течение 5 суток инкубировали на орбитальном шейкере при 220 об/мин и 28°С. По окончании срока культивирования ферментационную жидкость сливали из колб, подкисляли до рН 3 с помощью 1М HCl и центрифугировали на Centrifuge 5910R (Eppendorf) в течение 10 минут при скорости 4500 об/мин. Супернатант декантировали, а осадок трижды заливали ацетоном порциями по 50 мл, для обеспечения полноты экстракции. Все полученные порции были объединены, профильтрованы через фильтр, стойкий к растворителю (бумажный, «синяя лента») и упарены на роторном испарителе под вакуумом.

Пример 2.2. Подготовка хроматографической колонки и сорбента

В чистую и сухую колонку для твердофазной экстракции помещали 2 мл сухого сорбента силикагеля 60А (0,040-0,063 мм), заливали 10 мл дихлорметана (ДХМ). После полного просачивания через сорбент колонку можно использовать для нанесения разделяемой смеси. Данная процедура применяется для достижения стабильности времен удерживания веществ на сорбенте.

Пример 2.3. Идентификация и выделение дутомицина из ферментационной жидкости

Сухой остаток, полученный в примере 2.1, перерастворяли в 30 мл дихлорметана (ДХМ) и промывали водой трижды до исчезновения окраски водной фазы. Затем фазу с ДХМ наносили на колонку с силикагелем 60А, подготовленную согласно п. 2.2.

После этого колонку элюировали растворами ДХМ:метанол, смешанными в соотношениях 100:0, 75:25, 50:50, 25:75, 0:100.

Активность полученных фракций оценивали по способности подавлять рост репортерных штаммов: E.coli dtolC JW5503 [11] и E.coli BW25113 с частичной делецией в гене 1ptD [12], трансформированных плазмидой pDualrep2 (Фиг. 4). Противомикробная активность была детектирована только во фракции 75:25.

Данную активную фракцию разделяли при помощи высокоэффективной хроматографии высокого давления (Фиг. 5) на ВЭЖХ-системе Vanquish Flex UHPLC System, используя детектор Diode Array (ThermoFisher Scientific), оснащенный колонкой Luna® 5 μm С18(2) 100 A, 250×4.6 mm (Phenomenex). Все полученные пробы тестировали на репортерных штаммах как описано выше, определяли активную фракцию и концентрировали ее на роторном испарителе.

Идентификацию активного вещества проводили методом хроматомасс-спектрометрии высокого разрешения, с использованием масс-спектрометра Bruker maXis II 4G ETD, хроматографа UltiMate 3000, оснащенного колонкой Acclaim RSLC 120 CI8 2.2 μm 2.1×100 mm. Масс-спектры обрабатывали с использованием программ OpenChrom Lablicate Edition (1.4.0.202201211106), TOPPView v. 2.6.0 [PMID: 17237091]. Структуру активного вещества устанавливали с использованием GNPS [PMID: 27504778], NPAtlas [PMID: 34718710, PMID: 31807684], Dictionary of Natural Products databases.

В соответствии со средней молекулярной массой (854,336 г/моль) был определен атомарный состав и молекулярная формула активного вещества (С₄₄Н₅₄О₁₇), а с помощью открытой базы данных GNPS-LIBRARY проведена его идентификация. Время удержания на гидрофобной колонке (оценочная гидрофобность) и оптический спектр поглощения (Фиг. 6) использованы в качестве данных, подтверждающих масс-спектрометрическую идентификацию.

Вес сухого остатка активной фракции, полученной из 0,5 л ферментационной среды, составил около 67 мг. ВЭЖХ-анализ показал, что полученный образец представляет собой дутомицин с 96% чистотой (Фиг. 8). Таким образом продуктивность штамма Streptomyces mirabilis KB13 ВКМ Ac-2938D можно определить как 134 мг/л.

Все публикации, патенты и заявки на патенты включены в настоящий документ посредством ссылки. Хотя в вышеприведенном описании это изобретение было описано в отношении некоторых предпочтительных вариантов его осуществления, и многие детали были изложены в целях иллюстрации, для специалистов в данной области техники будет очевидно, что изобретение допускает дополнительные варианты осуществления и что некоторые детали, описанные в данном документе, могут значительно изменяться без отклонения от сущности изобретения.

Использование терминов в единственном числе в контексте описания изобретения должно толковаться как охватывающее как единственное, так и множественное число, если иное не указано в данном документе или явно не противоречит контексту. Термины «состоящий из», «имеющий», «включающий» и «содержащий» следует толковать как неограничивающие термины, т.е. означающие «включая, но не ограничиваясь», если не указано иное. Перечисление диапазонов значений в данном документе просто предназначено для использования в качестве сокращенного способа индивидуальной ссылки на каждое отдельное значение, попадающее в этот диапазон, если здесь не указано иное, и каждое отдельное значение включено в спецификацию, как если бы оно было отдельно изложено в данном документе. Все способы, описанные в данном документе, могут выполняться в любом подходящем порядке, если иное не указано в данном документе или иным образом явно не противоречит контексту. Использование любых и всех примеров или иллюстративного языка (например, «такой как»), представленных в данном документе, предназначено просто для лучшего описания изобретения и не налагает ограничения на объем изобретения, если иное не заявлено. Никакие формулировки в описании не следует истолковывать как указывающие на какой-либо не заявленный элемент как существенный для практического применения изобретения.

Литература

1. Sinitsky, M.Yu.; Tsepokina, A.V.; Khutornaya, M.V.; Ponasenko, A.V.; Sumin, A.N. Genetic Basis of Anthracyclines Cardiotoxicity: Literature Review. Acta biomedica scientifica 2021, 6, 27-38, doi:10.29413/ABS.2021-6.4.3.

2. Xuan, L.-J.; Xu, S.-H.; Zhang, H.-L.; Xu, Y.-M.; Chen, M.-Q. Dutomycin, a New Anthracycline Antibiotic from Streptomyces. J. Antibiot. 1992, 45, 1974-1976, doi: 10.7164/antibiotics.45.1974.

3. Xu, R.; Hu, D.; Lin, J.; Tang, J.; Zhan, R.; Liu, G.; Sun, L. The Critical Role of 12-Methyl Group of Anthracycline Dutomycin to Its Antiproliferative Activity. Molecules 2022, 27, 3348, doi: 10.3390/molecules27103348.

4. Sun, L.; Wang, S.; Zhang, S.; Shao, L.; Zhang, Q.; Skidmore, C; Chang, C.-W.T.; Yu, D.; Zhan, J. Characterization of Three Tailoring Enzymes in Dutomycin Biosynthesis and Generation of a Potent Antibacterial Analogue. ACS Chem. Biol. 2016, 11, 1992-2001, doi:10.1021/acschembio.6b00245.

5. Jang, M.; Hara, S.; Kim, G.-H.; Kim, S.M.; Son, S.; Kwon, M.; Ryoo, I.-J.; Seo, H.; Kim, M.J.; Kim, N.-D.; et al. Dutomycin Induces Autophagy and Apoptosis by Targeting the Serine Protease Inhibitor SERPINB6. ACS Chem. Biol. 2021, 16, 360-370, doi:10.1021/acschembio.0c00889.

6. Nishimura, H. Minomycin,a New Antibiotic Pigment from a Streptomyces Sp.Journal of Antibiotics Ser. A 1960, 13.

7. Zakalyukina, Y.V.; Birykov, M.V.; Lukianov, D.A.; Shiriaev, D.I.; Komarova, E.S.; Skvortsov, D.A.; Kostyukevich, Y.; Tashlitsky, V.N.; Polshakov, V.I.; Nikolaev, E.; et al. Nybomycin-Producing Streptomyces Isolated from Carpenter Ant Camponotus Vagus. Biochimie 2019,160, doi:10.1016/j.biochi.2019.02.010.

8. Okonechnikov, K.; Golosova, O.; Fursov, M.; the UGENE team Unipro UGENE: A Unified Bioinformatics Toolkit. Bioinformatics 2012, 28, 1166-1167, doi: 10.1093/bioinformatics/bts091.

9. Shirling, E.B.; Gottlieb, D. Methods for Characterization of Streptomyces Species. International Journal of Systematic Bacteriology 1966, 16, 313-340, doi:10.1099/00207713-16-3-313.

10. Гаузе, Г.Ф.; Преображенская, Т.П.; Свешникова, М.А.; Терехова, Л.П.; Максимова, Т.С. Определитель актиномицетов. Роды Streptomyces, Streptoverticillium, Chainia; Наука: Москва, 1983;

11. Osterman, I.A.; Komarova, E.S.; Shiryaev, D.I.; Korniltsev, LA.; Khven, I.M.; Lukyanov, D.A.; Tashlitsky, V.N.; Serebryakova, M.V.; Efremenkova, O.V.; Ivanenkov, Y.A.; et al. Sorting Out Antibiotics' Mechanisms of Action: A Double Fluorescent Protein Reporter for High-Throughput Screening of Ribosome and DNA Biosynthesis Inhibitors. Antimicrob Agents Chemother 2016, 60, 7481-7489, doi:10.1128/AAC.02117-16.

12. Orelle, C; Carlson, S.; Kaushal, В.; Almutairi, M.M.; Liu, H.; Ochabowicz, A.; Quan, S.; Pham, V.C.; Squires, C.L.; Murphy, B.T.; et al. Tools for Characterizing Bacterial Protein Synthesis Inhibitors. Antimicrob Agents Chemother 2013, 57, 5994-6004, doi: 10.1128/AAC.01673-13.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой штамм Streptomyces mirabilis KB13, депонированный во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов ФГБУ «ФИЦ «Пущинский Научный Центр Биологических Исследований Российской Академии Наук» под регистрационным номером ВКМ Ас-2938D, – продуцент дутомицина. Данный штамм способен продуцировать ферментационную жидкость с высоким содержанием антибиотика дутомицина. 8 ил., 2 пр.

Штамм Streptomyces mirabilis KB13, депонированный во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов ФГБУ «ФИЦ «Пущинский Научный Центр Биологических Исследований Российской Академии Наук» под регистрационным номером ВКМ Ас-2938D, – продуцент дутомицина.