Макроциклический ингибитор тирозинкиназы и его применение Российский патент 2023 года по МПК C07D471/22 C07D498/22 A61K31/4375 A61K31/439 A61K31/519 A61P25/28 A61P29/00 A61P35/00 A61P37/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к технической области медицины и, в частности, к макроциклическому ингибитору тирозинкиназы или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру. Тирозинкиназа представляет собой один или несколько из элементов из числа TRK, ALK и/или ROS1. Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции или препарату, содержащему соединение или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или стереоизомер, способу получения соединения или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или стереоизомера и применениям соединения или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или стереоизомера.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Рак, также известный как злокачественная опухоль, представляет серьезную угрозу для здоровья и жизни человека. В 2004 году в мире от рака умерло 7,4 миллиона человек. В 2008 году было проведено третье национальное исследование причин смерти в Китае, результаты которого показали, что за последние 30 лет уровень смертности от рака в Китае увеличился примерно на 80%; при этом почти 2 миллиона человек умирают от рака ежегодно, что делает ситуацию очень тревожной.

В последние годы молекулярная таргетная терапия стала значительным прорывом в лечении рака. По сравнению с традиционными методами лечения, такими как хирургическое вмешательство, лучевая терапия и химиотерапия, молекулярная таргетная терапия открывает новые возможности для лечения рака благодаря ее высокой специфичности и относительно низким побочным эффектам и постепенно становится стандартной схемой лечения для пациентов с поздними стадиями рака. Протеинкиназы, которые представляют собой широкую область таргетной терапии, являются ключевыми регуляторами роста, пролиферации и выживания клеток; при этом к развитию рака могут приводить как генетические, так и эпигенетические изменения.

Киназа анапластической лимфомы (ALK) получила свое название в связи с тем, что она была впервые открыта в клеточной линии анапластической крупноклеточной лимфомы AMS3. EML4 принадлежит к семейству белков, ассоциированных с микротрубочками иглокожих, и состоит из N-концевой основной области, гидрофобной области белка, ассоциированного с микротрубочками иглокожих, и области с повторами WD. Сообщалось, что ген слияния EML4-ALK связан с развитием опухолей, и наиболее важную роль при этом играет N-концевая основная область. Soda et al. (2007) впервые сообщили о слиянии генов EML4-ALK при немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ), которое является результатом инверсии короткого плеча хромосомы 2; при этом EML4 слит с внутриклеточным киназным участком ALK по N-концу. Сайты слияния EML4-ALK варьируют; при этом образуются по меньшей мере 8 мутантов EML4-ALK. Мутации ALK были обнаружены при различных злокачественных новообразованиях, включая анапластическую крупноклеточную лимфому (ALCL). немелкоклеточный рак легкого, воспалительную миофибробластическую опухоль, колоректальный рак, рак молочной железы и некоторые другие.

ROS1 также является рецептором тирозинкиназы, который привлекает большое внимание. ROS1 находится в области 6q21, а его полноразмерная кДНК содержит 44 экзона. ROS1 кодирует 2347 аминокислот с общей молекулярной массой 259 кДа. Основная структура ROS 1 состоит из внемембранного участка (аминокислоты 1-1861), трансмембранного участка (аминокислоты 1862-1882) и активного тирозинкиназного участка (аминокислоты 1883-2347), находящегося внутри мембраны. Первый сайт слияния протоонкогенов ROS1 (FIG-ROS1) обнаружен в глиобластоме; при этом промежуточная делеция 240 оснований на 6q21 приводит к экспрессии слитого белка FIG-ROS1, который активирует тирозинкиназу. Мутации ROS1 также были обнаружены при различных злокачественных новообразованиях, включая глиобластому немелкоклеточный рак легкого, колоректальный рак, рак молочной железы и тому подобное.

Trk представляют собой семейство тирозинкиназ, активируемых фактором роста нервов; они включают три подтипа (TrkA, TrkB и TrkC) и кодируются генами NTRK1 (рецепторная тирозинкиназа 1 нервных клеток), NTRK2 и NTRK3 соответственно. После фосфорилирования Trk-киназ могут активироваться нисходящие сигнальные молекулы, которые благодаря этому также могут участвовать в регуляции пролиферации клеток, их дифференцировки, метаболизма, апоптоза и т.п. Ген NTRK может сливаться с другими генами, что вызывает высокую экспрессию Trk-киназ или конститутивное повышение активности Trk-киназ, что в конечном итоге может привести к развитию злокачественного новообразования. Слитые гены NTRK обнаруживаются во многих солидных опухолях у взрослых и детей, включая рак молочной железы, колоректальный рак, немелкоклеточный рак легкого и различные саркомы.

Три вышеупомянутые тирозинкиназы характеризуются значительной гомологией. Ген ROS1 и ген ALK имеют гомологию 49% в последовательности тирозинкиназного участка и высокую гомологию (77%) в АТФ-связывающей области каталитического киназного участка. Последовательности киназного участка TRK А/В/С имеют гомологию более 80%. Ген TRK А, ген ROS1 и ген ALK имеют гомологию около 40% в последовательности тирозинкиназного участка. Коммерчески доступный ингибитор ALK кризотиниб одновременно подавляет активность ROS1 и TRK; ингибитор TRK энтректиниб также обладает способностью подавлять активность ALK и ROS1.

В настоящее время как коммерчески доступные ингибиторы ALK/ROS1, так и ингибиторы NTRK, в отношении которых в 2017 году были поданы заявки на новый лекарственный препарат (NDA), продемонстрировали возникновение лекарственной устойчивости на фоне длительного применения, в основном из-за того, что аминокислотная последовательность киназы изменяется в результате мутации гена, например в общих мутационных сайтах в киназах ALK, включая L1196M, L1152R, G1202R, G1269A, 1151Tins, S1206Y, C1156Y, F1174L и т.п., общих мутационных сайтах в киназах ROS1, включая G2032R, D2033N, S1986F, L2026M, L1951R и т.п., и в общих мутационных сайтах в киназах NTRK, включая G595R, G623R, G667C, G623E, L686M и т.п. Таким образом, разработка противоопухолевого лекарственного препарата, обладающего высокой эффективностью и низкой токсичностью и способного решить проблему лекарственной устойчивости, имеет очень важное клиническое значение.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для решения вышеупомянутой проблемы в настоящем изобретении предлагается соединение с новой структурой, способное подавлять активность тирозинкиназного рецептора, или его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир или стереоизомер. Тирозинкиназный рецептор может представлять собой один или несколько из следующих элементов: TRK, ALK и/или ROS1. Кроме того, соединение имеет более высокую ингибирующую активность в отношении одной или нескольких киназ из числа TrkA, TrkB и TrkC, а также характеризуется более высокими значениями экспозиции и биодоступности в организме.

Для решения вышеупомянутой проблемы в настоящем изобретении также предлагается способ лечения злокачественного новообразования, основанный на воздействии на один или несколько тирозинказных рецепторов из числа TRK, ALK и ROS1 с помощью соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или стереоизомера. Злокачественное новообразование может выработать устойчивость к одному или большему количеству существующих лекарственных препаратов, причем такая устойчивость может быть вызвана мутацией в генах, кодирующих белки-мишени. Предпочтительно, мутантный ген представляет собой ген NTRK.

В одном аспекте настоящего изобретения предлагается соединение общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир или стереоизомер,

где:

М¹, М², М³, М⁴, М⁵, М⁶ и М⁷ каждый независимо выбран из С, (R¹) и N;

X¹, X², X³ и L¹, если они присутствуют, каждый независимо выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)-, -О-, -S-, -S(O)- и -S(O)₂-;

цикл А выбран из 3-10-членного циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, 6-8-членного моноарила, 8-10-членного конденсированного арила, 5-10-членного моногетероарила и 8-10-членного конденсированного гетероарила;

цикл В отсутствует или выбран из 3-10-членного циклоалкила и 3-10-членного гетероциклила, а когда цикл В отсутствует, X² и X³ напрямую соединены химической связью;

R¹, R², R³, R⁵ и R⁶, если они присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, галогена, нитро, циано и следующих групп, опционально замещенных одним или большим количеством Q¹: С_1-6 алкил, С_2-6 алкенил, С_2-6 алкинил, -OR^a, -SR^a, -NR^aR^b, -C(O)R^a, -C(O)OR^a, -OC(O)R^a, -OC(O)OR^a, -OC(O)NR^aR^b, -C(O)NR^aR^b, -NR^aC(O)R^b, -NR^aC(O)OR^b, -NR^aC(O)NR^aR^b, -S(O)R^a, -S(O)OR^a, -OS(O)R^a, -OS(O)OR^a, -OS(O)NR^aR^b, -S(O)NR^aR^b, -NR^aS(O)R^b, -NR^aS(O)OR^b, -NR^aS(O)NR^aR^b, -S(O)₂R^a, -S(O)₂OR^a, -OS(O)₂R^a, -OS(O)₂OR^a, -OS(O)₂NR^aR^b, -S(O)₂NR^aR^b, -NR^aS(O)₂R^b, -NR^aS(O)₂OR^b, -NR^aS(O)₂NR^aR^b, 3-10-членный циклоалкил, 3-10-членный гетероциклил, 6-10-членный ар ил и 5-10-членный гетероарил; Q¹, если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена, нитро, циано, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкил, гало С_1-6 алкокси, 3-10-членного циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, 6-10-членного арила и 5-10-членного гетероарила;

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода и следующих групп, опционально замещенных одним или большим количеством Q²: С_1-6 алкил, алкенил, алкинил, -C(O)R^a, -C(O)OR^a, -C(O)NR^aR^b, -S(O)R^a, -S(O)OR^a, -S(O)NR^aR^b, -S(O)₂R^a, -S(O)₂OR^a, -S(O)₂NR^aR^b, 3-10-членный циклоалкил, 3-10-членный гетероциклил, 6-10-членный арил и 5-10-членный гетероарил; Q², если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена, нитро, циано, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила, гало С_1-6 алкокси, 1, 3-10-членного циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, 6-10-членного арила и 5-10-членного гетероарила;

или X¹, вместе с L¹, образует 3-10-членный циклоалкил, 3-10-членный гетероциклил или 5-6-членный моногетероарил; и/или L¹, вместе с некоторыми атомами, входящими в цикл А, образует 3-10-членный циклоалкил или 3-10-членный гетероциклил; и/или X², вместе с некоторыми атомами, входящими в цикл А, образует 3-10-членный циклоалкил или 3-10-членный гетероциклил; 3-10-членный циклоалкил, 3-10-членный гетероциклил и 5-6-членный моногетероарил, опционально каждый независимо замещен заместителями, выбранными из: R⁴, R⁵, R⁶, галогена, амино, гидрокси, нитро, циано, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила и гало С_1-6 алкокси;

R^a и R^b, когда они присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила, гало С_1-6 алкокси, 3-10-членного циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, 6-10-членного арила и 5-10-членного гетероарила; и

m, n, р, q и t каждый независимо выбраны из 0, 1, 2, 3, 4 и 5.

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, где:

М¹, М², М³, М⁴, М⁵, М⁶ и М⁷ каждый независимо выбран из С, (R¹) и N, по меньшей мере один из которых представляет собой N;

X¹, X², X³ и L¹, если они присутствуют, каждый независимо выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)- и -О-;

цикл А выбран из 6-8-членного моноарила и 5-8-членного моногетероарила;

цикл В отсутствует или выбран из 3-8-членного циклоалкила и 3-8-членного гетероциклила;

R¹, R², R³, R⁵ и R⁶, если они присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, галогена, нитро, циано и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q¹: С_1-6 алкил, -OR^a, -NR^aR^b, -C(O)R^a, -C(O)OR^a, -OC(O)R^a, -OC(O)OR^a, -OC(O)NR^aR^b, -C(O)NR^aR^b, -NR^aC(O)R^b, -NR^aC(O)OR^b, -NR^aC(O)NR^aR^b, 3-8-членный циклоалкил, 3-8-членный гетероциклил, 6-8-членный арил и 5-8-членный гетероарил; Q¹, если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена, нитро, циано, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила и гало С_1-6 алкокси;

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q²: С_1-6 алкил, -C(O)R^a, -C(O)OR^a, -C(O)NR^aR^b, 3-8-членный циклоалкил и 3-8-членный гетероциклил; Q², если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена, нитро, циано, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила, гало С_1-6 алкокси, 3-8-членного циклоалкила и 3-8-членного гетероциклила;

или X¹, вместе с L¹, образует 3-8-членный циклоалкил, 3-8-членный гетероциклил или 5-6-членный моногетероарил; и/или L¹, вместе с некоторыми атомами, входящими в цикл А, образует 3-8-членный циклоалкил или 3-8-членный гетероциклил; и/или X², вместе с некоторыми атомами, входящими в цикл А образует 3-8-членный циклоалкил или 3-8-членный гетероциклил; 3-8-членный циклоалкил, 3-8-членный гетероциклил и 5-6-членный моногетероарил, опционально каждый независимо замещен заместителями, выбранными из: R⁴, R⁵, R⁶, галогена, амино, гидрокси, нитро, циано, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила и гало С_1-6 алкокси;

R^a и R^b, когда они присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила, гало С_1-6 алкокси, 3-8-членного циклоалкила и 3-8-членного гетероциклила; а также

m, n, р, q и t каждый независимо выбраны из 0, 1, 2, 3, 4 и 5.

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, где:

М¹, М², М³, М⁴, М⁵, М⁶ и М⁷ каждый независимо выбран из С, (R¹) и N, по меньшей мере один из которых представляет собой N;

X¹ и L¹ каждый независимо выбран из -C(R⁵)(R⁶)- и -N(R⁴)-;

X² и X³, если они присутствуют, каждый независимо выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)- и -О-;

цикл А выбран из фенила и 5-6-членного моногетероарила;

цикл В отсутствует или выбран из 3-6-членного моноциклоалкила и 3-6-членного моногетероциклила;

R¹, R², R³, R⁵ и R⁶, если они присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, галогена, нитро, циано и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q¹: С_1-6 алкил, -OR^a, -NR^aR^b, -C(O)R^a, -C(O)OR^a, -C(O)NR^aR^b, 3-6-членный циклоалкил, 3-6-членный гетероциклил, фенил и 5-6-членный гетероарил; Q¹, если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена, нитро, циано, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила и гало С_1-6 алкокси;

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q²: С_1-6 алкил, -C(O)R^a, 3-6-членный циклоалкил и 3-6-членный гетероциклил; Q², если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена, нитро, циано, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила, гало С_1-6 алкокси, 3-6-членного циклоалкила и 3-6-членного гетероциклила;

или X¹, вместе с L¹, образует 3-6-членный моногетероциклил или 5-6-членный моногетероарил; и/или L¹, вместе с некоторыми атомами, входящими в цикл А, образует 3-6-членный моноциклоалкил или 3-6-членный моногетероциклил; и/или X², вместе с некоторыми атомами, входящими в цикл А образует 3-6-членный моноциклоалкил и 3-6-членный моногетероциклил; 3-6-членный моногетероциклил, 5-6-членный моногетероарил и 3-6-членный моноциклоалкил опционально каждый независимо замещен заместителями, выбранными из: R⁴, R⁵, R⁶, галогена, амино, гидрокси, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила и гало С_1-6 алкокси;

R^a и R^b, если они присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила, гало С_1-6 алкокси, 3-6-членного циклоалкила и 3-6-членного гетероциклила;

m представляет собой 1, 2 или 3;

n, р и q каждый независимо выбраны из 0, 1, 2 и 3; а также

t представляет собой 0 или 1.

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, причем указанное соединение имеет структуру, представленную общей формулой (II),

где:

М², М⁵ и М⁶ каждый независимо выбран из СН и N; а также

X¹, X², X³, L¹, A, R², m, n, р и q соответствуют приведенному выше описанию для общей формулы (I).

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, причем указанное соединение имеет структуру, представленную общей формулой (III),

где:

цикл С выбран из 3-6-членного насыщенного моногетероциклила и 5-6-членного азотсодержащего моногетероарила, предпочтительно 5-6-членного насыщенного моногетероциклила; 3-6-членный насыщенный моногетероциклил и 5-6-членный азотсодержащий моногетероарил опционально каждый независимо замещен заместителями, выбранными из: R⁴, R⁵, R⁶, галогена, амино, гидрокси, С_1-4 алкила, С_1-4 алкокси, С_1-4 алкиламино, ди(С_1-4 алкил)амино, гало С_1-4 алкила, гидрокси С_1-4 алкила, амино С_1-4 алкила и гало С_1-4 алкокси:

-(Х²)_р- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)-C(R⁵)(R⁶)-, -O-C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-N(R⁴)- и -C(R⁵)(R⁶)-O-, а его левая химическая связь соединена с циклом А, а его правая химическая связь соединена с X³;

-(X³)_q- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)-C(R⁵)(R⁶)-, -O-C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-N(R⁴)- и -C(R⁵)(R⁶)-O-, и его левая химическая связь соединена с X², а его правая химическая связь соединена с карбонилом;

цикл А выбран из фенила и 5-6-членного моногетероарила, предпочтительно 5-6-членного азотсодержащего гетероарила;

R², если присутствует, независимо выбран из водорода, галогена и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q¹: С_1-4 алкил, -OR^a и -NR^aR^b; Q¹, если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена, нитро, циано, С_1-4 алкила, С_1-4 алкокси, С_1-4 алкиламино, ди(С_1-4 алкил)амино, гало С_1-4 алкила, гидрокси С_1-4 алкила, амино С_1-4 алкила и гало С_1-4 алкокси:

R^a и R^b, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода и C_1-4 алкила;

R⁵ и R⁶, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, галогена, гидрокси, амино, С_1-4 алкила и С_1-4 алкокси;

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода и С_1-4 алкила, опционально замещенного одним-двумя Q²; Q², если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена и C_1-4 алкокси;

n представляет собой 0, 1 или 2; и

М¹, М⁵ и М⁶ соответствуют приведенному выше описанию для общей формулы (I) или (II).

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, причем цикл С представляет собой опционально замещенный 5-6-членный насыщенный моногетероциклил, более предпочтительно опционально замещенный 5-6 насыщенный азотсодержащий гетероциклил.

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, причем указанное соединение имеет структуру, представленную общей формулой (IV),

где каждый опциональный заместитель в цикле С независимо выбран из R⁴, R⁵, R⁶, галогена, амино, гидрокси, нитро, циано, С_1-6 алкила, С_1-6 алкокси, С_1-6 алкиламино, ди(С_1-6 алкил)амино, гало С_1-6 алкила, гидрокси С_1-6 алкила, амино С_1-6 алкила и гало С_1-6 алкокси;

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, где:

цикл С выбран из азиридинила, азетидинила, пирролидинила, имидазолидинила, пиразолидинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, гексагидропиридазинила, гексагидропиримидинила, пирролила, имидазолила, пиразолила, пиридинила или пиримидинила, каждый из которых опционально замещен заместителями, выбранными из фтора, хлора, брома, йода, гидрокси, амино, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, втор-бутила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, метиламино, диметиламино. этиламино, диэтиламино, трифторметила и трифторметокси;

цикл А выбран из фенила, пирролила, имидазолила, пиразолила, тиазолила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, изотиазолила, 1,2,4-триазолила, 1,2,3-триазолила, 1,3,4-оксадиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4-тиадиазолила, 1,2,4-тиадиазолила, пиридинила, пиримидинила, пиридазинила, 1,3,5-триазинила и тетразинила;

R², если присутствует, независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, йода, гидрокси, амино, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, втор-бутила, метиламино, диметиламино, этиламино, диэтиламино, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, трифторметила и трифторметокси;

R⁵ и R⁶, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, йода, гидрокси, амино, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, втор-бутила, метокси, этокси, пропокси и изопропокси; и

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила и втор-бутила.

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанных выше общих формул (I)-(IV) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, где:

цикл А выбран из и , и, предпочтительно, волнистая линия с отметкой 1 представляет точку соединения цикла А с L¹, а волнистая линия с отметкой 2 представляет точку соединения цикла А с X²;

-(Х²)_р- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)-C(R⁵)(R⁶)- и -O-C(R⁵)(R⁶)-, и, предпочтительно, его левая химическая связь соединена с циклом А, а его правая химическая связь соединена с X³; и

-(X³)_q- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-N(R⁴)- и -C(R⁵)(R⁶)-O, и, предпочтительно, его левая химическая связь соединена с X², а его правая химическая связь соединена с карбонилом.

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, причем указанное соединение имеет структуру, представленную общей формулой (V),

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, где:

X¹ представляет собой -N(R⁴)-;

L¹ представляет собой -C(R⁵)(R⁶)-;

цикл А выбран из фенила и 5-6-членного азотсодержащего гетероарила;

R², если присутствует, независимо выбран из водорода, галогена и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q¹: С_1-4 алкил, -OR^a и -NR^aR^b; Q¹, если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена, нитро, циано, С_1-4 алкила, С_1-4 алкокси, С_1-4 алкиламино, ди(С_1-4 алкил)амино, гало С_1-4 алкила, гидрокси С_1-4 алкила, амино С_1-4 алкила и гало С_1-4 алкокси;

R^a и R^b, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода и С_1-4 алкила;

R⁵ и R⁶, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, галогена, гидрокси, амино, С_1-4 алкила и С_1-4 алкокси;

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода и С_1-4 алкила, опционально замещенного одним-двумя Q²; Q², если присутствует, независимо выбран из гидрокси, амино, галогена и С_1-4 алкокси; а

n представляет собой 0, 1 или 2.

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, где:

цикл А выбран из фенила, пирролила, имидазолила, пиразолила, фурила, тиенила, тиазолила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, изотиазолила, 1,2,4-триазолила, 1,2,3-триазолила, 1,3,4-оксадиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4-тиадиазолила, 1,2,4-тиадиазолила, пиридинила, пиримидинила, пиридазинила, 1,3,5-триазинила и тетразинила;

R², если присутствует, независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, йода, гидрокси, амино, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, emop-бутила, метиламино, диметиламино, этиламино, диэтиламино, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, трифторметила и трифторметокси;

R⁵ и R⁶, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, йода, гидрокси, амино, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, втор-бутил, метокси, этокси, пропокси и изопропокси; и

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила и втор-бутила.

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, где:

цикл А выбран из и, и, предпочтительно, волнистая линия с отметкой 1 представляет точку соединения цикла A c L¹, а волнистая линия с отметкой 2 представляет точку соединения цикла А с X²;

-(Х²)_р- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)-C(R⁵)(R⁶)- и -O-C(R⁵)(R⁶)-, и, предпочтительно, его левая химическая связь соединена с циклом А а его правая химическая связь соединена с X³; и

-(X³)_q- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-N(R⁴)- и -C(R⁵)(R⁶)-O-, и, предпочтительно, его левая химическая связь соединена с X², а его правая химическая связь соединена с карбонилом.

Любой заместитель и любая опциональная группа заместителя в техническом решении, описанном выше в настоящей заявке, могут быть объединены друг с другом для создания нового и полного технического решения, и при этом созданное новое техническое решение будет входить в объем настоящего изобретения.

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, причем указанное соединение выбрано из:

В некоторых вариантах настоящее изобретение относится к соединению указанной выше общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или стереоизомеру, причем указанное соединение выбрано из:

В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическому препарату, содержащему соединение вышеуказанной общей формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или стереоизомер, а также один или большее количество фармацевтически приемлемых носителей и/или вспомогательных веществ. Фармацевтический препарат может представлять собой любую фармацевтически приемлемую форму выпуска. Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества представляют собой субстанции, которые нетоксичны, совместимы с активным ингредиентом и в других отношениях биологически совместимы с организмом. Выбор конкретного вспомогательного вещества будет зависеть от способа введения, используемого для лечения конкретного пациента, или типа заболевания и состояния. Примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ включают, помимо прочего, растворители, разбавители, диспергатор, суспендирующие агенты, поверхностно-активные вещества, изотонический агент, загустители, эмульгаторы, связующие агенты, смазывающие агенты, стабилизаторы, гидратирующие агенты, ускорители эмульгирования, буферы, абсорбенты, красители, ионообменные агенты, антиадгезивные агенты для пресс-форм, покрывающие агенты, ароматизаторы, антиоксиданты и тому подобное, которые широко применяются в области фармацевтики. При необходимости в фармацевтическую композицию могут быть дополнительно добавлены отдушки, консерванты, подсластители и т.п.

В некоторых вариантах осуществления изобретения указанные выше фармацевтические препараты можно вводить пациенту или субъекту, нуждающемуся в таком лечении, перорально, парентерально, ректально, интрапульмонально и т.п. Для перорального введения фармацевтическая композиция может быть приготовлена в виде лекарственных форм для перорального введения, например в виде таких обычных твердых лекарственных форм для перорального введения, как таблетки, капсулы, пилюли, гранулы и тому подобное; также она может быть приготовлена в виде жидких лекарственных форм для перорального введения, таких как растворы, суспензии, сиропы для приема внутрь и т.п. В процессе приготовления фармацевтических композиций в виде лекарственных форм для перорального введения могут быть добавлены подходящие наполнители, связующие агенты, разрыхлители, смазывающие агенты и тому подобное. Для парентерального введения указанные выше фармацевтические препараты также могут быть приготовлены в виде инъекционных лекарственных форм, в том числе в виде растворов для инъекций, стерильных порошков для инъекций и концентрированных растворов для инъекций. Инъекционные лекарственные формы могут быть приготовлены обычным способом, известным специалистам в области фармацевтики, без добавления каких-либо добавок во время приготовления, или, в зависимости от свойств лекарственного препарата, могут быть добавлены подходящие добавки. Для ректального введения фармацевтические композиции могут быть приготовлены в виде суппозиториев и т.п. Для интрапульмонального введения фармацевтические композиции могут быть приготовлены в виде препаратов для ингаляции, аэрозолей, порошкового спрея или спрея и т.п.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение указанной выше общей формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или стереоизомер, и один или несколько вторых терапевтически активных агентов для применения в комбинации с ингибиторами тирозинкиназы по настоящему изобретению для лечения и/или профилактики заболеваний, опосредованных тирозинкиназой, и связанных состояний, таких как боль, злокачественное новообразование, воспаление, нейродегенеративные заболевания, аутоиммунные заболевания, инфекционные заболевания и т.п.

Боль может иметь любое происхождение или этиологию, включая, помимо прочего, одну или несколько из следующих разновидностей боли: воспалительная боль, висцеральная боль, боль, вызванная злокачественным новообразованием, боль, вызванная химиотерапией, боль в ране, хирургическая и послеоперационная боль, боль при родах, острая боль, хроническая боль, непреодолимая боль, соматическая боль, ноцицептивная боль, нейропатическая боль, боль при кровотечении, иммуногенетическая боль, боль эндокринного происхождения, боль, вызванная метаболическиими нарушениями, кардиогенная боль, головная боль, фантомная боль в конечностях и зубная боль. Терапевтически активные агенты, пригодные для применения в комбинированной терапии боли, включают, помимо прочего, модуляторы каналов Nav1.7, опиоидные анальгетики, нестероидные противовоспалительные препараты, седативные средства, селективные/неселективные ингибиторы циклооксигеназы, противоэпилептические средства, антидепрессанты, местные анестетики, блокаторы 5-НТ рецепторов, агонисты 5-НТ рецепторов, алкалоиды спорыньи, блокаторы β-рецепторов, блокаторы мускариновых рецепторов, нитраты, витамин K и т.п.

Злокачественное новообразование включает, помимо прочего, один или несколько из следующих видов злокачественных новообразований: рак легкого, рак толстой кишки, рак простаты, рак молочной железы, рак печени, лимфома, рак щитовидной железы, множественная миелома, саркома мягких тканей, рак яичников, рак шейки матки, карцинома фаллопиевых труб, почечно-клеточная карцинома, рак желудка, стромальная опухоль желудочно-кишечного тракта, рак костей, базальноклеточная карцинома, рак брюшины, дерматофиброма, рак поджелудочной железы, рак пищевода, глиобластома, рак головы и шеи, воспалительная миофибробластическая опухоль и анапластическая крупноклеточная лимфома. Вторые терапевтически активные агенты, пригодные для применения в комбинированной терапии злокачественных новообразований, включают, помимо прочего, ингибиторы митоза, алкилирующие агенты, антиметаболиты, антисмысловую ДНК или РНК, противоопухолевые антибиотики, ингибиторы факторов роста, ингибиторы передачи сигналов, ингибиторы клеточного цикла, ингибиторы ферментов, модуляторы ретиноидных рецепторов, ингибиторы протеасом, ингибиторы топоизомеразы, модификаторы биологического ответа, гормоны, ингибиторы ангиогенеза, ингибиторы клеточного роста, антитела к белкам-мишеням, ингибиторы НМП-СоА редуктазы, ингибиторы пренилпротеинтрансферазы и т.п.

Воспаление включает, помимо прочего, атеросклероз, аллергию и воспаление, вызванное инфекцией или травмой. Терапевтически активные агенты, пригодные для применения в комбинированной терапии воспаления, включают, помимо прочего, стероидные противовоспалительные препараты и нестероидные противовоспалительные препараты.

Нейродегенеративное заболевание включает, помимо прочего, одно или несколько из следующих заболеваний: болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз и болезнь Хантингтона. Терапевтически активные агенты, пригодные для применения в комбинированной терапии нейродегенеративных заболеваний, включают, помимо прочего, дофаминомиметики, агонисты дофаминовых рецепторов, вещества, влияющие на метаболизм дофамина, антагонисты NMDA-рецепторов, ингибиторы рецепторов аденозина А_2А, вещества, влияющие на высвобождение и обратный захват дофамина, центральные антихолинергические средства, ингибиторы холинэстеразы, агонисты 5-НТ-рецепторов, антагонисты α2-адренергических рецепторов, антидепрессанты, агонисты холинергических рецепторов, ингибиторы β/γ секретазы, антагонисты Н3-рецепторов или антиоксидантные средства и т.п.

Аутоиммунное заболевание включает, помимо прочего, одно или несколько из следующих заболеваний: ревматоидный артрит, синдром Шегрена, диабет 1-го типа и красная волчанка. Терапевтически активные агенты, пригодные для применения в комбинированной терапии аутоиммунных заболеваний, включают, помимо прочего, болезнь-модифицирующие противоревматические препараты, нестероидные противовоспалительные препараты, глюкокортикоидные препараты, антагонисты ФНО, циклофосфамид, мофетила микофенолат циклоспорин и т.п.

Инфекционные заболевания включают трипаносомоз и т.п.

В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции дополнительно содержат одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, описанных выше.

В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение общей формулы (I), (II), (III), (IV) или (V) или его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир или стереоизомер и второй терапевтически активный агент могут присутствовать в одной лекарственной форме, т.е. в виде комбинированной лекарственной формы, или в отдельных лекарственных формах, вводимых субъекту одновременно или последовательно.

В другом аспекте настоящее изобретение также относится к применению соединения указанной выше общей формулы (I), (II), (III), (IV) или (V) или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или стереоизомера для приготовления лекарственных препаратов для лечения и/или профилактики заболеваний и связанных с ними состояний, опосредованных одной или большим количеством тирозинкиназ из числа TRK, ALK и/или ROS1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевания и связанные с ними состояния, опосредованные одной или большим количеством тирозинкиназ из числа TRK, ALK и/или ROS1, включают, помимо прочего, боль, злокачественное новообразование, воспаление, нейродегенеративное заболевание, аутоиммунное заболевание, инфекционное заболевание и т.п. Злокачественное новообразование включает, помимо прочего, рак легкого, рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак простаты, рак молочной железы, рак печени, рак желчного пузыря, холангиокарциному, лейкоз, меланому, лимфому, рак щитовидной железы, множественную миелому, саркому мягких тканей, рак яичников, рак шейки матки, карциному фаллопиевых труб, почечно-клеточную карциному, рак желудка, стромальную опухоль желудочно-кишечного тракта, рак костей, базальноклеточную карциному, рак брюшины, дерматофиброму рак поджелудочной железы, рак пищевода, глиобластому, рак головы и шеи, воспалительную миофибробластическую опухоль и анапластическую крупно клеточную лимфому, нейробластому и т.п. Боль, воспаление, нейродегенеративное заболевание, аутоиммунное заболевание и инфекционное заболевание определены выше.

В некоторых вариантах осуществления изобретения рак легкого включает мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточный рак легкого. В некоторых вариантах осуществления изобретения немелкоклеточный рак легкого включает аденокарциному легкого, плоскоклеточную карциному и крупноклеточную карциному.

В некоторых вариантах осуществления изобретения злокачественное новообразование, опосредованное одной или большим количеством тирозинкиназ из числа TRK, ALK и/или ROS1, включает злокачественное новообразование, которое по меньшей мере частично устойчиво к одному или большему количеству существующих таргетных терапевтически активных агентов.

В некоторых вариантах осуществления изобретения устойчивость злокачественного новообразования вызвана одной или большим количеством мутаций в генах, кодирующих рецепторы киназ TRK, ALK и/или ROS1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения мутационные сайты белка-мишени ALK находятся в положениях полипептидной цепи L1196M, L1152R, G1202R, G1269A, G1269S, 1151Tins, S1206R S1206Y/C, C1156Y, F1174L, F1174S, R1050H, F1245C/I/L/V, R1275L/Q, Т1151М, M1166R, I1170N, I1170S, I1171N, I1171T, I1171S, V1180L, I1183T, L1196M, A1200V L1204F, L1240V, D1270G Y1278S, R¹192P, G1128A, G1286R, T1343I, D1203N, Е1210К, F1174S, F1174C/L/V, F1245C/L, L1252R G1296M/Q, Т1151К7М, V1180L и т.п.. В некоторых вариантах осуществления изобретения мутационные сайты белка-мишени ROS1 находятся в положениях полипептидной цепи G2032R, D2033N, S1986F, L2026M, L1951R, L2155S, G2101A, K2003I и т.п.. В некоторых вариантах осуществления изобретения мутационные сайты белка-мишени TRK находятся в положениях полипептидной цепи G517R A542V, V573M, F589L, F589C, G595R, G595S, D596V, F600L, F646V, C656Y, C656F, L657V, G667S, G667C, Y676S, G623R G667C, G623E, L686M, G545R, A570V, Q596E, Q596P, V601G, F617L, F617C, G623S, D624Y R630K, C682Y, C682F, L683V, G693S, G713S, C685F, C685Y, L686V, G696A G639R и т.п..

В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение по настоящему изобретению также можно применять для лечения заболеваний и связанных с ними состояний, опосредованных тирозинкиназами, выбранными из числа JAK2, SRC, FYN, LYN, YES, FGR FAK, ARK5 или любой их комбинации, причем предпочтительно такими заболеваниями являются злокачественные новообразования.

В другом аспекте настоящее изобретение также относится к способу лечения заболеваний и связанных с ними состояний, которые опосредованы одной или большим количеством тирозинкиназ из числа TRK, ALK и ROS1, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения вышеупомянутой общей формулы (I), (II), (III), (IV) или (V) или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или стереоизомера, вышеупомянутого фармацевтической препарата или вышеупомянутой фармацевтической композиции, причем заболевания и связанные с ними состояния, которые опосредованы одной или большим количеством тирозинкиназ из числа TRK, ALK и ROS1, описаны выше.

«Эффективное количество» относится к дозе лекарственного препарата, которая способна ослабить, замедлить, ингибировать или излечить заболевание, имеющееся у субъекта. Вводимая доза определяется такими факторами, как способ введения лекарственного препарата, его фармакокинетика, тяжесть заболевания и индивидуальные характеристики (пол, вес, рост, возраст) субъекта.

В другом аспекте настоящее изобретение также относится к способу получения соединения общей формулы (I), который включает следующие стадии:

промежуточное соединение 1 и промежуточное соединение 2 подвергают ряду реакций, таких как реакция замещения, реакция снятия защиты, реакция ацилирования (с использованием ацилирующего реагента) и т.п. в присутствии органического растворителя и катализатора при надлежащей температуре с получением соединения общей формулы (I).

Заместители и переменные в приведенных выше формулах определены выше.

Органический растворитель включает обычный растворитель для проведения реакции, известный специалистам в данной области, который может быть полярным растворителем или неполярным растворителем, протонным растворителем или апротонным растворителем, и, предпочтительно, полярным апротонным растворителем, таким как дихлорметан, трихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил, диметилформамид, диметилсульфоксид и т.п.

Катализатор включает катализатор дегидратации и основный катализатор. Примерами катализатора дегидратации являются диэтилазодикарбоксилат, азобисформил дипиперидин, трибутилфосфин и т.п. Основный катализатор включает органическое основание и неорганическое основание, предпочтительно органическое основание, более предпочтительно органические аминные основания, такие как триэтиламин, пиридин, N,N-диизопропилэтиламин и т.п.

Примерами реакции замещения являются реакция между кислотой и спиртом с образованием сложного эфира, дегидратация нескольких молекул спирта с образованием простого эфира и дегидратация нескольких молекул карбоновой кислоты с образованием ангидрида кислоты.

Реакция снятия защиты может представлять собой, например, реакцию удаления групп, защищающих гидроксильную или аминогруппу.

Реакция ацилирования может представлять собой, например, реакцию между ацилирующим агентом и амино- или гидроксигруппой с образованием амида или сложного эфира.

Промежуточные продукты, применяемые в способе синтеза по настоящему изобретению, являются либо коммерчески доступными, либо готовятся самостоятельно, и могут быть приготовлены специалистами в данной области с использованием известных обычных химических реакций, и при этом способ их приготовления также входит в объем настоящей заявки.

В настоящей заявке названия всех соединений даны в соответствии с их химической структурой, и если название соединения не соответствует химической структуре этого соединения, химическая структура имеет преимущественную силу.

Если не указано иное, использованные в настоящей заявке научные и технические термины употребляются в значениях, которые, как правило, понятны специалистам в данной области, однако для лучшего понимания настоящего изобретения определения некоторых терминов приведены ниже. Если определения терминов, приведенные в данном документе, не согласуются со значениями, обычно понимаемыми специалистами в данной области, определения и объяснения терминов, представленные в настоящей заявке, имеют преимущественную силу.

Используемый в данном документе термин «галоген» относится к фтору, хлору, брому или йоду.

Используемый в данном документе термин «С_1-6 алкил» относится к линейному или разветвленному алкилу, имеющему от 1 до 6 атомов углерода, и включает, например, «С_1-5 алкил», «С_1-4 алкил», «C_1-3 алкил», «C_1-2 алкил», «С_2-6 алкил», «С_2-3 алкил», «С_2-4 алкил», «С_2-3 алкил», «С_3-6 алкил», «С_3-5 алкил», «С_3-4 алкил», «С_4-6 алкил», «С_4-5 алкил», «С_5-6 алкил» и т.п. Примерами С_1-6 алкила являются, помимо прочего, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, 2-метилбутил, неопентил, 1-этилпропил, н-гексил, изогексил, 3-метилпентил, 2-метилпентил, 1-метил пентил, 3,3-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2,3-этилбутил, 2-этилбутил, 1,2-диметилпропил и т.п. Используемый в данном документе термин «С_1-4 алкил» относится к конкретному соединению, имеющему от 1 до 4 атомов углерода в С_1-6 алкиле.

Используемый в данном документе термин «С_1-6 алкокси» относится к «С_1-6 алкил-О», при этом «C_1-6 алкил» определен выше. Используемый в данном документе термин «С_1-4 алкокси» относится к «С_1-4 алкил-О-», при этом «С_1-4 алкил» определен выше.

Используемый в данном документе термин «С_2-6 алкенил» относится к линейному, разветвленному или циклическому алкенилу, имеющему по меньшей мере одну двойную связь и от 2 до 6 атомов углерода, и включает, например, «С_2-5 алкенил», «С_2-4 алкенил », «С_2-3 алкенил», «С_3-6 алкенил», «С_3-5 алкенил», «С_3-4алкенил», «С_4-6 алкенил», «С_4-5 алкенил», «С_5-6 алкенил» и т.п. Примерами _2-6 алкенила являются, помимо прочего, этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, 1,3-бутадиенил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-пентенил, 1,3-пентадиенил, 1,4-пентадиенил, 1-гексенил, 2-гексенил, 3-гексенил, 1,4-гексадиенил, циклопентенил, 1,3-циклопентадиенил, циклогексенил, 1,4-циклогексадиенил и т.п.

Каждый из используемых в данном документе терминов «гидрокси С_1-6 алкил», «амино С_1-6 алкил» и «гало С_1-6 алкил» относится к группе, в которой водород С_1-6 алкильной группы замещен одной или большим количеством гидрокси-, амино- или галогеновых групп, и при этом С_1-6 алкил определен выше.

Используемый в данном документе термин «гало С_1-6 алкокси» относится к С_1-6алкоксигруппе, в которой водород замещен одной или большим количеством галогеновых групп.

Используемые в данном документе термины «С_1-6 алкиламино» и «ди(С_1-6 алкил) амино» относятся к С_1-6 алкил-NH- и , соответственно.

Используемая в данном документе формулировка «цикл В отсутствует» относится к X², непосредственно связанному с X³ одинарной химической связью.

«3-10-членный циклоалкил» включает «3-8-членный циклоалкил» и «8-10-членный конденсированный циклоалкил».

Термин «3-8-членный циклоалкил», используемый в данном документе, относится к насыщенному или частично насыщенному и неароматическому моноциклическому циклоалкилу, имеющему от 3 до 8 атомов углерода в цикле, и включает «3-8-членный насыщенный циклоалкил» и «3-8-членный частично насыщенный циклоалкил», и, предпочтительно, «3-4-членный циклоалкил», «3-5-членный циклоалкил», «3-6-членный циклоалкил», «3-7-членный циклоалкил», «4-5-членный циклоалкил», «4-6-членный циклоалкил», «4-7-членный циклоалкил», «4-8-членный циклоалкил», «5-6-членный циклоалкил», «5-7-членный циклоалкил», «5-8-членный циклоалкил», «6-7-членный циклоалкил», «6-8-членный циклоалкил», «7-8-членный циклоалкил», «3-6-членный насыщенный циклоалкил», «5-8-членный насыщенный циклоалкил», «5-7-членный насыщенный циклоалкил», «5-6-членный насыщенный циклоалкил» и т.п. Конкретными примерами «3-8-членного насыщенного циклоалкила» являются, помимо прочего, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил и т.п.; конкретными примерами «3-8-членного частично насыщенного циклоалкила» являются, помимо прочего, циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклопентадиенил, циклогексенил, циклогекс-1,3-диенил, циклогекс-1,4-диенил, циклогептенил, циклогепт-1,3-диенил, циклогепт-1,4-диенил, циклогепт-1,3,5-триенил, циклооктенил, циклоокт-1,3-диенил, циклоокт-1,4-диенил, циклоокт-1,5-диенил, циклоокт-1,3,5-триенил, циклооктатетраенил и т.п.

Термин «8-10-членный конденсированный циклоалкил», используемый в данном документе, относится к насыщенному или частично насыщенному и неароматическому циклоалкилу, имеющему от 8 до 10 атомов углерода в кольце, который образован двумя или большим количеством циклических структур, имеющих два соседних атома углерода (один цикл конденсированного циклоалкила может быть ароматическим циклом, но конденсированный циклоалкил в целом является неароматическим) и включает «8-9-членный конденсированный циклоалкил», «9-10-членный конденсированный циклоалкил» и т.п., которые могут быть конденсированы в виде 5-6-членного циклоалкано, 5-6-членного циклоалкила, бензо 5-6-членного циклоалкила и т.п. Примерами 8-10-членного конденсированного циклоалкила являются, помимо прочего, бицикло[3.1.0]гексил, бицикло[4.1.0]гептил, бицикло[2.2.0]гексил, бицикло[3.2.0]гептил, бицикло[4.2.0]октил, октагидроциклопентадиенил, октагидро-1Р-инденил, декагидронафтил, тетрадекагидрофенантрил, бицикло[3.1.0]гекс-2-енил, бицикло[4.1.0]гепт-3-енил, бицикло[3.2.0]гепт-3-енил, бицикло[4.2.0]окт-3-енил, 1,2,3,3а-тетрагидроциклопентадиенил, 2,3,3а,4,7,7а-гексагидро-1Н-инденил, 1,2,3,4,4а,5,6,8а-октагидронафтил, 1,2,4a,5,6,8a-гексагидронафтил, 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10-декагидрофенантрил, бензоциклопентил, бензоциклогексил, бензоциклогексенил, бензоциклопентенил и т.п.

Используемый в данном документе термин «3-10-членный гетероциклил» включает «3-8-членный гетероциклил» и «8-10-членный конденсированный гетероциклил».

Термин «3-8-членный гетероциклил», используемый в данном документе, относится к насыщенной или частично насыщенной и неароматической моноциклической циклической группе, имеющей от 3 до 8 кольцевых атомов, которая содержит по меньшей мере один (например, 1, 2, 3, 4 или 5) кольцевой гетероатом, и при этом указанные гетероатомы представляют собой атомы азота, атомы кислорода и/или атомы серы. Опционально, кольцевой атом (например, атом углерода, атом азота или атом серы) может быть замещен оксогруппой (с образованием, например, входящей в цикл связи С=O, N=O, S=O или SO₂). Термин «3-8-членный гетероциклил» включает «3-8-членный насыщенный гетероциклил» и «3-8-членный частично насыщенный гетероциклил». Предпочтительно, «3-8-членный гетероциклил» содержит от 1 до 3 гетероатомов, например один или два гетероатома, выбранных из атомов азота и кислорода, или один атом азота. Предпочтительно, «3-8-членный гетероциклил» представляет собой «3-7-членный гетероциклил», «3-6-членный гетероциклил», «4-7-членный гетероциклил», «4-6-членный гетероциклил», «6-8-членный гетероциклил», «5-7-членный гетероциклил», «5-6-членный гетероциклил», «3-6-членный насыщенный гетероциклил», «5-6-членный насыщенный гетероциклил», «3-6-членный азотсодержащий гетероциклил», «3-6 «членный насыщенный азотсодержащий гетероциклил», «5-6-членный азотсодержащий гетероциклил», «5-6-членный насыщенный азотсодержащий гетероциклил» и тому подобное. «3-8-членный гетероциклил» может, например, содержать только один или два атома азота или один или два других гетероатома (например, атомы кислорода и/или атомы серы). Конкретными примерами «3-8-членного гетероциклила» являются, помимо прочего, азиридинил, 2H-азиридинил, диазазиридинил, 3H-диазациклопропенил, азетидинил, 1,4-диоксанил, 1,3-диоксанил, 1,3-диоксоланил, 1,4-диоксадиенил, тетрагидрофурил, дигидропирролил, пирролидинил, имидазолидинил, 4,5-дигидроимидазолил, пиразолидинил, 4,5-дигвдропиразолил, 2,5-дигидротиенил, тетрагвдротиенил, 4,5-дигидротиазолиперил, тиа-дигидротиазолиперил, тиа тетрагидропиридинонил, дигидропиперидинонил, пиперазинил, морфолинил, 4,5-дигвдрооксазолил, 4,5-дигидроизоксазолил, 2,3-дигвдроизоксазолил, оксазолвдинил, 2Н-1,2-оксазинил, 4H-1,2-оксазинил, 6H-1,2-оксазинил, 4H-1,3-оксазинил, 6H-1,3-оксазинил, 4H-1,4-оксазинил, 4H-1,3-тиазинил, 6H-1,3-тиазинил, 2H-пиранил, 2H-пиран-2-онил, 3,4-дигидро-2H-пиранил и т.п.

Используемый в данном документе термин «8-10-членный конденсированный гетероциклил» относится к насыщенной или частично насыщенной и неароматической циклической группе, имеющей от 8 до 10 кольцевых атомов, и по меньшей мере один из кольцевых атомов является гетероатомом (одие цикл конденсированного гетероциклила может представлять собой ароматическое цикл, но конденсированный гетероциклил в целом не является ароматическим), который образован двумя или большим количеством циклических структур, имеющих два общих атома, расположенных рядом друг с другом, и при этом гетероатомы представляют собой атомы азота, атомы кислорода и/или атомы серы. Опционально, кольцевой атом (например, атом углерода, атом азота или атом серы) может быть замещен оксогруппой (с образованием, например, входящей в цикл связи С=O, N=O, S=O или SO₂). Термин «8-10-членный конденсированный гетероциклил» включает «8-9-членный конденсированный гетероциклил», «9-10-членный конденсированный гетероциклил» и т.п., которые могут быть конденсированы в виде 5-6-членного гетероцикло 5-6-членного гетероциклила, 5-6-членного гетероцикло 5-6-членного циклоалкила, 5-6-членного бензо-гетероциклила и 5-6-членного гетероаро 5-6-членного гетероциклила; при этом 5-6-членный гетероарил определен ниже. Примерами «8-10-членного конденсированного гетероциклила» являются, помимо прочего, пирролидиноцикло пропил, циклопентазациклопропил, пирролидиноциклобутил, пирролидинопирролидинил, пирролидинопиперидинил, пирролидинопиперазинил, пирролидиноморфолинил, пиперидиноморфолинил, бензопирролидинил, тетрагидроимидазо [4,5-с]пиридинил, 3,4-дигидрохиназолинил, 1,2-дигидрохиноксалинил, бензо [d] [1,3] диоксолил, 1,3-дигидроизобензофуранил, 2H-хроменил, 2H-хромен-2-онил, 4H-хроменил, 4H-хромен-4-онил, хроманил, 4H-1,3-бензоксазинил, 4,6-дигидро-1H-фуро[3,4-d]имидазолил, 3а,4,6,6а-тетрагидро-1H-фуро[3,4-d]имидазолил, 4,6-дигидро-1H-тиено [3,4-d] имидазолил, 4,6-дигидро-1H-пирроло[3,4-d] имидазолил, алкилбензимидазолил, октагидробензо[d]имидазолил, декагидрохинолинил, гексагидротиеноимидазолил, гексагидрофуроимидазолил, 4,5,6,7-тетрагидро-1H-бензо[d]имидазолил, октагидроциклопента[с]пирролил, дигидроиндолил, дигидроизоиндолил, бензоксазолилалкил, бензотиазолилалкил, 1,2,3,4-тетр агидроизохинолинил, 1,2,3,4-тетрагидрохинолинил, 4H-1,3-бензоксазинил и т.п.

Используемый в данном документе термин «6-10-членный арил» включает «6-8-членный моноциклоарил» и «8-10-членный арил с конденсированным циклом».

Используемый в данном документе термин «6-8-членный моноциклоарил» относится к моноциклоарилу имеющему от 6 до 8 атомов углерода в кольце, примерами которого являются, помимо прочего, фенил, циклооктатетраенил и т.п., и, предпочтительно, фенил.

Термин «8-10-членный конденсированный кольцевой арил», используемый в данном документе, относится к ароматической циклической группе, имеющей от 8 до 10 кольцевых атомов углерода и образованной двумя или большим количеством циклических структур, имеющих два общих атома углерода, расположенных рядом друг с другом, и, предпочтительно, «9-10-членный конденсированный кольцевой арил», например нафтил и т.п.

Используемый в данном документе термин «5-10-членный гетероарил» включает «5-8-членный одиночный моногетероарил» и «8-10-членный конденсированный гетероарил».

Используемый в данном документе термин «5-8-членный моногетероарил» относится к ароматической моноциклической циклической группе, имеющей от 5 до 8 кольцевых атомов (по меньшей мере один из которых является гетероатомом, таким как атом азота, атом кислорода или атом серы). Опционально, кольцевой атом (например, атом углерода, атом азота или атом серы) может быть замещен оксогруппой (с образованием, например, входящей в цикл связи С=O, N=O, S=O или SO₂). Термин «5-8-членный моногетероарил» включает «5-7-членный моногетероарил», «5-6-членный моногетероарил», «5-6-членный азотсодержащий моногетероарил», «6-членный азотсодержащий моногетероарил» и т.п.; при этом один из кольцевых гетероатомов «азотсодержащего моногетероарила» представляет собой атом азота, например, он может содержать только один или два атома азота, или один атом азота и один или два других гетероатома (например, атомы кислорода и/или атомы серы), или два атома азота и один или два других гетероатома (например, атомы кислорода и/или атомы серы). Конкретными примерами «5-8-членного моногетероарила» являются, помимо прочего, фурил, тиенил, пирролил, тиазолил, изотиазолил, тиадиазолил, оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил, имидазолил, пиразолил, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, пиридил, 2-пиридонил, 4-пиридонил, пиримидинил, пиридазинил, пиразинил, 1,2,3-триазинил, 1,3,5-триазинил, 1,2,4,5-тетразинил, азациклогептилтриенил, 1,3-диазациклогептилтриенил, азациклооктатетраенил и т.п. Конкретными примерами «5-6-членного моногетероарила» являются, помимо прочего, те, которые имеют от 5 до 6 кольцевых атомов в конкретных примерах вышеупомянутого «5-8-членного моногетероарила».

Используемый в данном документе термин «8-10-членный конденсированный гетероарил» относится к ароматической циклической структуре, которая образована двумя или большим количеством циклических структур, имеющих два общих атома, расположенных рядом друг с другом, и содержит от 8 до 10 кольцевых атомов (по меньшей мере один из которых является гетероатомом, таким как атом азота, атом кислорода или атом серы). Опционально, кольцевой атом (например, атом углерода, атом азота или атом серы) может быть замещен оксогруппой (с образованием, например, входящей в цикл связи С=O, N=O, S=O или SO₂). Термин «8-10-членный конденсированный гетероарил» включает «9-10-членный конденсированный гетероарил», «8-9-членный конденсированный гетероарил» и т.п., которые могут быть конденсированы в виде бензо 5-6-членного гетероарила, 5-6-членного гетероаро 5-6-членного гетероарила и т.п. Конкретными примерами «8-10-членного конденсированного гетероарила» являются, помимо прочего, пирроло пиррол ил, пирролофурил, пиразолопирролил, пиразолотиенил, фуротиенил, пиразолоксазолил, бензофурил, бензоизофурил, бензотиенил, индолил, изоиндолил, бензоксазолил, бензоимидазолил, индазолил, бензотриазолил, хинолинил, 2-хинолинонил, 4-хинолинонил, 1-изохинолинонил, изохинолинил, акридинил, фенантридинил, бензопиридазинил, фталазинил, хиназолинил, хиноксалинил, пуринил, нафтиридинил и т.п.

Термин «опционально замещенный…», используемый в данном документе, включает как «замещенный…», так и «не замещенный…».

Термин «фармацевтически приемлемая соль», используемый в данном документе, относится к соли, образованной кислотной функциональной группой (например, -СООН, -ОН, -SO₃H и т.п.) и подходящим неорганическим или органическим основанием (включая соли щелочных металлов, соли щелочноземельных металлов, соли аммония и соли с азотсодержащими органическими основаниями), или к соли, образованной основной функциональной группой (например, -NH₂ и т.п.) и подходящей неорганической или органической кислотой (например, карбоновой кислотой и т.п.).

Используемый в данном документе термин «стереоизомер» означает, что соединение по настоящему изобретению может существовать в форме рацемата или рацемической смеси, одного энантиомера, смеси диастереоизомеров или одного диастереоизомера, поскольку указанное соединение содержит один или большее количество асимметричных центров. Соединение по настоящему изобретению может иметь асимметричные центры и, таким образом, приводить к наличию двух оптических изомеров. Объем настоящего изобретения включает все возможные оптические изомеры и их смеси. Если соединение по настоящему изобретению содержит олефиновую двойную связь, объем настоящего изобретения включает цис-изомер и транс-изомер, если не указано иное. Описанные в данном документе соединения могут существовать в таутомерных формах (в виде одного из изомеров функциональнойх группы), имеющих разные точки присоединения водорода за счет одного или большего количества сдвигов двойной связи, например кетонная и енольная формы соединения являются кето-енольными таутомерами. Все таутомеры и их смеси включены в объем настоящего изобретения. Все энантиомеры, диастереоизомеры, рацематы, мезомеры, цис-транс-изомеры, таутомеры, геометрические изомеры и эпимеры соединения, а также их смеси включены в объем настоящего изобретения.

Используемый в данном документе термин «форма выпуска» относится к лекарственной форме, пригодной для клинического применения, включая, помимо прочего, порошки, таблетки, гранулы, капсулы, растворы, эмульсии, суспензии, инъекционные формы (включая раствор для инъекций, стерильные порошки для инъекций и концентрированные растворы для инъекций), спреи, аэрозоли, порошковые спреи, лосьоны, линименты, мази, пластыри, пасты, накладки, средства для полоскания или суппозитории, и, более предпочтительно, порошки, таблетки, гранулы, капсулы, растворы, инъекции, мази, средства для полоскания или суппозитории.

Все технические решения в ссылках, цитируемых в настоящей заявке, включены в объем настоящего изобретения и предназначены для его иллюстрации.

Преимущества, обеспечиваемые настоящим изобретением, включают, помимо прочего:

1. Соединение и его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир или стереоизомер обладают превосходной ингибирующей активностью в отношении одной или большего количества тирозинкиназ из числа TRK, ALK и/или ROS1, обладают хорошими фармакокинетическими свойствами in vivo, длительным действием и высокой биодоступностью, а также могут быть использованы для лечения и/или предотвращения заболеваний и связанных с ними состояний, опосредованных одной или большим количеством тирозинкиназ из числа TRK, ALK и/или ROS1;

2. Соединение и его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир или стереоизомер оказывают более значительный терапевтический эффект при злокачественных новообразованиях, опосредованных одной или большим количеством тирозинкиназ из числа TRK, ALK и/или ROS1, и, в частности, оказывают более значительный терапевтический эффект при злокачественных новообразованиях, которые характеризуются лекарственной устойчивостью к существующим противоопухолевым препаратам; и

3. Соединение по настоящему изобретению характеризуется простым способом получения и стабильным качеством, может быть приготовлено с высокой чистотой, а его производство легко масштабировать для промышленного выпуска.

РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Технические решения по настоящему изобретению будут описаны ниже со ссылкой на нижеследующие примеры, и для иллюстрации вышеизложенного содержания настоящего изобретения будут приведены дополнительные подробные описания, но при этом не следует понимать, что объем настоящего изобретения ограничен нижеследующими примерами. Любой метод, разработанный на основании вышеизложенного содержания настоящего изобретения, входит в объем настоящего изобретения.

В данном контексте, атом углерода, помеченный знаком «*» в структуре соединения, представляет собой хиральный атом углерода в одной конфигурации, такой как R-конфигурация или S-конфигурация.

В названии соединения «22R/S» означает, что соединение представляет собой единственный изомер с конфигурацией соответствующего хирального углерода «22R» или «22S».

Пример 1: (2²R/R,6S)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-4-окса-7-аза-1 (5,3) -имидазо[4,5-b]пиридин-3 (3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-он (Соединение 2)

1. Получение 6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-1и1)-3-нитропиридин-2-амина

5-фтор-2-метокси-3-(пирролидин-2-ил)пиридин (2,0 г, 10,2 ммоль) и 6-хлор-3-нитропиридин-2-амин (1,8 г, 10,4 ммоль) добавляли к ацетонитрилу (50 мл), затем добавляли диизопропилэтиламин (3,9 г, 30,2 ммоль), смесь нагревали до 70°С и оставляли реагировать на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли воду (50 мл) и фильтровали. Твердое вещество промывали этилацетатом (30 мл) и сушили под вакуумом с получением целевого продукта (3,2 г, выход: 94,1%).

LC-MS (М/е): 334,1 [М+Н]⁺

2. Получение 6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиридин-2,3-диамина

6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3-нитропиридин-2-амин (1,0 г, 3,0 ммоль) растворяли в смеси метанола (30 мл) и тетрагидрофурана (10 мл), добавляли никель Ренея (200 мг) и оставляли смесь реагировать на 16 ч при 25°С в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали выпариванием в роторной установке, а остаток без дополнительной очистки использовали на следующей стадии.

LC-MS (М/е): 304,1 [М+Н]⁺

3. Получение 5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина

6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиридин-2,3-диамин (неочищенный продукт после предыдущей стадии, около 3,0 ммоль) растворяли в толуоле (10 мл), добавляли триэтилортоформиат (4,4 г, 29,7 ммоль) и n-толуолсульфоновую кислоту (103 мг, 0,6 ммоль), смесь нагревали до 120°С и оставляли реагировать на 4 часа. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли раствор бикарбоната натрия (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3). Органическую фазу объединяли, концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир: этилацетат=1:1) с получением целевого продукта (0,85 г, выход: 90,4%).

LC-MS (М/е): 314,1 [М+Н]⁺

4. Получение 3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ола

5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3H-имидазо [4,5-6]пиридин (0,85 г, 2,72 ммоль) добавляли к раствору хлористого водорода в этаноле (7 мл), смесь нагревали до 90°С в микроволновой печи и оставляли реагировать на 40 минут. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли триэтиламин (5 мл) и снова концентрировали выпариванием в роторной установке. Реакционную смесь очищали препаративной хроматографией среднего давления (дихлорметан: метанол=15:1) с получением целевого продукта (0,58 г, выход: 71,4%).

LC-MS (М/е): 300,1 [М+Н]⁺

5. Получение трет-бутил((2S)-1-((3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил))окси)пропан-2-ил)карбамата

3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ол (300 мг, 1,0 ммоль) и трет-бутил(S)-(1-гидроксипроп-2-ил)карбамат (350 мг, 2,0 ммоль) добавляли к тетрагидрофурану (10 мл), затем добавляли азобисформил дипиперидин (630 мг, 2,5 ммоль) и три-н-бутилфосфин (510 мг, 2,5 ммоль) и оставляли смесь реагировать при 50°С на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (дихлорметан:метанол=30:1) с получением целевого продукта (340 мг, выход: 74,4%).

LC-MS (М/е): 457,0 [М+Н]⁺

6. Получение (2S)-1-((3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил))окси)пропан-2-амина

Трет-бутил ((2S)-1-((3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)окси)пропан-2-ил)карбамат (0,30 г, 0,66 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (3 мл) и оставляли смесь реагировать при 25 0°С на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, и остаток использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

LC-MS (М/е): 357,0 [М+Н]⁺

7. Получение (6S)-3⁵-фтор-6-метил-1³Н-4-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридина-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-она (Соединение 2-1)

Раствор

(2S)-1-((3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпирвдин-2-ил)окси)пропан-2-амина (неочищенный продукт после предыдущей стадии, около 0,66 ммоль) и триэтиламин (2 мл) в тетрагидрофуране (10 мл) добавляли по каплям к раствору карбонилдиимидазола (160 мг, 1,0 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл), и смесь оставляли реагировать при 25°С на 4 часа. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали препаративной хроматографией среднего давления (дихлорметан: метанол=20:1) с получением целевого продукта (неочищенный, 300 мг).

LC-MS (М/е): 383,2 [М+Н]⁺

8. Получение (2²R/S,6S)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-4-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинациклооктафан-8-она (Соединение 2)

(6S)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-4-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинациклооктафан-8-он (неочищенный) отделяли препаративной хроматографией высокого давления (ацетонитрил: вода=7:3) с получением требуемого соединения (50 мг, выход для трех стадий 7-9: 19,9%).

Требуемое соединение получали в виде раствора в метаноле с концентрацией 1,12 мг/мл, а удельное вращение требуемого соединения составляло -47,62 в соответствии с методом определения оптического вращения 0621 Optical Rotation Determination Method of General Chapter TV, Chinese Pharmacopoeia, 2015 Edition.

Молекулярная формула: C₁₉H₁₉FN₆O₂

Молекулярная масса: 382,4

LC-MS (M/e): 383,2 [M+H]⁺

¹H-ЯМР (400 МГц,CDCl₃) δ 10,01 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,88 (d, J=10,4 Гц, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,35-7,38 (m, 1H), 6,51 (d,J=9,2 Гц, 1H), 5,67-5,70 (m, 1H), 5,11-5,14 (m, 1H), 4,28-4,32 (m, 1H), 4,22-4,26 (m, 1H), 3,90-3,96 (m, 1Н), 3,53-3,59 (m, 1Н), 2,41-2,49 (m, 2Н), 2,32-2,23 (m, 1H), 1,92-1,95 (m, 1H), 1,59 (d,J=6,8 Гц, 3Н).

Пример 2: (2²R/S,6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-4-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-он (Соединение 3)

1. Получение 3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ола

5-фтор-3-(1-(3-(трифторметансульфонил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)пиридин-2-ил-трифторметансульфонат (900 мг, 1,6 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (16 мл) и воде (5 мл), добавляли моногидрат гидроксида лития (335,2 мг, 7,99 ммоль), и смесь оставляли реагировать при 25°С на 16 ч. рН реакционной смеси доводили соляной кислотой до 6 и экстрагировали этилацетатом (30 мл). Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (15 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением целевого продукта (360 мг, выход: 75%).

LC-MS (М/е): 300,1 [М+Н]⁺

2. Получение трет-бутил((2R)-(1-((3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил))окси)пропан-2-ил)карбамата

3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ол (360 мг, 1,2 ммоль), (R)-(1-трет-бутиловый эфир-гидроксипропан-2-ил) карбаминовой кислоты (316,1 мг, 1,8 ммоль), азобисформил дипиперидин (455,2 мг, 1,8 ммоль) и три-н-бутилфосфин (365 мг, 1,8 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (6 мл), и смесь оставляли реагировать на 16 ч при 50°С в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрировали и очищали колоночной хроматографией (5% метанол/дихлорметан) с получением целевого продукта (280 мг, выход: 51%).

LC-MS (М/е): 457,0 [М+Н]⁺

3. Получение (2R)-1-((3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил))окси)пропан-2-амина

трет-Бутил

((2R)-(1-((3-(1-(3-имидазо[4,5-d]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)окси)пропан-2-ил)карбамат (280 мг, 0,61 ммоль) растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (3 мл), и смесь оставляли реагировать на 0,5 ч при 25°С. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, а остаток использовали без дополнительной очистки на следующей стадии. LC-MS (М/е): 357,0 [М+Н]⁺

4. Получение 6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-4-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридина-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-она (Соединение 3-1)

Раствор (2R)-(1-((3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)-окси)пропан-2-амин (неочищенный продукт после предыдущей стадии, около 0,61 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) и триэтиламине (2 мл) добавляли к растворукарбонилдиимидазола (149,2 мг, 0,92 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл), и смесь оставляли реагировать при 25°С на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали с получением целвого продукта (неочищенного).

LC-MS (М/е): 383,2 [М+Н]⁺

5. Получение (2²R/S,6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³Н-4-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-она (Соединение 3)

(6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-4-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-он (неочищенный) отделяли обращенно-фазовой колоночной хроматографией высокого давления (ацетонитрил: вода=7:3) с получением требуемого соединения (12 мг, выход для трех стадий 3-5: 5,1%).

Молекулярная формула: C₁₉H₁₉FN₆O₂

Молекулярная масса: 382,4

LC-MS (М/е): 383,0 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 10,50 (d, J=7,6 Гц, 1H), 8,35 (s, 1Н), 7,89 -7,84 (m, 2Н), 7,34-7,26 (m, 1H), 6,50 (d, J=8,8 Гц, 1H), 5,63-5,60 (m, 1H), 5,16-5,12 (m, 1H), 4,45-4,35 (m, 1H), 4,18-4,13 (m, 1H), 3,95-3,92 (m, 1H), 3,62-3,59 (m, 1H), 2,54-2,42 (m, 2Н), 2,26-2,23 (m, 1H), 1,99-1,96 (m, 1H), 1,56 (d, J=8,8 Гц, 3Н).

Пример 3:

(2²R/S,6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинцинциклооктафан-8-он (Соединение 11)

1. Получение бензил (R)-бут-3-ин-2-ил((2-нитрофенил)сульфонил)карбамата

Бензил ((2-нитрофенил)сульфонил)карбамат (5,0 г, 14,9 ммоль) и (S)-бут-3-ин-2-ол (1,0 г, 14,3 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (60 мл) и добавляли трифенилфосфин (4,0 г, 15,2 ммоль). Диэтилазодикарбоксилат (2,7 г, 15,5 ммоль) добавляли в атмосфере азота и смесь оставляли реагировать при 20°С на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир: этилацетат=2:1) с получением целевого продукта (3,16 г, выход: 56,9%).

LC-MS (М/е): 389,0 [М+Н]⁺

2. Получение бензил (R)-бут-3-ин-2-ил карбамата

Бензил (R)-бут-3-ин-2-ил((2-нитрофенил)сульфонил)карбамат (3,16 г, 8,14 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (30 мл), добавляли гидроксид лития (2,4 г, 57,1 ммоль) и тиогликолевую кислоту (2,6 г, 28,3 ммоль) и оставляли смесь реагировать при 20°С на 16 ч. К реакционной смеси добавляли воду (100 мл) и этилацетат (100 мл), проводили разделение, а водную фазу экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3). Органическую фазу объединяли, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир: этилацетат=10:1) с получением целевого продукта (890 мг, выход: 53,9%).

LC-MS (М/е): 204,1 [М+Н]⁺

3. Получение 6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3-нитропиридин-2-амина

5-фтор-2-метокси-3-(пирролидин-2-ил)пиридин (2,0 г, 10,2 ммоль) и 6-хлор-3-нитропиридин-2-амин (1,8 г, 10,4 ммоль) добавляли к ацетонитрилу (50 мл), затем добавляли диизопропилэтиламин (3,9 г, 30,2 ммоль), смесь нагревали до 70°С и оставляли реагировать на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли воду (50 мл) и фильтровали; твердое вещество промывали этилацетатом (30 мл) и сушили под вакуумом с получением целевого продукта (3,2 г, выход: 94,1%).

LC-MS (М/е): 334,1 [М+Н]⁺

4. Получение 6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиридин-2,3-диамина

6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3-нитропиридин-2-амин (1,0 г, 3,0 ммоль) растворяли в смеси метанола (30 мл) и тетрагидрофурана (10 мл), добавляли никель Ренея (200 мг) и оставляли смесь реагировать на 16 ч при 25°С в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали выпариванием в роторной установке, а остаток без дополнительной очистки использовали на следующей стадии.

LC-MS (М/е): 304,1 [М+Н]⁺

5. Получение 5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3Н-имидазо[4,5-b] пиридина

6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиридин-2,3-диамин (неочищенный продукт после предыдущей стадии, около 3,0 ммоль) растворяли в толуоле (10 мл), добавляли триэтилортоформиат (4,4 г, 29,7 ммоль) и п-толуолсульфоновую кислоту (103 мг, 0,6 ммоль), смесь нагревали до 120°С и оставляли реагировать на 4 часа. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли раствор бикарбоната натрия (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3). Органическую фазу объединяли, концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 1:1) с получением целевого продукта (0,85 г, выход: 90,4%).

LC-MS (М/е): 314,1 [М+Н]⁺

6. Получение 3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ола

5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3H-имидазо [4,5-b]пиридин (0,85 г, 2,72 ммоль) добавляли к раствору хлористого водорода в этаноле (7 мл), смесь нагревали до 90°С в микроволновой печи и оставляли реагировать на 40 минут. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли триэтиламин (5 мл) и снова концентрировали выпариванием в роторной установке. Реакционную смесь очищали препаративной хроматографией среднего давления (дихлорметан:метанол = 15:1) с получением целевого продукта (0,58 г, выход: 71,4%).

LC-MS (М/е): 300,1 [М+Н]⁺

7. Получение 5-фтор-3-(1-(3-((трифторметил)сульфонил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)пиридин-2-ил-трифторметансульфоната

3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ол (0,58 г, 1,94 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли 1,1,1-трифтор-N-фенил-N-((трифторметил)сульфонил)метансульфонамид (2,1 г, 5,88 ммоль) и триэтиламин (784 мг, 7,76 ммоль) и оставляли смесь реагировать при 20°С на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 2:1) с получением целевого продукта (0,73 г, выход: 67,0%).

LC-MS (М/е): 564,0 [М+Н]⁺

8. Получение бензил ((2R)-4-(5-фтор-3-(1-(3-((трифторметил)сульфонил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)пиридин-2-ил)-бут-3-ин-2-ил)карбамата

5-фтор-3-(1-(3-((трифторметил)сульфонил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)пиридин-2-ил-трифторметансульфонат (0,73 г 1,3 ммоль), йодид меди (50 мг, 0,26 ммоль), бис(трифенилфосфин)палладия (II) дихлорид (91 мг, 0,13 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (503 мг, 3,9 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (50 мл) и оставляли смесь реагировать на 0,5 часа при 50°С в атмосфере азота. Медленно добавляли раствор бензил (R)-бут-3-ин-2-илкарбамата (300 мг, 1,5 ммоль) в тетрагидрофуране и оставляли смесь реагировать при 50°С на 4 часа. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат =1:1) с получением целевого продукта (0,53 г, выход: 66,3%).

LC-MS (М/е): 617,2 [М+Н]⁺

9. Получение бензил ((2R)-4-(3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)бут-3-ин-2-ил)карбамата

Бензил

((2R)-4-(5-фтор-3-(1-(3-((трифторметил)сульфонил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)пиридин-2-ил)-бут-3-ин-2-ил)карбамат (0,53 г, 0,86 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (20 мл) и воде (20 мл), добавляли гидроксид лития (180 мг, 4,3 ммоль) и оставляли смесь реагировать при 20°С на 1 час. К реакционной смеси добавляли этилацетат (20 мл) и разделяли, после чего водную фазу экстрагировали этилацетатом (20 мл × 2). Органическую фазу объединяли, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (дихлорметан:метанол = 20:1) с получением целевого продукта (0,4 г, выход: 96,2%).

LC-MS (М/е): 485,2 [М+Н]⁺

10. Получение (2R)-4-(3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)бутан-2-амина

Бензил

((2R)-4-(3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)бут-3-ин-2-ил)карбамат (0,4 г, 0,83 ммоль) растворяли в метаноле (50 мл), добавляли палладий на угле (200 мг) и оставляли смесь реагировать на 16 ч при 20°С в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали, фильтрат концентрировали с получением целевого продукта (неочищенного), который использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

LC-MS (М/е): 355,2 [М+Н]⁺

11. Получение (6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридина-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-она (Соединение 11-1)

N,N'-карбонилдиимидазол (250 мг, 1,54 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (20 мл), затем добавляли к раствору (2R)-4-(3-(1-(H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)бутан-2-амина (неочищенный продукт после предыдущей стадии) в тетрагидрофуране (10 мл) и оставляли смесь реагировать при 25°С на 2 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали колоночной хроматографией (дихлорметан:метанол = 20:1) с получением целевого продукта (неочищенный, 40 мг).

12. Получение (2²R/S,6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридина-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-она (Соединение 11)

(6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-он (неочищенный) разделяли препаративной хроматографией высокого давления (ацетонитрил:вода = 8:2) с получением требуемого соединения (3 мг, выход для трех стадий 10-12: 0,95%).

Молекулярная формула: C₂₀H₂₁FN₆O

Молекулярная масса: 380,4

LC-MS (М/е): 381,1 [M+H]⁺

¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 9,46 (d, J = 8,0 Гц, 1Н), 8,33 (s, 1H), 8,30 (d, J = 2,8 Гц, 1Н), 7,88 (d, J = 8,8 Гц, 1Н), 7,14 (dd, J = 2,8 Гц, 9,6 Гц, 1Н), 6,53 (d, J = 8,8 Гц, 1Н), 5,42 (t, J = 6,0 Гц, 1Н), 4,35-4,37 (m, 1Н), 3,91-3,96 (m, 1Н), 3,68-3,71 (m, 1Н), 3,39-3,43 (m, 1Н), 2,87-2,92 (m, 2H), 2,51-2,54 (m, 1Н), 2,34-2,38 (m, 1Н), 2,18-2,25 (m, 2H), 2,00-2,02 (m, 1Н), 1,83-1,88 (m, 1Н), 1,39 (d, J=6,8 Гц, 3H).

Пример 4: (3R,7S)-4⁵-фтор-3,7-диметил-1³H-окса-2,8-диаза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-4(3,2)пиридинциклононфан-9-он (Соединение 13)

1. Получение 3-(1-((3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-иламино)этил)-5-фторпиридин-2-ола

трет-Бутил

5-((1-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)этил)амино)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-3-карбоксилат (400 мг, 104 ммоль) растворяли в растворе хлористого водорода в этаноле (6 мл) и оставляли смесь реагировать при 85°С на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, доводили до рН 8 с помощью триэтиламина и очищали обращенно-фазовой колоночной хроматографией (0-20% ацетонитрил/вода) с получением целевого продукта (100 мг, выход: 35%).

LC-MS (М/е): 274,0 [М+Н]⁺

2. Получение трет-бутил ((2S)-1-((3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)амино)этил)-5-фторпиридин2-ил))окси)пропан-2-ил)карбамата

3-(1-((3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил-амино)этил)-5-фторпиридин-2-ол (100 мг, 0,37 ммоль), трет-бутил (S)-(1-гидроксипропан-2-ил карбамат (96,2 мг, 0,55 ммоль), азобисформил дипиперидин (138,5 мг, 0,55 ммоль) и три-н-бутилфосфин (111,1 мг, 0,55 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (2 мл) и оставляли смесь реагировать на 16 ч при 50°С в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрировали и очищали колоночной хроматографией (5% метанол/дихлорметан) с получением целевого продукта (40 мг, выход: 25%).

LC-MS (М/е): 431,0 [М+Н]⁺

3. Получение N-(1-(2-((S)-2-аминопропокси)-5-фторпиридин-3-ил)этил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-амина

трет-Бутил

((2S)-1-((3-(1-((3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)амино)этил)-5-фторпиридин-2-ил)окси)пропан-2-ил)карбамат (40 мг, 0,093 ммоль) растворяли в дихлорметане (2 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл) и оставляли смесь реагировать на 0,5 ч. Реакционную смесь концентрировали, и неочищенный продукт использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

LC-MS (М/е): 331,0 [М+Н]⁺

4. Получение (7S)-4⁵-фтор-3,7-диметил-1³H-5-окса-2,8-диаза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-4(3,2)-пиридинциклононфан-9-она (Соединение 13-1)

Раствор

N-(1-(2-((S)-2-аминопропокси)-5-фторпиридин-3-ил)этил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-амина (неочищенный продукт после предыдущей стадии) в тетрагидрофуране (1 мл) и триэтиламине (0,2 мл) добавляли к раствору карбонилдиимидазола (22,6 мг, 0,14 ммоль) в тетрагидрофуране (1 мл) и оставляли смесь реагировать при 25°С на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали с получением целевого продукта (неочищенного).

LC-MS (М/е): 357,1 [М+Н]⁺

5. Получение (3R,7S)-4⁵-фтор-3,7-диметил-1³H-5-окса-2,8-диаза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-4(3,2)-пиридинциклононфан-9-она (Соединение 13)

(7S)-4⁵-фтор-3,7-диметил-1³H-5-окса-2,8-диаза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридина-4(3,2)-пиридинциклононфан-9-он отделяли колоночной обращенно-фазовой хроматографией высокого давления (ацетонитрил/вода = 70%) с получением требуемого соединения (3 мг, выход для трех стадий 3-5: 9%).

Требуемое соединение получали в виде раствора в метаноле с концентрацией 1,12 мг/мл, а удельное вращение требуемого соединения составляло +175,3 в соответствии с методом определения оптического вращения 0621 Optical Rotation Determination Method of General Chapter IV, Chinese Pharmacopoeia, 2015 Edition.

Молекулярная формуна: C₁₇H₁₇FN₆O₂

Молекулярная масса: 356,4

LC-MS (M/e): 357,1 [М+Н]⁺

¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 10,28 (s, 1Н), 8,37 (s, 1H), 7,88 (d, J = 2,8, 1H), 7,79 (d, J = 8,8, 1H), 7,48-7,44 (m, 1H), 6,43 (d, J = 8,8, 1H), 5,56-5,53 (m, 1H), 5,06-5,03 (m, 1H), 4,92-4,89 (m, 1H), 4,31-4,25 (m, 2H), 1,63 (d, J = 6,4, 3Н), 1,53 (d, J = 6,8, 3Н).

Пример 5: (2²R,6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-4-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридина-3(3,2)-пиридина-2(1,2)-пирролидинациклооктафан-8-он (Соединение 3')

1. Получение (R)-6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3-нитропиридин-2-амина

(R)-5-фтор-2-метокси-3-(пирролидин-2-ил)пиридин (1,0 г, 5,1 ммоль) и 6-хлор-3-нитропиридин-2-амин (886 мг, 5,1 ммоль) добавляли к ацетонитрилу (30 мл), затем добавляли диизопропилэтиламин (1,98 г, 15,3 ммоль), нагревали смесь до 70°С и оставляли реагировать на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли воду (30 мл) и фильтровали. Твердое вещество промывали этилацетатом (30 мл) и сушили под вакуумом с получением целевого продукта (1,65 г, выход: 97,0%).

LC-MS (М/е): 334,1 [М+Н]⁺

2. Получение (R)-6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ип)пирролидин-1-ил)пиридин-2,3-диамина

(R)-6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3-нитропиридин-2-амин (1,65 г, 4,94 ммоль) растворяли в метаноле (20 мл), добавляли никель Ренея (1 г) и оставляли смесь реагировать на 16 ч при 20°С в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали выпариванием в роторной установке, а остаток без дополнительной очистки использовали на следующей стадии.

LC-MS (М/е): 304,1 [М+Н]⁺

3. Получение (R)-5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина

(R)-6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиридин-2,3-диамин (неочищенный продукт после предыдущей стадии, около 3,0 ммоль) растворяли в толуоле (30 мл), затем добавляли триметилортоформиат (5,2 г, 49 ммоль) и п-толуолсульфоновую кислоту (170 мг, 0,99 ммоль), и смесь нагревали до 110°С и оставляли реагировать на 5 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли раствор бикарбоната натрия (100 мл) и этилацетата (100 мл) и проводили разделение, а водную фазу экстрагировали этилацетатом (50 мл × 3). Органическую фазу объединяли, концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (этилацетат) с получением целевого продукта (1,5 г, выход: 96,8%).

LC-MS (М/е): 314,1 [М+Н]⁺

4. Получение (R)-3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ола

(R)-5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин (1,5 г, 4,79 ммоль) добавляли к раствору хлористого водорода в этаноле (30 мл), смесь нагревали до 90°С и оставляли реагировать на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, доводили рН до щелочного значения путем добавления триэтиламина (5 мл), снова концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (дихлорметан:метанол = 10:1) с получением целевого продукта (1,4 г, выход: 97,9%).

LC-MS (М/е): 300,1 [М+Н]⁺

5. Получение трет-бутил((R)-1-((3-((R)-1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил))окси)пропан-2-ил)карбамата

(R)-3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ол (700 мг, 2,34 ммоль), трет-бутил (R)-(1-гидроксипропан-2-ил)карбамат (410 мг, 2,34 ммоль) и три-н-бутилфосфин (945 мг, 4,68 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (10 мл), добавляли азобисформил дипиперидин (1,18 г 4,68 ммоль) в атмосфере азота и оставляли смесь реагировать при 30°С на 2 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали хроматографией на колонке С18 с получением целевого продукта (500 мг, выход: 46,7%).

LC-MS (М/е): 457,0 [М+Н]⁺

6. Получение (R)-1-((3-((R)-1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил))окси)пропан-2-амина

трет-Бутил ((R)-1-((3-((R)-1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)окси)пропан-2-ил)карбамат (500 мг, 1,1 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (20 мл) и оставляли смесь реагировать при 20°С на 16 ч. Реакционный раствор концентрировали, доводили рН до щелочного значения с помощью триэтиламина, концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали хроматографией на колике С18 с получением целевого продукта (неочищенного, 400 мг).

LC-MS (М/е): 357,0 [М+Н]⁺

7. Получение (2²R,6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-4-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-она (Соединение 3')

(R)-1-((3-((R)-1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)окси)пропан-2-амин (неочищенный продукт после предыдущей стадии, 400 мг, около 1,1 ммоль) растворяли в ксилоле (50 мл), добавляли карбонилдиимидазол (535 мг, 3,3 ммоль), смесь нагревали до 130°С и оставляли реагировать на 2 ч. Реакционную смесь концентрировали, очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 1:1) с получением целевого продукта (неочищенного, 300 мг) и далее разделяли с помощью препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ высокого давления (ацетонитрил:вода) = 10% -70%) с получением требуемого соединения (100 мг, выход: 23,8%).

Молекулярная формула: C₁₉H₁₉FN₆O₂

Молекулярная масса: 382,4

LC-MS (М/е): 383,2 [М+Н]⁺

¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 10,50 (m, 1Н), 8,36 (s, 1H), 7,86-7,90 (m, 2H), 7,31-7,35 (m, 1H), 6,51 (d, J = 8,8 Гц, 1H), 5,63-5,60 (m, 1H), 5,13-5,17 (m, 1H), 4,39-4,42 (m, 1H), 4,15-4,19 (m, 1H), 3,92-3,98 (m, 1H), 3,65-3,60 (m, 1H), 2,50-2,59 (m, 2H), 2,40-2,50 (m, 1H), 1,95-2,01 (m, 1H), 1,57 (d, J = 6,8 Гц, 3Н).

Соединения 3 и 3' представляли собой одно и то же соединение, что было подтверждено различными методами, включая протонную ЯМР-спектроскопию, масс-спектрометрию, ВЭЖХ, определение удельного вращения и т.п.

Пример 6: (2²R,6S)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-окса-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-он (Соединение 2')

Способ получения этого соединения соответствовал таковому по Примеру 5, за исключением того, что на стадии 5 вместо трет-бутил (R)-(1-гидроксипропан-2-ил)карбамата использовали трет-6утил(S)-(1-гидроксипропан-2-ил)карбамат.

Соединения 2 и 2' представляли собой одно и то же соединение, что было подтверждено различными методами, включая протонную ЯМР-спектроскопию, масс-спектрометрию, ВЭЖХ, определение удельного вращения и т.п.

Пример 7:

(2²R,6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-он (Соединение 11')

7. Получение (R)-6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3--ил)пирролидин-1-ил)-3-нитропиридин-2-амина

(R)-5-фтор-2-метокси-3-(пирролидин-2-ил)пиридин (2,0 г, 10,2 ммоль) и 6-хлор-3-нитропиридин-2-амин (1,8 г, 10,4 ммоль) добавляли к ацетонитрилу (50 мл), затем добавляли диизопропилэтиламин (3,9 г, 30,2 ммоль) и нагревали смесь до 70°С в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли воду (50 мл) и фильтровали. Твердое вещество промывали этилацетатом (30 мл) и сушили под вакуумом с получением целевого продукта (3,27 г, выход: 96,2%).

LC-MS (М/е): 334,1 [М+Н]⁺

2. Получение (R)-6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиридин-2,3-диамина

(R)-6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3-нитропиридин-2-амин (3,27 г, 9,8 ммоль) растворяли в метаноле (50 мл), добавляли никель Ренея (2 г) и оставляли смесь реагировать на 3 ч при 20°С в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали выпариванием в роторной установке, а остаток без дополнительной очистки использовали на следующей стадии.

LC-MS (М/е): 304,1 [М+Н]⁺

3. Получение (R)-5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина

(R)-6-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиридин-2,3-диамин (неочищенный продукт после предыдущей стадии, около 9,8 ммоль) растворяли в толуоле (100 мл), добавляли триметилортоформиат (10,4 г, 98 ммоль) и п-толуолсульфоновую кислоту (170 мг, 0,99 ммоль), смесь нагревали до 110°С и оставляли реагировать на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли раствор бикарбоната натрия (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3). Органическую фазу объединяли, концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 1:1) с получением целевого продукта (3,05 г, выход: 99,0%).

LC-MS (М/е): 314,1 [М+Н]⁺

4. Получение (R)-3-(1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ола

(R)-5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин (3,05 г, 9,7 ммоль) добавляли к раствору хлористого водорода в этаноле (100 мл), смесь нагревали до 80°С и оставляли реагировать на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке, добавляли триэтиламин (5 мл) и снова концентрировали выпариванием в роторной установке. Реакционную смесь очищали колоночной хроматографией (дихлорметан:метанол = 10:1) с получением целевого продукта (2,8 г, выход: 96,2%).

LC-MS (М/е): 300,1 [М+Н]⁺

5. Получение (R)-5-фтор-3-(1-(3-((трифторметил)сульфонил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)пиридин-2-илтрифторметансульфоната

(R)-3-(1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ол (2,8 г, 9,36 ммоль) растворяли в дихлорметане (100 мл), добавляли 1,1,1-трифтор-N-фенил-N-((трифторметил)сульфонил)метансульфонамид (10 г, 28 ммоль) и триэтиламин (4,7 г, 46,5 ммоль) и оставляли смесь реагировать при 20°С на 16 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 5:1) с получением целевого продукта (4,46 г, выход: 84,6%).

LC-MS (М/е): 564,0 [М+Н]⁺

6. Получение бензил ((R)-4-(5-фтор-3-((R)-1-(3-((трифторметил)сульфонил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)пиридин-2-ил)-бут-3-ин-2-ил)карбамата

(R)-5-фтор-3-(1-(3-((трифторметил)сульфонил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)пиридин-2-ил трифторметансульфонат (4,46 г, 7,92 ммоль), йодид меди (300 мг, 1,48 ммоль), бис(трифенилфосфин)дихлорид палладия (560 мг, 0,8 ммоль) и DIPEA (3,0 г, 23,2 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (100 мл) и оставляли смесь реагировать на 0,5 ч при 50°С в атмосфере азота. Медленно добавляли раствор бензил (R)-бут-3-ин-2-ил-карбамата (1,6 г, 7,9 ммоль) в тетрагидрофуране и оставляли смесь реагировать при 50°С на 5 ч. Реакционную смесь концентрировали выпариванием в роторной установке и очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 2:1) с получением целевого продукта (3,7 г, выход: 75,8%).

LC-MS (М/е): 617,2 [М+Н]⁺

7. Получение бензил ((R)-4-(3-((R)-1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)бут-3-ин-2-ил)карбамата

Бензил ((R)-4-(5-фтор-3-((R)-1-(3-((трифторметил)сульфонил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ин-2-ил)карбамат (3,7 г, 6,0 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (40 мл) и воде (10 мл), добавляли гидроксид лития (1,26 г, 30 ммоль) и оставляли смесь реагировать при 20°С на 2 ч. К реакционной смеси добавляли этилацетат (100 мл) и воду (50 мл) и проводили разделение, а водную фазу экстрагировали этилацетатом (50 мл × 2). Органическую фазу объединяли, концентрировали и очищали колоночной хроматографией (дихлорметан:метанол = 20:1) с получением целевого продукта (2,6 т, выход: 89,6%).

LC-MS (М/е): 485,2 [М+Н]⁺

8. Получение (R)-4-(3-((R)-1-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)бутан-2-амина

Бензил

((R)-4-(3-((R)-1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)бут-3-ин-2-ил)карбамат (1 г, 2,1 ммоль) растворяли в метаноле (50 мл), добавляли палладий на угле (500 мг) и оставляли смесь реагировать на 16 ч при 20°С в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали с получением целевого продукта (неочищенного, 700 мг), который использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

LC-MS (М/е): 335,2 [М+Н]⁺

9. Получение (2²R,6R)-3⁵-фтор-6-метил-1³H-7-аза-1(5,3)-имидазо[4,5-b]пиридин-3(3,2)-пиридин-2(1,2)-пирролидинциклооктафан-8-она (Соединение 11')

N,N-карбонилдиимидазол (412 мг, 2,54 ммоль) растворяли в ксилоле (25 мл), затем добавляли раствор (R)-4-(3-((R)-1-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил)пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин-2-ил)бутан-2-амина (неочищенный, 300 мг, около 0,85 ммоль) в ксилоле (25 мл) и оставляли смесь реагировать при 20°С на 2 ч, нагревали до 130°С и оставляли смесь реагировать на 5 ч. Реакционную смесь концентрировали, очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир:этилацетат = 1:1) с получением целевого продукта (неочищенного) и разделяли препаративной ВЭЖХ высокого давления (ацетонитрил:вода = 10% -80%) с получением требуемого соединения (70 мг, выход: 21,7%).

Молекулярная формула: C₂₀H₂₁FN₆O

Молекулярная масса: 380,4

LC-MS (М/е): 381,1 [М+Н]⁺

¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 9,48 (d, J = 8.4 Гц, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,31 (d, J = 2,4 Гц, 1Н), 7,89 (d, J = 8,8 Гц, 1Н), 7,15 (dd, J₁ = 2,4 Гц, J₂ = 9,6 Гц, 1Н), 6,55 (d, J = 8,8 Гц, 1Н), 5,43 (t, J = 6,4 Гц, 1Н), 4,34-4,37 (m, 1Н), 3,93-3,99 (m, 1Н), 3,68-3,74 (m, 1Н), 3,40-3,47 (m, 1Н), 2,86-2,98 (m, 2H), 2,50-2,57 (m, 1Н), 2,36-2,41 (m, 1Н), 2,17-2,27 (m, 2H), 1,87-1,98 (m, 1Н), 1,82-1,89 (m, 1Н), 1,40 (d, J = 6,8 Гц, 3Н).

Соединения 11 и 11' представляли собой одно и то же соединение, что было подтверждено различными методами, включая протонную ЯМР-спектроскопию, масс-спектрометрию, ВЭЖХ, определение удельного вращения и т.п.

Анализ активности

Ниже представлены иллюстративные анализы активности некоторых соединений по настоящему изобретению, чтобы продемонстрировать полезную активность и полезный технический эффект соединения по настоящему изобретению. Однако следует понимать, что следующие схемы экспериментов являются исключительно иллюстрацией настоящего изобретения и не ограничивают его объем.

Иллюстративный эксперимент 1: Способность соединений по настоящему изобретению подавлять пролиферацию клеток in vitro

Материалы, использованные в эксперименте

Исследуемые вещества представляли собой соединения, описанные в примерах, приведенных выше.

В этом эксперименте использовались следующие клеточные линии:

Клеточная линия Ва/F3 LMNA-NTRK1-G595R:

линия стабильно экспрессирующих клеток Ba/F3, трансфицированных LMNA-NTRK1 G595R;

Клеточная линия Ba/F3 ETV6-NTRK3-G623R:

линия стабильно экспрессирующих клеток Ba/F3, трансфицированных ETV6-NTRK3-G623R.

Метод эксперимента (анализ CelltiterGlo)

1. Клеточная культура и инокуляция

Использовали клетки в суспензионной культуре, в качестве ростовой среды использовали RPMI-1640+10% FBS; при этом клетки тестировали в фазе логарифмического роста.

Клетки в фазе логарифмического роста собирали и подсчитывали с помощью счетчика тромбоцитов. Жизнеспособность клеток определяли методом исключения трипанового синего; при этом жизнеспособность клеток поддерживалась на уровне более 90%. Концентрацию клеток доводили до требуемой, и 90 мкл клеточной суспензии добавляли в лунки 96-луночного планшета.

2. Приготовление исследуемых веществ

2.1 Приготовление маточных растворов исследуемых веществ в ДМСО (концентрации веществ приведены в Таблице 2).

2.2 Приготовление исходных рабочих растворов исследуемых веществ

Маточные растворы исследуемых веществ разводили от 10 мМ до 1 мМ с помощью ДМСО, а затем готовили серию разведений с шагом 3 для получения 9 концентраций. Разведенные в ДМСО растворы веществ в количестве 2 μл добавляли к 98 μл раствора культуры клеток для получения исходных рабочих растворов исследуемых веществ (концентрация вещества была в 10 раз выше конечной концентрации; концентрация ДМСО составляла 1%; максимальная концентрация составляла 10 мкМ).

Максимальная концентрация была в ДМСО, который являлся растворителем-контролем; в холостые лунки добавляли только среду без инокулированных клеток.

2.3 Обработка веществом

10 мкл исходного рабочего раствора вещества добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета с инокулированными клетками (10-кратное разведение, конечная концентрация ДМСО-0,1%).

Конечные концентрации исследуемых веществ составляли: 1000 нМ, 333,33 нМ, 111,11 нМ, 37,04 нМ, 12,35 нМ, 4,12 нМ, 1,37 нМ, 0,46 нМ и 0,15 нМ.

Клетки культивировали в инкубаторе для клеточных культур с 5% CO₂ в течение 72 часов.

3. Обнаружение

Реагент CTG размораживали, планшет с клетками доводили до комнатной температуры в течение 30 минут, в каждую лунку добавляли 60 мкл реагента (набор для анализа Celltiter Glo), встряхивали в течение 2 минут с помощью шейкера (в отсутствие света), после чего инкубировали планшет при комнатной температуре в течение 10 мин (в отсутствие света). Значения светового сигнала считывали на многофункциональном считывающем устройстве для микропланшетов.

4. Обработка данных

1) Ингибирование (%) = (сигнал от лунки с ДМСО в качестве растворителя-контроля - сигнал от лунки с исследуемым веществом) / (сигнал от лунки с ДМСО в качестве растворителя-контроля сигнал от холостой лунки) × 100%;

2) строили кривую с помощью программы GraphPad Prism 5.0 и получали значение IC₅₀.

Результат эксперимента и вывод

Из Таблицы 3 видно, что соединения по настоящему изобретению способны эффективно подавлять пролиферацию клеток, таких как Ba/F3 LMNA-NTRK1-G595R и Ba/F3 ETV6-NTRK3-G623R, что указывает на то, что соединения по настоящему изобретению обладают потенциалом клинического применения и могут использоваться для лечения устойчивых к лекарственным препаратам онкологических заболеваний, вызываемых мутацией гена NTRK.

Иллюстративный эксперимент 2: Способность соединений по настоящему изобретению подавлять пролиферацию клеток in vitro

Материалы, использованные в эксперименте

Исследуемые вещества представляли собой соединения, описанные в примерах, приведенных выше.

В этом эксперименте использовались следующие клеточные линии:

Клеточная линия Ba/F3 SLC34A2/ROS1-G2032R:

линия стабильно экспрессирующих клеток Ba/F3, трансфицированных SLC34A2/ROS1-G2032R.

Метод эксперимента (анализ CelltiterGlo)

1. Клеточная культура и инокуляция

Использовали клетки в суспензионной культуре, в качестве ростовой среды использовали RPMI-1640+10% FBS; при этом клетки тестировали в фазе логарифмического роста.

Клетки в фазе логарифмического роста собирали и подсчитывали с помощью счетчика тромбоцитов. Жизнеспособность клеток определяли методом исключения трипанового синего; при этом жизнеспособность клеток поддерживалась на уровне более 90%. Концентрацию клеток доводили до требуемой, и 90 мкл клеточной суспензии добавляли в лунки 96-луночного планшета.

2.2 Приготовление исходных рабочих растворов исследуемых веществ

Маточные растворы исследуемых веществ разводили от 10 мМ до 1 мМ с помощью ДМСО, а затем готовили серию разведений с шагом 3,16 для получения 9 концентраций. Разведенные в ДМСО растворы веществ в количестве 2 μл добавляли к 98 μл раствора культуры клеток для получения исходных рабочих растворов исследуемых веществ (концентрация вещества была в 10 раз выше конечной концентрации; концентрация ДМСО составляла 1%; максимальная концентрация составляла 10 мкМ).

Максимальная концентрация была в ДМСО, который являлся растворителем-контролем; в холостые лунки добавляли только среду без инокулированных клеток.

2.3 Обработка веществом

10 мкл исходного рабочего раствора вещества добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета с инокулированными клетками (10-кратное разведение, конечная концентрация ДМСО-0,1%).

Конечные концентрации исследуемых веществ составляли: 1000 нМ, 316 нМ, 100 нМ, 31,6 нМ, 10 нМ, 3,16 нМ, 1 нМ, 0,316 нМ и 0,1 нМ.

Клетки культивировали в инкубаторе для клеточных культур с 5% CO₂ в течение 72 часов.

3. Обнаружение

Реагент CTG размораживали, планшет с клетками доводили до комнатной температуры в течение 30 минут, в каждую лунку добавляли 100 мкл реагента (набор для анализа Celltiter Glo), встряхивали в течение 5 минут с помощью шейкера (в отсутствие света), после чего инкубировали планшет при комнатной температуре в течение 20 мин (в отсутствие света). Значения светового сигнала считывали на многофункциональном считывающем устройстве для микропланшетов.

4. Обработка данных

1) Жизнеспособность клеток (%) = (сигнал от лунки с исследуемым веществом - сигнал от холостой лунки / сигнал от лунки с ДМСО в качестве растворителя-контроля - сигнал от холостой лунки) × 100%;

2) строили кривую с помощью программы GraphPad Prism 5.0 и получали значение IC₅₀.

Результат эксперимента и вывод

Из Таблицы 6 видно, что соединения по настоящему изобретению способны эффективно подавлять пролиферацию клеток, таких как Ba/F3 SLC34A2/ROS1-G2032R, что указывает на то, что соединения по настоящему изобретению обладают потенциалом клинического применения и могут использоваться для лечения устойчивых к лекарственным препаратам онкологических заболеваний, вызываемых мутацией гена ROS.

Иллюстративный эксперимент 3: Эксперимент по изучению эффективности соединения по настоящему изобретению в модели подкожного ксенотрансплантата из клеток стабильной линии BaF3-LMNA-NTRKl-G595R

Материалы, использованные в эксперименте

Исследуемые вещества представляли собой соединения, описанные в примерах, приведенных выше.

Положительный контроль: соединение LOXO-195 со следующей структурой, полученное с использованием метода, описанного ранее (см. патентную заявку WO2011146336):

Метод эксперимента

1.1 Инокуляция клеток

Клетки стабильной линии BaF3 LMNA-NTRK1-G595R, ресуспендированные в бессывороточной среде RPMI 1640, подкожно инокулировали мышам (NOD-SCID) в правую лопаточную область из расчета 1×10⁶ клеток/мышь (0,1 мл/мышь).

1.2 Введение мышам, распределенным по группам

Когда средний объем опухоли составлял около 500 мм³, мышей случайным образом распределяли по следующим группам: группа растворителя, группа Соединения 3 (10 мг/кг, 5 мг/кг, 3 мг/кг, 1 мг/кг, 2 раза в сутки) и группа LOXO-195 (30 мг/кг, 10 мг/кг, 3 мг/кг, 2 раза в сутки).

Подробная информация о способе введения, вводимой дозе и пути введения приведена в Таблице 7-1 и Таблице 7-2.

1.3 Показатели для оценки результатов эксперимента

1) Коэффициент подавления роста опухоли, TGI (%)

TGI (%) = (1-Т/С) × 100%

2) Соотношение объемов опухоли Т/С (%) (группа терапии/контрольная группа)

Т/С (%) = t_rtv / C_RTV × 100%

* RTV = V_t/V₀, где V_t - объем опухоли в день t после распределения животных по группам, V₀ - объем опухоли в день распределения животных по группам;

t_rtv - средний относительный объем опухоли в группе введения; C_rTv - средний относительный объем опухоли в контрольной группе с растворителем.

3) Эффективность в основном оценивали следующим образом: Т/С (%) больше 40% - эффекта нет; Т/С (%) меньше или равно 40% - эффект есть; коэффициент TGI больше или равен 60% - эффект есть.

Результат эксперимента и вывод

Результаты проведенных экспериментов убедительно свидетельствуют о том, что пероральное введение эффективного количества соединения по настоящему изобретению способно подавлять рост опухоли из клеток BaF3-LMNA-NTRKl-G595R, несущих слитые гены NTRK, из чего следует, что соединение по настоящему изобретению способно эффективно подавлять рост опухолей со слитым геном NTRK и имеет хороший потенциал клинического применения.

Группа изобретений относится к области медицины и включает соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемую соль, стереоизомер, фармацевтическую композицию и применение соединения формулы (I) для приготовления лекарственного средства. В формуле (I) М¹, М², М⁴, М⁵ и М⁶ каждый независимо выбран из C(R¹) и N; М³ и М⁷ представляют собой С; X¹, X², X³ и L¹, если они присутствуют, каждый независимо выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)- и -О; цикл А выбран из фенила, пиридинила, пиримидинила и пиридазинила; цикл В отсутствует, X² и X³ напрямую соединены химической связью; R¹, R², R³, R⁵ и R⁶, если они присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, галогена и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q¹: С_1-6 алкил, -OR^a; Q¹, если присутствует, представляет собой галоген; R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода и С_1-6 алкила; или X¹, вместе с L¹, образует пирролидинил; R^a, когда присутствует, выбран из C_1-6 алкила, галоС_1-6 алкила; m, n, р, q и t каждый независимо выбраны из 0, 1, 2, 3, 4 и 5. Технический результат - соединение формулы (I), обладающее ингибирующей активностью в отношении TRK и/или ROS1 тирозинкиназ. 3 н. и 16 з.п. ф-лы, 10 табл., 7 пр.

1. Соединение общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер,

где:

М¹, М², М⁴, М⁵ и М⁶ каждый независимо выбран из C(R¹) и N;

М³ и М⁷ представляют собой С;

X¹, X², X³ и L¹, если они присутствуют, каждый независимо выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)- и -О-;

цикл А выбран из фенила, пиридинила, пиримидинила и пиридазинила;

цикл В отсутствует, X² и X³ напрямую соединены химической связью;

R¹, R², R³, R⁵ и R⁶, если они присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, галогена и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q¹: С_1-6 алкил, -OR^a; Q¹, если присутствует, представляет собой галоген;

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода и С_1-6 алкила;

или X¹, вместе с L¹, образует пирролидинил;

R^a, когда присутствует, выбран из C_1-6 алкила, галоС_1-6 алкила; и

m, n, р, q и t каждый независимо выбраны из 0, 1, 2, 3, 4 и 5.

2. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по п. 1, отличающееся тем, что указанное соединение имеет структуру, представленную общей формулой (II)

где М², М⁵ и М⁶ каждый независимо выбран из СН и N.

3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по п. 1, отличающееся тем, что указанное соединение имеет структуру, представленную общей формулой (III)

где:

цикл С представляет собой пирролидинил;

-(Х²)_р- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)-C(R⁵)(R⁶)-, -O-C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-N(R⁴)- и -C(R⁵)(R⁶)-O-, и его левая химическая связь соединена с циклом А, а его правая химическая связь соединена с X³;

-(X³)_q- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)-C(R⁵)(R⁶)-, -O-C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-N(R⁴)- и -C(R⁵)(R⁶)-O-, и его левая химическая связь соединена с X², а его правая химическая связь соединена с карбонилом;

цикл А выбран из фенила, пиридинила, пиримидинила и пиридазинила;

R², если присутствует, независимо выбран из водорода, галогена и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q¹: С_1-4 алкил и -OR^a; Q¹, если присутствует, представляет собой галоген;

R^a, если присутствует, выбран из C_1-4 алкила;

R⁵ и R⁶, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, галогена, C_1-4 алкила и С_1-4 алкокси;

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода и С_1-4 алкила; и

n представляет собой 0, 1 или 2.

4. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по п. 3, отличающееся тем, что указанное соединение имеет структуру, представленную общей формулой (IV)

5. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по любому из пп. 3, 4, отличающееся тем, что:

цикл С выбран из пирролидинила;

цикл А выбран из фенила, пиридинила, пиримидинила и пиридазинила;

R², если присутствует, независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, йода, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, втор-бутила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, трифторметила и трифторметокси;

R⁵ и R⁶, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, йода, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, втор-бутила; и

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила и втор-бутила.

6. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по любому из пп. 1-5, отличающееся тем, что:

цикл А выбран из и волнистая линия с отметкой 1 представляет точку соединения цикла A c L¹, а волнистая линия с отметкой 2 представляет точку соединения цикла А с X²;

-(Х²)_р- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)-C(R⁵)(R⁶)- и -О-C(R⁵)(R⁶)-, и его левая химическая связь соединена с циклом А, а его правая химическая связь соединена с X³; и

-(X³)_q- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-N(R⁴)- и -C(R⁵)(R⁶)-О-, и его левая химическая связь соединена с X², а его правая химическая связь соединена с карбонилом.

7. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по любому из пп. 1-6, отличающееся тем, что указанное соединение выбрано из следующих соединений:

8. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по п. 7, отличающееся тем, что указанное соединение выбрано из следующих соединений:

9. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по любому из пп. 1, 2, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой соединение, имеющее структуру, представленную общей формулой (V)

10. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по любому из пп. 1, 2, отличающееся тем, что:

X¹ представляет собой -N(R⁴)-;

L¹ представляет собой -C(R⁵)(R⁶)-;

цикл А выбран из фенила, пиридинила, пиримидинила и пиридазинила;

R², если присутствует, независимо выбран из водорода, галогена и следующих групп, опционально замещенных одним-тремя Q¹: С_1-4 алкил и -OR^a; Q¹, если присутствует, представляет собой галоген;

R^a, если присутствует, выбран из C_1-4 алкила;

R⁵ и R⁶, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, галогена, C_1-4 алкила и C_1-4 алкокси;

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода и C_1-4 алкила; и

n представляет собой 0, 1 или 2.

11. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по п. 10, отличающееся тем, что:

цикл А выбран из фенила, пиридинила и пиримидинила;

R², если присутствует, независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, йода, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, втор-бутила и метокси, этокси, пропокси, изопропокси, трифторметила и трифторметокси;

R⁵ и R⁶, если присутствуют, каждый независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, йода, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила и втор-бутила; и

R⁴, если присутствует, независимо выбран из водорода, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила и втор-бутила.

12. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по п. 11, отличающееся тем, что:

цикл А выбран из и волнистая линия с отметкой 1 представляет точку соединения цикла A c L¹, а волнистая линия с отметкой 2 представляет точку соединения цикла А с X²;

-(Х²)_р- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-C(R⁵)(R⁶)-, -N(R⁴)-C(R⁵)(R⁶)- и -О-C(R⁵)(R⁶)-, и его левая химическая связь соединена с циклом А, а его правая химическая связь соединена с X³; и

-(X³)_q- выбран из -C(R⁵)(R⁶)-, -C(R⁵)(R⁶)-N(R⁴)- и -C(R⁵)(R⁶)-О-, и его левая химическая связь соединена с X², а его правая химическая связь соединена с карбонилом.

13. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, или стереоизомер по любому из пп. 10-12, отличающееся тем, что указанное соединение выбрано из следующих соединений:

14. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении TRK и/или ROS1, содержащая эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли, или стереоизомера по любому из пп. 1-13, и один или большее количество фармацевтически приемлемых носителей и/или вспомогательных веществ.

15. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли, или стереоизомера по любому из пп. 1-13 для приготовления лекарственного средства для лечения заболеваний и связанных с ними состояний, опосредованных одной или большим количеством тирозинкиназ из числа TRK и/или ROS1; при этом указанные заболевания и связанные с ними состояния представляют собой злокачественное новообразование.

16. Применение по п. 15, где злокачественное новообразование выбрано из рака легкого, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака молочной железы, холангиокарциномы, лейкоза, меланомы, рака щитовидной железы, множественной миеломы, саркомы мягких тканей, рака яичников, рака желудка, дерматофибромы, рака поджелудочной железы, глиобластомы, рака головы и шеи.

17. Применение по п. 15, где указанные заболевания представляют собой злокачественное новообразование, которое по меньшей мере частично устойчиво к терапевтически активным агентам, воздействующим на TRK и/или ROS1.

18. Применение по п. 16, где рак легкого выбран из мелкоклеточного рака легкого и не мелкоклеточного рака легкого.

19. Применение по п. 16, где злокачественное новообразование представляет собой воспалительную миофибробластическую опухоль.