Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний животных Российский патент 2023 года по МПК C12Q1/18 G01N33/48 

Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии, может быть использовано для разработки эффективных терапевтических мероприятий. Способ позволяет определить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам без выделения чистой культуры, то есть с меньшей затратой времени.

Уровень техники

Известен способ, в котором применяется питательная среда, применяемая для культивирования бактерий рода Pseudomonas. В нее входят пептон, глицерин, различные минеральные соли, г/л:

Пептон - 20.0

Глицерин - 10.0

K2HPO4- 1.5

MgSO4⋅7H2O - 1,5

Вода дистиллированная до 1 л (King Е.О., Ward М.К., Raney D.Е. Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescin // J. Lab and Clin. Med. - 1954. - Vol.44 (2). - P. 301-307).

Известна питательная среда LB (являющаяся одной из основных для культивирования бактерий рода Pseudomonas), состоящая, г/л:

Пептон - 10.0

Дрожжевой экстракт - 5.0

Натрий хлористый - 10.0

Вода водопроводная до 1 л (Дашкевич В.С., Дашкевич Н.Ю., Ашмарина Л.Ф., Шушаро А.И. Способ борьбы с возбудителями заболеваний растений // Патент РФ №2130265, заявлено 29.12.97; опубл. 20.05.99. Бюл.14).

Недостатком данных способов является высокая стоимость среды, связанная с наличием в ее составе такого дорогостоящего ингредиента, каким является пептон.

Известен способ, в котором питательная среда для культивирования Pseudomonasfluorescens АР-33, содержит мелассу, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, сульфат магния семиводный дистиллированную воду, при этом, питательная среда дополнительно содержит горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, янтарную кислоту, лапрол для жидкой питательной среды или агар для твердой питательной среды при следующем соотношении компонентов, г/л:

Меласса - 15

Калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный - 0,5

Сульфат магния семиводный - 0,2

Горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием - 250

Янтарная кислота - 0,05

Лапрол или агар соответственно 5 или 18

Дистиллированная вода до 1 л.

Недостатком данного способа является высокая концентрация клеток в поле зрения микроскопа при микроскопическом исследовании, данный результат препятствует выявлению минимально подавляющей концентрации.

Наиболее близким изобретением к описываемому способу по технической сущности является способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительного заболевания, включающий забор гнойного отделяемого, культивирование его на питательной среде в присутствии антибиотика с последующей оценкой результата, отличающийся тем, что забор гнойного отделяемого осуществляют из очага гнойного воспаления челюстно-лицевой области, культивируют в сахарном бульоне не менее двух часов, после чего вводят стандартные диски с исследуемыми антибиотиками и инкубируют в течение не менее двух часов, результат оценивают по степени мутности содержимого в пробе, считая, что чем меньше мутность, тем выше чувствительность.

Рассмотренный способ имеет ряд недостатков, основными из которых являются: субъективная оценка полученных данных, для точного результата необходимо специальное дорогостоящее оборудование и временные затраты.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения являлась разработка такого способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний, который позволяет применять наиболее удобную и дешевую среду культивирования для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Техническим результатом изобретения является создание технически простой среды, которая позволяет определить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам без выделения чистой культуры, то есть с меньшей затратой времени.

Технический результат достигается с помощью способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний животных, в котором забор гнойного отделяемого, культивирование его на питательной среде в присутствии антибиотика с последующей оценкой результата, при этом мясо-пептонный агар разливают по чашкам Петри, дают ему застыть с 1%-ной глюкозой, нанесенной на его поверхность штрихом, причем полученный образец в объеме 1 мл засевают на поверхность мясо-пептонного агара, раскладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками, после чего Чашки Петри устанавливают в термостат не менее чем на 14 часов при температуре 37±0,5°С, результат оценивают по измерению зоны задержки роста и по максимальному размеру судят о лучшем действии антибиотика, который и рекомендуют использовать для лечения больного животного.

Сущность способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний животных, включающий забор гнойного отделяемого, культивирование его на питательной среде в присутствии антибиотика с последующей оценкой результата, при этом мясо-пептонный агар разливают по чашкам Петри, дают ему застыть с 1%-ной глюкозой, нанесенной на его поверхность штрихом, причем полученный образец в объеме 1 мл засевают на поверхность мясо-пептонного агара, раскладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками, после чего Чашки Петри устанавливают в термостат не менее чем на 14 часов при температуре 37±0,5°С, результат оценивают по измерению зоны задержки роста и по максимальному размеру судят о лучшем действии антибиотика, который и рекомендуют использовать для лечения больного животного.

Краткое описание чертежей и их материалов

На фиг.1 дан способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний животных, подтитровка к антибиотикам, выделенной культуры.

На фиг.2 дан способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний животных, культура, выделенная от больного животного с предварительным диагнозом: «Гнойно-воспалительный абсцесс печени».

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний животных.

Культуру выделили от больного животного с предварительным диагнозом: «Гнойно-воспалительный абсцесс печени».

Пример №1.

Забор гнойного отделяемого осуществляют с помощью стерильного одноразового шприца во время оперативных вмешательств по вскрытию и дренированию очагов гнойной инфекции или пунктированием инфильтрата стерильным одноразовым шприцем после обработки места вкола иглы 70%-ным этиловым спиртом. После пунктирования место вкола иглы дополнительно обрабатывают 3%-ным раствором перекиси водорода и раствором бриллиантового зеленого. В пробирки с мясо-пептонным бульоном стандартной разливки по 5 мл помещают не менее 3 капель гнойного отделяемого из очага гнойной инфекции. Количество пробирок соответствует количеству исследуемых антибиотиков. Пробирки устанавливают в термостат не менее чем на 2 часа при температуре 38±0,5°С. Через 2 часа пробирки достают из термостата. В каждую из пробирок добавляют по одному стандартному диску с одним из исследуемых антибиотиков. Затем все пробирки повторно инкубируют при температуре 38±0,5°С не менее двух часов. По истечении двух часов пробирки достают из термостата, визуально оценивают степень мутности содержимого в каждой пробирке и определяют чувствительность микроорганизмов к соответствующему антибиотику, считая, что чем меньше мутность, тем выше чувствительность. Недостатком является субъективная оценка полученных данных, для точного результата необходимо специальное оборудование.

Пример 2.

Выполняется аналогично примеру №1, но вместо мясо-пептонного бульона используют пептонно-гороховую жидкую среду. Пробирки устанавливают в термостат не менее чем на 2 часа при температуре 35±0,5°С. Через 2 часа пробирки достают из термостата. В каждую из пробирок добавляют по одному стандартному диску с одним из исследуемых антибиотиков. Затем все пробирки повторно инкубируют при температуре 37±0,5°С не менее двух часов. По истечении двух часов пробирки достают из термостата и учитывают полученный результат. При этом культура визуально лучше растет в данной среде, что отмечается интенсивным помутнением. Однако, минимальную подавляющую концентрацию в примере определить сложно, в связи с активным ростом культуры в данной среде, в связи с чем требуется увеличивать концентрацию исследуемых антибиотиков.

Пример №3.

Выполняется аналогично примеру 1, но вместо мясо-пептонного бульона используют мясо-пептонный агар. Его разливают по чашкам Петри, дают застыть с 1%-ной глюкозой, нанесенной на его поверхность штрихом, причем полученный образец в объеме 1 мл засевают на поверхность мясо-пептонного агара, раскладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками, после чегоЧашки Петри устанавливают в термостат не менее чем на 14 часов при температуре 37±0,5°С. Результат оценивают по измерению зоны задержки роста и по максимальному размеру судят о лучшем действии антибиотика, который и рекомендуют использовать для лечения больного животного (фиг.1).

Таким образом, оптимальным является пример 3. Рассмотренный способ прост в исполнении, создается среда, в которой возможно определить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам без выделения чистой культуры, то есть с меньшей затратой времени.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества: позволяет применять наиболее удобную и дешевую среду культивирования для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний животных, включающий забор гнойного отделяемого в объеме 1 мл, культивирование его на поверхности мясо-пептонного агара, розлитого по чашкам Петри с 1%-ной глюкозой, нанесенной на его поверхность штрихом; затем раскладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками, после чего чашки Петри устанавливают в термостат на 14 ч при температуре 37±0,5°С; результат оценивают по измерению зоны задержки роста и по максимальному размеру судят о лучшем действии антибиотика, который и рекомендуют использовать для лечения больного животного. Изобретение обеспечивает определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам без выделения чистой культуры. 2 ил., 3 пр.

Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний животных, включающий забор гнойного отделяемого, культивирование его на питательной среде в присутствии антибиотика с последующей оценкой результата, отличающийся тем, что мясо-пептонный агар разливают по чашкам Петри, дают ему застыть с 1%-ной глюкозой, нанесенной на его поверхность штрихом, причем полученный образец в объеме 1 мл засевают на поверхность мясо-пептонного агара, раскладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками, после чего чашки Петри устанавливают в термостат на 14 ч при температуре 37±0,5°С, результат оценивают по измерению зоны задержки роста и по максимальному размеру судят о лучшем действии антибиотика, который и рекомендуют использовать для лечения больного животного.