Применение (Е)-(4-бромфенил)(6-(2-гидроксифенил)-2-иминио-4,7,8-триоксо-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нонан-9-илиден)метаноата в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью Российский патент 2023 года по МПК A61K31/4188 C07D487/10 A61P31/06 

Изобретение относится к области органической химии, а именно к соединениям класса спиро[имидазол-2,2'-пирролов], проявляющих противотуберкулезную активность, которые могут быть использованы в качестве исходных продуктов для синтеза новых гетероциклических систем и в фармакологии.

Известен способ синтеза заявленных соединений - (Е)-(арил)(6-(2-гидроксиарил)-2-иминио-4,7,8-триоксо-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нонан-9-илиден)метаноатов, являющихся продуктами взаимодействия 3-ароилпирроло[2,1-с][1,4]бензоксазин-1,2,4-трионов с 1,3-дифенилгуанидином (Кобелев, А.И. Взаимодействие пирролобензоксазинтрионов с дифенилгуанидином. Синтез замещенных спиро[имидазол-2,2'-пирролов] / А.И. Кобелев, М.В. Дмитриев, А.Н. Масливец // Журнал органической химии. - 2021. - Т. 57. - Вып.1. - С.103-108. [Kobelev, A.I. Reaction of Pyrrolobenzoxazinetriones with Diphenylguanidine. Synthesis of Substituted Spiro [imidazole-2,2'-pyrroles] / A.I. Kobelev, M.V. Dmitriev, A.N. Maslivets // Russian Journal of Organic Chemistry. - 2021. - Vol.57. - №. 1. - P. 108-112. DOI: 10.1134/S1070428021010152].), образующихся по следующей схеме:

Задачей изобретения является изыскание новых соединений, обладающих противомикробной активностью, и расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

Технический результат - выявлена ранее не известная противотуберкулезная активность соединения (Е)-(4-бромфенил)(6-(2-гидроксифенил)-2-иминио-4,7,8-триоксо-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нонан-9-илиден)метаноата.

Технический результат достигается получением соединения (Е)-(4-бромфенил)(6-(2-гидроксифенил)-2-иминио-4,7,8-триоксо-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нонан-9-илиден)метаноата путем взаимодействия 3-ароилпирроло[2,1-c][1,4]бензоксазин-1,2,4-триона 1 с 1,3-дифенилгуанидином в среде растворителя с последующим выделением целевого продукта, по следующей схеме:

Процесс ведут при комнатной температуре, а в качестве растворителя используют безводный этилацетат.

Изобретение иллюстрируется следующим примером.

Пример 1. (Е)-(4-бромфенил)(6-(2-гидроксифенил)-2-иминио-4,7,8-триоксо-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нонан-9-илиден)метаноат (2).

К раствору 1.0 ммоль пирролдиона 1 в 15 мл сухого этилацетата добавляли 1.0 ммоль 1,3-дифенилгуанидина, перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре (до исчезновения фиолетовой окраски исходного пирролдиона 1), образовавшийся осадок соединения 2 отфильтровывали. Выход 86,7%, бесцветные кристаллы, т.пл. 206-209°С (разл., этилацетат).

Соединение (2) C₃₁H₂₁BrN₄O5.

Найдено, %: С 61.08, Н 3.45, N 9.18.

Вычислено, %: С 61.10, Н 3.47, N 9.19.

Соединение (2) - бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО и ДМФА, труднорастворимое в менее полярных органических растворителях, нерастворимое в воде и алканах. Устойчиво при хранении в обычных условиях.

В ИК спектре соединения (2), записанном в виде пасты в вазелиновом масле, присутствуют полосы валентных колебаний фенольной группы ОН и иминиогруппы в виде широкой полосы при 3177 см^-1, карбонильных групп 1791, 1725 (С⁴=O, С⁷=O), 1687 (COAr). см^-1.

В спектре ЯМР ¹Н соединения (2), записанном в растворе в ДМСО-d₆, кроме сигналов протонов ароматических колец, синглет протонов иминиогруппы при 9.26 м.д. и уширенный синглет протона фенольной группы ОН при 10.03 м.д.

Пример 2. Фармакологическое исследование соединения 2 на наличие противотуберкулезной активности.

Для исследований химических веществ использован микрометод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде с использованием индикатора роста резазурина натриевой соли [Palomino J., Martin A, Camacho М. et al. ResazurinMicrotiter Assay Plate: Simple and Inexpensive Method for Detection of Drug Resistance in Mycobacterium tuberculosis. ResazurinMicrotiter Assay Plate: Simple and Inexpensive Method for Detection of Drug Resistance in Mycobacterium tuberculosis // Antimicrobail Agents and Chemotherapy. 2002. Vol.46, N 8.P. 2720-2722. ttps://doi.org/10.1128/AAC.46.8.2720.].

Исследуемые вещества в количестве 10 мг растворяли в 0,5 мл «Диметилсульфоксида», после чего добавляли 4,5 мл 0,9% изотонического раствора хлорида натрия, тем самым получая исходный раствор в 2,0 мг/мл.

В лунках стерильного 96-луночного плоскодонного микропланшета готовили два параллельных ряда двукратных серийных разведений химических соединений в питательной жидкой среде Мидлбрук 7Н, содержащую обогатительную добавку ВАСТЕС MGIT OADC (олеиновая кислота, альбумин, декстроза и каталаза). В каждой лунке содержалось 150 мкл определенной концентрации испытуемого вещества и 30 мкл обогатительной добавки.

Из 14-ти суточной культуры М. tuberculosis штамм H₃₇Rv готовили бактериальную суспензию, которая была стандартизирована по оптическому стандарту мутности Мак-Фарланда №1 с использованием денситометра, после чего инокулят разводили 1:20 в питательной среде Мидлбрук 7Н9 и вносили в каждую лунку планшета по 150 мкл.

В последних рядах содержалась питательная среда и культура в равных объемах (контроль). Максимально испытанная концентрация соответствовала 1000,0 мкг/мл, минимальная - 1,0 мкг/мл.

Планшеты запечатывали в полиэтиленовые пакеты и инкубировали при 37°С в течение 8 суток. Через 8 дней инкубации в каждую лунку добавляли 30 мкл 0,01% раствора натрия резазурината, приготовленного в стерильной дистиллированной воде и культивировали еще 24 часа при 37°С, затем оценивали визуально изменение окраски резазурина. Изменение от синего до розового цвета указывает на снижение резазурина и, следовательно, рост бактерий.

Анализ полученных данных показал: - соединение 2 обладает ингибирующей активностью в концентрации 500 мкг/мл в отношении культуры М. tuberculosis.

Изобретение относится к области фармацевтики, а именно к применению (Е)-(4-бромфенил)(6-(2-гидроксифенил)-2-иминио-4,7,8-триоксо-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нонан-9-илиден)метаноата формулы I, обладающего противотуберкулезной активностью. Изобретение обеспечивает эффективное противотуберкулезное действие. 1 табл., 2 пр.

I

Применение (Е)-(4-бромфенил)(6-(2-гидроксифенил)-2-иминио-4,7,8-триоксо-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нонан-9-илиден)метаноата

,

обладающего противотуберкулезной активностью.