Способ определения необходимости выполнения вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с донацией сперматозоидов при идиопатическом мужском бесплодии с необструктивной азооспермией Российский патент 2024 года по МПК G01N33/50 A61B5/00 

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к урологии, репродуктологии, клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования мужского бесплодия неустановленного генеза и оценки репродуктивного здоровья мужчин.

В настоящее время бесплодие приобрело статус глобальной социально-демографической проблемы, с которой сталкивается 15% пар во всем мире при планировании семьи (Agarwal A, Mulgund A, Hamada A, Chyatte MR. А unique view on male infertility around the globe; 2 Reprod Biol Endocrinol 2015; 13(1):37. doi:10.1186/s12958-015-0032-1.). Показатель встречаемости «мужского» фактора, то есть, количественных и качественных нарушений в сперме, при обследовании пары на бесплодие приближается к 50%, что требует пристального внимания к мужскому здоровью (Лебедев Г.С., Голубев Н.А., Шадеркин И.А., Шадеркина В.А., Аполихин О.И., Сивков А.В., Комарова В.А. Мужское бесплодие в Российской Федерации: статистические данные за 2000-2018 годы. Экспериментальная и клиническая урология 2019; (4): 4-12).

Таким образом, доля мужчин с нарушениями в эякуляте ежегодно увеличивается, что является одной из причин снижения рождаемости, и становится как медицинской, так и социальной проблемой. Современные методы диагностики позволяют распознавать многие факторы мужского бесплодия: генетические, эндокринные, инфекционные, экстрагенитальные и т.д. Однако, несмотря на все современные медико-биологические достижения, остается 1/3 пациентов с нераспознанной причиной (идиопатической) мужского бесплодия. При этом нельзя забывать, что часть пациентов из этой категории для реализации отцовства не хотят прибегать к вспомогательным репродуктивным технологиям, и стремятся достичь беременности естественным путем. Поэтому поиск причин мужского бесплодия остается актуальным вопросом современной урологии.

Разработка принципиально новой стратегии и тактики скрининга мужской инфертильности на основе молекулярных инструментов представляет собой насущную потребность. На сегодняшний день в практике врача уролога практически отсутствуют надежные, соответствующие времени методики для точной диагностики мужского бесплодия, основанные на использовании достижений молекулярной биологии и генетики.

В данной ситуации следует отметить, что репродукция - сложный процесс, в основе которого лежит взаимодействие эндокринной и иммунной систем и микробиоты. В то же время существующий гемато-тестикулярный барьер, который позволяет избежать аутоиммунные атаки против белков, экспрессируемых сперматозоидами, при повреждении которого возникает секреторный тип мужского бесплодия. (Santacroce L, Imbimbo С, Ballini А, Crocetto F, Scacco S, Cantore S, Di Zazzo E, Colella M, Jirillo E. Testicular Immunity and Its Connection with the Microbiota. Physiological and Clinical Implications in the Light of Personalized Medicine. J Pers Med. 2022 Aug 20;12(8):1335. doi: 10.3390/jpm12081335. PMID: 36013286; PMCID: PMC9409709).

Поэтому клинически традиционных показателей спермограммы не всегда достаточно в оценке фертильности сперматозоидов. Более того, морфологический анализ биоптатов яичка, окрашенных стандартными красителями, может демонстрировать информацию о текущем состоянии сперматогенеза, но не позволяет прогнозировать сохранность сперматогенного эпителия в перспективе. Необходим поиск новых критериев мужской фертильности, биохимических и морфологических маркеров для расширения доказательной базы некоторых параметров спермы и определения качества половых клеток.

В практике для оценки качества и фертильности спермы в настоящее время выполняется спермограмма [WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. - 5th ed. - WHO (Geneva), 2010. - Vol.270; Руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека. Пер. с англ. Н.П. Макаровой под научн. ред. Л.Ф. Курило. 5-е изд. - М.: Изд-во "Капитал принт", 2012]. Данное исследование включает в себя определение целого ряда параметров эякулята, из которых, однако, на практике преимущественно используется только ограниченное число критериев (определение концентрации, жизнеспособности, подвижности и морфологии сперматозоидов).

К недостаткам морфологической оценки эякулята (WHO (Geneva), 2010) относятся:

- основана на визуальном исследовании функционально-морфологических критериев и не позволяет выявить биохимические причины мужского бесплодия;

- носит субъективный характер, отчего результат оценки качества половой клетки зависит от проводящего данный анализ;

- не позволяет в 40% случаев, а иногда и более, дать приемлемую интерпретацию причин бесплодия неясного генеза, так как показатели спермограмм мужчин с идиопатическим бесплодием находятся в пределах нормы, согласно критериям ВОЗ, и соответствуют критериям фертильных мужчин, поскольку нет достаточного количества данных о биохимических механизмах, лежащих в основе формирования фертильности.

Из существующего уровня техники известен способ определения одного из таких маркеров инфертильности - фрагментации ДНК сперматозоидов - с использованием различных методов документации этого явления: TUNEL-тест (TdT-mediated dUTP Nick End Labeling); электрофорез ДНК индивидуальных, заключенных в агарозу клеток - Comet assay (single cell gel electrophoresis); тест на структуру хроматина - метод SCSA (sperm chromatin structure assay), который позволяет определить степень повреждения нитей ДНК в сперматозоидах, коррелирующую с мужской фертильностью как в естественных условиях, так и во вспомогательной репродукции. Для количественного определения клеток с нарушенной ДНК используют проточную цитометрию или флуоресцентную микроскопию [Жабин С.Г. и др. Сравнительная оценка уровня ДНК-фрагментации и других показателей фертильности эякулята // Пробл. репрод. - 2015. - Т. 21. - №4. -С.121-124].

Однако недостатками способов определения фрагментации ДНК являются:

- трудоемкость и технические сложности;

- необходимость использования дорогостоящих реактивов и оборудования (например, проточного цитофотометра);

- недостаточная стандартизация методологии и общепринятого протокола исследования;

- отсутствие понимания биологических механизмов, лежащих в основе анализируемого параметра, так как источником повреждения ДНК в сперме могут быть либо повреждения, возникающие в ходе сперматогенеза, либо инициация процесса апоптоза, либо оксидативный стресс.

- фрагментация ДНК является поздним маркером апоптоза, поэтому способ не позволяет выявить ранние биохимические нарушения, начавшиеся в клетке и ассоциированные с ее гибелью, т.е. когда клетка находится на ранних этапах апоптоза.

Известен Способ диагностики мужского бесплодия, включающий исследование эякулята на содержание эндокринных дизрапторов (EDs), отличающийся тем, что при обнаружении наличия триклозана ≥0,15 нг/мл методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием устанавливают токсическую форму бесплодия, (патент РФ№2675856, опубл.25.12.2018).

Недостатками данного технического решения являются:

- данный способ позволяет определить лишь токсическую форму патозооспермии;

- данный способ не позволяет выявить конкретные воспалительные причины мужского бесплодия;

- трудоемкость и технические сложности.

Известен способ прогнозирования идиопатического бесплодия мужчин путем исследования иммунохимического параметра в сперме, отличающийся тем, что методом латексагглютинации определяют концентрации термостабильной карбоксилэстеразы в семенной плазме в начале исследования и через 4-6 недель и по сумме концентраций двух определений выше 16,0 нг/мл прогнозируют идиопатическое бесплодие (патент РФ №2697395. Опуб. 14.08.2019).

Однако недостатками этого способа определения являются:

- не высокая чувствительность метода (55,3%),

- метод определяет биохимические изменения в семенной плазме и не демонстрирует корреляцию с морфологическими изменениями в извитых семенных канальцах;

- трудоемкость и технические сложности, необходимость специальной аппаратуры.

Известен способ определения качества эякулята у мужчин по активности креатинфосфокиназы в спермальной плазме, включающий сбор образца эякулята, полученный путем мастурбации и семяизвержения в чистый контейнер из пластика, доставку в лабораторию в течение 30 минут при температуре от 20 до 37°С, помещение в термостат при 37°С для разжижения, центрифугирование в течение 10 мин при 1000 g, перенесение в чистую пробирку и определение активности креатинфосфокиназы на автоматическом биохимическом анализаторе кинетическим методом, отличающийся тем, что интерпретацию результатов проводят следующим образом: активность креатинфосфокиназы более 362,3 Е/л соответствует нормозооспермии; от 167,0 до 362,3 Е/л включительно соответствует олигозооспермии; от 109,4 до 167,0 Е/л включительно соответствует криптозооспермии; активность КФК ниже 109,4 Е/л включительно соответствует азооспермии по данным спермограммы.(патент РФ№2732968, опубл. 25.08.2020).

Однако недостатками иммунофлуоресцентного анализа гидроксиметилированной ДНК являются:

- необходимость использования дорогостоящих реактивов (антител, флуорохромов) и оборудования (например, люминесцентного микроскопа);

- трудоемкость и технические сложности;

- недостаточная стандартизация методологии и общепринятого протокола исследования;

- отсутствие определения патогенеза биологических механизмов ДНК-фрагментации, лежащих в основе анализируемого параметра, так как причиной повреждения ДНК сперматозоидов могут быть либо повреждения, возникающие в ходе сперматогенеза, либо инициация процесса апоптоза, либо активные формы кислорода.

Известен способ оценки репродуктивной функции мужчин с идиопатическим бесплодием и астенозооспермией, отличающийся тем, что с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в клетках подвижной фракции эякулята определяют уровень экспрессии и мутантный аллель гена противомикробного пептида DEFB126 и при снижении уровня экспрессии по меньшей мере в 3,4 раза в сравнении с экспрессией группы здоровых доноров и выявлении мутантного генотипа del/del DEFB126 диагностируют астенозооспермию, обусловленную нарушением белковой структуры гликокаликса сперматозоидов (патент РФ№2759147, опубл. 09.11.2021).

Недостатками данного технического решения являются:

- трудоемкость и технические сложности;

- метод позволяет выявить факт наличия мутантного генотипа del/del DEFB126, который провоцирует развитие астенозооспермии, причину нарушения подвижности сперматозоида данный способ не позволяет выявить;

- с помощью данного способа невозможно определить в какой период сперматогенеза произошла мутация, которая стала причиной нарушения подвижности сперматозоида.

В настоящее время существует небольшое количество работ, посвященных морфометрическому анализу сперматогенеза.

Известен способ диагностики гипосперматогенеза и атрофии сперматогеннго эпителия в паренхиме яичка путем проведения морфометрического анализа биоптата и определения индекса сперматогенеза с помощью вычисления отношения числа всех сперматогенных клеток к числу сустентоцитов (клеток Сертоли) в 30 поперечных срезов извитых семенных канальцев [А.Ф. Астраханцев, Соловьев А.А., 2001]. Оценка результата производится по таким признакам как: снижение индекса сперматогенеза до 10-90%, снижение индекса сперматогенеза более 90%, при этом в 1 случае диагностируется гипосперматогенез, во 2 случае диагностируют атрофию сперматогенных клеток яичка.

Недостатки данного метода: метод неточен, т.к. не дает информации о количественном соотношении сперматогенных клеток различной степени дифференцировки в процессе различных фаз сперматогенеза: размножения, роста, созревания и формирования.

Наиболее близким к заявленному техническому решению является способ диагностики нарушений сперматогенеза у человека путем определения его цитологического профиля, отличающийся тем, что на гистологическом срезе поперечных сечений извитых семенных канальцев мужской половой железы проводят определение каждой из VI клеточных ассоциаций, составляющих цикл сперматогенеза, затем производят дифференцированный подсчет количества сперматогенных клеток, входящих в каждую ассоциацию, по отношению к количеству сустентоцитов данного сегмента канальца, сравнивают результаты подсчета с цитологическим профилем сперматогенеза в половых железах здоровых мужчин и оценивают результат, констатируя нарушение на стадии формирования при снижении количества ранних и поздних сперматид во всех VI клеточных ассоциациях более 5%; на стадии созревания при уменьшении количества сперматогенных клеток, входящих в VI клеточную ассоциацию; на стадии роста при снижении числа первичных сперматоцитов на стадиях I-V; на стадии размножения при уменьшении количества сперматогоний на всех VI стадиях.(патент РФ№2665162, опубл. 28.08.2018).

Недостатками данного технического решения являются:

- трудоемкость и необходимость в высококвалифицированном персонале;

- нет корреляции изменений в паренхиме и строме яичка;

- данный метод демонстрирует конкретные морфологические изменения в яичке, но не поясняет патогенез данных нарушений.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение является усовершенствование методики прогнозирования нарушений сперматогенеза неустановленного генеза.

Данная задача решается за счет того, что заявленный пособ прогнозирования идиопатического мужского бесплодия в условиях программ вспомогательных репродуктивных технологий, включающий проведение гистологического анализа биоптатов яичка, отличается тем, что у мужчин с бесплодием неустановленного генеза получают биопсийный материал яичка, в котором методом световой микроскопии оценивают состояние сперматогенеза в извитых семенных канальцах по десятибалльной шкале, далее оценивают интерстиций яичка и наличие в ней триптазаактивных тучных клеток (ТК) в 1 мм², которые контрастируются с помощью иммунногистохимического окрашивания. В случае выявления интенсивной инфильтрации интерстиция яичка триптазаактивными тучными клетками более 39 в 1 мм² на фоне нарушения сперматогенеза 6 баллов и ниже, прогнозируют необходимость выполнения протокола вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с донацией сперматозоидов.

Техническим результатом, обеспечиваемым приведенной совокупностью признаков, является повышение точности и достоверности прогнозирования, путем введения дополнительных процедур цитоморфологического анализа паренхимы и стромы яичка и введения дополнительных критериев оценки результатов.

Известно, что тучные клетки (ТК) формируются из гемопоэтических клеток-предшественников, но при этом зрелые ТК обычно не циркулируют в крови. Они мигрируют в периферические ткани, где приобретают свой зрелый фенотип [Komi D.E.A., Khomtchouk К., Santa Maria P.L. A review of the contribution of mast cells in wound healing: involved molecular and cellular mechanisms. Clin Rev Allergy Immunol. 2020;58(3):298-312. DOI: 10.1007/s12016-019-08729-w.]. Этому процессу, а также локальному созреванию и активации ТК способствует фактор стволовых клеток (SCF), продуцируемый различными клетками, включая фибробласты и эндотелиальные клетки. Сами ТК экспрессируют широкий спектр рецепторов, таких как FcsRI, Fey, рецепторы комплемента, цитокинов, хемокинов, гормонов и толл-подобные рецепторы. Это позволяет ТК синтезировать разнообразный и широкий спектр биологически активных продуктов [Gri G., Frossi В., DTnca F. et al. Mast cell: an emerging partner in immune interaction. Front Immunol. 2012;3:120. DOI: 10.3389/fimmu.2012.00120.].

Однако роль ТК в формировании мужского бесплодия остается до конца не ясной. Получены данные о повышенном содержании ТК как в эякуляте, так и непосредственно в тканях репродуктивных органов у бесплодных мужчин, особенно при идиопатической азооспермии. Так, анализ образцов семенной жидкости бесплодных мужчин с астенозооспермией показал, что количество ТК у этих пациентов было больше, чем у здоровых мужчин [El-Karaksy A., Mostafa Т., Shaeer O.K. et al. Seminal mast cells in infertile asthenozoospermic males. Andrologia. 2007;39(6):244-247. DOI: 10.1111/j.1439-0272.2007.00795.x.].

Цель нашего исследования - провести количественный подсчет тучных клеток в интерстиции яичка и их корреляцию с нарушением сперматогенеза у мужчин с идиопатическим мужским бесплодием для решения вопроса о необходимости выполнения протокола вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с донацией сперматозоидов.

У мужчин с идиопатической азооспермией получают биоптат яичка, методом световой микроскопии оценивают состояние сперматогенеза в извитых семенных канальцах в баллах. Так же в условиях световой микроскопии оценивается интерстиций яичка и наличие в нем триптазаактивных тучных клеток (ТК). Отдельно производился морфометрический подсчет ТК в 1 мм² и определение соотношение их количества с нарушением сперматогенеза. Высокое содержание ТК в 1 мм² интерстиция яичка свидетельствует о выраженном хроническом воспалении гонады, о малой перспективе восстановления сперматогенного эпителия, низкой эффективности получения собственных сперматозоидов и прогнозирования необходимости выполнения протокола вспомогательных репродуктивных технологий с донацией сперматозоидов.

С целью разработки референсных значений для количества тучных клеток в интерстиции яичка нами был проведен ROC- анализ клинической базы пациентов (n=32), обратившихся в клинику по лечению бесплодия, в ходе которого была определена точка разделения (cut-off) для количества тучных клеток в 1 мм² интерстиция яичка у мужчин с патозооспермией и нормозооспермией.

При статистической обработке полученных данных (ROC - анализ) была определена площадь под ROC - кривой, которая соответствует взаимосвязи прогноза патозооспермии и количества триптазаактивных тучных клеток в 1 мм² интерстиция яичка у мужчин и составила 0.994±0,01 с 95% ДИ: 0.979-1,0.

Пороговое значение количества триптазаактивных тучных клеток в точке cut-off составило 39,0 / мм². При выявлении количества тучных клеток в интерстиции яичка в равном или превышающем данное значение прогнозировалась тяжелая степень бесплодия (патозооспермии) с низкой эффективностью ЭКО/ИКСИ с применением собственных сперматозоидов и высокий прогноз приверженности ИКСИ с использованием донорской спермы. Чувствительность и специфичность метода составила 95% и 100% соответственно.

Наши исследования показали, что, высвобождая провоспалительные медиаторы, хемотаксические факторы и иммунорегуляторные цитокины, которые способствуют прогрессии фибриллогенеза, ТК, расположенные в интерстиции ткани яичка, могут приводить к снижению тестикулярной функции и нарушению сперматогенеза. Данный факт нашел подтверждение в клинических наблюдениях пациентов с необструктивной азооспермией и без явных объективных причин мужского фактора бесплодия, у которых в интерстициальном пространстве яичка были обнаружены ТК.

Мы установили, что, тучные клетки являются триггером в формировании патоспермии за счет высокой способности к миграции в соединительной ткани, которая усиливается во время воспаления, и выработки множества медиаторов, начиная от предварительно сформированных протеаз и гистамина, заканчивая синтезированными de novo цитокинами, хемокинами и липидными медиаторами.

Одним из важных аспектов наших исследований, посвященных изучению причин идиопатического бесплодия, стала визуализация и подсчет ТК с помощью иммунногистохимического анализа. Таким образом, повышенное количество тучных клеток может служить маркером в тактике преодоления мужского фактора бесплодия. Это позволило получить информацию о тяжести нарушения сперматогенеза из-за изменения клеточного микроокружения в интерстиции яичка, а также обеспечивает повышение точности диагностики идиопатического бесплодия мужчин и оценки перспективы сохранности развития мужских половых клеток.

В случае, когда перспективы консервативного и хирургического лечения мужского бесплодия у пациента отсутствуют, следует рекомендовать супружеской паре выполнение протокола вспомогательных репродуктивных технологий с донацией сперматозоидов.

Подробное описание способа и примеры его клинического выполнения

Предлагаемый способ прогнозирования осуществляется следующим образом. Биопсия яичка производится открытым способом по стандартным показаниям по методике Micro-TESE (Franco G, Scarselli F, Casciani V, De Nunzio C, Dente D, Leonardo C, Greco PF, Greco A, Minasi MG, Greco E. A novel stepwise micro-TESE approach in non obstructive azoospermia. BMC Urol. 2016 May 12;16(1):20. doi: 10.1186/s12894-016-0138-6).

После стандартной фиксации в забуференном 4% формальдегиде биопсийный материал заливали в парафин. Иммуногистохимическую детекцию триптазы ТК проводили с помощью антител Anti-Mast Cell Tryptase antibody (клон AA1, #ab2378, разведение 1:2000; Abeam, Великобритания). В качестве вторичных использовались козьи антитела #AS-M1-HRP, хромогенная детекция которых проводилась реагентом ImmPACTTM DAB Peroxidase Substrat Kit (#SK-4105) согласно инструкции производителя. После стандартной процедуры обезвоживания срезы заключали в постоянную монтажную среду (Vector Laboratories, Burlingame, СА, USA, #Н1000).

Микроскопическое исследование осуществляется с помощью микроскопа «01ympus СХ43» при общем увеличении оптической системы х 400. Тучные клетки оценивались в 1 мм² интерстиция яичка. Качество сперматогенеза оценивалось на поперечных срезах извитых семенных канальцах в баллах, где 10 баллов - сперматогенез полностью сохранен; 9 -незначительные нарушения сперматогенеза - дезорганизация сперматогенного эпителия, много поздних сперматид; 8 - меньше чем пять сперматозоидов в канальце, немного поздних сперматид; 7 - отсутствие сперматозоидов и поздних сперматид, много ранних сперматид; 6 -отсутствие сперматозоидов и поздних сперматид, мало ранних сперматид; 5 -отсутствие сперматозоидов и сперматид, много сперматоцитов; 4 -отсутствие сперматозоидов и сперматид, мало сперматоцитов; 3 - только сперматогонии; 2 - отсутствие половых клеток, только клетки Сертоли; 1 -отсутствие элементов сперматогенного эпителия (тубулярная атрофия) [Aafjes J.H., van der Vijver J.C., Schenck P.E. Value of a testicular biopsy rating for prognosis in oligozoospermia. Br Med J. 1:289 -290., 1978.]

В случае выявления у пациента интенсивной инфильтрации интерстиция яичка триптазаактивными тучными клетками более 39 в 1 мм² на фоне нарушения сперматогенеза 6 баллов и ниже, прогнозируют необходимость выполнения протокола вспомогательных репродуктивных технологий с донацией сперматозоидов.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами:

Пример 1. Пациент А-ов., 37 лет. Мужское бесплодие 5 лет. По данным спермограммы и клинического обследования - идиопатическая необструктивная азооспермия. Оценка сперматогенеза - 2-3 балла. Количество триптазаактивных тучных клеток - 114 мм² в интерстиции яичка. Морфологически зрелые сперматозоиды при биопсии яичка не были получены. Прогноз восстановления сперматогенеза - отрицательный.

Пример 2. Пациент К-ев., 27 лет. Мужское бесплодие 3 года. По данным спермограммы и клинического обследования - идиопатическая необструктивная азооспермия. Оценка сперматогенеза - 6 баллов. Количество триптазаактивных тучных клеток - 39 мм² в интерстиции яичка. Морфологически зрелые сперматозоиды при биопсии яичка не были получены. Прогноз восстановления сперматогенеза - отрицательный. Пациенту рекомендовано ВРТ / ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида) с использованием донорской спермы.

Пример 3. Пациент М-ян., 30 лет. Мужское бесплодие 3 года. По данным спермограммы и клинического обследования - идиопатическая необструктивная азооспермия. Оценка сперматогенеза - 7-8 баллов. Количество триптазаактивных тучных клеток - 35 мм² в интерстиции яичка. При биопсии яичка были получены единичные морфологически зрелые сперматозоиды, поэтому у этого мужчины была взята ткань яичка для криоконсервации для последующего выполнения ИКСИ после плановой подготовки партнерши к трансферу эмбриона.

Во всех приведенных клинических случаях мужского бесплодия данные лабораторного и инструментального исследования не выявили явных отклонений. Однако прослеживается четкая тенденция ухудшения сперматогенеза при увеличении количества тучных клеток в 1 мм² ткани яичка. Т.е. чем меньше тучных клеток в интерстиции яичка, тем лучше прогноз в плане сохранности сперматогенеза в извитом семенном канальце яичка и успеха программы ВРТ.

Преимущества метода:

Заявленный способ позволяет повысить точность и достоверность прогнозирования успешности программ вспомогательных репродуктивных технологий, тем самым принять своевременные меры к осуществлению повторного протокола вспомогательных репродуктивных технологий с использованием аутоспермиев или донацией половых клеток. Тем самым сокращается время протокола программы ВРТ и снижается субъективность морфологической оценки сперматогенеза.

Способ апробирован на достаточно большом материале и может быть рекомендован к использованию в центрах планирования семьи и репродукции.

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, репродуктологии, клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения необходимости выполнения вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с донацией сперматозоидов при идиопатическом мужском бесплодии с необструктивной азооспермией. У мужчин с бесплодием неустановленого генеза получают биопсийный материал яичка, в котором на гистологическом срезе поперечных сечений извитых семенных канальцев исследуют методом световой микроскопии состояние сперматогенеза по десятибалльной шкале. Далее исследуют строму яичка и наличие в ней триптазаактивных тучных клеток в 1 мм², которые контрастируют с помощью иммунногистохимического окрашивания. При выявлении триптазаактивных тучных клеток 39 и более в 1 мм² в интерстиции яичка на фоне нарушения сперматогенеза 6 баллов и ниже прогнозируют необходимость выполнения протокола вспомогательных репродуктивных технологий с донацией сперматозоидов. Изобретение позволяет получить информацию о тяжести нарушения сперматогенеза из-за изменения клеточного микроокружения в интерстиции яичка, а также обеспечивает повышение точности диагностики идиопатического бесплодия мужчин и оценки перспективы сохранности развития мужских половых клеток. 3 пр.

Способ определения необходимости выполнения вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с донацией сперматозоидов при идиопатическом мужском бесплодии с необструктивной азооспермией, включающий проведение гистологического анализа биоптата яичка, отличающийся тем, что у мужчин с бесплодием неустановленого генеза получают биопсийный материал яичка, в котором на гистологическом срезе поперечных сечений извитых семенных канальцев исследуют методом световой микроскопии состояние сперматогенеза по десятибалльной шкале, далее исследуют строму яичка и наличие в ней триптазаактивных тучных клеток в 1 мм², которые контрастируют с помощью иммунногистохимического окрашивания; при выявлении триптазаактивных тучных клеток 39 и более в 1 мм² в интерстиции яичка на фоне нарушения сперматогенеза 6 баллов и ниже прогнозируют необходимость выполнения протокола вспомогательных репродуктивных технологий с донацией сперматозоидов.