ПРОЛЕКАРСТВА ДАНТРОЛЕНА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК C07D405/12 A61K31/4178 A61K31/661 A61P9/00 A61P25/00 A61P29/00 A61K9/08 A61K9/20 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящей заявке испрашивается приоритет по предварительной заявке США № 62/575124, поданной 20 октября 2017 года, и предварительной заявке США № 62/674422, поданной 21 мая 2018 года, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0002] Изобретение относится к пролекарствам дантролена, их композициям и способам их применения для лечения заболевания.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0003] Пролекарства, как правило, являются альтернативными формами активных лекарственных средств, обратимо модифицированными или дериватизированными химической группой, которая делает пролекарство неактивным или обеспечивает растворимость, стабильность или биодоступность, или изменяет некоторое другое свойство активного лекарственного вещества. Как правило, химическая группа пролекарства отщепляется от пролекарства под действием нагревания, кавитации, давления, изменения pH, восстановления-окисления, и/или ферментативной активности, действующей на пролекарство, тем самым высвобождая активное лекарственное средство. Отщепление химической группы пролекарства может происходить до доставки лекарственного средства индивидууму, но, как правило, оно происходит in vivo посредством ферментативных процессов у индивидуума.

[0004] Дантролен (1-{[5-(4-нитрофенил)-2-фурил]метилиденамино}имидазолидин-2,4-дион), имеет структуру формулы (1):

[0005] Дантролен является предпочтительным для выбора средством спасения при лечении злокачественной гипертермии ("MH"), и он широко доступен в большинстве регионов, в которые поставляются анестетики. Впервые синтезированный в 1967 году, дантролен первоначально использовали для лечения мышечных спазмов 1975 году, и позднее в 1979 году он получил одобрение FDA для лечения MH. Дантролен признан в качестве мощного мышечного релаксанта и в качестве средства для лечения нервной спастичности. С его первоначального открытия дантролен был исследован для профилактики и лечения других угрожающих жизни состояний, таких как передозировка рекреационных наркотиков, таких как "экстази" (N-метил-3,4-метилендиоксифенилизопропиламин), тепловой удар, злокачественный нейролептический синдром и ишемическое повреждение периферической нервной системы, и он может быть важным для профилактики синдрома внезапной детской смерти (SIDS).

[0006] Дантролен очень слабо растворим в воде. Слабая растворимость дантролена значительно влияет на его введение. Например, DANTRIUM^TM представляет собой дантролен натрий, предоставляемый в 20-мг флаконах, который должен быть разбавлен 60 мл стерильной воды перед внутривенным введением. Рекомендованная доза дантролена для лечения MH составляет от 1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг. По существу, индивидууму массой 80 кг может потребоваться быстрая инфузия вплоть до 2400 мл для лечения MH.

[0007] В дополнение к его слабой растворимости, растворы дантролена имеют высокое значение pH. pH DANTRIUM^TM составляет приблизительно 9,5. RYANODEX®, усовершенствованный состав дантролена натрия, который можно разбавлять до 50 мг/мл, значительно улучшает скорость, с которой можно вводить дантролен натрий. Однако разбавленный RYANODEX® также имеет высокое значение pH - приблизительно 10,3. Вследствие их высоких значений pH, современные составы дантролена нельзя вводить подкожно или внутримышечно - только внутривенно. Действительно, необходимо предупреждать экстравазацию в окружающие ткани в избежание некроза тканей.

[0008] Хотя пролекарство дантролена может быть полезным для решения проблем с растворимостью лекарственного средства и pH, идентификация подходящей пролекарственной части затруднена несколькими факторами, присущими молекуле дантролена. Например, предполагается, что низкая растворимость дантролена связана с его обширной ароматической системой, которая может вовлекаться в гидрофобное пи-стэкинг поведение. Даже заряженная нитрочасть дантролена не может повысить растворимость соединения в воде.

[0009] Дантролен включает гидантоиновую часть, которая присутствует в других фармацевтических соединениях, например, таких как фенитоин. Однако в то время как описаны стратегии для повышения растворимости в воде пролекарств в виде других гидантоин-содержащих соединений, неясно, можно ли сходные стратегии успешно использовать для дантролена, учитывая его уникальную химическую структуру и физические свойства.

[0010] Существует потребность в новых составах дантролена, которые имеют подходящую концентрацию и pH, которые делают их пригодными для внутримышечного или подкожного применения, а также перорального, трансмукозального (например, интраназального) и внутрикостного введения.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0011] Изобретение относится к соединениям формулы I

I

где R представляет собой -P(O)(OH)₂ или -P(O)(OR₁)(OR₂); R₁ представляет собой H, -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил; и R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил, а также к их фармацевтически приемлемым солям. Также описаны фармацевтические композиции, содержащие соединения формулы I, а также способы их применения.

[0012] Также изобретение относится к соединениям формулы II

II

где R₃ представляет собой H, -C(O)-Z-N(R₄)(R₅), -C(O)Z-C(O)-OH или -C(O)-NH-Y-CH₂-OC(O)-Z-C(O)-OH; Z представляет собой C_1-6алк; Y представляет собой арилен; C_1-6алкил; R₅ представляет собой H или C_1-6алкил; или R₄ и R₅, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоалкил; а также к их фармацевтически приемлемым солям. Также описаны фармацевтические композиции, содержащие соединения формулы II, а также способы их применения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0013] На фиг.1 представлена площадь пика с течением времени для конвертирования пролекарства по изобретению в дантролен щелочной фосфатазой при 25°C.

[0014] На фиг.2 представлена площадь пика с течением времени для конвертирования пролекарства по изобретению (2a) в дантролен щелочной фосфатазой при 25°C.

[0015] На фиг.3 представлена площадь пика с течением времени для конвертирования пролекарства по изобретению в дантролен в плазме крысы при 22°C.

[0016] На фиг.4 представлена площадь пика с течением времени для конвертирования пролекарства по изобретению в дантролен в плазме крысы при 37°C.

[0017] На фиг.5 представлено конвертирование соединения 2a в дантролен в плазме крысы. Плазму крысы инкубировали с 100 мкг/мл соединения 2a при 37°C. Площадь под пиками пролекарства и дантролена на хроматограммах, полученных при 385 нм, нанесена на график против времени реакции. Круги соответствуют пролекарству. Треугольники соответствуют дантролену.

[0018] На фиг.6 представлена средняя концентрация дантролена в плазме крысы от животных, которым дозировали 7,5 мг/кг пролекарства 2a (n=5±SEM (стандартная ошибка среднего значение)). Количественное определение по поглощению при 385 нм.

[0019] На фиг.7 представлена средняя концентрация дантролена в цельной крови крысы от животных, которым вводили 7,5 мг/кг пролекарства 2a (n=3). Количественное определение по поглощению при 385 нм.

[0020] На фиг.8 представлена средняя концентрация дантролена в плазме крысы от животных, которым дозировали 7,5 мг/кг пролекарства 2a (n=5 ± SEM). Количественное определение по поглощению при 385 нм.

[0021] На фиг.9 представлена средняя концентрация дантролена в цельной крови крысы от животных, которым дозировали 7,5 мг/кг пролекарства 2a (n=5 ± SEM). Количественное определение по поглощению при 385 нм.

[0022] На фиг.10 представлено конвертирование соединения 2b в дантролен в плазме крысы. Плазму крысы инкубировали со 100 мкг/мл соединения 2b при 37°C. Площадь под пиками пролекарства и дантролена на хроматограммах, полученных при 385 нм, нанесена на график против времени реакции. Круги соответствуют пролекарству. Треугольники соответствуют дантролену.

[0023] На фиг.11 представлена средняя концентрация дантролена в плазме крысы от животных, которым дозировали 10,6 мг/кг 2b (n=5±SEM). Количественное определение по поглощению при 385 нм.

[0024] На фиг.12 представлено конвертирование 10c в дантролен в плазме крысы. Плазму крысы инкубировали со 100 мкг/мл соединения 10c при 37°C. Площадь под пиками пролекарства и дантролена на хроматограммах, полученных при 385 нм, нанесена на график против времени реакции. Круги соответствуют пролекарству. Треугольники соответствуют дантролену.

[0025] На фиг.13 представлено конвертирование 12a в дантролен в плазме крысы. Плазму крысы инкубировали с 100 мкг/мл 12a при 37°C. Площадь под пиками пролекарства и дантролена на хроматограммах, полученных при 385 нм, нанесена на график против времени реакции. Круги соответствуют пролекарству. Треугольники соответствуют дантролену.

[0026] На фиг.14 представлена средняя концентрация дантролена в цельной крови от животных, которым дозировали 4 мг/кг пролекарства 12a (n=3 ± SEM). Количественное определение по поглощению при 385 нм.

[0027] На фиг.15 представлено версия конвертирования 17b в дантролен в плазме крысы. Плазму крысы инкубировали со 100 мкг/мл 17b при 37°C. Площадь под пиками пролекарства и дантролена на хроматограммах, полученных при 385 нм, нанесена на график против времени реакции. Круги соответствуют пролекарству. Треугольники соответствуют дантролену.

[0028] На фиг.16 представлено конвертирование 22c в дантролен в плазме крысы. Плазму крысы инкубировали со 100 мкг/мл 22c при 37°C. Площадь под пиками пролекарства и дантролена на хроматограммах, полученных при 385 нм, нанесена на график против времени реакции. Круги соответствуют пролекарству. Треугольники соответствуют дантролену.

[0029] На фиг.17 представлена средняя концентрация дантролена в цельной крови от животных, которым дозировали 4 мг/кг пролекарства 22c (n=3 ± SEM). Количественное определение по поглощению при 385 нм.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЛЛЮСТРАТИВНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

[0030] Настоящее изобретение может стать более понятным с помощью приведенного ниже подробного описания совместно с прилагаемыми чертежами и примерами, которые формируют часть настоящего изобретения. Следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными композициями, устройствами, способами, применениями, условиями или параметрами, описанными и/или представленными в настоящем описании, и что терминология, используемая в настоящем описании, предназначена для описания конкретных вариантов осуществления только посредством примера и не предназначена для ограничения заявленного изобретения.

[0031] Как используют в описании, в том числе в прилагаемой формуле изобретения, форма единственного числа включает форму множественного числа, и указание на конкретную числовую величину включает по меньшей мере эту конкретную величину, если контекст явно не указывает на иное.

[0032] Когда приведен диапазон величин, иллюстративный вариант осуществления включает диапазон от одной конкретной величины и/или до другой конкретной величины. Все диапазоны являются инклюзивными и комбинируемыми. Кроме того, указание на величины, указанные в диапазонах, включает каждую величину в этом диапазоне. Когда величины выражены в виде приближенных значений с использованием предшествующего слова "приблизительно", будет понятно, что эта конкретная величина составляет другой вариант осуществления. Термин "приблизительно", как используют в рамках изобретения, при указании на поддающуюся измерению величину, такую как количество, период времени и т.п., охватывает приемлемое колебание данной величины, например, такое как ±10%, от указанной величины. Например, выражение "приблизительно 50%" может включать ±10% от 50, или от 45% до 55%, включая 50%.

[0033] Должно быть понятно, что определенные признаки изобретения, которые для ясности описаны в настоящем описании в контексте отдельных вариантов осуществления, также могут быть предоставлены в комбинации в одном варианте осуществления. Напротив, различные признаки изобретения, которые для краткости описаны в контексте одного варианта осуществления, также могут быть предоставлены по отдельности или в любой подкомбинации.

[0034] Как используют в рамках изобретения, как само по себе, так и совместно с другим термином или терминами, следует понимать, что выражения "способ проведения лечения" и "способ лечения" могут использоваться взаимозаменяемо с выражением "для применения для лечения" конкретного заболевания.

[0035] Как используют в рамках изобретения, как само по себе, так и совместно с другим термином или терминами, "фармацевтически приемлемый" указывает на то, что указываемый объект, например, такой как фармацевтически приемлемый эксципиент, является в основном химически и/или физически совместимым с другими ингредиентами в композиции, и/или в общем физиологически совместимым с его реципиентом.

[0036] Как используют в рамках изобретения, "фармацевтическая композиция" относится к композиции, полученной путем комбинирования любого из составов, включая суспензии, или дисперсий, описанных в настоящем описании, с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

[0037] "Фармацевтически приемлемый эксципиент" относится к разбавителю, адъюванту, эксципиенту или носителю, с которым вводят соединение по изобретению. "Фармацевтически приемлемый эксципиент" относится к веществу, которое является нетоксичным, биологически переносимым и иным образом биологически пригодным для введения индивидууму, такому как инертное вещество, добавляемому в фармакологическую композицию или иным образом используемому в качестве наполнителя, носителя или разбавителя для облегчения введения средства, и которое совместимо с ним. Примеры эксципиентов приведены, например, в Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17^th ed., Mack Publishing Co. (1985).

[0038] Как используют в рамках изобретения, как само по себе, так и совместно с другим термином или терминами, "субъект(ы)", "индивидуум(ы)" и "пациент(ы)", относятся к млекопитающим, в том числе к человеку. Термин человек(люди) относится к и включает человеческого ребенка, подростка или взрослого.

[0039] Как используют в рамках изобретения, как само по себе, так и совместно с другим термином или терминами, "лечить", "лечащий", "подвергнутый лечению" и "лечение", относятся к и включают применение для смягчения, временного облегчения и/или излечения, или любую их комбинацию, или его результат. В других вариантах осуществления способы, описанные в настоящем описании, можно использовать профилактически. Следует понимать, что "профилактика" или профилактическое применение или результат не относятся к и не требуют абсолютного или полного предупреждения (т.е. 100% превентивное или защитное применение или результат). Как используют в рамках изобретения, профилактика или профилактическое применение или результат относятся к применениям и результатам, при которых введение соединения или композиция уменьшает или снижает тяжесть конкретного состояния, симптома, нарушения или заболевания, описанного в настоящем описании; уменьшает или снижает вероятность испытать конкретное состояние, симптом, нарушение или заболевание, описанное в настоящем описании; или замедляет возникновение или рецидив (повторное возникновение) конкретного состояния, симптома, нарушения или заболевания, описанного в настоящем описании; или любой комбинации вышеуказанных.

[0040] Как используют в рамках изобретения, как само по себе, так и совместно с другим термином или терминами, "терапевтический" и "терапевтически эффективное количество" относятся к количеству соединения или композиции, которое (a) лечит конкретное состояние, симптом, нарушение или заболевание, описанное в настоящем описании; (b) ослабляет, смягчает или устраняет один или несколько симптомов конкретного состояния, нарушения или заболевания, описанного в настоящем описании; (c) замедляет возникновение или рецидив (повторное возникновение) конкретного состояния, симптома, нарушения или заболевания, описанного в настоящем описании. Следует понимать, что термины "терапевтический" и "терапевтически эффективный" охватывают любой из вышеупомянутых эффектов (a)-(c), либо отдельно, либо в комбинации с любым из других (a)-(c).

[0041] Термин "C₁-C₆алк" относится к алифатическому линкеру, имеющему 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода, и он включает, например, -CH₂-, -CH(CH₃)-, -CH(CH₃)-CH₂- и -C(CH₃)₂-. Термин "-C₀алк-" относится к связи.

[0042] Термин "алкил" относится к прямой или разветвленной углеводородной группе, имеющей от 1 до 12 атомов углерода ("C₁-C₁₂"), предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода ("C₁-C₆"), в группе. Примеры алкильных групп включают метил (Me, C₁алкил), этил (Et, C₂алкил), н-пропил (C₃алкил), изопропил (C₃алкил), бутил (C₄алкил), изобутил (C₄алкил), втор-бутил (C₄алкил), трет-бутил (C₄алкил), пентил (C₅алкил), изопентил (C₅алкил), трет-пентил (C₅алкил), гексил (C₆алкил), изогексил (C₆алкил) и т.п.

[0043] Термин "гетероциклоалкил" относится к любой от трех- до десяти-членной моноциклической или бициклической насыщенной кольцевой структуре, содержащей по меньшей мере один гетероатом, выбранный из группы, состоящей из O, N и S. Примеры подходящих гетероциклоалкильных групп включают, но не ограничиваются ими, азепанил, азиридинил, азетидинил, пирролидинил, пиперазинил, пиперидинил, морфолинил, тиоморфолинил и т.п.

[0044] Термин "арил", когда его используют отдельно или в качестве части группы заместителя, относится к моно- или бициклической ароматической углеводородной кольцевой структуре, имеющей 6 или 10 атомов углерода в кольце. Предпочтительные арильные части включают фенил и нафтил.

[0045] Термин "арилен" относится к моно- или бициклической ароматической углеводородной кольцевой структуре, имеющей 6 или 10 атомов углерода в кольце. Предпочтительные ариленовые части включают фенилен и нафтилен. Соединения по изобретению могут быть хиральными и в результате могут существовать в качестве единственного энантиомера или смеси энантиомеров. Все энантиомеры и их смеси охватываются настоящим изобретением.

[0046] Также в объем изобретения входят изотопные варианты соединений формулы I и II. Как используют в рамках изобретения, термин "изотопный вариант" относится к соединению, которое содержит доли изотопов одного или нескольких атомов, составляющих соединение, в количестве, превышающем природное. Например, "изотопный вариант" соединения может быть радиоактивно меченным, т.е. может содержать один или несколько радиоактивных изотопов или может быть меченным не радиоактивными изотопами, например, такими как дейтерий (²H или D), углерод-11 (¹¹C), углерод-13 (¹³C), азот-15 (¹⁵N), фторид-18 (¹⁸F) и т.п. Будет понятно, что в соединении, где вносят такую изотопную замену, следующие атомы, когда они присутствуют, могут варьироваться, так что, например, любой водород может представлять собой ²H/D, любой углерод может представлять собой ¹¹C или ¹³C, любой азот может представлять собой ¹⁵N, или любой фторид (при наличии) может представлять собой ¹⁸F, и что присутствие и нахождение таких атомов можно определять способами, известными в данной области.

[0047] Соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo. В некоторых аспектах соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни от приблизительно 1 секунды или менее до приблизительно от 1 минут до 90 минут. В некоторых аспектах, соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни менее 1 секунды. В других аспектах, соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни, составляющим секунды, т.е. с временем полужизни менее одной минуты, например, с временем полужизни приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 или приблизительно 59 секунд. В других аспектах соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни от приблизительно 1 до приблизительно 5 минут, например, приблизительно 1, 2, 3, 4 или приблизительно 5 минут. В других аспектах соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни от приблизительно 1 до приблизительно 10 минут. В других аспектах соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни от приблизительно 5 до приблизительно 10 минут. В некоторых аспектах соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни приблизительно от 1 минуты до 60 минут. В некоторых аспектах соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни приблизительно от 1 минуты до 45 минут. В некоторых аспектах соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни приблизительно от 1 минуты до 30 минут. В некоторых аспектах соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни приблизительно от 1 минуты до 20 минут. В некоторых аспектах соединения формулы I и II конвертируются в дантролен in vivo с временем полужизни приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 или приблизительно 90 минут.

[0048] Изобретение относится к пролекарствам дантролена формулы I:

где R представляет собой

-P(O)(OH)₂ или -P(O)(OR₁)(OR₂);

R₁ представляет собой H, -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил; и

R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил;

или их фармацевтически приемлемым солям.

[0049] В некоторых аспектах пролекарства дантролена по изобретению представляют собой пролекарства детролена, где R представляет собой -P(O)(OH)₂, и они имеют формулу I-A:

[0050] Также в объем изобретения входят фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I-A. Предпочтительные соли включают, например, натриевые соли соединений формулы I-A. Также в объем изобретения входят соли соединений формулы I-A с литием, магнием, кальцием и калием. Альтернативные солевые формы включают соли аммония, холина и трометамина. Предпочтительной солью соединения формулы I-A является соль мононатрия. Другой предпочтительной солью соединения формулы I-A является соль динатрия. Другой предпочтительной солью соединения формулы I-A является соль монотрометамина. Другой предпочтительной солью соединения формулы I-A является соль дитрометанина. Также в объем изобретения входят фармацевтически приемлемые органические соли соединений формулы I-A.

[0051] В некоторых аспектах пролекарства дантролена по изобретению представляют собой пролекарства, где R представляет собой -P(O)(OR₁)(OR₂), и они имеют формулу I-B:

[0052] В некоторых аспектах R₁ представляет собой H. В этих аспектах R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил. Также в объем изобретения входят фармацевтически приемлемые соли таких соединений формулы I-B. Предпочтительные соли включают, например, натриевые соли соединений формулы I-B. Другие соли включают соли соединений формулы I-B с литием, магнием, кальцием и калием. Альтернативные формы солей включают соли аммония, холина и трометамина. Также в объем изобретения входят фармацевтически приемлемые органические соли соединений формулы I-B.

[0053] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C_1-6алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C_1-12алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C_13-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C_18-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C_20-26алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₂алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₃алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₄алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₅алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₆алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₇алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₈алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₉алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₀алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₁алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₂алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₃алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₄алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₅алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₆алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₇алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₈алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁₉алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₂₀алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₂₁алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₂₂алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₂₃алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₂₄алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₂₅алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C₂₆алкил.

[0054] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой арил. Например, в некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой фенил.

[0055] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C₁алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C₂алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C₃алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C₄алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C₅алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C₆алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_1-6алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_1-12алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_13-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_18-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_20-26алкил.

[0056] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)C_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)C_1-6алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)C_1-12алкил. R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)C_13-16алкил. R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)C_18-26алкил. R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)C_20-26алкил.

[0057] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_1-6алкил. В других аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_1-12алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_13-16алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_18-26алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой H и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_20-26алкил.

[0058] В других аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил, или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил и R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил.

[0059] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой -C_1-26алкил и R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил. Например, в этих аспектах R₁ может представлять собой -C_1-6алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C_1-12алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C_13-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C_18-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C_20-26алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₂алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₃алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₄алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₅алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₆алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₇алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₈алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₉алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁₀алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁₁алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁₂алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁₃алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁₄алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁₅алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁₆алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁₇алкил. В некоторых аспектах R₁ -C₁₈алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁₉алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₂₀алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₂₁алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₂₂алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₂₃алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₂₄алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₂₅алкил. В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₂₆алкил.

[0060] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой арил и R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил, или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах R₁ представляет собой фенил и R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил.

[0061] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил и R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил, или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах R₁ представляет собой C₁алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C₂алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C₃алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C₄алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C₅алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C₆алкC(O)O-C_1-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_1-6алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_1-12алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_13-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_18-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_20-26алкил.

[0062] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)C_1-26алкил и R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил, или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах R₁ представляет собой C₁алкOC(O)C_1-6алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)C_1-12алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)C_13-16алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)C_18-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)C_20-26алкил.

[0063] В некоторых аспектах соединений формулы I-B, R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_1-26алкил и R₂ представляет собой -C_1-26алкил, арил, C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил, -C₁алкOC(O)C_1-26алкил или C₁алкOC(O)OC_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах R₁ представляет собой C₁алкOC(O)OC_1-6алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_1-12алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_13-16алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_18-26алкил. В других аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_20-26алкил.

[0064] В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C_1-26алкил и R₂ представляет собой -C_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой -C_1-6алкил, -C_1-12алкил, -C_13-26алкил, -C_18-26алкил, -C_20-26алкил, -C₁алкил, -C₂алкил, -C₃алкил, -C₄алкил, -C₅алкил, -C₆алкил, -C₇алкил, -C₈алкил, -C₉алкил, -C₁₀алкил, -C₁₁алкил, -C₁₂алкил, -C₁₃алкил, -C₁₄алкил, -C₁₅алкил, -C₁₆алкил, -C₁₇алкил, -C₁₈алкил, -C₁₉алкил, -C₂₀алкил, -C₂₁алкил, -C₂₂алкил, -C₂₃алкил, -C₂₄алкил, -C₂₅алкил или -C₂₆алкил.

[0065] В некоторых аспектах R₁ представляет собой арил (например, фенил) и R₂ представляет собой арил (например, фенил).

[0066] В некоторых аспектах R₁ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил и R₂ представляет собой C_1-6алкC(O)O-C_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой C₁алкC(O)O-C_1-26алкил, C₂алкC(O)O-C_1-26алкил, C₃алкC(O)O-C_1-26алкил, C₄алкC(O)O-C_1-26алкил, C₅алкC(O)O-C_1-26алкил, C₆алкC(O)O-C_1-26алкил, C_1-6алкC(O)O-C_1-6алкил, C_1-6алкC(O)O-C_1-12алкил, C_1-6алкC(O)O-C_13-26алкил, C_1-6алкC(O)O-C_18-26алкил или C_1-6алкC(O)O-C_20-26алкил.

[0067] В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)C_1-26алкил и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)C_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой C₁алкOC(O)C_1-6алкил, -C₁алкOC(O)C_1-12алкил, -C₁алкOC(O)C_13-16алкил, -C₁алкOC(O)C_18-26алкил или -C₁алкOC(O)C_20-26алкил.

[0068] В некоторых аспектах R₁ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_1-26алкил и R₂ представляет собой -C₁алкOC(O)OC_1-26алкил. Например, в некоторых аспектах каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой C₁алкOC(O)OC_1-6алкил, -C₁алкOC(O)OC_1-12алкил, -C₁алкOC(O)OC_13-16алкил, -C₁алкOC(O)OC_18-26алкил или -C₁алкOC(O)OC_20-26алкил.

[0069] Соединения формулы I, которые включают соединения формулы I-A и I-B, могут быть предоставлены в качестве фармацевтически приемлемых солей, когда это применимо. Эти соли включают соли натрия. Также предусматриваются соли калия, лития, кальция и магния. Альтернативные формы солей включают соли аммония, холина и трометамина.

[0070] Также в объем изобретения входят пролекарства дантролена формулы II

где

R₃ представляет собой H, -C(O)-Z-N(R₄)(R₅), -C(O)Z-C(O)-OH, или -C(O)-Y-CH₂-OC(O)-Z-C(O)-OH;

Z представляет собой C_1-6алк;

Y представляет собой арил;

R₄ представляет собой H или C_1-6алкил;

R₅ представляет собой H или C_1-6алкил;

или R₄ и R₅, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоалкил;

или их фармацевтически приемлемая соль.

[0071] В предпочтительных аспектах R₃ представляет собой H и соединение формулы II представляет собой соединение формулы II-A

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0072] В других аспектах формулы II, R₃ представляет собой C(O)-Z-N(R₄)(R₅) и соединение формулы II представляет собой соединение формулы II-B

где

Z представляет собой C_1-6алк;

R₄ представляет собой H или C_1-6алкил;

R₅ представляет собой H или C_1-6алкил;

или R₄ и R₅, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоалкил;

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0073] В этих аспектах формулы II-B, Z может представлять собой C₁алк, C₂алк, C₃алк, C₄алк, C₅алк или C₆алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C_1-2алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C₁алк.

[0074] В этих аспектах формулы II-B, R₄ представляет собой H. В других аспектах R₄ представляет собой C_1-6алкил, например, C₁алкил, C₂алкил, C₃алкил, C₄алкил, C₅алкил или C₆алкил. В предпочтительных аспектах R₄ представляет собой метил, этил или изопропил.

[0075] В этих аспектах формулы II-B, R₅ представляет собой H. В других аспектах R₅ представляет собой C_1-6алкил, например, C₁алкил, C₂алкил, C₃алкил, C₄алкил, C₅алкил или C₆алкил. В предпочтительных аспектах R₅ представляет собой метил, этил или изопропил.

[0076] В некоторых из этих аспектов формулы II-B, R₄ представляет собой H и R₅ представляет собой H. В других аспектах R₄ представляет собой H и R₅ представляет собой C_1-6алкил, например, C₁алкил, C₂алкил, C₃алкил, C₄алкил, C₅алкил или C₆алкил. В других аспектах каждый из R₄ и R₅ независимо представляет собой C_1-6алкил, например, C₁алкил, C₂алкил, C₃алкил, C₄алкил, C₅алкил или C₆алкил.

[0077] В некоторых из этих аспектов формулы II-B, R₄ и R₅, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклоалкил. Предпочтительные гетероциклоалкильные части включают, например, морфолинил, пиперазинил, пиперидинил, пирролидинил, азетидинил и азиридинил.

[0078] Предпочтительные соединения формулы II-B включают, например,

и их фармацевтически приемлемые соли.

[0079] В других аспектах формулы II, R₃ представляет собой C(O)-Z-C(O)-OH и соединение формулы II представляет собой соединение формулы II-C

где

Z представляет собой C_1-6алк;

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0080] В этих аспектах формулы II-C, Z может представлять собой C₁алк, C₂алк, C₃алк, C₄алк, C₅алк или C₆алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C_1-2алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C₁алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C₂алк.

[0081] Предпочтительное соединение формулы II-C представляет собой

и его фармацевтически приемлемые соли.

[0082] В других аспектах формулы II R₃ представляет собой -C(O)-NH-Y-CH₂-OC(O)-Z-C(O)-OH и соединение формулы II представляет собой соединение формулы II-D

где

Y представляет собой арилен; и

Z представляет собой C_1-6алк;

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0083] В этих аспектах формулы II-D Y может представлять собой фенилен или нафтилен, предпочтительно фенилен.

[0084] В этих аспектах формулы II-D Z может представлять собой C₁алк, C₂алк, C₃алк, C₄алк, C₅алк или C₆алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C_1-2алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C₁алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C₂алк.

[0085] Предпочтительное соединение формулы II-D представляет собой

и его фармацевтически приемлемые соли.

[0086] В других аспектах R₃ представляет собой -C(O)-O-Y-CH₂-OC(O)-Z-C(O)-OH и соединение формулы II представляет собой соединение формулы II-E

где

Y представляет собой арилен; и

Z представляет собой C_1-6алк;

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0087] В этих аспектах формулы II-E Y может представлять собой фенилен или нафтилен, предпочтительно фенилен.

[0088] В этих аспектах формулы II-E Z может представлять собой C₁алк, C₂алк, C₃алк, C₄алк, C₅алк или C₆алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C_1-2алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C₁алк. В некоторых аспектах Z представляет собой C₂алк.

[0089] Соединения формулы II, которые включают соединения формулы II-A, II-B, II-C, II-D и II-E, могут быть предоставлены в качестве фармацевтически приемлемых солей, в соответствующих случаях. Они включают соли натрия. Также предусматриваются соли калия, лития, кальция и магния. Альтернативные формы солей включают соли аммония, холина и трометамина. Также в объем изобретения входят фармацевтически приемлемые органические соли соединений формулы II.

[0090] Соединения формулы I и II, которые включают соединения формулы I-A, I-B, II-A, II-B, II-C, II-D и II-E и их фармацевтически приемлемые соли, можно получать в качестве фармацевтических композиций путем комбинирования соединения с фармацевтически приемлемым эксципиентом. В некоторых вариантах осуществления один или несколько дополнительных фармацевтически приемлемых эксципиентов выбраны из группы, состоящей из консервантов, антиоксидантов или их смесей. В других вариантах осуществления изобретения дополнительный фармацевтически приемлемый эксципиент представляет собой консервант, такой как, но не ограничиваясь ими, фенол, крезол, сложный эфир п-гидроксибензойной кислоты, хлорбутанол или их смеси. В других вариантах осуществления изобретения фармацевтически приемлемый эксципиент представляет собой антиоксидант, такой как, но не ограничиваясь ими, аскорбиновая кислота, пиросульфит натрия, пальмитиновая кислота, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, токоферолы или их смеси.

[0091] Фармацевтические композиции по изобретению могут быть предоставлены в качестве суспензий. В других вариантах осуществления фармацевтические композиции по изобретению могут быть предоставлены в качестве растворов.

[0092] В фармацевтических композициях по изобретению соединение по изобретению может присутствовать в концентрации от приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 400 мг/мл, например, от 1 мг/мл до приблизительно 200 мг/мл, от 1 мг/мл до приблизительно 300 мг/мл, от предпочтительно 5 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, предпочтительно при физиологических значениях pH. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение по изобретению присутствует в концентрации, равной или превышающей приблизительно 5 мг/мл. В следующих вариантах осуществления соединение по изобретению присутствует в концентрации приблизительно от 10 до 25 мг/мл. В следующих вариантах осуществления соединение по изобретению присутствует в концентрации приблизительно 1 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл, 15 мг/мл, 20 мг/мл, 25 мг/мл, 30 мг/мл, 35 мг/мл, 40 мг/мл, 45 мг/мл или 50 мг/мл. В следующих вариантах осуществления соединение по изобретению присутствует в концентрации приблизительно 125 мг/мл, 150 мг/мл, 175 мг/мл, 200 мг/мл, 225 мг/мл, 250 мг/мл, 275 мг/мл, 300 мг/мл, 325 мг/мл, 350 мг/мл, 375 мг/мл или приблизительно 400 мг/мл.

[0093] В определенных вариантах осуществления соединение по изобретению присутствует в концентрации, равной или превышающей приблизительно 55 мг/мл. В следующих вариантах осуществления соединение по изобретению присутствует в концентрации приблизительно от 55 до 125 мг/мл. В конкретных вариантах осуществления соединение по изобретению присутствует в концентрации приблизительно 75 мг/мл, 80 мг/мл, 85 мг/мл, 90 мг/мл, 95 мг/мл, 100 мг/мл, 105 мг/мл, 110 мг/мл, 115 мг/мл, 120 мг/мл или 125 мг/мл. В других вариантах осуществления a соединение по изобретению присутствует в концентрации приблизительно от 75 мг/мл до 95 мг/мл, от 80 мг/мл до 100 мг/мл, от 90 мг/мл до 110 мг/мл, от 95 мг/мл до 105 мг/мл, от 95 мг/мл до 115 мг/мл, от 100 мг/мл до 110 мг/мл, от 110 мг/мл до 125 мг/мл, включая все диапазоны и поддиапазоны между ними.

[0094] В определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции по изобретению могут дополнительно содержать стабилизатор или два или более стабилизаторов. В следующих вариантах осуществления изобретения стабилизатор выбран из группы, состоящей из поверхностно-активных веществ, полимеров, сшитых полимеров, буферных веществ, электролитов и неэлектролитов. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция содержит комбинацию двух или более стабилизаторов, выбранных из группы, состоящей из поверхностно-активных веществ, полимеров, сшитых полимеров, буферных веществ, электролитов и неэлектролитов. В следующих вариантах осуществления изобретения стабилизатор представляет собой поверхностно-активное вещество, такое как, но не ограничиваясь ими, полиэтиленоксид (PEO), производное PEO, полисорбат 80, полисорбат 20, полоксамер 188, полиэтоксилированные растительные масла, лецитин, сывороточный альбумин человека и их смеси. В конкретных вариантах осуществления изобретения стабилизатор представляет собой полимер, такой как, но не ограничиваясь ими, поливинилпирролидон (такой как, но не ограничиваясь ими, повидон K12, повидон K17 и их смеси), полиэтиленгликоль 3350 и их смеси. В других вариантах осуществления изобретения стабилизатор представляет собой электролит, такой как, но не ограничиваясь ими, хлорид натрия, хлорид кальция и их смеси. В других вариантах осуществления изобретения стабилизатор представляет собой неэлектролит, такой как, но не ограничиваясь ими, декстроза, глицерин, маннит или их смеси. В других вариантах осуществления изобретения стабилизатор представляет собой сшитый полимер, такой как, но не ограничиваясь ими, натрий карбоксиметилцеллюлоза (CMC). В некоторых вариантах осуществления изобретения стабилизатор представляет собой CMC 7LF, CMC 7MF, CMC 7HF или их смеси.

[0095] В следующих вариантах осуществления изобретения можно использовать комбинации неэлектролитных стабилизаторов и электролитных стабилизаторов. В некоторых вариантах осуществления комбинация стабилизаторов может содержать два или более неэлектролитных стабилизаторов. В других вариантах осуществления комбинация стабилизаторов может содержать два или более электролитных стабилизаторов. В следующих вариантах осуществления комбинация стабилизаторов может содержать один или несколько неэлектролитных стабилизаторов и один или несколько электролитных стабилизаторов. В следующих вариантах осуществления комбинация стабилизаторов может содержать два или более из маннита, декстрозы и хлорида натрия.

[0096] В определенных вариантах осуществления изобретения можно использовать комбинации стабилизаторов на основе поверхностно-активных веществ и полимерных стабилизаторов. В некоторых вариантах осуществления комбинация стабилизаторов может содержать два или более стабилизаторов на основе поверхностно-активных веществ. В других вариантах осуществления комбинация стабилизаторов может содержать два или более полимерных стабилизаторов. В следующих вариантах осуществления комбинация стабилизаторов может содержать один или несколько стабилизаторов на основе поверхностно-активных веществ и один или несколько полимерных стабилизаторов. В следующих вариантах осуществления комбинация стабилизаторов может содержать два или более из полисорбата 80, полисорбата 20 и полоксамера 188. В следующих вариантах осуществления комбинация стабилизаторов может содержать один или несколько из полисорбата 80, полисорбата 20 и полоксамера 188 и один или несколько из повидона K12, повидона K17 и полиэтиленгликоля 3350.

[0097] В определенных вариантах осуществления изобретения композиция содержит от приблизительно 0,2 мг/мл до приблизительно 75 мг/мл одного или нескольких стабилизаторов и все диапазоны и поддиапазоны между ними. В конкретных вариантах осуществления изобретения композиция содержит приблизительно от 0,2 до 0,7 мг/мл, от 0,5 до 1 мг/мл, от 1 до 5 мг/мл, от 2 до 8 мг/мл, от 5 до 6 мг/мл, от 5 до 10 мг/мл, от 8 до 12 мг/мл, от 10 до 15 мг/мл, от 15 до 20 мг/мл, от 20 до 30 мг/мл, от 30 до 40 мг/мл, от 40 до 50 мг/мл, от 45 до 55 мг/мл, от 50 до 60 мг/мл или от 60 до 75 мг/мл одного или нескольких стабилизаторов и все диапазоны и поддиапазоны между ними. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция содержит приблизительно 0,2 мг/мл, 0,5 мг/мл, 1 мг/мл, 2 мг/мл, 3 мг/мл, 4 мг/мл, 5 мг/мл, 5,5 мг/мл, 6 мг/мл, 7 мг/мл, 8 мг/мл, 9 мг/мл, 10 мг/мл, 12 мг/мл, 15 мг/мл, 17 мг/мл, 20 мг/мл, 25 мг/мл, 30 мг/мл, 35 мг/мл, 40 мг/мл, 45 мг/мл, 50 мг/мл, 55 мг/мл, 60 мг/мл, 65 мг/мл, 70 мг/мл или 75 мг/мл одного или нескольких стабилизаторов.

[0098] В конкретных вариантах осуществления изобретения композиция дополнительно содержит одно или несколько буферных средств, таких как, но не ограничиваясь ими, NaH₂PO₄·H₂O, NaH₂PO₄·2H₂O, безводный NaH₂PO₄, цитрат натрия, лимонная кислота, Tris, гидроксид натрия, HCl или их смеси. В определенных вариантах осуществления изобретения композиция содержит приблизительно от 1 мМ до 20 мМ одного или нескольких буферных средств, и все диапазоны и поддиапазоны между ними. В конкретных вариантах осуществления изобретения композиция содержит приблизительно от 1 до 2 мМ, от 1 до 3 мМ, от 1 до 5 мМ, от 2 до 8 мМ, от 5 до 6 мМ, от 5 до 10 мМ, от 8 до 12 мМ, от 10 до 15 мМ, или от 15 до 20 мМ одного или нескольких буферных средств, и все диапазоны и поддиапазоны между ними. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция содержит приблизительно 1 мМ, 2 мМ, 3 мM, 4 мМ, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мM, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ, 19 мМ или 20 мМ одного или нескольких буферных средств.

[0099] В определенных вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция имеет pH приблизительно 3-10, например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH приблизительно 5-9. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH приблизительно 6-9. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH приблизительно 6-7. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH приблизительно 6-8,5. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH приблизительно 7-8,5. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH от более чем 7 до 8,5. В определенных вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH приблизительно от 6,0 до 8,0. В конкретных вариантах осуществления изобретения композиция имеет pH приблизительно от 6,0 до 7,0, от 6,5 до 7,0, от 6,5 до 7,5, от 6,7 до 7,2, от 7,0 до 7,2, от 7,0 до 7,5, от 7,0 до 8,0 или от 7,0 до 8,5.

[0100] В определенных вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция имеет осмолярность от приблизительно 280 мосм/л до приблизительно 310 мосм/л, например, приблизительно 280, 285, 290, 300, 305 или приблизительно 310 мосм/л. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция имеет осмолярность от приблизительно 290 мосм/л до приблизительно 300 мосм/л. В следующих вариантах осуществления изобретения композиция имеет осмолярность приблизительно 290 мосм/л. В некоторых вариантах осуществления осмолярность может быть выбрана посредством применения надлежащих количеств одного или нескольких стабилизаторов, которые выступают в качестве изменяющих тоничность средств в композиции, таких как, но не ограничиваясь ими, неэлектролитные стабилизаторы и электролитные стабилизаторы, описанные в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления осмолярность может быть выбрана посредством применения надлежащих количеств одного или нескольких буферных средств, которые выступают в качестве изменяющих тоничность средств в композиции, таких как, но не ограничиваясь ими, буферные средства, описанные в настоящем описании.

[0101] Фармацевтические композиции по изобретению можно вводить внутривенно. Альтернативно фармацевтические композиции по изобретению можно вводить внутримышечно. В других вариантах осуществления фармацевтические композиции по изобретению вводят подкожно. Фармацевтические композиции по изобретению также можно вводить перорально. В других вариантах осуществления фармацевтические композиции по изобретению вводят трансмукозальным путем, например, посредством интраназального введения. В других вариантах осуществления фармацевтические композиции по изобретению вводят внутрикостным путем.

[0102] Соединения и фармацевтические композиции по изобретению можно использовать для лечения нарушений, отвечающих на дантролен. Например, индивидуумам, нуждающимся в лечении, можно вводить терапевтически эффективное количество соединения по изобретению или его соли. В других аспектах индивидуумам, нуждающимся в лечении, можно вводить терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по изобретению или ее соли. В других аспектах индивидуумам, нуждающимся в лечении, можно вводить терапевтически эффективное количество соединения по изобретению, например, соединения формулы I-A, I-B, II-A, II-B, II-C, II-D, II-E или его фармацевтически приемлемой соли. Например, индивидууму, нуждающемуся в лечении, можно вводить терапевтически эффективное количество соединения по изобретению, например, соединения формулы II-A, или его фармацевтически приемлемой соли.

[0103] Нарушения, отвечающие на дантролен, включают, например, злокачественную гипертермию, хроническую спастичность, тепловой удар вследствие изнурительной физической нагрузки, аритмии сердца, тахикардии, фибрилляцию предсердий, остановку сердца, инфаркт миокарда, сердечную недостаточность, повреждение миокарда, кардиомиопатию, болезнь центральных волокон, боковой амиотрофический склероз, рабдомиолиз, мышечную дистрофию Дюшенна, атаксию, гиперактивность детрузора, гиперактивный мочевой пузырь, судороги, эпилепсию, нейролептический злокачественный синдром, стресс-реакцию человека, болезнь Альцгеймера, болезнь Гентингтона, рассеянный склероз, боковой амиотрофический склероз, болезнь Паркинсона, повреждение при ишемии-реперфузии, нейрональное повреждение при реперфузии, гипоксию, аневризму головного мозга, субарахноидальное кровоизлияние, инсульт, гипертермию, ассоциированную с пристрастием к наркотикам, или гипертермию ассоциированную с передозировкой наркотиков.

[0104] В предпочтительных аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения злокачественной гипертермии у индивидуума.

[0105] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения хронической спастичности у индивидуума.

[0106] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения теплового удара вследствие изнурительной физической нагрузки.

[0107] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения аритмий сердца у индивидуума.

[0108] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения тахикардий у индивидуума.

[0109] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения фибрилляции предсердий у индивидуума.

[0110] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения остановки сердца у индивидуума.

[0111] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения инфаркта миокарда у индивидуума.

[0112] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения сердечной недостаточности у индивидуума.

[0113] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения повреждения миокарда у индивидуума.

[0114] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения кардиомиопатии у индивидуума.

[0115] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения болезни центральных волокон у индивидуума.

[0116] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения бокового амиотрофического склероза у индивидуума.

[0117] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения рабдомиолиза у индивидуума.

[0118] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения мышечной дистрофии Дюшенна у индивидуума.

[0119] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения атаксии у индивидуума.

[0120] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения гиперактивности детрузора у индивидуума.

[0121] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения гиперактивного мочевого пузыря у индивидуума.

[0122] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения эпилептического судорог у индивидуума.

[0123] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения эпилепсии у индивидуума.

[0124] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения нейролептического злокачественного синдрома у индивидуума.

[0125] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения стресс-реакции человека у индивидуума.

[0126] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения болезни Альцгеймера у индивидуума.

[0127] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения болезни Гентингтона у индивидуума.

[0128] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения рассеянного склероза у индивидуума.

[0129] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения болезни Паркинсона у индивидуума.

[0130] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения повреждения при ишемии-реперфузии у индивидуума.

[0131] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения нейронального повреждения при реперфузии у индивидуума.

[0132] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения гипоксии у индивидуума.

[0133] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения аневризмы головного мозга у индивидуума.

[0134] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения субарахноидального кровоизлияния у индивидуума.

[0135] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения инсульта у индивидуума.

[0136] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения гипертермии, ассоциированной с пристрастием к наркотикам (например, пристрастием к экстази (3,4-метилендиоксиметамфетамин)) у индивидуума.

[0137] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения гипертермии, ассоциированной с передозировкой наркотика (например, передозировкой экстази (3,4-метилендиоксиметамфетамин)) у индивидуума.

[0138] В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения накопления ацетилхолина у индивидуума. В других аспектах соединения и/или фармацевтические композиции по изобретению используют для лечения воздействия нейротоксического нервно-паралитического вещества, например, воздействия нервно-паралитического газа (например, фосфорорганические газы, такие как зарин, зоман и VX) у индивидуума. См., например, предварительную заявку США № 62/554049, поданную 5 сентября 2017 года. Как используют в рамках изобретения "нейротоксическое нервно-паралитическое вещество" или "нервно-паралитическое вещество" относится к соединениям, которые воздействуют на передачу нервных импульсов в нервной системе. Нервно-паралитические вещества представляют собой фосфорорганические соединения, т.е. они имеют формулу (R)₃P(O), где все группы R могут быть одинаковыми или могут различаться. Нервно-паралитические вещества "G"-типа включают O-пинаколилметилфосфонофлуоридат (зоман, GD), этил N, N-диметилфосфорамидоцианидат (табун, GA), пропан-2-илметилфосфонофлуоридат (зарин, GB), циклогексилметилфосфонофлуоридат (циклозарин, GF) и 2-(диметиламино)этил (GV). Нервно-паралитические вещества "V"-типа включают O-циклопентил S-(2-диэтиламиноэтил)метилфосфонотиолат (EA-3148), (S)-(этил{[2-(диэтиламино)этил]сульфонил}(этил)фосфонаты), такие как (S)-(этил {[2-(диэтиламино)этил]сульфанил}(этил)фосфинат) (VE), O, O-диэтил S-[2-(диэтиламино)этил]фосфоротиоат (VG), S-[2-(диэтиламино)этил] O-этилметилфосфонотиоат (VM), N, N-диэтил-2-(метил-(2-метилпропокси)фосфорил)сульфанилэтанамин (VR) и этил({2-[бис(пропан-2-ил)амино]этил}сульфанил)(метил)фосфинат (VX). Способы, описанные в настоящем описании, можно использовать для лечения индивидуума, подвергнутого воздействию одного нервно-паралитического вещества. Способы, описанные в настоящем описании, также можно использовать для лечения индивидуума, подвергнутого воздействию двух или более нервно-паралитических веществ.

[0139] Как используют в рамках изобретения выражения "в результате воздействия нервно-паралитического вещества" и "вследствие воздействия нервно-паралитического вещества" относятся к эффектам, которые являются прямым следствием воздействия нервно-паралитического вещества, а также к эффектам, которые являются вторичными последствиями воздействия нервно-паралитического вещества.

[0140] В некоторых аспектах изобретение относится к способам лечения индивидуума, подвергнутого воздействию нервно-паралитического вещества, фармацевтической композицией, содержащей некоторое количество соединения формулы I, как описано в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли. Например, в некоторых аспектах описанные способы препятствуют неврологическому повреждению, вторичному для воздействия нервно-паралитического вещества. В других аспектах описанные способы обеспечивают нейропротективные эффекты после воздействия нервно-паралитического вещества. В других аспектах описанные способы смягчают повреждение ткани головного мозга, являющееся вторичным после воздействия нервно-паралитического вещества. В других аспектах описанные способы смягчают повреждение ткани головного мозга, являющее вторичным для эпилептического статуса, являющегося вторичным для воздействия нервно-паралитического вещества. В других аспектах описанные способы препятствуют нейрональному некрозу вследствие воздействия нервно-паралитического вещества. В других аспектах описанные способы смягчают нейрональный некроз вследствие воздействия нервно-паралитического вещества. В других аспектах описанные способы лечат перегрузку внутриклеточным кальцием вследствие воздействия нервно-паралитического вещества. В других аспектах описанные способы смягчают перегрузку внутриклеточным кальцием вследствие воздействия нервно-паралитического вещества. В других аспектах описанные способы препятствуют перегрузке внутриклеточным кальцием вследствие воздействия нервно-паралитического вещества.

[0141] Индивидуумы, описанные в настоящем описании, могут подвергаться воздействию нервно-паралитического вещества посредством ингаляции. В других аспектах индивидуумы подвергаются воздействию нервно-паралитического вещества посредством черескожного переноса вещества. В других аспектах индивидуумы подвергаются воздействию нервно-паралитического вещества посредством употребления жидкости или пищи, контаминированной нервно-паралитическим веществом. В других аспектах индивидуумы подвергаются воздействию нервно-паралитического вещества посредством подкожного, внутривенного или внутримышечного введения вещества индивидууму.

[0142] В некоторых аспектах способы относятся к способам защиты индивидуума от нейронального некроза после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. В этих вариантах осуществления фармацевтическую композицию, содержащую некоторое количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, вводят индивидууму после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. Как используют в рамках изобретения "защита" от нейронального некроза охватывает уменьшение тяжести эффектов нервно-паралитического вещества, или смягчение эффекта нервно-паралитического вещества, или уменьшение нейронального повреждения в результате воздействия нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах "защита" от нейронального некроза охватывает предупреждение нейронального некроза у индивидуума, подвергнутого воздействию нервно-паралитического вещества. Таким образом, индивидуумы, которые "защищены" от нейронального некроза посредством введения соединений и композиций, описанных в настоящем описании, лучше проходят нейроповеденческие тесты, по сравнению с индивидуумами, подвергнутыми воздействию нервно-паралитического вещества, которым не вводили описанные соединения или композиции.

[0143] В некоторых вариантах осуществления вся центральная нервная система индивидуума защищается от нейронального некроза. В некоторых вариантах осуществления от нейронального некроза защищается лобно-теменная кора, гиппокамп и/или таламус. В других аспектах от нейронального некроза защищается лобно-теменная кора. В других аспектах от нейронального некроза защищается гиппокамп. В других вариантах осуществления от нейронального некроза защищается таламус.

[0144] Наличие и степень нейронального некроза можно определять с использованием способов, известных в данной области, включая нейроповеденческие тесты, радиологические тесты и патологическую оценку.

[0145] Также изобретение относится к способам защиты индивидуума от снижения функции центральной нервной системы в результате воздействия нервно-паралитического вещества. Эти способы включают введение индивидууму фармацевтической композиции, содержащей некоторое количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества.

[0146] Также изобретение относится к способам защиты индивидуума от дисфункции центральной нервной системы в результате воздействия нервно-паралитического вещества. Эти способы включают введение индивидууму фармацевтической композиции, содержащей некоторое количество соединения формулы I, как описано в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества.

[0147] Также изобретение относится к способам лечения изменений поведения у индивидуума в результате воздействия нервно-паралитического вещества. Эти способы включают введение индивидууму фармацевтической композиции, содержащей некоторое количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества.

[0148] Как используют в рамках изобретения "защита" от снижения функции центральной нервной системы охватывает уменьшение тяжести эффектов нервно-паралитического вещества на центральную нервную систему, или смягчение эффектов на центральную нервную систему нервно-паралитического вещества, или снижение эффектов на центральную нервную систему нервно-паралитического вещества. Следовательно, индивидуумы, которые "защищены" от снижения функции центральной нервной системы посредством введения описанных композиций, содержащих соединения формулы I, лучше проходят нейроповеденческие тесты по сравнению с индивидуумами, подвергнутыми воздействию нервно-паралитического вещества, которым не вводили описанные композиции.

[0149] Также изобретение относится к способам лечения судорог, индуцированных нервнопаралитическим средством, у индивидуума, подвергнутого воздействию нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах подвергаемые лечению судороги представляют собой эпилептический статус (SE). Эти способы включают введение индивидууму фармацевтической композиции, содержащей некоторое количество соединения формулы I или II или его фармацевтически приемлемой соли. Как используют в рамках изобретения, лечение припадков, индуцированных нервно-паралитическим веществом, приводит к уменьшению тяжести или длительности судорог. В других аспектах лечение приводит снижению как тяжести, так и длительности судорог.

[0150] Количество соединения формулы I или II или его фармацевтически приемлемой соли, которое является эффективным для лечения индивидуума в соответствии с любыми из описанных способов, должно определяться специалистом в данной области. Терапевтически эффективное количество может представлять собой количество, необходимое для лечения индивидуума в однократной дозе. Альтернативно терапевтически эффективное количество может представлять собой совокупное количество дантролена, требуемое для лечения индивидуума на протяжении длительного курса лечения.

[0151] В вариантах осуществления, где индивидуумом является человек, эффективное количество соединения формулы I или II представляет собой количество соединения, эквивалентное от 1 мг/кг до 100 мг/кг дантролена, вводимое в одной или нескольких дозах. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 1 мг/кг до приблизительно 90 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 1 мг/кг до приблизительно 80 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 1 мг/кг до приблизительно 70 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 1 мг/кг до приблизительно 60 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 1 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 1 мг/кг до приблизительно 40 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 1 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 1 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 10 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 15 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 20 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 15 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 10 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, предпочтительно от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 6 мг/кг, дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 15 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 10 мг/кг до 100 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 20 мг/кг до 100 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 30 мг/кг до 100 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 40 мг/кг до 100 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 50 мг/кг до 100 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 50 мг/кг до 75 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от 25 мг/кг до 75 мг/кг дантролена. В некоторых аспектах эффективное количество соединения формулы I или II является приблизительно эквивалентным 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 или приблизительно 34 мг/кг дантролена. В некоторых аспектах эффективное количество соединения формулы I или II для лечения человека эквивалентно приблизительно 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или приблизительно 100 мг/кг дантролена. В других аспектах эффективное количество соединения формулы I или II эквивалентно от приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или приблизительно 100 мг/кг дантролена.

[0152] В некоторых аспектах изобретения время введения фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, индивидууму после воздействия нервно-паралитического вещества может влиять на величину защиты от нейронального некроза, сообщаемой индивидууму.

[0153] В некоторых аспектах изобретения время введения фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, индивидууму после воздействия нервно-паралитического вещества может влиять на величину снижения функции центральной нервной системы, сообщаемого индивидууму.

[0154] В некоторых аспектах изобретения время введения фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, индивидууму после воздействия нервно-паралитического вещества может влиять на лечение индуцированных нервно-паралитическим веществом судорог у индивидуума.

[0155] Что касается времени введения фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, в некоторых аспектах по меньшей мере одну дозу фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, вводят индивидууму через 24 часа или менее после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах по меньшей мере одну дозу фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, вводят индивидууму через 20 часов или менее после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах по меньшей мере одну дозу фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, вводят индивидууму через 16 часов или менее после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах по меньшей мере одну дозу фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, вводят индивидууму через 12 часов или менее после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах по меньшей мере одну дозу фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, вводят индивидууму через 8 часов или менее после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах по меньшей мере одну дозу фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, вводят индивидууму через 4 часа или менее после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах по меньшей мере одну дозу фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, вводят индивидууму через 2 часа или менее после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах по меньшей мере одну дозу фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, вводят индивидууму через 1 час или менее после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества. В некоторых аспектах по меньшей мере одну дозу фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, вводят индивидууму в пределах приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или в пределах приблизительно 24 часов после воздействия на индивидуума нервно-паралитического вещества.

[0156] В некоторых аспектах фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль может доставлять эффективное количество соединения формулы I или II индивидууму, подвергнутому воздействию нервно-паралитического вещества, в одной дозе. Между тем, в других аспектах может быть необходимо две или более дозы фармацевтической композиции для доставки эффективного количества соединения формулы I или II индивидууму, подвергнутому воздействию нервно-паралитического вещества. Например, может быть необходимо 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 доз фармацевтической композиции для доставки эффективного количества соединения формулы I или II индивидууму, подвергнутому воздействию нервно-паралитического веществ. Эти дополнительные дозировки можно вводить по существу одновременно с первой дозой. В других аспектах дополнительные дозировки отделены во времени от первой дозы. В тех аспектах, в которых вводят 3 или более доз, каждая доза может быть отделена по времени от введения любой другой дозы. Интервалы между дозами могут составлять 1 или более часов, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 часов. В других аспектах интервалы между дозами могут составлять 1 или несколько суток.

[0157] В соответствии с изобретением, введение соединения формулы I или II индивидууму, подвергнутому воздействию нервно-паралитического вещества, является вспомогательной терапией при воздействии нервно-паралитического вещества. Индивидуумам, подвергнутым воздействию нервно-паралитического вещества, также можно вводить один или несколько антидотов нервно-паралитических веществ. Одним классом антидотов для воздействия нервно-паралитического вещества являются реактиваторы ацетилхолинэстеразы, например, азоксима хлорид (HI-6). Другим классом антидотов для воздействия нервно-паралитического вещества являются обратимые антагонисты рецепторов ацетилхолина, например, атропина метилнитрат. Индивидуумам, подвергнутым воздействию нервно-паралитических веществ, также можно вводить противосудорожное лекарственное средство. Иллюстративные противосудорожные лекарственные средства включают альдегиды (например, паральдегид), ароматические аллиловые спирты (например, стирипентол), бензодиазепины (например, клобазам, клонезепам, клоразепат, диазепам, мидазолам, лоразепам, нитразепам, темазепам, ниметазепам), барбитураты (например, фенобарбитал, метилфенобарбитал, барбексаклон), бромиды (например, бромид калия), карбаматы (например, фелбамат), карбоксамиды (например, карбамазепин, окскарбазепин, эсликарбазепина ацетат), жирные кислоты (например, вальпроевая кислота, вальпроат натрия, дивалпрекс натрий, вигабатрин, прогабид, тиагабин), топирамат, аналоги GABA (например, габапентин, прегабалин), гидантоины (например, этотоин, фенитоин, мефенитоин, фосфенитоин), оксазолидиндионы (например, параметадион, триметадион, этадион), пропионаты (например, бекламид), пиримидиндионы (например, примидон), пирролидины (например, бриварацетам, левитирацетам, селетрацетам), сукцинимиды (например, этосуксимид, фенсуксимид, месуксимид), сульфонамиды (например, ацетазоламид, султиам, метазоламид, зонисамид), триазины (например, ламотригин), соединения мочевины (например, фенетурид, фенацемид), валпроиламиды (например, вальпромид, валноктамид), перампанел и их комбинации. В некоторых аспектах противосудорожное лекарственное средство представляет собой бензодиазепин, например, мидазолам. В других аспектах противосудорожное лекарственное средство представляет собой барбитурат. В других аспектах противосудорожное лекарственное средство представляет собой гидантоин. В некоторых аспектах противосудорожное лекарственное средство представляет собой паральдегид. В других аспектах противосудорожное лекарственное средство представляет собой бромид калия. В некоторых аспектах противосудорожное лекарственное средство представляет собой жирную кислоту. В других аспектах противосудорожное лекарственное средство представляет собой топирамат.

[0158] В аспектах, где индивидууму, подвергнутому воздействию нервно-паралитического вещества, вводят антидот, соединение формулы I или II вводят после введения антидота. Например, соединение формулы I или II можно вводить после введения реактиватора ацетилхолинэстеразы и/или после введения обратимого антагониста рецепторов ацетилхолина.

[0159] В аспектах, где индивидууму, подвергнутому воздействию нервно-паралитического вещества, вводят противосудорожное средство, соединение формулы I или II можно вводить одновременно с введением противосудорожного средства. Соединение формулы I или II можно вводить по существу одновременно с введением противосудорожного средства, а также, например, в пределах приблизительно 5 минут после введения противосудорожного средства. В других вариантах осуществления соединение формулы I или II вводят до введения противосудорожного средства. В других вариантах осуществления соединение формулы I или II вводят после введения противосудорожного средства.

[0160] Фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить внутривенно. В других аспектах фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить трансдермальным путем. В других аспектах фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить внутримышечно. В других аспектах фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить внутрикостным путем. В других аспектах фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить подкожно.

[0161] Предпочтительные фармацевтические композиции для применения в описанных способах включают соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов. Предпочтительные фармацевтические композиции содержат соединение формулы I или II или его фармацевтически приемлемую соль, маннит, полисорбат (например, полисорбат 80), повидон (например, повидон K12), необязательное средство для коррекции pH (например, NaOH или HCl), и воду.

[0162] В соответствии с изобретением, введение соединения и/или фармацевтической композиции, как описано в настоящем описании, может обеспечивать по существу эквивалентную AUC у индивидуума по сравнению с введением эталонного продукта дантролена, такого как RYANODEX^®. В других аспектах введение соединения и/или фармацевтической композиции, как описано в настоящем описании, может обеспечивать по существу эквивалентную AUC у индивидуума по сравнению со сравнительной композицией. Например, в некоторых аспектах при введении индивидууму 90% доверительные интервалы (CI) относительного среднего значения AUC_(0-t) и AUC_(0-∞) дантролена описанной фармацевтической композиции может составлять в пределах от 80% до 125% (например, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 105%, 110%, 115%, 120% или 125%) от относительного среднего значения AUC_(0-t) и AUC_(0-∞), соответственно, дантролена при введении эталонного продукта дантролена, например, RYANODEX^®. В некоторых аспектах при введении индивидууму 90% доверительные интервалы (CI) для относительного среднего значения AUC_(0-t) и AUC_(0-∞) дантролена описанной фармацевтической композиции находится в пределах от 80% до 125% (например, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 105%, 110%, 115%, 120% или 125%) от относительных средних значений AUC_(0-t) и AUC_(0-∞), соответственно, дантролена при введении сравнительного продукта.

[0163] Приведенные ниже примеры предоставлены для иллюстрации некоторых из идей, описанных в настоящем описании. Хотя считается, что каждый пример соответствует конкретным индивидуальным вариантам осуществления изобретения, ни один из примеров не следует считать ограничивающими более общие варианты осуществления, описанные в настоящем описании. В приведенных ниже примерах были предприняты попытки обеспечить точность используемых чисел (например, количества, температура и т.д.), однако следует учитывать некоторую экспериментальную погрешность и отклонение.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

[0164] Натрий дантролен (1 экв.) растворяли безводном диметилформамиде. Добавляли реагент 3 (1 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 60°C в атмосфере азота. Через 4 ч добавляли еще один эквивалент реагента 3 и реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение ночи. Затем реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали два раза насыщенным хлоридом натрия. Слои разделяли. Органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с использованием хроматографии на силикагеле. Желаемый продукт выделяли с чистотой 90-95%. Данные ¹H-ЯМР согласовывались со спрогнозированными для желаемого продукта.

[0165] Пример 1, способ A: 1a, сушили с P₂O₅ в течение ночи. К смеси 1a (500 мг, 1,48 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли 3 (0,84 мл, 3,72 ммоль), а затем NaI (245 мг, 1,63 ммоль) при 0°C. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 64 ч. Смесь разбавляли EtOAc (30 мл) и рассолом (20 мл). Органический слой отделяли, промывали водой (2×15 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный остаток очищали флэш-хроматографией (два раза), элюируя 0-10% MeOH/CH₂Cl₂ с получением желаемого соединения 4 (355 мг, 45%) в виде желтого твердого вещества.

[0166] Пример 1, способ B: 1a сушили с P₂O₅ в течение ночи. К смеси 1a (8,0 г, 23,8 ммоль) в DMF (160 мл) добавляли 3 (6,5 мл, 28,79 ммоль), а затем NaI (4,28 г, 28,55 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 ч. Смесь разбавляли EtOAc (250 мл) и рассолом (60 мл). Органический слой отделяли, промывали водой (2×75 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Остаток растирали с CH₂Cl₂-гексаном с получением желтого твердого вещества (~7 г). Это твердое вещество очищали флэш-хроматографией (два раза, инактивированный SiO₂), элюируя 0-10% MeOH/CH₂Cl₂, с получением желаемого соединения 4 (1,92 г, 15%) в виде желтого твердого вещества.

Пример 2

[0167] Образец соединения 4 обрабатывали 1 мл смеси 9/1 трифторуксусной кислоты/воды в течение 20-30 мин при температуре окружающей среды. Избыток TFA сразу удаляли с использованием высокого вакуума и полученное твердое вещество собирали фильтрацией, промывали водой (5 мл) и сушили воздухом. Исходный материал, реакционную смесь и конечный продукт анализировали посредством LC/MS для определения того, конвертируется ли 2 обратно дантролен в условиях удаления защитной группы. Не наблюдали обратного конвертирования 2 в дантролен. Данные ¹H-ЯМР продукта согласовывались со спрогнозированными данными для желаемого продукта.

[0168] Пример 2, способ A: к смеси 4 (886 мг, 1,65 ммоль) в CH₂Cl₂ (9 мл) добавляли TFA (9 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель выпаривали на роторном испарителе до сухого состояния. Полученный остаток растирали с гексаном в течение 1 ч и желтое твердое вещество фильтровали и сушили с получением желаемого соединения 2 (660 мг, 94%).

Пример 3

[0169] 50 мг 2 смешивали с 3 мл метанола (полное растворение) и наносили на 1 г Na+ ионообменной колонки. Соединение элюировали метанолом и после лиофилизации обеспечило 18 мг (выход 36%) оранжевого твердого вещества. Этот материал растворяли в воде и осторожно титровали до pH 8,5 добавлением небольших аликвот 0,1 M NaOH, при перемешивании. Затем раствор лиофилизировали с получением оранжевого твердого вещества, соединение 2a. Данные LC/MS образца до и после лиофилизации были идентичными, что указывает на то, что не происходит обратного конвертирования в дантролен в ходе ионного обмена. Данные ¹H-ЯМР продукта согласовывались со спрогнозированными данными для желаемого продукта.

[0170] Пример 3, способ A: к перемешиваемой суспензии 2 (500 мг, 1,17 ммоль) в воде (63 мл, категория ВЭЖХ) добавляли 0,1 Н NaOH (23,6 мл, 2,34 ммоль) при комнатной температуре аликвотами по 650 мкл, после чего сразу проводили быстрое встряхивание до тех пор, пока значение pH не достигало 8,5. Раствор фильтровали и фильтрат лиофилизировали в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения 2a (530 мг, 96%) в виде желтого твердого вещества. MS (CI) m/z=424,9 [M]⁺. ¹H NMR (300 МГц, D₂O): δ 8,08 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,72 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,59 (с, 1H), 6,98 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,86 (д, J=3,6 Гц, 1H), 5,19 (д, J=6,0 Гц, 2H), 4,32 (с, 2H).

Пример 4. Конвертирование 2a в дантролен с помощью щелочной фосфатазы при 25°C

Инкубация с щелочной фосфатазой

[0171] Пролекарство 2a инкубировали с очищенной щелочной фосфатазой при 25°C. Конечная реакционная смесь содержала приблизительно 20 мкг/мл пролекарства и 50 мкЕ/мкл щелочной фосфатазы (из кишечника теленка, Sigma #11097075001) в 1X PBS, pH 7,4. Также получали контрольную смесь, содержавшую 20 мкг/мл пролекарства без фермента в 1X PBS pH 7,4. Реакционную смесь с ферментом хранили при 25°C и аликвоты 10 мкл инжектировали и анализировали посредством ВЭЖХ через 0,9 ч, 3,2 ч, 5,5 ч, 7,7 ч и 19,9 ч. Контрольную смесь также хранили при 25°C и аликвоты 10 мкл инжектировали для анализа посредством ВЭЖХ через 1,5 ч, 3,8 ч, 6,6 ч, 8,3 ч и 20,4 ч.

Анализ образцов посредством ВЭЖХ

[0172] Анализ проводили с использованием системы Waters 2695 Alliance System, оборудованной детектором PDA и колонкой Restek Ultra C18 (5 мкм, 250×4,6 мм), поддерживаемой при 25°C. Образцы анализировали с использованием градиентного способа с подвижной фазой A, содержавшей ацетонитрил, и подвижной фазой B, содержавшей ацетонитрил:фосфатный буфер pH 6,9 33:67. Колонку уравновешивали 100% подвижной фазой B, а затем держали в этой композиции в течение 19 мин. Затем количество подвижной фазы A увеличивали до 55% за 5 мин. Колонку промывали 55% A в течение 2 мин, возвращали к 100% B в течение 2 мин, а затем повторно уравновешивали 100% B в течение 5 мин на протяжении общего времени 33 мин. 10 мкл образца инжектировали, и детекцию анализируемых соединений проводили посредством УФ при 375 нм. Пролекарство элюировалось приблизительно через 3,1 минуты и дантролен элюировался приблизительно через 15,4 минуты. Проводили мониторинг изменения площади пика с течением времени для определения конвертирования пролекарства в дантролен. Графики для площади пика с течением времени представлены на фиг.1 и фиг.2.

Пример 5. Конвертирование 2a в дантролен в плазме крысы при 22°C

Инкубация с плазмой

[0173] Эксперимент in vitro проводили посредством добавления 40 мкл приблизительно 10 мг/мл 2a, растворенного в DMF, к 360 мкл предварительно замороженной плазмы самцов крыс Sprague Dawley при 22°C. Плазму с добавленным соединением хранили при 22°C и аликвоты 50 мкл отбирали через 25 мин, 3 ч и 20 ч после добавления. Аликвоты сразу обрабатывали 50 мкл ацетонитрила и перемешивали встряхиванием с последующим центрифугированием при 4000 об/мин в течение 5 мин при 25°C. 50 мкл супернатанта разбавляли 50 раз в смеси ацетонитрил:фосфатный буфер pH 6,9 33:67 и переносили в стеклянный флакон для анализа посредством ВЭЖХ.

Анализ образцов посредством ВЭЖХ

[0174] Анализ проводили с использованием системы Waters 2695 Alliance System, оборудованной детектором PDA и колонкой Restek Ultra C18 (5 мкм, 250×4,6 мм), поддерживаемой при 25°C. Образцы анализировали с использованием градиентного способа с подвижной фазой A, содержавшей ацетонитрил, и подвижной фазой B, содержавшей ацетонитрил:фосфатный буфер pH 6,9 33:67. Колонку уравновешивали 100% подвижной фазой B, а затем держали в этой композиции в течение 19 мин. Затем количество подвижной фазы A увеличивали до 55% за 5 мин. Колонку промывали 55% A в течение 2 мин, возвращали к 100% B в течение 2 мин, а затем повторно уравновешивали 100% B в течение 5 мин на протяжении общего времени 33 мин. 10 мкл образца инжектировали, и детекцию анализируемых соединений проводили посредством УФ при 375 нм. Пролекарство элюировалось приблизительно через 3,1 минуты и дантролен элюировался приблизительно через 15,4 минуты. Проводили мониторинг изменения площади пика с течением времени для определения конвертирования пролекарства в дантролен. См. фиг.3.

Пример 6. Конвертирование 2a в дантролен в плазме при 37°C

Инкубация с плазмой

[0175] Эксперимент in vitro проводили посредством добавления 60 мкл приблизительно 10 мг/мл 2a, растворенного в DMF, к 690 мкл предварительно замороженной плазмы самцов крыс Sprague Dawley при 37°C. Плазму с добавленным соединением хранили при 37°C и аликвоты 50 мкл отбирали через 5, 10 мин, 20 мин, 30 мин, 40 мин, 50 мин, 60 мин, 100 мин, 2,5 ч, 3,5 ч, 4 ч, 5 ч и 6,5 ч после добавления. Аликвоты сразу обрабатывали 50 мкл ацетонитрила и перемешивали встряхиванием с последующим центрифугированием при 4000 об/мин в течение 5 мин при 25°C. 50 мкл супернатанта переносили в стеклянный флакон для анализа посредством ВЭЖХ.

Анализ образцов посредством ВЭЖХ

[0176] Анализ проводили с использованием системы Waters 2695 Alliance System, оборудованной детектором PDA и колонкой Restek Ultra C18 (5 мкм, 250×4,6 мм), поддерживаемой при 25°C. Образцы анализировали с использованием градиентного способа с подвижной фазой A, содержавшей 0,1% трифторуксусную кислоту в воде, и подвижной фазой B, содержавшей 0,1% трифторуксусную кислоту в ацетонитриле при скорости потока 1,0 мл/мин. Колонку уравновешивали 67% подвижной фазы A/33% подвижной фазы B, а затем держали в этой композиции в течение 19 мин. Затем количество подвижной фазы B увеличивали до 70% за 5 мин. Колонку промывали 70% B в течение 2 мин, возвращали к 33% B в течение 2 мин, а затем повторно уравновешивали 33% B в течение 5 мин на протяжении общего времени 47 мин. 5 мкл образца инжектировали, и детекцию анализируемых соединений проводили посредством УФ при 375 нм. Пролекарство элюировалось приблизительно через 6,5 минуты и дантролен элюировался приблизительно через 18,5 минуты. Проводили мониторинг изменения площади пика с течением времени для определения конвертирования пролекарства в дантролен. График площади пика для пролекарства с течением времени представлен на фиг.4.

Пример 7. Биодоступность дантролена после введения 2a крысам

Способы

[0177] Соединение 2a составляют в концентрации 8 мг/мл в 5% водном растворе маннита (в качестве модификатора тоничности) при pH 8,0. Состав вводят в/в, п/к или в/м канюлированным крысам Harlan Sprague Dawley (3 крысы/группа) от Envigo RMS, Inc. (Indianapolis, IN). В каждой группе вводят 7,5 мг/кг 2a, что равно 5 мг/кг эквивалентов дантролена (DE). Проводят взятие цельной крови (0,1 мл) через катетер в яремной вене через 0, 0,033 (только для в/в), 0,083, 0,167, 0,33, 0,66, 1, 3, 6 и 9 часов. Сразу после взятия 0,1 мл цельной крови добавляют к 0,3 мл ацетонитрила для остановки реакции биоконвертирования пролекарства. Затем образцы помещают на влажный лед до центрифугирования для удаления преципитата. Преципитированный матрикс цельной крови анализируют в отношении 2a, дантролена и метаболита 5-OH дантролена с использованием колонки 4-мкм Polar RP 80Å, 75×2 мм Phenomenex Synergi на системе Waters Acquity UPLC, подсоединенной к системе LC/MS/MS Applied Biosystems/MDS Sciex API 6500. Образцы количественно определяют, исходя из стандартных кривых, полученных для каждого анализируемого соединения в преципитированном матриксе цельной крови.

[0178] Аналогично, концентрацию дантролена в плазме с течением времени определяют после введения Ryanodex внутривенно крысам в дозе 5 мг кг^-1. Поскольку Ryanodex представляет собой 3,5 гидрат дантролена натрия, это эквивалентно дозе 3,9 мг кг^-1 дантролена на молярной основе (т.е. 3,9 мг кг^-1 эквивалентов дантролена (DE)).

[0179] Площадь под кривой (AUC) вычисляют с использованием правила трапеции с использованием программного обеспечения SigmaPlot 12.5.

Результаты

[0180] Введение 2a крысам в/в, в/м и п/к путем приводит к быстрому появлению дантролена в крови.

Пример 8. Биодоступность дантролена после введения соединений по изобретению крысам

Способы

[0181] Соединения по изобретению составляют в 5% водном растворе маннита (в качестве модификатора тоничности). Состав вводят в/в, п/к или в/м канюлированным крысам Harlan Sprague Dawley (3 крысы/группа) от Envigo RMS, Inc. (Indianapolis, IN). В каждой группе вводят количество, эквивалентное 5 мг/кг эквивалентов дантролена (DE). Проводят взятие цельной крови (0,1 мл) через катетер в яремной вене через 0, 0,033 (только для в/в), 0,083, 0,167, 0,33, 0,66, 1, 3, 6 и 9 часов. Сразу после взятия 0,1 мл цельной крови добавляют к 0,3 мл ацетонитрила для остановки реакции биоконвертирования пролекарства. Затем образцы помещают на влажный лед до центрифугирования для удаления преципитата. Преципитированный матрикс цельной крови анализируют в отношении исходного пролекарства, дантролена и метаболита 5-OH дантролена с использованием колонки 4-мкм Polar RP 80Å, 75×2 мм Phenomenex Synergi на системе Waters Acquity UPLC, подсоединенной к системе LC/MS/MS Applied Biosystems/MDS Sciex API 6500. Образцы количественно определяют, исходя из стандартных кривых, полученных для каждого анализируемого соединения в преципитированном матриксе цельной крови.

[0182] Аналогично, концентрацию дантролена в плазме с течением времени определяют после введения Ryanodex внутривенно крысам в дозе 5 мг кг^-1. Поскольку Ryanodex представляет собой 3,5 гидрат дантролена натрия, это эквивалентно дозе 3,9 мг кг^-1 дантролена на молярной основе (т.е. 3,9 мг кг^-1 эквивалентов дантролена (DE)).

[0183] Площадь под кривой (AUC) вычисляют с использованием правила трапеции с использованием программного обеспечения SigmaPlot 12.5.

Результаты

[0180] Введение соединений по изобретению крысам в/в, в/м и п/к путем приводит к быстрому появлению дантролена в крови.

Пример 9

Обзор исследования

[0184] Задачей исследования является определение того, имеет ли соединение по изобретению (например, соединение 2a) нейропротективные эффекты в модели выживания у млекопитающих, например, собак, свиней, кроликов, грызунов (например, крыс, мышей, морских свинок) и приматов (например, мартышка, шимпанзе). Одной из иллюстративных моделей является модель выживания у крыс при введении GD (зоман).

[0185] Однократные дозы соединения по изобретению вводят после начала индуцированных нервно-паралитическим веществом судорог. Например, вводят однократные дозы соединения, эквивалентные от 1 мг/мг до 30 мг/кг дантролена (например, 10 мг/кг или 30 мг/кг). Введение соединения по изобретению можно проводить внутривенно, подкожно, внутримышечно, трансдермальным путем, внутрикостным путем. Например, дозу можно вводить внутривенно.

[0186] Выживанию можно способствовать посредством введения антидота нервно-паралитического вещества. Например, азоксима хлорид (HI-6) можно вводить до воздействия нервно-паралитического вещества, например, за тридцать минут до подкожной инъекции (п/к) зомана, атропина метилнитрат можно вводить через одну минуту после п/к инъекции зомана и мидазолам можно вводить через двадцать минут после начала индуцированных зоманом судорог, которые достигают показателя Racine по меньшей мере 3.

[0187] Контроли включают одну группу животных без введения (наивные), а в другой группе вводят стерильную воду после начала индуцированных нервно-паралитическим веществом судорог (например, через 50 минут после начала индуцированных нервно-паралитическим веществом судорог).

[0188] Проводят серию нейроповеденческих тестов на протяжении некоторого периода времени, например, приблизительно через 28 суток после воздействия однократной дозы нервно-паралитического вещества. Через день после периода тестирования (например, на 29 сутки) всех животных умерщвляют под анестезией, например, посредством кровопускания или интракардиальной перфузии. Головной мозг извлекают из каждого животного для микроскопической оценки нейропатологии, и сердце извлекают из каждого животного для исследования возможной патологии.

Материалы

[0189] Зоман (GD) - разбавленный 0,9% хлоридом натрия. Зоман представляет собой фосфорорганическое нервно-паралитическое вещество, которое инактивирует ацетилхолинэстеразу (AChE) путем образования аддукта с ферментом.

- Химическое наименование: пинаколилметилфосфонофлуоридат;

- Формула: C₇H₁₆FO₂P;

- Молекулярная масса: 182,17;

- MRIGlobal партия #: GD090415-DOC-1;

- ID первичного стандарта: 13972-49-3;

- Чистота: 100%;

- Условия хранения < 4°C.

[0190] HI-6: Химическое название: [(E)-[1-[(4-карбамоилпиридин-1-ий-1-ил)метоксиметил]пиридин-2-илиден]метил]оксоазания метансульфонат (азоксима хлорид).

Структура:

Формула: C₁₄H₁₆Cl₂N₄O₃.

Молекулярная масса: 359,207.

[0191] Атропина метилнитрат: химическое название: (8,8-диметил-8-азониабицикло[3.2.1]октан-3-ил) 3-гидрокси-2-фенилпропаноата нитрат

Структура:

Формула: C₁₈H₂₆N₂O₆.

Молекулярная масса: 366,414.

[0192] Мидазолам: химическое название: 8-хлор-6-(2-фторфенил)-1-метил-4H-имидазо[1,5-a][1,4]бензодиазепин.

Структура:

Формула: C₁₈H₁₃ClFN₃.

Молекулярная масса: 325,771.

Дозы

[0193] HI-6, зоман, атропина метилнитрат и мидазолам: могут быть выбраны однократные дозы HI-6 (в/б, 125 мг/кг); зомана (п/к, 154 мкг /кг, 1,4×LD₅₀), атропина метилнитрата (в/м, 2 мг/кг) и мидазолама (в/м, 2 мг/кг). Ожидается, что этот режим вызовет судороги, которые достигнут показателя Racine по меньшей мере 3 и приемлемого количества выживших для испытания для наблюдения.

[0194] Соединения по изобретению: можно вводить соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, как описано в настоящем описании. Предпочтительным соединением является соединение 2a.

Получение дозы

[0195] В экспериментах с использованием GD, GD получают в ледяном 0,9% хлориде натрия в соответствии с SOP MRI-5821 "Preparation of Standards and Samples from Research Development and Testing Evaluation (RDTE) Dilute Solutions".

Шкала Racine

1=обездвиживание и взгляд в упор;

2=кивание головой, "отряхивание мокрой собаки";

3=клонус передней конечности;

4=двухсторонний клонус передних конечностей;

5=двухсторонний клонус передних конечностей, подъем на задние конечности и потеря равновесия.

Нейроповеденческие тесты

[0196] Области головного мозга, повреждаемые в результате воздействия зомана, могут включать гиппокамп и энторинальную, лобную и теменную кору. Эти области содержат структуры и нервные цепи для обучения, формирования воспоминаний, переработки информации и других когнитивных процессов. Для оценки потенциальных нейропротективных эффектов соединения по изобретению животное оценивают с использованием серии поведенческих тестов, которые задействуют обучение, память, сенсорно-моторную интеграцию и адаптивные ответы. Примеры таких тестов включают: 1) тест на предпочтение сахарозы и 2) тест принудительного плавания.

Тест на предпочтение сахарозы

[0197] В тесте на предпочтение сахарозы (SPT) используется естественная склонность крыс предпочитать сладкую воду над обычной водой. Он является общепринятым тестом для определения поведения жажды удовольствия (гедония) или его отсутствия (ангедония) и требует, чтобы животное адаптировалось к изменению размещения слева или справа бутылок, содержащих водопроводную воду и воду с 1% сахарозой.

[0198] Крыс содержат по отдельности с доступом к пище и воде без ограничений (одна бутылка воды в каждой клетке) перед SPT. Для акклиматизационной части SPT 2 бутылки воды помещают в домашнюю клетку каждой крыс на 5-6 суток. Бутылки с водой оборудованы поилками, которые минимизируют протекания, и их взвешивают приблизительно каждые 24 часа. После фазы акклиматизации одну бутылку для воды заполняют приблизительно 200 мл 1% раствора сахарозы, а другую бутылку заполняют приблизительно 200 мл водопроводной воды. Через двадцать четыре часа количество жидкости, оставшейся в каждой бутылке, регистрируют. Размещение бутылок слева/справа затем меняют и количество жидкости, оставшееся в каждой бутылке, вновь регистрируют через двадцать четыре часа. Количество (мл) употребленного раствора сахарозы выражают в качестве процента от общего объема употребленной жидкости (вода с сахарозой плюс вода) в течение каждого из двух периодов по 24 часа и сравнивают по группам и суткам.

Тест принудительного плавания

[0199] Тест форсированного плавания (FST) был разработан Porsolt в поздние 1970-е в качестве быстрого способа скрининга эффективности антидепрессантных лекарственных средств у грызунов. Увеличенная обездвиженность, которая возникает в конце 5-минутного FST у грызунов без лечения ("нормальных") интерпретировалась как "поведенческое отчаяние" и она обращалась вспять антидепрессантными лекарственными средствами, что коррелировало с антидепрессантной эффективностью этих средств у людей. Однако конструктивная валидность этого теста была подвергнута сомнению по многим причинам, включающим: 1) в FST тестируются острые эффекты антидепрессантов, в то время как у пациентов с клинической депрессией лекарственные средства требуют 4-6 недель для клинического улучшения; 2) зависимой переменной в FST является острый ответ животного на тест и не характеристика животного и 3) интерпретация поведения плавания как "поведенческое отчаяние" является антропоморфической. В настоящее время считается, что прогрессирующая обездвиженность, наблюдаемая у крыс без лечения, отражает адаптивный ответ на острый стресс в результате помещения в контейнер без возможности выбраться.

[0200] При FST активность плавания и обездвиженность определяют в стеклянной цилиндрической камере (46 см H×30 см D), заполненной водой (высота 30 см, 25°C). Термометры используют, чтобы убедиться в том, что температура воды является постоянной 24-26°C для всех животных. Проводят два сеанса плавания, один в качестве первоначального "предварительного теста" в течение 15 мин, за которым следует второй "тест" в течение 5 мин через 24 часа. Сеансы теста регистрируют на видео. Время, потраченное на активное плавание, и время, потраченное в обездвиженном состоянии, оценивают для каждой минуты FST.

Нейропатология

[0201] 7 срезов головного мозга каждого животного оценивают микроскопически с использованием полуколичественной оценочной системы из 6 точек. Микроскопические очаги повреждения оценивают по шкале из 6 точек:

0=норма;

1=1-5 пораженных клеток на микроскопическое поле 40X;

2=6-20 пораженных клеток на микроскопическое поле 40X;

3=21-50 пораженных клеток на микроскопическое поле 40X;

4=50%-80% пораженных клеток на микроскопическое поле 40X;

5 = >80% пораженных клеток на микроскопическое поле 40X.

Пример 10. Получение 2b

[0202] К перемешиваемой суспензии 2 (100 мг, 0,23 ммоль) в воде (12 мл, категория ВЭЖХ) капельно добавляли Tris (5, 57 мг, 0,47 ммоль), растворенный в воде (5 мл), при комнатной температуре. Значение pH конечного раствора составляло 6,6. Раствор фильтровали и фильтрат лиофилизировали в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения 2b (150 мг, 95%) в виде желтого твердого вещества. MS (CI) m/z=424,9 [M]+. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): δ 8,24 (м, 2H), 7,93 (м, 2H), 7,73 (м, 1H), 7,12 (м, 1H), 6,97 (м, 1H), 5,20 (м, 2H), 4,40 (м, 2H), 3,63 (м, 15 H).

Пример 11

[0203] Стадия 1: 1a сушили с P₂O₅ в течение ночи. К смеси 1a (1,0 г, 2,97 ммоль) в DMF (20 мл) добавляли ледяную уксусную кислоту (340 мкл, 5,95 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь переливали на раздробленный лед, твердое вещество отфильтровывали и промывали водой. Полученное влажное твердое вещество сушили над безводным P₂O₅ в течение ночи с получением желаемого соединения 7 (920 мг, 98%) в виде желтого твердого вещества.

[0204] Стадия 2: к суспензии 7 (1,35 г, 4,29 ммоль) в воде (45 мл) добавляли формалин (4,35 мл, 57,45 ммоль, 37% формальдегид в воде), а затем K₂CO₃ (51 мг, 0,37 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь фильтровали и желтое твердое вещество промывали 3% водным раствором формальдегида и сушили воздухом в течение 24 ч с получением желаемого соединения 9 (1,2 г, 82%).

[0205] Стадия 3: к раствору 9 (615 мг, 1,78 ммоль) в смеси DMF:ацетон (40 мл, 15:25 мл) медленно добавляли PCl₃ (1,2 мл, 13,71 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин при 0°C и в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем смесь переливали на раздробленный лед и полученное твердое вещество отфильтровывали, промывали водой (3×50 мл) и сушили над P₂O₅ в вакууме в течение 16 ч с получением желаемого соединения 6 (600 мг, 92%). ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): δ 8,33 (д, J=8,5 Гц, 2H), 8,03 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,87 (с, 1H), 7,48 (д, J=3,3 Гц, 1H), 7,11 (д, J=3,6 Гц, 1H), 5,42 (с, 2H), 4,53 (с, 2H).

Пример 12

[0206] СТАДИЯ 1: 1a сушили с P₂O₅ в течение ночи. К смеси 1a (1,0 г, 2,97 ммоль) в DMF (20 мл) добавляли ледяную уксусную кислоту (340 мкл, 5,95 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь переливали на раздробленный лед, полученное твердое вещество фильтровали и промывали водой. Влажное твердое вещество сушили над безводным P₂O₅ в течение ночи с получением желаемого соединения 7 (920 мг, 98%) в виде желтого твердого вещества.

[0207] СТАДИЯ 2: к суспензии 7 (90 мг, 0,28 ммоль) в воде (2,6 мл) добавляли формалин (0,29 мл, 3,83 ммоль, 37% формальдегид в воде), а затем K₂CO₃ (3,4 мг, 0,02 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь фильтровали и желтое твердое вещество промывали 3% водным раствором формальдегида и сушили на воздухе в течение 24 ч с получением желаемого соединения 9 (86 мг, 88%). MS (CI) m/z=343 [M]^-. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): δ 8,32 (д, J=9,0 Гц, 2H), 8,03 (д, J=9,1 Гц, 2H), 7,83 (с,1H), 7,47 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,08 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,52 (т, 1H), 4,85 (д, J=7,1 Гц, 2H), 4,45 (с, 2H).

Пример 13

[0208] СТАДИЯ 1: безводный DMF (0,8 мл, 10,33 ммоль) растворяли в безводном тетрагидрофуране (13 мл). Этот раствор капельно добавляли к перемешиваемому раствору тионилхлорида (0,75 мл, 10,33 ммоль) в тетрагидрофуране (9 мл) и охлаждали на ледяной бане. После полного добавления и 30 минут на льду ледяную баню удаляли и добавляли твердый N-гидроксисукцинимид (832 мг, 7,23 ммоль) (который полностью растворялся), а затем сразу добавляли твердую предварительно порошкованную морфолинуксусную кислоту (1,0 г, 6,88 ммоль). Морфолинуксусная кислота растворялась медленно с образованием однородного раствора, который быстро становился мутным. Реакционную смесь оставляли энергично перемешиваться в течение при комнатной температуре. Белое твердое вещество промывали тетрагидрофураном и сушили в вакууме с получением желаемого соединения 11 (1,6 г, 96%) в виде белого твердого вещества.

[0209] СТАДИЯ 2: к раствору 9 (660 мг, 1,92 ммоль) и 11 (928 мг, 3,83 ммоль) в безводном DMF (12 мл) добавляли триэтиламин (0,39 мл, 2,8 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при 60°C. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и очищали обращено-фазовой колоночной хроматографией с использованием смеси ацетонитрил-вода в качестве элюента. Фракции колонки анализировали посредством ВЭЖХ и фракции, содержавшие продукт, лиофилизировали с получением неочищенного соединения, имевшего чистоту 50%. Этот неочищенный продукт вновь очищали посредством препаративной ВЭЖХ с использованием смеси ацетонитрил-вода. Лиофилизация очищенных фракций дала указанное в заголовке соединение 10 (100 мг, 10%) в виде желтого твердого вещества.

[0210] СТАДИЯ 3: к перемешиваемому раствору 10 (75 мг, 0,16 ммоль) в безводном 1,4-диоксане (4 мл) добавляли HCl (0,3 мл, 4 Н в 1,4-диоксане) при комнатной температуре и полученную смесь перемешивали в течение 2 ч. Растворители выпаривали на роторном испарителе до сухого состояния. Полученный остаток растворяли в воде и лиофилизировали в течение ночи с получением 10c (75 мг, 94%).

[0211] MS (CI) m/z=472,1 [M]⁺. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): δ 8,33 (д, J=8,8 Гц, 2H), 8,03 (д, J=9,1 Гц, 2H), 7,89 (с, 1H), 7,49 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,11 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,60 (с, 2H), 4,54 (с, 2H), 3,32-3,81 (м, 10H). ¹H NMR (300 МГц, D₂O): δ 8,17 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,81 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,60 (с, 1H), 6,93-7,02 (м, 1H), 6,88-6,92 (м, 1H), 5,73 (с, 2H), 4,39 (с, 2H), 4,26 (с, 2H), 3,90-4,09 (м, 4H), 3,30-3,52 (м, 4H).

Пример 14

[0212] СТАДИЯ 1: к смеси K₂CO₃ (4,0 г, 28,94 ммоль) и TBAHSO₄ (240 мг, 0,70 ммоль) в воде (8 мл) добавляли 13 (2,0 г, 11,48 ммоль) в CH₂Cl₂ (8 мл) при 0°C. Полученную смесь перемешивали в течение 20 мин при 0°C, а затем добавляли 14 (1,3 мл, 12,85 ммоль) и вновь перемешивали в течение 3 ч. Органический слой отделяли и промывали водой (2×5 мл) и насыщенным водным рассолом (5 мл). Слой CH₂Cl₂ сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали флэш-хроматографией, элюируя 0-100% EtOAc/гексаном с получением желаемого соединения 15 (2,2 г, 86%) в виде бесцветной камеди.

[0213] СТАДИЯ 2: 1a сушили с P₂O₅ в течение ночи. К смеси 15 (2,2 г, 9,87 ммоль) в DMF (35 мл) добавляли 1a (1,66 г, 4,93 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь разбавляли EtOAc (50 мл) и промывали водой (2×25 мл) и насыщенным водным рассолом (15 мл). Слой EtOAc сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали флэш-хроматографией, элюируя 0-100% EtOAc/CH₂Cl₂ (два раза) с последующим растиранием с CH₂Cl₂-гексаном с получением желаемого соединения 16 (500 мг, 20%) в виде желтого твердого вещества.

[0214] СТАДИЯ 3: к смеси 16 (340 мг, 0,68 ммоль) в CH₂Cl₂ (18 мл) добавляли TFA (1,8 мл). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворители выпаривали на роторном испарителе до сухого состояния. Полученный остаток растирали с гексаном в течение 1 ч и желтое твердое вещество отфильтровывали и сушили с получением желаемого соединения 12 (300 мг, 99%).

[0215] СТАДИЯ 4: к перемешиваемой суспензии 6 (260 мг, 0,58 ммоль) в воде (36 мл, категория ВЭЖХ) добавляли 0,1 Н NaOH (5,85 мл, 0,58 ммоль) при комнатной температуре аликвотами по 400 мкл, а сразу после этого проводили быстрое встряхивание. Значение pH конечного раствора составляло 6,73. Раствор фильтровали и фильтрат лиофилизировали в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения 12a (150 мг, 55%) в виде желтого твердого вещества. MS (CI) m/z=445,1 [M]⁺. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): δ 8,34 (д, J=8,8 Гц, 2H), 8,04 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,87 (с, 1H), 7,49 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,11 (д, J=3,8 Гц, 1H), 5,43 (с, 2H), 4,51 (с, 2H), 2,40 (м, 2H), 2,15 (м, 2H).

Пример 15

[0216] СТАДИЯ 1: к раствору соединения 9 (500 мг, 1,45 ммоль) в безводном DMF (10 мл) добавляли соединение 18 (488 мг, 1,85 ммоль) в DMF (2 мл), а затем TEA (0,3 мл, 2,2 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Смесь разбавляли EtOAc (50 мл), промывали водой (2×15 мл). Органический слой сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и упаривали до сухого состояния. Неочищенный продукт очищали два раза флэш-хроматографией, элюируя 0-10% MeOH/CH₂Cl₂, с получением желаемого соединения 19 (350 г, 40%) в виде желтого твердого вещества.

[0217] СТАДИЯ 2: к раствору соединения 19 (200 мг, 0,32 ммоль) в смеси MeOH:1,4-диоксан (1:1, 6 мл) добавляли моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (63 мг, 0,32 ммоль). Прозрачный раствор перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Растворители выпаривали на роторном испарителе до сухого состояния. Остаток очищали флэш-хроматографией, элюируя 0-10% MeOH/CH₂Cl₂, с получением желаемого соединения 20 (125 г, 77%) в виде желтого твердого вещества.

[0218] СТАДИЯ 3: к раствору соединения 20 (120 мг, 0,24 ммоль) и соединения 21 (26,4 мг, 0,26 ммоль) в смеси м-ксилол:1,4-диоксан (1:1, 16 мл) добавляли моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (15 мг, 0,07 ммоль) и молекулярные сита 4Å (100 мг). Полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли 1,4-диоксаном (30 мл) и фильтровали. Фильтрат выпаривали и неочищенный остаток очищали два раза флэш-хроматографией, элюируя 0-10% MeOH/CH₂Cl₂, с получением желаемого соединения 17 (16 мг, 11%) в виде желтого твердого вещества.

[0219] СТАДИЯ 4: к перемешиваемой суспензии 17 (5 мг, 8,4 мкмоль) в воде (3 мл, категория ВЭЖХ) капельно добавляли 0,1 Н Tris (90 мкл, 8,9 мкмоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Раствор фильтровали и фильтрат лиофилизировали в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения 17b (6 мг, 100%) в виде желтого твердого вещества. MS (CI) m/z=594,1 [M]⁺. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): δ 9,96 (ушир. с, 1H), 8,34 (д, J=8,8 Гц, 2H), 8,05 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,89 (с, 1H), 7,5 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,46 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,29 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,12 (д, J=3,5 Гц, 1H), 5,57 (с, 2H), 4,99 (с, 2H), 4,55 (с, 2H), 3,23-3,32 (м, 9H), 2,33-2,36 (м, 4H).

Пример 16

[0220] СТАДИЯ 1: к смеси 23 (2,5 г, 14,28 ммоль) в DMF (30 мл) добавляли триэтиламин (3,47 мл, 24,93 ммоль), а затем 24 (3,92 мл, 53,9 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 ч. Смесь разбавляли EtOAc (100 мл) и водой (50 мл). Слой EtOAc промывали водой (2×25 мл), 5% NaHCO₃ (25 мл) и насыщенным водным рассолом (15 мл). Слой EtOAc сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали флэш-хроматографией, элюируя 0-100% EtOAc/гексаном, с получением желаемого соединения 25 (657 мг, 21%) в виде бесцветного масла.

[0221] СТАДИЯ 2: 1a сушили с P₂O₅ в течение ночи. К смеси 1a (647 мг, 1,92 ммоль) в DMF (12 мл) добавляли 25 (647 мг, 2,89 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 110 ч. Смесь разбавляли EtOAc (40 мл), промывали водой (2×15 мл) и насыщенным водным рассолом (15 мл). Слой EtOAc сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Неочищенный остаток очищали флэш-хроматографией, элюируя 0-100% EtOAc/CH₂Cl₂, с получением желаемого соединения 26 (260 мг, 27%) в виде желтого твердого вещества.

[0222] СТАДИЯ 3: К перемешиваемому раствору 26 (210 мг, 0,41 ммоль) в безводном 1,4-диоксане (4 мл) добавляли HCl (4 мл, 4 Н в 1,4-диоксане) при комнатной температуре и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Растворители выпаривали на роторном испарителе до сухого состояния. Полученный остаток растирали с гексаном в течение 1 ч и желтое твердое вещество фильтровали и сушили с получением указанного в заголовке соединения 22c (153 мг, 83%). MS (CI) m/z=402,1 [M]⁺. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): δ 8,47 (ушир. с, 3H), 8,34 (д, J=8,8 Гц, 2H), 8,04 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,91 (с, 1H), 7,50 (д, J=3,6 Гц, 1H), 7,12 (д, J=3,6 Гц, 1H), 5,61 (с, 2H), 4,56 (с, 2H), 3,85 (с, 2H).

Пример 17. Основные материалы и способы UPLC

[0223] Анализ LC-MS проводили с использованием системы жидкостной хроматографии Agilent 1290 Infinity II Ultra Performance Liquid Chromatography System, оборудованной колонкой Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 Column (2,1×50 мм, 1,8 мкм). Мониторинг элюирования проводили при 210 нм и 385 нм с использованием детектора диодных матриц. Подвижная фаза A представляла собой воду с 0,1% (об./об.) трифторуксусной кислотой, и подвижная фаза B представляла собой ацетонитрил с 0,1% трифторуксусной кислотой. Для каждого образца инъецировали 10 мкл и элюирование проводили с использованием линейного градиента, который начинался с 25% B и возрастал до 43% B в течение 4 минут при скорости потока 0,5 мл/мин. Система жидкостной хроматографии была подсоединена к трехквадрупольному масс-спектрометру Agilent 6420.

Стандартные кривые ВЭЖХ для измерения концентрации

[0224] Приблизительно 1 мг представляющего интерес соединения взвешивали и растворяли до 1 мг/мл с использованием 25% ацетонитрила (в воде об./об.). Проводили 10-кратное разведение пролекарства с использованием 25% ацетонитрила с получением раствора 100 мкг/мл раствор. Серию 2-кратных разведений с использованием 25% ацетонитрила проводили для получения растворов 50, 25, 12,5 и 6,25 мкг/мл. Для каждого образца анализировали 10 мкл с использованием оборудования и градиента, описанных в разделе "Основные материалы и способы UPLC". Стандартную кривую для концентрации строили, вручную интегрируя хроматограммы при 385 нм и строя график площади пика в зависимости от концентрации.

Фармакокинетический анализ

[0225] В каждый заданный момент времени проводили взятие 400 мкл в пробирку K2EDTA, а затем помещали на лед до центрифугирования. После центрифугирования 100 мкл плазмы комбинировали с 300 мкл ацетонитрила, а затем проводили центрифугирование для удаления преципитированного материала. Образцы анализировали с использованием градиента, описанного в разделе "Основные материалы и способы UPLC". Стандартную кривую для дантролена строили для каждого эксперимента путем растворения 3,8 мг дантриума в 14,9 мл 50% метаноле (об./об.) в воде. Дантриум разбавляли в супернатанте смеси преципитированные клетки крови крысы: ацетонитрил 1:3 с получением образцов для стандартной кривой. Диапазон стандартной кривой составлял от 5000 до 5 нг/мл. Мониторинг поглощения дантролена проводили при 385 нм с использованием детектора на диодной матрице и функциональности мониторинга множественных реакций масс-спектрометра.

Обратное конвертирование соединения 2a в плазме и фармакокинетика

[0226] Для определения конвертирования соединения 2a в дантролена в плазму крысы 1 мг соединения 2a растворяли до 1 мг/мл в воде. Аликвоту объемом 100 мкл соединения 2a комбинировали с 900 мкл плазмы, взятой от крыс Sprague Dawley. Затем реакционную смесь с плазмой помещали на водяную баню при 37°C. Первоначальная концентрация соединения 2a в плазме составляла 100 мкг/мл. Первоначальный образец получали, сразу извлекая 100 мкл из реакционной смеси с плазмой и перемешивая их со 100 мкл ацетонитрила для гашения реакции, что вызывало преципитацию. Нерастворимый материал осаждали центрифугированием при 15000 об/мин в течение 5 минут при 25°C. Образец для анализа LC-MS получали путем комбинирования 75 мкл супернатанта с 75 мкл воды. Анализ LC-MS проводили путем инжектирования 10 мкл и образцы элюировали с использованием оборудования и градиента, описанных в разделе "Основные материалы и способы UPLC". Дополнительные образцы получали через 10, 30, 45, 60, 120, 180 и 240 минут. Потерю тестируемого соединения и увеличение уровня дантролена количественно определяли путем интеграции вручную пиков на хроматограммах для 385 нм (фиг.5). Время полужизни соединения 2a в этих условиях получали путем аппроксимации экспоненциальной функции к этим данным. Время полужизни соединения 2a составляло 82 минуты. Также получали отрицательный контроль, где вместо плазмы крысы использовали фосфатно-солевой буфер, и не наблюдали конвертирования.

[0227] Фармакокинетику дантролена в плазме после введения соединения 2a живым крысам анализировали посредством введения крысам Sprague-Dawley с канюлированными венами и анализа плазмы на дантролен с использованием LC-MS (фиг.6 и таблица 1). Дозирование, взятие образцов и анализ проводились MPI Research. Внутривенные дозы вводили через канюлю в яремной вене. Внутримышечные дозы вводили путем инъекции воловины дозы в большую мышечную массу левой задней конечности, а другую половину дозы вводили в правую заднюю конечность. В каждой исследуемой группы было пять крыс. Соединение 2a растворяли до 8 мг/мл в подвергнутом стерилизации фильтрованием 5% манните (масс/об) с получением уровня дозы 7,5 мг/кг и объема дозы 0,94 мл/кг. Сбор плазмы проводили до введения и через 0,033, 0,083, 0,167 и 0,33, 0,66, 1, 2, 3, 6, 9 часов после введения.

[0228] В каждом эксперименте наблюдали только следовые количества 2a после введения посредством в/в, в/м или п/к путей. Следовательно, для определения фармакокинетики отслеживали только концентрацию дантролена.

Таблица 1. Биодоступность дантролена в плазме после введения соединения 2a внутривенным и внутримышечным путями

Путь введения AUC (нг*ч/мл) AUC (мкг*ч/мл) % биодоступность в/в 52148 5,2148 100 в/м 40565 4,0565 77,8

[0229] Во втором анализе проводили анализ фармакокинетики соединения 2 в цельной крови живых крыс (фиг.7 и таблица 2). Каждая исследуемая группа включала трех крыс. Соединение 2a растворяли до 8 мг/мл подвергнутом стерилизации фильтрованием 5% манните (масс/об) с получением уровня дозы 7,5 мг/кг и объема дозы 0,94 мл/кг. Взятие крови проводили до введения, через 0,033, 0,083, 0,167 и 0,33, 0,66, 1, 2, 3, 6, 9 часов после введения. Образцы цельной крови разбавляли в 4 раза в ацетонитриле и центрифугировали для удаления преципитата.

Таблица 2. Биодоступность дантролена в цельной крови после введения соединения 2a внутривенным и внутримышечным путями

Путь введения AUC (нг*ч/мл) AUC (мкг*ч/мл) % Биодоступность в/в 47528 4,7528 100 в/м 45297 4,5297 95,3

[0230] Проводили другой фармакокинетический анализ соединения 2a у живых крыс (фиг.8 и 9, таблица 3). Каждая исследуемая группа включала пять крыс. Соединение 2a растворяли до 8 мг/мл в подвергнутом стерилизации фильтрованием 5% водном растворе маннита (масс./об.) до уровня дозы 7,5 мг/кг и объем дозы 0,94 мл/кг. Взятие крови проводили до введения и через 0,033, 0,083, 0,167 и 0,33, 0,66, 1, 2, 3, 6, 9 часов после введения. Образцы крови разбавляли в 4 раза в ацетонитриле и центрифугировали для удаления преципитата. Образцы плазмы получали путем помещения крови в пробирки K₂EDTA, а затем центрифугирования. Затем полученную плазму аспирировали и разбавляли в 4 раза в ацетонитриле перед другим раундом центрифугирования для удаления преципитированного материала.

Таблица 3. Биодоступность дантролена после введения соединения 2a внутривенным, внутримышечным и подкожным путями

Путь введения AUC (нг*ч/мл) AUC (мкг*ч/мл) % Биодоступность в/в^a 41906 4,1906 100 в/м^a 33861 3,3861 80,8 п/к^a 26388 2,6388 64,0 в/в^b 40298 4,0298 100 в/м^b 22857 2,2857 56,7 п/к^b 20019 2,0019 49,7

^a Анализ цельной крови, ^b Анализ плазмы

Обратное конвертирование соединения 2b в плазме и фармакокинетика

[0231] Для определения конвертирования соединения 2b в дантролен в плазме крысы 1 мг соединения 2b растворяли до 1 мг/мл в воде. Аликвоту 100 мкл соединения 2b комбинировали с 900 мкл плазмы, взятой от крыс Sprague Dawley. Затем реакционную смесь с плазмой помещали на водяную баню при 37°C. Первоначальная концентрация соединения 2b в плазме составляла 100 мкг/мл. Первоначальный образец получали, сразу извлекая 100 мкл из реакционной смеси с плазмой и перемешивая их со 100 мкл ацетонитрила для гашения реакции, что вызывало преципитацию. Нерастворимый материал осаждали центрифугированием при 15000 об/мин в течение 5 минут при 25°C. Образец для анализа LC-MS получали путем комбинирования 75 мкл супернатанта с 75 мкл воды. Анализ LC-MS проводили путем инжектирования 10 мкл и образцы элюировали с использованием оборудования и градиента, описанных в разделе "Основные материалы и способы UPLC". Дополнительные образцы получали через 15, 30, 45, 60, 120, 180 и 240 минут. Потерю соединения 2 и увеличение уровня дантролена количественно определяли путем интеграции вручную пиков на хроматограммах для 385 нм (фиг.10). Время полужизни соединения 2b в этих условиях получали путем аппроксимации экспоненциальной функции к этим данным. Время полужизни соединения 2b составляло 77 минут. Также получали отрицательный контроль, где вместо плазмы крысы использовали фосфатно-солевой буфер, и не наблюдали конвертирования.

[0232] Фармакокинетику дантролена в плазме после введения соединения 2b живым крысам анализировали посредством введения крысам Sprague-Dawley с канюлированными венами и анализа плазмы на дантролен с использованием LC-MS (фиг.11 и таблица 4). Дозирование, взятие образцов и анализ проводились MPI Research. Внутривенные дозы вводили через канюлю в яремной вене. Внутримышечные дозы вводили путем инъекции воловины дозы в большую мышечную массу левой задней конечности, а другую половину дозы вводили в правую заднюю конечность. В каждой исследуемой группы было пять крыс. Соединение 2b растворяли до 11,4 мг/мл в подвергнутом стерилизации фильтрованием 5% манните (масс./об.) с получением уровня дозы 10,6 мг/кг и объема дозы 0,94 мл/кг. Сбор плазмы проводили до введения и через 0,033, 0,083, 0,167 и 0,33, 0,66, 1, 2, 3, 6, 9 часов после введения.

Таблица 4. Биодоступность дантролена в плазме после введения соединения 2b внутривенным и внутримышечным путями

Путь введения AUC (нг*ч/мл) AUC (мкг *ч/мл) % Биодоступность в/в 55748 5,5749 100 в/м 41947 4,1947 75,2

Пример 18. Обратное конвертирование соединения 10c в плазме

[0233] Для определения конвертирования соединения 10c в дантролен в плазме крысы 0,9 мг 10c растворяли до 1 мг/мл в воде. Аликвоту 100 мкл соединения 10c комбинировали с плазмой, взятой от крыс Sprague Dawley. Затем реакционную смесь с плазмой помещали на водяную баню при 37°C. Первоначальная концентрация соединения 10c в плазме составляла 100 мкг/мл. Первоначальный образец получали, сразу извлекая 100 мкл из реакционной смеси с плазмой и перемешивая их со 100 мкл ацетонитрила для гашения реакции, что вызывало преципитацию. Нерастворимый материал осаждали центрифугированием при 15000 об/мин в течение 5 минут при 25°C. Образец для анализа LC-MS получали путем комбинирования 75 мкл супернатанта с 75 мкл воды. Анализ LC-MS проводили путем инжектирования 10 мкл и образцы элюировали с использованием оборудования и градиента, описанных в разделе "Основные материалы и способы UPLC". Дополнительные образцы получали через 10, 20, 35, 45 и 60 минут. Потерю соединения 10c и увеличение уровня дантролена количественно определяли путем интеграции вручную пиков на хроматограммах для 385 нм. В течение первых 10 минут инкубации с плазмой 10c полностью конвертировалось в дантролен. Оцененное время полужизни составляло 1,9 мин. Также получали отрицательный контроль, где фосфатно-солевой буфер использовали вместо плазмы крысы, и наблюдали медленное конвертирование в дантролен. Время полужизни 10c в фосфатно-солевом буфере составляло 294 минуты. См. фиг.12.

Пример 19. Конвертирование соединение 12a в плазме и фармакокинетика

[0234] Для определения конвертирования соединения 12a в дантролен в плазме крысы получали раствор 12a 1 мг/мл в воде. Аликвоту 100 мкл 12a комбинировали с плазмой, взятой от крыс Sprague Dawley. Затем реакционную смесь с плазмой помещали на водяную баню при 37°C. Первоначальная концентрация соединения 12a в плазме составляла 100 мкг/мл. Первоначальный образец получали, сразу извлекая 100 мкл из реакционной смеси с плазмой и перемешивая их со 100 мкл ацетонитрила для гашения реакции, что вызывало преципитацию. Нерастворимый материал осаждали центрифугированием при 15000 об/мин в течение 5 минут при 25°C. Образец для анализа LC-MS получали путем комбинирования 75 мкл супернатанта с 75 мкл воды. Анализ LC-MS проводили путем инжектирования 10 мкл и образцы элюировали с использованием оборудования и градиента, описанных в разделе "Основные материалы и способы UPLC". Дополнительные образцы получали через 10, 20, 35, 45, 60, 75 и 150 минут. Потерю соединения 12a и увеличение уровня дантролена количественно определяли путем интеграции вручную пиков на хроматограммах для 385 нм (фиг.13). Время полужизни 12a в этих условиях получали путем аппроксимации экспоненциальной функции к данным. Вычисленное время полужизни составило 12,2 мин. Для отрицательного контроля, где фосфатно-солевой буфер использовали вместо плазмы крысы, время полужизни составляло более 150 минут.

[0235] Фармакокинетические свойства 12a анализировали аналогично тому, как и для 22c, за исключением того, что соединение растворяли до 5 мг/мл в 5% манните с получением уровня дозы 4 мг/кг и объема дозы 0,8 мл/кг (фиг.14).

Пример 20. Конвертирование соединения 17b в плазме

[0236] Для построения стандартной кривой для вычисления концентрации 17b 1 мг соединения растворяли в 200 мкл диметилформамида с получением раствора 5 мг/мл. Раствор 5 мг/мл разбавляли в 5 раз в воде, а затем центрифугировали при 15000 об/мин, 25°C, 5 мин. Супернатант использовали для получения 10-кратного разведения в 25% ацетонитриле в воде с получением раствора 100 мкг/мл. Проводили серию 2-кратных разведений с использованием 25% ацетонитрила с получением растворов 50, 25, 12,5 и 6,25 мкг/мл. Эти растворы анализировали, как описано в разделе "Основные материалы и способы UPLC" за исключением того, что градиент продолжали до конца с 90% ацетонитрилом через 14,4 минуты.

[0237] Для определения конвертирования 17b в дантролен в плазме крысы получали раствор 17b 1 мг/мл в воде. Аликвоту 100 мкл 17b комбинировали с 900 мкл плазмы, взятой от крыс Sprague Dawley. Затем реакционную смесь с плазмой помещали на водяную баню при 37°C. Первоначальная концентрация соединения 17b в плазме составляла 100 мкг/мл. Первоначальный образец получали, сразу извлекая 100 мкл из реакционной смеси с плазмой и перемешивая их со 100 мкл ацетонитрила для гашения реакции, что вызывало преципитацию. Нерастворимый материал осаждали центрифугированием при 15000 об/мин в течение 5 минут при 25°C. Образец для анализа LC-MS получали путем комбинирования 75 мкл супернатанта с 75 мкл воды. Анализ LC-MS проводили путем инжектирования 10 мкл и образцы элюировали с использованием оборудования и градиента, описанных в разделе "Основные материалы и способы UPLC". Дополнительные образцы получали через 15, 30, 45, 60, 180, 240 и 300 минут. Потерю соединения 17b и увеличение уровня дантролена количественно определяли путем интеграции вручную пиков на хроматограммах для 385 нм (фиг.15). Время полужизни 17b в этих условиях получали путем аппроксимации экспоненциальной функции к данным. Вычисленное время полужизни составило 94,5 мин. Для отрицательного контроля, где фосфатно-солевой буфер использовали вместо плазмы крысы, время полужизни составляло более 447 минут.

Пример 21. Конвертирование соединения 22c в плазме и фармакокинетика

[0238] Для определения конвертирования 22c в дантролен в плазме крысы получали раствор 22c 1 мг/мл в воде. Аликвоту 100 мкл 22c комбинировали с 900 мкл плазмы, взятой от крыс Sprague Dawley. Затем реакционную смесь с плазмой помещали на водяную баню при 37°C. Первоначальная концентрация соединения 22c в плазме составляла 100 мкг/мл. Первоначальный образец получали, сразу извлекая 100 мкл из реакционной смеси с плазмой и перемешивая их со 100 мкл ацетонитрила для гашения реакции, что вызывало преципитацию. Нерастворимый материал осаждали центрифугированием при 15000 об/мин в течение 5 минут при 25°C. Образец для анализа LC-MS получали путем комбинирования 75 мкл супернатанта с 75 мкл воды. Анализ LC-MS проводили путем инжектирования 10 мкл и образцы элюировали с использованием оборудования и градиента, описанных в разделе "Основные материалы и способы UPLC". Дополнительные образцы получали через 10, 20, 35, 45, 60, 75 и 150 минут. Потерю соединения 22с и увеличение уровня дантролена количественно определяли путем интеграции вручную пиков на хроматограммах для 385 нм (фиг.16). Время полужизни 22с в этих условиях получали путем аппроксимации экспоненциальной функции к данным. В течение первых 10 минут инкубации с плазмой 22c полностью конвертировалось в дантролен. Оцененное время полужизни составляло 3,2 мин. Также проводили испытание отрицательного контроля, где фосфатно-солевой буфер использовали вместо плазмы крысы, и наблюдали 85% обратное конвертирование через 150 минут.

[0239] Фармакокинетику 22c у живых крыс анализировали посредством дозирования крысам Sprague-Dawley с канюлей в вене и анализа крови в отношении дантролена с использованием LC-MS (фиг.17). Внутривенные дозы вводили через канюлю в яремной вене. Подкожные дозы вводили посредством инъекции между кожей и нижележащими слоями ткани в левой задней конечности каждого животного. Внутримышечные дозы вводили путем инъекции половины дозы в большую мышечную массу левой задней конечности, а другой половины дозы в правую заднюю конечность. В каждой исследуемой группе было три крысы. 22c растворяли до 3 мг/мл подвергнутом стерилизации фильтрованием 5% водном растворе маннита (масс/об) с 10% DMSO с получением уровня дозы 4 мг/кг и объем дозы 1,33 мл/кг. Взятие крови проводили до введения и через 0,167, 0,33, 0,66 и 1,33 часов после введения. В каждый момент времени проводили взятие 100 мкл крови во флакон, в который было помещено 300 мкл ацетонитрила. Образцы крови центрифугировали для осаждения какого-либо нерастворимого материала. Супернатанты быстро замораживали и хранили на сухом льду. Образцы анализировали с использованием способов, описанных в разделах "Основные материалы и способы UPLC" и "Фармакокинетический анализ".

Группа изобретений относится к органической химии и включает пролекарства дантролена формулы I или их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтическую композицию, их содержащую, и соединение формулы III. В формуле I R представляет собой -P(O)(OH)₂ или -P(O)(OR₁)(OR₂); R₁ представляет собой H или -C_1-6алкил; и R₂ представляет собой -C_1-6алкил. Технический результат - пролекарства дантролена, которые имеют высокую растворимость в воде. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 17 ил., 4 табл., 21 пр.

1. Соединение формулы I

где R представляет собой

-Р(O)(ОН)₂ или -Р(O)(OR₁)(OR₂);

R₁ представляет собой Н или -С_1-6алкил; и

R₂ представляет собой -С_1-6алкил;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, где R представляет собой -Р(O)(ОН)₂.

3. Соединение по п. 1, где R представляет собой -Р(O)(OR₁)(OR₂).

4. Соединение по п. 3, где R₁ представляет собой -С_1-6алкил.

5. Соединение по п. 4, где R₂ представляет собой -С_1-6алкил.

6. Соединение по любому из предшествующих пунктов в форме фармацевтически приемлемой соли.

7. Фармацевтическая композиция для лечения нарушений, отвечающих на дантролен, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из предшествующих пунктов или его фармацевтическую соль, и фармацевтически приемлемый эксципиент, предназначенная для подкожного или внутримышечного введения.

8. Фармацевтическая композиция по п. 7, где нарушение представляет собой злокачественную гипертермию, хроническую спастичность, тепловой удар вследствие изнурительной физической нагрузки, аритмии сердца, тахикардии, фибрилляцию предсердий, остановку сердца, инфаркт миокарда, сердечную недостаточность, повреждение миокарда, кардиомиопатию, болезнь центральных волокон, боковой амиотрофический склероз, рабдомиолиз, мышечную дистрофию Дюшенна, атаксию, гиперактивность детрузора, гиперактивный мочевой пузырь, судороги, эпилепсию, нейролептический злокачественный синдром, стресс-реакцию человека, болезнь Альцгеймера, болезнь Гентингтона, рассеянный склероз, болезнь Паркинсона, повреждение при ишемии-реперфузии, нейрональное повреждение при реперфузии, гипоксию, аневризму головного мозга, субарахноидальное кровоизлияние, инсульт, гипертермию, ассоциированную с пристрастием к наркотикам, или гипертермию, ассоциированную с передозировкой наркотиков, воздействие нервно-паралитического вещества, воздействие нервно-паралитического газа или накопление ацетилхолина.

9. Фармацевтическая композиция по п. 8, где эта фармацевтическая композиция является пригодной для внутримышечного введения.

10. Фармацевтическая композиция по п. 8, где эта фармацевтическая композиция является пригодной для подкожного введения.

11. Соединение формулы III