Способ диагностики вегетативных нарушений при постковидном синдроме у детей школьного возраста Российский патент 2024 года по МПК G01N33/68 G01N33/573 

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии и может быть использовано в качестве метода диагностики вегетативных нарушений при постковидном синдроме у детей школьного возраста.

Под синдромом вегетативной дисфункции (СВД) понимается полисистемное расстройство, возникающие в результате нарушения деятельности надсегментарных вегетативных структур. Клинические проявления СВД проявляются вариативностью, при которой в патологический процесс вовлекаются большинство систем организма, при этом ведущее место отводится расстройствам сердечно-сосудистой системы. Симптоматика СВД зависит от вегетативного тонуса, возраста ребенка, эмоциональных нарушений, темперамента и характера личности [Синдром вегетативной дисфункции у детей и подростков / Л. С. Чутко, Т. Л. Корнишина, С. Ю. Сурушкина [и др.] // Журнал неврологии и психиатрии им. C.C. Корсакова. – 2018. – Т. 118, № 1. – С. 43-49. – DOI 10.17116/jnevro20181181143-49. – EDN YPBUCS].

Вегетативные нарушения являются часто встречающимся облигатным признаком постковидных нарушений. Поперечное исследование показало, что симптомы постковидного периода могут сохраняться у 52% пациентов через 1 месяц после появления симптомов [Sugiyama, A., Miwata, K., Kitahara, Y., Okimoto, M., Abe, K. E. B., Ouoba, S., Akita, T.,Tanimine, N., Ohdan, H., Kubo, T., Nagasawa, A., Nakanishi, T., Takafuta, T., Tanaka, J., 2022. Long COVID occurrence in COVID-19 survivors. Sci.Rep. 12, 6039].

Многочисленные сообщения о случаях заболевания указывают на то, что вегетативная дисфункция или дизавтономия являются важным последствием длительного течения COVID [S. Blitshteyn, S. Whitelaw Postural orthostatic tachycardia syndrome (POTS) and other autonomic disorders after COVID-19 infection: a case series of 20 patients Immunol. Res., 69 (2021), pp. 205-211]. В проспективном мультицентровом исследовании отмечено, что вегетативные симптомы на этапе постCOVID-19 требуют наблюдения даже у пациентов без неврологических проявлений [A. Buoite Stella, G. Furlanis, N.A. Frezza, R. Valentinotti, M. Ajcevic, P. Manganotti Autonomic dysfunction in post-COVID patients with and without neurological symptoms: a prospective multidomain observational study].

При вегетативной дисфункции в детском возрасте отмечается ограниченное количество методов диагностики, что делает невозможным применение существующих способов (например, нагрузочные и фармакологические пробы) и ведет к несвоевременному выявлению этих нарушений. Наиболее распространенные методы диагностики (вегетативные пробы, исследование вариабельности сердечного ритма, тестирование по специальным опросникам) применяются лишь при появлении соответствующих жалоб, что, как правило, не используется у детей.

При большинстве положительных качеств, многие методы не имеют четких границ нормы и патологии, зачастую носят субъективный характер, требуют использования специального оборудования, значительных временных затрат. Всё это обусловливает необходимость разработки общедоступных методов своевременной объективной диагностики вегетативной дисфункции в постковидном периоде.

Известен способ верификации и вегетативных расстройств и определение их степени тяжести при помощи схемы, разработанной А.М. Вейном [Вегетативные расстройства: клиника, лечение, диагностика. Руководство для врачей. Под ред. Голубева В.Л. М.: Медицинское информационное агентство; 2010]. Способ основан на рейтинговой оценке выраженности вегетативных симптомов в баллах с использованием субшкал, включающих критерии диагностики сердечно-сосудистых, желудочно-кишечных, урологических, кожно-трофических, нарушений терморегуляции. Недостатком такого метода является субъективизм оценки состояния со стороны пациента и врача, что приводит к недостоверности полученных результатов.

Неврологические симптомы распространены при постковидном синдроме и связаны с повышенными уровнями провоспалительных цитокинов IL-6, MCP-1 и TNF- у большинства пациентов [Tsilingiris, D.; Vallianou, N.G.; Karampela, I.; Christodoulatos, G.S.; Papavasileiou, G.; Petropoulou, D.; Magkos, F.; Dalamaga, M. Laboratory Findings and Biomarkers in Long COVID: What DoWe Know So Far? Insights into Epidemiology, Pathogenesis, Therapeutic Perspectives and Challenges. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 10458. https://doi.org/10.3390/ijms241310458].

Лица с наиболее частыми симптомами после COVID-19 имеют более высокие исходные уровни провоспалительных, хемотаксических цитокинов [Alfadda A. A. et al. Clinical and biochemical characteristics of people experiencing post-coronavirus disease 2019-related symptoms: A prospective follow-up investigation //Frontiers in medicine. – 2022. – Т. 9. – С. 1067082]. Это говорит нам о том, что постковидный период сопровождается иммунологическими нарушениями.

M. Salah и др. доказали, что моноцитарный хемотаксический фактор в плазме крови у взрослых, перенесших коронавирусную инфекцию, обладает повышенной чувствительностью. Так в случае контроля диапазон концентрации MCP-1 составлял 10-40 нг/мл, при лёгкой степени - 50-240 нг/мл, средне-тяжелой степени - 220-1580 нг/мл, у реконвалесцентов - 40-70 нг/мл.

Способов объективной лабораторной диагностики вегетативных нарушений у детей в изученных нами патентных источниках и научной медицинской литературе не обнаружено.

Технический результат: повышение специфичности и точности диагностики вегетативных нарушений у детей школьного возраста, доступность, неинвазивность, объективизация способа диагностики.

Указанный результат достигается путем определения в слюне пациента с постковидным синдромом концентрации моноцитарного хемотаксического протеина-1 (MCP-1).

Способ осуществляют следующим образом: у обследуемого больного собирают ротовую жидкость в стерильную ёмкость для сдачи анализов. В последующем слюну центрифугируют при 3000 оборотах в течение 15 минут. Отделенную слюну можно хранить 2 часа при комнатной температуре и в течение длительного периода при -20 градусах и ниже [МСР-1-ИФА-БЕСТ (А-8782), серия 21 (ВЕКТОР-БЕСТ, Россия)]. Технология определения уровня моноцитарного хемотаксического белка (MCP-1) слюны базируется на проведении твердофазного ИФА (сэндвич-метод) с использованием специализированных стандартных тест-систем.

Необходимые реактивы: иммуноферментный набор для количественного определения моноцитарного хемотаксического белка методом конкурентного ИФА в биологических жидкостях ("МСР-1-ИФА-БЕСТ ", страна-производитель - Россия), планшет разборный, калибровочные образцы, контрольный образец (инактивированный), конъюгат №1,2, раствор для восстановления калибровочных и контрольных образцов, раствор для разведения образцов, концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, раствор тетраметилбензидина плюс, стоп-реагент, пленка для заклеивания планшета, трафарет для построения калибровочного графика, ванночка для реагента, наконечники для дозатора. Планшет разборный в наборе сорбирован моноклональными антителами, специфичными к моноцитарному хемотаксическому белку. Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора для разведения образцов. В лунки первого стрипа вносили по 100 мкл калибровочных образцов и по 100 мкл контрольного образца в дублях, приготовленных согласно рекомендации производителя. В остальные лунки планшета вносили по 100 мкл анализируемых образцов ротовой жидкости. Планшет инкубировали 120 минут при температуре 37±1°С при перемешивании со скоростью 700 об/минуту в шейкере-термостате (ELMI, Латвия). После этого удаляли жидкость из лунок планшета и выполняли 5-кратную промывку лунок на вошере (ASYS, Англия). Во все лунки планшета вносили по 100 мкл конъюгата №1. Планшет инкубировали еще 1 час при температуре 37±1°С при перемешивании со скоростью 700 об/минуту в шейкере-термостате (ELMI, Латвия). Удаляли содержимое лунок планшета и промывали их пять раза внося по 350 мкл рабочего раствора промывающего буфера. Затем вносили по 100 мкл конъюгата № 2. Инкубировали 30 минут при температуре 37±1°С. Затем после 5-х кратной промывки в лунки планшета добавляли по 100 мкл раствора рабочего раствора субстрата ТМБ, который представляет собой стабилизированной раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида и субстратный буфер, содержащий перекись водорода. Инкубировали еще 20 - 25 минут при температуре 37±1°С и после развития окраски останавливали реакцию путем добавления 100 мкл стоп-реактива. Величину оптической плотности растворов в лунках стрипов регистрировали на фотометре c вертикальным сканированием (ридере) (Stat Fax 2100, Awareness, США) в двухволновом режиме: при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 640 нм.

Конкретные показатели, определяющие наличие вегетативных нарушений, высчитывались с использованием R-квадрата путем регрессионного анализа и сравнивались с результатами тестирования по шкале для оценки вегетативных нарушений (А.М. Вейн).

При значении МСР-1 от 3,5 пг/мл до 19,64 г/мл делают вывод об отсутствии вегетативных нарушений, при значении МСР-1 19,65 нг/мл и более диагностируют вегетативные нарушения.

Данный способ был апробирован при обследовании 60 детей с постковидным синдромом в возрасте от 8 до 14 лет, 30 мальчиков и 30 девочек. Группу контроля составили 20 практически здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту с основной группой.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1. Пациентка А., 12 лет. Перенесла новую коронавирусную инфекцию легкой степени тяжести в сентябре 2021 в форме назофарингита. Предъявляла жалобы на раздражительность, частые переживания, головные боли (по типу напряжения). Неврологический статус без патологии. Тестирование по схеме Вейна определило 20 баллов, по вопроснику Вейна - 12 баллов (результаты указывают на отсутствие субъективных симптомов вегетативной дистонии). Уровень MCP-1 в слюне оказался равным 6,9 пг/мл, что объективно подтверждает отсутствие вегетативной дисфункции.

Пример 2. Пациент Р., мальчик 11 лет. Перенёс новую коронавирусную инфекцию средней степени тяжести в назофарингобронхиальной форме в декабре 2022 года. После окончания острого периода у пациента сохранялись жалобы на cнижение физической активности, нарушение сна, раздражительность, частые переживания, трудности общения с другими детьми, нарушение концентрации, памяти, ухудшение самочувствия при смене погоды, плохая переносимость холода, жары, духоты. При осмотре неврологических симптомов не выявлено. С помощью иммуноферментного анализа по вышеописанной методике определен сывороточный уровень моноцитарного хемотаксического белка в слюне – 33,6 пг/мл. При этом по схеме Вейна отмечалось 35 баллов, по опроснику Вейна - 28 баллов, данные показатели констатируют наличие вегетативной дисфункции.

Пример 3. Пациентка С., 13 лет. Жалобы на повышение потливости дистальных отделов конечностей, повышение температуры до 37,3°С, головные боли (по типу напряжения), слабость, вялость плохая переносимость холода, жары, духоты, повышенная тревожность, обмороки, снижение концентрации, внимания, памяти. При осмотре выявлена локальная потливость кистей и стоп, астеничность. Пациентка негативно отреагировала на тестирование по опроснику Вейна, на все пункты давала отрицательные ответы, в итоге суммарный балл оказался равным 10 баллам (отсутствие вегетативной дисфункции). При проведении иммуноферментного анализа слюны был получен сывороточный уровень моноцитарного хемотаксического протеина-1 в количестве 48,9 пг/мл. При повторном тестировании вегетативного статуса через сутки было выявлено повышение баллов по опроснику Вейна (29 баллов) и по схеме Вейна (45 баллов), что подтвердило наличие вегетативной дисфункции.

Таким образом, способ обеспечивает точность диагностики наличия вегетативных нарушений при постковидном синдроме у детей, значительно сокращает диагностические сроки, а также повышает достоверность субъективных симптомов вегетативных проявлений, что позволяет проводить своевременную адекватную терапию.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для диагностики вегетативных нарушений при постковидном синдроме у детей школьного возраста с помощью лабораторных данных. У пациента в слюне методом твердофазного ИФА определяют количественное содержание моноцитарного хемотаксического протеина-1. При его значении от 3,5 до 19,64 пг/мл констатируют отсутствие вегетативных нарушений при постковидном синдроме. При значении моноцитарного хемотаксического протеина-1 19,65 пг/мл и более диагностируют вегетативные нарушения при постковидном синдроме. Способ обеспечивает возможность повышения специфичности и точности, доступности, неинвазивности, объективизации диагностики вегетативных нарушений у детей школьного возраста за счет определения в слюне пациента содержания моноцитарного хемотаксического протеина-1. 3 пр.

Способ диагностики вегетативных нарушений при постковидном синдроме у детей школьного возраста с помощью лабораторных данных, отличающийся тем, что у пациента в слюне методом твердофазного ИФА определяют количественное содержание моноцитарного хемотаксического протеина-1, и при его значении от 3,5 до 19,64 пг/мл констатируют отсутствие вегетативных нарушений при постковидном синдроме, при значении моноцитарного хемотаксического протеина-1 19,65 пг/мл и более диагностируют вегетативные нарушения при постковидном синдроме.