КОМПОЗИЦИЯ ДВУХСТОРОННИХ БИБЛИОТЕЧНЫХ МЕТОК И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ПЛАТФОРМЕ СЕКВЕНИРОВАНИЯ MGI Российский патент 2024 года по МПК C12N15/10 C12N15/11 C12Q1/68 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области конструирования библиотеки из ДНК плазмы, более конкретно, относится к композиции двухсторонних библиотечных меток и ее применению в платформе секвенирования MGI.

Предшествующий уровень техники

Для того, чтобы реализовать секвенирование большего количества образцов в процессе секвенирования на высокопроизводительном секвенаторе MGI, каждый образец необходимо пометить отличающимся индексом и отсеквенировать, а затем данные разделяются посредством биоинформатического анализа в зависимости от информации с индексов. Однако в настоящее время в платформе секвенирования MGI в основном используются односторонние библиотечные метки. Поскольку односторонние библиотечные метки (индексы) имеют естественные дефекты, это легко приводит к перекрестным помехам в данных от разных образцов. Из-за загрязнения адаптеров или праймеров при синтезе, ходе эксперимента или секвенирования проблемы перекрестных помех неизбежны. Следовательно, необходимо решить проблему низкочастотных взаимных перекрестных помех между разными образцами. Наилучший способ - использовать двухсторонние библиотечные метки, которые могут эффективно устранить проблемы взаимных перекрестных помех между разными образцами.

Однако по сравнению с односторонними библиотечными метками применение двухсторонних библиотечных меток, независимо от того, может ли секвенатор точно считывать библиотечные двухсторонние метки или нет, серьезно повлияет на эффективное разделение данных секвенирования посредством биоинформатического анализа. Если возникнет проблема со считыванием последовательностей двухсторонних библиотечных меток, скорость разделения данных секвенирования будет снижена, что приведет к увеличению стоимости секвенирования.

Следовательно, проблемой, требующей решения, является каким образом применить двухсторонние метки для маркировки объединенных библиотек, чтобы не только уменьшить проблемы перекрестных помех образцов, но и улучшить скорость разделения данных секвенирования.

Сущность

Основная цель изобретения заключается в том, чтобы обеспечить композицию двухсторонних библиотечных меток и ее применение в платформе секвенирования MGI, чтобы решить проблему с перекрестными помехами образцов при применении односторонних библиотечных меток в платформе секвенирования MGI.

Для достижения этой цели в соответствии с аспектом изобретения предлагается композиция двухсторонних библиотечных меток, где данная композиция двухсторонних библиотечных меток включает множество 5'-концевых библиотечных меток и множество 3'-концевых библиотечных меток, длины 5'-концевых библиотечных меток одинаковы, длины 3'-концевых библиотечных меток одинаковы, и частоты каждого основания в одном и том же положении также одинаковы.

Кроме того, длины 5'-концевых библиотечных меток одинаковы с длинами 3'-концевых библиотечных меток, предпочтительно любые фиксированные длины составляют от 6 до 10 п.о.; желательно, чтобы в составе двухсторонних библиотечных меток было не менее 3 различий в основаниях между любыми двумя библиотечными метками, количество непрерывных одинаковых оснований в любой библиотечной метке не превышало 3, а содержание GC во всех библиотечных метках было равно 40-60%. Предпочтительно, композиция двухсторонних библиотечных меток содержит комбинацию из сбалансированных по 4 двухсторонних библиотечных меток или комбинацию из сбалансированных по 8 двухсторонних библиотечных меток, где комбинация из сбалансированных по 4 двухсторонних библиотечных меток содержит 4n 5'-концевых библиотечных меток и 4n 3'-концевых библиотечных меток, а комбинация сбалансированных по 8 двухсторонних библиотечных меток включает 8n 5'-концевых библиотечных меток и 8n 3'-концевых библиотечных меток, где n представляет собой целое число, большее или равное 1.

Кроме того, в комбинации из сбалансированных по 4 двухсторонних библиотечных меток, 5'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 96 групп, показанных в таблице 1, а 3'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких групп из 96 групп, показанных в таблице 1, которые отличаются от 5'-концевых библиотечных меток.

Кроме того, в комбинации из сбалансированных по 8 двухсторонних библиотечных меток, 5'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 48 групп, показанных в таблице 2, а 3'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких групп из 48 групп, показанных в Таблице 2, которые отличаются от 5'-концевых библиотечных меток.

Согласно второму аспекту изобретения, в изобретении предлагается композиция праймеров для амплификации с двусторонними библиотечными метками для платформы секвенирования MGI, и композиция праймеров для амплификации включает множество пар праймеров для амплификации с двусторонними библиотечными метками, каждая пара праймеров для амплификации содержит 5’ концевую библиотечную метку и 3’ концевую библиотечную метку, и длины множества 5'-концевых библиотечных меток в парах праймеров для амплификации одинаковы, и длины множества 3'-концевых библиотечных меток в парах праймеров для амплификации одинаковы, и частоты каждого основания в одном и том же положении также одинаковы.

Кроме того, длины множества 5'-конца библиотечных меток в парах праймеров для амплификации одинаковы с длинами множества 3'-концевых библиотечных меток в парах праймеров для амплификации; предпочтительно, чтобы длины множества 5'-концевых библиотечных меток и длины множества 3'-концевых библиотечных меток были любой фиксированной длины между 6~10 п.о.; желательно, чтобы в составе было не менее 3 отличий оснований между любыми двумя библиотечными метками, а количество непрерывных одинаковых оснований в любой библиотечной метке не превышало 3; желательно, чтобы содержание GC во всех библиотечных метках составляло 40-60%; предпочтительно композиция содержит комбинацию 4n пар праймеров для амплификации сбалансированных по 4 или комбинацию 8n пар праймеров для амплификации сбалансированных по 8, где n представляет собой целое число, большее или равное 1.

Кроме того, в комбинации 4n пар праймеров для амплификации сбалансированных по 4 5'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 96 групп, показанных в таблице 1, а 3'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 96 групп, показанных в таблице 1, которые отличаются от 5'-концевых библиотечных меток; предпочтительно, в комбинации 8n пар праймеров для амплификации сбалансированных по 8, 5'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 48 групп, показанных в таблице 2, а 3'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 48 групп, показанных в таблице 2, которые отличаются от 5'-концевых библиотечных меток.

Кроме того, каждая пара праймеров для амплификации дополнительно содержит 5'-концевую универсальную последовательность для амплификации и 3'-концевую универсальную последовательность для амплификации, причем 5'-концевая универсальная последовательность для амплификации содержит универсальную вышележащую последовательность 5'-концевой библиотечной метки и универсальную нижележащую последовательность 5'-концевой библиотечной метки, а 3'-концевая универсальная последовательность для амплификации содержит универсальную вышележащую последовательность 3'-концевой библиотечной метки и универсальную нижележащую последовательность 3'-концевой библиотечной метки; предпочтительно, универсальная вышележащая последовательность 5'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 793, а универсальная нижележащая последовательность 5'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 794; универсальная вышележащая последовательность 3'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 795, а универсальная нижележащая последовательность 3'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 796; или

универсальная вышележащая последовательность 5'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 793, а универсальная нижележащая последовательность 5'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 797; универсальная вышележащая последовательность 3'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 795, а универсальная нижележащая последовательность 3'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 798.

В соответствии с третьим аспектом изобретения в изобретении также предлагается набор для создания библиотеки для секвенирования, который включает любую из указанных выше композиций праймеров для амплификации.

Кроме того, набор дополнительно содержит «пузырьковые» адаптеры, при этом «пузырьковые» адаптеры содержат первую последовательность адаптера и вторую последовательность адаптера, первая последовательность адаптера представляет собой SEQ ID NO: 769, а вторая последовательность адаптера представляет собой SEQ ID NO: 770, или первая последовательность адаптера представляет собой SEQ ID NO: 773, а вторая последовательность адаптера представляет собой SEQ ID NO: 774.

В соответствии с четвертым аспектом изобретения в изобретении предлагается способ конструирования библиотеки для секвенирования на основе платформы секвенирования MGI, включающий применение любого из указанных наборов для конструирования.

В соответствии с пятым аспектом изобретения в изобретении предлагается библиотека для секвенирования, включающая указанную выше комбинацию двухсторонних библиотечных меток или любую из указанных выше комбинаций праймеров для амплификации.

Путем введения двухсторонних библиотечных меток и оптимизации комбинации двухсторонних библиотечных меток, при применении этих двухсторонних библиотечных меток для разделения данных секвенирования можно решить проблемы перекрестных помех, вызванные синтезом, экспериментальным процессом и машинным секвенированием, и результаты будут точнее. Кроме того, контролируя одинаковые длины 5'-концевых библиотечных меток и длины 3'-концевых библиотечных меток, и ограничивая частоты каждого основания в одном и том же положении, основания двухсторонних меток в композиции имеют одинаковую частоту, поэтому при синтезе адаптеров или праймеров для амплификации двухсторонних меток композиции можно получить несколько библиотек с хорошо сбалансированными по основаниям метками с двух концов. Когда эти несколько библиотек объединены и секвенированы машинным образом, последовательности двусторонних меток могут быть точно прочитаны, а данные секвенирования могут быть эффективно разделены.

Краткое описание чертежей

Сопроводительные чертежи, которые составляют часть этой заявки, предназначены для дальнейшего понимания настоящего изобретения. Иллюстративные воплощения настоящего изобретения и их описание предназначены для объяснения настоящего изобретения, а не для его ограничения. На чертежах:

На Фигуре 1A, Фигуре 1B и Фигуре 1C показаны преимущества платформы секвенирования MGI с использованием двухсторонних меток по сравнению с односторонними метками для устранения проблем с перекрестными помехами;

На фигурах 2А и 2В показаны две формы адаптера для MGI с односторонней меткой;

На фигурах 3А и 3В показаны две формы адаптера для MGI с двухсторонними метками;

На Фигуре 4 показан процесс построения библиотеки с использованием двух двухсторонних меток на основе платформы MGI;

На Фигуре 5 показано, что решения, в которых используются двухсторонние метки по настоящему изобретению, совместимы с решениями, в которых используются односторонние метки;

На Фигуре 6 показан адаптер, в котором праймеры для амплификации двухсторонних меток и праймеры для амплификации односторонних меток совместимы;

Фигуры 7А и 7В показывают сбалансированные по основаниям последовательности, относящиеся к типу сбалансированных по 4 и сбалансированных по 8;

На Фигуре 8 показано сравнение баланса оснований между метками, сбалансированными по 4 и сбалансированными по 8;

На Фигуре 9 показано сравнение выходных данных двух способов построения библиотек;

На фигуре 10 показана разница в разделении данных секвенирования между метками, сбалансированными по 4 и сбалансированными по 8, в процессах секвенирования 12 объединенных образцов.

Подробное описание воплощений

Следует отметить, что воплощения в настоящей заявке и признаки в воплощениях могут быть объединены друг с другом без конфликта. Настоящее изобретение будет подробно описано ниже со ссылкой на воплощения.

Толкование конкретных терминов:

Адаптеры двусторонних меток: для высокопроизводительного секвенирования требуется универсальный адаптер секвенирования для присоединения к концам каждого фрагмента. Каждая некомплементарная область адаптера имеет вариабельную последовательность, которая представляет собой последовательность метки, которая используется для разделения данных во время секвенирования.

Баланс оснований в последовательностях меток: последовательность ДНК состоит из четырех оснований, а именно A, T, G и C. Для эффективного считывания во время секвенирования набор последовательностей меток объединяется, с тем чтобы гарантировать, что соотношение оснований в каждом положении в последовательности меток одинаково.

Как упоминалось в «предшествующем уровне техники», при использовании односторонних меток для создания библиотек для высокопроизводительного секвенирования MGI возникают некоторые проблемы с перекрестными помехами между образцами (Это явление также существует на платформе секвенирования Illumina. Хотя платформа MGI сильно отличается от платформы Illumina, процесс синтеза последовательности адаптера, создания библиотеки и гибридизации неизбежно вызывает проблемы с перекрестными помехами между образцами). Как показано на Фигуре 1А, если в экспериментальном процессе возникает 1 % взаимных перекрестных помех, будь то синтез адаптера, создание библиотеки, гибридизационный захват или машинное секвенирование, будут те же проблемы с перекрестными помехами. Лучший способ решить проблемы с перекрестными помехами между образцами - это ввести двухсторонние метки в процессе конструирования библиотеки. Как показано на Фигуре 1B, проблемы с перекрестными помехами можно решить только путем введения двухсторонних меток при максимально возможном контроле экспериментальных процессов. Как показано на Фигуре 1C, двухсторонние метки уменьшат проблемы перекрестных помех в 100 раз (от 1% до 0,01%) относительно односторонних меток.

Чтобы решить проблемы с перекрестными помехами в образцах для платформы секвенирования MGI, в этом изобретении также делается попытка заменить односторонние метки двусторонними метками. Идея и процесс исследований и разработок заключался в следующем.

Пузырьковые адапторы используются при конструировании библиотеки MGI. В отличие от адаптеров Y-типа у Illumina, односторонние метки MGI можно включить в адаптеры (как показано на Фигуре 2B) или использовать отдельно (Фигура 2A); в то время как последовательности двухсторонней метки не могут быть объединены с последовательностью переднего конца (как показано на Фигуре 3B, поскольку область переднего конца составляет всего 7 п.о. если последовательность метки включена на переднем конце, структура «пузырька» будет длиннее, и стабильность этой структуры крайне плоха, а эффективность очень низка. И эффективность при осуществлении будет ниже чем у усеченной структуры, где праймеры последовательности метки и универсальный адаптер разделены). И универсальный адаптер и праймеры для амплификации двухсторонних меток можно использовать отдельно (как показано на Фигуре 3A). Двусторонние метки были соединены в соответствии со структурой, показанной на Фигуре 3А, и авторы изобретения обнаружили, что большая «везикула» в середине «пузырькового» адаптера будет влиять на стабильность вторичной структуры стадии отжига и влиять на лигирование адаптеров (средняя эффективность составляет 20%-40%). «Пузырьковый» адаптер MGI отличается от Y-образного адаптера Illumina, в котором двухсторонние метки могут быть объединены вместе.

Дальнейшие исследования показали, что, когда неспаренные основания в средней области «пузырьковых» адаптеров MGI могут составлять 30 ± 5 п.о., а спаренные основания - 20 ± 2 п.о., легче сформировать стабильное лигирование при отжиге, повышая эффективность лигирования, как показано в Решении 1 на Фигуре 4. Когда неспаренные основания в средней области также могут иметь размер 45 ± 5 п.о., а спаренные основания - 25 ± 2 п.о., легче сформировать стабильное лигирование отжига, повышая эффективность лигирования, как показано в Решении 2 на Фигуре 4. Кроме того, авторы изобретения обнаружили, что по сравнению с Решением 2 Решение 1 имеет следующие преимущества: во-первых, когда «пузырьковая» область составляет 30±5 п.о., адаптеры стабильно отжигаются, комплементарная область является короткой и стабильность полезна для лигирования. Во-вторых, при совместимости с ампликонами с односторонними метками, ампликоны можно переключать между односторонними и двухсторонними метками, как показано на Фигуре 5. Оно также совместимо с адаптерами с односторонними метками, как показано на Фигуре 6.

Изобретатели также обнаружили, что, хотя Решение 2 имеет много преимуществ по сравнению с Решением 1, оба решения могут работать, если нужно получить библиотеку секвенирования на платформе секвенирования MGI с двусторонними метками. Если созданная библиотека с двусторонними метками используется для машинного секвенирования, а данные секвенирования разделяются после секвенирования, авторы обнаружили, что требования к балансу оснований в адаптерах с двусторонними метками для MGI во время секвенирования являются более строгими, чем у адаптеров с односторонними метками, и данные секвенирования могут быть разделены только в том случае, если последовательности меток на двух концах являются правильными, как показано на Фигуре 1B. То есть, хотя двухсторонние метки решают проблемы перекрестных помех между образцами, требования к балансу оснований для машинного секвенирования чрезвычайно строгие, а плохой баланс оснований серьезно повлияет на точность считывания данных секвенирования, что, в свою очередь, повлияет на эффективное разделение данных секвенирования.

Для более точного разделения данных секвенирования, взяв в качестве примера количество оснований в двухсторонних метках, равное 10, авторы изобретения оптимизировали баланс оснований в двухсторонних метках в соответствии со следующими правилами: 1) между каждой последовательностью меток есть различия в 3 основаниях; 2) содержание GC каждой последовательности составляет 0,4-0,6; 3) количество непрерывных одинаковых оснований не может превышать 3. В соответствии с этими правилами была оценена вторичная структура каждой последовательности выбранной метки, чтобы увидеть, образуется ли вторичная структура, например, шпилечные складки, между последовательностью метки и универсальным праймером на 3'-конце праймера для амплификации, что уменьшит эффективность амплификации, есть ли влияние на баланс каждого основания метки в объединенных библиотеках образцов, есть ли дополнительное влияние на точность считывания последовательности метки и, следовательно, есть ли снижение точности разделения данных секвенирования.

В соответствии с приведенными выше оптимизированными правилами скрининга настоящее изобретение оптимизирует 384 типа последовательностей меток, сбалансированных по 4, и 384 типа последовательностей меток, сбалансированных по 8. Метки, сбалансированные по 4, относятся к группе последовательностей меток, показанных на Фигуре 7А (первые 1-4 метки показаны в таблице 4). Группа из 4 последовательностей меток относится к основаниям A, T, G или C, встречающимся один раз в каждом положении с 1-й по 10-е положение каждой метки. Аналогично, метки, сбалансированные по 8, относятся к группе из 8 последовательностей меток, как показано на Фигуре 7В (первые 1-8 меток показаны в таблице 5). Группа из 8 последовательностей меток относится к основанию A, T, G или C, встречающемуся дважды в каждом положении с 1-й по 10-е положение каждой метки.

Согласно многочисленным тестам изобретения, группа из меток, сбалансированных по 4, является наименьшей единицей баланса и лучшей комбинацией. Комбинации меток, сбалансированных по 4, могут быть объединены в 4, 8, 12 и 16 комбинаций, которые являются 4-кратно сбалансированными, а комбинации меток, сбалансированных по 8, должны быть объединены в 8 и 16 комбинаций, которые являются 8-кратно сбалансированными. Как показано на Фигуре 8 (последовательность метки в комбинации меток, сбалансированных по 4, слева соответствует комбинации меток библиотеки, содержащейся в первых 4 наборах из числа наборов праймеров для амплификации в таблице 1, и библиотечная метка комбинации меток, сбалансированных по 8, справа соответствует комбинации библиотечных меток, содержащейся в первых двух наборах наборов праймеров для амплификации в таблице 2), когда библиотеки из меток, сбалансированных по 4, объединены и секвенированы на устройстве, основания сбалансированы, и пропорция каждого основания составляет 25%. А при использовании комбинаций меток, сбалансированных по 8, доля каждого основания составляет 0-50%. При объединении 8 кратных, например, 8 или 16 образцов, пропорция каждого основания после комбинации библиотечных меток может быть сбалансирована, и каждая составляет 25%. Когда на устройстве объединены и секвенированы 12 образцов, доля каждого основания в комбинации из меток, сбалансированных по 8, составляет от 16,7% до 33,3%.

Кроме того, баланс нецелой кратности 4 меток также лучше, чем комбинация меток, сбалансированных по 8, и применение меток, сбалансированных по 4, более удобно. По мере того, как производительность секвенирования секвенатора MGI становится все выше и выше, оптимизированные 384 типа комбинаций меток, сбалансированных по 4, в настоящей заявке обеспечивают эффективное секвенирование четырех закрытых библиотек с метками, сбалансированными по 4 (см. Таблицу 1 для комбинаций меток, сбалансированных по 4). Оптимизированные комбинации 384 меток, сбалансированных по 8, также обеспечивают эффективное секвенирование восьми закрытых библиотек с метками, сбалансированными по 8 (см. Таблицу 2 для комбинации меток, сбалансированных по 8).

Предпочтительно, когда две сбалансированные метки используются для формирования двухсторонних праймеров для амплификации, последовательность праймера 1 представляет собой прямое расположение 384 номеров, а праймер 2 представляет собой обратное расположение 384 номеров, что является рекомендуемым расположением настоящего изобретения. В практических приложениях также можно комбинировать и размещать в соответствии с фактическими потребностями. Например, как показано в таблице 1, когда праймер 1 выбран в любой из 96 групп, праймер 2 может быть выбран в любой из оставшихся 95 групп. Конечно, если количество объединяемых образцов больше 4, например 8 или 12, количество групп меток праймера 1 просто должно отличаться от числа групп меток праймера 2. Например, праймер 1 выбирают из первых 3 групп, а праймер 2 можно выбирать из любых 3 групп из оставшихся 93 групп. Пока на устройстве объединены и секвенированы 4 кратные образцы, двусторонние библиотечные метки можно выбирать в соответствии с этим правилом.

Когда количество объединенных образцов не является числом кратным 4, 4 образца с большим объемом данных секвенирования должны быть расположены в одном наборе комбинаций сбалансированных меток, а образцы с небольшим объемом данных секвенирования должны быть расположены в другом наборе других комбинаций сбалансированных меток. В этой ситуации комбинации из меток, сбалансированных по 4, имеют очевидные преимущества перед комбинациями из меток, сбалансированных по 8. Комбинации меток, сбалансированных по 4, имеют преимущество перед комбинациями меток, сбалансированных по 8, при целочисленной кратности 4 (4, 12, 20), а комбинация нецелочисленной кратности 4 также лучше, чем комбинация меток, сбалансированных по 8, а баланс лучше, чем у комбинации меток, сбалансированных по 8, когда число объединяемых образцов равно 4n+1 и 4n+2. Таким образом, комбинация из меток, сбалансированных по 4, имеет следующие преимущества: 1) Комбинаций из меток, сбалансированных по 4, в два раза больше, чем из меток, сбалансированных по 8; 2) для трех групп несбалансированных расположений баланс в комбинациях групп 4n+1 и 4n+2 также лучше, чем в комбинации меток, сбалансированных по 8; 3) Когда есть разница в количестве данных секвенирования между образцами, комбинации меток, сбалансированных по 4, лучше располагать близко к балансу, и образцы для большого количества данных секвенирования имеют приоритет в сбалансированной комбинации, и это может быть несбалансированным для образцов для небольшого количества данных секвенирования.

Таблица 1. Группа, сбалансированная по 4

Код SEQ Последова-тельность Код
группы SEQ
ID
NO: Последова-тельность Код
группы SEQ
ID
NO: Последова-тельность груп-пы ID NO: 1 1 tcacattgct 33 129 gcgaccttga 65 257 aatgactggt 2 aatggcgctc 130 atcgtgagtt 258 gtgccacaac 3 gtctcaatga 131 cgtcgtcaac 259 cgaatgatcg 4 cggatgcaag 132 taataagccg 260 tcctgtgcta 2 5 tcgcttaagc 34 133 ccacttagta 66 261 tgtgaattgg 6 cgaggcttag 134 agtagctagt 262 aaccggcctt 7 gtctaaggct 135 gacgaactcg 263 ctatccgacc 8 aatacgccta 136 ttgtcggcac 264 gcgattagaa 3 9 aagcctattg 35 137 agcatatcgt 67 265 cgtaaccgca 10 cgctactgca 138 gtagacggag 266 gactgataac 11 tcaagagcat 139 cattctcatc 267 atgcttactg 12 gttgtgcagc 140 tcgcggatca 268 tcagcggtgt 4 13 agacaggaat 36 141 ctggaggcaa 68 269 acataacacc 14 ccttgccgta 142 gatacttgtg 270 cacctgaggt 15 gtcattacgg 143 tgcctccact 271 gtgactgtaa 16 taggcattcc 144 acatgaatgc 272 tgtggctctg 5 17 catatcatcg 37 145 tcagcagagg 69 273 ctcagactct 18 gcacaacaat 146 ctgtgcatta 274 acacatgcta 19 ttgtcgtggc 147 agtaatcgac 275 tgtgcctaag 20 agcggtgcta 148 gacctgtcct 276 gagttgaggc 6 21 agccagtagg 38 149 aagcggtgaa 70 277 agccgttctc 22 gtaagtgtac 150 ctatcacact 278 ttgttggtct 23 tagtcacgtt 151 gccgttatgc 279 caagacaaga 24 cctgtcacca 152 tgtaacgctg 280 gctacacgag 7 25 atcgtggatg 39 153 gcgtgtaact 71 281 gtgacgcgat 26 tggagatcga 154 catgtaccac 282 aacctctctg 27 cctcacagat 155 tgccactgta 283 tcttgagaga 28 gaatctctcc 156 ataacggtgg 284 cgagatatcc 8 29 gcagactgac 40 157 cttgaaggtt 72 285 gaaggattca 30 ctcattaacg 158 gcctctatgg 286 tcgcctggtt 31 tggtgagctt 159 tagatccacc 287 agtaacacgg 32 aatccgctga 160 agacggtcaa 288 ctcttgcaac 9 33 tcgcatcaac 41 161 gctggattaa 73 289 agagacttac 34 agaacagtga 162 taacaccggc 290 cttatggccg 35 catgtctcct 163 atgactgccg 291 gcctgacgtt 36 gtctggagtg 164 cgcttgaatt 292 tagcctaaga 10 37 gaggtctgtg 42 165 ctatagcgag 74 293 aagcatatcc 38 ctatagacgt 166 aacgttgttc 294 ctaatccgtt 39 tgcagtgacc 167 gctaccacgt 295 gcttggtcga 40 actccactaa 168 tggcgataca 296 tgcgcagaag 11 41 gcgaagtagg 43 169 tccgccaatc 75 297 gatcctgata 42 tgcctaacct 170 caactagtgt 298 tcaagcacgg 43 aatggtctac 171 agtaagccaa 299 ctgtagcgct 44 ctatccggta 172 gtgtgttgcg 300 agcgtattac 12 45 tacgcttcag 44 173 gatcagatgg 76 301 tgtctgattg 46 cggagcatct 174 ctcgtaggtc 302 accagacggt 47 gtactagatc 175 tcgtgtccat 303 gtgtctgacc 48 acttagcgga 176 agaacctaca 304 caagactcaa 13 49 atcactccat 45 177 ccgcattcct 77 305 tcctccacag 50 gatcgcagtg 178 gttggacata 306 agacgaggtc 51 ccggaattcc 179 tgatcgaggc 307 ctggattact 52 tgattggaga 180 aacatcgtag 308 gatatgctga 14 53 cacaaggtcg 46 181 gttgcgcgaa 78 309 ctggtcaagg 54 tctcgcagga 182 acaagtaagc 310 gctccattcc 55 gtggtatcat 183 cgcttctcct 311 tgatgtcgaa 56 agatctcatc 184 tagcaagttg 312 aacaaggctt 15 57 gatggagatt 47 185 aggcctcttc 79 313 catctagaca 58 ctcattctgc 186 gtaatgtcgt 314 gcggatacag 59 tggcagacaa 187 cactgcagag 315 ttctgcttgt 60 acatcctgcg 188 tctgaagaca 316 agaacgcgtc 16 61 acgtcgcaga 48 189 gctaaggata 80 317 aagacgaact 62 tgtataggct 190 cacggttggt 318 ccagtactgc 63 caacacattg 191 tgaccaccag 319 gttcgctgta 64 gtcggttcac 192 atgttcatcc 320 tgctatgcag 17 65 agccataagc 49 193 agctactctg 81 321 tacacgcgca 66 gtattccgag 194 caacgtgagt 322 aggtacgcag 67 cataggttca 195 tcgatgctaa 323 gttcgattgt 68 tcggcagctt 196 gttgcaagcc 324 ccagttaatc 18 69 gttcggtcct 50 197 cgacatgtgt 82 325 taagatcgga 70 tggattgtag 198 gatgcgcata 326 agctcggctt 71 ccagaacgtc 199 tcgtgatcag 327 gttcgataag 72 aactccaaga 200 atcatcagcc 328 ccgatcatcc 19 73 cgtacactgg 51 201 tcaatggcgg 83 329 actggactca 74 gcacacagca 202 cagtaactct 330 caatagaggc 75 atggtgtatc 203 gttgcctgac 331 gtcacttaag 76 tactgtgcat 204 agccgtaata 332 tggctcgctt 20 77 cggcaatcag 52 205 ctaataggct 84 333 cgcactatgg 78 gtagttcgga 206 tctcctccac 334 gaggtacatt 79 tacaggaact 207 agctgcatga 335 tcttagtgac 80 acttccgttc 208 gaggagtatg 336 atacgcgcca 21 81 tgctccacga 53 209 accacgtagc 85 337 tgaggcatat 82 aatcaaggtc 210 gaatgcagta 338 attctatggc 83 gtaggtcaat 211 ttggtagcct 339 ccgtagcatg 84 ccgatgttcg 212 cgtcatctag 340 gacactgcca 22 85 gacgtgtgca 54 213 tcaatgaggt 86 341 acggcattaa 86 tcgccacttc 214 agcgaagctg 342 gtaagcgagg 87 ataagcacgt 215 ctgtcttaac 343 cattatcgct 88 cgttatgaag 216 gatcgcctca 344 tgcctgactc 23 89 aatagagcca 55 217 gttccgaatg 87 345 gactcatcca 90 gtacctcgac 218 tacgtacgca 346 acgaacatac 91 ccggtgattg 219 cggagttcac 347 ttacgtcggt 92 tgctactagt 220 acatacgtgt 348 cgtgtggatg 24 93 gatccggact 56 221 ctgaagagat 88 349 cctaacattc 94 ttaggcacaa 222 gaagcctcca 350 atcgcacgca 95 agcattcttg 223 tgtcttcatc 351 gaacgttcgg 96 ccgtaatggc 224 acctgagtgg 352 tggttggaat 25 97 gtatagctgc 57 225 gtacgtcctt 89 353 aacaagtgag 98 cagacatctg 226 aactaggtca 354 gttgttgctc 99 agcggtggat 227 tgtgtcaggc 355 tgacgcaact 100 tctctcaaca 228 ccgacataag 356 ccgtcactga 26 101 catccactgt 58 229 tccacacgtc 90 357 tgttattccg 102 gccgtgaaca 230 cggcacatga 358 ctactcaaga 103 ataagcggag 231 gtatgttcct 359 acgagacgtc 104 tggtattctc 232 aatgtggaag 360 gacgcggtat 27 105 acagttctca 59 233 agacagacgt 91 361 gatgacgtta 106 cattgagagc 234 ttctgtggag 362 agccgatacc 107 gtcacgactg 235 caggtcttcc 363 ttatctcgag 108 tggcactgat 236 gctacacata 364 ccgatgacgt 28 109 aatgattcgc 60 237 ctagcgacac 92 365 gtgagttcgc 110 cgcttaagta 238 aggcattact 366 acacaacatg 111 ttgagcgacg 239 gacatccgga 367 cgtgcgatca 112 gcaccgctat 240 tcttgagttg 368 tacttcggat 29 113 acgaacggat 61 241 acaacagaag 93 369 ctatcggtgt 114 gaacggacta 242 cgcttgtgga 370 gacattcaag 115 tgctctctgg 243 gttggtctcc 371 agtgacacca 116 cttgtatacc 244 tagcacactt 372 tcgcgatgtc 30 117 caccagcaca 62 245 gcttgcaata 94 373 cgagtcagtc 118 ttgtctgtag 246 tggacgtgct 374 ttgccagtga 119 agtatcactc 247 aacgaaccgg 375 aacaagcact 120 gcaggatggt 248 ctacttgtac 376 gcttgttcag 31 121 ttatccacgt 63 249 cggtgagtga 95 377 tagtgatgtg 122 acggttcgtc 250 gcaatgcatt 378 cgtgtgacat 123 gaccagtaag 251 ttccattcac 379 atccaccacc 124 cgtagagtca 252 aatgccagcg 380 gcaactgtga 32 125 acgttaaggt 64 253 tactcttctc 96 381 atccaccggt 126 ctcagcttag 254 aggaaggtaa 382 ccgtcattac 127 tgtgctccta 255 gttggacggt 383 tgagtggcta 128 gaacaggacc 256 ccactcaacg 384 gatagtaacg

Таблица 2. 384 типа последовательностей меток, сбалансированных по 8

Код
груп-пы SEQ
ID
NO: Последова-тельность Код
группы SEQ
ID
NO: Последова-тельность Код
группы SEQ
ID NO: Последова-тельность 1 385 cgtcgatgac 17 513 cgtcactatt 33 641 cagaacgtgg 386 atataaggcg 514 gcgatgcaga 642 gttcttctgt 387 gatcgtgctc 515 cgtgtcctag 643 cggtgaagtc 388 cagtcttcgg 516 gaagaatgga 644 gtaagatgag 389 agaacgatct 517 atgtgtggct 645 tgccatcaca 390 ttggtgcatt 518 tcctgtacac 646 tcctcggata 391 gccgtcataa 519 ttaccgattc 647 acagtgtcct 392 tccaaccaga 520 aacacagccg 648 aatgccacac 2 393 gatagcaaga 18 521 tcataccaag 34 649 gaccactcga 394 accgtgcttc 522 gaagcttact 650 atggacaaca 395 gcagatgtaa 523 gtcagtaggt 651 aacctacggt 396 tgttggagcg 524 ctgtgcgtag 652 tctaggattg 397 ttgtatccac 525 agtgaatgga 653 cggattctcg 398 cgcacagatg 526 tccacggttc 654 cgatcttctc 399 caactctcgt 527 aatctgcctc 655 tcatcggaat 400 atgccatgct 528 cggctaacca 656 gttggaggac 3 401 aggcagctta 19 529 gacatacagt 35 657 acacatgcta 402 tagcctagcg 530 agaggcctca 658 ccttaggacg 403 atcacgtgcg 531 cctgatattg 659 ctaaccaatc 404 cgttatgcgc 532 gtgctgaact 660 aacgcacgag 405 caaggatcga 533 cgatggtcag 661 gtcggttcac 406 gttgtcgtat 534 aatacagcgc 662 tggctcatgt 407 gcaatcaatc 535 tcgtcctgac 663 tggtggttgt 408 tcctgacaat 536 ttccatggta 664 gatatacgca 4 409 aggtgcctta 20 537 cgttcgactg 36 665 cacgaacact 410 aagaaccaag 538 cgctacactc 666 tgcgtgagca 411 catacatgac 539 atagatcggt 667 gtactgacga 412 tgcctggtga 540 accagattca 668 ccgtgagttc 413 tctcggagtt 541 gatacggagg 669 acttacttgg 414 gtcgtagact 542 ttaggaggaa 670 agaagctcat 415 gcatataccg 543 gcgcttctac 671 gttactggac 416 ctagcttcgc 544 tagctctact 672 tagcctcatg 5 417 gacgtatcaa 21 545 ccacctgctt 37 673 tgacaatgac 418 cctgctagga 546 cgtaggtctg 674 aatcacctct 419 caacttggcg 547 tcttagtgac 675 aacagacctg 420 atgcgacctc 548 atcctagaac 676 gctagtgtgt 421 gttaaggacg 549 aggtgtaggt 677 gcggttgata 422 tccaagttgt 550 gtaaccatca 678 ctagcgacac 423 aggtccattc 551 taggtccaga 679 cggttgaacg 424 tgatgccaat 552 gacgaactcg 680 ttctcctgga 6 425 cctaagagtt 22 553 ccaacagatt 38 681 agttagctgg 426 gatactagct 554 cctctatctc 682 agtcctgtaa 427 aaggcatctc 555 gagtgtctca 683 taaggccggt 428 tggcatctgg 556 ttggcttaag 684 gccttatcct 429 acactggagc 557 agtcgcatgg 685 cagcattcaa 430 gtatgccaca 558 atcttgcggc 686 tcgagcaatc 431 ctcttagtag 559 tgcaaggcct 687 gtaacgaacg 432 tgcggctcaa 560 gaagacagaa 688 ctcgtaggtc 7 433 taaggctaga 23 561 acagactcat 39 689 ctggattact 434 gaggagataa 562 gagttgaggc 690 gtatgttcct 435 cgttagcact 563 gttctagacg 691 tgttcgcgac 436 aggctaggat 564 agttcaggcg 692 cacggaattg 437 atctcactgg 565 cagacgatga 693 agcacaatgc 438 tccagttctc 566 tccaacctat 694 acacaccgga 439 gtaaccgctc 567 ttacgttctc 695 tatctcgcta 440 cctcttagcg 568 cgcggtcata 696 gcgatggaag 8 441 actaaggctg 24 569 aatccttccg 40 697 taactcgtgg 442 gaggagtatg 570 gaggattgaa 698 acaaccagta 443 tagtcaacgc 571 atcggagtgc 699 agcgtacgtc 444 ccatcaagga 572 gcgttaagtg 700 tcgactctgt 445 agcctctgct 573 cctcggcaat 701 ctgtatgcca 446 ttcgttcaca 574 ttaacggctt 702 gacgagacct 447 gtaagtgtac 575 tgattccaca 703 cgttggtaac 448 cgtcgcctat 576 cgcaacatgc 704 gttcgataag 9 449 tgtgaaggag 25 577 tcaatgaggt 41 705 caagcgcgat 450 agaccggttc 578 gtccaagctg 706 gtgtgagtgc 451 ctcgcctaac 579 gcgcactaag 707 gcagcataat 452 ccgctgtcta 580 cggtgagtga 708 ttcttgtgca 453 gacataacct 581 tgaatccgac 709 tggcacattg 454 gagaatagca 582 aatgctcact 710 aacaatacgc 455 ttatgtcagg 583 atcggttcca 711 cgtattgctg 456 acttgcctgt 584 cattcgattc 712 actcgccaca 10 457 tgctggatct 26 585 ttatgcctac 42 713 gctgcttggt 458 agtagtgttg 586 atcctccgac 714 ttgtggatac 459 ctccaatcct 587 cgcagatata 715 accaaggcga 460 cctatgtgta 588 acaacatgtg 716 agaagaccta 461 taatatccgc 589 tcggatgagg 717 tagctctgtc 462 gtgccacaac 590 cgtgcgatca 718 cgacttctat 463 gcagtcagga 591 gatcttacgt 719 ctctccaacg 464 aaggccgaag 592 gagtaggcct 720 gatgaagacg 11 465 cgtgttagag 27 593 aagagagaag 43 721 tccagctcat 466 acaggacgat 594 gttctcacgg 722 accaagactc 467 cggataacgg 595 aagcggtgaa 723 caactgcgca 468 gttagtgcct 596 cgctcagtta 724 agtggatatc 469 aagcacgaca 597 ctagacactc 725 gtactaagag 470 gtctccttgc 598 gcttattgct 726 gtgtacgtcg 471 tcaccgtata 599 tgcgttctgc 727 cggtctctgt 472 tactagcttc 600 tcaacgcact 728 tatgctgaga 12 473 accattcacg 28 601 cttgcttaca 44 729 aataggtagg 474 agtagctagt 602 ctcctcgcaa 730 agcttgcgct 475 ttccgaaggt 603 tctcagcctc 731 tggagccgat 476 gtaccaacca 604 gacggagtac 732 ccgcatacta 477 tatgtgtgtc 605 acgtctatct 733 ttcgatgacg 478 cgatcggtac 606 gaatagagtg 734 gatccaatac 479 gaggatctag 607 aggatacggt 735 gcattctcgc 480 ccgtacgcta 608 tgaagctagg 736 ctagcagtta 13 481 gtcaactcgg 29 609 aacctcgcac 45 737 cgttgacgct 482 tggaagcaca 610 gatccggact 738 agtatatgcg 483 tcgttgtagc 611 gtgtctacag 739 acctccgcta 484 agccgaagtt 612 acggagaatc 740 caacacgaat 485 gatgcaacct 613 tgttacctca 741 ttgagtaagg 486 acttccgttc 614 tcaatacgtg 742 gaagctctta 487 caagttggaa 615 ctaagttggt 743 tccgagatgc 488 ctacgtctag 616 cgcggattga 744 gtgctgtcac 14 489 tgtcgttaag 30 617 acctcacata 46 745 agcttccagc 490 gtctcaatga 618 cggactgtct 746 tgcctatcgc 491 gatcaagcca 619 cgtggcagaa 747 caatctcgcg 492 aactccgatc 620 attcgaatgc 748 cttcctacaa 493 ctaagtcttc 621 taggttcaag 749 acgaggtact 494 tgagagcgct 622 gtccactctc 750 gatgaaggat 495 acgatctcgg 623 gaatagtgct 751 tcgagcgtta 496 ccggtgagat 624 tcaatggcgg 752 gtagagattg 15 497 catctcatga 31 625 aagcatcctg 47 753 acggctagag 498 ctgtgactcg 626 gtggtgttca 754 gctatagctt 499 agaccttgga 627 gtacaacgtt 755 tgcgtcatgg 500 actgtcgacg 628 cctgcagcat 756 ttccaacatc 501 gtgaagacac 629 tctatcgtac 757 cggtgttgga 502 tactgtgcat 630 cactcgtagc 758 gattgcgcct 503 gcagagcgtt 631 tgcagcagca 759 ataacgctca 504 tgcacatatc 632 agatgtaagg 760 caacagtaac 16 505 cctgtgtaac 32 633 gtgtaaccgc 48 761 actggaggag 506 aacgatgcca 634 catcggaaga 762 gccggtaagt 507 tcgagcatag 635 gaggaattac 763 ctcacactta 508 gaattcctgt 636 tgttcgctct 764 agacagtggc 509 agaacgtccg 637 accgtctata 765 ctgatgtcct 510 cgccaaggta 638 tgcctcagag 766 gagttcacaa 511 ttgtgaaggc 639 acaagtgccg 767 tgttctcttc 512 gttcctcatt 640 ctaactggtt 768 taacacgacg

Скорость разделения данных секвенирования в группах из меток сбалансированных по 4, будет выше, потому что секвенатор более точно считывает основания со сбалансированной композицией, а несбалансированные основания вызовут ошибки чтения и уменьшат скорость разделения данных секвенирования. Когда 12 образцов объединены в равных пропорциях, метки, сбалансированные по 4, и метки, сбалансированные по 8, использовались для создания библиотек для секвенирования. Из результатов, показанных на Фигуре 10, для меток, сбалансированных по 4, 12 образцов имеют почти одинаковое разделение данных секвенирования. Для меток, сбалансированных по 8, некоторые образцы из 12 образцов значительно снизили разделение данных.

На основании результатов вышеуказанных исследований авторы изобретения предложили технические решения изобретения.

В типичном воплощении изобретения предлагается композиция двухсторонних библиотечных меток. Композиция двухсторонних библиотечных меток включает множество 5'-концевых библиотечных меток и множество 3'-концевых библиотечных меток. Все длины 5'-концевых библиотечных одинаковы, длины 3'-концевых библиотечных меток одинаковы, и частоты каждого основания в одном и том же положении в композиции двухсторонних библиотечных меток также одинаковы.

В композиции двухсторонних библиотечных меток, предлагаемых изобретением, за счет контроля того, что длины библиотечных меток для 5'-конца одинаковы, длины библиотечных меток для 3'-конца одинаковы, и частоты каждого основания в одном и том же положении одинаковы, можно получить несколько библиотек с хорошо сбалансированными двусторонними метками. Когда несколько библиотек объединены для секвенирования, последовательность двухсторонних меток может быть прочитана более точно, а данные секвенирования могут быть разделены более эффективно.

Для дальнейшего улучшения баланса оснований и точности считывания библиотечных меток в предпочтительном воплощении длина 5'-концевых библиотечных меток совпадает с длиной 3'-концевых библиотечных меток для, предпочтительно равна любой фиксированной длине между 6-10 п.о. Длина библиотечных меток на обоих концах одинакова, так что при разделении образцов одинаковое количество оснований в библиотечных метках на обоих концах участвует в определении источника образца, поэтому вероятность поддержки, обеспечиваемой библиотеками, с обоих концов одинаковы. Это позволяет избежать того, что один конец библиотечной метки будет длиннее и референсная вероятность поддержки будет выше, а другой конец библиотечной метки будет короче и референсная вероятность поддержки будет ниже, что приведет к результату, который больше полагается на метки для одного конца.

Предпочтительно, чтобы в композиции двухсторонних библиотечных меток было не менее 3 отличий оснований между любыми двумя библиотечными метками, а количество непрерывных одинаковых оснований в любой библиотечной метке не превышало 3, и, желательно, чтобы содержимое GC во всех библиотечных метках составляло 40-60%. Когда библиотечные метки соответствуют вышеуказанным принципам оптимизации оснований и используются вместе, баланс оснований лучше, результаты считывания точнее, и скорость разделения данных также выше.

Предпочтительно, композиция двухсторонних библиотечных меток включает композицию из двухсторонних библиотечных меток, сбалансированных по 4, или композицию из двухсторонних библиотечных меток, сбалансированных по 8, комбинация из двухсторонних библиотечных меток, сбалансированных по 4, включает 4n 5'-концевых библиотечных меток и 4n 3'-концевых библиотечных меток. Комбинация из двухсторонних библиотечных меток, сбалансированных по 8, включает 8n 5'-концевых библиотечных меток и 8n 3'-концевых библиотечных меток для, n - целое число, большее или равное 1.

В предпочтительном воплощении в композиции двухсторонних библиотечных меток, сбалансированных по 4, 5'-концевые библиотечные метки выбирают из любой из 96 групп, показанных в таблице 1, а 3'-концевые библиотечные метки выбирают из любой из 96 групп, показанных в Таблице 1, отличающихся от группы 5'-концевых библиотечных меток.

В предпочтительном воплощении в составе сбалансированных по 8 двухсторонних библиотечных меток 5'-концевые библиотечные метки выбирают из любой из 48 групп, показанных в таблице 2, а 3'-концевые библиотечные метки выбирают из любой из 48 групп, показанных в таблице 2, отличающихся от группы 5'-концевых библиотечных меток.

Во втором типичном воплощении изобретения предлагается композиция праймеров для амплификации с двухсторонними библиотечными метками для платформы секвенирования MGI, где композиция праймеров для амплификации включает множество пар праймеров для амплификации с двухсторонними библиотечными метками, при этом каждая пара праймеров для амплификации включает 5'-концевую библиотечную метку и 3'-концевую библиотечную метку, длины 5'-концевых библиотечных меток одинаковы, и длины 3'-концевых библиотечных меток в парах праймеров для амплификации одинаковы, и частоты каждого основания в одном и том же положении также одинаковы.

За счет контроля одинаковых длин 5'-концевых библиотечных меток и одинаковых длин 3'-концевых библиотечных меток множества пар праймеров для амплификации, а также чтобы частоты каждого основания в одном и том же положении также были одинаковыми, когда двухсторонние метки в композиции праймеров для амплификации используются для маркировки нескольких объединенных образцов для секвенирования, считывание оснований меток сбалансировано, результаты более точны, и данные образцов, разделенных по меткам, также более точны, что улучшает скорость разделения данных секвенирования.

На основании одинаковых длин 5'-концевых библиотечных меток и одинаковых длин 3'-концевых библиотечных меток вышеуказанных объединенных образцов, чтобы дополнительно улучшить баланс оснований и точность считывания библиотечных меток, в предпочтительном воплощении, длины 5'-концевых библиотечных меток и длины 3'-концевых библиотечных меток множества пар праймеров для амплификации одинаковы. Длины библиотечных меток для обоих концов каждой пары праймеров для амплификации одинаковы, так что при разделении образцов одинаковое количество оснований в библиотечных метках на обоих концах участвует в определении источника образца, и вероятность поддержки, предоставляемой библиотеками на обоих концах, одинакова. Это позволяет избежать того, что один конец библиотечной метки будет длиннее и референсная вероятность поддержки выше, а другой конец библиотечной метки будет короче, а референсная вероятность поддержки ниже, что приведет к результату, который больше полагается на метки для одного конца.

Более предпочтительно, длины 5'-концевых библиотечных меток и 3'-концевых библиотечных меток фиксирована и имеет любую длину между 6-10 п.о., кроме того, предпочтительная длина составляет 10 п.о., что обеспечивает большую дискриминацию и большие преимущества, чем другие длины, такие как 6 п.о. или 8 п.о.

Чтобы обеспечить более сбалансированные библиотечные метки, в предпочтительном воплощении в составе праймеров для амплификации имеется по меньшей мере 3 различия в основаниях между любыми двумя библиотечными метками, и количество непрерывных одинаковых оснований в любой из библиотечных меток не превышает 3, а содержание GC в библиотечных метках составляет 40-60%. Когда библиотечные метки соответствуют описанному выше принципу оптимизации оснований и используются совместно, баланс чтения оснований становится лучше, результат более точен, а скорость разделения данных секвенирования также повышается.

В предпочтительном воплощении указанная композиция праймеров для амплификации включает комбинацию 4n пар праймеров для амплификации с метками, сбалансированными по 4, или комбинацию 8n пар праймеров для амплификации с метками, сбалансированными по 8, где n представляет собой целое число, большее или равное 1. Более предпочтительно, в 4n парах праймеров для амплификации с метками, сбалансированными по 4, 5' концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 96 групп, показанных в таблице 1, а 3'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 96 групп, отличных от 5' концевых библиотечных меток, показанных в таблице 1. Количество групп в данном документе определяется в соответствии с фактическими потребностями. Комбинации 96 групп последовательностей меток в таблице 1 обеспечивают более высокую точность считывания, поэтому разделение данных секвенирования является более точным, а скорость разделения также повышается.

В другом предпочтительном воплощении в 8n парах праймеров для амплификации с метками, сбалансированными по 8, 5'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 48 групп, показанных в таблице 2, а 3'-концевые библиотечные метки выбирают из любой одной или нескольких из 48 групп, показанных в таблице 2, которые отличаются от групп 5'-концевых библиотечных меток.

В приведенной выше композиции праймеров для амплификации каждая пара праймеров для амплификации дополнительно включает 5'-концевую универсальную последовательность для амплификации и 3'-концевую универсальную последовательность для амплификации, и 5'-концевая универсальная последовательность для амплификации включает универсальную нижележащую последовательность 5'-концевых библиотечных меток и универсальную вышележащую последовательность 5'-концевых библиотечных меток, 3'-концевая универсальная последовательность для амплификации включает универсальную нижележащую последовательность 3'-концевых библиотечных меток и универсальную вышележащую последовательность для 3'-концевых библиотечных меток. Специфическую последовательность универсальной последовательности для амплификации в каждой паре праймеров для амплификации определяют в соответствии с существующими универсальными последовательностями платформы секвенирования MGI. Комбинация праймеров для амплификации, образованная парами праймеров для амплификации, содержащими вышеуказанные библиотечные метки, может повысить точность считывания библиотечных меток, когда образцы объединены и секвенированы на машине, тем самым повышая точность данных секвенирования каждого образца.

Как упоминалось выше, в конструкции библиотеки может использоваться относительно короткий «пузырьковый» адаптер (то есть количество неспаренных оснований в средней области составляет 30 ± 5 п.о.) или относительно длинный «пузырьковый» адаптер (количество неспаренных оснований в средней области составляет 45 ± 5 п.о.). Соответственно, универсальная последовательность в паре праймеров для амплификации в данном документе также может быть адаптирована к более длинной или более короткой универсальной последовательности для амплификации в зависимости от длины «пузырькового» адаптера.

В предпочтительном воплощении, соответствующем применению более короткого «пузырькового» адаптера, универсальная вышележащая последовательность 5'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 793, а универсальная нижележащая последовательность 5'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ. ID №: 794; универсальная вышележащая последовательность 3' концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 795, а универсальная нижележащая последовательность 3' концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 796.

В другом предпочтительном воплощении, соответствующем применению более длинного «пузырькового» адаптера, универсальная вышележащая последовательность 5'-концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 793, а универсальная нижележащая последовательность 5'-концевой библиотечной метки для представляет собой SEQ. ID №: 797; универсальная вышележащая последовательность 3' концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 795, а универсальная нижележащая последовательность 3' концевой библиотечной метки представляет собой SEQ ID NO: 798.

В третьем воплощении изобретения также предлагается набор библиотечных конструктов на основе платформы секвенирования MGI, набор включает любую композицию праймеров для амплификации, упомянутую выше. В двухсторонних библиотечных метках в праймерах для амплификации соблюден баланс оснований, поэтому последовательности меток каждого образца после секвенирования могут быть точно прочитаны, а точность разделения данных объединенных образцов повышается.

Для дальнейшего повышения удобства создания библиотеки набор может дополнительно включать «пузырьковый» адаптер платформы секвенирования MGI, «пузырьковый» адаптер включает первую последовательность адаптера и вторую последовательность адаптера, и первая последовательность адаптера представляет собой SEQ ID NO: 769, вторая последовательность адаптера представляет собой SEQ ID NO: 770, или первая последовательность адаптера представляет собой SEQ ID NO: 773, вторая последовательность адаптера представляет собой SEQ ID NO: 774. По сравнению с относительно более длинным «пузырьковым» адаптером, более короткий «пузырьковый» адаптер может не только улучшить стабильность лигирования и повысить эффективность лигирования, но также более совместим с последующими процедурами ПЦР-амплификации после лигирования адаптера.

В четвертом воплощении изобретения предлагается способ создания библиотеки для секвенирования с применением любого из вышеуказанных наборов на основе платформы секвенирования MGI. Когда библиотеки, созданные с вышеуказанными наборами, секвенируются на устройстве, баланс библиотечных меток становится лучше, и скорость разделения данных точности считывания становится выше.

В пятом воплощении изобретения также предлагается библиотека секвенирования. Библиотека секвенирования включает любую композицию праймеров для амплификации или конструируется любым из вышеуказанных способов. Баланс библиотечных меток в библиотеке секвенирования лучше, и точность чтения библиотечных меток после секвенирования выше, и скорость разделения данных выше.

Преимущества изобретения будут дополнительно описаны ниже в воплощении. Следует отметить, что в примерах ниже для создания библиотек используется набор для подготовки библиотек NadPrep™ DNA library prep kit.

Артикул №: 1002212 NadPrep® Plasma Free DNA double-end tag library prep kit (для MGI).

Артикул №: 1003811 User's Guide V1. 0 (Nanodigmbio, Нанкин).

Кратко способ описывается следующим образом.

Фрагмент образца ДНК --- репарация концов и присоединение аденозина к тупым концам фрагмента ДНК --- Лигирование --- Отбор фрагментов --- ПЦР-амплификация --- Очистка библиотеки, количественный анализ и контроль качества --- Секвенирование или целевое секвенирование на платформе MGI.

Следует также отметить, что следующие примеры являются просто иллюстративными и не ограничивают способ изобретения следующими способами.

Пример 1. Решение 1 и Решение 2 для подготовки библиотеки.

Стадии: см. набор для подготовки библиотеки ДНК DNA library prep kit (для MGI) (201909Version2.0)

Различия заключаются в последовательности «пузырькового» адаптера и последовательности праймера для амплификации.

(1) Решение 1:

Последовательность «пузырькового» адаптера:

SEQ ID NO:769 (адаптер 1) и SEQ ID NO:770 (адаптер 2):

SEQ ID NO: 769: (31 п.о.) /phos/agtcggaggccaagcggtcttaggaagacaa;

SEQ ID NO: 770 (40 п.о.): ttgtcttcctaacaggaacgacatggctacgatccgact*t.

SEQ ID NO:771 (праймер для амплификации 1) - SEQ ID NO:772 (праймер для амплификации 2):

SEQ ID NO: 771: (64 п.о.)

/phos/ctctcagtacgtcagcagttnnnnnnnnnncaactccttggctcacagaacgacatggctacga, где последовательность перед nnnnnnnnnn (/phos/ctctcagtacgtcagcagtt) представляет собой SEQ ID NO: 793, последовательность после nnnnnnnn (caactccttggctcacagaacgacatggctacga) представляет собой SEQ ID NO: 794, (gacatggctacga представляет собой удлиненную часть по сравнению с решением 2).

SEQ ID NO: 772: (52 п.о.)

gcatggcgaccttatcagnnnnnnnnttgtcttcctaagaccgcttggcc, где последовательность перед nnnnnnnn (gcatggcgaccttatcag) представляет собой SEQ ID NO:795, последовательность после nnnnnnnnnn (ttgtcttcctaagaccgcttggcc) представляет собой SEQ ID NO:796 (cc представляет собой удлиненную часть по сравнению с Решением 2).

Характеристики Решения 1:

1. Комплементарная часть адаптера 7 + 13 п.о. (принадлежит области 20 ± 2 п.о.), область везикулярной структуры 20 + 12 п.о. (принадлежит области 30 ± 5 п.о.);

2. Праймер для амплификации немного длиннее.

Преимущества:

1. Структура «пузырьков» короче, поэтому отожженная структура стабильна.

2. Праймер для амплификации совместим с односторонними праймерами для амплификации и односторонними метками (см. 201910229527.4).

(2) Решение 2:

Последовательность адаптера

SEQ ID NO: 773 (адаптер 1) - SEQ ID NO: 774 (адаптер 2).

SEQ ID NO: 773 (35 п.о.):/phos/agtcggaggccaagcggtcttaggaagacaatcag.

SEQ ID NO: 774 (59 п.о.):

ctgattgtcttcctaagcaactccttggctcacagaacgacatggctacgatccgactt.

SEQ ID NO:775 (праймер для амплификации 1) и SEQ ID NO:776 (праймер для амплификации 2).

SEQ ID NO: 775: (51 п.о.)

/фос/ctctcagtacgtcagcagttnnnnnnnnnncaactccttggctcacagaac; где последовательность перед nnnnnnnnnn (/phos/CTCtcagtacgtcagcagtt) представляет собой SEQ ID NO:793, последовательность после nnnnnnnnnn (caactccttggctcacagaac) представляет собой SEQ ID NO:797.

SEQ ID NO: 776: (50 п.о.)

gcatggcgaccttatcagnnnnnnnnttgtcttcctaagaccgcttgg, где последовательность перед nnnnnnnnnn (gcatggcgaccttatcag) представляет собой SEQ ID NO:795, последовательность после nnnnnnnnnn (ttgtcttcctaagaccgcttgg) представляет собой SEQ ID NO:798.

Характеристики Решения 2:

1. Комплементарная часть адаптера 7+17 п.о. (относится к области 25±2 п.о.), «пузырьковая» структура 34+12 п.о. (относится к области 45±5 п.о.);

2. Праймер для амплификации короче.

Недостатки по сравнению с решением 1:

1. «Пузырьковая» структура длиннее, поэтому загибридизованная структура относительно нестабильна.

2. Праймер для амплификации не совместим с другими решениями (праймер для амплификации короче, и нет повторяющейся последовательности с «пузырьковой» структурой).

Результаты адаптерных структур и праймеров для амплификации решения 1 и решения 2 показаны на Фигуре 4. Могут быть получены обе библиотеки с двусторонними метками для секвенирования MGI. Для конструирования библиотеки в процессе эксперимента вводили 25 нг и 100 нг ДНК. Информация представлена в таблице ниже.

Таблица 3. Выходы библиотеки Решения 1 и Решения 2

Решение Вводимое
количество ДНК Циклы ПЦР Выход библиотеки 1 25 нг 7 1222нг 100 нг 5 1367 нг 2 25 нг 7 1176 нг 100 нг 5 1159 нг

Библиотеки с двусторонними метками для MGI могут быть получены как из Решения 1, так и из Решения 2, и выход библиотек аналогичен, как показано на Фигуре 9. Но Решение 2 не совместимо с односторонними праймерами для амплификации и адаптерами с односторонними метками.

Пример 2. Сравнение разделения данных в 12 объединенных образцах между метками, сбалансированными по 4, и метками, сбалансированными по 8.

Решение с использованием двусторонних меток может эффективно решить проблемы перекрестных помех между образцами (также называемые перескоком меток). Но только когда оба конца меток правильные, данные секвенирования могут быть эффективно разделены. Таким образом, требования к балансу двусторонних меток более строгие, чем для односторонних меток. Настоящее изобретение оптимизирует два набора решений с метками, сбалансированными по 4, и метками, сбалансированными по 8. В этом примере использовались как метки, сбалансированные по 4, так и метки, сбалансированные по 8, а также объединены 12 библиотек для секвенирования для определения скорости разделения каждого образца для двух наборах решений. Экспериментальные стадии и информация представлены ниже:

Стадии: См. инструкции к набору для подготовки библиотеки ДНК NadPrep™ (для MGI) (201909Version2.0). Различие лишь в том, что адаптер с односторонними метками был заменен на адаптер с двусторонними метками.

Последовательность меток, сбалансированных по 4, использованная в эксперименте, показана в таблице 4, соседние 4 метки представляют собой группу баланса, и каждая группа выделяется жирным или неутолщенным шрифтом. Метка 1 представляет собой прямое распределение 384 последовательностей меток, а метка 2 представляет собой обратное распределение 384 последовательностей меток. Праймер 1 с меткой 1 и праймер 2 с меткой 384 составляют комбинацию первой группы праймеров с двусторонней меткой. Праймер 1 с меткой 2 и праймер 2 с меткой 383 составляют комбинацию второй группы праймеров с двусторонней меткой. Всего будет 384 комбинации.

Расположения меток, сбалансированных по 8, и расположения меток, сбалансированных по 4, одинаковы. Единственным отличием является 8 меток в группе, как показано в таблице 5. При объединении 12 библиотечных меток первые 8 являются сбалансированными, а последние 4 - несбалансированными. Для комбинации из меток, сбалансированных по 4, 12 библиотечных меток точно сбалансированы.

Таблица 4. 12 комбинаций меток, сбалансированных по 4

№ комбинации № метки 1 Метка 1 SEQ № метки 2 Метка 2 SEQ XDI001 1(SEQ ID NO:1) tcacattgct 384(SEQ ID NO:384) gatagtaacg XDI002 2(SEQ ID NO:2) aatggcgctc 383(SEQ ID NO:383) tgagtggcta XDI003 3(SEQ ID NO:3) gtctcaatga 382(SEQ ID NO:382) ccgtcattac XDI004 4(SEQ ID NO:4) cggatgcaag 381(SEQ ID NO:381) atccaccggt XDI005 5(SEQ ID NO:5) tcgcttaagc 380(SEQ ID NO:380) gcaactgtga XDI006 6(SEQ ID NO:6) cgaggcttag 379(SEQ ID NO:379) atccaccacc XDI007 7(SEQ ID NO:7) gtctaaggct 378(SEQ ID NO:378) cgtgtgacat XDI008 8(SEQ ID NO:8) aatacgccta 377(SEQ ID NO:377) tagtgatgtg XDI009 9(SEQ ID NO:9) aagcctattg 376(SEQ ID NO:376) gcttgttcag XDI010 10(SEQ ID NO:10) cgctactgca 375(SEQ ID NO:375) aacaagcact XDI011 11(SEQ ID NO:11) tcaagagcat 374(SEQ ID NO:374) ttgccagtga XDI012 12(SEQ ID NO:12) gttgtgcagc 373(SEQ ID NO:373) cgagtcagtc

Таблица 5. 12 комбинаций меток, сбалансированных по 4

№ комбинации № метки 1 Метка 1 SEQ № метки 2 Метка 2 SEQ MDI001 1(SEQ ID NO:385) cgtcgatgac 384(SEQ ID NO:768) taacacgacg MDI002 2(SEQ ID NO:386) atataaggcg 383(SEQ ID NO:767) tgttctcttc MDI003 3(SEQ ID NO:387) gatcgtgctc 382(SEQ ID NO:766) gagttcacaa MDI004 4(SEQ ID NO:388) cagtcttcgg 381(SEQ ID NO:765) ctgatgtcct MDI005 5(SEQ ID NO:389) agaacgatct 380(SEQ ID NO:764) agacagtggc MDI006 6(SEQ ID NO:390) ttggtgcatt 379(SEQ ID NO:763) ctcacactta MDI007 7(SEQ ID NO:391) gccgtcataa 378(SEQ ID NO:762) gccggtaagt MDI008 8(SEQ ID NO:392) tccaaccaga 377(SEQ ID NO:761) actggaggag MDI009 9(SEQ ID NO:393) gatagcaaga 376(SEQ ID NO:760) caacagtaac MDI010 10(SEQ ID NO:394) accgtgcttc 375(SEQ ID NO:759) ataacgctca MDI011 11(SEQ ID NO:395) gcagatgtaa 374(SEQ ID NO:758) gattgcgcct MDI012 12(SEQ ID NO:396) tgttggagcg 373(SEQ ID NO:757) cggtgttgga

Для стандарта - мгеномной ДНК человека создаются библиотеки с 12 комбинациями двусторонних меток, сбалансированных по 4, и меток, сбалансированных по 8. Последовательности двусторонних меток, сбалансированных по 4, показаны в таблице 4, а последовательности двусторонних меток, сбалансированных по 8, показаны в таблице 5. Библиотеки, сбалансированные по 4, и библиотеки, сбалансированные по 8, секвенируют и анализируют на платформе секвенирования MGI.

Две группы библиотек были разделены на два раунда, в первом раунде для разделения использовалась максимальная отказоустойчивость (разделит ошибки секвенирования), а во втором раунде для разделения была разрешена только одна отказоустойчивость на метку. Результаты разделения данных показаны на Фигуре 10, скорость разделения данных 12 библиотек с метками, сбалансированными по 4, более стабильна, а скорость разделения данных 12 библиотек с метками, сбалансированными по 8, нестабильна. Результаты показывают, что сбалансированные двухсторонние метки в большей степени способствуют эффективному разделению данных секвенатора MGI, в данном документе дизайн меток, сбалансированных по 8, позволяет повысить эффективную скорость разделения данных лишь в некоторой степени, но дизайн меток, сбалансированных по 4, повышает лучше.

Пример 3

Чтобы обеспечить разницу в эффективности между 48 группами комбинаций сбалансированных по 8 меток, предусмотренных настоящим изобретением, и 12 группами комбинаций сбалансированных по 8 меток, обеспечиваемых производством MGI, при их дизайне учитывалась совместимость. Существует разница в 3 основания в любых двух последовательностях между 48 группами комбинаций меток, сбалансированных по 8, и 12 группами комбинаций меток, сбалансированных по 8, предоставленных производством MGI.

Кроме того, есть и другие важные отличия:

1. Композиция оснований последовательности меток в настоящем изобретении более сбалансирована и содержание GC составляет 40%-60%, при этом содержание GC в метках производства MGI составляет от 20% до 80%.

2. Последовательность метки по настоящему изобретению обладает свойством соответствия адаптерной последовательности Решения 1, чтобы гарантировать равномерное получение амплифицированных библиотек. Но некоторые последовательности производства MGI не удовлетворяют сбалансированному требованию по эффективности амплификации библиотеки.

Чтобы дополнительно проверить разницу эффективности в балансе амплификации, была выбрана группа из меток, сбалансированных по 8, комбинаций MDI001-MDI008 по изобретению и группа из меток, сбалансированных по 8, комбинаций MGI001-MGI008 производства MGI (показана в таблице 6) для конструирования библиотек: 100 нг ДНК в качестве исходного материала, ПЦР-амплификация в течение 5 циклов для определения выхода библиотеки, результаты представлены в таблице 7.

Как показано в Таблице 7, выходы библиотек по изобретению одинаковы, в то время как выход одной библиотеки производства MGI составляет менее половины нормального значения, что указывает на то, что оптимизированные последовательности меток по настоящему изобретению имеют лучший баланс. Кроме того, эффективность амплификации более стабильна. В то же время, благодаря высокой пропускной способности секвенатора MGI, две группы из 384 меток в настоящем изобретении оказались лучше, чем 120 меток производства MGI, чтобы удовлетворить потребность в высокой производительности для объединенного секвенирования.

Таблица 6. 8 комбинаций меток, сбалансированных по 8, производства MGI

№ комбинации № метки 1 Метка 1 SEQ № Метки 2 Метка 2 SEQ MGI001 1(SEQ ID NO:777) atgcatctaa 120(SEQ ID NO:785) tagaggacaa MGI002 2(SEQ ID NO:778) agctctggac 119(SEQ ID NO:786) cctagcgaat MGI003 3(SEQ ID NO:779) ctatcacgtg 118(SEQ ID NO:787) gtagtcatcg MGI004 4(SEQ ID NO:780) ggactagtgg 117(SEQ ID NO:788) gctgagctgt MGI005 5(SEQ ID NO:781) gccaagtcca 116(SEQ ID NO:789) aacctagata MGI006 6(SEQ ID NO:782) cctgtcaagc 115(SEQ ID NO:790) ttgccatctc MGI007 7(SEQ ID NO:783) tagaggtctt 114(SEQ ID NO:791) agatcttgcg MGI008 8(SEQ ID NO:784) tatggcaact 113(SEQ ID NO:792) cgctatcggc

Таблица 7

№ библиотеки Выход библиотеки № библиотеки Выход библиотеки MGI001 1328 MDI001 1386 MGI002 1251 MDI002 1255 MGI003 1196 MDI003 1229 MGI004 1267 MDI004 1311 MGI005 667 MDI005 1307 MGI006 1345 MDI006 1238 MGI007 1257 MDI007 1233 MGI008 1344 MDI008 1274

Согласно вышеприведенным воплощениям, двухсторонние библиотечные метки настоящего изобретении вводили в платформе секвенирования MGI для решения проблем перекрестных помех образцов, вызванных синтезом, экспериментальным процессом и процессом секвенирования, что сделает результаты обнаружения более точными. Кроме того, авторы изобретения обнаружили, путем тестирования и оптимизации, что когда средняя структура «пузырькового» адаптера имеет длину 30 ± 5 п.о., а количество спаренных оснований равно 20 ± 2 п.о., отжиг «пузырьковых» адаптеров является наиболее стабильным. Между тем, праймер для амплификации представляет собой удлиненный праймер для амплификации, который может быть совместим с ампликонами с односторонними метками и адаптерами с молекулярными односторонними метками. «Пузырьковые» адаптеры с такой композиционной структурой используются вместе с удлиненными праймерами для амплификации при конструировании библиотеки, которые могут быть совместимы с существующим решением с односторонними метками для платформы MGI и удобны для приложения секвенирования MGI.

На основании вышеизложенного, чтобы получить лучшее разделение данных, настоящее изобретение оптимизировало 384 комбинации последовательностей меток, сбалансированных по 4, и меток, сбалансированных по 8, соответственно, что обеспечивает оптимальное решение для высокопроизводительного секвенирования и разделения данных секвенирования для платформы MGI.

Приведенное выше описание представляет собой только предпочтительное воплощение настоящего изобретения и не предназначено для ограничения настоящего изобретения, и специалисты в данной области техники могут внести в настоящее изобретение различные модификации и изменения. Любые модификации, эквивалентные замены, усовершенствования и т.д., сделанные в рамках сущности и объема настоящего изобретения, предназначены для включения в объем охраны настоящего изобретения.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> НАНОДИГМБАЙО (НАНЬЦЗИН) БАЙОТЕКНОЛОДЖИ КО., ЛТД.

<120> КОМПОЗИЦИЯ ДВУХСТОРОННИХ БИБЛИОТЕЧНЫХ МЕТОК И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

В ПЛАТФОРМЕ СЕКВЕНИРОВАНИЯ MGI

<130> PN204453NAGD

<150> PCT/CN2020/139919

<151> 2020-12-28

<150> CN 202010838955.X

<151> 2020-08-19

<160> 798

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 1

tcacattgct 10

<210> 2

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 2

aatggcgctc 10

<210> 3

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 3

gtctcaatga 10

<210> 4

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 4

cggatgcaag 10

<210> 5

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 5

tcgcttaagc 10

<210> 6

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 6

cgaggcttag 10

<210> 7

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 7

gtctaaggct 10

<210> 8

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 8

aatacgccta 10

<210> 9

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 9

aagcctattg 10

<210> 10

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 10

cgctactgca 10

<210> 11

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 11

tcaagagcat 10

<210> 12

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 12

gttgtgcagc 10

<210> 13

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 13

agacaggaat 10

<210> 14

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 14

ccttgccgta 10

<210> 15

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 15

gtcattacgg 10

<210> 16

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 16

taggcattcc 10

<210> 17

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 17

catatcatcg 10

<210> 18

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 18

gcacaacaat 10

<210> 19

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 19

ttgtcgtggc 10

<210> 20

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 20

agcggtgcta 10

<210> 21

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 21

agccagtagg 10

<210> 22

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 22

gtaagtgtac 10

<210> 23

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 23

tagtcacgtt 10

<210> 24

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 24

cctgtcacca 10

<210> 25

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 25

atcgtggatg 10

<210> 26

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 26

tggagatcga 10

<210> 27

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 27

cctcacagat 10

<210> 28

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 28

gaatctctcc 10

<210> 29

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 29

gcagactgac 10

<210> 30

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 30

ctcattaacg 10

<210> 31

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 31

tggtgagctt 10

<210> 32

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 32

aatccgctga 10

<210> 33

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 33

tcgcatcaac 10

<210> 34

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 34

agaacagtga 10

<210> 35

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 35

catgtctcct 10

<210> 36

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 36

gtctggagtg 10

<210> 37

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 37

gaggtctgtg 10

<210> 38

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 38

ctatagacgt 10

<210> 39

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 39

tgcagtgacc 10

<210> 40

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 40

actccactaa 10

<210> 41

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 41

gcgaagtagg 10

<210> 42

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 42

tgcctaacct 10

<210> 43

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 43

aatggtctac 10

<210> 44

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 44

ctatccggta 10

<210> 45

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 45

tacgcttcag 10

<210> 46

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 46

cggagcatct 10

<210> 47

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 47

gtactagatc 10

<210> 48

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 48

acttagcgga 10

<210> 49

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 49

atcactccat 10

<210> 50

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 50

gatcgcagtg 10

<210> 51

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 51

ccggaattcc 10

<210> 52

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 52

tgattggaga 10

<210> 53

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 53

cacaaggtcg 10

<210> 54

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 54

tctcgcagga 10

<210> 55

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 55

gtggtatcat 10

<210> 56

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 56

agatctcatc 10

<210> 57

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 57

gatggagatt 10

<210> 58

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 58

ctcattctgc 10

<210> 59

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 59

tggcagacaa 10

<210> 60

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 60

acatcctgcg 10

<210> 61

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 61

acgtcgcaga 10

<210> 62

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 62

tgtataggct 10

<210> 63

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 63

caacacattg 10

<210> 64

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 64

gtcggttcac 10

<210> 65

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 65

agccataagc 10

<210> 66

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 66

gtattccgag 10

<210> 67

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 67

cataggttca 10

<210> 68

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 68

tcggcagctt 10

<210> 69

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 69

gttcggtcct 10

<210> 70

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 70

tggattgtag 10

<210> 71

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 71

ccagaacgtc 10

<210> 72

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 72

aactccaaga 10

<210> 73

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 73

cgtacactgg 10

<210> 74

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 74

gcacacagca 10

<210> 75

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 75

atggtgtatc 10

<210> 76

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 76

tactgtgcat 10

<210> 77

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 77

cggcaatcag 10

<210> 78

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 78

gtagttcgga 10

<210> 79

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 79

tacaggaact 10

<210> 80

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 80

acttccgttc 10

<210> 81

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 81

tgctccacga 10

<210> 82

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 82

aatcaaggtc 10

<210> 83

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 83

gtaggtcaat 10

<210> 84

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 84

ccgatgttcg 10

<210> 85

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 85

gacgtgtgca 10

<210> 86

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 86

tcgccacttc 10

<210> 87

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 87

ataagcacgt 10

<210> 88

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 88

cgttatgaag 10

<210> 89

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 89

aatagagcca 10

<210> 90

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 90

gtacctcgac 10

<210> 91

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 91

ccggtgattg 10

<210> 92

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 92

tgctactagt 10

<210> 93

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 93

gatccggact 10

<210> 94

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 94

ttaggcacaa 10

<210> 95

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 95

agcattcttg 10

<210> 96

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 96

ccgtaatggc 10

<210> 97

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 97

gtatagctgc 10

<210> 98

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 98

cagacatctg 10

<210> 99

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 99

agcggtggat 10

<210> 100

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 100

tctctcaaca 10

<210> 101

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 101

catccactgt 10

<210> 102

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 102

gccgtgaaca 10

<210> 103

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 103

ataagcggag 10

<210> 104

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 104

tggtattctc 10

<210> 105

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 105

acagttctca 10

<210> 106

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 106

cattgagagc 10

<210> 107

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 107

gtcacgactg 10

<210> 108

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 108

tggcactgat 10

<210> 109

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 109

aatgattcgc 10

<210> 110

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 110

cgcttaagta 10

<210> 111

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 111

ttgagcgacg 10

<210> 112

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 112

gcaccgctat 10

<210> 113

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 113

acgaacggat 10

<210> 114

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 114

gaacggacta 10

<210> 115

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 115

tgctctctgg 10

<210> 116

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 116

cttgtatacc 10

<210> 117

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 117

caccagcaca 10

<210> 118

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 118

ttgtctgtag 10

<210> 119

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 119

agtatcactc 10

<210> 120

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 120

gcaggatggt 10

<210> 121

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 121

ttatccacgt 10

<210> 122

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 122

acggttcgtc 10

<210> 123

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 123

gaccagtaag 10

<210> 124

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 124

cgtagagtca 10

<210> 125

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 125

acgttaaggt 10

<210> 126

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 126

ctcagcttag 10

<210> 127

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 127

tgtgctccta 10

<210> 128

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 128

gaacaggacc 10

<210> 129

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 129

gcgaccttga 10

<210> 130

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 130

atcgtgagtt 10

<210> 131

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 131

cgtcgtcaac 10

<210> 132

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 132

taataagccg 10

<210> 133

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 133

ccacttagta 10

<210> 134

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 134

agtagctagt 10

<210> 135

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 135

gacgaactcg 10

<210> 136

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 136

ttgtcggcac 10

<210> 137

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 137

agcatatcgt 10

<210> 138

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 138

gtagacggag 10

<210> 139

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 139

cattctcatc 10

<210> 140

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 140

tcgcggatca 10

<210> 141

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 141

ctggaggcaa 10

<210> 142

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 142

gatacttgtg 10

<210> 143

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 143

tgcctccact 10

<210> 144

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 144

acatgaatgc 10

<210> 145

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 145

tcagcagagg 10

<210> 146

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 146

ctgtgcatta 10

<210> 147

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 147

agtaatcgac 10

<210> 148

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 148

agtaatcgac 10

<210> 149

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 149

aagcggtgaa 10

<210> 150

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 150

ctatcacact 10

<210> 151

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 151

gccgttatgc 10

<210> 152

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 152

tgtaacgctg 10

<210> 153

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 153

gcgtgtaact 10

<210> 154

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 154

catgtaccac 10

<210> 155

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 155

tgccactgta 10

<210> 156

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 156

ataacggtgg 10

<210> 157

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 157

cttgaaggtt 10

<210> 158

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 158

gcctctatgg 10

<210> 159

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 159

tagatccacc 10

<210> 160

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 160

agacggtcaa 10

<210> 161

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 161

gctggattaa 10

<210> 162

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 162

taacaccggc 10

<210> 163

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 163

atgactgccg 10

<210> 164

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 164

cgcttgaatt 10

<210> 165

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 165

ctatagcgag 10

<210> 166

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 166

aacgttgttc 10

<210> 167

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 167

gctaccacgt 10

<210> 168

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 168

tggcgataca 10

<210> 169

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 169

tccgccaatc 10

<210> 170

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 170

caactagtgt 10

<210> 171

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 171

agtaagccaa 10

<210> 172

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 172

gtgtgttgcg 10

<210> 173

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 173

gatcagatgg 10

<210> 174

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 174

ctcgtaggtc 10

<210> 175

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 175

tcgtgtccat 10

<210> 176

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 176

agaacctaca 10

<210> 177

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 177

ccgcattcct 10

<210> 178

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 178

gttggacata 10

<210> 179

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 179

tgatcgaggc 10

<210> 180

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 180

aacatcgtag 10

<210> 181

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 181

gttgcgcgaa 10

<210> 182

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 182

acaagtaagc 10

<210> 183

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 183

cgcttctcct 10

<210> 184

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 184

tagcaagttg 10

<210> 185

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 185

aggcctcttc 10

<210> 186

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 186

gtaatgtcgt 10

<210> 187

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 187

cactgcagag 10

<210> 188

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 188

tctgaagaca 10

<210> 189

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 189

gctaaggata 10

<210> 190

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 190

cacggttggt 10

<210> 191

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 191

tgaccaccag 10

<210> 192

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 192

atgttcatcc 10

<210> 193

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 193

agctactctg 10

<210> 194

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 194

caacgtgagt 10

<210> 195

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 195

tcgatgctaa 10

<210> 196

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 196

gttgcaagcc 10

<210> 197

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 197

cgacatgtgt 10

<210> 198

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 198

gatgcgcata 10

<210> 199

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 199

tcgtgatcag 10

<210> 200

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 200

atcatcagcc 10

<210> 201

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 201

tcaatggcgg 10

<210> 202

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 202

cagtaactct 10

<210> 203

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 203

gttgcctgac 10

<210> 204

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 204

agccgtaata 10

<210> 205

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 205

ctaataggct 10

<210> 206

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 206

tctcctccac 10

<210> 207

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 207

agctgcatga 10

<210> 208

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 208

gaggagtatg 10

<210> 209

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 209

accacgtagc 10

<210> 210

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 210

gaatgcagta 10

<210> 211

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 211

ttggtagcct 10

<210> 212

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 212

cgtcatctag 10

<210> 213

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 213

tcaatgaggt 10

<210> 214

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 214

agcgaagctg 10

<210> 215

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 215

ctgtcttaac 10

<210> 216

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 216

gatcgcctca 10

<210> 217

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 217

gttccgaatg 10

<210> 218

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 218

tacgtacgca 10

<210> 219

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 219

cggagttcac 10

<210> 220

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 220

acatacgtgt 10

<210> 221

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 221

ctgaagagat 10

<210> 222

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 222

gaagcctcca 10

<210> 223

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 223

tgtcttcatc 10

<210> 224

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 224

acctgagtgg 10

<210> 225

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 225

gtacgtcctt 10

<210> 226

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 226

aactaggtca 10

<210> 227

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 227

tgtgtcaggc 10

<210> 228

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 228

ccgacataag 10

<210> 229

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 229

tccacacgtc 10

<210> 230

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 230

cggcacatga 10

<210> 231

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 231

gtatgttcct 10

<210> 232

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 232

aatgtggaag 10

<210> 233

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 233

agacagacgt 10

<210> 234

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 234

ttctgtggag 10

<210> 235

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 235

caggtcttcc 10

<210> 236

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 236

gctacacata 10

<210> 237

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 237

ctagcgacac 10

<210> 238

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 238

aggcattact 10

<210> 239

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 239

gacatccgga 10

<210> 240

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 240

tcttgagttg 10

<210> 241

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 241

acaacagaag 10

<210> 242

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 242

cgcttgtgga 10

<210> 243

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 243

gttggtctcc 10

<210> 244

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 244

tagcacactt 10

<210> 245

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 245

gcttgcaata 10

<210> 246

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 246

tggacgtgct 10

<210> 247

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 247

aacgaaccgg 10

<210> 248

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 248

ctacttgtac 10

<210> 249

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 249

cggtgagtga 10

<210> 250

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 250

gcaatgcatt 10

<210> 251

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 251

ttccattcac 10

<210> 252

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 252

aatgccagcg 10

<210> 253

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 253

tactcttctc 10

<210> 254

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 254

aggaaggtaa 10

<210> 255

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 255

gttggacggt 10

<210> 256

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 256

ccactcaacg 10

<210> 257

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 257

aatgactggt 10

<210> 258

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 258

gtgccacaac 10

<210> 259

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 259

cgaatgatcg 10

<210> 260

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 260

tcctgtgcta 10

<210> 261

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 261

tgtgaattgg 10

<210> 262

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 262

aaccggcctt 10

<210> 263

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 263

ctatccgacc 10

<210> 264

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 264

gcgattagaa 10

<210> 265

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 265

cgtaaccgca 10

<210> 266

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 266

gactgataac 10

<210> 267

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 267

atgcttactg 10

<210> 268

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 268

tcagcggtgt 10

<210> 269

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 269

acataacacc 10

<210> 270

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 270

cacctgaggt 10

<210> 271

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 271

gtgactgtaa 10

<210> 272

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 272

tgtggctctg 10

<210> 273

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 273

ctcagactct 10

<210> 274

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 274

acacatgcta 10

<210> 275

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 275

tgtgcctaag 10

<210> 276

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 276

gagttgaggc 10

<210> 277

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 277

agccgttctc 10

<210> 278

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 278

ttgttggtct 10

<210> 279

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 279

caagacaaga 10

<210> 280

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 280

gctacacgag 10

<210> 281

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 281

gtgacgcgat 10

<210> 282

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 282

aacctctctg 10

<210> 283

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 283

tcttgagaga 10

<210> 284

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 284

cgagatatcc 10

<210> 285

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 285

gaaggattca 10

<210> 286

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 286

tcgcctggtt 10

<210> 287

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 287

agtaacacgg 10

<210> 288

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 288

ctcttgcaac 10

<210> 289

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 289

agagacttac 10

<210> 290

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 290

cttatggccg 10

<210> 291

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 291

gcctgacgtt 10

<210> 292

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 292

tagcctaaga 10

<210> 293

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 293

aagcatatcc 10

<210> 294

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 294

ctaatccgtt 10

<210> 295

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 295

gcttggtcga 10

<210> 296

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 296

tgcgcagaag 10

<210> 297

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 297

gatcctgata 10

<210> 298

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 298

tcaagcacgg 10

<210> 299

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 299

ctgtagcgct 10

<210> 300

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 300

agcgtattac 10

<210> 301

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 301

tgtctgattg 10

<210> 302

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 302

accagacggt 10

<210> 303

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 303

gtgtctgacc 10

<210> 304

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 304

caagactcaa 10

<210> 305

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 305

caagactcaa 10

<210> 306

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 306

agacgaggtc 10

<210> 307

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 307

ctggattact 10

<210> 308

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 308

gatatgctga 10

<210> 309

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 309

ctggtcaagg 10

<210> 310

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 310

gctccattcc 10

<210> 311

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 311

tgatgtcgaa 10

<210> 312

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 312

aacaaggctt 10

<210> 313

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 313

catctagaca 10

<210> 314

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 314

gcggatacag 10

<210> 315

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 315

ttctgcttgt 10

<210> 316

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 316

agaacgcgtc 10

<210> 317

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 317

aagacgaact 10

<210> 318

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 318

ccagtactgc 10

<210> 319

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 319

gttcgctgta 10

<210> 320

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 320

tgctatgcag 10

<210> 321

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 321

tacacgcgca 10

<210> 322

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 322

aggtacgcag 10

<210> 323

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 323

gttcgattgt 10

<210> 324

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 324

ccagttaatc 10

<210> 325

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 325

taagatcgga 10

<210> 326

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 326

agctcggctt 10

<210> 327

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 327

gttcgataag 10

<210> 328

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 328

ccgatcatcc 10

<210> 329

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 329

actggactca 10

<210> 330

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 330

caatagaggc 10

<210> 331

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 331

gtcacttaag 10

<210> 332

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 332

tggctcgctt 10

<210> 333

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 333

cgcactatgg 10

<210> 334

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 334

gaggtacatt 10

<210> 335

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 335

tcttagtgac 10

<210> 336

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 336

atacgcgcca 10

<210> 337

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 337

tgaggcatat 10

<210> 338

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 338

attctatggc 10

<210> 339

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 339

ccgtagcatg 10

<210> 340

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 340

gacactgcca 10

<210> 341

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 341

acggcattaa 10

<210> 342

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 342

gtaagcgagg 10

<210> 343

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 343

cattatcgct 10

<210> 344

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 344

tgcctgactc 10

<210> 345

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 345

gactcatcca 10

<210> 346

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 346

acgaacatac 10

<210> 347

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 347

ttacgtcggt 10

<210> 348

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 348

cgtgtggatg 10

<210> 349

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 349

cctaacattc 10

<210> 350

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 350

atcgcacgca 10

<210> 351

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 351

gaacgttcgg 10

<210> 352

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 352

tggttggaat 10

<210> 353

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 353

aacaagtgag 10

<210> 354

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 354

gttgttgctc 10

<210> 355

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 355

tgacgcaact 10

<210> 356

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 356

ccgtcactga 10

<210> 357

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 357

tgttattccg 10

<210> 358

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 358

ctactcaaga 10

<210> 359

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 359

acgagacgtc 10

<210> 360

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 360

gacgcggtat 10

<210> 361

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 361

gatgacgtta 10

<210> 362

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 362

agccgatacc 10

<210> 363

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 363

ttatctcgag 10

<210> 364

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 364

ccgatgacgt 10

<210> 365

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 365

gtgagttcgc 10

<210> 366

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 366

acacaacatg 10

<210> 367

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 367

cgtgcgatca 10

<210> 368

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 368

tacttcggat 10

<210> 369

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 369

ctatcggtgt 10

<210> 370

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 370

gacattcaag 10

<210> 371

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 371

agtgacacca 10

<210> 372

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 372

tcgcgatgtc 10

<210> 373

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 373

cgagtcagtc 10

<210> 374

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 374

ttgccagtga 10

<210> 375

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 375

aacaagcact 10

<210> 376

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 376

gcttgttcag 10

<210> 377

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 377

tagtgatgtg 10

<210> 378

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 378

cgtgtgacat 10

<210> 379

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 379

atccaccacc 10

<210> 380

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 380

gcaactgtga 10

<210> 381

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 381

atccaccggt 10

<210> 382

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 382

ccgtcattac 10

<210> 383

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 383

tgagtggcta 10

<210> 384

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 384

gatagtaacg 10

<210> 385

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 385

cgtcgatgac 10

<210> 386

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 386

atataaggcg 10

<210> 387

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 387

gatcgtgctc 10

<210> 388

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 388

cagtcttcgg 10

<210> 389

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 389

agaacgatct 10

<210> 390

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 390

ttggtgcatt 10

<210> 391

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 391

gccgtcataa 10

<210> 392

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 392

tccaaccaga 10

<210> 393

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 393

gatagcaaga 10

<210> 394

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 394

accgtgcttc 10

<210> 395

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 395

gcagatgtaa 10

<210> 396

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 396

tgttggagcg 10

<210> 397

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 397

ttgtatccac 10

<210> 398

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 398

cgcacagatg 10

<210> 399

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 399

caactctcgt 10

<210> 400

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 400

atgccatgct 10

<210> 401

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 401

aggcagctta 10

<210> 402

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 402

tagcctagcg 10

<210> 403

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 403

atcacgtgcg 10

<210> 404

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 404

cgttatgcgc 10

<210> 405

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 405

caaggatcga 10

<210> 406

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 406

gttgtcgtat 10

<210> 407

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 407

gcaatcaatc 10

<210> 408

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 408

tcctgacaat 10

<210> 409

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 409

aggtgcctta 10

<210> 410

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 410

aagaaccaag 10

<210> 411

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 411

catacatgac 10

<210> 412

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 412

tgcctggtga 10

<210> 413

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 413

tctcggagtt 10

<210> 414

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 414

gtcgtagact 10

<210> 415

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 415

gcatataccg 10

<210> 416

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 416

ctagcttcgc 10

<210> 417

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 417

gacgtatcaa 10

<210> 418

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 418

cctgctagga 10

<210> 419

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 419

caacttggcg 10

<210> 420

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 420

atgcgacctc 10

<210> 421

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 421

gttaaggacg 10

<210> 422

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 422

tccaagttgt 10

<210> 423

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 423

aggtccattc 10

<210> 424

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 424

tgatgccaat 10

<210> 425

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 425

cctaagagtt 10

<210> 426

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 426

gatactagct 10

<210> 427

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 427

aaggcatctc 10

<210> 428

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 428

tggcatctgg 10

<210> 429

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 429

acactggagc 10

<210> 430

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 430

gtatgccaca 10

<210> 431

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 431

ctcttagtag 10

<210> 432

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 432

tgcggctcaa 10

<210> 433

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 433

taaggctaga 10

<210> 434

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 434

gaggagataa 10

<210> 435

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 435

cgttagcact 10

<210> 436

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 436

aggctaggat 10

<210> 437

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 437

atctcactgg 10

<210> 438

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 438

tccagttctc 10

<210> 439

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 439

gtaaccgctc 10

<210> 440

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 440

cctcttagcg 10

<210> 441

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 441

actaaggctg 10

<210> 442

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 442

gaggagtatg 10

<210> 443

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 443

tagtcaacgc 10

<210> 444

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 444

ccatcaagga 10

<210> 445

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 445

agcctctgct 10

<210> 446

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 446

ttcgttcaca 10

<210> 447

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 447

gtaagtgtac 10

<210> 448

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 448

cgtcgcctat 10

<210> 449

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 449

tgtgaaggag 10

<210> 450

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 450

agaccggttc 10

<210> 451

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 451

ctcgcctaac 10

<210> 452

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 452

ccgctgtcta 10

<210> 453

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 453

gacataacct 10

<210> 454

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 454

gagaatagca 10

<210> 455

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 455

ttatgtcagg 10

<210> 456

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 456

acttgcctgt 10

<210> 457

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 457

tgctggatct 10

<210> 458

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 458

agtagtgttg 10

<210> 459

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 459

ctccaatcct 10

<210> 460

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 460

cctatgtgta 10

<210> 461

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 461

taatatccgc 10

<210> 462

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 462

gtgccacaac 10

<210> 463

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 463

gcagtcagga 10

<210> 464

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 464

aaggccgaag 10

<210> 465

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 465

cgtgttagag 10

<210> 466

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 466

acaggacgat 10

<210> 467

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 467

cggataacgg 10

<210> 468

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 468

gttagtgcct 10

<210> 469

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 469

aagcacgaca 10

<210> 470

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 470

gtctccttgc 10

<210> 471

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 471

tcaccgtata 10

<210> 472

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 472

tactagcttc 10

<210> 473

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 473

accattcacg 10

<210> 474

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 474

agtagctagt 10

<210> 475

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 475

ttccgaaggt 10

<210> 476

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 476

gtaccaacca 10

<210> 477

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 477

tatgtgtgtc 10

<210> 478

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 478

cgatcggtac 10

<210> 479

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 479

gaggatctag 10

<210> 480

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 480

ccgtacgcta 10

<210> 481

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 481

gtcaactcgg 10

<210> 482

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 482

tggaagcaca 10

<210> 483

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 483

tcgttgtagc 10

<210> 484

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 484

agccgaagtt 10

<210> 485

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 485

gatgcaacct 10

<210> 486

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 486

acttccgttc 10

<210> 487

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 487

caagttggaa 10

<210> 488

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 488

ctacgtctag 10

<210> 489

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 489

tgtcgttaag 10

<210> 490

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 490

gtctcaatga 10

<210> 491

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 491

gatcaagcca 10

<210> 492

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 492

aactccgatc 10

<210> 493

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 493

ctaagtcttc 10

<210> 494

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 494

tgagagcgct 10

<210> 495

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 495

acgatctcgg 10

<210> 496

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 496

ccggtgagat 10

<210> 497

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 497

catctcatga 10

<210> 498

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 498

ctgtgactcg 10

<210> 499

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 499

agaccttgga 10

<210> 500

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 500

actgtcgacg 10

<210> 501

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 501

gtgaagacac 10

<210> 502

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 502

tactgtgcat 10

<210> 503

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 503

gcagagcgtt 10

<210> 504

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 504

tgcacatatc 10

<210> 505

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 505

cctgtgtaac 10

<210> 506

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 506

aacgatgcca 10

<210> 507

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 507

tcgagcatag 10

<210> 508

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 508

gaattcctgt 10

<210> 509

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 509

agaacgtccg 10

<210> 510

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 510

cgccaaggta 10

<210> 511

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 511

ttgtgaaggc 10

<210> 512

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 512

gttcctcatt 10

<210> 513

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 513

cgtcactatt 10

<210> 514

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 514

gcgatgcaga 10

<210> 515

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 515

cgtgtcctag 10

<210> 516

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 516

gaagaatgga 10

<210> 517

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 517

atgtgtggct 10

<210> 518

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 518

tcctgtacac 10

<210> 519

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 519

ttaccgattc 10

<210> 520

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 520

aacacagccg 10

<210> 521

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 521

tcataccaag 10

<210> 522

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 522

gaagcttact 10

<210> 523

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 523

gtcagtaggt 10

<210> 524

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 524

ctgtgcgtag 10

<210> 525

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 525

agtgaatgga 10

<210> 526

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 526

tccacggttc 10

<210> 527

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 527

aatctgcctc 10

<210> 528

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 528

cggctaacca 10

<210> 529

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 529

gacatacagt 10

<210> 530

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 530

agaggcctca 10

<210> 531

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 531

cctgatattg 10

<210> 532

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 532

gtgctgaact 10

<210> 533

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 533

cgatggtcag 10

<210> 534

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 534

aatacagcgc 10

<210> 535

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 535

tcgtcctgac 10

<210> 536

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 536

ttccatggta 10

<210> 537

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 537

cgttcgactg 10

<210> 538

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 538

cgctacactc 10

<210> 539

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 539

atagatcggt 10

<210> 540

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 540

accagattca 10

<210> 541

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 541

gatacggagg 10

<210> 542

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 542

ttaggaggaa 10

<210> 543

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 543

gcgcttctac 10

<210> 544

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 544

tagctctact 10

<210> 545

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 545

ccacctgctt 10

<210> 546

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 546

cgtaggtctg 10

<210> 547

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 547

tcttagtgac 10

<210> 548

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 548

atcctagaac 10

<210> 549

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 549

aggtgtaggt 10

<210> 550

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 550

gtaaccatca 10

<210> 551

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 551

taggtccaga 10

<210> 552

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 552

gacgaactcg 10

<210> 553

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 553

ccaacagatt 10

<210> 554

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 554

cctctatctc 10

<210> 555

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 555

gagtgtctca 10

<210> 556

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 556

ttggcttaag 10

<210> 557

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 557

agtcgcatgg 10

<210> 558

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 558

atcttgcggc 10

<210> 559

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 559

tgcaaggcct 10

<210> 560

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 560

gaagacagaa 10

<210> 561

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 561

acagactcat 10

<210> 562

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 562

gagttgaggc 10

<210> 563

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 563

gttctagacg 10

<210> 564

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 564

agttcaggcg 10

<210> 565

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 565

cagacgatga 10

<210> 566

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 566

tccaacctat 10

<210> 567

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 567

ttacgttctc 10

<210> 568

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 568

cgcggtcata 10

<210> 569

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 569

aatccttccg 10

<210> 570

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 570

gaggattgaa 10

<210> 571

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 571

atcggagtgc 10

<210> 572

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 572

gcgttaagtg 10

<210> 573

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 573

cctcggcaat 10

<210> 574

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 574

ttaacggctt 10

<210> 575

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 575

tgattccaca 10

<210> 576

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 576

cgcaacatgc 10

<210> 577

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 577

tcaatgaggt 10

<210> 578

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 578

gtccaagctg 10

<210> 579

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 579

gcgcactaag 10

<210> 580

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 580

cggtgagtga 10

<210> 581

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 581

tgaatccgac 10

<210> 582

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 582

aatgctcact 10

<210> 583

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 583

atcggttcca 10

<210> 584

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 584

cattcgattc 10

<210> 585

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 585

ttatgcctac 10

<210> 586

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 586

atcctccgac 10

<210> 587

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 587

cgcagatata 10

<210> 588

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 588

acaacatgtg 10

<210> 589

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 589

tcggatgagg 10

<210> 590

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 590

cgtgcgatca 10

<210> 591

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 591

gatcttacgt 10

<210> 592

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 592

gagtaggcct 10

<210> 593

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 593

aagagagaag 10

<210> 594

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 594

gttctcacgg 10

<210> 595

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 595

aagcggtgaa 10

<210> 596

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 596

cgctcagtta 10

<210> 597

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 597

ctagacactc 10

<210> 598

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 598

gcttattgct 10

<210> 599

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 599

tgcgttctgc 10

<210> 600

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 600

tcaacgcact 10

<210> 601

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 601

cttgcttaca 10

<210> 602

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 602

ctcctcgcaa 10

<210> 603

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 603

tctcagcctc 10

<210> 604

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 604

gacggagtac 10

<210> 605

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 605

acgtctatct 10

<210> 606

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 606

gaatagagtg 10

<210> 607

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 607

aggatacggt 10

<210> 608

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 608

tgaagctagg 10

<210> 609

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 609

aacctcgcac 10

<210> 610

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 610

gatccggact 10

<210> 611

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 611

gtgtctacag 10

<210> 612

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 612

acggagaatc 10

<210> 613

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 613

tgttacctca 10

<210> 614

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 614

tcaatacgtg 10

<210> 615

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 615

ctaagttggt 10

<210> 616

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 616

cgcggattga 10

<210> 617

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 617

acctcacata 10

<210> 618

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 618

cggactgtct 10

<210> 619

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 619

cgtggcagaa 10

<210> 620

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 620

attcgaatgc 10

<210> 621

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 621

taggttcaag 10

<210> 622

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 622

gtccactctc 10

<210> 623

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 623

gaatagtgct 10

<210> 624

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 624

tcaatggcgg 10

<210> 625

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 625

aagcatcctg 10

<210> 626

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 626

gtggtgttca 10

<210> 627

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 627

gtacaacgtt 10

<210> 628

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 628

cctgcagcat 10

<210> 629

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 629

tctatcgtac 10

<210> 630

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 630

cactcgtagc 10

<210> 631

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 631

tgcagcagca 10

<210> 632

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 632

agatgtaagg 10

<210> 633

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 633

gtgtaaccgc 10

<210> 634

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 634

catcggaaga 10

<210> 635

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 635

gaggaattac 10

<210> 636

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 636

tgttcgctct 10

<210> 637

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 637

accgtctata 10

<210> 638

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 638

tgcctcagag 10

<210> 639

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 639

acaagtgccg 10

<210> 640

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 640

ctaactggtt 10

<210> 641

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 641

cagaacgtgg 10

<210> 642

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 642

gttcttctgt 10

<210> 643

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 643

cggtgaagtc 10

<210> 644

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 644

gtaagatgag 10

<210> 645

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 645

tgccatcaca 10

<210> 646

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 646

tcctcggata 10

<210> 647

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 647

acagtgtcct 10

<210> 648

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 648

aatgccacac 10

<210> 649

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 649

gaccactcga 10

<210> 650

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 650

atggacaaca 10

<210> 651

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 651

aacctacggt 10

<210> 652

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 652

tctaggattg 10

<210> 653

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 653

cggattctcg 10

<210> 654

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 654

cgatcttctc 10

<210> 655

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 655

tcatcggaat 10

<210> 656

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 656

gttggaggac 10

<210> 657

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 657

acacatgcta 10

<210> 658

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 658

ccttaggacg 10

<210> 659

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 659

ctaaccaatc 10

<210> 660

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 660

aacgcacgag 10

<210> 661

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 661

gtcggttcac 10

<210> 662

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 662

tggctcatgt 10

<210> 663

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 663

tggtggttgt 10

<210> 664

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 664

gatatacgca 10

<210> 665

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 665

cacgaacact 10

<210> 666

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 666

tgcgtgagca 10

<210> 667

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 667

gtactgacga 10

<210> 668

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 668

ccgtgagttc 10

<210> 669

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 669

acttacttgg 10

<210> 670

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 670

agaagctcat 10

<210> 671

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 671

gttactggac 10

<210> 672

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 672

tagcctcatg 10

<210> 673

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 673

tgacaatgac 10

<210> 674

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 674

aatcacctct 10

<210> 675

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 675

aacagacctg 10

<210> 676

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 676

gctagtgtgt 10

<210> 677

<211> 10

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> tag sequence for base balance

<400> 677