ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ И ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ОТ НЕАЛКОГОЛЬНОЙ ЖИРОВОЙ БОЛЕЗНИ ПЕЧЕНИ Российский патент 2024 года по МПК A61K31/423 A61K31/7042 A61K31/7048 A61P1/16 

Область техники

[0001]

Настоящее изобретение относится к профилактическому и/или терапевтическому средству от неалкогольной жировой болезни печени.

Уровень техники

[0002]

Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) представляет собой жировую болезнь печени, не связанную с алкогольным гепатитом или вирусным гепатитом. По оценкам, 30% населения в мире страдает от НАЖБП. НАЖБП представляет собой общий термин для обозначения ряда состояний от простого стеатоза до неалкогольного стеатогепатита (NASH). Простой стеатоз представляет собой накопление жира в гепатоцитах и имеет относительно хороший прогноз. NASH включает как жировой гепатоз, так и воспаление печени и может привести к относительно тяжелому состоянию, такому как фиброз ткани печени, цирроз печени или гепатоцеллюлярная карцинома. Лечение вирусных гепатитов, таких как гепатит С, в последнее время быстро прогрессирует, и поэтому ожидается, что в будущем число пациентов с раком печени, вызванным вирусом, уменьшится. Напротив, ожидается увеличение числа пациентов с раком печени в результате NASH (непатентные документы 1, 2 и 3)

[0003]

Считается, что НАЖБП развивается по широко известному механизму «двухударной теории», при которой НАЖБП прогрессирует от стадии накопления жира в гепатоцитах до стадии воспаления/фиброза печени (непатентный документ 4). Кроме того, недавно была предложена «теория множественных параллельных ударов», в которой различные факторы участвуют в развитии НАЖБП параллельно (непатентный документ 5). В диагностике NASH ключевыми факторами являются баллонирование гепатоцитов, тельца Мэллори-Денка и фиброз. Руководство по клинической практике НАЖБП/NASH Японского общества гастроэнтерологов (The NAFLD/NASH Clinical Practice Guideline of the Japanese Society of Gastroenterology) определяет патологический диагностический критерий для NASH как «НАЖБП с баллонирующей дегенерацией гепатоцитов с воспалением в дополнение к макровезикулярному жировому перерождению».

Matteoni et al. классифицировали пациентов с НАЖБП на четыре стадии на основании патологических результатов в свете их прогноза и определили типы 3 и 4 как NASH (непатентные документы 3 и 6). Увеличение гепатоцитов и баллонирующая дегенерация являются патологическими результатами, которые указывают на то, что накопление жира вызывает дегенерацию цитоскелета. Эти результаты являются ключевыми критериями диагностики для NASH.

[0004]

Лечение НАЖБП основывается, главным образом, на лечении ожирения, диабета, дислипидемии и гипертонии путем улучшения образа жизни, такого как диетотерапия и лечебная физкультура. Помимо улучшения образа жизни, в клинической практике проводят медикаментозное лечение. Лекарственные средства для лечения предназначены для инсулинорезистентности, нарушения липидного обмена, гипертонии или окислительного стресса. Лекарственные средства, используемые для инсулинорезистентности, включают инсулин-сенсибилизирующее лекарственное средство, такое как производные на основе тиазолидина (пиоглитазон, росиглитазон и т.п.), которые являются лигандами ядерного рецептора PPARγ, участвующего в повышении чувствительности к инсулину, или лекарственные средства на основе бигуанида (метформин и т.п.). Лекарственные средства, используемые для нарушений липидного обмена, включают лекарственные средства на основе фибратов (фенофибрат, безафибрат и т.п.), которые являются агонистами PPARα, препараты на основе статинов или ингибиторы кишечной реабсорбции холестерина (эзетимиб и т.п.). Лекарственные средства, используемые при гипертонии, включают антагонисты рецептора ангиотензина II типа 1 (ARB) (непатентные документы 1 и 3).

Кроме того, при окислительном стрессе лекарственные средства, используемые в качестве антиоксиданта, включают витамин Е.

[0005]

Соответствующая схема лечения для пациента может быть выбрана в зависимости от основного заболевания из этих медикаментозных методов лечения. Однако, любое медикаментозное лечение требует дальнейшего изучения. К сожалению, НАЖБП не имеет в настоящее время доступного медикаментозного лечения.

[0006]

Что касается лекарственных средств на основе фибрата, фенофибрат, как сообщается, был исследован в отношении эффекта на НАЖБП в клинических испытаниях (непатентный документ 7). Кроме того, в патентном документе 1 раскрыто, что (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляная кислота или ее соль, или ее сольват обладает селективным PPARα активирующим действием, и в патентном документе 2 раскрыто, что соединение является полезным для профилактики и лечения неалкогольной жировой болезни печени. Между тем, что касается ингибиторов натрий-глюкозного котранспортера 2 (SGLT2), в отношении remogurifurojin было проведено клиническое исследование и, как сообщается, он оказывает лечебное действие на NASH (непатентный документ 8). Наряду с увеличением количества пациентов с метаболическим синдромом во всем мире прогнозируется увеличение числа пациентов с NASH. Поскольку считается, что NASH является причиной невирусной гепатоцеллюлярной карциномы, которая является основным фактором смерти от рака (непатентный документ 9), желательно создать более эффективное лечение.

Перечень цитируемых ссылочных документов

Патентный документ

[0007]

Патентный документ 1: WO 2005/023777

Патентный документ 2: WO 2015/005365

Непатентный документ

[0008]

Непатентный документ 1: Chalasani N. et al. Hepatology, 55, 2005-23 (2012)

Непатентный документ 2: Musso G. et al. Nat. Rev. Drug Discov. 15 (4), 249-74 (2016.1)

Непатентный документ 3: NAFLD/NASH Clinical Practice Guideline, 2014 of the Japanese Society of Gastroenterology

Непатентный документ 4: Day CP. et al, Gastroenterology, 114 (4), 842-5 (1998)

Непатентный документ 5: Tilg H. et al. Hepatology, 52, 1836-46 (2010)

Непатентный документ 6: Matteoni CA. et al. Gastroenterology, 116, 1413-9 (1999)

Непатентный документ 7: Fernandez-Miranda C. et al. Dig. Liver Dis., 40, 200-5 (2008)

Непатентный документ 8: Wilkison W. et al. Abstract O047. International Liver Congress; April 22-26, 2015

Непатентный документ 9: Fujii M. et al. Med. Mol. Morphol, 46, 141-52 (2013)

Краткое изложение сущности изобретения

Техническая задача

[0009]

Целью настоящего изобретения является создание фармацевтической композиции и/или комбинации лекарственных средств, которые оказывают предотвращающее и/или улучшающее действие на увеличение липидных капель в гепатоцитах и/или баллонирование гепатоцитов и, следовательно, способны предотвращать и/или лечить НАЖБП и NASH.

Решение задачи

[0010]

В связи с изложенными проблемами, для того, чтобы найти средство, полезное для профилактики и/или лечения неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), в частности, тяжелого неалкогольного стеатогепатита (NASH), авторы настоящего изобретения провели интенсивные исследования с использованием мышиной модели NASH-HCC. Они обнаружили, что комбинация (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляной кислоты (далее также называемая в качестве соединения 1), которая является агонистом PPARα с ингибитором SGLT2, который описан в Expert Opin. Investig. Drugs (2013) 22(4): 463-486 etc., оказывает сильные действия в отношении уменьшения размера липидной капли в гепатоцитах и/или для подавления баллонирования гепатоцитов, и, как следствие, для предотвращения и/или лечения НАЖБП и NASH. Настоящее изобретение было осуществлено на основе этих результатов.

[0011]

Другими словами, настоящее изобретение относится к композиции, набору или тому подобному, характеризующемуся комбинацией агониста PPARα с ингибитором SGLT2. Более конкретно, настоящее изобретение относится к следующим пунктам [1]-[52].

[1] Профилактическое и/или терапевтическое средство от болезни печени, включающее комбинацию агониста PPARα с ингибитором SGLT2.

[2] Профилактическое и/или терапевтическое средство по пункту [1], где заболевание печени включает неалкогольную жировую болезнь печени.

[3] Профилактическое и/или терапевтическое средство по пункту [2], где неалкогольная жировая болезнь печени включает неалкогольный стеатогепатит.

[4] Профилактическое и/или терапевтическое средство по пункту [2], обладающее эффектом подавления баллонирования гепатоцитов у субъекта с неалкогольной жировой болезнью печени.

[5] Профилактическое и/или терапевтическое средство по пункту [1], где заболевание печени включает цирроз печени или гепатоцеллюлярную карциному.

[6] Профилактическое и/или терапевтическое средство по любому из пунктов [1]-[5], где агонист PPARα представляет собой (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляную кислоту или ее соль, или ее сольват.

[7] Профилактическое и/или терапевтическое средство по любому из пунктов [1]-[6], где ингибитор SGLT2 выбран из дапаглифлозина, канаглифлозина, ипраглифлозина, эмпаглифлозина, лузеоглифлозина, тофоглифлозина, эртуглифлозина, сотаглифлозина, бексаглифлозина или ремоглифлозина.

[8] Профилактическое и/или терапевтическое средство по любому из пунктов [1]-[7], представляющее собой комбинированное лекарственное средство.

[9] Профилактическое и/или терапевтическое средство по любому из пунктов [1]-[7], представляющее собой набор.

[0012]

[10] Лекарственное средство для применения в профилактике и/или лечении заболевания печени, включая комбинацию агониста PPARα с ингибитором SGLT2.

[11] Лекарственное средство по пункту [10], где заболевание печени включает неалкогольную жировую болезнь печени.

[12] Лекарственное средство по пункту [11], где неалкогольная жировая болезнь печени включает неалкогольный стеатогепатит.

[13] Лекарственное средство по пункту [11], обладающее эффектом подавления баллонирования гепатоцитов у субъекта с неалкогольной жировой болезнью печени.

[14] Лекарственное средство по пункту [10], где заболевание печени включает цирроз печени или гепатоцеллюлярную карциному.

[15] Лекарственное средство по любому из пунктов [10] - [14], где агонист PPARα представляет собой (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляную кислоту или ее соль, или ее сольват.

[16] Лекарственное средство по любому из пунктов [10] - [15], где ингибитор SGLT2 выбран из дапаглифлозина, канаглифлозина, ипраглифлозина, эмпаглифлозина, лузеоглифлозина, тофоглифлозина, эртуглифлозина, сотаглифлозина, бексаглифлозина или ремоглифлозина.

[17] Лекарственное средство по любому из пунктов [10] -[16], представляющее собой комбинированное лекарственное средство.

[18] Лекарственное средство по любому из пунктов [10] - [16], представляющее собой набор.

[0013]

[19] Фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения заболевания печени, включающая агонист PPARα, ингибитор SGLT2 и фармацевтически приемлемый носитель.

[20] Фармацевтическая композиция по пункту [19], где заболевание печени включает неалкогольную жировую болезнь печени.

[21] Фармацевтическая композиция по пункту [20], где неалкогольная жировая болезнь печени включает неалкогольный стеатогепатит.

[22] Фармацевтическая композиция по пункту [20], обладающая эффектом подавления баллонирования гепатоцитов у субъекта с неалкогольной жировой болезнью печени.

[23] Фармацевтическая композиция по пункту [19], где заболевание печени включает цирроз печени или гепатоцеллюлярную карциному.

[24] Фармацевтическая композиция по любому из пунктов [19]-[23], где агонист PPARα представляет собой (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляную кислоту или ее соль, или ее сольват.

[25] Фармацевтическая композиция по любому из пунктов [19]-[24], где ингибитор SGLT2 выбран из дапаглифлозина, канаглифлозина, ипраглифлозина, эмпаглифлозина, лузеоглифлозина, тофоглифлозина, эртуглифлозина, сотаглифлозина, бексаглифлозина или ремоглифлозина.

[0014]

[26] Способ профилактики и/или лечения заболевания печени, включающий процесс введения субъекту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества агониста PPARα и процесс введения субъекту эффективного количества ингибитора SGLT2.

[27] Способ профилактики и/или лечения по пункту [26], где заболевание печени включает неалкогольную жировую болезнь печени.

[28] Способ профилактики и/или лечения по пункту [27], где неалкогольная жировая болезнь печени включает неалкогольный стеатогепатит.

[29] Способ профилактики и/или лечения по пункту [27], для подавления баллонирования гепатоцитов у субъекта с неалкогольной жировой болезнью печени.

[30] Способ профилактики и/или лечения по пункту [26], где заболевание печени включает цирроз печени или гепатоцеллюлярную карциному.

[31] Способ профилактики и/или лечения по любому из пунктов [26]-[30], где агонист PPARα представляет собой (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляную кислоту или ее соль, или ее сольват.

[32] Способ профилактики и/или лечения по любому из пунктов [26]-[31], где ингибитор SGLT2 выбран из дапаглифлозина, канаглифлозина, ипраглифлозина, эмпаглифлозина, лузеоглифлозина, тофоглифлозина, эртуглифлозина, сотаглифлозина, бексаглифлозина или ремоглифлозина.

[33] Способ профилактики и/или лечения по любому из пунктов [26]-[32], где агонист PPARα и ингибитор SGLT2 вводят одновременно.

[34] Способ профилактики и/или лечения по любому из пунктов [26]-[32], где агонист PPARα и ингибитор SGLT2 вводят раздельно с интервалами.

[0015]

[35] Применение агониста PPARα и ингибитора SGLT2 для производства профилактического и/или терапевтического средства при болезни печени.

[36] Применение по пункту [35], где заболевание печени включает неалкогольную жировую болезнь печени.

[37] Применение по пункту [36], где неалкогольная жировая болезнь печени включает неалкогольный стеатогепатит.

[38] Применение по пункту [36], где средство обладает эффектом подавления баллонирования гепатоцитов у субъекта с неалкогольной жировой болезнью печени.

[39] Применение по пункту [35], где заболевание печени включает цирроз печени или гепатоцеллюлярную карциному.

[40] Применение по любому из пунктов [35]-[39], где агонист PPARα представляет собой (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляную кислоту или ее соль, или ее сольват.

[41] Применение по любому из пунктов [35]-[40], где ингибитор SGLT2 выбран из дапаглифлозина, канаглифлозина, ипраглифлозина, эмпаглифлозина, лузеоглифлозина, тофоглифлозина, эртуглифлозина, сотаглифлозина, бексаглифлозина или ремоглифлозина.

[42] Применение по любому из пунктов [35]-[41], где средство представляет собой комбинированное лекарственное средство.

[43] Применение по любому из пунктов [35]-[41], где средство представляет собой набор.

[0016]

[44] Комбинация агониста PPARα с ингибитором SGLT2 для профилактики и/или лечения болезни печени.

[45] Комбинация по пункту [44], где заболевание печени включает неалкогольную жировую болезнь печени.

[46] Комбинация по пункту [45], где неалкогольная жировая болезнь печени включает неалкогольный стеатогепатит.

[47] Комбинация по пункту [45], обладающая эффектом подавления баллонирования гепатоцитов у субъекта с неалкогольной жировой болезнью печени.

[48] Комбинация по пункту [44], где заболевание печени включает цирроз печени или гепатоцеллюлярную карциному.

[49] Комбинация по любому из пунктов [44]-[48], где агонист PPARα представляет собой (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляную кислоту или ее соль, или ее сольват.

[50] Комбинация по любому из пунктов [44]-[49], где ингибитор SGLT2 выбран из дапаглифлозина, канаглифлозина, ипраглифлозина, эмпаглифлозина, лузеоглифлозина, тофоглифлозина, эртуглифлозина, сотаглифлозина, бексаглифлозина или ремоглифлозина.

[51] Комбинация по любому из пунктов [44]-[50], являющаяся комбинированным лекарственным средством.

[52] Комбинация по любому из пунктов [44]-[50], которая является набором.

Полезные эффекты изобретения

[0017]

Терапевтическое средство, лекарственное средство, фармацевтическая композиция, способ лечения, применение или комбинация по настоящему изобретению могут подавлять увеличение липидных капель в гепатоцитах и/или баллонирование гепатоцитов у пациента с неалкогольной жировой болезнью печени (НАЖБП) или неалкогольным стеатогепатитом (NASH). Соответственно, настоящее изобретение может обеспечить новую профилактику и/или лечение НАЖБП и NASH. В частности, настоящее изобретение может обеспечить профилактику и/или лечение NASH высокой степени тяжести.

Краткое описание фигур

[0018]

На фиг.1 показан размер липидной капли (мкм²) в гепатоцитах при введении соединения 1 (0,1 мг/кг), тофоглифлозина (10 мг/кг) или комбинации соединения 1 (0,1 мг/кг) и тофоглифлозина (10 мг/кг) по настоящему изобретению.

На фиг.2 показано баллонирование гепатоцитов при введении соединения 1 (0,1 мг/кг), тофоглифлозина (10 мг/кг) или комбинации соединения 1 (0,1 мг/кг) и тофоглифлозина (10 мг/кг) по настоящему изобретению.

На фиг.3 показано баллонирование гепатоцитов при введении соединения 1 (0,1 мг/кг), ипраглифлозина (3 мг/кг) или комбинации соединения 1 (0,1 мг/кг) и ипраглифлозина (3 мг/кг) по настоящему изобретению.

Описание вариантов осуществления

[0019]

В настоящем изобретении агонист PPARα означает общий термин, обозначающий соединения, активирующие рецептор PPARα-типа. Рецептор PPARα-типа представляет собой тип рецепторов, активируемых пролифератором пероксисом (PPAR), которые являются одним из видов ядерных рецепторов. Рецептор PPARα-типа участвует в окислении жиров. В частности, включены фибраты, такие как фенофибрат, клофибрат, безафибрат, клинофибрат, ципрофибрат, этофибрат и гемфиброзил и WY-14643 (пириниксовая кислота), GW-7647 (2-(4-(2-(1-(1-циклогексанбутил)-3-циклогексилуреидо)этил)фенилтио)-2-метилпропионат) и пемафибрат. (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляная кислота (Соединение 1), которое также известно под общим названием пемафибрат, используется в настоящем изобретении. Его можно получить, например, в соответствии со способом, описанным в WO 2005/023777, или в соответствии с любым общеизвестным способом, описанным в документах.

[0020]

В настоящем изобретении ингибитор SGLT2 означает общий термин соединений, обладающих ингибирующим действием на натрий-глюкозный котранспортер 2 (SGLT2), участвующий в реабсорбции глюкозы в почке. В частности, включены дапаглифлозин, канаглифлозин, ипраглифлозин (ASP1941), эмпаглифлозин (BI 10773), лузеоглифлозин (TS-071), тофоглифлозин (CSG452), эртуглифлозин (PF-04971729), сотаглифлозин (LX-4211), бексаглифлозин (EGT-1442) и ремоглифлозин (KGT-1681). Каждое из этих соединений может быть использовано в виде фармацевтически приемлемой соли и/или сольвата в зависимости от ситуации, но настоящее изобретение включает все из них.

[0021]

Ипраглифлозин является общепринятым названием для соединения (1S)-1,5-ангидро-1-C-{3-[(1-бензотиофен-2-ил)метил]-4-фторфенил}-D-глюцитол. Ипраглифлозин можно использовать, например, как ипраглифлозин L-пролин (1:1).

[0022]

Тофоглифлозин является общепринятым названием для соединения (1S,3'R,4'S,5'S,6'R)-6-[(4-этилфенил)метил]-6'-(гидроксиметил)-3',4',5',6'-тетрагидро-3H-спиро[2-бензофуран-1,2'-пиран]-3',4',5'-триол. Тофоглифлозин можно использовать, например, как тофоглифлозин моногидрат.

[0023]

Ипраглифлозин можно получить, например, в соответствии со способом, описанным в WO 2004/080990, или в соответствии с любым общеизвестным способом, описанным в документах.

[0024]

Тофоглифлозин можно получить, например, в соответствии со способом, описанным в WO 2006/080421, или в соответствии с любым общеизвестным способом, описанным в документах.

[0025]

В настоящем изобретении заболевание печени включает ожирение печени, гепатит, НАЖБП, NASH, цирроз печени и рак печени, такой как гепатоцеллюлярная карцинома.

[0026]

«Соль» по настоящему изобретению конкретно не ограничивается при условии, что она является фармацевтически приемлемой. Она включает соли щелочных металлов, такие как натриевая соль и калиевая соль; соли щелочноземельных металлов, такие как соль кальция и соль магния; соли неорганических оснований, такие как соль аммония; соли органических оснований, такие как соль триалкиламина; соли минеральных кислот, такие как хлористоводородная соль и сульфатная соль; и соли органических кислот, такие как ацетатная соль.

[0027]

«Сольват» по настоящему изобретению включает гидрат и алкоголят (такой как этанолат).

[0028]

Комбинированное лекарственное средство представляет собой фармацевтический продукт, включающий два или более активных ингредиента в одной лекарственной форме. В настоящем изобретении примером комбинированного лекарственного средства может быть таблетка, включающая агонист PPARα и ингибитор SGLT2 в эффективном количестве.

[0029]

Набор представляет собой набор из двух или более фармацевтических продуктов. Каждый из фармацевтических продуктов могут приниматься или вводиться одновременно или раздельно с интервалами. В настоящем изобретении примером набора может быть комбинация фармацевтического продукта, содержащего эффективное количество агониста PPARα, с фармацевтическим продуктом, содержащим эффективное количество ингибитора SGLT2. В настоящем изобретении примером набора может быть комбинация фармацевтического продукта, содержащего эффективное количество агониста PPARα, с фармацевтическим продуктом, содержащим эффективное количество ингибитора SGLT2.

[0030]

NASH характеризуется баллонированием гепатоцитов в дополнение к увеличению липидных капель в гепатоцитах (см. непатентные документы 3 и 6). Как описано в приведенных ниже примерах, комбинированное использование соединения 1 с ипраглифлозином значительно ингибировало баллонирование гепатоцитов у мыши NASH-HCC, которая является животной моделью для NASH. Кроме того, комбинированное применение соединения 1 с тофоглифлозином значительно ингибировало баллонирование гепатоцитов у мыши NASH-HCC и ингибировало увеличение липидных капель в гепатоцитах. Соответственно, комбинированное применение агониста PPARα с ингибитором SGLT2 по настоящему изобретению является полезным в качестве профилактического и/или терапевтического средства для лечения NASH у млекопитающих, включая людей.

[0031]

Терапевтическое средство, лекарственное средство и тому подобное, полученные путем комбинирования агониста PPARα с ингибитором SGLT2 по настоящему изобретению, можно использовать отдельно или в комбинации с другими фармацевтически приемлемыми носителями для получения лекарственной формы, такой как таблетки, капсулы, гранулы, порошки, лосьоны, мази, инъекции или суппозитории. Эти препараты могут быть получены в соответствии с известным способом.

[0032]

Терапевтические средства, лекарственные средства и тому подобное, полученные путем комбинирования агониста PPARα с ингибитором SGLT2 по настоящему изобретению, вводят перорально или парентерально. Специалисты в данной области могут соответствующим образом установить дозу в зависимости от массы тела, возраста, пола, симптомов и тому подобного пациента. Когда соединение 1 в качестве агониста PPARα вводят взрослому, суточная доза может составлять от 0,01 до 1000 мг, предпочтительно от 0,01 до 10 мг, более предпочтительно от 0,05 до 5 мг, и его вводят предпочтительно в 1-3 раздельными дозами. Когда ипраглифлозин используют в качестве ингибитора SGLT2, суточная доза может составлять от 0,1 до 1000 мг, предпочтительно от 1 до 200 мг. Когда тофоглифлозин используют в качестве ингибитора SGLT2, суточная доза может составлять от 0,1 до 500 мг, предпочтительно от 1 до 100 мг. В любом случае суточную дозу вводят в 1-3 раздельными дозами.

Примеры

[0033]

Далее настоящее изобретение описано более конкретно со ссылкой на примеры, но настоящее изобретение не ограничивается примерами ни в какой степени.

[0034]

Пример 1. Эффект соединения 1 в комбинации с тофоглифлозином на мышиной модели NASH

Мышь NASH-HCC представляет собой животную модель, у которой развивается цирроз печени из жирового гепатоза по причине NASH, когда ее кормят рационом с высоким содержанием жиров, и впоследствии развивается гепатоцеллюлярная карцинома (непатентный документ 9). Эффект соединения 1 в комбинации с тофоглифлозином исследовали на мышиной модели NASH-HCC.

В этом исследовании соединение 1 получали в соответствии со способом, описанным в патентном документе 1. Тофоглифлозин моногидрат (Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) использовали в качестве конкретного примера тофоглифлозина.

[0035]

1) Используемое животное:

Мыши NASH-HCC получали со ссылкой на непатентный документ 9 и использовали для этого эксперимента. В частности, самцам мышей C57BL/6J подкожно вводили 200 мкг стрептозотоцина на второй день после появления. Мышей кормили вволю получали рационом с высоким содержанием жиров (HFD-32, Clea Japan, Inc.) в течение 2 недель, начиная с 4-недельного возраста. Мышей разделили на четыре группы, как описано ниже в 2), и им вводили лекарственные средства от 6-недельного до 9-недельного возраста, как описано ниже в 3). Суточное потребление пищи мышами в каждой группе измеряли при введении лекарственных средств таким образом, чтобы мышей всех групп кормили тем же количеством пищи, что и мышей контрольной группы.

2) Способ распределения по группам:

Мышей NASH-HCC разделяли на четыре группы, которые включали контрольную группу, группу, которой вводили 0,1 мг/кг соединения 1, группу, которой вводили 10 мг/кг тофоглифлозина, и группу, которой вводили их комбинацию (0,1 мг/кг соединения 1 и 10 мг/кг тофоглифлозина) (n=5-7). Мышей разделяли непосредственно перед началом введения лекарственного средства (в возрасте 6 недель). Не было никакой разницы в средней массе тела между группами.

3) Введение лекарственного средства:

Контрольной группе вводили 3% водный раствор гуммиарабика. Соединение 1 и/или тофоглифлозин растворяли в 3% водном растворе гуммиарабика и вводили группе, которой вводили соединение 1, группе, которой вводили тофоглифлозин, или группе, которой вводили их комбинацию, соответственно. Мышам каждой группы перорально вводили раствор в 5 мл/кг массы тела один раз в день. Период введения составлял 3 недели, начиная с 6-недельного возраста, как описано выше.

[0036]

4) Способ наблюдения и исследования:

После периода введения печень каждой мыши вырезали под наркозом и фиксировали 10% нейтральным забуференным раствором формалина для приготовления образцов, окрашенных гематоксилином-эозином. Используя образцы, размер липидных капель в гепатоцитах анализировали с помощью программного обеспечения для анализа изображений Image J. Площадь от 6000 до 10000 липидных капель измеряли в каждом образце. Медиану площади липидной капли рассчитывали для каждой мыши, а затем медиану и квартиль рассчитывали для каждой группы на основе медианы для каждой мыши в группе. Эти данные выражали в виде диаграммы размаха (фиг. 1).

Баллонирование гепатоцитов у каждой мыши оценивали в слепых условиях в соответствии со следующими критериями (Kleiner et al., Hepatology 41, 1313-21, 2005).

Нет клеток, подвергшихся баллонной дистрофии: 0

Клетка, подвергшаяся балонной дистрофии, встречается редко (несколько баллонных клеток): 1

Значительное количество баллонных клеток или выраженное (баллонирование): 2

Затем среднее значение баллов (балл баллонирования) рассчитывали в каждой группе и показывали значения (фиг. 2).

Статистическую обработку выполняли с использованием статистического программного обеспечения EZR, которое расширяет функции R и R Commander.

Программное обеспечение распространяется бесплатно на веб-сайте Jichi Medical University Saitama Medical Center (Bone Marrow Transplantation (2013) 48, 452-458). Тест Steel (N=5-7) осуществляли с использованием EZR, группа с введением лекарственного средства была отмечена знаком * на фигурах, когда группа имела существенное различие при p <0,05 относительно контрольной группы, и помечена знаком **, когда группа имела существенное различие при р <0,01.

[0037]

5) Результат

Как показано на фиг. 1, средний размер липидных капель составлял 1,17 (мкм²) в контрольной группе, 1,00 (мкм²) в группе, которой вводили 0,1 мг/кг соединения 1, и 1,00 (мкм²) в группе, которой вводили 10 мг/кг тофоглифлозина. Хотя наблюдалась тенденция уменьшения размера липидных капель в гепатоцитах, статистически значимого различия не было. В отличие от групп с одним введением, средний размер липидных капель составлял 0,89 (мкм²) в группе с введением их комбинации, и наблюдалось значимое уменьшение (p=0,037) по сравнению с контрольной группой.

Кроме того, как показано на фиг. 2, балл баллонирования составил 1,33 в контрольной группе, 0,60 в группе, которой вводили 0,1 мг/кг соединения 1, и 0,71 в группе, которой вводили 10 мг/кг тофоглифлозина. Несмотря на тенденцию подавления баллонирования гепатоцитов, статистически значимого различия не выявлено. В отличие от групп с одним введением, балл баллонирования составлял 0,14 в группе с введением их комбинации, и по сравнению с контрольной группой наблюдалось заметное подавление (р=0,0089) баллонирования гепатоцитов.

[0038]

Пример 2. Эффект соединения 1 в комбинации с ипраглифлозином на мышиной модели NASH

Эффект соединения 1 в комбинации с ипраглифлозином исследовали на мышах NASH-HCC (непатентный документ 9).

В этом исследовании соединение 1 получали в соответствии со способом, описанным в патентном документе 1. Ипраглифлозин (Shanghai Haoyuan Chamexpress Co., Ltd., Shanghai, China) использовали в качестве конкретного примера ипраглифлозина.

[0039]

1) Используемые животные:

Мышей NASH-HCC получали так же, как в 1) Примера 1, и их использовали для этого эксперимента.

2) Способ распределения по группам:

Мышей NASH-HCC разделяли на четыре группы, которые включали контрольную группу, группу, которой вводили 0,1 мг/кг соединения 1, группу, которой вводили 3 мг/кг ипраглифлозина, и группу, которой вводили их комбинацию (0,1 мг/кг соединения 1 и 3 мг/кг ипраглифлозина) (n=8). Мышей разделяли непосредственно перед началом введения лекарственного средства (в возрасте 6 недель). Не было никакой разницы в средней массе тела между группами.

3) Введение лекарственного средства:

Контрольной группе вводили 3% водный раствор гуммиарабика. Соединение 1 и/или ипраглифлозин растворяли в 3% водном растворе гуммиарабика и вводили группе, которой вводили соединение 1, группе, которой вводили ипраглифлозин, или группе, которой вводили их комбинацию, соответственно. Мышам каждой группы перорально вводили раствор в 5 мл/кг массы тела один раз в день. Период введения составлял 3 недели, начиная с 6-недельного возраста.

[0040]

4) Способ наблюдения и исследования:

Наблюдение и исследования проводили так же, как в 4) Примера 1.

[0041]

5) Результат

Как показано на фиг. 3 балл баллонирования составлял 1,50 в контрольной группе, 1,35 в группе, которой вводили 0,1 мг/кг соединения 1, и 0,88 в группе, которой вводили 3 мг/кг ипраглифлозина. Несмотря на тенденцию подавления баллонирования гепатоцитов, статистически значимого различия не выявлено. В отличие от групп с одним введением, балл баллонирования составлял 0,38 в группе с введением их комбинации, и по сравнению с контрольной группой наблюдалось заметное подавление (р=0,009) баллонирования гепатоцитов.

[0042]

Как видно из приведенных выше результатов, комбинированное применение соединения 1 с ингибитором SGLT2, таким как тофоглифлозин или ипраглифлозин, по настоящему изобретению, обеспечивает значительный эффект уменьшения размера липидных капель в гепатоцитах и подавления баллонирования гепатоцитов на мышиной модели NASH. Уменьшение размера липидных капель в гепатоцитах и подавление баллонирования гепатоцитов соответствуют улучшению состояния НАЖБП и NASH, что, в свою очередь, приводит к профилактике цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы, которые являются терминальными заболеваниями НАЖБП и NASH.

Промышленная применимость

[0043]

Поскольку комбинация агониста PPARα и ингибитора SGLT2 оказывает профилактическое и/или терапевтическое действие на НАЖБП и NASH, настоящее изобретение имеет промышленную применимость.

Настоящее изобретение относится к профилактическому и/или терапевтическому средству от заболевания печени, включающему комбинацию агониста PPARα с ингибитором SGLT2, где заболевание печени выбрано из группы, состоящей из неалкогольной жировой болезни печени, цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы, где агонист PPARα представляет собой (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляную кислоту или ее соль, где ингибитор SGLT2 представляет собой ипраглифлозин или тофоглифлозин. Настоящее изобретение обеспечивает значительный эффект уменьшения размера липидных капель в гепатоцитах и подавления баллонирования гепатоцитов на мышиной модели неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП). 5 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.

1. Профилактическое и/или терапевтическое средство от заболевания печени, включающее комбинацию агониста PPARα с ингибитором SGLT2,

где заболевание печени выбрано из группы, состоящей из неалкогольной жировой болезни печени, цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы,

где агонист PPARα представляет собой (R)-2-[3-[[N-(бензоксазол-2-ил)-N-3-(4-метоксифенокси)пропил]аминометил]фенокси]масляную кислоту или ее соль,

где ингибитор SGLT2 представляет собой ипраглифлозин или тофоглифлозин.

2. Профилактическое и/или терапевтическое средство по п. 1, где неалкогольная жировая болезнь печени представляет собой неалкогольный стеатогепатит.

3. Профилактическое и/или терапевтическое средство по п. 1, где заболевание печени представляет собой цирроз печени.

4. Профилактическое и/или терапевтическое средство по п. 1, где заболевание печени представляет собой гепатоцеллюлярную карциному.

5. Профилактическое и/или терапевтическое средство по любому из пп. 1-4, представляющее собой комбинированное лекарственное средство.

6. Профилактическое и/или терапевтическое средство по любому из пп. 1-4, представляющее собой набор.