НОВАЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКАЯ ФОРМА N,N'-БИС-[2-(1Н-ИМИДАЗОЛ-4-ИЛ)ЭТИЛ]ПРОПАНДИАМИДА И ЕЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2024 года по МПК C07D403/12 A61K31/4178 A61K31/4172 A61P29/00 A61P37/08 A61P11/02 

Область техники

Изобретение относится к областям медицины, фармакологии и химико-фармацевтической промышленности, а именно к новой кристаллической форме N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, содержащих ее фармацевтической композиции и лекарственной форме, которые могут найти применение для лечения и/или профилактики воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей.

Уровень техники

Синдром воспаления слизистой оболочки является одной из самых распространенных патологий верхних дыхательных путей, обычно относящейся к инфекционным, вазомоторным, аллергическим и другими видам ринитов. В общем случае при ринитах развивается отечность слизистой оболочки и гипертрофия стенок сосудов, что затрудняет дыхание и отрицательно сказывается на качестве жизни больного (С.Е. ИЛЬИНСКИЙ и М.Г. МИХАЙЛОВ, Диагностика и лечение хронических воспалительных заболеваний носоглотки у взрослых, РОССИЙСКАЯ РИНОЛОГИЯ, 2010, Т. 18, 3, с. 43-44).

Диагностика форм ринита проводится по жалобам пациента и клинической картине. В ряде случаев в дифференциальной диагностике необходимы лабораторные исследования и КТ околоносовых пазух. При идентификации аллергена лечение может ограничиться прекращением контакта с ним. При выраженных проявлениях в виде заложенности носа, зуда в носу, чиханья и стекания слизи по задней стенке глотки следует индивидуально подобрать пациенту адекватную фармакотерапию (А.Л. ГУСЕВА и М.Л. ДЕРБЕНЕВА Ринит: дифференциальная диагностика и принципы лечения, МЕДИЦИНСКИЙ СОВЕТ, 2020, 16, c. 102-108).

Решающее значение в лечении ринитов по-прежнему принадлежит своевременному использованию симптоматических средств, направленных на подавление механизмов развития клинических проявлений и облегчение течения болезни (А.В. ГУРОВ Отек слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Как с ним бороться?, РМЖ, 2009, Т. 17, 19, c. 1254-1258). Для симптоматической терапии используют сосудосуживающие препараты, антихолинергические препараты, кромоны, местные и системные антигистаминные средства, блокаторы рецепторов лейкотриенов, топические и системные глюкокортикостероиды, сорбенты, пре- и пробиотики.

Ближайшими аналогами рассматриваемого изобретения, применяемыми для симптоматического лечения ринитов, являются бисамиды формулы (I) и конкретный представитель бисамидов, соединение N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамид формулы (II), которые впервые были раскрыты в патентах RU 2665688 C2 и RU 2725881 C2. Соединения вводили в реакции с солями металлов в качестве хелаторов. Авторами показана возможность применения бисамидов формулы (I) для лечения и/или профилактики заболеваний, связанных с металлозависимыми реакциями свободнорадикального окисления, например, железоизбыточной анемии, атеросклероза, поздней порфирии, отравлений солями переходных металлов и т.д.

N,N′-Бис[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамид может быть получен по реакции диметилмалоната с гистамином в полярном органическом растворителе при температуре 85-120°С (RU 2679636 C1).

В патенте RU 2685277 C1 были детально исследованы новые свойства N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида. Показано, что соединение обладает эффективностью в подавлении активности гистаминового рецептора третьего типа, в терапии аллергических (таких как круглогодичный и персистирующий аллергический ринит) и других заболеваний, связанных с избыточной стимуляцией гистаминового рецептора третьего типа.

Одной из ключевых задач современной фармацевтической отрасли является разработка лекарственных форм, обладающих увеличенной скоростью развития терапевтического эффекта, что необходимо для предотвращения наступления тяжелых последствий. Это в большей степени справедливо и для симптоматических лекарственных средств. Следует также отметить, что лекарственное средство и фармацевтические композиции должны обладать способностью храниться в течение значительных периодов времени, не проявляя значимого изменения физико-химических свойств активного компонента.

Сведения об обладающих увеличенной скоростью развития терапевтического эффекта формах N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида не выявлены в научно-технической литературе. Из этого следует, что потенциал соединения на данный момент не раскрыт и не исследован до конца.

Таким образом, техническая проблема, которая не была решена, заключается в недостаточных стабильности, терапевтической эффективности и фармакокинетических параметрах (скорость развития терапевтического эффекта и биодоступность) лекарственных форм N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида.

Раскрытие сущности изобретения

Технический результат

Задачей настоящего изобретения является разработка стабильной при хранении и негигроскопичной новой формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, обладающей оптимальным набором физико-химических и фармакокинетических параметров.

Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что новая кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, ранее неизвестная из уровня техники, обладает пониженной гигроскопичностью и повышенной стабильностью с сохранением хорошей растворимости. Кроме того, фармацевтическая композиция, содержащая указанную новую кристаллическую форму, обладает улучшенной прессуемостью с хорошими показателями сыпучести без заметных электростатических явлений. Новая кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида также обладает улучшенной биодоступностью, которая, в частности, выражается в быстром развитии терапевтического эффекта. Указанные свойства справедливы и для содержащих новую кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида фармацевтической композиции и лекарственного средства.

Технические результаты, на достижение которых направлено настоящее изобретение, заключаются в:

- повышении краткосрочной стабильности при хранении формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и содержащих ее фармацевтической композиции и лекарственной формы;

- повышении долгосрочной стабильности формы N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и содержащих ее фармацевтической композиции и лекарственной формы;

- уменьшении гигроскопичности с сохранением достаточной растворимости формы N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида;

- улучшении прессуемости с сохранением хороших показателей сыпучести без заметных электростатических явлений фармацевтической композиции и лекарственной формы, содержащих форму N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида;

- увеличении терапевтической эффективности формы N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и содержащих ее фармацевтической композиции и лекарственной формы;

- улучшении биодоступности, в частности, проявляемой в увеличенной скорости развития терапевтического эффекта и улучшенных фармакокинетических показателях формы N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и содержащих ее фармацевтической композиции и лекарственной формы;

- эффективном жаропонижающем и обезболивающем действии в терапии воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей;

- расширении арсенала лекарственных средств для лечения и/или профилактики ринитов, фарингитов, синуситов и других воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей.

Под стабильностью понимается способность формы вещества, фармацевтической композиции и лекарственного средства сохранять химические, физические, микробиологические и биофармацевтические свойства в определенных границах на протяжении выбранного срока.

Под гигроскопичностью понимают свойство вещества поглощать водяные пары (влагу) из воздуха. Степень и интенсивность поглощения водяных паров зависят от химического состава вещества, формы вещества и от содержания водяных паров в воздухе.

Под прессуемостью понимают способность частиц порошка к когезии под давлением с образованием устойчивой твердой лекарственной формы. Сыпучесть лекарственной формы характеризует способность порошка равномерно заполнять заданную форму.

Под терапевтической эффективностью понимается способность лекарственного средства обеспечивать фармакологическое действие. Терапевтическая эффективность любого конкретного лекарственного средства может быть определена путем оценки ответа пациента или животного после введения ему лекарственного средства; при этом лекарственное средство с высокой терапевтической эффективностью будет обеспечивать большее ослабление симптомов и/или их исчезновение, чем лекарственное средство с низкой терапевтической эффективностью.

Разные кристаллические и аморфные формы определенного активного вещества, могут обладать различными свойствами, такими как профиль растворения, температура плавления, стабильность, гигроскопичность, форма частиц, плотность, биодоступность, электризуемость, прессуемость, сыпучесть и т.д. Данные свойства обязательно учитываются при изготовлении лекарственных средств. В частности, сильная электризуемость и низкая прессуемость не позволяют получить такую лекарственную форму, как таблетка. Лекарственные соединения должны обладать способностью хорошо растворяться и храниться в течение длительных периодов времени, не проявляя значительного изменения физико-химических свойств, например, не обводняться, что может приводить как к изменению химического состава лекарственно средства, так и к разрыхлению и рассыпанию лекарственной формы, например, таблетки.

Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

Настоящая техническая задача решается, а указанные технические результаты достигаются благодаря новой кристаллической форме N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида.

N,N'-Бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамид может быть представлен в виде мезомерных структур. Кристаллические формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида относятся к настоящему изобретению независимо от способа изображения мезомерной структуры. Мезомерные структуры включают:

Мезомеры по имидазольным группам: Мезомеры по амидным группам:

Например, N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамид и N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-5-ил)этил]пропандиамид являются мезомерами. Поэтому понятия «кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамид» и «кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-5-ил)этил]пропандиамид» являются эквивалентными понятиями.

Под мезомером (мезомерной структурой) понимают структуру в теории химического резонанса, возникающую из-за сопряжения кратных связей и/или неподеленных электронных пар в молекуле. В N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамиде мезомерный эффект возможен у двух имидазольных и двух амидных групп.

Учитывая мезомерный эффект, альтернативными названиями N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению являются:

Бис-1,3-(N^β-гистаминил)малоновая кислота;

N,N'-Бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]малонамид;

N,N'-Бис-[2-(1Н-имидазол-5-ил)этил]малонамид;

N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамид;

N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-5-ил)этил]пропандиамид.

Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению может быть охарактеризована положениями пиков в порошковой рентгенограмме, полученной с использованием Cu(Kα)-излучения, 2θ, град: 16.9±0.2, 20.0±0.2 и 21.2±0.2. В предпочтительном варианте кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению может быть охарактеризована положениями пиков в порошковой рентгенограмме, полученной с использованием Cu(Kα)-излучения, 2θ, град: 16.9±0.2, 19.7±0.2, 20.0±0.2, 21.2±0.2, 22.2±0.2, 23.0±0.2, 23.5±0.2, 26.7±0.2 и 28.8±0.2. В другом варианте кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению может быть охарактеризована положениями пиков в порошковой рентгенограмме, полученной с использованием Cu(Kα)-излучения, 2θ, град: 10.0±0.2, 16.9±0.2, 19.7±0.2, 20.0±0.2, 21.2±0.2, 22.2±0.2, 23.0±0.2, 23.5±0.2, 26.7±0.2, 28.8±0.2 и 32.3±0.2. В еще более предпочтительном варианте кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению может быть охарактеризована порошковой рентгенограммой, представленной на фиг. 1.

В другом варианте кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению может быть охарактеризована сингонией кристаллической решетки и параметрами элементарной кристаллической ячейки. Кристаллическая ячейка представляет собой параллелепипед, построенный на узлах кристаллической решетки, параллельные переносы (трансляции) которого в трех измерениях позволяют построить всю кристаллическую решетку. Параметрами кристаллической решетки являются величины ребер (a, b и c) и величины углов между ними (α, β и γ). В предпочтительном варианте сингонией кристаллической решетки кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению является моноклинная сингония. Кристалл моноклинной сингонии построен из параллелепипедов, в которых α и γ = 90°, β ≠ 90°. Параметрами кристаллической решетки моноклинной сингонии являются величины ребер и величина непрямого угла. В кристаллической форме N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению величины ребер составляют 8.51±0.50 Å, 4.59±0.50 Å и 18.00±0.50 Å (предпочтительно 8.51±0.20 Å, 4.59±0.20 Å и 18.00±0.20 Å); и величина угла составляет (град): 99.32°±5.00° (предпочтительно 99.32±2.00°). Следует учитывать, что наблюдаемые параметры кристаллической ячейки могут зависеть от температуры измерений. В предпочтительном варианте величины ребер составляют (Å, ангстрем) 8.51191(18) Å, 4.59550(13) Å и 18.0085(4) Å, и величина угла составляет (град) 99.3191(11)° при комнатной температуре (от 20 до 30°C, предпочтительно 25°C). В другом предпочтительном варианте величины ребер составляют (Å, ангстрем): 8.490(4) Å, 4.5613(19) Å и 17.918(9) Å, и величиной угла (град) 99.94(2)° при температуре 140 К.

Дополнительно кристаллическая ячейка и кристаллическая решетка твердой формы могут быть охарактеризованы данными на фиг. 2-4.

Понятие «кристаллическая форма» в контексте настоящего изобретения относится к веществу в твердой форме, в которой молекулы занимают упорядоченное положение в пространстве и образуют кристаллическую решетку. Упорядоченное положение молекул в кристаллической решетке называется дальним порядком. Структура определенного химического состава в результате какого-либо физико-химического воздействия (механического, термического, давление, влажность, растворение в различных растворителях при различных условиях) может в сильной степени изменять свои свойства. Большей частью это обуславливается изменением кристаллической структуры или искажением этой структуры под действием внешних сил или внутренних напряжений. Некоторые фармацевтически активные вещества могут образовывать кристаллические структуры более, чем одного типа. Разные по кристаллической структуре и свойствам кристаллические формы называют полиморфами. Фармацевтическая субстанция может также существовать в аморфной фазе. Аморфное состояние вещества отличается от кристаллического отсутствием упорядоченности во взаимном расположении атомов или молекул в веществе (дальний порядок взаимного расположения молекул), межмолекулярным расстоянием и более высокой внутренней энергией.

Для исследования кристаллических форм обычно применяют метод порошковой рентгеновской дифракции.

Метод порошковой рентгеновской дифрактометрии позволяет идентифицировать даже небольшие изменения в состоянии атомной решетки кристалла, не детектируемые другими методами. Рентгенография поликристаллических образцов позволяет определять состояния твердого тела (кристаллическое, разные его формы, аморфное, или их комбинации). Значение структурных исследований весьма велико. Определение связи между атомной структурой и свойствами вещества позволяет устанавливать рациональный контроль за технологическими процессами, раскрывать причины изменения этих свойств под действием того или иного фактора, дает возможность более сознательно управлять технологическим процессом создания фармацевтических субстанций и изменять его в нужном направлении.

Метод порошковой рентгеновской дифракции основан на получении и последующем анализе дифракционной картины, возникающей в результате дифракции рентгеновских лучей на порошке или поликристаллическом образце исследуемого материала. В общем случае кристалл можно представить как серию плоскостей, на которую под углом θ направляется луч рентгеновского излучения. Дифрагированные лучи фиксируются при помощи детектора или фотопленки. Для получения дифрактограммы от кристаллического порошка проводят измерение интенсивностей рассеянного излучения в зависимости от угла 2θ между образцом и первичным пучком. По формуле Вульфа-Брегга nλ = 2dsinθ можно рассчитать межплоскостные расстояния в кристалле. Полученные данные для каждого вещества строго индивидуальны, поэтому рентгенограмма однозначно характеризует исследуемое вещество (см. ОФС.1.2.1.1.0011.15 Рентгеновская порошковая дифрактометрия). Рентгенограммы кристаллических веществ дают отдельные, резко выраженные узкие линии (четкие пики), а аморфных - широкий размытый максимум (гало).

Способ получения кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

В качестве исходных веществ для получения кристаллической формы могут быть использованы диметилмалонат (малоновый эфир) и гистамин или соль гистамина. Способ получения кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида включает следующие стадии:

Стадия 1 (необязательная стадия). Взаимодействие дигидрохлорида гистамина с основанием с образованием гистамина в форме свободного амина;

Стадия 2. Взаимодействие гистамина с диметилмалонатом;

Стадия 3. Обработка полученного на стадии 2 продукта минеральной кислотой;

Стадия 4. Подщелачивание полученного продукта (или добавление основания) до завершения выпадения осадка кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида;

Стадия 5 (необязательная стадия). Очистка кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида известными методами.

Схема синтеза:

Далее приведено подробное описание каждой стадии.

Стадия 1. Взаимодействие дигидрохлорида гистамина с основанием

Реакцию дигидрохлорида гистамина с основанием проводят для получения гистамина в виде свободного основания.

Для проведения реакции готовят раствор дигидрохлорида гистамина в любом подходящем растворителе. Подходящий растворитель может быть выбран из спирта, эфира, галогеналкана, ароматического углеводорода или нитроалкана. Примерами спирта являются метиловый спирт (метанол), этиловый спирт (этанол), изопропиловый спирт (изопропанол), н-бутанол и т.д. Примерами эфиров являются диэтиловый эфир (этоксиэтан), тетрагидрофуран (ТГФ), диоксан. Примерами галогеналканов являются хлороформ, хлористый метилен и тетрахлорметан. Примерами ароматических углеводородов являются бензол, толуол и ксилолы. Примерами нитроалканов являются нитрометан и нитроэтан. В предпочтительном варианте количество растворителя выбирают таким образом, чтобы обеспечить полное растворение дигидрохлорида гистамина. Концентрация соединения может составлять от 0,01 моль/л (ммоль/мл) до 0,5 моль/л (ммоль/мл), включая промежуточные концентрации и диапазоны концентраций, например, 0,01 моль/л, 0,05 моль/л, 0,1 моль/л, 0,2 моль/л, 0,25 моль/л, 0,3 моль/л, 0,4 моль/л, 0,5 моль/л, от 0,05 моль/л до 0,3 моль/л, от 0,1 моль/л до 0,3 моль/л и от 0,1 моль/л до 0,2 моль/л.

После растворения дигидрохлорида гистамина к раствору добавляют подходящее основание. В качестве подходящего основания могут быть выбраны, например, гидроксид натрия или гидроксид калия. Также могут быть применены сильные амины, например, триэтиламин.

После завершения реакции нейтрализации полученный амин может быть выделен известными методами, например, экстракцией с последующим удалением растворителей. Гистамин в виде свободного основания может без выделения быть введен в следующую стадию. Кроме того, стадия 1 может быть проведена совместно со стадией 2. Для этого стадию 2 проводят в присутствии подходящего основания, например, в присутствии триэтиламина или морфолина.

Если в качестве исходного соединения используется гистамин в виде свободного основания, то стадию 1 проводить необязательно.

Стадия 2. Взаимодействие гистамина с диметилмалонатом

Для проведения реакции готовят раствор гистамина в любом подходящем растворителе. Подходящий растворитель может быть выбран из спирта, эфира, галогеналкана, ароматического углеводорода или нитроалкана. Примерами спирта являются метиловый спирт (метанол), этиловый спирт (этанол), изопропиловый спирт (изопропанол), н-бутанол и т.д. Примерами эфиров являются диэтиловый эфир (этоксиэтан), тетрагидрофуран (ТГФ), диоксан. Примерами галогеналканов являются хлороформ, хлористый метилен. Примерами ароматических углеводородов являются бензол, толуол и ксилолы. Примерами нитроалканов являются нитрометан и нитроэтан. В предпочтительном варианте гистамин растворяют в изопропаноле или в н-бутаноле. В другом предпочтительном варианте количество растворителя выбирают таким образом, чтобы обеспечить полное растворение гистамина. Концентрация гистамина может составлять от 0,01 моль/л (ммоль/мл) до 0,5 моль/л (ммоль/мл), включая промежуточные концентрации и диапазоны концентраций, например, 0,01 моль/л, 0,05 моль/л, 0,1 моль/л, 0,2 моль/л, 0,25 моль/л, 0,3 моль/л, 0,4 моль/л, 0,5 моль/л, от 0,05 моль/л до 0,3 моль/л, от 0,1 моль/л до 0,3 моль/л и от 0,1 моль/л до 0,2 моль/л.

После растворения гистамина к раствору добавляют диметилмалонат. В предпочтительном варианте диметилмалонат и гистамин берут в стехиометрических количествах, то есть в молярном соотношении 1:2. Молярное соотношение диметилмалоната и гистамина может также составлять от 5:1 до 1:5, в более предпочтительном от 1:1 до 1:5, в еще более предпочтительном от 1:2 до 1:3. Диметилмалонат может быть добавлен без растворителя, так и в подходящем растворителе, например, в этаноле, изопропаноле или н-бутаноле.

В предпочтительном варианте реакцию проводят при кипячении и при перемешивании.

Время реакции определяется количествами взятых гистамина и диметилмалоната и может составлять от 1 до 48 ч, в предпочтительном варианте от 12 до 36 ч. Момент завершения реакции может быть определен, например, методом тонкослойной хроматографии по исчезновению пятна гистамина.

Продукт реакции из реакционной смеси может быть выделен известными методами, например, фильтрованием. Продукт также может быть введен в следующую стадию без промежуточного выделения.

Стадия 3. Обработка осадка минеральной кислотой

Полученный на стадии 2 осадок обрабатывают водным раствором минеральной кислоты. В качестве такой кислоты может быть выбрана соляная, серная, фосфорная, азотная и другие сильные кислоты, в предпочтительном варианте кислота представляет собой соляную кислоту.

Количество кислоты определяют, исходя из количества растворяемого осадка. Для более полного растворения может быть взят небольшой избыток кислоты (10-30% от количества осадка).

Допустимая концентрация кислоты составляет от 0.01 М (моль/л) до 5.00 М (моль/л), в более предпочтительном варианте от 0.1 М до 0.2 М. Момент завершения реакции может быть определен визуально по завершению растворения осадка.

Стадия 4. Подщелачивание полученного продукта

К полученному на стадии 3 раствору добавляют подходящее основание. При этом наблюдается помутнение раствора и/или выпадение осадка в виде кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида. Подходящим основанием может быть щелочь, например, NaOH и KOH, или сода Na₂CO₃.

Для ускорения выпадения кристаллов к раствору может быть добавлен вспомогательный растворитель, например, избыток изопропанола, н-бутанола или ацетона.

Реакцию проводят при комнатной температуре или при охлаждении до 5-15°C. Рекомендуется контроль pH реакционной смеси. Момент завершения реакции может быть определен по наличию слабощелочной среды, например, по значению pH 8.0-11.0 реакционной смеси. В другом варианте реакцию завершают после прекращения выпадения кристаллов.

Полученные кристаллы выделяют известными методами, например, фильтрованием.

Стадия 5. Очистка продукта

Осадок кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида может быть дополнительно очищен известными методами. Например, осадок может быть промыт органическими растворителями (гексан, ацетон), после чего дополнительно высушен.

Фармацевтическая композиция

Настоящая техническая проблема решается, а указанные технические результаты достигаются также благодаря фармацевтической композиции для лечения и/или профилактики воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей, содержащей кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида настоящего изобретения и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Под фармацевтической композицией понимается пригодная для использования для людей или животных композиция (смесь, состав и т.д.), включающая активную фармацевтическую субстанцию. Активная фармацевтическая субстанция в фармацевтической композиции содержит действующее вещество - кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида настоящего изобретения. Специалисту в данной области будет понятно, что к фармацевтической композиции настоящего изобретения будут относиться также композиции, содержащие одно или несколько других активных фармацевтических субстанций.

Понятия «включает» и «содержит» в контексте настоящего изобретения означает, что указанные фармацевтические композиции (лекарственные средства, группы компонентов и т.д.) включают перечисленные далее компоненты/ингредиенты, но не исключают включение других компонентов/ингредиентов.

В предпочтительном варианте фармацевтическая композиция представляет собой состав в виде твердой формы. Примерами твердых лекарственных форм являются порошки, гранулы, брикеты, капсулы, таблетки, драже и т.д. Специалисту в данной области будет понятно, что фармацевтическая композиция настоящего изобретения может иметь любую другую форму, обеспечивающую сохранность положительных свойств активной фармацевтической субстанции или действующего вещества. В наиболее предпочтительном варианте твердая форма представляет собой порошок, гранулу, капсулу или таблетку. Порошком является твердая недозированная лекарственная форма, состоящая из твердых отдельных сухих частиц различной дисперсности, обладающая свойством сыпучести. Капсулой является твердая дозированная или недозированная лекарственная форма, включающая твердую (как правило, желатиновую) оболочку, внутри которой заключен инкапсулят, содержащий одно или более действующих веществ с добавлением или без вспомогательных веществ. Гранулой является твердая дозированная лекарственная форма в виде крупинок (агрегатов частиц порошка) круглой, цилиндрической или неправильной формы, содержащая одно или несколько действующих веществ с добавлением вспомогательных веществ. Таблеткой является твердая дозированная лекарственная форма, чаще всего получаемая прессованием порошков или гранул, содержащих одно или более действующих веществ с добавлением или без вспомогательных веществ.

Количественное содержание кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида в фармацевтической композиции выбирается из диапазона от 0,01 до 99,99 мас.%, в предпочтительном варианте от 1,00 до 80,00 мас.%, в более предпочтительном от 5,00 до 60,00 мас.%, например, 5,00 мас.%, 10,00 мас.%, 15,00 мас.%, 20,00 мас.%, 25,00 мас.%, 30,00 мас.%, 35,00 мас.%, 40,00 мас.%, 45,00 мас.%, 50,00 мас.%, 55,00 мас.%, 60,00 мас.%, от 10,00 мас.% до 20,00 мас.%; от 20,00 мас.% до 30,00 мас.%; от 30,00 мас.% до 40,00 мас.%; от 40,00 мас.% до 50,00 мас.%; от 50,00 мас.% до 60,00 мас.%, включая все промежуточные значения с шагом в 1,00 мас.%. Например, значение 23,00 мас.% входит в качестве одного из значений в диапазон от 20,00 мас.% до 30,00 мас.%.

В другом предпочтительном варианте фармацевтическая композиция содержит кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида настоящего изобретения в эффективном количестве.

Понятие «эффективное количество» («терапевтически эффективное количество») в контексте настоящего изобретения относится к количеству фармацевтической композиции или лекарственного средства, которое при введении субъекту является достаточным для воздействия такого лечения на заболевание, нарушение или симптом. «Эффективное количество» может изменяться, например, в зависимости от того, в какой форме находится вещество, от природы заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания или нарушения, от тяжести заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания или нарушения, от возраста субъекта, подлежащего лечению, и/или от веса субъекта, подлежащего лечению. Надлежащее количество в каждом конкретном случае будет очевидно специалисту в данной области или может быть определено путем стандартных экспериментов.

В предпочтительном варианте кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида содержится в фармацевтической композиции или лекарственном средстве и используется в определенной дозировке. Дозировка кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению, может находиться в диапазоне от 1 мг до 1000 мг в сутки, предпочтительно от 60 мг до 500 мг. В предпочтительном варианте в твердой форме фармацевтической композиции или лекарственного средства N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида находится в количестве, соответствующем рекомендуемой дозировке.

Понятие «дозировка», используемое здесь, характеризует содержание одного или нескольких действующих веществ в количественном выражении на единицу дозы, или единицу объема, или единицу массы в соответствии с лекарственной формой, либо для некоторых видов лекарственных форм количество высвобождаемого из лекарственной формы действующего вещества за единицу времени.

Фармацевтическая композиция настоящего изобретения включает по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент, являющийся носителем действующих веществ, обеспечивающий требуемый объем/массу и необходимые характеристики лекарственного средства в определенной лекарственной форме. В предпочтительном варианте фармацевтическая композиция включает фармацевтически приемлемый эксципиент, который выбирают из группы, включающей наполнитель, связывающее вещество, смазывающее вещество, разрыхляющее вещество, скользящее вещество, консервант, корригент и краситель.

Термин «наполнитель» или «разбавитель» означает вспомогательные вещества, используемые для придания твердым лекарственным формам заданного объема или массы. В качестве наполнителей могут быть использованы крахмал, глюкоза, сахароза, лактоза (молочный сахар), магния карбонат основной, магния окись, натрия хлорид, натрия гидрокарбонат, глина белая (каолин), желатин, целлюлоза микрокристаллическая (МЦК), метилцеллюлоза (МЦ), натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы (Na КМЦ), кальция карбонат, кальция фосфат двузамещенный, глицин (аминоуксусная кислота), декстрин, амилопектин, ультраамилпектин, сорбит, маннит, пектин и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Термин «связывающие» означает вещества, входящие в состав таблетируемой массы для придания ей необходимой вязкости. В качестве связывающих веществ используются вода, спирт этиловый, крахмальный клейстер, сахарный сироп, растворы: карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ), оксиэтилцеллюлозы (ОЭЦ), оксипропилметилцеллюлозы (ОПМЦ); поливиниловый спирт (ПВС), поливинилпирролидон (ПВП), альгиновая кислота, натрия альгинат, желатин и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Термин «скользящее вещество» означает вспомогательные вещества, используемые в технологическом процессе производства таблеток на стадии прессования для улучшения текучести гранул или порошка за счет уменьшения трения между частицами. Скользящее вещество может быть представлено одним или несколькими из числа крахмала, талька, полиэтиленоксида-4000, стеариновой кислоты, кальция и магния стеарата и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Термин «смазывающее вещество» или «лубрикант» означает вспомогательные вещества, способствующие уменьшению силы трения между поверхностью таблетки и стенками кюветы пуансона, в которой таблетка формируется, используемые в технологическом процессе производства таблеток на стадии прессования. Смазывающее вещество может быть представлено одним или несколькими из числа стеарата магния, стеарата кальция, стеарил фумарата натрия, полиэтиленгликоля (с молекулярной массой свыше 3350), лаурилсульфата натрия, талька, минерального масла, лейцина и полоксамера и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Термин «разрыхлитель» означает вещества, использующиеся для улучшения распадаемости или растворения, обеспечивая механическое разрушение таблеток в жидкой среде, что необходимо для скорейшего высвобождения действующего вещества. Разрыхлитель может быть представлен одним или несколькими из числа микрокристаллической целлюлозы, кроскармеллозы натрия, кросповидона, натриевой соли гликолята крахмала, крахмала, пектина, желатина, амилопектина, ультраамилопектина, агар-агара, альгиновой кислоты, калия и натрия альгината, твин-80 и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Дополнительные компоненты, корригенты, используются для улучшения вкуса (подсластитель) и запаха (ароматизатор). К ним относятся, например, сахар, какао, ванилин. Красители (пигменты) используются для улучшения внешнего вида фармацевтической композиции и лекарственной формы. Примерами красителей являются диоксид титана, индигокармин.

Количество, состав и форма фармацевтически приемлемого эксципиента могут быть выбраны специалистом в данной области произвольно при условии полного или частичного сохранения кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида.

Пути введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению включают, но не ограничиваются пероральным, ингаляционным, местным, трансдермальным, сублингвальным и ректальным путями. В предпочтительном варианте фармацевтическую композицию вводят перорально или сублингвально.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно получить с помощью известных общепринятых способов в области фармацевтики.

Лекарственное средство

Настоящая техническая проблема решается, а указанные технические результаты достигаются также благодаря лекарственному средству для лечения и/или профилактики воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей, содержащему кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида или фармацевтическую композицию настоящего изобретения.

Под лекарственным средством (лекарственным препаратом) понимаются пригодные для использования у людей или животных активную фармацевтическую субстанцию или фармацевтическую композицию в виде лекарственной формы.

В одном из вариантов настоящее изобретение относится к лекарственному средству в твердой лекарственной форме. Лекарственные формы по настоящему изобретению включают, но не ограничиваются указанным: гранулы, таблетки, в частности, буккальные таблетки, шипучие таблетки, таблетки, покрытые оболочкой, таблетки с замедленным высвобождением, обычные таблетки, таблетки с контролируемым высвобождением, диспергируемые в полости рта таблетки, лиофилизированные быстрорастворимые таблетки и т.п.; капсулы, такие как твердые капсулы, мягкие капсулы, желатиновые капсулы и т.п.

Таблетки, порошки, капсулы и гранулы согласно настоящему изобретению могут использоваться для приготовления растворов, гелей, мазей или суспензий, включая растворы для инъекций, растворы для спреев, растворы для аэрозолей. Указанные формы могут дополнительно вноситься в пластыри, суппозитории, трансдермальные и топические лекарственные средства.

Специалисту в данной области будет понятно, что лекарственное средство настоящего изобретения может иметь любую форму, обеспечивающую сохранность положительных свойств активной фармацевтической субстанции. В наиболее предпочтительном варианте твердая форма представляет собой порошок, гранулу, капсулу или таблетку.

В качестве лекарственного средства настоящего изобретения может выступать и фармацевтическая композиция, включающая кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида. В предпочтительном варианте лекарственное средство также включает по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент, но его наличие не является обязательным.

Количественное содержание кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида в лекарственном средстве выбирается из диапазона от 0,01 до 100,00 мас.%, в предпочтительном варианте от 1,00 до 80,00 мас.%, в более предпочтительном от 5,00 до 60,00 мас.%, например, 5,00 мас.%, 10,00 мас.%, 15,00 мас.%, 20,00 мас.%, 25,00 мас.%, 30,00 мас.%, 35,00 мас.%, 40,00 мас.%, 45,00 мас.%, 50,00 мас.%, 55,00 мас.%, 60,00 мас.%, от 10,00 мас.% до 20,00 мас.%; от 20,00 мас.% до 30,00 мас.%; от 30,00 мас.% до 40,00 мас.%; от 40,00 мас.% до 50,00 мас.%; от 50,00 мас.% до 60,00 мас.%, включая все промежуточные значения с шагом в 1,00 мас.%. Например, значение 23,00 мас.% входит в качестве одного из значений в диапазон от 20,00 мас.% до 30,00 мас.%.

Лекарственные средства по настоящему изобретению могут вводиться (не ограничиваясь указанным) перорально, парентерально, ингаляционно, подкожно, внутрибрюшинно, местно, ректально. Терапевтическая дозировка лекарственного средства, содержащего новую кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, или активную фармацевтическую субстанцию, или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению, может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента.

Применение кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и содержащих ее фармацевтической композиции и лекарственного средства

Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, содержащие ее фармацевтическая композиция и лекарственное средство настоящего изобретения могут применяться для лечения и/или профилактики воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей.

Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и содержащая ее фармацевтическая композиция настоящего изобретения могут применяться для изготовления лекарственного средства настоящего изобретения.

В одном из вариантов настоящего изобретения кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида настоящего изобретения в составе фармацевтической композиции или лекарственного средства по настоящему изобретению вводят в количестве от 1 мг до 1000 мг в сутки, предпочтительно от 10 мг до 400 мг. Указанная дозировка может быть введена как одной дозой, так и разделена на несколько приемов в течение суток, например, 2, 3 или 4 раза в сутки. Наиболее предпочтительные варианты доз могут быть определены, исходя из возраста и/или массы тела пациента, а также из характера проявляемых симптомов.

В одном варианте воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей связано с ринитом, или вызвано ринитом, или представляет собой ринит. В более конкретном варианте воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей вызвано аллергическим ринитом, инфекционным ринитом (например, вирусным или бактериальным ринитами) или вазомоторным ринитом. В другом варианте ринит может быть в острой форме (острый ринит) или в хронической форме (хронический ринит). К ринитам также относятся атрофический, гипертрофический риниты, ринит, вызванный применением сосудосуживающих или гормональных препаратов, ринит, связанный с ожогами и повреждениями слизистой оболочки или носовыми кровотечениями ринит и т.д.

В другом альтернативном варианте воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей связано с синуситом (риносинуситом), или вызвано синуситом (риносинуситом), или представляет собой синусит (риносинусит). В более конкретном варианте воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей вызвано гайморитом (синуситом верхнечелюстной пазухи), фронтитом (синусит лобной пазухи), этмоидитом (воспаление слизистой оболочки ячеек решетчатого лабиринта) и сфеноидитом (воспаление слизистой оболочки клиновидной пазухи). Синусит может быть в острой форме (острый синусит) или хронической форме (хронический синусит). К синуситам также относятся травматические, вирусные, бактериальные, грибковые, смешанные, аллергические синуситы.

В другом альтернативном варианте воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей связано с фарингитом, или вызвано фарингитом, или представляет собой фарингит. В более конкретном варианте воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей вызвано тонзиллитом, фаринготонзиллитом или назофарингитом. В другом варианте фарингит может быть в острой форме (острый фарингит) или хронической форме (хронический фарингит). К фарингитам также относят вирусные, бактериальные, грибковые, аллергические, травматические, катаральные, гиперпластические, субатрофические, атрофические, смешанные фарингиты.

Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и содержащие ее фармацевтическая композиция и лекарственное средство настоящего изобретения могут применяться в качестве обезболивающих и жаропонижающих средств в терапии воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Обезболивающее действие кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида проявляется в снятии или уменьшении болевых ощущений, возникших в ходе развития патологического состояния. Жаропонижающее (антипиретическое) действие кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида проявляется в снижении температуры тела при лихорадке. Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и содержащие ее фармацевтическая композиция и лекарственное средство настоящего изобретения могут также применяться в качестве обезболивающих и жаропонижающих средств в симптоматической терапии и в случае отсутствия воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 - экспериментальная дифрактограмма образца кристаллической формы N,N'-бис[2-(1H-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида (синяя кривая) и теоретическая дифрактограмма рассчитанной для него ячейки (красная линия) и их разностная кривая (серая линия). Синие штрихи обозначают расчетные положения пиков. Экспериментальные подробности изложены в примере 1.

Фиг. 2 - строение N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида в кристаллической форме настоящего изобретения, полученное методом рентгеноструктурного анализа.

Фиг. 3 - строение элементарной ячейки кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида настоящего изобретения.

Фиг. 4 - упаковка молекул в кристаллической решетке кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида настоящего изобретения.

Фиг. 5 - эффективность кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида при внутрижелудочном введении в модели ЛПС-индуцированного притока клеток воспаления в нос. В качестве препарата сравнения использовали Дексаметазон.

Обозначения:

* - достоверность различия (P < 0.05) с интактными животными,

& - достоверность различия (P < 0.05) с контролем;

Фиг. 6 - эффективность кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида при внутрижелудочном введении в модели субхронического риносинусита у мышей. В качестве препаратов сравнения использовали Дезлоратадин, Лоратадин и Дексаметазон.

Обозначения:

* - достоверность различия (P < 0.05) с интактными животными,

& - достоверность различия (P < 0.05) с контролем;

Фиг. 7 - эффективность кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида в модели воспаления гортани, индуцированная аппликацией раствора формалина крысам. В качестве препаратов сравнения использовали Дексаметазон, Парацетамол, Ибупрофен и комбинация препаратов Парацетамол+Фенилэфрин+Фенирамин+Аскорбиновая кислота (ТераФлю)

Обозначения:

* - достоверность различия (P < 0.05) с интактной группой,

& - достоверность различия (P < 0.05) с контролем;

Фиг. 8 - эффективность кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида на модели лихорадочной реакции у крыс. В качестве препарата сравнения использовались Ибупрофен, Парацетамол, Парацетамол + Фенилэфрин + Фенирамин + Аскорбиновая кислота (ТераФлю от гриппа и простуды).

Обозначения:

* - достоверность различия (P < 0.05) с интактной группой,

& - достоверность различия (P < 0.05) с контролем;

Фиг. 9 - влияние кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида на количество корчей за 15 мин на модели специфической болевой реакции методом химического раздражения брюшины (тест «уксусные корчи»). В качестве препарата сравнения использовались Ибупрофен (Нурофен), Парацетамол (Парацетамол) и Кеторолак (Кеторол)

Обозначения:

* - достоверность различия (P < 0.05) с интактной группой,

& - достоверность различия (P < 0.05) с контролем.

Если не указано иное, все технические и специальные термины, использованные в данном контексте, имеют общепринятое в данной области техники значение.

Осуществление изобретения

Настоящее изобретение дополнительно поясняется, но не ограничивается следующими примерами.

Пример 1. Получение кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

К раствору 0,500 г (4,5 ммоль) гистамина в 20 мл изопропанола добавляли по каплям, при перемешивании, 0,360 г (2,25 ммоль) раствора диметилмалоната в 10 мл изопропанола. Смесь кипятили с обратным холодильником при перемешивании в течение 20 часов. Выпавший осадок отфильтровывали и растворяли в минимальном количестве 0.1 M соляной кислоты. Для нейтрализации полученного раствора к нему приливали 10-кратное количество изопропилового спирта (по объему), после чего к смеси медленно добавляли карбонат натрия (под тягой). При достижении слабощелочной реакции среды продукт осаждался в виде бесцветных кристаллов. Добавление карбоната натрия прекращали после завершения выпадения осадка. Кристаллический осадок отфильтровывали и промывали ацетоном. Продукт сушили на воздухе. Получено: 0,474 г (73%) кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида.

Далее регистрировали рентгенограмму полученной кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида. Все исследования были выполнены на рентгеновском дифрактометре Bruker D8 Advance (медное излучение CuK_α) с позиционно-чувствительным детектором LynxEye, геометрия на отражение, с вращением. Сбор данных осуществлялся с помощью программного комплекса Bruker DIFFRACplus, анализ - с помощью программы EVA и Topas V5.0.

На фиг. 1 представлена порошковая рентгенограмма полученной кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида. В таблице 1 перечислены положения углов 2θ и их относительные интенсивности.

Таблица 1. Интенсивности и положения некоторых пиков с относительной интенсивностью больше 3% для образца кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

Положение. [°2θ] Межплоскостное расстояние [Å] Отн. Инт. [%] 9.979 8.86 8.0 10.922 8.09 10.3 16.890 5.25 39.0 19.716 4.50 40.9 20.001 4.44 100.0 21.179 4.19 84.9 22.062 4.03 5.9 22.247 3.99 18.4 23.016 3.86 12.3 23.529 3.78 8.4 24.910 3.57 3.8 25.771 3.45 4.8 26.762 3.33 32.1 27.949 3.19 5.9 28.830 3.09 26.5 31.613 2.83 9.0 32.271 2.77 11.9 34.112 2.63 8.0

На рентгенограмме кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида наблюдали следующие интенсивные пики (максимумы) при углах дифракции 2θ (± 0,2°): 10.0, 16.9, 19.7, 20.0, 21.2, 22.2, 23.0, 23.5, 26.7, 28.8 и 32.3. Характеристичными пиками являлись: 16.9, 19.7, 20.0, 21.2, 22.2, 23.0, 23.5, 26.7, 28.8 и 32.3. Наиболее интенсивные максимумы: 16.9, 20.0 и 21.2.

Кристаллическая структура полученной фазы была определена с помощью полнопрофильного уточнения массива порошковых дифракционных данных («метод Ритвельда»). Измерения были проведены при комнатной температуре (296.15К). Общий вид дифрактограмм образцов кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и их сравнение с рассчитанными также показан на фиг. 1. Синяя кривая - эксперимент, красная - расчет, серая - разность между ними. Параметры кристаллической ячейки определены в таблице 2.

Таблица 2. Параметры кристаллической структуры формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

Параметры ячейки a (Å) 8.51191(18) b (Å) 4.59550(13) c (Å) 18.0085(4) β (град) 99.3191(11)

Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида была также исследована методом рентгеноструктурного анализа (РСА). Рентгенодифракционные исследования соединения проводили на дифрактометре Bruker APEX II (MoKα-излучение, графитовый монохроматор, w-сканирование). Структура расшифрована прямым методом и уточнена МНК в анизотропном полноматричном приближении по F²_hkl и представлена на фиг. 2. Атомы водорода рассчитаны геометрически и уточнены с наложением ограничений на длины связей и валентные углы. Кристаллографическая информация для ячейки C₁₃H₁₈N₆O₂: моноклинная сингония, пространственная группа P2/n, a = 8.490(4) Å, b = 4.5613(19) Å, c = 17.918(9) Å, α = 90°, β = 99.94(2)°, γ = 90°, V = 683.5(5) ų, Z = 2, T = 140 K. Более подробная кристаллографическая информация представлена в таблице 3.

Таблица 3. Кристаллографические данные N,N'-бис[2-(1H-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

Брутто формула C₁₃H₁₈N₆O₂ Молекулярная масса 290.33 T, K 140 Пространственная группа P2/n Z 2 a, Å 8.490(4) b, Å 4.5613(19) c, Å 17.918(9) α, ° 90 β, ° 99.94(2) γ, ° 90 V, ų 683.5(5) ρ_выч, г⋅см^-3 1.411 μ, см^-1 1 F(000) 308 2θ_max, ° 50 Число измеренных отражений 6848 Число независимых отражений 1348 Число отражений с I>2σ(I) 631 Количество уточняемых параметров 97 R1 [I>2σ(I) ] 0.0562 wR2 [по всем отражениям] 0.1024 GOF 0.938 Остаточная электронная плотность, e⋅Å^-3(ρ_min/ρ_max ) 0.252/-0.283

Строение элементарной ячейки и кристаллической упаковки представлены на фиг. 3 и 4.

Параметры ячейки, полученные в РСА монокристалла, отличаются на 1-3% от рассчитанных с помощью метода Ритвельда. Это связано с тем, что исследование монокристалла проводили при температуре 140 K, а исследование с помощью полнопрофильного уточнения массива порошковых дифракционных данных проведено при комнатной температуре.

Пример 2. Исследование долгосрочной стабильности и гигроскопичности при хранении новой кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

Исследование долгосрочной стабильности проводили при следующих условиях:

Период времени: 36 мес.;

Температура: 25±2°C;

Относительная влажность: 60±5%;

Контроль образца проводили:

1-й год: 3-й, 6-й, 9-й и 12-й месяцы (± 10 дней);

2-й год: 6-й и 12-й месяцы (± 15 дней);

3-й год 12 месяцев (± 30 дней).

Методы исследования образца: определение воды по методу Карла-Фишера (ГОСТ 33593-2015) и метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Результаты измерений представлены в таблице 4.

Таблица 4. Исследование долгосрочной стабильности и гигроскопичности образца кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

Месяцы Внешний вид образца Содержание воды по методу Карла-Фишера, % Содержание примесей по методу HPLC, % 0 Почти белый кристаллический порошок 0.23 0.13 3 + 0.23 0.16 6 + 0.27 0.14 9 + 0.20 0.05 12 + 0.27 0.14 18 + 0.28 0.27 24 + 0.27 0.19 36 + 0.26 0.19

Пример 3. Исследование краткосрочной стабильности и гигроскопичности при хранении новой кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

Исследование краткосрочной стабильности проводили при следующих условиях:

Период времени: 6 мес.;

Температура: 40±2°C;

Относительная влажность: 75±5%;

Контроль образца проводили на 3-й и 6-й месяцы (± 10 дней).

Методы исследования образца: определение воды по методу Карла-Фишера (ГОСТ 33593-2015) и метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Результаты измерений представлены в таблице 5.

Таблица 5. Исследование краткосрочной стабильности и гигроскопичности образца кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

Месяцы Внешний вид образца Содержание воды по методу Карла-Фишера, % Содержание примесей по методу HPLC, % 0 Почти белый кристаллический порошок 0.2 0.13 3 + 0.3 0.15 6 + 0.3 0.14

Пример 4. Получение фармацевтической композиции и лекарственного средства, содержащих новую кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида

Кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, полученную в примере 1, использовали для приготовления фармацевтических композиций согласно составам, показанным в таблице 6.

Для каждого состава кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида смешивали с эксципиентами, указанными в таблице 6, затем тщательно перемешивали итоговую смесь.

Таблица 6. Составы фармацевтических композиций по настоящему изобретению, содержащие кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида в качестве активного вещества

Состав 1 Состав 2 Состав 3 Компоненты мг Компоненты Мг Компоненты мг Активное вещество 2.0 Активное вещество 10.0 Активное вещество 20.0 Микрокристаллическая целлюлоза 73.2 Микрокристаллическая целлюлоза 366.0 Микрокристаллическая целлюлоза 732.0 Карбоксиметилкрахмал натрия 4.0 Карбоксиметилкрахмал натрия 20.0 Натрия крахмал гликолят 40.0 Магния стеарат 0.8 Магния стеарат 4.0 Магния стеарат 8.0

Полученную фармацевтическую композицию таблетировали на таблеточной машине, состоящей из стальной матрицы с отверстиями и двумя расположенными друг над другом хромированными стержнями - верхними и нижними пуансонами соответствующего диаметра. Нижний пуансон фиксирует пространство в матрице, в которое засыпается фармацевтическая композиция. Далее верхний пуансон спрессовывает композицию. Затем верхний и нижний пуансоны последовательно удаляются из матрицы, выталкивая таблетку. Для таблетирования были выбраны 1-ый и 2-ой составы композиции. В результате получили таблетки, содержащие кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида в качестве активного вещества.

Пример 5. Исследование растворимости

Определение растворимости кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида проводили, руководствуясь ОФС.1.2.1.0005.15 Растворимость, государственной фармакопеи РФ. В качестве модели слюны человека использовали фосфатный буфер с pH 6.8.

К 100 мг кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида добавляли 1.0 мл фосфатного буфера и непрерывно встряхивали полученную взвесь в течение 10 минут при 25°C. Вещество растворилось не полностью, раствор был мутным.

Далее к 10 мг кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида добавляли 1.0 мл фосфатного буфера и повторяли описанную выше процедуру. Кристаллическая форма полностью растворилась. Насыщенный раствор был получен при растворении 45 мг вещества в 1 мл фосфатного буфера. Согласно ОФС.1.2.1.0005.15 субстанцию следует классифицировать как растворимую.

Указанный пример иллюстрирует пригодность кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида для последующего получения жидких лекарственных форм, например, растворов для инъекций, спреев, аэрозолей и т.д.

Пример 6. Исследование активности кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида в модели гистамин-индуцированной заложенности носа у собак

Модель гистамин-индуцированной заложенности носа у собак проводили по стандартной методике (R.L.TINIAKOV et al. Canine model of nasal congestion and allergic rhinitis, JOURNAL OF APPLIED PHYSIOLOGY, 2003, V. 94, N. 5, pp. 1821-1828). Собакам породы бигль в носовую полость впрыскивали 5% раствор гистамина в объеме 250 мкл/ноздря. До введения гистамина и через 10 минут после введения гистамина с помощью ринометра производили измерение объема носовой полости правой и левой ноздри.

В первом эксперименте кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) вводили однократно внутрижелудочно в дозах 1,62 и 5,4 мг/кг за 8 ч до введения гистамина. Препараты сравнения Дезлоратадин (Эриус) в дозе 0,12 мг/кг, Эбастин (Кестин) в дозе 0,27 мг/кг вводили внутрижелудочно в аналогичном режиме. Информация об эксперименте и результаты представлены в таблице 7.

Во втором эксперименте кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) вводили однократно внутрижелудочно в дозах 1,62 и 5,4 мг/кг за 30 мин до введения гистамина. Препараты сравнения Дезлоратадин (Эриус) в дозе 0,12 мг/кг, Парацетамол+Фенилэфрин+ Фенирамин+Аскорбиновая кислота (ТераФлю от гриппа и простуды) в дозе 54 мг/кг вводили внутрижелудочно в аналогичном режиме. Информация об эксперименте и результаты представлены в таблице 8.

Полученные данные проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка на нормальность распределения полученных в ходе эксперимента значений. В случае отличного от нормального распределения для оценки межгрупповых различий использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Данна). В случае нормального распределения для сравнения нескольких групп использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Тьюки). Разница между результатами считалась достоверной при уровне значимости Р<0.05.

Таблица 7. Исследование активности в модели гистамин-индуцированной заложенности носа у собак

Группа Доза, мг/кг Режим введения Количество собак в группе Средний объем ноздри от исходной,
в % через 10 минут после введения гистамина Контроль (растворитель) Однократно внутрижелудочно, за 8 ч до введения гистамина 22 55% Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида 1.62 22 77% 5.4 22 78% Дезлоратадин 0.12 11 58% Эбастин 0.27 11 57%

Таблица 8. Исследование активности в модели гистамин-индуцированной заложенности носа у собак

Группа Доза, мг/кг Режим введения Количество собак в группе Средний объем ноздри от исходной,
в % через 10 минут после введения гистамина Контроль (растворитель) Однократно внутрижелудочно, за 30 мин до введения гистамина 19 55% Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида 1.62 10 78% 5.4 10 79% Дезлоратадин 0.12 19 62% Парацетамол + Фенилэфрин + Фенирамин+Аскорбиновая кислота 54 10 80%

Данные, представленные в таблицах 7 и 8, наглядно показывают, что прием кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида существенно увеличивает объем ноздрей в модели гистамин-индуцированной заложенности носа у собак. Эффект наступал через 35 мин после введения субстанции и длился не менее 8 ч. По выраженности действия кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида превосходила Дезлоратадин и Эбастин. Кроме того, значимый эффект наблюдался уже через 5-10 минут после введения гистамина. Проведенное исследование также демонстрирует быстро развивающийся и более длительный терапевтический эффект при применении кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида согласно настоящему изобретению по сравнению с прототипом RU 2685277 C1.

Пример 7. Исследование биодоступности

Таблетки, полученные в примере 4 (дозировкой 2 и 10 мг), вводили внутрижелудочно собакам в течение 14 дней раз в сутки в дозах 2 мг (1 таблетка 2 мг), 6 мг (3 таблетки 2 мг) и 20 мг (2 таблетки 10 мг) на собаку. Отбирали образцы плазмы крови после 14-го введения препарата через 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 ч после дозирования и перед дозированием. Кровь у собак отбирали из латеральной вены голени в объеме 0,2 мл в полипропиленовые пробирки, содержащие 20 мкл 5% ЭДТА. Плазму крови отделяли центрифугированием при 10000 об/мин в течение 10 минут и хранили до анализа при температуре не выше -70°С. Для определения концентрации действующего вещества использовали ВЭЖХ-МС/МС анализ. Хроматографические условия были подобраны при вводе раствора исследуемого соединения в смеси ацетонитрил:вода (1:1) в МС/МС детектор через ВЭЖХ систему для достижения оптимальных хроматографических параметров. Концентрации N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида в плазме крови рассчитывались по калибровочной кривой, построенной по площадям хроматографических пиков стандартных образцов исследуемого соединения в интактной плазме или гомогенате интактного образца органа, нормированных на площадь внутреннего стандарта. Результаты измерений представлены в таблицах 9 и 10.

Таблица 9. Содержание действующего вещества в плазме крови собак после однократного внутрижелудочного введения в дозах 2, 6 и 20 мг на собаку

Доза Время (ч) N Среднее
(нг/мл) SD (нг/мл) SE (нг/мл) 2 мг/собаку 0 7 0.00 0.00 0.00 0.25 7 2.64 0.54 0.20 0.5 7 5.60 1.93 0.73 1 7 19.7 5.08 1.92 2 7 24.6 7.50 2.83 4 7 20.2 15.6 5.91 6 7 11.6 13.8 5.23 8 7 4.08 0.44 0,17 24 7 2.14 1.51 0.57 6 мг/собаку 0 8 0.00 0.00 0.00 0.25 8 10.9 10.7 3.78 0.5 8 30.3 22.5 7.94 1 8 48.8 34.6 12.2 2 8 45.1 12.7 4.48 4 8 57.2 27.8 9.85 6 8 12.3 3.55 1.26 8 8 9.49 2.40 0.85 24 8 3.03 0.31 0.11 20 мг/собаку 0 8 0.00 0.00 0.00 0.25 8 4.77 3.72 1.31 0.5 8 35.9 13.5 4.76 1 8 97.7 18.6 6.58 2 8 114 22.2 7.85 4 8 73.2 14.1 4.99 6 8 42.3 9.59 3.39 8 8 28.1 6.69 2.36 24 8 8.37 1.91 0.68

Таблица 10. Содержание действующего вещества в плазме крови собак после 14-кратного внутрижелудочного введения в дозах 2, 6 и 20 мг на собаку

Доза Время (ч) N Среднее
(нг/мл) SD (нг/мл) SE (нг/мл) 2 мг/собаку 0 8 0.62 1.15 0.41 0,25 8 1.25 1.39 0.49 0,5 8 3.39 3.36 1.19 1 8 16.0 5.82 2.06 2 8 24.7 3.98 1.41 4 8 14.38 2.19 0.78 6 8 9.96 1.78 0.63 8 8 8.04 0.75 0.27 24 8 1.96 1.69 0.60 6 мг/собаку 0 8 0.00 0.00 0.00 0,25 8 0.00 0.00 0.00 0,5 8 4.57 4.32 1.53 1 8 34.4 12.9 4.56 2 8 89.3 27.3 9.66 4 8 42.6 9.76 3.45 6 8 25.5 4.28 1.51 8 8 15.6 1.42 0.50 24 8 3.77 0.86 0.30 20 мг/собаку 0 8 7.60 1.98 0.70 0,25 8 11.1 5.74 2.03 0,5 8 48.8 32.9 11.6 1 8 131 17.5 6.19 2 8 154 37.2 13.2 4 8 95.5 21.2 7.50 6 8 49.0 12.2 4.32 8 8 35.5 9.06 3.20 24 8 7.03 2.43 0/86

Результаты исследования показывают, что основная масса действующего вещества выводилась в течение 24 ч, а максимальное содержание в плазме крови наблюдалось уже через 1-2 ч после введения препарата. Аналогичные исследования были проведены и с таблетками, полученными согласно прототипу (RU 2685277 С2). Было оценено содержание действующего вещества через 2 часа после однократного введения препарата (таблетка 2 мг, доза 2 мг). Содержание вещества в крови составило 15.2±4.1 нг/мл, что статистически меньше концентрации, достигнутых при применении таблеток согласно настоящему изобретению. Таким образом, кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида и содержащая ее лекарственная форма демонстрирует улучшенные показатели биодоступности в сравнении с прототипом.

Пример 8. Исследование активности в модели липополисахарид(ЛПС)-индуцированного притока клеток воспаления в нос

Крысам линии Вистар в носовую полость (обе ноздри) впрыскивали 0,125 мкг/кг раствор ЛПС в объеме 20 мкл/ноздря так, чтобы раствор не провалился в носоглотку. Кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) вводили однократно внутрижелудочно в дозах 1.8, 9, 18 мг/кг непосредственно перед введением ЛПС. Препарат сравнения Дексаметазон в дозе 0,6 мг/кг вводили в аналогичном режиме. Через 4 ч после введения ЛПС у животных собирали назальный лаваж и определяли количество клеток воспаления в лаваже. Полученные данные проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка на нормальность распределения полученных в ходе эксперимента значений. В случае отличного от нормального распределения для оценки межгрупповых различий использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Данна). В случае нормального распределения для сравнения нескольких групп использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Тьюки). Разница между результатами считалась достоверной при уровне значимости Р<0.05. Условия эксперимента представлены в таблице 11, результаты измерений показаны на фиг. 5.

Таблица 11. Условия исследования активности в модели липополисахарид(ЛПС)-индуцированного притока клеток воспаления в нос у собак

Группа Доза, мг/кг Режим введения препарата Количество крыс в группе Интактные - - 10 Интактные (растворитель) 10 Контроль (растворитель) - Однократно, внутрижелудочно, непосредственно перед введением ЛПС 10 АФС 1.8 10 9 10 18 10 Дексаметазон 0.6 10

Полученные данные показывают, что при пероральном введении кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида достоверно снижается приток лейкоцитов, макрофагов и нейтрофилов в назальную полость животного. По выраженности действия кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида не уступала дексаметазону.

Пример 9. Исследование активности в модели субхронического риносинусита у мышей

Модель субхронического риносинусита у мышей реализовали по стандартной методике (J.S.BAE et al. Mouse model of IL-17-dominant rhinitis using polyinosinic-polycytidylic acid, ALLERGY, ASTHMA & IMMUNOLOGY RESEARCH, 2017, V. 9, N. 6, pp. 540-549). Мышам-самкам линии balb/c в каждую ноздрю вводили 5 мкл физиологического раствора, содержащего 100 мкг овальбумина (Sigma, A5503) и 100 мкг Poly (I:C) (Sigma, P1530), введение проводили в дни 1, 2, 3, 7 и 14. Группе ложной иммунизации в каждую ноздрю вводили 5 мкл физиологического раствора. Для развития назального воспаления с 15 по 21 дни включительно в каждую ноздрю экспериментальных животных интраназально вводили 5 мкл физиологического раствора, содержащего 3% овальбумина. Кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) вводили однократно внутрижелудочно в дозах 0.3, 3, 30 мг/кг 1 раз в сутки на 15-21 сутки одновременно с интраназальным введением 3% раствора овальбумина. Препараты сравнения Дезлоратадин (Дезлоратадин) в дозе 0,75 мг/кг, Лоратадин (Лоратадин) в дозе 1,5 мг/кг, Эбастин (Кестин) в дозе 3 мг/кг, Дексаметазон (Дексаметазон) в дозе 1 мг/кг вводили в аналогичном режиме. Через 24 ч после последнего введения овальбумина (22 сутки) у животных собирали назальный лаваж и определяли количество клеток воспаления в лаваже. Полученные данные проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка на нормальность распределения полученных в ходе эксперимента значений. В случае отличного от нормального распределения для оценки межгрупповых различий использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Данна). В случае нормального распределения для сравнения нескольких групп использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Тьюки). Разница между результатами считалась достоверной при уровне значимости Р<0.05. Условия эксперимента представлены в таблице 12, результаты измерений показаны на фиг. 6.

Таблица 12. Условия исследования активности в модели субхронического риносинусита у мышей

Группа Доза, мг/кг Режим введения препарата Количество мышей в группе Интактные - - 10 Ложная иммунизация (растворитель) 10 Контроль (растворитель) - Внутрижелудочно, 1 раз в сутки на 15-21 сутки 10 АФС 0.3 10 3 10 30 10 Дезлоратадин 0.75 10 Лоратадин 1.5 10 Эбастин 3 10 Дексаметазон 1 10

Полученные данные показывают, что в модели субхронического риносинусита у мышей при пероральном введении кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида достоверно снижается приток лейкоцитов и макрофагов в назальную полость. По выраженности действия кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида не уступала Дексаметазону, Дезлоратадину и Лоратадину.

Пример 10. Исследование активности в модели неинфекционного фарингита, индуцированного аппликацией раствора формалина крысам

Модель формалин-индуцированного воспаления гортани реализовали по стандартной методике (G.L.VISWANATHA et al. Novel experimental model of non-infectious pharyngitis in rats, JOURNAL OF PHARMACOLOGICAL AND TOXICOLOGICAL METHODS, 2014, V. 69, N. 2, pp. 189-195). Крысам под анестезией в наружную яремную вену через катетер вводили краситель Evans Blue (30 мг/кг). Через 10 мин после введения красителя на поверхность слизистой оболочки глотки делали аппликации 30%-ным раствором формалина (3 раза по 5 сек. каждая). Через 60 мин после нанесения 30% раствора формалина животных эвтаназировали путем обескровливания. Головную часть каждой крысы перфузировали гепаринизированным физиологическим раствором (40 ЕД/мл), чтобы удалить внутрисосудистый краситель. Степень воспаления оценивали по тесту экссудации красителя. Краситель Evans Blue из ткани экстрагировали в формамид при 55°С в течение 24 ч. Поглощение определяли спектрофотометрически при 620 нм. Кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) в дозах 1.8, 5.4, 9 и 18 мг/кг вводили внутрижелудочно за 1 ч до нанесения формальдегида. Препараты сравнения Дексаметазон, Парацетамол, Ибупрофен и комбинацию препаратов Парацетамол + Фенилэфрин + Фенирамин + Аскорбиновая кислота (ТераФлю от гриппа и простуды) вводили в аналогичном режиме. Полученные данные проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка на нормальность распределения полученных в ходе эксперимента значений. В случае отличного от нормального распределения для оценки межгрупповых различий использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Данна). В случае нормального распределения для сравнения нескольких групп использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Тьюки). Разница между результатами считалась достоверной при уровне значимости Р<0.05. Условия эксперимента представлены в таблице 13, результаты измерений показаны на фиг. 7.

Таблица 13. Условия исследования активности в модели неинфекционного фарингита, индуцированного аппликацией раствора формалина крысам

Группа Доза Режим введения препарата Количество крыс в группе Интактные - - 20 Контроль (растворитель) - Однократно, внутрижелудочно, за 1 ч до нанесения формальдегида 20 АФС 1.8 мг/кг 20 5.4 мг/кг 20 9 мг/кг 20 18 мг/кг 20 Парацетамол + Фенирамин + Фенилэфрин +Аскорбиновая кислота 2 г/кг 20 Парацетамол 45 мг/кг 20 Ибупрофен 18 мг/кг 20 Дексаметазон 0.6 мг/кг 20

Результаты исследования показывают, что кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида оказывает противовоспалительное действие и снижает проницаемость сосудов. По выраженности действия кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида не уступала Дексаметазону, Парацетомолу, Ибупрофену и комбинации препаратов Парацетамол + Фенирамин + Фенилэфрин + Аскорбиновая кислота.

Пример 11. Исследование активности в модели лихорадочной реакции у крыс

Модель лихорадочной реакции реализовали по стандартной методике (J.TOMAZETTI, et al. Baker yeast-induced fever in young rats: characterization and validation of an animal model for antipyretics screening, JOURNAL OF NEUROSCIENCE METHODS, 2005, V. 147, N. 1, pp. 29-35). В экспериментальную группу были отобраны животные без признаков отклонений внешнего вида таким образом, чтобы индивидуальное значение массы отклонялось от среднего значения в пределах пола не более чем на ±20%. Крысам линии Wistar подкожно вводили 20% суспензии пекарских дрожжей (12 мл/кг). Кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) в дозах 3.6, 5.4, 9, 13.5, 18 мг/кг вводили внутрижелудочно, однократно через 14 ч после введения дрожжей. Препараты сравнения Ибупрофен (Нурофен) в дозе 18 мг/кг, Парацетамол (Парацетамол) в дозе 45 мг/кг, Парацетамол + Фенилэфрин + Фенирамин + Аскорбиновая кислота (ТераФлю от гриппа и простуды) в дозе 2 г/кг вводили внутрижелудочно в аналогичном режиме. Ректальную температуру измеряли электротермометром до введения пирогена и через 14, 16, 17, 18, 19, 20 и 24 ч после него. Полученные данные проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка на нормальность распределения полученных в ходе эксперимента значений. В случае отличного от нормального распределения для оценки межгрупповых различий использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Данна). В случае нормального распределения для сравнения нескольких групп использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Тьюки). Разница между результатами считалась достоверной при уровне значимости Р<0.05. Условия эксперимента представлены в таблице 14, результаты измерений показаны на фиг. 8.

Таблица 14. Условия исследования активности в модели лихорадочной реакции у крыс

Группа Доза Режим введения препарата Количество крыс в группе Интактные (растворитель) - - 14 Контроль (растворитель) - Однократно, внутрижелудочно, через 14 ч после введения дрожжей 14 АФС 3.6 мг/кг 14 5.4 мг/кг 14 9 мг/кг 14 13.5 мг/кг 14 18 мг/кг 14 Ибупрофен 18 мг/кг 14 Парацетамол 45 мг/кг 14 Парацетамол + Фенилэфрин + Фенирамин + Аскорбиновая кислота 2 г/кг 14

Результаты исследования показывают, что кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида обладает антипирогенным действием. По выраженности эффекта кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида превосходит препараты сравнения Ибупрофен и Парацетамол и не уступает комбинированному препарату Парацетамол + Фенилэфрин + Фенирамин + Аскорбиновая кислота (ТераФлю от гриппа и простуды).

Пример 12. Исследование активности в модели специфической болевой реакции методом химического раздражения брюшины (тест «уксусные корчи»)

Модель специфической болевой реакции методом химического раздражения брюшины (тест «уксусные корчи») реализовали по стандартной методике (M.SOBCZAK et al. Novel mixed NOP/MOP agonist BU08070 alleviates pain and inhibits gastrointestinal motility in mouse models mimicking diarrhea-predominant irritable bowel syndrome symptoms, EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY, 2014, V. 736, pp. 63-69). Исследование проводилось на беспородных мышах, индивидуальное значение массы которых отклонялось от среднего значения в пределах пола не более чем на ±20%. Кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) вводили мышам однократно внутрижелудочно. Препарат сравнения Ибупрофен (Нурофен), Парацетамол (Парацетамол) и Кеторолак (Кеторол) вводили внутрижелудочно в аналогичном режиме. Через 1 час для проведения теста «уксусные корчи» мышам интраперитонеально вводили 1% уксусную кислоту в объеме 10 мл на 1 кг массы животного. Оценивали количество корчей (судорожные сокращения брюшных мышц, сопровождающихся вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины) за 15 минут после введения уксусной кислоты. Полученные данные проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка на нормальность распределения полученных в ходе эксперимента значений. В случае отличного от нормального распределения для оценки межгрупповых различий использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Данна). В случае нормального распределения для сравнения нескольких групп использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Тьюки). Разница между результатами считалась достоверной при уровне значимости Р<0.05. Условия эксперимента представлены в таблице 15, результаты измерений показаны на фиг. 9.

Таблица 15. Условия исследования активности в тесте «уксусные корчи»

Группа Доза, мг/кг Режим введения препарата Количество мышей в группе Интактные
(растворитель) - 10 Контроль (растворитель) - Внутрижелудочно, однократно 10 АФС 3 10 30 10 60 10 90 10 Ибупрофен 50 10 Парацетамол 75 10 Кеторолак 15 10

Результаты исследования показывают, что кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида достоверно снижает количество болевых реакций (корчей) у мышей, вызванных внутрибрюшинным введением уксусной кислоты. По выраженности действия кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида не уступает ибупрофену, парацетамолу и кеторолаку.

Изобретение относится к кристаллической форме N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, характеризующейся положениями пиков в порошковой рентгенограмме, 2θ, град: 16.9±0.2, 20.0±0.2, 21.2±0.2, 26.7±0.2, 28.8±0.2. Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида по изобретению характеризуется моноклинной сингонией, величинами ребер кристаллической ячейки, (ангстрем): 8.51±0.50 , 4.59±0.50 и 18.00±0.50 ; и величиной угла (град): 99.32°±5.00°. Изобретение относится к способу получения кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида по изобретению, включающему взаимодействие гистамина с диметилмалонатом и обработку полученного продукта минеральной кислотой с последующим подщелачиванием или добавлением основания до завершения выпадения осадка кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида. Также изобретение относится к фармацевтической композиции и лекарственному средству в твердой форме для лечения и/или профилактики воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей, содержащим кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида по изобретению в терапевтически эффективном количестве и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. Технический результат – кристаллическая форма N,N′-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, обладающая повышенной стабильностью при хранении, уменьшенной гигроскопичностью с сохранением достаточной растворимости формы, улучшенной биодоступностью, эффективным жаропонижающим и обезболивающим действием в терапии воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей. 5 н. и 10 з.п. ф-лы, 9 ил., 15 табл., 12 пр.

1. Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, характеризующаяся положениями пиков в порошковой рентгенограмме, 2θ, град: 16.9±0.2, 20.0±0.2, 21.2±0.2, 26.7±0.2, 28.8±0.2.

2. Кристаллическая форма по п.1, характеризующаяся положениями пиков в порошковой рентгенограмме, полученной с использованием Cu(Kα)-излучения, 2θ, град: 16.9±0.2, 19.7±0.2, 20.0±0.2, 21.2±0.2, 22.2±0.2, 23.0±0.2, 23.5±0.2, 26.7±0.2, 28.8±0.2 и 32.3±0.2.

3. Кристаллическая форма по п.1, характеризующаяся положениями пиков в порошковой рентгенограмме, полученной с использованием Cu(Kα)-излучения, 2θ, град: 10.0±0.2, 16.9±0.2, 19.7±0.2, 20.0±0.2, 21.2±0.2, 22.2±0.2, 23.0±0.2, 23.5±0.2, 26.7±0.2, 28.8±0.2 и 32.3±0.2.

4. Кристаллическая форма N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида, характеризующаяся моноклинной сингонией, величинами ребер кристаллической ячейки, (ангстрем): 8.51±0.50 , 4.59±0.50 и 18.00±0.50 ; и величиной угла (град): 99.32°±5.00°.

5. Кристаллическая форма по п.4, характеризующаяся величинами ребер, (ангстрем): 8.51191(18) , 4.59550(13) и 18.0085(4) , и величиной угла (град) 99.3191(11)° при комнатной температуре.

6. Кристаллическая форма по п.4, характеризующаяся величинами ребер, (ангстрем): 8.490(4) , 4.5613(19) и 17.918(9) , и величиной угла (град) 99.94(2)° при температуре 140 K.

7. Способ получения кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида по любому из пп.1-6, включающий взаимодействие гистамина с диметилмалонатом и обработку полученного продукта минеральной кислотой с последующим подщелачиванием или добавлением основания до завершения выпадения осадка кристаллической формы N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида.

8. Способ по п.7, дополнительно включающий стадию получения гистамина путем взаимодействия дигидрохлорида гистамина с подходящим основанием.

9. Способ по п.7, дополнительно включающий добавление растворителя, выбранного из изопропанола, н-бутанола и ацетона, на стадии подщелачивания.

10. Фармацевтическая композиция для лечения и/или профилактики воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей, содержащая кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида по любому из пп.1-6 в терапевтически эффективном количестве и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

11. Фармацевтическая композиция по п.10, отличающаяся тем, что воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей вызвано ринитом.

12. Лекарственное средство в твердой форме для лечения и/или профилактики воспалений слизистой оболочки верхних дыхательных путей, содержащее кристаллическую форму N,N'-бис-[2-(1Н-имидазол-4-ил)этил]пропандиамида по любому из пп.1-6 или фармацевтическую композицию по п.10 или 11.

13. Лекарственное средство по п.12, отличающееся тем, что твердая форма представляет собой порошок, гранулу, капсулу или таблетку.

14. Лекарственное средство по п.12, отличающееся тем, что включает по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

15. Лекарственное средство по п.12, отличающееся тем, что воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей вызвано ринитом.