N-БУТИЛ-2-[6-МЕТИЛ-4-(ТИЕТАН-3-ИЛОКСИ)ПИРИМИДИН-2-ИЛТИО]АЦЕТАМИД, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИОКСИДАНТНУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 2024 года по МПК C07D409/12 A61K31/506 A61P39/06 

Предлагаемое изобретение относится к фармацевтической химии и медицине, а именно к новому соединению - N-бутил-2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетамиду, обладающему антиоксидантной активностью.

Известно, что производные этил-2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетата проявляют антиоксидантную активность. [Синтез и исследование биологической активности новых серосодержащих производных пиримидина / Ю.И. Виноградова, С.А. Мещерякова, Д.Р. Хузин [и др.] // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования - Воронеж: Воронежский государственный университет, 2023. - С. 188-191. - DOI 8/978-5-9273-3827-6-2023-188-1911

Наиболее близким аналогом изобретения является (5-бром-2-гидроксифенил)метилиденгидразид 2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]уксусной кислоты, проявляющий антиоксидантную активность [Патент RU 2626651, 2017 г.].

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, в том числе обладающих антиоксидантной активностью.

Технический результат - получение биологически активного вещества с высокой антиоксидантной активностью.

Сущность изобретения: N-бутил-2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетамиду формулы (I):

обладающий антиоксидантной активностью.

Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны.

Заявляемое соединение синтезируют взаимодействием N-бутил-2-(6-метил-4-оксо-3,5-дигидропиримидин-2-илтио)ацетамида с 2-хлорметилтиираном в водном растворе гидроксида калия.

В качестве препарата сравнения выбрана аскорбиновая кислота, которая успешно применяется в практической медицине и имеет доказанную эффективность в качестве моносредства или компонента препаратов с антиоксидантными свойствами [Перекисное окисление липидов и антиоксидантные системы при психических заболеваниях. Социальная и клиническая психиатрия, 2016, т.26, №3, с. 65-71]. Влияние заявляемых соединений и препарата сравнения на процессы свободнорадикального окисления изучали в трех модельных системах in vitro с использованием экспресс-метода определения антиоксидантной активности, основанного на регистрации хемилюминесценции, возникающего при взаимодействии свободных радикалов с люминолом [P.P. Фархутдинов, С.И. Тевдорадзе. Методики исследования хемилюминесценции биологического материала на хемилюминометре ХЛМ-003. Методы оценки антиоксидантной активности биологически активных веществ, РУДН, Москва, (2005), с. 147-154]. Исследования были проведены на модельных системах, в которых протекают реакции образования активных форм кислорода (модель I), реакции перекисного окисления липидов (ПОЛ) (модель II) и на модельной системе, генерирующей активные формы кислорода в фагоцитах крови (модель III).

Регистрацию свечения проводили на хемилюминомере «ХЛМ-003» (Россия). Хемилюминесценцию регистрировали в течение 5 минут. Проводилась оценка светосуммы свечения (S, у.е.) и максимальной интенсивности свечения (Imax, ye.). Антиоксидантная активность определялась по степени угнетения хемилюминесценции и пересчитывалась в процентах от контроля.

Исследуемые вещества и препарат сравнения аскорбиновую кислоту (субстанция-порошок, Хэбэй Вэлком Фармасьютикал Ко. Лтд, Китай) добавляли в конечной концентрации 1×10^-3 моль/л. Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Выявлено, что вид распределения полученных данных отличается от нормального, поэтому при дальнейшей работе использовались непараметрические методы. Данные представлены в виде медианы, 25 и 75 процентилей. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05.

Пример 1.

Синтез заявляемого соединения.

0,765 г N-бутил-2-(6-метил-4-оксо-3,5-дигидропиримидин-2-илтио)ацетамида (3 ммоль) растворяют в 4% водном растворе КОН (3,3 ммоль) и добавляют 0,358 г 2-хлорметилтиирана (3,3 ммоль). Перемешивают на магнитной мешалке при 40-50°С в течение часа. Образовавшуюся смолообразную массу промывают водой, обрабатывают этилацетатом, этилацетатную фазу промывают 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, этилацетат отгоняют. Выход 0,34 г (35,46%). Т. пл. 102-103°С.

Спектр ЯМР ¹Н (500 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 0,87 (т, 3Н, С⁴Н₃, J 7,1 Гц); 1,21,-1,29 (м, 2Н, С³Н₂), 1,40-1,47 (м, 2Н, С²Н₂), 2,4 (с, 3Н, 6-СН₃); 3,22-3,26 (м, 2Н, NHCH₂), 3,42-3,47 [м, 2Н, S(CH)₂]; 3,51-3,55 [м, 2Н, S(CH)₂]; 3,76 (с, 2Н, SCH₂CO); 5,80-5,87 (м, 1H, ОСН_тиет); 6,29 (с, 1Н, 5-Н), 6,95 (уш. с, 1Н, CONH)

Спектр ЯМР ¹³С (75,5 МГц, CDC1₃), 5, м.д.: 13,8 (С⁴Н₃); 19,8 (С³Н₂); 23,75 (^бС-СН₃); 32,2 (С²Н₂); 167,0 (С⁴); 35,18 (С², С⁴'тиетан); 38,2 (NH-СН₂); 70,20 (O-С³'тиетан); 103,00 (С⁵); 169,16 (²С);169,3 (2-SCH₂CO);

Элементный анализ.

Найдено, %: С 51.35; Н 6.46; N 12.83; S 19.58-C₁₄H₂₁N₃O₂S₂ Вычислено, %: С 51,31; Н 6,40; N 12,84; S 19.59

Заявляемое соединение представляет собой, белый кристаллический порошок, нерастворимый в воде, этаноле, растворимый в хлороформе, диметилформамиде, диметилсульфоксиде.

Пример 2.

Оценка влияния заявляемого соединения на реакции образования активных форм кислорода (АФК) (модель I).

Для инициации активных форм кислорода использовали 20 мл фосфатного буфера с добавлением цитрата и люминола. Состав буфера: 2,72 г. KH₂PO₄, 7,82 г. KCl, 1,5 г. цитрата натрия C₆H₈O₇Na₃*5,5H₂O на 1 литр дистиллированной воды. Величину рН полученного раствора доводили до 7,45 ед. титрованием насыщенным раствором КОН и добавляли 0,2 мл маточного раствора люминола (10-5 М). Образование АФК инициировали введением 1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа.

В таблице приведены значения медиан светосуммы свечения и максимальной интенсивности свечения.

Как видно из таблицы, введение заявляемого соединения и препарата сравнения приводило к снижению светосуммы свечения и максимальной интенсивности свечения, что свидетельствует о том, что данные соединения обладают способностью нейтрализовать образование активных форм кислорода.

Пример 3.

Оценка влияния заявляемого соединения на процессы перекисного окисления липидов (модель II).

Для оценки действия соединений на перекисное окисление липидов (модель II) из куриного желтка готовили липопротеиновые комплексы. Желток смешивали с фосфатным буфером в соотношении 1:5, затем гомогенизировали. Хемилюминесценцию инициировали добавлением 1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа, запускавшего процесс окисления ненасыщенных жирных кислот, входящих в состав липидов. По интенсивности развивающегося свечения судили о процессах перекисного окисления липидов.

Как видно из таблицы, введение заявляемого соединения I приводило к снижению светосуммы и максимальной светимости ХЛ, что свидетельствует о том, что соединение I обладает способностью нейтрализовать перекисные липидные радикалы.

Пример 4.

Фагоцитарная активность заявляемого соединения (модель III).

Для исследования влияния соединений на генерацию активных форм кислорода фагоцитами использовали цельную гепаринизированную кровь (из расчета 50 ЕД гепарина на 1 мл крови) здоровых добровольцев. Соединения вносили в 0,1 мл крови в объеме 0,01 мл, инкубировали в течение 5 минут. Интенсивность генерации фагоцитами активных форм кислорода определяли с помощью регистрации уровня люминолзависимой хемилюминесценции. Для этого добавляли 2,0 мл физиологического раствора с люминолом в концентрации 10^-5 М и определяли хемилюминесценцию в течение 5 минут. «Кислородный взрыв» в фагоцитах стимулировали добавлением к 0,1 мл крови 0,01 мл 1% взвеси зимозана с последующим инкубированием в течение 5 минут при 37°С. Появление активных форм кислорода фиксировалось через 1-2 минуты после воздействия чужеродного материала на мембраны фагоцитов и достигало своего максимума за 5-6 минут, длилось в течение 20-30 минут. Данный процесс сопровождался свечением, интенсивность которого резко увеличивается в присутствии люминола.

Заявляемое химическое соединение ингибирует фагоцитарную активность клеток крови (Таблица).

Согласно результатам исследования, заявляемое соединение I уменьшает спонтанное свечение и быструю вспышку, демонстрирует ингибирование интенсивности ПОЛ, уступающее препарату сравнения, однако, в отличие от аскорбиновой кислоты, соединение I оказывает ингибирующий эффект на генерацию активных форм кислорода фагоцитами, не проявляя прооксидантную активность.

Изобретение относится к новому соединению - N-бутил-2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетамиду, обладающему антиоксидантной активностью. Технический результат: получено новое соединение N-бутил-2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетамид, которое обладает способностью нейтрализовать образование активных форм кислорода и обладает антиоксидантной активностью. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 4 пр.

1. N-бутил-2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетамид формулы

2. Соединение по п. 1, проявляющее антиоксидантную активность.

3. Соединение по п. 1, ингибирующее фагоцитарную активность.