Способы лечения рака с помощью анти-PD-1-антител и анти-CTLA4-антител Российский патент 2024 года по МПК A61K39/395 A61P35/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к терапиям, эффективным для лечения рака. В частности, изобретение относится к способу лечения рака, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в комбинации с анти-CTLA4-антителом или его антигенсвязывающим фрагментом с использованием режимов дозирования, указанных в настоящем документе.

Перекрестная ссылка на родственные заявки

По данной заявке испрашиваются приоритет по предварительной заявке на патент США 62/630038, поданной 13 февраля 2018 года, предварительной заявке на патент США 62/732838, поданной 18 сентября 2018 года, и предварительной заявке на патент США 62/740741, поданной 3 октября 2018 года, полное содержание каждой из которых включено в настоящий документ в качестве ссылки.

Ссылка на перечень последовательностей, представленный в электронном виде Список последовательностей по настоящей заявке представлен в электронном виде через EFS-Web в виде списка последовательностей в формате ASCII с именем файла «24695WOPCT-SEQLIST-06FEB2019.TXT», датой создания 6 февраля 2019 года и размером 56,0 кб. Этот перечень последовательностей, представленный через EFS-Web, является частью описания и полностью включен в настоящее описание в качестве ссылки.

Предпосылки создания изобретения

PD-1 рассматривают как важный элемент в иммунной регуляции и поддержании периферической толерантности. PD-1 умеренно экспрессируется на наивных Т-, В- и NKT-клетках и повышающе регулируется передачей сигнала через Т/В-клеточные рецепторы на лимфоцитах, моноцитах и миелоидных клетках (Sharpe et al., The function of programmed cell death 1 and its ligands in regulating autoimmunity and infection. Nature Immunology (2007); 8:239-245).

Два известных лиганда для PD-1, PD-L1 (B7-H1) и PD-L2 (B7-DC) экспрессируются в злокачественных новообразованиях человека, возникающих в различных тканях. На больших наборах образцов, например, рака яичников, почек, колоректального рака, рака поджелудочной железы, печени и меланомы, показано, что экспрессия PD-L1 коррелирует с неблагоприятным прогнозом и сниженной общей выживаемостью независимо от последующего лечения (Dong et al., Nat Med. 8(8):793-800 (2002); Yang et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. 49: 2518-2525 (2008); Ghebeh et al. Neoplasia 8:190-198 (2006); Hamanishi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104: 3360-3365 (2007); Thompson et al., Cancer 5: 206-211 (2006); Nomi et al., Clin. Cancer Research 13:2151-2157 (2007); Ohigashi et al., Clin. Cancer Research 11: 2947-2953 (2005); Inman et al., Cancer 109: 1499-1505 (2007); Shimauchi et al. Int. J. Cancer 121:2585-2590 (2007); Gao et al. Clin. Cancer Research 15: 971-979 (2009); Nakanishi J. Cancer Immunol Immunother. 56: 1173-1182 (2007); и Hino et al., Cancer 00: 1-9 (2010)).

Аналогично, было установлено, что экспрессия PD-1 на инфильтрирующих опухоли лимфоцитах является признаком дисфункциональных Т-клеток при раке молочной железы и меланоме (Ghebeh et al., ВМС Cancer. 2008 8:5714-15 (2008); Ahmadzadeh et al., Blood 114: 1537-1544 (2009)) и коррелирует с неблагоприятным прогнозом при раке почки (Thompson et al., Clinical Cancer Research 15: 1757-1761(2007)). Соответственно, было сделано предположение о том, что экспрессирующие PD-L1 опухолевые клетки взаимодействуют с экспрессирующими PD-1 Т-клетками с ослаблением активации Т-клеток и уклонением от иммунного надзора, способствуя тем самым ослаблению иммунного ответа против опухоли.

Терапии, основанные на ингибировании иммунных контрольных точек, нацеленные на сигнальный путь PD-1, привели к революционным улучшениям клинического ответа во многих типах рака у человека (Brahmer et al., N Engl J Med 2012, 366: 2455-65; Garon et al. N Engl J Med 2015, 372: 2018-28; Hamid et al., N Engl J Med 2013, 369: 134-44; Robert et al., Lancet 2014, 384: 1109-17; Robert et al., N Engl J Med 2015, 372: 2521-32; Robert et al., N Engl J Med 2015, 372: 320-30; Topalian et al., N Engl J Med 2012, 366: 2443-54; Topalian et al., J Clin Oncol 2014, 32: 1020-30; Wolchok et al., N Engl J Med 2013, 369: 122-33). Иммунотерапии, направленные на сигнальный путь PD-1, включают моноклональные антитела, направленные на рецептор PD-1 (KEYTRUDA™ (пембролизумаб), Merck and Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA и OPDIVO™ (ниволумаб), Bristol-Myers Squibb Company, Princeton, NJ, USA), а также те, которые связываются с лигандом PD-L1 (MPDL3280A; TECENTRIQ™ (атезолизумаб), Genentech, San Francisco, СА, USA; IMFINZI™ (дурвалумаб), AstraZeneca Pharmaceuticals LP, Wilmington, DE; BAVENCIO™ (авелумаб), Merck KGaA, Darmstadt, Germany). Оба терапевтических подхода продемонстрировали противоопухолевые эффекты во многих типах рака.

Было высказано предположение о том, что эффективность таких антител может быть увеличена, если их вводить в сочетании с другими одобренными или экспериментальными терапиями рака, например, облучением, хирургическим вмешательством, химиотерапевтическими агентами, таргетными терапиями, агентами, которые ингибируют другие сигнальные пути, которые дисрегулированы в опухолях, и другие агенты, повышающие иммунитет.Одним из таких агентов, который тестировали в комбинации с антагонистами PD-1, является антагонист цитотоксического Т-лимфоцит-ассоциированного антигена 4 (сокращенно CTLA4).

CTLA4 имеет очень тесную взаимосвязь с молекулой CD28 по структуре гена, расположению хромосом, гомологии последовательностей и экспрессии генов. Оба являются рецепторами для костимулирующей молекулы В7, в основном экспрессирующейся на поверхности активированных Т-клеток. После связывания с В7 CTLA4 может подавлять активацию мышиных и человеческих Т-клеток, играя отрицательную регулирующую роль в активации Т-клеток.

Моноклональные антитела (mAb) против CTLA4 или лиганды CTLA4 могут предотвращать связывание CTLA4 с его нативными лигандами, тем самым блокируя трансдукцию отрицательного регулирующего сигнала Т-клеток CTLA4 и повышая чувствительность Т-клеток к различным антигенам. В этом аспекте результаты исследований in vivo и in vitro в значительной степени согласуются. В настоящее время некоторые моноклональные антитела (mAb) против CTLA4 проходят клинические испытания в отношении лечения рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, колоректального рака, рака желудочно-кишечного тракта, рака печени, злокачественной меланомы и т.д. (Grosso et al., CTLA-4 blockade in tumor models: an overview of preclinical and translational research. Cancer Immun. 13:5 (2013)).

В качестве важных факторов, влияющих на функцию Т-клеток, CTLA4 и mAb CTLA4 могут оказывать специфическое терапевтическое воздействие на заболевания, вмешиваясь в иммунную микросреду в организме. Они обладают высокой эффективностью и устраняют недостаток традиционных лекарственных средств, открывая новый путь генной терапии. CTLA4 и mAb CTLA4 проходят тестирование в экспериментах и на различных фазах клинических испытаний. Например, в отношении аутоиммунных заболеваний было показано, что они эффективно подавляют гиперреактивность дыхательных путей в животной модели астмы, предотвращают развитие ревматических заболеваний, опосредуют иммунную толерантность к аллотрансплантату в организме и т.п. С другой стороны, хотя биологическая генная терапия не показала каких-либо побочных эффектов в краткосрочных клинических испытаниях, следует обратить внимание на потенциальный эффект после длительного применения. Например, чрезмерная блокада передачи сигналов CTLA4-B7 с помощью mAb CTLA4 может привести к развитию аутоиммунных заболеваний. Поскольку антитела могут специфически связываться со своими антигенами и вызывать лизис клеток-мишеней или блокировать развитие патологии, разработка и использование лекарственных препаратов на основе антител, особенно гуманизированных антител, имеют важное значение в клиническом лечении злокачественных опухолей и других иммунных заболеваний у людей.

Было бы целесообразно разработать дополнительные схемы дозирования, которые позволят вводить безопасную и эффективную дозу анти-PD-1-антитела, отдельно или в комбинации с анти-CTLA4-антителом, что является более удобным для пациентов. Было бы целесообразно разработать способы лечения рефрактерных к PD-1/PD-L1 видов рака путем введения анти-PD-1-антитела и анти-CTLA4-антитела с использованием схем дозирования, представленных в настоящем документе.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает альтернативные, менее частые режимы дозирования для лечения имеющего рак пациента с помощью анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом ожидается, что схема дозирования обеспечит безопасную и эффективную дозу анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающего фрагмента. Оно также обеспечивает альтернативные, менее частые режимы дозирования для лечения имеющего рак пациента с помощью комбинации анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с анти-CTLA4-антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В частности, изобретение обеспечивает способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение пациенту около 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента каждые шесть недель, при этом анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (а) определяющие комплементарность области (CDR) легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и определяющие комплементарность области (CDR) тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8; или (b) CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 11, 12 и 13, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 14, 15 и 16. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой пембролизумаб.

Также обеспечен способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение пациенту около 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и около 25 мг, 50 мг, 75 мг или 100 мг анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом каждое из анти-PD-1-антитела и анти-CTLA4-антитела или их антигенсвязывающих фрагментов вводят пациенту каждые шесть недель, при этом анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (а) определяющие комплементарность области (CDR) легкой цепи, содержащие последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8; или (b) CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 11, 12 и 13, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 14, 15 и 16; и при этом анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 41, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 36, 37 и 38.

В одном варианте осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8; и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 41, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38.

В еще одном варианте осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 4; и анти-CTLA4-антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 50, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 49.

Во всех вышеупомянутых вариантах осуществления количество анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, вводимого пациенту, составляет от примерно 350 мг до примерно 450 мг. В других вариантах осуществления количество анти-PD-1-антитела или антигенсвязывающего фрагмента составляет примерно 400 мг. В других вариантах осуществления количество анти-PD-1-антитела или антигенсвязывающего фрагмента составляет 400 мг.

Во всех описанных выше в настоящем документе способах лечения, композициях и применениях анти-PD-1-антитело или антигенсвязывающий фрагмент ингибирует связывание PD-L1 с PD-1, и предпочтительно также ингибирует связывание PD-L2 с PD-1. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления способов лечения, композиций и применений по настоящему изобретению анти-PD-1-антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с PD-1 и блокирует связывание PD-L1 с PD-1. В одном конкретном варианте осуществления анти-PD-1-антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, и при этом тяжелая и легкая цепи содержат аминокислотные последовательности, показанные на фигуре 1 (SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 10). В другом варианте осуществления анти-PD-1-антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, и при этом тяжелая и легкая цепи содержат аминокислотные последовательности, показанные на фигуре 1 (SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 10) и анти-CTLA4-антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая и легкая цепи содержат аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 57 и 58.

В некоторых предпочтительных вариантах осуществления способов лечения, композиций и применений по изобретению анти-CTLA4-антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с CTLA4. В одном варианте осуществления анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 41, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38. В одном конкретном варианте осуществления анти-CTLA4-антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, при этом вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержат аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 50 и 49, соответственно. В другом варианте осуществления анти-CTLA-антитело представляет собой моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 57, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 58.

В некоторых вариантах осуществления любого из указанных выше способов, композиций и применений злокачественная опухоль экспрессирует один или оба из PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления экспрессия PD-L1 в злокачественной опухоли является повышенной. В дополнительном варианте осуществления злокачественная опухоль является рефрактерной к PD-1/PD-L1 (например, это злокачественная опухоль, которая не отвечала на предшествующее лечение агентом против PD-1 или против PD-L1). В дополнительном варианте осуществления злокачественная опухоль представляет собой меланому рефрактерную к PD-1/PD-L1.

Краткое описание фигур

На фигуре 1 показаны аминокислотные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи для иллюстративного анти-PD-1 моноклонального антитела, применимого в настоящем изобретении (SEQ ID NO: 5 и 10, соответственно). Вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи подчеркнуты (SEQ ID NO: 4 и 9), и CDR выделены жирным шрифтом и заключены в рамку.

На фигуре 2 показано, что Сmах пембролизумаба в равновесном состоянии для 400 мг Q6W находится в диапазоне от 2 мг/кг Q3W и 200 мг Q3W до 10 мг/кг Q2W.

На фигуре 3 показано, что воздействия пембролизумаба (Cavg и Cmin) в равновесном состоянии аналогичны для 400 мг Q6W по сравнению с 2 мг/кг Q3W и 200 мг Q3W.

На фигурах 4А и 4В показаны фармакокинетические профили пембролизумаба в равновесном состоянии для режима дозирования 400 мг Q6W в сравнении с режимом дозирования фиксированной дозы 200 мг (верхний) и режимом дозирования Q3W, 2 мг/кг массы тела (нижний). Результаты представлены для концентраций в логарифмическом масштабе (фигура 4А) и концентраций в линейном масштабе (фигура 4В).

Подробное описание изобретения

I. Определения и сокращения

В описании и прилагаемой формуле изобретения применяются следующие сокращения:

АЕ - нежелательное явление

AUCss - площадь под кривой зависимости концентрации от времени в устойчивом состоянии

BICR - независимая централизованная оценка в слепом режиме

Cavg, ss - усредненная по времени концентрация в равновесном состоянии

CDR - определяющая комплементарность область

CI - доверительный интервал

Cmax, ss - пиковые концентрации в равновесном состоянии

Cmin, ss - минимальные концентрации в равновесном состоянии

CPS - Combined Positive Score

CTLA4 - цитотоксический Т-лимфоцит-ассоциированный антиген 4

DOR - длительность ответа

ECG - электрокардиограмма

ECOG - Восточная кооперативная онкологическая группа

E-R - ответ на воздействие (концентрацию)

FFPE - фиксированный формалином, залитый парафином

FR - каркасная область

GM - среднее геометрическое

НСС - гепатоцеллюлярная карцинома

HNSCC - плоскоклеточный рак головы и шеи

HL - лимфома Ходжкина

IgG - иммуноглобулин G

IHC - иммуногистохимия или иммуногистохимический

IV - внутривенно

LPS - балл пропорции лимфомы

mAb - моноклональные антитела

МСС - карцинома из клеток Меркеля

MEL - меланома

MMR - система исправления несоответствий

MPS - оценка модифицированной пропорции

MSI-H - высокая частота микросателлитной нестабильности

NCI СТСАЕ - Общие терминологические критерии нежелательных явлений Национального института рака

NSCLC - немелкоклеточный рак легкого

ORR - частота объективного ответа

OS - общая выживаемость

PD - прогрессирующее заболевание

PD-1 - запрограммированная смерть 1 (также известная как запрограммированная смерть клетки-1 и рецептор запрограммированной смерти 1)

PD-L1 - лиганд 1 запрограммированной гибели клеток 1

PD-L2 - лиганд 2 запрограммированной гибели клеток 1

PFS - выживаемость без прогрессирования

РК - фармакокинетические параметры

Q2W - одна доза каждые две недели

Q3W - одна доза каждые три недели

Q6W - одна доза каждые шесть недель

RCC - почечно-клеточная карцинома

SAE - серьезное нежелательное явление

SC - подкожное введение

TPS - Tumor Proportion Score

V_H - вариабельная область тяжелой цепи иммуноглобулина

V_L - вариабельная область легкой цепи иммуноглобулина

Для облегчения понимания изобретения ниже специально определены некоторые технические и научные термины. Если конкретно не определено где-либо в другом месте в этом документе, все другие технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют значение, в котором они обычно понимаются специалистом в данной области, к которой относится это изобретение.

Ссылка на «или» указывает одну или обе возможности, если контекст явно не диктует одну из указанных возможностей. В некоторых случаях «и/или» используется, чтобы выделить одну или обе возможности.

Используемые в настоящем документе, включая прилагаемую формулу изобретения, формы единственного числа, такие как «а», «ап» и «the», включают соответствующие им ссылки на множественное число, если из контекста явно не диктует иное.

Термин «примерно» при изменении количества (например, мг) вещества или композиции, или значения параметра, характеризующего стадию в способе, или т.п., относится к отклонению численной величины, которое может возникать, например, в ходе типичных процедур измерения, обращения и отбора проб, связанных с приготовлением, снятием характеристик и/или использованием вещества или композиции; из-за непреднамеренной ошибки в этих процедурах; из-за различий в изготовлении, источнике или чистоте ингредиентов, используемых для изготовления композиций или выполнения процедур; и т.п. В некоторых вариантах осуществления «примерно» может означать отклонение в пределах ±0,1%, ±0,5%, ±1%, ±2%, ±3%, ±4%, ±5%, ±6%, ±7%, ±8. %, ±9% или ±10%. Что касается дозировки «примерно 400 мг», то дозировка может составлять от 360 мг до 440 мг, от 370 мг до 430 мг, от 380 мг до 420 мг, от 390 мг до 410 мг, от 395 мг до 405 мг, от 400 до 440 мг или от 390 до 440 мг. В альтернативных вариантах осуществления дозировка может составлять 360 мг, 365 мг, 370 мг, 375 мг, 380 мг, 385 мг, 390 мг, 395 мг, 400 мг, 405 мг, 410 мг, 415 мг, 420 мг, 425 мг, 430 мг, 435 мг или 440 мг. Что касается количества времени между введениями в схеме терапевтического лечения (то есть количества времени между введениями анти-PD-1 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, например, «примерно 6 недель», которое используется здесь взаимозаменяемо с «приблизительно каждые шесть недель»), «примерно» относится к заявленному времени ± отклонение, которое может возникать из-за графика пациента/клинициста и доступности вокруг целевой даты 6-недель. Например, «примерно 6 недель» может относиться к 6 неделям ±5 дней, 6 неделям ±4 дня, 6 неделям ±3 дня, 6 неделям ±2 дня или 6 неделям ±1 день, или может относиться к диапазону от 5 недель, 2 дней до 6 недель, 5 дней.

Фармакокинетическое «равновесное состояние» представляет собой период времени, в течение которого любое накопление концентраций лекарственного средства за счет многократных доз достигло максимума, и системное воздействие лекарственного средства считается однородным после введения каждой последующей дозы; в конкретном случае пембролизумаба равновесное состояние достигается на ~16 неделе или через ~16 недель введения.

AUCss, Cavg,ss и Cmin,ss представляют собой фармакокинетические показатели системного воздействия лекарственного средства (например, пембролизумаба) на человека после его введения и обычно считаются факторами, влияющими на эффективность лекарственного средства. AUCss и Cavg,ss представляют собой среднее воздействие за интервал дозирования, но отличаются по единицам измерения. «Cmin,ss» представляет минимальную или самую низкую (минимальную) концентрацию лекарственного средства, наблюдаемую в конце интервала дозирования, непосредственно перед введением следующей дозы.

«Cmax,ss» представляет собой максимальную или самую высокую (пиковую) концентрацию лекарственного средства, наблюдаемую вскоре после его введения. В конкретном случае пембролизумаба, который вводят в виде внутривенной инфузии, пиковая концентрация появляется сразу же после окончания инфузии. Cmax,ss является показателем, который обычно считается фактором, влияющим на безопасность.

«Введение» и «лечение» применительно к животному, человеку, экспериментальному субъекту, клетке, ткани, органу или биологической жидкости, относятся к приведению в контакт экзогенного фармацевтического, терапевтического, диагностического агента или композиции с животным, человеком, субъектом, клеткой, тканью, органом или биологической жидкостью. «Лечить» или «лечение» рака в контексте настоящего описания означает введение анти-PD-1-антитела или антигенсвязывающего фрагмента, одного или в комбинации с анти-CTLA4-антителом или его антигенсвязывающий фрагментом, субъекту, страдающему раком или у которого диагностирован рак, для достижения по меньшей мере одного положительного терапевтического эффекта, такого как, например, уменьшение количества раковых клеток, уменьшение размера опухоли, уменьшение скорости инфильтрации раковых клеток в периферические органы или уменьшение скорости метастазирования опухоли или роста опухоли. «Лечение» может включать одно или несколько из следующего: индукцию/усиление противоопухолевого иммунного ответа, снижение уровня одного или нескольких онкомаркеров, остановку или задержку роста опухоли или злокачественного заболевания крови, или прогрессирования заболевания, ассоциированного со связыванием PD-1 с его лигандами PD-L1 и/или PD-L2 («заболевание, связанное с PD-1»), такого как рак, стабилизацию заболевания, связанного с PD-1, ингибирование роста или выживания опухолевых клеток, устранение или уменьшение размера одного или нескольких раковых поражений или опухолей, снижение уровня одного или нескольких онкомаркеров, облегчение или устранение клинических проявлений заболевания, связанного с PD-1, уменьшение тяжести или продолжительности клинических симптомов заболевания, связанного с PD-1, такого как рак, продление выживаемости пациента относительно ожидаемой выживаемости у аналогичного не подвергнутого лечению пациента, и индукцию полной или частичной ремиссии злокачественного состояния или другого заболевания, связанного с PD-1.

Положительные терапевтические эффекты при раке можно измерить рядом способов (см. W.A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S-10S (2009)). Например, что касается ингибирования роста опухоли, в соответствии со стандартами NCI, Т/С ≤ 42% является минимальным уровнем противоопухолевой активности. Т/С < 10% считается высоким уровнем противоопухолевой активности, при этом Т/С (%) = Медиана объема опухоли у подвергнутых лечению субъектов/Медиана объема опухоли у контроля × 100. В некоторых вариантах осуществления лечение, достигаемое с помощью терапевтически эффективного количества, представляет собой любую из выживаемости без прогрессирования (PFS), выживаемости без признаков заболевания (DFS) или общей выживаемости (OS). PFS, также называемая «Периодом времени до прогрессирования опухоли», обозначает продолжительность времени во время и после лечения, когда рак не растет, и включает отрезок времени, когда пациенты проявляли полный ответ или частичный ответ, а также отрезок времени, когда пациенты проявляли стабильное заболевание. DFS относится к продолжительности времени в течение и после лечения, когда пациент остается свободным от заболевания. OS относится к продлению продолжительности жизни по сравнению с наивными или не подвергнутыми лечению индивидуумами или пациентами. Хотя вариант осуществления способов лечения, композиций и применений по настоящему изобретению может не быть эффективным в достижении положительного терапевтического эффекта у каждого пациента, он должен быть эффективен у статистически значимого количества субъектов, определенного с помощью любого статистического критерия, известного в данной области, такого как критерий Стьюдента, критерий Хи-квадрат, U-критерий Манна-Уитни, критерий Краскела-Уоллиса (Н-критерий), критерий Джонкхира-Терпстры и критерий Вилкоксона.

Термин «пациент» (альтернативно называемый в настоящем документе «субъектом» или «индивидуумом») относится к млекопитающему (например, крысе, мыши, собаке, кошке, кролику), который можно лечить способами и композициями по изобретению, предпочтительно человеку. В некоторых вариантах осуществления пациентом является взрослый пациент.В других вариантах осуществления пациентом является педиатрический пациент.

Термин «антитело» относится к любой форме антитела, которая проявляет желаемую биологическую или связывающую активность. Таким образом, он используется в самом широком смысле и, в частности, охватывает, но без ограничения, моноклональные антитела (в том числе полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, гуманизированные, полностью человеческие антитела, и химерные антитела. «Родительские антитела» представляют собой антитела, полученные путем подвергания иммунной системы воздействию антигена до модификации антител для предполагаемого применения, такого как гуманизация антитела для применения в качестве терапевтического средства для человека.

Как правило, основная структурная единица антитела включает тетрамер. Каждый тетрамер включает две идентичные пары полипептидных цепей, при этом каждая пара имеет одну «легкую» (около 25 кДа) и одну «тяжелую» цепь (приблизительно 50-70 кДа). Амино-концевой участок каждой цепи включает вариабельную область из приблизительно 100-110 или более аминокислот, главным образом, ответственную за распознавание антигена. Карбокси-концевая часть тяжелой цепи может определять константную область, главным образом, ответственную за эффекторную функцию. Как правило, легкие цепи человека относят к легким цепям класса каппа и лямбда. Кроме того, тяжелые цепи человека, как правило, относят к классам мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон и определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, соответственно. В легких и тяжелых цепях вариабельные и константные области соединены с помощью «J-области» из приблизительно 12 или более аминокислот, при этом тяжелая цепь также включает «D-область» из приблизительно 10 или более аминокислот.См. в целом Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989).

Вариабельные области каждой пары легкая/тяжелой цепь образуют сайт связывания антитела. Таким образом, обычно интактное антитело имеет два сайта связывания. За исключением бифункциональных или биспецифических антител, два сайта связывания являются обычно одинаковыми.

Как правило, вариабельные домены как тяжелой, так и легкой цепей содержат три гипервариабельные области, также называемые определяющими комплементарность областями (CDR), которые расположены в относительно консервативных каркасных областях (FR). CDR обычно располагаются в нужном положении с помощью каркасных областей, что позволяет связываться со специфическим эпитопом. Обычно, от N-конца к С-концу, вариабельные домены как легких, так и тяжелых цепей содержат FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Отнесение аминокислот к каждому домену осуществляется обычно в соответствии с определениями Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5^th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196:901-917 or Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883.

Термин «гипервариабельная область» относится к аминокислотным остаткам антитела, которые ответственны за связывание антигена. Гипервариабельная область содержит аминокислотные остатки из «определяющей комплементарность области» или «CDR» (т.е. CDRL1, CDRL2 и CDRL3 в вариабельном домене легкой цепи и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 в вариабельном домене тяжелой цепи). См. Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (определение CDR-участков антитела по последовательности); смотрите также Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917 (определение CDR-участков антитела по структуре). Термин остатки «каркасной области» или «FR» относится к остаткам вариабельного домена, отличным от остатков гипервариабельного участка, определенных здесь как остатки CDR.

Если не указано иное, «фрагмент антитела» или «антигенсвязывающий фрагмент» относится к антигенсвязывающим фрагментам антител, то есть фрагментам антител, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном, с которым связывается полноразмерное антитело, например, фрагментам, которые сохраняют одну или несколько областей CDR. Примеры связывающих фрагментов антител включают, но без ограничения, фрагменты Fab, Fab', F(ab')₂ и Fv.

Антитело, которое «специфически связывается с» определенным белком-мишенью, представляет собой антитело, которое проявляет предпочтительное связывание с этой мишенью по сравнению с другими белками, но эта специфичность не подразумевает абсолютную специфичность связывания. Антитело считается «специфическим» в отношении намеченной мишени, если его связывание является событием, определяющим присутствие белка-мишени в образце, например, без вызывания нежелательных результатов, таких как ложные результаты. Антитела или их связывающие фрагменты, применимые в настоящем изобретении, будут связываться с белком-мишенью с аффинностью, которая по меньшей мере в два раза выше, предпочтительно по меньшей мере в десять раз выше, более предпочтительно по меньшей мере в 20 раз выше и наиболее предпочтительно по меньшей мере в 100 раз выше аффинности к белкам-немишеням. В данном контексте считается, что антитело специфически связывается с полипептидом, содержащим данную аминокислотную последовательность, например, аминокислотную последовательность зрелой молекулы PD-1 человека или PD-L1 человека, если оно связывается с полипептидами, содержащими эту последовательность, но не связывается с белками, в которых отсутствует эта последовательность.

«Химерное антитело» относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителе, полученном от конкретного вида (например, человека) или относящемся к конкретному классу или подклассу антител, в то время как остальная часть цепи (цепей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителе, полученном от другого вида (например, мыши) или относящемся к другому классу или подклассу антител, а также фрагментам таких антител, при условии, что они проявляют желаемую биологическую активность.

«Антитело человека» относится к антителу, которое включает только последовательности белка иммуноглобулина человека. Антитело человека может содержать мышиные углеводные цепи в случае продукции в организме мыши, в клетке мыши или в гибридоме, происходящей из клетки мыши. Аналогичным образом, «антитело мыши» или «антитело крысы» относится к антителу, которое содержит только последовательности иммуноглобулина мыши или крысы, соответственно.

«Гуманизированное антитело» относится к формам антител, которые содержат последовательности из нечеловеческих (например, мышиных) антител, а также антител человека. Такие антитела содержат минимальную последовательность, происходящую из нечеловеческого иммуноглобулина. Обычно гуманизированное антитело будет включать по существу все из по меньшей мере одного, а обычно двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петлевые участки соответствуют таковым из нечеловеческого иммуноглобулина, и все или по существу все из FR-областей являются таковыми из последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело необязательно также будет включать по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), обычно таковую иммуноглобулина человека. Префикс «hum», «hu» или «h» добавляется к названиям клонов антител, когда необходимо отличать гуманизированные антитела от родительских антител грызунов. Гуманизированные формы антител грызунов обычно содержат те же последовательности CDR родительских антител грызунов, хотя некоторые аминокислотные замены могут быть включены для увеличения аффинности, повышения стабильности гуманизированного антитела или по другим причинам.

Термины «рак», «раковый» или «злокачественный» относятся к физиологическому состоянию у млекопитающих или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, которое характеризуется неконтролируемым ростом клеток. Примеры рака включают, но без ограничения, карциному, лимфому, лейкоз, бластому и саркому. Более конкретные примеры таких видов рака включают, но без ограничения, плоскоклеточный рак, миелому, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, глиому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, острый миелоидный лейкоз (AML), множественную миелому, рак желудочно-кишечного тракта, рак почки, рак яичников, рак печени, лимфобластный лейкоз, лимфоцитарный лейкоз, колоректальный рак, рак эндометрия, рак почки, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, меланому, хондросаркому, нейробластому, рак поджелудочной железы, мультиформную глиобластому, рак шейки матки, рак головного мозга, рак желудка, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак ободочной кишки и рак головы и шеи. Дополнительные виды рака, которые можно лечить в соответствии с настоящим изобретением, включают те, которые характеризуются повышенной экспрессией одного или обоих PD-L1 и PD-L2 в исследуемых образцах тканей.

«Биотерапевтический агент» означает биологическую молекулу, такую как антитело или слитый белок, которая блокирует передачу сигнала от лиганда/рецептора в любом биологическом пути, который поддерживает сохранение и/или рост опухоли или подавляет противоопухолевый иммунный ответ.

«CDR» или «CDRs» означает определяющий комплементарность участок (участки) в вариабельной области иммуноглобулина, определяемый с использованием системы нумерации Kabat.

«Платиносодержащая химиотерапия» (также известная как платины) относится к использованию химиотерапевтического агента (агентов), применяющихся для лечения рака, которые представляют собой координационные комплексы платины. Платиносодержащие химиотерапевтические агенты представляют собой алкилирующие агенты, которые сшивают ДНК, что приводит к неэффективной репарации «мисматчей» ДНК и, как правило, к апоптозу. Примерами платины являются цисплатин, карбоплатин и оксалиплатин.

«Химиотерапевтический агент» представляет собой химическое соединение, пригодное для лечения рака. Классы химиотерапевтических агентов включают, но без ограничения: алкилирующие агенты, антиметаболиты, ингибиторы киназы, веретенныйяд растительные алкалоиды, цитотоксические/противоопухолевые антибиотики, ингибиторы топизомеразы, фотосенсибилизаторы, антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогенов (SERM), антипрогестероны, ингибиторы эстрогеновых рецепторов (ERD), антагонисты эстрогеновых рецепторов, агонисты рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона, антиандрогены, ингибиторы ароматазы, ингибиторы EGFR, ингибиторы VEGF, антисмысловые олигонуклеотиды, которые ингибируют экспрессию генов, вовлеченных в аномальную пролиферацию клеток или рост опухоли. Химиотерапевтические агенты, применимые в способах лечения по настоящему изобретению, включают цитостатические и/или цитотоксические агенты.

«Chothia» означает систему нумерации антител, описанную в Al-Lazikani et al., JMB 273:927-948 (1997).

«Консервативно модифицированные варианты» или «консервативная замена» относится к заменам аминокислот в белке другими аминокислотами, имеющими схожие характеристики (например, заряд, размер боковой цепи, гидрофобность/гидрофильность, конформацию основной цепи и жесткость и т.д.), так что изменения часто могут быть осуществлены без изменения биологической активности или других желательных свойств белка, таких как аффинность и/или специфичность к антигену. Специалисты в данной области признают, что, как правило, одиночные аминокислотные замены в несущественных областях полипептида существенно не изменяют биологическую активность (см., например, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.)). Кроме того, замены структурно или функционально схожих аминокислот с меньшей долей вероятности будут нарушать биологическую активность. Типичные консервативные замены представлены в таблице 1.

«По существу состоит из» и его вариации, такие как «по существу состоят из» или «по существу состоящий из», используемые в описании и формуле изобретения, означает включение любых перечисленных элементов или группы элементов и необязательное включение других элементов схожей или другой природы по сравнению с перечисленными элементами, которые не изменяют существенно основные или новые свойства указанного режима дозирования, способа или композиции. В качестве неограничивающего примера, антигенсвязывающий фрагмент PD-1, который по существу состоит из описанной аминокислотной последовательности, может также включать одну или несколько аминокислот, в том числе замен одного или нескольких аминокислотных остатков, которые не влияют существенно на свойства связывающего соединения.

«Содержать» или разновидности, такие как «содержат», «содержит» или «состоит из» используются во всем описании и формуле изобретения во включающем смысле, то есть для определения наличия заявленных признаков, но не для исключения наличия или добавления дополнительных признаков, которые могут существенно улучшить функционирование или эффективность любого из вариантов осуществления по изобретению, где контекст требует иного, что обусловлено языком выражения или необходимо подразумеваемым положением.

Используемые в настоящем документе термины «комбинированный» или «комбинирование», или «совместное составление», или «совместно составленный» относятся по меньшей мере к двум различным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые составлены вместе и хранятся в виде комбинированного продукта в одном флаконе или сосуде (например, инъекционное устройство), а не составлены и хранятся отдельно, а затем смешиваются перед введением или вводятся по отдельности. В одном варианте осуществления совместный состав содержит анти-PD-1-антитело и анти-CTLA4-антитело.

«Диагностическое моноклональное антитело против PD-1» означает mAb, которое специфически связывается со зрелой формой указанного PD-1 (PD-L1 или PD-L2), которая экспрессируется на поверхности некоторых клеток млекопитающих. В зрелом PD-1 отсутствует предсекреторная лидерная последовательность, также называемая лидерным пептидом. Термины «PD-1» и «зрелый PD-1» используются здесь взаимозаменяемо и, как будет подразумеваться, означают одну и ту же молекулу, если не указано иное или не вытекает со всей очевидностью из контекста.

В контексте настоящего описания диагностическое mAb против PD-L1 человека или mAb против hPD-L1 относятся к моноклональному антителу, которое специфически связывается со зрелой молекулой PD-L1 человека. Зрелая молекула PD-L1 человека состоит из аминокислот 19-290 следующей последовательности:

Конкретными примерами диагностических mAb против PD-L1 человека, применимых в качестве диагностических mAb для иммуногистохимического (IHC) выявления экспрессии PD-L1 в фиксированных формалином, залитых парафином (FFPE) срезах опухолевой ткани, являются антитело 20С3 и антитело 22С3, которые описаны в WO 2014/100079. Эти антитела содержат аминокислотные последовательности вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи, показанные в ниже таблице 2.

Другим mAb против PD-L1 человека, которое, как сообщалось, применимо для IHC выявления экспрессии PD-L1 в FFPE срезах тканей (Chen, B.J. et al., Clin Cancer Res 19: 3462-3473 (2013)), является кроличье mAb против PD-L1 человека, общедоступное от Sino Biological, Inc. (Beijing, P.R. China; Catalog number 10084-R015).

«Каркасная область» или «FR» в контексте настоящего описания означает вариабельные области иммуноглобулина, за исключением областей CDR.

«Выделенное антитело» и «выделенный фрагмент антитела» относятся к состоянию очистки и в таком контексте означают, что названная молекула по существу свободна от других биологических молекул, таких как нуклеиновые кислоты, белки, липиды, углеводы или другие материалы, такие как клеточный дебрис и среды для роста. Вообще, термин «выделенный», как подразумевается, не относится к полному отсутствию такого материала или к отсутствию воды, буферов или солей, если они не присутствуют в количествах, которые сильно мешают экспериментальному или терапевтическому применению связывающегося соединения, описанного в настоящем документе.

«Kabat» в контексте настоящего описания означает систему выравнивания и нумерации для иммуноглобулинов, впервые предложенную Elvin A. Kabat ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.).

«Моноклональное антитело» или «mAb», или «Mab» в контексте настоящего описания относится к популяции по существу гомогенных антител, т.е. молекулы антител, составляющие популяцию, являются идентичными по аминокислотной последовательности, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать, в незначительных количествах. Напротив, обычные препараты (поликлональных) антител, как правило, включают множество различных антител, имеющих разные аминокислотные последовательности в своих вариабельных доменах, в частности, своих CDR, которые часто специфичны для различных эпитопов. Определение «моноклональное» указывает на характер антитела, полученного из по существу гомогенной популяции антител, и не должно быть истолковано как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела, которые будут использоваться в соответствии с настоящим изобретением, могут быть получены методом получения гибридом, впервые описанным Kohler et al. (1975) Nature 256: 495, или могут быть получены методами рекомбинантных ДНК (см., например, патент США 4816567). «Моноклональные антитела» также могут быть выделены из фаговых библиотек антител с использованием методов, описанных, например, в Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 и Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597. См. также Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731.

«Анти-CTLA4-антитело», применимое в любом из способов лечения, композиций, наборов и применений по настоящему изобретению, включает моноклональные антитела (mAb) или их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с CTLA4 человека и блокируют взаимодействие CTLA4 со своими лигандами CD80 (В7.1) и CD 86 (В7.2). Анти-CTLA4-антитело может представлять собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело, и может включать человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область выбрана из группы, состоящей из константных областей IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и в предпочтительных вариантах осуществления человеческая константная область представляет собой константную область IgG1 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из фрагментов Fab, Fab'-SH, F(ab')₂, scFv и Fv.

«Анти-PD-1-антитело», применимое в любом из способов, композиций, наборов и применений по настоящему изобретению, включает моноклональные антитела (mAb) или их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с PD-1 человека. Альтернативные названия или синонимы для PD-1 и его лигандов включают: PDCD1, PD1, CD279 и SLEB2 для PD-1; PDCD1L1, PDL1, В7Н1, В7-4, CD274 и В7-Н для PD-L1; и PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc и CD273 для PD-L2. В любом из способов лечения, в любой из композиций и в любом из применений настоящего изобретения, в которых проводят лечение человеческого индивидуума, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент является антагонистом PD-1, который блокирует связывание PD-L1 человека с PD-1 человека, или блокирует связывание обоих, PD-L1 и PD-L2 человека, с PD-1 человека. Аминокислотные последовательности PD-1 человека можно найти в NCBI Locus No. NP_005009. Аминокислотные последовательности PD-L1 и PD-L2 человека можно найти в NCBI Locus No. NP_054862 и NP_079515, соответственно. Анти-PD-1-антитело может представлять собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело и может включать человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область выбрана из группы, состоящей из константных областей IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и в предпочтительных вариантах осуществления человеческая константная область представляет собой константную область IgG1 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из фрагментов Fab, Fab'-SH, F(ab')₂, scFv и Fv.

Экспрессия «PD-L1» или «PD-L2» означает любой детектируемый уровень экспрессии указанного белка PD-1 на клеточной поверхности или мРНК для указанного PD-1 в клетке или ткани, если не указано иное. Экспрессию белка PD-1 можно обнаружить с помощью диагностического антитела PD-1 в IHC анализе среза опухолевой ткани или с помощью проточной цитометрии. Альтернативно, экспрессию белка PD-1 опухолевыми клетками можно обнаружить с помощью получения изображения с использованием позитронно-эмиссионной томографии, используя связывающий агент (например, фрагмент антитела, аффитело и т.п.), который специфически связывается с желаемой PD-1-мишенью, например, PD-L1 или PD-L2. Методы обнаружения и измерения экспрессии мРНК для PD-1 включают RT-PCR и количественную RT-PCR в реальном времени.

Несколько подходов было описано для количественного определения экспрессии белка PD-L1 в IHC анализах срезов опухолевой ткани. См., например, Thompson et al., PNAS 101 (49): 17174-17179 (2004); Thompson et al., Cancer Res. 66:3381-3385 (2006); Gadiot et al., Cancer 117:2192-2201 (2011); Taube et al., Sci Transl Med 4, 127ra37 (2012); and Toplian et al., New Eng. J Med. 366 (26): 2443-2454 (2012).

В одном подходе используется простая бинарная конечная точка положительной или отрицательной для PD-L1 экспрессии, при этом положительный результат определяется в виде процента опухолевых клеток, которые проявляют гистологические признаки окрашивания мембраны клеточной поверхности. Срез опухолевой ткани считается положительным в отношении экспрессии PD-L1, если это значение составляет по меньшей мере 1%, предпочтительно 5% от общего количества опухолевых клеток.

В другом подходе экспрессию PD-L1 в срезе опухолевой ткани количественно определяют в опухолевых клетках, а также в инфильтрирующих иммунных клетках, которые преимущественно включают лимфоциты. Процент опухолевых клеток и инфильтрирующих иммунных клеток, которые проявляют окрашивание мембраны, количественно определяют как < 5%, от 5 до 9%, а затем с шагом в 10% вплоть до 100%. В случае опухолевых клеток экспрессию PD-L1 принимают за отрицательную, если оценкой является оценка < 5%, и за положительную, если оценка составляет ≥ 5%. Экспрессию PD-L1 в иммунном инфильтрате регистрируют в виде полуколичественного определения, называемого скорректированной оценкой воспаления (AIS), которую определяют путем умножения процента клеток с окрашиванием мембраны на интенсивность инфильтрата, которая оценивается как отсутствие (0), легкая (1 балл, редкие лимфоциты), умеренная (2 балла, очаговая инфильтрация опухоли лимфогистиоцитарными агрегатами) или сильная (3 балла, диффузная инфильтрация). Срез опухолевой ткани принимают за положительный в отношении экспрессии PD-L1 иммунными инфильтратами, если AIS ≥ 5.

Срез опухолевой ткани, который был окрашен в соответствии с IHC с использованием диагностического антитела против PD-L1, может быть также оценен в отношении экспрессии белка PD-L1 путем оценки экспрессии PD-L1 как в опухолевых клетках, так и в инфильтрирующих иммунных клетках в срезе ткани, используя способ оценки. См. WO 2014/165422. Один способ оценки PD-L1 включает изучение каждого опухолевого очага на срезе ткани в отношении окрашивания и присвоение срезу ткани одной или обеих из модифицированной Н оценки (MHS) и модифицированной оценки относительного содержания (MPS). Чтобы поставить MHS, четыре отдельных процентных значения оцениваются во всех жизнеспособных опухолевых клетках и окрашенных мононуклеарных воспалительных клетках во всех исследованных опухолевых очагах: (а) клетки, не имеющие окрашивания (интенсивность = 0), (b) слабое окрашивание (интенсивность = (с) умеренное окрашивание (интенсивность = 2+) и (d) сильное окрашивание (интенсивность = 3+). Клетка должна иметь хотя бы частичное окрашивание мембраны, чтобы ее можно было включить в процентные значения, соответствующие слабому, умеренному или сильному окрашиванию. Затем оцененные процентные значения, сумма которых составляет 100%, вводят в формулу 1 x (процент клеток со слабым окрашиванием) + 2х(процент клеток с умеренным окрашиванием) + 3х(процент клеток с сильным окрашиванием), и результат присваивается срезу ткани в качестве MHS. MPS ставится путем оценки во всех жизнеспособных опухолевых клетках и окрашенных мононуклеарных воспалительных клетках во всех исследованных опухолевых очагах, процента клеток, которые имеют хотя бы частичное окрашивание мембраны любой интенсивности, и полученный процент присваивается срезу ткани в качестве MPS. В некоторых вариантах осуществления опухоль принимают за положительную в отношении экспрессии PD-L1, если MHS или MPS является положительной.

Другим способом оценки/количественного определения экспрессии PD-L1 в опухоли является «Combined Positive Score» или «CPS», который относится к алгоритму определения показателя экспрессии PD-L1 из образца опухоли пациента. CPS пригоден при отборе пациентов для лечения с использованием определенных схем лечения, включая методы лечения, включающие введение анти-PD-1-антитела, в котором экспрессия PD-L1 ассоциирована с более высокой частотой ответа у конкретной популяции пациентов по сравнению с той же популяцией пациентов, которая не экспрессирует PD-L1. CPS определяется путем определения количества жизнеспособных PD-L1-положительных опухолевых клеток, количества жизнеспособных PD-L1-отрицательных опухолевых клеток и количества жизнеспособных PD-L1-положительных мононуклеарных воспалительных клеток (MIC) в опухолевой ткани от пациента, имеющего опухоль, и расчет CPS по следующей формуле:

(Кол-во PD-L1-положительных опухолевых клеток) + (Кол-во PD-L1-положительных MIC) × 100%

(Кол-во PD-L1-положительных опухолевых клеток) + (Кол-во PD-L1-отрицательных опухолевых клеток).

В конкретных вариантах осуществления используемый способ оценки экспрессии PD-L1 представляет собой «показатель доли лимфомы». Лимфома характеризуется гомогенной популяцией слитых клеток, которые стирают архитектуру лимфатического узла или структуру метастатического участка. «LPS» или «оценка доли лимфомы» представляет собой процентную долю этой популяции клеток, которые экспрессируют PD-L1. При определении LPS не делается попыток отличить действительно неопластические клетки от реактивных клеток. Экспрессия PD-L1 характеризуется интенсивностью частичного или полного окрашивания мембраны.

Еще одним способом оценки экспрессии PD-L1 является «TPS» или «Tumor Proportion Score», который представляет собой долю опухолевых клеток, экспрессирующих PD-L1 на клеточной мембране. TPS обычно включает процент неопластических клеток, экспрессирующих PD-L1 с любой интенсивностью (слабой, умеренной или сильной), которую можно определить с помощью иммуногистохимического анализа с использованием диагностических mAb против PD-L1 человека, например, антитело 20С3 и антитело 22С3, описанные выше. Считается, что клетки экспрессируют PD-L1, если присутствует окрашивание мембраны, включая клетки с частичным окрашиванием мембраны.

Уровень экспрессии мРНК PD-1 можно сравнить с уровнями экспрессии мРНК одного или нескольких контрольных генов, которые часто используются в количественной RT-PCR, таких как убиквитин С.

В некоторых вариантах осуществления уровень экспрессии PD-L1 (белка и/или мРНК) в злокачественных клетках и/или в инфильтрующих иммунных клетках в опухоли определяется как «сверхэкспрессированный» или «повышенный» на основе сравнения с уровнем экспрессии PD-L1 (белка и/или мРНК) в соответствующем контроле. Например, контрольным уровнем экспрессии белка PD-L1 или мРНК может быть уровень, определяемый в незлокачественных клетках того же типа или на срезе из соответствующей нормальной ткани. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления экспрессия PD-L1 в образце опухоли определяется как повышенная, если белка PD-L1 (и/или мРНК PD-L1) в образце по меньшей мере на 10%, 20% или 30% больше, чем в контроле.

«Срез ткани» относится к отдельной части или кусочку образца ткани, например, тонкому срезу ткани, сделанному из образца нормальной ткани или опухоли.

«Опухоль» применительно к субъекту, у которого диагностирован рак или у которого подозревается наличие рака, относится к злокачественной или потенциально злокачественной неоплазме или массе ткани любого размера и включает первичные опухоли и вторичные неоплазмы. Солидной опухолью является характеризующаяся аномальным ростом масса ткани, которая обычно не содержит кисты или жидкие области. Различные типы солидных опухолей названы по типу клеток, которые их образуют. Примерами солидных опухолей являются саркомы, карциномы и лимфомы. Лейкозы (рак крови) обычно не образуют солидные опухоли (National Cancer Institute, Dictionary of Cancer Terms).

«Вариабельные области» или «V-область» в контексте настоящего описания означает сегмент цепей IgG, который является вариабельным по последовательности между различными антителами. Она простирается до остатка 109 по Kabat в легкой цепи и 113 в тяжелой цепи.

«Критерии оценки ответа RECIST 1.1» в контексте настоящего описания означают определения, приведенные в Eisenhauer, Е.А. et al., Eur. J. Cancer 45:228-247 (2009) для целевых поражений или нецелевых поражений, в зависимости от ситуации, в которой измеряется ответ.

II. Антитела против PD-1 и антигенсвязывающие фрагменты, используемые в изобретении

Примеры mAb, которые связываются с PD-1 человека, используемых в способах лечения, композициях и применениях по настоящему изобретению, описаны в US 7521051, US 8008449 и US 8354509. Специфические mAb против PD-1 человека, эффективные в качестве антагониста PD-1 в способах лечения, композициях и применениях по настоящему изобретению, включают: пембролизумаб (ранее известный как MK-3475, SCH 900475 и ламбролизумаб), гуманизированные mAb IgG4 со структурой, описанной в WHO Drug Information, т. 27, No. 2, стр. 161-162 (2013), и который содержит аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепей, показанные на ФИГУРЕ 1, и гуманизированные антитела h409A11, h409A16 и h409A17, которые описаны в WO 2008/156712 и в таблице 3.

В некоторых вариантах осуществления способов, композиций, наборов и применений по настоящему изобретению анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: (a) CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8; или (b) CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 11, 12 и 13, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 14, 15 и 16. В некоторых вариантах осуществления изобретения анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой человеческое антитело. В других вариантах осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой гуманизированное антитело. В других вариантах осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой химерное антитело. В конкретных вариантах осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой моноклональное антитело.

В других вариантах осуществления способов лечения, композиций, наборов и применений по настоящему изобретению анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с PD-1 человека и содержит (а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9, или ее вариант, и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4 или ее варианта; SEQ ID NO: 22 или ее варианта; и SEQ ID NO: 23 или ее варианта.

Вариант последовательности вариабельной области тяжелой цепи или полноразмерной последовательности тяжелой цепи идентичен эталонной последовательности, за исключением наличия вплоть до 17 консервативных аминокислотных замен в каркасной области (т.е. вне CDR), и предпочтительно имеет менее десяти, девяти, восьми, семи, шести или пяти консервативных аминокислотных замен в каркасной области. Вариант последовательности вариабельной области легкой цепи или полноразмерной последовательности легкой цепи идентичен эталонной последовательности, за исключением наличия вплоть до пяти консервативных аминокислотных замен в каркасной области (т.е. вне CDR), и предпочтительно имеет менее четырех, трех или двух консервативных аминокислотных замен в каркасной области.

В другом варианте осуществления способов, композиций, наборов и применений по настоящему изобретению анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с PD-1 человека и содержит (а) тяжелую цепь, содержащую или состоящую из последовательности аминокислот, представленной в SEQ ID NO: 10, или ее варианта; и (b) легкую цепь, содержащую или состоящую из последовательности аминокислот, представленной в SEQ ID NO: 5, или ее варианта; SEQ ID NO: 24 или е варианта; или SEQ ID NO: 25 или е варианта.

В еще одном варианте осуществления способов лечения, композиций и применений по изобретению анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с PD-1 человека и включает (а) тяжелую цепь, содержащую или состоящую из последовательности аминокислот, представленной в SEQ ID NO: 10, и (b) легкой цепи, содержащей или состоящей из последовательности аминокислот, представленной в SEQ ID NO: 5.

В представленной ниже таблице 3 приводится список аминокислотных последовательностей, приводимых в качестве примера mAb против PD-1 для применения в способах лечения, композициях, наборах и применениях по настоящему изобретению.

III. Анти-CTLA4-антитела и антигенсвязывающие фрагменты, используемые в изобретении

В одном из вариантов осуществления способов лечения, композиций, наборов и применений по изобретению анти-CTLA-4-антитело представляет собой человеческое моноклональное антитело 10D1, известное в настоящее время как ипилимумаб и продаваемое как Yervoy™, которое раскрыто в патенте США 6984720 и WHO Drug Information 19(4): 61 (2005). В другом варианте осуществления анти-CTLA-4-антитело представляет собой тремелимумаб, также известный как СР-675206, который представляет собой моноклональное антитело IgG2, описанный в публикации заявки на патент США 2012/263677 или публикациях международных заявок РСТ WO 2012/122444 или WO 2007/113648 А2.

В других вариантах осуществления способов, композиций, наборов и применений по настоящему изобретению анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: CDR легкой цепи, содержащую последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 26, 27 и 28, и CDR тяжелой цепи, содержащую последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 29, 30 и 31.

В других вариантах осуществления способов, композиций, наборов и применений по настоящему изобретению анти-CTLA4-антитело представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывается с человеческим CTLA4 и содержит (а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 32, и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 33.

В одном из вариантов осуществления способов лечения, композиций, наборов и применений по изобретению анти-CTLA-4-антитело представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 34, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах осуществления анти-CTLA4-антитело представляет собой антигенсвязывающий фрагмент SEQ ID NO: 34 и/или SEQ ID NO: 35, при этом антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с CTLA4.

В одном из вариантов осуществления способов лечения, композиций, наборов и применений по изобретению анти-CTLA-4-антитело представляет собой любое из анти-CTLA-4 антител или их антигенсвязывающих фрагментов, раскрытых в публикации международной заявки WO 2016/015675 А1. В одном из вариантов осуществления анти-CTLA4-антитело представляет собой моноклональное антитело, которое содержит следующие CDR:

CDRH1, содержащую аминокислотную последовательность GFTFSDNW (SEQ ID NO: 36);

CDRH2, содержащую аминокислотную последовательность IRNKPYNYET (SEQ ID NO: 37);

CDRH3, содержащую аминокислотную последовательность TAQFAY (SEQ ID NO: 38;)

и/или

CDRL1, содержащую аминокислотную последовательность ENIYGG (SEQ ID NO: 39);

CDRL2, содержащую аминокислотную последовательность GAT (SEQ ID NO: 40); и

CDRL3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из: QNVLRSPFT (SEQ ID NO: 41); QNVLSRHPG (SEQ ID NO: 42); или QNVLSSRPG (SEQ ID NO: 43).

В одном из вариантов осуществления способов лечения, композиций, наборов и применений по изобретению анти-CTLA4-антитело представляет собой 8D2/8D2 (RE) или его вариант, 8D2H1L1 или его вариант, 8D2H2L2 или его вариант, 8D3H3L3 или вариант из них, 8D2H2L15 или его вариант, или 8D2H2117 или его вариант.

В другом варианте осуществления способов лечения, композиций, наборов и применений по изобретению анти-CTLA4-антитело представляет собой вариант 8D2/8D2 (RE), вариант 8D2H1L1, вариант 8D2H2L2, вариант 8D2H2L15 или вариант 8D2H2117, где метионин (Met) в положении 18 в аминокислотной последовательности VH-цепи независимо замещен аминокислотой, выбранной из: лейцина (Leu), валина (Val), изолейцина (Ile) или аланина (Ala). В вариантах осуществления изобретения анти-CTLA4-антитело содержит последовательность варианта 1 8D2H2L2, как указано в таблице выше.

В другом варианте осуществления способов лечения, композиций, наборов и применений по изобретению анти-CTLA4-антитело представляет собой вариант 1 8D2H2L2, имеющий полную аминокислотную последовательность тяжелой цепи, представленную в SEQ ID NO: 57, и полную последовательностей легкой цепи, представленную в SEQ ID NO: 58.

В одном из вариантов осуществления способов лечения, композиций, наборов и применений по изобретению анти-CTLA4-антитело представляет собой любое из анти-CTLA4-антител или их антигенсвязывающих фрагментов, описанных в публикации международной заявки WO 2018/035710 А1, опубликованной 1 марта 2018 года.

IV. Способы и применения изобретения

Изобретение обеспечивает способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение пациенту примерно 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента один раз каждые примерно шесть недель, при этом анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: (а) определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR), содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8; или (b) CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 11, 12 и 13, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 14, 15 и 16. В конкретных вариантах осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой пембролизумаб.

Также, обеспечен способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение пациенту около 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента один раз в шесть недель, при этом анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: (а) определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR), содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8; или (b) CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 11, 12 и 13, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 14, 15 и 16; и при этом анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: (с) CDR легкой цепи, содержащие последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 39, 40 и 41, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38; (d) CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 42, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38; или (е) CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 43, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38.

В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8; и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 43, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38.

В некоторых вариантах осуществления изобретения анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту один раз каждые приблизительно шесть недель в течение 12 недель или более. В других вариантах осуществления анти-PD-1-антитело или антигенсвязывающий фрагмент, и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту один раз каждые шесть недель в течение 18 недель или более, 24 недель или более, 30 недель или более, 36 недель или более, 42 недель или более, 48 недель или более, 54 недель или более, 60 недель или более, 66 недель или более, 72 недель или более, 78 недель или более, 84 недель или более, или 90 недель и более. В одном варианте осуществления введение происходит в тот же день. В подварианте осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в один и тот же день одновременно (например, в едином составе или одновременно в виде отдельных составов). В альтернативном варианте осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят последовательно в один день (например, в виде отдельных составов) в любом порядке. В одном варианте осуществления последовательного введения в один и тот же день сначала вводят анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.В другом варианте осуществления последовательного введения в тот же день сначала вводят анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

В первом варианте осуществления (Вариант осуществления Е1) изобретение включает способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаб) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз примерно в шесть недель. В другом варианте осуществления (Вариант осуществления 1) изобретение дополнительно включает введение пациенту 25 мг, 50 мг, 75 мг или 100 мг анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента один раз примерно каждые шесть недель. В одном варианте осуществления 25 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз примерно каждые шесть недель. В одном варианте осуществления 50 мг анти-CTLA4-антитела вводят примерно каждые шесть недель. В другом варианте осуществления 75 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз примерно каждые шесть недель. В другом варианте осуществления 100 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз приблизительно каждые шесть недель. В другом варианте осуществления рак является рефрактерным к PD-1/PD-L1 (например, это рак, который не отвечал на предшествующее лечение средством против PD-1 или против PD-L1). В другом варианте осуществления рак представляет собой меланому, рефрактерную к PD-1/PD-L1. В другом варианте осуществления рак представляет собой меланому, немелкоклеточный рак легкого, рак головы и шеи, уротелиальный рак, рак молочной железы, рак желудочно-кишечного тракта, множественную миелому, гепатоцеллюлярный рак, неходжкинскую лимфому, рак почки, лимфому Ходжкина, мезотелиому, рак яичников, мелкоклеточный рак легких, рак пищевода, рак анального канала, рак желчных путей, колоректальный рак, рак шейки матки, рак щитовидной железы, рак слюнных щелез, рак поджелудочной железы, опухоль головного мозга, глиобластому, саркому, опухоль кости или карциному из клеток Меркеля.

Во втором варианте осуществления (Вариант осуществления Е2) изобретение включает способ лечения нерезектабельной или метастатической меланомы у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаб) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В третьем варианте осуществления (Вариант осуществления Е3) изобретение включает способ лечения метастатического немелкоклеточного рака легкого (NSCLC) у пациента-человека, включающий введение пациенту 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаб) или антигенсвязывающего фрагмента один раз каждые приблизительно шесть недель.

В подварианте Варианта осуществления Е3 (Вариант осуществления Е3-А) у пациента имеется опухоль с высокой экспрессией PD-L1 [(Tumor Proportion Score (TPS) ≥ 50%)], и он ранее не подвергался платиносодержащей химиотерапии.

В другом подварианте Варианта осуществления Е3 (Вариант осуществления Е3-В) у пациента имеется опухоль с экспрессией PD-L1 (TPS ≥ 1%), и он ранее подвергался платиносодержащей химиотерапии. В конкретных вариантах Варианта осуществления Е3-В у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания во время или после получения платиносодержащей химиотерапии.

В еще одном подварианте Варианта осуществления Е3 (Вариант осуществления Е3-С) у пациента имеется опухоль с экспрессией PD-L1 (TPS ≥ 1%) и он ранее не подвергался платиносодержащей химиотерапии.

В еще одном подварианте Варианта осуществления Е3 (Вариант осуществления E3-D) опухоль пациента не тестировали на экспрессию PD-L1. В этом варианте осуществления пациент получал лечение анти-PD-1-антителом или его антигенсвязывающий фрагментом, независимо от экспрессии PD-L1. В определенных вариантах осуществления пациент ранее не подвергался платиносодержащей химиотерапии.

В некоторых вариантах Варианта осуществления Е3 (включая Вариант осуществления Е3-А, Е3-В и Е3-С) TPS PD-L1 определяли с помощью одобренного FDA теста.

В некоторых вариантах Варианта осуществления Е3 (включая Вариант осуществления Е3-А, Е3-В, Е3-С и E3-D) опухоль пациента не имеет геномных аберраций EGFR или ALK.

В некоторых вариантах Варианта осуществления Е3 (включая Вариант осуществления Е3-А, Е3-В, Е3-С и E3-D) опухоль пациента имеет геномную аберрацию EGFR или ALK и имеет прогрессирование заболевания во время или после получения лечения аберрации(й) EGFR или ALK до получения анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.

В четвертом варианте осуществления (Вариант осуществления Е4) изобретение включает способ лечения метастатического немелкоклеточного рака легкого (NSCLC) у пациента-человека, включающий: (1) введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно в шесть недель, и (2) введение пациенту пеметрекседа и карбоплатина. В подвариантах Варианта осуществления Е4 пациент ранее не подвергался лечению противораковым терапевтическим средством до начала комбинированного режима лечения с использованием анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, пеметрекседа и карбоплатина.

В некоторых вариантах Варианта осуществления Е3 и Е4 (включая их подварианты) у пациента имеется неплоскоклеточный немелкоклеточный рак легкого.

В подвариантах Варианта осуществления Е4 пеметрексед вводят пациенту в количестве 500 мг/м².

В подвариантах Варианта осуществления Е4 пеметрексед вводят пациенту посредством внутривенной инфузии каждые 21 день. В конкретных вариантах осуществления время инфузии составляет около 10 минут.

В подвариантах Варианта осуществления Е4 (Вариант осуществления Е4-А) изобретение дополнительно включает введение пациенту от примерно 400 мкг до примерно 1000 мкг фолиевой кислоты один раз в день, начиная примерно за 7 дней до введения пеметрекседа пациенту и продолжая примерно до 21 дня после введения пациенту последней дозы пеметрекседа. В некоторых вариантах осуществления фолиевую кислоту вводят перорально.

В подвариантах Вариантов осуществления Е4 и Е4-А (Вариант осуществления Е4-В) изобретение дополнительно включает введение пациенту примерно 1 мг витамина В₁₂ примерно за 1 неделю до первого введения пеметрекседа и примерно каждых трех циклов введения пеметрекседа. (т.е. приблизительно каждые 9 недель). В некоторых вариантах осуществления витамин В₁₂ вводят внутримышечно.

В подвариантах Вариантов осуществления Е4, Е4-А и Е4-В (Вариант осуществления Е4-С) изобретение дополнительно включает введение пациенту около 4 мг дексаметазона два раза в сутки за день до, в день и на следующий день после введения пеметрекседа. В некоторых вариантах осуществления дексаметазон вводят перорально.

В пятом варианте осуществления (Вариант осуществления Е5) изобретение включает способ лечения рецидивирующего или метастатического плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC) у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба), или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В подвариантах Варианта осуществления Е5 пациента ранее подвергали платиносодержащей химиотерапии. В некоторых вариантах осуществления у пациента отмечалось прогрессирование заболевания в ходе или после платиносодержащей химиотерапии.

В шестом варианте осуществления (Вариант осуществления Е6) изобретение включает способ лечения рефрактерной классической лимфомы Ходжкина (cHL) у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В седьмом варианте осуществления (Вариант осуществления Е7) изобретение включает способ лечения классической лимфомы Ходжкина (cHL) у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель, при этом пациент имел рецидив после (а) одной или нескольких линий терапии cHL, (b) 2 или более линий терапии cHL или (с) 3 или более линий терапии для cHL.

В подвариантах Вариантов осуществления Е6 и Е7 пациент представляет собой взрослого пациента.

В альтернативных подвариантах Вариантов осуществления Е6 и Е7 пациент представляет собой педиатрического пациента.

В восьмом варианте осуществления (Вариант осуществления Е8) изобретение включает способ лечения местно-распространенной или метастатической уротелиальной карциномы у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента, пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В подвариантах Варианта осуществления Е8 пациент не подходит для химиотерапии, содержащей цисплатин.

В подвариантах Варианта осуществления Е8 у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания во время или после химиотерапии, содержащей платину, или в течение 12 месяцев после неоадъювантного или адъювантного лечения с помощью химиотерапии, содержащей платину.

В подвариантах Варианта осуществления Е8 опухоль пациента экспрессирует PD-L1 (CPS ≥ 10).

В девятом варианте (Вариант осуществления Е9) изобретение включает способ лечения нерезектабельных или метастатических солидных опухолей с высокой микросателлитной нестабильностью (MSI-H) или репарации несоответствий (MMR) у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаб) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз примерно каждые шесть недель.

В подварианте Варианта осуществления Е9 у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания после предшествующего противоракового лечения.

В десятом варианте осуществления (Вариант осуществления Е10) изобретение включает способ лечения нерезектабельного или метастатического колоректального рака с дефицитом MSI-H или MMR у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаб) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз каждые приблизительно шесть недель.

В подварианте Варианта осуществления Е10 у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания после предшествующего лечения фторпиримидином, оксалиплатином и иринотеканом.

В одиннадцатом варианте осуществления (Вариант осуществления Е11) изобретение включает способ лечения рецидивирующего местно-распространенного или метастатического рака желудка у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаб) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В двенадцатом варианте осуществления (Вариант осуществления Е12) изобретение включает способ лечения рецидивирующей местно-распространенной или метастатической аденокарциномы желудочно-пищеводного соединения у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаб) или антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В подвариантах Вариантов осуществления Е11 и Е12 опухоль пациента экспрессирует PD-L1 [Combined Positive Score (CPS) ≥ 1].

В подвариантах Вариантов осуществления Е11 и Е12 у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания во время или после одной или нескольких предшествующих линий терапии. В конкретных вариантах осуществления предшествующие линии терапии включают фтор пиримидин- и платинос о держащую химиотерапию.

В подвариантах Вариантов осуществления Е11 и Е12 у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания во время или после двух или более предшествующих линий терапии, включая фтор пиримидин- и платиносодержащую химиотерапию.

В подвариантах Вариантов осуществления Е11 и Е12 у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания во время или после одной или нескольких предшествующих линий терапии, включая терапию, направленную на HER2/neu.

В подвариантах Вариантов осуществления Е11 и Е12 у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания во время или после двух или более предшествующих линий терапии, включая терапию, направленную на HER2/neu.

В тринадцатом варианте (Вариант осуществления Е13) изобретение включает способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз каждые приблизительно шесть недель, при этом у пациента имеется рак, выбранный из группы, состоящей из: меланомы, рака легкого, рака головы и шеи, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака желудочно-кишечного тракта, множественной миеломы, гепатоцеллюлярного рака, лимфомы, рака почки, мезотелиомы, рака яичников, рак пищевода, рак анального канала, рака желчных путей, колоректального рака, рака шейки матки, рака щитовидной железы и рака слюнных желез.

В четырнадцатом варианте осуществления (Вариант осуществления Е14) изобретение включает способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель, при этом у пациента имеется мелкоклеточный рак легкого.

В пятнадцатом варианте осуществления (Вариант осуществления Е15) изобретение включает способ лечения неходжкинской лимфомы у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В подварианте Варианта осуществления Е15 неходжкинская лимфома представляет собой первичную медиастинальную В-крупноклеточную лимфому (PMBCL). В некоторых вариантах осуществления, когда у пациента имеется PMBCL, пациент имеет рефрактерную PMBCL. В некоторых вариантах осуществления у пациента развился рецидив после одной или нескольких предшествующих линий терапии. В некоторых вариантах осуществления у пациента развился рецидив после двух или более предшествующих линий терапии. В некоторых вариантах осуществления пациент ранее не получал другую линию терапии.

В шестнадцатом варианте осуществления (Вариант осуществления Е16) изобретение включает способ лечения метастатического плоскоклеточного NSCLC у пациента-человека, включающий: (1) введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно в шесть недель, и (2) введение пациенту (i) карбоплатина и паклитаксела или (ii) карбоплатина и наб-паклитаксела.

В семнадцатом варианте осуществления (Вариант осуществления Е17) изобретение включает способ лечения карциномы из клеток Меркеля (МСС) у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно в шесть недель. В конкретных подвариантах Варианта осуществления Е17 рак представляет собой рецидивирующую местно-распространенную МСС. В конкретных подвариантах Варианта осуществления Е17 рак представляет собой метастатическую МСС.

В подвариантах Варианта осуществления Е17 пациент представляет собой взрослого пациента. В альтернативных подвариантах Варианта осуществления Е17 пациент представляет собой педиатрического пациента.

В восемнадцатом варианте осуществления (Вариант осуществления Е18) изобретение включает способ адъювантной терапии меланомы у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно в шесть недель, при этом у пациента ранее было резецировано одно или несколько очагов меланомы. В подвариантах Варианта осуществления Е18 способ включает лечение резецированной меланомы III стадии высокой степени риска.

В девятнадцатом варианте (Вариант осуществления Е19) изобретение включает способ лечения гепатоцеллюлярной карциномы (НСС) у пациента-человека, включающий введение пациенту 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента один раз приблизительно каждые шесть недель. В некоторых вариантах осуществления Е19 пациент ранее получал лечение сорафенибом.

В двадцатом варианте осуществления (Вариант осуществления Е20) изобретение включает способ лечения почечно-клеточной карциномы (RCC) у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В подвариантах Варианта осуществления Е20 рак представляет собой распространенную светлоклеточную RCC.

В подвариантах Варианта осуществления Е20 у пациента имеется запущенная или метастатическая почечно-клеточная карцинома (ПКР).

В подвариантах Варианта осуществления Е20 (Вариант осуществления Е20А) пациент дополнительно получает лечение акситинибом. В подвариантах изобретения акситиниб принимают перорально.

В конкретных вариантах Варианта осуществления Е20А пациент принимает 5 мг акситиниба приблизительно каждые 12 часов или два раза в день.

В альтернативных вариантах Варианта осуществления Е20А дозировка акситиниба составляет 2,5 мг, 3 мг, 7 мг или 10 мг два раза в день.

В двадцать первом варианте осуществления (Вариант осуществления Е21) изобретение включает способ лечения рака молочной железы у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз каждый шесть недель.

В подварианте Варианта осуществления Е21 рак молочной железы представляет собой тройной отрицательный рак молочной железы.

В подварианте Варианта осуществления Е21 рак молочной железы представляет собой ER+/HER2- рак молочной железы.

В двадцать втором варианте (Вариант осуществления Е22) изобретение включает способ лечения рака носоглотки у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту раз приблизительно каждые шесть недель.

В двадцать третьем варианте (Вариант осуществления Е23) изобретение включает способ лечения рака щитовидной железы у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В двадцать четвертом варианте осуществления (Вариант осуществления Е24) изобретение включает способ лечения рака слюнных желез у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель.

В двадцать пятом варианте осуществления (Вариант осуществления Е25) изобретение включает способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель, при этом рак выбран из группы, состоящей из: меланомы, немелкоклеточного рака легкого, рецидивирующей или рефрактерной классической лимфомы Ходжкина, первичной медиастинальной В-крупноклеточной лимфомы, плоскоклеточного рака головы и шеи, уротелиальной карциномы, рака пищевода, рак желудка, рак шейки матки, PMBCL, рака MSI-H, гепатоцеллюлярной карциномы и карциномы из клеток Меркеля.

В двадцать шестом варианте осуществления (Вариант осуществления Е26) изобретение включает способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз примерно каждые шесть недель, при этом рак представляет собой гематологическую злокачественную опухоль.

В подварианте Варианта осуществления Е26 гематологическая злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из: острого лимфобластного лейкоза (ALL), острого миелоидного лейкоза (AML), хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), хронического миелоидного лейкоза (CML), диффузной В-крупноклеточной лимфомы (DLBCL), EBV-положительной DLBCL, первичной медиастинальной В-крупноклеточной лимфомы, В-клеточной лимфомы с высоким содержанием Т-клеток/гистиоцитов, фолликулярной лимфомы, лимфома Ходжкина (HL), лимфомы из мантийных клеток (MCL), множественной миеломы (ММ), белка клеток миелоидного лейкоза-1 (MCL-1), миелодиспластического синдрома (MDS), неходжкинской лимфомы (NHL) и малой лимфоцитарной лимфомы (SLL).

В двадцать седьмом варианте осуществления (Вариант осуществления Е27) изобретение включает способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение пациенту 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента один раз приблизительно каждые шесть недель, при этом у пациента имеется опухоль с высокой мутационной нагрузкой.

В конкретных вариантах осуществления высокая мутационная нагрузка составляет по меньшей мере около 10 мутаций на мегабазу исследованного генома, по меньшей мере около 11 мутаций на мегабазу исследованного генома, по меньшей мере около 12 мутаций на мегабазу исследованного генома или по меньшей мере около 13 мутаций на мегабазу исследованного генома.

В двадцать восьмом варианте осуществления (Вариант осуществления Е28) изобретение включает способ лечения рака пищевода у пациента-человека, включающий введение пациенту 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента один раз приблизительно каждые шесть недель.

В подвариантах Варианта осуществления Е28 у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания во время получения одной предшествующей линии стандартной терапии до получения анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. В дополнительном варианте осуществления у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания во время получения одной или нескольких линий стандартной терапии до получения анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. В другом варианте осуществления у пациента наблюдалось прогрессирование заболевания во время получения двух или более линий стандартной терапии до приема анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. В конкретных вариантах осуществления стандартная терапия включает одно или несколько из следующего: паклитаксел, доцетаксел или иринотекан.

В подвариантах Варианта осуществления Е28 у пациента имеется запущенная или метастатическая аденокарцинома или плоскоклеточная карцинома пищевода.

В подвариантах Варианта осуществления Е28 у пациента имеется запущенная или метастатическая аденокарцинома Зиверта пищеводно-желудочного перехода типа I.

В подвариантах Варианта осуществления Е28 опухоль пациента экспрессирует PD-L1 (Combined Positive Score [CPS] ≥ 10).

В двадцать девятом варианте осуществления (Вариант осуществления Е29) изобретение включает способ лечения немышечно-инвазивного рака мочевого пузыря высокого риска (NMIBC) у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту один раз приблизительно каждые шесть недель. В некоторых вариантах осуществления у пациента имеется NMIBC с карциномой in situ (CIS) или CIS плюс папиллярная болезнь.

В подварианте Варианта осуществления Е29 пациент ранее получал лечение стандартной терапией перед лечением анти-PD-1-антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых вариантах осуществления предшествующая терапия представляет собой терапию Bacillus (BCG). В конкретных вариантах осуществления у пациента отсутствовал ответ на терапию BCG. В некоторых вариантах осуществления пациент не подходил для радикальной цистэктомии или был сделан выбор, чтобы его не подвергать радикальной цистэктомии.

В любом из способов по настоящему изобретению, описанных выше (включая Варианты осуществления Е1-Е29), антитело против PD-1 или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой любое из антител или антигенсвязывающих фрагментов, описанных в Разделе II «Подробного описания изобретения» «Антитела против PD-1 и антигенсвязывающие фрагменты, эффективные в изобретении» в настоящем документе.

Варианты осуществления любого из описанных выше способов изобретения (включая Варианты осуществления Е1-Е29) могут дополнительно включать введение примерно 25 мг, 50 мг, 75 мг или 100 мг анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента один раз приблизительно каждые шесть недель. В одном варианте осуществления 25 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз приблизительно каждые шесть недель. В одном варианте осуществления 50 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз приблизительно каждые шесть недель. В другом варианте осуществления 75 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз приблизительно каждые шесть недель. В другом варианте осуществления 100 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз приблизительно каждые шесть недель. В одном варианте осуществления 25 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз каждые шесть недель. В одном варианте осуществления 50 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз каждые шесть недель. В другом варианте осуществления 75 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз каждые шесть недель. В другом варианте осуществления 100 мг анти-CTLA4-антитела вводят один раз каждые шесть недель. В некоторых вариантах осуществления любого из вышеуказанных способов анти-CTLA4-антитело и анти-PD-1-антитело вводят совместно. В других вариантах осуществления анти-CTLA4-антитело и анти-PD-1-антитело совместно составляют.В любом из способов по изобретению, описанных выше, анти-CTLA4-антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой любое из антител или антигенсвязывающих фрагментов, описанных в разделе III «Подробного описания изобретения» «Антитела против CLTA4 и антигенсвязывающие фрагменты, эффективные в изобретении» в настоящем документе.

В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело представляет собой пембролизумаб или его антигенсвязывающий фрагмент, или антитело, которое перекрестно конкурирует с пембролизумабом. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело представляет собой вариант пембролизумаба; т.е. антитело или антигенсвязывающий фрагмент, имеющий CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8.

В любом из описанных выше способов анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту приблизительно каждые шесть недель. В конкретных вариантах осуществления анти-PD1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту каждые шесть недель, каждые шесть недель ±5 дней, ±4 дня, ±3 дня, ±2 дня или ±1 день.

В вариантах осуществления любого из описанных в настоящем документе способов пациенту вводят внутривенную (IV) инфузию лекарственного средства, содержащего любое из анти-PD-1-антител или их антигенсвязывающих фрагментов, или любое из анти-CTLA4-антител или их антигенсвязывающих фрагментов, каждый из которых описан в настоящем документе. В одном варианте осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят путем внутривенной (IV) инфузии одновременно (например, в одном составе или одновременно в виде отдельных составов).

В другом варианте осуществления анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят путем внутривенной (IV) инфузии последовательно в один и тот же день (например, в виде отдельных составов) в любом порядке. В одном подварианте осуществления сначала вводят анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В другом варианте осуществления сначала вводят анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

В альтернативных вариантах осуществления пациенту подкожно вводят (например, врач-клиницист) или назначают любое из анти-PD-1-антител или их антигенсвязывающих фрагментов, или любое из анти-CTLA4-антител или их антигенсвязывающих фрагментов, каждое из которых описано в настоящем документе.

В любом из способов, описанных в настоящем документе, включая Варианты осуществления Е1-Е29 и его подварианты, способ может дополнительно содержать один или несколько «дополнительных терапевтических агентов» (в контексте настоящего описания «дополнительный терапевтический агент» относится к дополнительному агенту относительно антагониста PD-1 и анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента). Дополнительным терапевтическим агентом может являться, например, химиотерапевтический препарат, отличный от анти-PD-1-антитела или анти-CTLA4-антитела, биотерапевтический агент (включая, но без ограничения, антитела к VEGF, EGFR, Her2/neu, рецепторам VEGF, другим рецепторам факторов роста, CD20, CD40, CD-40L, ОХ-40, 4-1ВВ и ICOS), иммуногенный агент (например, аттенуированные раковые клетки, опухолевые антигены, антигенпредставляющие клетки, такие как дендритные клетки, нагруженные антигеном, полученным из опухоли, или нуклеиновые кислоты, иммуностимулирующие цитокины (например, IL-2, IFNα/2, GM-CSF) и клетки, трансфицированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины, такие как, но без ограничения, GM-CSF).

Как отмечено выше, в некоторых вариантах осуществления способов по настоящему изобретению способ, кроме того, включает введение дополнительного терапевтического агента. В конкретных вариантах осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой анти-LAG3-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, анти-GITR-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, анти-TIGIT-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, анти-CD27-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.В одном варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой вектор на основе вируса болезни Ньюкасла, экспрессирующий IL-12. В следующем варианте осуществления дополнительным терапевтическим агентом является динациклиб.

Примеры химиотерапевтических агентов включают алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; ацетогенины (особенно буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелезин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги KW-2189 и CBI-TMI); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктин; спонгистатин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новэмбихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урациловый иприт; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, особенно калихеамицин гамма-1I и калихеамицин фи-I1, см., например, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994); динемицин, включая динемицин А; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также хромофор неокарзиностатин и родственные ему хромофоры хромопротеиновых энедииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, каминомицин-5, карзомицин-6, дактиномицин-6, дактиномицин-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин (включая морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадреналовые вещества, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; наполнитель на основе фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамида гликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демекольцин; диазиквон; эльфорнитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглуцид; нитрат галлия; гидроксимочевину; лентинан; лонидаинин; майтанзиноиды, такие как майтанзин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; трихотецены (особенно токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид («Ара-С»); циклофосфамид; тиотепа; таксоиды, например, паклитаксел и доксетаксел; хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платины; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорелбин; новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеприведенных соединений. Также включены противогормональные агенты, которые регулируют или ингибируют действие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (SERM), включая, например, тамоксифен, ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и торемифен (Фарестон); ингибиторы ароматазы, ингибирующие фермент ароматазу, регулирующие продукцию эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, мегестрола ацетат, экземестан, форместан, фадрозол, ворозол, летрозол и анастрозол; и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, леупролид и гозерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеприведенных соединений.

В некоторых вариантах осуществления, которые включают стадию введения дополнительного терапевтического агента (т.е. в дополнение к анти-PD-1-антителу (например, пембролизумабу) или его антигенсвязывающему фрагменту, и анти-CTLA4-антителу или его антигенсвязывающему фрагменту), дополнительный терапевтический агент в комбинированной терапии можно вводить с использованием того же режима дозирования (доза, частота и длительность лечения), который обычно используют, когда агент используют в качестве монотерапии для лечения того же типа рака. В других вариантах осуществления пациент получает меньшее общее количество дополнительного терапевтического агента при комбинированной терапии, чем тогда, когда агент используется в качестве монотерапии, например, меньшие дозы, менее частые дозы и/или более короткая длительность лечения.

Дополнительный терапевтический агент в комбинированной терапии можно вводить перорально, внутрь опухоли или парентерально, включая внутривенный, внутримышечный, внутрибрюшинный, подкожный, ректальный, местный и трансдермальный пути введения. Например, комбинированное лечение может включать анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, оба из которых можно вводить внутривенно или подкожно, а также химиотерапевтический агент, который можно вводить перорально.

Комбинированную терапию по настоящему изобретению можно применять до или после операции по удалению опухоли, и можно применять до, во время или после лучевой терапии. Комбинированную терапию по настоящему изобретению также можно применять в случае, когда опухоль пациента является нерезектабельной.

В некоторых вариантах осуществления комбинированную терапию по настоящему изобретению назначают пациенту, который ранее не подвергался лечению биотерапевтическим или химиотерапевтическим агентом, т.е. является не подвергнутым такому лечению. В других вариантах осуществления комбинированную терапию назначают пациенту, которому не удалось достичь длительного ответа после предшествующей терапии с использованием биотерапевтического или химиотерапевтического агента, т.е. является подвергнутым лечению.

Комбинированную терапию по изобретению можно применять для лечения опухоли, которая является достаточно большой, чтобы быть обнаруженной с помощью пальпации или методов визуализации, хорошо известных в данной области, таких как ЯМР-томография, УЗИ или компьютерная томография. В некоторых вариантах осуществления комбинированную терапию по настоящему изобретению применяют для лечения опухоли на запущенной стадии, имеющей размеры, составляющие по меньшей мере приблизительно 200 мм³, 300 мм³, 400 мм³, 500 мм³, 750 мм³ или вплоть до 1000 мм³.

В некоторых вариантах осуществления комбинированную терапию по настоящему изобретению назначают пациенту-человеку, который имеет рак, экспрессирующий PD-L1. В некоторых вариантах осуществления экспрессия PD-L1 детектируется с использованием диагностического антитела против PD-L1 человека или его антигенсвязывающего фрагмента в иммуногистохимическом анализе (IHC) на FFPE срезе ткани или срезе замороженной ткани образца опухоли, удаленного у пациента. Врач пациента может заказать диагностический тест для определения экспрессии PD-L1 в образце опухолевой ткани, удаленном у пациента, до начала лечения анти-PD-1-антителом или его антигенсвязывающий фрагментом, но предполагается, что врач может заказать первый или последующие диагностические тесты в любое время после начала лечения, например, после завершения курса лечения.

Выбор дозировки дополнительного терапевтического агента зависит от нескольких факторов, включая скорости метаболизма частицы в сыворотке или тканях субъекта, степени симптомов, иммуногенности частицы и доступности клеток-, ткани-или органа-мишени у индивидуума, подвергаемого лечению. Дозировка дополнительного терапевтического агента должна представлять собой количество, обеспечивающее приемлемый уровень побочных эффектов. Соответственно, количество дозы и частота дозирования каждого дополнительного терапевтического агента (например, биотерапевтического или химиотерапевтического агента) будут частично зависеть от конкретного терапевтического агента, тяжести рака, подлежащего лечению, и характеристик пациента. Имеется руководство по выбору соответствующих доз антител, цитокинов и небольших молекул. См., например, Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594-1602; Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002). Определение подходящего режима дозирования может производиться врачом, например, с использованием параметров или факторов, которые, как известно или как полагают в данной области техники, влияют на лечение или, по прогнозам, могут повлиять на лечение, и будет зависеть, например, от истории болезни пациента (например, предшествующей терапии), типа и стадии рака, подлежащего лечению, и биомаркеров ответа на один или несколько терапевтических агентов в комбинированной терапии.

V. Композиции и наборы

Изобретение также относится к композициям, содержащим дозу анти-PD-1-антитела (например, пембролизумаба) или его антигенсвязывающего фрагмента, и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество, где дозировка составляет около 400 мг.Анти-PD-1-антитело можно продуцировать, например, в клетках СНО с использованием общепринятой клеточной культуры и технологий выделения/ очистки.

В вариантах осуществления изобретения композиция дополнительно содержит гистидиновый буфер с рН примерно от 5,0 до 6,0. В конкретных вариантах осуществления гистидин присутствует при концентрации примерно 10 мМ.

В вариантах осуществления изобретения композиция дополнительно содержит сахарозу. В конкретных вариантах осуществления сахароза присутствует при концентрации примерно 70 мг/мл.

В вариантах осуществления изобретения композиция дополнительно содержит полисорбат 80. В конкретных вариантах осуществления полисорбат 80 присутствует при концентрации примерно 0,2 мг/мл.

В некоторых вариантах осуществления композиция содержит 10 мМ гистидина, рН 5,5, 7% сахарозы, 0,02% полисорбата 80 и 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.

В вариантах осуществления по изобретению композиция является жидкой.

В альтернативных вариантах осуществления композиция является лиофилизированной.

В композициях по изобретению анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может представлять собой любое из антител и антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящем документе, т.е. описанных в Разделе II «Подробного описания изобретения» «Анти-PD-1-антитела и антигенсвязывающие фрагменты, эффективные в изобретении» (например, пембролизумаб).

В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая анти-PD-1-антитело в качестве антагониста PD-1, может быть предоставлена в виде жидкого состава или может быть приготовлена путем восстановления лиофилизированного порошка стерильной водой для инъекций перед применением. В WO 2012/135408 описано приготовление жидких и лиофилизированных лекарственных средств, содержащих пембролизумаб, которые являются подходящими для применения в настоящем изобретении.

В некоторых вариантах осуществления анти-CTLA4-антитело составлено, как описано в WO 2018/204343 (PCT/US2018/030420). В некоторых вариантах осуществления анти-CTLA4-антитело и анти-PD-1-антитело составлены совместно, как описано в WO 2018/204343.

Изобретение также относится к набору для лечения пациента, имеющего рак, при этом набор содержит: (а) 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и (b) инструкции по применению анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в любом из описанных в настоящем документе способов лечения рака.

Изобретение также относится к набору для лечения пациента, имеющего рак, при этом набор содержит: (а) около 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, (b) около 25 мг, 50 мг, 75 мг или 100 мг анти-CTLA4 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и (с) инструкции по применению анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и анти-CTLA-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в любом из способов лечения рака, описанных в настоящем документе. В одном варианте осуществления набор содержит 25 мг анти-CTLA4-антитела. В одном варианте осуществления набор содержит 50 мг анти-CTLA4-антитела. В другом варианте осуществления набор содержит 75 мг анти-CTLA4-антитела. В другом варианте осуществления набор содержит 100 мг анти-CTLA4-антитела.

В любом из наборов по изобретению анти-PD-1-антитело или антигенсвязывающий фрагмент может представлять собой любое из антител или антигенсвязывающих фрагментов, описанных в разделе II «Подробного описания изобретения» «Анти-PD-1-антитела и антигенсвязывающие фрагменты, применимые в изобретении». Кроме того, в любом из наборов по настоящему изобретению антитело против CTLA4 или антигенсвязывающий фрагмент может представлять собой любое из антител или антигенсвязывающих фрагментов, описанных в разделе III «Подробного описания изобретения» озаглавленного «Анти-CTLA4-антитела и антигенсвязывающие фрагменты, применимые в изобретении».

Наборы по настоящему изобретению могут содержать анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающие фрагменты, и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающие фрагменты в отдельных контейнерах вместе с вкладышем в упаковку. Наборы по настоящему изобретению могут содержать анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вместе в одном и том же составе (например, в виде совместного состава). Контейнер(ы) наборов содержит по меньшей мере одну дозу (т.е. около 400 мг) лекарственного средства, содержащего анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и по меньшей мере одну дозу (например, около 25 мг, около 50 мг, около 75 мг, около 100 мг) лекарственного средства, содержащего анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и вкладыш в упаковку или этикетку, которая содержит инструкции по лечению пациента, имеющего рак, с использованием лекарственного средства (средств), содержащегося в нем. Контейнер может быть иметь одинаковую или разную форму (например, флаконы, шприцы и бутылки) и/или состоять из одинакового или разного материала (например, пластик или стекло). Набор может дополнительно включать другие материалы, которые могут применяться для введения лекарственных средств, такие как разбавители, фильтры, пакеты и шланги для внутривенных вливаний, иглы и шприцы. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления набора в инструкциях указано, что лекарственное средство предназначено для лечения пациента, имеющего опухоль, при этом опухоль экспрессирует PD-L1 по результатам, например, IHC анализа. В некоторых вариантах осуществления опухоль имеет Tumor Proportion Score (TPS) > 1% PD-L1. В другом варианте осуществления опухоль имеет TPS > 50% PD-L1. TPS PD-L1 означает количество опухолевых клеток в образце, экспрессирующих PD-L1. В других вариантах осуществления опухоль имеет TPS > 5% PD-L1, > 10% PD-L1, > 15% PD-L1, > 20% PD-L1, > 25% PD-L1, > 30% PD-L1, > 35% PD-L1, > 40% PD-L1 или > 45% PD-L1. В другом варианте осуществления опухоль пациента экспрессирует PD-L1 с CPS > 10%. В другом варианте осуществления опухоль пациента экспрессирует PD-L1 с CPS > 5%. В другом варианте осуществления опухоль пациента экспрессирует PD-L1 с CPS > 1%.

Эти и другие аспекты изобретения, включая иллюстративные конкретные варианты осуществления, перечисленные ниже, будут очевидны из учений, содержащихся в настоящем документе.

Общие методы

Стандартные методы молекулярной биологии описаны в Sambrook, Fritsch и Maniatis (1982 & 1989 2^nd Edition, 2001 3^rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3^rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). Стандартные методы также обнаруживаются в Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, в которых описано клонирование в бактериальных клетках и мутагенез ДНК (т. 1), клонирование в клетках млекопитающих и дрожжах (т. 2), гликоконъюгаты и экспрессия белков (т. 3), и биоинформатика (т. 4).

Способы очистки белков, в том числе иммунопреципитация, хроматография, электрофорез, центрифугирование и кристаллизация, описаны (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Химический анализ, химическая модификация, посттрансляционная модификация, получение слитых белков, гликозилирование белков описаны (см., например, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391). Продукция, очистка и фрагментация поликлональных и моноклональных антител описаны (Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, supra). Стандартные методы для характеристики взаимодействий лиганд/рецептор имеются в распоряжении (см., например, Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York).

Могут быть получены моноклональные, поликлональные и гуманизированные антитела (см., например, Sheperd and Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:10678-10684; Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883; Foote and Winter (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499; патент США 6,329,511).

Альтернативой гуманизации является использование библиотек антител человека с дисплеем на фаге или библиотек антител человека в трансгенных мышах (Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1:837-839; Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156; Hoogenboom and Chames (2000) Immunol. Today 21:371-377; Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol. 17:397-399).

Очистка антигена не является необходимой для образования антител. Животные могут быть иммунизированы клетками, несущими представляющий интерес антиген. Спленоциты могут быть затем выделены из иммунизированных животных, и спленоциты могут быть слиты с линией миеломных клеток для получения гибридомы (см., например, Meyaard et al. (1997) Immunity 7:283-290; Wright et al. (2000) Immunity 13:233-242; Preston et al., supra; Kaithamana et al. (1999) J. Immunol. 163:5157-5164).

Антитела могут быть конъюгированы, например, с небольшими молекулами лекарственного средства, ферментами, липосомами, полиэтиленгликолем (PEG). Антитела могут быть использованы для терапевтического средства, диагностического средства, набора или других целей, и включают антитела, связанные, например, с красителями, радиоизотопами, ферментами или металлами, например, коллоидным золотом (см., например, Le Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146:169-175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999) J. Immunol. 162:2804-2811; Everts et al. (2002) J. Immunol. 168:883-889).

Способы проточной цитометрии, в том числе сортировка клеток с активацией флуоресценции (FACS), имеются в распоряжении (см., например, Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2^nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Доступны флуоресцентные реагенты, подходящие для модификации нуклеиновых кислот, в том числе праймеры и зонды нуклеиновых кислот, полипептидов и антител, для применения, например, в качестве диагностических реагентов (Molecular Probesy (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO).

Описаны стандартные методы гистологии иммунной системы (см., например, Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY). Пакеты программ и базы данных для определения, например, антигенных фрагментов, лидерных последовательностей, сворачивания белков, функциональных доменов, сайтов гликозилирования и совмещения последовательностей имеются в распоряжении (см., например, GenBank, Vector NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742; Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133:17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690).

Все публикации, упомянутые в настоящем документе, включены в него посредством ссылки с целью описания и раскрытия методологий и материалов, которые могут быть использованы в связи с настоящим изобретением.

При наличии описанных в настоящем документе различных вариантов осуществления изобретения со ссылкой на сопровождающие чертежи, следует понимать, что изобретение не ограничивается этими точными вариантами осуществления, и что специалист в данной области может осуществлять различные изменения и модификации без отступления от объема или сущности изобретения, как определено в прилагаемой формуле изобретения.

Пример 1

График дозирования пембролизумаба каждые шесть недель (Q6W) для нескольких типов опухолей основан на оценке с использованием моделирования и имитации.

Пембролизумаб, ингибитор контрольной точки анти-PD-1, в настоящее время одобренный для применения в лечении множества различных видов рака, продемонстрировал безопасность и действенность при введении в дозе 200 мг или 2 мг/кг Q3W. Альтернативный расширенный режим дозирования обеспечит преимущества удобства и гибкости как для пациентов, так и для врачей, назначающих лечение. Надежная характеристика фармакокинетики (PK) пембролизумаба и зависимостей воздействие (концентрация) - ответ (E-R) как в отношении действенности, так и в отношении безопасности, позволяет использовать основанные на модели подходы для поддержки альтернативных режимов дозирования пембролизумаба.

Дозу пембролизумаба для режима Q6W выбирали путем сравнения воздействий с одобренными режимами Q3W (200 мг и 2 мг/кг) после достижения равновесного состояния PK; действенность и безопасность сравнивали между режимами на основе знания E-R. PK воздействия имитировали вплоть до 24 недель дозирования, чтобы гарантировать равновесное состояние у всех субъектов, используя установленную популяционную PK-модель (с зависимой от времени элиминацией) пембролизумаба, которая адекватно описывает PK для множества типов опухолей. Действенность определяли с использованием показателей воздействия в равновесном состоянии, AUCss или усредненной по времени концентрации (Cavg,ss) и остаточных концентраций (Cmin,ss), которые сравнивали между режимами. Профиль безопасности пембролизумаба при режиме Q6W сравнивали путем обеспечения более низких предсказанных пиковых концентраций в равновесном состоянии (Cmax,ss), чем пиковые концентрации при максимальной клинически вводимой и хорошо переносимой дозе 10 мг/кг Q2W.

Прогнозируется, что PK пембролизумаба после введения 400 мг Q6W будет следовать аналогичному профилю, что и PK при одобренных режимах дозирования 200 мг Q3W и 2 мг/кг Q3W (см. фигуру 4). В таблице 4 представлено сравнение показателей воздействия между режимами. Режим дозирования пембролизумаба 400 мг Q6W был выбран на основании аналогичных предсказанных воздействий (Cavg,ss или AUCss, среднее геометрическое (GM) на ~1% выше) по сравнению с теми, которые были достигнуты при 200 мг Q3W (см. фигуру 3). Было предсказано, что менее 1% субъектов будут иметь более низкие значения Cmin,ss по сравнению с теми, кто получал 200 мг Q3W и 2 мг/кг Q3W (фигура 3). Предсказанные значения Cmax,ss для 400 мг Q6W значительно ниже (GM на ~65% ниже) значений, достигаемых при 10 мг/кг Q2W, который, как было показано, имеет приемлемую безопасность для многих типов опухолей (см. фигуру 2). Учитывая сходные профили воздействия и установленные, параллельные оси X графики зависимости E-R для пембролизумаба при клинически тестируемых дозах, ожидается, что клинические результаты, достигнутые при применении 400 мг Q6W, будут аналогичны таковым при применении 200 мг Q3W для разных типов опухолей.

На основании используемого в настоящем документе подхода к моделированию и имитации ожидается, что режим дозирования пембролизумаба в дозе 400 мг Q6W приведет к PK-воздействиям, аналогичным одобренным режимам дозирования 200 мг Q3W и 2 мг/кг. PK-имитации демонстрирует, что с точки зрения воздействия пембролизумаба - Средняя концентрация в интервале дозирования (Cavg) (или площадь под кривой [AUC]) при дозе 400 мг Q6W была аналогична таковой при одобренной дозе 200 мг Q3W, таким образом, сравнивая эффективность между режимами дозирования. Остаточные концентрации (Cmin) при 400 мг Q6W, как правило, находились в пределах диапазона значений, достигнутых при 2 мг/кг или 200 мг Q3W у большинства (> 99%) пациентов. Пиковые концентрации (Cmax) при 400 мг Q6W были значительно ниже Cmax для самой высокой клинически тестированной дозы 10 мг/кг Q2W, подтверждая тот факт, что профиль безопасности для 400 мг Q6W должен быть сопоставим с одобренным профилем безопасности пембролизумаба. Было продемонстрировано, что график зависимости воздействие-ответ (E-R) для пембролизумаба является параллельным оси X по всем показаниям к применению, и прогнозы OS при меланоме и NSCLC демонстрируют, что действенность при 400 мг Q6W, как предполагается, будет аналогичной таковой при 200 мг или 2 мг/кг Q3W, при условии аналогичных воздействий; таким образом, предполагается, что режим дозирования 400 мг Q6W будет эффективным по всем показаниям к применению.

Пример 2

Фаза 1 рандомизированного клинического исследования пембролизумаба для оценки безопасности и переносимости внутривенной инфузии 400 мг пембролизумаба Q6W у пациентов с запущенной меланомой

Данное исследование предназначено для оценки фармакокинетики (PK), безопасности и переносимости пембролизумаба при приеме каждые 6 недель (Q6W). Когорта из 100 участников получала 400 мг пембролизумаба Q6W. У этой когорты участников собирали данные по PK, эффективности и безопасности. В исследование включали участников мужского/женского пола в возрасте не моложе 18 лет с запущенной меланомой. В этом исследовании не использовали стратификацию по возрасту, полу или другим характеристикам.

Участники получали внутривенную (IV) инфузию 400 мг пембролизумаба Q6W в циклах 1-18. У этих участников собирали данные по PK, эффективности и безопасности. Результаты обеспечили предварительные данные по РК, эффективности и безопасности пембролизумаба при введении Q6W. Основываясь на четком понимании клинической фармакологии пембролизумаба и его хорошо изученных профилей E-R, ожидается, что такое изменение схемы дозирования обеспечит аналогичную действенность и безопасность во всех клинических ситуациях, где одобрен режим дозирования пембролизумаба 200 мг Q3W (включая монотерапию и комбинацию с другими агентами). Таким образом, режим дозирования 400 мг Q6W будет иметь сходный профиль польза-риск с 200 мг Q3W, так как режим менее частого дозирования при клиническом применении пембролизумаба основан на анализах моделирования и имитации (см. пример 1).

Дизайн исследования

Исследование, которое представляет собой рандомизированное перекрестное многоцентровое открытое исследование безопасности пембролизумаба у участников с запущенной меланомой, проводили в соответствии с Надлежащей клинической практикой (Good Clinical Practices, GCP). Это исследование фазы 1 проводили на участниках с неоперабельной или метастатической меланомой. Период лечения продолжался каждые 42 дня в течение до 18 циклов (приблизительно 2 года). Лечение продолжали до тех пор, пока участники получали пользу от лечения и не имели прогрессирования заболевания или не отвечали критериям исключения из исследования. Более подробно, исследование состояло из: (1) Периода скрининга продолжительностью до 28 дней, для гарантии того, что участник подходит для участия в исследовании, и (2) периода интервенции продолжительностью приблизительно 104 недели, состоящего в лечении пембролизумабом. Участники получали пембролизумаб путем внутривенной инфузии в течение 30 минут Q6W в течение до 18 циклов, и (3) периода последующего наблюдения, во время которого участников наблюдали на наличие нежелательных явлений (АЕ) в течение 30 дней и серьезных нежелательных явлений (SAE) в течение 90 дней (30 дней, если участник начинал новую противоопухолевую терапию). Участников с продолжающимся АЕ на момент прекращения лечения наблюдали до разрешения, стабилизации, до объяснения события иным образом, или до утраты контакта с участником для последующего наблюдения.

Участники, которые прервали участие в исследовании по причинам, отличным от рентгенологического прогрессирования заболевания, подвергались визуализации во время последующего наблюдения после окончания лечения на выраженность заболевания до прогрессирования заболевания, зафиксированного рентгенологически, согласно RECIST 1.1 и, если это клинически необходимо, подтверждали локализацией согласно iRECIST, инициируя лечение рака вне рамок исследования, отзывая информированное согласие, не участвуя в последующем наблюдении или завершении исследования. Всех участников контролировали по телефону на общую выживаемость в период последующего наблюдения за выживаемостью до момента смерти, отзыва участником информированного согласия, утраты контакта с участником для последующего наблюдения или окончания исследования.

Всем участникам, включенным в это исследование, поставлен диагноз меланомы на поздней стадии. Результаты этого исследования будут способствовать пониманию РК-характеристик пембролизумаба при введении в режиме дозирования Q6W. Параметры безопасности, обычно используемые для оценки исследуемых системных противораковых терапий, включены в качестве конечных точек безопасности, включая, но без ограничения, частоту, связь с исследуемым препаратом и исход нежелательных явлений (АЕ)/серьезных нежелательных явлений (SAE); и изменения основных показателей жизнедеятельности и лабораторных показателей. АЕ оценивали в соответствии с критериями Неблагоприятных явлений Национального Института Рака США (National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events, [NCI CTCAE] Version 4.0).

Целью данного исследования является характеристика PK-профиля пембролизумаба после введения путем внутривенной инфузии Q6W. Данные PK анализировали после того, как все участники завершили Цикл 5. Параметры PK включали AUC, Cmax и Cmin. Образование антилекарственных антител (Antidrug Antibodies, ADA) может потенциально затруднить воздействие лекарственного средства в терапевтических дозах и вызывать последующую токсичность, связанную с инфузией. Определяли ответ антилекарственных антител на пембролизумаб в начале каждого из Циклов 1, 2, 4 и 5. Изучали любое влияние присутствия ADA на воздействие пембролизумаба.

В этом исследовании в качестве основной конечной точки использовали ORR на основе критериев RECIST 1.1 по данным независимой централизованной оценки в слепом режиме (BICR). Частота объективного ответа является приемлемым показателем клинической пользы для исследования на поздних стадиях, который демонстрирует превосходство новой противоопухолевой терапии, особенно, если величина эффекта велика и терапия имеет приемлемый профиль соотношения риск/польза. Изображения отправляются в Международную организацию по исследованию клетки (iCRO) и считываются централизованно независимым экспертом, не осведомленным о виде лечения, чтобы свести к минимуму предвзятое отношение в оценках ответов.

Общая выживаемость (OS) является вторичной конечной точкой и признана золотым стандартом для демонстрации превосходства новой противоопухолевой терапии в рандомизированных клинических исследованиях. RECIST 1.1 используется BICR при оценке изображений на показатели эффективности и местным центром при определении соответствия критериям. Модифицированные критерии RECIST 1.1 для оценки иммунотерапевтических средств (iRECIST) были разработаны и опубликованы рабочей группой RECIST при участии ведущих экспертов из промышленности и научных кругов, а также при участии Управления по контролю за продуктами и лекарствами США и Европейского агентства по лекарственным средствам. Одномерное измерение целевых поражений, качественная оценка нецелевых поражений и категории ответов являются идентичными RECIST 1.1, пока не наблюдается прогрессирование согласно RECIST 1.1. Однако, если участник является клинически стабильным, может быть проведена дополнительная визуализация для подтверждения рентгенологического прогрессирования. iRECIST используется исследователями для оценки ответа и прогрессирования опухоли, и для принятия решений о лечении, а также для анализа поисковых показателей эффективности, если это указано.

Критерии включения

Участники могут быть включены в исследование только в случае соответствия всем следующим критериям:

• Участник имеет гистологически или цитологически подтвержденный диагноз меланомы на поздней стадии.

• Участник имеет неоперабельную меланому стадии III или IV в соответствии с системой стадирования Американского объединенного комитета по раку (American Joint Committee on Cancer, AJCC), не поддающуюся местной терапии.

• Участник не получал лечение запущенного или метастатического заболевания, за исключением следующего: меланома с мутацией BRAF V600 могла подвергаться стандартной таргетной терапии (например, ингибитор BRAF/MEK, отдельно или в комбинации) и соответствовать критериям для этого исследования

• Предшествующая адъювантная или неоадъювантная терапия меланомы разрешается, если она была завершена по меньшей мере за 4 недели до рандомизации и все связанные АЕ либо вернулись к исходному уровню, либо стабилизировались (разрешение токсического эффекта(ов) самой последней предшествующей терапии до степени 1 или ниже [кроме алопеции]). Если субъект подвергался серьезной операции или лучевой терапии > 30 Гр, он должен восстановиться от токсичности и/или осложнений после вмешательства.

Участник женского пола является подходящим для участия в исследовании, если она не беременная, не кормит грудью и согласна следовать конкретным рекомендациям по контрацепции на период лечения и в течение по меньшей мере 120 дней, или дает информированное согласие.

Участник должен иметь показатель общего состояния по шкале Восточной кооперативной онкологической группы (ECOG) 0 (полностью активен, способен выполнять все те же функции без ограничений, что и до начала развития заболевания) или 1 (ограничен в физически напряженной активности, но амбулаторно в состоянии выполнять легкую или сидячую работу, например, легкую домашнюю работу, канцелярскую работу) и должен иметь адекватную функцию органов, как указано в таблице 5. Образцы собирали за 72 часа до начала исследования.

Критерии исключения

Участники исключаются из исследования, если выполняется любой из следующих критериев:

• Участница представляет женщину с детородным потенциалом (WOCBP), у которой был положительный тест на беременность в течение 72 часов до рандомизации или назначения лечения. Если анализ мочи положительный или не может быть подтвержден как отрицательный, требуется сывороточный тест на беременность.

• Участник ранее получал системное лечение неоперабельной или метастатической меланомы (за исключением случаев, указанных в критериях включения, описанных выше).

• Участник ранее получал терапию анти-PD-1, анти-PD-L1 или анти-PD-L2, или агентом, направленным на другой стимулирующий или ко-ингибирующий Т-клеточный рецептор (например, ОХ-40 и CD137), или любым другим антителом или лекарственным средством, специфически нацеленным на пути контрольных точек, отличным от анти-CTLA-4, что допускается в адъювантных условиях.

• Участник получал предшествующую лучевую терапию в течение 2 недель до начала лечения в рамках исследования. Участники должны восстановиться после всех токсических эффектов, связанных с облучением, без необходимости применения кортикостероидов, и не иметь лучевого пневмонита.

• Участник получал живую вакцину в течение 30 дней до первой дозы исследуемого лекарственного средства. Примеры живых вакцин включают, но без ограничения, следующие: корь, эпидемический паротит, краснуха, ветряная оспа (ветрянка), желтая лихорадка, бешенство, Bacillus Calmette Guerin (BCG) и тифозная вакцина. Сезонные вакцины против гриппа для инъекций, как правило, являются вакцинами убитого вируса и допускаются; однако интраназальные вакцины против гриппа (например, FluMist®) являются живыми аттенуированными вакцинами и не допускаются.

• Участник на текущий момент участвует или принимал участие в исследовании экспериментального препарата или использовал экспериментальное устройство в течение 4 недель до первой дозы исследуемого препарата.

• Участнику поставлен диагноз иммунодефицита или он получает длительную системную стероидную терапию (в дозах, превышающих 10 мг в день эквивалента преднизона) или любую другую форму иммуносупрессивной терапии в течение 7 дней до первой дозы исследуемого препарата.

• Участник имеет известное дополнительное злокачественное новообразование, которое прогрессирует или требовала активного лечения в течение последних 2 лет.Примечание: Участники с базальноклеточной карциномой кожи, плоскоклеточной карциномой кожи или карциномой in situ (например, карцинома молочной железы, рак шейки матки in situ), которые прошли потенциально радикальное лечение, не исключаются.

• Участник имеет известные активные метастазы в CNS и/или карциноматозный менингит. Участники с ранее пролеченными метастазами в головной мозг могут участвовать при условии, что они являются рентгенологически стабильными (т.е. без признаков прогрессирования) в течение по меньшей мере 4 недель по результатам повторной визуализации (обратите внимание, что повторная визуализация должна выполняться на стадии скрининга во время исследования), клинически стабильными и без требования лечения стероидами в течение по меньшей мере 14 дней до первой дозы исследуемого препарата.

• Участник имеет тяжелую гиперчувствительность (≥ 3 степени) к пембролизумабу и/или любому из его вспомогательных веществ.

• Участник имеет меланому глаза.

• Участник имеет активное аутоиммунное заболевание, которое требовало системного лечения в течение последних 2 лет (например, с использованием агентов, модифицирующих заболевание, кортикостероидов или иммунодепрессантов). Заместительная терапия (например, тироксин, инсулин или физиологическая заместительная терапия кортикостероидами при надпочечниковой или гипофизарной недостаточности) не считается формой системного лечения и допускается.

• Участник имеет историю (неинфекционного) пневмонита, который требовал стероидов, или на текущий момент имеет пневмонит.

• Участник имеет активную инфекцию, требующую системной терапии.

• Участник имеет известную историю заражения вирусом иммунодефицита человека (HIV).

• Участник имеет известную историю гепатита В (определен как поверхностный антиген вируса гепатита В [HBsAg] реактивный) или известную историю активного вируса гепатита С (определен как [качественное определение] РНК HCV).

• Участник имеет историю или текущее свидетельство любого состояния, терапии или отклонения лабораторных показателей, которые могут исказить результаты исследования, помешать участнику участвовать на протяжении всего исследования, или по мнению врача-исследователя участие в исследовании не отвечает наилучшим интересам участника.

• Участник имеет известное психическое расстройство или расстройство, связанное с употреблением психоактивных веществ, которое может помешать выполнению требований исследования.

• Участник является беременной, кормит грудью или ожидает зачатия или отцовства во время запланированной продолжительности исследования, начиная со скринингового визита и в течение 120 дней после последней дозы исследуемого препарата.

Прекращение исследуемого вмешательства и исключение участника из исследования

Прекращение исследуемого вмешательства не означает выход из исследования. Поскольку определенные данные по клиническим событиям, возникающим после прекращения исследуемого вмешательства могут быть важными для исследования, они должны быть собраны во время последнего запланированного визита участника в период последующего наблюдения, даже если участник прекратил исследуемое вмешательство. Таким образом, все участники, которые прекратили исследуемое вмешательство до завершения периода лечения, указанного в протоколе, все равно продолжат участие в исследовании.

Участники могут прекратить исследуемое вмешательство в любое время по любой причине или могут быть исключены из исследования по усмотрению исследователя в случае возникновения каких-либо нежелательных эффектов. Кроме того, исследователь может прервать исследуемое вмешательство у участника, если исследуемое вмешательство является неуместным, нарушен план исследования или по административным и/или другим причинам безопасности.

Участник должен быть отстранен от исследуемого вмешательства, но продолжать оставаться под наблюдением в рамках исследования по любой из следующих причин:

• Просьбы участника или его законного представителя о прекращении исследуемого вмешательства.

• Участник прерывает получение исследуемого вмешательства более чем на 12 недель подряд или имеет 3 кумулятивных пропущенных дозы.

• Участник имеет медицинское состояние или личные обстоятельства, которые по мнению исследователя подвергают участника ненужному риску из-за продолжения получения исследуемого вмешательства.

• Участница имеет подтвержденный положительный сывороточный тест на беременность.

• Участник имеет подтвержденное рентгенологическое прогрессирование заболевания.

• Участник имеет любое прогрессирование или рецидив любого злокачественного новообразования, или любое проявление другого злокачественного новообразования, которое требует активного лечения.

• Участник имеет неприемлемые неблагоприятные явления.

• Участник страдает интеркуррентным заболеванием, отличным от другого злокачественного новообразования, как указано выше, что препятствует дальнейшему проведению лечения.

• Исследователь решает прекратить лечение.

• Участник имеет рецидивирующий пневмонит 2 степени.

• Участник завершил 35 курсов лечения (примерно 2 года) пембролизумабом.

Участник исключается из исследования, если участник или его законный представитель отозвал согласие на участие в исследовании. Если участник отказывается от участия в исследовании, он больше не будет получать исследуемое лечение и не будет наблюдаться во время запланированных протоколом визитов.

Информированное согласие

Исследователь или уполномоченное лицо с медицинской квалификацией получает документально подтвержденное согласие от каждого потенциального участника или законного представителя каждого участника до участия в клиническом исследовании. Если во время исследования в статусе участника происходят изменения (например, требования к состоянию здоровья или совершеннолетия), исследователь или уполномоченное лицо с медицинской квалификацией обеспечивает наличие соответствующего согласия.

Эффективность/оценки

Оценки опухолей включают все известные или предполагаемые очаги заболевания. Визуализация может включать компьютерную томографию (КТ) грудной клетки, брюшной полости и таза или магнитно-резонансную томографию (МРТ) на исходном уровне и при подозрении на прогрессирование заболевания или метастазы в головной мозг. Визуализацию опухоли настоятельно рекомендуется проводить с помощью КТ. Для грудной клетки, живота и таза можно использовать МРТ с контрастным усилением, когда КТ с йодсодержащим контрастным препаратом противопоказана или когда это требуется местной практикой. Для головного мозга наиболее предпочтительным методом визуализации является МРТ.

Одно и то же устройство получения изображения (в идеальном случае один и тот же сканер и одинаковое использование контрастного препарата) используют у участника на протяжении всего исследования. Одинаковое использование методов визуализации поможет оптимизировать воспроизводимость оценки существующей и новой опухолевой нагрузки и повысить точность оценки ответа или прогрессирования. Все запланированные визуализации для всех участников исследования изучаются исследователем на предмет прогрессирования заболевания. Кроме того, изображения (в том числе полученные посредством других устройств), которые получены в незапланированный момент времени для определения прогрессирования заболевания (а также визуализации, проведенные по другим причинам, но которые фиксируют рентгенологическое прогрессирование по оценке исследователя), также хранятся в исследовательском центре.

Подтверждение измеряемого проявления заболевания на основе RECIST 1.1 с помощью BICR при скрининге будет использовано для определения пригодности участника. Подтверждение с помощью BICR того, что визуализация у участника показывает по меньшей мере 1 очаг, который является подходящим для выбора в качестве целевого очага согласно RECIST 1.1, требуется до распределения участников по группам.

Первоначальная визуализация опухоли

Первоначальную визуализацию опухоли при скрининге выполняют в течение 28 дней до даты введения первой дозы. Любые визуализации, проведенные после Цикла 1, Дня 1 лечения, не включаются в скрининговую оценку. Исследовательская группа изучает снимки, полученные во время скрининга, для подтверждения того, что участник имеет измеряемое проявление заболевания согласно RECIST 1.1. Если визуализацию головного мозга проводят для подтверждения стабильности существующих метастазов, по возможности используют МРТ. Если МРТ противопоказана с медицинской точки зрения, приемлемой альтернативой является КТ с контрастированием.

Визуализация опухоли во время исследования

Первую визуализационную оценку во время исследования проводят через 12 недель (84 дня ±7 дней) после даты введения первой дозы. Последующую визуализацию опухоли проводят каждые 9 недель (63 дня ±7 дней) или чаще, при наличии клинических показаний. Через 52 недели (365 дней ±7 дней) участникам, которые продолжают лечение, визуализацию будут проводить каждые 12 недель (84 дня ±7 дней).

Объективный ответ подтверждается повторной визуализационной оценкой. Визуализацию опухоли для подтверждения PR или CR проводят по меньшей мере через 4 недели после появления первых признаков ответа. Затем участники возвращаются к регулярной плановой визуализации, начиная со следующей запланированной даты ее проведения. Участникам, прошедшим дополнительную визуализацию для подтверждения, не нужно проходить следующую плановую визуализацию опухоли, если она должна состояться менее чем через 4 недели; проведение визуализации опухоли можно возобновить в день проведения следующей плановой визуализации.

Согласно модифицированным критериям iRECIST, прогрессирование заболевания подтверждается исследовательским центром через 4-8 недель после первых рентгенологических данных прогрессирования заболевания (PD) у клинически стабильных участников. Участники, у которых прогрессирование заболевания не подтверждается, могут продолжать лечение по усмотрению исследователя до тех пор, пока прогрессирование не будет подтверждено исследовательским центром. Участникам, получившим подтверждающую визуализацию, не нужно проходить следующую плановую визуализацию опухоли, если она должна состояться менее чем через 4 недели; проведение визуализации опухоли можно возобновить в день проведения следующей запланированной визуализации, если она является клинически стабильной. Участники, у которых подтверждается прогрессирования заболевания с использованием критериев iRECIST, согласно оценке исследовательским центром, прекращают лечение в рамках исследования.

Визуализация опухоли при завершении лечения и в период последующего наблюдения

Для участников, которые прекращают исследуемое вмешательство, визуализацию опухоли проводят на момент прекращения лечения (окно ±4 недели). Если предыдущая визуализация была получена в течение 4 недель до даты прекращения лечения, то визуализация при прекращении лечения не является обязательной. Для участников, которые прекращают участие в исследовании из-за документально подтвержденного прогрессирования заболевания, это является последней необходимой визуализацией опухоли, если исследователь решит не применять iRECIST.

Для участников, которые прекращают исследуемое вмешательство без документально подтвержденного прогрессирования заболевания, должны быть приложены все усилия для продолжения наблюдения за выраженностью заболевания путем визуализации опухоли с использованием того же графика визуализации, который использовали во время лечения каждые 12 недель (±7 дней) до начала нового противоопухолевого лечения, прогрессирования заболевания, беременности, смерти, отзыва согласия или окончания исследования, в зависимости от того, что произойдет раньше.

RECIST 1.1 Оценка заболевания

RECIST 1.1 использовали в качестве первичного критерия для оценки ответа опухоли, даты прогрессирования заболевания и в качестве основы для всех протоколов лечения, связанных со статусом заболевания (например, прекращение исследуемого вмешательства). Несмотря на то, что RECIST 1.1 ссылается на максимум 5 целевых очагов в целом и 2 на каждый орган, этот протокол допускает максимум 10 целевых очагов в целом и 5 на каждый орган, если с клинической точки зрения важно обеспечить более широкую выборку опухолевой нагрузки.

Оценка заболевания по iRECIST

Критерии iRECIST основаны на RECIST 1.1, но адаптированы таким образом, чтобы учитывать уникальный ответ опухоли, наблюдаемый при использовании иммунотерапевтических препаратов. Исследователь будет использовать iRECIST для оценки ответа и прогрессирования опухоли, и для принятия решений относительно лечения. В случае клинической стабильности участники не прерывают лечение до тех пор, пока исследователь не подтвердит прогрессирование, работая с местной радиологией. Это разрешение продолжать лечение, несмотря на первоначальное рентгенологическое PD, учитывает наблюдение того, что у некоторых участников может наблюдаться временное обострение опухоли в первые несколько месяцев после начала иммунотерапии, а затем они испытывают последующий ответ заболевания.

Любой участник, считающийся клинически нестабильным, отстраняется от исследуемого вмешательства после рентгенологического подтверждения PD исследовательским центром, и повторная визуализация опухоли для подтверждения PD с помощью iRECIST не требуется. Если исследователь решает продолжить лечение, участник может продолжать получать исследуемое вмешательство, и оценку опухоли следует повторить через 4-8 недель, чтобы подтвердить PD с помощью iRECIST, согласно оценке исследователя. Если повторная визуализация не подтверждает PD с помощью iRECIST по оценке исследователя, и участник продолжает оставаться клинически стабильным, исследуемое вмешательство продолжается и следует обычному расписанию визуализации. Если PD подтверждается, участники отстраняются от исследуемого вмешательства.

Если у участника имеется подтвержденное рентгенологическое прогрессирование (iCPD), исследуемое вмешательство отменяют; однако, если участник достигает клинически значимого улучшения, в качестве исключения рассматривается продолжение исследуемого вмешательства. В этом случае, если исследуемое вмешательство продолжают, следует продолжать проведение визуализации опухоли. В таблице 6 представлена сводная информация, касающаяся требований к визуализации и лечению после первого рентгенологического подтверждения прогрессирования.

Оценки безопасности

Оценки безопасности включают сбор АЕ и SAE, мониторинг основных показателей жизнедеятельности и данных лабораторных исследований (включая тесты на беременность), выполнение электрокардиограмм (ЭКГ) и медицинский осмотр, а также подтверждение сопутствующей лекарственной терапии.

Нежелательные явления

Исследователь или уполномоченное лицо оценивает каждого субъекта на предмет потенциальных новых или ухудшающихся АЕ и более частых АЕ, если есть клинические показания. Оценка АЕ включает, но без ограничения, тип, частоту возникновения, тяжесть (классифицируется в соответствии с National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events [NCI CTCAE] Version 4.0), продолжительность, серьезность и связь с исследуемым препаратом. Регистрируются нежелательные явления, возникающие во время исследования, включая исходные признаки и симптомы.

Полный медицинский осмотр

Исследователь или уполномоченное лицо проводит полный медицинский осмотр в период скрининга. Клинически значимые отклонения от нормы регистрируются в истории болезни. После первой дозы исследуемого вмешательства новые клинически значимые отклонения от нормы регистрируются как АЕ.

Направленный медицинский осмотр

Для циклов, которые не требуют полного медицинского осмотра, исследователь или уполномоченное лицо проводит направленный медицинский осмотр в соответствии с клиническими показаниями до назначения исследуемого вмешательства. Новые клинически значимые отклонения от нормы регистрируются как АЕ.

Жизненно важные признаки

Жизненно важные показатели измеряются в полусидячем положении после 5-минутного отдыха и включают температуру, систолическое и диастолическое артериальное давление, частоту дыхания, частоту пульса и вес. Рост измеряют только во время скрининга.

Электрокардиограммы

Стандартную ЭКГ в 12 отведениях выполняют с использованием местных стандартных процедур. Клинически значимые отклонения от нормы во время скрининга регистрируются как история болезни. При клинической необходимости во время исследования выполняют дополнительные ЭКГ. Клинически значимые результаты, полученные при последующих ЭКГ, регистрируют как АЕ.

Лабораторные оценки клинической безопасности

Тесты, указанные в таблице 7, выполняют в местной лаборатории. Дополнительные тесты могут быть выполнены в любое время в ходе исследования, если исследователь сочтет это необходимым.

Все АЕ, SAE и другие подлежащие отчетности события, связанные с безопасностью, которые возникают после подписания информированного согласия, но до распределения/рандомизации по лечебным группам, должны регистрироваться исследователем, если участник получает терапию плацебо или другое лечение в подготовительный период исследования, если событие вынуждает исключить участника из исследования, или является результатом вмешательства, указанного в протоколе, включая, но без ограничения, отмывку или прекращение обычной терапии, диеты или процедуры. Исследователь должен регистрировать все АЕ с момента распределения/рандомизации по лечебным группам и до 30 дней после прекращения исследуемого вмешательства.

Исследователь должен регистрировать все АЕ, отвечающие серьезным критериям, с момента распределения/рандомизации по лечебным группам и до 90 дней после прекращения исследуемого вмешательства или 30 дней после прекращения исследуемого вмешательства, если участник начинает новую противоопухолевую терапию, в зависимости от того, что наступит раньше. Кроме того, о любом SAE, доведенном до сведения исследователя в любое время за пределами указанного выше периода, немедленно сообщается, если событие считается связанным с лекарственным средством.

Статистические методы для анализов эффективности

Частота объективного ответа (ORR) - ORR рассчитывается как отношение количества участников, которые, согласно сообщениям, достигли подтвержденного CR или PR, верифицированного с помощью BICR, к количеству участников, включенных в популяцию АРаТ. Участники в анализируемой популяции АРаТ без оценок ORR будут считаться участниками без ответа на терапию. Точный биномиальный 95%-ный доверительный интервал (CI) (на основе метода Clopper and Pearson, 1934) рассчитывают для истинной ORR.

Выживаемость без прогрессирования (PFS) - Для оценки распределения PFS используется непараметрический метод Каплана-Мейера. Будут рассчитаны 95%-ные доверительные интервалы для медианы PFS и точечных оценок PFS в различные последующие моменты времени, начиная с первого дня лечения в рамках исследования. Поскольку прогрессирование заболевания оценивается периодически, PD может возникать в любое время в интервале между последней оценкой, когда PD не было зафиксировано, и оценкой, когда PD было зафиксировано. Истинная дата PD будет приблизительно соответствовать дате первой оценки, когда было объективно зафиксировано PD на основе RECIST 1.1 с помощью BICR. Смерть всегда рассматривается как событие PFS. Участники, которые не испытывают событие PFS, будут подвергнуты цензуре при последней оценке болезни. Для анализа PFS, если события (PD или смерть) произошли сразу после более чем одной пропущенной оценки заболевания, данные подвергаются цензуре при последней оценке заболевания до пропущенных визитов. Кроме того, данные после новой противоопухолевой терапии подвергаются цензуре при последней оценке заболевания перед началом новой противоопухолевой терапии. Если участник соответствует нескольким критериям цензуры, будет применяться критерий цензуры, который встречался раньше.

Общая выживаемость (OS) - Непараметрический метод Каплана-Мейера используют для оценки распределения OS. Рассчитывали 95%-ный доверительный интервал для медианы OS и точечных оценок OS в различные последующие моменты времени, начиная с первого дня лечения в рамках исследования.

Продолжительность ответа (DOR) - DOR представлена в описательной форме с использованием непараметрического метода Каплана-Мейера. В этот анализ включается только часть участников, показавших CR или PR.

Стратегия анализа для ключевой конечной точки эффективности

В таблице 8 кратко изложен подход к первичному анализу ключевых конечных точек эффективности.

Безопасность и переносимость оценивали путем клинического обзора всех соответствующих параметров, включая неблагоприятные события и лабораторные параметры. Широкие категории АЕ, состоящие из процента участников с любым АЕ, АЕ, связанным с лекарственным средством, серьезным АЕ, АЕ, которое связано с лекарственным средством и является серьезным, и которые прекратили прием из-за АЕ, обобщены с помощью точечных оценок с 95%-ными доверительными интервалами (таблица 9).

АЕ представляет собой любое неблагоприятное медицинское явление у участника клинического исследования, временно ассоциированное с применением исследуемого вмешательства, независимо от того, считается ли оно связанным с исследуемым вмешательством или нет. Следовательно, АЕ может представлять собой любой неблагоприятное и непредусмотренное проявление (включая отклоняющиеся от нормы данные лабораторного исследования), симптом или заболевание (новое или обострившееся), временно ассоциированное с применением лекарственного средства.

Следующее включено как АЕ:

• Любые отклоняющиеся от нормы результаты лабораторных тестов (гематология, клиническая химия или общий анализ мочи) или другие оценки безопасности (например, ЭКГ, рентгенологические снимки, измерения основных показателей жизнедеятельности), в том числе те, которые ухудшаются по сравнению с исходным уровнем или считаются клинически значимыми с медицинской или научной точки зрения исследователя.

• Обострение хронического или периодического ранее существовавшего состояния, включая увеличение частоты и/или интенсивности состояния.

• Новые состояния, обнаруженные или диагностированные после проведения исследовательского вмешательства, даже если они могли присутствовать до начала исследования.

• Признаки, симптомы или клинические последствия предполагаемого лекарственного взаимодействия.

• Признаки, симптомы или клинические последствия предполагаемой передозировки либо исследуемого вмешательства, либо сопутствующего лекарственного средства.

• Ухудшение признаков и симптомов злокачественного новообразования во время исследования регистрируется как АЕ. Прогрессирование заболевания, оцениваемое путем измерения злокачественных образований на рентгенограммах или другими методами, не регистрируется как АЕ, если только событие не привело к госпитализации или смерти.

Следующие события не соответствуют определению АЕ для целей данного исследования:

• Медицинская или хирургическая процедура (например, эндоскопия, аппендэктомия): состояние, которое приводит к операции, является АЕ.

• Ситуации, в которых неблагоприятное медицинское явление не произошло (госпитализация по социальным причинам и/или для удобства).

• Ожидаемые ежедневные колебания уже имеющегося заболевания(й) или состояния(й), присутствующего или обнаруженного в начале исследования, которое не ухудшается.

• Операция, запланированная до получения информированного согласия, для лечения уже имеющегося состояния, которое не ухудшилось.

Если событие не является АЕ согласно приведенному выше определению, то оно не может представлять собой SAE, даже если отвечает серьезным состояниям. SAE определяется как любое нежелательное медицинское явление, которое при любой дозе:

• Приводит к смерти

• Угрожает жизни. Термин «угрожает жизни» в определении «серьезное» относится к событию, в котором участник подвергался риску смерти в момент события. Это не относится к событию, которое гипотетически могло вызвать смерть, если бы было более тяжелым.

• Требует госпитализации в стационар или продления существующей госпитализации. Госпитализация определяется как прием в стационар, независимо от продолжительности пребывания, даже если госпитализация является мерой профилактики для дальнейшего наблюдения. Госпитализация для плановой процедуры для лечения уже существующего состояния, которое не ухудшилось, не является SAE. Уже существующее состояние представляет собой клиническое состояние, которое диагностируется до применения продукта MSD и документируется в истории болезни участника.

• Приводит к стойкой или значительной нетрудоспособности/недееспособности. Термин нетрудоспособность означает существенное нарушение способности человека выполнять нормальные жизненные функции. Это определение не предназначено для включения состояний, имеющих относительно незначительное медицинское значение, таких как неосложненная головная боль, тошнота, рвота, диарея, грипп и случайные травмы (например, растяжение связок голеностопного сустава), которые могут мешать или препятствовать выполнению повседневных функций, но не представляют существенного нарушения.

• Является врожденной аномалией/врожденным дефектом у потомства участника, принимающего продукт, независимо от времени до постановки диагноза.

Медицинское или научное суждение используется при принятии решения о том, уместно ли сообщение о SAE в других ситуациях, таких как важные медицинские события, которые могут не представлять непосредственной угрозы для жизни или привести к смерти или госпитализации, но могут подвергнуть опасности участника или могут потребовать медицинского или хирургического вмешательства для предотвращения одного из других исходов, перечисленных в приведенном выше определении. Эти события обычно считаются серьезными. Примеры таких событий включают инвазивные или злокачественные опухоли, интенсивное лечение в отделении неотложной помощи или дома при аллергическом бронхоспазме, дискразиях крови или судорогах, которые не приводят к госпитализации или развитию лекарственной зависимости или злоупотреблению лекарственными препаратами.

Демографические и исходные характеристики

Отображается количество и процент подвергнутых скринингу, распределенных субъектов, основные причины непрохождения скрининга и основные причины прекращения участия в исследовании. Демографические переменные (например, возраст, пол), исходные характеристики, первичный и вторичный диагнозы, а также предшествующие и сопутствующие терапии обобщены либо с помощью описательной статистики, либо с помощью категориальных таблиц для всех включенных субъектов.

Анализы подгрупп

Чтобы определить, согласуется ли частота ответов по различным подгруппам, оценку частоты ответа (с номинальным 95%-ным CI) для первичной конечной точки проводили в каждой категории следующих классификационных переменных:

• Возрастная категория (< 65 против ≥ 65 лет)

• Пол (женский против мужского)

• Раса (белые против небелых)

• Стадия заболевания (III против IVM1a против IVM1b против IVM1c)

• Метастазы в головной мозг (да против нет)

• Статус ECOG (0 против 1)

• Статус PD-L1 (положительный против отрицательного)

• BRAF дикого типа по сравнению с мутантом BRAF (без предшествующего лечения) по сравнению с мутантом BRAF (предшествующее лечение)

Создается форест-диаграмма, на которой представлены прогнозируемые точечные оценки и CI для лечебного эффекта по категориям подгрупп, перечисленных выше. Любые указанные подгруппы, в которых менее 10 участников, исключаются из анализа.

Пример 3

Введение 400 мг пембролизумаба Q6W в комбинации с анти-CTLA4-антителом пациентам с меланомой, рефрактерной к PD-1

Исследуемые группы 1 и 2 изучали на противоопухолевую активность анти-CTLA4-антитела (например, антитела 8D2H2L2, Вариант 1) с пембролизумабом или без него у участников с запущенной меланомой, рефрактерной к анти-PD1/L1.

Группа I: В Цикле 1, День 1 и во всех последующих циклах участники получали 25 мг анти-CTLA4-антитела (например, антитела 8D2H2L2, Вариант 1) в комбинации с пембролизумабом в дозе 400 мг. Анти-CTLA4-антитело и пембролизумаб вводили по схеме Q6W непрерывно в течение до 2 лет.

Промежуточный анализ безопасности проводили, когда первые 6 участников, подлежащих оценке на DLT, завершали свою оценку DLT. Если наблюдаемый уровень DLT превышал 25%, дозировка пембролизумаба 400 мг Q6W может быть заменена пембролизумабом 200 мг Q3W у вновь включенных участников.

Группа II (n = до 40) В Цикле 1, День 1 и во всех последующих циклах участники будут получать 25 мг анти-CTLA4-антитела (например, антитела 8D2H2L2, Вариант 1) в качестве монотерапии по схеме Q6W непрерывно в течение до 2 лет.

Все цитируемые в настоящем документе источники включены в качестве ссылки в такой же степени, как если бы для каждой отдельной публикации, записи в базе данных (например, последовательностей Genbank или записей в GeneID), патентной заявки или патента конкретно и отдельно указывали о том, что она включена в качестве ссылки. Это заявление о включении путем ссылки определено заявителями согласно 37 C.F.R. §1.57 (b) (1) в отношении каждой отдельной публикации, записи в базе данных (например, последовательностей Genbank или записей в GeneID), патентной заявки или патента, каждый из которых четко определен в соответствии с 37 C.F.R. § 1.57(b) (2), даже если такая цитата не связана непосредственно со специальным заявлением о включении путем ссылки. Цитирование ссылки в настоящем документе не является признанием того, что ссылка имеет отношение к уровню техники, также не представляет собой признания относительно содержания или даты этих публикаций или документов.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> МЕРК ШАРП & ДОУМ КОРП.

Лала, Маллика

Джэйн, Локеш

Ли, Мэньгиао

Алтура, Рэйчел Эллисон

Тсе, Арчи Нгай-чиу

<120> Способы лечения рака с помощью анти-PD-1-антител и анти-CTLA4-антител

<130> 24695

<150> 62/630,038

<151> 2018-02-13

<150> 62/732,828

<151> 2018-09-18

<150> 62/740,741

<151> 2018-10-03

<160> 58

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб - CDR1 легкой цепи

<400> 1

Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 2

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб- CDR2 легкой цепи

<400> 2

Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб- CDR3 легкой цепи

<400> 3

Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 4

<211> 111

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб- вариабельная область легкой цепи

<400> 4

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 5

<211> 218

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб- легкая цепь

<400> 5

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 6

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб- CDR1 тяжелой цепи

<400> 6

Asn Tyr Tyr Met Tyr

1 5

<210> 7

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб- CDR2 тяжелой цепи

<400> 7

Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210> 8

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб- CDR3 тяжелой цепи

<400> 8

Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 9

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб- вариабельная область тяжелой цепи

<400> 9

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 10

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пембролизумаб- тяжелая цепь

<400> 10

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 11

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR1 легкой цепи

<400> 11

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 12

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR2 легкой цепи

<400> 12

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 13

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR3 легкой цепи

<400> 13

Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 14

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR1 тяжелой цепи

<400> 14

Ser Tyr Tyr Leu Tyr

1 5

<210> 15

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR2 тяжелой цепи

<400> 15

Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 16

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hPD-1.08A CDR3 тяжелой цепи

<400> 16

Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 17

<211> 290

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 17

Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu

1 5 10 15

Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr

20 25 30

Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu

35 40 45

Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile

50 55 60

Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser

65 70 75 80

Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn

85 90 95

Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr

100 105 110

Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val

115 120 125

Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val

130 135 140

Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr

145 150 155 160

Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser

165 170 175

Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn

180 185 190

Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr

195 200 205

Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu

210 215 220

Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His

225 230 235 240

Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr

245 250 255

Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys

260 265 270

Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu

275 280 285

Glu Thr

290

<210> 18

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 20C3 Зрелая вариабельная область легкой цепи

<400> 18

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Ser Tyr Asp Val Val Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 19

<211> 122

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 20C3 Зрелая вариабельная область тяжелой цепи

<400> 19

Gln Val Gln Val Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Glu Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Asp Tyr Asn Glu Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Met Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ala Ser Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ile Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Trp Leu Val His Gly Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 20

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 22C3 Зрелая вариабельная область легкой цепи

<400> 20

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Thr

20 25 30

Ser Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln

85 90 95

Ser Tyr Asp Val Val Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 21

<211> 122

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 22C3 Зрелая вариабельная область тяжелой цепи

<400> 21

Gln Val His Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr His Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Ile Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met His Leu Thr Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Trp Leu Ile His Gly Asp Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 22

<211> 111

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-16 вариабельная область легкой цепи

<400> 22

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 23

<211> 111

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-17 вариабельная область легкой цепи

<400> 23

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 24

<211> 218

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-16 легкая цепь полной длины

<400> 24

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 25

<211> 218

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> K09A-L-17 легкая цепь полной длины

<400> 25

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 26

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRL1 легкой и тяжелой цепи Ипилимумаба

<400> 26

Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 27

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRL2 легкой и тяжелой цепи Ипилимумаба

<400> 27

Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 28

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRL3 легкой и тяжелой цепи Ипилимумаба

<400> 28

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr

1 5

<210> 29

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRH1 легкой и тяжелой цепи Ипилимумаба

<400> 29

Ser Tyr Thr Met His

1 5

<210> 30

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRH2 легкой и тяжелой цепи Ипилимумаба

<400> 30

Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 31 <211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRH3 легкой и тяжелой цепи Ипилимумаба

<400> 31

Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr

1 5

<210> 32

<211> 118

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VR тяжелой цепи Ипилимумаба

<400> 32

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 33

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VR легкой цепи Ипилимумаба

<400> 33

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 34

<211> 448

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зрелая тяжелая цепь и зрелая легкая цепь Ипилимумаба

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 35

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зрелая тяжелая цепь и зрелая легкая цепь ипилимумаба

<400> 35

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 36 <211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRH1 Моноклонального антитела

<400> 36

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn Trp

1 5

<210> 37

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRH2 Моноклонального антитела

<400> 37

Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr

1 5 10

<210> 38

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRH3 Моноклонального антитела

<400> 38

Thr Ala Gln Phe Ala Tyr

1 5

<210> 39

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRL1 Моноклонального антитела

<400> 39

Glu Asn Ile Tyr Gly Gly

1 5

<210> 40

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRL2 Моноклонального антитела

<400> 40

Gly Ala Thr

1

<210> 41 <211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRL3 Моноклонального антитела

<400> 41

Gln Asn Val Leu Arg Ser Pro Phe Thr

1 5

<210> 42 <211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRL3 Моноклонального антитела <400> 42

Gln Asn Val Leu Ser Arg His Pro Gly

1 5

<210> 43

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CDRL3 Моноклонального антитела

<400> 43

Gln Asn Val Leu Ser Ser Arg Pro Gly

1 5

<210> 44

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2/8D2 (RE) VH

<400> 44

Glu Val Lys Leu Asp Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Pro Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Gly Glu Asp Met Gly Ile Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ala Gln Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ala

115

<210> 45

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2/8D2 (RE) VL

<400> 45

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Gly Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Gly

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Met Ser Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Ser Leu His Pro

65 70 75 80

Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Arg Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105

<210> 46

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H1L1 VH

<400> 46

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Met Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ala Gln Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 47

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H1L1 VL

<400> 47

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Gly

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Gln Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Ser Gly Met Ser Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Lys Ile Ser Ser Leu His Pro

65 70 75 80

Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Arg Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 48

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H2L2 VH

<400> 48

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Met Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ala Gln Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 49

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H2L2 VL

<400> 49

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Gly

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Arg Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 50

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H2L2 VH - вариант 1

<400> 50

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ala Gln Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 51

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D3H3L3 VL

<400> 51

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Glu Tyr Ala Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ala Gln Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 52

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D3H3L3 VL

<400> 52

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Gly

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Arg Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 53

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H2L15 VH

<400> 53

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Met Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ala Gln Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 54

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H2L15 VL

<400> 54

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Gly

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Arg His Pro

85 90 95

Gly Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 55

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H2L17 VH

<400> 55

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Met Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ala Gln Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 56

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H2L17 VL

<400> 56

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Gly

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Ser Arg Pro

85 90 95

Gly Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 57

<211> 445

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H2L2 полная тяжелая цепь - вариант 1

<400> 57

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ala Gln Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 58

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 8D2H2L2 аолная легкая цепь - вариант 1

<400> 58

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Gly

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Arg Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<---

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины. 1 и 2 объекты представляют собой способы лечения рефрактерного к PD-1/PD-L1 рака у пациента-человека, включающие введение 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту каждые шесть недель и 25 мг анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту каждые шесть недель. 3-6 объекты - наборы для лечения пациента, имеющего рефрактерный к PD-1/PD-L1 рак, содержащие 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и 25 мг анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, композицию для лечения рефрактерного к PD-1/PD-L1 рака, и их применение для лечения индивидуума, страдающего рефрактерным к PD-1/PD-L1 раком. 7 и 8 объекты - применение в комбинации анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в количестве 25 мг и анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в количестве 400 мг для лечения рефрактерного к PD-1/PD-L1 рака. Технический результат заключается в безопасном и эффективном режиме дозирования анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. 8 н. и 24 з.п. ф-лы, 4 ил., 9 табл., 3 пр.

1. Способ лечения рефрактерного к PD-1/PD-L1 рака у пациента-человека, включающий введение 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту каждые шесть недель и 25 мг анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента пациенту каждые шесть недель, при этом анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR), содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и области CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8;

и где анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

области CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 41, и области CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 9, или вариант последовательности SEQ ID NO: 9, и

(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 4, или вариант последовательности SEQ ID NO: 4.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 4.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 10, и легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 5.

5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 50, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 49.

6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 57, и легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 58.

7. Способ лечения рефрактерного к PD-1/PD-L1 рака у пациента-человека, включающий введение каждого из 400 мг анти-PD-1-антитела и 25 мг анти-CTLA4-антитела пациенту каждые шесть недель, при этом анти-PD-1-антитело содержит (i) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 10, и (ii) легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 5, и где анти-CTLA4-антитело содержит (iii) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 57, и (iv) легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 58.

8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что рак представляет собой меланому, рефрактерную к PD-1/PD-L1.

9. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из: меланомы, немелкоклеточного рака легкого, рака головы и шеи, уротелиального рака, рака молочной железы, рака желудочно-кишечного тракта, множественной миеломы, гепатоцеллюлярного рака, неходжкинской лимфомы, рака почки, лимфомы Ходжкина, мезотелиомы, рака яичника, мелкоклеточного рака легкого, рака пищевода, рака анального канала, рака желчных протоков, колоректального рака, рака шейки матки, рака щитовидной железы, рак слюнных желез, рака поджелудочной железы, опухоли головного мозга, глиобластомы, саркомы, опухоли кости или карциномы из клеток Меркеля.

10. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту путем внутривенного или подкожного введения.

11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой пембролизумаб.

12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело и анти-CTLA4-антитело вводят совместно.

13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело и анти-CTLA4-антитело составляют совместно.

14. Набор для лечения пациента, имеющего рефрактерный к PD-1/PD-L1 рак, содержащий:

(а) 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента,

(b) 25 мг анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента; и

(c) инструкции по применению анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR), содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и области CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8;

и где анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

области CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 41, и области CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38.

15. Набор по п. 14, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело представляет собой пембролизумаб.

16. Набор по любому из пп. 14, 15, отличающийся тем, что анти-CTLA4-антитело представляет собой моноклональное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 50, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 49.

17. Набор по любому из пп. 14-16, отличающийся тем, что анти-CTLA4-антитело представляет собой моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 57, и легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 58.

18. Набор по любому из пп. 14-17, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 9, или вариант последовательности SEQ ID NO: 9, и

(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 4, или вариант последовательности SEQ ID NO: 4.

19. Набор по любому из пп. 14-18, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 4.

20. Набор по любому из пп. 14-19, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 10, и легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 5.

21. Набор для лечения пациента, имеющего рефрактерный к PD-1/PD-L1 рак, содержащий:

(а) 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента,

(b) 25 мг анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента; и

(c) инструкции по применению анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента,

при этом анти-PD-1-антитело содержит (i) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 10, и (ii) легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 5, и

где анти-CTLA4-антитело содержит (iii) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 57, и (iv) легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 58.

22. Набор по любому из пп. 14-21, отличающийся тем, что рак представляет собой меланому, рефрактерную к PD-1/PD-L1.

23. Набор по любому из пп. 14-21, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из: меланомы, немелкоклеточного рака легкого, рака головы и шеи, уротелиального рака, рака молочной железы, рака желудочно-кишечного тракта, множественной миеломы, гепатоцеллюлярного рака, неходжкинской лимфомы, рака почки, лимфомы Ходжкина, мезотелиомы, рака яичника, мелкоклеточного рака легкого, рака пищевода, рака анального канала, рака желчных протоков, колоректального рака, рака шейки матки, рака щитовидной железы, рак слюнных желез, рака поджелудочной железы, опухоли головного мозга, глиобластомы, саркомы, опухоли кости или карциномы из клеток Меркеля.

24. Набор по любому из пп. 14-23, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту путем внутривенного или подкожного введения.

25. Набор по любому из пп. 14-24, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело и анти-CTLA4-антитело вводят совместно.

26. Набор по любому из пп. 14-25, отличающийся тем, что анти-PD-1-антитело и анти-CTLA4-антитело составляют совместно.

27. Композиция для лечения рефрактерного к PD-1/PD-L1 рака, содержащая 400 мг анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и 25 мг анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента,

при этом анти-PD-1-антитело содержит (i) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 10, и (ii) легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 5, и

где анти-CTLA4-антитело содержит (iii) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 57, и (iv) легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 58.

28. Применение набора по любому из пп. 14-26 или композиции по п. 27 для лечения индивидуума, страдающего рефрактерным к PD-1/PD-L1 раком.

29. Применение по п. 28, отличающееся тем, что рак представляет собой меланому, рефрактерную к PD-1/PD-L1.

30. Применение по п. 28, отличающееся тем, что рак представляет собой меланому, немелкоклеточный рак легкого, рак головы и шеи, уротелиальный рак, рак молочной железы, рак желудочно-кишечного тракта, множественную миелому, гепатоцеллюлярный рак, неходжкинскую лимфому, рак почки, лимфому Ходжкина, мезотелиому, рак яичника, мелкоклеточный рак легкого, рак пищевода, рак анального канала, рак желчных протоков, колоректальный рак, рак шейки матки, рак щитовидной железы, рак слюнных желез, рак поджелудочной железы, опухоль головного мозга, глиобластому, саркому, опухоль кости, или карциному из клеток Меркеля.

31. Применение анти-PD-1-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в количестве 400 мг для лечения рефрактерного к PD-1/PD-L1 рака в комбинации с анти-CTLA4-антителом или его антигенсвязывающим фрагментом в количестве 25 мг,

при этом анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

(i) определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR), содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и области CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8; или

(ii) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 10, и легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 5;

и где анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

(iii) области CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 41, и области CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38; или

(iv) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 57, и легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 58.

32. Применение анти-CTLA4-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в количестве 25 мг для лечения рефрактерного к PD-1/PD-L1 рака в комбинации с анти-PD-1- антителом или его антигенсвязывающим фрагментом в количестве 400 мг,

при этом анти-PD-1-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

(i) определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR), содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и области CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 6, 7 и 8; или

(ii) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 10, и легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 5;

и где анти-CTLA4-антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

(iii) области CDR легкой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 39, 40 и 41, и области CDR тяжелой цепи, содержащие последовательности аминокислот, представленные в SEQ ID NO: 36, 37 и 38; или

(iv) тяжелую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 57, и легкую цепь, содержащую последовательность аминокислот, представленную в SEQ ID NO: 58.