Способ лечения черепно-мозговой травмы и средство для его осуществления Российский патент 2024 года по МПК A61K38/17 A61P25/00 

Изобретение относится к медицине, в частности экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для создания фармацевтических композиций и лекарственных форм, предназначенных для лечения черепно-мозговой травмы.

Тема лечения черепно-мозговой травмы (ЧМТ) в настоящее время является весьма актуальной задачей современной медицины. Это обусловлено крайне низким арсеналом фармакологических средств лечения этого вида травм, особенно с учетом их патофизиологических особенностей. В России частота ЧМТ составляет примерно 4 случая на 1000 населения или 400 тыс. пострадавших в год. Около 10% из них погибают и еще столько же становятся инвалидами. По оценке разных авторов ЧМТ является наиболее частой причиной смерти и тяжелой инвалидности в группе лиц не старше 35 лет. При этом мужчины получают ЧМТ в 2-3 раза чаще, чем женщины. Наиболее частой причиной ЧМТ являются дорожно-транспортные происшествия. Второй наиболее значительной причиной ЧМТ (от 20% до 30%) являются падения, особенно среди молодых и пожилых лиц. Наибольший риск ЧМТ отмечается в возрасте от 15 до 24 лет и после 70 лет, причем у последних ЧМТ связана в основном с падениями, производственными, спортивными и бытовыми травмами. В патогенезе ЧМТ ведущую роль играют нарушения основных нейродинамических процессов в центральной нервной системе, обуславливающие сосудистые, ликвородинамические и эндокринно-гуморальные нарушения. Реакция сосудистой системы мозга проявляются распространенным спазмом сосудов с последующей гиперемией мозга и венозным застоем. Расстройства циркуляции ликвора связаны с развитием ликворной гипертензии, нарушениями проницаемости гематоэнцефалического барьера. Ослабление регуляторных функций гипоталамо-гипофизарной системы приводит к нарушениям гормонального баланса в организме, расстройствам водного и солевого обмена, нарушениям кровообращения с развитием гипоксии головного мозга и явлений отека-набухания мозговой ткани. В настоящее время ЧМТ является также доминирующей травмой при военных конфликтах в результате минно-взрывных контузий. Очевидно, что все виды ЧМТ в зависимости от степени тяжести имеют свою специфику, но с точки зрения медикаментозного лечения они очень близки ввиду весьма ограниченного арсенала медикаментозных средств. Из фармакологических средств лечения ЧМТ в основном используют диуретики, ингибиторы кальциевых каналов (нифедипин), вазодилятаторы и гипотензивные препараты (циннаризин, кавинтон и ингибиторы ангиотензин конвертирующего фермента и его сосудитсых рецепторов), транквилизаторы (реланиум, седуксен) и ноотропные препараты (ноотропил, фенотропил), нестероидные (кетопрофен) и стероидные (дексаметазон) противовоспалительные средства. В основном цель медикаментозной терапии при ЧМТ, независимо от степени тяжести сводится к снижению черепно-мозгового давления и восстановлению мозговой гемодинамики, купированию воспалительной реакции для устранения явлений гипоксии мозга.

В патенте RU 2477150 С2, опубл. 10.03.2013, Бюл. №7 описан способ лечения больных с черепно-мозговой травмой на фоне гипертензионного синдрома в острый период. Для этого осуществляют забор крови пациента с последующим выделением из нее 50 мл эритроцитов. Эритроциты насыщают 1 мл дексаметазона и возвращают в кровеносную систему пациента. Процедуру проводят 1 раз в день с интервалом в 2-3 дня. Курс лечения составляет 5 процедур. Способ позволяет сократить сроки лечения данной категории пациентов за счет наиболее полноценной доставки лекарственного препарата, обеспечиваемой насыщением им эритроцитов пациента. Недостатком предложенного способа является сложность его выполнения и большое количество побочных эффектов от применения дексаметазона.

В патенте RU 2309745 С2, опубл. 10.11.2007, Бюл. №31 для лечения ЧМТ предложено использовать средство, оказывающее комплексное антиишемическое, антигипоксическое и противосудорожное действие. В качестве такого средства используют зопиклон, который является «небензодиазепиновым» агонистом бензодиазепиновых рецепторов. Показано, что в первые три дня посттравматического периода зопиклон на 24,9-42,6% (против вазодилататора нимодипина или против антигипоксанта натрия оксибутирата) повышал устойчивость головного мозга при травме к ишемии, гипоксии, гиперкапнии и судорогам. Основным недостатком зопиклона является его пробочное действие, связанное с седативным действием и развитие к нему лекарственной зависимости.

Для лечения сочетанной черепно-мозговой травмой с целью компенсации посттравматической анемии, используют эритропоэтин. Так в патенте RU 2446834 С2, опубл. 10.04.2012, Бюл. №10 описан способ лечения пострадавших с тяжелой сочетанной черепно-мозговой травмой (ЧМТ). Для этого пострадавшему проводят стандартную общепринятую интенсивную терапию. Дополнительно внутривенно струйно вводят препарат эпокрин (эритропоэтин). В первые сутки посттравматического периода эпокрин в дозе 10000 ME вводят однократно. Во вторые сутки посттравматического периода в зависимости от степени тяжести травмы и угрозы летального исхода эпокрин вводят в дозе 10000-20000 ME. В третьи и четвертые сутки эпокрин вводят в дозе 10000 ME. На пятые сутки посттравматического периода эпокрин вводят в дозе 5000-10000 ME. Разработанный режим введения эпокрина, который включен в интенсивную терапию больных с тяжелой сочетанной ЧМТ, позволяет повысить эффективность лечения, уменьшить летальность и число случаев возникновения осложнений. Основным недостатком предложенного способа является его узкая патофизиологическая направленность, в частности, способ нацелен только на компенсацию посттравматической анемии и никоим образом не влияет на воспалительные и нейро-дегенеративные процессы в мозге, возникшие после ЧМТ. В результате его эффективность недостаточна для лечения ЧМТ, а достаточна только для компенсации посттравматической анемии.

В патенте RU 2406506 С1, опубл. 20.12.2010, Бюл. №35 приводится фармацевтическая композиция холин альфосцерата в форме раствора для инъекций (холитилин), обладающая ноотропной активностью и холиномиметическим действием, способ лечения/профилактики заболеваний ЦНС и последствий черепно-мозговых травм. Фармацевтическая композиция содержит в качестве активного ингредиента холина альфосцерат в терапевтически эффективном количестве и в качестве фармацевтически приемлемого носителя - повидон (пласдон или коллидон) в количестве 0,2-0,8 мас. % в пересчете на 100% всей композиции. Фармацевтическая композиция по изобретению используется для лечения или профилактики заболеваний ЦНС и последствий черепно-мозговых травм. Основным недостатком фармацевтической композиции являются побочные эффекты, связанные с холиномиметическим действием холелитина такие как: тошнота, боль в животе и перманентная спутанность сознания.

В патенте RU 2554502 С9, опубл. 27.06.2015, Бюл. №18 приводятся данные об эффективности применения]Ч-(2-адамантил)-гексаметиленимина гидрохлорида (гимантана) в качестве средства для лечения нарушений мозгового кровообращения и травм головного мозга. Установлена способность гимантана при его введении через 3,5 часа после моделирования гематомы у крыс и последующем введении в течение 4 дней снижать смертность животных и улучшать когнитивные и моторные показатели, что свидетельствует о наличии у него нейропротекторного потенциала на модели интрацеребральной посттравматической гематомы. Технический результат состоит в реализации заявленного назначения: показано, что гимантан в дозе 5 мг/кг при внутривенном введении вызывал увеличение мозгового кровотока в коре головного мозга крыс после ишемического поражения мозга, не изменяя при этом уровня артериального давления. Препарат не оказывал значимого влияния на кровоснабжение мозга интактных животных и не вызывал изменений частоты сердечных сокращений и частоты дыхания.

Все производные адамантана обладают большим количеством побочных эффектов, среди которых наиболее часто встречаются: бессонница, психомоторное возбуждение, параноидальный экзогенный психоз, сопровождаемый зрительными галлюцинациями (у предрасположенных пациентов пожилого возраста), головокружение, снижение остроты зрения.

В патенте RU 2414901 С2, опубл. 27.03.2011, Бюл. №9 описано средство, оказывающее нейропротекторное действие в остром периоде черепно-мозговой травмы. В качестве такого средства предложено применение известного антиконвульсанта ламотриджина (другие названия вещества - ламиктал, ламолеп) в качестве средства, предупреждающего ишемические и гипоксические расстройства в остром периоде черепно-мозговой травмы. Показано предупреждение вторичных расстройств функций мозга вследствие ишемии, гипоксии с гиперкапнией, гемической гипоксии с одновременным облегчением восстановления нервно-психического статуса. Ламотриджин на 24,9-42,6% повышает устойчивость мозга к ведущим факторам его вторичного повреждения и увеличивает продолжительность жизни мышей в посттравматический период на 109,6%. Недостатком предложенного средства является большое количество побочных эффектов со стороны центральной нервной системы, печени и системы кроветворения. Близкое вышеописанному по фармакологической группе лекарственное средство предложено использовать в патенте RU 2318501 С2, опубл. 10.03.2008, Бюл. №7. В качестве такого средства предложено использовать адедипрол (вольпроат натрия), которое обладает многофакторным нейропротекторным и ноотропным действием при черепно-мозговой травме. Впервые обнаружен высокий защитный противосудорожный индекс вальпроата натрия в посттравматический период при больших судорожных припадках в случае его назначения со 2 суток после травмы. Курсовое применение препарата не только восстанавливает скорость обучения травмированных животных до уровня интактных, но и стимулирует приобретение поведенческих адаптивных ответов, в том числе отсроченное воспроизведение адаптивных реакций (метод оценки состояния мнестических функций). Основным недостатком заявленного средства также является большое количество побочных эффектов со стороны центральной нервной системы и системы кроветворения, препарат обладает гепатотоксичностью.

В патенте RU 2766785 С1, опубл. 15.03.2022, Бюл. №8 описывается способ коррекции патологии 2-амино-5-этил-1,3,4-тиодиазолия-И-ацетил-аминоэтаноатом при травматическом повреждении головного мозга. Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии. Способ коррекции неврологического дефицита при травматическом повреждении головного мозга включает моделирование черепно-мозговой травмы у крыс свободным падением груза массой 155 грамм с высоты 0,6 м. Для коррекции патологии вводят внутрижелудочно через зонд 2-амино-5-этил-1,3,4-тиодиазолия-N-ацетил-аминоэтаноат, курсом 3-е суток, в дозе 50 мг/кг, однократно, первый раз за 30 мин до моделирования патологии, с последующим введением в течение 2-х суток. Способ приводит к выраженной коррекции последствий травматического повреждения головного мозга. 2-амино-5-этил-1,3,4-тиодиазолия-N-ацетил-аминоэтаноат в дозе 50 мг/кг, введенный как до черепно-мозговой травмы, так и после позволяет снизить неврологическую симптоматику. Данные о такой эффективности 2-амино-5-этил-1,3,4-тиодиазолия-N-ацетил-аминоэтаноата также приведены в патентах: RU 2756325 С1, опубл. 29.09.2021, Бюл. №8, RU 2763012 С1, опубл. 24.12.2021, Бюл. №36, RU 2758433 С1, опубл. 28.12.2021, Бюл. №31, предположительно обладающего антиоксидантной и антигипоксической активностью и блокирующем активацию свободнорадикальных процессов, а также перекисного окисления липидов клеточных мембран, при острых нарушениях регионального и общего кровообращения.

В патенте RU 2252023 С2 (прототипе), опубл. 20.05.2005, Бюл. №14 для лечения черепно-мозговой травмы предложено сразу после травмы внутривенное капельное введение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината (мексидол) по 200 мг 2 раза в сутки при тяжелой степени и 200 мг 1 раз в сутки при средней и легкой степени травмы. Способ обеспечивает детоксикационный эффект в остром периоде ЧМТ за счет впервые установленного антитоксического действия препарата - ускорения распада и выведения из цереброспинальной жидкости токсических метаболитов. Мексидол является антиоксидантом, оказывающим антигипоксическое, мембранопротекторное, ноотропное, противосудорожное и анксиолитическое действие. Мексидол является ингибитором свободно-радикальных процессов, мембранопротектором, обладающим антигипоксическим, стресс-протективным, ноотропным, противосудорожным и анксиолитическим действием. Препарат повышает резистентность организма к воздействию различных повреждающих факторов (шок, гипоксия и ишемия, нарушения мозгового кровообращения, интоксикация алкоголем и антипсихотическими средствами /нейролептиками/). Механизм действия препарата Мексидол® обусловлен его антиоксидантным, антигипоксантным и мембранопротекторным действием. Препарат ингибирует перекисное окисление липидов, повышает активность супероксиддисмутазы, повышает соотношение липид-белок, уменьшает вязкость мембраны, увеличивает ее текучесть. Мексидол модулирует активность мембраносвязанных ферментов (кальцийнезависимой фосфодиэстеразы, аденилатциклазы, ацетилхолинэстеразы), рецепторных комплексов (бензодиазепинового, ГАМК, ацетилхолинового), что усиливает их способность связывания с лигандами, способствует сохранению структурно-функциональной организации биомембран, транспорта нейромедиаторов и улучшению синаптической передачи. Мексидол повышает содержание в головном мозге дофамина. Вызывает усиление компенсаторной активации аэробного гликолиза и снижение степени угнетения окислительных процессов в цикле Кребса в условиях гипоксии с увеличением содержания АТФ и креатинфосфата, активацию энергосинтезирующих функций митохондрий, стабилизацию клеточных мембран. Препарат улучшает метаболизм и кровоснабжение головного мозга, улучшает микроциркуляцию и реологические свойства крови, уменьшает агрегацию тромбоцитов. Стабилизирует мембранные структуры клеток крови (эритроцитов и тромбоцитов) при гемолизе. Обладает гиполипидемическим действием, уменьшает содержание общего холестерина и ЛПНП. Антистрессорное действие проявляется в нормализации постстрессового поведения, соматовегетативных нарушений, восстановлении циклов "сон-бодрствование", нарушенных процессов обучения и памяти, снижении дистрофических и морфологических изменений в различных структурах головного мозга. Основным недостатком Мексидола является его сравнительно невысокая эффективность при черепно-мозговой травме.

В последние годы все большее внимание привлекают нативные и синтетические аполипопротеины. Аполипопротеины являются структурными компонентами липопротеинов сыворотки крови, выполняющих важные транспортные и регуляторные функции в организме. Преимуществом их применения в качестве лекарственных средств является их природное происхождение, т.к. они не являются чужеродными для иммунной системы организма.

В статье Kay A.D. et al. при изучении тяжелых черепно-мозговых травм пациентов обнаружена значительная потеря апоЕ-содержащих липопротеинов из спинномозговой жидкости и существенное увеличение холестерина, что позволило предложить концепцию тесной связи апоЕ и метаболизма холестерина в контексте острого повреждения головного мозга и необходимость лечения, направленного на транспорт липидов в ЦНС для прорастания нейронов и синаптогенеза, однако выдвинутая концепция не была проверена авторами на практике [Kay A.D. et al. Remodeling of cerebrospinal fluid lipoprotein particles after human traumatic brain injury // J Neurotrauma. 2003. 20(8):717-723].

Недавние исследования показали, что аполипопротеин A-I (АпоА-I), основная белковая составляющая частиц липопротеинов высокой плотности, играет решающую роль в сохранении целостности сосудов головного мозга и снижении риска болезни Альцгеймера. При внутривенном введении меченого радиоактивным йодом АпоА-I (¹²⁵I-АпоА-I) крысам дикого типа показали наличие ¹²⁵I-АпоА-I в различных отделах головного мозга, что свидетельствует о преодолении гематоэнцефалического барьера, в том числе путем холестерин-опосредованного эндоцитоз в клетки трансформированного эндотелия микрососудов головного мозга человека, трансцитоза через эндотелий [Zhou A.L. et al. Apolipoprotein A-I Crosses the Blood-Brain Barrier through Clathrin-Independent and Cholesterol-Mediated Endocytosis // J. Pharmacol. Exp.Ther. 2019. 369:481-488].

В обзоре Sengupta M.B., Mukhopadhyay D. обращено внимание на то, что роль АпоА-I возрастает во вторичной фазе травматического повреждения спинного мозга. Предполагается, что АпоА-I все больше экспрессируется и секретируется как отсроченный ответ на повреждение нейронов, и это механизм самозащиты поврежденной системы [Sengupta М.В., Mukhopadhyay D. Possible role of apolipoprotein Al in healing and cell death after neuronal injury // Front Biosci (Elite Ed). 2016. 8(3):460-477]. Однако в обзоре не рассматривается применение АпоА-I в качестве средства лечения черепно-мозговой травмы.

В более детальном исследовании Li J. et al. показано, что после травмы спинного мозга большое количество макрофагов крови проникает в место поражения и фагоцитирует остатки миелина, превращаясь в пенистые макрофаги, что приводит к хроническому воспалению. Препарат D-4F, пептидомиметик аполипопротеина A-I, состоящий из D-аминокислот, известный ранее как средство, способствующее липидному метаболизму пенистых макрофагов при атеросклерозе, изучали в качестве средства нейропротекции при травме спинного мозга. Установлено, что D-4F может способствовать удалению остатков миелина, уменьшать образование пенистых макрофагов в очаге поражения и способствовать нейропротекции и восстановлению двигательной функции после травмы спинного мозга. Сделано предположением, что эти полезные функции D-4F могут быть связаны с его способностью усиливать экспрессию АТФ-связывающего кассетного транспортера Al (АВСА1), основного переносчика, который опосредует отток липидов в пенистых макрофагах, поскольку ингибирование активности АВСА1 может обратить вспять эффект D-4F in vitro. Сделано заключение, что D-4F может быть многообещающим кандидатом для лечения травмы спинного мозга, способствуя клиренсу миелиновых остатков пенистыми макрофагами через путь ABCAl[Li J. et al. D-4F, an apolipoprotein A-I mimetic, promotes the clearance of myelin debris and the reduction of foamy macrophages after spinal cord injury // Bioengineered. 2022; 13(5): 11794-11809].

Предложен нанокомплекс для направленной репарации сосудисто-нервного поражения, включающий липид, аполипопротеин и пептид-мишень, который при диабетической энцефалопатии способен преимущественно целенаправленно связываться с цереброваскулярным эндотелием посредством связывания пептида-мишени, чтобы восстанавливать эндотелиальные клетки сосудов, способствовать удалению бляшек Ар вблизи кровеносных сосудов и восстанавливать компоненты цереброваскулярной и нейроваскулярной единиц, таких как клетки микроглии, астроциты и нейроны. В качестве апопротеинов в состав нанокомплекса могут быть включены один или более апопротеинов из группы: АпоЕ, АпоА-I, АпоА-II, and АпоС-I. Нанокомплекс снижает когнитивные нарушения за счет восстановления цереброваскулярных функций и мозгового кровотока при диабетической энцефалопатии, болезни Альцгеймера. Не изучено его применение при черепно-мозговой травме [WO 2021089053 A1 NANO COMPLEX FOR TARGETED REPAIRING OF NEUROVASCULAR LESION, AND PREPARATION AND USE THEREOF].

В статье Yan_Ji-G. et al. показано применение 4F - миметика аполипопротеина A-I для лечения и профилактики черепно-мозговой травмы, вызванной вибрационной болезнью, у крыс, подвергнутых воздействию вибрации в течение 8 недель. Установлено, что 4F оказывает 5 основных профилактических эффектов: увеличение расширения сосудов и уменьшение повреждения эндотелия; увеличение концентрации N0 в крови и снижение супероксида для предотвращения повреждения нейронов; увеличение липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), что улучшает восстановление эндотелия; защита миелина нервных волокон, что может быть связано с увеличением ЛПВП; уменьшение вторичного воспаления, отека и внутриневрального давления, тем самым предотвращая атрофию нейронов и апоптоз [Yan Ji-G. et al. Cumulative Brain Injury from Motor Vehicle-Induced Whole-Body Vibration and Prevention by Human Apolipoprotein A-I Molecule Mimetic (4F) Peptide (an Apo A-I Mimetic) // J Stroke Cerebrovasc Dis. 2015. 24(12): 2759-2773]. Однако черепно-мозговая травма при вибрационной болезни является следствием длительного многократного воздействия вибрации на голову. Не изучено применение 4F - миметика аполипопротеина A-I для лечения черепно-мозговых травм при однократном воздействии травмирующего фактора, например, при контузии.

Технической проблемой настоящего изобретения является расширение арсенала лечебных средств для лечения черепно-мозговой травмы, являющейся следствием однократного воздействии травмирующего фактора (контузии).

Поставленная техническая проблема решается применением аполипопротеина A-I человека или его функционально значимых фрагментов для лечения черепно-мозговой травмы, являющейся следствием однократного воздействии травмирующего фактора (контузии).

Техническим результатом является улучшение локомоторной активности, и когнитивных функций, снижение морфологических нарушений в структуре тканей головного мозга субъекта.

Терминология

Аполипопротеин A-I (АпоА-I) - нативный (природный) аполипопротеин плазмы крови, входящий в состав липопротеинов высокой плотности (ЛПВП).

Контузия головного мозга, или ушиб мозга - это повреждение в виде макроструктурной деструкции вещества мозга, чаще с геморрагическим компонентом, наступающей в момент воздействия травмирующего агента. Различают ушибы легкой, средней и тяжелой степени.

Рекомбинантный АпоА-I - белок, характеризующийся аминокислотной последовательностью природного АпоА-I, полученный генно-инженерным способом путем конструирования рекомбинантной ДНК, обеспечивающей в составе плазмидного вектора экспрессию синтетического гена, включающего нуклеотидную последовательность, кодирующую АпоА-I человека, в клетках бактерий, млекопитающих или дрожжей, которые могут использоваться как продуценты АпоА-I.

Терапевтически эффективное количество - это доза заявленного средства при введении субъекту, достаточная для получения заявленного технического результата, направленного на лечение черепно-мозговой травмы.

Фармацевтически приемлемый носитель означает, что носитель должен являться совместимым с другими ингредиентами композиции и не наносить вреда его реципиенту, то есть быть нетоксичным для клеток или млекопитающих в тех дозах и концентрациях, в которых его применяют.

Функционально значимый фрагмент - фрагмент полной аминокислотной последовательности АпоА-I человека (аминокислотные остатки №1-243), обладающий функциональной автономией и функциональной активностью, обеспечивающей в составе заявленного средства получение заявленных в изобретении технических результатов.

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) - комплекс контактных повреждения черепа, вещества головного мозга и его оболочек, сосудов и/или черепно-мозговых нервов, сопровождающиеся клинической симптоматикой и в большинстве случаев морфологическими изменениями при наличии четкого травматического анамнеза, имеющих единый механизм и давность образования.

Раскрытие сущности изобретения

Изобретение относится к средству для лечения черепно-мозговой травмы, включающее АпоА-I человека (АпоА-I) или функционально значимый фрагмент. АпоА-1 человека имеет аминокислотную последовательность размером 243 а.о. с молекулярной массой 28,5 кДа, SEQ ID NO 1 (аминокислотные остатки 1-243).

В одном варианте осуществления указанное средство включает функционально значимый фрагмент АпоА-I человека.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой укороченную с N-конца аминокислотную последовательность АпоА-I человека.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой аминокислотную последовательность АпоА-I человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка (аминокислотные остатки 3-243).

В одном варианте осуществления указанное средство составлено в виде фармацевтической композиции, включающей АпоА-I человека или его функционально значимый фрагмент, и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель представляет собой воду для инъекций или физиологический раствор.

Изобретение также относится к применению вышеуказанного средства для лечения черепно-мозговой травмы.

В одном варианте осуществления вышеуказанное средство включает функционально значимый фрагмент АпоА-I человека.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой укороченную с N-конца аминокислотную последовательность АпоА-I человека.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой аминокислотную последовательность АпоА-I человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка (аминокислотные остатки 3-243).

В одном варианте осуществления указанное средство составлено в виде фармацевтической композиции, включающей АпоА-I человека или его функционально значимый фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель представляет собой воду для инъекций или физиологический раствор.

Изобретение также относится к способу лечения черепно-мозговой травмы.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой укороченную с N-конца аминокислотную последовательность АпоА-I человека.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой аминокислотную последовательность АпоА-I человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка (аминокислотные остатки 3-243).

В одном варианте осуществления указанное средство составлено в виде фармацевтической композиции, включающей АпоА-I человека или его функционально значимый фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель представляет собой воду для инъекций или физиологический раствор. В одном варианте осуществления введение вышеуказанного средства осуществляют местно или парентерально.

В одном варианте осуществления парентеральное введение осуществляют внутривенно или внутримышечно.

В одном варианте осуществления местное введение осуществляют подкожно.

Субъектом с признаками черепно-мозговой травмы, является млекопитающее, в частности, человек.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Морфологические изменения коры головного мозга мышей через 5 недель после моделирования черепно-мозговой травмы. Ув. 200.

Примечание: а - нарушение цитоархитектоники, выраженная деструкция наружного зернистого слоя; 6 - нормо- и гиперхромные нейроны в наружном зернистом слое; в - формирование крупных очагов нейронофагии, их перемещение под мягкую мозговую оболочку; г - преобладание гиперхромных нейронов в наружном зернистом и пирамидном слоях, а, 6, в - окраска гематоксилином и эозином; г - окраска толуидиновым синим.

Фиг. 2. Морфологические изменения коры головного мозга мышей через 5 недель после моделирования черепно-мозговой травмы и еженедельного введения рекомбинантного aпoA1.

Примечание: а - дезинтеграция наружного зернистого слоя; 6 - диффузная инфильтрация наружного зернистого слоя клетками микроглии; в - формирование крупного очага нейронофагии под мягкой мозговой оболочкой; г - крупный очаг нейронофагии. а, г - окраска толуидиновым синим; 6, в - окраска гематоксилином и эозином, а, 6, г - ув. 200; в - ув. 400.

Осуществление изобретения

Изобретение относится к средству для лечения черепно-мозговой травмы и включает нативный или рекомбинантный АпоА-I человека с аминокислотной последовательностью размером 243 а.о., молекулярной массой 28,5 кДа или его функционально значимый фрагмент.

В одном варианте осуществления указанное средство включает функционально значимый фрагмент АпоА-I человека.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой укороченную с N-конца аминокислотную последовательность АпоА-I человека (SEQ ID NO 1, аминокислотные остатки 1-243, АпоА-I-1-243), обладающую функциональной автономией и функциональной активностью, обеспечивающей в составе заявленного средства получение заявленных в изобретении технических результатов.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой аминокислотную последовательность АпоА-I человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка, размером 241 а.о. с молекулярной массой 28,3 кДа (SEQ ID NO 2, аминокислотные остатки 3-243, АпоА-I-3-243).

Функционально значимый фрагмент АпоА-I человека может быть получен с помощью методов генной инженерии путем конструирования рекомбинантной ДНК, обеспечивающей в составе плазмидного вектора экспрессию в бактериальной или дрожжевой или иной клетке синтетического гена, имеющего в своем составе нуклеотидную последовательность, кодирующую функционально значимый фрагмент АпоА-I человека, с последующим выделением синтезированного в клетке рекомбинантного белка, кодируемого нуклеотидной последовательностью синтетического гена, и получением на его основе функционально значимого фрагмента АпоА-I человека известными для специалиста методами, но не ограничивается указанным генно-инженерным методом. Функционально значимый фрагмент АпоА-I человека, имеющий аминокислотную последовательность АпоА-I-1-243 человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка (rАпоА-I-3-243) получали генно-инженерным способом путем клонирования синтетического гена, имеющего в своем составе нуклеотидную последовательность гена АпоА-I-1-243 человека, в клетках Е. coli, с последующим выделением целевого белка и его кислотным гидролизом для получения rАпоА-I-3-243, как описано в патенте согласно патенту РФ № 2573930.

В одном варианте осуществления вышеуказанное средство составлено в виде фармацевтической композиции, включающей АпоА-I-1-243 человека или rАпоА-I-1-243 или его функционально значимый фрагмент, и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель представляет собой воду для инъекций или физиологический раствор

В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция включает rАпоА-I-3-243 человека и воду для инъекций.

Изобретение также относится к применению АпоА-I-1-243 человека или rАпоА-I-1-243 человека или его функционально значимого фрагмента для лечения черепно-мозговой травмы.

В одном варианте осуществления указанное средство включает функционально значимый фрагмент АпоА-I человека.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой укороченную с N-конца аминокислотную последовательность АпоА-I человека (SEQ ID NO 1, аминокислотные остатки 1-243, АпоА-I-1-243), обладающую функциональной автономией и функциональной активностью, обеспечивающей в составе заявленного средства получение заявленных в изобретении технических результатов.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-1 человека имеет последовательность, представляющую собой аминокислотную последовательность АпоА-I человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка (SEQ ID NO 2, аминокислотные остатки 3-243, АпоА-I-3-243).

В одном варианте осуществления вышеуказанное средство составлено в виде фармацевтической композиции, включающей АпоА-i-1-243 человека или rАпоА-I-1-243 или его функционально значимый фрагмент, и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель представляет собой воду для инъекций или физиологический раствор

В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция включает rАпоА-I-3-243 человека и воду для инъекций.

Изобретение также относится к способу лечения черепно-мозговой травмы.

В одном варианте осуществления указанное средство включает функционально значимый фрагмент АпоА-I человека.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой укороченную с N-конца аминокислотную последовательность АпоА-I человека (SEQ ID NO 1, аминокислотные остатки 1-243, АпоА-I-1-243), обладающую функциональной автономией и функциональной активностью, обеспечивающей в составе заявленного средства получение заявленных в изобретении технических результатов.

В одном варианте осуществления функционально значимый фрагмент АпоА-I человека имеет последовательность, представляющую собой аминокислотную последовательность АпоА-I человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка (SEQ ID NO 2, аминокислотные остатки 3-243, АпоА-I-3-243).

В одном варианте осуществления вышеуказанное средство составлено в виде фармацевтической композиции, включающей АпоА-I-1-243 человека или rАпоА-I-1-243 или его функционально значимый фрагмент, и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель представляет собой воду для инъекций или физиологический раствор

В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция включает rАпоА-I-3-243 человека и воду для инъекций.

В одном варианте осуществления введение заявленного средства осуществляют местно или парентерально.

В одном варианте осуществления парентеральное введение осуществляют внутривенно или внутримышечно.

В одном варианте осуществления местное введение осуществляют подкожно.

Продолжительность введения и терапевтически эффективное количество вводимого заявленного средства может широко варьироваться в зависимости от множества факторов, включая выраженность черепно-мозговой травмы, параметров субъекта, включая размер, вес, возраст, и другие факторы, хорошо известные специалисту в данной области техники.

Субъектом с признаками черепно-мозговой травмы, является млекопитающее, в частности, человек.

Нативный АпоА-I человека является компонентном липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) плазмы крови.

Нативный АпоА-I человека SEQ ID NO 1 (аминокислотные остатки 1-243, АпоА-I-1-243) получали путем выделения ЛПВП из плазмы крови человека с помощью изоплотностного ультрацентрифугирования в растворе КBr [Mills G.L. et al. Guidebook to Lipoprotein Techniques. Edited by R. H. Burden and P. H. van Knippenberg. - Amsterdam:

Elsevier, 2000. - 475 p.] с последующими делипидированием ЛПВП [Cham В. Е., Knowlee В. R. J. Lipid. Res. - 1976. - Vol.17, No. 2. P. 176-181] и очисткой [Пыхтина М.Б. и др. Биофармацевтический журнал. - 2012. - Т. 4. - №6. - С 37-45].

Рекомбинантный АпоА-I человека SEQ ID NO 1 (аминокислотные остатки 1-243, rАпоА-I-1-243) получали с помощью методов генной инженерии путем конструирования рекомбинантной ДНК, обеспечивающей в составе плазмидного вектора экспрессию синтетического гена, включающего нуклеотидную последовательность, кодирующую химерный АпоА-I человека, в клетках E.coli, например, по патенту РФ № 2573930, либо в клетках метилотрофных дрожжей Pichia pastoris, например, по патенту РФ № 2605326] с последующим получением зрелого rАпоА-I-1-243 человека путем ферментативного гидролиза соответствующего химерного белка, но не ограничиваются указанными методами.

Функционально значимый фрагмент АпоА-I человека может быть получен с помощью методов генной инженерии путем конструирования рекомбинантной ДНК, обеспечивающей в составе плазмидного вектора экпрессию в бактериальной или дрожжевой или иной клетке синтетического гена, имеющего в своем составе нуклеотидную последовательность, кодирующую функционально значимый фрагмент АпоА-I человека, с последующим выделением синтезированного в клетке рекомбинантного белка, кодируемого нуклеотидной последовательностью синтетического гена, и получением на его основе функционально значимого фрагмента АпоА-I человека известными для специалиста методами, но не ограничиваются указанным генно-инженерным методом.

Функционально значимый фрагмент АпоА-I человека, имеющий аминокислотную последовательность АпоА-I-1-243 человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка (rАпоА-I-3-243) получали генно-инженерным способом путем клонирования синтетического гена, имеющего в своем составе нуклеотидную последовательность гена АпоА-1-1-243 человека, в клетках Е. coli, с последующим выделением целевого белка и его кислотным гидролизом для получения rАпоА-I-3-243, как описано в патенте согласно патенту РФ №2573930.

Примеры

Все примеры осуществления изобретения выполнены с применением функционально значимого фрагмента АпоА-I человека, имеющего аминокислотную последовательность АпоА-I-1-243 человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка (rАпоА-I-3-243).

Пример 1. Получение функционально значимого фрагмента АпоА-I человека rАпоА-I-3-243

Функционально значимый фрагмент АпоА-I человека, соответствующий аминокислотам 3-243 АпоА-I человека (SEQ ID NO 2) (далее - «rАпоА-I-3-243») получали генно-инженерным способом путем клонирования в составе плазмидного вектора рекомбинантной ДНК, включающей нуклеотидную последовательность, кодирующую химерный АпоА-I, и обеспечивающей его синтез в клетках E.coli; последующих выделения и очистки химерного АпоА-I. Для получения rАпоА-I-3-243 химерный белок АпоА-I подвергали кислотному гидролизу, как описано в патенте РФ №2573930. В частности, нуклеотидная последовательность рекомбинантной ДНК, включает с 5'-конца ATG-кодон, кодирующий метионин, затем (1) фрагмент ДНК, кодирующий 6 а.о. гистидина; (2) фрагмент ДНК, кодирующий 6 а.о. про-формы белка апоА-I человека; (3) фрагмент ДНК, кодирующий N-концевой фрагмент из 15 а.о. бычьей панкреатической РНКазы А; (2) фрагмент ДНК, кодирующий 6 а.о. про-формы белка апоА-I человека; (4) фрагмент ДНК, кодирующий сайт узнавания протеазы вируса табачной мозаики; (5) мутантный ген зрелого белка апоА-I-1-243 человека. Химерному белку АпоА-1 соответствует аминокислотная последовательность, кодируемая всеми последовательно указанными нуклеотидными последовательностями рекомбинантной ДНК, причем последовательность (2), представлена дважды, второй раз после последовательности (3).

Применение осуществляли в виде фармацевтической композиции, включающей функционально значимый фрагмент АпоА-I человека rАпоА-I-3-243, и фармацевтически приемлемый растворитель, в которой в качестве фармацевтически приемлемого растворителя применяли воду для инъекций.

Введение осуществляли подкожно.

Пример 2. Описание экспериментов

Описание линии мышей, использованных для экспериментального осуществления заявленного изобретения

Сравнительное исследование эффективности применения функционально значимого фрагмента АпоА-I человека rАпоА-I-3-243 проводили на аутбредных (нелинейных) лабораторных мышах ICR, которые являются наиболее часто используемыми исследовательскими объектами в области онкологии, токсикологии, тератология, при разработке вакцин, изучении старения и для общих целей.

В эксперимент отбирали мышей массой 27-30 граммов в возрасте четырех месяцев. Животных кормили обычной пищей, со свободным доступом к воде.

Были сформированы 4 группы экспериментальных животных:

К(-) - контрольная группа интактных здоровых мышей ICR, 10 особей);

К(+) - контрольная группа мышей с черепно-мозговой травмой (10 особей);

Опытная группа 1 - опытная группа мышей с черепно-мозговой травмой, которым вводили rАпоА-I-3-243 один раз в неделю в течение трех недель подкожно в область холки (10 особей).

Опытная группа 2 - группа сравнения мышей с черепно-мозговой травмой, которым один раз в неделю в течение трех недель подкожно вводили мексидол (10 особей).

Опытной группе 1 вводили rАпоА-I-3-243 в дозе 7 мг/кг массы тела, при этом rАпоА-I-3-243 вводили в составе фармацевтической композиции, в которой в качестве фармацевтически приемлемого носителя использовали воду для инъекций, при концентрации rАпоА-I-3-243 в растворе 1,2 мг/мл.

Опытной группе 2 вводили внутривенно мексидол в дозе 7 мг/кг массы тела.

Описание модели черепно-мозговой травмы

Для проведения сравнительных исследований моделировали черепно-мозговую травму (ЧМТ) легкой степени. Для этого использовали модель Marmarou [Marmarou А. А new model of diffuse brain injury in rats. Part I: Pathophysiology and biomechanics // J. neurosurgery, 1994, vol. 80, №. 2, pp. 291-300] в модификации для мышей M.J. Kanea и соавт.[Kanea М. A mouse model of human repetitive mild traumatic brain injury // J. Neuroscience Methods, 2012, vol. 203, Is. 1, pp. 41-49]. Для воспроизведения легкой ЧМТ на мышах весом 27-30 г. использовали груз диаметром 20 мм и весом 100 г при высоте падения 2,0 метра после удара по голове в резервуар высотой 23 см, на поролоновую подушку для смягчения. Для исключения сопротивления при ударе поверхность резервуара укрывали алюминиевой фольгой таким образом, чтобы она могла выдержать вес мыши. После удара по голове фольга легко разрывается, и животное с ускорением падает вниз. Ускорение и падение, вызванное ударом, всегда включает горизонтальное вращение тела мыши на 180°. Использованный метод моделирует наиболее распространенную форму черепно-мозговой травмы у людей. Существующие модели ЧМТ на животных вызывают очаговые тяжелые повреждения, в отличие от наблюдаемых при повторных и легких сотрясениях мозга, и лишь немногие из них приспособлены для повторного применения. Ключевым аспектом использованной в данном исследовании модели является нанесение удара по черепу не пристегнутой мыши, обеспечивающее быстрое ускорение свободно движущихся головы и туловища, важная характеристика, как известно, для сотрясения мозга у людей и фактор, который отсутствует у других существующих животных моделей ЧМТ. Данный метод не требует разреза кожи головы, установки защитных шлемов для черепа или хирургического вмешательства, и процедура может быть завершена за 1-2 минуты. Мыши не проявляют признаков судорог, паралича или нарушений поведения. Переломы черепа и внутричерепные кровотечения встречаются очень редко. Незначительные нарушения координации движений и двигательная гиперактивность со временем восстанавливаются. Гистологический анализ показывает легкую астроцитарную реактивность, отсутствие нарушения гематоэнцефалического барьера, отека и активации микроглии. Эта новая животная модель проста и экономична и облегчает характеристику нейробиологических и поведенческих последствий ЧМТ. Модель идеально подходит для высокопроизводительного скрининга потенциальных новых методов лечения легких сотрясений головного мозга, с которыми сталкиваются спортсмены и военнослужащие. [Kanea М. A mouse model of human repetitive mild traumatic brain injury // J. Neuroscience Methods, 2012, vol. 203, Is. 1, pp. 41-49].

Пример 3. Результаты исследования локомоторной активности и когнитивной функции мышей при черепно-мозговой травме

В таблице 1 представлено влияние rАпоА-I-3-243 и мексидола на показатели локомоторной активности и когнитивной функции в сравниваемых группах мышей через 3 недели после ЧМТ.

Как видно из таблицы 1 применение rАпоА-I-3-243 обеспечивает выраженный терапевтический эффект при нарастающих последствиях черепно-мозговой травмы даже при двукратном подкожном введении в дозе 7 мг/кг массы тела. В основном это касается восстановления нарушенных локомоторных функций, нарушений вестибулярного аппарата и когнитивной функции (центровые посещения, груминг, пристеночные стойки, заглядывания в норку). По этим показателям мексидол значительно уступает заявленному средству и в эквивалентной дозе практически не обладает терапевтическим действием. Доза rАпоА-I-3-243 7 мг/кг массы тела является экспериментально подобранной и оптимальной для коррекции последствий черепно-мозговой травмы в эксперименте in vivo, при дозах ниже 7 мг/кг массы тела терапевтическая эффективность заявленного средства снижается, а при дозах свыше 7 мг/кг массы тела увеличивается лишь незначительно.

Пример 4. Морфологические изменения коры головного мозга мышей при черепно-мозговой травме

Экспериментальные группы: 1-я - моделирование черепно-мозговой травмы, подкожное введение 1 раз в неделю в течении пяти недель физиологического раствора (К+); 2-я - моделирование черепно-мозговой травмы, подкожное введение 1 раз в неделю в течении пяти недель rАпоА-I-3-243 в дозе 7 мг/кг в виде водного раствора (вода для инъекций).

Проведены светооптическое исследование и количественная оценка нормо- и гиперхромных нейронов в молекулярном, наружном зернистом и пирамидном слоях коры головного мозга (в тестовой площади 239972,87 мкм²). Объем выборки составлял не менее 1000 клеток в неперекрывающихся полях зрения (не менее 5 полей зрения).

Гистологическое исследование препарата резецированного участка коры после его фиксации нейтральным формалином выполняли по стандартной методике с окраской гематоксилином и эозином окраска гематоксилином и толуидиновым синим. Для электронно-микроскопического исследования кусочки ткани резецированного участка коры размером 4-5 мм³ предварительно фиксировали в жидкости Карновского, а затем в 1% растворе четырехокиси осмия на 0,2 М какодилатном буфере. Обезвоживание спиртом и ацетоном, а также последующую заливку в аралдит проводили по стандартной методике. Ультратонкие срезы получали на ультратомах LKB III и Leica ULTRACUT ЕМ UC7 (Leica, Германия), контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Исследование проводили в электронных микроскопах JEM-100 В и JEM-1400 (фирмы «Jeol», Япония).

Морфологические изменения коры головного мозга в очаге поражения через 5 нед после черепно-мозговой травмы и еженедельного подкожного введения физиологического раствора характеризовались выраженными нарушениями цитоархитектоники, проявляющимися в деградации аксонов и дендритов нейронов и тотальной дезинтеграции межнейрональных ассоциаций (фиг. 1, а). В наружном зернистом слое нейроны уменьшены в размерах, полиморфны, очень тесно сгруппированы (фиг. 1, б). Вокруг нормохромных нейронов располагаются гиперхромные клетки, среди которых присутствуют клетки микроглии (фиг. 1, в). В пирамидном слое нейроны преимущественно гиперхромные (клетки-тени) с выраженным перицеллюлярным отеком (фиг. 1, г), разрозненно располагающиеся по всему слою; повсеместно встречаются округлые пустоты на месте погибших нейронов.

Отличительной особенностью реорганизации коры головного мозга при данной модели черепно-мозговой травмы было образование крупных очагов нейронофагии (площадь очагов варьировалась от 3400 до 21500 мкм²), которые располагались преимущественно под мягкой мозговой оболочкой (см. фиг. 1, в). Такие очаги состояли в основном из клеток микроглии; в центре некоторых очагов встречались единичные нейроны. Вокруг очагов нейронофагии располагались обширные бесклеточные зоны. Крупноочаговая нейронофагия при черепно-мозговой травме может представлять собой один из механизмов резорбции необратимо поврежденных нейронов с «выталкиванием» мононуклеарных инфильтратов наружу.

Капилляры и мелкие артерии немногочисленны, неравномерно полнокровны. Отмечается выраженный периваскулярный/перикапиллярный отек.

Общий характер структурных изменений коры головного мозга в очаге поражения через 5 нед. после черепно-мозговой травмы и еженедельного подкожного введения rАпоА-I-3-243 был таким же, как и в предыдущей группе, но отличался по выраженности. Отмечалась дезорганизация наружного зернистого и пирамидного слоев коры, которая заключалась, прежде всего, в выраженной деградации волокнистых структур, дезинтеграции нейронов и их хаотичном распределении в пределах слоев (рис. 2, а). В наружном зернистом слое усиливались процессы нейронофагии (рис. 2, б); клетки микроглии интенсивно (диффузно) инфильтрировали этот слой, образовывали вокруг нейронов скопления, на больших протяжениях замещали их. Так же, как и в предыдущей группе, формировали крупные очаги нейронофагии, которые перемещались под мягкую мозговую оболочку (рис. 2, в, г). В некоторых препаратах одновременно присутствовали от 2 до 4 таких очагов. В целом можно сказать, что процессы резорбции необратимо поврежденных нейронов в данной группе происходили более интенсивно (судя по большим скоплениям клеток микроглии), чем в группе без применения rАпоА-I-3-243. Этот процесс свидетельствует о начале организации, который заключается в формировании новообразованных капилляров по периферии зоны повреждения, активно запускается трансформация моноцитов и микроглиоцитов в клетки «зернистые шары», заполненные продуктами распада миелина. Таким образом, rАпоА-I-3-243 снижает вероятность запуска массивного некроза, который с вою очередь способствует прогрессирующему оттеку мозга и необратимым повреждениям функций отделом головного мозга.

По данным количественного анализа степенью хроматофилии цитоплазмы в группе rАпоА-I-3-243 установлено преобладание (на 63,4%, р<0,001) доли гиперхромных нейронов (преимущественно локализованных в пирамидном слое) над нормохромными, расположенными преимущественно в наружном зернистом слое (Табл. 2). В пирамидном слое наблюдались выраженные дегенеративные изменения пирамидных нейронов, сопровождавшиеся перицеллюлярным отеком. Однако доля гиперхромных нейронов у мышей группы была меньше на 37,3% (р<0,001) по сравнению с мышами, которым ежедневно подкожно вводился физиологический раствор (Табл. 2.). Этот показатель также может свидетельствовать о более интенсивной элиминации необратимо поврежденных нейронов из очага поражения. Такая элиминация поврежденных клеток происходит по пути апоптоза, или программированной клеточной гибели. Таким образом, rАпоА-I-3-243 обладает нейропротекторным действием, поскольку способствует гибели нейронов по пути апоптоза, а не некроза.

Несмотря на это сохранялись изменения цитоархитектоники, особенно заметные в наружном зернистом слое, в котором нейроны образовывали разрозненные скопления в виде цепочек и небольших групп клеток.

Выраженных нарушений гемодинамики в очаге поражения в этот срок эксперимента не выявлено, но следует отметить неравномерное капиллярное полнокровие и перикапиллярный отек.

Заключение. Качественный и количественный анализ трех слоев коры головного мозга мышей после черепно-мозговой травмы и корригирующего лечения с применением рекомбинантного rАпоА-I-3-243 (в дозе 7 мг/кг) свидетельствует о том, что при выбранном способе поражения головного мозга нарушения цитоархитектоники и дезинтеграции межнейрональных ассоциаций сохраняются в течение 5 недель. Наиболее выраженные структурные изменения по таким критериям, как нарушения цитоархитектоники и количество гиперхромных нейронов выявлены в группе животных, у которых не применялись никакие методы коррекции. Структурные изменения головного мозга у мышей, получавших в качестве лечебного воздействия рекомбинантный rАпоА-I-3-243 имели наиболее выраженные процессы нейронофагии, которые можно рассматривать как один из механизмов интенсивной элиминации необратимо поврежденных нейронов. rАпоА-I-3-243 снижает вероятность запуска массивного некроза, оказывает нейропротекторное действие.

Работы выполнены с использованием оборудования ЦКП ФИЦ ФТМ «Протеомный анализ», поддержанного финансированием Минобрнауки России (соглашение №075-15-2021-691) и ЦКП ФИЦ ФТМ «Спектрометрические измерения».

Изобретение относится к области медицины, а именно к применению средства, включающего функционально значимый фрагмент аполипопротеина А-I человека в качестве средства для лечения черепно-мозговой травмы. Применение средства, включающего функционально значимый фрагмент аполипопротеина А-I человека (rАпоА-I-3-243), имеющего аминокислотную последовательность АпоА-I-1-243 человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка, идентифицируемую как SEQ ID NO 1, в качестве средства для лечения черепно-мозговой травмы. Данное применение позволяет улучшить локомоторную активность и когнитивные функции, а также снизить морфологические нарушения в структуре тканей головного мозга субъекта. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 4 пр.

1. Применение средства, включающего функционально значимый фрагмент аполипопротеина А-I человека (rАпоА-I-3-243), имеющего аминокислотную последовательность АпоА-I-1-243 человека, укороченную с N-конца на 2 аминокислотных остатка, идентифицируемую как SEQ ID NO 1, в качестве средства для лечения черепно-мозговой травмы.

2. Применение по п.1, где указанное средство составлено в виде фармацевтической композиции, включающей эффективное количество rАпоА-I-3-243 и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Применение по п.2, где в качестве фармацевтически приемлемого носителя используют воду для инъекций или физиологический раствор.