Область техники

Настоящее изобретение относится к выделенным антителам к CD45RC человека или их связывающим фрагментам, к нуклеиновых кислотам и вектору экспрессии, их кодирующим, к композициям, их содержащим, и к их применению в качестве лекарственных препаратов, в том числе для профилактики и/или лечения связанных с CD45RC^high заболеваний (включая аутоиммунные заболевания, нежелательные иммунные ответы, моногенные заболевания и лимфому или рак), в частности, для предупреждения и/или лечения реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ).

Предшествующий уровень техники

CD45 (также известный как общий лейкоцитарный антиген (LCA), ЕС3.1.3.48, Т200, Ly5 и PTPRC) представляет собой первую и прототипную тирозиновую протеинфосфатазу рецепторного типа (RPTP). Его экспрессия ограничивается всеми ядросодержащими гематопоэтическими клетками, где он является одним из самых распространенных гликопротеинов клеточной поверхности, образуя почти 10 процентов клеточной поверхности, и, по оценкам, присутствует в плазматической мембране приблизительно в 25 мкМ (Trowbridge & Thomas, 1994. Annu Rev Immunol. 12:85-116; Hermiston et al., 2003. Annu Rev Immunol. 21:107-37; Holmes, 2006. Immunology. 117(2):145-55).

CD45 содержит внеклеточный домен, один трансмембранный домен и крупный цитоплазматический домен. Трансмембранный и цитоплазматический домены являются высококонсервативными у разных видов животных. В частности, цитоплазматический домен CD45 содержит два тандемных фосфатазных домена, из которых только проксимальный по отношению к мембране домен имеет ферментную активность (Desai et al., 1994. EMBO J. 13(17):4002-10). Функция второго, более С-концевого фосфатазного домена в CD45 остается точно не известной, хотя предполагается, что она может опосредованно участвовать в активности CD45 посредством стабилизации первого домена. Через этот цитоплазматический домен CD45 функционирует как центральный регулятор уровней фосфотирозина в гематопоэтических клетках, модулируя активность Src семейства тирозин-протеинкиназ (например, Lck в Т-клетках или Lyn, Fyn и Lck в В-клетках) (Palacios & Weiss, 2004. Oncogene. 23(48):7990-8000; Lowell, 2004. Mol Immunol. 41(6-7):631-43).

В отличие от трансмембранного и цитоплазматического доменов внеклеточный домен CD45 демонстрирует более высокий полиморфизм среди разных линий лейкоцитов. Действительно, этот внеклеточный домен является сильно гликозилированным и содержит три альтернативно сплайсированных экзона (4, 5 и 6 - которые кодируют детерминанты А, В и С, соответственно), которые характеризуются О-связанным гликозилированием и являются сиалилированными (Hermiston et al., 2003. Annu Rev Immunol. 21:107-37; Holmes, 2006. Immunology. 117(2): 145-55). Таким образом, посредством динамически-контролируемого альтернативного сплайсинга в дифференциации лейкоцитов и клеточной активации, что приводит к изменениям во внеклеточном домене молекулы, могут создаваться изоформы CD45, различающиеся размером, формой и зарядом (Hall et al., 1988. J Immunol. 141(8):2781-7; Lynch, 2004. Nat Rev Immunol. 4(12):931-40).

Самая большая изоформа CD45, содержащая все три альтернативно сплайсированных экзона, CD45RABC, имеет массу приблизительно 235 кДа, а самая маленькая изоформа без всех трех экзонов, CD45RO, имеет массу приблизительно 180 кДа. Возможны промежуточные изоформы, содержащие только два (CD45RAB, CD45RAC, CD45RBC) или только один (CD45RA, CD45RB, CD45RC) из трех экзонов.

При том, что функция разных изоформ CD45 не ясна, дифференциальная экспрессия этих изоформ была связана с уровнем активации Т-клеток и она обеспечивает диссоциацию наивных Т-клеток и Т-клеток памяти (Birkeland et al., 1989. Proc Natl Acad Sci USA. 86(17):6734-8). Например, CD45RA присутствует на периферических наивных зрелых CD4⁺ Т-клетках, a CD45RO экспрессируется на активированных и CD4⁺ Т-клетках памяти. CD45RABC экспрессируется на В-клетках и их предшественниках, на подгруппе дендритных клеток и других антигенпрезентирующих клетках. Эффекторные клетки памяти RA (Temra), подтип терминально-дифференцированных Т-клеток памяти, также реэкспрессируют маркер наивных Т-клеток CD45RA (Koch et al., 2008. Immun Ageing. 5:6). Что важно, такой профиль экспрессии изоформ является высококонсервативным у различных видов животных, что подчеркивает его функциональную роль и важность (Hermiston et al, 2003. Annu Rev Immunol. 21:107-37).

Профиль экспрессии изоформы CD45RC на CD4⁺ и CD8⁺ Т-клетках обеспечивает возможность дифференциации между функционально различающимися аллореактивными подгруппами Т-клеток, которые ведут себя по-разному в плане пролиферации и секреции цитокинов. Например, было показано, что у грызунов и CD4⁺ , и CD8⁺ Т-клетки с CD45RC^выс - сильные T_h1 эффекторные клетки, способствующие отторжению трансплантата и воспалению органов (Spickett et al., 1983. J Exp Med. 158(3):795-810; Xystrakis et al., 2004. Eur JImmunol. 34(2):408-17), а Т-клетки, экспрессирующие необнаруживаемые или низкие уровни CD45RC^низ/- - T_h2 и регуляторные Т-клетки, и они ингибируют отторжение аллотрансплантата, реакцию «трансплантат против хозяина» (РТПХ) и клеточно-опосредованные аутоиммунные заболевания (Xystrakis et al., 2004. Blood. 104(10):3294-30; Guillonneau et al., 2007. J Clin Invest. 117(4):1096-106; Powrie & Mason, 1990. J Exp Med. 172(6): 1701-8). У людей была обнаружена корреляция между высокой пропорцией CD45RC⁺ CD8⁺ Т-клеток до трансплантации и сниженной выживаемостью трансплантата у пациентов с трансплантацией почки (Ordonez et al., 2013. PLoS One. 8(7):e69791).

В связи с этим элиминация популяции Т-клеток с CD45RC^выс представляет собой многообещающий подход для индуцирования иммунной толерантности у человека и, следовательно, для предупреждения, подавления и/или лечения отторжения трансплантата (в частности, РТПХ) и аутоиммунных заболеваний.

РТПХ - серьезная причина смертности и заболеваемости у пациентов с трансплантацией стволовых клеток. Именно в ходе иммунореактивного процесса, опосредованного Т-клетками, клетки донора действуют против клеток реципиента. В настоящее время в основе профилактики РТПХ лежит иммуносуппрессия с помощью иммуномодулирующих препаратов, таких как кортикостероиды. Несмотря на то, что наблюдается определенный прогресс благодаря улучшению выживаемости с течением времени, кортикостероиды не предотвращают развитие РТПХ у высокой доли пациентов (менее 50% пациентов с острой РТПХ и 40-50% пациентов с хронической РТПХ в зависимости от первоначальной степени тяжести заболевания - Garnett et al., 2013. Ther Adv Hematol. 4(6):366-378), ассоциируются со значительной токсичностью, и многие из существующих в настоящее время терапий спасения ассоциируются с повышенной иммуносуппрессией и инфекционными осложнениями. Таким образом, остается неудовлетворенная потребность в разработке новых стратегий лечения для РТПХ с целью улучшения результатов лечения после трансплантации в долгосрочной перспективе.

Авторы настоящего изобретения ранее описывали, что истощение популяции Т-клеток с CD45RC^high может представлять собой потенциальную новую терапию в предупреждении или подавлении отторжения трансплантата посредством уменьшения популяции агрессивных эффекторных Т-клеток и В-клеток при увеличении популяции толерогенных регуляторных Т-клеток. Действительно, временное лечение с помощью mAb к CD45RC инициирует быстрый апоптоз Т-клеток с CD45RC^high с сохранением иммунитета памяти. Более того, авторы настоящего изобретения показали, что краткосрочная терапия с использованием антител к CD45RC обуславливает постоянную выживаемость аллотрансплантата без признаков хронического отторжения (Международный патент WO 2016016442; Picarda et al., 2017. JCI Insight. 2(3):e90088).

Авторы настоящего изобретения разработали новое моноклональное антитело, направленное против CD45RC человека. Это антитело конкурирует с антителами к CD45RC человека, в настоящее время имеющимися на рынке (например, клоном МТ2), демонстрируя сопоставимый профиль реактивности, однако со значительно более благоприятной цитотоксической активностью в отношении Т-клеток и при минимальной концентрации. Действительно, антитело к CD45RC человека по настоящему изобретению демонстрирует большую аффинность по сравнению с другими доступными в настоящее время антителами и, следовательно, имеет больший терапевтический эффект.

Интересен тот факт, что антитело по настоящему изобретению также может быть полезным в профилактике или лечении определенных моногенных заболеваний, при которых в патологии задействованы иммунные ответы. Моногенные заболевания вызываются дефектами единичных генов. Причиной более 4000 человеческих заболеваний являются такие дефекты, связанные с одним конкретным геном. До настоящего времени большинство вариантов лечения концентрируются на лечении симптомов таких заболеваний в попытке улучшить качество жизни пациента. Генная терапия - главная надежда для эффективного лечения заболеваний такого типа. Тем не менее, были обнаружены значительные препятствия во время разработки методов доставки генов к соответствующим клеткам, пораженным заболеванием, а также имеется тот факт, что иммунные ответы против трансгенного продукта или вектора ограничивают терапевтическую эффективность.

Среди моногенных заболеваний некоторые связаны с генами, задействованными в иммунной системе (например, первичные иммунодефицита Т- и/или В-клеток и синдром APECED), или с генами, не связанными с иммунными функциями, но дефицит которых ассоциируется с воспалением и/или иммунными реакциями [например, мышечная дистрофия Дюшенна (МДД)].

Синдром APECED, также известный как аутоиммунный полигландулярный синдром I типа (APS 1) - редкое мультиорганное аутосомно-рецессивное аутоиммунное заболевание, вызываемое мутациями в гене AIRE, транскрипционном регуляторе, который обеспечивает экспрессию ткане-рестриктированных антигенов (TRA) в медуллярных эпителиальных тимических клетках (mTEC) и уничтожение аутореактивных Т-клеток. Для человека было описано более 100 мутаций в гене AIRE, которые вызывают синдром APECED с распространенностью 1-9:1000000 (Orphanet, http://www.orpha.net). Клинический фенотип APECED обычно определяется присутствием 2 из 3 основных симптомов: гипопаратиреоз, недостаточность надпочечников (Аддисонова болезнь) и хронический кожно-слизистый кандидоз (ХКК). Это заболевание также ассоциируется со множеством аутоиммунных и эктодермальных характеристик, таких как диабет 1 типа, гипоплазия зубной эмали, витилиго, синдром преждевременного истощения яичников, кератит, пернициозная анемия, алопеция, экзокринный панкреатит, интерстициальная легочная болезнь, нефрит и другие нарушения.

МДД - моногенное заболевание, при котором мутации гена DMD, кодирующего белок дистрофии, приводят к тяжелой Х-сцепленной мышечной дистрофии, которая поражает все произвольно сокращающиеся мышцы, а также мышцы сердца и дыхательные мышцы на поздних стадиях. Иммунные ответы задействованы в патофизиологии заболевания у пациентов с МДД и мышей с мышечной дистрофией, сцепленной с Х-хромосомой (см. Rosenberg et al., 2015. Sci Transl Med. 7(299):299rv4). Стандартным лечением МДД являются кортикоиды, например, преднизолон. У мышей с мышечной дистрофией, сцепленной с Х-хромосомой, также применяли терапии, уменьшающие эффекторные иммунные ответы или воспаление, например, внутривенные иммуноглобулины, траниласт, индукторы гемоксигеназы-1, антагонист рецептора IL-1 и IL-2, с целью увеличения популяции регуляторных Т-клеток (Treg) (Villalta et al., 2014. Sci Transl Med. 6(258):258ra142; Rosenberg et al, 2015. Sci Transl Med. 7(299):299rv4). Тем не менее, несмотря на предложенные недавно многообещающие новые терапии, средняя продолжительность жизни пациентов с МДД до сих пор остается значительно низкой.

Авторы настоящего изобретения продемонстрировали то, что лечение крыс Dmd^-/- (Dmd^mdx) с использованием антитела к CD45RC, специфически истощающего популяцию клеток с CD45RC^high, улучшило мышечную силу (Ouisse et al., 2019. Front Immunol. In press). Они также продемонстрировали, что введение крысам Aire^-/- моноклонального антитела к CD45RC приводит к значительному истощению популяции Т-клеток с CD45RC^high и к устранению характеристик симптомов APECED (рукопись в работе; Международная патентная заявка WO 2019115791).

Таким образом, применение антитела по настоящему изобретению представляет собой перспективный подход к профилактике и/или лечению моногенных заболеваний, таких как МДД и APECED.

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к выделенному антителу к CD45RC человека или его связывающему фрагменту, при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 4, 5, 6, 8, 100, 116, 117, 118 и 119;и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 15 (SASSSVS-X₁₂-YMH) и 18 (RASSSVS-X₁₂-YMH), где Х₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

(ii) VL-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

В одном варианте осуществления указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 4 и 5; и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, где X₁₂ отсутствует;

(ii) VL-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

В одном варианте осуществления указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностью 4; и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, где Х₁₂ отсутствует;

(ii) VL-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

В одном варианте осуществления указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 4, 6 и 100; и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 15 и 18, где X₁₂ отсутствует;

(ii) VL-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

В одном варианте осуществления указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

1) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 61 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 81;

2) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 62 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 82;

3) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 62 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 83;

4) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 62 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 84;

5) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 63 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 82;

6) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 63 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 83;

7) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 63 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 84;

8) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 64 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 82;

9) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 64 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 83;

10) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 64 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 84;

11) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 101 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 85;

12) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 101 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 103;

13) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 65 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 85;

14) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 65 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 103;

15) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 62 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 85;

16) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 101 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 82;

17) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 121 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 85;

18) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 122 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 85;

19) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 123 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 85;

20) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 124 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 85;

21) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 63 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 85;

22) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 67 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 85;

23) HCVR с последовательностью SEQ ID NO: 67 и LCVR с последовательностью SEQ ID NO: 103; или

24) HCVR и LCVR, содержащие последовательность не-CDR областей, имеющих минимум 70% идентичности с последовательностью не-CDR областей HCVR и LCVR по пунктам с 1) по 23).

В одном варианте осуществления указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 4, 5, 6, 8, 100, 116, 117, 118 и 119; и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 15 и 18, где Х₁₂ в SEQ ID NO: 15 и 18 выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

(ii) VL-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17;

где предпочтительно аминокислотный остаток в позиции L71 по Kabat области LCVR - Phe (F).

Настоящее изобретение также относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей выделенное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению.

Настоящее изобретение также относится к вектору экспрессии, содержащему нуклеиновую кислоту по пункту 7.

Настоящее изобретение также относится к клетке, содержащей нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению или вектор экспрессии по настоящему изобретению.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей выделенное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению, нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, вектор экспрессии по настоящему изобретению или клетку по настоящему изобретению, а также минимум одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

Настоящее изобретение также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоте по настоящему изобретению, вектору экспрессии по настоящему изобретению, клетке по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению, предназначенных для применения в качестве лекарственного препарата.

Настоящее изобретение также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоте по настоящему изобретению, вектору экспрессии по настоящему изобретению, клетке по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению, предназначенных для применения при:

- индуцировании иммунной толерантности у нуждающегося в этом субъекта; и/или

- предупреждении и/или подавлении отторжений трансплантата.

Настоящее изобретение также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоте по настоящему изобретению, вектору экспрессии по настоящему изобретению, клетке по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению, предназначенных для применения в предупреждении, уменьшении интенсивности и/или лечении связанных с CD45RC^выс состояний, предпочтительно когда такое связанное с CD45RC^выс состояние выбирается из группы, включающей аутоиммунные заболевания, нежелательные иммунные ответы, моногенные заболевания и лимфому или рак.

Настоящее изобретение также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту по настоящему изобретению, нуклеиновой кислоте по настоящему изобретению, вектору экспрессии по настоящему изобретению, клетке по настоящему изобретению или фармацевтической композиции по настоящему изобретению, предназначенных для применения в профилактике и/или лечении реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ).

Настоящее изобретение также относится к способу in vitro для обнаружения или количественного определения hCD45RC в образце, клетке, ткани или органе, включающему воздействие на указанный образец, клетку, ткань или орган выделенным антителом или его связывающим фрагментом по настоящему изобретению, где необязательно такое выделенное антитело или его связывающий фрагмент являются мечеными.

Определения

«Антитело» или «иммуноглобулин»

В контексте настоящего изобретения «иммуноглобулин» означает белок с комбинацией двух тяжелых и двух легких цепей независимо от того, имеет ли он какую-нибудь релевантную специфическую иммунореактивность. Термин «антитела» означает такие структуры, которые имеют значительную известную специфическую иммунореактивную активность по отношению к целевому антигену (например, CD45RC человека). Термин «антитела к CD45RC человека» используется в настоящем документе для обозначения антител, которые демонстрируют иммунологическую специфичность к белку CD45RC человека. Как объясняется в настоящем документе, «специфичность» к CD45RC человека не исключает перекрестную реакцию с видами, гомологами CD45RC человека.

Антитела и иммуноглобулины содержат легкие и тяжелые цепи, с межцепной ковалентной связью между ними или без нее. Основные иммуноглобулиновые структуры в системах позвоночных относительно хорошо понятны. Общий термин «иммуноглобулин» включает пять отдельных классов антител, которые различаются биохимически. Хотя следующее обсуждение будет, в основном, направлено на класс IgG молекул иммуноглобулина, все пять классов антител входят в пределы объема настоящего изобретения. Что касается IgG, иммуноглобулины содержат две идентичные легкие полипептидные цепи с молекулярным весом около 23 кДа и две идентичные тяжелые цепи с молекулярным весом около 53-70 к Да. Эти четыре цепи соединяются дисульфидными связями с Y-конфигурацией, при этом легкие цепи обрамляют тяжелые цепи, начиная у устья Y и проходя через вариабельную область. Легкие цепи антитела классифицируются как каппа (κ) или лямбда (λ). Каждый класс тяжелых цепей может связываться либо с κ, либо с λ легкой цепью. В общем, легкие и тяжелые цепи ковалентно связаны друг с другом, а «хвостовые» области двух тяжелых цепей связываются друг с другом ковалентными дисульфидными связями или нековалентными связями, когда иммуноглобулины создаются либо гибридомами, В-клетками или генетически-сконструированными клетками-хозяевами. В тяжелой цепи аминокислотные последовательности идут от N-конца на вилочных концах Y-конфигурации к С-концу внизу каждой цепи. Специалистам в данной области понятно, что тяжелые цепи классифицируются как гамма (γ), мю (μ), альфа (α), дельта (δ) или эпсилон (ε) с некоторыми подклассами внутри них (например, γ1-γ4). Природа данной цепи определяет «класс» антитела как IgG, IgM, IgA IgD или IgE, соответственно. Иммуноглобулиновые подклассы или «изотипы» (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и т.д.) хорошо описаны и определяют функциональную специализацию. Модифицированные версии каждого из этих классов и изотипов легко распознаются специалистом в данной области, если принять во внимание настоящее описание изобретения, и, соответственно, входят в границы объема настоящего изобретения. Как было указано выше, вариабельная область антитела позволяет антителу селективно распознавать эпитопы на антигенах и специфически связываться с ними. То есть вариабельный домен легкой цепи (V_L домен) и вариабельный домен тяжелой цепи (V_H домен) антитела объединяются и образуют вариабельную область, которая определяет трехмерный антигенсвязывающий участок. Такая четвертичная структура антитела образует антигенсвязывающий участок на конце каждой ветви Y. В частности, антигенсвязывающий участок определяется тремя определяющими комплементарность областями (CDR) на каждой из V_H и V_L цепей.

«Характеризуемая как имеющая […] аминокислот, замещаемых другой аминокислотой»

В контексте настоящего изобретения фраза «характеризуемая как имеющая […] аминокислот, замещаемых другой аминокислотой» в отношении указанной последовательности означает наличие в указанной последовательности «консервативных аминокислотных модификаций».

«Консервативные аминокислотные модификации»

Фраза «консервативные аминокислотные модификации» означает модификации, которые значительным образом не затрагивают или не изменяют характеристики связывания антитела или его связывающего фрагмента, содержащих указанную аминокислотную последовательность. Такие консервативные модификации включают аминокислотные замены, добавления или удаления. Модификации могут вводиться в антитело или его связывающий фрагмент с помощью стандартных методов, известных в данной области, таких как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез.

Консервативные аминокислотные замены - это обычно замены, при которых аминокислотный остаток замещается аминокислотным остатком, имеющим боковую цепь с аналогичными физико-химическими свойствами. Указанные последовательности вариабельной области и CDR могут содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 или более аминокислотных вставок, удалений и/или замен. Если выполняются замены, предпочтительными заменами являются консервативные модификации. В данной области были определены семейства аминокислотных остатков, имеющих похожие боковые цепи. Такие семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислыми боковыми цепями (например, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин), β-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Таким образом, один или более аминокислотных остатков в CDR и/или вариабельных областях антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению могут заменяться другими аминокислотными остатками из того же семейства боковых цепей, и измененное антитело может проверяться на сохранение функции (т.е. изложенные здесь свойства, такие как, например, связывание с hCD45RC) с помощью описанных здесь исследований. В других вариантах осуществления нить аминокислот в CDR и/или вариабельных областях антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению может заменяться структурно похожей нитью, которая отличается порядком и/или составом членов семейства боковых цепей.

«CD45»

В контексте настоящего изобретения термин «CD45» (также известный как CD45R или PTPRC) означает трансмембранный гликопротеин, существующий в различных изоформах. Такие различные изоформы CD45 отличаются своими структурами внеклеточного домена в результате альтернативного сплайсинга 3 вариабельных экзонов (экзонов 4, 5 и 6), кодирующих детерминанты А, В и С, соответственно, внеклеточной области CD45. Антитела, способные реагировать с рестриктированным эпитопом, объединяются в группу «CD45R». Таким образом, антитела к CD45RA, к CD45RB и к CD45RC распознают изоформы CD45, которые включают экспрессию детерминант А, В и С, соответственно. Различные изоформы CD45 имеют разные внеклеточные домены, но имеют идентичную внеклеточную последовательность, проксимальную по отношению к мембране, а также для трансмембранного домена и крупных внутриклеточных концевых сегментов, содержащих два тандемно-гомологичных высококонсервативных фосфатазных домена приблизительно с 300 остатками. CD45 и его изоформы нековалентно связываются с фосфопротеином, ассоциированным с фосфатазой лимфоцитов (LPAP) на Т- и В-лимфоцитах. Были сообщения о том, что CD45 ассоциируется с несколькими другими антигенами клеточной поверхности, включая CD1, CD2, CD3 и CD4. CD45 задействован в активации лимфоцитов сигнализации. Если перед термином CD45 стоит буква h (например, hCD45), подразумевается, что CD45 человеческого происхождения.

CD45RC

В контексте настоящего изобретения термин «CD45RC» означает мембранный гликопротеин с одной цепью I типа 200-220 кДа, хорошо известный специалисту в данной области. CD45RC - изоформа CD45 альтернативного сплайсинга, содержащая экзон 6, кодирующий детерминанту С (отсюда терминология CD45RC, т.е. CD45, рестриктированный (англ. Restricted) С детерминантой), но с отсутствующими экзонами 4 и 5, соответственно кодирующими детерминанты А и В. Аминокислотная последовательность CD45RC человека приведена в SEQ ID NO: 104, соответствующей Учетному номеру UniProt Р08575-10 (версия 10, измененная 28 марта 2018 г. - Контрольная сумма: F92C874C9A114890). Такая изоформа CD45RC экспрессируется на В-клетках и подгруппе CD8⁺ Т-клеток и CD4⁺ Т-клеток, но не на CD8⁺ или CD4⁺ Treg, CD14+- моноцитах или полиморфоядерных лейкоцитах (Picarda et al., 2017. JCI Insight. 2(3):e90088). При том, что некоторые моноклональные антитела могут распознавать эпитоп в части CD45, общей для всех разных форм (они называются антитела к CD45), другие моноклональные антитела имеют рестриктированную специфичность к указанной изоформе, в зависимости от того, какую детерминанту они распознают (А, В или С). Если перед термином стоит буква h (например, hCD45RC), подразумевается, что CD45RC человеческого происхождения.

«Антиген клетки CD45RC^high» или «маркер поверхности клетки CD45RC^high»

В контексте настоящего изобретения термины «антиген клетки CD45RC^high» или «маркер поверхности клетки CD45RC^high» означают антиген (или эпитоп) с последовательностью SEQ ID NO: 23, который экспрессируется или представлен на поверхности клеток CD45RC^high (включая Т-клетки, В-клетки и естественные киллеры (NK клетки)), которые могут быть мишенью агента против CD45RC, который с ними связывается (например, антитела или аптамера). Иллюстративные маркеры поверхности Т-клеток CD45RC^high включают, помимо прочего, CD45RC, описанный ранее, или другие антигены, которые характеризуют указанную популяцию Т-клеток. Представляющий интерес маркер поверхности Т-клетки CD45RC^high преимущественно экспрессируется на Т-клетках CD45RC^high по сравнению с другими Т-клетками млекопитающего He-CD45RC^high.

Затем, после получения антител, направленных против указанного выше маркера поверхности клетки CD45RC, специалист в данной области может легко выбрать те, которые воздействуют на клетки CD45RC^high и которые можно использовать для истощения популяции клеток CD45RC^high посредством антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), комплементзависимой цитотоксичности (CDC) или индукции CD45RC^high, но не гибели клеток CD45RC^low/- (например, посредством апоптоза) после прямого связывания антитела (Picarda et al., 2017. JCI Insight. 2(3):e90088).

«CDR» или «определяющая комплементарность область»

В контексте настоящего изобретения термин «CDR» или «определяющая комплементарность область» означает несмежные антигенсвязывающие активные центры антитела, находящиеся в вариабельной области полипептидов тяжелых и легких цепей. CDR были определены в соответствии с правилами Таблицы 1, составленной на основании публикаций Kabat et al., 1991. Sequences of proteins of immunological interest (5^th ed.). Bethesda, MD: U.S. Dep. of Health and Human Services; и Chothia and Lesk, 1987. J Mol Biol. 196(4):901-17:

«Эпитоп»

В контексте настоящего документа термин «эпитоп» означает определенную организацию аминокислот, расположенных на белке или белках, с которыми связывается антитело или его связывающий фрагмент. Эпитопы часто состоят из химически активной поверхностной группы молекул, например, аминокислот или сахарных боковых цепей, и имеют определенные трехмерные структурные характеристики, а также определенные зарядные характеристики. Эпитопы могут быть линейными (или непрерывными) или конформационными, т.е. включающими две или более последовательностей аминокислот в разных областях антигена, которые не обязательно являются последовательными.

«Каркасная область» или «FR» или «не-CDR области»

В контексте настоящего документа термины «каркасная область», «FR» или «не-CDR области» включают аминокислотные остатки, которые являются частью вариабельной области, но не являются частью CDR (например, при использовании определения CDR по Kabat/Chothia). Таким образом, каркас вариабельной области имеет около 100-120 аминокислот в длину, но включает только аминокислоты за пределами CDR.

Для конкретного примера HCVR и для CDR согласно определению Kabat/Chothia:

- FR1 может соответствовать домену вариабельной области, включающему аминокислоты 1-25 согласно определению Chothia/AbM, или через 5 остатков согласно определению Kabat;

- FR2 может соответствовать домену вариабельной области, включающему аминокислоты 36-49;

- FR3 может соответствовать домену вариабельной области, включающей аминокислоты 67-98; и

- FR4 может соответствовать домену вариабельной области от аминокислот 104-110 до конца вариабельной области.

Каркасные области для легкой цепи аналогичным образом разделяются каждой из CDR из LCVR. В природных антителах шесть CDR, присутствующих на каждом мономерном антителе, являются короткими, несмежными последовательностями аминокислот, которые располагаются определенным образом для образования антигенсвязывающего активного центра антитела, когда антитело принимает свою трехмерную конфигурацию в водной среде. Остатки тяжелых и легких вариабельных доменов демонстрируют меньшую межмолекулярную вариабельность в аминокислотной последовательности и называются каркасными областями. Каркасные области, главным образом, принимают β-листовую конформацию, и CDR образуют петли, которые соединяют и в некоторых случаях образуют часть β-листовой структуры. Таким образом, такие каркасные области образуют каркас для расположения шести CDR с правильной ориентацией посредством межцепных, нековал ентных взаимодействий. Антигенсвязывающий активный центр, образованный расположенными CDR, определяет поверхность, комплементарную эпитопу на иммунореактивном антигене. Эта комплементарная поверхность способствует нековалентному связыванию антитела с эпитопом иммунореактивного антигена. Специалист в данной области может легко определить положение CDR.

«Область тяжелой цепи»

В контексте настоящего документа термин «область тяжелой цепи» включает аминокислотные последовательности, полученные от константных доменов тяжелой цепи иммуноглобулина. Белок, содержащий область тяжелой цепи, содержит минимум один С_Н1 домен, шарнирный (например, верхнюю, среднюю и/или нижнюю шарнирную область) домен, С_Н2 домен, С_Н3 домен или их вариант или фрагмент. В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут содержать Fc область тяжелой цепи иммуноглобулина (например, шарнирную часть, С_Н2 домен и С_Н3 домен). В другом варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не содержат минимум одну область константного домена (например, весь С_Н2 домен или его часть). В определенных вариантах осуществления минимум один и предпочтительно все константные домены происходят от тяжелой цепи иммуноглобулина человека. Например, по одному предпочтительному варианту осуществления область тяжелой цепи содержит полностью человеческий шарнирный домен. В других предпочтительных вариантах осуществления область тяжелой цепи, содержащая полностью человеческую Fc область (например, последовательности шарнирного, С_Н2 и С_Н3 доменов от человеческого иммуноглобулина). В определенных вариантах осуществления составляющие константные домены области тяжелой цепи - от разных молекул иммуноглобулина. Например, область тяжелой цепи белка может содержать С_Н2 домен, происходящий от молекулы IgG1, и шарнирную область, происходящую от молекулы IgG3 или IgG4. В других вариантах осуществления константные домены - химерные домены, содержащие области разных молекул иммуноглобулина. Например, шарнир может содержать первую область от молекулы IgG1 и вторую область от молекулы IgG3 или IgG4. Как указано выше, специалисту в данной области понятно, что константные домены области тяжелой цепи могут быть модифицированы так, что они различаются аминокислотной последовательностью от природной молекулы иммуноглобулина (дикого типа). Таким образом, антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут содержать изменения или модификации одного или более константных доменов тяжелой цепи (С_Н1, шарнира, С_Н2 или С_Н3) и/или константного домена легкой цепи (C_L). Иллюстративные модификации включают добавления, удаления или замены одной или более аминокислот в одном или более доменов.

«Шарнирная область»

В контексте настоящего документа термин «шарнирная область» включает область молекулы тяжелой цепи, которая соединяет С_Н1 домен с С_Н2 доменом. Эта шарнирная область содержит приблизительно 25 остатков и является гибкой, что позволяет двум N-концевым антигенсвязывающим участкам двигаться независимо. Шарнирные области могут подразделяться на три отчетливых домена: верхний, средний и нижний шарнирные домены (Roux et al., 1998. J Immunol. 161(8):4083-90).

«Гипервариабельная петля»

Термин «гипервариабельная петля» не строго синонимичен определяющей комплементарность области (CDR), поскольку гипервариабельные петли (HV) определяются на основании структуры, a CDR определяются на основании вариабельности последовательности (Kabat et al., 1991. Sequences of proteins of immunological interest (5^th ed.). Bethesda, MD: U.S. Dep.of Health and Human Services), и пределы HV и CDR могут различаться в некоторых V_H и V_L доменах. CDR V_L и V_H доменов могут обычно определяться по Kabat/Chothia, что уже объяснялось выше.

«Идентичность» или «идентичный»

В контексте настоящего документа термин «идентичность» или «идентичный» при использовании в отношении связи между последовательностями двух или более аминокислотных последовательностей или двух или более последовательностей нуклеиновых кислот означает степень схожести последовательностей между аминокислотными последовательностями или последовательностями нуклеиновых кислот, что определяется числом совпадений между нитями аминокислотных остатков или остатков нуклеиновых кислот. «Идентичность» измеряет процент идентичных совпадений между меньшей из двух или более последовательностей с выравниваниями гэпов (если таковые имеются) при применении определенной математической модели или компьютерной программы (т.е. «алгоритмов»).

Идентичность связанных аминокислотных последовательностей или последовательностей нуклеиновых кислот можно легко рассчитать при помощи известных методов. Такие методы включают, помимо прочего, методы, описанные в публикациях Lesk А. М. (1988). Computational molecular biology: Sources and methods for sequence analysis. New York, NY: Oxford University Press; Smith D.W. (1993). Biocomputing: Informatics and genome projects. San Diego, CA: Academic Press; Griffin A.M. & Griffin H.G. (1994). Computer analysis of sequence data, Part 1. Totowa, NJ: Humana Press; von Heijne G. (1987). Sequence analysis in molecular biology: treasure trove or trivial pursuit. San Diego, CA: Academic press; Gribskov M. R. & Devereux J. (1991). Sequence analysis primer. New York, NY: Stockton Press; Carillo et al., 1988. SIAM J Appl Math. 48(5): 1073-82.

Предпочтительные методы для определения идентичности предназначены для выявления самого большого совпадения между анализируемыми последовательностями. Методы определения идентичности описаны в общедоступных компьютерных программах. Предпочтительные методы компьютерных программ для определения идентичности между двумя последовательностями включают программный пакет GCG, включающий GAP (Genetics Computer Group, Университет штата Висконсин, Мадисон, Висконсин; Devereux et al., 1984. Nucleic Acids Res. 12(1 Pt 1):387-95), BLASTP, BLASTN и FASTA (Altschul et al., 1990. J Mol Biol. 215(3):403-10). К программе BLASTX предоставлен открытый доступ в Национальном центре биотехнологической информации (NCBI) и других источниках (BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894). Также для определения идентичности можно использовать хорошо известный алгоритм Смита-Уотермана.

«Иммуноспецифический», «специфический κ» или «связываться специфически»

В контексте настоящего документа антитело или его связывающий фрагмент являются «иммуноспецифическими», «специфическими к» антигену или «специфически связываются» с антигеном, если они вступают в реакцию на обнаруживаемом уровне с указанным антигеном (например, hCD45RC), предпочтительно с константой аффинности (K_A), которая равна или превышает около 10⁶ М^-1, предпочтительно равна или превышает около 10⁷ М^-1, 10⁸ М^-1, 5×10⁸ М^-1, 10⁹ М^-1, 5×10⁹ М^-1 или более.

Аффинность антитела или его связывающего фрагмента к его распознанному антигену также обычно выражается как равновесная константа диссоциации (K_D). Говорят, что антитело или его связывающий фрагмент являются «иммуноспецифическими», «специфическими κ» антигену или «специфически связываются» с антигеном, если они вступают в реакцию на обнаруживаемом уровне с указанным антигеном (например, hCD45RC), предпочтительно с K_D, равной или менее 10^-6 М, предпочтительно равной или менее 10^-7 М, 5×10^-8 М, 10^-8 М, 5×10^-9 М, 10^-9 М или менее.

Аффинности антител или их связывающего фрагмента можно легко определить при помощи традиционных методов, например, методов, описанных в публикации Scatchard, 1949. Ann NY Acad Sci. 51:660-672. Свойства связывания антитела или его связывающего фрагмент с антигенами, клетками или тканями обычно можно определить и оценить при помощи методов иммунологического анализа, включая, например, ELISA, флуоресцентный иммунологический анализ, например, иммуногистохимию (ИГХ) и/или сортировку клеток с активированной флуоресценцией (FACS), или посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR, например, с помощью BIAcore®).

«Моноклональное антитело»

В контексте настоящего документа термин «моноклональное антитело» означает антитело, полученное от популяции, главным образом, гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, образующие популяцию, являются идентичными за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в небольших количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифическими, будучи направленными против единичного антигенного сайта. Более того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против единичной детерминанты на антигене. В дополнение к их специфичности моноклональные антитела имеют преимущество, которое заключается в том, что их можно синтезировать без контаминации другими антителами. Определение «моноклональное» не следует толковать как требующее продуцирования антител каким-либо конкретным методом. Например, моноклональные антитела или их связывающий фрагмент по настоящему изобретению можно получить посредством гибридомной методологии, впервые описанной в публикации Kohler et al., 1975. Nature. 256(5517):495-7, либо можно создать при помощи методов рекомбинантных ДНК в бактериальных, эукариотических клетках животных или растений (Патент US 4,816,567). «Моноклональные антитела» также могут выделяться из фаговых библиотек антител с помощью методов, например, описанных в публикациях Clackson et al., 1991. Nature. 352(6336):624-8 и Marks et al., 1991. J Mol Biol. 222(3):581-97.

«Предупреждать» или «предупреждение» или «профилактика»

В контексте настоящего документа термины «предупреждать», «предупреждение» или «профилактика» означают профилактические или предупредительные меры, в которых целью является снижение вероятности того, что у субъекта разовьется патологическое состояние или заболевание в течение определенного периода времени. Такое снижение может отражаться, например, в отсроченном наступлении минимум одного симптома патологического состояния или заболевания у субъекта.

«Субъект»

В контексте настоящего документа термин «субъект» означает млекопитающее, предпочтительно человека. В одном варианте осуществления субъектом может быть «пациент», т.е. теплокровное животное, предпочтительнее человек, который/которое ожидает получения или получает медицинское обслуживание или был(о)/является/будет объектом медицинской процедуры или наблюдения в плане развития заболевания. Термин «млекопитающее» здесь означает любое млекопитающее, включая людей, домашних и сельскохозяйственных животных, а также животных зоопарка, участников спортивных соревнований или питомцев, таких как собаки, кошки, крупный рогатый скот, лошади, овцы, свиньи, козы, кролики и т.д. Предпочтительно такое млекопитающее является приматом, предпочтительнее человеком.

«Вариабельная область» или «вариабельный домен»

В контексте настоящего документа термин «вариабельный» означает тот факт, что определенные области вариабельных доменов V_H и V_L значительным образом различаются в последовательности у разных антител и используются в связывании и специфичности каждого конкретного антитела к его целевому антигену. Тем не менее, вариабельность не равномерно распределяется по вариабельным доменам антител. Она концентрируется в трех сегментах, называемых «гипервариабельными петлями» в каждом V_L домене и V_H домене, которые образуют часть антигенсвязывающего сайта.

Первая, вторая и третья гипервариабельные петли домена легкой цепи Vλ называются здесь L1 (λ), L2 (λ) и L3 (λ) и могут определяться как содержащие остатки 24-33 (L1(λ), состоящие из 9, 10 или 11 аминокислотных остатков), 49-53 L2 (λ), состоящие из 3 остатков) и 90-96 (L3(λ), состоящие 6 остатков) в V_L домене (Morea et al., 2000. Methods. 20(3):267-79).

Первая, вторая и третья гипервариабельные петли домена легкой цепи Vκ называются здесь L1(κ), L2(κ) и L3(κ) и могут определяться как содержащие остатки 25-33 (L1(κ), состоящие из 6, 7, 8, 11, 12 или 13 остатков), 49-53 (L2(κ), состоящие из 3 остатков) и 90-97 (L3(κ), состоящие из 6 остатков) в V_L домене (Morea et al., 2000. Methods. 20(3):267-79).

Первая, вторая и третья гипервариабельные петли V_H домена называются здесь H1, Н2 и Н3 и могут определяться как содержащие остатки 25-33 (H1, состоящие из 7, 8 или 9 остатков), 52-56 (Н2, состоящие из 3 или 4 остатков) и 91-105 (Н3, высоковариабельные по длине) в V_H домене (Morea et al., 2000. Methods. 20(3):267-79).

Если не указано иное, термины L1, L2 и L3, соответственно, означают первую, вторую и третью гипервариабельную петли V_L домена и включают гипервариабельные петли, полученные от изотипов Vκ и Vλ. Термины H1, Н2 и Н3, соответственно, означают первую, вторую и третью гипервариабельную петли V_H домена и включают гипервариабельные петли, полученные от любого из известных изотипов тяжелой цепи, включая гамма (γ), мю (μ), альфа (α), дельта (δ) или эпсилон (ε). Гипервариабельные петли L1, L2, L3, H1, Н2 и Н3 каждая могут содержать часть «определяющей комплементарность области» или «CDR», определение которой было дано здесь выше.

«Лечение» или «облегчение»

В контексте настоящего документа термины «лечение» или «облегчение» означают терапевтическое воздействие, исключающее профилактические или предупредительные меры; при котором целью является замедление (уменьшение степени) целевого патологического состояния или заболевания. К нуждающимся в лечении относятся те, у которых такое заболевание уже имеется или подозревается. Считается, что у субъекта целевое патологическое состояние или заболевание было успешно «вылечено», если после получения терапевтического количества выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению у указанного субъекта имеется наблюдаемое и/или измеряемое снижение или отсутствие одного или более следующих параметров: уменьшение числа клеток CD45RC^high; уменьшение процентной доли клеток CD45RC^high к общему количеству клеток; уменьшение в некоторой степени одного или более симптомов, связанных с определенным заболеванием или состоянием; сниженные уровни смертности и заболеваемости; и/или повышение качества жизни. Указанные выше параметры для оценки успешного лечения или улучшения состояния при заболевании можно измерить при использовании стандартных процедур, известных врачу.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту, связывающимися с CD45RC человека (hCD45RC).

«Выделенное антитело» в контексте настоящего документа означает антитело, которое, по существу, свободно от других антител, имеющих другие антигенные специфичности (например, выделенное антитело, которое специфически связывается с hCD45RC, в значительной степени свободно от антител, которые специфически связываются не с hCD45RC, а с другими антигенами). Выделенное антитело, которое специфически связывается с hCD45RC, тем не менее, может иметь кросс-реактивность в отношении других антигенов, таких как молекулы CD45RC от других видов. Более того, выделенное антитело может быть в значительной степени свободно от другого клеточного материала и/или химических веществ, в частности, тех, которые препятствовали бы диагностическому или терапевтическому применению антитела, включая, помимо прочего, ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые компоненты.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент являются очищенными.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент очищаются до:

(1) значения более 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% или более по весу антитела или его связывающего фрагмента, что определяется по методу Лоури, и предпочтительнее более 96%, 97%, 98% или 99% по весу;

(2) степени, достаточной для получения минимум 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности при использовании секвенатора с вращающимся стаканом; или

(3) гомогенности по результатам электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE) в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях и при использовании окрашивания Кумасси синим или предпочтительно окрашивания серебром.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с внеклеточным доменом hCD45RC. В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются минимум с одним эпитопом, присутствующим на внеклеточном домене hCD45RC.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связывается с С детерминантной, кодируемой экзоном 6 hCD45. В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются минимум с одним эпитопом на детерминанте С, кодируемой экзоном 6 hCD45.

В одном варианте осуществления аминокислотная последовательность детерминанты С, кодируемой экзоном 6 hCD45, содержит или состоит из SEQ ID NO: 23. В одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты экзона 6, кодирующего детерминанту С hCD45, содержит или состоит из SEQ ID NO: 24.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются минимум с одним эпитопом, содержащим или состоящим из SEQ ID NO: 23, или его фрагментом.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связывается минимум с одним эпитопом, содержащим или состоящим из последовательности, имеющей идентичность минимум около 70%, предпочтительно минимум 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 23, или его фрагментом.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются минимум с одним эпитопом, кодируемым последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 24, или его фрагментом.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связывается минимум с одним эпитопом, кодируемым последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей или состоящей из последовательности, имеющей идентичность минимум около 70%, рпредпочтительно минимум 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 24, или его фрагментом.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связывается минимум с одним эпитопом, содержащим или состоящим из минимум 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 или 47 аминокислот с SEQ ID NO: 23, или его фрагментом; или с последовательностью, имеющей идентичность минимум около 70%, предпочтительно минимум 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 23, или его фрагментом.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связывается минимум с одним эпитопом, содержащим или состоящим из минимум 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 или 47 последовательных аминокислот с SEQ ID NO: 23, или его фрагментом; или с последовательностью, имеющей идентичность минимум около 70%, предпочтительно минимум 75%, 80%), 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 23, или его фрагментом.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий В одном варианте осуществления фрагмент минимум одного эпитопа, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 23, содержит или состоит из 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 или 47 аминокислотных остатков.

В одном варианте осуществления фрагмент минимум одного эпитопа, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 23, содержит или состоит из 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 или 47 аминокислотных остатков, распределенных по длине в 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 73, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900,910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1010, 1020, 1030, 1040, 1050, 1060, 1070, 1080, 1090, 1100 или более последовательных аминокислотных остатков с последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 23.

В одном варианте осуществления последовательность, содержащая SEQ ID NO: 23 - последовательность hCD45, изложенная в SEQ ID NO: 99, соответствующая Учетному номеру UniProt Р08575-3 (версия 3, изменено 28 марта 2018 г. - Checksum: 6E942E2BF6B17AC5).

В одном варианте осуществления последовательность, содержащая SEQ ID NO: 23 - последовательность hCD45RC, представленная в SEQ ID NO: 104, соответствующая Учетному номеру UniProt Р08575-10 (версия 10, изменено 28 марта 2018 г. - Checksum: F92C874C9A114890).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются с детерминантой А, кодируемой экзоном 4 hCD45. В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются минимум с одним эпитопом на детерминанте А, кодируемой экзоном 4 hCD45.

В одном варианте осуществления аминокислотная последовательность детерминанты А, кодируемой экзоном 4 hCD45, содержит или состоит из SEQ ID NO: 105.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются с детерминантой В, кодируемой экзоном 5 hCD45. В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются минимум с одним эпитопом на детерминанте В, кодируемой экзоном 5 hCD45.

В одном варианте осуществления аминокислотная последовательность детерминанты В, кодируемой экзоном 5 hCD45, содержит или состоит из SEQ ID NO: 106.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются с hCD45RA. В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются минимум с одним эпитопом hCD45RA.

В одном варианте осуществления аминокислотная последовательность hCD45RA содержит или состоит из SEQ ID NO: 107, соответствующей Учетному номеру UniProt Р08575-8 (версия 8, изменено 28 марта 2018 г. - Checksum: F42C1FEC9EDE4BC0).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются с hCD45RB. В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются минимум с одним эпитопом hCD45RB.

В одном варианте осуществления аминокислотная последовательность hCD45RB содержит или состоит из SEQ ID NO: 108, соответствующей Учетному номеру UniProt Р08575-9 (версия 9, изменено 28 марта 2018 г. - Checksum: 745870037910С575).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются с hCD45RAB. В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются минимум с одним эпитопом hCD45RAB.

В одном варианте осуществления аминокислотная последовательность hCD45RAB содержит или состоит из SEQ ID NO: 109, соответствующей Учетному номеру UniProt Р08575-5 (версия 5, изменено 28 марта 2018 г. - Checksum: EA40BE995CD98F7C).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются с hCD45R0. В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению не связываются минимум с одним эпитопом hCD45R0.

В одном варианте осуществления аминокислотная последовательность hCD45R0 содержит или состоит из SEQ ID NO: 110, соответствующей Учетному номеру UniProt Р08575-4 (версия 4, изменено 28 марта 2018 г. - Checksum: D3CB364EF4243384).

В одном варианте осуществления минимум один эпитоп является конформационным эпитопом. В другом варианте осуществления минимум один эпитоп является непрерывным эпитопом.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с hCD45RC с равновесной константой диссоциации (K_d) около 5×10^-7 М или менее, предпочтительно около 2.5×10^-7 М или менее, около 1×10^-7 М или менее, около 7.5×10^-8 М или менее, около 5×10^-8 М или менее, около 1×10^-8 М или менее.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с hCD45RC со скоростью ассоциации (K_on) около 1×10⁴ М^-1сек^-1 или более, предпочтительно около 5×10⁴ М^-1сек^-1 или более, около 1×10⁵ М^-1сек^-1 или более, около 2.5×10⁵ М^-1сек^-1 или более, около 5×10⁵ М^-1сек^-1 или более.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с hCD45RC со скоростью диссоциации (K_off) около 5×10^-2 сек^-1 или менее, предпочтительно около 4×10^-2 сек^-1 или менее, около 3×10^-2 сек^-1 или менее, около 2×10^-2 сек^-1 или менее, около 1.5×10^-2 сек^-1 или менее.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению связываются с hCD45RC минимум с одной, предпочтительно минимум с двумя, предпочтительнее с тремя характеристиками:

- равновесная константа диссоциации (K_d) около 5×10^-7 М или менее, предпочтительно около 2.5×10^-7 М или менее, около 1×10^-7 М или менее, около 7.5×10^-8 М или менее, около 5×10^-8 М или менее, около 1×10^-8 М или менее;

- скорость ассоциации (K_on) около 1×10⁴ М^-1сек^-1 или более, предпочтительно около 5×10⁴ М^-1сек^-1 или более, около 1×10⁵ М^-1сек^-1 или более, около 2.5×10⁵ М^-1сек^-1 или более, около 5×10⁵ М^-1сек^-1 или более; и

- скорость диссоциации (K_off) около 5×10^-2 сек^-1 или менее, предпочтительно около 4×10^-2 сек^-1 или менее, около 3×10^-2 сек^-1 или менее, около 2×10^-2 сек^-1 или менее, около 1.5×10^-2 сек^-1 или менее.

Методы для определения аффинности (включающие, например, определение K_d, k_off и k_on) антитела или его связывающего фрагмента к его лиганду хорошо известны в отрасли и включают, помимо прочего, поверхностный плазмонный резонанс (SPR), сортировку клеток с активированной флуоресценцией (FACS), иммуноферментный анализ (ELISA), AlphaLISA и KinExA.

Предпочтительный метод - BIAcore®, который основан на поверхностном плазмонном резонансе с использованием иммобилизованного CD45RC для определения аффинности антитела или его связывающего фрагмента. Один из способов применения данного метода будет проиллюстрирован далее в разделе

«Примеры».

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению - поликлональное антитело или его связывающий фрагмент.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению - моноклональное антитело или его связывающий фрагмент.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению - молекула, которая выбирается из группы, содержащей или состоящей из целого антитела, одноцепочечного антитела, димерного одноцепочечного антитела, однодоменного антитела, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab)'2, Fd, дефукозилированного антитела, биспецифического антитела, диатела, триатела и тетратела.

Термин «связывающий фрагмент» в контексте настоящего изобретения означает часть или область антитела по настоящему изобретению, которая содержит меньше аминокислотных остатков, чем целое антитело. «Связывающий фрагмент» связывается с антигеном и/или конкурирует с целым антителом, от которого он был получен, за связывание с антигеном (например, специфическое связывание с CD45RC человека). Связывающие фрагменты антител охватывают, без ограничений, одноцепочечные антитела, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab)'2, Fd, дефукозилированные антитела, диатела, триатела и тетратела.

«Одноцепочечное антитело» в контексте настоящего изобретения означает любое антитело или его фрагмент, которые являются белком, имеющим первичную структуру, содержащую или состоящую из одной непрерывной последовательности последовательных аминокислотных остатков, включая, помимо прочего, (1) одноцепочечные Fv молекулы (scFv); (2) одноцепочечные белки, содержащие только один вариабельный домен легкой цепи или его фрагмент, который содержит три CDR вариабельного домена легкой цепи, без ассоциированного фрагмента тяжелой цепи; и (3) одноцепочечные белки, содержащие только один вариабельный домен тяжелой цепи или его фрагмент, который содержит три CDR вариабельного домена тяжелой цепи, без ассоциированного фрагмента легкой цепи.

«Одноцепочечное Fv», также сокращаемое «sFv» или «scFv», означает фрагменты антитела, которые содержат V_H и V_L домены антитела, соединенные в одну аминокислотную цепь. Предпочтительно аминокислотная последовательность scFv также содержит пептидный линкер между V_H и V_L доменами, который позволяет scFv создавать необходимую структуру для связывания с антигеном (Pluckthun, 1994. Antibodies from Escherichia coli. In Rosenberg & Moore (Eds.), The pharmacology of monoclonal antibodies. Handbook of Experimental Pharmacology, 113:269-315. Springer: Berlin, Heidelberg).

«Fv» в контексте настоящего изобретения означает минимальный фрагмент антитела, который содержит полный антигенраспознающий и антигенсвязывающий сайт. Этот фрагмент состоит из димера одной HCVR и одной LCVR с прочной нековалентной связью. Из фолдинга этих двух доменов образуются шесть гипервариабельных петель (по три петли от тяжелой и легкой цепи), которые способствуют связыванию с антигеном и придают специфичность связывания с антигеном антителу. Тем не менее, даже единичный вариабельный домен (или половина Fv, содержащая только три CDR, специфические для антигена) имеет способность распознавать антиген и связываться с ним, хотя и с меньшей аффинностью по сравнению со всем участком связывания.

«Диатела» в контексте настоящего изобретения означает небольшие фрагменты антител, полученные посредством конструирования scFv фрагментов с короткими линкерами (около 5-10 остатков) между HCVR и LCVR таким образом, чтобы обеспечивалось межцепочечное, но не внутрицепочечное объединение вариабельных доменов, приводящее к образованию двухвалентного фрагмента, т.е. фрагмента, имеющего два антигенсвязывающего сайта. Биспецифические диатела являются гетеродимерами двух «кроссоверных» scFv фрагментов, в которых HCVR и LCVR двух антител присутствуют на разных полипептидных цепях. Диатела более подробно описаны в Патенте ЕР 0404097, Патентной заявке WO 1993011161; и публикации Holliger et al, 1993. Proc Natl Acad Sci USA. 90(14):6444-8.

Антигенсвязывающие фрагменты можно получать с помощью стандартных методов. Например, Fab или F(ab')2 фрагменты можно получать посредством расщепления протеазой выделенных антител в соответствии с традиционными методами.

Следует понимать, что антитела или их связывающие фрагменты по настоящему изобретению можно модифицировать с помощью известных методов. Например, для замедления клиренса in vivo и получения более благоприятного фармакокинетического профиля антитело или его связывающий фрагмент можно модифицировать полиэтиленгликолем (ПЭГ). Методы для присоединения и сайт-специфического конъюгирования ПЭГ с антителом или его связывающим фрагментом описаны, например, в публикациях Leong et al, 2001. Cytokine. 16(3): 106-19; Delgado et al, 1996. Br J Cancer. 73(2): 175-82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению - молекула, выбираемая из группы, содержащей или состоящей из унитела, доменного тела и нанотела.

«Унитела» хорошо известны в данной области и означают фрагменты антител, в которых отсутствует шарнирная область антител IgG4. Удаление шарнирной области приводит к образованию молекулы, которая по сути имеет размер, в два раза меньше размера традиционных антител IgG4, и имеет область одновалентного связывания, а не область двухвалентного связывания антител IgG4.

«Доменные антитела» хорошо известны в данной области и означают наименьшие функциональные единицы связывания антител, соответствующие вариабельным областям тяжелых или легких цепей антител.

«Однодоменные антитела» хорошо известны в данной области и означают белки, полученные от антител, которые имеют уникальные структурные и функциональные свойства природных антител с тяжелыми цепями (Muyldermans, 2013. Annu Rev Biochem. 82:775-97). Эти антитела с тяжелыми цепями могут содержать один вариабельный домен (V_HH) - одним таким примером являются нанотела (nanobodies®) - или один вариабельный домен (V_HH) и два константных домена (C_H2 and С_Н3) - например, верблюжьи антитела - или один вариабельный домен (V_HH) и пять константных доменов (C_H1, C_H2, С_Н3, С_Н4 и C_H5) - например, антитела акулы.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению - миметик, выбираемый из группы, содержащей или состоящей из аффитела, аффилина, аффитина, аднектина, атримера, эвазина, дарпина, антикалина, авимера, финомера, версатела и дуокалина.

«Аффитела» хорошо известны в данной области и означают белки аффинности, основанные на домене белка аминокислотного остатка 58, полученные от одного из IgG связывающих доменов стафилококкового белка А (Frejd & Kim, 2017. Exp Mol Med. 49(3):e306; Патент US 5,831,012).

«Дарпины» (сконструированные белки с анкириновым повтором) хорошо известны в данной области и относятся к технологии сконструированных белков-миметиков с повтором (DRP) антител, разработанной для использования способностей к связыванию белков, не принадлежащих к антителу (Binz et al, 2003. J Mol Biol. 332(2):489-503; Pluchthun, 2015. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 55:489-511).

«Антикалины» хорошо известны в данной области и относятся к другой технологии белков-миметиков антител, при которой специфичность связывания обеспечивается липокалинами (Skerra, 2008. FEBS J. 275(11):2677-83). Антикалины также могут создаваться как белок с двумя мишенями под названием «дуокалины» (Schlehuber & Skerra, 2001. Biol Chem. 382(9): 1335-42).

«Авимеры» хорошо известны в данной области и относятся к другой технологии белков-миметиков антител (Silverman et al, 2005. Nat Biotechnol. 23(12): 1556-61).

«Версатела» хорошо известны в данной области и относятся к другой технологии белков-миметиков антител (Патентная заявка US 20070191272). Это малые белки с 3-5 кДа с цистеинами > 15%, которые образуют каркас с высокой дисульфидной плотностью, заменяющий гидрофобную сердцевину, которую имеют обычные белки. Замена большого количества гидрофобных аминокислот, содержащих гидрофобную сердцевину, малым количеством дисульфидов приводит к созданию белка, который меньше, более гидрофильный (меньшая агрегация и неспецифическое связывание), более устойчив к протеазам и нагреву и имеет меньшую плотность эпитопов Т-клеток, потому что остатки, которые, по большей части, способствуют МНС-презентации, являются гидрофобными. Хорошо известно, что все четыре из этих свойств влияют на иммуногенность, и предполагается, что вместе они вызывают значительное уменьшение иммуногенности.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению также включают мультиспецифические антитела или их связывающие фрагменты, т.е. антитела, которые являются иммуноспецифическими к более чем одному, например, минимум двум разным антигенам, одним из которых является hCD45RC согласно настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению также включают полимеры антител или их связывающих фрагментов, т.е. более одного, например, минимум два антитела или их связывающих фрагмента, независимо от того, являются ли они идентичными или разными, ковалентно соединенные вместе, напрямую или опосредованно.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению - иммуноконъюгат, содержащий указанное антитело или его связывающий фрагмент, конъюгированные с терапевтическим средством.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению - конъюгат, содержащий указанное антитело или его связывающий фрагмент, конъюгированные с визуализирующим средством. Указанный конъюгат может применяться, например, в целях визуализации.

Далее по тексту и если явно не указано иное, нумерация и определения CDR соответствуют определению Kabat/Chothia.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи (которая сокращается здесь как HCVR или V_H), которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: X₁-IF-X₂-GG-X₃-Y-X₄-N-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-G (SEQ ID NO: 2); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3),

где:

X₁ выбирается из Asp (D), Ile (I) и Arg (R);

X₂ выбирается из Pro (Р) и Ser (S);

Х₃ выбирается из Asp (D), Ser (S) и Gly (G);

X₄ выбирается из Ala (А) и Thr (Т);

Х₅ выбирается из Ser (S) и Tyr (Y);

Х₆ выбирается из Asn (N), Ala (А) и Ser (S);

Х₇ выбирается из Glu (Е), Asp (D), Pro (Р) и Gin (Q);

X₈ выбирается из Lys (K) и Ser (S);

Х₉ выбирается из Phe (F) и Val (V); и

Х₁₀ выбирается из Lys (K) и Gin (Q).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: X₁-IF-X₂-GG-X₃-Y-X₄-N-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-G (SEQ ID NO: 2); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3),

DIFPGGDYANSNEKFKG, где:

X₁ выбирается из Asp (D), Ile (I) и Arg (R);

X₂ выбирается из Pro (P) и Ser (S);

X₃ выбирается из Asp (D), Ser (S) и Gly (G);

X₄ выбирается из Ala (А) и Thr (T);

X₅ выбирается из Ser (S) и Tyr (Y);

X₆ выбирается из Asn (N), Ala (А) и Ser (S);

X₇ выбирается из Glu (E), Asp (D), Pro (P) и Gin (Q);

X₈ выбирается из Lys (K) и Ser (S);

X₉ выбирается из Phe (F) и Val (V); и

Х₁₀ выбирается из Lys (K) и Gin (Q).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGDYANSNEKFKG (SEQ ID NO: 4); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGDYANSNEKFKG (SEQ ID NO: 4); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGDYANSNEKVKG (SEQ ID NO: 5); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID N0:3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGDYANSNEKVKG (SEQ ID NO: 5); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYTNYAEKFQG (SEQ ID NO: 6); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYTNYAEKFQG (SEQ ID NO: 6); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGSYTNYSESFQG (SEQ ID NO: 7); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGSYTNYSESFQG (SEQ ID NO: 7); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGSYTNYADSVKG (SEQ ID NO: 8); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGSYTNYADSVKG (SEQ ID NO: 8); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: RIFPGGGYTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 9); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID N0:3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: RIFPGGGYTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 9); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: IIFPGGSYTNYSPSFQG (SEQ ID NO: 10); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: IIFPGGSYTNYSPSFQG (SEQ ID NO: 10); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFSGGSYTNYADSVKG (SEQ ID NO: 11); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFSGGSYTNYADSVKG (SEQ ID NO: 11); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGDYTNYAEKFQG (SEQ ID NO: 100); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGDYTNYAEKFQG (SEQ ID NO: 100); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYANYAEKFQG (SEQ ID NO: 116); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYANYAEKFQG (SEQ ID NO: 116); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYTNYAEKFKG (SEQ ID NO: 117); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYTNYAEKFKG (SEQ ID NO: 117); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYTNYNEKFQG (SEQ ID NO: 118); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYTNYNEKFQG (SEQ ID NO: 118); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYTNSAEKFQG (SEQ ID NO: 119); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: DIFPGGGYTNSAEKFQG (SEQ ID NO: 119); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи (которая сокращается здесь как LCVR или V_L), которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: X₁₁-ASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 12);

V_L-CDR2: X₁₃-TSN-X₁₄-X₁₅-X₁₆ (SEQ ID NO: 13); и

V_L-CDR3: Х₁₇-QRSSYPLTF (SEQ ID NO: 14),

где:

Х₁₁ выбирается из Ser (S) и Arg (R);

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

X₁₃ выбирается из Asn (N) и Ala (А); или X₁₃ является любой аминокислотой, кроме Ala (А) или Asn (N);

Х₁₄ выбирается из Leu (L), Ser (S) и Arg (R);

X₁₅ выбирается из Pro (P), Ala (А) и Gin (Q);

X₁₆ выбирается из Ser (S) и Thr (T); и

X₁₇ выбирается из Gin (Q) и His (H).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: X₁₁-ASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 12);

V_L-CDR2: X₁₃-TSN-X₁₄-X₁₅-X₁₆ (SEQ ID NO: 13); и

V_L-CDR3: Х₁₇-QRSSYPLTF (SEQ ID NO: 14),

где:

Х₁₁ выбирается из Ser (S) и Arg (R);

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

X₁₃ выбирается из Asn (N) и Ala (А); или X₁₃ является любой аминокислотой, кроме Ala (А) или Asn (N);

Х₁₄ выбирается из Leu (L), Ser (S) и Arg (R);

X₁₅ выбирается из Pro (P), Ala (А) и Gin (Q);

X₁₆ выбирается из Ser (S) и Thr (T); и

Х₁₇ выбирается из Gin (Q) и His (H).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: X₁,-ASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 12);

V_L-CDR2: X₁₃-TSN-X₁₄-X₁₅-X₁₆ (SEQ ID NO: 13); и

V_L-CDR3: Х₁₇-QRSSYPLTF (SEQ ID NO: 14),

где:

Х₁₁-Ser (S);

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

Х₁₃ является Asn (N); или X₁₃ является любой аминокислотой, кроме Ala (А) или Asn (N);

Х₁₄ - Leu (L);

Х₁₅ - Pro (Р);

X₁₆ - Ser (S); и

Х₁₇ - Gln (Q).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: X₁₁-ASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 12);

V_L-CDR2: X₁₃-TSN-X₁₄-X₁₅-X₁₆ (SEQ ID NO: 13); и

V_L-CDR3: X₁₇-QRSSYPLTF (SEQ ID NO: 14),

где:

X₁₁ - Ser(S);

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

X₁₃ - Asn (N); или X₁₃ является любой аминокислотой, кроме Ala (A) or Asn (N);

Х₁₄ - Leu (L);

X₁₅ - Pro (P);

X₁₆ - Ser (S); и

Х₁₇ - Gln (Q).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

Х₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: SASSSVSYMH (SEQIDNO: 15);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: SASSSVSYMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17), где:

Х₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNLPS (SEQ ID NO: 16); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X,2-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLQS (SEQ ID NO: 20); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLQS (SEQ ID NO: 20); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLQS (SEQ ID NO: 20); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLQS (SEQ ID NO: 20); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLQS (SEQ ID NO: 20); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLQS (SEQ ID NO: 20); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: HQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 21),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: HQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 21),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: HQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 21).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: HQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 21).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: HQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 21),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNSPS (SEQ ID NO: 19); и

V_L-CDR3: HQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 21),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X,2-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNRAT (SEQ ID NO: 22); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNRAT (SEQ ID NO: 22); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

Х₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNRAT (SEQ ID NO: 22); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNRAT (SEQ ID NO: 22); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNRAT (SEQ ID NO: 22); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: NTSNRAT (SEQ ID NO: 22); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLPS (SEQ ID NO: 111); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLPS (SEQ ID NO: 111); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLPS (SEQ ID NO: 111); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLPS (SEQ ID NO: 111); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLPS (SEQ ID NO: 111); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: ATSNLPS (SEQ ID NO: 111); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTANLPS (SEQ ID NO: 120); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTANLPS (SEQ ID NO: 120); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTANLPS (SEQ ID NO: 120); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTANLPS (SEQ ID NO: 120); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTANLPS (SEQ ID NO: 120); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: SASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 15);

V_L-CDR2: NTANLPS (SEQ ID NO: 120); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: X₁₃-TSNLPS (SEQ ID NO: 127); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), и

Х₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: X₁₃-TSNLPS (SEQ ID NO: 127); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), и

X₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: X₁3-TSNLPS (SEQ ID NO: 127); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

где:

X₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVSYMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: X₁₃-TSNLPS (SEQ ID NO: 127); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17).

где:

X₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: X₁₃-TSNLPS (SEQ ID NO: 127); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), и

X₁3 - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1: RASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 18);

V_L-CDR2: X₁₃-TSNLPS (SEQ ID NO: 127); и

V_L-CDR3: QQRSSYPLTF (SEQ ID NO: 17),

где:

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), и

X₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: X₁-IF-X₂-GG-X₃-Y-X₄-N-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-G (SEQ ID NO: 2); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3); и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1: X₁₁-ASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 12);

V_L-CDR2: X₁₃-TSN-X₁4-X₁5-X₁6 (SEQ ID NO: 13); и

V_L-CDR3: X₁₇-QRSSYPLTF (SEQ ID NO: 14),

где:

X₁ выбирается из Asp (D), Ile (I) и Arg (R);

X₂ выбирается из Pro (P) и Ser (S):

Х₃ выбирается из Asp (D), Ser (S) и Gly (G);

X₄ выбирается из Ala (А) и Thr (T);

X₅ выбирается из Ser (S) и Tyr (Y);

Х₆ выбирается из Asn (N), Ala (А) и Ser (S);

X₇ выбирается из Glu (E), Asp (D), Pro (P) и Gin (Q);

X₈ выбирается из Lys (K) и Ser (S);

X₉ выбирается из Phe (F) и Val (V);

Х₁₀ выбирается из Lys (K) и Gin (Q);

Х₁₁ выбирается из Ser (S) и Arg (R);

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

X₁₃ выбирается из Asn (N) и Ala (А); или X₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N);

Х₁₄ выбирается из Leu (L), Ser (S) и Arg (R);

X₁₅ выбирается из Pro (P), Ala (А) и Gin (Q);

X₁₆ выбирается из Ser (S) и Thr (T); и

X₁₇ выбирается из Gin (Q) и His (H).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

V_H-CDR2: X₁-IF-GG-X₃-Y-X₄-N-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-G (SEQ ID NO: 2); и

V_H-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3); и

- LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDRI: X₁₁-ASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 12);

V_L-CDR2: X₁₃-TSN-X₁₄-X₁₅-X₁₆ (SEQ ID NO: 13); и

V_L-CDR3: X₁₇-QRSSYPLTF (SEQ ID NO: 14),

где:

X₁ выбирается из Asp (D), Ile (I) и Arg (R);

X₂ выбирается из Pro (P) и Ser (S):

X₃ выбирается из Asp (D), Ser (S) и Gly (G);

X₄ выбирается из Ala (А) и Thr (T);

X₅ выбирается из Ser (S) и Tyr (Y);

X₆ выбирается из Asn (N), Ala (А) и Ser (S);

X₇ выбирается из Glu (E), Asp (D), Pro (P) и Gin (Q);

X₈ выбирается из Lys (K) и Ser (S);

X₉ выбирается из Phe (F) и Val (V);

X₁₀ выбирается из Lys (K) и Gin (Q);

Х₁₁ выбирается из Ser (S) и Arg (R);

X₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

X₁₃ выбирается из Asn (N) и Ala (А); или X₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N);

Х₁₄ выбирается из Leu (L), Ser (S) и Arg (R);

X₁₅ выбирается из Pro (P), Ala (А) и Gin (Q);

X₁₆ выбирается из Ser (S) и Thr (T); и

Х₁₇ выбирается из Gin (Q) и His (H).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация соответствует определению в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация соответствует определению в Таблице 2.

В одном варианте осуществления любая из V_H-CDR1, V_H-CDR2, V_H-CDR3, V_L-CDR1, V_L-CDR2 и/или V_L-CDR3, определение которым дано выше, может быть охарактеризована как имеющая 1, 2, 3, 4, 5 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления любая из V_H-CDR1, V_H-CDR2, V_H-CDR3, V_L-CDR1, V_L-CDR2 и/или V_L-CDR3, определение которым дано выше, может быть охарактеризована как имеющая аминокислотную последовательность, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с определенной CDR или наборами CDR, определение которым было дано выше.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (и) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация выбирается из комбинаций №1, №2, №7, №14, №20, №26, №49, №50, №63, №65, №72, №79, №86 и №92, определение которым дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация выбирается из комбинаций №1, №2, №7, №14, №20, №26, №49, №50, №63, №65, №72, №79, №86 и №92, определение которым дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемая из группы, содержащей или состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 4, 5, 6, 7, 8, 100, 116, 117, 118 и 119; и

V_H-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1, выбираемая из группы, содержащей или состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 15 и 18, где отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно X₁₂ отсутствует;

V_L-CDR2, выбираемая из группы, содержащей или состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 16, 111 и 120; и

V_L-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемая из группы, содержащей или состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 4 и 5; и

V_H-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1 последовательности SEQ ID NO: 15, где Х₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно X₁₂ отсутствует;

V_L-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

V_L-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемая из группы, содержащей или состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 4, 5, 6 и 100; и

V_H-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1, выбираемая из группы, содержащей или состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 15 и 18, где Х₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует;

V_L-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

V_L-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_H-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемая из группы, содержащей или состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 4, 6 и 100; и

V_H-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит следующие три CDR:

V_L-CDR1, выбираемая из группы, содержащей или состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 15 и 18, где Х₁₂ отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует;

V_L-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

V_L-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №1, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №1, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 4 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 15, 16 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 15 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №2, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №2, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 4 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 16 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №7, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №7, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 5 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 15, 16 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 15 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №14, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №14, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 6 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 16 и 17; где X₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №20, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №20, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 7 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 16 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно X₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №26, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №26, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 8 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 16 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №49, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №49, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 100 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 15, 16 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 15 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №50, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №50, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 100 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 16 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно X₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №63, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №63, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 100 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 111 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №65 определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №65, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 116 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 16 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №72, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №72, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 117 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 16 и 17; где Х₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно Х₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №79, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №79, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 118 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 16 и 17; где X₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно X12 отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №86, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №86, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 119 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 18, 16 и 17; где X₁₂ в SEQ ID NO: 18 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно X₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №92, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR и (ii) трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация является комбинацией №92, определение которой дано в Таблице 2.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) трех CDR области HCVR, представленных как SEQ ID NO: 1, 4 и 3; и (ii) трех CDR области LCVR, представленных как SEQ ID NO: 15, 120 и 17; где X₁₂ в SEQ ID NO: 15 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), предпочтительно X₁₂ отсутствует.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_H-FR1: QVQLQQSGAELVRPGTSVKMSCKAAGYTFT (SEQ ID NO: 25);

V_H-FR2: WVKQRPGHGLEWIG (SEQ ID NO: 26);

V_H-FR3: KATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAIYYCVR (SEQ ID NO: 27);

V_H-FR4: WGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 28).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_H-FR1: QVQLQQSGAELVRPGTSVKMSCKAAGYTFT (SEQ ID NO: 25);

V_H-FR2: WVKQRPGHGLEWIG (SEQ ID NO: 26);

V_H-FR3: KATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAIYYCVR (SEQ ID NO: 27);

V_H-FR4: WGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 28).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_H-FR1: QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT (SEQ ID NO: 29);

V_H-FR2: WVRQAPGQGLEWIG (SEQ ID NO: 30);

V_H-FR3: RVTLTADTSISTAYMELSRLRSDDTVVYYCVR (SEQ ID NO: 31);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_H-FR1: QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT (SEQ ID NO: 29);

V_H-FR2: WVRQAPGQGLEWIG (SEQ ID NO: 30);

V_H-FR3: RVTLTADTSISTAYMELSRLRSDDTVVYYCVR (SEQ ID NO: 31);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_H-FR1: EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYTFT (SEQ ID NO: 33);

V_H-FR2: WVRQMPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 34);

V_H-FR3: QVTLSADKSISTAYLQLSSLKASDTAMYYCVR (SEQ ID NO: 35);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_H-FR1: EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYTFT (SEQ ID NO: 33);

V_H-FR2: WVRQMPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 34);

V_H-FR3: QVTLSADKSISTAYLQLSSLKASDTAMYYCVR (SEQ ID NO: 35);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_H-FR1: QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGYTFT (SEQ ID NO: 36);

V_H-FR2: WIRQAPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 37);

V_H-FR3: RFTLSADTAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCVR (SEQ ID NO: 38);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_H-FR1: QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGYTFT (SEQ ID NO: 36);

V_H-FR2: WIRQAPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 37);

V_H-FR3: RFTLSADTAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCVR (SEQ ID NO: 38);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_H-FR1: EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYTFT (SEQ ID NO: 39);

V_H-FR2: WVRQMPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 34);

V_H-FR3: QVTLSADKSISTAYLQLSSLKASDTAMYYCVR (SEQ ID NO: 35);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_H-FR1: EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYTFT (SEQ ID NO: 39);

V_H-FR2: WVRQMPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 34);

V_H-FR3: QVTLSADKSISTAYLQLSSLKASDTAMYYCVR (SEQ ID NO: 35);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_H-FR1: QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 40);

V_H-FR2: WIRQAPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 37);

V_H-FR3: RFTLSADTAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVR (SEQ ID NO: 41);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_H-FR1: QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 40);

V_H-FR2: WIRQAPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 37);

V_H-FR3: RFTLSADTAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVR (SEQ ID NO: 41);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_H-FR1: EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT (SEQ ID NO: 42);

V_H-FR2: WVRQMPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 34);

V_H-FR3: QVTLSADKSISTAYLQLSSLKASDTAMYYCVR (SEQ ID NO: 35);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_H-FR1: EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFT (SEQ ID NO: 42);

V_H-FR2: WVRQMPGKGLEWIG (SEQ ID NO: 34);

V_H-FR3: QVTLSADKSISTAYLQLSSLKASDTAMYYCVR (SEQ ID NO: 35);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_H-FR1: QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 40);

V_H-FR2: WIRQAPGKGLEWVG (SEQ ID NO: 43);

V_H-FR3: RFTLSADTAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVR (SEQ ID NO: 41);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_H-FR1: QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 40);

V_H-FR2: WIRQAPGKGLEWVG (SEQ ID NO: 43);

V_H-FR3: RFTLSADTAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVR (SEQ ID NO: 41);

V_H-FR4: WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 32).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_L-FR1: QIVLTQSPTIMSASPGEKVTITC (SEQ ID NO: 44);

V_L-FR2: WFQQKTGTSPRLWIY (SEQ ID NO: 45);

V_L-FR3: GVPARFSGSGSGTS-X₁₈-SLTISRMEAEDAATYYC (SEQ ID NO: 46);

V_L-FR4: GAGTKLELK (SEQ ID NO: 47),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_L-FR1: QIVLTQSPTIMSASPGEKVTITC (SEQ ID NO: 44);

V_L-FR2: WFQQKTGTSPRLWIY (SEQ ID NO: 45);

V_L-FR3: GVPARFSGSGSGTS-X₁₈-SLTISRMEAEDAATYYC (SEQ ID NO: 46);

V_L-FR4: GAGTKLELK (SEQ ID NO: 47)

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно Х₁₈ - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_L-FR1: DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 48);

V_L-FR2: WFQQKPGKAPKLWIY (SEQ ID NO: 49);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTE-X₁₈-TLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 50);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_L-FR1: DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 48);

V_L-FR2: WFQQKPGKAPKLWIY (SEQ ID NO: 49);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTE-X₁₈-TLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 50);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_L-FR1: EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITC (SEQ ID NO: 52);

V_L-FR2: WFQQKPDQSPKLWIY (SEQ ID NO: 53);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTD-X₁₈-TLTINSLEAEDAATYYC (SEQ ID NO: 54);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X18 - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_L-FR1: EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITC (SEQ ID NO: 52);

V_L-FR2: WFQQKPDQSPKLWIY (SEQ ID NO: 53);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTD-X₁₈-TLTINSLEAEDAATYYC (SEQ ID NO: 54);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_L-FR1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 55);

V_L-FR2: WFQQKPGQAPRLWIY (SEQ ID NO: 56);

V_L-FR3: GIPARFSGSGSGTD-X₁₈-TLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 57);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_L-FR1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 55);

V_L-FR2: WFQQKPGQAPRLWIY (SEQ ID NO: 56);

V_L-FR3: GIPARFSGSGSGTD-X₁₈-TLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 57);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_L-FR1: DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 48);

V_L-FR2: WYQQKPGKAPKLWIY (SEQ ID NO: 58);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTE-X₁₈-TLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 50);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_L-FR1: DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 48);

V_L-FR2: WYQQKPGKAPKLWIY (SEQ ID NO: 58);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTE-X₁₈-TLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 50);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Tyr (Y).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_L-FR1: DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 48);

V_L-FR2: WYQQKPGKAPKLWIY (SEQ ID NO: 58);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTE-X₁₈-TLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 50);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Phe (F).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_L-FR1: DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 48);

V_L-FR2: WYQQKPGKAPKLWIY (SEQ ID NO: 58);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTE-X₁₈-TLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 50);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Phe (F).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_L-FR1: EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITC (SEQ ID NO: 52);

V_L-FR2: WYQQKPDQSPKLWIY (SEQ ID NO: 59);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTD-X₁₈-TLTINSLEAEDAATYYC (SEQ ID NO: 54);

VL-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Phe (F).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_L-FR1: EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITC (SEQ ID NO: 52);

V_L-FR2: WYQQKPDQSPKLWIY (SEQ ID NO: 59);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTD-X₁₈-TLTINSLEAEDAATYYC (SEQ ID NO: 54);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Phe (F).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_L-FR1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 55);

V_L-FR2: WYQQKPGQAPRLWIY (SEQ ID NO: 60);

V_L-FR3: GIPARFSGSGSGTD-X₁₈-TLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 57);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Phe (F).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_L-FR1: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (SEQ ID NO: 55);

V_L-FR2: WYQQKPGQAPRLWIY (SEQ ID NO: 60);

V_L-FR3: GIPARFSGSGSGTD-X₁₈-TLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 57);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Phe (F).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

V_L-FR1: DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 48);

V_L-FR2: WFQQKPGKAPKLWIY (SEQ ID NO: 49);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTE-X₁₈-TLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 50);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Phe (F).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, которая содержит следующие четыре FR:

V_L-FR1: DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 48);

V_L-FR2: WFQQKPGKAPKLWIY (SEQ ID NO: 49);

V_L-FR3: GVPSRFSGSGSGTE-X₁₈-TLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 50);

V_L-FR4: GGGTKVEIK (SEQ ID NO: 51),

где:

X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), предпочтительно X₁₈ - Phe (F).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области LCVR, при этом указанная комбинация соответствует определению в Таблице 3.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) четырех FR области HCVR и (ii) четырех FR области LCVR, при этом указанная комбинация соответствует определению в Таблице 3.

В одном варианте осуществления любая из V_H-FR1, V_H-FR2, V_H-FR3, V_H-FR4, V_l-FR1, V_L-FR2, V_L-FR3 и/или V_L-FR4, определение которым было дано выше, может быть охарактеризована как имеющая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления любая из V_H-FR1, V_H-FR2, V_H-FR3, V_H-FR4. V_L-FR1, V_L-FR2, V_L-FR3 и/или V_L-FR4, определение которым было дано выше, может быть охарактеризована как имеющая аминокислотную последовательность, имеющую идентичной минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с определенной FR или наборами FR, определение которым было дано ранее.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из:

- V_H-FR1, описанной ранее,

- V_H-CDR1, описанной ранее,

- V_H-FR2, описанной ранее,

- V_H-CDR2, описанной ранее,

- V_H-FR3 описанной ранее,

- V_H-CDR3 описанной ранее, и

- V_H-FR4, описанной ранее.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из:

- V_H-FR1, выбираемой из SEQ ID NO 25, 29, 33, 36, 39, 40 и 42;

- V_H-CDR1, выбираемой из SEQ ID NO 1;

- V_H-FR2, выбираемой из SEQ ID NO 26, 30, 34, 37 и 43;

- V_H-CDR2, выбираемой из SEQ ID NO 2;

- V_H-FR3, выбираемой из SEQ ID NO 27, 31, 35, 38 и 41;

- V_H-CDR3, выбираемой из SEQ ID NO 3; и

- V_H-FR4, выбираемой из SEQ ID NO 28 и 32.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из:

- V_H-FR1, выбираемой из SEQ ID NO 25, 29, 33, 36, 39, 40 и 42;

- V_H-CDR1, выбираемой из SEQ ID NO 1;

- V_H-FR2, выбираемой из SEQ ID NO 26, 30, 34, 37 и 43;

- V_H-CDR2, выбираемой из SEQ ID NO 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 100, 116, 117, 118 и 119;

- V_H-FR3, выбираемой из SEQ ID NO 27, 31, 35, 38 и 41;

- V_H-CDR3, выбираемой из SEQ ID NO 3; и

- V_H-FR4, выбираемой из SEQ ID NO 28 и 32.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящей из V_H-FR1, V_H-CDR1, V_H-FR2, V_H-CDR2, V_H-FR3, V_H-CDR3 и V_H-FR4, при этом указанная комбинация соответствует определению в Таблице 4.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 61; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 61.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 62; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 62.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 63; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 63.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 64; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 64.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 65; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 65.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 66; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 66.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 67; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 67.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 68; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 68.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 69; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 69.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 70; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 70.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 101; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 101.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 121; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 121.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 122; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 122.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 123; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 123.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 124; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 124.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из:

- V_L-FR1, описанной ранее,

- V_L-CDR1, описанной ранее,

- V_L-FR2, описанной ранее,

- V_L-CDR2, описанной ранее,

- V_L-FR3, описанной ранее,

- V_L-CDR3, описанной ранее, и

- V_L-FR4, описанной ранее.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из:

- V_L-FR1, выбираемой из SEQ ID NO 44, 48, 52 и 55;

- V_L-CDR1, выбираемой из SEQ ID NO 12;

- V_L-FR2, выбираемой из SEQ ID NO 45, 49, 53, 56, 58, 59 и 60;

- V_L-CDR2, выбираемой из SEQ ID NO 13;

- V_L-FR3, выбираемой из SEQ ID NO 46, 50, 54 и 57;

- V_L-CDR3, выбираемой из SEQ ID NO 14; и

- V_L-FR4, выбираемой из SEQ ID NO 47 и 51.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR, содержащую или состоящую из:

- V_L-FR1, выбираемой из SEQ ID NO 44, 48, 52 и 55;

- V_L-CDR1, выбираемой из SEQ ID NO 15 и 18;

- V_L-FR2, выбираемой из SEQ ID NO 45, 49, 53, 56, 58, 59 и 60;

- V_L-CDR2, выбираемой из SEQ ID NO 16, 19, 20, 22, 111 и 120;

- V_L-FR3, выбираемой из SEQ ID NO 46, 50, 54 и 57;

- V_L-CDR3, выбираемой из SEQ ID NO 17 и 21; и

- V_L-FR4, выбираемой из SEQ ID NO 47 и 51.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из комбинации V_L-FR1, V_L-CDR1, V_L-FR2, V_L-CDR2, V_L-FR3, V_L-CDR3 и V_L-FR4, при этом указанная комбинация соответствует определению в Таблице 5.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из V_L-FR1, V_L-CDR1, V_L-FR2, V_L-CDR2, V_L-FR3, V_L-CDR3 и V_L-FR4, определение которым было дано ранее, где X₁₈ - Phe (F), если Х₁₂ не отсутствует (т.е. если Х₁₂ - любая из Asn (N), Ser (S) или Gly (G)). В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из комбинации V_L-FR1, V_L-CDR1, V_L-FR2, V_L-CDR2, V_L-FR3, V_L-CDR3 и V_L-FR4, определение которым было дано ранее, где X₁₈ выбирается из Tyr (Y) и Phe (F), если Х₁₂ отсутствует.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 71, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 71.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 72.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 73.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 74, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 74.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 75, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 75.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 76, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 76.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 77, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 77.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 78, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 78.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 79, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 79.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 80, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 80.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 102, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 102.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 112, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 112.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 72, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 125.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 128, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G); и X₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 128.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательностей SEQ ID NO: 71-80, 102, 112, 125 или 128, где Х₁₂ отсутствует.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 81; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 81.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 82; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 82.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 83; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 83.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 84; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 84.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 85; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 86; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 86.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 87; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 87.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 88; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 88.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 89; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 89.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 90; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 90.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 103; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 103.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 113; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 113.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 126; или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 126.

В предпочтительном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCVR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 129, где Х₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 129.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, определение которой было дано выше; и

- LCVR, определение которой было дано выше.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 101, 121, 122, 123 и 124; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 101, 121, 122, 123 или 124; и

- LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 102, 112, 125 и 128, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G), и Х₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 102, 112, 125 или 128.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 101, 121, 122, 123 и 124; или HCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 101, 121, 122, 123 или 124; и

- LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 103, 113, 126 и 129, где Х₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N); или LCVR, содержащую или состоящую из последовательности не-CDR областей, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей SEQ ID NO: 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 103, 113, 126 или 129.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X,2 выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ Ш N0: 75, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X,2 выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 72, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 73, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 74, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 75, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 76, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 77, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 78, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 79, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 80, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 102, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 112, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 125, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 61 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 62 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 63 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему, изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 64 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержал HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 65 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 66 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 67 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 68 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 69 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 70 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 101 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 121 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 122 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 123 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 81.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 82.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 84.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 85.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 86.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 87.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 88.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 89.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 90.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 113.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCVR с SEQ ID NO: 124 и LCVR с SEQ ID NO: 126.

В одном варианте осуществления любая из HCVR и/или LCVR, определение которым было дано выше, может быть охарактеризована как имеющая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления последовательность не-CDR областей любой из HCVR и/или LCVR, определение которым было дано выше, может быть охарактеризована как имеющая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления любая из HCVR и/или LCVR, определение которым было дано выше, может быть охарактеризована как имеющая аминокислотную последовательность, которая имеет идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с определенной HCVR и/или LCVR, определение которым было дано выше.

В одном варианте осуществления последовательность не-CDR областей любой из HCVR и/или LCVR, определение которым было дано выше, может быть охарактеризована как имеющая аминокислотную последовательность, которая имеет идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с последовательностью не-CDR областей определенной HCVR и/или LCVR, определение которым было дано выше.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит полностью или, по существу, полностью человеческую константную область тяжелой цепи (которая сокращается здесь как HCCR или С_Н) и/или константную область легкой цепи (которая сокращается здесь как LCCR или C_L).

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 91.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 114.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 115.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 91, 114 или 115; и

- LCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 91; и

- LCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 114; и

- LCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 115: и

- LCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления HCCR с SEQ ID NO: 91, 114 или 115 может быть охарактеризована как имеющая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления LCCR с SEQ ID NO: 92 может быть охарактеризована как имеющая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления HCCR с SEQ ID NO: 91, 114 или 115 и/или LCCR с SEQ ID NO: 92 может быть охарактеризована как имеющая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления HCCR с SEQ ID NO: 91, 114 или 115 может быть охарактеризована как имеющая аминокислотную последовательность, которая имеет идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 91, 114 или 115, соответственно.

В одном варианте осуществления LCCR с SEQ ID NO: 92 может быть охарактеризована как имеющая аминокислотную последовательность, которая имеет идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления HCCR с SEQ ID NO: 91, 114 или 115 и/или LCCR с SEQ ID NO: 92 может быть охарактеризована как имеющая аминокислотную последовательность, которая имеет идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 91, 114 или 115 и/или SEQ ID NO: 92, соответственно.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCCR и LCCR, содержащие аминокислотные последовательности, которые гомологичны аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 91, 114 или 115, и SEQ ID NO: 92, соответственно, и при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент сохраняют желаемые функциональные свойства.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат полностью или практически полностью мышиную HCCR и/или LCCR.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 93.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат LCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 94.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 93; и

- LCCR, содержащую или состоящую из последовательности SEQ ID NO: 94.

В одном варианте осуществления HCCR с SEQ ID NO: 93 может быть охарактеризована как имеющая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления LCCR с SEQ ID NO: 94 может быть охарактеризована как имеющая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления HCCR с SEQ ID NO: 93 и/или LCCR с SEQ ID NO: 94 могут быть охарактеризованы как имеющие 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 или более аминокислот, замещаемых другой аминокислотой.

В одном варианте осуществления HCCR с SEQ ID NO: 93 может быть охарактеризована как имеющая аминокислотную последовательность, которая имеет идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 93.

В одном варианте осуществления LCCR с SEQ ID NO: 94 может быть охарактеризована как имеющая аминокислотную последовательность, которая имеет идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 94.

В одном варианте осуществления HCCR с SEQ ID NO: 93 и/или LCCR с SEQ ID NO: 94 могут быть охарактеризованы как имеющие аминокислотную последовательность, которая имеет идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 93 и/или SEQ ID NO: 94, соответственно.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат HCCR и LCCR, содержащие аминокислотные последовательности, которые являются гомологичными аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 93 и SEQ ID NO: 94, соответственно, и при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент сохраняют желаемые функциональные свойства.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению являются мышиным, химерным или гуманизированным антителом или его фрагментом.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению являются мышиным антителом или его фрагментом.

«Мышиное антитело или его связывающий фрагмент» в контексте настоящего документа включает антитела и их связывающие фрагменты, в которых вариабельная область (включая CDR и FR) и константная область получены от мыши.

В одном варианте осуществления мышиное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области LCVR, представленные в SEQ ID NO: 12, 13 и 14, где, если применимо, Х₁₂ отсутствует.

В предпочтительном варианте осуществления мышиное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 1, 4 и 3; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области LCVR, представленные в SEQ ID NO: 15, 16 и 17, где, если применимо, X₁₂ отсутствует.

В предпочтительном варианте осуществления мышиное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три, еще предпочтительнее четыре FR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 25, 26, 27 и 28; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три, еще предпочтительнее четыре FR области SEQ ID NO: 44, 45, 46 и 47, где, если применимо, X₁₈ - Tyr (Y).

В предпочтительном варианте осуществления мышиное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению, таким образом, может содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 61; и/или LCVR, представленную в SEQ ID NO: 71 или 81.

В предпочтительном варианте осуществления мышиное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению, таким образом, может содержать HCCR, представленную в SEQ ID NO: 93; и/или LCCR, представленную в SEQ ID NO: 94.

В предпочтительном варианте осуществления мышиное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению, таким образом, может содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 61; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 93.

В предпочтительном варианте осуществления мышиное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению, таким образом, может содержать легкую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 71 или 81; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 94.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению являются химерным антителом или его связывающим фрагментом.

«Химерное антитело или его связывающий фрагмент» в контексте настоящего документа в широком смысле означает антитело или его связывающий фрагмент, содержащий первую аминокислотную последовательность, соединенную со второй аминокислотной последовательностью, с которой она естественным образом не соединяется в природе. Эти аминокислотные последовательности могут обычно существовать в отдельных белках, которые соединяются в слитом белке, или они могут обычно существовать в одном и том же белке, но размещаются в слитом белке иным образом. Химерный белок может быть создан, например, посредством химического синтеза или посредством создания и трансляции полинуклеотида, в котором пептидные области закодированы с необходимой связью. Термин «химерное антитело или его связывающий фрагмент» охватывает здесь антитела и их связывающие фрагменты, в которых

(a) константная область или ее часть изменена, заменена или обменена таким образом, чтобы вариабельная область была соединена с константной областью другого или измененного класса, эффекторной функцией и/или видом либо полностью другой молекулой, которая придает новые свойства химерному антителу, например, ферментом, токсином, гормоном, фактором роста, лекарственным средством и т.д.; или

(b) вариабельная область или ее часть изменена, заменена или обменена с вариабельной областью или ее частью, имеющей другую или измененную специфичность к антигену; или с соответствующими последовательностями от другого вида или от другого класса или подкласса антител.

В одном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат тяжелую цепь и/или легкую цепь, содержащую константную область человека и вариабельную область мыши (включая CDR мыши и FR мыши).

В одном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь человека и легкую цепь мыши; или тяжелую цепь мыши и легкую цепь человека.

В одном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области LCVR, представленные в SEQ ID NO: 12, 13 и 14.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 1, 4 и 3; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области LCVR, представленные в SEQ ID NO: 15, 16 и 17.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 1, 4 и 3; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области LCVR, представленные в SEQ ID NO: 18, 111 или 120, и 17, соответственно.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре FR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 25, 26, 27 и 28; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре FR области LCVR, представленные в SEQ ID NO: 44, 45, 46 и 47.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре FR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 25, 26, 27 и 28; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре FR области LCVR, представленные в SEQ ID NO: 48, 58, 50 и 51.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 61; и/или LCVR, представленную в SEQ ID NO: 71 или 81.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 61; и/или LCVR, представленную в SEQ ID NO: 112, 113, 125, 126, 128 или 129.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать человеческую HCCR, представленную в SEQ ID NO: 91, 114 или 115; и/или человеческую LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать человеческую HCCR, представленную в SEQ ID NO: 91; и/или человеческую LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать человеческую HCCR, представленную в SEQ ID NO: 114; и/или человеческую LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать человеческую HCCR, представленную в SEQ ID NO: 115; и/или человеческую LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать человеческую HCCR, представленную в SEQ ID NO: 91, 114 или 115; и/или мышиную LCCR, представленную в SEQ ID NO: 94.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать человеческую HCCR, представленную в SEQ ID NO: 91; и/или мышиную LCCR, представленную в SEQ ID NO: 94.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать человеческую HCCR, представленную в SEQ ID NO: 114; и/или мышиную LCCR, представленную в SEQ ID NO: 94.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать человеческую HCCR, представленную в SEQ ID NO: 115; и/или мышиную LCCR, представленную в SEQ ID NO: 94.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может также содержать мышиную HCCR, представленную в SEQ ID NO: 93; и/или человеческую LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 61; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91, 114 или 115.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 61; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 61; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 114.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 61; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 115.

В предпочтительном варианте осуществления химерное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению может, таким образом, содержать легкую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 71 или 81; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению являются гуманизированным антителом или его связывающим фрагментом.

«Гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент» в контексте настоящего документа означает химерное антитело или его связывающий фрагмент, которые содержат минимальную последовательность, происходящую из иммуноглобулина, не относящегося к человеку. Сюда включаются антитела, созданные клеткой, не относящейся к человеку, имеющей вариабельные и константные области, которые были изменены таким образом, чтобы в большей степени напоминать антитела, которые были бы созданы человеческой клеткой, например, посредством изменения аминокислотной последовательности антитела, не относящегося к человеку, для включения аминокислот, присутствующих в последовательностях зародышевого типа человеческого иммуноглобулина. Гуманизированные антитела или их связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями зародышевого типа человеческого иммуноглобулина (например, мутациями, введенными случайным или сайт-специфическим мутагенезом in vitro или соматической мутацией in vivo), например, в CDR. Термин «гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент» также включает антитела и их связывающий фрагмент, в которых последовательности CDR, полученные от зародышевой линии другого вида млекопитающих, например, мыши, были привиты к человеческим каркасным областям. Другими словами, термин «гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент» означает антитело или его связывающий фрагмент, в которых CDR реципиентного человеческого антитела заменяются CDR от донорского антитела, не относящегося к человеку, например, антитела мыши. Гуманизированные антитела или их связывающие фрагменты также могут содержать остатки донорского происхождения в каркасных последовательностях. Гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент также могут содержать минимум часть константной области человеческого иммуноглобулина. Гуманизированные антитела и их связывающие фрагменты также могут содержать остатки, которые отсутствуют и у реципиентного антитела, и в последовательностях импортированных CDR или FR. Гуманизация может осуществляться при помощи методов, известных в данной области (например, Jones et al., 1986. Nature. 321(6069):522-5; Riechmann et al., 1988. Nature. 332(6162):323-7; Verhoeyen et al., 1988. Science. 239(4847): 1534-6; Presta, 1992. Curr Opin Biotechnol. 3(4):394-8; Патент US 4,816,567), включая такие методы, как «сверхгуманизация» антител (например, Tan et al., 2002. J Immunol. 169(2):1119-25) и «рекомбинация поверхностных остатков» (resurfacing) (например, Staelens et al., 2006. Mol Immunol. 43(8):1243-57; Roguska et al., 1994. Proc Natl Acad Sci USA. 91(3):969-73).

Методы для гуманизации антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению хорошо известны в данной области и будут подробно изложены далее в разделе «Примеры». Выбор человеческих вариабельных доменов как легких, так и тяжелых цепей, которые будут использоваться в создании гуманизированного антитела или его связывающего фрагмента, очень важен для снижения антигенности. В соответствии с так называемым методом «наилучшего приближения» поиск последовательности вариабельного домена антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению осуществляется по всей библиотеке известных человеческих последовательностей вариабельного домена. Затем человеческая последовательность, которая ближе всего к последовательности мыши, принимается как человеческая каркасная область (FR) для гуманизированного антитела (Sims et al., 1993. J Immunol. 151(4):2296-308; Chothia & Lesk, 1987. J Mol Biol. 196(4):901-17).

По другому методу для гуманизации антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению используется определенная каркасная область от консенсусной последовательности всех человеческих антител определенной подгруппы легкой или тяжелой цепей. Одну и ту же каркасную область можно использовать для нескольких разных гуманизированных антител (Carter et al., 1992. Proc Natl Acad Sci USA. 89(10):4285-9; Presta et al., 1993. J Immunol. 151(5):2623-32). Также важно, чтобы гуманизация антител осуществлялась с сохранением высокой аффинности к hCD45RC и других благоприятных биологических свойств. Для достижения этой цели, согласно предпочтительному методу, гуманизированные антитела и их связывающие фрагменты создают при помощи процесса анализа исходных последовательностей и различных концептуальных гуманизированных продуктов с использованием трехмерных моделей исходных и гуманизированных последовательностей. Трехмерные модели иммуноглобулина общедоступны и известны специалистам в данной области. Имеются компьютерные программы, которые иллюстрируют и демонстрируют вероятные трехмерные структуры выбранных кандидатных последовательностей иммуноглобулина. Изучение таких демонстраций позволяет выполнить анализ вероятной роли остатков в функционировании кандидатной последовательности иммуноглобулина, т.е. анализ остатков, которые влияют на способность кандидатного иммуноглобулина связываться с эпитопом. Таким образом остатки CDR можно выбирать и комбинировать от консенсусной и импортной последовательностей таким образом, чтобы получить необходимую характеристику антитела, например, повышенную аффинность к hCD45RC. В общем, остатки CDR напрямую и существеннее всего влияют на связывание антигена.

Другой метод для гуманизации антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению заключается в использовании несущих частей трансгенных или трансхромосомных животных человеческой иммунной системы для иммунизации. У таких животных, являющихся хозяином, их гены иммуноглобулина заменили на функциональные гены иммуноглобулина человека. Таким образом, антитела, созданные такими животными или в гибридомах, полученных от В-клеток таких животных, уже являются гуманизированными. Примеры такого трансгенного или трансхромосомного животного включают, помимо прочего:

- мышей XenoMouse (Abgenix, Фримонт, Калифорния), описанных в Патентах US 5,939,598, US 6,075,181, US 6,114,598, US 6,150,584 и US 6,162,963;

- мышей HuMAb Mouse^® (Medarex, Inc.), описанных в публикациях Lonberg et al., 1994. Nature. 368(6474):856-859; Lonberg & Huszar, 1995. Int Rev Immunol. 13(1):65-93; Harding & Lonberg, 1995. Ann N Y Acad Sci. 764:536-46; Taylor et al., 1992. Nucleic Acids Res. 20(23):6287-95; Chen et al., 1993. Int Immunol. 5(6):647-56; Tuaillon et al., 1993. Proc Natl Acad Sci USA. 90(8):3720-4; Choi et al., 1993. Nat Genet. 4(2): 117-23; Chen et al., 1993. EMBO J. 12(3):821-30; Tuaillon et al., 1994. J Immunol. 152(6):2912-20; Taylor et al., 1994. Int Immunol. 6(4):579-91; Fishwild et al., 1996. Nat Biotechnol. 14(7):845-51;

- мышей KM Mouse^®, описанных в Патентной заявке WO 2002043478;

- мышей ТС mice, описанных в публикации Tomizuka et al., 2000. Proc Natl Acad Sci USA. 97(2):722-7; и

- крыс OmniRat™ (OMT, Inc.), описанных в Патентной заявке WO 2008151081; Geurts et al., 2009. Science. 325(5939):433; Menoret et al., 2010. Eur J Immunol. 40(10):2932-41; Osborn et al., 2013. J Immunol. 190(4): 1481-90.

Гуманизированные антитела и их связывающие фрагменты также могут быть получены с использованием разных других методов, например, при использовании для иммунизации других трансгенных животных, которые были созданы для экспрессии спектра антител человека (Jakobovitz et al., 1993. Nature. 362(6417):255-8), или посредством выбора спектров антител с помощью методов фагового дисплея. Такие методы известны специалисту и могут применяться, начиная с моноклональных антител или их связывающих фрагментов, что описано в настоящей заявке.

В некоторых вариантах осуществления антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению, содержащие HCVR и LCVR (или их CDR), могут содержать первый константный домен (С_Н1 и/или C_L), аминокислотная последовательность которого является полностью или, главным образом, человеческой.

В одном варианте осуществления, особенно когда антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению предназначено для применения в терапевтических целях для человека, обычно вся константная область или минимум ее часть имеют полностью или, по существу, человеческую аминокислотную последовательность. Таким образом, один или более или любая комбинация С_Н1 домена, шарнирной области, С_Н2 домена, С_Н3 домена и C_L домена (и С_Н4 домена, если он присутствует) могут быть полностью или, по существу, человеческими в отношении их аминокислотной последовательности. Преимущество заключается в том, что С_Н1 домен, шарнирная область, С_Н2 домен, С_Н3 домен и C_L домен (и С_Н4 домен, если он присутствует) все могут иметь полностью или, по существу, человеческую аминокислотную последовательность.

Термин «по существу человеческая» в контексте константной области гуманизированного или химерного антитела или его связывающего фрагмента означает идентичность аминокислотной последовательности минимум 70%, предпочтительно минимум 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с человеческой константной областью.

Термин «человеческая аминокислотная последовательность» в данном контексте означает аминокислотную последовательность, которая закодирована геном иммуноглобулина человека, который включает зародышевую линию, реаранжированные гены и гены с соматической мутацией. Настоящее изобретение также включает белки, содержащие константные домены «человеческой» последовательности, которые были изменены посредством одного или более аминокислотных добавлений, удалений или замен в отношении человеческой последовательности, за исключением тех вариантов осуществления, в которых явно требуется присутствие «полностью человеческой шарнирной области».

Присутствие «полностью человеческой шарнирной области» в антителе или его связывающем фрагменте по настоящему изобретению может быть желательным как для минимизации иммуногенности, так и для оптимизации стабильности антитела. Считается, что одна или более аминокислотных замен, вставок или удалений могут осуществляться в константной области тяжелой и/или легкой цепи, особенно в Fc области. Аминокислотные замены могут приводить к замене замещенной аминокислоты другой природной аминокислотой либо неприродной или модифицированной аминокислотой. Другие структурные модификации также допускаются, например, изменения в профиле гликозилирования (например, посредством добавления или удаления сайтов N- или О-сцепленного гликозилирования). В зависимости от предназначения антитела или его связывающего фрагмента может быть желательно модифицировать антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению в отношении его свойств связывания с Fc рецепторами, например, для модуляции эффекторной функции. Например, в Fc область могут вводиться цистеиновый остаток (остатки), что обеспечивает возможность образования межцепной дисульфидной связи в данной области. Гомодимерное антитело, созданное таким образом, может иметь улучшенную эффекторную функцию (Caron et al., 1992. J Exp Med. 176(4): 1191-5; Shopes, 1992. J Immunol. 148(9):2918-22).

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области LCVR, представленные в SEQ ID NO: 12, 13 и 14, где, если применимо, Х₁₂ отсутствует или является Ser (S).

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области HCVR и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области LCVR в комбинации, представленной в Таблице 2, где, если применимо, X₁₂ отсутствует или является Ser (S).

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1 с SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 100, 116, 117, 118 и 119; и

V_H-CDR3 с SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1, выбираемую из SEQ ID NO: 15 и 18, где X₁₂ отсутствует или является Ser (S);

V_L-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 16, 19, 20, 22, 111 и 120; и

V_L-CDR3, выбираемую из SEQ ID NO: 17 и 21.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1 с SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 4 и 5; и

V_H-CDR3 с SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1 с SEQ ID NO: 15, где Х₁₂ отсутствует;

V_L-CDR2 с SEQ ID NO: 16; и

V_L-CDR3 с SEQ ID NO: 17.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1 с SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 6, 7 и 8; и

V_H-CDR3 с SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1 с SEQ ID NO: 18, где Х₁₂ отсутствует;

V_L-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 16 и 19; и

V_L-CDR3 с SEQ ID NO: 17.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1 с SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 9, 10 и 11; и

V_H-CDR3 с SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1 с SEQ ID NO: 18, где X₁₂ отсутствует;

V_L-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 19, 20 и 22; и

V_L-CDR3, выбираемую из SEQ ID NO: 17 и 21.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1 с SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2 с SEQ ID NO: 100; и

V_H-CDR3 с SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1 с SEQ ID NO: 18, где X₁₂ - Ser (S);

V_L-CDR2 с SEQ ID NO: 16; и

V_L-CDR3 с SEQ ID NO: 17.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_H-CDR1 с SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 6, 7, 8 и 100; и

V_H-CDR3 с SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

V_L-CDR1 с SEQ ID NO: 18, где Х₁₂ отсутствует или является Ser (S);

V_L-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 16 и 19; и

V_L-CDR3 с SEQ ID NO: 17.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация выбирается из комбинаций №1, №7, №14, №26 и №50, представленных в Таблице 2, где, если применимо, X₁₂ отсутствует или является Ser (S).

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре FR области HCVR и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре FR области LCVR, представленные в Таблице 3.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_h-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 29, 33, 36, 39, 40 и 42;

V_H-FR2, выбираемую из SEQ ID NO: 30, 34, 37 и 43;

V_H-FR3, выбираемую из SEQ ID NO: 31, 35, 38 и 41; и

V_H-FR4 с SEQ ID NO: 32; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_l-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 48, 52 и 55;

V_L-FR2 выбираемую из SEQ ID NO: 49, 53, 56, 58, 59 и 60;

v_l-fr3 выбираемую из SEQ ID NO: 50, 54 и 57; и

V_L-FR4 c SEQ ID NO:51.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области LCVR, при этом указанная комбинация выбирается из комбинаций №9, №10, №11, №12, №13, №14, №16, №17, №18, №19, №20, №21, №23, №24, №25, №26, №27, №28, №30, №31, №32, №33, №34, №35, №37, №38, №39, №40, №41, №42, №44, №45, №46, №47, №48, №49, №51, №52, №53, №54, №55 и №56, представленных в Таблице 3.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_h-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 29, 33 и 36;

V_H-FR2, выбираемую из SEQ ID NO: 30, 34 и 37;

V_H-FR3, выбираемую из SEQ ID NO:31, 35 и 38; и

V_H-FR4 с SEQ ID NO: 32; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_l-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 48, 52 и 55;

V_L-FR2, выбираемую из SEQ ID NO: 49, 53 и 56;

V_L-FR3, выбираемую из SEQ ID NO: 50, 54 и 57; и

V_L-FR4 c SEQ ID NO:51.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области LCVR, при этом указанная комбинация выбирается из комбинаций №9, №10, №11, №16, №17, №18, №23, №24 и №25, представленных в Таблице 3.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать:

- HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 101, 121, 122, 123 и 124; и/или

- LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 103, 113, 126 и 129.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать любую комбинацию HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 101, 121, 122, 123 и 124, и LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 103, 113, 126 и 129, что было подробно описано выше.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать:

- HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 62, 63 и 64; и/или

- LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 82, 83 и 84.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать любую комбинацию HCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 62, 63 и 64, и LCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 82, 83 и 84, что было подробно описано выше.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать:

- HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67 и 101; и/или

- LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 82, 83, 84, 85 и 103.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать любую комбинацию HCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67 и 101, и LCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 82, 83, 84, 85 и 103, что было подробно описано выше.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 62, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 82.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 62, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 83.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 62, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 84.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 63, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 82.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 63, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 83.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 63, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 84.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 64, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 82.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 64, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 83.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 64, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 84.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 101, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 101, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 103.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 65, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 65, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 103.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 62, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 101, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 82.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 121, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 122, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 123, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 124, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 63, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 67, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 85.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать HCVR, представленную в SEQ ID NO: 67, и LCVR, представленную в SEQ ID NO: 103.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать HCCR, представленную в SEQ ID NO: 91, 114 или 115; и/или LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать HCCR, представленную в SEQ ID NO: 91; и/или LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать HCCR, представленную в SEQ ID NO: 114; и/или LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать HCCR, представленную в SEQ ID NO: 115; и/или LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 или 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91, 114 или 115.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 или 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 или 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 114.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 или 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 115.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63 или 64; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91, 114 или 115.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63 или 64; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63 или 64; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 114.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63 или 64; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 115.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67 и 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91, 114 или 115.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67 и 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67 и 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 114.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67 и 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 115.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 114.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 115.

В одном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать легкую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 или 103; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 92.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать легкую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 82, 83 или 84; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 92.

В предпочтительном варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать легкую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 82, 83, 84, 85 или 103; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 92.

В определенном варианте осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент, определение которым было дано здесь ранее, содержат CDR1 области LCVR, представленную в SEQ ID NO: 12 (предпочтительно представленную в SEQ ID NO: 15 или 18, предпочтительнее представленную в SEQ ID NO: 15), где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G). В этом варианте осуществления, где X₁₂ не отсутствует, аминокислотный остаток в позиции L71 по Kabat области LCVR - предпочтительно Phe (F); другими словами, мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению предпочтительно содержит FR3 области LCVR, представленную в SEQ ID NO: 46, 50, 54 или 57, где X₁₈ - Phe (F). При выполнении этих условий (т.е. Х₁₂ не отсутствует и занимает предпочтительно позицию L71 по Kabat (т.е. X₁₈) и является Phe (F)) применяется любой из указанных выше вариантов осуществления, относящихся к мышиному, химерному или гуманизированному антителу или связывающему фрагменту по настоящему изобретению.

Таким образом, по данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению содержат минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области HCVR, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3; и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области LCVR, представленные в SEQ ID NO: 12, 13 и 14, где, если применимо, Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению содержат минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области HCVR и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее три CDR области LCVR в комбинации, представленной в Таблице 2, где, если применимо, Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

v_h-cdr1 с SEQ ID NO: I;

V_H-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 и 100; и

V_H-CDR3 с SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

v_l-cdr1, выбираемую из SEQ ID NO: 15 и 18, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

V_L-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 16, 19, 20, 22, 111 и 120; и

v_l-cdr3, выбираемую из SEQ ID NO: 17 и 21.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

v_h-cdr1 с SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 4, 5, 6, 8, 100, 116, 117, 118 и 119; и

v_h-cdr3 с SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

v_l-cdr1, выбираемую из SEQ ID NO: 15 и 18, где X₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

V_L-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 16, 111 и 120; и

v_l-cdr3 с SEQ ID NO: 17.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению содержат:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

v_h-cdr1 с SEQ ID NO: 1;

V_H-CDR2, выбираемую из SEQ ID NO: 4 и 5; и

v_h-cdr3 с SEQ ID NO: 3; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее следующие три определяющие комплементарность области (CDR):

v_l-cdr1 с SEQ ID NO: 15, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

V_L-CDR2 с SEQ ID NO: 16; и

v_l-cdr3 с SEQ ID NO: 17.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению содержат комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее трех CDR области LCVR, при этом указанная комбинация выбирается из комбинаций №1, №7, №14, №26 и №50, представленных в Таблице 2, где, если применимо, Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

По данному определенному варианту осуществления гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению также могут содержать минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре FR области HCVR и/или минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре FR области LCVR, представленные в Таблице 3, где, если применимо, X₁₈ - Phe (F).

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению также могут содержать:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_h-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 25, 29, 33, 36, 39, 40 и 42;

V_H-FR2, выбираемую из SEQ ID NO: 26, 30, 34, 37 и 43;

V_H-FR3, выбираемую из SEQ ID NO: 27, 31, 35, 38 и 41; и

V_H-FR4, выбираемую из SEQ ID NO: 28 и 32; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_l-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 44, 48, 52 и 55;

V_L-FR2, выбираемую из SEQ ID NO: 45, 49, 53, 56, 58, 59 и 60;

V_L-FR3, выбираемую из SEQ ID NO: 46, 50, 54 и 57, где X₁₈ - Phe (F); и

V_L-FR4, выбираемую из SEQ ID NO: 47 и 51.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению также могут содержать комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области LCVR, при этом указанная комбинация выбирается из любых комбинаций, представленных в Таблице 3, где, если применимо, X₁₈ - Phe (F).

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению также могут содержать:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_h-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 29, 33, 36, 39, 40 и 42;

V_H-FR2, выбираемую из SEQ ID NO: 30, 34, 37 и 43;

v_h-fr3, выбираемую из SEQ ID NO: 31, 35, 38 и 41; и

V_H-FR4 с SEQ ID NO: 32; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_l-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 48, 52 и 55;

V_L-FR2, выбираемую из SEQ ID NO: 49, 53, 56, 58, 59 и 60;

v_l-fr3, выбираемую из SEQ ID NO: 50, 54 и 57, где X₁₈ - Phe (F); и

V_L-FR4 c SEQ ID NO:51.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению также могут содержать комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области LCVR, при этом указанная комбинация выбирается из комбинаций №9, №10, №11, №12, №13, №14, №16, №17, №18, №19, №20, №21, №23, №24, №25, №26, №27, №28, №30, №31, №32, №33, №34, №35, №37, №38, №39, №40, №41, №42, №44, №45, №46, №47, №48, №49, №51, №52, №53, №54, №55 и №56, представленных в Таблице 3, где, если применимо, X₁₈ - Phe (F).

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению также могут содержать:

- HCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_h-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 29, 33 и 36;

V_H-FR2, выбираемую из SEQ ID NO: 30, 34 и 37;

V_H-FR3, выбираемую из SEQ ID NO: 31, 35 и 38; и

V_H-FR4 с SEQ ID NO: 32; и

- LCVR, которая содержит минимум одну, предпочтительно минимум две, предпочтительнее минимум три, еще предпочтительнее четыре следующих каркасных области (FR):

v_l-fr1, выбираемую из SEQ ID NO: 48, 52 и 55;

V_L-FR2, выбираемую из SEQ ID NO: 49, 53 и 56;

V_L-FR3, выбираемую из SEQ ID NO: 50, 54 и 57, где X₁₈ - Phe (F); и

V_L-FR4 c SEQ ID NO: 51.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению также могут содержать комбинацию (i) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области HCVR и (ii) минимум одной, предпочтительно минимум двух, предпочтительнее минимум трех, еще предпочтительнее четырех FR области LCVR, при этом указанная комбинация выбирается из комбинаций №9, №10, №11, №16, №17, №18, №23, №24 и №25, представленных в Таблице 3, где, если применимо, X₁₈ - Phe (F).

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать:

- HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 101,121, 122, 123 и 124;и/или

- LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 102, 112, 125 и 128, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G) и Xn - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N).

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать любую комбинацию HCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 101, 121, 122, 123 и 124, и LCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 102, 112, 125 и 128, что было подробно описано ранее.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать:

- HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 61; и/или

- LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 71, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать любую комбинацию HCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 61, и LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 71, что было подробно описано ранее.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать:

- HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 62, 63 и 64; и/или

- LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 72, 73 и 74, где Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать любую комбинацию HCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 62, 63 и 64, и LCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 72, 73 и 74, что было подробно описано ранее.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать:

- HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67, 101,121, 122, 123 и 124; и/или

- LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 72, 73, 74, 75 и 102.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать любую комбинацию HCVR, выбираемой из SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67 и 101, и LCVR, выбираемой из SEQ ID NO: SEQ ID NO: 72, 73, 74, 75 и 102, что было подробно описано ранее.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать HCCR, представленную в SEQ ID NO: 91, 93, 114 или 115; и/или LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92 или 94.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут также содержать HCCR, представленную в SEQ ID NO: 91 или 93; и/или LCCR, представленную в SEQ ID NO: 92 или 94.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 или 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91, 93, 114 или 115.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 или 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91 или 93.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63 или 64; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91, 93, 114 или 115.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63 или 64; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91 или 93.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67 и 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91, 93, 114 или 115.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 62, 63, 64, 65, 67 и 101; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 91 или 93.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать легкую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 103 или 113; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 92 или 94.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать легкую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 82, 83 или 84; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 92.

По данному определенному варианту осуществления мышиное, химерное или гуманизированное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению могут, таким образом, содержать легкую цепь, содержащую вариабельную область, представленную в SEQ ID NO: 82, 83, 84, 85 или 103; и/или константную область, представленную в SEQ ID NO: 92.

Другим объектом настоящего изобретения является выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению.

«Выделенная нуклеиновая кислота» в контексте настоящего документа означает нуклеиновую кислоту, которая, по существу, отделяется от других геномных ДНК последовательностей, а также белков или комплексов, таких как рибосомы и полимеразы, которые естественным образом сопровождают нативную последовательность. Данный термин охватывает последовательность нуклеиновой кислоты, которую удалили из ее природного окружения, и включает изоляты рекомбинантных или клонированных ДНК и химически синтезированные аналоги или аналоги, биологически синтезированные гетерологичными системами. По существу, чистая нуклеиновая кислота включает выделенные формы нуклеиновой кислоты. Разумеется, это относится к нуклеиновой кислоте, выделенной первоначально, и не исключает гены или последовательности, позднее добавленные к выделенной нуклеиновой кислоте человеком.

В одном варианте осуществления такая выделенная нуклеиновая кислота является очищенной.

В одном варианте осуществления такая выделенная нуклеиновая кислота очищена:

(1) до значения более 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% или более по весу нуклеиновой кислоты, что определяется методами абсорбции или методами флуоресценции (например, посредством измерения коэффициента абсорбции на 260 и 280 нм (А_260/280)), и предпочтительнее всего более 96%, 97%, 98% или 99% по весу; или

(2) до гомогенности по результатам электрофореза в агарозном геле и при использовании интеркалирующего агента, такого как бромид этидия, SYBR Green, GelGreen и подобных.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, кодирующей HCVR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности SEQ ID NO: 95 или любой последовательности, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 95, кодирующей HCVR мышиного или химерного антитела или его связывающего фрагмента с SEQ ID NO:61.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, кодирующей LCVR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности SEQ ID NO: 96 или любой последовательности, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 96, кодирующей LCVR мышиного или химерного антитела или его связывающего фрагмента с SEQ ID NO:81.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из:

- последовательности, кодирующей HCVR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, и

- последовательности, кодирующей LCVR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из:

- последовательности SEQ ID NO: 95 или любой последовательности, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 995, и

- последовательности SEQ ID NO: 96 или любой последовательности, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 96.

Следует понимать, что специалист в данной области может конструировать последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие все другие HCVR и LCVR, описанные здесь, в частности, для гуманизированных антител или их связывающего фрагмента по настоящему изобретению.

Также следует понимать, что специалисту в данной области известны методы молекулярной биологии, направленные на модификацию последовательности нуклеиновой кислоты с целью улучшения, например, уровней рекомбинантного продуцирования, например, посредством оптимизации ко донов. По сути, настоящая заявка охватывает любую нуклеиновую кислоту, кодирующую любые HCVR и/или LCVR, описанные здесь.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, кодирующей полностью или, по существу, полностью человеческую HCCR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности SEQ ID NO: 97 или любой последовательности, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 97, кодирующей HCCR химерного или гуманизированного антитела или его связывающего фрагмента с SEQ ID NO: 91.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, кодирующей полностью или, по существу, полностью человеческую LCCR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности SEQ ID NO: 98 или любой последовательности, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 98, кодирующей HCCR химерного или гуманизированного антитела или его связывающего фрагмента с SEQ ID NO: 92.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из:

- последовательности, кодирующей полностью или, по существу, полностью человеческую HCCR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, и

- последовательности, кодирующей полностью или, по существу, полностью человеческую LCCR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления нуклеиновая кислота по настоящему изобретению содержит или состоит из:

- последовательности SEQ ID NO: 97 или любой последовательности, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 97, и

- последовательности SEQ ID NO: 98 или любой последовательности, имеющей идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 98.

Другим объектом настоящего изобретения является вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность, кодирующую HCVR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 95 или любую последовательность, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 95, предпочтительно функционально связанные с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность, кодирующую LCVR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 96 или любую последовательность, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 96, предпочтительно функционально связанные с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит:

- последовательность, кодирующую HCVR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами, и

- последовательность, кодирующую LCVR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит:

- последовательность SEQ ID NO: 95 или любую последовательность, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 95, предпочтительно функционально связанные с регуляторными элементами, и

- последовательность SEQ ID NO: 96 или любую последовательность, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 96, предпочтительно функционально связанные с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность, кодирующую HCCR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 97 или любую последовательность, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 97, предпочтительно функционально связанные с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность, кодирующую LCCR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 98 или любую последовательность, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 98, предпочтительно функционально связанные с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит:

- последовательность, кодирующую HCCR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами, и

- последовательность, кодирующую LCCR антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит:

- последовательность SEQ ID NO: 97 или любую последовательность, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 97, предпочтительно функционально связанные с регуляторными элементами, и

- последовательность SEQ ID NO: 98 или любую последовательность, имеющую идентичность минимум 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с SEQ ID NO: 98, предпочтительно функционально связанные с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность, кодирующую тяжелую цепь антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит последовательность, кодирующую легкую цепь антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению содержит:

- последовательность, кодирующую тяжелую цепь антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами, и

- последовательность, кодирующую легкую цепь антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с регуляторными элементами.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению является моноцистронным.

Под термином «моноцистронный» подразумевается, что единичная нуклеиновая кислота, кодирующая единичный белок, экспрессируется в единичном векторе экспрессии.

В одном варианте осуществления вектор экспрессии по настоящему изобретению является полицистронным.

Под термином «полицистронный» подразумевается, что минимум две или более нуклеиновых кислот, каждая из которых кодирует единичный белок, экспрессируются в единичном векторе экспрессии.

Другим объектом настоящего изобретения является клетка, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению, или вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению.

Другим объектом настоящего изобретения является метод получения и очистки выделенного антитела или его связывающего фрагмента, связывающихся с hCD45RC по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления такой метод включает:

- культивирование клеток-хозяев, трансформированных нуклеиновой кислотой или вектором экспрессии по настоящему изобретению, в условиях, подходящих для экспрессии антитела или его связывающего фрагмента, и

- выделение экспрессированного антитела или его связывающего фрагмента.

Данный рекомбинантный процесс можно применять для получения в больших масштабах антител или их связывающих фрагментов, включая моноклональные антитела, предназначенные для применения в терапевтических и/или диагностических целях in vitro, ex vivo и/или in vivo.

Эти процессы хорошо известны в данной области (Subramanian (Ed.), 2004. Antibodies (1st ed.. Vol.1: Production and Purification). New York, NY: Springer US).

В одном варианте осуществления экспрессированное антитело или его связывающий фрагмент далее очищаются.

Методы очистки антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению хорошо известны в данной области (Subramanian (Ed.), 2004. Antibodies (1st ed., Vol.1: Production and Purification). New York, NY: Springer US) и включают, помимо прочего, хроматографию, предпочтительно аффинную хроматографию, предпочтительнее аффинную хроматографию на агарозе белка L.

В одном варианте осуществления антитело по настоящему изобретению может быть модифицировано для улучшения антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), комплементзависимой цитотоксичности (CDC) и/или антитело-зависимого фагоцитоза. Такие модификации хорошо известны в данной области.

Например, известно, что антитела с низким содержанием фукозы улучшают ответ ADCC через рецептор FcγRIII (Международная патентная публикация WO2014140322). Таким образом, антитело по настоящему изобретению может иметь низкое содержание фукозы.

Термин «содержание фукозы» в контексте настоящего документа означает процентную долю фукозилированных форм в N-гликанах, которые присоединяются к остатку N297 Fc фрагмента каждой тяжелой цепи каждого антитела (соответствующего N180 SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 114; или N174 SEQ ID NO:93).

Термин «низкое содержание фукозы» в контексте настоящего документа означает содержание фукозы ровно в 65% или меньше. Преимущество заключается в том, что содержание фукозы меньше или равно 65%, предпочтительно меньше или равно 60%, 55% или 50% или даже меньше или равно 45%, 40%, 35%, 30%, 25% или 20%. Тем не менее, нет необходимости в том, чтобы содержание фукозы было равно нулю, и оно может быть, например, больше или равно 5%, 10%, 15% или 20%.

В одном варианте осуществления антитело по настоящему изобретению может также содержать разные типы гликозилирования (N-гликаны олигоманнозного или биантенарного комплексного типа, с вариабельной пропорцией остатков бисектного N-ацетилглюкозамина (GlcNAc) или галактозных остатков в случае с N-гликанами биантенарного комплексного типа), при условии, что они имеют низкое содержание фукозы (Международная патентная публикация WO2007048077). Например, антитела, имеющие слабо фукозилированные N-гликаны, можно получить так, как описано в Европейской патентной публикации ЕР 1176195 или в Международных патентных публикациях WO2001077181 или WO2012041768.

N-гликаны олигоманнозного типа имеют сниженное время полужизни in vivo по сравнению с N-гликанами биантенарного комплексного типа. Следовательно, преимущество заключается в том, что антитела по настоящему изобретению имеют на их сайтах N-гликозилирования Fc фрагмента гликановые структуры биантенарного комплексного типа, с низким содержанием фукозы, что было определено ранее.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с терапевтическим компонентом, т.е. лекарственным средством. В одном варианте осуществления такой терапевтический компонент выбирается из цитотоксина, химиотерапевтического агента, цитокина, иммуносуппрессанта, иммуностимулятора, литического пептида и радиоизотопа. Такие конъюгаты называются здесь «конъюгаты антитело-лекарственное средство» или «ADC».

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с цитотоксическим компонентом. В одном варианте осуществления такой цитотоксический компонент выбирается из таксола; цитохалазина В; грамицидина D; бромида этидия; эметина; митомицина; этопозида; тенопозида; винкристина; винбластина; колхицина; доксорубицина; дауномицина; дигидроксиантрацин диона; тубулин-ингибиторов (таких как, например, майтансина или его аналога или производного); антимитотических агентов (таких как, например, монометилауристатина Е или F или его аналога или производного); доластатина или его аналога; иринотекана или его аналога; митоксантрона; митрамицина; актиномицина D; 1-дегидротестостерона; глюкокортикоидов; прокаина; тетракаина; лидокаина; пропранолола; пуромицина; калихимицина или его аналога или производного; антиметаболитов (например, метотрексата, меркаптопурина, 6-тиогуанина, цитарабина, флударабина, 5-фторурацила, декарбазина, гидроксимочевины, аспарагиназы, гемцитабина или кладрибина); алкилирующего агента (например, мехлорэтамина, тиоэпы, хлорамбуцила, мелфалана, кармустина, ломустина, циклофосфамида, бусульфана, дибромоманнитола, стрептозотоцина, дакарбазина, прокарбазина или митомицина С); производных платины (таких как, например, цисплатин или карбоплатин); дуокармицина А, дуокармицина SA, рашельмицина или его аналога или производного; антибиотиков (таких как, например, дактиномицин, блеомицин, даунорубицин, доксорубицин, идарубицин, митрамицин, митомицин, митоксантрон, пликамицин или антрамицин); пирроло[2,1-с][1,4]-бензодиазепинов таких как, например, антрамицин); дифтерийного токсина и связанных молекул (таких как, например, цепь дифтерии А и ее активные фрагменты и гибридные молекулы), рицин-токсина, такого как, например, рицин А или токсин цепи дегликозилированного рицина А, холерного токсина, шигаподобного токсина, такого как SLT I, SLT II, SLT IIV, LT токсина, С3 токсина, токсина Шига, коклюшного токсина, столбнячного токсина, соевого ингибитора протеаз типа Боумана-Бирка, экзотоксина Pseudomonas, алорина, сапорина, модецина, геланина, цепи абрина А, цепи модецина А, альфасарцина, белков Aleurites fordii, диантиновых белков, белков Phytolacca Americana, таких как PAPI, PAPII и PAP-S, ингибитора momordica charantia, курцина, кротина, ингибитора sapaonaria officinalis, токсинов гелонина, митогеллина, рестриктоцина, феномицина и эномицина); рибонуклеаз; дезоксирибонуклеазы I; стафилококкового энтеротоксина А; антивирусного белка лаконоса; дифтерийного токсина; и эндотоксина Pseudomonas.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с ауристатином или пептидным аналогом, его производным или его пролекарством. Было доказано, что ауристатины нарушают микротубулиновую динамику, ГТФ-гидролиз и ядерное и клеточное деление (Woyke et al., 2001. Antimicrob Agents Chemother. 46(12):3802-8) и имеют противораковую (Патент США №5,663,149) и противогрибковую активность (Pettit et al., 1998. Antimicrob Agents Chemother. 42(11):2961-5). Например, на ауристатин Е можно воздействовать пара-ацетил-бензойной кислотой или бензоилвалериановой кислотой для получения АЕВ и EVB, соответственно. Другие типовые производные ауристатина включают AFP, MMAF (монометил ауристатин F) и ММАЕ (монометил ауристатин Е). Подходящие ауристатины и аналоги, производные и пролекарства ауристатинов, а также подходящие линкеры для конъюгирования ауристатинов с антителами описаны, например, в Патентах США №5,635,483, 5,780,588 и 6,214,345 и в Международных патентных публикациях WO2002088172, WO2004010957, WO2005081711, WO2005084390, WO2006132670, WO2003026577, WO200700860, WO2007011968 и WO2005082023.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с пирроло[2,1-с][1,4]-бензодиазепином (PDB) (таким как, например, антрамицин) или его аналогом, производным или пролекарством. В данной области имеются описания подходящих PDB и производных PDB и соответствующих технологий.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с цитотоксическим компонентом, выбираемым из антрациклина, майтансина, калихимицина, дуокармицина, рашельмицина (СС-1065), доластатина 10, доластатина 15, иринотекана, монометил ауристатина Е, монометил ауристатина F, PDB или его аналога, производного или пролекарства.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с антрациклином или его аналогом, производным или пролекарством.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с майтансином или его аналогом, производным или пролекарством.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с калихимицином или его аналогом, производным или пролекарством.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с дуокармицином или его аналогом, производным или пролекарством.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с рашельмицином (СС-1065) или его аналогом, производным или пролекарством.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с доластатином или его аналогом, производным или пролекарством.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с монометил ауристатином Е или его аналогом, производным или пролекарством.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с минометил ауристатином F или его аналогом, производным или пролекарством.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению конъюгировано с иринотеканом или его аналогом, производным или пролекарством.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению является меченым.

Под термином «меченое» подразумевается, что с выделенным антителом или его связывающим фрагментом конъюгирован или к ним присоединен минимум один элемент, изотоп или химическое соединение, что позволяет, например, обнаружить указанное выделенное антитело или его связывающий фрагмент.

Примеры меток включают, помимо прочего, люминесцентные красители (также называемые флуорофоры или фотообнаруживаемые метки), изотопные метки (также называемые радиоактивными метками, радиометками или тяжелыми изотопами), контрастные вещества, магнитные метки, электрические метки, термальные метки и цветные метки.

Примеры люминесцентных красителей включают, помимо прочего, красители Alexa Fluor®, красители BODIPY®, флюоресцеин, 5-карбоксифлюоресцеин, 5-(4,6-дихлортриазин-2-ил) аминофлюоресцеин, 2'7'-диметокси-4'5'-дихлор-6-карбоксифлюоресцеин, флюоресцеин изотиоцианат (FITC), QFITC, Oregon Green® 488, Oregon Green® 514, родамин и его производные (такие как, например, родамин зеленый, родамин зеленый green-X, родамин красный red-X, Х-родамин, 6-карбокси-Х-родамин (ROX), 6-карбоксиродамин (R6G), N,N,N',N'-тетраметил-6-карбоксиродамин (TAMRA), лиссамин родамин В, родамин 123, родамин Х изотиоцианат, сульфородамин В, сульфородамин 101 (Texas Red), тетраметил родамин, тетраметил родамин изотиоцианат (TRITC)), эозин, эозин изотиоцианат, эритрозин, эритрозин В, эритрозин изотиоцианат, Texas Red®, Texas Red®^-X, нафтофлюоресцеин. малахитовый зеленый, малахитовый зеленый изотиоцианат, производные кумарина. Pacific Orange, Cascade Blue, Cascade Yellow, дансил хлорид, краситель дапоксил, 1-диметиламин-N(2-азидо-этил)нафталин-5-сульфонамид, 6-(6-амино-2-(2-азидоэтил)-1,3-диоксо-1H-бензо(de)-2(3H)изохинолин, 6-(6-амино-2-(2-пропинил)-1,3-диоксо-1H-бензо(de)-2(3H)изохинолин, 8-(4-азидоэтилоксифенил)-2,6-диэтил-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3а,4а-диаза-s-индацин, 8-(4-пропинилоксифенил)-2,6-диэтил-1,3,5,7-тетраметил-4,4-дифтор-4-бора-3а,4а-диаза-s-индацин, 1-(3-азидо-пропокси)-7-метиламино-феноксазин-3-он, 1-(2-пропинил)-7-метилам ино-феноксазм-3-он, N-(5-(3-азидопропиламино)-9H-бензо(a)-фенокса-2-ин-9-илиден)-N-метил-метанаминийхлорид, N-(5-(3-пропинил-амино)-9H-бензо(a)-феноксазин-9-илен)-N-метил-метанаминийхлорид, (9-(3-азидо-пропокси)-7-пиперидин-1-ил-феноксазин-3-илиден)-диметил-аммонийперхлорат, 4-ацетамидо-4'-изотиоцианатостилбен-2,2'-дисульфокислота, акридин, акридин изотиоцианат, 5-(2'-аминоэтил)аминонафталин-1-сульфоновая кислота, 4-амино-N-[3-винилсульфонил)фенил]нафталимид-3,5 дисульфонат, N-(4-амилино-1-нафтил)малеимид, антраниламид, бриллиантовый желтый, кумарин, производные кумарина, 7-амино-4-метилкумарин, 7-амино-трифторметилкулуарин, цианозин, 4',6-диаминидино-2-фенилиндол, 5',5''-дибромопирогаллол-сульфо нефталеин, 7-диэтиламино-3-(4'-изотиоцианатофенил)-4-метилкумарин-4,4'-диизотиоцианатодигидро-стильбен-2,2'-дисулъфокислота, 4,4'-диизотиоциан атостильбен-2,2'-дисульфокислота, этидий, IR144, IR1446, 4-метил умбеллиферон, о-крезолфталеин, нитротиразин, параросанилин, феноловый красный, В-фикоэритрин, о-фталевый диальдегид, пирен, пирен бутират, сукцинимидил 1-пирен бутират, Reactive Red 4, рибофлавин, розоловая кислота, хелаты лантаноидов, квантовые точки, цианины, пирилиевые красители и скварены.

Примеры изотопных меток включают, помимо прочего, соединения ^99mTc (такие как, например, эксаметазим, медроновая кислота, макроагрегированный альбумин, сестамиби, тетрофосмин, эксаметазим, сулесомаб, тилманосепт, аркитумомаб, вотумумаб, hynic-октреотид и подобные): соединения ¹²³I, ¹²⁵I или ¹³¹I (такие как, например, иофлупан, иофетамин, иомазенил, натрия йодгиппурат, иобенгуан, меченный радиоактивным йодом холестерин, минретумомаб, тозитумомаб и подобные); соединения ¹⁸F (такие как, например, флорбетапир, флутеметамол, флуцикловин, фтордезоксиглюкоза, фторэтилтирозин, фторид натрия и подобные); соединения ⁶⁴Cu (такие как, например, Cu-ETS2 и подобные); соединения ⁷⁵Se (такие как, например, SeHCAT); соединения ¹¹¹In (такие как, например, имциромаб, капромаб пендетид, сатумомаб пендетид и подобные); соединения ⁸²Rb (такие как, например, хлорид рубидия); соединения ¹⁵³Sm (такие как, например, лексидронам и подобные); соединения ⁸⁹Sr (такие как, например, стронций-89 хлорид и подобные); соединения ⁹⁰Y (такие как, например, ибритутомаб тиуксетан и подобные); соединения ²²³Ra (такие как, например, радий-223 хлорид и подобные); соединения ¹⁷⁷Lu (такие как, например, оксодотреотид и подобные); и любые соединения, содержащие минимум один атом ²Н, ³Н, ¹¹С, ¹³N, ¹⁴С, ¹⁵O, ¹⁸F, ²²Na, ²⁴Na, ³²Р, ⁴⁷Са, ⁵¹Cr, ⁵⁷Со, ⁵⁸Со, ⁵⁹Fe, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷⁵Se, ⁸¹mKr, ⁸²Rb, ⁸⁹Sr, ⁹⁰Y, ⁹⁹mTc, ¹¹¹In, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹³³Xe, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁵Dy, ¹⁶⁹Er, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁶Re, ¹⁹⁸Au, ²⁰¹Tl и/или ²²³Ra.

Примеры контрастных веществ включают, помимо прочего, диатризоевую кислоту, метризойную кислоту, йодамид, йоталамовую кислоту, йокситаламовую кислоту, йоглициевую кислоту, ацетризовую кислоту, йокармиковую кислоту, метиодал, диодон, метризамид, йогексол, йоксагловую кислоту, йопамидол, йопромид, йотролан, йоверсол, йопентол, йодиксанол, йомепрол, йобитридол, йоксилан, йодоксамовую кислоту, йотроксиновую кислоту, иогликамовую кислоту, адипиодон, иобензамовую кислоту, иопаноевую кислоту, йоцетамовую кислоту, йоподат натрия, тиропановую кислоту, йоподат кальция, йопидол, пропилйодон, йофендилат, липиодол, сульфат бария, гадобеновую кислоту, гадобутрол, гадодиамид, гадофосвесет, гадолиний, гадопентетовую кислоту, гадотеровую кислоту, гадотеридол, гадоверсетамид, гадоксетовую кислоту, цитрат железа(III)-аммония, мангафодипир, ферумокссил, ферристен, перфлуброн, микросферы человеческого альбумина, микрочастицы галактозы, перфленапент, микросферы фосфолипидов, гексафторид серы и подобные.

Другим объектом настоящего изобретения является композиция, содержащая антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению.

Другим объектом настоящего изобретения является композиция, содержащая минимум одну нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению.

Другим объектом настоящего изобретения является композиция, содержащая минимум один вектор экспрессии, содержащий минимум одну нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению.

Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению; и минимум одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая минимум одну нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению; и минимум одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая минимум один вектор экспрессии, содержащий минимум одну нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению; и минимум одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или носитель.

Термин «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» включает все и любые растворители, диспергенты, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические средства и средства, замедляющие абсорбцию, и подобные им. Указанное вспомогательное вещество не вызывает неблагоприятную, аллергическую или другую нежелательную реакцию при введении животному, предпочтительно человеку. Для введения человеку препараты должны соответствовать стандартам стерильности, пирогенности и общим стандартам безопасности и чистоты, установленным нормативными органами, такими как, например, Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA) или Европейское агентство лекарственных средств (ЕМА).

Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, которые могут применяться в таких композициях, включают, помимо прочего, ионообменники, окись алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, смеси частичных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, вода, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, двузамещенный фосфорнокислый натрий, дикалия гидрофосфат, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы (например, карбоксиметилцеллюлоза натрия), полиэтиленгликоль, полиакрилаты, воски, полиэтилен-полиоксипропилен-блок-полимеры, полиэтиленгликоль и ланолин.

В одном варианте осуществления фармацевтические композиции по настоящему изобретению содержат носители, которые являются фармацевтически приемлемыми для препарата, подходящему для инъекции субъекту. В частности, это могут быть изотонический, стерильный, физиологический растворы (мононатрий- или динатрийфосфат, хлорид натрия, калия, кальция или магния и подобные им или смеси таких солей) либо сухие, особенно лиофилизированные композиции, которые при добавлении, в зависимости от обстоятельств, стерилизованной воды или физиологического раствора позволяют создавать пригодные для инъекций растворы.

Другим объектом настоящего изобретения является лекарственный препарат, содержащий антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению.

Другим объектом настоящего изобретения является лекарственный препарат, содержащий минимум одну нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению.

Другим объектом настоящего изобретения является лекарственный препарат, содержащий минимум один вектор экспрессии, содержащий минимум одну нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его связывающий фрагмент, связывающиеся с hCD45RC по настоящему изобретению.

Настоящее изобретение также относится к методам индуцирования иммунной толерантности у нуждающегося в этом субъекта посредством введения выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению. Оно также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту, нуклеиновой кислоте, вектору экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственному препарате по настоящему изобретению, предназначенных для применения в индуцировании иммунной толерантности у нуждающегося в этом субъекта.

Термин «иммунная толерантность» в контексте настоящего документа относится к состоянию невосприимчивости иммунной системы к определенным веществам или тканям, которые могут вызывать иммунный ответ, при сохранении иммунного ответа в отношении других веществ или тканей.

Термин «иммунный ответ» в контексте настоящего документа включает опосредованные Т-клетками и/или опосредованные В-клетками иммунные ответы. Иллюстративные иммунные ответы включают, помимо прочего, Т-клеточные иммунные реакции (например, продуцирование цитокинов и клеточная цитотоксичность), а также иммунные ответы, на которые опосредованно влияет активация Т-клеток (например, макрофаги). Иммунные клетки, участвующие в иммунном ответе, включают лимфоциты (такие как В-клетки и Т-клетки, включая CD4⁺, CD8⁺, T_h1 и T_h2 клетки), антигенпрезентирующие клетки (например, профессиональные антиген презентирующие клетки, такие как дендритные клетки), естественные клетки киллеры, миелоидные клетки (такие как макрофаги, эозинофилы, тучные клетки, базофилы и гранулоциты).

Настоящее изобретение также относится к методам истощения популяции клеток с CD45RC^выс у нуждающегося в этом субъекта посредством введения выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению. Оно также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту, нуклеиновой кислоте, вектору экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственному препарату по настоящему изобретению, предназначенным для применения в истощении популяции клеток с CD45RC^выс у нуждающегося в этом субъекта.

Относительный уровень экспрессии hCD45RC измеряют посредством цитометрии. Можно выделить три типа клеток: клетки, представляющий высокий, промежуточный или отрицательный уровень экспрессии hCD45RC.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению истощают популяцию Т-клеток с CD45RC^high. «Т-клетки CD45RC^high» - Т-клетки, которые экспрессируют маркер CD45RC на высоком уровне, что было определено ранее. Специалисту в данной области понятно, что выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению, которые истощают популяцию Т-клеток с CD45RC^high, также могут истощать популяции других типов клеток с CD45RC^high, таких как естественные клетки-киллеры с CD45RC^high или В-клетки с CD45RC^high.

В контексте настоящего документа термины «истощать» или «истощение» в отношении клеток, экспрессирующих CD45RC, означают измеряемое уменьшение числа клеток у субъекта. Такое уменьшение может составлять минимум около 10%, например, минимум около 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более. В некоторых вариантах осуществления эти термины означают уменьшение числа клеток с CD45RC^high у субъекта или в образце до количества ниже обнаруживаемых предельных значений. По настоящему изобретению выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат специфически опосредуют истощение популяции эффекторных клеток, сильно экспрессирующих CD45RC, в частности, клеток, сконструированных как CD45RC^high T_eff.

В частности, указанное выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению истощают популяцию Т-клеток с CD45RC^выс посредством связывания с hCD45RC и преобразования про-апоптотических сигналов и/или посредством активации антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), комплементзависимой цитотоксичности (CDC) или антитело-зависимого фагоцитоза.

В контексте настоящего документа термин «антитело-зависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность» или «ADCC» означают форму цитотоксичности, при которой секретируемые антитела, связанные с Fc рецепторами (FcRs), присутствующими на определенных цитотоксических клетках (например, естественных клетках-киллерах, нейтрофилах, моноцитах и макрофагах), позволяют этим цитотоксическим эффекторным клеткам специфически связываться с клеткой-мишенью, несущей антиген, и впоследствии уничтожать клетку-мишень. Для анализа активности ADCC представляющей интерес молекулы можно провести анализ ADCC in vitro, например, такой, какой был описан в Патентах US 5,500,362 или US 5,821,337.

В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению опосредуют комплементзависимую цитотоксичность.

Термин «комплементзависимая цитотоксичность» или «CDC» означает лизис клетки-мишени в присутствии комплемента. Активация классического пути активации комплемента инициируется связыванием первого компонента системы комплемента с антителами, которые связаны со своим распознанным антигеном. Для оценки активации комплемента можно провести анализ CDC, например, такой, который был описан в публикации Gazzano-Santoro et al., 1997. J Immunol Methods. 202(2): 163-71.

В определенном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению могут быть конъюгированы с цитотоксическим агентом или ингибитором роста.

Настоящее изобретение также относится к методам экспансии и/или потенциации регуляторных Т-клеток у нуждающегося в этом субъекта посредством введения выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению. Оно также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагмент, нуклеиновой кислоте, вектору экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственному препарату по настоящему изобретению, предназначенным для применения в экспансии и/или потенциации регуляторных Т-клеток у нуждающегося в этом субъекта.

В контексте настоящего документа термин «экспансия» означает процесс преобразования и/или увеличения определенной популяции клеток (например, иммунных клеток, таких как Treg). Экспансия популяции клеток может происходить in vivo, in vitro или ex vivo.

В контексте настоящего документа термин «потенциация» означает процесс усиления функции определенной популяции клеток (например, посредством повышения супрессивной способности клеток Treg). Потенциация популяции клеток может происходить in vivo, in vitro или ex vivo.

«Регуляторные Т-клетки» или «Treg» - Т-клетки, которые могут подавлять аномальный или чрезмерный иммунный ответ и играть роль в иммунной толерантности. Обычно Treg - «регуляторные Т-клетки Foxp3^+» и/или «клетки CD45RC^low/-».

В контексте настоящего документа термины «регуляторные Т-клетки Foxp3^+» и/или «клетки CD45RC^low/-» означают 0.1-10% клеток CD4⁺ и/или Т-клеток CD8⁺ Т у человека и грызунов, у которых характеристический маркер - транскрипционный фактор Foxp3.

В одном варианте осуществления методы и способы применения направлены на экспансию и/или потенциации клеток Foxp3⁺ и/или CD45RC^low/-Treg.

В одном варианте осуществления экспансия клеток CD45RC^low/- Treg осуществляется посредством стимуляции. В одном варианте осуществления экспансия клеток CD45RC^low/- Treg осуществляется посредством стимуляции в присутствии IL-2 и IL-15. В одном варианте осуществления экспансия клеток CD45RC^low/- Treg осуществляется посредством стимуляции антителами к CD3/κ CD28 и/или клетками, презентирующими аллогенный антиген (АРС), и/или специфическими антигенами.

Дополнительно или в качестве варианта настоящее изобретение относится к методам in vitro или ex vivo очистки клеток CD45RC^low/- Treg.

В одном варианте осуществления клетки CD45RC^low/- Treg - CD8⁺/CD4⁺ Т-клетки. В одном варианте осуществления клетки CD45RC^low/- Treg - CD8⁺/CD4^- Т-клетки. В одном варианте осуществления клетки CD45RC^low/- Treg - CD8^-/CD4⁺ Т-клетки.

В одном варианте осуществления также может осуществляться экспансия и/или потенциация очищенных клеток CD45RC^low/- Treg до введения, одновременно с введением или после введения нуждающегося в этом субъекту.

Настоящее изобретение также относится к методам предупреждения и/или подавления отторжений трансплантата посредством введения нуждающемуся в этом субъекту выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению. Оно также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту, нуклеиновой кислоте, вектору экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственному препарату по настоящему изобретению, предназначенным для применения в предупреждении и/или подавлении отторжений трансплантата у нуждающегося в этом субъекта.

Термины «предупреждение отторжений трансплантата» и «подавление отторжений трансплантата» охватывают предупреждение или ингибирование иммунного отторжения трансплантата, а также замедление наступления или прогрессирования иммунного отторжения трансплантата. Термины также охватывают продление выживаемости трансплантата у субъекта или предупреждение недостаточности трансплантата у субъекта. Также эти термины означают уменьшение интенсивности симптома иммунного отторжения трансплантата, включая, например, уменьшение интенсивности иммунологического осложнения, связанного с иммунным отторжением, например, интерстициального фиброза, хронического артериосклероза трансплантата или васкулита.

Термин «трансплантация» и его вариации относятся к введению трансплантата реципиенту, независимо от того, является ли такая трансплантация сингенной (когда донор и реципиент генетически идентичны), аллогенной (когда донор и реципиент имеют разное генетическое происхождение, но принадлежат к одному и тому же виду) или ксеногенной (когда донор и реципиент принадлежат к разным видам). Таким образом, согласно типичному сценарию, хозяин является человеком, а трансплантат является изотрансплантатом, полученным от человека того же или другого генетического происхождения. Согласно другому сценарию, трансплантат получают от вида, отличающегося от вида, которому его переносят, включая животных филогенно сильно различающихся видов, например, когда сердце бабуина трансплантируют человеку.

Термин «отторжение трансплантата» в контексте настоящего документа включает как острое, так и хроническое отторжение трансплантата.

«Острое отторжение» - отторжение иммунной системой реципиента тканевого трансплантата, когда трансплантированная ткань является иммунологически чужеродной. Острое отторжение характеризуется инфильтрацией ткани трансплантата иммунными клетками реципиента, которые выполняют свою эффекторную функцию и разрушают ткань трансплантата. Наступление острого отторжения происходит быстро и обычно имеет место у людей в течение нескольких недель после операции по трансплантации. Как правило, острое отторжение можно ингибировать или подавить при помощи иммуносупрессивных лекарственных препаратов, таких как рапамицин, циклоспорин, моноклональное антитело к CD40L и подобных им.

«Хроническое отторжение» обычно происходит у людей в течение периода от нескольких месяцев до нескольких лет после трансплантации, даже в присутствии успешного иммуноподавления острого отторжения. Фиброз - распространенный фактор при хроническом отторжении всех типов трансплантатов органов.

В одном варианте осуществления отторжение трансплантата - отторжение аллогенного трансплантата. Соответственно, в одном варианте осуществления донором трансплантата является человек. Донором трансплантата может быть живой донор или мертвый донор, а именно донор трупной ткани.

В одном варианте осуществления таким трансплантатом является орган, ткань или клетки.

В контексте настоящего документа термин «орган» означает твердый васкуляризованный орган, который выполняет определенную функцию или группу функций в организме. Термин «орган» включает, помимо прочего, сердце, легкое, почку, печень, поджелудочную железу, кожу, матку, кость, хрящ, тонкий или толстый кишечник, мочевой пузырь, головной мозг, молочную железу, кровеносные сосуды, пищевод, фаллопиеву трубу, желчный пузырь, яичники, поджелудочную железу, простату, плаценту, спинной мозг, конечность, включая верхнюю и нижнюю, селезенку, желудок, семенники, вилочковую железу, щитовидную железу, трахею, мочеточник, уретру, матку.

В контексте настоящего документа термин «ткань» означает любой тип ткани человека или животных и включает, помимо прочего, сосудистую ткань, кожную ткань, печеночную ткань, ткань поджелудочной железы, нервную ткань, урогенитальную ткань, желудочно-кишечную ткань, скелетную ткань, включая кость и хрящ, жировую ткань, соединительную ткань, включая сухожилия и связки, амниотическую ткань, хориальную ткань, твердую мозговую оболочку, перикард, мышечную ткань, железистую ткань, ткань кожи лица, глазную ткань.

В контексте настоящего документа термин «клетки» означает композицию, обогащенную представляющими интерес клетками, предпочтительно композицию, содержащую минимум 30%, предпочтительно минимум 50%, предпочтительнее минимум 65% указанных клеток.

В одном варианте осуществления «клетки» выбираются из группы, содержащей или состоящей из: мультипотентных гемопоэтических стволовых клеток, полученных из костного мозга, периферической крови или пуповинной крови; или плюрипотентных (т.е. эмбриональных стволовых клеток [ES] или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток [iPS]) или дифференцированных клеток, полученных из мультипотентных стволовых клеток, разных клеточных линий дифференцировки, включая, помимо прочего, кардиомиоциты, β-пенкреатические клетки, гепатоциты, нейроны и подобные им.

В одном варианте осуществления, при котором трансплантация является трансплантацией аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (HSCT), «клетки» выбираются из группы, содержащей или состоящей из: мультипотентных гемопоэтических стволовых клеток, обычно получаемых из костного мозга, периферической крови или пуповинной крови.

«HSCT» или «трансплантация гемопоэтических стволовых клеток» - трансплантационная терапия, которая может оказывать лечебное действие на пациентов с лейкозом и лимфомами (включая, помимо прочего, острый миелоидный лейкоз (AML), острый лимфоидный лейкоз (ALL), хронический миелоидный лейкоз (CML), синдром миелодисплазии (MDS), миелопролиферативный синдром, лимфомы Ходжкина, неходжкинские лимфомы, хронический лимфолейкоз (CLL) и множественную миелому). Тем не менее, важным ограничением аллогенной HSCT является развитие реакции «трансплатат против хозяина» (РТПХ), которая развивается в тяжелой форме у около 30-50% людей, получающих такое лечение.

Таким образом, в одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению применяются для предупреждения и/или подавления РТПХ.

В следующем варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению могут применяться в комбинации с мультипотентными гематопоэтическими стволовыми клетками для профилактики и/или лечения лейкоза и/или лимфом (включая, помимо прочего, острый миелоидный лейкоз (AML), острый лимфоидный лейкоз (ALL), хронический миелоидный лейкоз (CML), синдром миелодисплазии (MDS), миелопролиферативный синдром, лимфомы Ходжкина, неходжкинские лимфомы, хронический лимфолейкоз (CLL) и множественную миелому).

Дополнительно или в качестве варианта выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению могут применяться для создания трансплантата.

В одном варианте осуществления на такой трансплантат воздействуют выделенным антителом или его связывающим фрагментом, нуклеиновой кислотой, вектором экспрессии, композицией, фармацевтической композицией или лекарственным препаратом по настоящему изобретению перед трансплантацией для истощения популяции клеток с CD45RC^high.

В предпочтительном варианте осуществления таким трансплантатом является костный мозг, и на него воздействуют выделенным антителом или его связывающим фрагментом, нуклеиновой кислотой, вектором экспрессии, композицией, фармацевтической композицией или лекарственным препаратом по настоящему изобретению перед трансплантацией для истощения популяции Т-клеток с CD45RC^high. В одном варианте осуществления костный мозг содержит CD34⁺ клетки, содержащие Т-клетки с CD45RC^high и Т-клетки с CD45RC^low/-.

Настоящее изобретение также относится к методам профилактики, снижения интенсивности и/или лечения заболеваний, нарушений или состояний, связанных с hCD45RC^high посредством введения нуждающемуся в этом субъекту выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению. Оно также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту, нуклеиновой кислоте, вектору экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственному препарату по настоящему изобретению, предназначенным для применения в профилактике и/или лечении заболеваний, нарушений или состояний, связанных с hCD45RC^high.

В контексте настоящего документа термин «заболевания, нарушения или состояния, связанные с hCD45RC^high» означает заболевания, нарушения или состояния, вызванные или потенциализованные возросшей пропорцией клеток hCD45RC у субъекта и/или повышенным уровнем экспрессии hCD45RC в клетках субъекта.

Под «возросшей пропорцией клеток CD45RC^high у субъекта» подразумевается повышение около 5%, предпочтительно около 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более от числа клеток, экспрессирующих CD45RC (т.е. клеток CD45RC^high) у определенного субъекта в сравнении со стандартом, таким как, например, число клеток CD45RC^high у, по существу, здорового субъекта.

Под «повышенным уровнем экспрессии hCD45RC в клетках субъектах» подразумевается повышение около 5%, предпочтительно около 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более от уровня экспрессии hCD45RC, независимо от того, на уровне мРНК или на белковом уровне, в клетках определенного субъекта в сравнении со стандартом, таким как, например, уровень экспрессии hCD45RC в клетках, по существу, здорового субъекта.

В одном варианте осуществления связанные с hCD45RC^high заболевания, нарушения или состояния выбираются из группы, включающей или состоящей из аутоиммунных заболеваний, нежелательных иммунных ответов, моногенных заболеваний и лимфомы или рака.

В одном варианте осуществления связанные с hCD45RC^high заболевания, нарушения или состояния выбираются из группы, включающей или состоящей из аутоиммунных заболеваний, нежелательных иммунных ответов и моногенных заболеваний.

В контексте настоящего изобретения термин «аутоиммунное заболевание» означает заболевание, при котором иммунная система дает иммунный ответ (например, В-клеточный или Т-клеточный ответ) против антигена, который является частью нормального хозяина (то есть аутоантигена), с последующим повреждением тканей. При аутоиммунном заболевании иммунная система хозяина не распознает определенный антиген как «собственный» и иммунная реакция направляется против тканей хозяина, экспрессирующих этот антиген.

Иллюстративные примеры аутоиммунных заболеваний, рассматриваемых в настоящем изобретении, включают, помимо прочего, ревматоидный артрит, ювенальный олигоартрит, коллаген-индуцированный артрит, адъювант-индуцированный артрит, синдром Шегрена, множественный склероз, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит, воспалительное заболевание кишечника (включая болезнь Крона и язвенный колит), аутоиммунную желудочную атрофию, вульгарный пемфигус, псориаз, витилиго, диабет 1 типа, диабет без ожирения, миастению гравис, базедову болезнь, тиреоидит Хашимото, склерозирующий холангит, склерозирующий сиалоденит, системную красную волчанку, аутоиммунную тромбоцитопеническую пурпуру, синдром Гудпасчера, Аддисонову болезнь, системный склероз, полимиозит, дерматомиозит, приобретенную гемофилию, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, увеит, IgG4-acco циированные аутоиммунные заболевания (такие как, например, заболевания, указанные в Таблице 1 публикации Kleger et al., 2015. Dtsch Arztebl Int. 112(8):128-135, которая включается в настоящий документ посредством ссылки) и подобные им.

В предпочтительном варианте осуществления таким аутоиммунным заболеванием является системная красная волчанка.

В предпочтительном варианте осуществления таким аутоиммунным заболеванием является воспалительное заболевание кишечника, включая болезнь Крона и язвенный колит. В предпочтительном варианте осуществления таким аутоиммунным заболеванием является болезнь Крона. В предпочтительном варианте осуществления таким аутоиммунным заболеванием является язвенный колит.

В контексте настоящего документа термин «нежелательный иммунный ответ» означает любую нежелательную иммунную реакцию, предпочтительно любую нежелательную иммунную реакцию, направленную на (i) белки, экспрессированные в ходе генной терапии, (ii) векторы (такие как, например, вирусные векторы), используемые в ходе генной терапии, и/или (iii) терапевтические белки. Такие белки включают, например, фактор VIII (гемофилия А) и другие факторы свертывания крови, ферментозаместительные терапии, моноклональные антитела (например, натализумаб, ритуксимаб, инфликсимаб), поликлональные антитела, ферменты и цитокины (например, IFNP). Термин «нежелательный иммунный ответ» также означает аллергии и аллергические реакции.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению могут вводиться субъекту для подавления иммунного ответа, особенно для предупреждения иммунных реакций на определенные белки, когда их экспрессия восстанавливается генной терапией у таких субъектов с соответствующими генетически обусловленными недостаточностями. Таким образом, выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению могут применяться для предупреждения иммунной реактивности в отношении белков, обычно отсутствующих у субъекта из-за мутаций, когда генная терапия обеспечивает их восстановление. Более того, протеинотерапия - область медицинских инноваций, которая приобретает широкое распространение и включает применение белков, таких как ферменты, антитела или цитокины, непосредственно для субъектов в качестве терапевтических продуктов. Одно из основных препятствий в доставке таких лекарственных препаратов включает иммунные ответы, направленные против самих терапевтических белков. Введение терапевтических средств на основе белков часто сопровождается введением иммуносуппрессантов, которые применяются для продления времени жизни белка и, следовательно, для повышенного поглощения белка в клетках и тканях организма. Тем не менее, применение обычных иммуносуппрессантов может быть нежелательным из-за неспецифического характера подавления иммунного ответа, что приводит к нежелательным побочным действиям для пациента. Таким образом, данный подход можно применять для подавления иммунного ответа на терапевтические белки и пептиды, такие как терапевтические антитела, цитокины, ферменты или любой другой белок, который вводится пациенту.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению могут вводиться субъекту для подавления иммунного ответа, особенно для предупреждения иммунных реакций на векторы, используемые в генной терапии, в частности, вирусные векторы, используемые в генной терапии. Такие вирусные векторы включают, например, векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV), аденовирусные (Ad) векторы, лентивирусные векторы и подобные им. См. Nayak & Herzog, 2010. Gene Ther. 17(3):295-304.

В контексте настоящего документа термин «аллергия» или «аллергии» означает неблагоприятную реакцию иммунной системы. Аллергические реакции имеют место на обычно безвредные вещества окружающей среды, известные как аллергены; такие реакции являются приобретенными, прогнозируемыми и быстрыми. Строго говоря, аллергия является одной из четырех форм гиперчувствительности и называется гиперчувствительностью I типа (или немедленного типа). Она характеризуется чрезмерной активацией определенных белых клеток крови, называемых тучными клетками и базофилами по типу антитела, известного как IgE, которая приводит к чрезвычайной воспалительной реакции. Распространенные аллергические реакции включают экзему, сыпь, аллергический ринит, астму, пищевые аллергии и реакции на яд жалящих насекомых, таких как осы и пчелы.

Термин «моногенные заболевания» в контексте настоящего документа означает заболевания, вызываемые мутацией в единичном гене, который выбирается из следующих генов:

(i) гены, которые не ассоциируются с иммунной функцией, но дефект которых ассоциируется с воспалением и/или иммунными реакциями, например, гены, дефекты которых связаны со следующими заболеваниями: мышечная дистрофия Дюшенна (МДД), муковисцидоз, лизосомные болезни и недостаточность α1-анти-трипсина; и

(ii) гены, задействованные в иммунной системе, дефект которых вызывает воспаление и/или аутоиммунные реакции, такие как гены, дефекты которых связаны со следующими заболеваниями: Т-клеточный первичный иммунодефицит, например, синдром IPEX (Х-сцепленный синдром иммунной дисрегуляции, полиэндокринопатии и энтеропатии), APECED (аутоиммунный полиэндокринный синдром 1 типа), В-клеточные первичные иммунодефицита, синдром Макла-Уэлса, смешанный аутовоспалительный и аутоиммунный синдром, NLRP12-ассоциированный наследственный синдром периодической лихорадки и периодический синдром, ассоциированный с рецептором 1 фактора некроза опухоли.

В предпочтительном варианте осуществления таким аутоиммунным заболеванием является APECED (аутоиммунный полиэндокринный синдром 1 типа).

В предпочтительном варианте осуществления таким аутоиммунным заболеванием является мышечная дистрофия Дюшенна (МДД).

Термин «лимфома или рак» в контексте настоящего документа охватывает лимфому или рак, которые ассоциируются с клетками с CD45RC^high. Иллюстративные лимфома или рак, ассоциированные с клетками с CD45RC^high, включают, помимо прочего, острый миелоидный лейкоз (AML), острый лимфоидный лейкоз (ALL), хронический миелоидный лейкоз (CML), синдром миелодисплазии (MDS)/миелопролиферативный синдром, лимфомы (например, такие как лимфомы Ходжкина и неходжкинские лимфомы), хронический лимфолейкоз (CLL) и множественную миелому).

Таким образом, настоящее изобретение относится к методу истощения популяции клеток с CD45RC^high у нуждающегося в этом субъекта, посредством экспансии и/или потенциации регуляторных Т-клеток, предпочтительно Foxp3⁺ и/или CD45RC^low Treg, что предупреждает и/или подавляет отторжение трансплантатов; или предупреждает, снижает интенсивность и/или лечит связанные с hCD45RC^high заболевания, нарушения или состояния посредством введения выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению.

В предпочтительном варианте осуществления таким связанным с hCD45RC^high заболеванием, нарушением или состоянием является системная красная волчанка, воспалительное заболевание кишечника (включая болезнь Крона и язвенный колит), APECED (аутоиммунный полиэндокринный синдром 1 типа) или мышечная дистрофия Дюшенна (МДД).

В предпочтительном варианте осуществления таким связанным с hCD45RC^high заболеванием, нарушением или состоянием является системная красная волчанка, воспалительное заболевание кишечника (включая болезнь Крона и язвенный колит) или APECED (аутоиммунный полиэндокринный синдром 1 типа).

Оно также относится к выделенному антителу или его связывающему фрагменту, нуклеиновой кислоте, вектору экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственному препарату по настоящему изобретению для применения в истощении популяции клеток с CD45RC^high у нуждающегося в этом субъекта, посредством экспансии и/или потенциации регуляторных Т-клеток, предпочтительно Foxp3⁺ и/или CD45RC^low Treg, что предупреждает и/или подавляет отторжение трансплантатов; или предупреждает, снижает интенсивность и/или лечит связанные с hCD45RC^high заболевания, нарушения или состояния.

В одном варианте осуществления создаются препараты для введения субъекту на основе выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению вводятся системно или местно.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению вводятся посредством инъекции, перорально, местно, назально, буккально, ректально, вагинально, интратрахеально, посредством эндоскопии, трансмукозально или посредством чрескожного введения.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению вводятся посредством инъекции, предпочтительно системной инъекции.

Примеры препаратов, подготовленных для инъекции, включают, помимо прочего, растворы, такие как, например, стерильные водные растворы, гели, дисперсии, эмульсии, суспензии, твердые формы, подходящие для использования при приготовлении растворов или суспензий с добавлением жидкости перед использованием, такие как, например, порошок, липосомные формы и подобные им.

Примеры системных инъекций включают, помимо прочего, внутривенную (в/в), подкожную, внутримышечную (в/м), внутрикожную (в/к), внутрибрюшинную (в/б) инъекцию и перфузию.

В одном варианте осуществления при инъекции выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению являются стерильными. Методы для получения стерильной композиции включают, помимо прочего, синтез по GMP (где GMP означает «Надлежащая производственная практика»).

Стерильные инъекционные формы композиции могут быть водной или маслянистой суспензией. Такие суспензии можно приготовить в соответствии с методами, известными в данной области, с применением подходящих диспергентов или увлажняющих и суспендирующих средств. Таким стерильным инъекционным препаратом также может быть стерильный инъекционный раствор или суспензия в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые могут применяться - вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды традиционно применяются стерильные, жирные масла. Для этой цели может применяться любое легкое жирное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. В приготовлении инъекционных препаратов полезными являются жирные кислоты, например, олеиновая кислота и ее глицеридные производные, а также природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в их полиоксиэтилированных версиях. Такие масляные растворы или суспензии также могут содержать разбавитель на основе спирта с длинной цепью или диспергент, например, карбоксиметилцеллюлозу или подобные диспергенты, которые обычно используются в приготовлении фармацевтически приемлемых дозированных форм, включая эмульсии и суспензии. Также для целей приготовления препарата могут применяться другие широко используемые поверхностно-активные вещества, такие как Tweens, Spans и другие эмульгирующие средства или улучшители биодоступности, которые обычно применяются в приготовлении фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других дозированных форм.

Следует понимать, что в настоящем изобретении также предполагаются другие подходящие способы введения, и решение о способе введения в конечном итоге принимает лечащий врач в рамках здравого медицинского суждения. Помимо введения посредством инъекции (в/в, в/б, в/м и подобных), возможно применение других способов, таких как распыление (Respaud et al, 2014. MAbs. 6(5): 1347-55; Guilleminault et al., 2014. J Control Release. 196:344-54; Respaud et al, 2015. Expert Opin Drug Deliv. 12(6): 1027-39) или чрескожное введение (Jackisch et al., 2014. Geburtshilfe Frauenheilkd. 74(4):343-349; Solal-Celigny, 2015. Expert Rev Hematol. 8(2):147-53).

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению вводятся нуждающемуся в этом субъекту в терапевтически эффективном количестве.

Термин «терапевтически эффективное количество» в контексте настоящего документа означает количество, эффективное при необходимых дозах и в течение необходимых периодов времени для достижения желаемого профилактического и/или терапевтического результата.

Тем не менее, следует понимать, что общая суточная доза выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению определяется лечащим врачом в рамках здравого медицинского суждения. Конкретный терапевтически эффективный уровень дозировки для определенного пациента будет зависеть от различных факторов, которые включают подлежащее лечению заболевание и степень тяжести этого заболевания; используемое выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновую кислоту, вектор экспрессии, композицию, фармацевтическую композицию или лекарственный препарат; возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол и диету субъекта; время введения, способ введения и скорость экскреции конкретного используемого выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата; продолжительность лечения; лекарственные средства, используемые в комбинации или одновременно с конкретным используемым выделенным антителом или его связывающим фрагментом, нуклеиновой кислотой, вектором экспрессии, композицией, фармацевтической композицией или лекарственным препаратом; и подобные факторы, хорошо известные в медицинской области. Например, в данной области принято начинать дозировки соединения на уровнях меньше уровней, необходимых для достижения желаемого терапевтического эффекта, и постепенно повышать дозировку до достижения желаемого терапевтического эффекта. Общая доза, необходимая для каждого лечения, может вводиться в виде нескольких доз или единичной дозы.

В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению варьирует от около 0.1 мг/кг до около 5 мг/кг, от около 0,2 мг/кг до около 4 мг/кг, от около 0,3 мг/кг до около 3 мг/кг, от около 0,4 мг/кг до около 2,5 мг/кг, от около 0,5 мг/кг до около 2 мг/кг.

В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению варьирует от около 10 мкг/кг до около 400 мкг/кг, от около 20 мкг/кг до около 300 мкг/кг, от около 30 мкг/кг до около 250 мкг/кг, от около 35 мкг/кг до около 200 мкг/кг, от около 40 мкг/кг до около 160 мкг/кг.

В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению вводится один раз в сутки, дважды в сутки, трижды в сутки или чаще.

В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению вводится ежедневно, через день, раз в три дня, раз в четыре дня, раз в пять дней, раз в шесть дней.

В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению вводится каждую неделю, раз в две недели, раз в три недели.

В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению вводится каждый месяц, раз в два месяца, раз в три месяца, раз в четыре месяца, раз в пять месяцев, раз в шесть месяцев.

В предпочтительном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению вводится каждые 12 часов, каждые 24 часа, каждые 36 часов, каждые 48 часов, каждые 60 часов, каждые 72 часа, каждые 96 часов.

В предпочтительном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению вводится каждые 60 часов.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению принимаются однократно. В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению принимаются длительное время.

В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению вводится на протяжении около 5 дней, 7 дней, 10 дней, 14 дней, 21 дня, 28 дней, 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 6 месяцев, 1 года или дольше.

В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению вводится на протяжении периода времени, который варьируется от около одной недели до около восьми недель, от около двух недель до около семи недель, от около двух недель до около шести недель, от около трех недель до около пяти недель.

В предпочтительном варианте осуществления терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению вводится на протяжении периода времени, который варьируется от около 10 дней до около 40 дней, от около 15 дней до около 35 дней, от около 20 дней до около 30 дней.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, композиция, фармацевтическая композиция или лекарственный препарат по настоящему изобретению вводятся до терапевтического средства, одновременно с ним или после него.

Некоторые примеры терапевтических средств, подходящих для одновременного введения с выделенным антителом или его связывающим фрагментом, нуклеиновой кислотой, вектором экспрессии, композицией, фармацевтической композицией или лекарственным препаратом по настоящему изобретению, включают, помимо прочего, иммуносуппрессанты, цитотоксины, химиотерапевтические средства, цитокины, иммуностимуляторы, литические пептиды и радиоизотопы.

Специалисту в данной области понятно, что одновременное введение выделенного антитела или его связывающего фрагмента, нуклеиновой кислоты, вектора экспрессии, композиции, фармацевтической композиции или лекарственного препарата по настоящему изобретению с определенным терапевтическим средством, которое может быть выбрано среди тех, которые указаны здесь, но не ограничиваясь ими, будет зависеть от заболевания или состояния, подлежащего предупреждению и/или лечению.

Примеры иммуносуппресантов включают, помимо прочего, ингибиторы mTOR, такие как, например, сиролимус, эверолимус, ридафоролимус, темсиролимус, умиролимус и зотаролимус; антагонисты рецептора IL-1, такие как, например, анакинра; антиметаболиты, такие как, например, азатиоприн, лефлуномид, метотрексат, микофеноловая кислота и терифлуномид; противоопухолевые иммуномодуляторы, такие как, например, апремиласт, леналидомид, помалидомид и талидомид; антитела, такие как, например, экулизумаб, аладимумаб, афелимомаб, цертолизумаб пэгол, голимумаб, инфликсимаб, нерелимомаб, меполизумаб, омализумаб, фаралимомаб, эльсилимомаб, лебрикизумаб, устекинумаб, секукинумаб, муромонаб-CD3, отеликсизумаб, теплизумаб, висилизумаб, кленоликсимаб, келиксимаб, занолимумаб, эфализумаб, эрлизумаб, обинутузумаб, ритуксимаб, окрелизумаб, пасколизумаб, гомиликсимаб, лумиликсимаб, тенеликсимаб, торализумаб, аселизумаб, галиксимаб, гавилимомаб, руплизумаб, белимумаб, блисибимод, ипилимумаб, тремелимумаб, бертилимумаб, лерделимумаб, метелимумаб, натализумаб, тоцилизумаб, одулимомаб, базиликсимаб, даклизумаб, инолимомаб, золимомаб аритокс, аторолимумаб, цеделизумаб, фонтолизумаб, маслимомаб, моролимумаб, пекселизумаб, реслизумаб, ровелизумаб, сиплизумаб, тализумаб, телимомаб аритокс, вапаликсимаб, вепалимомаб, абатацепт, белатацепт, этанерцепт, пегсунерцепт, афлиберцепт, алефацепт и рилонацепт.

Примеры цитотоксинов включают, помимо прочего, радионуклиды (например, ³⁵S, ¹⁴С, ³²Р, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁹⁰Y, ⁸⁹Zr, ²⁰¹Tl, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁵⁷Cu, ²¹³Bi и ²¹¹At), конъюгированные радионуклиды и химиотерапевтические средства. Другие примеры цитотоксинов включают, помимо прочего, антиметаболиты (например, 5-фторурицил (5-FU), метотрексат (МТХ), флударабин и т.д.), средства, оказывающие воздействие на микротрубочки (например, винкристин, винбластин, колхицин, таксаны (такие, как паклитаксел и доцетаксел) и т.д.), алкилирующие средства (например, циклофасфамид, мелфалан, бисхлорэтилнитрозомочевина (BCNU) и т.д.), препараты на основе платины (например, цисплатин (также называемый cDDP), карбоплатин, оксалиплатин, JM-216, CI-973 и т.д.), антрациклины (например, доксорубицин, даунорубицин и т.д.), антибиотики (например, митомицин-С), ингибиторы топоизомеразы (например, этопозид, тенопозид и камптотецины) или другие цитотоксические средства, такие как рицин, дифтерийный токсин (DT), экзотоксин Pseudomonas (РЕ) А, РЕ40, абрин, сапорин, вирусный белок фитолакки, этидия бромид, глюкокортикоид, сибиреязвенный токсин и другие.

Примеры химиотерапевтических средств включают, помимо прочего, координационные соединения платины (такие как, например, цисплатин, карбоплатин или оксалиплатин); таксановые соединения (такие как, например, паклитаксел или доцетаксел); ингибиторы топоизомеразы I (такие как, например, иринотекан или топотекан); ингибиторы топоизомеразы II (такие как, например, этопозид или тенипозид); алкалоиды барвинка (такие как, например, винбластин, винкристин или винорелбин); производные противоопухолевого нуклеозида (такие как, например, 5-фторурацил, гемцитабин или капецитабин); алкилирующие средства (такие как, например, азотистый иприт или нитрозомочевина, циклофосфамид, хлорамбуцил, кармустин или ломустин; производные противоопухолевого антрациклина (такие как, например, даунорубицин, доксорубицин, идарубицин или митоксантрон); антитела к HER2 (такие как, например, трастузумаб); антагонисты рецептора эстрогенов или селективные модуляторы рецептора эстрогена (такие как, например, тамоксифен, торемифен, дролоксифен, фаслодекс или ралоксифен); ингибиторы ароматазы (такие как, например, эксеместан, анастрозол, летразол или ворозол); дифференцирующие средства (такие как, например, ретиноиды, витамин D и блокираторы метаболизма ретиноевой кислоты [RAMBA], например, аккутан); ингибиторы ДНК-метилтрансферазы (такие как, например, азацитидин); ингибиторы киназы (такие как, например, флавоперидол, иматиниб мезилат илигуфитиниб); ингибиторы фарнезилтрансферазы; и ингибиторы HDAC.

Примеры цитокинов включают, помимо прочего, хемокины (такие как, например, CCL1, CCL2/MCP1, CCL3/MIP1α, CCL4/MIP1β, CCL5/RANTES, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18/PARC/DCCK1/АМАС1/MIP4, CCL19, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CCL28, CXCL1/KC, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8/IL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, CXCL17, CX3CL1, XCL1 и XCL2), факторы некроза опухолей (такие как, например, TNFA, Лимфотоксин, TNFSF4, TNFSF5/CD40LG, TNFSF6, TNFSF7, TNFSF8, TNFSF9, TNFSF10, TNFSF11, TNFSF13, TNFSF13B и EDA) и интерлейкины (такие как, например, IL-1α, IL-1β, IL-1Ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36α, IL-36β, IL-36γ, IL-36Ra, IL-37, IL-38, IFNα, IFNβ, IFNκ, IFNω и GM-CSF).

Примеры иммуностимуляторов включают, помимо прочего, филграстим, пегфилграстим, ленограстим, молграмостим, сарграмостим, анцестим, альбинтерферон, интерферон альфа, пегинтерферон альфа, интерферон бета, пегинтерферон бета, интерферон гамма, альдеслейкин, опрелвекин, гормон роста, иммуноцианин, пегадемаза, пролактин, тазонермин, гистаминдигидрохлорид, Poly ICLC, витамин D, лентинан, плериксафор, роквинимекс, мифамуртид, глатирамер ацетат, тимопентин, тимозин α1, тимулин, полиинозиновая : полицитидиловая кислота, пидотимод, вакцина бацилл Кальметта-Герена, вакцина от меланомы и вакцина сипулейцел-т.

Примеры литических пептидов включают, помимо прочего, токсины (такие как, например, токсин Diptheria или экзотоксин Pseudomonas).

Примеры радиоизотопов включают, помимо прочего, радионуклиды технеция (например, Тс-99 и Тс-97), калия (например, K-40), рубидия (например, Rb-82), йода (например, I-123, I-124, I-125, I-129, I-131), цезия (например, Cs-135, Cs-137), кобальта (например, Со-60), палладия (например, Pd-103, Pd-107), кадмия (например, Cd-113), стронция (например, Sr-89, Sr-90), европия (например, Eu-55), олова (например, Sn-121, Sn-126), фосфора (например, Р-32, Р-33), таллия (например, Tl-201), индия (например, In-111), галлия (например, Ga-67, Ga-68), иттрия (например, Y-90), иридия (например, Ir-192), висмута (например, Bi-213), радия (например, Ra-223, Ra-225) и рутения (например, Ru-106).

Настоящее изобретение также относится к применению выделенного антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению для обнаружения или количественного определения hCD45RC в образце, клетке, ткани или органе; и к методам обнаружения или количественного определения hCD45RC в образце, клетке, ткани или органе, включающим воздействие на указанный образец, клетку, ткань или орган выделенным антителом или его связывающим фрагментом по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления области применения и методы обнаружения или количественного определения hCD45RC могут быть in vitro или in vivo.

В одном варианте осуществления выделенное антитело или его связывающий фрагмент по настоящему изобретению помечают так, как описано ранее, для целей обнаружения или диагностики.

Исследования, подходящие для обнаружения или количественного определения hCD45RC с использованием выделенного антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению хорошо известны в данной области и включают, помимо прочего, иммуноферментный анализ ELISA, сэндвич-вариант иммуноферментного анализа ELISA, радиоиммунологический анализ RIA, анализ сортировки клеток с активированной флуоресценцией FACS, иммуногистохомию тканей, анализ вестерн-блот и иммунопреципитацию.

В одном варианте осуществления таким образцом является биологический образец. Примеры биологических образцов включают, помимо прочего, биологические жидкости (предпочтительно кровь, предпочтительнее сыворотка крови), плазму, синовиальную жидкость, жидкость бронхоальвеолярного лаважа, мокроту, лимфу, асцитическую жидкость, мочу, амниотическую жидкость, перитонеальную жидкость, спинномозговую жидкость, плевральную жидкость, перикардиальную жидкость, и альвеолярные макрофаги, лизаты тканей, биопсии и экстракты, полученные из пораженных тканей.

В одном варианте осуществления образец берут или получают у субъекта перед проведением любого анализа. Соответственно, в данном варианте осуществления способы применения и методы обнаружения и количественного определения hCD45RC - способы применения и методы in vitro.

Настоящее изобретение также относится к применению выделенного антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению для диагностики связанных с hCD45RC заболеваний у субъекта; а также к методам диагностики связанных с hCD45RC заболеваний у субъекта, включающих воздействие на образец, полученный от указанного субъекта, выделенным антителом или его связывающим фрагментом по настоящему изобретению.

Исследования, подходящие для обнаружения или количественного определения hCD45RC с использованием выделенного антитела или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению хорошо известны в данной области и включают, помимо прочего, иммуноферментный анализ ELISA, сэндвич-вариант иммуноферментного анализа ELISA, радиоиммунологический анализ RIA, анализ сортировки клеток с активированной флуоресценцией FACS, иммуногистохомию тканей, анализ вестерн-блот и иммунопреципитацию.

В одном варианте осуществления таким образцом является биологический образец. Примеры биологических образцов включают, помимо прочего, биологические жидкости (предпочтительно кровь, предпочтительнее сыворотка крови), плазму, синовиальную жидкость, жидкость бронхоальвеолярного лаважа, мокроту, лимфу, асцитическую жидкость, мочу, амниотическую жидкость, перитонеальную жидкость, спинномозговую жидкость, плевральную жидкость, перикардиальную жидкость, и альвеолярные макрофаги, лизаты тканей, биопсии и экстракты, полученные из пораженных тканей.

В одном варианте осуществления образец берут или получают у субъекта перед проведением любого анализа. Соответственно, в данном варианте осуществления способы применения и методы диагностики связанных с hCD45RC заболеваний - способы применения и методы in vitro.

В одном варианте осуществления такие связанные с hCD45RC заболевания - заболевания, связанные с hCD45RC^high, определение которым было дано ранее. В соответствии с данным вариантом осуществления, у субъекта может быть диагностировано связанное с hCD45RC заболевание, если hCD45RC обнаруживается в образце, полученном от указанного субъекта, на уровне, в количестве или с концентрацией, превышающих таковые у стандартного субъекта (например, у в значительной степени здорового субъекта или у субъекта, который, по имеющимся данным, не страдает от связанного с hCD45RC заболевания).

В одном варианте осуществления способы применения и методы диагностики связанных с hCD45RC заболеваний также включают этап лечения субъекта, если у указанного субъекта диагностируют связанное с hCD45RC заболевание.

В настоящей заявке раскрывается выделенное антитело к CD45RC человека или его связывающий фрагмент, при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент связываются с CD45RC человека:

(i) c равновесной константой диссоциации (K_D) 5×10^-7 М или менее;

(ii) со скоростью ассоциации (K_on) 1×10⁴ М^-1 сек^-1 или более; и/или

(iii) со скоростью диссоциации (K_off) 5×10^-2 сек^-1 или менее;

предпочтительно когда K_D, K_on и/или K_off определяются посредством поверхностного плазмонного резонанса.

Антитело или его связывающий фрагмент связываются с минимум одним эпитопом, представленным в С детерминанте hCD45RC.

Антитело или его связывающий фрагмент связываются с минимум одним эпитопом, содержащим минимум 5 аминокислот с SEQ ID NO: 23, или его фрагментом; или с последовательностью, имеющей идентичность минимум около 70% с SEQ ID NO: 23 или его фрагментом.

Антитело является моноклональным.

Антитело является мышиным, химерным или гуманизированным.

a) Вариабельная область тяжелой цепи (HCVR) антитела или его связывающего фрагмента содержит следующие три определяющих комплементарность области (CDR):

- VH-CDR1: NYYIG (SEQ ID NO: 1);

- VH-CDR2: X₁-IF-X₂-GG-X₃-Y-X₄-N-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-G (SEQ ID NO: 2); и

- VH-CDR3: RNFDY (SEQ ID NO: 3), и

b) вариабельная область легкой цепи (LCVR) указанного антитела или его связывающего фрагмента содержит следующие три CDR:

- VL-CDR1: X₁₁-ASSSVS-X₁₂-YMH (SEQ ID NO: 12);

- VL-CDR2: X₁₃-TSN-X₁₄-X₁₅-X₁₆ (SEQ ID NO: 13); и

- VL-CDR3: X₁₇-QRSSYPLTF (SEQ ID NO: 14);

где:

X₁ выбирается из Asp (D), Ile (I) и Arg (R);

X₂ выбирается из Pro (P) и Ser (S);

Х₃ выбирается из Asp (D), Ser (S) и Gly (G);

X₄ выбирается из Thr (Т) и Ala (А);

Х₅ выбирается из Tyr (Y) и Ser (S);

Х₆ выбирается из Ala (A), Asn (N) и Ser (S);

Х₇ выбирается из Glu (Е), Asp (D), Pro (Р) и Gln (Q);

Х₈ выбирается из Lys (K) и Ser (S);

Х₉ выбирается из Phe (F) и Val (V);

Х₁₀ выбирается из Lys (K) и Gln (Q);

Х₁₁ выбирается из Arg (R) и Ser (S);

Х₁₂ выбирается из Asn (N), Ser (S), Gly (G) и пустой позиции; Х₁₃ выбирается из Asn (N) и Ala (А); или Х₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N);

Х₁₄ выбирается из Leu (L), Ser (S) и Arg (R); X₁₅ выбирается из Pro (P), Ala (А) и Gln (Q); X₁₆ выбирается из Ser (S) и Thr (T); и Х₁₇ выбирается из Gln (Q) и His (H).

Антитело или его связывающий фрагмент содержат комбинацию CDR, представленную в Таблице 2.

Антитело или его связывающий фрагмент содержат:

a) HCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 61-70; и

b) LCVR, выбираемую из SEQ ID NO: 71-90.

Антитело или его связывающий фрагмент содержат комбинацию HCVR и LCVR, выбираемых из:

где Х₁₂ в SEQ ID NO 71-74 выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G).

В настоящей заявке также раскрывается нуклеиновая кислота, кодирующая выделенное антитело или его связывающий фрагмент, описанные выше.

В настоящей заявке также раскрывается вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту, описанную выше.

В настоящей заявке также раскрывается композиция, содержащая выделенное антитело или связывающий фрагмент, описанные выше, нуклеиновую кислоту, описанную выше, или вектор экспрессии, описанный выше.

В настоящей заявке также раскрывается фармацевтическая композиция, содержащая выделенное антитело или связывающий фрагмент, описанные выше, нуклеиновую кислоту, описанную выше, или вектор экспрессии, описанный выше, а также минимум одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

В настоящей заявке также раскрываются выделенное антитело или его связывающий фрагмент, описанные выше, нуклеиновая кислота, описанная выше, вектор экспрессии, описанный выше, композиция, описанная выше, или фармацевтическая композиция, описанная выше, предназначенные для применения в качестве лекарственного препарата.

Выделенное антитело или его связывающий фрагмент, описанные выше, нуклеиновая кислота, описанная выше, вектор экспрессии, описанный выше, композиция, описанная выше, или фармацевтическая композиция, описанная выше, предназначены для применения:

- в индуцировании иммунной толерантности у нуждающегося в этом субъекта;

- в предупреждении и/или подавлении отторжений трансплантата; и/или

- в предупреждении, подавлении и/или лечении связанных с CD45RC^выс состояний, предпочтительно выбираемых из аутоиммунных заболеваний, нежелательных иммунных ответов, моногенных заболеваний и лимфомы или рака.

Выделенное антитело или его связывающий фрагмент, описанные выше, нуклеиновая кислота, описанная выше, вектор экспрессии, описанный выше, композиция, описанная выше, или фармацевтическая композиция, описанная выше, предназначены для применения в профилактике и/или лечении реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ).

Краткое описание фигур.

Фиг. 1 показывает уровень экспрессии CD45RC (по результатам детектирования посредством ABIS-45RC или коммерчески доступного антитела МТ2) на разных типах лейкоцитов в человеческой крови. Окрашивание ABIS-45RC или МТ2 было выполнено на клетках разных типов в цельной крови (ЭДТА) здоровых добровольцев. Затем эритроциты подвергли лизису (Versalyse, Beckman Coulter) перед цитометрическим анализом (Navios, Beckman Coulter). Сначала клетки гейтировали на морфологию, дублетные клетки и живые клетки. (А(1) - А(3)) Репрезентативный анализ с точечными диаграммами экспрессии CD45RC по результатам детектирования ABIS-45RC или МТ2 у одного из трех здоровых добровольцев для разных типов лейкоцитов. ABIS-45RC показано на левых панелях, а МТ2 - на правых панелях, х-ось показывает интенсивность флуоресценции мечения маркеров последовательностей клеточных поколений для каждого показанного типа лейкоцитов; у-ось представляет интенсивность флуоресценции мечения антитела к CD45RC. Горизонтальные линии обозначают клетки с высокой, промежуточной/низкой и отрицательным уровнями экспрессии CD45RC, что показано на верхней левой точечной диаграмме, а числа представляют процентную долю клеток в каждой категории. (В(1) и В(2)) Средняя экспрессия+/- SEM CD45RC^high, CD45RC^low и CD45RC^- на разных типах лейкоцитов трех доноров, меченых ABIS-45RC (В(1)) или МТ2 (В(2)).

Фиг. 2 показывает, что и ABIS-45RC, и коммерческое антитело к CD45RC МТ2 конкурируют за один и тот же эпитоп.Мононуклеарные клетки периферической крови выделили из крови здоровых добровольцев и Т-клетки пометили Mab к CD3, химерным ABIS-45RC (с указанными концентрациями) и антителом к CD45RC (мышиным клоном MT2)-FITC с 1,33 мг/мл. Реактивность ABIS-45RC определили посредством использования биотинилированного вторичного антитела осла к человеческому IgG + Strepta PercpCy 5.5. Числа в окошках точечных диаграмм верхнего ряда представляют процентную долю клеток, которые были мечены обоими антителами.

Фиг. 3 показывает, что цитотоксичность, индуцированная ABIS-45RC, выше по сравнению с коммерческим антителом к CD45RC МТ2. Мононуклеарные клетки периферической крови здоровых добровольцев (n=3) инкубировали при 37°С со средой, изотипическим отрицательным контролем (2,5 или 10 мг/мл), ABIS-CD45RC (2,5 или 10 мг/мл) или дексаметазоном (10 мг/мл) в качестве положительного контроля в указанные временные периоды и затем клетки пометили мышиным антителом к CD3-FITC, а апоптотические клетки - Аннексином-V-PE. Графики (А-Е) показывают % клеток Аннексии V⁺ в указанных популяциях клеток. Репрезентативные точечные диаграммы (F) клеток Аннексии V⁺ (ранний апоптоз) и DAPI+(поздний апоптоз). Числа показывают процентную долю клеток в каждой категории.

Фиг. 4 показывает использование ABIS-45RC для лечения РТПХ у гуманизированных иммунодефицитных NSG мышей. (А) Экспериментальная процедура, показывающая, что мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) от здоровых доноров-добровольцев ввели внутривенно (в/в) (день 0) ранее (день -1) облученным сублетальными дозами (2 Гр) NSG иммунодефицитным мышам. ABIS-45RC вводили внутрибрюшинно (в/б) в соответствии с обозначенным протоколом в период со дня 0 по день 20. Изотипическим контролем был человеческий IgG (препарат IVIg), и его вводили в соответствии с тем же протоколом, что и ABIS-45RC. (В-С) Кривые выживаемости для NSG мышей и статистические данные проанализировали посредством анализа Каплана-Мейера (* р<0,01, ** р<0,001).

Фиг. 5 демонстрирует комбинацию точечных диаграмм проточной цитометрии, показывающих реактивность в отношении человеческих Т-клеток вариантов гуманизированных антител ABIS-45RC и мышиного антитела ABIS-45RC с двумя концентрациями (2 мкг/мл на левой панели, 1 мкг/мл на правой панели). (А) гуманизированное ABIS-45RC, вариант А; (В) гуманизированное ABIS-45RC, вариант В; (С) гуманизированное ABIS-45RC, вариант С; (D) гуманизированное ABIS-45RC, вариант D; (Е) гуманизированное ABIS-45RC, вариант Е; (F) гуманизированное ABIS-45RC, вариант F; (G) гуманизированное ABIS-45RC, вариант G; (Н) гуманизированное ABIS-45RC, вариант Н; (I) гуманизированное ABIS-45RC, вариант I; (J) мышиное ABIS-45RC.

Фиг. 6 показывает две точечные диаграммы поточной цитометрии, демонстрирующие, что как ABIS-45RC (левая панель), так и сконструированное Asn/Phe ABIS-45RC (правая панель) имеют эквивалентный профиль реактивности в отношении человеческих Т-клеток.

Фиг. 7 показывает уровень экспрессии CD45RC на лейкоцитах CD3+в человеческой крови трех здоровых добровольцев. Клетки сначала гейтировали на морфологию, дублетные клетки и живые клетки. (А) репрезентативный анализ с точечными диаграммами экспрессии CD45RC по результатам детектирования мышиным ABIS-45RC у одного из трех здоровых добровольцев; (В) репрезентативный анализ с точечными диаграммами экспрессии CD45RC по результатам детектирования гуманизированным ABIS-45RC, вариант А1, у одного из трех здоровых добровольцев; (С) репрезентативный анализ с точечными диаграммами экспрессии CD45RC по результатам детектирования гуманизированным ABIS-45RC, вариант A3, у одного из трех здоровых добровольцев, x-ось показывает FSC; у-осъ показывает интенсивность флуоресценции мечения антитела к CD45RC. Квадраты обозначают клетки с высоким, промежуточным/низким и отрицательными уровнями экспрессии CD45RC, а числа представляют процентную долю клеток в каждой категории.

Фиг. 8 показывает, что цитотоксичность, индуцированная ABIS-45RC или гуманизированными вариантами А1 и A3, является сопоставимой. МКПК здоровых добровольцев инкубировали при 37°С с изотопическим отрицательным контролем (10 мкг/мл), с мышиным ABIS-CD45RC (10 мкг/мл), с гуманизированным вариантом А1 (10 мкг/мл) или с гуманизированным вариантом A3 (10 мкг/мл) в течение указанных временных периодов, и затем клетки пометили антителами к CD3 и к CD45RA, а апоптотические клетки -Аннексином-V-PE. Графики показывают апоптоз в клетках CD3⁺CD45RA^выc (А) и CD3^- (В), по сравнению с состоянием для изотипического контроля.

Фиг. 9 показывает уровень экспрессии CD45RC (по результатам детектирования ABIS-45RC или гуманизированными вариантами А, А1 и A3) на клетках CD3⁺ (А) и клетках CD3^- (В) в крови макака. Клетки сначала гейтировали на морфологию, дублетные клетки и живые клетки. Репрезентативный анализ с точечными диаграммами экспрессии CD45RC по результатам детектирования ABIS-45RC или гуманизированными вариантами ABIS-45RC А, А1 и A3, х-ось показывает FSC; у-осъ показывает интенсивность флуоресценции мечения антитела к CD45RC. Квадраты обозначают клетки с положительными уровнями экспрессии CD45RC, а числа представляют процентную долю клеток.

Фиг. 10 показазывает выживаемость кожного трансплантата гуманизированных мышей, получивших лечение антителами к CD45RC человека. На NSG мышей, которым перенесли человеческие МНПК для индуцирования отторжения человеческой кожи, воздействовали мышиным ABIS-45RC или гуманизированным вариантом А1, вместе с рапамицином (Rapa). Результаты выражены как показатель выживаемости кожного трансплантата.

Примеры.

Далее настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами.

В этих примерах применяется следующая номенклатура: «ABIS-45RC»: мышиное антитело к hCD45RC по изобретению, содержащее:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 61;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 93;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 81; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 94.

«Вариант А антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 62;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 82; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант В антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 62;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 83; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант С антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 62;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 84; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант D антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 63;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 82; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант Е антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 63;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 83; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант F антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 63;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 84; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант G антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 64;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 83; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант Н антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 64;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 84; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант I антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 64;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 82; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант А1 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 101;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 85; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант А2 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 101;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 103; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант A3 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 65;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 85; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант А4 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 65;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 103; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант А5 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 62;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 85; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант А6 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 101;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 82; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант А7 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 121;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 85; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант А8 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 122;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 85; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант А9 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 123;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 85; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант А10 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 124;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 85; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант D1 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 63;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 85; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант И антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 67;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 85; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Вариант 12 антитела к 45RC»: гуманизированный вариант ABIS-45RC, содержащий:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 67;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 91;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 103; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«МТ2»: мышиное антитело к hCD45RC, коммерчески доступное в OriGene, арт. AM39022PU-N.

«Сконструированное Asn/Phe ABIS-45RC»: мышиное ABIS-45RC, химеризованное посредством конструирования его LCVR вставкой одного остатка в CDR1 и заменой одного остатка в FR3 (что описано в Примере 8). Сконструированное Asn/Phe ABIS-45RC содержит:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 61;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 93;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 71, где X₁₂ - Asn (N); и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 94.

«Сконструированное Ser/Phe ABIS-45RC»: мышиное ABIS-45RC, химеризованное посредством конструирования его LCVR вставкой одного остатка в CDR1 и заменой одного остатка в FR3 (что описано в Примере 8). Сконструированное Ser/Phe ABIS-45RC содержит:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 61;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 93;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 71, где Х₁₂ - Ser (S); и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 94.

«Сконструированное Gly/Phe ABIS-45RC»: мышиное ABIS-45RC, химеризованное посредством конструирования его LCVR вставкой одного остатка в CDR1 и заменой одного остатка в FR3 (что описано в Примере 8). Сконструированное Gly/Phe ABIS-45RC содержит:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 61;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 93;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 71, где Х12 - Gly (G); и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 94.

«Химерное N50A ABIS-45RC»: химерный вариант мышиного ABIS-45RC, содержащий легкую цепь мышиного ABIS-45RC и гуманизированную тяжелую цепь. Химерное N50A ABIS-45RC содержит:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 61;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 93;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 113; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Химерное S52A ABIS-45RC»: химерный вариант мышиного ABIS-45RC, содержащий легкую цепь мышиного ABIS-45RC и гуманизированную тяжелую цепь. Химерное S52A ABIS-45RC содержит:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 61;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 93;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 126; и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

«Химерное N50X ABIS-45RC»: химерный вариант мышиного ABIS-45RC, содержащий легкую цепь мышиного ABIS-45RC и гуманизированную тяжелую цепь. Химерное N5OX ABIS-45RC содержит:

- вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 61;

- константную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 93;

- вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 129, где Х₁₃ - любая аминокислота, кроме Ala (А) или Asn (N); и

- константную область легкой цепи с SEQ ID NO: 92.

Пример 1. Реактивность ABIS-45RC

Материал и методы

Окрашивание МКПК и сбор данных

50 мкл или 100 мкл свежей цельной крови с ЭДТА окрасили комбинациями соответствующих моноклональных антител (Abs) с последующим лизисом эритроцитов (versalyse, Beckman Coulter). После промывки клетки проанализировали на поточном цитометре Navios и данные проанализировали при помощи программного обеспечения Kaluza (Beckman Coulter, Марсель, Франция) и программного обеспечения FlowJo (Tree Star Inc).

Антитела и поточная цитометрия

Результаты

При первом скрининге ABIS-45RC не действовало против клеток CD45RC-, сортированных с использованием коммерческого клона МТ2 mAb к CD45RC, что указывает на то, что ABIS45RC смогло распознать CD45RC (данные не показаны).

Для дальнейшей характеристики ABIS-45RC мы проанализировали его реактивность с МКПК человека. Как показано на Фиг. 1А и В, часть Т CD4⁺ и Т CD8⁺ клеток - ABIS-45RC^high, а оставшиеся - ABIS-45RC^low или ABIS-45RC^-. Большинство В-клеток и NK клеток (естественных киллеров), а также pDC, были ABIS-45RC^high. Большинство NKT, iNKT MAIT, ILC2, ILC3 и CD14^intCD16⁺ моноцитов были ABIS-45RC^high или ABIS-45RC^low. CD14h^ighCD16^- моноциты, mDC, базофилов и нейтрофилов были преимущественно ABIS-45RC^-. CD4⁺ Treg и CD8⁺Foxp3⁺ Treg, по большей части, были ABIS-45RClow^/-.

Анализ основных популяций МКПК показал, что ABIS-45RC имело профиль реактивности, сопоставимый с коммерческим мышиным МТ2 антителом к CD45RC (Фиг. 1 и Picarda et al., 2017. JCIInsight. 2(3):e90088).

Пример 2. Сравнение ABIS-45RC и коммерческого антитела к CD45RC «МТ2»

Материал и методы

Выделение МКПК

Выполнили забор крови у здоровых добровольцев и мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) выделили посредством центрифугирования в градиенте фиколла, которое делает возможным удаление нежелательных фракций продуктов крови, таких как гранулоциты, тромбоциты и примесь эритроцитов.

Антитела и поточная цитометрия

Человеческие МКПК пометили антителом ABIS-45RC (с указанными концентрациями), антителом к CD3 и антителом к CD45RC (мышиный клон МТ2, Biolegend)-FITC с 1,33 мг/мл. Реактивность ABIS-45RC определили при помощи биотинилированного вторичного антитела осла к человеческому IgG⁺ Streptavidin PercpCy 5.5.

Для измерения интенсивности флуоресценции использовали цитометр Canto II (BD Biosciences) и данные проанализировали при помощи программного обеспечения FLOWJO (Tree Star Inc.). Клетки сначала гейтировали по их морфологии и мертвые клетки исключили посредством селекции DAPI-негативных клеток.

Анализ цитотоксичности

Человеческие МКПК инкубировали в среде при 37°С, с антителом изотипического контроля (Ms IgG1, клон 107.3, 10 мкг/мл), ABIS-45RC или антителом к CD45RC (мышиный клон МТ2) с концентрацией 2,5 или 10 мкг/мл в течение периода от 10 минут до 18 часов. Затем клетки окрасили антителом к CD3 (клон SK7, BD Biosciences), Аннексином-V и DAPI. Процентную долю апоптоза получили посредством гейтирования на клетках Аннексии V⁺ и DAPI⁺ среди Т или не-Т клеток посредством поточной цитометрии.

Результаты

И ABIS-45RC, и коммерческие антитела МТ2 к CD45RC конкурируют за один и тот же эпитоп

Как показано на Фиг. 2, совместное мечение коммерческим клоном МТ2 против CD45RC показало, что оба антитела конкурировали и, таким образом, узнавали один и тот же или близкий эпитоп человеческого CD45RC.

Цитотоксичностъ, индуцированная ABIS-45RC, выше по сравнению с коммерческим антителом к CD45RC

Как показано на Фиг. 3, ABIS-45RC было цитотоксическим к Т-клеткам, но не к клеткам, не являющимся Т-клетками. Более того, цитотоксичность Т-клеток была напрямую связана с уровнем экспрессии CD45RC и, что важно, ABIS-45RC показало более хорошие результаты при концентрации 2,5 мкг/мл по сравнению с клоном МТ2 при 10 мкг/мл.

Пример 3. Аффинность ABIS-45RC

Материал и методы

1×10⁷ МКПК CD45RChigh или клеток ЖХ, экспрессирующих CD45RC после плазмидной трансфекции, солюбилизировали при помощи набора для выделения мембранных белков Mem-PER (Thermo-fisher). ABIS-45RC иммобилизировали на биочипе СМ5 и клеточные мембраны инкубировали при 25°С для измерения констант аффинности с использованием SCK-метода и анализа концентрации без калибровки на BIAcore 3000 и BIAcore Т200.

Результаты

Измерения аффинности антитела CD45RC проанализировали посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR), технологии для анализа взаимодействий между антителом и антигеном, и анализ показал аффинность (K_D) в 5×10^-8 М, с K_on в 2.91×10⁵ М^-1.сек^-1 и K_off в 1.44×10^-2 сек^-1.

Пример 4. Лечение реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) с помощью ABIS-45RC

Материал и методы

Выделение МКПК

Забор крови у здоровых лиц выполнили в Établissement Francais du Sang (Нант, Франция). Письменное информированное согласие было получено в соответствии с правилами, принятыми в учреждении. МКПК выделили посредством центрифугирования в градиенте плотности фиколл-пака (Eurobio, Courtaboeuf, Франция). Оставшиеся красные клетки и тромбоциты удалили гипотоническим раствором и центрифугированием.

Животные

Мышей от 8 до 12 недель NOD/SCIDAL2Rγ^-/- (NSG) вырастили на наших собственных вивариях в условиях, свободных от специфической патогенной микрофлоры (SPF) (номер аккредитации С44-278).

Модель РТПХ

Все тело взрослых NSG иммунодефицитных мышей облучили сублетальными дозами (доза облучения 2 Гр в день -1) для индуцирования повреждений в тканях, которые способствуют развитию РТПХ. На следующий день (день 0) 1.5×10⁷ МКПК (включая Т-клетки CD45RC^high и CD45RC^low/-) от здоровых добровольцев ввели посредством внутривенной инъекции этим мышам. Человеческие МКПК и, в частности, Т-клетки реагируют против тканей мышей и атакуют их, вызывая повреждения. Эти Т-клетки и повреждения, наблюдаемые в печени, кишечнике, легких и коже, имитируют РТПХ, наблюдаемую после трансплантации костного мозга у людей или в других экспериментальных системах РТПХ, в которых используются грызуны в качестве доноров и реципиентов. В частности, такие повреждения тканей обычно вызывают потерю массы тела, которая начинается - в зависимости от числа инъецированных МКПК и в нашей экспериментальной системе -приблизительно на 13 день после инъекции МКПК. Контроль массы тела осуществляется ежедневно, и животных умертвляют, когда вес уменьшается до 20% от первоначального веса, во избежание излишних страданий.

Лечение

NSG мышам вводили внутрибрюшинно очищенное ABIS-45RC, с антителом МТ2 к CD45RC или с нерелевантным контролем (препаратом IVIg, используемым в клинических условиях, включающим человеческий очищенный IgG и содержащим преимущественно антитела IgG1) с дозировкой 0,8 мг/кг, начиная со дня 0 и каждые 2,5 дня в течение 20 дней.

NSG мыши, которым вводили ABIS-45RC или контрольные антитела, также получали внутрибрюшинно рапамицин со дня 0 по день 10 с субоптимальной дозой в 0,4 мг/сут.

Данная экспериментальная процедура описана на Фиг. 4А.

Результаты

Введение только МКПК вызвало потерю веса, начиная приблизительно со дня 14, и, как показано на Фиг. 4, смерть всех мышей ко дню 33 (медиана выживаемости: от 11 дней (Фиг. 4 В) до 15 дней (Фиг. 4С)).

Применение контрольного антитела и рапамицина продлило выживаемость без достижения статистической значимости (медиана выживаемости: 21 день (Фиг. 4С)).

При том, что применение МТ2 значительным образом продлило выживаемость мышей (медиана выживаемости: 19 дней (Иллюстрация 4 В)), применение ABIS-45RC значительным образом увеличило выживаемость мышей до 72 дней (медиана выживаемости: 35 дней (Фиг. 4 В)).

Наконец, комбинированное введение ABIS-45RC с рапамицином полностью предотвращало смерть вследствие РТПХ GVHD (100% выживаемость, Фиг. 4С).

Пример 5. Гуманизация ABIS-45RC

Было предпринято конструирование для гуманизации ABIS-45RC посредством переноса CDR в последовательности антитела зародышевой линии человека. ABIS-45RC гуманизировали посредством переноса трех CDR из LCVR (с SEQ ID NO: 15, 16 и 17) в LCVR зародышевой линии человека, максимально, насколько это возможно, гомологичной LCVR ABIS-45RC. Аналогичным образом, три CDR от HCVR (с SEQ ID NO: 1, 4 и 3) перенесли в HCVR зародышевой линии человека, максимально, насколько это возможно, гомологичной HCVR ABIS-45RC.

Кроме того, несколько аминокислотных остатков в каркасных областях (FR) выбранных вариабельных областей зародышевой линии человека заменили на аминокислотные остатки, присутствовавшие в мышиных вариабельных областях (так называемые обратные мутации). На основании информации о структуре вариабельных областей иммуноглобулина и руководствуясь гомологичной молекулярной моделью Fv антитела ABIS-45RC, определили, что эти несколько остатков в FR играют ключевую роль либо в поддержании CDR в правой конформации, либо в упаковке HCVR/LCVR, и, таким образом, их оставили в первой гуманизированной версии (версия А) или заменили их аналогами человеческой зародышевой линии, если возможно, в следующей гуманизированной версии (версии В и С). Руководствуясь гомологичной молекулярной моделью, в версиях В и С, если это посчитали возможным, остатки CDR также заменили на их аналоги человеческой зародышевой линии.

Создание модели гомологии

Модель ABIS-45RC создали в соответствии с установленными протоколами (Ramos, 2012. Methods MolBiol. 907:39-55).

Легкая цепь

В данном разделе, если не указано иное, нумерация аминокислот основывается на SEQ ID NO: 81.

Каркасные остатки LCVR использовали для поиска последовательностей структур антител с помощью BLAST. Первыми результатами были Protein Data Bank (PDB) ID: 4NCC (разрешение 2.50Å), где 83 из 89 остатков FR были идентичны и 85 из 89 остатков FR были схожи с остатками LCVR ABIS-45RC, и PDB ID: 1QOK (разрешение 2.40Å), где 83 из 87 остатков каркасных областей были идентичны и 84 из 87 остатков были схожи с остатками LCVR ABIS-45RC.

Последовательности этих двух структур отличались от таковой для LCVR ABIS-45RC (с SEQ ID NO: 81) с заменами Т9А, Т39Р, R44K, N49S и Р54А. Дополнительно, PDB ID: 4NCC отличалась последовательностью от LCVR ABIS-45RC с заменами L95F, A99G и L105I.

Сравнение этих двух структур показало высокую гомологию. Тем не менее, углеродные цепи приняли несколько другие конформации в областях А13-Е17 и Е104-K106.

На основании результатов последующих поисков CDR и присутствия двух N-концевых остатков, LCVR структуры PDB ID: 4NCC выбрали как каркасную матрицу LCVR и выбрали ротамерную конформацию L105I (в PyMol) относительно PDB ID: 1QOK.

Далее последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 области LCVR ABIS-45RC, с добавлением двух остатков на каждом конце, применили для поиска последовательностей структур антител посредством BLAST.

Для CDR1 первые результаты состояли из кластера последовательностей, где 9 из 9 остатков были идентичны. Среди них были PDB ID: 4NCC и PDB ID: 1QOK. Таким образом, структуру PDB ID: 4NCC приняли как матрицу для CDR1.

Для CDR2 первые результаты состояли из кластера последовательностей, где 6 из 7 остатков были идентичны. Среди них опять были PDB ID: 4NCC и PDB ID: 1QOK. Структуру PDB ID: 4NCC, следовательно, также приняли в качестве матрицы для CDR2.

Для CDR3 первым результатом, не имеющим гэпов, была PDB ID: 1QOK, где 13 из 13 остатков были идентичны. Тем не менее, PDB ID: 4NCC лишь немногим уступала PDB ID: 1QOK, имея 12 из 13 идентичных остатков. Сравнение этих двух структур показало, главным образом, идентичные конформации, за исключением замены L95F. Таким образом, структуру PDB ID: 4NCC приняли в качестве матрицы для CDR3 и выбрали ротамерную конформацию L95F (в PyMol) относительно PDB ID: 1QOK.

Таким образом, необходимости в том, что подставлять какие-либо матрицы CDR в матрицу каркаса LCVR не было, поскольку PDB ID: 4NCC выбрали в качестве первичной матрицы для всех CDR области LCVR.

Наконец, частичную модель LCVR вручную подвергли мутагенезу в 8 позициях (в PyMol) с выбором оптимальных ротамеров для соответствия последовательности LCVR ABIS-45RC.

Тяжелая цепь

В данном разделе, если не указано иное, нумерация аминокислот основывается на SEQ ID NO: 61.

Далее остатки каркаса HCVR использовали для поиска последовательностей структур антител посредством BLAST. Первым результатом была PDB ID: 3OPZ (разрешение 3.40Å), где 84 из 90 каркасных остатков были идентичны и 85 из 90 остатков были схожи с остатками области HCVR ABIS-45RC.

Поскольку в PDB ID: 3OPZ отсутствовал N-концевой остаток и разрешение было относительно невысоким, также рассмотрели дополнительные результаты с самыми высокими показателями идентичности/схожести. Первыми среди этих результатов были PDB ID: 4CAD (разрешение 2.50Å), где 78 из 91 каркасных остатков были идентичны и 87 из 91 остатков были схожи с остатками области HCVR ABIS-45RC; и PDB ID: 1RUR (разрешение 1.50Å), где 75 из 91 каркасных остатков были идентичны и 87 из 91 остатков были схожи с остатками области HCVR ABIS-45RC.

Сравнение структур PDB ID: 3OPZ и PDB ID: 4CAD показало высокую гомологию, а основное различие заключалось в альтернативных ротамерах остатков.

Сравнение структур PDB ID: 3OPZ и PDB ID: 1RUR, аналогичным образом, показало высокую гомологию; тем не менее, имелось значительное конформационное изменение в петле Vh-FR2 L45-G49 относительно структур PDB ID: 3OPZ и PDB ID: 4CAD.

Далее, на основании последовательности было сделано предположение, что HCVR ABIS-45RC и PDB ID: 4CAD будут демонстрировать конформацию Онеггера типа III (Honegger & Plückthun, 2001. J Mol Biol. 309(3):687-99) N-концевой нити 5-12 из-за присутствия глутамина в позиции 6. Тем не менее, было сделано предположение, что PDB ID: 1RUR будет демонстрировать конформацию Онеггера типа I из-за присутствия глутаминовой кислоты в позиции 6. Тем не менее, три структуры продемонстрировали идентичную конформацию нити 5-12. Также было сделано предположение, что последовательности HCVR ABIS-45RC, PDB ID: 4CAD и PDB ID: 1RUR примут K-форму (конформация с изломами), определенную пересмотренными правилами Ширай для CDR3 области HCVR (Kuroda et al., 2008. Proteins. 73(3):608-20).

На основании результатов последующих поисков CDR, более высокой общей схожести последовательности, структурной конкордантности с PDB ID: 3OPZ и более высокого экспериментального разрешения HCVR структуры PDB ID: 1RUR выбрали в качестве матрицы каркаса HCVR; тем не менее, петлю 45-49 PDB ID: 4CAD (имеющую ту же саму конформацию, что и PDB ID: 3OPZ) заменили на таковую PDB ID: 1RUR в матрице HCVR, используя N and С-концевые края двух остатков на концах 45-49 для фиксации фрагмента матрицы петли на матрице каркаса.

В последующем последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 области HCVR с добавлением двух остатков на каждом конце использовали для поиска последовательностей решенных структур антител посредством BLAST.

Для CDR1 имелся кластер последовательностей, в которых 9 из 12 остатков были идентичными. Среди них была PDB ID: 1RUR. Таким образом, структуру PDB ID: 1RUR выбрали в качестве матрицы для CDR1.

Для CDR2 главным результатом была PDB ID: 3NTC (разрешение 1.55Å), где 8 из 12 остатков были идентичны и 9 из 12 остатков были схожи с остатками HCVR ABIS-45RC. Тем не менее, PDB ID: 1RUR немногим уступала первой, имея 7 из 12 идентичных остатков и 9 из 12 схожих остатков относительно остатков HCVR ABIS-45RC. Сравнение двух структур показало, по существу, идентичные конформации, и более высокая идентичность PDB ID: 3NTC была обусловлена 2 С-концевыми остатками, добавленными к последовательности CDR2 в целях поиска BLAST. Таким образом, в качестве матрицы для CDR2 предпочли структуру PDB ID: 1RUR.

Для CDR3 первыми двумя результатами, не имеющими гэпов, были PDB ID: 1NGY (разрешение 2.20Å) и PDB ID: 1NGZ (разрешение 1.60Å), обе из которых имели 8 из 11 идентичных остатков и 9 из 11 схожих остатков относительно остатков HCVR ABIS-45RC. Сравнение двух структур показало значительным образом различающуюся конформацию основной цепи. Без привязки к конкретной теории авторы настоящего изобретения выдвинули гипотезу, что такое различие могло быть обусловлено остатком в позиции 101. В PDB ID: 1NGY более крупный метионин не может принять ориентацию меньшего серина PDB ID: 1NGZ, который направляет свою боковую цепь в белковую сердцевину. Поскольку желаемая замена для соответствия последовательности HCVR антитела ABIS-45RC - F101, структуру PDB ID: 1NGY приняли в качестве матрицы для CDR3. Далее для завершения частичной модели HCVR матрицу CDR3 перенесли на модифицированную матрицу HCVR PDB ID: 1RUR с использованием краев двух остатков на концах для фиксации фрагмента матрицы CDR на каркасной матрице (в PyMol).

Наконец, частичную модель HCVR вручную подвергли мутагенезу в 23 позициях (в PyMol) с выбором оптимальных ротамеров для соответствия последовательности HCVR ABIS-45RC.

Сборка конечной модели

Далее выбрали наилучшие третичные расположения частичных моделей HCVR и LCVR для сборки конечной модели. Последовательности матриц HCVR и LCVR отправили на сервер PAPS (Packing Angle Prediction Server) (Abhinandan & Martin, 2010. Protein Eng Des Sel. 23(9):689-97) для определения прогнозируемого наилучшего третичного расположения. Сервер PAPS выдал результат, что решенная структура антител PDB ID: 1MNU с относительным углом упаковки в -45,6° обеспечит наилучшее третичное расположение HCVR и LCVR. Таким образом, конечная модель была собрана посредством подстановки основных координат консервативных якорных сегментов частичных моделей HCVR и LCVR в PDB ID: 1MNU (в PyMol).

Наконец, координаты этой конечной модели подвергли циклу минимизации энергии с использованием GROMACS (Van der Spoel et ah, 2005. JComput Chem. 26(16):1701-18) с силовым полем GROMOS96 (Scott et al., 1999. JPhys Chem A. 103(19):3596-3607).

Зародышевые линии человека

Для конструирования CDR-привитых версий HCVR и LCVR ABIS-45RC было выбрано два раза по три зародышевые линии человека:

- IGHV1-2*01, IGHV5-51*01 и IGHV3-11 *05 для HCVR; и

- IGKV1-9*01, IGKV6-21*02 и IGKV3-11*01 для LCVR.

Конструирование гуманизированных HCVR и LCVR

Гуманизированные версии А и для HCVR, и для LCVR - консервативные версии, которые в явном виде минимизируют и/или избегают изменения остатков CDR. В связи с этим предполагается, что такие версии будут обеспечивать схожее или более эффективное связывание и/или активность как химерное антитело (HCVR [SEQ ID NO: 61] и LCVR [SEQ ID NO: 81] ABIS-45RC, слитые с константными областями человека [SEQ ID NO: 91 и 92]).

Гуманизированные версии В и для HCVR, и для LCVR конструируются таким образом, чтобы обеспечить процент идентичности последовательности с самой близкой зародышевой линией человека минимум 85%. Этого можно достичь посредством модифицирования на уровне генов зародышевой линии (т.е. замещения мышиного остатка соответствующим остатком зародышевой линии человека) аминокислотных остатков FR и/или CDR. 85% - предельная идентичность в процентах, необходимая для получения субосновы -zu- для «гуманизированного», обозначение в соответствии с руководством Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) 2014 по Международным непатентованным названиям (МНН) антител.

Гуманизированные версии С и для HCVR, и для LCVR конструируются таким образом, что достичь самой высокой степени идентичности последовательностей с соответствующей зародышевой линией человека. После проверки молекулярной модели гомологии несколько остатков определили в качестве кандидатов на модифицирование на уровне генов зародышевой линии. Таким образом, во внимание приняли все остатки, которые на разумных основаниях могли быть модифицированы на уровне генов зародышевой линии.

HCVR при использовании IGHV1-2*01

Для создания гуманизированной версии A HCVR из IGHV1-2*01 мышиные CDR (с SEQ ID NO: 1, 4 и 3) привили к IGHV1-2*01 и 4 остатка в FR2 и FR3 подвергли обратной мутации в исходные мышиные остатки для обеспечения полной активности антитела. Это остатки 148, L70, А72 и V97 в SEQ ID NO: 61. Полученная HCVR представлена в SEQ ID NO: 62 и имеет идентичность последовательностей в 81,6% с зародышевой линией человека IGHV1-2*01.

Для создания гуманизированной версии В HCVR из IGHV1-2*01, дополнительно к версии А, 5 аминокислотных остатков в CDR2 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии (т.е. заменили соответствующими остатками зародышевой линии человека IGHV1-2*01). Это остатки D56G, А58Т, S60Y, N61A и K65Q в SEQ ID NO: 61. Полученная HCVR представлена в SEQ ID NO: 65 и имеет идентичность последовательностей в 86,7% с зародышевой линией человека IGHV1-2*01.

Для создания гуманизированной версии С HCVR из IGHV1-2*01, дополнительно к версии В, 2 аминокислотных остатка в CDR2 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остатки D50R и E62Q в SEQ ID NO: 61. Полученная HCVR представлена в SEQ ID NO: 68 и имеет идентичность последовательностей в 88,8% с зародышевой линией человека IGHV1-2*01.

Затем создали различные другие гуманизированные версии HCVR из IGHV1-2*01, начиная с версии В. Действительно, для получения хорошо гуманизированного моноклонального антитела предполагается, что достаточным является показатель в 85% (версия В из IGHV1-2*01 имеет идентичность последовательностей в 86,7% с зародышевой линией человека IGHV1-2*01). Для снижения риска появления мутаций версии D, Е, F, G и Н были сконструированы таким образом, чтобы достичь показатель в 85% и не более.

Полученные версии D, Е, F, G и Н HCVR из IGHV1-2*01 представлены в SEQ ID NO: 101, 121, 122, 123 и 124, соответственно, и все имеют идентичность последовательностей в 85,7% с зародышевой линией человека IGHV1-2*01.

HCVR с использованием IGHV5-51 *01

Для создания гуманизированной версии A HCVR из IGHV5-51*01 мышиные CDR (с SEQ ID NO: 1, 4 и 3) привили к IGHV5-51*01 и 6 остатков в FR1, FR2 и FR3 подвергли обратной мутации в исходные мышиные остатки для сохранения полной активности антитела. Это остатки А24, Т28,148, L70, L83 и V97 в SEQ ID NO: 61. Полученная HCVR представлена в SEQ ID NO: 63 и имеет идентичность последовательностей в 79,6% с зародышевой линией человека IGHV5-51*01.

Для создания гуманизированной версии В HCVR из IGHV5-51*01, дополнительно к версии А, 1 аминокислотный остаток в FR1 и 6 аминокислотных остатков в CDR2 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остатки A24G, D56S, А58Т, S60Y, N61S, K63S и K65Q в SEQ ID NO: 61. Полученная HCVR представлена в SEQ ID NO: 66 и имеет идентичность последовательностей в 86,7% с зародышевой линией человека IGHV5-51*01.

Для создания гуманизированной версии С HCVR из IGHV5-51*01, дополнительно к версии В, 1 аминокислотный остаток в FR1 и 2 аминокислотных остатка в CDR2 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остатки T28S, D50I и Е62Р в SEQ ID NO: 61. Полученная HCVR представлена в SEQ ID NO: 69 и имеет идентичность последовательностей в 89,8% с зародышевой линией человека IGHV5-51*01.

HCVR с использованием IGHV3-11*05

Для создания гуманизированной версии A HCVR из IGHV3-11*05 мышиные CDR (с SEQ ID NO: 1, 4 и 3) привили к IGHV3-11*05 и 9 остатков в FR1, FR2 и FR3 подвергли обратной мутации в исходные мышиные остатки для сохранения полной активности антитела. Это остатки Y27, Т30, 148, G49, L70, А72, Т74, А79 и V97 в SEQ ID NO: 61. Полученная HCVR представлена в SEQ ID NO: 64 и имеет идентичность последовательностей в 76,5% с зародышевой линией человека IGHV3-11 *05.

Для создания гуманизированной версии В HCVR из IGHV3-11*05, дополнительно к версии А, 2 аминокислотных остатка в FR1, 6 аминокислотных остатков в CDR2 и 1 аминокислотный остаток FR3 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остатки Y27F, T30S, D56S, А58Т, S60Y, N61 A, E62D, K63S и A79L в SEQ ID NO: 61. Полученная HCVR представлена в SEQ ID NO: 67 и имеет идентичность последовательностей в 89,8% с IGHV3-11*05.

Для создания гуманизированной версии С HCVR из IGHV3-11*05, дополнительно к версии В, 1 аминокислотный остаток в FR2 и 1 аминокислотный остаток в CDR2 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остатки I48V и P53S в SEQ ID NO: 61. Полученная HCVR представлена в SEQ ID NO: 70 и имеет идентичность последовательностей в 87,8% с зародышевой линией человека IGHV3-11*05. LCVR с использованием IGKV1-9*01

Для создания гуманизированной версии A LCVR из IGKV1-9*01 мышиные CDR (с SEQ ID NO: 15, 16 и 17, где X₁₂ отсутствует) привили к IGKV1-9*01 и 3 остатка в FR2 и FR3 подвергли обратной мутации в исходные мышиные остатки для сохранения полной активности антитела. Это остатки F35, W46 и Y70 в SEQ ID NO: 81. Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 82 и имеет идентичность последовательностей в 83,2% с зародышевой линией человека IGKV1-9*01.

Для создания гуманизированной версии В LCVR из IGKV1-9*01, дополнительно к версии А, 1 аминокислотный остаток в CDR1 и 1 аминокислотный остаток в FR2 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остатки S24R и F35Y в SEQ ID NO: 81. Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 85 и имеет идентичность последовательностей в 85,3% с зародышевой линией человека IGKV1-9*01.

Для создания гуманизированной версии С LCVR из IGKV1-9*01, дополнительно к версии В, 2 аминокислотных остатка в CDR2 и 1 аминокислотный остаток в FR3 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остатки N49A, P54Q и Y70F в SEQ ID NO: 81. Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 88 и имеет идентичность последовательностей в 88,4% с зародышевой линией человека IGKV1-9*01.

Далее создали версию D LCVR из IGKV1-9*01 для введения дополнительного остатка (Ser; S) в CDR1, имеющегося в зародышевой линии человека IGKV1-9*01. Введение дополнительного остатка в петлю CDR1 показало, что активность связывания была консервативной (данные не показаны). Введение серинового остатка в CDR1 версии В доводит идентичность последовательностей до 86,3%, поэтому для снижения риска введения мутаций была создана версия D, где остаток L36 по Kabat был возвращен в первоначальный мышиный остаток Phe (F). Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 103.

LCVR с использованием IGKV6-21*02

Для создания гуманизированной версии A LCVR из IGKV6-21*02 мышиные CDR (с SEQ ID NO: 15, 16 и 17, где Х₁₂ отсутствует) привили к IGKV6-21*02 и 4 остатка в FR2 и FR3 подвергли обратной мутации в исходные мышиные остатки для сохранения полной активности антитела. Это остатки F35, W46, Y48 и Y70 в SEQ ID NO: 81. Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 83 и имеет идентичность последовательностей в 81,1% с зародышевой линией человека IGKV6-21*02.

Для создания гуманизированной версии В LCVR из IGKV6-21*02, дополнительно к версии А, 1 аминокислотный остаток в CDR1, 1 аминокислотный остаток в FR2, 1 аминокислотный остаток в CDR2 и 1 аминокислотный остаток в FR3 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остатки S24R, F35Y, L53S и Y70F в SEQ ID NO: 81. Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 86 и имеет идентичность последовательностей в 85,3% с зародышевой линией человека IGKV6-21*02.

Для создания гуманизированной версии С LCVR из IGKV6-21*02, дополнительно к версии В, 1 аминокислотный остаток в CDR3 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остаток Q88H в SEQ ID NO: 81. Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 89 и имеет идентичность последовательностей в 86,3% с зародышевой линией человека IGKV6-21*02.

LCVR с использованием IGKV3-11*01

Для создания гуманизированной версии A LCVR из IGKV3-11*01 мышиные CDR (с SEQ ID NO: 15, 16 и 17, где Х₁₂ отсутствует) привили к IGKV3-11*01 и 3 остатка в FR2 и FR3 подвергли обратной мутации в исходные мышиные остатки для сохранения полной активности антитела. Это остатки F35, W46 и Y70 в SEQ ID NO: 81. Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 84 и имеет идентичность последовательностей в 84,2% с зародышевой линией человека IGKV3-11*01.

Для создания гуманизированной версии В LCVR из IGKV3-11*01, дополнительно к версии А, 1 аминокислотный остаток в CDR1 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остаток S24R in SEQ ID NO: 81. Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 87 и имеет идентичность последовательностей в 85,3% с зародышевой линией человека IGKV3-11*01.

Для создания гуманизированной версии С LCVR из IGKV3-11*01, дополнительно к версии В, 1 аминокислотный остаток в FR2, 3 аминокислотных остатка в CDR2 и 1 аминокислотный остаток в FR3 далее модифицировали на уровне генов зародышевой линии. Это остатки F35Y, L53R, Р54А, S55 и Y70F в SEQ ID NO: 81. Полученная LCVR представлена в SEQ ID NO: 90 и имеет идентичность последовательностей в 90,5% с зародышевой линией человека IGKV3-11*01.

Пример 6. Продуцирование, очистка и определение характеристик гуманизированных антител к 45RC

Аналитическую эксклюзионную хроматографию по размеру (SEC-HPLC) и дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC) применили для сравнения профиля и термостабильности, соответственно, 9 вариантов гуманизированных антител к 45RC от А до I. Эти варианты соответствуют антителу, включающему «версии А» HCVR и LCVR, описанные в Примере 5. Аналитическую эксклюзионную хроматографию по размеру (SEC-HPLC) и дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC) также применили для сравнения профиля и термостабильности, соответственно, 4 других вариантов гуманизированных антител к 45RC A1, А2, II и 12. Материал и методы

Эксклюзионная хроматография по размеру - высокоэффективная жидкостная хроматография (SEC-HPLC)

Применили систему ВЭЖХ Shimadzu Prominence с колонкой Superdex 200 Increase 5/150 GL (GE Healthcare). Колонку предварительно откалибровали в том же буфере и в тех же условиях, которые применялись во время анализа образцов (с использованием калибровочных наборов Molecular Weight SEC Calibration kits производства GE Healthcare, в PBS IX, с расходом 0,25 мл/мин, с настройкой термостата колонки на 30°С).

Все образцы центрифугировали (20.000 g, 5 минут, 4°С) и их содержание белков количественно определили при помощи спектрофотометра Nanodrop ND-1000 с программой анализа IgG перед проведением эксклюзионной хроматографии по размеру (SEC).

Изократическую программу настроили на подачу около 15 мкг каждого образца при расходе в 0,25 мл/мин в течение 18 минут.После проведения анализа SEC из необработанных данных извлекли хроматограмму 280 нм и провели анализ посредством интегрирования пиков.

Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)

Для проведения исследований посредством дифференциальной сканирующей калориметрии применили систему MicrocalTM VP-Capillary DSC.

Образцы в 1x PBS буфере центрифугировали (20.000 g, 5 минут, 4°С) и их содержание белков количественно определили при помощи спектрофотометра Nanodrop ND-1000 с программой анализа IgG перед проведением дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC). Затем образцы растворили в PBS до конечной концентрации в 1 мг/мл.

Предварительное время уравновешивания составило 3 минуты, и последующие термограммы были получены в диапазоне от 20 до 110°С со скоростью сканирования в 60°С/час, периодом фильтрации в 25 секунд и средней обратной связью.

Перед анализом образцов были выполнены измерения 5 сканирований буфер/буфер для стабилизации прибора и сканирование буфер/буфер выполнялось между каждым сканированием белок/буфер.

Данные подставили в модель развертывания без перехода двух фаз с вычетом откорректированной опорной линии до и после перехода. Калометрическая энтальпия (АН) определяется как площадь под пиком перехода, а энтальпия Вант-Гоффа (AHv) определяется на основании используемой модели.

Результаты

SEC-HPLC

Параметры SEC указаны в нижеприведенной Таблице 7.

В вышеприведенной Таблице 7 жирным шрифтом показаны пики, соответствующие антителам к CD45RC (пик 3 для каждого из вариантов с А до Н, I1 и I2; и пик 2 для каждого из вариантов I, А1 и А2), при этом ВУ и рассчитанный MB предполагаются для мономерного, неосажденного и недиссоциированного антитела.

DSC

Параметры DSC приведены в Таблице 8 ниже.

Пример 7. Реактивность вариантов A-I гуманизированного ABIS-45RC

Материал и методы

Выделение МКПК

Выполнили забор крови здоровых добровольцев и выделили мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) посредством центрифугирования в градиенте фиколла, что позволило удалить нежелательные фракции продуктов крови, таких как гранулоциты, тромбоциты и примесь эритроцитов.

Антитела и проточная цитометрия

Человеческие МКПК пометили мышиным антителом ABIS-45RC или любым из вариантов A-I гуманизированных антител ABIS-45RC (с 2 мкг/мл и 1 мкг/мл) и антителом к CD3. Реактивность мышиных и гуманизированных антител ABIS-45RC определили при помощи биотинилированного вторичного антитела осла к человеческому IgG+Streptavidin PercpCy 5.5.

Для измерения интенсивности флуоресценции применили цитометр Canto II (BD Biosciences) и данные проанализировали с помощью программного обеспечения FLOWJO (Tree Star Inc.). Сначала клетки гейтировали по их морфологии и мертвые клетки исключили посредством селекции DAPI-отрицательных клеток.

Результаты

И антитело ABIS-45RC, и коммерческое антитело к CD45RC МТ2 конкурируют за один и тот же эпитоп

Мечение любым из гуманизированных антител ABIS-45RC (вариант А, Фиг. 5А; вариант В, Фиг. 5В; вариант С, Фиг. 5С; вариант D, Фиг. 5D; вариант Е, Фиг. 5Е; вариант F, Фиг. 5F; вариант G, Фиг. 5G; вариант Н, Фиг. 5Н; вариант I, Фиг. 51) или мышиным ABIS-45RC (Фиг. 5J) показывает, что антитела распознавали CD45RC человека аналогичным образом.

Пример 8. Сконструированные антитела

CDR1 области LCVR антитела ABIS-45RC имеет каноническую структуру, уникальную для мышиных антител, с длиной в 10 аминокислотных остатков (SEQ IDNO: 15, где Х₁₂ отсутствует, т.е. SASSSVSYMH).

Для создания гуманизированных версий А, В и С области LCVR, описанных в Примере 5, эту CDR1 с 10 аминокислотными остатками привили к зародышевым линиям человека, с обратной мутацией и/или модифицированием на уровне генов зародышевой линии, но без добавления или удаления какого-либо остатка. Тем не менее, в зародышевых линиях человека CDR1 области LCVR имеет минимальную длину в 11 аминокислотных остатков.

Таким образом, для повышения степени идентичности последовательностей с соответствующей зародышевой линией человека гуманизированных антител авторы настоящего изобретения предприняли попытку сконструировать ABIS-45RC VL-CDR1 "SASSSVSYMH" для добавления еще одного дополнительного остатка. Одной позицией-кандидатом является позиция 8 в SEQ ID NO: 15 (обозначенная как Х₁₂), т.е. между S30 и Y31 в SEQ ID NO: 81. Во всех зародышевых линиях-кандидатах для гуманизации эту позицию занимают Asn (N), Ser (S) или Gly (G), в то время как в мышиной зародышевой линии эта позиция не занята.

Чтобы исследовать значимость структуры и стабильность такой вставки VL-CDR1 антитела ABIS-45RC расширили посредством вставки аспарагина, т.е. SEQ ID NO: 15, где X₁₂ - Asn (N), т.е. SASSSVSNYMH. Затем выполнили поиск последовательностей структур антител посредством BLAST. Главным результатом была CDR1 области LCVR структуры PDB ID: 5СМА. Затем этот структурный сегмент привили к модели ABIS-45RC с использованием концов двух остатков на ее концах для фиксации фрагмента матрицы CDR на данной модели. Было отмечено, что для введения дополнительного остатка имело место конформационное изменение, которое сдвинуло соседний остаток, что привело к незначительному пространственному столкновению с Y70. Тем не менее, во всех зародышевых линиях человека этот остаток - более аккомодирующий фенилаланин.

Сконструированное мышиное антитело

На основании вышеизложенного, авторы настоящего изобретения сконструировали антитело ABIS-RC45, вставив аспарагиновый остаток (Asn, N) в VL-CDR1 и далее мутировав Y70 с SEQ ID NO: 81 в фенилаланин (Phe, F). Полученная LCVR «сконструированного антитела Asn/Phe ABIS-RC45» представлена в SEQ ID NO: 71, где Х₁₂ - Asn (N).

Аналогичным образом были созданы два других мышиных антитела посредством вставки серинового остатка (Ser, S) или глицинового остатка (Gly, G) в VL-CDR1 и последующей мутации Y70 с SEQ ID NO: 81 в фенилаланин (Phe, F). Две полученных LCVR «сконструированного Ser/Phe ABIS-RC45» и «сконструированного Gly/Phe ABIS-RC45» представлены в SEQ ID NO: 71, где Х₁₂ - Ser (S) или Gly (G), соответственно.

Сконструированные гуманизированные антитела

На основании вышеизложенного далее можно было разработать сконструированные гуманизированные версии А, В и С LCVR (что описано в Примере 5), представленные в SEQ ID NO: 72-80, где X₁₂ - Asn (N), Ser (S) или Gly (G) и остаток в позиции 70 - Phe (F).

Пример 9. Реактивность сконструированного Asn/Phe ABIS-45RC

Материал и методы

Выполнили забор крови здоровых добровольцев и выделили мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) посредством центрифугирования в градиенте фиколла, что позволило удалить нежелательные фракции продуктов крови, таких как гранулоциты, тромбоциты и примесь эритроцитов.

Человеческие МКПК пометили антителом ABIS-45RC или сконструированным Asn/Phe ABIS-45RC и антителом к CD3. Реактивность определили при помощи биотинилированного вторичного антитела осла к человеческому IgG⁺ Streptavidin PercpCy 5.5.

Для измерения интенсивности флуоресценции применили цитометр Canto II (BD Biosciences) и данные проанализировали с помощью программного обеспечения FLOWJO (Tree Star Inc.). Сначала клетки гейтировали по их морфологии и мертвые клетки исключили посредством селекции DAPI-отрицательных клеток.

Результаты

Как показано на Фиг. 6, мечение ABIS-45RC (левая панель) или сконструированным Asn/Phe ABIS-45RC (правая панель) показывает, что оба антитела распознавали CD45RC человека аналогичным образом.

Пример 10. Реактивность гуманизированных ABIS-45RC

Материал и методы

Выполнили забор крови здоровых добровольцев и выделили мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) посредством центрифугирования в градиенте фиколла, что позволило удалить нежелательные фракции продуктов крови, таких как гранулоциты, тромбоциты и примесь эритроцитов.

Человеческие МКПК пометили антителом ABIS-45RC или гуманизированным ABIS-45RC с 20, 5, 1,25 или 0,3 мкг/мл и антителом к CD3. Реактивность определили при помощи биотинилированного вторичного антитела осла к человеческому IgG⁺ Streptavidin PercpCy 5.5.

Для измерения интенсивности флуоресценции применили цитометр Canto II (BD Biosciences) и данные проанализировали с помощью программного обеспечения FLOWJO (Tree Star Inc.). Сначала клетки гейтировали по их морфологии и мертвые клетки исключили посредством селекции DAPI-отрицательных клеток.

Результаты

Мечение мышиным ABIS-45RC (Фиг. 7А) или гуманизированным ABIS-45RC, вариант А1 (Фиг. 7В) или вариант A3 (Фиг. 7С), с разными концентрациями показало, что оба антитела распознавали CD45RC человека аналогичным образом.

Пример 11. Индукция гибели клеток вариантами гуманизированного

ABIS-45RC

Материал и методы

Человеческие МКПК инкубировали со средой, изотипическим контролем Ab или вариантами антител к CD45RC (10 мкг/мл) в течение 6 часов. Затем клетки окрасили антителом к CD3 и антителом к CD45RA, аннексином V и DAPI. Процент общего апоптоза получили гейтированием на DAPI⁺ Аннексии V⁺+DAPI^- Аннексии V⁺ клетках среди Т-клеток или клеток, не относящихся к Т-клеткам, посредством поточной цитометрии.

Результаты

ABIS-45RC или гуманизированные варианты А1 или A3 эффективным образом индуцировали гибель клеток CD3⁺ (Фиг. 8А), но не клеток CD3^- (Фиг. 8 В).

Пример 12. Кросс-реактивность гуманизированного AB1S-45RC с приматом

Материал и методы

Выполнили забор крови у яванского макака и выделили мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) посредством центрифугирования в градиенте фиколла. МКПК пометили ABIS-45RC или гуманизированным ABIS-45RC с 10 мкг/мл и антителом к CD3. Реактивность определили при помощи биотинилированного вторичного антитела осла к человеческому IgG⁺ Streptavidin PercpCy 5.5.

Для измерения интенсивности флуоресценции применили цитометр Canto II (BD Biosciences) и данные проанализировали с помощью программного обеспечения FLOWJO (Tree Star Inc.). Сначала клетки гейтировали по их морфологии и мертвые клетки исключили посредством селекции DAPI-отрицательных клеток.

Результаты

Мечение ABIS-45RC или гуманизированными вариантами А, А1 или A3 показало, что все антитела распознавали CD45RC макака аналогичным образом в клетках CD3+ (Иллюстрация 9А) и клетках CD3- (Иллюстрация 9В).

Пример 13. Лечение отторжения человеческой кожи с помощью ABIS-45RC и гуманизированного варианта А1

Материал и методы

Выделение МКПК

Забор крови выполнили в du Sang (Нант, Франция) у

здоровых лиц. Письменное информированное согласие было получено в соответствии с правилами, принятыми в учреждении. МКПК выделили посредством центрифугирования в градиенте плотности фиколл-пака (Eurobio, Courtaboeuf, Франция). Оставшиеся красные клетки и тромбоциты удалили гипотоническим раствором и центрифугированием.

Животные

Мышей от 8 до 12 недель NOD/SCIDAL2Rγ^-/- (NSG) вырастили на наших собственных вивариях в условиях, свободных от специфической патогенной микрофлоры (SPF) (номер аккредитации С44-278).

Модель трансплантации человеческой кожи

Человеческую кожу получили от здоровых добровольцев в ходе пластической операции на передней брюшной стенке и трансплантацию провели так, как было описано ранее ( et al., 2018. Front Immunol. 8:2014). Через один месяц 5×10⁶ МКПК от аллогенных здоровых добровольцев ввели посредством внутривенной инъекции с телами или без антител.

Отторжение трансплантата оценивали по шкале от 0 до 5 баллов на основании сухости (1 балл), неэластичности (2 балла), образования корок (3 балла), частичной потери (4 балла) и полной потери кожи (5 баллов) посредством макроскопического наблюдения.

Приживление человеческих МКПК контролировали в крови посредством поточной цитометрии.

Лечение

NSG мышам вводили внутрибрюшинно очищенное антитело ABIS-45RC или гуманизированный вариант антитела А1 с 0,8 мг/кг, начиная со дня 0 и затем каждые 2,5 дней в течение 20 дней, вместе с внутрибрюшинным введением рапамицина в течение периода со дня 0 до дня 10 с субоптимальной дозой 0,4 мг/сут.

Результаты

Лечение только МКПК вызвало потерю веса, которая началась приблизительно со дня 14, и, как показано на Иллюстрации 10, гибель всех мышей ко дню 33.

Мы ранее показали, что лечение только рапамицином не продлевало выживаемость (медиана выживаемости: 21 день ( et al., 2018. Front Immunol. 8:2014)). В этом случае лечение ABIS-45RC или гуманизированным вариантом А1 полностью предотвратило отторжение кожного трансплантата.

--->

Перечень последовательностей

<110> ИНСЕРМ

УНИВЕРСИТЕ ДЕ НАНТ

СЕНТР ОСПИТАЛЬЕ УНИВЕРСИТЕР ДЕ НАНТ

<120> Выделенное антитело к CD45RC человека, нуклеиновая кислота,

вектор экспрессии, клетка, фармацевтическая композиция, их

применение, in vitro способ обнаружения hCD45RC

<150> PCT/EP2019/075374 RU2021111193

<160> 129

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR1

<400> 1

Asn Tyr Tyr Ile Gly

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> САЙТ

<222> 1

<223> Xaa выбирают из Asp (D), Ile (I) и Arg (R)

<220>

<223> VH-CDR2

<220>

<221> САЙТ

<222> 4

<223> Xaa выбирают из Pro и Ser (S)

<220>

<221> САЙТ

<222> 7

<223> Xaa выбирают из Asp (D), Ser (S) и Gly (G)

<220>

<221> САЙТ

<222> 9

<223> Xaa выбирают из Ala (A) и Thr (T)

<220>

<221> САЙТ

<222> 11

<223> Xaa выбирают из Ser (S) и Tyr (Y)

<220>

<221> САЙТ

<222> 12

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ala (A) и Ser (S)

<220>

<221> САЙТ

<222> 13

<223> Xaa выбирают из Glu (E), Asp (D), Pro (P) и Gln (Q)

<220>

<221> САЙТ

<222> 14

<223> Xaa выбирают из Lys (K) и Ser (S)

<220>

<221> СЙТ

<222> 15

<223> Xaa выбирают из Phe (F) и Val (V)

<220>

<221> САЙТ

<222> 16

<223> Xaa выбирают из Lys (K) и Gln (Q)

<400> 2

Xaa Ile Phe Xaa Gly Gly Xaa Tyr Xaa Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR3

<400> 3

Arg Asn Phe Asp Tyr

1 5

<210> 4

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 4

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Asp Tyr Ala Asn Ser Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 5

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 5

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Asp Tyr Ala Asn Ser Asn Glu Lys Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 6

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 6

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 7

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 7

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Glu Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 8

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 8

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 9

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 9

Arg Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 10

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 10

Ile Ile Phe Pro Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 11

Asp Ile Phe Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 12

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> САЙТ

<222> 1

<223> Xaa выбирают из Ser (S) и Arg (R)

<220>

<223> VL-CDR1

<220>

<221> САЙТ

<222> 8

<223> Xaa отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 12

Xaa Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr Met His

1 5 10

<210> 13

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> САЙТ

<222> 1

<223> Xaa выбирают из Asn (N) и Ala (A); или Xaa является любой

аминокислотой, но не Ala (A) или Asn (N)

<220>

<223> VL-CDR2

<220>

<221> САЙТ

<222> 5

<223> Xaa выбирают из Leu (L), Ser (S) и Arg (R)

<220>

<221> САЙТ

<222> 6

<223> Xaa выбирают из Pro (P), Ala (A) и Gln (Q)

<220>

<221> САЙТ

<222> 7

<223> Xaa выбирают из Ser (S) и Thr (T)

<400> 13

Xaa Thr Ser Asn Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 14

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> САЙТ

<222> 1

<223> Xaa выбирают из Gln (Q) и His (H)

<220>

<223> VL-CDR3

<400> 14

Xaa Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe

1 5 10

<210> 15

<211> 11

<212> PRT

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR1

<220>

<221> САЙТ

<222> 8

<223> Xaa отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 15

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr Met His

1 5 10

<210> 16

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR2

<400> 16

Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser

1 5

<210> 17

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR3

<400> 17

Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe

1 5 10

<210> 18

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR1

<220>

<221> САЙТ

<222> 8

<223> Xaa отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 18

Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr Met His

1 5 10

<210> 19

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR2

<400> 19

Asn Thr Ser Asn Ser Pro Ser

1 5

<210> 20

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR2

<400> 20

Ala Thr Ser Asn Leu Gln Ser

1 5

<210> 21

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR3

<400> 21

His Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe

1 5 10

<210> 22

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR2

<400> 22

Asn Thr Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 23

<211> 48

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> C детерминанта hCD45RC

<400> 23

Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr Asp Pro

1 5 10 15

Val Ser Pro Leu Thr Thr Thr Leu Ser Leu Ala His His Ser Ser Ala

20 25 30

Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn Thr Ser

35 40 45

<210> 24

<211> 144

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Экзон 6 hCD45RC

<400> 24

gatgtcccag gagagaggag tacagccagc acctttccta cagacccagt ttccccattg

60

acaaccaccc tcagccttgc acaccacagc tctgctgcct tacctgcacg cacctccaac

120

accaccatca cagcgaacac ctca

144

<210> 25

<211> 30

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR1

<400> 25

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr

20 25 30

<210> 26

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR2

<400> 26

Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 27

<211> 32

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR3

<400> 27

Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln

1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys Val Arg

20 25 30

<210> 28

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR4

<400> 28

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 29

<211> 30

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR1

<400> 29

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr

20 25 30

<210> 30

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR2

<400> 30

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 31

<211> 32

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR3

<400> 31

Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys Val Arg

20 25 30

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR4

<400> 32

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 33

<211> 30

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR1

<400> 33

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr

20 25 30

<210> 34

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR2

<400> 34

Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 35

<211> 32

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR3

<400> 35

Gln Val Thr Leu Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg

20 25 30

<210> 36

<211> 30

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR1

<400> 36

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr

20 25 30

<210> 37

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR2

<400> 37

Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 38

<211> 32

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR3

<400> 38

Arg Phe Thr Leu Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg

20 25 30

<210> 39

<211> 30

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR1

<400> 39

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr

20 25 30

<210> 40

<211> 30

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR1

<400> 40

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser

20 25 30

<210> 41

<211> 32

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR3

<400> 41

Arg Phe Thr Leu Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg

20 25 30

<210> 42

<211> 30

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR1

<400> 42

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr

20 25 30

<210> 43

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-FR2

<400> 43

Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly

1 5 10

<210> 44

<211> 23

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR1

<400> 44

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 45

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR2

<400> 45

Trp Phe Gln Gln Lys Thr Gly Thr Ser Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 46

<211> 32

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR3

<220>

<221> SITE

<222> 15

<223> Xaa выбирают из Tyr (Y) и Phe (F)

<400> 46

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Xaa Ser

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 47

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR4

<400> 47

Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

1 5

<210> 48

<211> 23

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR1

<400> 48

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 49

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR2

<400> 49

Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 50

<211> 32

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR3

<220>

<221> САЙТ

<222> 15

<223> Xaa выбирают из Tyr (Y) и Phe (F)

<400> 50

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Xaa Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 51

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR4

<400> 51

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5

<210> 52

<211> 23

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR1

<400> 52

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 53

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR2

<400> 53

Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 54

<211> 32

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR3

<220>

<221> САЙТ

<222> 15

<223> Xaa выбирают из Tyr (Y) и Phe (F)

<400> 54

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 55

<211> 23

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR1

<400> 55

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 56

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR2

<400> 56

Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 57

<211> 32

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR3

<220>

<221> САЙТ

<222> 15

<223> Xaa выбирают из Tyr (Y) и Phe (F)

<400> 57

Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 58

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR2

<400> 58

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 59

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR2

<400> 59

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 60

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-FR2

<400> 60

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 61

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCVR мыши

<400> 61

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Asp Tyr Ala Asn Ser Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 62

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 62

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Asp Tyr Ala Asn Ser Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 63

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 63

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Asp Tyr Ala Asn Ser Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Val Thr Leu Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 64

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 64

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Asp Tyr Ala Asn Ser Asn Glu Lys Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 65

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 65

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 66

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 66

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Glu Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Leu Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 67

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 67

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 68

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 68

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 69

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 69

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ile Ile Phe Pro Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Leu Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 70

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 70

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Ala Asp Thr Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 71

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCVR мыши

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 71

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Phe Gln Gln Lys Thr Gly Thr Ser Pro Arg Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Ser Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 72

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 72

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 73

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 73

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 74

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 74

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 75

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 75

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 76

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 76

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Ser Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 77

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 77

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 78

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 78

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 79

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 79

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Ser Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 80

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 80

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 81

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCVR мыши

<400> 81

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Thr Gly Thr Ser Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 82

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 82

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 83

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 83

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 84

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 84

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 85

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 85

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 86

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 86

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Ser Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 87

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 87

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 88

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 88

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 89

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 89

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Ser Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 90

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 90

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 91

<211> 330

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCCR человека

<400> 91

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 92

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCCR человека

<400> 92

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 93

<211> 323

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCCR мыши

<400> 93

Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala

1 5 10 15

Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu

50 55 60

Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val

65 70 75 80

Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys

85 90 95

Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro

100 105 110

Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu

115 120 125

Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser

130 135 140

Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu

145 150 155 160

Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

165 170 175

Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn

180 185 190

Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro

195 200 205

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln

210 215 220

Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val

225 230 235 240

Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val

245 250 255

Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln

260 265 270

Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn

275 280 285

Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val

290 295 300

Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His

305 310 315 320

Ser Pro Gly

<210> 94

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCCR мыши

<400> 94

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu

1 5 10 15

Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg

35 40 45

Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu

65 70 75 80

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

100 105

<210> 95

<211> 342

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCVR мыши

<400> 95

caggtccagc tgcaacagtc tggcgctgag ctggttaggc ctgggacttc agtgaagatg

60

tcctgcaagg ccgctggata caccttcact aactactaca taggttgggt aaagcagagg

120

cctggacatg gccttgagtg gatcggagat attttccctg gaggtgacta tgccaacagc

180

aatgagaagt tcaagggcaa agccacactg actgcagaca catcctccag cacagcctac

240

atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgccatct attactgtgt gagaaggaac

300

tttgactact ggggccaagg caccactctc acagtgtcct ca

342

<210> 96

<211> 318

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCVR мыши

<400> 96

caaattgttc tcacccagtc tccaacaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtgacc

60

ataacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggttccagca gaagacaggc

120

acttctccca gactctggat ttataacaca tccaacctgc cttctggagt ccccgctcgc

180

ttcagtggca gtggatctgg gacctcttac tctctcacaa tcagccgaat ggaggctgaa

240

gatgctgcca cttattactg ccagcaaagg agtagttacc cactcacgtt cggtgctggg

300

accaagctgg agctgaaa

318

<210> 97

<211> 990

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCCR человека

<400> 97

gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg

60

ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg

120

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca

180

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc

240

tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc

300

aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga

360

ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct

420

gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg

480

tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac

540

agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag

600

gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc

660

aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag

720

atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc

780

gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg

840

ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg

900

cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg

960

cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa

990

<210> 98

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCCR человека

<400> 98

cgaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct

60

ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag

120

tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac

180

agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag

240

aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag

300

agcttcaaca ggggagagtg t

321

<210> 99

<211> 1306

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> hCD45

<300>

<308> UniProt номер доступа P08575-3

<309> 2018 03 28

<400> 99

Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe

1 5 10 15

Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro

20 25 30

Thr Gly Leu Thr Thr Ala Lys Met Pro Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp

35 40 45

Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe Ser Pro Ala Ser Thr Phe Glu

50 55 60

Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr Thr Ser Leu Ser Pro Asp Asn

65 70 75 80

Thr Ser Thr Gln Val Ser Pro Asp Ser Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe

85 90 95

Asn Thr Thr Gly Val Ser Ser Val Gln Thr Pro His Leu Pro Thr His

100 105 110

Ala Asp Ser Gln Thr Pro Ser Ala Gly Thr Asp Thr Gln Thr Phe Ser

115 120 125

Gly Ser Ala Ala Asn Ala Lys Leu Asn Pro Thr Pro Gly Ser Asn Ala

130 135 140

Ile Ser Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr

145 150 155 160

Asp Pro Val Ser Pro Leu Thr Thr Thr Leu Ser Leu Ala His His Ser

165 170 175

Ser Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn

180 185 190

Thr Ser Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Leu Ser Pro

195 200 205

Ser Gly Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr Thr Ile Ala Thr Thr Pro Ser

210 215 220

Lys Pro Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu

225 230 235 240

Tyr Asn Lys Glu Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu

245 250 255

Asn Val Glu Cys Gly Asn Asn Thr Cys Thr Asn Asn Glu Val His Asn

260 265 270

Leu Thr Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val Ser Ile Ser His Asn Ser Cys

275 280 285

Thr Ala Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly Val Glu

290 295 300

Lys Phe Gln Leu His Asp Cys Thr Gln Val Glu Lys Ala Asp Thr Thr

305 310 315 320

Ile Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln

325 330 335

Asn Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys

340 345 350

Glu Ile Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu His Glu Tyr Lys Cys Asp

355 360 365

Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Phe Thr Asn Ala Ser Lys Ile

370 375 380

Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys

385 390 395 400

Arg Ser Glu Ala Ala His Gln Gly Val Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln

405 410 415

Arg Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys

420 425 430

Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn

435 440 445

Leu Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile

450 455 460

Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr Thr

465 470 475 480

Lys Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp Asn Met Thr Val Ser Met Thr

485 490 495

Ser Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn

500 505 510

Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu

515 520 525

Val Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu

530 535 540

Gln Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp

545 550 555 560

Tyr Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser

565 570 575

Lys Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser Ile

580 585 590

Ala Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys Arg

595 600 605

Ser Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu Arg Asp Asp Glu

610 615 620

Lys Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp Ile Leu Leu Glu

625 630 635 640

Thr Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu Phe Leu Ala Glu

645 650 655

Phe Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu Ala

660 665 670

Arg Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val Asp Ile Leu Pro

675 680 685

Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn Gly Asp Ala Gly

690 695 700

Ser Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe Lys Glu Pro Arg

705 710 715 720

Lys Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr Val Asp Asp Phe

725 730 735

Trp Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile Val Met Val Thr

740 745 750

Arg Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu Tyr Trp Pro Ser

755 760 765

Met Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile Asn

770 775 780

Gln His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile Val

785 790 795 800

Asn Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr His Ile Gln Phe

805 810 815

Thr Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro His Leu Leu Leu

820 825 830

Lys Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly Pro

835 840 845

Ile Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr Ile

850 855 860

Gly Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu Asn Lys Val Asp

865 870 875 880

Val Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met Val

885 890 895

Gln Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val Glu Tyr

900 905 910

Asn Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr

915 920 925

Leu His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu Pro Ser Pro Leu

930 935 940

Glu Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser Trp Arg Thr Gln

945 950 955 960

His Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser Asn

965 970 975

Val Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu Glu

980 985 990

Met Ser Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp Asp

995 1000 1005

Ser Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn Ala Ser Phe Ile Met

1010 1015 1020

Ser Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala Ala Gln Gly Pro Leu Lys

1025 1030 1035 1040

Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys

1045 1050 1055

Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys

1060 1065 1070

Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val

1075 1080 1085

Asp Leu Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe

1090 1095 1100

Glu Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr

1105 1110 1115 1120

Gln Tyr Thr Asn Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu

1125 1130 1135

Leu Ile Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys Asn

1140 1145 1150

Ser Ser Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His

1155 1160 1165

Cys Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn

1170 1175 1180

Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln Val

1185 1190 1195 1200

Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr Phe Glu

1205 1210 1215

Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr Tyr Pro Ala Gln

1220 1225 1230

Asn Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp Lys Ile Glu Phe

1235 1240 1245

Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn Pro

1250 1255 1260

Leu Gly Ala Pro Glu Lys Leu Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala Glu Gly

1265 1270 1275 1280

Ser Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly Pro Glu His Ser Val Asn Gly

1285 1290 1295

Pro Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln Gly Ser

1300 1305

<210> 100

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 100

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Asp Tyr Thr Asn Tyr Ala Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 101

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Asp Tyr Thr Asn Tyr Ala Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 102

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 102

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 103

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 103

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 104

<211> 1193

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> hCD45RC

<300>

<308> UniProt номер доступа P08575-10

<309> 2018 03 28

<400> 104

Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe

1 5 10 15

Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro

20 25 30

Thr Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr Asp

35 40 45

Pro Val Ser Pro Leu Thr Thr Thr Leu Ser Leu Ala His His Ser Ser

50 55 60

Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn Thr

65 70 75 80

Ser Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Leu Ser Pro Ser

85 90 95

Gly Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr Thr Ile Ala Thr Thr Pro Ser Lys

100 105 110

Pro Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu Tyr

115 120 125

Asn Lys Glu Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu Asn

130 135 140

Val Glu Cys Gly Asn Asn Thr Cys Thr Asn Asn Glu Val His Asn Leu

145 150 155 160

Thr Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val Ser Ile Ser His Asn Ser Cys Thr

165 170 175

Ala Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly Val Glu Lys

180 185 190

Phe Gln Leu His Asp Cys Thr Gln Val Glu Lys Ala Asp Thr Thr Ile

195 200 205

Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln Asn

210 215 220

Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys Glu

225 230 235 240

Ile Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu His Glu Tyr Lys Cys Asp Ser

245 250 255

Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Phe Thr Asn Ala Ser Lys Ile Ile

260 265 270

Lys Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys Arg

275 280 285

Ser Glu Ala Ala His Gln Gly Val Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln Arg

290 295 300

Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys Asp

305 310 315 320

Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn Leu

325 330 335

Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile Ala

340 345 350

Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr Thr Lys

355 360 365

Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp Asn Met Thr Val Ser Met Thr Ser

370 375 380

Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly

385 390 395 400

Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val

405 410 415

Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu Gln

420 425 430

Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp Tyr

435 440 445

Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Lys

450 455 460

Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser Ile Ala

465 470 475 480

Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys Arg Ser

485 490 495

Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu Arg Asp Asp Glu Lys

500 505 510

Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp Ile Leu Leu Glu Thr

515 520 525

Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu Phe Leu Ala Glu Phe

530 535 540

Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu Ala Arg

545 550 555 560

Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val Asp Ile Leu Pro Tyr

565 570 575

Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn Gly Asp Ala Gly Ser

580 585 590

Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe Lys Glu Pro Arg Lys

595 600 605

Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr Val Asp Asp Phe Trp

610 615 620

Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile Val Met Val Thr Arg

625 630 635 640

Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu Tyr Trp Pro Ser Met

645 650 655

Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile Asn Gln

660 665 670

His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile Val Asn

675 680 685

Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr His Ile Gln Phe Thr

690 695 700

Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro His Leu Leu Leu Lys

705 710 715 720

Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly Pro Ile

725 730 735

Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr Ile Gly

740 745 750

Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu Asn Lys Val Asp Val

755 760 765

Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met Val Gln

770 775 780

Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val Glu Tyr Asn

785 790 795 800

Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr Leu

805 810 815

His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu Pro Ser Pro Leu Glu

820 825 830

Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser Trp Arg Thr Gln His

835 840 845

Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser Asn Val

850 855 860

Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu Glu Met

865 870 875 880

Ser Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp Asp Ser

885 890 895

Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn Ala Ser Phe Ile Met Ser

900 905 910

Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala Ala Gln Gly Pro Leu Lys Glu

915 920 925

Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val

930 935 940

Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys Ala

945 950 955 960

Gln Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val Asp

965 970 975

Leu Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu

980 985 990

Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln

995 1000 1005

Tyr Thr Asn Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu Leu

1010 1015 1020

Ile Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys Asn Ser

1025 1030 1035 1040

Ser Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys

1045 1050 1055

Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn Leu

1060 1065 1070

Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln Val Val

1075 1080 1085

Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr Phe Glu Gln

1090 1095 1100

Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr Tyr Pro Ala Gln Asn

1105 1110 1115 1120

Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp Lys Ile Glu Phe Asp

1125 1130 1135

Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn Pro Leu

1140 1145 1150

Gly Ala Pro Glu Lys Leu Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala Glu Gly Ser

1155 1160 1165

Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly Pro Glu His Ser Val Asn Gly Pro

1170 1175 1180

Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln Gly Ser

1185 1190

<210> 105

<211> 66

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> A детерминанта hCD45

<400> 105

Gly Leu Thr Thr Ala Lys Met Pro Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp Pro

1 5 10 15

Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe Ser Pro Ala Ser Thr Phe Glu Arg

20 25 30

Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr Thr Ser Leu Ser Pro Asp Asn Thr

35 40 45

Ser Thr Gln Val Ser Pro Asp Ser Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe Asn

50 55 60

Thr Thr

65

<210> 106

<211> 47

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> B детерминанта hCD45

<400> 106

Gly Val Ser Ser Val Gln Thr Pro His Leu Pro Thr His Ala Asp Ser

1 5 10 15

Gln Thr Pro Ser Ala Gly Thr Asp Thr Gln Thr Phe Ser Gly Ser Ala

20 25 30

Ala Asn Ala Lys Leu Asn Pro Thr Pro Gly Ser Asn Ala Ile Ser

35 40 45

<210> 107

<211> 1211

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> hCD45RA

<300>

<308> UniProt номер доступа P08575-8

<309> 2018 03 28

<400> 107

Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe

1 5 10 15

Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro

20 25 30

Thr Gly Leu Thr Thr Ala Lys Met Pro Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp

35 40 45

Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe Ser Pro Ala Ser Thr Phe Glu

50 55 60

Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr Thr Ser Leu Ser Pro Asp Asn

65 70 75 80

Thr Ser Thr Gln Val Ser Pro Asp Ser Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe

85 90 95

Asn Thr Thr Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Leu Ser

100 105 110

Pro Ser Gly Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr Thr Ile Ala Thr Thr Pro

115 120 125

Ser Lys Pro Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala Asn Ile Thr Val Asp Tyr

130 135 140

Leu Tyr Asn Lys Glu Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn

145 150 155 160

Glu Asn Val Glu Cys Gly Asn Asn Thr Cys Thr Asn Asn Glu Val His

165 170 175

Asn Leu Thr Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val Ser Ile Ser His Asn Ser

180 185 190

Cys Thr Ala Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly Val

195 200 205

Glu Lys Phe Gln Leu His Asp Cys Thr Gln Val Glu Lys Ala Asp Thr

210 215 220

Thr Ile Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu Thr Phe Thr Cys Asp Thr

225 230 235 240

Gln Asn Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Met Ile Phe Asp Asn

245 250 255

Lys Glu Ile Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu His Glu Tyr Lys Cys

260 265 270

Asp Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Phe Thr Asn Ala Ser Lys

275 280 285

Ile Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gln Ile Ile Phe

290 295 300

Cys Arg Ser Glu Ala Ala His Gln Gly Val Ile Thr Trp Asn Pro Pro

305 310 315 320

Gln Arg Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu

325 330 335

Lys Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln

340 345 350

Asn Leu Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu Ser Leu His Ala Tyr Ile

355 360 365

Ile Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr

370 375 380

Thr Lys Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp Asn Met Thr Val Ser Met

385 390 395 400

Thr Ser Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg

405 410 415

Asn Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr

420 425 430

Leu Val Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys Asp Phe Arg Val Lys Asp

435 440 445

Leu Gln Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys Ala Tyr Phe His Asn Gly

450 455 460

Asp Tyr Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn

465 470 475 480

Ser Lys Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser

485 490 495

Ile Ala Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys

500 505 510

Arg Ser Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu Arg Asp Asp

515 520 525

Glu Lys Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp Ile Leu Leu

530 535 540

Glu Thr Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu Phe Leu Ala

545 550 555 560

Glu Phe Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu

565 570 575

Ala Arg Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val Asp Ile Leu

580 585 590

Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn Gly Asp Ala

595 600 605

Gly Ser Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe Lys Glu Pro

610 615 620

Arg Lys Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr Val Asp Asp

625 630 635 640

Phe Trp Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile Val Met Val

645 650 655

Thr Arg Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu Tyr Trp Pro

660 665 670

Ser Met Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile

675 680 685

Asn Gln His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile

690 695 700

Val Asn Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr His Ile Gln

705 710 715 720

Phe Thr Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro His Leu Leu

725 730 735

Leu Lys Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly

740 745 750

Pro Ile Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr

755 760 765

Ile Gly Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu Asn Lys Val

770 775 780

Asp Val Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met

785 790 795 800

Val Gln Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val Glu

805 810 815

Tyr Asn Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro

820 825 830

Tyr Leu His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu Pro Ser Pro

835 840 845

Leu Glu Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser Trp Arg Thr

850 855 860

Gln His Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser

865 870 875 880

Asn Val Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu

885 890 895

Glu Met Ser Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp

900 905 910

Asp Ser Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn Ala Ser Phe Ile

915 920 925

Met Ser Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala Ala Gln Gly Pro Leu

930 935 940

Lys Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val

945 950 955 960

Lys Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile

965 970 975

Cys Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu

980 985 990

Val Asp Leu Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val

995 1000 1005

Phe Glu Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln

1010 1015 1020

Tyr Gln Tyr Thr Asn Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys

1025 1030 1035 1040

Glu Leu Ile Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys

1045 1050 1055

Asn Ser Ser Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile

1060 1065 1070

His Cys Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu

1075 1080 1085

Asn Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln

1090 1095 1100

Val Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr Phe

1105 1110 1115 1120

Glu Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr Tyr Pro Ala

1125 1130 1135

Gln Asn Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp Lys Ile Glu

1140 1145 1150

Phe Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn

1155 1160 1165

Pro Leu Gly Ala Pro Glu Lys Leu Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala Glu

1170 1175 1180

Gly Ser Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly Pro Glu His Ser Val Asn

1185 1190 1195 1200

Gly Pro Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln Gly Ser

1205 1210

<210> 108

<211> 1192

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> hCD45RB

<300>

<308> UniProt номер доступа P08575-9

<309> 2018 03 28

<400> 108

Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe

1 5 10 15

Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro

20 25 30

Thr Gly Val Ser Ser Val Gln Thr Pro His Leu Pro Thr His Ala Asp

35 40 45

Ser Gln Thr Pro Ser Ala Gly Thr Asp Thr Gln Thr Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ala Ala Asn Ala Lys Leu Asn Pro Thr Pro Gly Ser Asn Ala Ile Ser

65 70 75 80

Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Leu Ser Pro Ser Gly

85 90 95

Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr Thr Ile Ala Thr Thr Pro Ser Lys Pro

100 105 110

Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu Tyr Asn

115 120 125

Lys Glu Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu Asn Val

130 135 140

Glu Cys Gly Asn Asn Thr Cys Thr Asn Asn Glu Val His Asn Leu Thr

145 150 155 160

Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val Ser Ile Ser His Asn Ser Cys Thr Ala

165 170 175

Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly Val Glu Lys Phe

180 185 190

Gln Leu His Asp Cys Thr Gln Val Glu Lys Ala Asp Thr Thr Ile Cys

195 200 205

Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln Asn Ile

210 215 220

Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys Glu Ile

225 230 235 240

Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu His Glu Tyr Lys Cys Asp Ser Glu

245 250 255

Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Phe Thr Asn Ala Ser Lys Ile Ile Lys

260 265 270

Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys Arg Ser

275 280 285

Glu Ala Ala His Gln Gly Val Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln Arg Ser

290 295 300

Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys Asp Cys

305 310 315 320

Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn Leu Lys

325 330 335

Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile Ala Lys

340 345 350

Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr Thr Lys Ser

355 360 365

Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp Asn Met Thr Val Ser Met Thr Ser Asp

370 375 380

Asn Ser Met His Val Lys Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly Pro

385 390 395 400

His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val Arg

405 410 415

Asn Glu Ser His Lys Asn Cys Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu Gln Tyr

420 425 430

Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp Tyr Pro

435 440 445

Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Lys Ala

450 455 460

Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser Ile Ala Leu

465 470 475 480

Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys Arg Ser Cys

485 490 495

Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu Arg Asp Asp Glu Lys Gln

500 505 510

Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp Ile Leu Leu Glu Thr Tyr

515 520 525

Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu Phe Leu Ala Glu Phe Gln

530 535 540

Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu Ala Arg Lys

545 550 555 560

Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val Asp Ile Leu Pro Tyr Asp

565 570 575

Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn Gly Asp Ala Gly Ser Asn

580 585 590

Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe Lys Glu Pro Arg Lys Tyr

595 600 605

Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr Val Asp Asp Phe Trp Arg

610 615 620

Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile Val Met Val Thr Arg Cys

625 630 635 640

Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu Tyr Trp Pro Ser Met Glu

645 650 655

Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile Asn Gln His

660 665 670

Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile Val Asn Lys

675 680 685

Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr His Ile Gln Phe Thr Ser

690 695 700

Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro His Leu Leu Leu Lys Leu

705 710 715 720

Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly Pro Ile Val

725 730 735

Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr Ile Gly Ile

740 745 750

Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu Asn Lys Val Asp Val Tyr

755 760 765

Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met Val Gln Val

770 775 780

Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val Glu Tyr Asn Gln

785 790 795 800

Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr Leu His

805 810 815

Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu Pro Ser Pro Leu Glu Ala

820 825 830

Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser Trp Arg Thr Gln His Ile

835 840 845

Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser Asn Val Ile

850 855 860

Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu Glu Met Ser

865 870 875 880

Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp Asp Ser Asp

885 890 895

Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn Ala Ser Phe Ile Met Ser Tyr

900 905 910

Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala Ala Gln Gly Pro Leu Lys Glu Thr

915 920 925

Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val Ile

930 935 940

Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys Ala Gln

945 950 955 960

Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val Asp Leu

965 970 975

Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu Leu

980 985 990

Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln Tyr

995 1000 1005

Thr Asn Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu Leu Ile

1010 1015 1020

Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys Asn Ser Ser

1025 1030 1035 1040

Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys Arg

1045 1050 1055

Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn Leu Leu

1060 1065 1070

Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln Val Val Lys

1075 1080 1085

Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr Phe Glu Gln Tyr

1090 1095 1100

Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr Tyr Pro Ala Gln Asn Gly

1105 1110 1115 1120

Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp Lys Ile Glu Phe Asp Asn

1125 1130 1135

Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn Pro Leu Gly

1140 1145 1150

Ala Pro Glu Lys Leu Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala Glu Gly Ser Glu

1155 1160 1165

Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly Pro Glu His Ser Val Asn Gly Pro Ala

1170 1175 1180

Ser Pro Ala Leu Asn Gln Gly Ser

1185 1190

<210> 109

<211> 1258

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> hCD45RAB

<300>

<308> UniProt номер доступа P08575-5

<309> 2018 03 28

<400> 109

Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe

1 5 10 15

Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro

20 25 30

Thr Gly Leu Thr Thr Ala Lys Met Pro Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp

35 40 45

Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe Ser Pro Ala Ser Thr Phe Glu

50 55 60

Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr Thr Ser Leu Ser Pro Asp Asn

65 70 75 80

Thr Ser Thr Gln Val Ser Pro Asp Ser Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe

85 90 95

Asn Thr Thr Gly Val Ser Ser Val Gln Thr Pro His Leu Pro Thr His

100 105 110

Ala Asp Ser Gln Thr Pro Ser Ala Gly Thr Asp Thr Gln Thr Phe Ser

115 120 125

Gly Ser Ala Ala Asn Ala Lys Leu Asn Pro Thr Pro Gly Ser Asn Ala

130 135 140

Ile Ser Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Leu Ser Pro

145 150 155 160

Ser Gly Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr Thr Ile Ala Thr Thr Pro Ser

165 170 175

Lys Pro Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu

180 185 190

Tyr Asn Lys Glu Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu

195 200 205

Asn Val Glu Cys Gly Asn Asn Thr Cys Thr Asn Asn Glu Val His Asn

210 215 220

Leu Thr Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val Ser Ile Ser His Asn Ser Cys

225 230 235 240

Thr Ala Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly Val Glu

245 250 255

Lys Phe Gln Leu His Asp Cys Thr Gln Val Glu Lys Ala Asp Thr Thr

260 265 270

Ile Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln

275 280 285

Asn Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys

290 295 300

Glu Ile Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu His Glu Tyr Lys Cys Asp

305 310 315 320

Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Phe Thr Asn Ala Ser Lys Ile

325 330 335

Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys

340 345 350

Arg Ser Glu Ala Ala His Gln Gly Val Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln

355 360 365

Arg Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys

370 375 380

Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn

385 390 395 400

Leu Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile

405 410 415

Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr Thr

420 425 430

Lys Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp Asn Met Thr Val Ser Met Thr

435 440 445

Ser Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn

450 455 460

Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu

465 470 475 480

Val Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu

485 490 495

Gln Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp

500 505 510

Tyr Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser

515 520 525

Lys Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser Ile

530 535 540

Ala Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys Arg

545 550 555 560

Ser Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu Arg Asp Asp Glu

565 570 575

Lys Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp Ile Leu Leu Glu

580 585 590

Thr Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu Phe Leu Ala Glu

595 600 605

Phe Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu Ala

610 615 620

Arg Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val Asp Ile Leu Pro

625 630 635 640

Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn Gly Asp Ala Gly

645 650 655

Ser Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe Lys Glu Pro Arg

660 665 670

Lys Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr Val Asp Asp Phe

675 680 685

Trp Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile Val Met Val Thr

690 695 700

Arg Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu Tyr Trp Pro Ser

705 710 715 720

Met Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile Asn

725 730 735

Gln His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile Val

740 745 750

Asn Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr His Ile Gln Phe

755 760 765

Thr Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro His Leu Leu Leu

770 775 780

Lys Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly Pro

785 790 795 800

Ile Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr Ile

805 810 815

Gly Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu Asn Lys Val Asp

820 825 830

Val Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met Val

835 840 845

Gln Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val Glu Tyr

850 855 860

Asn Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr

865 870 875 880

Leu His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu Pro Ser Pro Leu

885 890 895

Glu Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser Trp Arg Thr Gln

900 905 910

His Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser Asn

915 920 925

Val Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu Glu

930 935 940

Met Ser Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp Asp

945 950 955 960

Ser Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn Ala Ser Phe Ile Met

965 970 975

Ser Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala Ala Gln Gly Pro Leu Lys

980 985 990

Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys

995 1000 1005

Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys

1010 1015 1020

Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val

1025 1030 1035 1040

Asp Leu Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe

1045 1050 1055

Glu Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr

1060 1065 1070

Gln Tyr Thr Asn Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu

1075 1080 1085

Leu Ile Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys Asn

1090 1095 1100

Ser Ser Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His

1105 1110 1115 1120

Cys Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn

1125 1130 1135

Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln Val

1140 1145 1150

Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr Phe Glu

1155 1160 1165

Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr Tyr Pro Ala Gln

1170 1175 1180

Asn Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp Lys Ile Glu Phe

1185 1190 1195 1200

Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn Pro

1205 1210 1215

Leu Gly Ala Pro Glu Lys Leu Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala Glu Gly

1220 1225 1230

Ser Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly Pro Glu His Ser Val Asn Gly

1235 1240 1245

Pro Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln Gly Ser

1250 1255

<210> 110

<211> 1145

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> hCD45R0

<300>

<308> UniProt номер доступа P08575-4

<309> 2018 03 28

<400> 110

Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe

1 5 10 15

Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro

20 25 30

Thr Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Leu Ser Pro Ser

35 40 45

Gly Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr Thr Ile Ala Thr Thr Pro Ser Lys

50 55 60

Pro Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu Tyr

65 70 75 80

Asn Lys Glu Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu Asn

85 90 95

Val Glu Cys Gly Asn Asn Thr Cys Thr Asn Asn Glu Val His Asn Leu

100 105 110

Thr Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val Ser Ile Ser His Asn Ser Cys Thr

115 120 125

Ala Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly Val Glu Lys

130 135 140

Phe Gln Leu His Asp Cys Thr Gln Val Glu Lys Ala Asp Thr Thr Ile

145 150 155 160

Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln Asn

165 170 175

Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys Glu

180 185 190

Ile Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu His Glu Tyr Lys Cys Asp Ser

195 200 205

Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Phe Thr Asn Ala Ser Lys Ile Ile

210 215 220

Lys Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys Arg

225 230 235 240

Ser Glu Ala Ala His Gln Gly Val Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln Arg

245 250 255

Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys Asp

260 265 270

Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn Leu

275 280 285

Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile Ala

290 295 300

Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr Thr Lys

305 310 315 320

Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp Asn Met Thr Val Ser Met Thr Ser

325 330 335

Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly

340 345 350

Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val

355 360 365

Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu Gln

370 375 380

Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp Tyr

385 390 395 400

Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Lys

405 410 415

Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser Ile Ala

420 425 430

Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys Arg Ser

435 440 445

Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu Arg Asp Asp Glu Lys

450 455 460

Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp Ile Leu Leu Glu Thr

465 470 475 480

Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu Phe Leu Ala Glu Phe

485 490 495

Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu Ala Arg

500 505 510

Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val Asp Ile Leu Pro Tyr

515 520 525

Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn Gly Asp Ala Gly Ser

530 535 540

Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe Lys Glu Pro Arg Lys

545 550 555 560

Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr Val Asp Asp Phe Trp

565 570 575

Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile Val Met Val Thr Arg

580 585 590

Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu Tyr Trp Pro Ser Met

595 600 605

Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile Asn Gln

610 615 620

His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile Val Asn

625 630 635 640

Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr His Ile Gln Phe Thr

645 650 655

Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro His Leu Leu Leu Lys

660 665 670

Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly Pro Ile

675 680 685

Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr Ile Gly

690 695 700

Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu Asn Lys Val Asp Val

705 710 715 720

Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met Val Gln

725 730 735

Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val Glu Tyr Asn

740 745 750

Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr Leu

755 760 765

His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu Pro Ser Pro Leu Glu

770 775 780

Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser Trp Arg Thr Gln His

785 790 795 800

Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser Asn Val

805 810 815

Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu Glu Met

820 825 830

Ser Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp Asp Ser

835 840 845

Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn Ala Ser Phe Ile Met Ser

850 855 860

Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala Ala Gln Gly Pro Leu Lys Glu

865 870 875 880

Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val

885 890 895

Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys Ala

900 905 910

Gln Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val Asp

915 920 925

Leu Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu

930 935 940

Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln

945 950 955 960

Tyr Thr Asn Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu Leu

965 970 975

Ile Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys Asn Ser

980 985 990

Ser Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys

995 1000 1005

Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn Leu

1010 1015 1020

Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln Val Val

1025 1030 1035 1040

Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr Phe Glu Gln

1045 1050 1055

Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr Tyr Pro Ala Gln Asn

1060 1065 1070

Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp Lys Ile Glu Phe Asp

1075 1080 1085

Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn Pro Leu

1090 1095 1100

Gly Ala Pro Glu Lys Leu Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala Glu Gly Ser

1105 1110 1115 1120

Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly Pro Glu His Ser Val Asn Gly Pro

1125 1130 1135

Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln Gly Ser

1140 1145

<210> 111

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR2

<400> 111

Ala Thr Ser Asn Leu Pro Ser

1 5

<210> 112

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 112

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 113

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 113

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 114

<211> 330

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCCR человека

<400> 114

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 115

<211> 113

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCCR человека

<400> 115

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Ala Ala Ala His His His His His

100 105 110

His

<210> 116

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 116

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Ala Asn Tyr Ala Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 117

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 117

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 118

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 118

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 119

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH-CDR2

<400> 119

Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Ser Ala Glu Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 120

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL-CDR2

<400> 120

Asn Thr Ala Asn Leu Pro Ser

1 5

<210> 121

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 121

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Ala Asn Tyr Ala Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 122

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 122

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 123

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 123

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 124

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная HCVR

<400> 124

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Ser Ala Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Arg Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 125

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<400> 125

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Phe Gln Gln Lys Thr Gly Thr Ser Pro Arg Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Ala Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Ser Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 126

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<400> 126

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Thr Gly Thr Ser Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ala Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 127

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> САЙТ

<222> 1

<223> Xaa является любой аминокислотой, но не Ala (A) или Asn (N)

<220>

<223> VL-CDR2

<400> 127

Xaa Thr Ser Asn Leu Pro Ser

1 5

<210> 128

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 31

<223> Xaa выбирают из Asn (N), Ser (S) и Gly (G)

<220>

<221> САЙТ

<222> 50

<223> Xaa является любой аминокислотой, но не Ala (A) или Asn (N)

<400> 128

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Xaa Tyr

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile

35 40 45

Tyr Xaa Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 129

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная LCVR

<220>

<221> САЙТ

<222> 49

<223> Xaa является любой аминокислотой, но не Ala (A) или Asn (N)

<400> 129

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Xaa Thr Ser Asn Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<---

Изобретение относится к области биохимии, в частности выделенному антителу к CD45RC или его связывающему фрагменту. Также раскрыты нуклеиновая кислота, кодирующая указанное антитело; вектор экспрессии, содержащий указанную нуклеиновую кислоту; клетка-хозяин, содержащая указанный вектор. Раскрыты применение указанного антитела для индуцирования иммунной толерантности у нуждающегося в этом субъекта или подавлении отторжений трансплантата; применение указанного антитела для профилактики или лечения реакции «трансплантат против хозяина»; способ in vitro детекции или количественного определения с помощью указанного антитела. Изобретение позволяет эффективно подавлять отторжение трансплантата. 11 н. и 6 з.п. ф-лы, 13 пр., 8 табл., 10 ил.

1. Выделенное антитело к CD45RC или его связывающий фрагмент, при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 100, 116, 117, 118 и 119; и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 15 (SASSSVS-X12-YMH) и 18 (RASSSVS-X12-YMH), где X12 отсутствует или выбирается из Asn (N), Ser (S) и Gly (G);

(ii) VL-CDR2 с последовательностями, выбранными из группы, включающей SEQ ID NO: 16, 19, 20, 22, 111, 120 и 127; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17 или 21.

2. Выделенное антитело или его связывающий фрагмент по п. 1, при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 4 и 5; и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, где Х12 отсутствует;

(ii) VL-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

3. Выделенное антитело или его связывающий фрагмент по п. 1 или 2, при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO 4; и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, где X12 отсутствует;

(ii) VL-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

4. Выделенное антитело или его связывающий фрагмент по п. 1, при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 4, 6 и 100; и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью, которая выбирается из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 15 и 18, при этом Х12 отсутствует;

(ii) VL-CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 16; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.

5. Выделенное антитело или его связывающий фрагмент по п. 1, при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат:

(a) HCVR, которая содержит следующие три CDR:

(i) VH-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 1;

(ii) VH-CDR2 с последовательностями, которые выбираются из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 4 и 118; и

(iii) VH-CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и

(b) LCVR которая содержит следующие три CDR:

(i) VL-CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, где Х12 отсутствует;

(ii) VL-CDR2 с поседовательностью SEQ ID NO: 120; и

(iii) VL-CDR3 с последовательностью SEQ IО NO: 17.

6. Выделенное антитело или его связывающий фрагмент по любому из пп. 1-5, при этом указанное антитело или его связывающий фрагмент содержат: