ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающей части, которые могут связываться с белком 1 программируемой клеточной смерти (PD-1) человека. Антитело по настоящему изобретению, кроме того, используют в получении лекарственного средства для лечения заболеваний, при которых экспрессия PD-1 является вредной.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ДЛЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

PD-1 (CD279) представляет собой белок из 288 аминокислот, ингибирующий рецептор, экспрессированный на активированных T-клетках и B-клетках, клетках естественных киллерах и моноцитах. PD-1 является членом семейства T-клеточных коингибирующих рецепторов CD28/CTLA-4 (антигена цитотоксических T-лимфоцитов)/ICOS (индуцируемого костимулятора). Рецептор PD-1 имеет два лиганда, а именно, белок лиганд смерти 1 (PD-L1) и белок лиганд смерти 2 (PD-L2). PD-L1 (CD274, B7H 1) широко экспрессируется как на лимфоидных, так и на нелимфоидных тканях, таких как CD4 и CD8 T-клетки, клетки линий макрофагов, периферические ткани, так же как на клетках опухолей, инфицированных вирусом клетках и клетках аутоиммунной ткани. PD-L2 (CD273, B7-DC) имеет более ограниченную экспрессию, чем PD-L1, являясь экспрессированным на активированных дендритных клетках и макрофагах (1). PD-L1 экспрессируется в большинстве злокачественных опухолей человека, включая меланому, глиому, немелкоклеточный рак легкого, плоскоклеточную карциному головы и шеи, лейкоз, рак поджелудочной железы, почечноклеточную карциному и печеночноклеточную карциному, и может являться индуцируемым почти во всех типах злокачественных опухолей (2). Связывание PD-1 с его лигандами приводит к уменьшенной пролиферации T-клеток и секреции цитокинов, супрессируя гуморальный и клеточный иммунные ответы и ухудшая течение заболеваний, где активный иммунный ответ в ином случае облегчал бы состояние заболевания. Эту иммуносупрессию можно обращать посредством ингибирования локального взаимодействия PD-1 с PD-L1, и эффект является аддитивным также, когда взаимодействие PD-1 с PD-L2 блокировано (3, 4).

Блокирование PD-1 с использованием антагонистов, включая моноклональные антитела, исследовали при лечении злокачественных опухолей и хронических вирусных инфекций (5).

Моноклональные антитела против PD-1 известны в данной области и описаны, например, в Патентных документах WO2006121168, WO2009114335, WO2008156712, WO2012145493, WO2015036394, WO2015112800, WO2016015685 и WO2018128939.

Три антитела, нацеленные на PD-1 человека, для лечения различных злокачественных опухолей, в комбинации с общепринятыми лекарственными средствами, являются коммерчески доступными. Эти три антитела представляют собой ниволумаб, пембролизумаб и цемиплимаб.

Несмотря на клинический успех антител против PD-1, эти терапевтические антитела имеют несколько недостатков, включая высокую стоимость, ограниченное время полужизни и иммуногенность.

Соответственно, в данной области существует постоянная необходимость основанного на пути PD-1/PD-L1 лечения заболеваний с использованием антител, которые могут эффективно связывать PD-1 человека и блокировать его связывание с PD-L1 или PD-L2, а также обеспечивать улучшение, по отношению к некоторым из проблем существующих видов терапии. Настоящее изобретение относится к таким новым антителам.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новым антителам против PD-1, которые имеют одну или несколько улучшенных характеристик, например, относительно известных антител против PD-1, используемых для терапевтических целей. Антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению связывает с высокой аффинностью PD-1 человека. Аминокислотная последовательность константной области антитела против PD-1 состоит из константной области IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM или IgD, предпочтительно, IgGl или IgG4. Кроме того, одно или несколько антител против PD-1 по настоящему изобретению имеют модифицированную или уменьшенную, или отсутствующую активность ADCC и/или CDC. В некоторых аспектах, настоящее изобретение относится к антителам против PD-1, имеющим высокую активность ADCC и/или CDC, которые могут приводить к лизису экспрессирующих PD-1 клеток. Антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению имеет K_D 10^-10 M или менее, более предпочтительно, 10^-11 M или менее и даже более предпочтительно, 10^-12 M или менее для антигена PD-1. Значение K_Dпредставляет собой измерение аффинности связывания антитела по отношению к его антигену-мишени. Антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть по настоящему изобретению можно использовать для лечения заболеваний, где взаимодействие PD-1 с PDL1 и/или PDL2 вовлечено в модификацию состояния заболевания, например, при инфекциях и различных злокачественных опухолях. В одном аспекте, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению блокирует взаимодействие рецептора PD-1 с его природным лигандом PD-L1 и/или PD-L2. В другом аспекте изобретения, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть уничтожает T-клетки, экспрессирующие PD-1. Настоящее изобретение относится также к способам получения новых антител против PD-1 и содержащих их фармацевтических композиций.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На фиг. 1 изображена общая схема вектора для векторной конструкции pZRCIIhyg LC-HC против PD-1, которую используют для получения полноразмерного моноклонального антитела против PD-1 по настоящему изобретению.

На фиг. 2 изображена общая схема вектора pSEX83, используемого для получения библиотеки, для получения Fab против PD-1 по настоящему изобретению.

На фиг. 3 изображена общая схема вектора для векторной конструкции pZRCIIIhyg LC-HC против PD-1, которую используют для получения полноразмерного моноклонального антитела против PD-1 из Fab против PD-1 по настоящему изобретению.

На фиг. 4 изображены результаты эксперимента проточной цитометрии, показывающие, что антитела против PD-1 IP-H4.2L1, IP-H4L1 (IgG1) и IP-H4L1 (IgG4) по настоящему изобретению, направленные против PD-1 человека, связывают PD-1 на клеточной поверхности PBMC человека.

На фиг. 5 изображены результаты эксперимента проточной цитометрии с использованием линий клеток HEK 293T, показывающие, что антитела против PD-1 IP-H4.2L1, IP-H4.19L1, IP-H4.36L1 по настоящему изобретению, направленные против PD-1 человека, связывают PD-1 на клеточной поверхности.

На фиг. 6 изображены результаты эксперимента проточной цитометрии с использованием линий клеток HEK 293T, показывающие, что антитела против PD-1 N5NL, N6NL, N7NL, N9NL и N10NL по настоящему изобретению, направленные против PD-1 человека, связывают PD-1 на клеточной поверхности.

На фиг. 7 изображены результаты эксперимента, показывающие, что антитела против PD-1 IP-H4.2L1, IP-H4.19L1, IP-H4.36L1 по настоящему изобретению, направленные против PD-1 человека, стимулируют секрецию интерлейкина-2 (IL-2) в анализе реакции смешанной культуры лимфоцитов.

На фиг. 8 изображены результаты эксперимента, показывающие, что антитела против PD-1 IP-H4.2L1, IP-H4.19L1, IP-H4.36L1 по настоящему изобретению, направленные против PD-1 человека, стимулируют секрецию IFN-гамма (IFN-γ) в анализе реакции смешанной культуры лимфоцитов.

На фиг. 9 изображены результаты эксперимента, показывающие, что антитела против PD-1 N5NL, N6NL, N9NL и N10NL по настоящему изобретению, направленные против PD-1 человека, стимулируют секрецию IL-2 в анализе реакции смешанной культуры лимфоцитов.

На фиг. 10 изображены результаты эксперимента, показывающие, что антитела против PD-1 N5NL, N6NL, N9NL и N10NL по настоящему изобретению, направленные против PD-1 человека, стимулируют секрецию IFN-γ в анализе реакции смешанной культуры лимфоцитов.

Определения

Термин «антитело», как обозначено в настоящем описании, включает полноразмерные антитела и любой их антигенсвязывающий фрагмент (т.е., «антигенсвязывающую часть») или их одиночные цепи. «Антитело» относится к гликопротеину, содержащему по меньшей мере две тяжелые (H) цепи и две легкие (L) цепи, соединенные между собой дисульфидными связями, или его антигенсвязывающей части. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (сокращенно обозначенной в настоящем описании как VH) и константной области тяжелой цепи (сокращенно обозначенной в настоящем описании как CH). Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов, CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (сокращенно обозначенной в настоящем описании как VL) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена, CL. Области VH и VL можно дополнительно подразделять на области гипервариабельности, названные определяющими комплементарность областями (CDR), перемежающиеся областями, которые являются более консервативными, названными каркасными областями (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, аранжированных от амино-конца к карбокси-концу в следующем порядке: FRl, CDRl, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелых и легких цепей содержат связывающий домен, взаимодействующий с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включая различные клетки иммунной системы (например, иммуноэффекторные клетки) и первый компонент (C1q) классической системы комплемента.

Термин «функционально связанный» предназначен для обозначения того, что ген антитела лигирован в вектор таким образом, что последовательности для контроля транскрипции и трансляции внутри вектора служат для предназначенной для них функции регуляции транскрипции и трансляции гена антитела.

Термины «Ka» и Kd хорошо известны специалисту в данной области, где «Ka» представляет собой скорость связывания для конкретного взаимодействия антитело-антиген, в то время как термин «Kd» представляет собой скорость диссоциации для конкретного взаимодействия антитело-антиген. Термин «K_D» представляет собой константу аффинности, которую получают из соотношения Kd и Ka. Ее можно измерять с использованием способа поверхностного плазмонного резонанса, который хорошо известен в данной области. Значение K_Dявляется измерением аффинности связывания антитела по отношению к его антигену-мишени. Термин «K_D» определен также в WO 2006121168. Содержание этого Патентного документа приведено в настоящем описании в качестве ссылки.

Термины «моноклональные антитело» или «композиция моноклональных антител», в рамках изобретения, относятся к препарату молекул антител одного молекулярного состава. Композиция моноклональных антител имеет одну специфичность связывания и аффинность для конкретного эпитопа.

Термин «биспецифическое антитело» относится к гомогенной популяции антител, вовлеченной в высоко специфическое узнавание и связывание двух различных антигенных детерминант или эпитопов.

Термин «рекомбинантное антитело» по настоящему изобретению, включает моноклональные антитела, которые получают рекомбинантным способом с использованием синтетических генов тяжелых и легких цепей. Рекомбинантные антитела по этому изобретению представляют собой моноклональные антитела (mAb), которые не получены с использованием традиционных технологий на основе гибридомы, и не нуждаются в гибридомах и животных в процессе получения.

Термин «иммуноэффекторная функция», в рамках изобретения, представляет собой биохимическое событие, возникающее в результате взаимодействия области Fc антитела с рецептором или лигандом Fc. Эффекторные функции включают, но без ограничения ADCC, ADCP и CDC. Термин также представляет физиологическое событие, такое как время полужизни в кровотоке лекарственного средства или нацеливание лекарственного средства на конкретный тип клетки или ткани.

Термин «ADCC» или «антителозависимая опосредованная клетками цитотоксичность», в рамках изобретения, представляет собой опосредованную клетками реакцию, где неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют FcγR, узнают связанное антитело на клетке-мишени и затем вызывают лизис клетки-мишени.

Термин «ADCP» или «антителозависимый опосредованный клетками фагоцитоз», в рамках изобретения, представляет собой опосредованную клетками реакцию, где неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют FcγR, узнают связанное антитело на клетке-мишени и впоследствии вызывают фагоцитоз клетки-мишени.

Термин «иммуноэффекторная клетка», в рамках изобретения, представляет собой клетку, которая экспрессирует один или несколько рецепторов Fc и опосредует одну или несколько эффекторных функций. Эффекторные клетки включают, но без ограничения, моноциты, макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки, эозинофилы, тучные клетки, тромбоциты, B-клетки, большие гранулярные лимфоциты, клетки Лангерганса, клетки естественные киллеры (NK), и γδ - T-клетки, и могут происходить из любого организма, включая, но без ограничения, человека, мышей, крыс, кроликов и обезьян.

Термин фрагмент «Fc», название которого отражает его способность легко кристаллизоваться. В молекулах IgG, область Fc получают посредством расщепления папаином на N-конце от Cys 226. Область Fc является центральной для иммуноэффекторных функций антител.

Термин «белок Fc», в рамках изобретения, относится к части одной тяжелой цепи иммуноглобулина, начинающейся в шарнирной области непосредственно выше участка расщепления папаином и заканчивающийся на C-конце антитела., соответственно, полный домен Fc содержит по меньшей мере часть шарнирного (например, верхней, средней и/или нижней шарнирной области) домена, домена CH2 и домена CH3.

Термин «фармацевтический состав» относится к препаратам, которые находятся в такой форме, чтобы обеспечивать однозначно эффективную биологическую активность активных ингредиентов. Термин «фармацевтический состав» или «фармацевтическая композиция», или «композиция» могут быть использованы в настоящем описании взаимозаменяемо.

Термин «наполнитель» относится к средству, которое можно добавлять к составу для стабилизации активной лекарственной субстанции в составленной форме для коррекции и поддержания осмоляльности и pH фармацевтических препаратов. Примеры общеупотребительных наполнителей включают, но без ограничения, сахара, полиолы, аминокислоты, поверхностно-активные вещества и полимеры. «Фармацевтически приемлемые» наполнители представляют собой наполнители, которые можно целесообразно вводить субъекту-млекопитающему для обеспечения эффективной дозы используемого активного ингредиента.

Термин «лечение» или «терапевтические средства», в рамках изобретения, относится к любому лечению заболевания у млекопитающего, в частности, у человека. Он включает: (a) предотвращение возникновения заболевания у субъекта, который может являться предрасположенным к заболеванию или подверженным риску получения заболевания, но еще не был диагностирован как имеющий его; (b) ингибирование заболевания, т.е., остановка его развития; и (c) облегчение заболевания, т.е., вызов регрессии заболевания.

Термины «пациент» и «субъект» использованы взаимозаменяемо и использованы в своем общепринятом смысле для обозначения живого организма, страдающего от состояния или подверженного состоянию, которое можно предотвращать или лечить посредством введения композиции по настоящему изобретению, и включают как человека, так и не относящихся к человеку животных. Примеры субъектов включают, но без ограничения, человека, шимпанзе и другие виды обезьян старого и нового света; сельскохозяйственных животных, таких как крупный рогатый скот, овцы, свиньи, козы и лошади; домашних млекопитающих, таких как собаки и кошки; лабораторных животных, включая грызунов, таких как мыши, крысы и морские свинки; птиц, включая домашних, диких и промысловых птиц, таких как куры, индюшки и другие куриные, утки, гуси и т.п. Термин не обозначает конкретный возраст. Таким образом, взрослые, молодые и новорожденные индивидуумы представляют интерес.

«Эффективное количество» антитела по изобретению, или его композиции представляет собой количество, которое доставляют субъекту-млекопитающему, либо в однократной дозе, либо в качестве части из серий, которое является эффективным для индукции иммунного ответа против антигена-мишени у указанного субъекта. Это количество меняется в зависимости от состояния здоровья и физического состояния индивидуума, подлежащего лечению, таксономической группы индивидуума, подлежащего лечению, и других важных факторов. Ожидают, что количество может попадать в относительно широкий диапазон, который можно определять посредством общепринятых исследований.

«Фармацевтически эффективная доза» или «терапевтически эффективная доза» представляет собой дозу, необходимую для лечения или предотвращения, или облегчения одного или нескольких связанных с PD-1 нарушений или симптомов у субъекта, предпочтительно, по настоящему изобретению, для злокачественной опухоли или инфекции, или аутоиммунного заболевания. Фармацевтически эффективная доза зависит, среди прочего, от конкретного соединения (в настоящем описании оно представляет собой антитело против PD-1 или его комбинацию или конъюгат, или биспецифическое антитело) для введения, тяжести симптомов, чувствительности субъекта к побочным эффектам, типа заболевания, используемой композиции, способа введения, типа млекопитающего, подвергаемого лечению, физических характеристик конкретного млекопитающего, принимаемых во внимание, таких как состояние здоровья и физическое состояние, сопутствующее лекарственное средство, желательная степень защиты и другие факторы, хорошо известные специалисту в данной области.

Сокращенные наименования аминокислот, как использовано в настоящей заявке, представлены в таблице ниже.

Полное наименование Сокращенное наименование (3-буквенное) Сокращенное наименование (1-буквенное) Аланин Ala A Аргинин Arg R Аспарагин Asn N Аспартат Asp D Цистеин Cys C Глутамат Glu E Глутамин Gln Q Глицин Gly G Гистидин His H Изолейцин Ile I Лейцин Leu L Лизин Lys K Метионин Met M Фенилаланин Phe F Пролин Pro P Серин Ser S Треонин Thr T Триптофан Trp W Тирозин Tyr Y Валин Val V

Другие сокращения, используемые в настоящей заявке:

ACT: Адоптивный перенос клеток

ADCC: Антителозависимая клеточная цитотоксичность

ADCP: Антителозависимый клеточный фагоцитоз

CDC: Комплементзависимая цитотоксичность

CDR: Определяющая комплементарность область

КОЕ: Колониеобразующая единица

CH: Константная область тяжелой цепи

cHL: Классическая лимфома Ходжкина

CL: Константная область легкой цепи

dNTP: Дезоксирибонуклеотидтрифосфат

ESCC: Плоскоклеточная карцинома пищевода

FACS: Активированная флуоресценцией сортировка клеток

HC: Тяжелая цепь

HCC: Печеночноклеточная карцинома

HCVR: Вариабельная область тяжелой цепи

HEK: Эмбриональная почка человека

hyg: гигромицин

IFN-γ: IFN-гамма

LC: Легкая цепь

LCVR: Вариабельная область легкой цепи

mAb: Моноклональное антитело

MCC: Карцинома из клеток Меркеля

MLR: Реакция смешанной культуры лимфоцитов

MOI: Множественность инфекции

NSCLC: Немелкоклеточный рак легкого

PBMC: Мононуклеарные клетки периферической крови

PD-1/PD 1: Рецептор 1 программируемой клеточной смерти

PD-L1/PD L1: Лиганд 1 программируемой смерти

PD-L2/PD L2: Лиганд 2 программируемой смерти

Pfx: ДНК-полимераза с корректирующей активностью, Pfx™от Invitrogen.

PMBCL: Первичная медиастинальная крупноклеточная B-клеточная лимфома

sRCA: Избирательная амплификация по типу катящегося кольца

RCC: Почечноклеточная карцинома

об/мин: Оборотов в минуту

SCCHN: Плоскоклеточная карцинома головы и шеи

SCLC: Мелкоклеточный рак легкого

SEQ/seq: Последовательность

SPR: Поверхностный плазмонный резонанс

VH: Вариабельная область тяжелой цепи

VL: Вариабельная область легкой цепи.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новым антителам против PD-1, которые можно использовать для терапевтических целей.

В одном варианте осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению связывает с высокой аффинностью PD-1 человека.

В одном варианте осуществления, аминокислотная последовательность константной области антитела против PD-1 состоит из константной области IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgG2/G4, IgA, IgE, IgM или IgD, предпочтительно, IgGl или IgG4.

В другом варианте осуществления, одно или несколько антител против PD-1 по настоящему изобретению имеют модифицированную или уменьшенную, или отсутствующую активность ADCC и/или CDC. В одном из вариантов осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть имеет уменьшенный потенциал для вызова проблемы с безопасностью ADCC и CDC. В другом варианте осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть имеет активность ADCC и/или CDC.

В другом варианте осуществления, одно или несколько антител против PD-1 по настоящему изобретению имеет активность ADCP.

В одном из вариантов осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению имеет K_D 10^-8 M или менее, более предпочтительно, 10^-10 M или менее и даже более предпочтительно, 10^-11 M или менее, даже более предпочтительно, 10^-12 M или менее для антигена PD-1. Значение K_D представляет собой измерение аффинности связывания антитела по отношению к его антигену-мишени.

В одном из вариантов осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению вступает в перекрестную реакцию с PD-1 из видов, отличных от человека.

В одном из вариантов осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению имеет более высокую специфичность связывания для PD-1 человека.

В одном из вариантов осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению имеет увеличенное время полужизни у субъекта.

В одном варианте осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению блокирует функцию PD-1.

В одном варианте осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению предотвращает связывание PD-1 с экспрессирующими PD-L1 клетками-мишенями.

В одном из вариантов осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению предотвращает связывание PD-1 с экспрессирующими PD-L2 клетками-мишенями.

В другом варианте осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению уничтожает T-клетки, экспрессирующие PD-1.

В одном варианте осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению имеет улучшенное время полужизни в кровотоке.

В другом варианте осуществления, антитело против PD-1 или антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению является способным связывать PD-1 обезьяны, обеспечивая простоту разработки лекарственного средства посредством предоставления соответствующей модели фармакологии и токсикологии на животных.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к экспрессирующему вектору, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей экспрессирующий вектор, где экспрессирующий вектор содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть по настоящему изобретению.

В одном из вариантов осуществления, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть, специфически связывающие PD-1 человека, и приемлемый носитель.

В одном из вариантов осуществления, настоящее изобретение относится к иммуноконъюгату, содержащему антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть, связанные с лекарственным средством.

В одном из вариантов осуществления, настоящее изобретение относится к биспецифической молекуле, содержащей антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть, связанные с второй функциональной группой, имеющей специфичность связывания, отличную от указанного антитела или его антигенсвязывающей части.

В одном из вариантов осуществления, настоящее изобретение относится к комбинации, содержащей по меньшей мере два или более антитела или их антигенсвязывающих частей, где по меньшей мере одно антитело или его антигенсвязывающая часть представляет собой антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть по настоящему изобретению.

В другом варианте осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть по настоящему изобретению можно использовать для лечения заболеваний, при которых активность PD-1 является вредной, таких как различные злокачественные опухоли, различные инфекции. В одном из вариантов осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть по настоящему изобретению можно использовать для лечения аутоиммунных нарушений.

В одном из вариантов осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть по настоящему изобретению можно использовать для лечения злокачественной опухоли, выбранной из NSCLC, SCLC, RCC, cHL, SCCHN, уротелиальной карциномы, колоректального рака, ESCC, первичной медиастинальной крупноклеточной B-клеточной лимфомы, злокачественной опухоли с высокой микросателлитной нестабильностью, рака желудка, рака шейки матки, карциномы из клеток Меркеля, эндометриальной карциномы и злокачественной опухоли с высокой мутационной нагрузкой опухоли (TMB-H), где активность PD-1 умножена.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В одном варианте осуществления, антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть по настоящему изобретению связывает с высокой аффинностью PD-1 человека.

В одном варианте осуществления, CDR1 тяжелой цепи (далее в настоящем описании обозначено как CDRH1) антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению имеет аминокислотную последовательность общей формулы (I): X_1a-A_1a-X_2a-A_2a, где

X_1a представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагина, глицина и треонина;

A_1a представляет собой дипептид, выбранный из Tyr-Tyr и Ile-Thr;

X_2a представляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, фенилаланина, метионина и аланина;

A_2a представляет собой одиночную аминокислоту или дипептид, или трипептид, или тетрапептид, выбранные из тирозина, аспарагина, серина, глицина, Asn-Ser, Asn-Ser-Gly и Ser-Asn-Ser-Gly, при условии, что аспарагин в качестве X_1aи метионин в качестве X_2a не присутствуют совместно.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления, CDRH1 тяжелой цепи антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению имеет аминокислотную последовательность формулы (Ia): X_1a-Y-Y-X_2a-Y, где

X_1a представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагина и треонина;

X_2a представляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, метионина и аланина, при условии, что аспарагин в качестве X_1a и метионин в качестве X_2a не присутствуют совместно.

В более предпочтительном варианте осуществления, CDRH1 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой TYYIY.

В альтернативном предпочтительном варианте осуществления, CDRH1 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой GITFSNSG.

В одном варианте осуществления, CDR2 тяжелой цепи (далее в настоящем описании обозначено как CDRH2) антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению имеет аминокислотную последовательность общей формулы (II): A_1b-X_1b-A_2b-X_2b-X_3b-A_3b-X_4b-X_5b-X_6b-X_7b-X_8b-A_4b, где

A_1b необязательно присутствует, и когда присутствует, представляет собой глицин;

X_1bпредставляет собой аминокислоту, выбранную из метионина, изолейцина, лейцина, глицина, валина и аланина;

A_2b представляет собой трипептид или тетрапептид, выбранный из Asn-Pro-Ser-Asn или Trp-Tyr-Asp;

Каждый из X_2b и X_3b независимо представляет собой аминокислоту, выбранную из глицина и серина;

A_3b представляет собой одиночную аминокислоту или дипептид, выбранные из лизина или Thr-Asn;

X_4b представляет собой аминокислоту, выбранную из тирозина, аргинина и фенилаланина;

X_5b представляет собой аминокислоту, выбранную из серина, тирозина и аспарагина;

X_6b может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аминокислоту, выбранную из глутаминовой кислоты и глутамина;

X_7b может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагина и лизина;

X_8b может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аминокислоту, выбранную из тирозина и фенилаланина;

A_4b может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой лизин.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления, CDRH2 тяжелой цепи антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению имеет аминокислотную последовательность формулы (IIa): G-X_1b-N-P-S-N-X_2b-X_3b-T-N-X_4b-X_5b-X_6b-X_7b-X_8b-K, где

X_1b представляет собой аминокислоту, выбранную из метионина, изолейцина, лейцина, глицина, валина и аланина;

Каждый из X_2b и X_3b независимо представляет собой аминокислоту, выбранную из глицина и серина;

Каждый из X_4b и X_8b независимо представляет собой аминокислоту, выбранную из тирозина и фенилаланина;

X_5b представляет собой аминокислоту, выбранную из серина и аспарагина;

X_6b представляет собой аминокислоту, выбранную из глутаминовой кислоты и глутамина;

X_7b представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагина и лизина.

В более предпочтительном варианте осуществления, CDRH2 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению выбрана из GVNPSNGGTNYNENYK, GVNPSNGGTNYNQNYK или GVNPSNSGTNYNENYK.

В альтернативном предпочтительном варианте осуществления, CDRH2 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой IWYDGSKRY.

В одном варианте осуществления, CDR3 тяжелой цепи (далее в настоящем описании обозначено как CDRH3) антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению имеет аминокислотную последовательность общей формулы (III): A_1c-X_1c-A_2c-X_2c-A_3c-X_3c-A_4c-X_4c-X_5c-A_5c, где

A_1c может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аргинин;

X_1c представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагиновой кислоты, аспарагина и глутаминовой кислоты;

A_2c представляет собой аминокислоту или дипептид, выбранные из аспарагина, серина и треонина или Tyr-Arg;

X_2c представляет собой аминокислоту, выбранную из тирозина, гистидина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, глицина и фенилаланина;

A_3c представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагиновой кислоты, тирозина, изолейцина, фенилаланина, гистидина и триптофана;

X_3c может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, аланина, глутамина и метионина;

A_4c может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой глицин;

X_4c может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аминокислоту, выбранную из тирозина, гистидина и фенилаланина;

X_5c может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты;

A_5c может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой тирозин.

В одном из вариантов осуществления, CDRH3 тяжелой цепи антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению имеет аминокислотную последовательность формулы (IIIa): R-X_1c-Y-R-X_2c-D-X_3c-G-X_4c-X_5c-Y, где

Каждый из X_1c и X_5c независимо представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты;

Каждый из X_2c и X_4c независимо представляет собой аминокислоту, выбранную из тирозина, гистидина и фенилаланина;

X_3cпредставляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, аланина, глутамина и метионина.

В более предпочтительном варианте осуществления CDRH3 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению выбран из RDYRYDMGFDY или RDYRYDMGYDY, или RDYRYDMGHDY.

В альтернативном предпочтительном варианте осуществления, CDRH3 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой ESEY или NNDI, или NSDF, или NSDH, или NSDY, или NSGY, или NTDW, или NTDY.

В одном варианте осуществления, CDR1 легкой цепи (далее в настоящем описании обозначено как CDRL1) антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению имеет аминокислотную последовательность общей формулы (IV): A_1d-X_1d-A_2d-X_2d-X_3d-A_3d-X_4d-A_4d-X_5d-A_5d, где

A_1d представляет собой дипептид или трипептид, выбранный из Gln-Ser или Arg-Ala-Ser;

X_1dпредставляет собой аминокислоту, выбранную из валина, глутаминовой кислоты и лизина;

A_2d представляет собой аминокислоту, выбранную из глицина и серина;

X_2d представляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, аланина, серина и метионина;

X_3d представляет собой аминокислоту, выбранную из серина, тирозина и глутаминовой кислоты;

A_3d может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аминокислоту, выбранную из треонина;

X_4d может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аминокислоту, выбранную из серина, аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты.

A_4d может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой тетрапептид Gly-Tyr-Ser-Tyr;

X_5d может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, аланина и метионина;

A_5d может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой гистидин.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления, CDRL1 легкой цепи (антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению) имеет аминокислотную последовательность формулы (IVa): R-A-S-X_1d-G-X_2d-X_3d-T-X_4d-G-Y-S-Y-X_5d-H, где

X_1dпредставляет собой аминокислоту, выбранную из глутаминовой кислоты и лизина;

Каждый из X_2d и X_5d независимо представляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, аланина и метионина;

X_3d представляет собой аминокислоту, выбранную из серина и глутаминовой кислоты;

X_4d представляет собой аминокислоту, выбранную из серина, аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты.

В более предпочтительном варианте осуществления CDRL1 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой RASKGVSTSGYSYLH.

В альтернативном предпочтительном варианте осуществления CDRL1 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой QSVSSY.

В одном варианте осуществления, CDRL2 легкой цепи (далее в настоящем описании обозначено как CDRL2) антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части имеет аминокислотную последовательность общей формулы (V): A_1e-X_1e-A_2e-X_2e-A_3e, где

A_1e может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой дипептид Leu-Ala;

X_1e представляет собой аминокислоту, выбранную из серина, аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты;

A_2e представляет собой аминокислоту, выбранную из тирозина или аланина;

X_2e представляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, аланина, серина и метионина;

A_3e может необязательно присутствовать, и когда присутствует, представляет собой дипептид Glu-Ser.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления, CDRL2 легкой цепи антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части имеет аминокислотную последовательность формулы (Va): L-A-X_1e-Y-X_2e-E-S, где

X_1e представляет собой аминокислоту, выбранную из серина, аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты;

X_2e представляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, аланина и метионина.

В более предпочтительном варианте осуществления CDRL2 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой LASYLES.

В альтернативном предпочтительном варианте осуществления CDRL2 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой DAS.

В одном варианте осуществления, CDR3 легкой цепи (далее в настоящем описании обозначено как CDRL3) антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части имеет аминокислотную последовательность общей формулы (VI): A_1f-X_1f-A_2f-X_2f-X_3f-X_4f-X_5f-X_6f, где

A_1f представляет собой дипептид, выбранный из Gln-His и Gln-Gln;

X_1f представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из серина, аргинина, аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты;

A_2f представляет собой аминокислоту, выбранную из аргинина и серина;

X_2f представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагиновой кислоты, аспарагина и глутаминовой кислоты;

Каждый из X_3f и X_5f независимо представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, аланина, триптофана, аргинина и метионина;

X_4f представляет собой пролин;

X_6f представляет собой треонин.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления, CDRL3 легкой цепи антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части имеет аминокислотную последовательность формулы (VIa): Q-H-X_1f-R-X_2f-X_3f-P-X_4f-T, где

X_1f представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из серина, аргинина, аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты;

X_2f представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты;

Каждый из X_3f и X_4f независимо представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, аланина и метионина.

В более предпочтительном варианте осуществления CDRL3 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой QHSRDLPLT.

В альтернативном предпочтительном варианте осуществления CDRL3 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению представляет собой QQSSNWPRT.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3 антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части по настоящему изобретению выбраны из аминокислотных последовательностей, как приведено ниже в таблице 1.

Таблица 1: Аминокислотные последовательности области CDR Seq. ID No. Область CDR Аминокислотная последовательность области CDR 1 CDRH1 NYYLY 2 CDRH1 NYYVY 3 CDRH1 NYYIY 4 CDRH1 TYYIY 5 CDRH1 TYYVY 6 CDRH1 TYYMY 7 CDRH1 GITFSNSG 8 CDRH2 GVNPSNGGTNYNENYK 9 CDRH2 GVNPSNSGTNYNENYK 10 CDRH2 GVNPSNSGTNYNQNYK 11 CDRH2 GVNPSNGSTNYNQNYK 12 CDRH2 GMNPSNGGTNYNENYK 13 CDRH2 GMNPSNGSTNYNQNYK 14 CDRH2 GVNSSNGGTNYNENYK 15 CDRH2 GINSSNGGTNYNENYK 16 CDRH2 GVNSSNGSTNYNENYK 17 CDRH2 GLNSSNGSTNYNENYK 18 CDRH2 GVNPSNGGTNYSEKYK 19 CDRH2 GVNPSNGGTNYSEKFK 20 CDRH2 GLNPSNSGTNYNENYK 21 CDRH2 GLNPSNGSTNYNENYK 22 CDRH2 GINPSNGGTNYNENYK 23 CDRH2 GVNPSNGGTNFNENYK 24 CDRH2 GVNPSNGGTNYNEKYK 25 CDRH2 GVNPSNGGTNYNENFK 26 CDRH2 GVNPSNGGTNYNQNYK 27 CDRH2 GVNPSNSGTNYNQNYK 28 CDRH2 GVNPSNGSTNYNQNYK 29 CDRH2 GMNPSNGGTNYNENYK 30 CDRH2 IWYDGSKRY 31 CDRH3 RDYRFDMGYDY 32 CDRH3 RDYRYDMGFDY 33 CDRH3 RDYRYDMGYDY 34 CDRH3 REYRFDMGYDY 35 CDRH3 REYRFDMGYEY 36 CDRH3 REYRYDMGYEY 37 CDRH3 RDYRYDLGYDY 38 CDRH3 REYRYDMGFDY 39 CDRH3 RDYRYDMGFEY 40 CDRH3 RDYRYDMGYEY 41 CDRH3 REYRYDMGYEY 42 CDRH3 RDYRYDIGFDY 43 CDRH3 REYRYDIGYDY 44 CDRH3 REYRYDIGYEY 45 CDRH3 RDYRYDQGYDY 46 CDRH3 REYRYDQGYEY 47 CDRH3 RDYRYDMGHDY 48 CDRH3 ESEY 49 CDRH3 NNDI 50 CDRH3 NSDF 51 CDRH3 NSDH 52 CDRH3 NSDY 53 CDRH3 NSGY 54 CDRH3 NTDW 55 CDRH3 NTDY 56 CDRL1 RASKGVSTSGYSFLH 57 CDRL1 RASKGVSTSGYSWLH 58 CDRL1 RASKGVSTSGYSYLY 59 CDRL1 RASKGVSTSGYSYIY 60 CDRL1 RASKGVSTSGYSFLY 61 CDRL1 RASKGVSTSGYTYLY 62 CDRL1 RASKNVSTSGYSYLY 63 CDRL1 RASEGVSTSGYSYLH 64 CDRL1 RASEGVSTSGFSYIH 65 CDRL1 RASKNVSTTGFSYLH 66 CDRL1 RASKNVSSTSYSYLH 67 CDRL1 RASKNVSSTSFSYLY 68 CDRL1 RASKGVSSTSFSYIH 69 CDRL1 RASRGISTSGYSYIH 70 CDRL1 RASEGISTSGYSYIH 71 CDRL1 RASEGLDTSGYSYIH 72 CDRL1 RASEGLETSGYSYIH 73 CDRL1 RASEGISTSGYSYVH 74 CDRL1 RASKGISTDGYSYMH 75 CDRL1 RASKGISTEGYSYMH 76 CDRL1 RADKGVSTSGYSYMH 77 CDRL1 RASKGVSTSGYSYLH 78 CDRL1 RASKSVSTSGFSYLH 79 CDRL1 RASQSVSSYLA 80 CDRL1 RGSKGVSSGIYSYLH 81 CDRL1 QSVSSY 82 CDRL2 IASYLES 83 CDRL2 MASYLES 84 CDRL2 VASYLES 85 CDRL2 FASYLES 86 CDRL2 AASYLES 87 CDRL2 IASFLES 88 CDRL2 IASWLES 89 CDRL2 IASHLES 90 CDRL2 MASFLES 91 CDRL2 MASWLES 92 CDRL2 LASYLQS 93 CDRL2 IASYLQS 94 CDRL2 IASFLQS 95 CDRL2 LASFLQS 96 CDRL2 LASWLQS 97 CDRL2 IASWLQS 98 CDRL2 VASWLQS 99 CDRL2 AASFLES 100 CDRL2 LADYLES 101 CDRL2 LADYIES 102 CDRL2 LADYVES 103 CDRL2 LAEYMES 104 CDRL2 LAEYVES 105 CDRL2 LADYLEDY 106 CDRL2 LADYIEDY 107 CDRL2 LAEYLEDY 108 CDRL2 LASYLES 109 CDRL2 LASNLES 110 CDRL2 DASNRAT 111 CDRL2 KASSLES 112 CDRL2 DAS 113 CDRL3 QHSRELPLT 114 CDRL3 QHSRNLPLT 115 CDRL3 QHSREIPLT 116 CDRL3 QHSRNIPLT 117 CDRL3 QHSRDIPLT 118 CDRL3 QHSRDFPLT 119 CDRL3 QHSRNFPLT 120 CDRL3 QHSRDIPIT 121 CDRL3 QHSRDFPIT 122 CDRL3 QRSRDLPLT 123 CDRL3 QKSRDLPLT 124 CDRL3 QYSRDLPIT 125 CDRL3 QRSRDIPLT 126 CDRL3 QKSRDIPLT 127 CDRL3 QYSRDIPLT 128 CDRL3 QHERDLPLT 129 CDRL3 QHERDIPLT 130 CDRL3 QHRRDIPVT 131 CDRL3 QHDRDLPMT 132 CDRL3 QHSRDLPLT 133 CDRL3 QHSWELPLT 134 CDRL3 QHYSNYPLT 135 CDRL3 QHSRDAPLT 136 CDRL3 QQSSNWPRT

В одном из вариантов осуществления, настоящее изобретение относится к антителу против PD-1 или его антигенсвязывающей части, содержащим:

(a) CDRH1 общей формулы (I): X_1a-A_1a-X_2a-A_2a;

(b) CDRH2 общей формулы (II): A_1b-X_1b-A_2b-X_2b-X_3b-A_3b-X_4b-X_5b-X_6b-X_7b- X_8b-A_4b;

(c) CDRH3общей формулы (III): A_1c-X_1c-A_2c-X_2c-A_3c-X_3c-A_4c-X_4c-X_5c-A_5c;

(d) CDRL1 общей формулы (IV): A_1d-X_1d-A_2d-X_2d-X_3d-A_3d-X_4d-A_4d-X_5d-A_5d;

(e) CDRL2 общей формулы (V): A_1e-X_1e-A_2e-X_2e-A_3eи

(f) CDRL3 общей формулы (VI): A_1f-X_1f-A_2f-X_2f -X_3f- X_4f -X_5f-X_6f,

где

X_1a представляет собой аминокислоту, выбранную из аспарагина, глицина и треонина;

A_1a представляет собой дипептид, выбранный из Tyr-Tyr и Ile-Thr;

X_2a представляет собой аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, валина, фенилаланина, метионина и аланина;

A_2a представляет собой одиночную аминокислоту или дипептид, или трипептид, или тетрапептид, выбранные из тирозина, аспарагина, серина, глицина, Asn-Ser, Asn-Ser-Gly и Ser-Asn-Ser-Gly;