Способ лимфатического трассирования, используемый при заболевании, связанном с мастэктомией Российский патент 2024 года по МПК A61K49/00 A61K31/136 A61K47/02 A61K47/12 A61P35/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к области фармацевтических препаратов и, в частности, относится к способу лимфатического трассирования, используемому при заболевании, связанном с мастэктомией.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Метастазирование является основной биологической характеристикой злокачественных опухолей, а также основной причиной послеоперационного рецидива опухоли и смерти пациентов. Уровень излечения и частота выживаемости пациентов со злокачественными опухолями будут значительно снижены, как только у них разовьется метастазирование. Лимфатическое метастазирование является одним из важных факторов, влияющих на прогноз больных со злокачественными опухолями.

При оперативном лечении больных раком молочной железы все большее внимание привлекают интраоперационная лимфангиография и биопсия сторожевого лимфатического узла (sentinel lymph node biopsy, SLNB) в качестве высокочувствительного метода обнаружения метастазов в подмышечных лимфатических узлах.

Сторожевой лимфатический узел (sentinel lymph node, SLN) представляет собой специфические лимфатические узлы, которые в первую очередь получают лимфатический дренаж из области опухоли, и, в которых в самом начале развиваются метастазы опухоли, а также он получает неочищенную лимфатическую жидкость и максимальный объем дренажа, который, вероятнее всего, содержит метастатические опухолевые клетки. SLN является первым барьером при метастазировании раковых клеток через лимфу. Если метастазов в SLN нет, маловероятно метастазирование в другие лимфатические узлы в этой области.

В настоящее время существующие методы SLNB включают метод красителя, нуклидный метод и комбинированное применение красителя-нуклида.

Основные трассеры лимфатических узлов на основе красителей, о которых сообщается как у нас в стране, так и за ее пределами, включают метиленовый синий, наноуглерод, изосульфановый синий и патентованный синий и т.д. В настоящее время метиленовый синий и наноуглерод чаще используются в качестве трассеров лимфатических узлов в клиниках Китая, в то время как изосульфановый синий и патентованный синий меньше используются в Китае из-за их высокой стоимости и сложности с приобретением в Китае.

Среди вышеописанных трассеров лимфатических узлов на основе красителей изосульфановый синий или патентованный синий обладают слабой связывающей способностью с белком, и после инъекции изосульфановый синий или патентованный синий диспергируются в небольшом количестве тканей и быстро их окрашивают.Однако продолжительность окрашивания изосульфановым синим или патентованным синим короче, поэтому необходимо повторное введение изосульфанового синего или патентованного синего. Кроме того, изосульфановый синий и патентованный синий стоят дорого и не производятся в Китае. Продолжительность окрашивания метиленовым синим велика, но метиленовый синий обладает более сильной связывающей способностью с белком, поэтому он также окрашивает в синий цвет окружающие ткани. Метод красителя является важным методом и выбор идеального красителя в качестве лимфатического трассера является важной гарантией дальнейшего повышения показателя эффективности SLNB. Тем не менее, доступные в настоящее время лимфатические трассеры в Китае очень ограничены, и только наноуглерод с торговым названием Canarine в основном используется для трассирования дренирующих лимфатических узлов в области рака желудка. Другие красители не одобрены для соответствующих показаний и не имеется четкой инструкции.

Наноуглерод находится в накапливающемся состоянии in vivo и не метаболизируется in vivo. При попадании в кровоток и лимфоток он может блокировать капилляры. Более того, если плотность раковых тканей более твердая и хрупкая, прямое внутриопухолевое введение наноуглерода может вызвать некроз и отпадение опухолевых тканей, вызывая кровотечение.

Нуклидный метод позволяет точно определить местонахождение лимфатических узлов и его легко использовать во время операции, однако требуется специальный прибор для обнаружения, стоимость которого высока. Кроме того, поскольку используется радионуклид, существует риск радиоактивного загрязнения.

Поэтому важно разработать безопасный и эффективный лимфатический трассер для трассирования SLN при операции по поводу рака молочной железы, который определяет, происходит ли метастазирование опухоли, с тем, чтобы улучшить качество жизни пациенток с раком молочной железы и продлить их жизнь.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

На основании тропности митоксантрона гидрохлорида к лимфатической системе, т.е. митоксантрона гидрохлорид окрашивает лимфатические узлы вблизи опухоли в темно-синий цвет (цвет митоксантрона гидрохлорида), в настоящем изобретении митоксантрона гидрохлорид разработан в качестве лимфатического трассера для окрашивания лимфатических узлов вблизи опухоли при операции по поводу рака молочной железы, что помогает клиническому определению местоположения и диссекции лимфатических узлов.

Таким образом, настоящее изобретение относится к способу лимфатического трассирования, используемому при заболевании, связанном с мастэктомией.

В настоящем изобретении, если не указано иное, используемые здесь научные и технические термины имеют значения, обычно понятные специалистам в данной области. Кроме того, используемые здесь термины и экспериментальные методики, относящиеся к химии белков и нуклеиновых кислот, молекулярной биологии, культуре клеток и тканей, микробиологии и иммунологии, являются терминами и общепринятыми методиками, широко используемыми в соответствующих областях. Между тем, чтобы лучше понять настоящее изобретение, ниже приведены определения и описания соответствующих терминов.

Также следует понимать, что используемые здесь термины предназначены только для цели описания конкретных вариантов осуществления изобретения и не предназначены для ограничения настоящего изобретения.

В контексте данного документа термины «пациент», «индивидуум» и «субъект» являются взаимозаменяемыми и относятся к любому отдельному животному, которое желает пройти лечение, более предпочтительно млекопитающему (включая, например, животных, отличных от человека, таких как кошки, собаки, лошади, кролики, животные зоопарка, коровы, свиньи, овцы и нечеловеческие приматы). В конкретных вариантах осуществления изобретения пациентом в данном документе является человек. У пациента имеется опухоль молочной железы, есть подозрения на нее или существует риск ее возникновения. В контексте данного документа термин «заболевание» относится к любому состоянию, при котором может быть полезно лечение, которое включает среди прочих, хронические и острые заболевания или расстройства, включая те патологические состояния, которые провоцируют млекопитающего к рассматриваемому заболеванию.

В контексте данного документа термин «фармацевтический препарат» относится к препарату в форме, обеспечивающей эффективность биологической активности содержащегося в нем активного ингредиента, который не содержит других компонентов, обладающих неприемлемой токсичностью для субъекта, которому препарат вводится.

В контексте данного документа термин «регулятор рН» относится к соединению или смеси нескольких соединений для обеспечения того, чтобы значение рН реконструкционного набора находилось в пределах допустимого диапазона для введения (значение рН примерно от 4,0 до 10,5) для людей или млекопитающих. Подходящие регуляторы рН включают фармацевтически приемлемые буферы, такие как трис(гидроксиметил)метилглицин (трицин), фосфаты или трис(гидроксиметил)аминометан (ТРИС); фармацевтически приемлемые кислоты, такие как фармацевтически приемлемые органические кислоты (например, муравьиная кислота и уксусная кислота) или их смеси, или неорганические кислоты (например, соляная кислота и фосфорная кислота) или их смеси; и фармацевтически приемлемые основания, такие как карбонат натрия, бикарбонат натрия или их смеси. Если используемый конъюгат находится в форме кислой соли, регулятор рН иногда предоставляется в отдельном флаконе или контейнере, благодаря чему пользователь набора может регулировать рН как часть многоступенчатой процедуры.

В контексте данного документа термин «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» относится к ингредиенту, а не к активному ингредиенту в фармацевтическом препарате, который нетоксичен для субъектов. Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества включают, помимо прочего, буферы, носители, стабилизаторы или консерванты.

В контексте данного документа термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли, которая не является вредной с биологической точки зрения или в отношении других аспектов. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислот и оснований. Фраза «фармацевтически приемлемый» означает, что вещество или композиция должны быть химически и/или токсикологически совместимыми с другими ингредиентами для приготовления препарата и/или с млекопитающим, которому вводят препарат.

В контексте данного документа термин «фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты» относится к таким фармацевтически приемлемым солям, которые образованы неорганическими или органическими кислотами; неорганические кислоты включают, например, соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, углекислоту и фосфорную кислоту, а органические кислоты выбирают из алифатических, циклоалифатических, ароматических, аралифатических, гетероциклических, карбоновых и сульфоорганических кислот, таких как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, глюконовая кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, аспарагиновая кислота, аскорбиновая кислота, глутаминовая кислота, антраниловая кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, памовая кислота, фенилуксусная кислота, метансульфоновая кислота (метансульфонат), этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота и салициловая кислота.

Термин «фармацевтически приемлемая соль присоединения основания» относится к таким фармацевтически приемлемым солям, которые образованы органическими или неорганическими основаниями. Примеры приемлемых неорганических оснований включают соли натрия, калия, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца и алюминия. Соли, полученные из фармацевтически приемлемых органических нетоксичных оснований, включают соли первичных аминов, вторичных аминов, третичных аминов, замещенных аминов (включая встречающиеся в природе замещенные амины) и циклических аминов, а также соли основных ионообменных смол, такие как соли изопропиламина, триметиламина, диэтиламина, триэтиламина, трипропиламина, этаноламина, 2-диэтиламиноэтанола, триметиламина, дициклогексиламина, лизина, аргинина, гистидина, кофеина, новокаина, гидрабамина, холина, бетаина, этилендиамина, глюкозамина, метилглюкамина, теобромина, пурина, пиперазина, пиперидина, N-этилпиперидина и полиаминные смолы.

В контексте данного документа термин «лечение» относится к клиническим вмешательствам, которые пытаются изменить естественное течение заболевания у индивидуума, проходящего лечение, и могут использоваться для профилактики или в ходе клинической патологии. Желательные терапевтические эффекты включают в себя, помимо прочего, предотвращение возникновения или рецидива заболеваний, ослабление симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий заболеваний, предотвращение метастазирования, замедление скорости прогрессирования заболеваний, облегчение или ослабление болезненного состояния и облегчение или улучшение прогноза.

В контексте данного документа термин «введение» относится к способу введения определенной дозы соединения (например, инъекция митоксантрона гидрохлорида) или фармацевтической композиции (например, фармацевтической композиции, содержащей ингибитор или антагонист) субъекту (например, пациенту). Соединение или фармацевтическую композицию можно вводить любым подходящим способом, включая парентеральное введение, внутрилегочное введение и интраназальное введение. Если соединение или фармацевтическая композиция необходимы для местного лечения, их можно вводить внутрь пораженных тканей. Парентеральное вливание включает, например, внутримышечное введение, внутривенное введение, внутриартериальное введение, внутрибрюшинное введение или подкожное введение. Лекарства можно вводить любыми подходящими путями, например путем инъекции, такой как внутривенная инъекция или подкожная инъекция, что частично определяется тем, является ли введение временным или длительным. В настоящем документе рассматриваются различные схемы введения, которые включают, помимо прочего, однократное введение, многократное введение в разные моменты времени, болюсное инъекционное введение и импульсную инфузию.

В контексте данного документа, популяция полного анализа (full analysis set, FAS), группа субъектов в соответствии с принципом начавших проходить лечение (intention to treat, ITT) относится к совокупности данных, включающих в себя субъектов, которые участвуют в испытании, получают лечение и имеют базовые оценки терапевтического эффекта.

В контексте данного документа выборка пациентов, выполнивших требования протокола (per protocol set, PPS), относится ко всем подгруппам людей, получавших лечение, которые завершили исследование и исключили серьезные нарушения протокола (в отношении объектов исследования, которые нарушают критерии включения или критерии исключения), что представляет собой группу пациентов, которые соответствуют критериям включения, не соответствуют критериям исключения и завершили программу лечения.

Настоящее изобретение относится к способу лимфатического трассирования, используемому при заболевании, связанном с мастэктомией, включающему: введение лимфатического трассера, содержащего митоксантрона гидрохлорид, хлорид натрия, уксусную кислоту, ацетат натрия и антиоксидант, представляющий собой пиросульфит натрия или динатрия эдетат;

причем содержание митоксантрона гидрохлорида составляет 2-10 мг/мл;

содержание хлорида натрия составляет 3-18 мг/мл;

содержание уксусной кислоты составляет 0,15-1 мг/мл;

содержание ацетата натрия составляет 0,03-0,15 мг/мл;

содержание пиросульфита натрия составляет 0,05-0,3 мг/мл;

содержание динатрия эдетата составляет 0,05-0,3 мг/мл;

лимфатический трассер представляет собой инъекцию;

инъекцию вводят подкожно или субсерозно;

инъекцию вводят местно;

места инъекций находятся на молочной железе и/или в тканях и органах вокруг молочной железы;

инъекцию вводят в несколько мест; концентрация инъекции составляет 2-10 мг/мл; и объем инъекции составляет 0,1-3,0 мл.

В одном варианте осуществления заболевание, связанное с мастэктомией, выбрано из опухоли молочной железы, кисты молочной железы, фибромы молочной железы и туберкулеза молочной железы; предпочтительно опухоль молочной железы включает доброкачественную опухоль молочной железы и злокачественную опухоль молочной железы; более предпочтительно, злокачественная опухоль молочной железы представляет собой рак молочной железы, и лимфатический трассер используется для трассирования лимфы при раке молочной железы.

В еще одном варианте осуществления по меньшей мере вводят 0,1 мл инъекции в концентрации 5 мг/мл; и максимально вводят не более 3,0 мл инъекции в концентрации 5 мг/мл; и/или

если лимфатический трассер содержит митоксантрона гидрохлорид, хлорид натрия, уксусную кислоту, ацетат натрия и пиросульфит натрия, то лимфатический трассер дополнительно содержит сульфат натрия; содержание сульфата натрия составляет 0,05-0,6 мг/мл, предпочтительно 0,15-0,45 мг/мл, и более предпочтительно 0,15 мг/мл, 0,3 мг/мл или 0,45 мг/мл;

значение рН инъекции находится в диапазоне 2,8-4,3;

содержание митоксантрона гидрохлорида составляет 2 мг/мл, 5 мг/мл или 10 мг/мл;

содержание хлорида натрия составляет 4-16 мг/мл и более предпочтительно 4 мг/мл, 8 мг/мл или 16 мг/мл;

содержание уксусной кислоты составляет 0,23-0,92 мг/мл и более предпочтительно 0,23 мг/мл, 0,46 мг/мл или 0,92 мг/мл;

содержание ацетата натрия составляет 0,05-0,1 мг/мл и более предпочтительно 0,05 мг/мл или 0,1 мг/мл; и

содержание пиросульфита натрия составляет 0,8-0,12 мг/мл.

В еще одном варианте осуществления инъекцию готовят следующим способом:

(1) взвешивание предписанных количеств уксусной кислоты, ацетата натрия, хлорида натрия и динатрия эдетата или взвешивание предписанных количеств уксусной кислоты, ацетата натрия, хлорида натрия и пиросульфита натрия, или взвешивание предписанных количеств уксусной кислоты, ацетата натрия, хлорида натрия, пиросульфита натрия и сульфата натрия, смешивание их с растворителем и растворение их с получением смешанного раствора вспомогательных веществ, предпочтительно растворитель представляет собой воду для инъекций, предпочтительно вспомогательные вещества растворяют при перемешивании; и

(2) смешивание смешанного раствора вспомогательных веществ, полученного на стадии (1), с предписанными количествами митоксантрона гидрохлорида, предпочтительно митоксантрона гидрохлорид растворяется при перемешивании, предпочтительно митоксантрона гидрохлорид растворяют при перемешивании в течение 10-30 минут;

предпочтительно способ дополнительно включает следующую стадию: (3) фильтрование, предпочтительно фильтрование с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и/или 0,22 мкм;

предпочтительно способ дополнительно включает следующую стадию: (4) разлив во флаконы и заполнение газообразным азотом, предпочтительно стерилизацию проводят при 121°С в течение 15 минут после заполнения газообразным азотом; и

предпочтительно значение рН инъекции находится в диапазоне 2,8-4,3.

Митоксантрона гидрохлорид изначально был противоопухолевым препаратом, и в настоящее время в основном используется для лечения злокачественной лимфомы, рака молочной железы и острого лейкоза. Основываясь на тропизме митоксантрона гидрохлорида к лимфатической системе, т.е. митоксантрона гидрохлорид окрашивает лимфатические узлы вблизи опухоли в темно-синий цвет (цвет митоксантрона гидрохлорида), в настоящем изобретении митоксантрона гидрохлорид разработан в качестве лимфатического трассера, который вводится локально при операции на опухоли для окрашивания лимфатических узлов вблизи опухоли и помогает клиническому позиционированию и диссекции лимфатических узлов. Детальное исследование доклинической фармакодинамики митоксантрона гидрохлорида показало, что этот препарат имеет высокое сродство к лимфатическим узлам при подкожном или субсерозном введении и может окрашивать лимфатические узлы в синий цвет. Таким образом, настоящий лекарственный препарат может использоваться в качестве лимфатического трассера и обеспечивает новую идею лечения полного уничтожения рака молочной железы у пациенток с раком молочной железы.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В целях ясности и краткости описания признаки в данном документе описываются как составная часть одного и того же или отдельных вариантов осуществления изобретения. Однако следует понимать, что объем настоящего изобретения может включать некоторые варианты осуществления изобретения, имеющие комбинации всех или некоторых из описанных признаков.

Предписанные количества хлорида натрия, уксусной кислоты, ацетата натрия и динатрия эдетата взвешивали, прибавляли в предписанное количество воды для инъекции и растворяли при перемешивании; предписанное количество митоксантрона гидрохлорида прибавляли после растворения вспомогательных веществ и растворяли при перемешивании в течение 30 минут; и смешанный раствор подвергали тонкой фильтрации с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и 0,22 мкм, разливали во флаконы и заполняли газообразным азотом, герметизировали крышками и стерилизовали при 121°С в течение 15 минут. Было обнаружено, что значение рН инъекции митоксантрона гидрохлорида составляло 3,5.

Предписанные количества хлорида натрия, уксусной кислоты, ацетата натрия, пиросульфита натрия и сульфата натрия взвешивали, прибавляли в предписанное количество воды для инъекций и растворяли при перемешивании; после растворения вспомогательных веществ прибавляли предписанное количество митоксантрона гидрохлорида и растворяли при перемешивании в течение 30 минут; и смешанный раствор подвергали тонкой фильтрации с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и 0,22 мкм, разливали во флаконы и заполняли газообразным азотом, герметизировали крышками и стерилизовали при 121°С в течение 15 минут.Обнаружено, что значение рН инъекции митоксантрона гидрохлорида составляло 3,4.

Предписанные количества хлорида натрия, уксусной кислоты, ацетата натрия и динатрия эдетата взвешивали, прибавляли в предписанное количество воды для инъекций и растворяли при перемешивании; после растворения вспомогательных веществ прибавляли предписанное количество митоксантрона гидрохлорида и растворяли при перемешивании в течение 30 минут; и смешанный раствор подвергали тонкой фильтрации с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и 0,22 мкм, разливали во флаконы и заполняли газообразным азотом, герметизировали крышками и стерилизовали при 121°С в течение 15 минут. Было обнаружено, что значение рН инъекции митоксантрона гидрохлорида составляло 3,6.

Предписанные количества хлорида натрия, уксусной кислоты, ацетата натрия, пиросульфита натрия и сульфата натрия взвешивали, прибавляли в предписанное количество воды для инъекций и растворяли при перемешивании; после растворения вспомогательных веществ прибавляли предписанное количество митоксантрона гидрохлорида и растворяли при перемешивании в течение 30 минут; и смешанный раствор подвергали тонкой фильтрации с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и 0,22 мкм, разливали во флаконы и заполняли газообразным азотом, герметизировали крышками и стерилизовали при 121°С в течение 15 минут. Было обнаружено, что значение рН инъекции митоксантрона гидрохлорида составляло 3,7.

Предписанные количества хлорида натрия, уксусной кислоты, ацетата натрия, пиросульфита натрия и сульфата натрия взвешивали, прибавляли в предписанное количество воды для инъекций и растворяли при перемешивании; после растворения вспомогательных веществ прибавляли предписанное количество митоксантрона гидрохлорида и растворяли при перемешивании в течение 30 минут; и смешанный раствор подвергали тонкой фильтрации с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и 0,22 мкм, разливали во флаконы и заполняли газообразным азотом, герметизировали крышками и стерилизовали при 121°С в течение 15 минут. Было обнаружено, что значение рН инъекции митоксантрона гидрохлорида составляло 3,6.

Предписанные количества хлорида натрия, уксусной кислоты, ацетата натрия и динатрия эдетата взвешивали, прибавляли в предписанное количество воды для инъекций и растворяли при перемешивании; после растворения вспомогательных веществ прибавляли предписанное количество митоксантрона гидрохлорида и растворяли при перемешивании в течение 30 минут; и смешанный раствор подвергали тонкой фильтрации с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и 0,22 мкм, разливали во флаконы и заполняли газообразным азотом, герметизировали крышками и стерилизовали при 121°С в течение 15 минут.Было обнаружено, что значение рН инъекции митоксантрона гидрохлорида составляло 3,7.

Предписанные количества хлорида натрия, уксусной кислоты, ацетата натрия и пиросульфита натрия взвешивали, прибавляли в предписанное количество воды для инъекций и растворяли при перемешивании; после растворения вспомогательных веществ прибавляли предписанное количество гидрохлорида митоксантрона и растворяли при перемешивании в течение 30 минут; и смешанный раствор подвергали тонкой фильтрации с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и 0,22 мкм, разливали во флаконы и заполняли газообразным азотом, герметизировали крышками и стерилизовали при 121°С в течение 15 минут. Было обнаружено, что значение рН инъекции гидрохлорида митоксантрона составляло 3,9.

Предписанные количества хлорида натрия, уксусной кислоты, ацетата натрия, пиросульфита натрия и сульфата натрия взвешивали, прибавляли в предписанное количество воды для инъекций и растворяли при перемешивании; после растворения вспомогательных веществ прибавляли предписанное количество митоксантрона гидрохлорида и растворяли при перемешивании в течение 30 минут; и смешанный раствор подвергали тонкой фильтрации с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и 0,22 мкм, разливали во флаконы и заполняли газообразным азотом, герметизировали крышками и стерилизовали при 121°С в течение 15 минут. Было обнаружено, что значение рН инъекции митоксантрона гидрохлорида составляло 3,5.

Пример 9. Исследования фармакокинетического и фармакодинамического биологического испытания инъекции митоксантрона гидрохлорида

Органом-мишенью инъекции митоксантрона гидрохлорида для лимфатического трассирования является лимфатический узел в области дренирования молочной железы. При смешивании митоксантрона гидрохлорида с соляной кислотой может образоваться однородный кислый раствор. После введения инъекции митоксантрона гидрохлорида в тканевое пространство изменяется рН микроокружения, и митоксантрона гидрохлорид будет постепенно осаждаться в виде нанокристаллов. Кристаллы предотвращают попадание митоксантрона гидрохлорида в кровоток через капилляры. Благодаря высокой проницаемости лимфатических капилляров, митоксантрона гидрохлорид может проникать в лимфатические капилляры через пространство эндотелиальных клеток, а также путем пиноцитоза и фагоцитоза эндотелиальных клеток, по лимфодренажу достигать регионарных лимфатических узлов и обогащать регионарные лимфатические узлы и оставаться в лимфатических узлах в течение времени, тем самым достигая эффектов окрашивания и трассирования лимфатических узлов.

Для проверки безопасности и эффективности инъекции митоксантрона гидрохлорида для лимфатического трассирования при отслеживании поврежденных дренирующих лимфатических узлов у пациентки с раком молочной железы и для проверки переносимости и фармакокинетики инъекции митоксантрона гидрохлорида для лимфатического трассирования in vivo у субъекта с раком молочной железы с тем, чтобы определить безопасный диапазон доз, в этом примере была принята одноцентровая, рандомизированная, открытая и контрольная схема клинического испытания. После того, как молочная железа была полностью обнажена, для лимфатического трассирования в несколько участков молочной железы вводили инъекцию гидрохлорида митоксантрона при концентрации 5 мг/мл. В зависимости от размера молочной железы общая доза инъекции составляла 0,1-3,0 мл. Переносимость у людей и фармакокинетику у субъектов проверяли по группам, и в то же самое время вели наблюдения за эффективностью исследуемого препарата.

Фармакокинетические результаты: инъекция митоксантрона гидрохлорида быстро всасывается после перитуморального введения, и максимум в основном достигается через 15-30 минут после инъекции. При этом препарат быстро метаболизируется после поступления в кровь, и в плазме препарат практически полностью метаболизируется через 60 минут, самое большее через 120 минут после введения. Кроме того, концентрация в плазме после введения обычно показывает дозозависимую тенденцию, концентрации в плазме у разных субъектов в низкодозовой группе все ниже нижнего предела количественного определения в различные моменты времени; концентрации в плазме у разных пациентов в группе средних и высоких доз равны или превышают нижний предел количественного определения, как максимум, в 4 временных точках, и обнаруженная максимальная концентрация составляет всего 79,4 нг/мл, что примерно в 6,5 раз меньше максимальной концентрации 510±206 нг/мл, указанной в документе для пациентов с острым лейкозом, получавших химиотерапию митоксантроном путем инфузионного введения (10-12 мг/м²/сут). В документе химиотерапия высокими дозами митоксантрона используется при лечении рака яичников, максимально переносимая общая доза митоксантрона, вводимого внутривенно болюсно, составляет 75 мг/м², и AUC при этой дозе составляет 560-1700 нгхч/мл, что в 10,7-32,5 раза больше максимальной AUC (3143 нг × мин/мл) в настоящем исследовании.

Пример 10. Применение инъекции гидрохлорида митоксантрона для лимфатического трассирования при операции у пациентки с раком молочной железы

1. Схема клинического испытания

В исследовании применялась одноцентровая, позитивная и самоконтролируемая схема клинического испытания. В соответствии с принципом повышения дозы переносимость и фармакокинетика у субъектов проверялись интраоперационными инъекциями по группам, и в то же время проводилось исследование по эффективности лекарственного препарата, проходящего клиническое испытание. В исследовании планировалось отобрать от 12 до 24 пациенток с раком молочной железы. Пациентки были разделены на 4 группы по 3-6 человек в каждой группе, и каждой пациенке в группах соответственно вводили 0,5 мл, 1,0 мл, 2,0 мл и 3,0 мл митоксантрона гидрохлорида для инъекций в концентрации 5 мг/мл. В одну грудь каждого субъекта вводили 2 мКи меченого нуклидом коллоида серы в молочную железу вокруг опухоли за 12-24 часов до операции в отделении медицинской радиологии, и были получены данные визуализации для определения положения и количества SLNs. В другую молочную железу каждого субъекта вводили инъекцию гидрохлорида митоксантрона, и каждый субъект получал только одну дозу лекарственного препарата, проходящего клиническое испытание. Наблюдали за безопасностью лекарственного препарата, проходящего клиническое испытание, изучали оптимальную дозу и способ применения исследуемого препарата, одновременно исследовали эффективность исследуемого препарата.

Лекарственный препарат, проходящий клиническое испытание: инъекцию митоксантрона гидрохлорида для лимфатического трассирования вводили в железы вокруг опухоли с помощью кожной тест-иглы во время операции и места введения были такими же, как и у контрастного препарата, и общая доза составляла 0,5-3,0 мл. Контрастный препарат: каждой участнице исследования вводили 2 мКи меченого нуклидом коллоида серы в железы вокруг опухоли за 12-24 часов до операции в отделении медицинской радиологии.

В исследовании планировалось отобрать от 9 до 18 женщин в возрасте от 18 до 70 лет с раком молочной железы. На самом деле, 10 участниц исследования завершили испытание.

Оценка эффективности

Основной конечный показатель

Сравнение показателей эффективности трассирования SLN лекарственным препаратом, проходящим клиническое испытание, и контрастным препаратом

Показатель эффективности трассирования SLN=общее количество пациентов с успешным трассированием SLN/общее количество пациентов, участвующих в исследовании × 100%

Успешное трассирование SLN с помощью исследуемого препарата означает, что SLNs, трассированные с помощью исследуемого препарата, представляют собой окрашенные подмышечные лимфатические узлы и лимфатические узлы, на которые указывают окрашенные лимфатические сосуды.

Успешное трассирование SLN контрастным препаратом означает, что SLNs, распознаваемые контрастным (нуклидным) трассером, представляют собой лимфатические узлы с максимальным показанием гамма-счетчика и значением показания в 10 или более раз превышающим фоновое значение.

Вспомогательный конечный показатель

Были зарегистрированы количества SLNs, трассированные исследуемым препаратом и контрастным препаратом, количества SLNs, трассированные вместе двумя трассерами, и количества SLNs, которые не были трассированы двумя препаратами, но клинически подозреваемые.

Регистрировали патологические состояния SLNs, обнаруженные исследуемым препаратом или контрастным препаратом.

Регистрировали местное повреждение, вызванное исследуемым препаратом или контрастным препаратом.

Оценки безопасности и переносимости

Все субъекты, использующие исследуемый препарат, были включены в оценку показателей безопасности, переносимости и ожидаемого результата. Оценка безопасности клинического исследования проводилась не раньше 21±3 дня после завершения операции. Оценка проводилась путем сравнения результатов медицинского обследования в течение двух недель перед проверкой результатов послеоперационных лабораторных анализов в соответствии с основными критериями оценки нежелательных явлений, т.е. Общими терминологическими критериями для оценки нежелательных явлений Национального института рака, версия 4.0.3 (Criteria for Adverse Events, CTCAE 4.0.3). Взаимосвязь между степенями нежелательных явлений и исследуемым препаратом оценивалась для определения максимально переносимой дозы и диапазона безопасных доз.

2. Результаты эффективности клинического испытания

Исследование показывает, что показатель эффективности трассирования SLN инъекцией митоксантрона гидрохлорида для лимфатического трассирования выше, и нет существенной разницы между инъекцией митоксантрона гидрохлорида и контрастным меченным нуклидом коллоидом серы. Показатели эффективности трассирования SLN контрастным препаратом и группами исследуемого препарата в дозе 0,5 мл или 2,0 мл все составляют 100%. Однако показатели эффективности трассирования SLN с помощью контрастного препарата и группой исследуемого препарата в дозе 1,0 мл составляют 75%, а при анализе субъектов, участвующих в исследовании, у 1 субъекта в данной дозовой группе обнаружен макрометастаз рака. Причина может заключаться в том, что поражение достаточно велико, чтобы блокировать лимфатические сосуды, и лимфатические узлы, обнаруженные как исследуемым препаратом, так и контрастным препаратом, не трассируются, вызывая неудачное трассирование у субъекта. Нет существенной разницы между количеством SLNs, трассированных исследуемым препаратом при каждой дозе, и количеством SLNs, трассированных контрастным препаратом, а также количеством SLNs, трассированных вместе двумя трассерами. Нет существенной разницы между количеством SLNs, которые не трассируются исследуемым препаратом при каждой дозе, но клинически ожидаемы, и количеством SLNs, которые не трассируются контрастным препаратом, но клинически ожидаемы. Было указано, что по сравнению с нуклидным методом исследуемый препарат оказывает благотворное действие на трассирование лимфатических узлов. Патологические результаты SLNs, обнаруженные исследуемым препаратом и контрастным препаратом, показывают, что раковых метастазов в SLNs, трассированных исследуемым препаратом и контрастным препаратом, не обнаружено.

Пример 11. Случай применения инъекции митоксантрона гидрохлорида для лимфатического трассирования у пациентки с раком левой молочной железы

Предоперационный диагноз: рак правой молочной железы (cT1N0M0)

Послеоперационный диагноз: рак правой молочной железы (sT1N0M0)

Название операции: тотальная мастэктомия правой молочной железы+маркировка SLN+дренирование экссудата х 2

Интраоперационные наблюдения: при осмотре правой подмышечной впадины видны шесть набухших лимфатических узлов, среди которых лимфатические узлы А, В, С и D окрашены в синий цвет и содержат нуклиды, а лимфатические узлы Е и F не окрашены в синий цвет и не содержат нуклидов.

Оперативные процедуры заключаются в следующем. Больного уложили на спину с отведением правой верхней конечности. После того, как общая анестезия подействовала, вводили по 1,5 мл препарата в концентрации 2 мл: 10 мг в 4 зоны вокруг опухоли и операционное поле обычным способом дезинфицировали и обкладывали простынями. Результаты предоперационной биопсии пациентки показали четкий диагноз рака правой молочной железы. На правой грудной стенке формировали поперечный разрез длиной около 10,0 см, кожный лоскут отслаивали до подключичной области вниз до реберной дуги, латерально до задней подмышечной линии и медиально до средней линии. Вся правая грудь, окружающая жировая ткань и большая грудная фасция были разрезаны и удалены. При обследовании правой подмышечной впадины были видны шесть набухших лимфатических узлов, среди которых лимфатические узлы А, В, С и D были окрашены в синий цвет и содержали нуклиды, а лимфатические узлы Е и F не были окрашены в синий цвет и не содержали нуклидов. Лимфатические узлы были подвергнуты исследованию патологии замороженных срезов и через 30 минут был получен патологический отчет (SLNs правой молочной железы А, В, С, D, Е и F), который показал, что в замороженных срезах лимфатических узлов не было обнаружено раковых метастазов. Рану промывали, при отсутствии активного кровотечения проверяли количество инструментов и марлевых салфеток, устанавливали по одному дренажу соответственно в подмышечную впадину и грудную стенку, на разрез накладывали шов. Операция прошла гладко, анестезия была соответствующая, после операции больную переводили в палату.

Результаты патоморфологического исследования: (правые SLNs молочной железы А, В, С, D, Е и F) в замороженных срезах лимфатических узлов раковых метастазов не обнаружено.

Всего выявляют 6 лимфатических узлов, среди которых окрашиваются 4 лимфатических узла.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лечении или диагностике рака молочной железы. Предложен способ лимфатического трассирования, используемый при заболевании, связанном с мастэктомией, включающий введение лимфатического трассера, содержащего митоксантрона гидрохлорид, хлорид натрия, уксусную кислоту, ацетат натрия и антиоксидант, представляющий собой пиросульфит натрия или динатрия эдетат, причем лимфатический трассер представляет собой инъекцию, которую вводят подкожно или субсерозно в несколько месст, а места инъекций находятся на молочной железе и/или в тканях и органах вокруг молочной железы. При этом трассер содержит указанные компоненты при следующем соотношении: содержание митоксантрона гидрохлорида составляет 2-10 мг/мл; содержание хлорида натрия составляет 3-18 мг/мл; содержание уксусной кислоты составляет 0,15-1 мг/мл; содержание ацетата натрия составляет 0,03-0,15 мг/мл; содержание пиросульфита натрия составляет 0,05-0,3 мг/мл; содержание динатрия эдетата составляет 0,05-0,3 мг/мл. Концентрация митоксантрона гидрохлорида во вводимом путем инъекции объеме составляет 2-10 мг/мл, а объем инъекции составляет 0,1-3,0 мл. После местного введения препарата не наблюдается никаких местных или системных токсических и побочных эффектов, препарат обладает хорошей переносимостью, эффективностью и безопасностью. 3 з.п. ф-лы, 8 табл., 11 пр.

1. Способ лимфатического трассирования, используемый при заболевании, связанном с мастэктомией, включающий: введение лимфатического трассера, содержащего митоксантрона гидрохлорид, хлорид натрия, уксусную кислоту, ацетат натрия и антиоксидант, представляющий собой пиросульфит натрия или динатрия эдетат;

причем содержание митоксантрона гидрохлорида составляет 2-10 мг/мл;

содержание хлорида натрия составляет 3-18 мг/мл;

содержание уксусной кислоты составляет 0,15-1 мг/мл;

содержание ацетата натрия составляет 0,03-0,15 мг/мл;

содержание пиросульфита натрия составляет 0,05-0,3 мг/мл;

содержание динатрия эдетата составляет 0,05-0,3 мг/мл;

лимфатический трассер представляет собой инъекцию;

инъекцию вводят подкожно или субсерозно;

инъекцию вводят местно;

места инъекций находятся на молочной железе и/или в тканях и органах вокруг молочной железы;

инъекцию вводят в несколько мест;

концентрация митоксантрона гидрохлорида во вводимом путем инъекции объеме составляет 2-10 мг/мл; и

объем инъекции составляет 0,1-3,0 мл.

2. Способ по п. 1, в котором заболевание, связанное с мастэктомией, выбрано из опухоли молочной железы, кисты молочной железы, фибромы молочной железы и туберкулеза молочной железы; предпочтительно опухоль молочной железы включает доброкачественную опухоль молочной железы и злокачественную опухоль молочной железы; более предпочтительно злокачественная опухоль молочной железы представляет собой рак молочной железы, и лимфатический трассер используется для трассирования лимфы при раке молочной железы.

3. Способ по п. 1, в котором по меньшей мере вводят путем инъекции 0,1 мл митоксантрона гидрохлорида в концентрации 5 мг/мл; и максимально вводят путем инъекции не более 3,0 мл митоксантрона гидрохлорида в концентрации 5 мг/мл; или

если лимфатический трассер содержит митоксантрона гидрохлорид, хлорид натрия, уксусную кислоту, ацетат натрия и пиросульфит натрия, то лимфатический трассер дополнительно содержит сульфат натрия; содержание сульфата натрия составляет 0,05-0,6 мг/мл, предпочтительно 0,15-0,45 мг/мл, и более предпочтительно 0,15 мг/мл, 0,3 мг/мл или 0,45 мг/мл;

значение рН инъекции находится в диапазоне 2,8-4,3;

содержание митоксантрона гидрохлорида составляет 2 мг/мл, 5 мг/мл или 10 мг/мл;

содержание хлорида натрия составляет 4-16 мг/мл и более предпочтительно 4 мг/мл, 8 мг/мл или 16 мг/мл;

содержание уксусной кислоты составляет 0,23-0,92 мг/мл и более предпочтительно 0,23 мг/мл, 0,46 мг/мл или 0,92 мг/мл;

содержание ацетата натрия составляет 0,05-0,1 мг/мл и более предпочтительно 0,05 мг/мл или 0,1 мг/мл; и

содержание пиросульфита натрия составляет 0,8-0,12 мг/мл.

4. Способ по пп. 1-3, в котором инъекцию готовят следующим способом:

(1) взвешивание предписанных количеств уксусной кислоты, ацетата натрия, хлорида натрия и динатрия эдетата, или взвешивание предписанных количеств уксусной кислоты, ацетата натрия, хлорида натрия и пиросульфита натрия, или взвешивание предписанных количеств уксусной кислоты, ацетата натрия, хлорида натрия, пиросульфита натрия и сульфата натрия, смешивание их с растворителем и растворение их с получением смешанного раствора вспомогательных веществ, предпочтительно растворитель представляет собой воду для инъекций, предпочтительно вспомогательные вещества растворяют при перемешивании; и

(2) смешивание смешанного раствора вспомогательных веществ, полученного на стадии (1), с предписанными количествами митоксантрона гидрохлорида, предпочтительно митоксантрона гидрохлорид растворяется при перемешивании, предпочтительно митоксантрона гидрохлорид растворяют при перемешивании в течение 10-30 мин;

предпочтительно способ дополнительно включает следующую стадию: (3) фильтрование, предпочтительно фильтрование с использованием фильтрующих мембран 0,45 мкм и/или 0,22 мкм;

предпочтительно способ дополнительно включает следующую стадию: (4) разлив во флаконы и заполнение газообразным азотом, предпочтительно стерилизацию проводят при 121°C в течение 15 мин после заполнения газообразным азотом; и

предпочтительно значение рН инъекции находится в диапазоне 2,8-4,3.