СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЖЕНСКОГО БЕСПЛОДИЯ, ЗАКЛЮЧАЮЩИЙСЯ В СТИМУЛЯЦИИ РЕГЕНЕРАЦИИ ЭНДОМЕТРИЯ ПУТЕМ ВНУТРИМАТОЧНОГО ВВЕДЕНИЯ ТРОМБОЦИТАРНОЙ АУТОПЛАЗМЫ, ОБОГАЩЕННОЙ ТРОМБОЦИТАРНЫМИ ФАКТОРАМИ РОСТА Российский патент 2024 года по МПК A61B17/42 A61K35/16 A61M37/00 A61P15/08 

Способ лечения женского бесплодия, заключающийся в стимуляции регенерации эндометрия путем внутриматочного введения тромбоцитарной аутоплазмы, обогащенной тромбоцитарными факторами роста, относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначен для лечения пациенток с бесплодием, связанным с патологией эндометрия.

Известно большое количество способов лечения бесплодия, ассоциированного с заболеваниями эндометрия и яичников, является достаточно частой патологией у женщин репродуктивного возраста [1, 2]. Несмотря на существенный прогресс в области вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), установлено, что перенос эмбриона в 70-80% случаев оказывается неудачным, эмбрионы не способны имплантироваться [3-5]. Кроме состояния эмбриона и иммунологических факторов нарушения имплантации также в значительной степени обусловлены состоянием эндометрия [2, 6].

В качестве одного из перспективных методов лечения данных состояний в последние годы рассматривается применение тромбоцитарной аутоплазмы (ТАП), которая готовиться из цельной крови пациента и дополнительно обогащается тромбоцитами, за счет чего насыщается факторами роста с высоким противовоспалительным и митогенным потенциалом [5, 7, 8].

Известно, что уровень секреции факторов роста у пациенток с бесплодием ниже, чем у женщин без нарушений фертильности [9]. Это позволило предположить возможность положительного эффекта применения ТАП у пациенток с бесплодием и гипоплазией эндометрия. Известно, что для успешной имплантации человеческого эмбриона толщина эндометрия должна составлять не менее 7 мм [5, 8]. Следовательно, наличие тонкого эндометрия при проведении ВРТ может привести к отмене цикла и незапланированной криоконсервации эмбриона. Установлено, что ОТП повышает активность генов, отвечающих за рецептивность и пролиферацию эндометрия [10]. Сообщают, что осуществление этой процедуры перед переносом эмбриона может значительно увеличить скорость имплантации [11]. По мнению Nazari L. et al. (2016), насыщенная цитокинами и факторами роста ОТП может стимулировать пролиферацию и регенерацию эндометрия у женщин с нарушениями имплантации [12].

Механизмы, путем которых ТАП влияет на возникновение беременности до настоящего времени не изучены. На сегодняшний день можно сделан ряд предположений о том, что ТАП компенсирует недостаток фактора роста фибробластов-1 (FGF-1), сниженных у пациенток с нарушениями имплантации [12], большинство факторов роста, содержащихся в ТАП, имеют соответствующие рецепторы на ткани эндометрия, что дает им возможность воздействовать на ремоделирование и рецептивность эндометрия и, следовательно, имплантацию эмбриона [13, 14]; факторы роста сосудов, содержащиеся в ТАП способствуют васкуляризации децидуальной оболочки, активации ангиогенеза плаценты и пролиферации эндометрия [15].

Из уровня техники известен способ повышения эффективности вспомогательных репродуктивных технологий у пациенток с повторными неэффективными попытками имплантации (Патент RU 2669726 С1, опубл. 15.10.2018 Бюл. №29 МПК А61В 17/42, А61К 31/565, А61К 31/57, А61Р 15/08), заключающийся внутриматочном введении аутологичной обогащенной тромбоцитами плазмы крови, при подготовки эндометрия пациентки по стандартизованному протоколу заместительной гормональной терапии на фоне мониторинга роста эндометрия, на 10/11 день цикла после ультразвуковой оценки толщины эндометрия проводят внутриматочную перфузию 1,0-1,5 мл аутологичной плазмы крови, обогащенной тромбоцитами, с помощью инсеминационного катетера и при достижении необходимой толщины эндометрия производится перенос жизнеспособных эмбрионов.

Также известен, способ внутриматочной инфузии аутологичной плазмы женщины для повышения эффективности программ вспомогательных репродуктивных технологий (Патент RU 276215 С1, опубл. 16.12.2021 Бюл. №35 МПК А61К 35/60; А61М 25/00; А61Р 15/08), заключающийся в том, что при достижении толщины эндометрия 7 мм и более назначают препарат прогестерона, дважды, при этом в первый и третий день приема препарата прогестерона вводят внутриматочно катетером для инсеминации в полость матки, не достигая маточного дна, приготовленную из цельной венозной крови женщины плазму, обогащенную тромбоцитами в объеме 0,8-1 мл. Недостатками данных способов являются:

- недостаточный объем ведения тромбоцитарной аутоплазмы для орошения всей поверхности эндометрия, объем внутренней маточной полости в норме составляет 5-6 см³, введение 1 мл аутоплазмы не позволяет получить выраженный клинический эффект;

- применение катетора для инсеменации для введения тромбоцитарной плазмы, так как катетор имеет небольшой объем около 0,1 мл, что увеличивает время процедуры.

При разработке предлагаемого способа была поставлена цель - повысить эффективность применения тромбоцитарной аутоплазмы при внутриматочном введении и сократить время манипуляции.

Технический результат заключается в увеличении толщины эндометрия, а также повышает частоту наступления беременности.

Технический результат достигается за счет того, что в полость матки вводится тромбоцитарная аутоплазма при помощи зонда для пайпель-биопсии в объеме 3 мл на 9 день менструального цикла, увеличение объема вводимой плазмы повышает концентрацию факторов роста на единицу площади эндометрия по сравнению с прототипами, что стимулирует активную регенерацию эндометрия.

Предложенный способ лечения выполняется следующим образом. Предварительно перед манипуляцией получают кровь из локтевой вены пациентки в объеме 10 мл, помещают в пробирку для центрифугирования, содержащие 20 а.е /мл антикоагулянта (эноксапарин). Центрифугирование осуществляют при 800-900G, на протяжении 10 минут. После центрифугирования из пробирки набирают тромбоцитарную аутоплазму в зонд для пайпель-биопсии. Введение тромбоцитарной аутоплазмы в полость матки осуществляют на гинекологическом кресле в амбулаторных условиях с помощью зонда для пайпель-биопсии на 9 день менструального цикла. Больную укладывают в гинекологическое кресло. Обрабатывают операционное поле раствором антисептика. С помощью зеркала Куско обнажают шейку матки. При помощи зонда для пайпель-биопсии осуществляется орошение слизистой оболочки полости матки аутоплазмой, содержащей тромбоцитарные факторы роста, в количестве 3 мл.

Предложенный способ лечения женского бесплодия, заключающийся в регенерации эндометрия путем внутриматочного введения тромбоцитарной аутоплазмы, обогащенной тромбоцитарными факторами роста способствует улучшению показателей ультразвукового исследования (УЗИ) - увеличению толщины эндометрия, а также повышает частоту наступления беременности.

Данные результаты подтверждает сравнительное исследование клинической эффективности и безопасности предложенного способа у 95 пациенток с гипоплазией эндометрия и бесплодием, которые были рандомизированы в 2 группы:

группа 1 (основная) - 46 пациентки с гипоплазией эндометрия и бесплодием, которым производилось внутриматочное введение ТАП в дополнение к основной терапии;

группа 2 (сравнения) - 49 пациенток с гипоплазией эндометрия и бесплодием, которым ТАП не вводилась в полость матки.

Длительность наблюдения составила 1 год после лечения. В ходе исследования выполнялось комплексное обследование и лечение пациенток, а также оценка исходов лечения с анализом частоты наступления беременности. Сравнивали частоту наступления беременности в зависимости от подхода к ведению пациенток. В ходе обследования оценивали результаты УЗИ органов малого таза (толщину эндометрия на 9-11 день менструального цикла).

Безопасность проводимого лечения оценивали по наличию и выраженности побочных эффектов и отклонений результатов УЗИ.

Статистический анализ результатов исследования был выполнен с помощью пакетов программного обеспечения Statsoft. STATISTICA 10 и Microsoft Excel 2016.

Изобретение поясняется табл. 1, 2.

В табл.1 представлена динамика показателя толщины эндометрия, определенного с помощью УЗИ, у пациенток с гипоплазией эндометрия и бесплодием. До начала лечения величины этого показателя у пациенток обеих групп достоверно не различались, однако после проведенного лечения наблюдалось значительные изменения толщины эндометрия (р<0,05) относительно исходных значений, при этом в группе женщин, которым осуществлялось внутриматочное введение ТАП, величина данного параметра была достоверно выше (р<0,05), чем в группе сравнения.

В табл.2 представлена частота наступления беременности у пациенток с гипоплазией эндометрия и бесплодием в течение года после внутриматочного введения/отсутствия введения ТАП на 9 день менструального цикла на протяжении 3 месяцев.

В группе женщин, которым осуществлялось внутриматочное введение ТАП, частота беременности составила 55,3% (25 случаев из 46), значение этого показателя было достоверно выше (р=0,033) соответствующей частоты наступления беременности в группе 2 - 30,6% (15 случаев из 49).

Анализ безопасности использованных методов лечения показал, что ни у кого из пациенток не отмечалось нежелательных явлений, связанных с внутриматочным введением ТАП, в том числе отклонений от референсных значений уровней лабораторных показателей анализов крови (общего и биохимического) и анализа мочи.

Предлагаемый способ лечения женского бесплодия, заключающийся в стимуляции регенерации эндометрия путем внутриматочного введения тромбоцитарной аутоплазмы, обогащенной тромбоцитарными факторами роста имеет ряд преимуществ по сравнению с прототипами:

1. Ведения большего объема тромбоцитарной аутоплазмы для орошения всей поверхности эндометрия, что позволяет получить выраженный клинический эффект;

2. Применение зонда для пайпель-биопсии позволяет вводить объем аутоплазмы 0,7 мл одномоментно, что сокращает время манипуляции.

Список использованных источников:

1. Seckin S., Ramadan Н., Mouanness М., Kohansieh М., Merhi Z. Ovarian response to intraovarian platelet-rich plasma (PRP) administration: hypotheses and potential mechanisms of action. J Assist Reprod Genet. 2022; 39(1): 37-61. doi: 10.1007/s10815-021-02385-w.

2. Herlihy N.S., Seli E. The use of intraovarian injection of autologous platelet rich plasma (PRP) in patients with poor ovarian response and premature ovarian insufficiency. Curr Opin Obstet Gynecol. 2022; 34(3):133-137. doi: 10.1097/GCO.0000000000000784.

3. Tremellen K., Pacella-Ince L. An audit of clinical outcomes following ovarian administration of platelet-rich plasma (PRP) in women with severe diminished ovarian reserve. Aust N Z J Obstet Gynaecol. 2022; 62(5):.767-772. doi: 10.111 l/ajo.13578.

4. Ledee N., Prat-Ellenberg L., Petitbarat M., Chevrier L., Simon С., Irani Е.Е., Vitoux D., Bensussan A., Chaouat G. Impact of prednisone in patients with repeated embryo implantation failures: beneficial or deleterious? J Reprod Immunol. 2018; 127:11-15. doi:10.1016/j.jri.2018.03.003.

5. Pacu I., Zygouropoulos N., Dimitriu M., Rosu G., Ionescu С.A. Use of platelet-rich plasma in the treatment of infertility in poor responders in assisted human reproduction procedures. Exp Ther Med. 2021; 22(6): 1412. doi: 10.3892/etm.2021.10848.

6. Hajipour H., Nejabati H.R., Latifi Z., Hamdi K., Bahrami-asl Z., Fattahi A., Nouri M. Lymphocytes immunotherapy for preserving pregnancy: mechanisms and challenges. Am J Reprod Immunol. 2018; 80: el2853. doi:10.111 l/aji.12853.

7. Amable P.R., Carias R.B.V., Teixeira M.V.T., da Cruz Pacheco I., Do Amaral R.J.F.C., Granjeiro J.M., Borojevic R. Platelet-rich plasma preparation for regenerative medicine: optimization and quantification of cytokines and growth factors. Stem Cell Res Ther. 2013; 4(3): 67. doi:10.1186/scrt218.

8. Opneja A., Kapoor S., Stavrou E.X. Contribution of platelets, the coagulation and fibrinolytic systems to cutaneous wound healing. ThrombRes. 2019; 179: 56-63. doi:10.1016/j.thromres.2019.05.001.

9. Sak M., Gul T., Evsen M., Soydinc H., Sak S., Ozler A., Alabalik U. Fibroblast growth factor-1 expression in the endometrium of patients with repeated implantation failure after in vitro fertilization. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2013; 17(3): 398-402.

10. Marini M.G., Perrini C., Esposti P., Corradetti B., Bizzaro D., Riccaboni P., Fantinato E., Urbani G., Gelati G., Cremonesi F. Effects of platelet-rich plasma in a model of bovine endometrial inflammation in vitro. Reprod Biol Endocrinol. 2016; 14(1): 58. doir10.1186/s12958- 016-0195-4.

11. Farimani M., Heshmati S., Poorolajal J., Bahmanzadeh M. A report on three live births in women with poor ovarian response following intra-ovarian injection of platelet-rich plasma (PRP). Mol Biol Rep. 2019; 46(2): 1611-1616. doi:10.1007/sl 1033-019-04609-w.

12. Nazari L., Salehpour S., Hoseini S., Zadehmodarres S. Effects of autologous platelet-rich plasma on implantation and pregnancy in repeated implantation failure: A pilot study. Int J Reprod BioMed. 2016; 14(10): 625-628.

13. Anitua E., de la Fuente M., Ferrando M., Quintana F., Larreategui Z., Matorras R., Orive G. Biological effects of plasma rich in growth factors (PRGF) on human endometrial fibroblasts. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2016; 206:125-130. doi.T0.1016/j.ejogrb.2016.09.024.

14. Yu H., Gao S., Tang H., Chen H., Deng Z., Yang L., Liu Z., Tang Q., Tang T. Growth hormone intrauterine perfusion combined with replacement cycle in the treatment of non-response thin endometrium: report of 5 cases. Int J Clin Exp Med. 2016; 9(6): 11982-11989.

15. Furukawa Y., Kawano Y., Fukuda J., Matsumoto H., Narahara H. The production of vascular endothelial growth factor and metalloproteinase via protease-activated receptor in human endometrial stromal cells. Fertil Steril. 2009; 91(2): 535-541. doi:10.1016/j.fertnstert.2007.11.080.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии. Осуществляют стимуляцию регенерации эндометрия путем внутриматочного введения тромбоцитарной аутоплазмы, обогащенной тромбоцитарными факторами роста. При этом аутоплазму в полость матки вводят на гинекологическом кресле в амбулаторных условиях с помощью зонда для пайпель-биопсии на 9 день менструального цикла в количестве 3 мл. Способ позволяет увеличить толщину эндометрия, а также повысить частоту наступления беременности. 2 табл.

Способ лечения женского бесплодия, заключающийся в стимуляции регенерации эндометрия путем внутриматочного введения тромбоцитарной аутоплазмы, обогащенной тромбоцитарными факторами роста, заключающийся в том, что аутоплазму в полость матки вводят на гинекологическом кресле в амбулаторных условиях с помощью зонда для пайпель-биопсии на 9 день менструального цикла в количестве 3 мл.