Средство для ингибирования штаммов вируса SARS-CoV-2 на основе (+)-усниновой кислоты Российский патент 2025 года по МПК A61K31/427 A61K31/496 C07D417/14 A61P31/14 

Изобретение относится к новым средствам, способным ингибировать широкий спектр штаммов вируса SARS-CoV-2, и может быть использовано в молекулярной биологии, биохимии, медицине и фармакологии. Раскрывается применение производных (+)-усниновой кислоты, соединений Ia-с, следующей структуры в качестве средства противовирусного действия при SARS-CoV-2 инфекции. Изобретение обеспечивает эффективное снижение титра вируса в клеточной культуре.

Соединения Ia-с могут использоваться в качестве ингибиторов репродукции вируса SARS-CoV-2 и могут быть применены в медицине, вирусологии и фармакологии.

В мае 2023 года ВОЗ объявила об окончании пандемии COVID-19 вызванной новым короновирусом SARS-Cov 2. Однако это не означает, что угроза заражения этим вирусом исчезла, как не исчезла и вероятность тяжелого течения этого заболевания, в том числе с летальным исходом [Wise, J. Covid-19: WHO declares end of global health emergency. BMJ 2023, 368, p 1041]. Вирус продолжает циркулировать в человеческой популяции и его новые мутации, устойчивые к существующим вакцинам, теоретически способны привести к новому всплеску заболеваемости. Росту заболеваемости также способствует снижение вакцинации от SARS-Cov 2 на фоне улучшения эпидемиологической ситуации в мире и возвращения к привычному ритму жизни в большинстве стран. Кроме этого, имеющиеся в настоящее время штаммы вируса могут быть опасны для пожилых людей и людей с различными коморбидными состояниями, повышая смертность среди населения и увеличивая нагрузку на систему здравоохранения [Sahoo, В.М.; Ravi Kumar, B.V. V.; Sruti, J.; Mahapatra, M.K.; Banik, B.K.; Borah, P. Drug Repurposing Strategy (DRS): Emerging Approach to Identify Potential Therapeutics for Treatment of Novel Coronavirus Infection. Front. Mol. Biosci. 2021, 8, 1-11]. Все это делает важной разработку эффективной фармакотерапии, способной эффективно снижать тяжесть течения болезни и уменьшать частоту госпитализаций.

В качестве основных направлений для разработки новых противовирусных лекарственных средств для терапии COVID-19 обычно рассматриваются следующие мишени: хеликазы, трансмембранная сериновая протеаза 2, катепсин L, циклин G-ассоциированная киназа, адаптор-ассоциированная киназа 1, двухполюсный канал, факторы вирусной вирулентности, 3-химотрипсиноподобная протеаза, подавление избыточного воспалительного ответа, ингибирование вирусной мембраны, нуклеокапсида, оболочки и вспомогательных белков, ингибирование эндоцитоза [DOI: Ayele AG, Enyew EF, Kifle ZD. Roles of existing drug and drug targets for COVID-19 management. Metabol Open. 2021 Sep; 11:100103]. Однако лидером среди них является основная вирусная протеаза (MPro или 3CLpro), которая необходима для репликации вируса [Gil С, Ginex Т, Maestro I, Nozal V, Barrado-Gil L, Cuesta-Geijo MÁ, Urquiza J, Ramírez D, Alonso C, Campillo NE, Martinez A. COVID-19: Drug Targets and Potential Treatments. J Med Chem. 2020 Nov 12;63(21): 12359-12386]. Именно таким механизмом действия обладают препараты, получившие одобрение для фармакотерапии COVID-19. Первый - это Nirmatrelvir входящий совместно с ritonavir в состав Paxlovid от компании Pfizer и одобренный FDA в 2023 году для лечения инфекций COVID-19 легкой и средней степени тяжести у взрослых с высоким риском развития тяжелой формы заболевания [Harris, Е. FDA Grants Full Approval to Paxlovid, COVID-19 Antiviral Treatment. JAMA 2023, 2023]. Второй - это Энситрелвир (Ensitrelvir), торговое наименование Xocova, разработанный компанией Hokkaido University и Shionogi & Co., Ltd проходящий 3 тью фазу клинических испытаний, но получивший экстренное одобрение регулятора в Японии для клинического применения [Unoh, Y.; Uehara, S.; Nakahara, K.; Nobori, H.; Yamatsu, Y.; Yamamoto, S.; Maruyama, Y.; Taoda, Y.; Kasamatsu, K.; Suto, Т.; et al. Discovery of S-217622, a Noncovalent Oral SARS-CoV-2 3CL Protease Inhibitor Clinical Candidate for Treating COVID-19. J. Med. Chem. 2022, 65, 6499-6512]. В тестах in vitro и in vivo оба этих средства проявляли аналогичное противовирусное действие.

Одним из перспективных направлений медицинской химии для синтеза новых агентов с противовирусной активностью является использование природных соединений в качестве исходных платформ, чему в последнее время уделяется особое внимание [Merarchi, М.; Dudha, N.; Das, B.C.; Garg, M. Natural products and phytochemicals as potential anti-SARS-CoV-2 drugs. Phyther. Res. 2021, 35, 5384-5396].

Усниновая кислота является вторичным метаболитом лишайников родов Usnea, Cladonia, Alectoria и многих других. Она обладает широким спектром биологической активности: противомикробной, противоопухолевой, противовоспалительной и противовирусной [Macedo, D.C.S.; Almeida, F.J.F.; Wanderley, M.S.O.; Ferraz, M.S.; Santos, N.P.S.; López, A.M.Q.; Santos-Magalhãaes, N.S.; Lira-Nogueira, M.C.B. Usnic acid: from an ancient lichen derivative to promising biological and nanotechnology applications. Phytochem. Rev. 2021, 20, 609-630]. Ранее было показано, что (+) и (-)-усниновые кислоты проявляют активность в отношении вируса Эпштейна-Бара и полиомавируса крыс [Campanella, L.; Delfini, М.; Ercole, P.; Iacoangeli, A.; Risuleo, G. Molecular characterization and action of usnic acid: a drug that inhibits proliferation of mouse polyomavirus in vitro and whose main target is RNA transcription. Biochimie 2002, 84, 329-334]. В серии работ было выявлено, что оба энантиомера усниновой кислоты проявляют активность в отношении вируса гриппа H1N1, а их химическая модификация способна приводить к веществам с более выраженными противогриппозными свойствами [Sokolov, D.N.; Zarubaev, V.V.; Shtro, А.А.; Polovinka, M.P.; Luzina, O.A.; Komarova, N.I.; Salakhutdinov, N.F.; Kiselev, O.I. Anti-viral activity of (-)- and (+)-usnic acids and their derivatives against influenza virus A(H1N1)2009. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2012, 22, 7060-706]. Недавно проведенные исследования in silico демонстрируют потенциальную возможность (+)-усниновой кислоты связываться с активным сайтом протеазы 3CLpro а также с рецептор-связывающим доменом (RBD) поверхностного гликопротеина S вируса SARS-CoV-2 [Prateeksha, G.; Rana, T.S.; Asthana, A.K.; Singh, B.N.; Barik, S.K. Screening of cryptogamic secondary metabolites as putative inhibitors of SARS-CoV-2 main protease and ribosomal binding domain of spike glycoprotein by molecular docking and molecular dynamics approaches. J. Mol. Struct. 2021, 1240, 130506]. В другой работе, было показано, что (+)-усниновая кислота способна связываться с трансмембрановой сериновой протеазой 2 (TMPRSS2) [Coban, М.А.; Morrison, J.; Maharjan, S.; Hernandez Medina, D.H.; Li, W.; Zhang, Y.S.; Freeman, W.D.; Radisky, E.S.; Le Roch, K.G.; Weisend, С.М.; et al. Attacking COVID-19 Progression Using Multi-Drug Therapy for Synergetic Target Engagement. Biomolecules 2021, 11, 787]. Нами ранее показано, что (+)-усниновая кислота может проявлять ингибирующие свойства в отношении трех штаммов вирусов SARS-CoV-2 (Ухань, Дельта и Омикрон В.1.1.529) с показателями ингибирующей активности IC₅₀ 10.5, 20.9, 3.7 мкМ и индексами селективности 13, 7 и 39 соответственно [A.S. Filimonov, O.I. Yarovaya, A.V. Zaykovskaya, N.B. Rudometova, D.N. Shcherbakov, V.Yu. Chirkova, D.S. Baev, S.S. Borisevich, O.A. Luzina, O.V. Pyankov, R.A. Maksyutov, N.F. Salakhutdinov (+)-Usnic Acid and Its Derivatives as Inhibitors of a Wide Spectrum of SARS-CoV-2 Viruses. Viruses 2022, 14(10), 2154]. В тоже время исходная усниновая кислота обладает значительной токсичностью, как в отношении исследуемых клеток, так и гепатотоксичностью у живых организмах. Таким образом, наиболее близким к заявляемым соединениям прототипом можно считать природную (+)-усниновую кислоту формулы II

Недостатком известного соединения являются невысокая противовирусная активность и относительно высокая цитотоксичность.

Техническим результатом изобретения является выявление новых эффективных агентов, обладающих широким спектром противовирусной активности в отношении различных штаммов вирусов SARS-CoV-2.

Технический результат достигается применением новых производных (+)-усниновой кислоты формулы Ia-с

у которых выявлена биологическая активность, заключающаяся в их способности ингибировать репродукцию различных штаммов вируса SARS-CoV-2.

Соединения общей формулы I, после проведения углубленных фармакологических исследований, могут использоваться, как в чистом виде, так и в качестве компонента новых низкотоксичных высокоэффективных против вирусов SARS-CoV-2 лекарственных форм.

Синтез соединений проводили по схеме, представленной на фиг.1. На первой стадии из (+)-усниновой кислоты II было получено бромпроизводное усниновой кислоты III путем реакции с бромом в диоксане. Бромпроизводное усниновой кислоты III было выделено с выходом 70% после колоночной хроматографии. Тиосемикарбазоны IV были синтезированы по реакции соответствующих альдегидов с тиосемикарбазидом в этаноле. Продукты IV были выделены с выходами 58-97%. На заключительной стадии проводилась реакция между бромусниновой кислотой III и тиосемикарбазоном IV в метаноле, в результате которой были выделены путем высаживания соединения Ia-с с выходами 75-79%.

Для анализа ингибирующей активности препаратов мы использовали шесть штаммов коронавируса SARS-CoV-2: был использован прототипный вариант Ухань (генетическая линия В, не является VOC), вирусы этой генетической линии циркулировали в начале пандемии, дельта-вариант (который был широко распространен на территории РФ в 2021-2022 г. ) и четыре штамма, относящиеся к Омикрон-варианту. Впервые Омикрон-вариант был выявлен в ноябре 2021 года в Южной Африке и быстро стал доминирующим вариантом в мире. На сегодняшний день он полностью вытеснил все остальные варианты коронавируса. Быстрое накопление мутаций в разных комбинациях способствовало появлению большого числа сублиний омикрона, некоторые из которых были доминирующими в мире. В работе был использован штамм сублинии ВА.1, которая являлась первой из известных сублиний варианта омикрон. С начала 2022 года доминирующим вариантом стал ВА.5, одной из широко распространенных его сублиний является ВА.5.2. Еще одним из прямых потомков ВА.5 является линия BQ.1.1, штаммы этой генетической сублинии обладают высокой инфекционностью и способностью уклоняться от иммунного ответа. Субвариант Omicron ХВВ.1.5 является сублинией варианта ХВВ, который возник в результате рекомбинации двух сублиний ВА.2. Субвариант ХВВ содержит 14 мутаций в дополнение к тем, которые обнаружены у ВА.2. Быстрый рост числа этих субвариантов и их обширный набор пиковых мутаций напоминают ситуацию при появлении первого варианта Омикрона ВА.1.

Исследование проводили с использованием штаммов коронавируса SARS-CoV-2, депонированных в Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора: hCoV-19/Australia/VIC01/2020 (генетическая линия В, (EPI_ISL_406844)), hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021 (генетическая линия В.1.617.2 (дельта), (EPI_ISL_7338814)), hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021 (генетическая линия ВА.1 (омикрон 1), (EPI_ISL_8920444)), hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022 (генетическая линия ВА.5.2 (омикрон 5.2), (EPI_ISL_16613436)),. hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023 (субвариант омикрона BQ.1.1 (EPI_ISL_17730076)), hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023 (субвариант омикрона ХВВ.1.5 (EPI_ISL_17770464)), способных уклоняться от иммунного ответа организма-хозяина (https://ria.ru/20210204/koronavirus-1595992876.html?ysclid=1pj4kvbaai354867128).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Синтез (R)-3-Ацетил-8-(2-бромоацетил)-2,5,7-тригидрокси-4а,6-диметил-9-окса-4(4аН)-флуоренон III

Усниновую кислоту (10 гр, 29,07 ммоль) растворили в 150 мл диоксана. К полученному раствору добавили заранее приготовленный раствор брома (9,306 гр, 3 мл, 58,16 ммоль) в диоксане (150 мл), а также бромоводородную кислоту (1 мл, 48%). Полученную смесь оставили в темноте на 7 дней. После раствор упарили на ротационном испарителе. Бромусниновую кислоту III выделяли колоночной хроматографией (элюент - хлористый метилен-гексан 1:1) на силикагеле (Merk 63-200 μ).

Пример 2. Синтез (E)-2-((фуран-3-ил)метилен)гидразинкарботиоамида IVa

Тиосемикарбазид (710 мг, 7,80 ммоль) и 3-Фуранкарбоксальдегид (300 мг, 3,12 ммоль) помещали в колбу с этанолом (10 мл). Полученную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение двух часов. Затем смесь разбавляли водой до формирования осадка. Полученный осадок (тиосемикарбазон альдегида IVa) отфильтровывали и сушили на воздухе. Продукт был использован без дальнейшей очистки.

Пример 3. Синтез (E)-2-((5-Бромотиофен-2-ил)метилен)гидразин карботиоамида IVb

Тиосемикарбазид (710 мг, 7,80 ммоль) и 5-бромотиофен-2-карбоксальдегид (600 мг, 3,16 ммоль) помещали в колбу с этанолом (10 мл). Полученную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение двух часов. Затем смесь разбавляли водой до формирования осадка. Полученный осадок (тиосемикарбазон альдегида IVb) отфильтровывали и сушили на воздухе. Продукт был использован без дальнейшей очистки.

Пример 4. Синтез (E)-2-(3-((4-(4-Фторофенил)пиперазин-1-ил)метил)-4-метоксибензилиден)гидразинкарботиоамид IVc

Тиосемикарбазид (420 мг, 4,62 ммоль) и 3-((4-(4-фторофенил)пиперазин-1-ил)метил)-4-метоксибензальдегид (600 мг, 1,83 ммоль) помещали в колбу с этанолом (10 мл). Полученную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение двух часов. Затем смесь разбавляли водой до формирования осадка. Полученный осадок (тиосемикарбазон альдегида IVc) отфильтровывали и сушили на воздухе. Продукт был использован без дальнейшей очистки.

Пример 5. Синтез (2R)-4-ацетил-5,11,13-тригидрокси-2,12-диметил-10-{2-[(2Е)-2-[(фуран-3-ил)метилиден]гидразин-1-ил]-1,3-тиазол-4-ил}-8-оксатрицикло[7.4.0.0^2,7]тридека-1(9),4,6,10,12-пентаен-3-она Ia

Бромусниновую кислоту III (100 мг, 0,24 ммоль) растворяли в метаноле при 40°С. К полученному раствору добавляли тиосемикарбазон IVa (40 мг, 0,24 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение часа. Полученную смесь разбавляли водой, а выпавший осадок отфильтровывали и сушили на воздухе.

Т_разл=155-157°С. Выход: 75% Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д., J Гц): 1.71 (3Н, с, Н-15), 2.15 (3Н, с, Н-10), 2.64 (3Н, с, Н-12), 5.90 (1Н, с, Н-4), 6.75 (1Н, м, Н-21), 7.11 (1Н, с, Н-14), 7.39 (1Н, с, Н-20), 7,59 (1Н, с, Н-19), 7.63 (1Н, с, Н-17), 8.93 (1Н, ш с, NH), 10.95 (1Н, с, ОН-9), 18.79 (1Н, с, ОН-3). Спектр ЯМР ¹³С (CDCl₃, δ, м.д.): 8.30 (С-15), 27.76 (С-10), 32.06 (С-12), 59.37 (С-9b), 97.29 (С-4), 97.49 (С-6), 103.36 (С-9а), 104.61 (С-14), 105.13 (С-2), 107.19 (С-21), 108.84 (С-8), 121.97 (С-18), 135.09 (С-17), 143.27 (С-13), 143.42 (С-19), 144.00 (С-20), 151.25 (С-9), 151.54 (С-7), 156.35 (С-5а), 166.27 (С-16), 180.58 (С-4а), 191.57 (С-3), 198.07 (С-1), 201.34 (С-11). HRMS: Расчетное значение: m/z=493.0938 (C₂₄H₁₉O₇N₃³²S)⁺ Измеренное значение: m/z=493.0941. [α]_D¹⁹=+135°.

Пример 6. Синтез (2R)-4-ацетил-5,11,13-тригидрокси-2,12-диметил-10-{2-[(2Е)-2-[(5-бромотиофен-2-ил)метилиден]гидразин-1-ил]-1,3-тиазол-4-ил}-8-оксатрицикло[7.4.0.0^2,7]тридека-1(9),4,6,10,12-пентаен-3-она Ib

Бромусниновую кислоту III (100 мг, 0,24 ммоль) растворяли в метаноле при 40°С.К полученному раствору добавляли тиосемикарбазон IVb (63 мг, 0,24 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение часа. Полученную смесь разбавляли водой, а выпавший осадок отфильтровывали и сушили на воздухе.

Т_разл=153-155°С. Выход: 78% Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д., J Гц): 1.69 (3Н, с, Н-15), 2.16 (3Н, с, Н-10), 2.64 (3Н, с, Н-12), 5.92 (1Н, с, Н-4), 6.77 (1Н, д, J=3.83 Hz, Н-19), 6.86 (1Н, д, J=3.78 Hz, Н-20), 7.11 (1Н, с, Н-14), 7.58 (1Н, с, Н-17), 9.06 (1Н, шс, NH), 10.29 (1Н, с, ОН-9), 18.79 (1Н, с, ОН-3). Спектр ЯМР ¹³С (CDCl₃, δ, м.д.): 7.97 (С-15), 27.47 (С-10), 31.76 (С-12), 59.00 (С-9b), 97.04 (С-4), 97.08 (С-6), 103.17 (С-9а), 104.72 (С-14), 104.88 (С-2), 108.50 (С-8), 115.29 (С-21), 128.64 (С-19), 129.92 (С-20), 135.97 (С-17), 139.39 (С-18), 142.78 (С-13), 151.00 (С-9), 151.22 (С-7), 155.87 (С-5а), 165.49 (С-16), 180.12 (С-4а), 191.26 (С-3), 197.72 (С-1), 201.00 (С-11). HRMS: Расчетное значение m/z=586.9815 (C₂₄H₁₈O₆H₃Br³²S₂)⁺. Измеренное значение m/z=586.9820. [α]_D¹⁹=+230°.

Пример 7. Синтез (2R)-4-Ацетил-10-{2-[(Е)-2-[(3-{[4-(4-фторофенил)пиперазин-1-ил]метил}-4-метоксифенил)метилиден]гидразин-1-ил]-1,3-тиазол-4-ил}-5,11,13-тригидрокси-2,12-диметил-8-оксатрицикло[7.4.0.0^2,7]тридека-1(9),4,6,10,12-пентаен-3-он Ic

Бромусниновую кислоту III (100 мг, 0,24 ммоль) растворяли в метаноле при 40°С. К полученному раствору добавляли тиосемикарбазон IVd (95 мг, 0,24 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение часа. Полученную смесь разбавляли водой, а выпавший осадок отфильтровывали и сушили на воздухе.

Т_разл=120-122°С. Выход: 79% Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д., J Гц): 1.67 (3Н, с, Н-15), 2.13 (3Н, с, Н-10), 2.61 (3Н, с, Н-12), 3.83 (3Н, с, Н-25), 5.00 (2Н, с, Н-24), 5.88 (1H, с, Н-4), 6.82 (5Н, м, Н-22, Н-27, Н-28, Н-30, Н-31), 7.09 (1H, с, Н-14), 7.45-7.65 (3Н, м, Н-17, Н-19, Н-23), 8.92 (1Н, шс, NH), 10.24 (1Н, с, ОН-9), 18.78 (1Н, с, ОН-3). Спектр ЯМР ¹³С (CDCl₃, δ, м.д.): 8.31 (С-15), 27.62 (С-10), 32.00 (С-12), 55.47 (С-25), 59.32 (С-9b), 65.26 (С-24), 97.24 (С-4), 97.21 (С-6), 103.31 (С-9а), 104.42 (С-14), 105.01 (С-2), 108.80 (С-8), 110.26 (С-22), 115.56 (С-27, С-31, д, J=12 Hz), 115.83 (С-28, С-30, д, J=3.2 Hz), 125.64 (С-18), 126.07 (С-20), 127.14 (С-19), 127.69 (С-23), 142.43 (С-17), 143.42 (С-13), 151.31 (С-7), 151.42 (С-9), 154.74 (С-26, д, J=2.2 Hz), 155.68 (С-29, д, J=239 Hz), 156.32 (С-5а), 158.06 (С-21), 166.4 (С-16), 180.44 (С-4а), 191.53 (С-3), 197.92 (С-1), 201.21 (С-11). HRMS: Расчетное значение m/z=586.9815 (C₃₄H₂₈O₈N₃F³²S)⁺. Измеренное значение m/z=586.9820. [α]_D¹⁹=+198°.

Пример 8. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамм генетической линии В (Ухань) in vitro на культуре клеток Vero Е6.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Australia/VIC01/2020 (генетическая линия В, (EPI_ISL_406844). Вирусы этой генетической линии циркулировали в начале пандемии, вызванной коронавирусной инфекцией. Штамм вируса был получен из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 7,5 lgTCD₅₀/ml).

Определение ингибирующих концентраций (IC₅₀) соединений было проведено в тесте снижения цитопатического действия вируса на клетки в трех повторах. Культура клеток Vero Е6 была выращена в 96-луночных культуральных планшетах с конфлюэнтностью не менее 90%. Готовили последовательные понижающиеся трехкратные разведения соединений, начиная с концентрации 300 мкг/мл. В эксперименте использовали вирус множественностью заражения 0,01 (эквивалентно дозе 100 TCD₅₀ на лунку).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации соединений проводили одновременно. Для этого в культуральный планшет с монослоем клеток вносили разведения соединений, затем вносили поддерживающую среду без вируса (для определения токсической концентрации соединений) и жидкость, содержащую вирус (для определения ингибирующей активности соединений). Культуральные планшеты инкубировали при 37°С в течение 4 суток, затем окрашивали МТТ (NeoFroxx) согласно инструкции производителя. Учет результатов проводили на планшетном анализаторе (Thermo Scientific MultiskanFC), обработку данных осуществляли при помощи программы SOFTmax PRO 4.0 с использованием 4-х параметрического метода анализа. Для всех исследованных соединений определены 50% токсическая концентрация (СС₅₀) и концентрации 50% ингибирования (IC₅₀) В дальнейшем, для каждого соединения рассчитывали индекс селективности (SI) - отношение токсичности соединения и ингибирующей активности против вируса SARS-CoV-2 (СС₅₀/IC₅₀) (табл. 1).

Пример 9. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамма hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021 (Дельта) in vitro на культуре клеток Vero Е6.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021 (генетическая линия В.1.617.2 (Дельта), (EPI_ISL_7338814)), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 6,75 lgTCD₅₀/ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 2.

Пример 10. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 генетической линии ВА.1 (Омикрон 1) in vitro на культуре клеток Vero Е6.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021 (генетическая линия ВА.1 (омикрон 1), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 5,5 lgTCD50/ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 3.

Пример 11. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамма hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022 генетической линии ВА.5.2 (Омикрон 5.2) in vitro на культуре клеток Vero Е6.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022 (генетическая линия ВА.5.2 (омикрон 5.2), (EPI_ISL_16613436)), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 6,5 lgTCD50/ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 4.

Пример 12. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023 генетической линии BQ.1.1 in vitro на культуре клеток Vero Е6.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023 (генетической линии BQ.1.1 (EPI_ISL_17730076)), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 6,25 lgTCD50/ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 5.

Пример 13. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамм hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023 (ХВВ.1.5) in vitro на культуре клеток Vero Е6.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023 (генетической линии ХВВ.1.5. (EPI_ISL_17770464)), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 4,75 lgTCD50/ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 6.

Таким образом, в результате представленных экспериментальных данных, было показано, что заявленные соединения формулы I обладают противовирусной активностью в отношении широкого спектра штаммов вируса SARS-CoV-2. Ингибирование репродукции вируса SARS-CoV-2 касается штаммов hCoV-19/Australia/VIC01/2020; hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021; hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021; hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022; hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023; hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023, способных уклоняться от иммунного ответа организма-хозяина.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биохимии, медицины и фармакологии и представляет собой применение производных (+)-усниновой кислоты формулы Ia-с в качестве средства для ингибирования репродукции штаммов вируса SARS-CoV-2. Изобретение обеспечивает эффективное снижение титра вирусов SARS-CoV-2 (штаммы hCoV-19/Australia/VIC01/2020, hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021, hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021, hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022, hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023, hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023) в клеточной культуре. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 6 табл., 13 пр.

1. Применение тиазологидразонов на основе (+)-усниновой кислоты общей формулы Ia-с

в качестве средства для ингибирования репродукции штаммов вируса SARS-CoV-2.

2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что ингибирование репродукции вируса SARS-CoV-2 касается штаммов hCoV-19/Australia/VIC01/2020; hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021; hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021; hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022; hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023; hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023, способных уклоняться от иммунного ответа организма-хозяина.