ИНГИБИТОРЫ ПУТИ IL-4/IL-13 ДЛЯ ПОВЫШЕННОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ Российский патент 2025 года по МПК A61K39/395 C07K16/28 A61P35/00 A61K45/06 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[001] Настоящее изобретение относится к способам лечения злокачественных новообразований, включающим введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 в комбинации с терапевтически эффективным количеством ингибитора белка программируемой гибели 1 (PD-1). В некоторых вариантах осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 повышает противоопухолевую эффективность блокады PD-1.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[002] Иммунитет типа 2 способствует росту опухоли и метастазированию при различных типах злокачественных новообразований. Несколько ассоциированных с типом 2 цитокинов, хемокинов или рецепторов участвуют в развитии злокачественных новообразований и гиперэкспрессированы в различных опухолях человека. Например, IL-4, IL-13, IL-4Rα и IL-33 гиперэкспрессированы в ряде типов злокачественных новообразований человека и ассоциированы с неблагоприятным прогнозом при раке мочевого пузыря, молочной железы или яичников (Joshi et al., Cancer Med., 3(6):1615-28, 2014; Formentini et al., Int J Colorectal Dis., 27(10):1369-76, 2012); Tong et al., Mol Oncol. 10(1):113-25, 2015). Иммунитет типа 2 отличается продукцией ряда цитокинов и хемокинов типа 2 (например, IL-4, IL-13, тимусного стромального лимфопоэтина (TSLP), IL-33), и, как правило, его наблюдают в тканях во время аллергических ответов или паразитарных инфекций. Иммунный ответ типа 2 также вносит вклад в ответ с репарацией ткани и фиброз (Wynn, Nat Rev Immunol., 15(5):271-82, 2015; Gieseck et al., Nat Rev Immunol., 18(1):62-76, 2017).

[003] Протоковая аденокарцинома поджелудочной железы (PDAC) является третьей по частоте причиной гибели, связанной со злокачественными новообразованиями, в США с 5-летним коэффициентом выживаемости 8%. Этот крайне неблагоприятный прогноз, главным образом, связан с тем, что PDAC рефрактерна к большинству способов терапии. В частности, иммунотерапия с блокадой иммунных контрольных точек (ICB) (например, против PD-1 или против антигена цитотоксических T-лимфоцитов 4 (CTLA-4)) не обеспечивает клинический ответ у пациентов с PDAC. Ключевым компонентом сильной резистентности к лекарственным средствам при PDAC является его уникальная десмопластическая строма - плотная фиброзная и стромальная реакционная среда, состоящая из опухолеассоциированных фибробластов, иммунных клеток и больших количеств компонентов внеклеточного матрикса, действующая в качестве физического барьера для перфузии лекарственных средств и инфильтрации T-клетками и создающая крайне иммуносупрессорную среду, ингибирующую функцию T-клеток (Olive et al., Science, 324(5933):1457-61, 2009; Provenzano et al., Cancer Cell, 21(3):418-29, 2012; Feig et al., Proc Natl Acad Sci U S A., 110(50):20212-17,2013).

[004] Доклинические исследования показали, что генетическая абляция или блокада IL-13, IL-4R или TSLP может снижать рост опухоли и метастазирование при раке поджелудочной железы, раке молочной железы и колоректальном раке. Кроме того, показано, что с помощью IL-4 и TSLP сыворотки можно прогнозировать выживаемость пациентов с раком поджелудочной железы (Piro et al., Oncoimmunology 6(9):e1322242, 2017; De Monte et al., J Exp Med, 208(3):469-78, 2011). Зависящее от механизмов иммунитета типа 2 образование опухоли включает индуцирование фиброза, ингибирование противоопухолевого иммунного надзора или повышенный метаболизм глюкозы и глутамина в злокачественных клетках (DeNardo et al., Cancer Cell, 16(2):91-102, 2009; Liou et al, Cell Rep., 19(7):1322-33, 2017; Pedroza-Gonzalez et al., J Exp Med, 208(3):479-90, 2011; Venmar et al., Biochim Biophys Acta, 1853(5):1219-28, 2015; Ostrand-Rosenberg et al., J. Immunol., 165:6015-19, 2000). В совокупности, эти данные свидетельствуют о том, что иммунитет типа 2 способствует росту опухоли и метастазированию при различных типах злокачественных новообразований.

[005] Таким образом, существует потребность в новых и эффективных способах терапии для лечения злокачественных новообразований, включая типы и подтипы злокачественных новообразований, отличающиеся иммунным ответом типа 2, и злокачественные новообразования, резистентные к предшествующей терапии.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[006] В одном из аспектов настоящее изобретение относится к способу лечения или ингибирования роста опухоли, включая: (a) выбор индивидуума с опухолью; и (b) введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора белка программируемой гибели 1 (PD-1). В одном из вариантов осуществления индивидуум имеет опухоль, выбранную из группы, состоящей из колоректального рака, рака яичников, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, злокачественного новообразования головного мозга, рака шейки матки, рака мочевого пузыря, рака анального канала, рака матки, рака толстого кишечника, рака печени, рака поджелудочной железы, рака легких, рака эндометрия, злокачественного новообразования костной ткани, рака яичка, рака кожи, рака почки, рака желудка, рака пищевода, рака головы и шеи, рака слюнных желез, миеломы, лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, фолликулярной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфоплазмацитоидной лимфомы, лимфомы из клеток краевой зоны, лимфомы из клеток мантийной зоны, диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы, B-клеточных лимфом, лимфогранулематоза, лимфомы Беркитта, острого лимфобластного лейкоза, волосатоклеточного лейкоза и B-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза. В одном из вариантов осуществления опухоль включает зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование. В другом варианте осуществления зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование включает рак поджелудочной железы, рак молочной железы, колоректальный рак, рак яичников, злокачественное новообразование головного мозга, рак кожи, рак предстательной железы, рак почки, рак легких, лимфому Ходжкина или рак мочевого пузыря. В другом варианте осуществления опухоль включает рак поджелудочной железы. В одном из вариантов осуществления опухоль является первичной, метастатической или рецидивирующей. В одном из вариантов осуществления индивидуума лечат с помощью одного или более способов противоопухолевой терапии. В одном из вариантов осуществления индивидуум имеет опухоль, резистентную или неадекватно отвечающую на предшествующую терапию. В одном из вариантов осуществления индивидуум имеет опухоль, резистентную или неотвечающую на лечение ингибитором иммунных контрольных точек (например, ингибитором PD-1, ингибитором LAG3 и т.д.).

[007] В одном из вариантов осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 выбран из группы, состоящей из антитела против IL-4, антитела против IL-13, биспецифического антитела против IL-4/IL-13, ингибитора рецептора IL-4 (IL-4R), ловушки IL-4, ловушки IL-13 и антитела против IL-4R. В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 является антителом против IL-4 (например, пасколизумабом). В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 является антителом против IL-13 (например, тралокинумабом, лебрикизумабом, дектрекумабом, GSK679586 или MEDI7836). В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 является биспецифическим антителом против IL-4/IL-13 (например, ромилкимабом). В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 является ингибитором IL-4R (например, мутеином IL-4, таким как питракинра или антитело против IL-4R). В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 является антителом против IL-4R. В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 является ловушкой IL-4 или ловушкой IL-13.

[008] В другом варианте осуществления антитело против IL-4R включает вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и вариабельную область легкой цепи (LCVR), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В другом варианте осуществления HCVR включает три определяющие комплементарность области (CDR) тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), и LCVR включает три CDR легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где: HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В другом варианте осуществления антитело против IL-4R включает тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9. В другом варианте осуществления антитело против IL-4R включает тяжелую цепь и легкую цепь, где легкая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В другом варианте осуществления антитело против IL-4R включает тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и легкая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 является дупилумабом или его биоэквивалентом. В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 выбран из группы, состоящей из дупилумаба, пасколизумаба, AMG317, MEDI2045, MEDI9314, тралокинумаба, лебрикизумаба, анрукинзумаба, дектрекумаба, GSK679586, MEDI7836, ромилкимаба, ловушки IL-4, ловушки IL-13, AER-003 и питракинры.

[009] В одном из вариантов осуществления ингибитор PD-1 выбран из антитела против PD-1, антитела против PD-L1 и антитела против PD-L2. В другом варианте осуществления ингибитор PD-1 является антителом против PD-1, включающим HCVR, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и LCVR, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12. В другом варианте осуществления HCVR включает три CDR тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), и LCVR включает три CDR легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где: HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18. В другом варианте осуществления антитело против PD-1 включает пару последовательностей HCVR/LCVR SEQ ID NO: 11/12. В другом варианте осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19. В другом варианте осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь и легкую цепь, где легкая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20. В другом варианте осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, и легкая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20. В другом варианте осуществления ингибитор PD-1 является цемиплимабом или его биоэквивалентом. В другом варианте осуществления ингибитор PD-1 является антителом против PD-1, выбранным из группы, состоящей из цемиплимаба, ниволумаба, пембролизумаба, пидилизумаба, MEDI0608, BI 754091, PF-06801591, синтилимаба, AGEN2034, спартализумаба, камрелизумаба, JNJ-63723283 и MCLA-134. В другом варианте осуществления ингибитор PD-1 является антителом против PD-L1, выбранным из группы, состоящей из H1H8314N, авелумаба, атезолизумаба, дурвалумаба, MDX-1105, LY3300054, FAZ053, STI-1014, CX-072, KN035 и CK-301.

[010] В другом варианте осуществления одну или более доз ингибитора пути IL-4/IL-13 вводят в комбинации с одной или более дозами антитела против PD-1. В другом варианте осуществления по меньшей мере одна доза ингибитора пути IL-4/IL-13 включает от приблизительно 0,1 до приблизительно 50 мг/кг массы тела индивидуума. В другом варианте осуществления по меньшей мере одна доза ингибитора пути IL-4/IL-13 включает от приблизительно 0,05 до приблизительно 1000 мг ингибитора. В другом варианте осуществления по меньшей мере одна доза ингибитора PD-1 включает от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг массы тела индивидуума. В другом варианте осуществления по меньшей мере одна доза ингибитора PD-1 включает от приблизительно 0,05 до приблизительно 500 мг ингибитора. В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 вводят до ингибитора PD-1. В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 вводят после ингибитора PD-1. В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 вводят одновременно с ингибитором PD-1. В другом варианте осуществления способ способствует регрессированию опухоли, задерживает рост опухоли, снижает количество опухолевых клеток, снижает опухолевую нагрузку и/или предотвращает рецидивирование опухоли у пациента. В другом варианте осуществления способ способствует по меньшей мере на приблизительно 10% большему регрессированию опухоли у подвергнутого лечению индивидуума по сравнению с неподвергнутым лечению индивидуумом или индивидуумом, которого лечили любым ингибитором в качестве монотерапии. В другом варианте осуществления способ приводит к по меньшей мере на 30%-ному или большему снижению опухолевых клеток или размера опухоли по сравнению с неподвергнутым лечению индивидуумом или индивидуумом, которого лечили любым ингибитором в качестве монотерапии.

[011] В другом варианте осуществления способ дополнительно включает использование по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства или способа терапии. В другом варианте осуществления дополнительное терапевтическое средство или способ терапии включает химиотерапию, циклофосфамид, хирургическое вмешательство, лучевую терапию, противоопухолевую вакцину, ингибитор LAG3, ингибитор CTLA-4, агонист GITR, ингибитор TIM3, ингибитор BTLA, ингибитор TIGIT, ингибитор CD47, ингибитор IDO, антагонист VEGF, ингибитор Ang2, ингибитор TGFβ, ингибитор EGFR, ингибитор VISTA, ингибитор CD38, агонист CD40, ингибитор CSF1R, ингибитор CCR2, ингибитор CXCR4, ингибитор CXCR2, ингибитор CCR4, ингибитор CXCL12, активатор CD28, агонист костимуляторного рецептора, антитело против опухолеспецифического антигена, биспецифическое антитело против CD3/против CD20, ГМ-КСФ, цитотоксин, химиотерапевтическое средство, онколитический вирус, ингибитор IL-6R, ингибитор IL-10, цитокин или его производное (например, IL-12 или IL-2), ADC, T-клетки с химерным антигенным рецептором, противовоспалительное лекарственное средство, НПВС и/или пищевую добавку.

[012] В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической системе доставки, включающей: (a) фармацевтическую композицию, включающую ингибитор пути IL-4/IL-13 и фармацевтически приемлемый носитель; и (b) фармацевтическую композицию, включающую ингибитор белка программируемой гибели 1 (PD-1) и фармацевтически приемлемый носитель. В одном из вариантов осуществления фармацевтические композиции (a) и (b) отделены друг от друга. В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция (a) включает одну или более доз ингибитора пути IL-4/IL-13. В другом варианте осуществления по меньшей мере одна доза включает приблизительно 5-1000 мг ингибитора пути IL-4/IL-13. В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция (b) включает одну или более доз ингибитора PD-1. В другом варианте осуществления по меньшей мере одна доза включает приблизительно 5-500 мг ингибитора PD-1. В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 выбран из группы, состоящей из антитела против IL-4, антитела против IL-13, биспецифического антитела против IL-4/IL-13, ингибитора рецептора IL-4 (IL-4R), ловушки IL-4, ловушки IL-13 и антитела против IL-4R. В другом варианте осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 выбран из группы, состоящей из дупилумаба, пасколизумаба, AMG317, MEDI2045, MEDI9314, тралокинумаба, лебрикизумаба, анрукинзумаба, дектрекумаба, GSK679586, MEDI7836, ромилкимаба, ловушки IL-4, ловушки IL-13, AER-003 и питракинры. В другом варианте осуществления ингибитор PD-1 выбран из группы, состоящей из антитела против PD-1, антитела против PD-L1 и антитела против PD-L2. В другом варианте осуществления ингибитор PD-1 является антителом против PD-1, выбранным из группы, состоящей из цемиплимаба, ниволумаба, пембролизумаба, пидилизумаба, MEDI0608, BI 754091, PF-06801591, синтилимаба, AGEN2034, спартализумаба, камрелизумаба, JNJ-63723283 и MCLA-134. В другом варианте осуществления ингибитор PD-1 является антителом против PD-L1, выбранным из группы, состоящей из H1H8314N, авелумаба, атезолизумаба, дурвалумаба, MDX-1105, LY3300054, FAZ053, STI-1014, CX-072, KN035 и CK-301.

[013] В другом варианте осуществления фармацевтическая система доставки дополнительно включает по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из циклофосфамида, противоопухолевой вакцины, ингибитора LAG3, ингибитора CTLA-4, агониста GITR, активатора CD28, ингибитора TIM3, ингибитора BTLA, ингибитора TIGIT, ингибитора CD38, ингибитора CD47, ингибитора IDO, антагониста VEGF, ингибитора Ang2, ингибитора TGFβ, ингибитора EGFR, ингибитора VISTA, агониста CD40, ингибитора CSF1R, ингибитора CCR2, ингибитора CXCR4, ингибитора CXCR2, ингибитора CCR4, ингибитора CXCL12, агониста костимуляторного рецептора, антитела против опухолеспецифического антигена, биспецифического антитела против CD3/против CD20, ГМ-КСФ, цитотоксина, химиотерапевтического средства, ингибитора IL-6R, ингибитора IL-10, онколитического вируса, цитокина, ADC, T-клеток с химерным антигенным рецептором, противовоспалительного лекарственного средства, НПВС и пищевой добавки. В другом варианте осуществления фармацевтическая система доставки предназначена для применения в лечении или ингибировании роста опухоли. В другом варианте осуществления опухоль включает зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование.

[014] В другом аспекте настоящее изобретение относится к набору, включающему фармацевтическую систему доставки, включающую: (a) фармацевтическую композицию, включающую ингибитор пути IL-4/IL-13 и фармацевтически приемлемый носитель; (b) фармацевтическую композицию, включающую ингибитор PD-1 и фармацевтически приемлемый носитель; и письменные инструкции по использованию ингибитора пути IL-4/IL-13 в комбинации с ингибитором PD-1 для лечения или ингибирования роста опухоли.

[015] В другом аспекте настоящее изобретение относится к ингибитору пути IL-4/IL-13 для применения в способе лечения или ингибирования роста опухоли в комбинации с ингибитором PD-1, включающем введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества каждого ингибитора. В другом аспекте настоящее изобретение относится к ингибитору PD-1 для применения в способе лечения или ингибирования роста опухоли в комбинации с ингибитором пути IL-4/IL-13, включающем введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества каждого ингибитора.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[016] Фигура 1A является линейным графиком, на котором показано снижение объема опухоли от объемов опухолей 30-110 мм³ на исходном уровне в соответствии с исследованием, описанным в примере 1. Символом (*) указана степень статистической значимости относительно изотипических контролей (IgG).

[017] Фигура 1B является столбиковой диаграммой, на которой показано процентное изменение объема опухоли у отдельных животных от объемов опухолей 30-110 мм³ на исходном уровне до дня 38 в соответствии с исследованием, описанным в примере 1.

[018] Фигура 2A является линейным графиком, на котором показано снижение объема опухоли от объемов опухолей 50-110 мм³ на исходном уровне в соответствии с повторным исследованием, описанным в примере 1. Символом (*) указана степень статистической значимости относительно изотипических контролей (IgG).

[019] Фигура 2B является столбиковой диаграммой, на которой показано процентное изменение объема опухоли у отдельных животных от объемов опухолей 50-110 мм³ на исходном уровне до дня 38 в соответствии с повторным исследованием, описанным в примере 1.

[020] Фигура 3A является столбиковой диаграммой, на которой показана экспрессия мРНК IL-4 и IL-13 относительно нормы у мышей Balb/c, которым подкожно (Sub-Cu) или ортотопически (Ortho) имплантировали клетки сингенных опухолевых органоидов поджелудочной железы, сконструированных для экспрессии онкогенного KRAS с сопутствующей потерей функции опухолевого супрессора P53 (клетки KP), как описано в примере 3.

[021] Фигура 3B является столбиковой диаграммой, на которой показана продукция цитокина IL-4 у мышей Balb/c, которым подкожно (Sub-Cu) или ортотопически (Ortho) имплантировали клетки сингенных опухолевых органоидов поджелудочной железы, сконструированных для экспрессии онкогенного KRAS с сопутствующей потерей функции опухолевого супрессора P53 (клетки KP), как описано в примере 3.

[022] Фигура 4A является линейным графиком, на котором показано снижение объема опухоли от объемов опухолей 70-100 мм³ на исходном уровне до дня 40 в соответствии с исследованием, описанным в примере 4. Символом (*) указана степень статистической значимости относительно изотипических контролей (IgG).

[023] Фигура 4B является столбиковой диаграммой, на которой показано процентное изменение объема опухоли у отдельных животных от объемов опухолей 70-100 мм³ на исходном уровне до дня 40 в соответствии с исследованием, описанным в примере 4.

[024] Фигура 4C является парой столбиковых диаграмм, на которых показаны уровни цитокинов интерферона гамма (ИФНγ) и фактора некроза опухоли альфа (ФНОα), измеренные в лизатах опухолей в конце исследования, описанного в примере 4.

[025] Фигура 5A является столбиковой диаграммой, на которой показано процентное изменение объема опухоли у отдельных животных от объемов опухолей 50-100 мм³ на исходном уровне до конца исследования в соответствии с исследованием, описанным в примере 5.

[026] Фигура 5B является столбиковой диаграммой, на которой показано содержание гиалуроновой кислоты (HA) в опухолях поджелудочной железы, что представлено в способе гистохимического окрашивания с использованием биотинилированного HA-связывающего белка (HABP) в четырех исследуемых группах: ISO/ISO, IL-4R/ISO, ISO/PD-1 и IL-4R/PD-1, в соответствии с исследованием, описанным в примере 5.

[027] Фигура 5C является столбиковой диаграммой, на которой показана инфильтрация CD8⁺ T-клетками в ложе опухоли, что показано посредством гистологического количественного анализа маркера CD8 инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL) в четырех исследуемых группах: ISO/ISO, IL-4R/ISO, ISO/PD-1 и IL-4R/PD-1, в соответствии с исследованием, описанным в примере 5.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[028] Следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено конкретными описанными способами и экспериментальными условиями, т.к. такие способы и условия могут варьироваться. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, предназначена для описания исключительно конкретных вариантов осуществления, а не для ограничения, и что объем настоящего изобретения будет ограничен только формулой изобретения.

[029] Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, обладают значением, общепринято понятным специалисту в области, к которой относится изобретение. В рамках изобретения термин "приблизительно" при использовании по отношению к конкретному перечисленному числовому значению означает, что значение может варьироваться относительно перечисленного значения на не более чем 1%. Например, в рамках изобретения выражение "приблизительно 100" включает 99 и 101 и все значения между ними (например, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т.д.).

[030] Хотя в практическом осуществлении настоящего изобретения можно использовать любые способы и материалы, схожие или эквивалентные представленным в настоящем описании, далее описаны предпочтительные способы и материалы.

[031] Настоящее изобретение включает способы лечения злокачественного новообразования, включающие введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 в комбинации с терапевтически эффективным количеством ингибитора белка программируемой гибели 1 (PD-1). В некоторых вариантах осуществления описанные способы нацелены на зависящие от иммунитета типа 2 про-онкогенные механизмы развития злокачественных новообразований, таким образом, являясь новым и высокоэффективный способом лечения или ингибирования роста опухоли, включая опухоли, проявляющие десмопластические черты. В некоторых вариантах осуществления описанными способами лечат зависящие от иммунитета типа 2 злокачественные новообразования с использованием блокады IL-4R или других иммунотерапевтических средств, направленных на пути иммунного ответа типа 2, в комбинации с противоопухолевыми средствами, включая, в качестве неограничивающих примеров, ICB (например, химиотерапию, биспецифические антитела, конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC) и T-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR)).

[032] В рамках изобретения термин "сигнатура генов иммунитета типа 2" относится к положительной регуляции или гиперэкспрессии одного или более цитокинов типа 2, хемокинов типа 2, рецепторов типа 2 и нижележащих генов-мишеней типа 2, включая, в качестве неограничивающих примеров: IL-13RA2, IL-25, IL-17RB, SERPINB2, CCL24, CEACAM1, CCL1, MUC5B, CCL26, IL-13RA1, POSTN, IL-6R, CCL18, CCL17, FCER2, CCR3, IL-6, CCL8, CRLF2, IL-33, TSLP, IL-4R, CCR4, PTGDR, FCER1A, IL-1RL1, DPP4, IL-4, IL-5 и IL-13. Как показано в примере 3, например, обнаружили, что экспрессия генов IL-4 и IL-13 подвергается обширной положительной регуляции в модели in vivo рака поджелудочной железы, являющегося зависящим от иммунитета типа 2 злокачественным новообразованием.

[033] В рамках изобретения термин "зависящие от иммунитета типа 2 злокачественные новообразования" относится к злокачественным новообразованиям или подтипам злокачественных новообразований, таким как злокачественные новообразования человека или подтипы злокачественных новообразований человека, демонстрирующим сильную сигнатуру генов иммунитета типа 2.

[034] В рамках изобретения термин "блокада пути иммунитета типа 2" относится к иммунотерапии, нацеленной на любой ген из сигнатуры генов иммунитета типа 2.

Способы лечения или ингибирования роста опухоли

[035] Настоящее изобретение включает способы лечения, улучшения или снижения тяжести по меньшей мере одного симптома или признака или ингибирования роста злокачественного новообразования у индивидуума. В этом аспекте описанные способы включают выбор индивидуума с опухолью и введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 (например, антитела против IL-4, антитела против IL-13, биспецифического антитела против IL-4/IL-13, ингибитора рецептора IL-4 (IL-4R), антитела против IL-4R, или любого другого "ингибитора пути IL-4/IL-13", как представлено в настоящем описании) и терапевтически эффективного количества ингибитора белка программируемой гибели 1 (PD-1) (например, антитела, специфически связывающегося с PD-1, PD-L1 и/или PD-L2, или любого другого "ингибитора PD-1", как представлено в настоящем описании).

[036] В настоящем описании ссылки на любое конкретное антитело против IL-4R и/или любое конкретное антитело против PD-1 представлены для иллюстрирования типичного ингибитора пути IL-4/IL-13 и типичного ингибитора PD-1, соответственно, и не ограничивают объем изобретения, т.к. также можно использовать комбинации других ингибиторов пути IL-4/IL-13 и ингибиторов PD-1.

[037] В рамках изобретения термины "лечение", "лечить" или т.п. означают облегчение или снижение тяжести по меньшей мере одного симптома или признака, устранение причинного фактора симптомов на временной или постоянной основе, задержку или ингибирование роста опухоли, снижение количества опухолевых клеток или опухолевой нагрузки, стимуляцию регрессирования опухоли, вызывание уменьшения, некроза и/или исчезновение опухоли, профилактику рецидивирования опухоль, профилактику или ингибирование метастазирования, ингибирование метастатического роста опухоли, устранение потребности в хирургическом вмешательстве, уменьшение опухоли и облегчение хирургического вмешательства, повышение показателя резекций и/или повышение длительности выживания индивидуума. Во многих вариантах осуществления термины "опухоль", "злокачественное новообразование" и "злокачественная опухоль" используют взаимозаменяемо, и они означают одну или более опухолей.

[038] В некоторых вариантах осуществления опухоль включает зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование. Неограничивающие примеры зависящих от иммунитета типа 2 злокачественных новообразований включают рак поджелудочной железы (например, PDAC), рак молочной железы, колоректальный рак, рак яичников, рак легких, лимфома и рак мочевого пузыря.

[039] В рамках изобретения выражение "нуждающийся в этом индивидуум" означает человека или не являющегося человеком млекопитающего, демонстрирующего один или более симптомов или признаков злокачественного новообразования, и/или у которого диагностировано злокачественное новообразование, включая солидную опухоль, и нуждающегося в его лечении. Во многих вариантах осуществления термины "индивидуум" и "пациент" используют взаимозаменяемо. Способы, представленные в настоящем описании, могут включать стадию выбора нуждающегося в этом индивидуума. Например, у человека можно диагностировать первичную или метастатическую опухоль и/или один или более симптомов или признаков, включая, в качестве неограничивающих примеров, увеличенные лимфоузлы, вздутие живота, боль/давление в грудной клетке, необъяснимую потерю веса, лихорадку, ночную потливость, постоянную утомляемость, потерю аппетита, увеличение селезенки, зуд. Выражение включает индивидуумов с первичной, развившейся или рецидивирующей опухолью. В конкретных вариантах осуществления выражение включает людей, имеющих солидную опухоль и/или нуждающихся в ее лечении. В других вариантах осуществления выражение включает людей, имеющих опухоль (например, лимфомы или лейкозы) и/или нуждающихся в ее лечении. Выражение также включает индивидуумов с первичными или метастатическими опухолями (злокачественными новообразованиями на поздней стадии). Выражение также включает индивидуумов с опухолями, включающими зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование, включая, в качестве неограничивающих примеров рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легких, плоскоклеточную карциному легких и лимфому Ходжкина.

[040] В некоторых вариантах осуществления выражение включает пациентов с опухолью, резистентной, или рефрактерной, или неадекватно контролируемой с помощью предшествующей терапии (например, лечения с использованием противоопухолевого средства, такого как монотерапия ингибитором пути IL-4/IL-13, монотерапия ингибитором PD-1, карбоплатин или доцетаксел). В некоторых вариантах осуществления выражение включает пациентов с опухолью, подвергнутой лечению с помощью одной или более линий предшествующей терапии (например, хирургически удаленной), но затем рецидивирующей. В некоторых вариантах осуществления выражение включает индивидуумов с опухолью, не являющихся кандидатами для излечивающего хирургического вмешательства или излечивающей лучевой терапии, или для которых общепринятую противоопухолевую терапию не рекомендуют, например, из-за токсических побочных эффектов.

[041] В других вариантах осуществления выражение "нуждающийся в этом индивидуум" включает пациентов со злокачественной опухолью, которую лечили, но она затем рецидивировала или метастазировала. Например, пациентов с опухолью можно подвергать с использованием одного или более противоопухолевых средств, приводящих к регрессированию опухоли; однако, затем они переносят рецидив злокачественного новообразования, резистентного к одному или более противоопухолевым средствам (например, резистентного к химиотерапии злокачественного новообразования), и их можно лечить способами по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления выражение включает пациентов, у которых наблюдают положительную регуляцию по меньшей мере одного цитокина, такого как IL-4 и/или IL-13. В некоторых вариантах осуществления выражение включает пациентов, у которых наблюдают повышенную продукцию по меньшей мере одного цитокина, такую как повышенная продукция IL-4. В некоторых вариантах осуществления выражение включает пациентов, у которых наблюдают повышенное содержание гиалуроновой кислоты (HA) в опухоли.

[042] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает способы лечения, задержки или ингибирования роста опухоли. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает способы стимуляции регрессирования опухоли. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает способы снижения количества опухолевых клеток или снижения опухолевой нагрузки. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает способы повышения выживаемости подвергнутого лечению индивидуума, повышения ответа или повышения длительности ответа. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает способы лечения или ингибирования роста опухоли у индивидуумов с раком поджелудочной железы, раком молочной железы, колоректального рака, злокачественного новообразования головного мозга, рака кожи, рака почки, рака яичников, рака легких (например, немелкоклеточного рака легких), лимфомы Ходжкина или рака мочевого пузыря.

[043] В некоторых вариантах осуществления описанные способы включают введение терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1 в комбинации с дополнительным терапевтическим средством или способом терапии (например, схемой лечения или способом лечения). В некоторых вариантах осуществления описанные способы включают введение дополнительного терапевтического средства, такого как противоопухолевое лекарственное средство. В рамках изобретения термин "противоопухолевое лекарственное средство" означает любое средство, которое можно использовать для лечения злокачественного новообразования, включая, в качестве неограничивающих примеров, цитотоксины и средства, такие как антиметаболиты, алкилирующие средства, антрациклины, антибиотики, антимитотические средства, прокарбазин, гидроксимочевину, аспарагиназу, кортикостероиды, митотан (O, P′-(DDD)), биологические средства (например, антитела и интерфероны) и радиоактивные средства. В рамках изобретения "цитотоксин или цитотоксическое средство" также относится к химиотерапевтическому средству и означает любое средство, вредоносное для клеток. Примеры включают Таксол® (паклитаксел), темозоломид, цитохалазин B, грамицидин D, бромид этидия, эметин, цисплатин, митомицин, этопозид, тенипозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин и его аналоги или гомологи. Дополнительное терапевтическое средство или способ терапии можно использовать для повышения противоопухолевой эффективности, снижения токсических эффектов одного или более способов терапии и/или снижения дозы одного или более терапевтических средств. В различных вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство или способ терапии может включать одно или более из: химиотерапии, циклофосфамида, хирургического вмешательства, лучевой терапии, противоопухолевой вакцины, ингибитора гена активации лимфоцитов 3 (LAG3) (например, антитела против LAG3), ингибитора антигена цитотоксических T-лимфоцитов 4 (CTLA-4) (например, ипилимумаба), агониста глюкокортикоид-индуцируемого рецептора фактора некроза опухоли (GITR) (например, антитела против GITR), ингибитора белка 3, содержащего домены T-клеточного иммуноглобулина и муцина (TIM3), ингибитора B-лимфоцитарного и T-лимфоцитарного аттенюатора (BTLA), ингибитора T-клеточного иммунорецептора с доменами Ig и ITIM (TIGIT), ингибитора CD47, ингибитора индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), антагониста фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) (например, "VEGF-ловушки", такой как афлиберцепт, или других VEGF-ингибирующих слитых белков, описанных в патенте США № 7087411, или антитела против VEGF или его антигенсвязывающего фрагмента (например, бевацизумаб или ранибизумаб) или низкомолекулярного ингибитора киназ рецептора VEGF (например, сунитиниба, сорафениба или пазопаниба)), ингибитора ангиопоэтина-2 (Ang2) (например, несвакумаба), ингибитора трансформирующего фактора роста бета (TGFβ), ингибитора рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) (например, эрлотиниба, цетуксимаба), агониста костимуляторного рецептора (например, агониста CD28), ингибитора VISTA, ингибитора CD38, агониста CD40, ингибитора CSF1R, ингибитора CCR2, ингибитора CXCR4, ингибитора CXCR2, ингибитора CCR4, ингибитора CXCL12, антитела против опухолеспецифического антигена [например, CA9, CA125, меланома-ассоциированного антигена 3 (MAGE3), карциноэмбрионального антигена (CEA), виментина, опухоль-M2-PK, простатспецифического антигена (PSA), муцина-1, MART-1 и CA19-9], биспецифического антитела против CD3/против CD20, вакцины (например, бациллы Кальметта-Герена), гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ), цитотоксина, химиотерапевтического средства, ингибитора IL-6R (например, сарилумаба), ингибитора IL-10, цитокина, такого как IL-2, IL-7, IL-12, IL-21 и IL-15, конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) (например, ADC против CD19-DM4 и ADC против DS6-DM4), онколитического вируса, T-клеток с химерным антигенным рецептором (например, CD19-нацеленных T-клеток), противовоспалительного лекарственного средства, такого как кортикостероид, нестероидного противовоспалительного лекарственного средства (НПВС), и пищевой добавки, такой как антиоксидант.

[044] В некоторых вариантах осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 и ингибитор PD-1 можно вводить в комбинации с терапией, включающей химиотерапевтическое средство (например, дакарбазин, темозоломид, циклофосфамид, доцетаксел, доксорубицин, даунорубицин, цисплатин, карбоплатин, гемцитабин, метотрексат, митоксантрон, оксалиплатин, паклитаксел и винкристин) и/или хирургическое вмешательство. В некоторых вариантах осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 и ингибитор PD-1 можно вводить в комбинации с противоопухолевой терапией, включающей, в качестве неограничивающих примеров, общепринятые способы противоопухолевой терапии, такие как химиотерапия, лучевая терапия, хирургическое вмешательство, или как представлено в другом месте в настоящем описании.

[045] В некоторых вариантах осуществления описанный способ приводит к повышенному ингибированию роста опухоли, например, более высокому регрессированию опухоли, у подвергнутого лечению индивидуума. Например, описанные способы введения терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1 способствуют на по меньшей мере приблизительно 10%, приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70% или приблизительно 80% большему регрессированию опухоли у подвергнутого лечению индивидуума по сравнению с неподвергнутым лечению индивидуумом или индивидуумом, которого лечили ингибитором в качестве монотерапии.

[046] В некоторых вариантах осуществления описанные способы введения терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1 приводят к задержке роста и развития опухоли, например, рост опухоли можно задерживать на приблизительно 3 дня, более 3 дней, приблизительно 7 дней, более 7 дней, более 15 дней, более 1 месяца, более 3 месяцев, более 6 месяцев, более 1 года, более 2 лет или более 3 лет у подвергнутого лечению индивидуума по сравнению с неподвергнутым лечению индивидуумом или индивидуумом, которого лечили любым ингибитором в качестве монотерапии.

[047] В некоторых вариантах осуществления описанные способы введения терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1 приводят к полному исчезновению всех признаков опухолевых клеток ("полному ответу"), приводят к по меньшей мере 30%-ному или большему снижению опухолевых клеток или размера опухоли ("частичному ответу") или приводят к полному или частичному исчезновению опухолевых клеток, включая новые измеримые опухоли. Уменьшение опухоли можно измерять любыми известными в этой области способами, например, посредством рентгенографии, позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ), компьютерной томографии (КТ), магнитно-резонансной томографии (МРТ), цитологического анализа, гистологического анализа или молекулярно-генетических анализов.

[048] В некоторых вариантах осуществления описанные способы введения терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1 приводят к повышению общей выживаемости (OS) или выживаемости без прогрессирования (PFS) индивидуума по сравнению с индивидуумом, которого лечат с помощью "стандарта лечения" (SOC) (например, химиотерапии, хирургического вмешательства или лучевой терапии). В некоторых вариантах осуществления PFS повышают на по меньшей мере один месяц, по меньшей мере 2 месяца, по меньшей мере 3 месяца, по меньшей мере 4 месяца, по меньшей мере 5 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 7 месяцев, по меньшей мере 8 месяцев, по меньшей мере 9 месяцев, по меньшей мере 10 месяцев, по меньшей мере 11 месяцев, по меньшей мере 1 год, по меньшей мере 2 года или по меньшей мере 3 года по сравнению с индивидуумом, которого подвергают любому одному или более способам терапии SOC. В некоторых вариантах осуществления OS повышают на по меньшей мере один месяц, по меньшей мере 2 месяца, по меньшей мере 3 месяца, по меньшей мере 4 месяца, по меньшей мере 5 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 7 месяцев, по меньшей мере 8 месяцев, по меньшей мере 9 месяцев, по меньшей мере 10 месяцев, по меньшей мере 11 месяцев, по меньшей мере 1 год, по меньшей мере 2 года или по меньшей мере 3 года по сравнению с индивидуумом, которого подвергают любому одному или более способам терапии SOC.

[049] В некоторых вариантах осуществления описанные способы введения терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1 приводят к повышенному ответу и длительности ответа у подвергнутого лечению индивидуума, например, на более чем 2%, более чем 3%, более чем 4%, более чем 5%, более чем 6%, более чем 7%, более чем 8%, более чем 9%, более чем 10%,более чем 20%, более чем 30%, более чем 40% или более чем 50% по сравнению с неподвергнутым лечению индивидуумом или индивидуумом, которого лечили любым ингибитором в качестве монотерапии.

[050] В некоторых вариантах осуществления комбинация вводимых ингибиторов является безопасной и хорошо переносится индивидуумом таким образом, что нет повышения нежелательных побочных эффектов по сравнению с индивидуумом, которого лечили любым ингибитором в качестве монотерапии.

[051] В некоторых вариантах осуществления описанные способы включают введение индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1, где у индивидуума наблюдают положительную регуляцию по меньшей мере одного цитокина, такого как IL-4 и/или IL-13. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума наблюдают более высокую положительную регуляцию по меньшей мере одного цитокина (например, IL-4 и/или IL-13) по сравнению с индивидуумом, не нуждающимся в противоопухолевом лечении.

[052] В некоторых вариантах осуществления описанные способы включают введение индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1, где у индивидуума наблюдают повышенную продукцию по меньшей мере одного цитокина, такую как повышенная продукция IL-4. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума наблюдают повышенную продукцию по меньшей мере одного цитокина (например, IL-4) по сравнению с индивидуумом, не нуждающимся в противоопухолевом лечении.

[053] В некоторых вариантах осуществления описанные способы введения индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1 приводят к значимо повышенной продукции интерферона гамма (ИФНγ) по сравнению с индивидуумом, которого лечили любым ингибитором в качестве монотерапии. В некоторых таких вариантах осуществления эти описанные способы дополнительно приводят к повышенному регрессированию опухоли и противоопухолевой активности.

[054] В некоторых вариантах осуществления описанные способы включают введение индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1, где у индивидуума наблюдают повышенное содержание гиалуроновой кислоты (HA) в опухоли. В некоторых таких вариантах осуществления у индивидуума наблюдают более высокое содержание HA, чем у индивидуума, не имеющего зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование.

[055] В некоторых вариантах осуществления описанные способы введения индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1 приводят к снижению содержания гиалуроновой кислоты (HA) в опухоли.

[056] В некоторых вариантах осуществления описанные способы введения индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1 приводят к значимо повышенной плотности инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL) и, таким образом, повышению цитотоксической противоопухолевой эффективности комбинированного лечения. В некоторых таких вариантах осуществления эти описанные способы дополнительно приводят к повышенному регрессированию опухоли и противоопухолевой активности.

Ингибиторы пути IL-4/IL-13

[057] Способы, представленные в настоящем описании, включают введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13. В рамках изобретения "ингибитор пути IL-4/IL-13" (также обозначаемый в настоящем описании как "антагонист пути IL-4/IL-13", "блокатор пути IL-4/IL-13" и т.д.) является любым средством, ингибирующим или снижающим по меньшей мере одно из: (i) связывания IL-4 и/или IL-13 с соответствующими рецепторами; (ii) передачи сигнала и/или активности IL-4 и/или IL-13; и/или (iii) нижележащей передачи сигнала/активности, являющейся результатом связывания IL-4 и/или IL-13 с соответствующими рецепторами. Неограничивающие примеры ингибиторов пути IL-4/IL-13 включают антитела против IL-4 (например, антитела, описанные в патенте США № 7740843 и публикациях патентных заявок США №№ 20100297110, 20160207995), антитела против IL-13 (например, антитела, описанные в патентах США №№ 7501121, 7674459, 7807788, 7910708, 7915388, 7935343, 8088618, 8691233, 9605065, публикациях патентных заявок США №№ 20060073148, 20080044420 и EP2627673B1), биспецифические антитела, связывающиеся с IL-4 и IL-13 (например, антитела, описанные в патенте США № 8388965, публикациях патентных заявок США №№ 20110008345, 20130251718, 20160207995), и ингибиторы рецептора IL-4 (IL-4R) (описанные ниже). Таким образом, части публикаций, процитированных в настоящем описании, в которых определены ингибиторы пути IL-4/IL-13, включены в настоящее описание в качестве ссылки.

[058] В некоторых вариантах осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 может являться антителом, низкомолекулярным соединением, нуклеиновой кислотой, полипептидом или его функциональным фрагментом или вариантом. Неограничивающие примеры подходящих антител-ингибиторов пути IL-4/IL-13 включают антитела против IL-4, антитела против IL-13 и биспецифические антитела против IL-4/IL-13, антитела против IL-4R и антигенсвязывающие фрагменты любых из указанных выше антител. Другие неограничивающие примеры подходящих ингибиторов пути IL-4/IL-13 включают: молекулы РНКи, такие как молекулы РНКи против IL-4 и РНКи против IL-13, антисмысловые молекулы, такие как антисмысловая РНК против IL-4 и антисмысловая РНК против IL-13, и доминантно-негативные белки такие как доминантно-негативный белок IL-4, доминантно-негативный белок IL-13.

[059] В рамках изобретения "ингибитор IL-4R" (также обозначаемый в настоящем описании как "ингибитор пути IL-4/IL-13", "антагонист IL-4Rα", "блокатор IL-4R", "блокатор IL-4Rα" и т.д.) является любым средством, связывающимся или взаимодействующим с IL-4Rα или лигандом IL-4R и ингибирующим или снижающим нормальную функцию передачи биологического сигнала рецептора IL-4 типа 1 и/или типа 2. Рецептор IL-4 типа 1 является димерным рецептором, содержащим цепь IL-4Rα и цепь γc. Рецептор IL-4 типа 2 является димерным рецептором, содержащим цепь IL-4Rα и цепь IL-13Rα1. Рецепторы IL-4 типа 1 взаимодействуют с IL-4 и стимулируются им, в то время как рецепторы IL-4 типа 2 взаимодействуют с IL-4 и IL-13 и стимулируются ими. Таким образом, ингибиторы IL-4R, которые можно использовать в способах настоящего изобретения, могут функционировать посредством блокирования IL-4-опосредованной передачи сигнала, IL-13-опосредованной передачи сигнала или IL-4- и IL-13-опосредованной передачи сигнала. Таким образом, ингибиторы IL-4R по настоящему изобретению могут предотвращать взаимодействие IL-4 и/или IL-13 с рецептором типа 1 или типа 2.

[060] Неограничивающие примеры категорий ингибиторов IL-4R включают мутеины IL-4 (например, питракинру), низкомолекулярные ингибиторы IL-4R, аптамеры против IL-4R, пептидные ингибиторы IL-4R (например, молекулы "пептитела"), "рецепторные антитела" (например, сконструированные молекулы, содержащие лиганд-связывающий домен компонента IL-4R) и антитела или антигенсвязывающие фрагменты антител, специфически связывающиеся с IL-4Rα человека. В рамках изобретения ингибиторы IL-4R также включают антигенсвязывающие белки, специфически связывающиеся с IL-4 и/или IL-13.

[061] Другие неограничивающие примеры подходящих ингибиторов пути IL-4/IL-13, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения включает, например, питракинру (AER-001; BAY-16-9996), аэродерм (AER-003) и антитела, известные в этой области как дупилумаб, пасколизумаб, AMG-317, MILR1444A, CAT-354, QAX576, анрукинзумаб (IMA-638), ISIS-369645 (AIR-645), IMA-026, APG-201, CNTO-607, MK-6105, MEDI9314, MEDI2045, тралокинумаб, лебрикизумаб, ромилкимаб и DOM-0910.

Антитела против IL-4Rα и их антигенсвязывающие фрагменты

[062] В некоторых иллюстративных вариантах осуществления настоящего изобретения ингибитор пути IL-4/IL-13 является антителом против IL-4Rα или его антигенсвязывающим фрагментом. Термин "антитело" на всем протяжении настоящего описания включает молекулы иммуноглобулинов, содержащие четыре полипептидные цепи, две тяжелые (H) цепи и две легкие (L) цепи, соединенные друг с другом дисульфидными связями, а также их мультимеры (например, IgM). В типичном антителе каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (сокращенно обозначаемую в настоящем описании как HCVR или V_H) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит три домена, C_H1, C_H2 и C_H3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (сокращенно обозначаемую в настоящем описании как LCVR или V_L) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен (C_L1). Области V_H и V_L можно дополнительно разделять на области гипервариабельности, обозначаемые как определяющие комплементарность области (CDR), перемежающиеся с областями, являющимися более консервативными, обозначаемыми как каркасные области (FR). Каждая V_H и V_L состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от амино-конца к карбокси-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. В других вариантах осуществления настоящего изобретения FR антитела (или его антигенсвязывающей части) могут являться идентичными последовательностям зародышевой линии человека или могут быть природно или искусственно модифицированными. Консенсусную аминокислотную последовательность можно определять на основе параллельного анализа двух или более CDR.

[063] Термин "антитело" на всем протяжении настоящего описания включает его антигенсвязывающие фрагменты, т.е. антигенсвязывающие фрагменты полных молекул антител. Термины "антигенсвязывающая часть" антитела, "антигенсвязывающий фрагмент" антитела и т.п. на всем протяжении настоящего описания включают любой природный, ферментативно получаемый, синтетический или генетически сконструированный полипептид или гликопротеин, специфически связывающийся с антигеном с образованием комплекса. Антигенсвязывающие фрагменты антитела можно получать, например, из полноразмерных молекул антител с любыми подходящими стандартными способами, такими как протеолитическое расщепление или рекомбинантные способы генетической инженерии, включающие манипуляции и экспрессию ДНК, кодирующей вариабельные и, необязательно, константные домены антитела. Такая ДНК известна и/или легко доступна, например, в коммерческих источниках, библиотеках ДНК (включая, например, фаговых библиотеках антител), или ее можно синтезировать. ДНК можно секвенировать и обрабатывать химически или способами молекулярной биологии, например, для расположения одного или более вариабельных и/или константных домена в подходящую конфигурацию, или для встраивания кодонов, создания остатков цистеина, модификации, добавления или делеции аминокислот и т.д.

[064] Неограничивающие примеры антигенсвязывающих фрагментов включает: (i) Fab-фрагменты; (ii) F(ab')₂-фрагменты; (iii) Fd-фрагменты; (iv) Fv-фрагменты; (v) одноцепочечные молекулы Fv (scFv); (vi) dAb-фрагменты; и (vii) минимальные распознающие единицы, состоящие из аминокислотных остатков, имитирующих гипервариабельную область антитела (например, выделенную определяющую комплементарность область (CDR), такую как пептид CDR3), или затрудненный пептид FR3-CDR3-FR4. Другие сконструированные молекулы, такие как домен-специфические антитела, однодоменные антитела, антитела с делетированными доменами, химерные антитела, антитела с пересаженными CDR, диатела, триатела, тетратела, минитела, нанотела (например, моновалентные нанотела, бивалентные нанотела и т.д.), малые модульные иммунофармацевтические средства (SMIP) и вариабельные домены IgNAR акул, также включены в выражение "антигенсвязывающий фрагмент" в рамках изобретения.

[065] Антигенсвязывающий фрагмент антитела, как правило, будет содержать по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может иметь любой размер или аминокислотный состав и, как правило, будет содержать по меньшей мере одну CDR, смежную или находящуюся в рамке считывания с одной или более каркасными последовательностями. В антигенсвязывающих фрагментах, содержащих домен V_H, связанный с доменом V_L, домены V_H и V_L можно располагать относительно друг друга в любом подходящем порядке. Например, вариабельная область может являться димерной и включать димеры V_H-V_H, V_H-V_L или V_L-V_L. Альтернативно, антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерный домен V_H или V_L.

[066] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный с по меньшей мере одним константным доменом. Неограничивающие примеры конфигураций вариабельных и константных доменов, которые можно обнаружить в антигенсвязывающем фрагменте антитела по настоящему изобретению, включают: (i) V_H-C_H1; (ii) V_H-C_H2; (iii) V_H-C_H3; (iv) V_H-C_H1-C_H2; (v) V_H-C_H1-C_H2-C_H3; (vi) V_H-C_H2-C_H3; (vii) V_H-C_L; (viii) V_L-C_H1; (ix) V_L-C_H2; (x) V_L-C_H3; (xi) V_L-C_H1-C_H2; (xii) V_L-C_H1-C_H2-C_H3; (xiii) V_L-C_H2-C_H3; и (xiv) V_L-C_L. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, включая любые из указанных выше примеров конфигураций, вариабельные и константные домены можно связывать напрямую друг с другом или с помощью полной или частичной шарнирной или линкерной области. Шарнирная область может состоять из по меньшей мере 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или более) аминокислот, что приводит к гибкому или полугибкому связыванию между смежными вариабельными и/или константными доменами в одной полипептидной молекуле. Кроме того, антигенсвязывающий фрагмент антитела по настоящему изобретению может включать гомодимер или гетеродимер (или другой мультимер) из любой из указанных выше конфигураций вариабельных и константных доменов в нековалентном соединении друг с другом и/или с одним или более мономерными доменами V_H или V_L (например, с помощью дисульфидных связей).

[067] Термин "антитело" на всем протяжении настоящего описания также включает мультиспецифические (например, биспецифические) антитела. Мультиспецифическое антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, как правило, будет содержать по меньшей мере два разных вариабельных домена, где каждый вариабельный домен может специфически связываться с отдельным антигеном или другим эпитопом на том же антигене. Любой формат мультиспецифического антитела можно адаптировать для использования в контексте антитела или антигенсвязывающего фрагмента антитела по настоящему изобретению с использованием общепринятых способов, доступных в этой области. Например, настоящее изобретение включает способы, включающие использование биспецифических антител, где одно плечо иммуноглобулина является специфическим для IL-4Rα или его фрагмента, а другое плечо иммуноглобулина является специфическим для второй терапевтической мишени или конъюгировано с терапевтическим остатком. Неограничивающие примеры биспецифических форматов, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения включают, например, биспецифические форматы на основе scFv или диатела, слитые белки IgG-scFv, Ig с двойным вариабельным доменом (DVD-Ig), квадрому, "выступы-во-впадину", общую легкую цепь (например, общую легкую цепь с "выступами-во-впадину" и т.д.), CrossMab, CrossFab, (SEED)-антитело, лейциновую молнию, дуотело, IgG1/IgG2, Fab двойного действия (DAF)-IgG и Mab² (см. обзор указанных выше форматов, например, в Klein et al. 2012, mAbs 4(6):653-663 и цитируемых в ней ссылках). Биспецифические антитела также можно конструировать с использованием конъюгации пептид/нуклеиновая кислота, например, где неприродные аминокислоты с ортогональной химической активностью используют для получения сайт-специфических конъюгатов антитело-олигонуклеотид, которые затем самособираются в мультимерные комплексы с определенным составом, валентностью и геометрией (см., например, Kazane et al., J. Am. Chem. Soc.,2013, 135(1):340-46).

[068] Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, могут являться антителами человека. Термин "антитело человека" на всем протяжении настоящего описания предназначен для включения антител, имеющих вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Несмотря на это, антитела человека по настоящему изобретению могут включать аминокислотные остатки, некодируемые последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека (например, мутации, встраиваемые посредством случайного или сайт-специфического мутагенеза in vitro или под действием соматической мутации in vivo), например, в CDR и, в частности, CDR3. Однако, термин "антитело человека" на всем протяжении настоящего описания не предназначен для включения антител, в которых последовательности CDR, полученные из зародышевой линии другого вида млекопитающих, таких как мышь, пересаживают на каркасные последовательности человека.

[069] Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, могут являться рекомбинантными антителами человека. Термин "рекомбинантное антитело человека" на всем протяжении настоящего описания предназначен для включения всех антител человека, полученных, экспрессируемых, созданных или выделенных рекомбинантными способами, таких как антитела, экспрессируемые с использованием рекомбинантного экспрессирующего вектора, с помощью которого трансфицируют клетку-хозяина (описанного ниже), антитела, выделенные из рекомбинантной, комбинаторной библиотеки антител человека (описанной ниже), антитела, выделенные из животного (например, мыши), трансгенного по генам иммуноглобулинов человека (см., например, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res., 20:6287-6295), или антитела, полученные, экспрессируемые, созданные или выделенные любыми другими способами, включающими сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулинов человека с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные антитела человека содержат вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Однако в некоторых вариантах осуществления такие рекомбинантные антитела человека подвергают мутагенезу in vitro (или, если используют животное, трансгенное по последовательностям Ig человека, соматическому мутагенезу in vivo), и, таким образом, аминокислотные последовательности областей V_H и V_L рекомбинантных антител являются последовательностями, которые, хоть и получены из последовательностей V_H и V_L зародышевой линии человека и родственны им, могут не существовать в природе в репертуаре антител зародышевой линии человека in vivo.

[070] В некоторых вариантах осуществления антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, специфически связываются с IL-4Rα. Термин "специфически связывается" или т.п. означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует комплекс с антигеном, являющийся относительно стабильным в физиологических условиях. Способы определения того, связывается ли специфически антитело с антигеном, хорошо известны в этой области и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т.п. Например, антитело, "специфически связывающееся" с IL-4Rα в рамках изобретения, включает антитела, связывающееся с IL-4Rα или его частью с K_D менее приблизительно 500 нМ, менее приблизительно 300 нМ, менее приблизительно 200 нМ, менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 90 нМ, менее приблизительно 80 нМ, менее приблизительно 70 нМ, менее приблизительно 60 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 40 нМ, менее приблизительно 30 нМ, менее приблизительно 20 нМ, менее приблизительно 10 нМ, менее приблизительно 5 нМ, менее приблизительно 4 нМ, менее приблизительно 3 нМ, менее приблизительно 2 нМ, менее приблизительно 1 нМ или менее приблизительно 0,5 нМ, что измеряют с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса. Однако выделенное антитело, специфически связывающееся с IL-4Rα человека может иметь перекрестную реактивность с другими антигенами, такими как молекулы IL-4Rα других биологических видов (не принадлежащие человеку).

[071] В некоторых иллюстративных вариантах осуществления настоящего изобретения ингибитор пути IL-4/IL-13 является антителом против IL-4Rα или его антигенсвязывающим фрагментом, содержащим вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), вариабельную область легкой цепи (LCVR) и/или определяющие комплементарность области (CDR), содержащие любые из аминокислотных последовательностей антител против IL-4R, как описано в патенте США № 7608693. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления антитело против IL-4Rα или его антигенсвязывающий фрагмент, которое можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению, содержит определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR) вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления антитело против IL-4Rα или его антигенсвязывающий фрагмент содержит три HCDR (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три LCDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В других вариантах осуществления антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR, содержащую SEQ ID NO: 1, и LCVR, содержащую SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают использование антитела против IL-4R, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления антитело против IL-4R содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. Примером антитела, содержащего HCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и LCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, является полностью человеческим антителом против IL-4R, известным как дупилумаб (DUPIXENT®). В некоторых иллюстративных вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают использование дупилумаба или его биоэквивалента. Термин "биоэквивалент" в отношении дупилумаба относится к антителам против IL-4R или IL-4R-связывающим белкам или их фрагментам, являющимся фармацевтическими эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, имеющими скорость и/или степень абсорбции, не демонстрирующую значимые различия относительно дупилумаба при введении в той же молярной дозе в схожих экспериментальных условиях в однократной дозе или многократных дозах. В контексте настоящего изобретения термин относится к антигенсвязывающим белкам, связывающимся с IL-4R, не имеющим клинически значимых различий относительно дупилумаба по своей безопасности, чистоте и/или активности.

[072] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против IL-4R человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR, имеющую 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности в отношении SEQ ID NO: 1.

[073] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против IL-4R человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит LCVR, имеющую 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности в отношении SEQ ID NO: 2.

[074] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против IL-4R человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, содержащую не более 5 замен аминокислот. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против IL-4R человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит LCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, содержащую не более 2 замен аминокислот.

[075] Идентичность последовательности можно измерять известными в этой области способами (например, GAP, BESTFIT и BLAST).

[076] Настоящее изобретение также включает использование антител против IL-4R в способах лечения злокачественных новообразований, где антитела против IL-4R включают варианты любых из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, представленных в настоящем описании, имеющих одну или более консервативных аминокислотных замен. Например, настоящее изобретение включает использование антител против IL-4R, имеющих аминокислотные последовательности HCVR, LCVR и/или CDR с, например, 10 или менее, 8 или менее, 6 или менее, 4 или менее и т.д. консервативных аминокислотных замен относительно любых из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, представленных в настоящем описании.

[077] Другие антитела против IL-4Rα, которые можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению, включают, например, антитело известное в этой области как AMG317 (Corren et al., 2010, Am J Respir Crit Care Med., 181(8):788-796), или MEDI 9314, или любые из антител против IL-4Rα, описанных в патенте США № 7186809, патенте США № 7605237, патенте США № 7638606, патенте США № 8092804, патенте США № 8679487 или патенте США № 8877189. Части публикаций, процитированных в настоящем описании, в которых определены антитела против IL-4Rα, включены, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки.

[078] Антитела против IL-4Rα, используемые в контексте способов по настоящему изобретению, могут иметь pH-зависимые характеристики связывания. Например, антитело против IL-4Rα для использования в способах по настоящему изобретению может проявлять сниженное связывание с IL-4Rα при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. Альтернативно, антитело против IL-4Rα по настоящему изобретению может проявлять повышенное связывание с его антигеном при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. Выражение "кислый pH" включает значения pH менее приблизительно 6,2, например, приблизительно 6,0, 5,95, 5,9, 5,85, 5,8, 5,75, 5,7, 5,65, 5,6, 5,55, 5,5, 5,45, 5,4, 5,35, 5,3, 5,25, 5,2, 5,15, 5,1, 5,05, 5,0 или менее. В рамках изобретения выражение "нейтральный pH" означает pH от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,4. Выражение "нейтральный pH" включает значения pH приблизительно 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35 и 7,4.

[079] В некоторых случаях "сниженное связывание с IL-4Rα при кислом pH по сравнению с нейтральным pH" выражают в терминах соотношения значения K_D антитела, связывающегося с IL-4Rα, при кислом pH со значением K_D антитела, связывающегося с IL-4Rα, при нейтральном pH (или наоборот). Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент можно считать проявляющим "сниженное связывание с IL-4Rα при кислом pH по сравнению с нейтральным pH" в целях по настоящему изобретению, если антитело или его антигенсвязывающий фрагмент демонстрирует соотношение K_D при кислом/нейтральном pH приблизительно 3,0 или более. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления соотношение K_D при кислом/нейтральном pH у антитела или антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению может составлять приблизительно 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 20,0, 25,0, 30,0, 40,0, 50,0, 60,0, 70,0, 100,0 или более.

[080] Антитела с pH-зависимыми характеристиками связывания можно получать, например, посредством скрининга популяции антител на сниженное (или повышенное) связывание с конкретным антигеном при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. Кроме того, модификации антигенсвязывающего домена на аминокислотном уровне могут приводить к получению антител с pH-зависимыми характеристиками. Например, заменяя одну или более аминокислот антигенсвязывающего домена (например, в CDR) остатком гистидина, можно получать антитело со сниженным связыванием антигена при кислом pH относительно нейтрального pH. В рамках изобретения выражение "кислый pH" означает pH 6,0 или менее.

Ингибиторы PD-1

[081] Способы, представленные в настоящем описании, включают введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества ингибитора PD-1. В рамках изобретения термин "ингибитор PD-1" относится к любой молекуле, способной ингибировать, блокировать, устранять или мешать активности или экспрессии PD-1. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD-1 может являться антителом, низкомолекулярным соединением, нуклеиновой кислотой, полипептидом или его функциональным фрагментом или вариантом. Неограничивающие примеры подходящих антител-ингибиторов PD-1 включают антитела против PD-1 и его антигенсвязывающие фрагменты, антитела против PD-L1 и его антигенсвязывающие фрагменты и антитела против PD-L2 и его антигенсвязывающие фрагменты. Другие неограничивающие примеры подходящих ингибиторов PD-1 включают молекулы РНКи, такие как молекулы РНКи против PD-1, РНКи против PD-L1 и РНКи против PD-L2, антисмысловые молекулы, такие как антисмысловая РНК против PD-1, антисмысловая РНК против PD-L1 и антисмысловая РНК против PD-L2, и доминантно-негативные белки, такие как доминантно-негативный белок PD-1, доминантно-негативный белок PD-L1 и доминантно-негативный белок PD-L2. Некоторые примеры указанных выше ингибиторов PD-1 описаны, например, в патентах США №№ 9308236, 10011656 и патентной заявке США № 20170290808, части которых, где определены ингибиторы PD-1, включены, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки.

Антитела против PD-1 и его антигенсвязывающие фрагменты

[082] В некоторых вариантах осуществления ингибиторы PD-1, используемые в способах, представленных в настоящем описании, являются антителами или их антигенсвязывающими фрагментами, специфически связывающимися с PD-1.

[083] Термины "антитело", "антигенсвязывающий фрагмент", "антитело человека", "рекомбинантное антитело" и другие родственные термины определены ниже. В контексте антител против PD-1 и их антигенсвязывающих фрагментов настоящее изобретение включает использование биспецифических антител, где одно плечо иммуноглобулина является специфическим для PD-1 или его фрагмента, а другое плечо иммуноглобулина является специфическим для второй терапевтической мишени или конъюгировано с терапевтическим остатком. Неограничивающие примеры биспецифических форматов, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения, включают, например, биспецифические форматы на основе scFv или диатела, слитые белки IgG-scFv, Ig с двойным вариабельным доменом ((DVD)-Ig), квадрому, "выступы-во-впадину", общую легкую цепь (например, общую легкую цепь с "выступами-во-впадину" и т.д.), CrossMab, CrossFab, (SEED)-тело, лейциновую молнию, дуотело, IgG1/IgG2, Fab двойного действия (DAF)-IgG и биспецифические форматы Mab² (см. обзор указанных выше форматов, например, в Klein et al. 2012, mAbs 4(6):653-663 и цитируемых в ней ссылках). Биспецифические антитела также можно конструировать с использованием конъюгации пептид/нуклеиновая кислота, например, где неприродные аминокислоты с ортогональной химической активностью используют для получения сайт-специфических конъюгатов антитело-олигонуклеотид, которые затем самособираются в мультимерные комплексы с определенным составом, валентностью и геометрией (см., например, Kazane et al., J. Am. Chem. Soc.,2013, 135(1):340-46).

[084] Термин "специфически связывается" или т.п. означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует комплекс с антигеном, являющийся относительно стабильным в физиологических условиях. Способы определения того, связывается ли специфически антитело с антигеном, хорошо известны в этой области и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т.п. Например, антитело, "специфически связывающееся" с PD-1, в рамках изобретения включает антитела, связывающиеся с PD-1 или его частью с K_D менее приблизительно 500 нМ, менее приблизительно 300 нМ, менее приблизительно 200 нМ, менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 90 нМ, менее приблизительно 80 нМ, менее приблизительно 70 нМ, менее приблизительно 60 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 40 нМ, менее приблизительно 30 нМ, менее приблизительно 20 нМ, менее приблизительно 10 нМ, менее приблизительно 5 нМ, менее приблизительно 4 нМ, менее приблизительно 3 нМ, менее приблизительно 2 нМ, менее приблизительно 1 нМ или менее приблизительно 0,5 нМ, что измеряют с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса. Однако выделенное антитело, специфически связывающееся с PD-1 человека, может иметь перекрестную реактивность в отношении других антигенов, таких как молекулы PD-1 других биологических видов (не принадлежащие человеку).

[085] В некоторых иллюстративных вариантах осуществления антитело против PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), вариабельную область легкой цепи (LCVR) и/или определяющие комплементарность области (CDR), содержащие аминокислотные последовательности любых из антител против PD-1, описанных в патенте США № 9987500, таким образом, включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления антитело против PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, которое можно использовать в контексте настоящего изобретения, содержит определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR) вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит три HCDR (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три LCDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18. В других вариантах осуществления антитело против PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR, содержащую SEQ ID NO: 11, и LCVR, содержащую SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают использование антитела против PD-1, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20. Примером антитела, содержащего HCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и LCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, является полностью человеческое антитело против PD-1, известное как цемиплимаб (также известный как REGN2810) (LIBTAYO®).

[086] В некоторых иллюстративных вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают использование REGN2810 или его биоэквивалента. В рамках изобретения термин "биоэквивалент" в отношении антител против PD-1 относится к антителам против PD-1 или PD-1-связывающим белкам или их фрагментам, являющимся фармацевтическими эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, имеющими скорость и/или степень абсорбции, не проявляющую значимых различий относительно референсного антитела (например, REGN2810) при введении в той же молярной дозе в схожих экспериментальных условиях в однократной дозе или многократных дозах; термин "биоэквивалент" также включает антигенсвязывающие белки, связывающиеся с PD-1 и не имеющие клинически значимых различий относительно REGN2810 в отношении безопасности, чистоты и/или активности.

[087] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против PD-1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR, имеющею 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности в отношении SEQ ID NO: 11.

[088] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против PD-1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит LCVR, имеющую 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности в отношении SEQ ID NO: 12.

[089] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против PD-1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, содержащую не более 5 замен аминокислот. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против PD-1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит LCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, содержащую не более 2 замен аминокислот.

[090] Идентичность последовательности можно измерять известными в этой области способами (например, GAP, BESTFIT и BLAST).

[091] Настоящее изобретение также включает использование антител против PD-1 в способах лечения злокачественных новообразований, где антитела против PD-1 включают варианты любых аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, представленных в настоящем описании, содержащих одну или более консервативных аминокислотных замен. Например, настоящее изобретение включает использование антител против PD-1, содержащих аминокислотные последовательности HCVR, LCVR и/или CDR, например, с 10 или менее, 8 или менее, 6 или менее, 4 или менее и т.д. консервативными аминокислотными заменами относительно любых из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, представленных в настоящем описании.

[092] Другие антитела против PD-1, которые можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению включают, например, антитела, известные в этой области как ниволумаб, пембролизумаб, MEDI0608, пидилизумаб, BI 754091, спартализумаб (также известный как PDR001), камрелизумаб (также известный как SHR-1210), синтилимаб, AGEN2034, JNJ-63723283, MCLA-134, или любые из антител против PD-1, описанных в патентах США №№ 6808710, 7488802, 8008449, 8168757, 8354509, 8609089, 8686119, 8779105, 8900587 и 9987500 и в патентных публикациях №№ WO2006/121168, WO2009/114335. Части публикаций, процитированных в настоящем описании, в которых определены антитела против PD-1, включены, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки.

[093] Антитела против PD-1, используемые в контексте способов по настоящему изобретению, могут иметь pH-зависимые характеристики связывания. Например, антитело против PD-1 для использования в способах по настоящему изобретению может проявлять сниженное связывание с PD-1 при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. Альтернативно, антитело против PD-1 по настоящему изобретению может проявлять повышенное связывание со своим антигеном при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. Выражение "кислый pH" включает значения pH менее приблизительно 6,2, например, приблизительно 6,0, 5,95, 5,9, 5,85, 5,8, 5,75, 5,7, 5,65, 5,6, 5,55, 5,5, 5,45, 5,4, 5,35, 5,3, 5,25, 5,2, 5,15, 5,1, 5,05, 5,0 или менее. В рамках изобретения выражение "нейтральный pH" означает pH от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,4. Выражение "нейтральный pH" включает значения pH приблизительно 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35 и 7,4.

[094] В некоторых случаях "сниженное связывание с PD-1 при кислом pH по сравнению с нейтральным pH" выражают в терминах соотношения значения K_D антитела, связывающегося с PD-1, при кислом pH и значения K_D антитела, связывающегося с PD-1, при нейтральном pH (или наоборот). Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент можно считать проявляющим "сниженное связывание с PD-1 при кислом pH по сравнению с нейтральным pH" в целях по настоящему изобретению, если антитело или его антигенсвязывающий фрагмент проявляет соотношение K_D при кислом/нейтральном pH приблизительно 3,0 или более. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления соотношение K_D при кислом/нейтральном pH для антитела или антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению может составлять приблизительно 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 20,0, 25,0, 30,0, 40,0, 50,0, 60,0, 70,0, 100,0 или более.

[095] Антитела с pH-зависимыми характеристиками связывания можно получать, например, посредством скрининга популяции антител на сниженное (или повышенное) связывание с конкретным антигеном при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. Кроме того, модификации антигенсвязывающего домена на аминокислотном уровне могут приводить к получению антител с pH-зависимыми характеристиками. Например, заменяя одну или более аминокислот антигенсвязывающего домена (например, в CDR) остатком гистидина, можно получать антитело со сниженным связыванием антигена при кислом pH относительно нейтрального pH. В рамках изобретения выражение "кислый pH" означает pH 6,0 или менее.

Антитела против PD-L1 и его антигенсвязывающие фрагменты

[096] В некоторых вариантах осуществления ингибиторы PD-1, используемые в способах, представленных в настоящем описании, являются антителами или их антигенсвязывающими фрагментами, специфически связывающимися с PD-L1. Например, антитело, "специфически связывающееся" с PD-L1, в рамках изобретения включает антитела, связывающиеся с PD-L1 или его частью с K_D приблизительно 1×10^-8 M или менее (например, меньшая K_D означает более сильное связывание). Термин "высокоаффинное" антитело против PD-L1 относится к mAb, имеющим аффинность связывания с PD-L1, выраженную как K_D по меньшей мере 10^-8 M, предпочтительно - 10^-9M, более предпочтительно - 10^-10 M, даже более предпочтительно - 10^-11 M, даже более предпочтительно - 10^-12 M, что измеряют посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, BIACORE™ или определения аффинности в растворе посредством ELISA. Однако выделенное антитело, специфически связывающееся с PD-L1 человека, может иметь перекрестную реактивность в отношении других антигенов, таких как молекулы PD-L1 другого биологического вида (не принадлежащие человеку).

[097] В некоторых иллюстративных вариантах осуществления антитело против PD-L1, или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), вариабельную область легкой цепи (LCVR) и/или определяющие комплементарность области (CDR), содержащие аминокислотные последовательности любых из антител против PD-L1, описанных в патенте США № 9938345, таким образом, включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления антитело против PD-L1 или его антигенсвязывающий фрагмент, которое можно использовать в контексте настоящего изобретения, содержит определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR) и определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR) вариабельной области легкой цепи (LCVR), где HCVR и LCVR содержат аминокислотные последовательности антитела против PD-L1, обозначенного как H1H8314N в патенте США № 9938345. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-L1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит три HCDR (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три LCDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3 содержат аминокислотные последовательности антитела против PD-L1, обозначенного как H1H8314N в патенте США № 9938345. В других вариантах осуществления антитело против PD-L1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR и LCVR, содержащие аминокислотные последовательности антитела против PD-L1, обозначенного как H1H8314N в патенте США № 9938345.

[098] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против PD-L1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит LCVR, имеющую 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности в отношении аминокислотной последовательности LCVR антитела против PD-L1, обозначенного как H1H8314N в патенте США № 9938345.

[099] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против PD-L1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR, содержащую аминокислотную последовательность антитела против PD-L1, обозначенного как H1H8314N в патенте США № 9938345, содержащую не более 5 замен аминокислот. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против PD-L1 человека или его антигенсвязывающий фрагмент содержит LCVR, содержащую аминокислотную последовательность антитела против PD-L1, обозначенного как H1H8314N в патенте США № 9938345, содержащую не более 2 замен аминокислот.

[0100] Идентичность последовательности можно измерять известными в этой области способами (например, GAP, BESTFIT и BLAST).

[0101] Настоящее изобретение также включает использование антител против PD-L1 в способах лечения злокачественных новообразований, где антитела против PD-L1 включают варианты любых из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, представленных в настоящем описании, содержащих одну или более консервативных аминокислотных замен. Например, настоящее изобретение включает использование антител против PD-L1, содержащих аминокислотные последовательности HCVR, LCVR и/или CDR, например, с 10 или менее, 8 или менее, 6 или менее, 4 или менее и т.д. консервативными аминокислотными заменами относительно любых из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, представленных в настоящем описании.

[0102] Другие антитела против PD-L1, которые можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению, включают, например, антитела известный в этой области как MDX-1105, атезолизумаб (TECENTRIQ™), дурвалумаб (IMFINZI™), авелумаб (BAVENCIO™), LY3300054, FAZ053, STI-1014, CX-072, KN035 (Zhang et al., Cell Discovery, 3, 170004 (March 2017)), CK-301 (Gorelik et al., American Association for Cancer Research Annual Meeting (AACR), 2016-04-04 Abstract 4606), или любые из других антител против PD-L1, описанных в патентных публикациях №№ US7943743, US8217149, US9402899, US9624298, US 9938345, WO 2007/005874, WO 2010/077634, WO 2013/181452, WO2013/181634, WO2016/149201, WO 2017/034916 или EP3177649. Части публикаций, процитированных в настоящем описании, в которых определены антитела против PD-L1, включены, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки.

Фармацевтические композиции и введение

[0103] Описанные способы включают введение нуждающемуся в этом индивидууму ингибитора пути IL-4/IL-13 в комбинации с ингибитором PD-1, где ингибиторы содержатся в отдельных фармацевтических композициях или комбинированной (единой) фармацевтической композиции. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно составлять с фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами и другими средствами, обеспечивающими подходящий перенос, доставку, переносимость и т.п. Множество подходящих составов можно найти в справочнике, известном всем химикам-фармацевтам: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa. Эти составы включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, липид-содержащие (катионные или анионные) везикулы (такие как LIPOFECTIN™), конъюгаты ДНК, безводные абсорбционные пасты, эмульсии "масло-в-воде" и "вода-в-масле", эмульсии карбовакса (полиэтиленгликолей с разными молекулярными массами), полутвердые гели, и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. Также см. Powell et al.,1998, J Pharm Sci Technol, 52:238-311.

[0104] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции по настоящему изобретению содержат терапевтически эффективное количество ингибитора пути IL-4/IL-13 (такого как антитело против IL-4R) и/или терапевтически эффективное количество ингибитора PD-1 (такого как антитело против PD-1) и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции по настоящему изобретению составляют для введения посредством инъекции, такой как внутривенная инъекция.

[0105] Известны различные системы доставки, и их можно использовать для введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению, например, инкапсуляция в липосомах, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать мутантные вирусы, рецептор-опосредованный эндоцитоз (см., например, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432). Способы введения включают, в качестве неограничивающих примеров, интрадермальный, внутримышечный, интраперитонеальный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный и пероральный пути. Композиции можно вводить любым общепринятым путем, например, посредством инфузии или болюсной инъекции, посредством абсорбции через эпителиальную или кожно-слизистую выстилку (например, слизистую оболочку полости рта, слизистую оболочку прямой кишки и тонкого кишечника и т.д.), и их можно вводить вместе с другими биологически активными средствами.

[0106] Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить подкожно или внутривенно с помощью стандартной иглы и шприца. Кроме того, в контексте подкожного введения устройство шприц-ручку можно использовать в доставке фармацевтической композиции настоящего изобретения. Такое устройство шприц-ручка может являться многоразовым или одноразовым. В многоразовом устройстве шприц-ручке, как правило, используют заменяемый картридж, содержащий фармацевтическую композицию. После того как вся фармацевтическая композиция в картридже введена, и картридж опустел, пустой картридж легко можно выбрасывать и заменять новым картриджем, содержащим фармацевтическую композицию. Затем устройство шприц-ручку можно использовать повторно. В одноразовом устройстве шприц-ручке нет заменяемого картриджа. В отличие от этого, одноразовое устройство шприц-ручку поставляют заранее наполненным фармацевтической композицией, содержащейся в резервуаре в устройстве. После опустошения резервуара с фармацевтической композицией, выбрасывают все устройство.

[0107] В некоторых случаях одну или обе фармацевтические композиции можно вводить с помощью системы с контролируемым высвобождением. В одном из вариантов осуществления можно использовать насос. В другом варианте осуществления можно использовать полимерные материалы. См. Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Fla. В еще одном варианте осуществления систему с контролируемым высвобождением можно помещать вблизи мишени композиции, и, таким образом, необходима только фракция системной дозы (см., например, Goodson, 1984, Medical Applications of Controlled Release, vol. 2, pp. 115-138). Другие системы с контролируемым высвобождением описаны в Langer, 1990, Science 249:1527-1533.

[0108] Подходящие инъецируемые препараты могут включать лекарственные формы для внутривенной, подкожной, внутрикожной и внутримышечной инъекций, капельной инфузии и т.д. Эти инъецируемые препараты можно получать известными способами. Например, инъецируемые препараты можно получать, например, посредством растворения, суспендирования или эмульгирования описанного выше антитела или его соли в стерильной водной среде или масляной среде, общепринято используемой для инъекций. В качестве водной среды для инъекций, можно использовать, например, физиологический раствор, изотонический раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные средства и т.д., которые можно использовать в комбинации с подходящим солюбилизатором, таким как спирт (например, этанол), полиол (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионное поверхностно-активное вещество [например, полисорбат 80, HCO-50 (аддукт полиоксиэтилена (50 моль) и гидрогенизированного касторового масла)] и т.д. В качестве масляной среды можно использовать, например, сезамовое масло, соевое масло и т.д., которое можно использовать в комбинации с солюбилизатором, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т.д. Полученным таким образом инъекционным препаратом, предпочтительно, наполняют подходящую ампулу.

[0109] Предпочтительно, фармацевтические композиции для перорального или парентерального использования, описанного выше, получают в лекарственных формах в однократной дозе, подходящих для дозы активных ингредиентов. Такие лекарственные формы в однократной дозе включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекционные препараты (ампулы), суппозитории и т.д.

[0110] Инъецируемые составы фармацевтических композиций можно получать известными способами. Например, инъецируемый состав можно получать, например, посредством растворения, суспендирования или эмульгирования ингибитора (например, антитела против PD-1 или антитела против IL-4R) или его соли в стерильной водной среде или масляной среде, общепринято используемой для инъекций. В качестве водной среды для инъекций можно использовать, например, физиологический раствор, изотонический раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные средства и т.д., которые можно использовать в комбинации с подходящим солюбилизатором, таким как спирт (например, этанол), полиол (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионное поверхностно-активное вещество [например, полисорбат 80, HCO-50 (аддукт полиоксиэтилена (50 моль) и гидрогенизированного касторового масла)] и т.д. В качестве масляной среды можно использовать, например, сезамовое масло, соевое масло и т.д., которое можно использовать в комбинации с солюбилизатором, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т.д. Полученным таким образом инъецируемым составом, предпочтительно, наполняют подходящую ампулу для инъекций. В некоторых вариантах осуществления инъецируемый состав может включать концентрацию ингибитора, например, антитела против PD-1 или антитела против IL-4R, и один или более фармацевтически приемлемых растворителейи (например, дистиллированную воду, физиологический раствор и т.д.).

[0111] Примеры фармацевтических композиций, содержащих антитело против IL-4R, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения, описаны, например, в патенте США № 8945559, части которого, где определены фармацевтические композиции, содержащие антитело против IL-4R, включены, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки. Примеры фармацевтических композиций, содержащих антитело против PD-1, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения, описаны, например, в патентной заявке США № 2019/0040137, части которой, где определены фармацевтические композиции, содержащие антитело против PD-1, включены, таким образом, в настоящее описание в качестве ссылки.

Фармацевтическая система доставки

[0112] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции для использования в описанных способах можно предоставлять в фармацевтической системе доставки, содержащей: (i) фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество ингибитора пути IL-4/IL-13; и (ii) фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество ингибитора PD-1. В этом аспекте изобретения фармацевтические композиции отделены друг от друга, но их можно предоставлять в единой фармацевтической системе доставки или в виде набора, т.е. фармацевтической системе доставки с сопутствующими письменными инструкциями по использованию ингибитора пути IL-4/IL-13 в комбинации с ингибитором PD-1 для лечения или ингибирования роста опухоли, как представлено в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая система доставки содержит одну или более доз ингибитора пути IL-4/IL-13. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая система доставки содержит одну или более доз ингибитора PD-1.

[0113] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая система доставки дополнительно содержит одно или более дополнительных терапевтических средств, таких как любые из указанных выше дополнительных терапевтических средств. Например, фармацевтическая система доставки, содержащая фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор пути IL-4/IL-13, и фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор PD-1, может дополнительно включать одно или более дополнительных терапевтических средств, выбранных из циклофосфамида, противоопухолевой вакцины, ингибитора LAG3 (например, антитела против LAG3), ингибитора CTLA-4 (например, ипилимумаба), агониста GITR (например, антитела против GITR), ингибитора TIM3, активатора CD28, ингибитора BTLA, ингибитора TIGIT, ингибитора CD38, ингибитора CD47, ингибитора IDO, антагониста VEGF (например, "VEGF-ловушки", такой как афлиберцепт или другие VEGF-ингибирующие слитые белки, описанные в патенте США №S 7087411, или антитела против VEGF или его антигенсвязывающий фрагмент (например, бевацизумаб или ранибизумаб) или низкомолекулярного ингибитора киназ рецептора VEGF (например, сунитиниба, сорафениба или пазопаниба)), ингибитора Ang2 (например, несвакумаба), ингибитора TGFβ, ингибитора EGFR (например, эрлотиниба, цетуксимаба), агониста костимуляторного рецептора (например, агониста CD28), ингибитора VISTA, агониста CD40, ингибитора CSF1R, ингибитора CCR2, ингибитора CXCR4, ингибитора CXCR2, ингибитора CCR4, ингибитора CXCL12, антитела против опухолеспецифического антигена [например, CA9, CA125, MAGE3, CEA, виментина, опухоль-M2-PK, PSA, муцина-1, MART-1 и CA19-9], биспецифического антитела против CD3/против CD20, онколитического вируса, вакцины (например, бациллы Кальметта-Герена), ГМ-КСФ, цитотоксина, химиотерапевтического средства, ингибитора IL-6R (например, сарилумаба), ингибитора IL-10, цитокина, такого как IL-2, IL-7, IL-12, IL-21 и IL-15, ADC (например, ADC против CD19-DM4 и ADC против DS6-DM4), T-клеток с химерным антигенным рецептором (например, CD19-нацеленных T-клеток), противовоспалительного лекарственного средства, такого как кортикостероид, НПВС и пищевой добавки, такого как антиоксидант. В одном из вариантов осуществления фармацевтическую систему доставки используют в комбинации с хирургическим вмешательством у нуждающегося в этом индивидуума.

Схемы введения

[0114] В некоторых вариантах осуществления описанные способы включают последовательное введение терапевтически эффективного количества ингибитора пути IL-4/IL-13 в комбинации с терапевтически эффективным количеством ингибитора PD-1 нуждающемуся в этом индивидууму, где каждый ингибитор вводят индивидууму в одной или более дозах, например, как часть специальной терапевтической схемы введения. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают введение ингибиторов для аддитивной или синергической активности для лечения злокачественного новообразования, предпочтительно, зависящего от иммунитета типа 2 злокачественного новообразования, такого как рак поджелудочной железы, рак молочной железы, колоректальный рак, рак яичников, злокачественное новообразование головного мозга, рак кожи, рак предстательной железы, рак почки, рак легких, лимфома Ходжкина или рак мочевого пузыря.

[0115] В рамках изобретения термин "последовательное введение" означает, что каждую дозу ингибитора вводят индивидууму в другой момент времени, например, в разные дни, разделенные заранее определенным интервалом (например, часами, днями, неделями или месяцами). В некоторых вариантах осуществления описанные способы включают последовательное введение индивидууму одной начальной дозы ингибитора пути IL-4/IL-13, а затем одной или более вторичных доз ингибитора пути IL-4/IL-13 и, необязательно, одной или более третичных доз ингибитора пути IL-4/IL-13. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают последовательное введение индивидууму одной начальной дозы ингибитора PD-1, а затем одной или более вторичных доз ингибитора PD-1 и, необязательно, одной или более третичных доз ингибитора PD-1.

[0116] В некоторых вариантах осуществления терапевтическая схема введения включает введение одной или более доз ингибитора пути IL-4/IL-13 в комбинации с одной или более дозами ингибитора PD-1. В некоторых вариантах осуществления одну или более доз ингибитора пути IL-4/IL-13 и/или одну или более доз ингибитора PD-1 вводят индивидууму с частотой приблизительно раз в сутки, раз в два дня, раз в три дня, раз в четыре дня, раз в пять дней, раз в шесть дней, раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели, раз в четыре недели, раз в месяц, раз в два месяца, раз в три месяца, раз в четыре месяца или реже.

[0117] В рамках изобретения выражение "в комбинации с" означает, что ингибитор пути IL-4/IL-13 вводят до, после или одновременно с ингибитором PD-1. Термин "в комбинации с" также включает последовательное или одновременное введение ингибитора пути IL-4/IL-13 и ингибитора PD-1.

[0118] Например, если ингибитор пути IL-4/IL-13 вводят "до" ингибитора PD-1, ингибитор пути IL-4/IL-13 можно вводить за более чем 150 часов, приблизительно 150 часов, приблизительно 100 часов, приблизительно 72 часа, приблизительно 60 часов, приблизительно 48 часов, приблизительно 36 часов, приблизительно 24 часа, приблизительно 12 часов, приблизительно 10 часов, приблизительно 8 часов, приблизительно 6 часов, приблизительно 4 часа, приблизительно 2 часа, приблизительно 1 час, приблизительно 30 минут или приблизительно 15 минут до введения ингибитора PD-1. Если ингибитор пути IL-4/IL-13 вводят "после" ингибитора PD-1, ингибитор пути IL-4/IL-13 можно вводить через приблизительно 15 минут, приблизительно 30 минут, приблизительно 1 час, приблизительно 2 часа, приблизительно 4 часа, приблизительно 6 часов, приблизительно 8 часов, приблизительно 10 часов, приблизительно 12 часов, приблизительно 24 часа, приблизительно 36 часов, приблизительно 48 часов, приблизительно 60 часов, приблизительно 72 часа или более 72 часов после введения ингибитора PD-1. Введение ингибитора пути IL-4/IL-13 "одновременно" с ингибитором PD-1 означает, что ингибитор пути IL-4/IL-13 вводят индивидууму в отдельной лекарственной форме в пределах 15 минут (до, после или одновременно) от введения ингибитора PD-1 или вводят индивидууму в виде единой комбинированной лекарственной формы, содержащей и ингибитор пути IL-4/IL-13, и ингибитор PD-1.

[0119] В некоторых вариантах осуществления описанные способы включают использование дополнительного (например, третьего) терапевтического средства или способа терапии, таких как любое из средств или способов терапии, указанных в настоящем описании.

[0120] В рамках изобретения термины "начальный", "вторичный", "третичный" и т.д. относятся к временной последовательности введения. Таким образом, "начальная доза" является дозой, которую вводят в начале схемы лечения (также обозначаемой как "базовая доза"); "вторичная доза" является дозой, вводимой после начальной дозы; и "третичная доза" является дозой, вводимой после вторичной дозы. Начальная, вторичная и третичная дозы могут содержать одинаковое количество ингибитора пути IL-4/IL-13 или ингибитора PD-1. Однако в некоторых вариантах осуществления количество, содержащееся в начальной, вторичной и/или третичной дозах, варьируют (например, его корректируют в сторону повышения или понижения, при необходимости) в течение лечения. В некоторых вариантах осуществления одну или более (например, 1, 2, 3, 4 или 5) доз вводят в начале схемы лечения как "ударные дозы" с последующими дозами, которые вводят реже (например, "поддерживающие дозы"). Например, ингибитор пути IL-4/IL-13 или ингибитор PD-1 можно вводить пациенту со злокачественным новообразованием в ударной дозе от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг с последующими одной или более поддерживающими дозами от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг массы тела пациента.

[0121] В одном из примеров вариантов осуществления настоящего изобретения каждую вторичную и/или третичную дозу вводят через ½-14 недель или более (например, ½, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½ или более недель) после непосредственно предшествующей дозы. В рамках изобретения фраза "непосредственно предшествующая доза" в последовательности множества введений означает дозу антитела против PD-1, вводимую индивидууму перед введением следующей дозы в последовательности без промежуточных доз.

[0122] Аналогично, "начальный цикл лечения" является циклом лечения, проводимым в начале схемы лечения; "вторичный цикл лечения" является циклом лечения, проводимым после начального цикла лечения; и "третичный цикл лечения" является циклом лечения, проводимым после вторичного цикла лечения. В контексте настоящего изобретения циклы лечения могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга.

Доза

[0123] В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна доза ингибитора пути IL-4/IL-13 содержит приблизительно 0,1-50 мг/кг, например, приблизительно 0,1-10 мг/кг массы тела индивидуума. Например, по меньшей мере одна доза может содержать приблизительно 0,1, 1, 0,3, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мг/кг массы тела индивидуума. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна доза ингибитора пути IL-4/IL-13 содержит приблизительно 0,05-1000 мг ингибитора пути IL-4/IL-13, например, приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 мг или более ингибитора пути IL-4/IL-13. В одном из вариантов осуществления ингибитор пути IL-4/IL-13 является REGN668 (дупилумабом).

[0124] В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна доза ингибитора PD-1 содержит приблизительно 0,1-20 мг/кг массы тела индивидуума, например, приблизительно 0,1, 1, 0,3, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мг/кг массы тела индивидуума. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна доза ингибитора PD-1 содержит приблизительно 0,05-500 мг ингибитора PD-1, например, приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 мг или более ингибитора PD-1. В одном из вариантов осуществления ингибитор PD-1 является REGN2810 (цемиплимабом).

[0125] Количества ингибитора пути IL-4/IL-13 и ингибитора PD-1, вводимые индивидууму в способах, представленные в настоящем описании, представляют собой терапевтически эффективное количество. В рамках изобретения термин "терапевтически эффективное количество" означает количество каждого ингибитора, приводящее к одному или более из: (a) снижения тяжести или длительности симптома или признака злокачественного новообразования, например, опухолевого очага; (b) ингибирования роста опухоли или повышения некроза опухоли, уменьшения опухоли и/или исчезновения опухоли; (c) задержки роста и развития опухоли; (d) ингибирования метастазирования опухоли; (e) профилактики рецидивирования роста опухоли; (f) повышения выживаемости индивидуума со злокачественным новообразованием; и/или (g) снижения использования или потребности в общепринятой противоопухолевой терапии (например, устранения потребности в хирургическом вмешательстве или снижения или устранения использования химиотерапевтических или цитотоксических средств) по сравнению с неподвергнутым лечению индивидуумом или индивидуумом, которого лечили любым ингибитором в качестве монотерапии.

[0126] В случае ингибитора пути IL-4/IL-13 (например, антитела против IL-4R) терапевтически эффективное количество может составлять от приблизительно 0,05 мг до приблизительно 1000 мг, например, приблизительно 0,05 мг, приблизительно 0,1 мг, приблизительно 1,0 мг, приблизительно 1,5 мг, приблизительно 2,0 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 110 мг, приблизительно 120 мг, приблизительно 130 мг, приблизительно 140 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 160 мг, приблизительно 170 мг, приблизительно 180 мг, приблизительно 190 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 210 мг, приблизительно 220 мг, приблизительно 230 мг, приблизительно 240 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 260 мг, приблизительно 270 мг, приблизительно 280 мг, приблизительно 290 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 310 мг, приблизительно 320 мг, приблизительно 330 мг, приблизительно 340 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 360 мг, приблизительно 370 мг, приблизительно 380 мг, приблизительно 390 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 410 мг, приблизительно 420 мг, приблизительно 430 мг, приблизительно 440 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 460 мг, приблизительно 470 мг, приблизительно 480 мг, приблизительно 490 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 510 мг, приблизительно 520 мг, приблизительно 530 мг, приблизительно 540 мг, приблизительно 550 мг, приблизительно 560 мг, приблизительно 570 мг, приблизительно 580 мг, приблизительно 590 мг, приблизительно 600 мг, приблизительно 610 мг, приблизительно 620 мг, приблизительно 630 мг, приблизительно 640 мг, приблизительно 650 мг, приблизительно 660 мг, приблизительно 670 мг, приблизительно 680 мг, приблизительно 690 мг, приблизительно 700 мг, приблизительно 710 мг, приблизительно 720 мг, приблизительно 730 мг, приблизительно 740 мг, приблизительно 750 мг, приблизительно 760 мг, приблизительно 770 мг, приблизительно 780 мг, приблизительно 790 мг, приблизительно 800 мг, приблизительно 810 мг, приблизительно 820 мг, приблизительно 830 мг, приблизительно 840 мг, приблизительно 850 мг, приблизительно 860 мг, приблизительно 870 мг, приблизительно 880 мг, приблизительно 890 мг, приблизительно 900 мг, приблизительно 910 мг, приблизительно 920 мг, приблизительно 930 мг, приблизительно 940 мг, приблизительно 950 мг, приблизительно 960 мг, приблизительно 970 мг, приблизительно 980 мг, приблизительно 990 мг или приблизительно 1000 мг ингибитора пути IL-4/IL-13. В некоторых вариантах осуществления индивидууму вводят 10 мг, 25 мг, 50 мг, 75 мг, 150 мг, 300 мг, 600 мг или 900 мг ингибитора пути IL-4/IL-13.

[0127] В случае ингибитора PD-1 (например, антитела против PD-1) терапевтически эффективное количество может составлять от приблизительно 0,05 мг до приблизительно 500 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 500 мг, от приблизительно 10 мг до приблизительно 450 мг, от приблизительно 50 мг до приблизительно 400 мг, от приблизительно 75 мг до приблизительно 350 мг или от приблизительно 100 мг до приблизительно 300 мг антитела. Например, в различных вариантах осуществления количество ингибитора PD-1 составляет приблизительно 0,05 мг, приблизительно 0,1 мг, приблизительно 1,0 мг, приблизительно 1,5 мг, приблизительно 2,0 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 110 мг, приблизительно 120 мг, приблизительно 130 мг, приблизительно 140 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 160 мг, приблизительно 170 мг, приблизительно 180 мг, приблизительно 190 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 210 мг, приблизительно 220 мг, приблизительно 230 мг, приблизительно 240 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 260 мг, приблизительно 270 мг, приблизительно 280 мг, приблизительно 290 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 310 мг, приблизительно 320 мг, приблизительно 330 мг, приблизительно 340 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 360 мг, приблизительно 370 мг, приблизительно 380 мг, приблизительно 390 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 410 мг, приблизительно 420 мг, приблизительно 430 мг, приблизительно 440 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 460 мг, приблизительно 470 мг, приблизительно 480 мг, приблизительно 490 мг или приблизительно 500 мг ингибитора PD-1.

[0128] В некоторых вариантах осуществления количество ингибитора пути IL-4/IL-13 (например, антитела против IL-4R) и/или ингибитора PD-1 (например, антитела против PD-1) в отдельной дозе, вводимой индивидууму, может быть меньше терапевтически эффективного количества, т.е. быть субтерапевтической дозой. Например, если терапевтически эффективное количество ингибитора содержит 3 мг/кг, субтерапевтическая доза содержит количество менее 3 мг/кг, например, 2 мг/кг, 1,5 мг/кг, 1 мг/кг, 0,5 мг/кг или 0,3 мг/кг. Как определено в настоящем описании, термин "субтерапевтическая доза" относится к количеству ингибитора, которое само по себе не приводит к терапевтическому эффекту. Однако в некоторых вариантах осуществления можно вводить множество субтерапевтических доз ингибитора для совокупного достижения терапевтического эффекта у индивидуума.

ПРИМЕРЫ

[0129] Далее настоящее изобретение описывают с помощью следующих примеров. Использование этих и других примеров где-либо в настоящем описании является исключительно иллюстративным и не ограничивает каким-либо образом объем и сущность настоящего изобретения или любой иллюстративной формы. Аналогично, изобретение не ограничено какими-либо конкретными предпочтительными вариантами осуществления, представленными в настоящем описании. Фактически, модификации и варианты изобретения могут быть очевидны специалистам в этой области после прочтения описания, и их можно осуществлять без отклонения от его сущности и объема. Таким образом, настоящее изобретение ограничено только формулой изобретения вместе с полным объемом эквивалентов, к которым относится формула изобретения. Кроме того, хотя были предприняты попытки обеспечить точность в отношении используемых чисел (например, количеств, температуры и т.д.), необходимо учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иначе, части являются массовыми частями, молекулярная масса является средней молекулярной массой, температура указана в градусах Цельсия, и давление является атмосферным или близким к нему.

Пример 1: Повышенная эффективность in vivo антитела против IL-4R в комбинации с антителом против PD-1 в модели рака поджелудочной железы

[0130] Этот пример относится к исследованию, в котором показана повышенная противоопухолевая эффективность блокады IL-4R при монотерапии в отдельности и в комбинации с терапией против PD-1 in vivo с использованием модели подкожной имплантации клеток органоидов KP, т.е. модели рака поджелудочной железы человека на мышах, являющегося зависящим от иммунитета типа 2 злокачественным новообразованием. В этом исследовании 8-10 мышам на группу лечения имплантировали клетки опухолевого органоида KP и лечение несущих опухоли мышей начинали, когда начальные объемы опухолей находились в диапазоне от 30 до 110 мм³.

[0131] Ингибитором пути IL-4/IL-13, используемым в этом примере, являлось антитело мыши против IL-4R, обозначенное как REGN1103, являющееся мышиным суррогатным антителом из моноклонального антитела человека, обозначенного как REGN668 (также известного как дупилумаб), нацеленного на IL-4R человека. REGN1103 содержит пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR SEQ ID NO: 21/22 и имеет аффинность к IL-4R мыши в диапазоне, схожем с аффинностью дупилумаба к IL-4R человека. Кроме того, REGN1103 ингибирует IL-4- и IL-13-зависимую пролиферацию линий клеток с IC₅₀ 1,9 нМ и 11 пМ, соответственно.

[0132] Ингибитором PD-1, используемым в этом примере, являлся клон антитела против PD-1 мыши, обозначенный как RPMI-14 (Bio X Cell), являющийся суррогатным антителом против PD-1, общеупотребительным для сингенных моделей опухолей на мышах.

Дизайн исследования

[0133] Для оценки того, активирован ли иммунный ответ типа 2 в моделях рака поджелудочной железы in vivo, оценивали уровни экспрессии IL-4 и IL-13 и продукции цитокина IL-4 в имплантационных моделях рака поджелудочной железы. Мышам Balb/c подкожно или ортотопически имплантировали сингенные клетки опухолевых органоидов, сконструированные для экспрессии онкогенного KRAS с сопутствующей потерей функции опухолевого супрессора P53 (KP), и через 4 недели после имплантации собирали опухоли.

[0134] Модель подкожной имплантации клеток органоидов KP также использовали для оценки противоопухолевой эффективности блокады IL-4R при монотерапии и/или в комбинации с терапией против PD-1 ICB in vivo.

Материалы и способы

[0135] Животные. Мышей Balb/c приобретали в Jackson Laboratories, и эксперименты осуществляли по руководствам, одобренным IACUC.

[0136] Получение органоидов KP. Нормальные эпителиальные органоиды поджелудочной железы выделяли из ткани поджелудочной железы мыши Balb/c дикого типа. Ткань поджелудочной железы измельчали и расщепляли в буфере с коллагеназой P (Fisher Sci, 50-100-3398) при 37°C в течение 15 мин. Суспензию клеток пропускали через фильтр 500 мкм, а затем снова через фильтр 100 мкм. Затем клетки высевали на матригель (VWR, 354234), на которой наслоена полная среда для органоидов; DME/F12, дополненная 1-кратным P/S/L-глутамином, 1-кратным B27 (Invitrogen), 1 мМ N-ацетилцистеина (Sigma-Aldrich), 10 нМ h-гастрина (Sigma-Aldrich), 50 нг/мл mEGF (Life Technologies), 1 мкг/мл mRSPO1 (Peprotech), 25 нг/мл h-ноггина (PeproTech), 100 нг/мл hFGF10 (PeproTech) и 10 мМ никотинамида (Sigma-Aldrich) (Boj et al., Mol Cell Oncol, 3(1):e1014757, 2015).

[0137] Затем полученные органоиды поддерживали в матригеле со сниженным содержанием факторов роста, на котором находится полная среда для органоидов, дополненная 10 нМ ингибитора Rock Y-27632 (Sigma-Aldrich, Y0503). Для пассажа органоиды вымывали из матригеля с использованием раствора для выделения клеток (Corning) в течение 2 часов на льду, а затем подвергали диссоциации в суспензию клеток с использованием аккутазы. Пассаж осуществляли в соотношении 1:4 раз в неделю.

[0138] Для лентивирусной трансдукции органоидов поджелудочной железы, их подвергали диссоциации в суспензию отдельных клеток и трансдуцировали с использованием лентивирусов для экспрессии KRas^V12 и для потери экспрессии p53 или для экспрессии p53^R175H с использованием способа спинфекции в присутствии полибрена (8 мкг/мл).

[0139] Затем трансдуцированные KP-органоиды ортотопически имплантировали в головку поджелудочной железы сингенных мышей Balb/c (0,1-0,5E6 клеток в 50:50 PBS/растворе матригеля на имплантацию), что приводит к росту опухоли в течение месяцев после имплантации.

[0140] Полученные опухоли KP собирали и выделяли клетки рака поджелудочной железы с использованием раствора коллагеназы XI/диспазы в течение ночи при 37°C. Затем клетки промывали в PBS и ресуспендировали в матригеле со сниженным содержанием факторов роста, на котором находится полная среда для органоидов.

Лечение

[0141] В каждой исследуемой группе (указанной в таблице 1 ниже) 8-10 мышам имплантировали клетки опухолевых органоидов KP и начинали лечение, когда опухоли развились (объемы опухолей 30-110 мм³ на исходном уровне). Мышам интраперитонеально инъецировали 25 мг/кг REGN1103 (антитела против mIL-4R) или Ab mIgG1 изотипического контроля в комбинации с 10 мг/кг антитела против mPD1 (клон RPMI-14) или IgG2a крысы изотипического контроля, начиная в день 13 после инъекции клеток KP (от 0,1E6 до 0,5E6 клеток), каждые 3-4 дня в 7 дозах.

Таблица 1

Группа Лечение 1 ISO/ISO Ab mIgG1, 25 мг/кг+IgG2a крысы, 10 мг/кг 2 IL-4R/ISO Антитело против IL-4R (REGN1103), 25 мг/кг+IgG2a крысы, 10 мг/кг 3 ISO/PD-1 Ab mIgG1, 25 мг/кг+антитело против PD-1 (RPMI-14, BioXCell), 10 мг/кг 4 IL-4R/PD-1 Антитело против IL-4R (REGN1103), 25 мг/кг+антитело против PD-1 (RPMI-14, BioXCell), 10 мг/кг

[0142] Мышам Balb/c подкожно вводили 1E5-2,5E5 сингенных клеток органоидов KP в 50:50 PBS/растворе матригеля. Клетки тестировали с использованием теста IMPACT до имплантаций in vivo. Опухоли измеряли дважды в неделю с помощью калипера, и объем вычисляли по формуле (L*W²)/2, где L является наибольшим диаметром, и W является перпендикулярным диаметром.

Результаты

[0143] Обнаружили, что экспрессия генов IL-4 и IL-13 подвергалась обширной положительной регуляции в ортотопически и подкожно имплантированных опухолях относительно нормальной поджелудочной железы, в которой отсутствует экспрессия генов IL-4 и IL-13. Аналогично, продукция цитокина IL-4, измеряемая посредством анализа ELISA, подвергалась обширной положительной регуляции в моделях ортотопических и подкожных опухолей, в то время как в нормальной поджелудочной железе не наблюдали продукцию цитокина IL-4. Эти данные свидетельствуют о том, что модели имплантации клеток органоидов KP рака поджелудочной железы экспрессируют высокие уровни IL-4 и IL-13, являющихся двумя ключевыми цитокинами, ассоциированными с иммунитетом типа 2, что, таким образом, свидетельствует о том, что иммунный ответ типа 2 активируется в этих моделях in vivo рака поджелудочной железы.

[0144] Кроме того, лечение против IL-4R повышало противоопухолевую эффективность блокады PD-1 in vivo. Результаты исследования лечения при объемах опухолей 30-110 мм³ на исходном уровне проиллюстрированы на фигурах 1A и 1B. Результаты в подгруппе подвергнутых лечению мышей с опухолями с объемом 50-110 мм³ на исходном уровне проиллюстрированы на фигурах 2A и 2B. Монотерапия против mPD-1 демонстрировала частичную противоопухолевую эффективность, при этом у 4 из 8 мышей наблюдали регрессирование опухоли, включая 2 полных ответа, в то время как монотерапия против mIL-4R не демонстрировала противоопухолевую активность. Однако комбинированное лечение против IL-4R и против PD-1 демонстрировало значительно повышенную противоопухолевую эффективность, при этом у 7 из 10 мышей наблюдали регрессирование опухоли, включая 6 полных регрессирований. Это было неожиданно превосходным результатом.

[0145] Таким образом, на иммунные ответы типа 2 с IL-4/IL-13 в зависящих от иммунитета типа 2 злокачественных новообразованиях можно эффективно направленно воздействовать посредством блокады пути IL-4/IL-13. В этом исследовании показано, что терапия против IL-4R существенно повышает противоопухолевую эффективность лечения против PD-1 до неожиданной степени в подкожной модели рака поджелудочной железы на животных, типичной для зависящих от иммунитета типа 2 злокачественных новообразований.

Пример 2: Рак поджелудочной железы человека и подтипы других типов злокачественных новообразований человека демонстрируют сильную сигнатуру иммунитета типа 2

[0146] Для оценки степени активации иммунного ответа типа 2 при разных типах злокачественных новообразований человека конструировали сигнатуру генов иммунитета типа 2, включающую ассоциированные с иммунитетом типа 2 цитокины, хемокины и их рецепторы, а также нижележащие гены-мишени иммунитета типа 2 (IL-13RA2, IL-25, IL-17RB, SERPINB2, CCL24, CEACAM1, CCL1, MUC5B, CCL26, IL-13RA1, POSTN, IL-6R, CCL18, CCL17, FCER2, CCR3, IL-6, CCL8, CRLF2, IL-33, TSLP, IL-4R, CCR4, PTGDR, FCER1A, IL-1RL1, DPP4, IL-4, IL-5 и IL-13). Эту сигнатуру иммунитета типа 2 использовали в отношении профилей экспрессии множества типов злокачественных новообразований человека, доступных в базе данных Атлас ракового генома (TCGA), а именно BRCA (рак молочной железы), COAD (аденокарцинома толстого кишечника), GBM (мультиформная глиобластома), KIRC (почечноклеточная карцинома), LGG (глиома низкой степени), LUAD (аденокарцинома легких), LUSC (плоскоклеточная карцинома легких), OV (рак яичников), PAAD (аденокарцинома поджелудочной железы), PRAD (аденокарцинома предстательной железы) и SKCM (меланома кожи). Верхний квантиль нормализованных значений экспрессии в FPKM (фрагменты на т.п.н транскрипта на миллион картированных ридов) использовали в качестве исходных входных данных. Получали Z-баллы для экспрессии каждого гена во всех образцах опухолей, представленных на тепловой карте. Для вычисления баллов сигнатуры Th2 максимальное значение Z-баллов (наибольшие Z-баллы) принимали за +4; и минимальное значение Z-баллов (наименьшие Z-баллы) принимали за -4. Затем вычисляли сумму Z-баллов для каждого из генов в списке генов сигнатуры Th2 для каждого образца. Комбинированная экспрессия (Z-баллы) представляет собой уровень сигнатуры Th2 образца.

[0147] Анализ этой тепловой карты сигнатуры иммунитета типа 2 показал, что рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легких и плоскоклеточная карцинома легких демонстрируют наибольшую общую экспрессию этой сигнатуры иммунитета типа 2 с минимальной гетерогенностью. Подтипы других типов злокачественных новообразований также демонстрировали сильную сигнатуру иммунитета типа 2, включая подтипы рака молочной железы и рак толстого кишечника. Однако, другие типы злокачественных новообразований (например, мультиформная глиобластома (GBM), глиома, меланома, рак предстательной железы) демонстрировали общую низкую экспрессию сигнатуры. В целом, эти данные свидетельствуют о сильной активности иммунитета типа 2 при раке поджелудочной железы и раке легких человека, а также в подтипах других типов злокачественных новообразований человека, включая рак молочной железы и рак толстого кишечника.

Пример 3: Цитокины IL-4 и IL-13 подвергаются обширной положительной регуляции и продуцируются в модели рака поджелудочной железы in vivo

[0148] Этот пример относится к исследованию того, активируется ли иммунный ответ типа 2 в моделях in vivo рака поджелудочной железы, посредством оценки уровней экспрессии IL-4 и IL-13 и продукции цитокина IL-4 в имплантационных моделях рака поджелудочной железы. Материалы и способы, описанные в примере 1, касающиеся животных и получения органоидов KP, являются теми же в примере 3.

[0149] Мышам Balb/c подкожно (Sub-Cu) или ортотопически (Ortho) имплантировали сингенные клетки опухолевых органоидов поджелудочной железы, сконструированных для экспрессии онкогенного KRAS с сопутствующей потерей функции опухолевого супрессора P53 (KP клетки), и опухоли получали через 4 недели после имплантации (n=4-5 мышей на условие).

[0150] Измерения цитокинов. Образцы опухолей ресуспендировали в реагенте для выделения белков из тканей (T-PER; Thermo Fisher, Waltham, Mass), дополненном смесью ингибиторов протеаз, и механически гомогенизировали с помощью TissueLyser II (Qiagen, Hilden, Germany). Общее содержание белка в белковых экстрактах опухолей измеряли с использованием анализа по Брэдфорду (анализ белков Pierce™ при 660 нм (Thermo Fisher, Waltham, Mass)). Концентрации цитокинов определяли с использованием заказных наборов MSD и спектрофотометра для чтения планшетов QuickPlex SQ120 (Meso Scale Discovery, Rockville, MD).

Результаты

[0151] Обнаружили, что экспрессия генов IL-4 и IL-13 подвергалась обширной положительной регуляции в ортотопически и подкожно имплантированных опухолях относительно нормальной поджелудочной железы, в которой отсутствует экспрессия генов IL-4 и IL-13 (фигура 3A). Аналогично, продукция цитокина IL-4, измеряемая посредством ELISA, подвергнута обширной положительной регуляции в ортотопических и подкожных моделях опухолей, в то время как в нормальной поджелудочной железе не наблюдали продукцию цитокина IL-4 (фигура 3B). Эти данные свидетельствуют о том, что модели имплантации клеток опухолевых органоидов KP рака поджелудочной железы экспрессируют высокие уровни IL-4 и IL-13, двух ключевых цитокинов, ассоциированных с иммунитетом типа 2, таким образом, демонстрируя, что в этих моделях in vivo рака поджелудочной железы активируется иммунный ответ типа 2. Таким образом, на IL-4/IL-13-индуцированные иммунные ответы типа 2 можно эффективно направленно воздействовать посредством блокады IL-4R (Harb et al., Clin Exp Allergy, 50(1):5-14, 2019; Le Floc’h et al., Allergy, Dec 2019).

Пример 4: Комбинированная блокада против IL-4R и против PD-1 последовательно приводит к повышенной противоопухолевой эффективности in vivo в более крупных опухолях

[0152] Этот пример представляет собой повтор исследования из примера 1 и оценку эффективности комбинированного лечения против IL-4R/PD-1 в отношении более крупных опухолей. В частности, в этом исследовании лечение начинали, когда развившиеся опухоли имели объем в диапазоне от 70 до 100 мм³.

Результаты

[0153] Монотерапия против IL-4R демонстрировала тенденцию в направлении контроля роста опухоли, в то время как монотерапия против mPD-1 не демонстрировала общую противоопухолевую активность. В отличие от этого, комбинированное лечение против IL-4R/PD-1 демонстрировало значимо повышенную противоопухолевую эффективность относительно контрольных групп монотерапии, контроль роста опухоли у 4 из 7 мышей. Результаты этого исследования проиллюстрированы на фигурах 4A и 4B.

[0154] Кроме того, измеряли системные уровни цитокинов интерферона гамма (ИФНγ) и фактора некроза опухоли альфа (ФНОα) в лизатах опухолей во временной точке в конце исследования. Продукция ИФНγ и ФНОα значимо повышалась в группе комбинированного лечения по сравнению с группами монотерапии или изотипического контроля (фигура 4C). В частности, наибольшие уровни внутриопухолевого ИФНγ (> 50 пг/мл) соответствовали наиболее отвечающим опухолям в каждой исследуемой группе. В целом, указанные выше результаты свидетельствуют о том, что комбинированное лечение против IL-4R/PD-1 индуцировало повышенную ИФНγ-зависимую противоопухолевую активность.

Пример 5: Комбинированная блокада IL-4R и PD-1 демонстрирует иммуномодулирующую активность в отношении опухолевой стромы и опухоли

[0155] Этот пример представляет собой повтор исследования из примера 1, но в нем исследовали строму и иммуномодулирующую активность комбинированного лечения против IL-4R/PD-1 у мышей, несущих опухоли PDAC. Осуществляли гистологический анализ содержимого стромы в этом коротком исследовании конечных точек лечения, в котором 8-10 мышам на группу лечения имплантировали клетки опухолевых органоидов KP. Лечение начинали, когда объемы опухолей достигали 50-100 мм³. Опухоли собирали после 2 доз лечения во избежание избыточного регрессирования опухоли, что делает возможным несмещенный гистологический анализ. Процентное изменение объема опухоли в исследуемых группах показано на фигуре 5A.

[0156] Гиалуроновая кислота (HA) является значимым компонентом микроокружения опухоли поджелудочной железы, как показано, ингибирующим перфузию лекарственных средств в ложе опухоли (Provenzano et al., Cancer Cell, 21(3):418-29, 2012, Jacobetz et al., Gut, 62(1):112-20, 2013). Показано, что ферментативное истощение HA повышает цитотоксическую противоопухолевую эффективность в доклинических моделях PDAC, и его исследовали на пациентах с раком поджелудочной железы в комбинации с химиотерапией или блокадой иммунных контрольных точек. Содержание HA в микроокружении опухолей поджелудочной железы определяли способом гистохимического окрашивания с использованием биотинилированного HA-связывающего белка (HABP) и цифрового патологического анализа (фигура 5B).

[0157] Иммуноокрашивание. Образцы фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 16-24 ч. и переносили в 70% этанол для заливки парафином. Все окрашивания осуществляли на парафиновых срезах ткани мыши 5 мкм.

[0158] Для иммуноокрашивания срезы подвергали депарафинизации, регитратировали и осуществляли демаскирование антигенов с помощью раствора RTU AR Citra (Biogenex, San Ramon, CA). Для блокирования эндогенных пероксидаз использовали H₂O₂. Неспецифическое связывание белков блокировали с помощью 10% сыворотки козы (Sigma, St Louis, MA). Срезы инкубировали с первичным антителом против CD8 (Cell Signaling Technologies, Danvers, MA) в течение ночи при 4°C и конъюгированным с пероксидазой хрена вторичным антителом (Cell Signaling Technologies). Остальные стадии осуществляли с использованием подходящих наборов Vectastain Elite ABC (Vector Labs.) и субстрата пероксидазы DAB (Vector Labs.) с докрашиванием гематоксилином. Цифровой количественный анализ депонирования HABP и плотности CD8⁺ T-клеток осуществляли с использованием платформы для анализа изображений HALO от Indica Labs.

[0159] Гистохимия HA. Использовали биотинилированный HA-связывающий белок (bHABP, Millipore Danvers MA USA). Срезы подвергали депарафинизации, регитратировали и блокировали 3% бычьим сывороточным альбумином (BSA) перед инкубацией с bHABP (1:200 в 1% BSA) в течение ночи при 4°C. Остальные стадии осуществляли с использованием набора Vectastain Elite ABC (Vector Labs. Burlingame CA) и субстрата пероксидазы DAB (Vector Labs.) с докрашиванием гематоксилином.

Результаты

[0160] На фигуре 5A показано процентное изменение объема опухоли (относительно исходного уровня) к концу исследования. Содержание HA значительно снижалось в группе монотерапии против IL-4R и в группе комбинированного лечения против IL-4R/PD-1 по сравнению с группами монотерапии против PD-1 и изотипического контроля (фигура 5B). Это снижение содержания HA было ассоциировано с повышением инфильтрации CD8⁺ T-клетками в ложе опухоли, в особенности, в группе комбинированного лечения против IL-4R/PD-1, что показано с помощью гистологического количественного анализа маркера CD8 инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL) (фигура 5C). Кроме того, повышенная инфильтрация T-клетками была ассоциирована со значительной синергической противоопухолевой эффективностью в группе комбинированного лечения против IL-4R/PD-1.

[0161] Указанные выше данные свидетельствуют о том, что в контексте поляризованных в отношении иммунитета типа 2 фиброзных опухолей поджелудочной железы блокада IL-4R имеет противоопухолевую активность благодаря двойному механизму действия: (i) мощной стромальной модуляции и регуляции депонирования HA; и (ii) значимому повышению инфильтрации TIL при комбинировании с терапевтическими средствами против PD-1.

Пример 6: Эффективность антитела против PD-1 человека в комбинации с антителом против IL-4R в отношении имплантированных опухолей

[0162] Для экспериментов в этом примере с помощью технологии VelociGene® (Valenzuela et al 2003,Nat. Biotechnol. 21:652-659; также см. патент США № 9987500) получали гуманизированных мышей, экспрессирующих внеклеточную часть PD-1 человека и трансмембранные и внутриклеточные части мышиной версии белка.

[0163] Примером антитела против PD-1, используемым для этого исследования, являлось полностью человеческое антитело (цемиплимаб), специфически связывающееся с PD-1 человека и содержащее HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 SEQ ID NO: 13-14-15-16-17-18 и HCVR/LCVR SEQ ID NO: 11/12. Пример ингибитора пути IL-4/IL-13, используемый в этом примере, описан в примере 1.

[0164] Эпителиальные органоиды поджелудочной железы выделяли из PD-1-гуманизированной мыши и обрабатывали, как описано в примере 1, для получения клеток опухолевых органоидов KP (клеток рака поджелудочной железы).

[0165] PD-1-гуманизированным мышам имплантировали 1,5×10⁶ клеток опухолевых органоидов KP в день 0 и лечение начинали, когда опухоли развились. Мышам интраперитонеально инъецировали 25 мг/кг REGN1103 (антитела против mIL-4R) или Ab изотипического контроля в комбинации с 10 мг/кг цемиплимаба или изотипического контроля, начиная в день 13 после инъекции клеток KP (от 0,1E6 до 0,5E6 клеток) каждые 3-4 дня в 7 дозах. Объемы опухолей подвергали мониторингу посредством измерения калипером дважды в неделю в течение эксперимента.

[0166] Лечение против IL-4R повышает противоопухолевую эффективность цемиплимаба. Регрессирование опухоли и полные ответы наблюдали у мышей, которых подвергали комбинированному лечению, по сравнению с монотерапией цемиплимабом.

Пример 7: Клиническое исследование

[0167] В клиническом исследовании пациентам с раком поджелудочной железы, раком легких, множественной миеломой, раком молочной железы и раком толстого кишечника вводят цемиплимаб в комбинации с дупилумабом. У пациентов, которым вводят цемиплимаб и дупилумаб, наблюдали более высокое ингибирование опухоли, чем у пациентов, которым вводят любое лекарственное средство в качестве монотерапии.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.

<120> ИНГИБИТОРЫ ПУТИ IL-4/IL-13 ДЛЯ ПОВЫШЕННОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ

ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ

<130> 10529P1-US

<160> 22

<170> FastSEQ для Windows версии 4.0

<210> 1

<211> 124

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCVR R668

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120

<210> 2

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCVR R668

<400> 2

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 3

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 R668

<400> 3

Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala

1 5

<210> 4

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 R668

<400> 4

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr

1 5

<210> 5

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 R668

<400> 5

Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu

1 5 10 15

Asp Val

<210> 6

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR1 R668

<400> 6

Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ile Gly Tyr Asn Tyr

1 5 10

<210> 7

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR2 R668

<400> 7

Leu Gly Ser

1

<210> 8

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3 R668

<400> 8

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 9

<211> 451

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HC R668

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly

450

<210> 10

<211> 219

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LC R668

<400> 10

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 11

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCVR R2810

<400> 11

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe

20 25 30

Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Trp Gly Asn Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 12

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCVR R2810

<400> 12

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Ser Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Leu Ser Ile Asn Thr Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu His Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Thr Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Val Val Asp Phe Arg

100 105

<210> 13

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 R2810

<400> 13

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Gly

1 5

<210> 14

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 R2810

<400> 14

Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr

1 5

<210> 15

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 R2810

<400> 15

Val Lys Trp Gly Asn Ile Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 16

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR1 R2810

<400> 16

Leu Ser Ile Asn Thr Phe

1 5

<210> 17

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR2 R2810

<400> 17

Ala Ala Ser

1

<210> 18

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3 R2810

<400> 18

Gln Gln Ser Ser Asn Thr Pro Phe Thr

1 5

<210> 19

<211> 444

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HC R2810

<400> 19

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe

20 25 30

Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Trp Gly Asn Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 20

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LC R2810

<400> 20

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Ser Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Leu Ser Ile Asn Thr Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu His Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Thr Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Val Val Asp Phe Arg Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 21

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCVR R1103

<400> 21

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Asp Asn Gly Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 22

<211> 111

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCVR R1103

<400> 22

Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly His Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<---

Группа изобретений относится к биотехнологии. Представлены способы лечения или ингибирования роста опухоли, включающей зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование, где способы включают выбор и введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества антитела, специфически связывающего рецептор IL-4 (IL-4R), и терапевтически эффективного количества антитела, специфически связывающего белок программируемой гибели 1 (PD-1). Изобретение способствует регрессированию опухоли, задерживает рост опухоли, снижает количество опухолевых клеток, снижает опухолевую нагрузку и/или предотвращает рецидивирование опухоли у пациента. 2 н. и 41 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 7 пр.

1. Способ лечения или ингибирования роста зависящего от иммунитета типа 2 злокачественного новообразования, включающий:

(a) выбор индивидуума с зависящей от иммунитета типа 2 злокачественной опухолью; и

(b) введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества антитела, специфически связывающего рецептор IL-4 (IL-4R), и терапевтически эффективного количества антитела, специфически связывающего белок программируемой гибели 1 (PD-1),

где антитело против PD-1 содержит три определяющие комплементарность области (CDR) тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR) и три CDR легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3) вариабельной области легкой цепи (LCVR), где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17 и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.

2. Способ по п. 1, где зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование включает рак поджелудочной железы, рак молочной железы, колоректальный рак, рак яичников, злокачественное новообразование головного мозга, рак кожи, рак предстательной железы, рак почки, рак легких, лимфому Ходжкина или рак мочевого пузыря.

3. Способ по п. 1 или 2, где зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование включает рак поджелудочной железы.

4. Способ по п. 1 или 2, где зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование включает немелкоклеточный рак легких.

5. Способ по п. 1 или 2, где зависящее от иммунитета типа 2 злокачественное новообразование включает плоскоклеточную карциному легких.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где злокачественное новообразование является первичным, метастатическим или рецидивирующим.

7. Способ по любому из пп. 1-6, где индивидуума лечили с помощью предшествующего противоопухолевого терапевтического средства или способа терапии.

8. Способ по любому из пп. 1-7, где индивидуума лечили ингибитором PD-1.

9. Способ по любому из пп. 1-8, где опухоль является резистентной или не отвечающей на предшествующее лечение терапевтическим средством или способом терапии.

10. Способ по любому из пп. 1-9, где у индивидуума наблюдают положительную регуляцию по меньшей мере одного цитокина.

11. Способ по п. 10, где по меньшей мере один цитокин включает по меньшей мере один из IL-4 и IL-13.

12. Способ по любому из пп. 1-11, где у индивидуума наблюдают повышенную продукцию по меньшей мере одного цитокина.

13. Способ по п. 12, где по меньшей мере один цитокин включает IL-4.

14. Способ по любому из пп. 1-13, где у индивидуума наблюдают повышенное содержание гиалуроновой кислоты (HA) в злокачественной опухоли.

15. Способ по любому из пп. 1-14, где антитело против IL-4R содержит HCVR, содержащую три определяющие комплементарность области (CDR) тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), и LCVR, содержащую три CDR легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где HCDR1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; HCDR2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; HCDR3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; LCDR1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; LCDR2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.

16. Способ по любому из пп. 1-15, где HCVR антитела против IL-4R содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 и LCVR антитела против IL-4R содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.

17. Способ по любому из пп. 1-16, где антитело против IL-4R содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.

18. Способ по любому из пп. 1-16, где антитело против IL-4R содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

19. Способ по любому из пп. 1-16, где антитело против IL-4R содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 и легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

20. Способ по любому из пп. 1-19, где антитело против IL-4R является дупилумабом или его биоэквивалентом.

21. Способ по любому из пп. 1-20, где HCVR антитела против PD-1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11 и LCVR антитела против PD-1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.

22. Способ по любому из пп. 1-21, где антитело против PD-1 содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.

23. Способ по любому из пп. 1-21, где антитело против PD-1 содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.

24. Способ по любому из пп. 1-21, где антитело против PD-1 содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19 и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.

25. Способ по любому из пп. 1-24, где антитело против PD-1 является цемиплимабом или биоэквивалентом.

26. Способ по любому из пп. 1-25, где одну или более доз антитела против IL-4R вводят в комбинации с одной или более дозами антитела против PD-1.

27. Способ по п. 26, где по меньшей мере одна доза антитела против IL-4R содержит от приблизительно 0,1 до приблизительно 50 мг/кг массы тела индивидуума.

28. Способ по п. 26, где по меньшей мере одна доза антитела против IL-4R включает от приблизительно 0,05 до приблизительно 1000 мг.

29. Способ по любому из пп. 26-28, где каждую дозу антитела против IL-4R вводят через 0,5-12 недель после непосредственно предшествующей дозы.

30. Способ по любому из пп. 26-29, где по меньшей мере одна доза антитела против PD-1 содержит от приблизительно 0,1 до приблизительно 20 мг/кг массы тела индивидуума.

31. Способ по любому из пп. 26-29, где по меньшей мере одна доза антитела против PD-1 включает от приблизительно 0,05 до приблизительно 500 мг.

32. Способ по п. 30 или 31, где каждую дозу антитела против PD-1 вводят через 0,5-12 недель после непосредственно предшествующей дозы.

33. Способ по любому из пп. 1-32, где антитело против IL-4R вводят одновременно с антителом против PD-1.

34. Способ по любому из пп. 1-32, где антитело против IL-4R вводят перед антителом против PD-1.

35. Способ по любому из пп. 1-32, где антитело против IL-4R вводят после антитела против PD-1.

36. Способ по любому из пп. 1-35, где способ способствует регрессированию опухоли, задерживает рост опухоли, снижает количество опухолевых клеток, снижает опухолевую нагрузку и/или предотвращает рецидивирование опухоли у пациента.

37. Способ по любому из пп. 1-36, где способ способствует на по меньшей мере приблизительно 10% большему регрессированию опухоли у подвергнутого лечению индивидуума по сравнению с не подвергнутым лечению индивидуумом или индивидуумом, которого лечили любым антителом в качестве монотерапии.

38. Способ по любому из пп. 1-36, где способ приводит к по меньшей мере 30%-ному или большему снижению опухолевых клеток или размера опухоли по сравнению с не подвергнутым лечению индивидуумом или индивидуумом, которого лечили любым антителом в качестве монотерапии.

39. Способ по любому из пп. 1-38, дополнительно включающий использование по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства или способа терапии.

40. Способ по п. 39, где дополнительное терапевтическое средство или способ терапии включает химиотерапию, циклофосфамид, хирургическое вмешательство, лучевую терапию, противоопухолевую вакцину, ингибитор LAG3, ингибитор CTLA-4, агонист GITR, ингибитор TIM3, ингибитор BTLA, ингибитор TIGIT, ингибитор CD38, ингибитор CD47, ингибитор IDO, антагонист VEGF, ингибитор Ang2, ингибитор TGFβ, ингибитор EGFR, ингибитор VISTA, агонист CD40, ингибитор CSF1R, ингибитор CCR2, ингибитор CXCR4, ингибитор CXCR2, ингибитор CCR4, ингибитор CXCL12, активатор CD28, агонист костимуляторного рецептора, антитело против опухолеспецифического антигена, биспецифическое антитело против CD3/против CD20, ГМ-КСФ, цитотоксин, химиотерапевтическое средство, онколитический вирус, ингибитор IL-6R, ингибитор IL-10, цитокин, ADC, T-клетки с химерным антигенным рецептором, противовоспалительное лекарственное средство, НПВС и/или пищевую добавку.

41. Способ лечения или ингибирования роста зависящего от иммунитета типа 2 злокачественного новообразования, включающий: (a) выбор индивидуума с зависящей от иммунитета типа 2 злокачественной опухолью; и (b) введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества антитела, специфически связывающего рецептор IL-4 (IL-4R), где антитело против IL-4R содержит HCVR, содержащий три определяющие комплементарность области (CDR) тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), и LCVR, содержащий три CDR легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где HCDR1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; HCDR2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; HCDR3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; LCDR1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; LCDR2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.

42. Способ по п. 41, в котором HCVR антитела против IL-4R включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 и LCVR антитела против IL-4R включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.

43. Способ по п. 41 или 42, в котором антитело против IL-4R содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 и легкая цепь включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.