В настоящем изобретении предложены средства и способы лечения ассоциированных с интерлейкином-18 (IL-18) заболеваний и нарушений, в частности, средства и способы лечения болезни Стилла. В частности, в настоящем изобретении предложены антитела, которые специфически связываются со свободным IL-18, и IL-18-связывающий белок (IL-18BP), предназначенные для применения при таких лечениях и в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма.

Интерлейкин-18 (IL-18), известный также как интерферон-гамма-индуцирующий фактор, представляет собой цитокин, который продуцируется активированными макрофагами, клетками Купфера и другими клетками. IL-18 связывается с рецептором IL-18 и индуцирует клеточно-опосредованный иммунитет. Нарушения (например, «выключение») рецептора цитокина IL-18 или цитокина IL-18 приводят к нарушению активности естественных клеток-киллеров (NK) и TH1-ответов. Помимо своей физиологической роли, IL-18 может индуцировать также серьезные воспалительные нарушения. Следовательно, для цели ранней диагностики таких нарушений необходимо количественно определять уровни свободного IL-18 в общей воде организма индивидуума, у которого предполагается наличие такого нарушения.

Однако в настоящее время количественное определение уровней IL-18 в общей воде организма, как правило, осуществляют с помощью методов ELISA с использованием антител, не обладающих специфичностью в отношении обнаружения свободного IL-18. Результат, достигаемый с помощью методов ELISA, ограничен специфичностью применяемого первичного антитела, которое связывается с антигеном-мишенью. До настоящего времени можно было обнаруживать с использованием поступающих в продажу антител только уровни общего IL-18, но антитела к свободному IL-18 до сих пор не были известны. Обнаружение общего IL-18 не позволяет адекватно оценивать уровни свободного IL-18, поскольку IL-18, входящий в комплекс, например, связанный с его встречающимся в естественных условиях антагонистом, а именно IL-18-связывающим белком (IL-18BP), обладает пониженной аффинностью к рецептору IL-18. Кроме того, известно, что повышенные уровни IL-18 часто ассоциированы с повышенными уровнями IL-18BP.

С учетом указанных выше причин, определение общего IL-18 является недостаточным для установления адекватного диагноза ассоциированных с IL-18 заболеваний. Это означает, что для того, чтобы иметь возможность оценивать уровни свободного IL-18 в общей воде организма индивидуума и устанавливать адекватный диагноз ассоциированного с IL-18 заболевания, необходимо иметь средства обнаружения, которые специфически связываются со свободным IL-18, но не с IL-18, входящим в комплекс. Поэтому в настоящее время не существует эффективного метода лечения ассоциированных с IL-18 заболеваний или нарушений.

Одним из таких заболеваний, которое сопровождается повышенными уровнями свободного IL-18 в общей воде организма, является болезнь Стилла.

Болезнь Стилла, развившаяся у взрослых (AoSD), представляет собой многофакторное аутовоспалительное заболевание неизвестной этиологии, описанное в 1971 г. Э. Байуотерсом {Bywaters, 1971}. По-видимому, важную роль играют различные инфекционные агенты, которые могут действовать в качестве триггеров в организме генетически предрасположенных хозяев {Bagnari и др., 2010}. Болезнь характеризуется целым рядом патологических компонентов с различными клиническими проявлениями, клиническими протеканиями и прогнозом. К наиболее часто встречающимся компонентам активного заболевания относятся высокотемпературное лихорадочное состояние, периодическая сыпь лососево-розового цвета, артралгия или артрит, боль в горле, гепатоспленомегалия, вариабельные мультисистемные проявления. Важными характеристиками состояния являются различные выявляемые в лабораторных анализах патологии, которые свидетельствуют о повреждении печени, системная воспалительная реакция, такая как нейтрофилия, реактанты острой фазы, включая высокие уровни ферритина, ассоциированные с низкой фракцией его гликозилированных форм, в то время как результат анализа на ревматоидные факторы и антиядерные антитела неизменно является отрицательным {Bagnari и др., 2010}. При отсутствии специфических симптомов диагностика часто является сложной, и может оказаться полезным применять классификационные критерии {Yamaguchi и др., 1992}.

Патогенез AoSD остается невыясненным, однако, по-видимому, активация макрофагов, Th1- и, возможно, Th17-клеток играет роль в качестве клеточной основы болезни {Efthimiou и др., 2007}. Провоспалительные цитокины, продуцируемые активированными иммунными клетками, такие как IL-18, IL-1β, IL-6, TNF-α, IFN-Y, ответственны за клинические и биохимические компоненты заболевания {Kawaguchi и др., 2001}. Периодичность протекания болезни и присутствие высоких уровней IL-18 и IL-1β позволяют рассматривать роль активации врожденной иммунной системы в качестве центральных патогенетических событий. Кроме того, недавно была выявлена активация инфламмасомы, и в совокупности указанные характеристики позволяют рассматривать данное явление как относящееся к группе аутовоспалительных заболеваний {Pouchot и Arlet, 2012}, {Gattorno и Martini, 2013}.

В случае AoSD, IL-18, по-видимому, является основным проксимальным медиатором воспалительного каскада {Kawaguchi и др., 2001}. Уровни IL-18 при AoSD достигают более высоких значений, чем при любых других ревматических состояниях, и, что является более важным, существует выраженная корреляция между уровнями IL-18 и клиническими и лабораторными маркерами активности болезни {Kawashima и др., 2001}. Уровни IL-18 в сыворотке снижаются в процессе ремиссии после успешного лечения.

Современные методы фармакологического лечения AoSD, например, с использованием модифицирующих болезнь противоревматических лекарственных средств (DMARD) и кортикостероидов, являются в значительной степени эмпирическими и характеризуются потенциально неблагоприятным профилем долгосрочный риск/полезное действие. В качестве терапевтической опции при AoSD {Fautrel, 2008} {Pouchot и Arlet, 2012} разрабатываются новые биологические средства, мишенью которых являются провоспалительные цитокины, изученные в поисковых клинических исследованиях на небольших группах пациентов {Mavragani и др., 2012}. До настоящего времени не были достигнуты убедительные и систематические результаты касательно безопасности и эффективности.

Настоящее изобретение открывает новые возможности для лечения болезни Стилла на основе объединения количественного определения истинного уровня свободного IL-18 в общей воде организма пациента, подлежащего лечению, с терапевтическим направленным воздействием на IL-18 с помощью IL-18-связывающего белка (IL-18BP) или антител, которые специфически связываются со свободным IL-18, что дает значительные конкурентные преимущества по сравнению с другими анти-цитокиновыми биологическими средствами благодаря нейтрализации IL-18 наряду с блокированием нижележащих цитокинов, таких как IL-6 и TNF-α, которые также участвуют в патогенезе AoSD.

Другая группа заболеваний, которая сопровождается повышенными уровнями свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой аутовоспалительные заболевания.

Аутовоспалительные заболевания вызываются нарушением регуляции врожденной иммунной системы и, как правило, имеют место в раннем детстве, они характеризуются высокой температурой и специфическими для заболевания схемами системного и органоспецифического воспаления и дисфункции. Идентифицированы многие генетические причины аутовоспалительных заболеваний и выявлена ассоциация между специфическими генами и отдельными аутовоспалительными состояниями. Нахождение связи на молекулярном уровне между каузативными генами, специфическими воспалительными путями и определенным фенотипом заболевания обеспечивает существенный прогресс в определении рациональных терапий для часто встречающихся рефрактерных клинических состояний.

Терапии на основе блокирования IL-1 представляют собой важный шаг на пути лечения аутовоспалительных состояний. Блокада IL-1 при связанных с геном NLRP3 криопирин-ассоциированных периодических синдромах (CAPS) и дефиците антагониста рецептора IL-1 (DIRA) является очень эффективной. Однако в случае других аутовоспалительных состояний данные об ответе на лечение ограничены неопубликованными данными и описаниями клинических случаев. Таким образом, распространение блокады IL-1 с CAPS на другие аутовоспалительные состояния в значительной степени является эмпирическим.

Другие педиатрические аутовоспалительные состояния связаны с различными генетическими дефектами, которые запускают другие клеточные пути активации, сопровождающиеся производством других медиаторов. Спонтанные активирующие мутации компонента инфламасомы NLRC4 ассоциированы с серьезными аутовоспалительными состояниями с ранним началом, характеризующимися повторяющимися вспышками MAS-подобных обострений. Мутации NLRC4 приводят также к конститутивной гиперсекреции IL-18.

X-сцепленный ингибитор апоптоза (XIAP) часто ассоциирован с гемофагоцитарным лимфогистиоцитозом (HLH), MAS-подобным синдромом, но может характеризоваться также другими фенотипами проявления заболевания. Подобно пациентам с NLRC4-MAS и пациентам с другими обусловленными MAS нарушениями, для пациентов с дефицитом XIAP и MAS-подобным фенотипом также характерны высокие уровни IL-18 в сыворотке.

При создании изобретения было установлено, что имеет место конститутивное производство и секреция IL-18 моноцитами, макрофагами и, по-видимому, другими типами клеток, и присутствие свободного IL-18 в сыворотке у детей с MAS-подобными состояниями, в отличие от других ранних аутовоспалительных состояний, таких как NOMID, и был сделан вывод о том, что блокада IL-18 может представлять собой не только другой подход к лечению аутовоспалительных заболеваний, но также и наиболее приемлемое лечение для рассматриваемой категории пациентов.

Таким образом, настоящее изобретение дает новые возможности для лечения педиатрических аутовоспалительных заболеваний с серьезным системным воспалением (ниже обозначены как MAS-подобные педиатрические состояния) за счет объединения количественного определения истинного уровня свободного IL-18 в общей воде организма пациента, подлежащего лечению, с терапевтическим направленным воздействием на IL-18 с помощью IL-18-связывающего белка (IL-18BP) или антител, которые специфически связываются со свободным IL-18.

В частности, первый вариант осуществления настоящего изобретения относится к ингибитору IL-18, прежде всего к IL-18-связывающему белку (IL-18ВР) или его активному фрагменту или варианту, указанному в настоящем описании, или композиции, содержащей ингибитор IL-18, прежде всего IL-18-связывающий белок (IL-18BP) или его активный фрагмент или вариант, указанный в настоящем описании, предназначенному/предназначенной для применения при лечении такого ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения у индивидуума, страдающего от такого заболевания или нарушения, в частности у индивидуума, у которого количественно установлено, что в общей воде организма имеют место

(I) аномальные уровни свободного IL-18, в частности уровни свободного IL-18, которые превышают уровень свободного IL-18 в общей воде организма здорового контрольного индивидуума, в частности на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100%, и/или

(II) аномальное отношение свободный IL-18/IL-18BP в общей воде организма по сравнению с уровнями в общей воде организма здорового контрольного индивидуума, в частности, отношение свободного IL-18 к IL-18BP, превышающее отношение в общей воде организма здорового контрольного индивидуума на 1%, 2,5%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100%,

с использованием анализа, позволяющего обнаруживать свободный IL-18 в общей воде организма, где в указанном анализе применяют IL-18BP или антитело или его функциональный фрагмент, где антитело или его активный фрагмент связывается с IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP.

В конкретном варианте осуществления изобретения указанная композиция практически свободна от вариантов IL-18BP с N-концевой и/или C-концевой делецией.

В различных других вариантах осуществления изобретения указанные делеционные варианты имеют делеции от 1 до 5 аминокислотных остатков на С-конце IL-18BP и/или от 1 до 30 аминокислотных остатков на N-конце IL-18BP.

В частности, доля делеционных вариантов в композиции, предлагаемой в изобретении, составляет менее чем 30%, в частности, менее чем 20%, в частности, менее чем 15%, в частности, менее чем 10%, в частности, менее чем 7,5%, в частности, менее чем 5%, в частности, менее чем 2,5%, в частности, менее чем 1%, в частности, менее чем 0,5%, в частности, менее чем 0,25%, в частности, менее чем 0,1%.

Такую композицию можно получать с помощью процесса очистки, который включает

- удаление клеток и клеточного дебриса из собранного супернатанта клеточной культуры путем центрифугирования, диафильтрации и перенос в резервуар для смешивания;

- концентрирование негомогенного IL-18BP и диафильтрацию, в частности, в противотоке боратного буфера, в частности, при pH, превышающих 7,5;

- захват IL-18BP на анионообменной смоле, в частности, на анионообменной смоле ТМАЕ Hi-Cap для удаления солей и питательных веществ, присутствующих в клеточной культуре;

- элюцию IL-18BP с использованием буфера, в частности, боратного буфера, содержащего NaCl;

- применение пяти дополнительных хроматографических стадий для гомогенизации IL-18BP, включая две стадии фильтрации в тангенциальном потоке и стадию удаления вируса путем фильтрации.

Указанные дополнительные стадии, в частности, включают

- обработку препарата белка с помощью аффинной хроматографии с иммобилизованными ионами металла, прежде всего на хелатирующей смоле Сефароза Fast Flow, активированной медью, для удаления белков клеток-хозяев;

- элюирование белка, в частности, ацетатом аммония;

- загрузку элюата, полученного помощью аффинной хроматографии с иммобилизованными ионами металла в хроматографическую колонку для гидрофобной хроматографии с индуцированием заряда, в частности, на МЕР HyperCel, для удаления других белков клеток-хозяев;

- элюирование продукта с использованием щелочного фосфатного буфера, прежде всего, фосфатного буфера, содержащего пропиленгликоль;

- концентрирование элюата, содержащего IL-18BP, путем диафильтрации;

- разведение ретентата, полученного в результате диафильтрации, и доведение значения pH до кислого, в частности, с использованием буфера на основе 2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты (MES);

- выделение белка с помощью ионообменной хроматографии, в частности, путем загрузки в колонку с СМ Сефароза Fast Flow в режиме проскока, для удаления оставшихся белков клеток-хозяев, которые удержались на колонке;

- доведение значения pH несвязанной фракции до , в частности, с помощью тетрабората натрия;

- выделение фракции, полученной на стадии ионообменной хроматографии, с использованием колонки для хроматографии гидрофобного взаимодействия, в частности, на фенил-сефарозе Fast Flow, для дальнейшей очистки;

- предварительное уравновешивание колонки боратным буфером, содержащим высокомолярный сульфат аммония, и элюирование продукта из колонки путем снижения молярности сульфата аммония.

В другом варианте осуществления изобретения композиция, предлагаемая в изобретении, и, в частности, композиция, предназначенная для применения, согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, содержит буфер на основе хлорида натрия и/или гидроксида натрия, и/или фосфата натрия, в частности, в концентрации от 0,01 М до 0,1 М, в частности, от 0,01 М до 0,05 М, и предпочтительно 0,01 М.

В частности, указанную композицию, предлагаемую в изобретении, приготавливают в виде стерильного раствора для инъекций, и она содержит буфер на основе хлорида натрия, гидроксида натрия и фосфата натрия, прежде всего в концентрации 0,01 М.

Еще в одном варианте осуществления изобретения ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, или композиция, содержащая ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, и, в частности, ингибитор IL-18 или композицию, предназначенный/предназначенную для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, вводят индивидууму, подлежащему лечению, в виде нескольких доз/день, нескольких доз/неделю или нескольких доз/месяц.

В частности, ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, вводят в виде двух доз в неделю, трех доз в неделю, четырех доз в неделю.

В конкретном варианте осуществления изобретения ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, вводят каждые 24-48 ч.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения однократная доза ингибитора IL-18, предлагаемого в изобретении, или композиции, содержащей ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, и, прежде всего ингибитора IL-18 или композиции, предназначенного/предназначенной для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, содержит от 10 до 600 мг ингибитора IL-18, прежде всего IL-18BP или его активного фрагмента или варианта, представленного в настоящем описании.

В частности, однократная доза содержит от 10 до 20 мг, от 20 до 40 мг, от 40 до 80 мг, от 80 до 160 мг, от 160 до 320 мг или от 320 до 600 мг ингибитора IL-18, прежде всего IL-18BP или его активного фрагмента или варианта, представленного в настоящем описании.

В конкретном варианте осуществления изобретения однократная доза или стандартная доза содержит от 0,5 мг ингибитора IL-18/кг веса тела до 10 мг ингибитора IL-18/кг веса тела, прежде всего от 1 мг ингибитора IL-18/кг веса тела до 8 мг ингибитора IL-18/кг веса тела, прежде всего от 2 мг ингибитора IL-18/кг веса тела до 6 мг ингибитора IL-18/кг веса тела, прежде всего от 1 мг ингибитора IL-18/кг веса тела до 5 мг ингибитора IL-18/кг веса тела.

Однократную дозу или стандартную дозу, указанную выше, можно разделять на несколько доз или стандартных доз и вводить индивидууму, подлежащему лечению, на протяжении нескольких часов или всего дня.

Ингибитор IL-18, предназначенный для применения согласно настоящему изобретению, может представлять собой антитело, предлагаемое в изобретении и представленное в SEQ ID NO:, или, в частности, IL-18BP, предлагаемый в изобретении, или его активный фрагмент или вариант, представленный в настоящем описании, в частности, человеческий IL-18BP, в частности, связывающий рекомбинантный человеческий интерлейкин 18 белок (rhIL-18BP), и, прежде всего, изоформу IL-18BP, представленную на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 7, или изоформу, представленную на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 390.

В конкретном варианте осуществления изобретения ингибитор IL-18, прежде всего IL-18BP, предлагаемый в изобретении, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, прежде всего IL-18BP, предлагаемый в изобретении, вводят каждые 24 или 48 ч в виде однократной дозы, составляющей от 0,5 мг ингибитора IL-18/кг веса тела, до 5 мг ингибитора IL-18/кг веса тела.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения ингибитор IL-18, в частности, IL-18BP, предлагаемый в изобретении, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, в частности, IL-18BP, предлагаемый в изобретении, и, в частности, ингибитор IL-18 или композицию, предназначенный/предназначенную для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, вводят индивидууму, подлежащему лечению, по меньшей мере до тех пор, пока у обработанного индивидуума не будет выявлен терапевтический ответ.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к ингибитору IL-18, прежде всего IL-18BP, предлагаемому в изобретении, или к композиции, содержащей ингибитор IL-18, в частности, IL-18BP, предлагаемый в изобретении, предназначенному/предназначенной для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где установленный уровень свободного IL-18 в общей воде организма должен составлять ≥5 пг/мл и, в частности, вплоть до 10000 пг/мл по сравнению с уровнем, составляющим ≤4 пг/мл у здорового контрольного индивидуума.

Другой вариант осуществления изобретения относится к ингибитору IL-18, прежде всего IL-18BP, предлагаемому в изобретении, или композиции, содержащей ингибитор IL-18, прежде всего IL-18BP, предлагаемый в изобретении, предназначенному/предназначенной для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где анализ для количественного определения уровня свободного IL-18 в общей воде организма включает стадии, на которых:

а) приводят образец общей воды организма, который предположительно содержит свободный IL-18, в контакт с IL-18BP или антителом, предлагаемым в изобретении, который/которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают возможность связываться IL-18BP или антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 с IL-18BP или антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце.

В различных вариантах осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении, прежде всего антитело, которое применяют в композиции, предлагаемой в изобретении, которое предназначено для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественной оценки свободного IL-18 общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, которое связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанное антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR тяжелой цепи антител, указанных в таблице 8, которые имеют последовательность, представленную в ряду 5 таблицы 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VK), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR легкой цепи антител, указанных в таблице 8, которые имеют последовательность, представленную в ряду 5 таблицы 8.

В конкретном варианте осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении, связывается со свободным IL-18 с аффинностью, составляющей от <2 пМ до <20 пМ, в частности, от <2 пМ до <15 пМ, в частности, от <2 пМ до <10 пМ, в частности, от <2 пМ до <5 пМ, но предпочтительно с аффинностью, составляющей <2 пМ, которую рассчитывают после титрования антител в присутствии IL-18 с определенной молярностью и на основе полученных значений EC₅₀ с использованием закона действующих масс.

Антитело, предлагаемое в изобретении, не связывается с эпитопом, описанным в WO 2014/037899, зарегистрированной 5 сентября 2013 г., в частности, с эпитопом, представленным на сс. 28 и 29 описания.

В частности, антитело, предлагаемое в изобретении, не содержит CDR и/или последовательности вариабельной легкой цепи и тяжелой цепи, представленные в перечне последовательностей в WO 2014/037899, зарегистрированной 5 сентября 2013 г.

В частности, антитело, предлагаемое в изобретении, в частности антитело, применяемое в композиции, предлагаемой в изобретении, которое предназначено для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, которое связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, содержащее

а) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 311, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 312, SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 314;

б) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 315, SEQ ID NO: 316 и SEQ ID NO: 317, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 318, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 320;

в) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 321, SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 323, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 324, SEQ ID NO: 325 и SEQ ID NO: 326;

г) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 327, SEQ ID NO: 328 и SEQ ID NO: 329, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 330, SEQ ID NO: 331 и SEQ ID NO: 332;

д) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 327, SEQ ID NO: 328 и SEQ ID NO: 329 и CDR1, CDR2, и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 333, SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 335;

е) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 336, SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 338, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 345, SEQ ID NO: 346 и SEQ ID NO: 347;

ж) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 340 и SEQ ID NO: 341, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 345, SEQ ID NO: 346 и SEQ ID NO: 347;

з) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 342, SEQ ID NO: 343 и SEQ ID NO: 344, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 345, SEQ ID NO: 346 и SEQ ID NO: 347;

и) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 348, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 350, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 357, SEQ ID NO: 358 и SEQ ID NO: 359;

к) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 351, SEQ ID NO: 352 и SEQ ID NO: 353, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 357, SEQ ID NO: 358 и SEQ ID NO: 359;

л) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 354, SEQ ID NO: 355 и SEQ ID NO: 356, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 357, SEQ ID NO: 358 и SEQ ID NO: 359;

м) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 360, SEQ ID NO: 361 и SEQ ID NO: 362, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 363, SEQ ID NO: 364 и SEQ ID NO: 365;

н) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 360, SEQ ID NO: 361 и SEQ ID NO: 362, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 366, SEQ ID NO: 367 и SEQ ID NO: 368;

o) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 370 и SEQ ID NO: 371 и CDR1, CDR2, и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 372, SEQ ID NO: 373 и SEQ ID NO: 374;

п) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 375, SEQ ID NO: 376 и SEQ ID NO: 377, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 378, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 380; или

p) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 381, SEQ ID NO: 382 и SEQ ID NO: 383, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, представленных в SEQ ID NO: 384, SEQ ID NO: 385 и SEQ ID NO: 386.

Изобретение относится также к антителу, предлагаемому в изобретении, в частности, к композиции, содержащей антитело, предлагаемое в изобретении, предназначенному/предназначенной для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где антитело, применяемое в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включающее любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, где указанное антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанное антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH) антител, указанных в таблице 8, и имеющие последовательности, представленные в таблице 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VK) антител, указанных в таблице 8, и имеющие последовательности, представленные в таблице 8.

Изобретение относится также к антителу, предлагаемому в изобретении, в частности, к композиции, которая содержит антитело, предлагаемое в изобретении, которое/которая предназначено/предназначена для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где антитело, применяемое в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его фрагменты, где указанное антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18ВР, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанное антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антител, указанных в таблице 8, и имеющие последовательности, определенные согласно Хотиа, которые указаны в таблице 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 соответствующей вариабельной области легкой цепи антител, указанных в таблице 8, и имеющие последовательности, определенные согласно Хотиа, которые указаны в таблице 8.

В частности, они представляют собой сегменты CDR или CDR антител 107С6, 108F8, 109А6, 111А6, 131В4, 131Е8, 131Н1, 132Н4, 133А6, 131В4-2, указанные в таблице 8.

В частности, антитело, предлагаемое в изобретении, в частности антитело, применяемое в композиции, которая содержит антитело, предлагаемое в изобретении, которое предназначено для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, которое связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, содержащее

а) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154 и SEQ ID NO: 155, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 157 и SEQ ID NO: 158;

б) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 161, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 163 и SEQ ID NO: 164;

в) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166 и SEQ ID NO: 167, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 169 и SEQ ID NO: 170;

г) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 173, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 174, SEQ ID NO: 175 и SEQ ID NO: 176;

д) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 173, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 179;

е) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 181 и SEQ ID NO: 182, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 191;

ж) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 184 и SEQ ID NO: 185, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 191;

з) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 187 и SEQ ID NO: 188, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 191;

и) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 193 и SEQ ID NO: 194, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 и SEQ ID NO: 203;

к) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196 и SEQ ID NO: 197, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 и SEQ ID NO: 203;

л) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 200, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 и SEQ ID NO: 203;

м) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205 и SEQ ID NO: 206, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 207, SEQ ID NO: 208 и SEQ ID NO: 209;

н) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205 и SEQ ID NO: 206, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 210, SEQ ID NO: 211 и SEQ ID NO: 212;

o) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 215, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217 и SEQ ID NO: 218;

п) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220 и SEQ ID NO: 221, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223 и SEQ ID NO: 224; или

p) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226 и SEQ ID NO: 227, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229 и SEQ ID NO: 230.

Изобретение относится также к антителу, предлагаемому в изобретении, в частности, к композиции, которая содержит антитело, предлагаемое в изобретении, которая/которое предназначено/предназначена для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где антитело, применяемое в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его фрагменты, где указанное антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18ВР, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанное антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антител, указанных в таблице 8, и имеющие последовательности, определенную согласно Кэботу, которые указаны в таблице 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 соответствующей вариабельной области легкой цепи антител, указанных в таблице 8, и имеющие последовательности, определенную согласно Кэботу, которые указаны в таблице 8.

В частности, они представляют собой сегменты CDR или CDR антител 107С6, 108F8, 109А6, 111А6, 131В4, 131Е8, 131Н1, 132Н4, 133А6, 131В4-2, указанных в таблице 8.

В частности, антитело, предлагаемое в изобретении, в частности антитело, применяемое в композиции, которая содержит антитело, предлагаемое в изобретении, которое предназначено для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, которое связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, содержащее

а) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 и SEQ ID NO: 233, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 234, SEQ ID NO: 235 и SEQ ID NO: 236;

б) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 237, SEQ ID NO: 238 и SEQ ID NO: 239, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 240, SEQ ID NO: 241 и SEQ ID NO: 242;

в) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 243, SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 245, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, SEQ ID NO: 246, SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 248;

г) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 251, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 252, SEQ ID NO: 253 и SEQ ID NO: 254;

д) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 251, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256 и SEQ ID NO: 257;

е) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259 и SEQ ID NO: 260, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 268 и SEQ ID NO: 269;

ж) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 262 и SEQ ID NO: 263, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 268 и SEQ ID NO: 269;

з) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 и SEQ ID NO: 266, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 268 и SEQ ID NO: 269;

и) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 270, SEQ ID NO: 271 и SEQ ID NO: 272, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 279, SEQ ID NO: 280 и SEQ ID NO: 281;

к) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 273, SEQ ID NO: 274 и SEQ ID NO: 275, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 279, SEQ ID NO: 280 и SEQ ID NO: 281;

л) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 276, SEQ ID NO: 277 и SEQ ID NO: 278, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 279, SEQ ID NO: 280 и SEQ ID NO: 281;

м) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 282, SEQ ID NO: 283 и SEQ ID NO: 284, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 285, SEQ ID NO: 286 и SEQ ID NO: 287;

н) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 282, SEQ ID NO: 283 и SEQ ID NO: 284, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 288, SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 290;

o) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 291, SEQ ID NO: 292 и SEQ ID NO: 293, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 295 и SEQ ID NO: 296;

п) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 297, SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 299, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 300, SEQ ID NO: 301 и SEQ ID NO: 302; или

p) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 303, SEQ ID NO: 304 и SEQ ID NO: 305, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 306, SEQ ID NO: 307 и SEQ ID NO: 308.

Изобретение относится также к антителу, предлагаемому в изобретении, в частности, к композиции, которая содержит антитело, предлагаемое в изобретении, которое/которая предназначено/предназначена для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где антитело, применяемое в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его фрагменты, где указанное антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18ВР, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанное антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антител, указанных в таблице 8, и имеющие последовательности, определенные согласно IMGT, которые представлены в таблице 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 соответствующей вариабельной области легкой цепи антител, указанных в таблице 8, и имеющие последовательности, определенные согласно IMGT, которые представлены в таблице 8.

В частности, они представляют собой сегменты CDR или CDR антител 107С6, 108F8, 109А6, 111А6, 131В4, 131Е8, 131Н1, 132Н4, 133А6, 131В4-2, указанных в таблице 8.

В частности, антитело, предлагаемое в изобретении, в частности антитело, применяемое в композиции, которая содержит антитело, предлагаемое в изобретении, которое предназначено для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, которое связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, содержащее

а) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 29, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 32;

б) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 и SEQ ID NO: 35, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37 и SEQ ID NO: 38;

в) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40 и SEQ ID NO: 41, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 44;

г) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49 и SEQ ID NO: 50;

д) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 и SEQ ID NO: 53;

е) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55 и SEQ ID NO: 56, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 59;

ж) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105 и SEQ ID NO: 106, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 59;

з) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111 и SEQ ID NO: 112, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 59;

и) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 и SEQ ID NO: 62, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67 и SEQ ID NO: 68;

к) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64 и SEQ ID NO: 65, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67 и SEQ ID NO: 68;

л) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 123 и SEQ ID NO: 124, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67 и SEQ ID NO: 68;

м) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131 и SEQ ID NO: 132, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137 и SEQ ID NO: 138;

н) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131 и SEQ ID NO: 132, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143 и SEQ ID NO: 144;

o) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 и SEQ ID NO: 71, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73 и SEQ ID NO: 74;

п) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 77, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 80; или

p) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55 и SEQ ID NO: 56, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 59.

В различных вариантах осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении, в частности антитело, которое применяют в композиции, содержащей антитело, предлагаемое в изобретении, которое предназначено для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, которое связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, содержащее

а) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 9 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 10;

б) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 12;

в) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 13 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 14;

г) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 15 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 16;

д) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 15 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 17;

е) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 18 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 19;

ж) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 103 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 19;

з) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 109 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 19;

и) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 20 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 22;

к) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 21 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 22;

л) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 121 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 22;

м) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 129 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 135;

н) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 129 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 141;

о) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 23 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 24;

п) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 25 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 26; или

р) аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 387 и аминокислотную последовательность VK SEQ ID NO: 19.

В различных альтернативных вариантах осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении, которое предназначено для применения в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе, предлагаемом в изобретении, для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, последовательность которого идентична на 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% последовательности одного из антител, указанных выше в подпунктах (а)-(р). В частности, указанное антитело не имеет никаких модификаций последовательности в CDR. Модификации вне CDR в каркасных доменах могут быть осуществлены в процессе гуманизации антитела и они служат для того, чтобы избежать возникновения, или для аннулирования иммунного ответа у человека.

Под объем настоящего изобретения подпадают также полинуклеотиды, кодирующие антитела, предлагаемые в изобретении, в частности антитела, указанные выше в подпунктах (а)-(р). В различных конкретных вариантах осуществления изобретения указанные полинуклеотиды имеют последовательности, представленные в перечне последовательностей под номерами SEQ ID NO: 81 и 83; 85 и 87, 89 и 91, 93 и 95, 93 и 97, 99 и 113, 101 и 113, 107 и 113, 115 и 125, 117 и 125, 119 и 125, 127 и 133, 127 и 139, 145 и 147, 149 и 151. Под объем настоящего изобретения подпадают также полинуклеотиды, которые являются комплементами указанных выше пар последовательностей или гибридизуются с указанными последовательностями в строгих условиях гибридизации и кодируют антитело, последовательность которого идентична на 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% последовательности одного из антител, указанного выше в подпунктах (а)-(р), где указанное антитело не имеет никаких модификаций последовательностей CDR.

Антитело, предлагаемое в изобретении, которое предназначено для применения в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе, предлагаемом в изобретении, для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма согласно изобретению, может представлять собой антитело, выбранное из группы, состоящей из моноклональных, поликлональных, химерных, одноцепочечных, биспецифических или биэффективных, антител с трансплантированными участками обезьяньих антител (симианизированных), человеческих и гуманизированных антител.

В частности, антитело, применяемое в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма согласно изобретению, представляет собой человеческое или гуманизированное антитело.

Антитело, предлагаемое в изобретении, можно получать путем вакцинации животного-донора для вырабатывания антител к человеческому интерлейкину-18 с применением технологии, позволяющей осуществлять иммунизацию с использованием белков с правильной укладкой. В конкретном варианте осуществления изобретения перед осуществлением иммунизации отбирают генетически модифицированных животных-доноров, в частности, мышей, имеющих главные комплексы гистосовместимости, которые предположительно являются чувствительными к IL-18BP, связывающемуся с расположенным на поверхности эпитопом IL-18. После иммунизации В-клетки выделяют из селезенки и осуществляют гибридизацию согласно стандартной основанной на получении гибридом технологии. Гибридомы сортируют на твердом носителе, в частности, на микропланшетах, и затем тестируют в отношении экспрессии моноклональных антител к IL-18, мишенью которых являются эпитопы IL-18, находящиеся в сайте связывания IL-18BP. Скрининг можно проводить, осуществляя 3 последовательные и селективные стадии:

Первая стадия. Сначала осуществляют скрининг антител с использованием IL-18, связанного с носителем, таким как гранула Luminex, для отбора клеток, экспрессирующих моноклональные антитела к IL-18.

Вторая стадия. Потенциальные антитела, мишенью которых является IL-18 на сайте связывания IL-18BP, подвергают повторному скринингу в условиях конкуренции с IL-18BP, но не со слияниями IL-18BP с Fc-доменами антител или слияниями других типов, для предупреждения отбора ложно-позитивных антител-кандидатов вследствие стерической помехи, создаваемой слитым пептидом.

Затем комплекс экспонируют биотинилированному IL-18BP для выявления интерференции с ранее идентифицированными антителами к IL-18 (см. таблицу 7, колонка №2).

Третья стадия. Третий скрининг можно осуществлять, например, с использованием связанного с носителем IL-18BP, в частности, IL-18BP, сцепленного с гранулами Luminex, и затем включенного в комплекс с интерлейкином-18, что обеспечивает презентацию имеющего правильную укладку рекомбинантного IL-18 позитивным антителам-кандидатам.

Изобретение относится также к ингибитору IL-18, предлагаемому в изобретении, или к композиции, содержащей ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, предназначенному/предназначенной для применения согласно различным вариантам осуществления изобретения, представленным в настоящем описании, где ингибитор IL-18 представляет собой IL-18BP, в частности, человеческий IL-18BP, в частности, связывающий рекомбинантный человеческий интерлейкин-18 белок (rhIL-18BP).

В частности, IL-18BP представляет собой изоформу a, b, с или d IL-18BP, в частности изоформу а, в частности изоформу с, в частности изоформу a, b, с или d, представленные на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 7, и SEQ ID NO: 388-390, но, прежде всего изоформу a IL-18BP, представленную на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 7, или изоформу с, представленную на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 389.

В композиции, предлагаемой в изобретении, можно применять также смеси указанных выше изоформ, в частности смесь изоформы а и изоформы с.

Под объем настоящего изобретения подпадает также мутеин IL-18BP, его фрагмент, пептид, функциональное производное, функциональный фрагмент, фракция, подвергнутое циклической мутации производное, слитый белок, содержащий IL-18BP, изоформа или соль.

В частности, изобретение относится к IL-18BP, который представляет собой слитый белок, содержащий полный или часть IL-18BP, который слит с полным иммуноглобулином или его частью, предпочтительно с константной областью иммуноглобулина, и где слитый белок все еще обладает способностью связываться с IL-18. Более конкретно, для применения в композиции согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения иммуноглобулин может быть IgG1- или IgG2-изотипа.

В различных вариантах осуществления изобретения предложен/предложена ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, или композиция, содержащая ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения для лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения, которое представляет собой одно из заболеваний или нарушений, выбранное из группы, состоящей из хронического обструктивного заболевания легких (COPD), связанного с трансфузией повреждения легкого, бронхолегочной дисплазии (BPD), острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), болезни Стилла, в частности болезни Стилла взрослых или болезни Стилла детей, юношеского ревматоидного артрита (JRA), юношеского идиопатического артрита (JIA), юношеского идиопатического артрита с системным началом (SoJIA), системного юношеского идиопатического артрита (sJIA), интерстициального заболевания легких (ILD), синдрома активации макрофагов (MAS), включая первичный, вторичный и рекуррентный MAS, гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза (HLH), семейного (наследственного) гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза (FHLH), ассоциированного с дефектами гена перфорина, munc 13-4 и 18-2, синтаксина 11, иммунных дефицитов, таких как синдром Чедиака-Хигаси (CHS), синдрома Грисцелли (GS), X-сцепленного лимфопролиферативного синдрома (XLP2), дефицита X-сцепленного ингибитора белка апоптоза (XIAP), приобретенного гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза, ассоциированного с инфекционными состояниями, прежде всего с вирусом герпеса, таким как EBV, и другими патогенами, криопирин-ассоциированных периодических синдромов (CAPS), включая семейный холодовой аутовоспалительный синдром (FCAS), синдром Мукле-Веллса (MWS) и мультисистемное воспалительное заболевание неонатального возраста (NOMID), аутовоспалительных синдромов, ассоциированных с мутациями NLRC4, гигантоклеточного артериита (GCA), пиогенного артрита, гангренозной пиодермы и угрей (PAPA), географической атрофии, саркоидоза, легочного саркоидоза, идиопатического легочного фиброза, муковисцидоза, легочной артериальной гипертензии, астмы, бронхоэктаза, сердечной недостаточности, ишемической болезни сердца, амиотрофического бокового склероза (ALS), атеросклероза, болезни сухого глаза (DED), кератита, язвы и истирания роговицы, неоваскуляризации роговицы, патологической внутриглазной неоваскуляризации, ирита, глаукомы, дегенерации желтого пятна, синдрома Шегрена, аутоиммунного увеита, болезни Бехчета, конъюнктивита, аллергического конъюнктивита, дерматита века, диабета типа 1, диабета типа 2, неалкогольной жировой болезни печени (NAFLD), стеатогепатита, трансплантации солидных органов и гематологических стволовых клеток, повреждения, вызванного ишемией-реперфузией, семейной средиземноморской лихорадки (FMF), периодических синдромов, ассоциированных с рецептором 1 фактора некроза опухоли (TRAPS), синдромов гипер-IgD (мутация в гене мевалонаткиназы), подагры, синдрома Шнитцлера, грануломатоза Вегенера, называемого также грануломатозом с полиангиитом (GPA), тиреоидита Хашимото, воспалительного заболевания кишечника (IBD), такого как болезнь Крона, воспалительного заболевания кишечника с ранним началом (EOIBD), EOIBD с очень ранним началом (VEOIBD), детского IBD, неонатального IBD, неспецифического язвенного колита, связанных с иммуноглобулином-4 (IgG4) заболеваний, синдрома Блау (мутация NOD-2), и терапий на основе стволовых клеток.

В одном из вариантов осуществления изобретения предложен/предложена ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, или композиция, содержащая ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, которая представлена в настоящем описании, для применения для лечения педиатрических аутовоспалительных заболеваний или состояний, в частности MAS-подобного педиатрического заболевания или состояния.

В конкретном варианте осуществления изобретения, MAS-подобное педиатрическое заболевание или состояние, подлежащее лечению с помощью ингибитора IL-18, предлагаемого в изобретении, или композиции, содержащей указанный ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, представляет собой ассоциированное с IL-18 педиатрическое аутовоспалительное заболевание или состояние с серьезным системным воспалением.

В частности, аутовоспалительное заболевание или состояние с серьезным системным воспалением обусловлено мутацией NLRC4 и/или ассоциировано с дефицитом XIAP, в частности дефицитом XIAP, обусловленным мутацией в XIAP/BIRC4.

Ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, можно применять для лечения Х-сцепленного лимфопролиферативного синдрома 2 (XLP2), обусловленного мутациями в XIAP/BIRC4, и/или для лечения серьезного гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза с ранним началом/MAS (HLH/MAS), ассоциированного с моногенным дефицитом XIAP, обусловленным мутациями XIAP/BIRC4.

В конкретном варианте осуществления изобретения ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, можно применять для лечения энтероколита, в частности Крон-подобного энтероколита, обусловленного или ассоциированного с дефицитом XIAP, в частности дефицитом XIAP, обусловленным мутацией в XIAP/BIRC4.

В конкретном варианте осуществления изобретения ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, можно применять для лечения воспалительного заболевания кишечника с ранним началом (EOIBD), EOIBD с очень ранним началом (VEOIBD), детского IBD, неонатального IBD, в частности в группе детей возрастом меньше 5 лет с различными генетическими дефектами, такими как мутации в/варианты IL-10, XIAP, NCF2, MEFV, LRBA, IL-10R, общий вариабельный иммунодефицит (CVID), CD19, MSH5, и др., и которые характеризуются слабым ответом на стандартное лечение.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18ВР, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, можно применять для снижения чувствительности к вирусным инфекциям, в частности инфекциям, вызываемым EBV и/или CMV, у пациентов, страдающих дефицитом XIAP, в частности дефицитом XIAP, обусловленным мутацией в XIAP/BIRC4, до того, как имела место вирусная инфекция, или после выведения вируса при лечении противовирусным средством.

В различных вариантах осуществления изобретения аутовоспалительное заболевание или состояние с серьезным системным воспалением, указанное в настоящем описании, сопровождается высокими уровнями IL-18 и свободного IL-18.

В одном из вариантов осуществления изобретения ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, применяют для лечения индивидуума, страдающего педиатрическим аутовоспалительным заболеванием или состоянием, в частности MAS-подобным педиатрическим заболеванием или состоянием (указанным в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения), которого ранее лечили одним или несколькими соединениями, выбранными из группы, которая состоит из нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (NSAIDS), преднизона; синтетических модифицирующих заболевание противоревматических лекарственных средств (sDMARD), иммунодепрессантов и биологических иммунодепрессантов, но у которого не был выявлен ответ на лечение или был выявлен неполный ответ на лечение.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, или композицию, содержащую ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18ВР, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, применяют для лечения эпизодов стерильного артрита с ранним началом, гангренозной пиодермы и угрей, которые являются компонентом РАРА-синдрома.

В различных вариантах осуществления изобретения ингибитор IL-18, предназначенный для применения для лечения педиатрических аутовоспалительных заболеваний или состояний, в частности MAS-подобного педиатрического заболевания или состояния, указанного в настоящем описании, представляет собой IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, указанный в настоящем описании, и композиция содержит IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, указанный в настоящем описании. В конкретном варианте осуществления изобретения композиция, содержащая IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, указанный в настоящем описании, практически свободна от имеющих N-концевую и/или C-концевую делецию вариантов IL-18ВР.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения IL-18BP представляет собой человеческий IL-18BP, в частности связывающий рекомбинантный человеческий интерлейкин-18 белок (rhIL-18BP).

В частности, IL-18BP выбирают из изоформ a, b, с и d человеческого IL-18ВР, в частности изоформы а, в частности изоформы с, в частности изоформы a, b, с или d, которые представлены на фиг. 12, но, прежде всего из изоформы а IL-18BP, представленной на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 7, или изоформы с, представленной на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 389.

В композиции, предлагаемой в изобретении, можно применять также смеси указанных выше изоформ, в частности смесь изоформы а и изоформы с.

Под объем настоящего изобретения подпадает также мутеин IL-18BP, его фрагмент, пептид, функциональное производное, функциональный фрагмент, фракция, подвергнутое циклической мутации производное, слитый белок, содержащий IL-18BP, изоформа или соль.

В различных вариантах осуществления изобретения ингибитор IL-18, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, или композицию, содержащую указанный ингибитор IL-18, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, применяют для лечения млекопитающего, в частности человека.

В конкретном варианте осуществления изобретения IL-18BP, предлагаемый в изобретении, или композицию, содержащую IL-18BP, предлагаемый в изобретении, и в частности IL-18BP или композицию, содержащую IL-18BP, предлагаемый в изобретении, предназначенный/предназначенную для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, вводят индивидууму, подлежащему лечению, в виде нескольких доз/день, нескольких доз/неделю или нескольких доз/месяц.

В частности, IL-18BP, предлагаемый в изобретении, или композицию, содержащую IL-18BP, предлагаемый в изобретении, вводят в виде двух доз в неделю, трех доз в неделю, четырех доз в неделю.

В конкретном варианте осуществления изобретения IL-18BP, предлагаемый в изобретении, или композицию, содержащую IL-18BP, предлагаемый в изобретении, вводят каждые 24-48 ч.

В конкретном варианте осуществления изобретения однократная доза или стандартная доза содержит от 0,5 мг IL-18 ВР/кг веса тела до 10 мг IL-18 ВР/кг веса тела, в частности от 1 мг IL-18 ВР/кг веса тела до 8 мг IL-18 ВР/кг веса тела, в частности от 2 мг IL-18 ВР/кг веса тела до 6 мг IL-18 ВР/кг веса тела, в частности от 1 мг IL-18 ВР/кг веса тела до 5 мг IL-18 ВР/кг веса тела.

В одном из вариантов осуществления изобретения изоформу человеческого IL-18BP или композицию, содержащую изоформу человеческого IL-18BP, вводят в виде однократной дозы, составляющей 1 мг IL-18 ВР/кг веса тела каждые 48 ч больному ребенку, страдающему от педиатрических аутовоспалительных заболеваний или состояний, в частности MAS-подобных педиатрических заболеваний или состояний, указанных в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения.

В конкретном варианте осуществления изобретения композиция, предлагаемая в изобретении, предназначена для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения для лечения болезни Стилла, в частности юношеской болезни Стилла, но, прежде всего, болезни Стилла, развившейся у взрослых (AoSD).

В частности, композиция содержит IL-18BP и у индивидуума, подлежащего лечению, диагностирована болезнь Стилла, в частности на основе выполнения по меньшей мере двух из основных критериев Ямагучи и необязательно наличия повышенного уровня маркеров воспаления.

Указанные по меньшей мере два из основных критериев Ямагучи выбирают из группы, состоящей из

I. температура >39°C в течение >1 недели;

II. лейкоцитоз >10000/мм³ с PMN>80%;

III. типичная сыпь;

IV. артралгия в течение >2 недель.

В одном из вариантов осуществления изобретения индивидуума, подлежащего лечению композицией, предлагаемой в изобретении, согласно одной из описанных выше схем введения, подвергали лечению с применением нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (NSAIDS), и/или преднизона, и/или синтетических модифицирующих заболевание противоревматических лекарственных средств (sDMARD), но у них не был получен ответ на лечение или был получен неполный ответ на лечение.

В частности, указанного индивидуума подвергали лечению нестероидными противовоспалительными лекарственными средствами (NSAIDS) и/или преднизоном в дозе, составляющей по меньшей мере 5 мг/день, в течение ≥1 месяца, и/или синтетическими модифицирующими заболевание противоревматическими лекарственными средствами (sDMARD) в дозе, составляющей по меньшей мере 10 мг/день в течение ≥3 месяцев.

В конкретном варианте осуществления изобретения указанная композиция, предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения для лечения болезни Стилла, в частности юношеской болезни Стилла, но, прежде всего, болезни Стилла, развившейся у взрослых (AoSD), практически свободна от имеющих N-концевую и/или C-концевую делецию вариантов IL-18BP.

В различных других вариантах осуществления изобретения указанные делеционные варианты имеют делеции от 1 до 5 аминокислотных остатков на С-конце IL-18BP и/или от 1 до 30 аминокислотных остатков на N-конце IL-18BP.

В частности, доля делеционных вариантов в композиции, предлагаемой в изобретение составляет менее чем 30%, в частности менее чем 20%, в частности менее чем 15%, в частности менее чем 10%, в частности менее чем 7,5%, в частности менее чем 5%, в частности менее чем 2,5%, в частности менее чем 1%, в частности менее чем 0,5%, в частности менее чем 0,25%, в частности менее чем 0,1%.

В другом варианте осуществления изобретения композиция, предлагаемая в изобретении, и, в частности, композиция, предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения для лечения болезни Стилла, в частности юношеской болезни Стилла, но, прежде всего, болезни Стилла, развившейся у взрослых (AoSD), содержит буфер, содержащий хлорид натрия и/или гидроксид натрия, и/или фосфат натрия, в частности в концентрации, составляющей от 0,01 до 0,1 М, в частности от 0,01 до 0,05 М, и, прежде всего 0,01 М.

В частности, указанную композицию приготавливают в виде стерильного раствора для инъекций, и она содержит буфер, содержащий хлорид натрия, гидроксид натрия и фосфат натрия, в частности, в концентрации 0,01 М.

В одном из вариантов осуществления изобретения композиция, предлагаемая в изобретении, предназначена для введения путем s.с.-инъекции. В частности, область s.с.-инъекции чередуют, в частности область инъекции находится на внешней стороне бедер и в различных квадрантах передней брюшной стенки. В частности, отдельные инъекции, которые в совокупности обеспечивают введение однократной дозы композиции, предлагаемой в изобретении, осуществляют в одну и ту же область тела, но не в строго одно и то же место.

В одном из вариантов осуществления изобретения перед введением температуру композиции доводят до комнатной, в частности до 18-25°C.

Еще в одном варианте осуществления изобретения композицию, предлагаемую в изобретении, и в частности композицию, предназначенную для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения для лечения болезни Стилла, в частности юношеской болезни Стилла, но, прежде всего, болезни Стилла, развившейся у взрослых (AoSD), вводят индивидууму, подлежащему лечению, в виде нескольких доз/день, нескольких до/неделю или нескольких доз/месяц.

В частности, композицию вводят в виде двух доз в неделю, трех доз в неделю, четырех доз в неделю.

В конкретном варианте осуществления изобретения однократная доза композиции, предлагаемой в изобретении, и в частности композиции, предназначенной для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, содержит от 10 до 600 мг IL-18BP.

В частности, однократная доза содержит от 10 до 20 мг, от 20 до 40 мг, от 40 до 80 мг, от 80 до 160 мг, от 160 до 320 мг или от 320 до 600 мг IL-18BP.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения композицию, предлагаемую в изобретении, и, в частности, композицию, предназначенную для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, вводят индивидууму, подлежащему лечению, по меньшей мере до тех пор, пока у подвергнутого лечению индивидуума не будет выявлен терапевтический ответ.

Указанный терапевтический ответ, в частности, характеризуется

(а) нормализацией температуры тела (нормальный диапазон от 36,3 до 37,4°C при измерении в подмышечной впадине) в отсутствии применения вторичных лекарственных средств, таких как NSAID, за 24 ч до измерения;

(б) ослаблением опухания суставов и повышением их мягкости (≥20%) и,

(в) снижением уровня C-реактивного белка (CRP) на ≥70% или нормализацией уровня CRP и ферритина до достижения референс-значений.

В одном из вариантов осуществления изобретения композиция, предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения для лечения болезни Стилла, в частности юношеской болезни Стилла, но, прежде всего, болезни Стилла, развившейся у взрослых (AoSD), содержит антитело, предлагаемое в изобретении, представленное в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к композиции, предлагаемой в изобретении, предназначенной для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где установленный уровень свободного IL-18 в общей воде организма должен быть ≥5 пг/мл и, в частности, составлять вплоть до 100 пг/мл, в частности от 6 до 50 пг/мл, в частности от 8 до 35 пг/мл, по сравнению с уровнем ≤4 пг/мл у здорового контрольного индивидуума.

Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к композиции, предлагаемой в изобретении, которая предназначена для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанное ассоциированное с IL-18 заболевание или нарушение представляет собой индуцированное IL-18 системное проявление воспаления и ассоциированные сочетанные заболевания, выбранные из группы, которая состоит из эмфиземы, воспаления ткани, деструкции ткани, резекции легкого, исчезновения сосудистой сети, апоптоза эндотелиальных клеток, метаплазии слизистой оболочки, гипертрофии сердца, снижения уровня VEGF в ткани легкого, утраты легочных сосудов, мускуляризации сосудов, ремоделирования сосудов, отложения коллагена, образования патологических слоев эластина в легком, фиброзного ремоделирования легкого, расширения воздушного пространства легких, хронического ремоделирования дыхательных путей и легочных сосудов и снижения легочной функции.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к композиции, предлагаемой в изобретении, предназначенной для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения для лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения, которое является компонентом синдрома хронического обструктивного заболевания легких (COPD), индуцированного курением, воздействием пассивного курения, загрязнителями воздуха в целом и характеризуется наличием слабо обратимого ограничения воздушного потока.

В частности, ассоциированное с IL-18 заболевание или нарушение ассоциировано с многими компонентами гетерогенного заболевания COPD и осложнений COPD, индуцированных вирусной или бактериальной инфекцией.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения хронического обструктивного заболевания легких (COPD), острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), заболевания сердца, амиотрофического бокового склероза (ALS), болезни сухого глаза и/или диабета типа 1 и/или типа 2.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения хронического обструктивного заболевания легких (COPD).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения заболевания сердца.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения болезни сухого глаза.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения амиотрофического бокового склероза (ALS).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения диабета типа 1 и/или диабета типа 2.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения болезни Стилла.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения болезни Стилла, развившейся у взрослых.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения юношеской болезни Стилла.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения юношеского ревматоидного артрита (JRA).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения юношеского идиопатического артрита (JIA).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения юношеского идиопатического артрита с системным началом (SoJIA).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения системного юношеского идиопатического артрита (sJIA).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения интерстициального заболевания легких (ILD).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения синдрома активации макрофагов (MAS).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза (HLH).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения семейного (наследственного) гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза (FHLH), ассоциированного с дефектами гена перфорина, munc 13-4.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения заболевания, обусловленного дефектом в гене синтаксина 11.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения иммунных дефицитов.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения синдрома Чедиака-Хигаси (CHS).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения синдрома Грисцелли (GS).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения Х-сцепленного лимфопролиферативного синдрома (XLP).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения приобретенного гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза, ассоциированного с инфекционными состояниями, в частности с вирусом герпеса, в частности с EBV.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения криопирин-ассоциированных периодических лихорадочных синдромов (CAPS).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения семейного холодового аутовоспалительного синдрома (FCAS).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения синдрома Мукле-Веллса (MWS).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения мультисистемного воспалительного заболевания неонатального возраста (NOMID).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения аутовоспалительного синдрома, ассоциированного с мутациями в NLRC4.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения гигантоклеточного артериита (GCA).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения географической атрофии.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения саркоидоза, легочного саркоидоза.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения связанного с трансфузией повреждения легкого.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения бронхолегочной дисплазии (BPD).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения интерстициального заболевания легких (ILD).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения идиопатического легочного фиброза.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения муковисцидоза.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения легочной артериальной гипертензии

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения астмы.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения бронхоэктаза.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения сердечной недостаточности.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения ишемической болезни сердца.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения атеросклероза.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения амиотрофического бокового склероза

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения болезни сухого глаза

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения кератита.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения язвы и истирания роговицы.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения неоваскуляризации роговицы.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения патологической внутриглазной неоваскуляризации.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения ирита.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения глаукомы.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения дегенерации желтого пятна.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения синдрома Шегрена.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения аутоиммунного увеита.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения болезни Бехчета.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения конъюнктивита, в частности аллергического конъюнктивита.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения дерматита века.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения неалкогольной жировой болезни печени (NAFLD).

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения стеатогепатита.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения нарушения, связанного с трансплантацией солидного органа и гематологической трансплантацией.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения повреждения, вызванного ишемией-реперфузией.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения семейной средиземноморской лихорадки.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения периодических синдромов, ассоциированных с рецептором 1 фактора некроза опухоли.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения криопирин-ассоциированных периодических лихорадочных синдромов.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения синдромов гипер-IgD.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения подагры.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения синдрома Шнитцлера.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения грануломатоза Вегенера.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения тиреоидита Хашимото.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения болезни Крона.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения неспецифического язвенного колита.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения связанных с иммуноглобулином-4 (IgG4) заболеваний.

В настоящем изобретении предложена также композиция, указанная в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для применения для лечения при использовании терапии на основе стволовых клеток.

Лечение любого ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения с применением ингибитора IL-18, предлагаемого в изобретении, в частности IL-18ВР, предлагаемого в изобретении, который указан в настоящем описании, или композиции, содержащей ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который указан в настоящем описании, включает предупреждение, прекращение, облегчение или реверсию симптомов, ассоциированных с указанным заболеванием или нарушением.

Различные другие варианты осуществления изобретения относятся к ингибитору IL-18, предлагаемому в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемому в изобретении, который представлен в настоящем описании, или к композиции, содержащей ингибитор IL-18, предлагаемый в изобретении, в частности IL-18BP, предлагаемый в изобретении, который представлен в настоящем описании, предназначенному/предназначенной для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, в котором

- модифицируют, в частности, ингибируют повышенную экспрессию IFNγ, IL-13 или IL-17A по сравнению с экспрессией у необработанных индивидуумов, страдающих указанным заболеванием или нарушением; и/или

- связывание IL-18BP свободного IL-18 компенсирует дисбаланс IL-18/IL-18ВР в результате улавливания и нейтрализации избытка свободного IL-18 в ткани и кровотоке; и/или

- IL-18BP ингибирует инфильтрацию нейтрофилов в легкое, в частности в результате уменьшения высвобождения G-CSF в дыхательных путях легкого; и/или

- ограничивают или ингибируют связывание IL-18, в частности, связывание свободного IL-18 с IL-18R, и, прежде всего связывание свободного IL-18 с IL-18Rα; и/или

- IL-18BP снижает связывание IL-18 с рецептором IL-18, в частности, связывание с IL-18Rα по меньшей мере на 5%, в частности, по меньшей мере на 10%, в частности, по меньшей мере на 15%, в частности, по меньшей мере на 20%, в частности, по меньшей мере на 25%, в частности, по меньшей мере на 30%, в частности, по меньшей мере на 40%, в частности, по меньшей мере на 45%, в частности, по меньшей мере на 50%, в частности, по меньшей мере на 55%, в частности, по меньшей мере на 60%, в частности, по меньшей мере на 65%, в частности, по меньшей мере на 70%, в частности, по меньшей мере на 75%, в частности, по меньшей мере на 80%, в частности, по меньшей мере на 85%, в частности, по меньшей мере на 90%, в частности, по меньшей мере на 95%, в частности, на 100%; и/или

- IL-18BP нейтрализует свободный IL-18 путем ограничения или предупреждения связывания IL-18 с рецептором IL-18 (IL-18R), прежде всего связывание свободного IL-18 с IL-18Rα.

Различные варианты осуществления настоящего изобретения открывают новые возможности для лечения педиатрических аутовоспалительных заболеваний с серьезным системным воспалением (в дальнейшем обозначены как MAS-подобные педиатрические состояния) и/или ассоциированных с ними симптомов, на основе объединения количественной оценки истинного свободного IL-18 в общей воде организма пациента, подлежащего лечению, с терапевтическим направленным воздействием на IL-18 связывающего IL-18 белка (IL-18BP) или антител, которые специфически связываются со свободным IL-18.

В частности, один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к ингибитору IL-18, в частности к IL-18BP или его активному фрагменту или варианту, представленному в настоящем описании, или к композиции, содержащей указанный ингибитор IL-18, в частности IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, представленный в настоящем описании, который/которая предназначен/предназначена для применения для лечения педиатрических аутовоспалительных заболеваний или состояний, в частности, для применения для лечения MAS-подобных педиатрических заболеваний или состояний и/или ассоциированных с ними симптомов у пациента, страдающего от такого заболевания или нарушения.

В частности, указанный пациент представляет собой млекопитающее, в частности человека.

В конкретном варианте осуществления изобретения MAS-подобное педиатрическое заболевание или состояние представляет собой ассоциированное с IL-18 педиатрическое аутовоспалительное заболевание или состояние с серьезным системным воспалением.

В частности, в настоящем изобретении предложен ингибитор IL-18, в частности IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, представленный в настоящем описании, или композиция, содержащая указанный ингибитор IL-18, в частности IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, представленный в настоящем описании, который/которая предназначен/предназначена для применения для лечения педиатрического аутовоспалительного заболевания или состояния с серьезным системным воспалением, которое обусловлено мутациями NLRC4, и/или ассоциированных с ним симптомов.

Мутации NLRCA могут приводить к повышенной активации NLRC4-инфламмасомы и опосредованному NLRC4 синдрому активации макрофагов (MAS). Выраженным признаком заболевания является высокий уровень IL-18, а также других цитокинов. С клинической точки зрения состояние характеризуется рекуррентными эпизодами повышенной температуры, недомогания, спленомегалии, тошноты, жидкого стула с поражениями тонкого кишечника и ободочной кишки.

Другой конкретный вариант осуществления изобретения относится к ингибитору IL-18, в частности IL-18BP или его активному фрагменту или варианту, представленному в настоящем описании, или к композиции, содержащей указанный ингибитор IL-18, в частности IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, представленный в настоящем описании, который/которая предназначен/предназначена для применения для лечения педиатрических аутовоспалительного заболевания или состояния с серьезным системным воспалением, вызванного дефицитом XIAP.

В частности, изобретение относится к ингибитору IL-18, в частности IL-18ВР или его активному фрагменту или варианту, представленному в настоящем описании, или к композиции, содержащей указанный ингибитор IL-18, в частности IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, представленный в настоящем описании, который/которая предназначен/предназначена для применения для лечения Х-сцепленного лимфопролиферативного синдрома 2 (XLP2), вызванного мутациями в XIAP/BIRC4.

Мутации в XIAP могут приводить к дефициту XIAP.

Дефицит XIAP представляет собой педиатрическое заболевание, которое возникает у лиц мужского пола и которое может проявляться в очень раннем возрасте. Наиболее часто встречающимися клиническими проявлениями являются HLH (54%), рекуррентная спленомегалия (57%) и воспалительное заболевание кишечника (IBD, 26%).

XIAP представляет собой сильный негативный регулятор NLRP3 у мышей и, по-видимому, у человека, а также инфламасом NLRC4. Гиперактивация NLRC4 приводит к конститутивному производству IL-18 миелоидными клетками.

Приводящие к потере функции мутации при дефицитах XIAP и различных фенотипах заболевания изучены лишь частично.

Одним из таких фенотипов, наблюдаемых у пациентов с дефицитом XIAP, является повышенная восприимчивость к вирусным инфекциям (EBV, CMV). Была высказана гипотеза о том, что XIAP может быть необходимым для выживания специфических в отношении вируса Т-клеток.

Кроме того, установлено, что дефицит XIAP повышает также предрасположенность к HLH.

У пациентов с дефицитом XIAP, как правило, развивается гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз (HLH), который часто является рекуррентным. У пациентов с HLH наблюдается повышенная температура, цитопения, гепатоспленомегалия, дисфункция печени, нарушения свертывания крови и гемофагоцитоз.

В отличие от FHL и XLP-1, HLH, запускаемый EBV при дефиците XIAP, не ассоциирован с нарушениями цитотоксических ответов NK- и СБ8⁺-Т-клеток, которые, по-видимому, являются нормальными.

Кроме того, у пациентов, страдающих дефицитом XIAP, часто наблюдается очень серьезный энтероколит. Имеются данные о том, что примерно 20% пациентов с дефицитом XIAP страдают от Крон-подобного трудноизлечимого энтероколита, характеризующегося слабым ответом на кортикостероиды, иммунодепрессанты и анти-TNF-агенты.

Возможное объяснение связи дефицита XIAP с Крон-подобным заболеванием на молекулярном уровне основано на том факте, что NOD-индуцируемая активация NF-kB зависит от XIAP вследствие опосредованного взаимодействия между BIR2-доменом XIAP и NOD1/2-взаимодействующим белком RIP2. Фактически, XIAP вносит вклад в трансдукцию сигнала NOD1/2 благодаря его способности стимулировать убиквитинилирование взаимодействующей с рецептором протеинкиназы 2 (RIPK2), в качестве индуктора активации NF-kB.

Таким образом, нарушение экспрессии XIAP вызывает нарушение передачи сигнала NOD1/2, приводя к недостаточной активации NF-kB. Неполная активация NF-kB, по-видимому, должна ассоциироваться с CD-подобными состояниями вследствие нарушенного вырабатывания противобактериальных ответов в кишечнике.

Более современные исследования показали, что XIAP играет более важную роль во врожденном иммунитете, поскольку было установлено, что XIAP участвует в функции Dectin-1, паттерн-распознающего рецептора, участвующего в контроле грибных инфекций. На этой модели было продемонстрировано, что XIAP необходим для активации NF-kB и МАРК, производства цитокинов и фагоцитоза после активации Dectin-1 его лигандами.

Другой вариант осуществления изобретения относится к ингибитору IL-18, в частности IL-18BP или его активному фрагменту или варианту, представленному в настоящем описании, или к композиции, содержащей указанный ингибитор IL-18, в частности IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, представленный в настоящем описании, который/которая предназначен/предназначена для применения для лечения воспалительного заболевания кишечника с ранним началом (EOIBD), в частности, в представленной в настоящем описании возрастной группе.

Рассмотрение группы пациентов с возрастом между возрастом, характерным для детского IBD, и возрастом, характерным для возрастной группы Ala с EOIBD, имеет смысл, если принять во внимание, что возраст начала заболевания часто составляет более 2 лет во многих релевантных подгруппах пациентов с моногенным IBD (таких как пациенты с дефицитом XIAP, хроническим грануломатозным заболеванием [CGD] или с другими дефектами нейтрофилов). С другой стороны, начиная с 7-летнего возраста, имеет место существенное увеличение частоты встречаемости пациентов с диагнозом обычного полигенного IBD, в частности CD. Это обусловливает наличие большей пропорции моногенного IBD у пациентов, у которых возраст начала заболевания был менее 6 лет.

Область IBD, его развитие и ответ на терапию зависят от возраста. Возраст начала заболевания может дать информацию о типе IBD и ассоциированных с ним генетических признаках:

1) для пациентов с дефектами передачи сигнала IL-10 характерно очень раннее начало заболевания, которое, как правило, возникает в течение первых месяцев жизни.

2) IBD с педиатрическим началом - термин, зарезервированный для пациентов с заболеванием, которое началось до 17-летнего возраста.

3) другую подгруппу педиатрической популяции обозначают как группу пациентов с IBD с ранним началом (EOIBD), в нее включают пациентов, у которых заболевание началось в возрасте до 10 лет.

4) IBD, начавшееся у пациентов моложе 6 лет, обозначают как IBD с очень ранним началом (VEOIBD).

Воспалительное заболевание кишечника с очень ранним началом (VEOIBD), т.е. IBD, диагностированное в возрасте ≤5, часто характеризуется другим и более серьезным фенотипом по сравнению с IBD с более поздним началом.

5) детское IBD представляет собой IBD, начавшееся у пациентов в возрасте менее 2 лет.

6) неонатальное IBD

Оценки показывают, что для VEOIBD частота встречаемости составляет 4,37/100000 детей, а распространенность составляет 14/100000.

Большинство случаев IBD с началом в возрасте старше 7-10 лет ассоциированы с полигенным характером генетической восприимчивости.

Нарушения, которые относят к моногенному IBD, имеют тенденцию к возникновению в более раннем возрасте. Имеются данные, свидетельствующие о том, что доля моногенных нарушений с IBD-подобными проявлениями среди всех пациентов с IBD находится в обратной корреляции с возрастом начала заболевания.

Механизмы, лежащие в основе воспалительного заболевания кишечника с ранним началом (EOIBD), обусловлены различными генетическими дефектами, такими как мутации в/варианты IL-10, XIAP, NCF2, MEFV, LRBA, IL-10R, общий вариабельный иммунодефицит (CVID), CD19, MSH5, и др., и они характеризуются слабым ответом на стандартное лечение

Наиболее часто встречающимися механизмами, лежащими в основе VEOIBD, являются моногенные состояния, нарушающие передачу сигнала IL-10 (IL-10, IL-10Ra, IL-10Rb), и дефициты XIAP, обусловленные мутациями, приводящими к потере функции. Как указано выше, дефицит XIAP ассоциирован с высокими уровнями IL-18 в сыворотке и, по-видимому, в кишечном компартменте.

Поскольку указанные механизмы являются рефрактерными к иммунодепрессантам первой линии и даже к биологическим агентам, таким как антитела к TNF, то лечение для стабилизации заболевания является необходимым с медицинской точки зрения.

Таким образом, в настоящем изобретении предложены подходы к лечению указанных выше состояний и/или ассоциированных с ними симптомов.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к антителу, предлагаемому в изобретении, в частности, к композиции, содержащей антитело, предлагаемое в изобретении, предназначенному/предназначенной для применения для лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения у индивидуума, страдающего от такого заболевания.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу определения количества свободного IL-18 в образце или in situ, включающему обнаружение специфического связывания IL-18BP или антитела, предлагаемого в изобретении и представленного в настоящем описании, со свободным белком IL-18 в образце или in situ, включающий стадии, на которых:

а) приводят в контакт образец или конкретную часть организма или область организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с IL-18BP или антителом, предлагаемым в изобретении и представленным в настоящем описании, который/которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают возможность связываться IL-18BP или антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 с IL-18BP или антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу диагностирования ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения, в частности ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения, указанного в настоящем описании, у пациента, включающему обнаружение специфического связывания IL-18BP или антитела, предлагаемого в изобретении и представленного в настоящем описании, со свободным белком IL-18 в образце или in situ, включающему стадии, на которых:

а) приводят в контакт образец или конкретную часть организма или область организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с IL-18BP или антителом, предлагаемым в изобретении и представленным в настоящем описании, который/которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают связываться IL-18BP или антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 с IL-18BP или антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце;

г) сравнивают количество свободного IL-18 в образце, полученном из организма индивидуума, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу диагностирования предрасположенности пациента к ассоциированному с IL-18 заболеванию или нарушению, в частности ассоциированному с IL-18 заболеванию или нарушению, указанному в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, включающему обнаружение специфического связывания IL-18BP или антитела, предлагаемого в изобретении и представленного в настоящем описании, со свободным белком IL-18 в образце или in situ, который включает стадии, на которых:

а) приводят в контакт образец или конкретную часть организма или область организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с IL-18BP или антителом, предлагаемым в изобретении и представленным в настоящем описании, который/которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают связываться IL-18BP или антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 с IL-18BP или антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце;

г) сравнивают количество свободного IL-18 в образце, полученном из организма пациента, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума;

где увеличение количества указанного свободного IL-18 в образце по сравнению с контрольным нормальным значением, полученным для здорового индивидуума, свидетельствует о том, что указанный пациент страдает от или имеет риск развития заболевания или нарушения, указанного в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу мониторинга минимальной остаточной болезни у пациента после лечения с использованием композиции, указанной в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанный способ включает:

а) приведение в контакт образца или конкретной части организма или области организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с IL-18BP или антителом, предлагаемым в изобретении и представленным в настоящем описании, который/которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) обеспечение возможности связывания IL-18BP или антитела со свободным IL-18;

в) обнаружение связывания IL-18 с IL-18BP или антителом и определение количества свободного IL-18 в образце;

г) сравнение количества свободного IL-18 в образце, полученном из организма пациента, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума;

где увеличение количества указанного свободного IL-18 в образце по сравнению с контрольным нормальным значением, полученным для здорового индивидуума, свидетельствует о том, что указанный пациент все еще страдает от минимальной остаточной болезни.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу прогнозирования чувствительности пациента к лечению с использованием композиции, указанной в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанный способ включает:

а) приведение в контакт образца или конкретной части организма или области организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с IL-18BP или антителом, предлагаемым в изобретении и представленным в настоящем описании, который/которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) обеспечение возможности связывания IL-18BP или антитела со свободным IL-18;

в) обнаружение связывания IL-18 с IL-18BP или антителом и определение количества свободного IL-18 в образце;

г) сравнение количества свободного IL-18 в образце, полученном из организма пациента, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума;

где уменьшение количества указанного свободного IL-18 в образце свидетельствует о том, что указанный пациент с высокой вероятностью может обладать чувствительностью к лечению.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу по одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, в котором IL-18ВР представляет собой изоформу а, b, с или d IL-18BP, в частности, изоформу а, в частности, изоформу с, в частности, изоформу а, b, с или d, представленные в SEQ ID NO: 7 и 388-390, и, прежде всего изоформу a IL-18BP, представленную в SEQ ID NO: 7, или изоформу с, представленную в SEQ ID NO: 389.

Можно применять также смеси указанных выше изоформ, и, в частности, смесь изоформы а и изоформы с.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу по одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, включающему на стадии а) дополнительную стадию, на которой применяют специфическую IL-18ВР-связывающую молекулу, которая связывается с сайтом IL-18BP, отличным от того, с которым связывается захватывающая молекула, в частности, где одна из указанных молекул связывается с сайтом IL-18BP, который связывается с IL-18.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу по одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, включающему дополнительную стадию, на которой определяют присутствие свободного IL-18ВР в образце путем применения на стадии а) специфической IL-18BP-захватывающей молекулы и специфической IL-18ВР-идентифицирующей молекулы, которая связывается с сайтом IL-18BP, отличным от того, с которым связывается захватывающая молекула, в частности, когда одна из указанных специфических в отношении IL-18BP молекул связывается с сайтом IL-18BP, который связывается с IL-18; путем определения на стадии в) количества свободного и общего IL-18 и свободного и общего IL-18BP, связанного с захватывающей молекулой в образце; и путем сравнения на стадии г) количества свободного и/или общего IL-18 и свободного и/или общего IL-18BP в образце, полученном из организма пациента, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума.

В одном из вариантов осуществления изобретения указанная захватывающая молекула представляет собой

а) IL-18BP;

б) специфическое в отношении IL-18 антитело, предлагаемое в изобретении, которое представлено в настоящем описании.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу по одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, в котором указанный образец выбирают из группы, состоящей из жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF), жидкостей кровеносной системы, секреторных жидкостей, биопсии и гомогенизированной ткани, прежде всего сыворотки, мочи, слез, слюны, желчи, пота, выделяемых продуктов, выдыхаемых продуктов, мокроты, бронхоальвеолярной жидкости, секрета сальных желез, клеточных, железистых, слизистых и тканевых выделений и т.д.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу по одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, в котором количество свободного IL-18 в сыворотке, выделенной из организма индивидуума, в частности, человека, страдающего от указанного заболевания, составляет ≥5 пг/мл и, в частности, вплоть до 10000 пг/мл, в то время как количество свободного IL-18 в сыворотке здорового индивидуума, в частности, здорового человека, составляет ≤4 пг/мл.

Изобретение относится также к диагностическому набору для обнаружения свободного IL-18, который содержит антитело, предлагаемое в изобретении и представленное в настоящем описании, в качестве захватывающей молекулы, и вторую специфическую в отношении IL-18 связывающую молекулу в качестве идентифицирующей молекулы, и, необязательно вторую специфическую в отношении IL-18 захватывающую молекулу, где идентифицирующая молекула связывается с сайтами IL-18, отличными от тех, с которыми связывается захватывающая молекула.

IL-18BP, предназначенный для применения в способе обнаружения и количественного определения свободного IL-18 в пробе или в образце согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, представляет собой человеческий IL-18BP, в частности, связывающий рекомбинантный человеческий интерлейкин 18 белок (rhIL-18BP).

В частности, IL-18BP представляет собой изоформу а, b, с или d IL-18BP, в частности, изоформу а, в частности изоформу с, в частности, изоформу а, b, с или d, представленные в SEQ ID NO: 7, и 388-390, и, прежде всего изоформу а IL-18BP, представленную в SEQ ID NO: 7, или изоформу с, представленную в SEQ ID NO: 389.

В композиции, предлагаемой в изобретении, можно применять также смеси изоформ, и, в частности, смесь изоформы а и изоформы с.

Под объем настоящего изобретения подпадает также мутеин IL-18BP, его фрагмент, пептид, функциональное производное, функциональный фрагмент, фракция, подвергнутое циклической мутации производное, слитый белок, содержащий IL-18BP, изоформа или соль.

В одном из вариантов осуществления изобретения применяют связывающий рекомбинантный человеческий интерлейкин 18 белок (rhIL-18BP), который практически свободен от имеющих N-концевую и/или С-концевую делецию вариантов IL-18BP.

В различных других вариантах осуществления изобретения указанные делеционные варианты имеют делеции от 1 до 5 аминокислотных остатков на С-конце IL-18BP и/или от 1 до 30 аминокислотных остатков на N-конце IL-18BP.

В частности, доля делеционных вариантов в препарате IL-18BP, применяемом в способе обнаружения и количественного определения свободного IL-18 в пробе или в образце согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, составляет менее чем 30%, в частности, менее чем 20%, в частности, менее чем 15%, в частности, менее чем 10%, в частности, менее чем 7,5%, в частности, менее чем 5%, в частности, менее чем 2,5%, в частности, менее чем 1%, в частности, менее чем 0,5%, в частности, менее чем 0,25%, в частности, менее чем 0,1%.

Для определения присутствия или отсутствия свободного IL-18 в образце согласно способу, представленному в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, можно применять любой формат иммунноанализа, известный обычным специалистам в данной области, такие, например, как форматы анализа, в которых используют методы косвенного обнаружения с использованием вторичных реагентов для обнаружения. В частности, можно применять ELISA и анализы с использованием иммунопреципитации и агглютинации. Подробное описание этих анализов приведено у Harlow и Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, изд-во Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1988, cc. 555-612, в WO 96/13590 на имя Maertens и Stuyver, Zrein и др., 1998, и в WO 96/29605.

Образец может представлять собой неразведенную или разведенную биологическую жидкость, такую как (но не ограничиваясь только ими) сыворотка, моча, слезы, слюна, желчь, пот, выделяемые продукты, выдыхаемые продукты, мокрота, бронхоальвеолярная жидкость, секрет сальных желез, клеточные, железистые, слизистые и тканевые выделения, биопсия, гомогенизированная ткань.

Для диагностики in situ IL-18BP или антитело, предлагаемый/предлагаемое в изобретении, или любой его активный и функциональный фрагмент можно вводить в организм, для которого требуется диагностирование, с помощью методов, известных в данной области, таких, например, как внутривенная, интраназальная, внутрибрюшинная, интрацеребральная, внутриартериальная инъекция, таким образом, чтобы могло иметь место специфическое связывание антитела, предлагаемого в изобретении, с областью эпитопа на амилоидном белке. Комплекс антитело/антиген можно легко обнаруживать с помощью метки, присоединенной к антителу или его функциональному фрагменту, или с помощью любого другого известного в данной области метода обнаружения.

Согласно другому объекту изобретения обнаружение свободного IL-18, представленного в настоящем описании, можно осуществлять с помощью процедуры иммуноанализа. Иммуноанализ, как правило, включает приведение в контакт тестируемого образца с антителом или IL-18BP, предлагаемым в изобретении, как представлено в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, которое/который специфически связывается со свободным IL-18, и обнаружение присутствия комплекса IL-18ВР/свободный IL-18 или комплекса антитело/свободный IL-18 в образце. Процедуру иммуноанализа можно выбирать из широкого разнообразия процедур иммуноанализа, известных специалистам в данной области, таких, например, как конкурентный или неконкурентный ферментный иммуноанализ, твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), радиоиммунный анализ (RIA), вестерн-блоттинг и т.д. Можно применять другие мультиплексные анализы, включая основанные на применении массивов, когда IL-18BP или антитело, предлагаемое в изобретении, помещают на подложку, такую как стеклянная гранула или планшет, и подвергают взаимодействию или иным образом приводят в контакт с тестируемым образцом.

Антитела, применяемые в этих анализах, могут быть моноклональными или поликлональными, и могут относиться к любому типу, такому как IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. Антитела можно получать путем иммунизации животных, таких как крысы, мыши и кролики. Антиген, применяемый для иммунизации, можно выделять из образцов или синтезировать с помощью технологии рекомбинантного белка. Методы получения антител и осуществления анализов на основе антител хорошо известны специалисту в данной области и описаны, например, более подробно у Harlow & Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, 1988; в Immunoassay: A Practical Approach, под ред. Gosling J.P., изд-во Oxford University Press, 2001 и/или у Ausubel и др., Current Protocols in Molecular Biology, указанные руководства регулярно перерабатываются.

Различные химические и биохимические производные IL-18BP или антител или фрагментов антител, предлагаемых в настоящем изобретении, можно получать с помощью известных методов. Один из типов производного, которое можно применять в диагностических целях в качестве иммуноконъюгата, содержит IL-18BP или молекулу антитела, предлагаемого в изобретении, или его антигенсвязывающий фрагмент, который конъюгирован с обнаруживаемой меткой. Однако во многих вариантах осуществления изобретения IL-18BP или антитело не метят, но в процессе анализа он/оно становится косвенно меченым в результате того, что он/оно связывается или с ним связывается другая молекула, которая является меченой. Под объем изобретения подпадают молекулярные комплексы, содержащие IL-18BP или молекулу антитела, предлагаемого в изобретении, и метку.

Примеры обнаруживаемых субстанций включают различные ферменты, простетические группы, флуоресцентные материалы, люминесцентные материалы, биолюминесцентные материалы и радиоактивные материалы. Примеры пригодных ферменты включают пероксидазу из хрена, щелочную фосфатазу, β-галактозидазу или ацетилхолинэстеразу; примеры пригодных комплексов простетических групп включают стрептавидин/биотин и авидин/биотин; примеры пригодных флуоресцентных материалов включают умбеллифероны, флуоресцеины, флуоресцеинизотиоцианат, родамины, дихлортриазиниламинфлуоресцеин, дансилхлорид, фикоэритрины, Alexa Fluor 647, Alexa Fluor 680, DilC₁₉(3), родамин Red-X, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 546, Texas Red, YOYO-1 + DNA, тетраметилродамин, Alexa Fluor 594, BODIPY FL, Alexa Fluor 488, флуоресцеин, BODIPY TR, BODIPY TMR, карбокси-SNARF-1, FM 1-43, Fura-2, Indo-1, Cascade Blue, NBD, DAPI, Alexa Fluor 350, аминометилкумарин, люцифер желтый, пропидия йодид или дансиламид; примером люминесцентного материала является люминол; примеры биолюминесцентных материалов включают зеленые флуоресцентные белки, модифицированные зеленые флуоресцентные белки, люциферазу, люциферин и экворин, а примеры пригодных радиоактивных материалов включают ¹²⁵I, ¹³¹I, ³⁵S или ³Н.

Иммуноанализы, как правило, должны включать осуществление инкубации образца, такого как биологическая жидкость, экстракт ткани, свежесобранные клетки или лизаты клеток, в присутствии меченного поддающейся обнаружению меткой IL-18BP или антитела, предлагаемого в изобретении, или его пептидных фрагментов, и обнаружение связанного IL-18BP или антитела с помощью любого из многочисленных методов, хорошо известных в данной области. Одним из методов измерения уровня свободного IL-18 с использованием IL-18ВР или антитела, предлагаемого в настоящем изобретении, является иммуноферментный анализ (EIA), такой как твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) (Voller А. и др., J. Clin. Pathol. 31, 1978, сс. 507-520; Butler J.E., Meth. Enzymol. 73, 1981, сс. 482-523; Enzyme Immunoassay, под ред. Maggio E., изд-во CRC Press, Boca Raton, FL, 1980). Фермент, конъюгированный либо с IL-18ВР, либо с антителом, предлагаемым в изобретении, либо с партнером по связыванию для IL-18BP или антитела, когда он в дальнейшем вступает в контакт с соответствующим субстратом, должен взаимодействовать с субстратом таким образом, чтобы происходило образование химической субстанции, которую можно обнаруживать, например, с помощью спектрофотометрических или флуориметрических средств.

В конкретном варианте осуществления изобретения IL-18BP, применяемый в любом из указанных выше форматах анализа, и, в частности, в формате ELISA, представляет собой изоформу а, b, с или d IL-18BP, или ее производное, в частности изоформу а, в частности, изоформу с, или ее производное, в частности, изоформу а, b, с или d, представленную в SEQ ID NO: 7, и 388-390, и, прежде всего изоформу a IL-18BP, представленную в SEQ ID NO: 7 или изоформу с, представленную в SEQ ID NO: 389.

В композиции, предлагаемой в изобретении, можно применять также смеси указанных выше изоформ, и, в частности, смесь изоформы а и изоформы с.

Биологический образец можно приводить в контакт с твердофазной подложкой или носителем и иммобилизовать на твердофазной подложке или носителе, такой/таком как нитроцеллюлоза или другая твердая подложка, которая пригодна для иммобилизации клеток, клеточных частиц или растворимых белков. Затем подложку можно промывать пригодными буферами и осуществлять последующую обработку несущим поддающуюся обнаружению метку IL-18BP или антитело, предлагаемое в изобретении. Затем твердофазную подложку можно промывать второй раз буфером для удаления несвязанного IL-18ВР или антитела. После этого можно определять количество связанной метки на твердой подложке с помощью стандартных средств. Хорошо известным примером такого метода является вестерн-блоттинг.

Различные варианты осуществления настоящего изобретения относятся к композициям, содержащим меченый IL-18BP или меченые антитела, предлагаемые в изобретении, которые представлены в настоящем описании.

Еще один объект изобретения относится к способу лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения у индивидуума, указанного в настоящем описании, где указанный способ включает

а. количественное определение уровня свободного IL-18 в общей воде организма указанного индивидуума с помощью способа, предлагаемого в изобретении и представленного в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения;

б. введение индивидууму, у которого путем количественного определения установлено, что он имеет аномальные уровни свободного IL-18 в общей воде организма, которые превышают уровень свободного IL-18 в общей воде организма здорового контрольного индивидуума на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100%, в терапевтически или профилактически эффективном количестве композицию, представленную в одном из вариантов осуществления изобретения 1-37 и 41, в частности, путем системного, интраназального, трансбуккального, орального введения, введения через слизистую оболочку, внутритрахеального, внутривенного, подкожного введения, введения в мочевой тракт, внутриматочного, подъязычного, внутрибронхиального, внутрилегочного, чрескожного или внутримышечного введения, прежде всего, путем бронхолегочного введения.

Композиции, предлагаемые в изобретении, могут содержать дополнительные медицинские средства, фармацевтические средства, носители, буферы, диспергирующие агенты, разбавители, совместно применяемые терапевтические средства, такие как противовоспалительные, бронходилататорные, антигистаминные, противозастойные или противокашлевые лекарственные субстанции и т.п. в зависимости от предполагаемого применения и пути введения.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении и представленную в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, вводят в профилактических целях.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении и представленную в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, вводят в терапевтических целях.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении и представленную в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, вводят индивидууму, страдающему от ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения, или предрасположенного к развитию такого заболевания или нарушения, путем системного, интраназального, внутриглазного, интравитреального введения, введения с помощью глазных капель, трансбуккального, орального введения, введения через слизистую оболочку, внутритрахеального, внутривенного, подкожного введения, введения в мочевой тракт, внутриматочного, подъязычного, внутрибронхиального, внутрилегочного, чрескожного или внутримышечного введения. В частности, фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении и представленную в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, вводят путем бронхолегочного введения.

Фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении и описанную в различных вариантах осуществления изобретения, представленных в настоящем описании, можно приготавливать в виде жидкости, жидкого спрея, микросфер, полутвердой субстанции, геля или порошка для введения через слизистую оболочку, например, интраназального, трансбуккального введения, введения через слизистую оболочку ротовой полости, внутритрахеального, введения в мочевой тракт, внутриматочного, подъязычного, внутрибронхиального, внутрилегочного и/или чрескожного введения. Кроме того, композиция может находиться в виде твердой формы лекарственного средства для трансбуккального введения, введения через слизистую оболочку в ротовой полости и/или подъязычного введения. Интраназальное, трансбуккальное введение, внутритрахеальное введение через ротовую полость, введение в мочевой тракт, внутриматочное введение, введение через слизистую оболочку и подъязычное введение приводит к расщеплению представленной в настоящем описании композиции в ротовой полости при температуре тела и необязательно может приводить к ее прилипанию в ротовой полости к выстилающей ткани. Кроме того, представленная в настоящем описании композиция может включать один или несколько эксципиентов, разбавителей, связующих веществ, замасливателей, улучшающих скольжение веществ, разрыхлителей, десенсибилизаторов, эмульгаторов, адгезивов для слизистой оболочки, солюбилизаторов, суспендирующих агентов, модификаторов вязкости, обеспечивающих ионную тоничность агентов, буферов, носителей, поверхностно-активных веществ, корригентов или их смесь.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения композицию приготавливают в форме для парентерального, внутривенного введения, в форме таблетки, пилюли, биоадгезивного пластыря, капель, губки, пленки, пастилки, твердого леденца, вафли, шарика, в форме «леденца на палочке», дискообразной структуры, суппозитория или спрея.

Введение через слизистую оболочку, как правило, является быстрым благодаря обширной сосудистой сети в слизистой оболочке и отсутствию роговичного слоя, присутствующего в эпидермисе. Такой путь транспортирования лекарственного средства, как правило, обеспечивает быстрое увеличение концентраций в крови и позволяет также избегать попадания в энтерогепатический кровоток и немедленного расщепления кислотами желудочного сока или частично эффектов «первого прохождения» через стенку кишечника и метаболизма в печени. Для лекарственных средств, как правило, требуется обеспечивать их продолжительное воздействие на поверхность слизистой оболочки для того, чтобы имела место значительная абсорбция лекарственного средства.

Пути введения через слизистую оболочку могут оказаться также более эффективными, чем оральный путь, поскольку эти пути могут обеспечивать относительно быструю абсорбцию и начало терапевтического действия. Кроме того, пути введения через слизистую оболочку могут оказаться предпочтительными для применения при лечении пациентов, которым трудно проглатывать таблетки, капсулы или другие твердые оральные формы, или у которых вследствие заболевания нарушена кишечная абсорбция. Таким образом, введение IL-18BP или фармацевтической композиции, содержащей IL-18BP и фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент, через слизистую оболочку имеет целый ряд преимуществ.

В случае интраназального или трансбуккального путей введения, абсорбцию лекарственного средства можно задерживать или пролонгировать, или поглощение можно осуществлять почти так же быстро, как и в случае внутривенного болюсного введения. Благодаря высокой проницаемости, обеспечиваемой интенсивным кровоснабжением, подъязычный путь введения может обеспечивать быстрое начало действия.

Интраназальные композиции можно вводить любым пригодным для этой формы методом. Композицию, включающую микросферы или порошок, можно вводить с помощью назального инсуффлятора. Примеры таких устройств хорошо известны специалистам в данной области и включают поступающие в продажу системы для порошка, такие как Fisons Lomudal System. Инсуффлятор создает облако из тонко распыленного порошка или микросфер. Инсуффлятор предпочтительно снабжен механизмом, гарантирующим введение композиции в практически фиксированном количестве. Порошок или микросферы можно применять непосредственно с помощью инсуффлятора, который снабжен флаконом или контейнером для порошка или микросфер. Альтернативно этому, порошком или микросферами можно заполнять капсулу, такую как желатиновая капсула, или другое однодозовое устройство, пригодное для назального введения. Инсуффлятор предпочтительно имеет механизм для вскрытия капсулы или другого устройства. Кроме того, композиция может обеспечивать сначала быстрое высвобождение действующего вещества и затем замедленное высвобождение действующего вещества, например, путем применения более одного типа микросфер или порошка. Кроме того, обычному специалисту в данной области должны быть хорошо известны альтернативные методы, пригодные для введения композиции в носовую полость. Можно применять любой пригодный метод. Более подробное описание пригодных методов изложено в ЕР 2112923, ЕР 1635783, ЕР 1648406, ЕР 2112923 (полное содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки).

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении и представленную в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, можно вводить также интраназально, т.е. путем ингаляции, и, таким образом, ее можно приготавливать в форме, пригодной для интраназального введения, т.е. в виде аэрозоля, формы в виде сухого порошка или жидкого препарата.

Примеры пригодных фармацевтических носителей, эксципиентов и/или разбавителей хорошо известны в данной области и включают (но не ограничиваясь только ими) камедь, крахмал (например, кукурузный крахмал, предварительно желированный крахмал), сахар (например, лактозу, маннит, сахарозу, декстрозу), производные целлюлозы (например, микрокристаллическую целлюлозу), акрилат (например, полиметилакрилат), карбонат кальция, оксид магния, тальк или их смеси.

Фармацевтически приемлемые носители для жидких препаратов представляют собой водные или неводные растворы, суспензии, препараты на основе сухого порошка, эмульсии или масла. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и инъекционные сложные органические эфиры, такие как этилолеат. Примерами масел являются масла животного, растительного или синтетического происхождения, например, арахисовое масло, соевое масло, оливковое масло, подсолнечное масло, рыбий жир, другие масла из морепродуктов или липиды из молока или яиц.

Настоящее изобретение относится также к транспульмонарному введению посредством ингаляции фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении и представленной в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, в форме сухого порошка, газообразных или летучих препаративных форм в системный кровоток через дыхательные пути. Абсорбция происходит практически с такой же скоростью, с какой препарат может поступать в альвеолы легких, поскольку альвеолярные и сосудистые эпителиальные мембраны являются хорошо проницаемыми, поток крови является обильным и имеется очень большая поверхность для адсорбции. Например, аэрозоли можно вводить с помощью упакованных под давлением дозирующих ингаляторов (MDI).

Фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении и представленную в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, как правило, следует вводить в смеси с пригодным фармацевтическим эксципиентом, разбавителем или носителем, выбранным с учетом предполагаемых средств ингаляции и стандартной фармацевтической практики.

В другом варианте осуществления изобретения препарат IL-18BP или препарат фармацевтической композиции, содержащей IL-18BP, находится в форме сухого порошка, необязательно в сочетании по меньшей мере с одним состоящим из частиц фармацевтически приемлемым носителем, которым может являться один или несколько материалов, известных в качестве фармацевтически приемлемых носителей, предпочтительно выбранных из материалов, которые известны в качестве носителей, применяемых в композициях в виде сухого порошка для ингаляции, например, сахариды, включая моносахариды, дисахариды, полисахариды и сахарные спирты, такие как арабиноза, глюкоза, фруктоза, рибоза, манноза, сахароза, трегалоза, лактоза, мальтоза, крахмалы, декстран, маннит или сорбит. Наиболее предпочтительным носителем является лактоза, например, моногидрат лактозы или безводная лактоза. Сухой порошок может содержаться в виде стандартных доз в капсулах, например, желатиновых или пластиковых, или в блистерах (например, алюминиевых или пластиковых), предназначенных для применения в ингаляционном устройстве для сухого порошка, которое может представлять собой однодозовое или многодозовое устройство, предпочтительно в виде стандартных доз вместе с носителем, взятым в количествах, достаточных для доведения общей массы порошка в капсуле до 5-50 мг. Альтернативно этому сухой порошок может содержаться в резервуаре адаптированного для введения многих доз ингаляционного устройства для сухого порошка (MDDPI).

Можно применять любой другой терапевтически эффективный путь введения, например, абсорбцию через эпителиальную или эндотелиальную ткани, или генную терапию, при которой пациенту вводят (например, с использованием экспрессионного вектора) молекулу ДНК, кодирующую активный агент, что приводит к экспрессии активного агента и его секреции in vivo.

Фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении и представленную в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, можно применять для лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения, указанного в настоящем описании и представленного в различных вариантах осуществления изобретения, в медицине человека и в ветеринарной медицине для лечения человека и животных, включая птиц, приматов кроме человека, собак, кошек, свиней, коз, овец, коров, лошадей, мышей, крыс и кроликов.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, для применения при лечении ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения, указанного в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, где индивидуум представляет собой млекопитающее, в частности, индивидуум представляет собой человека.

В другом конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, вводят в терапевтически эффективном количестве в сочетании с пригодной дозой по меньшей мере второго ингибитора провоспалительных цитокинов. В частности, указанный ингибитор обладает специфичностью в отношении IL-1, IL-6, IL-13, IL-17A, IFNγ или TNFα.

Водные носители включают воду, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, в том числе физиологический раствор и забуференные среды, такие как забуференные фосфатом физиологические растворы, вода, эмульсии, такие как эмульсии типа масло/вода, различные типы смачивающих агентов, стерильные растворы и т.д. Композиции, содержащие такие носители, можно приготавливать с помощью хорошо известных общепринятых методов. Пригодные носители могут включать любой материал, который при объединении с биологически активным соединением, предлагаемым в изобретении, сохраняет его биологическую активность.

В данной области предпринимались усилия для осуществления химической модификации барьерных свойств кожи с целью обеспечения проникновения определенных агентов, повышения эффективности доставляемых агентов, увеличения времени доставки, снижения доставляемых доз, уменьшения побочных действий, обусловленных различными методами доставки, уменьшения реакций пациентов и т.д.

В этой связи для увеличения проницаемости кожи для лекарственных средств применяли усиливающие проникновение вещества, которые часто представляли собой растворители, являющиеся акцепторами протонов, такие как диметилсульфоксид (ДМСО) и диметилацетамид. Другие усиливающие проникновение вещества, которые были изучены и оказались эффективными, включают 2-пирролидин, N,N-диэтил-м-толуамид (Deet), 1-додекалазациклогептан-2-он, N,N-диметилформамид, N-метил-2-пирролидин, тиогликолят кальция, гексанол, жирное кислоты и сложные эфиры, производные пирролидона, производные 1,3-диоксанов и 1,3-диоксоланов, 1-N-додецил-2-пирролидон-5-карбоновую кислоту, 2-пентил-2-оксопирролидинуксусную кислоту, 2-додецил-2-оксо-1-пирролидинуксусную кислоту, 1-азациклогептан-2-он-2-додецилуксусную кислоту и производные аминоспиртов, включая, среди прочего, производные 1,3-диоксанов.

Препараты для введения через слизистую оболочку могут включать стерильные водные и неводные растворы, суспензии, препараты на основе сухого порошка и эмульсии. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъекционные сложные органические эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая физиологический раствор и забуференные среды. Наполнители, применяемые для введения через слизистую оболочку, могут включать раствор хлорида натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактированный раствор Рингера или нелетучие масла. Могут присутствовать также консерванты и другие добавки, включая, например, противомикробные средства, антиоксиданты, хелатирующие агенты и инертные газы и т.п. Кроме того, фармацевтическая композиция, предлагаемая в настоящем изобретении, может содержать белковые носители, такие, например, как сывороточный альбумин или иммуноглобулин, предпочтительно человеческого происхождения.

Фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, можно наносить местно на участки поверхности тела и, таким образом, ее следует приготавливать в форме, пригодной для местного нанесения. Пригодные препараты для местного применения включают гели, мази, кремы, лосьоны, капли и т.п. Для местного применения фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, получают и применяют в виде раствора, суспензии или эмульсии в физиологически приемлемом разбавителе с использованием фармацевтического носителя или без него.

Фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, можно вводить также в виде композиций с контролируемым высвобождением, т.е. композиций, из которых высвобождение действующего вещества происходит в течение некоторого периода времени после введения. Композиции с контролируемым или пролонгированным высвобождением включают препараты, включенные в липофильные депо (например, жирные кислоты, воски, масла). В другом варианте осуществления изобретения композиция представляет собой композицию с немедленным высвобождением, т.е. композицию, из которой все действующее вещество высвобождается сразу после введения.

Другие примеры пригодных препаративных форм приведены в WO 2006/085983, полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки. Например, фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, согласно настоящему изобретению можно приготавливать в виде липосомальных препаративных форм. Технология получения липосомальных суспензий хорошо известна в данной области. Применяемый липидный слой может иметь любой общепринятый состав и может, как содержать холестерин, так и не содержать холестерин. Размер липосом можно уменьшать путем использования стандартных методов облучения ультразвуком и гомогенизации. Липосомальные препаративные формы, содержащие фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, можно лиофилизировать с получением лиофилизата, который можно восстанавливать с использованием фармацевтически приемлемого носителя, такого как вода, для восстановления липосомальной суспензии. Фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, можно вводить индивидууму в пригодной дозе. Схему дозирования должен определять лечащий врач с учетом клинических факторов. Как хорошо известно в области медицины, дозы для любого конкретного индивидуума должны зависеть от многих факторов, включая размер индивидуума, площадь поверхности тела, конкретного подлежащего введению соединения, пола, продолжительности и пути введения, общего состояния здоровья и других одновременно вводимых лекарственных средств.

Кроме того, следует иметь в виду, что, в зависимости от предполагаемого применения фармацевтической композиции, фармацевтическая композиция, предлагаемая в изобретении, может содержать дополнительные биологически активные субстанции. Указанные дополнительные биологически активные субстанции могут представлять собой, например, антитела, фрагменты антител, гормоны, факторы роста, ферменты, связывающие молекулы, цитокины, хемокины, молекулы нуклеиновой кислоты и лекарственные средства. В предпочтительном варианте осуществления изобретения фармацевтическую композицию, предлагаемую в настоящем изобретении, следует вводить совместно с агонистом бета-адренорецептора длительного действия (LABA), мускариновыми антагонистами длительного действия (LAMA), стероидами, кортикостероидом, глюкокортикоидом и глюкокортикоидными агонистами, ингибиторами фосфодиэстеразы, киназными ингибиторами, цитокиновыми и хемокиновыми ингибиторами или антагонистами, или протеазными ингибиторами, или их комбинациями.

Доза фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, должна зависеть от состояния, подлежащего лечению, конкретной применяемой композиции и других клинических факторов, таких как вес, размер и состояние индивидуума, площадь поверхности тела, конкретное соединение или композиция, предназначенное/предназначенная для введения, другие одновременно вводимые лекарственные средства и путь введения.

Фармацевтическую композицию предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, можно вводить в сочетании с другими биологически активными субстанциями и процедурами для лечения симптомов, связанных с ассоциированным с IL-18 заболеванием, таким как хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), связанное с трансфузией повреждение легких, бронхолегочная дисплазия (BPD), острый респираторный дистресс-синдром (ARDS), болезнь Стилла взрослых, болезнь Стилла детей, интерстициальная болезнь легких (ILD), идиопатический легочный фиброз, муковисцидоз, легочная артериальная гипертензия, астма, бронхоэктаз, сердечная недостаточность, амиотрофический боковой склероз (ALS), синдром сухого глаза (DED), кератит, язва и истирание роговицы, неоваскуляризация роговицы, патологическая внутриглазная неоваскуляризация, ирит, глаукома, дегенерация желтого пятна, синдром Шегрена, аутоиммунный увеит, болезнь Бехчета, конъюнктивит, аллергический конъюнктивит, дерматит века, диабет типа 2, неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD), стеатогепатит, трансплантация солидного органа и гематологическая трансплантация, повреждение, вызванное ишемией-реперфузией, семейная средиземноморская лихорадка, периодические синдромы, ассоциированные с рецептором 1 фактора некроза опухоли, криопирин-ассоциированные периодические синдромы лихорадки, гипер-IgD-синдромы, подагра, синдром Шнитцлера, грануломатоз Вегенера, называемый также грануломатозом с полиангиитом (GPA), тиреоидит Хашимото, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, связанные с иммуноглобулином-4 (IgG4) заболевания и терапии на основе стволовых клеток. Другие биологически активные субстанции могут представлять собой часть одной и той же композиции, уже содержащей композицию, предлагаемую в изобретении, в форме смеси, в которой композиция, предлагаемая в изобретении, и другая биологически активная субстанция смешаны в одном и том же фармацевтически приемлемом растворителе и/или носителе, или с ним, или могут находиться по отдельности в виде части раздельных композиций, которые могут поставляться по отдельности или вместе в форме набора компонентов.

Фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, можно вводить одновременно с другой(-ими) биологически активной(-ыми) субстанцией или субстанциями, поочередно или последовательно. Например, композицию, предлагаемую в изобретении, можно вводить одновременно с первой дополнительной биологически активной субстанцией или последовательно после или до введения указанной композиции. Если выбирают схему введения, при которой вводят более одной дополнительной биологически активной субстанции и по меньшей мере одну композицию, предлагаемую в изобретении, то часть соединений или субстанций можно вводить одновременно, а часть последовательно в различных комбинациях.

Так, другим объектом настоящего изобретения являются смеси, включающие фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, необязательно содержащие одну или несколько дополнительных биологически активных субстанций в терапевтически или профилактически эффективном количестве, а также способы применения такой композиции, предлагаемой в изобретении, или включающих ее смесей для предупреждения и/или терапевтического лечения, и/или облегчения воздействий хронического обструктивного заболевания легких (COPD), заболевания сердца и диабета типа 2.

Так, еще объектом настоящего изобретения являются смеси, включающие фармацевтическую композицию, предлагаемую в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, необязательно содержащие одну или несколько дополнительных биологически активных субстанций в терапевтически или профилактически эффективном количестве, а также способы применения такой композиции, предлагаемой в изобретении, или включающих ее смесей для предупреждения и/или терапевтического лечения, и/или облегчения воздействий хронического обструктивного заболевания легких (COPD), связанного с трансфузией повреждения легких, бронхолегочной дисплазии (BPD), острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), болезни Стилла взрослых, болезни Стилла детей, интерстициальной болезни легких (ILD), идиопатического легочного фиброза, муковисцидоза, легочной артериальной гипертензии, астмы, бронхоэктаза, сердечной недостаточности, амиотрофического бокового склероза (ALS), синдрома сухого глаза (DED), кератита, язвы и истирания роговицы, неоваскуляризации роговицы, патологической внутриглазной неоваскуляризации, ирита, глаукомы, дегенерации желтого пятна, синдрома Шегрена, аутоиммунного увеита, болезни Бехчета, конъюнктивита, аллергического конъюнктивита, дерматита века, диабета типа 2, неалкогольной жировой болезни печени (NAFLD), стеатогепатита, трансплантации солидного органа и гематологической трансплантации, повреждения, вызванного ишемией-реперфузией, семейной средиземноморской лихорадки, периодических синдромов, ассоциированных с рецептором 1 фактора некроза опухоли, криопирин-ассоциированных периодических синдромов лихорадки, гипер-IgD-синдромов, подагры, синдрома Шнитцлера, грануломатоза Вегенера, называемого также грануломатозом с полиангиитом (GPA), тиреоидита Хашимото, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, связанных с иммуноглобулином-4 (IgG4) заболеваний и терапии на основе стволовых клеток.

Другая биологически активная субстанция или соединение может оказывать свое биологическое действие посредством того же самого механизма, что и композиция, предлагаемая в изобретении, или сходного с ним механизма, или посредством неродственного механизма действия, или посредством нескольких родственных и/или неродственных механизмов действия.

В целом, другое биологически активное соединение может включать антитела, выработанные против INF-гамма, IL-17A, IL-13, IL-1-бета, IL-6, IL-2, IL-4, IL-12, TNF-альфа и связывающиеся с ними. В частности, смесь, предлагаемая в изобретении, может содержать IL-18BP (IL-18BP) или предлагаемую в изобретении и представленную в настоящем описании фармацевтическую композицию, которая содержит IL-18BP (IL-18BP) и фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент.

Пригодные дозы фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении, которая представлена в настоящем описании в различных вариантах осуществления изобретения, могут варьироваться в зависимости от состояния, возраста и вида индивидуума, и их легко могут определять специалисты в данной области. Общие суточные дозы, применяемые как в ветеринарии, так и в медицине человека, могут соответственно находиться в пределах от 0,1 до 10 мг/кг.

Кроме того, функциональные производные IL-18BP можно конъюгировать с полимерами для улучшения характеристик белка, таких как стабильность, время полужизни, биодоступность, переносимость человеческим организмом или иммуногенность. Для достижения указанной цели IL-18BP можно связывать, например, с полиэтиленгликолем (ПЭГ). ПЭГилирование можно осуществлять с помощью известных методов, которые описаны, например, в WO 92/13095.

Таким образом, в следующем варианте осуществления настоящего изобретения IL-18BP является ПЭГилированным.

Еще в одном варианте осуществления изобретения IL-18BP представляет собой слитый белок, содержащий полный IL-18BP или его часть, слитый/слитую с полным иммуноглобулином или его частью, предпочтительно с константной областью (Fc) иммуноглобулина, где слитый белок все еще обладает способностью связываться с IL-18. Более конкретно, иммуноглобулин может быть IgG1- или IgG2-изотипа.

В другом варианте осуществления изобретения IL-18BP является ПЭГилированным, слитым с полным иммуноглобулином или его частью, предпочтительно с константной областью (Fc) иммуноглобулина, где слитый белок все еще обладает способностью связываться с IL-18. Более конкретно, иммуноглобулин может быть IgG1- или IgG2-изотипа.

Специалисту в данной области должно быть очевидно, что полученный слитый белок сохраняет биологическую активность IL-18BP, в частности, способность связываться с IL-18. Слияние может быть непосредственным или через короткий линкерный пептид, имеющий длину от 1 до 3 или более аминокислотных остатков, например, 13 аминокислотных остатков. Указанный линкер может представлять собой трипептид, например, имеющий последовательность E-F-M (Glu-Phe-Met), или состоящую из 13 аминокислот линкерную последовательность, содержащую Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met, которая интродуцирована между последовательностью IL-18ВР и последовательностью иммуноглобулина. Полученный слитый белок обладает улучшенными характеристиками, такими как удлиненное время нахождения в общей воде организма (время полужизни), повышенная специфическая активность, повышенный уровень экспрессии, или слитый белок может легче поддаваться очистке.

Предпочтительно его сливают с областями тяжелой цепи, такими, например, как СН2- и СН3-домены человеческого IgG1. Получение специфических слитых белков, содержащих IL-18BP и часть иммуноглобулина, описано, например, в примере 11 WO 99/09063. Для создания слитых белков, предлагаемых в изобретении, можно применять также и другие изоформы молекул Ig, такие как изоформы IgG2 или IgG4, Ig других классов, например, типа IgM или IgA. Слитые белки могут быть мономерными или мультимерными, гетеро- или гомомультимерными.

Определения

Технические понятия и выражения, применяемые в настоящем описании, в целом имеют значение, общепринятое в рассматриваемой области, если ниже в настоящем описании не указано иное.

Употребляемые в настоящем описании и прилагаемых вариантах осуществления изобретения формы единственного числа включают множественное число, если из контекста ясно не следует иное. Так, например, ссылка на «соединение» означает ссылку на одно или несколько соединений.

В контексте настоящего описания понятия «лечение», «лечить» и т.п., как правило, обозначают достижение требуемого фармакологического и/или физиологического воздействия. Воздействие может быть профилактическим, заключающимся в полном или частичном предупреждении заболевания или его симптома, и/или может быть терапевтическим, заключающемся в частичном или полном излечении заболевания и/или нежелательных действий, обусловленных заболеванием. В контексте настоящего описания под понятие «лечение» подпадает любое лечение заболевания у индивидуума, и оно включает: (а) предупреждение заболевания, т.е. предотвращение нежелательного иммунного ответа у индивидуума, который может быть предрасположен к заболеванию; (б) ингибирование заболевания, т.е. прекращение его развития; или (в) ослабление заболевания, т.е. вызывание регресса заболевания; (г) реверсию симптомов заболевания, т.е. восстановление поврежденной ткани.

В контексте настоящего описания понятие «IL-18-связывающий белок (IL-18ВР)» включает полноразмерный белок, мутеин, фрагмент, пептид, функциональное производное, функциональный фрагмент, фракцию, полученное в результате циклической перестановки производное, слитый белок, его изоформу или соль.

В контексте настоящего описания понятие «свободный IL-18» означает мономерный растворимый и не входящий в комплекс белок интерлейкин-18.

Понятия «функциональный» и «активный» в настоящем описании используются как синонимы, и они относятся к модифицированному IL-18BP или фрагменту IL-18BP, который все еще обладает такими же или практически такими же биологическими, фармакологическими и терапевтическими свойствами, что и немодифицированный или полноразмерный IL-18BP, и который, следовательно, можно применять согласно настоящему изобретению для лечения указанных в настоящем описании заболеваний и нарушений таким же путем, что и немодифицированный IL-18BP.

В различных вариантах осуществления изобретения понятие «IL-18BP» относится к человеческому IL-18BP, в частности, к рекомбинантному человеческому IL-18BP, в частности, к изоформе а, b, с или d IL-18BP, в частности, к изоформе а, в частности, к изоформе с, в частности, к изоформе а, b, с или d, которые представлены на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 7, и SEQ ID NO: 388-390, и, прежде всего к изоформе a IL-18BP, представленной на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 7, или изоформе с, представленной на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 389.

Вариант или функциональный фрагмент IL-18BP

«Иммуноглобулин» представляет собой тетрамерную молекулу. В случае иммуноглобулина, встречающегося в естественных условиях, каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, каждая пара включает одну «легкую» (примерно 25 кДа) и одну «тяжелую» цепь (примерно 50-70 кДа). Аминоконцевая область каждой цепи включает вариабельную область, состоящую примерно из 100-110 или большего количества аминокислот, которые ответственны, прежде всего, за распознавание антигена. Карбоксиконцевая область каждой цепи содержит константную область, которая ответственна, прежде всего, за эффекторную функцию. Человеческие легкие цепи классифицируют как легкие каппа- и лямбда-цепи. Тяжелые цепи классифицируют как мю-, дельта-, гамма-, альфа- или эпсилон-цепи, определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. В легких и тяжелых цепях вариабельные и константные области соединены посредством «J»-области, состоящей примерно из 12 или большего количества аминокислот, при этом тяжелая цепь включает также «D»-область, состоящую примерно из 10 или большего количества аминокислот (общие сведения изложены в: Fundamental Immunology, глава 7, под ред. Paul W., 2-е изд., изд-во Raven Press, N.Y., 1989) (публикация полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки для всех целей). Вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепей образуют антигенсвязывающий центр, в результате чего интактный иммуноглобулин имеет два сайта связывания.

Иммуноглобулиновые цепи имеют одну и ту же общую структуру, характеризующуюся наличием относительно консервативных каркасных участков (FR), соединенных тремя гипервариабельными участками, которые называют также определяющими комплементарность участками или CDR. CDR из двух цепей каждой пары выровнены с помощью каркасных участков, что позволяет связываться со специфическим эпитопом. В направлении от N-конца к С-концу как легкие, так и тяжелые цепи содержат домены FR1, CDR1, FR2, CDR.2, FR3, CDR3 и FR4. Принадлежность аминокислот каждому из доменов определяют согласно системам определений, представленным у Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 и 1991 (определение гипервариабельных участков по Кэботу основано на вариабельности последовательностей и применяется наиболее часто), или у Chotia и Lesk, J. Mol. Biol, 196, 1987, сс. 901-917.

В отличие от этого определение согласно Хотия основано на положении структурных петель (Chotia и Lesk, J. Mol. Biol. 196, 1987, cc. 901-917, Хотиа и др., Nature 342, 1989, cc. 878-883).

Альтернативной системой определения принадлежности аминокислот каждому домену является система IMGT (http://www.imgt.org/IMGTScientificChart/Nomenclature/IMGT-FRCDRdefinition.html).

В контексте настоящего описания понятия «антитело» или «антитела» представляют собой общепринятые в данной области понятия, и подразумевается, что они относятся к молекулам или активным фрагментам молекул, которые связываются с известными антигенами, прежде всего, к молекулам иммуноглобулина и к иммунологически активным фрагментам молекул иммуноглобулина, т.е. молекулам, которые содержат сайт связывания, который иммуноспецифически связывается с антигеном. Согласно изобретению иммуноглобулин может представлять собой молекулу иммуноглобулина любого типа (IgG, IgM, IgD, IgE, IgA и IgY) или класса (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2), или подкласса.

Для целей настоящего изобретения понятие «антитело» относится к интактному иммуноглобулину или его антигенсвязывающему фрагменту, который конкурирует с интактным антителом за связывание с антигеном. В частности, в контексте настоящего изобретения «антитела» включают моноклональные, поликлональные, химерные, одноцепочечные, биспецифические или биэффективные антитела, антитела с трансплантированными участками обезьяньих антител, человеческие и гуманизированные антитела.

Примерами антигенсвязывающих фрагментов могут служить, среди прочего, Fab, Fab', F(ab')2, scFv, dAb и Fv-фрагменты, включая продукты, полученные с использованием экспрессионной библиотеки Fab-фрагментов иммуноглобулина, и эпитопсвязывающие фрагменты любого из антител или фрагментов, указанных выше. Другими примерами антигенсвязывающих фрагментов являются содержащие определяющие комплементарность участки (CDR) фрагменты, димерные антитела и полипептиды, которые содержат по меньшей мере часть иммуноглобулина, достаточную для придания полипептиду способности специфически связываться с антигеном.

Такие активные фрагменты можно получать из антитела, предлагаемого в настоящем изобретении, с помощью многочисленных известных в данной области методов. Например, очищенные моноклональные антитела можно расщеплять с помощью фермента, такого как пепсин, и подвергать ЖХВР-гель-фильтрации. Затем соответствующую фракцию, содержащую Fab-фрагменты, можно собирать и концентрировать посредством фильтрации через мембрану и т.п. Дополнительное описание общих методов выделения активных фрагментов антител приведено, например, у Khaw В. А. и др., J. Nucl. Med. 23, 1982, сс. 1011-1019; Rousseaux и др., Methods Enzymology, изд-во Academic Press, 121, 1986, сс. 663-669.

Понятие «гуманизированное антитело» относится к типу сконструированного антитела, которое имеет CDR, происходящие из нечеловеческого донорского иммуноглобулина. В одном из вариантов осуществления изобретения конкретные аминокислоты в каркасном участке и константных доменах тяжелых и легких цепей подвергали мутации для того, чтобы избежать или устранить иммунный ответ у человека. В альтернативном варианте осуществления изобретения гуманизированное антитело можно получать путем слияния константных доменов из человеческого антитела с вариабельными доменами антител из видов кроме человека. Примеры методов создания гуманизированных антител представлены в патентах США 6054297, 5886152 и 5877293.

Еще в одном варианте осуществления изобретения «гуманизированное антитело» относится к типу сконструированного антитела, которое имеет CDR, происходящие из нечеловеческого донорского иммуноглобулина, встроенные в «каркас» человеческого антитела, происходящий из одного (или большего количества) человеческого(их) иммуноглобулина(ов). Кроме того, поддерживающие остатки каркасного участка можно изменять для сохранения аффинности связывания. Методы получения «гуманизированных антител» хорошо известны обычным специалистам в данной области (см., например, у Queen и др., Proc. Natl Acad Sci USA, 86, 1989, сс. 10029-10032, Hodgson и др., Bio/Technology, 9, 1991, с. 421).

«Гуманизированное антитело» можно получать также с помощью нового генетического подхода, позволяющего создавать гуманизированное поликлональные антитела с созревшей аффинностью в организме крупных животных, таких, например, как кролики (см., например, U.S. 7129084).

Понятие «моноклональное антитело» также является общепринятым в данной области, и оно относится к антителу, которое массово получают в лаборатории из единичного клона и которое распознает только один антиген. Моноклональные антитела, как правило, создают путем слияния, как правило, короткоживущей продуцирующей антитело В-клетки с быстро растущей клеткой, такой как раковая клетка (иногда ее называют «бессмертной» клеткой). Полученная в результате этого гибридная клетка, или гибридома, быстро размножается, создавая клон, который продуцирует антитело в больших количествах. Следует иметь в виду, что для целей настоящего изобретения «моноклональное антитело» включает также антитела, которые продуцируются материнским клоном, который еще не достиг полной моноклональности.

Понятие «CDR» относится к гипервариабельному участку антитела. В контексте настоящего описания понятие «гипервариабельный участок», «HVR» или «HV», относится к участкам вариабельного домена антитела, последовательность которых является гипервариабельной, и/или которые образуют структурно выраженные петли. Как правило, антитела содержат шесть гипервариабельных участков, три в VH (H1, Н2, Н3) и три в VL (L1, L2, L3). В настоящее время применяют несколько систем определения гипервариабельного участка, и они подпадают под объем настоящего изобретения. Определение определяющих комплементарность участков согласно Кэботу основано на вариабельности последовательности, и его применяют наиболее широко (Kabat и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е изд., изд-во Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD., 1991).

Буквы «НС» и «LC» в сочетании с понятием «CDR» служат для обозначения CDR тяжелой цепи и легкой цепи соответственно, согласно Хотиа вместо этого указывают положение структурных петель (Chotia и Lesk, J. Mol. Biol. 196, 1987, cc. 901-917). Гипервариабельные участки, определенные согласно AbM, представляют собой компромисс между CDR согласно Кэботу и структурными петлями согласно Хотиа, они используются в программе моделирования антител AbM Oxford Molecular's. «Контактные» гипервариабельные участки определяют на основе анализа пригодных сложных кристаллических структур.

Понятие «нумерация остатков вариабельного домена согласно Кэботу» или «нумерация аминокислотных положений согласно Кэботу» и его варианты относятся к системе нумерации, применяемой для вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, представленной в сборнике антител у Kabat и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е изд. Изд-во Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.

В контексте настоящего изобретения понятие «функционально эквивалентное антитело» относится к антителу, которое обладает практически таким же по меньшей мере одним основным функциональным свойством с рассматриваемым антителом, например, функциональные свойства, представленные в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только этим): специфичность связывания со свободным белком IL-18. Антитела могут относиться к любому классу, например, IgG, IgM или IgA и т.д., или к любому подклассу, например, IgG1, IgG2a и т.д. или другим подклассам, указанным в настоящем описании или известным в данной области, но, прежде всего, к классу IgG4. Кроме того, антитела можно получать с помощью любого метода, такого как фаговый дисплей, или получать в любом организме или клеточной линии, включая клетки бактерий, насекомых, млекопитающих или другой тип клетки или линии клеток, которые продуцируют антитела с требуемыми характеристиками, такие как гуманизированные антитела. Антитела можно создавать также путем объединения Fab-фрагмента и Fc-области из различных видов.

Обычные специалисты в данной области легко могут получать фрагменты или аналоги антител, руководствуясь сведениями, представленными в настоящем описании. Предпочтительные амино- и карбоксиконцы фрагментов или аналогов находятся вблизи границ функциональных доменов. Структурные и функциональные домены можно идентифицировать путем сравнения данных о нуклеотидной и/или аминокислотной последовательности с публичными или находящимися в собственности фирм базами данных о последовательностях. Предпочтительно для идентификации мотивов последовательности или предсказанных конформационных доменов белка, которые встречаются в других белках с известной структурой и/или функцией, используют компьютеризованные методы сравнения. Методы идентификации белковых последовательностей, которые после укладки принимают известную трехмерную структуру, являются известными (Bowie и др., Science 253, 1991, с. 164).

Понятие «человеческое антитело» включает все антитела, которые имеют одну или большее количество вариабельных и константных областей, происходящих из последовательностей человеческого иммуноглобулина. В предпочтительном варианте осуществления изобретения все вариабельные и константные домены происходят из последовательностей человеческого иммуноглобулина (полностью человеческое антитело). Такие антитела можно получать в различных клетках-хозяевах, таких, например, прокариотическая клетка, например, Е. coli. В другом варианте осуществления изобретения клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку, например, клетку протиста, клетку животного, клетку растения, растительную или грибную клетку. В одном из вариантов осуществления изобретения клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего, включая (но не ограничиваясь только ими) СНО, COS, NS0, SP2, PER.C6, или грибную клетку, такую как Saccharomyces cerevisiae, или клетку насекомого, такую как Sf9. В другом варианте осуществления изобретения клетки, продуцирующие человеческие антитела, можно выращивать в биореакторах или, в случае растений, в теплицах и в полевых условиях (см., например, у: Riechmann L., и др., Nature, 332 (6162), 1988, cc. 332-323; Queen С., и др., Proc Natl Acad Sci U S А. 86 (24), декабрь 1989 г., cc. 10029-10033; Kashmiri S.V., и др., Methods 36 (1), май 2005 г., cc. 25-34; Hou S., и др., J Biochem 144 (1), июль 2008 г., cc. 115-120).

В контексте настоящего изобретения понятия «пациент» или «индивидуум» используют взаимозаменяемо, и они включают как человека, так и других животных, прежде всего млекопитающих, и другие организмы. Таким образом, способы можно применять как в терапии для человека, так и в области ветеринарии. В предпочтительном варианте осуществления изобретения пациент или индивидуум представляет собой млекопитающее, а в наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения пациент или индивидуум представляет собой человека.

В контексте настоящего описания выражения «фармацевтическая композиция» и «терапевтическая композиция» используются взаимозаменяемо в их наиболее широком смысле. Для целей настоящего изобретения считается, что они относятся к взятому в терапевтически эффективном количестве действующему веществу, т.е. IL-18BP, необязательно в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Они включают композиции, которые пригодны для лечебной обработки, контроля, ослабления, улучшения состояния или предупреждения заболевания или нарушения у человека или животного кроме человека. Таким образом, они включают фармацевтические композиции, предназначенные для применения в медицине человека или в ветеринарной медицине. Такая «терапевтическая композиция» отличается тем, что она включает по меньшей мере одно соединение IL-18BP или его физиологически приемлемую соль и необязательно носитель или эксципиент, при этом соль, и носитель, и эксципиент являются переносимыми для организма-мишени, который ими обрабатывают.

Понятие «терапевтически эффективное количество» относится к количеству, которое обеспечивает терапевтическое действие для рассматриваемого состояния и схемы введения. В частности, «терапевтически эффективное количество» означает количество, эффективное в отношении предупреждения, реверсирования, облегчения или ослабления симптомов заболевания или пролонгирования выживания индивидуума, подвергающегося лечению, который может представлять собой человека или животное кроме человека. Определение терапевтически эффективного количества находится в компетенции специалиста в данной области. В частности, в рассматриваемом случае «терапевтически или профилактически эффективное количество» относится к количеству белка или пептида, мутеина, функционального производного, фракции, полученного в результате циклической перестановки производного, слитого белка, его изоформы или соли, и соединения или фармацевтической композиции, которое после введения человеку или животному приводит к терапевтическому или профилактическому действию на указанного человека или животное. Специалист в данной области легко может определять эффективное количество согласно стандартным процедурам. Терапевтически эффективное количество или доза соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, может варьироваться в широких пределах и его можно определять методом, известным в соответствующей области. Доза может варьироваться в широких пределах и ее, естественно, следует регулировать в зависимости от индивидуальных требований в каждом конкретном случае.

Понятие «введение через слизистую оболочку» относится к различным путям введения, когда соединение абсорбируется слизистой оболочкой любой части организма. Введение через слизистую оболочку включает (но не ограничиваясь только ими) интраназальное, трансбуккальное введение, введение через слизистую оболочку ротовой полости, внутритрахеальное введение, введение в мочевой тракт, внутриректальное, внутриматочное, подъязычное, внутрибронхиальное, внутрилегочное и чрескожное введение.

Под понятие «фармацевтически приемлемый» подпадает любой носитель, эксципиент, разбавитель или наполнитель, который не оказывает негативного влияния на эффективность проявления биологической активности действующего вещества и который не является токсичным для хозяина, которому его вводят.

Понятие «слитый белок» относится к полипептиду, который содержит IL-18ВР или вирусный IL-18BP, или его мутеин или фрагмент, слитый с другим белком, который, например, обладает более продолжительным временем нахождения в общей воде организма. Так, IL-18BP или вирусный IL-18BP можно сливать с другим белком, полипептидом или т.п., например, иммуноглобулином или его фрагментом.

Такие изоформы, мутеины, слитые белки или функциональные производные сохраняют биологическую активность IL-18BP, в частности, способность связываться с IL-18, и предпочтительно активность, практически сходную с активностью IL-18BP. В идеальном варианте такие белки обладают биологической активностью, которая даже превышает активность немодифицированного IL-18BP. Предпочтительные активные фракции обладают активностью, которая превышает активность IL-18BP, или они обладают дополнительными преимуществами, такими как более высокая стабильность или более низкая токсичность или иммуногенность, или их легче получать в больших количествах, или легче очищать.

Понятие «интерлейкин-18-связывающий белок» включает также мутеин, функциональное производное, фракцию, биологически активный пептид, полученное в результате циклической перестановки производное, слитый белок, изоформу и соль IL-18BP.

В контексте настоящего описания понятие «мутеины» относится к аналогам IL-18BP или аналогам вирусного IL-18BP, в которых один или несколько аминокислотных остатков встречающегося в естественных условиях IL-18BP или вирусного IL-18BP заменены на другие аминокислотные остатки или исключены путем делеции, или один или несколько аминокислотных остатков добавлены к последовательности встречающегося в естественных условиях IL-18ВР или вирусного IL-18BP без значительного изменения активности полученных в результате этого продуктов по сравнению с IL-18BP дикого типа или вирусным IL-18BP. Такие мутеины получают с помощью известных методов синтеза и/или сайтнаправленного мутагенеза, высокопроизводительного мутагенеза, перестановки ДНК, методов эволюции белка или других известных методов, пригодных для указанной цели

Любой такой мутеин предпочтительно имеет аминокислотную последовательность, в достаточной степени дублирующую последовательность IL-18BP, или в достаточной степени дублирующую последовательность вирусного IL-18BP, для того, чтобы он обладал активностью, практически сходной с активностью IL-18BP. Одним из видов активности IL-18BP является его способность связываться с IL-18. Поскольку мутеин обладает значительной активностью в отношении связывания с IL-18, то его можно применять для очистки IL-18, например, с помощью аффинной хроматографии, и, таким образом, можно считать, что он обладает активностью, практически сходной с активностью IL-18BP. Таким образом, с помощью стандартных экспериментов можно определять, обладает ли любой рассматриваемый мутеин практически такой же активностью, что и IL-18BP, подвергая указанный мутеин, например, простому сэндвич-анализу в условиях конкуренции для определения того, связывается он или нет с соответствующим образом меченым IL-18, такому как радиоиммуноанализ или ELISA.

Мутеины полипептидов IL-18BP или мутеины вирусных IL-18BP, которые можно применять согласно настоящему изобретению, или нуклеиновая кислота, кодирующая их, включают ограниченный набор соответствующих в необходимой степени последовательностей в качестве замещающих пептидов или полинуклеотидов, которые обычный специалист в данной области может получать стандартными методами без излишних экспериментов на основе доктрины изобретения и указаний, представленных в настоящем описании.

Предпочтительные изменения, применяемые для получения мутеинов согласно настоящему изобретению, представляют собой изменения, известные как «консервативные» замены. Консервативные аминокислотные замены в полипептидах или белках IL-18BP, или в вирусных IL-18BP, могут включать замены синонимических аминокислот в группах, характеризующихся достаточно сходными физико-химическими свойствами, благодаря чему замены представителей группы друг на друга должны сохранять биологическую функцию молекулы (Grantham, 1974). Очевидно, что можно осуществлять также инсерции и делеции аминокислот в указанных выше последовательностях без изменения их функции, прежде всего в том случае, если инсерции или делеции затрагивают лишь небольшое количество аминокислот, например, менее тридцати, и предпочтительно менее десяти, и не приводят к удалению или смещению аминокислот, которые имеют решающее значение для функциональной конформации, например, остатков цистеина. Белки и мутеины, полученные в результате таких делеций и/или инсерций, подпадают под объем настоящего изобретения.

В контексте настоящего описания понятие «функциональные производные» включает производные IL-18BP или вирусного IL-18BP, и их мутеинов и содержащих их слитых белков, которые можно получать с использованием функциональных групп, которые присутствуют в виде боковых цепей на остатках, или N- или С-концевых групп, с помощью средств, известных в данной области, и они подпадают под объем изобретения, если они остаются фармацевтически приемлемыми, т.е. если они не нарушают активность белка, которая практически сходна с активностью IL-18BP или вирусных IL-18BP, и не придают токсические свойства композициям, содержащим их.

Такие производные могут, например, содержать полиэтиленгликолевые боковые цепи, которые могут маскировать антигенные сайты и удлинять время нахождения IL-18BP или вирусного IL-18BP в общей воде организма. Другие производные содержат алифатические сложные эфиры карбоксильных групп, амиды карбоксильных групп, полученные в результате взаимодействия с аммиаком или с первичными или вторичными аминами, N-ацильные производные свободных аминогрупп на аминокислотных остатках, образованные с использованием ацильных фрагментов (например, алканольные или карбоциклические ароильные группы), или О-ацильные производные свободных гидроксильных групп (например, групп на серильных или треонильных остатках), образованных с ацильными фрагментами.

В качестве «функционального фрагмента» IL-18BP или вирусного IL-18BP, мутеина и слитого белка, под объем настоящего изобретения подпадают любой фрагмент или предшественник полипептидной цепи молекулы белка IL-18BP индивидуально или вместе с ассоциированными молекулами или остатками, присоединенными к нему, такими, например, как сахарные или фосфатные остатки, или агрегатами молекулы белка, или самими сахарными остатками, при условии, что указанный фрагмент обладает активностью, практически сходной с активностью IL-18BP.

В контексте настоящего описания понятие «соли» относится как к солям карбоксильных групп, так и к кислотно-аддитивным солям аминогрупп молекулы IL-18BP или ее аналогов. Соли карбоксильных групп можно получать методами, известными в данной области, и они включают неорганические соли, например, соли натрия, кальция, аммония, железа или цинка и т.п. и соли с органическими основаниями, образованные, например, с аминами, такими как триэтаноламин, аргинин или лизин, пиперидин, прокаин и т.п. Кислотно-аддитивные соли включают, например, соли с минеральными кислотами, такими, например, как соляная кислота или серная кислота, и соли с органическими кислотами, такими, например, как уксусная кислота или щавелевая кислота. Очевидно, что любые такие соли должны сохранять биологическую активность IL-18BP, например, способность связываться с IL-18.

«Изоформы» IL-18BP представляют собой белки, обладающие способностью связываться с IL-18 или его фрагментом, которые можно получать путем альтернативного сплайсинга.

В контексте настоящего описания понятие «полученные с помощью циклической перестановки производные» относится к линейной молекуле, в которой концы были соединены друг с другом либо непосредственно, либо через линкер, с получением кольцевой молекулы, и затем кольцевая молекула была разомкнута в другом положении с получением новой линейной молекулы, концы которой отличны от концов исходной молекулы. Варианты с циклической перестановкой включают молекулы, структура которых эквивалентна структуре молекулы, которую подвергали циклизации и затем размыкали. Таким образом, молекулу с циклической перестановкой можно синтезировать de novo в виде линейной молекулы и не осуществлять стадию циклизации и размыкания. Получение производных с циклической перестановкой описано в WO 95/27732.

Выражение «аномальные уровни свободного IL-18» относится к уровням IL-18, повышенным или пониженным по сравнению с уровнями, присутствующими в общей воде организма здорового контрольного индивидуума. В частности, указанные аномальные уровни представляют собой повышенные уровни IL-18. В частности, указанный аномальный уровень свободного IL-18 в общей воде организма превышает уровень в общей воде организма здорового контрольного индивидуума на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100%. В конкретных вариантах осуществления изобретения референс-уровень или контрольный уровень представляет собой нормальный непатологический исходный уровень свободного IL-18, определенный у пациента, подлежащего лечению.

Выражение «аномальное соотношение свободный IL-18/IL-18BP» относится к повышенному соотношению IL-18 к IL-18BP по сравнению с величинами, обнаруженными в общей воде организма здорового контрольного индивидуума. В частности, указанное аномальное соотношение свободный IL-18/IL-18BP в общей воде организма превышает указанное соотношение в общей воде организма здорового контрольного индивидуума на 1%, 2.5%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100%. В конкретных вариантах осуществления изобретения референс-уровень или контрольный уровень представляет собой нормальный непатологический исходный уровень свободного IL-18, определенный у пациента, подлежащего лечению.

Выражения «молчание гена» и «посттрансляционное молчание гена» означают регуляцию, подавляющую экспрессию гена посредством механизмов, отличных от генетической модификации. Молчание возникает в результате нейтрализации мРНК на посттрансляционном уровне, при этом трансляция мРНК прекращается и происходит образование активного генного продукта, который в большинстве случаев представляет собой белок.

Понятие «предрасположенность» обозначает повышенную чувствительность индивидуума к развитию специфического заболевания. В рассматриваемом случае индивидуум классифицируется как предрасположенный, если, например, обнаружен повышенный уровень IL-18 в легких, сыворотке, мокроте, жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF) или в кровотоке.

Выражения «дым», «индуцированный дымом», «сигаретный дым» или «индуцированный сигаретным дымом» относятся к табачному дыму.

«Альвеолярные макрофаги» представляют собой подтип макрофагов, присутствующий в легочных альвеолах. Они часто содержат гранулы экзогенного материала, который они захватывают с поверхностей дыхательных путей. Такие черные гранулы встречаются, прежде всего, у людей, которые в течение длительного времени подвергались воздействию мелкой пыли, мелких частиц, например, у курильщика или людей, долгое время проживающих в крупных городах.

«Цитокиновый Th2-ответ» опосредован IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, и/или IL-17A, прежде всего IL-4 и/или IL-8, и/или IL-17A, в то время как «цитокиновый Th1-ответ» опосредован интерфероном-гамма (IFN-γ), IL-2 и фактором некроза опухоли-альфа (TNF-α).

Выражение «дисбаланс IL-18/IL-18BP» относится к нарушению регуляции общего взаимодействия IL-18 и IL-18BP, которое в конечном итоге приводит к повышенному уровню несвязанного IL-18.

Понятие «заболевание» обозначает состояние здоровья животного, при котором животное не может поддерживать гомеостаз, и при котором, если заболевание не ослабляется, то здоровье животного продолжает ухудшаться. В отличие от этого, понятие «нарушение» у животного обозначает состояние здоровья, при котором животное способно поддерживать гомеостаз, но при этом состояние здоровья животного является менее благоприятным, чем оно могло бы быть в отсутствии нарушения. Без лечения нарушение не обязательно приводит к дальнейшему ухудшению состояния здоровья животного.

Заболевание или нарушение «облегчают», если уменьшают серьезность симптома заболевания или нарушения, частоту, с которой у пациента возникают указанные симптомы, или уменьшают и то, и другое.

В контексте настоящего описания понятия «с нарушенной регуляцией» или «нарушенная регуляция», относятся к ухудшению биологического процесса, что, в свою очередь, может приводить к неблагоприятным физиологическим последствиям или аномальной экспрессии гена, нуклеиновой кислоты, белка, пептида или другой биологической молекулы. В том случае, если нарушена регуляция экспрессии гена, нуклеиновой кислоты, белка, пептида или другой биологической молекулы, то уровни экспрессии, процессирования или поддержания гена, нуклеиновой кислоты, белка, пептида или другой биологической молекулы находятся вне диапазона, который рассматривается специалистом в данной области как нормальный для указанного/указанной гена, нуклеиновой кислоты, белка, пептида или другой биологической молекулы. Нарушение регуляции гена, нуклеиновой кислоты, белка, пептида или другой биологической молекулы у млекопитающего можно определять путем измерения уровня гена, нуклеиновой кислоты, белка, пептида или другой биологической молекулы в организме млекопитающего и сравнения уровня, измеренного у этого млекопитающего, с уровнем, измеренным у соответствующей популяции, в отношении которой известно, что у нее не имеет место нарушение регуляции указанного/указанной гена, нуклеиновой кислоты, белка, пептида или другой биологической молекулы. Альтернативно этому уровень можно сравнивать с уровнем, измеренным у того же самого индивидуума в другой момент времени.

В контексте настоящего описания понятия «заболевание сердца» или «сердечно-сосудистое заболевание» включают заболевания и нарушения, которые поражают сердечную мышцу или кровеносные сосуды сердца и всего организма. Заболевания сердца могут приводить к сердечной недостаточности и, в конечном итоге, они являются одной из самых часто встречающихся причин смерти в промышленно развитых сообществах. Примерами заболеваний сердца, индуцированных нарушением баланса IL-18/IL-18BP, являются (но не ограничиваясь только ими) обструктивное заболевание сердца, тромболитическая дисфункция, алкогольная кардиомиопатия, пролапс клапана аорты, стеноз клапана аорты, аритмии, кардиогенный шок, врожденный порок сердца, дилатационная кардиомиопатия, сердечный приступ, сердечная недостаточность, опухоль сердца, стеноз клапана легочной артерии, гипертрофическая кардиомиопатия, идиопатическая кардиомиопатия, ишемическая болезнь сердца, ишемичесская кардиомиопатия, митральная регургитация, пролапс митрального клапана, перипартальная кардиомиопатия, стенокардия.

В контексте настоящего описания понятие «сахарный диабет типа 2» относится к наиболее распространенной форме диабета. Это заболевание или нарушение характеризуется либо тем, что организм не может продуцировать или продуцирует в недостаточных количествах фермент инсулин, либо тем, что клетки имеют дефекты с точки зрения их ответа на инсулин. Такие дефекты, по-видимому, зависят от инсулинового рецептора.

В контексте настоящего описания понятие «эндогенный» относится к любому материалу, происходящему из организма, клетки, ткани или системы, или продуцируемому в них. Понятие «экзогенный» относится к любому материалу, интродуцированному извне или продуцированному вне организма, клетки, ткани или системы.

В контексте настоящего описания понятие «экспрессия» относится к транскрипции и/или трансляции конкретной нуклеотидной последовательности под контролем ее промотора. В контексте настоящего описания понятие «экспрессионный вектор» относится к вектору, содержащему нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере часть генного продукта, которая может транскрибироваться. В некоторых случаях после этого молекулы РНК транслируются в белок, полипептид или пептид. В других случаях указанные последовательности не транслируются, что имеет место, например, при производстве антисмысловых молекул, siPHK, рибозимов и т.п. Экспрессионные векторы могут содержать различные контролирующие последовательности, которые относятся к нуклеотидным последовательностям, необходимым для транскрипции и возможно для трансляции, которые функционально связаны с кодирующей последовательностью в конкретном организме-хозяине. Помимо контролирующих последовательностей, которые управляют транскрипцией и трансляцией, векторы и экспрессионные векторы могут содержать также нуклеотидные последовательности, которые выполняют другие функции. Экспрессионный вектор, предлагаемый в настоящем изобретении, можно применять в генной терапии для лечения заболевания или нарушения, указанного в настоящем описании. В частности, указанный экспрессионный вектор представляет собой вирусный вектор. Вирусы, которые можно применять в качестве носителя для доставки экспрессионного вектора, выбирают из группы, включающей ретровирус, аденовирус, лентивирус, вирус герпеса простого, вирус коровьей оспы, вирус оспы и аденоассоциированный вирус.

В контексте настоящего описания понятия «ингибирует», «нейтрализует» или «блокирует» следует понимать как синонимы, они обозначают уменьшение количества молекул, реакции, взаимодействия, генной экспрессии, экспрессии мРНК и/или белка, стабильности, функции или активности на поддающуюся измерению величину или их полное предупреждение. Ингибиторы представляют собой соединения, которые, например, связываются, частично или полностью блокируют стимуляцию, снижают, предупреждают, замедляют активацию, инактивируют, десенсибилизируют или осуществляют понижающую регуляцию стабильности, экспрессии, функции и активности белка, гена и мРНК, например, являются антагонистами.

Понятие «антисмысловой экспрессионный вектор» относится к экспрессионному вектору, кодирующему одноцепочечную или двухцепочечную РНК, которая комплементарна цепи матричной РНК (мРНК) и которая ингибирует трансляцию указанной мРНК в аминокислоты. Понятие «антисмысловая РНК» включает asPHK, siPHK, shPHK, микроРНК.

В контексте настоящего описания понятие «генная терапия» означает применение ДНК, например, экспрессионного вектора, в качестве фармацевтического агента для лечения заболевания, указанного в настоящем описании.

Краткое описание вариантов осуществления изобретения

1. Композиция, содержащая IL-18BP или его активный фрагмент, предназначенная для применения для лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения у индивидуума, страдающего от такого заболевания или нарушения, где в общей воде организма указанного индивидуума количественно установлено присутствие аномальных уровней свободного IL-18, которые превышают уровень свободного IL-18 в общей воде организма здорового контрольного индивидуума, в частности на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100%, с помощью анализа, позволяющего обнаруживать свободный IL-18 в общей воде организма, где указанный анализ включает применение IL-18BP или антитела или его функционального фрагмента, где антитело или его активный фрагмент связывается с IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18ВР, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанная композиция практически свободна от имеющих N-концевую и/или С-концевую делецию вариантов IL-18BP, которые присутствуют в количестве менее чем 30%, в частности, менее чем 20%, в частности, менее чем 15%, в частности, менее чем 10%, в частности, менее чем 7,5%, в частности, менее чем 5%, в частности, менее чем 2,5%, в частности, менее чем 1%, в частности, менее чем 0,5%, в частности, менее чем 0,25%, в частности, менее чем 0,1%.

2. Композиция, содержащая ингибитор IL-18 или его активный фрагмент, предназначенная для применения для лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения у индивидуума, страдающего от такого заболевания, где в общей воде организма указанного индивидуума количественно установлено присутствие аномальных уровней свободного IL-18, которые превышают уровень свободного IL-18 в общей воде организма здорового контрольного индивидуума, в частности на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100%, с помощью анализа, позволяющего обнаруживать свободный IL-18 в общей воде организма, который включает применение IL-18BP или антитела или его функционального фрагмента, где антитело или его активный фрагмент связывается с IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанный ингибитор представляет собой IL-18ВР или антитело или его функциональный фрагмент, где антитело или его активный фрагмент связывается с IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанная композиция содержит хлорид натрия, и/или гидроксид натрия и/или фосфат натрия.

3. Композиция, содержащая игибитор IL-18 или его активный фрагмент, предназначенная для применения для лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения у индивидуума, страдающего от такого заболевания или нарушения, где в общей воде организма указанного индивидуума количественно установлено присутствие аномальных уровней свободного IL-18, которые превышают уровень свободного IL-18 в общей воде организма здорового контрольного индивидуума, в частности на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100%, с помощью анализа, позволяющего обнаруживать свободный IL-18 в общей воде организма, который включает применение IL-18BP или антитела или его функционального фрагмента, где антитело или его активный фрагмент связывается с IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанный ингибитор представляет собой IL-18ВР или антитело или его функциональный фрагмент, где антитело или его активный фрагмент связывается с IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанную композиция вводят индивидууму, подлежащему лечению, в виде нескольких доз/день, нескольких доз/неделю или нескольких доз/месяц.

4. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-3, где уровень свободного IL-18, определенный в общей воде организма, должен составлять ≥5 пг/мл и, в частности, вплоть до 10000 пг/мл по сравнению с ≤4 пг/мл у здорового контрольного индивидуума.

5. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-4, где анализ для количественного определения уровня свободного IL-18 в общей воде организма включает стадии, на которых:

а) приводят в контакт образец общей воды организма, в котором предполагается присутствие свободного IL-18, с IL-18BP или антителом, который/которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают возможность связываться IL-18BP или антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 с IL-18BP или антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце.

6. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-5, в которой антитело, применяемое в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, где антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанное антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR тяжелой цепи антител, указанных в таблице 8, которые имеют последовательности, указанные в ряду 5 таблицы 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VK), где CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR антител, указанных в таблице 8, которые имеют последовательности, указанные в ряду 5 таблицы 8.

7. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-6, в которой антитело, применяемое в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, где антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанное антитело содержит CDR1, CDR2, и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH) антител, указанных в таблице 8, и которые имеют последовательность, представленную в таблице 8, и CDR1, CDR2, и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VK) антител, указанных в таблице 8, и которые имеют последовательность, представленную в таблице 8.

8. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-7, в которой антитело, применяемое в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой антитело, выбранное из группы, состоящей из моноклональных, поликлональных, химерных, одноцепочечных, биспецифических или биэффективных антител, антител с трансплантированными участками обезьяньих антител, человеческих и гуманизированных антител.

9. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-6, в которой антитело, применяемое в качестве ингибитора IL-18 или в качестве захватывающей молекулы в анализе для количественного определения свободного IL-18 в общей воде организма, представляет собой человеческое или гуманизированное антитело.

10. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1 и 4-9, в которой указанные делеционные варианты имеют делеции от 1 до 5 аминокислотных остатков на С-конце IL-18BP и/или от 1 до 30 аминокислотных остатков на N-конце IL-18BP.

11. Композиция для применения согласно варианту осуществления изобретения 10, в которой доля делеционных вариантов в композиции составляет менее чем 30%, в частности менее чем 20%, в частности менее чем 15%, в частности менее чем 10%, в частности менее чем 7,5%, в частности менее чем 5%, в частности менее чем 2,5%, в частности менее чем 1%, в частности менее чем 0,5%, в частности менее чем 0,25%, в частности менее чем 0,1%.

12. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1, 2 и 4-11, где указанную композицию вводят индивидууму, подлежащему лечению, в виде нескольких доз/день, нескольких доз/неделю или нескольких доз/месяц.

13. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-12, где композицию вводят в виде двух доз в неделю, трех доз в неделю, четырех доз в неделю.

14. Композиция для применения согласно варианту осуществления изобретения 13, где однократная доза содержит от 10 до 600 мг IL-18BP.

15. Композиция для применения согласно варианту осуществления изобретения 14, где однократная доза содержит от 10 до 20 мг, от 20 до 40 мг, от 40 до 80 мг, от 80 до 160 мг, от 160 до 320 мг или от 320 до 600 мг IL-18BP.

16. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-15, где лечение продолжают по меньшей мере до тех пор, пока у подвергающегося лечению индивидуума не будет получен терапевтический ответ.

17. Композиция для применения согласно варианту осуществления изобретения 16, где указанный терапевтический ответ характеризуется

(а) нормализацией температуры тела (нормальный диапазон от 36,3 до 37,4°C при измерении в подмышечной впадине) при отсутствии применения NSAID за 24 ч до измерения;

(б) ослаблением опухания суставов и повышением их мягкости (≥20%) и,

(в) снижением уровня CRP на ≥70% или нормализацией уровня CRP и ферритина до достижения референс-значений.

18. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-17, в которой IL-18BP представляет собой человеческий IL-18BP, в частности белок, связывающий рекомбинантный человеческий интерлейкин 18 (rhIL-18BP).

19. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-18, в которой IL-18BP представляет собой изоформу а или изоформу с IL-18BP.

20. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-19, в которой IL-18BP представляет собой изоформу a IL-18BP, имеющую последовательность SEQ ID NO: 7.

21. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 1-20, где указанное ассоциированное с IL-18 заболевание или нарушение представляет собой заболевание или нарушение, выбранное из группы, состоящей из хронического обструктивного заболевания легких (COPD), связанного с трансфузией повреждения легкого, бронхолегочной дисплазии (BPD), острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), болезни Стилла, в частности болезни Стилла взрослых или болезни Стилла детей, юношеского ревматоидного артрита (JRA), юношеского идиопатического артрита (JIA), юношеского идиопатического артрита с системным началом (SoJIA), системного юношеского идиопатического артрита (sJIA), интерстициального заболевания легких (ILD), синдрома активации макрофагов (MAS), включая первичный, вторичный и рекуррентный MAS, гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза (HLH), семейного (наследственного) гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза (FHLH), ассоциированного с дефектами гена перфорина, типе 13-4 и 18-2, синтаксина 11, иммунных дефицитов, таких как синдром Чедиака-Хигаси (CHS), синдрома Грисцелли (GS), Х-сцепленного лимфопролиферативного синдрома (XLP2), дефицита Х-сцепленного ингибитора белка апоптоза (XIAP), приобретенного гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза, ассоциированного с инфекционным состоянием, прежде всего с вирусом герпеса, таким как EBV, и другими патогенами, криопирин-ассоциированных периодических синдромов (CAPS), включая семейный холодовой аутовоспалительный синдром (FCAS), синдром Мукле-Веллса (MWS) и мультисистемное воспалительное заболевание неонатального возраста (NOMID), аутовоспалительных синдромов, ассоциированных с мутациями NLRC4, гигантоклеточного артериита (GCA), географической атрофии, саркоидоза, легочного саркоидоза, идиопатического легочного фиброза, муковисцидоза, легочной артериальной гипертензии, астмы, бронхоэктаза, сердечной недостаточности, ишемической болезни сердца, амиотрофического бокового склероза (ALS), атеросклероза, болезни сухого глаза (DED), кератита, язвы и истирания роговицы, неоваскуляризации роговицы, патологической внутриглазной неоваскуляризации, ирита, глаукомы, дегенерации желтого пятна, синдрома Шегрена, аутоиммунного увеита, болезни Бехчета, конъюнктивита, аллергического конъюнктивита, дерматита века, диабета типа 1, диабета типа 2, неалкогольной жировой болезни печени (NAFLD), стеатогепатита, трансплантации солидных органов и гематологических стволовых клеток, повреждения, вызванного ишемией-реперфузией, семейной средиземноморской лихорадки (FMF), периодических синдромов, ассоциированных с рецептором 1 фактора некроза опухоли (TRAPS), синдромов гипер-IgD (мутация в гене мевалонаткиназы), подагры, синдрома Шнитцлера, грануломатоза Вегенера, называемого также грануломатозом с полиангиитом (GPA), тиреоидита Хашимото, болезни Крона, воспалительного заболевания кишечника с ранним началом (EOIBD), неспецифического язвенного колита, связанных с иммуноглобулином-4 (IgG4) заболеваний, синдрома Блау (мутация NOD-2), и терапий на основе стволовых клеток.

22. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где у указанного индивидуума диагностирована болезнь Стилла на основе присутствия по меньшей мере двух из основных критериев Ямагучи.

23. Композиция для применения согласно варианту осуществления изобретения 22, где указанные по меньшей мере два из основных критериев Ямагучи выбирают из группы, состоящей из

I. температуры >39°C в течение >1 недели;

II. лейкоцитоза >10000/мм³ при PMN >80%;

III. типичной сыпи;

IV. артралгии > в течение 2 недель

и необязательно повышенного уровня маркеров воспаления.

24. Композиция для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 22-23, где индивидуума, подлежащего лечению, подвергали лечению с применением нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (NSAIDS), преднизона и/или синтетических модифицирующих заболевание противоревматических лекарственных средств (sDMARD), но у него не был получен ответ на лечение или был получен неполный ответ на лечение.

25. Композиция для применения согласно варианту осуществления изобретения 24, где индивидуума, подлежащего лечению, подвергали лечению нестероидными противовоспалительными лекарственными средствами (NSAIDS) преднизоном в дозе, составляющей по меньшей мере 5 мг/день, в течение ≥1 месяца и/или синтетическими модифицирующими заболевание противоревматическими лекарственными средствами (sDMARD) в дозе, составляющей по меньшей мере 10 мг/день в течение ≥3 месяцев.

26. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанное ассоциированное с IL-18 заболевание или нарушение является компонентом синдрома хронического обструктивного заболевания легких (COPD), индуцированного курением, воздействием пассивного курения, загрязнителями воздуха в целом и характеризуется наличием слабо обратимого ограничения воздушного потока.

27. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанное ассоциированное с IL-18 заболевание или нарушение ассоциировано с многими компонентами гетерогенного заболевания COPD и осложнениями COPD, индуцированными вирусной или бактериальной инфекцией.

28. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанное ассоциированное с IL-18 заболевание или нарушение представляет собой индуцированное IL-18 системное проявление воспаления и ассоциированные сочетанные заболевания, выбранные из группы, которая состоит из эмфиземы, воспаления ткани, деструкции ткани, резекции легкого, исчезновения сосудистой сети, апоптоза эндотелиальных клеток, метаплазии слизистой оболочки, гипертрофии сердца, снижения уровня VEGF в ткани легкого, утраты легочных сосудов, мускуляризации сосудов, ремоделирования сосудов, отложения коллагена, образования патологических слоев эластина в легком, фиброзного ремоделирования легкого, расширения воздушного пространства легких, хронического ремоделирования дыхательных путей и легочных сосудов и снижения легочной функции

29. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где лечение включает предупреждение, прекращение, ослабление или реверсию симптомов ассоциированных с указанным заболеванием или нарушением.

30. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где модифицируют, в частности ингибируют повышенную экспрессию IFNγ, IL-13 или IL-17A по сравнению с экспрессией у не подвергнутых лечению индивидуумов, страдающих указанным заболеванием или нарушением.

31. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где связывание свободного IL-18 с помощью IL-18BP компенсирует дисбаланс IL-18/IL-18BP в результате улавливания и нейтрализации избытка свободного IL-18 в ткани и кровотоке.

32. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где IL-18BP ингибирует инфильтрацию нейтрофилов в легкое, в частности в результате уменьшения высвобождения G-CSF в дыхательных путях легкого.

33. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для лечения хронического обструктивного заболевания легких (COPD), острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), заболевания сердца, амиотрофического бокового склероза (ALS), болезни сухого глаза и/или диабета типа II.

34. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для лечения хронического обструктивного заболевания легких (COPD).

35. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для лечения заболевания сердца.

36. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для лечения амиотрофического бокового склероза (ALS).

37. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для лечения болезни сухого глаза.

38. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, предназначенная для лечения диабета типа II.

39. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где ограничивают или ингибируют связывание IL-18, в частности, связывание свободного IL-18 с IL-18R, и, прежде всего, связывание свободного IL-18 с IL-18Rα.

40. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где IL-18BP снижает связывание IL-18 с рецептором IL-18, в частности, связывание с IL-18Rα, по меньшей мере на 5%, в частности, по меньшей мере на 10%, в частности, по меньшей мере на 15%, в частности, по меньшей мере на 20%, в частности, по меньшей мере на 25%, в частности, по меньшей мере на 30%, в частности, по меньшей мере на 40%, в частности, по меньшей мере на 45%, в частности, по меньшей мере на 50%, в частности, по меньшей мере на 55%, в частности, по меньшей мере на 60%, в частности, по меньшей мере на 65%, в частности, по меньшей мере на 70%, в частности, по меньшей мере на 75%, в частности, по меньшей мере на 80%, в частности, по меньшей мере на 85%, в частности, по меньшей мере на 90%, в частности, по меньшей мере на 95%, в частности, на 100%.

41. Композиция для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где IL-18BP нейтрализует свободный IL-18 путем ограничения или предупреждения связывания IL-18 с рецептором IL-18 (IL-18R), прежде всего, связывание свободного IL-18 с IL-18Rα.

42. Человеческое или гуманизированное антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его фрагменты, где антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR сегментов тяжелой цепи антител, указанных в таблице 8, которые имеют последовательность, представленную в ряду 5 таблицы 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VK), где CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR легкой цепи антител, указанных в таблице 8, которые имеют последовательность, представленную в ряду 5 таблицы 8.

43. Человеческое или гуманизированное антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его фрагменты, где антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, имеющие последовательность, представленную в таблице 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, имеющие последовательность, представленную в таблице 8.

44. Антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его фрагменты, где антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18ВР, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR тяжелой цепи антител, указанных в таблице 8, которые имеют последовательность, представленную в ряду 5 таблицы 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VK), где CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR легкой цепи антител, указанных в таблице 8, которые имеют последовательность, представленную в ряду 5 таблицы 8, где указанное антитело не представляет собой антитело 107С6, 108F8, 109А6, 111А6, 131В4, 131Е8, 131Н1, 132Н4, 133А6, для которых последовательности VH и VK представлены в перечне последовательностей.

45. Композиция, содержащая антитело по одному из вариантов осуществления изобретения 42-44.

46. Композиция по варианту осуществления 45, которая представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель.

47. Композиция по варианту осуществления 45 или 46, содержащая антитело по одному из вариантов осуществления изобретения 42-44, для применения для лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения у индивидуума, страдающего от такого заболевания, указанного в одном из вариантов осуществления изобретения.

48. Способ определения количества свободного IL-18 в образце или in situ, включающий обнаружение специфического связывания антитела, указанного в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44, со свободным белком IL-18 в образце или in situ, включающий стадии, на которых:

а) приводят в контакт образец или конкретную часть организма или область организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с антителом, указанным в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44, которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают возможность связываться антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 с антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце.

49. Способ диагностирования ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения, в частности ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения, которое указано в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, у пациента, включающий обнаружение специфического связывания антитела, указанного в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44, со свободным белком IL-18 в образце или in situ, который включает стадии, на которых:

а) приводят в контакт образец или конкретную часть организма или область организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с антителом, указанным в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44, которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают возможность связываться антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце;

г) сравнивают количество свободного IL-18 в образце, полученном из организма индивидуума, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума.

50. Способ диагностирования предрасположенности к ассоциированному с IL-18 заболеванию или нарушению, в частности к ассоциированному с IL-18 заболеванию или нарушению, указанному в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, у пациента, включающий обнаружение специфического связывания антитела, указанного в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44, со свободным белком IL-18 в образце или in situ, который включает стадии, на которых:

а) приводят в контакт образец или конкретную часть организма или область организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с антителом, указанным в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44, которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают возможность связываться антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 с антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце;

г) сравнивают количество свободного IL-18 в образце, полученном из организма индивидуума, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума;

где повышение количества указанного свободного IL-18 в образце по сравнению с контрольным нормальным значением, полученным для здорового индивидуума, свидетельствует о том, что указанный пациент имеет риск развития заболевания или нарушения, указанного в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения.

51. Способ мониторинга минимальной остаточной болезни у пациента после лечения с помощью композиции, указанной в одном из вариантов осуществления изобретения 1-41 и 45-47, где способ включает:

а) приведение в контакт образца или конкретной части организма или области организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с антителом, указанным в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44, которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают возможность связываться антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 с антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце;

г) сравнивают количество свободного IL-18 в образце, полученном из организма индивидуума, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума;

где увеличение количества указанного свободного IL-18 в образце по сравнению с контрольным нормальным значением, полученным для здорового индивидуума, свидетельствует о том, что указанный пациент все еще страдает от минимальной остаточной болезни.

52. Способ предсказания чувствительности пациента к лечению с помощью композиции, указанной в одном из вариантов осуществления изобретения 1-41 и 45-47, где способ включает:

а) приведение в контакт образца или конкретной части организма или области организма, в котором/которой предполагается присутствие свободного IL-18, с антителом, указанным в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44, которое специфически связывается со свободным IL-18, но не связывается с IL-18, входящим в комплекс, и функционирует в качестве захватывающей молекулы для свободного IL-18;

б) дают возможность связываться антителу со свободным IL-18;

в) обнаруживают связывание IL-18 с антителом и определяют количество свободного IL-18 в образце;

г) сравнивают количество свободного IL-18 в образце, полученном из организма индивидуума, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума;

где уменьшение количества указанного свободного IL-18 в образце свидетельствует о том, что указанный пациент с высокой вероятностью может обладать чувствительностью к лечению.

53. Способ по одному из вариантов осуществления 48-52, включающий на стадии а) дополнительную стадию, на которой применяют специфическую в отношении IL-18BP связывающую молекулу, которая связывается с сайтом IL-18ВР, отличным от того, с которым связывается захватывающая молекула, в частности, где одна из указанных молекул связывается с сайтом IL-18BP, который связывается с IL-18.

54. Способ по одному из вариантов осуществления изобретения 48-53, включающий дополнительную стадию, на которой определяют присутствие свободного IL-18BP в образце путем применения на стадии а) специфической в отношении IL-18BP захватывающей молекулы и специфической в отношении IL-18BP идентифицирующей молекулы, которая связывается с сайтом IL-18BP, отличным от того, с которым связывается захватывающая молекула, в частности, когда одна из указанных специфических в отношении IL-18BP молекул связывается с сайтом IL-18BP, который связывается с IL-18; путем определения на стадии в) количества свободного и общего IL-18 и свободного и общего IL-18ВР, связанного с захватывающей молекулой в образце; и путем сравнения на стадии г) количества свободного и/или общего IL-18 и свободного и/или общего IL-18BP в образце, полученном из организма пациента, страдающего от заболеваний или нарушения, указанных в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, с количеством в образце, полученном из организма здорового индивидуума.

55. Способ по одному из вариантов осуществления изобретения 48-54, в котором указанная захватывающая молекула представляет собой

а) IL-18BP;

б) специфическое в отношении IL-18 антитело, указанное в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44.

56. Способ по одному из вариантов осуществления изобретения 48-55, в котором указанный образец выбирают из группы, состоящей из жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF), жидкостей кровеносной системы, секреторных жидкостей, биопсии и гомогенизированной ткани, прежде всего, сыворотки, мочи, слез, слюны, желчи, пота, выделяемых продуктов или выдыхаемых продуктов, мокроты, бронхоальвеолярной жидкости, секрета сальных желез, клеточных, железистых, слизистых или тканевых выделений.

57. Способ по одному из вариантов осуществления изобретения 48-56, в котором количество свободного IL-18 в сыворотке, выделенной из организма индивидуума, в частности, человека, страдающего от указанного заболевания, составляет ≥5 пг/мл и, в частности, вплоть до 10000 пг/мл, в то время как количество свободного IL-18 в сыворотке здорового индивидуума, в частности, здорового человека, составляет ≤4 пг/мл.

58. Диагностический набор для обнаружения свободного IL-18, который содержит антитело, указанное в одном из вариантов осуществления изобретения 42-44, в качестве захватывающей молекулы, и вторую специфическую в отношении IL-18 связывающую молекулу в качестве идентифицирующей молекулы, и, необязательно, вторую специфическую в отношении IL-18 захватывающую молекулу, где идентифицирующая молекула связывается с сайтами IL-18, отличными от тех, с которыми связывается захватывающая молекула.

59. Способ лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения у индивидуума, где указанный способ включает

а. количественное определение свободного IL-18 в общей воде организма указанного индивидуума с помощью способа по варианту осуществления изобретения 48;

б. введение индивидууму, у которого путем количественного определения установлено, что у него присутствуют аномальные уровни свободного IL-18 в общей воде организма, которые превышают уровень свободного IL-18 в общей воде организма здорового контрольного индивидуума на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более чем на 100%, в терапевтически или профилактически эффективном количестве композиции, представленной в одном из вариантов осуществления изобретения 1-37 и 41, в частности, путем системного, интраназального, трансбуккального, орального введения, введения через слизистую оболочку, внутритрахеального, внутривенного, подкожного введения, введения в мочевой тракт, внутриматочного, подъязычного, внутрибронхиального, внутрилегочного, чрескожного или внутримышечного введения, прежде всего, путем бронхолегочного введения.

60. Антитело по варианту осуществления изобретения 42 или варианту осуществления изобретения 44, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, где антитело связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18ВР, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, содержащее

a) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 310 и SEQ ID NO: 311, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 312, SEQ ID NO: 313 и SEQ ID NO: 314;

б) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 315, SEQ ID NO: 316 и SEQ ID NO: 317, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 318, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 320;

в) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 321, SEQ ID NO: 322 и SEQ ID NO: 323, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 324, SEQ ID NO: 325 и SEQ ID NO: 326;

г) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 327, SEQ ID NO: 328 и SEQ ID NO: 329, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 330, SEQ ID NO: 331 и SEQ ID NO: 332;

д) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 327, SEQ ID NO: 328 и SEQ ID NO: 329 и CDR1, CDR2, и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 333, SEQ ID NO: 334 и SEQ ID NO: 335;

e) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 336, SEQ ID NO: 337 и SEQ ID NO: 338, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 345, SEQ ID NO: 346 и SEQ ID NO: 347;

ж) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 340 и SEQ ID NO: 341, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 345, SEQ ID NO: 346 и SEQ ID NO: 347;

з) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 342, SEQ ID NO: 343 и SEQ ID NO: 344, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 345, SEQ ID NO: 346 и SEQ ID NO: 347;

и) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 348, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 350, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 357, SEQ ID NO: 358 и SEQ ID NO: 359;

к) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 351, SEQ ID NO: 352 и SEQ ID NO: 353, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 357, SEQ ID NO: 358 и SEQ ID NO: 359;

л) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 354, SEQ ID NO: 355 и SEQ ID NO: 356, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 357, SEQ ID NO: 358 и SEQ ID NO: 359;

м) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 360, SEQ ID NO: 361 и SEQ ID NO: 362, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 363, SEQ ID NO: 364 и SEQ ID NO: 365;

н) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 360, SEQ ID NO: 361 и SEQ ID NO: 362, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 366, SEQ ID NO: 367 и SEQ ID NO: 368;

о) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 370 и SEQ ID NO: 371 и CDR1, CDR2, и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 372, SEQ ID NO: 373 и SEQ ID NO: 374;

п) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 375, SEQ ID NO: 376 и SEQ ID NO: 377, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 378, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 380; или

p) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, представленных в SEQ ID NO: 381, SEQ ID NO: 382 и SEQ ID NO: 383, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи (VH), где указанные CDR содержатся в или практически состоят из соответствующих сегментов CDR1, CDR2 и CDR3, представленных в SEQ ID NO: 384, SEQ ID NO: 385 и SEQ ID NO: 386.

61. Антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его фрагменты, где указанное антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где указанное антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, которые имеют последовательности, определенные согласно Хотиа, которые представлены в таблице 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 соответствующей вариабельной области легкой цепи, которые имеют последовательности, определенные согласно Хотиа, которые представлены в таблице 8.

62. Антитело по варианту осуществления изобретения 61, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, которое связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, содержащее

а) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154 и SEQ ID NO: 155, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 157 и SEQ ID NO: 158;

6) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 160 и SEQ ID NO: 161, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 163 и SEQ ID NO: 164;

в) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166 и SEQ ID NO: 167, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 169 и SEQ ID NO: 170;

г) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 173, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 174, SEQ ID NO: 175 и SEQ ID NO: 176;

д) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 173, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 179;

e) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 181 и SEQ ID NO: 182, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 191;

ж) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 184 и SEQ ID NO: 185, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 191;

з) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 187 и SEQ ID NO: 188, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 191;

и) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 193 и SEQ ID NO: 194, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 и SEQ ID NO: 203;

к) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196 и SEQ ID NO: 197, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 и SEQ ID NO: 203;

л) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 200, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202 и SEQ ID NO: 203;

м) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205 и SEQ ID NO: 206, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 207, SEQ ID NO: 208 и SEQ ID NO: 209;

н) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205 и SEQ ID NO: 206, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 210, SEQ ID NO: 211 и SEQ ID NO: 212;

о) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 215, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 217 и SEQ ID NO: 218;

п) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220 и SEQ ID NO: 221, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223 и SEQ ID NO: 224; или

p) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 225, SEQ ID NO: 226 и SEQ ID NO: 227, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229 и SEQ ID NO: 230.

63. Антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его фрагменты, где антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18ВР, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, которые имеют последовательности, определенные согласно Кэботу, которые представлены в таблице 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 соответствующей вариабельной области легкой цепи, которые имеют последовательности, определенные согласно Кэботу, которые представлены в таблице 8.

64. Антитело по варианту осуществления изобретения 63, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, которое/который связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-18BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, содержащее

a) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232 и SEQ ID NO: 233, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 234, SEQ ID NO: 235 и SEQ ID NO: 236;

6) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 237, SEQ ID NO: 238 и SEQ ID NO: 239, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 240, SEQ ID NO: 241 и SEQ ID NO: 242;

в) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 243, SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 245, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, SEQ ID NO: 246, SEQ ID NO: 247 и SEQ ID NO: 248;

г) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 251, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 252, SEQ ID NO: 253 и SEQ ID NO: 254;

д) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250 и SEQ ID NO: 251, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256 и SEQ ID NO: 257;

e) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259 и SEQ ID NO: 260, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 268 и SEQ ID NO: 269;

ж) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 262 и SEQ ID NO: 263, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 268 и SEQ ID NO: 269;

з) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265 и SEQ ID NO: 266, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 268 и SEQ ID NO: 269;

и) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 270, SEQ ID NO: 271 и SEQ ID NO: 272, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 279, SEQ ID NO: 280 и SEQ ID NO: 281;

к) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 273, SEQ ID NO: 274 и SEQ ID NO: 275, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 279, SEQ ID NO: 280 и SEQ ID NO: 281;

л) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 276, SEQ ID NO: 277 и SEQ ID NO: 278, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 279, SEQ ID NO: 280 и SEQ ID NO: 281;

м) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 282, SEQ ID NO: 283 и SEQ ID NO: 284, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 285, SEQ ID NO: 286 и SEQ ID NO: 287;

н) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 282, SEQ ID NO: 283 и SEQ ID NO: 284, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 288, SEQ ID NO: 289 и SEQ ID NO: 290;

о) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 291, SEQ ID NO: 292 и SEQ ID NO: 293, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 295 и SEQ ID NO: 296;

п) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 297, SEQ ID NO: 298 и SEQ ID NO: 299, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 300, SEQ ID NO: 301 и SEQ ID NO: 302; или

p) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 303, SEQ ID NO: 304 и SEQ ID NO: 305, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 306, SEQ ID NO: 307 и SEQ ID NO: 308.

65. Антитело, включая любое функционально эквивалентное антитело или его фрагменты, где антитело или его функциональный фрагмент связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-I8BP или вблизи сайта связывания IL-18ВР, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, и где антитело содержит CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, которые имеют последовательности, определенные согласно IMGT, которые представлены в таблице 8, и CDR1, CDR2 и CDR3 соответствующей вариабельной области легкой цепи, которые имеют последовательности, определенные согласно IMGT, которые представлены в таблице 8.

66. Антитело по варианту осуществления изобретения 65, включая любое функционально эквивалентное антитело или его функциональный фрагмент, которое/который связывается со свободным IL-18 в сайте связывания IL-18BP или вблизи сайта связывания IL-I8BP, но не связывается с комплексами IL-18/IL-18BP, содержащее

а) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 29, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 32;

б) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 и SEQ ID NO: 35, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37 и SEQ ID NO: 38;

в) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40 и SEQ ID NO: 41, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43 и SEQ ID NO: 44;

г) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49 и SEQ ID NO: 50;

д) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52 и SEQ ID NO: 53;

e) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55 и SEQ ID NO: 56, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 59;

ж) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105 и SEQ ID NO: 106, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 59;

з) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111 и SEQ ID NO: 112, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 59;

и) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61 и SEQ ID NO: 62, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67 и SEQ ID NO: 68;

к) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64 и SEQ ID NO: 65, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67 и SEQ ID NO: 68;

л) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 123 и SEQ ID NO: 124, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67 и SEQ ID NO: 68;

м) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131 и SEQ ID NO: 132, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137 и SEQ ID NO: 138;

н) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131 и SEQ ID NO: 132, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143 и SEQ ID NO: 144;

о) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 и SEQ ID NO: 71, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73 и SEQ ID NO: 74;

п) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 77, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 80; или

p) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, представленные в SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55 и SEQ ID NO: 56, и CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, представленные в SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 59.

67. Антитело по одному из вариантов осуществления изобретения 60-66, где указанное антитело не представляет собой антитело 107С6, 108F8, 109А6, 111А6, 131В4, 131Е8, 131Н1, 132Н4, 133А6, для которых последовательности VH и VK представлены в перечне последовательностей.

68. Антитело, содержащее аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 387.

69. Антитело по одному из вариантов осуществления изобретения 60-67, которое представляет собой полностью человеческое или гуманизированное антитело.

70. Композиция, содержащая антитело по одному из вариантов осуществления изобретения 60-67.

71. Композиция по варианту осуществления изобретения 69, которая представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель.

72. Композиция по варианту осуществления изобретения 69 или 70, содержащая антитело по одному из вариантов осуществления изобретения 60-66, предназначенная для применения для лечения ассоциированного с IL-18 заболевания или нарушения у индивидуума, страдающего от такого заболевания, которое указано в одном из вариантов осуществления изобретения 1-41.

73. Антитело по одному из вариантов осуществления изобретения 60-67, предназначенное для применения в способе по одному из вариантов осуществления изобретения 48-57.

74. Антитело по варианту осуществления изобретения 73, которое применяют в качестве захватывающей и/или идентифицирующей молекулы.

75. Ингибитор IL-18 или композиция, содержащая указанный ингибитор IL-18, предназначенный/предназначенная для применения для лечения педиатрического аутовоспалительного заболевания или состояния и/или симптомов, ассоциированных с указанным заболеванием или состоянием.

76. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 75, где ингибитор IL-18 представляет собой IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, и композиция содержит указанный IL-18BP или его активный фрагмент или вариант.

77. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 76, где педиатрическое аутовоспалительное заболевание или состояние представляет собой MAS-подобное педиатрическое заболевание или состояние.

78. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 75 или 77, где MAS-подобное педиатрическое заболевание или состояние представляет собой ассоциированное с IL-18 педиатрическое аутовоспалительное заболевание или состояние с серьезным системным воспалением.

79. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 78, где указанное аутовоспалительное заболевание или состояние с серьезным системным воспалением обусловлено мутацией NLRC4.

80. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 78, где указанное аутовоспалительное заболевание или состояние с серьезным системным воспалением ассоциировано с дефицитом XIAP.

81. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 80, где указанный дефицит XIAP обусловлен мутацией XIAP/BIRC4.

82. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 80 или 81 для лечения X-сцепленного лимфопролиферативного синдрома 2 (XLP2), обусловленного мутациями в XIAP/BIRC4.

83. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 82 для лечения серьезного гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза с ранним началом/MAS (HLH/MAS), ассоциированного с моногенным дефицитом XIAP, обусловленным мутациями XIAP/BIRC4.

84. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 80 для лечения энтероколита, в частности Крон-подобного энтероколита, обусловленного или ассоциированного с дефицитом XIAP.

85. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно варианту осуществления изобретения 80 для снижения восприимчивости к вирусным инфекциям, в частности вызываемым EBV или CMV инфекциям, у пациентов, страдающих от дефицита XIAP, до того, как имела место вирусная инфекция, или после выведения вируса путем лечения противовирусным средством.

86. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 75-85, где указанное аутовоспалительные заболевание или состояние с серьезным системным воспалением сопровождается высокими уровнями IL-18 и свободного IL-18.

87. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из вариантов осуществления изобретения 75-82, где индивидуума, подлежащего лечению, подвергали лечению одним или несколькими соединениями, выбранными из группы, состоящей из нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (NSAIDS), преднизона, синтетических модифицирующих заболевание противоревматических лекарственных средств (sDMARD), иммунодепрессантов и биологических иммунодепрессантов, но у него не был получен ответ на лечение или был получен неполный ответ на лечение.

88. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанная композиция практически свободна от имеющих N-концевую и/или С-концевую делецию вариантов IL-18BP.

89. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения для лечения млекопитающего, в частности человека.

90. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанный ингибитор IL-18 или композицию вводят индивидууму, нуждающемуся в этом, в виде нескольких доз/день, нескольких доз/неделю или нескольких доз/месяц.

91. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанный ингибитор IL-18 или композицию вводят в виде одной дозы в неделю, двух доз в неделю, трех доз в неделю, четырех доз в неделю.

92. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанный ингибитор IL-18 или композицию вводят каждые 24-48 ч.

93. Ингибитор IL-18, в частности IL-18 ВР, или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где однократная доза содержит от 0,5 мг ингибитора IL-18/кг веса тела до 10 мг ингибитора IL-18/кг веса тела, в частности от 1 мг ингибитора IL-18/кг веса тела до 8 мг ингибитора IL-18/кг веса тела, в частности от 2 мг ингибитора IL-18/кг веса тела до 6 мг ингибитора IL-18/кг веса тела, в частности от 1 мг ингибитора IL-18/кг веса тела до 5 мг ингибитора IL-18/кг веса тела.

94. Ингибитор IL-18, в частности IL-18 ВР, или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где однократную дозу, содержащую от 0,5 мг ингибитора IL-18/кг веса тела до 5 мг ингибитора IL-18/кг веса тела, вводят каждые 24 или 48 ч.

95. Ингибитор IL-18, в частности IL-18ВР, или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где однократную дозу, составляющую 1 мг ингибитора IL-18/кг веса тела, вводят каждые 48 ч.

96. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанный ингибитор IL-18 представляет собой IL-18ВР, в частности человеческий IL-18BP, в частности связывающий рекомбинантный человеческий интерлейкин 18 белок (rhIL-18BP).

97. Ингибитор IL-18 или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где указанный человеческий IL-18BP выбран из изоформы a, b, c и d человеческого IL-18BP, в частности, изоформы а, в частности, изоформы с, в частности, из изоформ a, b, c или d, представленных на фиг. 12, но, прежде всего из изоформы а IL-18BP, представленной на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 7, или изоформы с, представленной на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 389.

98. Ингибитор IL-18, в частности IL-18ВР, или композиция, предназначенный/предназначенная для применения согласно одному из предыдущих вариантов осуществления изобретения, где изоформу а человеческого IL-18BP или композицию, содержащую изоформу а человеческого IL-18BP вводят в виде однократной дозы, составляющей 1 мг IL-18ВР/кг веса тела, каждые 48 ч.

99. Способ лечения педиатрического аутовоспалительного заболевания или состояния, в частности MAS-подобного педиатрического заболевания или состояния, и/или симптомов, ассоциированных с указанным заболеванием или состоянием, включающий введение ингибитора IL-18 или композиции, содержащей ингибитор IL-18, индивидууму, страдающему от такого заболевания или состояния.

100. Способ по варианту осуществления изобретения 99, в котором указанный ингибитор IL-18 представляет собой IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, и композиция содержит указанный IL-18BP или его активный фрагмент или вариант.

101. Способ по варианту осуществления изобретения 98 или варианту осуществления изобретения 100, где педиатрическое аутовоспалительное заболевание или состояние представляет собой заболевание или состояние, указанное в одном из вариантов осуществления изобретения 77-86.

102. Способ по одному из вариантов осуществления изобретения 99-101, в котором ингибитор IL-18, в частности, IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, и композицию, содержащую ингибитор IL-18, в частности, IL-18BP или его активный фрагмент или вариант, вводят с частотой и/или в дозе, которые указаны в одном из вариантов осуществления изобретения 90-94.

103. Способ по одному из вариантов осуществления изобретения 99-101, в котором индивидуум, подлежащий лечению, представляет собой млекопитающее или человека.

104. Способ по одному из вариантов осуществления изобретения 99-101, в котором ингибитор IL-18, указанный в одном из предыдущих вариантов осуществления изобретения, представляет собой IL-18BP, в частности, человеческий IL-18BP, в частности, выбранный из изоформ а, b, с и d человеческого IL-18BP, в частности, представляет собой изоформу а, в частности, изоформу с, в частности, изоформу а, b, с или d, представленные на фиг. 12, но, прежде всего изоформу а IL-18BP, представленную на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 7, или изоформу с, представленную на фиг. 12 в виде SEQ ID NO: 389.

105. Способ по одному из вариантов осуществления изобретения 99-101, в котором изоформу а человеческого IL-18BP или композицию, содержащую изоформу а человеческого IL-18BP, вводят в виде однократной дозы, составляющей 1 мг IL-18ВР/кг веса тела, каждые 48 ч.

106. Способ по одному из вариантов осуществления изобретения 99-101, в котором индивидуума, подлежащего лечению, лечили одним или несколькими соединениями, выбранными из группы, состоящей из нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (NSAIDS), преднизона; синтетических модифицирующих болезнь противоревматических лекарственных средств (sDMARD), иммунодепрессантов и биологических иммунодепрессантов, но у него не был выявлен ответ на лечение или был выявлен неполный ответ на лечение.

Краткое описание чертежей

На чертежах показано:

На фиг. 1 - сравнение уровней общего и свободного IL-18 в организме отдельных пациентов с сепсисом (адаптация данных, взятых из публикации Novick и др., 2001). Уровень свободного IL-18 (закрашенные кружки) в сыворотке пациентов с сепсисом при поступлении в клинику рассчитывали на основе концентрации общего IL-18 (незакрашенные кружки) и IL-18BPa, учитывая, что соотношение IL-18 и IL-18BPa в комплексе составляет 1:1, а рассчитанная величина KD составляет 400 пМ. Каждая вертикальная линия соединяет точки, соответствующие общему и свободному IL-18 в индивидуальных образцах сыворотки. Указанные выше анализы ELISA осуществляли с использованием пары антител, созданных Taniguchi с соавторами, 1997 1, а именно антитела 125-2Н в качестве первичного/захватывающего антитела и 159-12В в качестве вторичного/идентифицирующего антитела;

на фиг. 2 - результаты обнаружения общего IL-18 с использованием антител 125-2Н и 159-12В. Данные свидетельствуют о том, что оба антитела позволяют количественно оценивать общий IL-18;

на фиг. 3 - результаты титрования с использованием 400 пг/мл IL-18 в зависимости от уровня IL-18BP;

на фиг. 4 - индукция мышиного IL-18 в пространстве дыхательных путей легкого в день 5 после 1) воздействия воздуха, 2) воздействия табачного дыма (TS), 3) воздействия только полинозиновой-полицитидиловой кислоты (p[I:С]), 4) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 (индукция обострения). Пунктирная линия обозначает нижний предел обнаружения. Статистический анализ проводили с использованием непарного t-критерия;

на фиг. 5 - ингибирование общей инфильтрации клеток в пространство дыхательных путей легкого у мышей в день 5 после 1) воздействия воздуха, 2) воздействия табачного дыма (TS), 3) только p[I:С], 4) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 (индукция обострения), 5-7) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 после обработки IL-18BP в дозе 1, 3 или 10 мг/кг, 8) после обработки дексаметазоном в дозе 10 мг/кг. Статистический анализ проводили с использованием непарного t-критерия;

на фиг. 6 - ингибирование общей инфильтрации клеток в пространство дыхательных путей легкого у мышей в день 5 после 1) воздействия воздуха, 2) воздействия табачного дыма (TS), 3) только p[I:С], 4) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 (индукция обострения), 5) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 после обработки IL-18BP в дозе 10 мг/кг, 6) после обработки дексаметазоном в дозе 10 мг/кг. Статистический анализ проводили с использованием дисперсионного анализа (апостериорный критерий Сидака);

на фиг. 7 - ингибирование инфильтрации нейтрофилов с помощью IL-18BP. Мониторинг инфильтрации нейтрофилов в пространство дыхательных путей легкого у мышей осуществляли в день 5 после 1) воздействия воздуха, 2) воздействия табачного дыма (TS), 3) только p[I:С], 4) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 (индукция обострения), 5-7) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 после обработки IL-18BP в дозе 1, 3 или 10 мг/кг, 8) после обработки дексаметазоном в дозе 10 мг/кг. Статистический анализ проводили с использованием дисперсионного анализа (апостериорный критерий Сидака);

на фиг. 8 - ингибирование инфильтрации нейтрофилов с помощью IL-18BP. Мониторинг инфильтрации нейтрофилов в пространство дыхательных путей легкого у мышей в день 5 после 1) воздействия воздуха, 2) воздействия табачного дыма (TS), 3) только p[I:С], 4) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 (индукция обострения), 5) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 после обработки IL-18BP в дозе 10 мг/кг, 6) после обработки дексаметазоном в дозе 10 мг/кг. Статистический анализ проводили с использованием дисперсионного анализа (апостериорный критерий Сидака);

на фиг. 9 - ингибирование IL-18BP G-CSF-пути. Мониторинг присутствия G-CSF (пг/мл) в пространстве дыхательных путей легкого у мышей осуществляли с помощью ELISA в день 5 после 1) воздействия воздуха, 2) воздействия табачного дыма (TS), 3) только p[I:С], 4) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 (индукция обострения), 5-7) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 после обработки IL-18BP в дозе 1, 3 или 10 мг/кг, 8) после обработки дексаметазоном в дозе 10 мг/кг. Статистический анализ проводили с использованием t-критерия Стьюдента;

на фиг. 10 - уменьшение потери веса после обработки IL-18BP. Мониторинг потери веса мышей осуществляли в день 5 после 1) воздействия воздуха, 2) воздействия табачного дыма (TS), 3) только p[I:С], 4) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 (индукция обострения), 5) p[I:С] в комбинации с табачным дымом в день 4 после обработки IL-18BP в дозе 10 мг/кг, 7) после обработки дексаметазоном в дозе 10 мг/кг. Статистический анализ проводили с использованием дисперсионного анализа (апостериорный критерий Сидака);

на фиг. 11 - аминокислотные последовательности вариабельной тяжелой цепи (VH) и вариабельной легкой цепи (VK) антитела 131В4-2. Гипервариабельные участки CDR 1, CDR 2 и CDR 3 выделены путем подчеркивания соответствующих последовательностей, которые определяли с помощью системы нумерации Кэбота. Слева направо: первая подчеркнутая выделенная жирным шрифтом последовательность в каждой из последовательностей VH и VK соответствует CDR1, вторая подчеркнутая выделенная жирным шрифтом последовательность соответствует CDR 2 и третья подчеркнутая выделенная жирным шрифтом последовательность соответствует CDR 3;

на фиг. 12 - аминокислотные последовательности изоформ а, b, с и d IL-18BP.

Последовательности

SEQ ID NO: 1: эпитоп 1 IL-18: Tyr-Phe-Gly-Lys-Leu-Glu-Ser-Lys-Leu-Ser-Val-Ile-Arg-Asn

SEQ ID NO: 2: эпитоп 2 IL-18: Phe-Ile-Ile-Ser-Met-Tyr-Lys-Asp-Ser-Gln-Pro-Arg-Gly-Met-Ala-Val-Thre-Ile-Ser-Val-Lys

SEQ ID NO: 3: эпитоп 3 IL-18: Glu-Met-Asn-Pro-Pro-Asp-Asn-Ile-Lys-Asp-Thr-Lys-Ser-Asp-Ile-Ile-Phe

SEQ ID NO: 4: эпитоп 4 IL-18: Tyr-Phe-Gly-Lys-Leu-Glu-Ser

SEQ ID NO: 5: эпитоп 5 IL-18: Tyr-Lys-Asp-Ser-Gln-Pro-Arg-Gly-Met-Ala

SEQ ID NO: 6: эпитоп 6 IL-18: Asp-Asn-Ile-Lys-Asp-Thr-Lys

SEQ ID NO: 7: IL-18-связывающий белок (IL-18BP)

SEQ ID NO: 8: состоящая из 13 аминокислот линкерная последовательность: Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met

SEQ ID NO: 9: последовательность вариабельного домена VH антитела 107С6

SEQ ID NO 10 последовательность вариабельного домена VK антитела 107С6

SEQ ID NO: 11: последовательность вариабельного домена VH антитела 108F8

SEQ ID NO: 12: последовательность вариабельного домена VK антитела 108F8

SEQ ID NO: 13: последовательность вариабельного домена VH антитела 109А6

SEQ ID NO: 14: последовательность вариабельного домена VK антитела 109А6

SEQ ID NO: 15: последовательность вариабельного домена VH антитела 111А6

SEQ ID NO: 16: последовательность 1 вариабельного домена VK антитела 111А6

SEQ ID NO: 17: последовательность 2 вариабельного домена VK антитела 111А6

SEQ ID NO: 18: последовательность вариабельного домена VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 19: последовательность вариабельного домена VK антител 131В4 и 131В4-2

SEQ ID NO: 20: последовательность 1 вариабельного домена VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 21: последовательность 2 вариабельного домена антитела 131Е8 VH

SEO ID NO: 22: последовательность вариабельного домена VK антитела 131Е8

SEQ ID NO: 23: последовательность вариабельного домена антитела 132Н4 VH

SEQ ID NO: 24: последовательность вариабельного домена VK антитела 132Н4

SEQ ID NO: 25: последовательность вариабельного домена антитела 133А6 VH

SEQ ID NO: 26: последовательность вариабельного домена VK антитела 133А6

SEQ ID NO: 27: последовательность CDR1 VH антитела 107С6: Gly Туr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly

SEQ ID NO: 28: последовательность CDR2 VH антитела 107С6; Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro

SEQ ID NO: 29: последовательность CDR3 VH антитела 107С6: Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr

SEQ ID NO: 30: последовательность CDR1 VK антитела 107С6: Gln Ser Leu Leu Asp Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr

SEQ ID NO: 31: последовательность CDR2 VK антитела 107С6: Trp Ala Ser

SEQ ID NO: 32: последовательность CDR3 VK антитела 107С6: Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr

SEQ ID NO: 33: последовательность CDR1 VH антитела 108F8: Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly

SEQ ID NO: 34: последовательность CDR2 VH антитела 108F8: Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro

SEQ ID NO: 35: последовательность CDR3 VH антитела 108F8: Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr

SEQ ID NO: 36: последовательность CDR1 VK антитела 108F8: Gln Ser Leu Leu Asp Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr

SEQ ID NO: 37: последовательность CDR2 VK антитела 108F8: Trp Ala Ser

SEQ DNO 38: последовательность CDR3 VK антитела 108F8: Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr

SEQ ID NO: 39: последовательность CDR1 VH антитела 109А6: Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr

SEQ ID NO: 40: последовательность CDR2 VH антитела 109А6: Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr

SEQ ID NO: 41: последовательность CDR3 VH антитела 109А6: Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr

SEQ ID NO: 42: последовательность CDR1 VK антитела 109А6: Gln Arg Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

SEQ ID NO: 43: последовательность CDR2 VK антитела 109А6: Thr Val Ser

SEQ D NO 44: последовательность CDR3 VK антитела 109А6: Ser Gin Ser Thr Leu Val Pro Trp Thr

SEQ ID NO: 45: последовательность CDR1 VH антитела 111А6: Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr

SEQ ID NO: 46: последовательность CDR2 VH антитела 111А6: Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr

SEQ ID NO: 47: последовательность CDR3 VH антитела 111А6: Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr

SEQ ID NO: 48: последовательность 1 CDR1 VK антитела 111A6: Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr

SEQ ID NO: 49: последовательность 1 CDR2 VK антитела 111A6: Ser Thr Ser

SEQ ID NO: 50: последовательность 1 CDR3 VK антитела 111A6: Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr

SEQ ID NO: 51: последовательность 2 CDR1 VK антитела 111A6: Gln Arg Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

SEQ ID NO: 52: последовательность 2 CDR2 VK антитела 111A6: Thr Val Ser

SEQ ID NO: 53: последовательность 2 CDR3 VK антитела 111A6: Ser Gln Ser Thr Leu Val Pro Trp Thr

SEQ ID NO: 54: последовательность CDR1 VH антитела 131В4: Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr

SEQ ID NO: 55: последовательность CDR2 VH антитела 131В4: Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr

SEQ ID NO: 56: последовательность CDR3 VH антитела 131В4: Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr

SEQ ID NO: 57: последовательность CDR1 VK антитела 131В4: Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

SEQ ID NO: 58: последовательность CDR2 VK антитела 131В4: Lys Val Ser

SEQ ID NO: 59: последовательность CDR3 VK антитела 131В4: Ser Gln Ser Ser Leu Val Pro Trp Thr

SEQ ID NO: 60: последовательность 1 CDR1 VH антитела 131Е8: Gly Phe Ser Leu Pro Asn Tyr Gly

SEQ ID NO: 61: последовательность 1 CDR2 VH антитела 131Е8: Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr

SEQ ID NO: 62: последовательность 1 CDR3 VH антитела 131Е8: Ala Arg Asn Phe Tyr Ser Lys Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr

SEQ ID NO: 63: последовательность 2 CDR1 VH антитела 131Е8: Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp

SEQ ID NO: 64: последовательность 2 CDR2 VH антитела 131Е8: Ile Asn Pro Asn Ser Gly Ser Thr

SEQ ID NO: 65: последовательность 2 CDR3 VH антитела 131Е8: Ala Arg Leu Gly Asp Tyr

SEQ ID NO: 66: последовательность CDR1 VK антитела 131Е8: Ser Ser Val Ser Tyr

SEQ ID NO: 67: последовательность CDR2 VK антитела 131Е8: Asp Thr Ser

SEQ ID NO: 68: последовательность CDR3 VK антитела 131Е8: Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr

SEQ ID NO: 69: последовательность CDR1 VH антитела 132Н4: Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala

SEQ ID NO: 70: последовательность CDR2 VH антитела 132Н4: Ile Ser Ser Gly Gly Ala Asn Ile

SEQ ID NO: 71: последовательность CDR3 VH антитела 132Н4: Ala Arg Gly Asp Tyr Phe Asn His Phe Trp Phe Ala Tyr

SEQ ID NO: 72: последовательность CDR1 VK антитела 132Н4: Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

SEQ ID NO: 73: последовательность CDR2 VK антитела 132Н4: Lys Val Ser

SEQ ID NO: 74: последовательность CDR3 VK антитела 132Н4: Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr

SEQ ID NO: 75: последовательность CDR1 VH антитела 133А6: Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala

SEQ ID NO: 76: последовательность CDR2 VH антитела 133А6: Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Ile

SEQ ID NO: 77: последовательность CDR3 VH антитела 133А6

SEQ ID NO: 78: последовательность CDR1 VK антитела 133А6

SEQ ID NO: 79: последовательность CDR2 VK антитела 133А6

SEQ ID NO: 80: последовательность CDR3 VK антитела 133А6

SEQ ID NO: 81: ДНК-последовательность VH антитела 107С6

SEQ ID NO: 82: последовательность VH антитела 107С6

SEQ ID NO: 83: ДНК-последовательность VK антитела 107С6

SEQ ID NO: 84: последовательность VK антитела 107С6

SEQ ID NO: 85: ДНК-последовательность VH антитела 108F8

SEQ ID NO: 86: последовательность VH антитела 108F8

SEQ ID NO: 87: ДНК-последовательность VK антитела 108F8

SEQ ID NO: 88: последовательность VK антитела 108F8

SEQ ID NO: 89: ДНК-последовательность VH антитела 109А6

SEQ ID NO: 90: последовательность VH антитела 109А6

SEQ ID NO: 91: ДНК-последовательность VK антитела 109А6

SEQ ID NO: 92: последовательность VK антитела 109А6

SEQ ID NO: 93: ДНК-последовательность VH антитела 111А6

SEQ ID NO: 94: последовательность VH антитела 111А6

SEQ ID NO: 95: ДНК-последовательность 1 VK антитела 111А6

SEQ ID NO: 96: последовательность 1 VK антитела 111А6

SEQ ID NO: 97: ДНК-последовательность 2 VK антитела 111А6

SEQ ID NO: 98: последовательность 2 VK антитела 111А6

SEQ ID NO: 99: ДНК-последовательность 1 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 100: последовательность 1 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 101: ДНК-последовательность 2 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 102: последовательность 2 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 103: последовательность 2 вариабельного домена VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 104: последовательность 2 CDR1 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 105: последовательность 2 CDR2 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 106: последовательность 2 CDR3 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 107: ДНК-последовательность 3 вариабельного домена VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 108: последовательность 3 VH антитела 131 В4

SEQ ID NO: 109: последовательность 3 вариабельного домена VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 110: последовательность 3 CDR1 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 111: последовательность 3 CDR2 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 112: последовательность 3 CDR3 VH антитела 131В4

SEQ ID NO: 113: ДНК-последовательность VK антитела 131В4

SEQ ID NO: 114: последовательность VK антитела 131В4

SEQ ID NO: 115: ДНК-последовательность 1 VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 116: последовательность 1 VH антитела 131Е8

SEO ID NO: 117: ДНК-последовательность 2 VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 118: последовательность 2 VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 119: ДНК-последовательность 3 VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 120: последовательность 3 VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 121: последовательность 3 вариабельного домена VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 122: последовательность 3 CDR1 VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 123: последовательность 3 CDR2 VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 124: последовательность 3 CDR3 VH антитела 131Е8

SEQ ID NO: 125: ДНК-последовательность VK антитела 131Е8

SEQ ID NO: 126: последовательность VK антитела 131Е8

SEQ ID NO: 127: ДНК-последовательность VH антитела 131Н1

SEQ ID NO: 128: последовательность VH антитела 131Н1

SEQ ID NO: 129: последовательность вариабельного домена VH антитела 131Н1

SEQ ID NO: 130: последовательность CDR1 VH антитела 131Н1

SEQ ID NO: 131: последовательность CDR2 VH антитела 131Н1

SEQ ID NO: 132: последовательность CDR3 VH антитела 131Н1

SEQ ID NO: 133: ДНК-последовательность 1 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 134: последовательность 1 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 135: последовательность 1 вариабельного домена VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 136: последовательность 1 CDR1 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 137: последовательность 1 CDR2 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 138: последовательность 1 CDR3 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 139: ДНК-последовательность 2 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 140: последовательность 2 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 141: последовательность 2 вариабельного домена VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 142: последовательность 2 CDR1 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 143: последовательность 2 CDR2 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 144: последовательность 2 CDR3 VK антитела 131Н1

SEQ ID NO: 145: ДНК-последовательность VH антитела 132Н4

SEQ ID NO: 146: последовательность VH антитела 132Н4

SEQ ID NO: 147: ДНК-последовательность VK антитела 132Н4

SEQ ID NO: 148: последовательность VK антитела 132Н4

SEQ ID NO: 149: ДНК-последовательность VH антитела 133А6

SEQ ID NO: 150: последовательность VH антитела 133А6

SEQ ID NO: 151: ДНК-последовательность VK антитела 133А6

SEQ ID NO: 152: последовательность VK антитела 133А6

SEQ ID NO: 153: последовательность CDR1 VH антитела 107С6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 154: последовательность CDR2 VH антитела 107С6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 155: последовательность CDR3 VH антитела 107С6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 156: последовательность CDR1 VK антитела 107С6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 157: последовательность CDR2 VK антитела 107С6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 158: последовательность CDR3 VK антитела 107С6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 159: последовательность CDR1 VH антитела 108F8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 160: последовательность CDR2 VH антитела 108F8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 161: последовательность CDR3 VH антитела 108F8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 162: последовательность CDR1 VK антитела 108F8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 163: последовательность CDR2 VK антитела 108F8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 164: последовательность CDR3 VK антитела 108F8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 165: последовательность CDR1 VH антитела 109А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 166: последовательность CDR2 VH антитела 109А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 167: последовательность CDR3 VH антитела 109А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 168: последовательность CDR1 VK антитела 109А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 169: последовательность CDR2 VK антитела 109А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 170: последовательность CDR3 VK антитела 109А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 171: последовательность CDR1 VH антитела 111А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 172: последовательность CDR2 VH антитела 111А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 173: последовательность CDR3 VH антитела 111А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 174: последовательность CDR1 VK антитела 111А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 175: последовательность CDR2 VK антитела 111А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 176: последовательность CDR3 VK антитела 111А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 177: последовательность 2 CDR1 VK антитела 111А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 178: последовательность 2 CDR2 VK антитела 111А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 179: последовательность 3 CDR1 VK антитела 111А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 180: последовательность 1 CDR1 VH антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 181: последовательность 1 CDR2 VH антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 182: последовательность 1 CDR3 VH антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 183: последовательность 2 CDR1 VH антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 184: последовательность 2 CDR2 VH антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 185: последовательность 2 CDR3 VH антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 186: последовательность 3 CDR1 VH антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 187: последовательность 3 CDR2 VH антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 188: последовательность 3 CDR3 VH антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 189: последовательность CDR1 VK антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 190: последовательность CDR2 VK антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 191: последовательность CDR3 VK антитела 131В4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 192: последовательность 1 CDR1 VH антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 193: последовательность 1 CDR2 VH антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 194: последовательность 1 CDR3 VH антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 195: последовательность 2 CDR1 VH антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 196: последовательность 2 CDR2 VH антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 197: последовательность 2 CDR3 VH антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 198: последовательность 3 CDR1 VH антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 199: последовательность 3 CDR2 VH антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 200: последовательность 3 CDR3 VH антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 201: последовательность CDR1 VK антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 202: последовательность CDR2 VK антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 203: последовательность CDR3 VK антитела 131Е8 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 204: последовательность CDR1 VH антитела 131Н1 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 205: последовательность CDR2 VH антитела 131Н1 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 206: последовательность CDR3 VH антитела 131Н1 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 207: последовательность 1 CDR1 VK антитела 131Н1 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 208: последовательность 1 CDR2 VK антитела 131Н1 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 209: последовательность 1 CDR3 VK антитела 131Н1 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 210: последовательность 2 CDR1 VK антитела 131Н1 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 211: последовательность 2 CDR2 VK антитела 131Н1 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 212: последовательность 2 CDR3 VK антитела 131Н1 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 213: последовательность CDR1 VH антитела 132Н4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 214: последовательность CDR2 VH антитела 132Н4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 215: последовательность CDR3 VH антитела 132Н4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 216: последовательность CDR1 VK антитела 132Н4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 217: последовательность CDR2 VK антитела 132Н4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 218: последовательность CDR3 VK антитела 132Н4 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 219: последовательность CDR1 VH антитела 133А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 220: последовательность CDR2 VH антитела 133А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 221: последовательность CDR3 VH антитела 133А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 222: последовательность CDR1 VK антитела 133А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 223: последовательность CDR2 VK антитела 133А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 224: последовательность CDR3 VK антитела 133А6 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 225: последовательность CDR1 VH антитела 131В4-2 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 226: последовательность CDR2 VH антитела 131В4-2 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 227: последовательность CDR3 VH антитела 131В4-2 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 228: последовательность CDR1 VK антитела 131В4-2 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 229: последовательность CDR2 VK антитела 131В4-2 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 230: последовательность CDR3 VK антитела 131В4-2 согласно Хотиа

SEQ ID NO: 231: последовательность CDR1 VH антитела 107С6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 232: последовательность CDR2 VH антитела 107С6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 233: последовательность CDR3 VH антитела 107С6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 234: последовательность CDR1 VK антитела 107С6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 235: последовательность CDR2 VK антитела 107С6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 236: последовательность CDR3 VK антитела 107С6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 237: последовательность CDR1 VH антитела 108F8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 238: последовательность CDR2 VH антитела 108F8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 239: последовательность CDR3 VH антитела 108F8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 240: последовательность CDR1 VK антитела 108F8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 241: последовательность CDR2 VK антитела 108F8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 242: последовательность CDR3 VK антитела 108F8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 243: последовательность CDR1 VH антитела 109А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 244: последовательность CDR2 VH антитела 109А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 245: последовательность CDR3 VH антитела 109А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 246: последовательность CDR1 VK антитела 109А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 247: последовательность CDR2 VK антитела 109А6 согласно Кэботу

SEQ D NO 248: последовательность CDR3 VK антитела 109А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 249: последовательность CDR1 VH антитела 111A6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 250: последовательность CDR2 VH антитела 111A6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 251: последовательность CDR3 VH антитела 111A6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 252: последовательность 1 CDR1 VK антитела 111A6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 253: последовательность 1 CDR2 VK антитела 111A6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 254: последовательность 1 CDR3 VK антитела 111A6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 255: последовательность 2 CDR1 VK антитела 111A6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 256: последовательность 2 CDR2 VK антитела 111A6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 257: последовательность 2 CDR3 VK антитела 111A6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 258: последовательность 1 CDR1 VH антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 259: последовательность 1 CDR2 VH антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 260: последовательность 1 CDR3 VH антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 261: последовательность 2 CDR1 VH антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 262: последовательность 2 CDR2 VH антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 263: последовательность 2 CDR3 VH антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 264: последовательность 3 CDR1 VH антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 265: последовательность 3 CDR2 VH антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 266: последовательность 3 CDR3 VH антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 267: последовательность CDR1 VK антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 268: последовательность CDR2 VK антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 269: последовательность CDR3 VK антитела 131В4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 270: последовательность 1 CDR1 VH антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 271: последовательность 1 CDR2 VH антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 272: последовательность 1 CDR3 VH антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 273: последовательность 2 CDR1 VH антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 274: последовательность 2 CDR2 VH антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 275: последовательность 2 CDR3 VH антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 276: последовательность 3 CDR1 VH антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 277: последовательность 3 CDR2 VH антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 278: последовательность 3 CDR3 VH антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 279: последовательность CDR1 VK антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 280: последовательность CDR2 VK антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 281: последовательность CDR3 VK антитела 131Е8 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 282: последовательность CDR1 VH антитела 131Н1 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 283: последовательность CDR2 VH антитела 131Н1 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 284: последовательность CDR3 VH антитела 131Н1 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 285: последовательность 1 CDR1 VK антитела 131Н1 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 286: последовательность 1 CDR2 VK антитела 131Н1 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 287: последовательность 1 CDR3 VK антитела 131Н1 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 288: последовательность 2 CDR1 VK антитела 131Н1 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 289: последовательность 2 CDR2 VK антитела 131Н1 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 290: последовательность 2 CDR3 VK антитела 131Н1 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 291: последовательность CDR1 VH антитела 132Н4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 292: последовательность CDR2 VH антитела 132Н4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 293: последовательность CDR3 VH антитела 132Н4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 294: последовательность CDR1 VK антитела 132Н4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 295: последовательность CDR2 VK антитела 132Н4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 296: последовательность CDR3 VK антитела 132Н4 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 297: последовательность CDR1 VH антитела 133А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 298: последовательность CDR2 VH антитела 133А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 299: последовательность CDR3 VH антитела 133А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 300: последовательность CDR1 VK антитела 133А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 301: последовательность CDR2 VK антитела 133А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 302: последовательность CDR3 VK антитела 133А6 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 303: последовательность CDR1 VH антитела 131В4-2 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 304: последовательность CDR2 VH антитела 131В4-2 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 305: последовательность CDR3 VH антитела 131В4-2 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 306: последовательность CDR1 VK антитела 131В4-2 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 307: последовательность CDR2 VK антитела 131В4-2 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 308: последовательность CDR3 VK антитела 131В4-2 согласно Кэботу

SEQ ID NO: 309: CDR-сегмент антитела 107С6, последовательность CDR1 VH

SEQ ID NO: 310: CDR-сегмент антитела 107С6, последовательность CDR VH2

SEQ ID NO: 311: CDR-сегмент антитела 107С6, последовательность CDR VH3

SEQ ID NO: 312: CDR-сегмент антитела 107С6, последовательность CDR VK1

SEQ ID NO: 313: CDR-сегмент антитела 107С6, последовательность CDR VK2

SEQ ID NO: 314: CDR-сегмент антитела 107С6, последовательность CDR VK3

SEQ ID NO: 315: CDR-сегмент антитела 108F8, последовательность CDR VH1

SEQ ID NO: 316: CDR-сегмент антитела 108F8, последовательность CDR VH2

SEQ ID NO: 317: CDR-сегмент антитела 108F8, последовательность CDR VH3

SEQ ID NO: 318: CDR-сегмент антитела 108F8, последовательность CDR VK1

SEQ ID NO: 319: CDR-сегмент антитела 108F8, последовательность CDR VK2

SEQ ID NO: 320: CDR-сегмент антитела 108F8, последовательность CDR VK3

SEQ ID NO: 321: CDR-сегмент антитела 109А6, последовательность CDR VH1

SEQ ID NO: 322: CDR-сегмент антитела 109А6, последовательность CDR VH2

SEQ ID NO: 323: CDR-сегмент антитела 109А6, последовательность CDR VH3

SEQ ID NO: 324: CDR-сегмент антитела 109А6, последовательность CDR VK1

SEQ ID NO: 325: CDR-сегмент антитела 109А6, последовательность CDR VK2

SEQ ID NO: 326: CDR-сегмент антитела 109А6, последовательность CDR VK3

SEQ ID NO: 327: CDR-сегмент антитела 111А6, последовательность CDR VH1

SEQ ID NO: 328: CDR-сегмент антитела 111А6, последовательность CDR VH2

SEQ ID NO: 329: CDR-сегмент антитела 111А6, последовательность CDR VH3

SEQ ID NO: 330: CDR-сегмент антитела 111А6, последовательность 1 CDR VK1

SEQ ID NO: 331: CDR-сегмент антитела 111А6, последовательность 1 CDR VK2

SEQ ID NO: 332: CDR-сегмент антитела 111А6, последовательность 1 CDR VK3

SEQ ID NO: 333: CDR-сегмент антитела 111А6, последовательность 2 CDR VK1

SEQ ID NO: 334: CDR-сегмент антитела 111А6, последовательность 2 CDR VK2

SEQ ID NO: 335: CDR-сегмент антитела 111А6, последовательность 2 CDR VK3

SEQ ID NO: 336: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность 1 CDR VH1

SEQ ID NO: 337: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность 1 CDR VH2

SEQ ID NO: 338: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность 1 CDR VH3

SEQ ID NO: 339: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность 2 CDR VH1

SEQ ID NO: 340: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность 2 CDR VH2

SEQ ID NO: 341: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность 2 CDR VH3

SEQ ID NO: 342: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность 3 CDR VH1

SEQ ID NO: 343: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность 3 CDR VH2

SEQ ID NO: 344: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность 3 CDR VH3

SEQ ID NO: 345: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность CDR VK1

SEQ ID NO: 346: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность CDR VK2

SEQ ID NO: 347: CDR-сегмент антитела 131В4, последовательность CDR VK3

SEQ ID NO: 348: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность 1 CDR VH1

SEQ ID NO: 349: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность 1 CDR VH2

SEQ ID NO: 350: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность 1 CDR VH3

SEQ ID NO: 351: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность 2 CDR VH1

SEQ ID NO: 352: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность 2 CDR VH2

SEQ ID NO: 353: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность 2 CDR VH3

SEQ ID NO: 354: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность 3 CDR VH1

SEQ ID NO: 355: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность 3 CDR VH2

SEQ ID NO: 356: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность 3 CDR VH3

SEQ ID NO: 357: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность CDR VK1

SEQ ID NO: 358: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность CDR VK2

SEQ ID NO: 359: CDR-сегмент антитела 131Е8, последовательность CDR VK3

SEQ ID NO: 360: CDR-сегмент антитела 131Н1, последовательность CDR VH1

SEQ ID NO: 361: CDR-сегмент антитела 131Н1, последовательность CDR VH2

SEQ ID NO: 362: CDR-сегмент антитела 131Н1, последовательность CDR VH3

SEQ ID NO: 363: CDR-сегмент антитела 131Н1, последовательность 1 CDR VK1

SEQ ID NO: 364: CDR-сегмент антитела 131Н1, последовательность 1 CDR VK2

SEQ ID NO: 365: CDR-сегмент антитела 131Н1, последовательность 1 CDR VK3

SEQ ID NO: 366: CDR-сегмент антитела 131Н1, последовательность 2 CDR VK1

SEQ ID NO: 367: CDR-сегмент антитела 131Н1, последовательность 2 CDR VK2

SEQ ID NO: 368: CDR-сегмент антитела 131Н1, последовательность 2 CDR VK3

SEQ ID NO: 369: CDR-сегмент антитела 132Н4, последовательность CDR VH1

SEQ ID NO: 370: CDR-сегмент антитела 132Н4, последовательность CDR VH2

SEQ ID NO: 371: CDR-сегмент антитела 132Н4, последовательность CDR VH3

SEQ ID NO: 372: CDR-сегмент антитела 132Н4, последовательность CDR VK1

SEQ ID NO: 373: CDR-сегмент антитела 132Н4, последовательность CDR VK2

SEQ ID NO: 374: CDR-сегмент антитела 132Н4, последовательность CDR VK3

SEQ ID NO: 375: CDR-сегмент антитела 133А6, последовательность CDR VH1

SEQ ID NO: 376: CDR-сегмент антитела 133А6, последовательность CDR VH2

SEQ ID NO: 377: CDR-сегмент антитела 133А6, последовательность CDR VH3

SEQ ID NO: 378: CDR-сегмент антитела 133А6, последовательность CDR VK1

SEQ ID NO: 379: CDR-сегмент антитела 133А6, последовательность CDR VK2

SEQ ID NO: 380: CDR-сегмент антитела 133А6, последовательность CDR VK3

SEQ ID NO: 381: CDR-сегмент антитела 131В4-2, последовательность CDR VH1

SEQ ID NO: 382: CDR-сегмент антитела 131В4-2, последовательность CDR VH2

SEQ ID NO: 383: CDR-сегмент антитела 131В4-2, последовательность CDR VH3

SEQ ID NO: 384: CDR-сегмент антитела 131В4-2, последовательность CDR VK1

SEQ ID NO: 385: CDR-сегмент антитела 131В4-2, последовательность CDR VK2

SEQ ID NO: 386: CDR-сегмент антитела 131В4-2, последовательность CDR VK3

SEQ ID NO: 387: последовательность вариабельного домена VH антитела 131В4-2

SEQ ID NO: 388: аминокислотная последовательность изоформы b IL-18BP

SEQ ID NO: 389: аминокислотная последовательность изоформы с IL-18BP

SEQ ID NO: 390: аминокислотная последовательность изоформы d IL-18BP

Примеры

А. Обнаружение свободного IL-18 в сравнении с комплексом IL-18/IL-18BP

1. Обнаружение общего IL-18 в организме пациентов

Количественное определение человеческого IL-18 в организме пациентов осуществляют путем анализа с помощью ELISA, позволяющего обнаруживать общий IL-18 (как в свободной форме, так и в составе комплекса с IL-18BP). ELISA включает поступающие в продажу антитела (см. приведенную ниже таблицу 1). Наиболее распространенные анализы методом ELISA осуществляют с использованием пары антител к IL-18, которые были созданы Taniguchi с соавторами, 1997, и поступают в продажу от различных поставщиков, а именно, моноклонального мышиного антитела 125-2Н в качестве первичного/захватывающего антитела и моноклонального крысиного антитела 159-12В в качестве вторичного/идентифицирующего антитела.

2. Оценки уровней свободного IL-18

До настоящего времени не имелось публикаций об измерении уровней свободного IL-18. Оценки свободного IL-18 осуществляли путем расчета как описано у Novick и др., 2004 (см. ниже). Представлены данные о сравнении уровней IL-18 и IL-18BP у человека. В этих опытах исследователи применяли пару поступающих в продажу моноклональных антител к IL-18, 125-2Н и 159-12В, при этом антитело 125-2Н применяли для захвата и оно, как известно, связывается с комплексом IL-18/IL-18BP (Argiradi и др., 2009). Для расчета уровней свободного IL-18 в сыворотке пациента исследователи применяли закон действующих масс, предполагая, что связывание IL-18 антителами является обратимым. Расчет осуществляли следующим образом:

K_D=0,4нМ=([IL-18]×[IL-18BP])/[IL-18-IL18BP] или

[IL-18] в нМ=(0,4×[IL-18-IL18BP])/[IL-18BP],

где:

IL-18-IL-18BP обозначает комплекс

Константа диссоциации, рассчитанная согласно Kim и др., 2000, K_D=0,4 нМ.

Стехиометрическое соотношение в комплексе IL-18-IL-18BP равно 1:1

Концентрацию IL-18 определяют электрохемилюминесцентным методом

Концентрацию IL-18BP определяют с помощью ELISA.

Важно отметить, что авторы обнаружили большие вариации уровней свободного IL-18 по сравнению с общим IL-18 между пациентами, которые не отражают соотношения между IL-18 и IL-18BP. Важно отметить, что процитированных публикациях нет данных об указанном соотношении IL18/IL-18ВР. Кроме того, антитела к IL18 не обладают способностью различать свободный IL-18 и находящийся в составе комплекса IL-18/IL-18BP. И, наконец, как описано у Novick и др., 2001, антитела к IL-18BP, моноклональные антитела 582.10 и 657.27 соответственно, не позволяют обнаруживать IL-18BP в свободной форме, а позволяют обнаруживать только общий IL-18BP, поскольку, как было указано в публикациях, они не блокируют взаимодействие между IL-18ВР и IL-18. Следовательно, расчет свободного IL-18 с использованием концентрации IL-18BP является неточным. Обнадеживающим является, однако, то, что вариация данных свидетельствует о том, что обнаружение свободного IL-18 можно улучшать путем применения более пригодного анализа, включающего использованием антител, специфически нацеленных на область IL-18, которая связывается с IL-18BP.

3. Подтверждение того, что обычно применяемые поступающие в продажу антитела не обнаруживают свободный IL-18

Тестировали одиннадцать поступающих в продажу моноклональных антител к IL-18 в отношении их способности предупреждать какие-либо взаимодействия IL-18 с IL-18BP. Представленные ниже данные демонстрируют, что это не имеет место и что ни одно из протестированных антител не связывается с сайтом взаимодействия IL-18 с IL-18BP. Следовательно, обнаружение свободного IL-18 в образцах, полученных из организма человека, требует специфической конструкции и подходов, нацеленных, например, на сайт связывания IL-18/эпитоп для IL-18BP.

Тестировали обычно применяемые антитела 125-2Н и 159-12В в качестве как захватывающих, так и идентифицирующих антител (см. фиг. 2). Данные свидетельствуют о том, что оба антитела не распознают эпитоп IL-18 для IL-18BP и, следовательно, позволяют количественно оценивать только общий IL-18 (обе формы свободного и входящего в комплекс с IL-18BP).

Параллельно с антителами 125-2Н и 159-12G тестировали девять других поступающих в продажу моноклональных антител в отношении их способности обнаруживать свободный IL-18 в тех же условиях, которые указаны выше. Как описано выше, такое антитело должно представлять ценность с точки зрения обнаружения свободного IL-18 в биологических образцах. Перечень протестированных поступающих в продажу антител представлен в приведенной ниже таблице 2.

Полученные данные свидетельствуют о том, что ни одно из поступающих в продажу антител не обладало способностью отличать свободный IL-18 от IL-18, входящего в комплекс с IL-18BP.

4. Адаптация ELISA для обнаружения свободного IL-18

4.1 Захват свободного IL-18 с помощью IL-18BP

Лунки микропланшета сенсибилизировали взятым в соответствующем объеме соляным раствором фосфатного буфера, содержащим рекомбинантный человеческий IL-18BP (r-hIL-18BP), имеющий SEQ ID NO: 7 и содержащий менее 30% вариантов IL-18BP с N-концевой и/или С-концевой делецией. Описание r-hIL-18BP представлено ниже в разделе 6.6.1. Описание протокола очистки представлено в разделе 6.6.2. Планшеты инкубировали в течение определенного периода времени при 4°С и затем стабилизировали с использованием блокирующего буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин или другие соответствующие блокирующие агенты. После завершения реакции микропланшеты запечатывали и хранили при 4°С до осуществления обнаружения свободного IL-18. Микропланшеты можно также сушить в стабилизирующем растворе, что позволяет хранить их при комнатной температуре и затем восстанавливать путем гидратации, когда они потребуются для анализа.

Например, для конечного реакционного объема 100 мкл, сначала вносили 80 мкл конъюгата биотин/антитело. Образцы или биологические жидкости, содержащие свободный IL-18, тестировали с использованием сенсибилизированных IL-18BP микропланшетов. После этого вносят образец объемом 20 мкл, содержащий биологическую жидкость или стандарт в лунку микропланшета. Неразведенная или разведенная биологическая жидкость может представлять собой (но не ограничиваясь только ими) сыворотку, мочу, слезы, слюну, желчь, пот, выделяемые продукты или выдыхаемые продукты, мокроту, бронхоальвеолярную жидкость, секрет сальных желез, клеточные, железистые, слизистые или тканевые выделения, биопсию, гомогенизированную ткань. Концентрации стандарта свободного IL-18 находились в диапазоне от 4,2 пг/мл до 3000 пг/мл. Стандарт с различными концентрациями приготавливали с использованием поступающего в продажу рекомбинантного человеческого IL-18. Планшеты запечатывали и затем инкубировали при осторожном встряхивании для захвата свободного IL-18. Реакции давали проходить в течение соответствующего периода времени, составлявшего от нескольких минут до нескольких часов, при комнатной температуре, при 37°С или других температурах, которые не влияли на стабильность образцов и реагентов. Затем лунки микропланшета интенсивно промывали с использованием соответствующего буфера и затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл буферной проявляющей смеси. Проявляющая смесь содержала конъюгированный со стрептавидином фермент, такой как пероксидаза или щелочная фосфатаза. Лунки микропланшета запечатывали и давали пройти реакции в течение соответствующего периода времени, составлявшего от нескольких минут до нескольких часов, при комнатной температуре, при 37°С или других температурах, которые не влияли на стабильность образцов и реагентов. Затем осуществляли мониторинг результатов реакции с помощью ридера для микропланшетов при соответствующей нанометровой длине волны, измеряя абсорбцию или флуоресценцию полученного реагента.

4.2 Захват свободного IL-18 антителом к IL-18

Лунки микропланшета сенсибилизировали взятым в соответствующем объеме соляным раствором фосфатного буфера, содержащим антитело, предлагаемое в изобретении. Планшеты инкубировали в течение определенного периода времени при 4°С и затем стабилизировали с использованием блокирующего буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин или другие соответствующие блокирующие агенты. После завершения реакции микропланшеты запечатывали и хранили при 4°С до осуществления обнаружения свободного IL-18. Микропланшеты можно также сушить в стабилизирующем растворе, что позволяет хранить их при комнатной температуре и затем восстанавливать путем гидратации, когда они потребуются для анализа.

Например, для конечного реакционного объема 100 мкл, сначала вносили 80 мкл конъюгата биотин/антитело. Образцы или биологические жидкости, содержащие свободный IL-18, тестировали с использованием сенсибилизированных IL-18BP микропланшетов. После этого вносят образец объемом 20 мкл, содержащий биологическую жидкость или стандарт в лунку микропланшета. Неразведенная или разведенная биологическая жидкость может представлять собой (но не ограничиваясь только ими) сыворотку, мочу, слезы, слюну, желчь, пот, выделяемые продукты или выдыхаемые продукты, мокроту, бронхоальвеолярную жидкость, секрет сальных желез, клеточные, железистые, слизистые или тканевые выделения, биопсию, гомогенизированную ткань. Концентрации стандарта свободного IL-18 находились в диапазоне от 4,2 пг/мл до 3000 пг/мл. Стандарт с различными концентрациями приготавливали с использованием поступающего в продажу рекомбинантного человеческого IL-18. Планшеты запечатывали и затем инкубировали при осторожном встряхивании для захвата свободного IL-18. Реакции давали проходить в течение соответствующего периода времени, составлявшего от нескольких минут до нескольких часов, при комнатной температуре, при 37°С или других температурах, которые не влияли на стабильность образцов и реагентов. Затем лунки микропланшета интенсивно промывали с использованием соответствующего буфера и затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл буферной проявляющей смеси. Проявляющая смесь содержала конъюгированный со стрептавидином фермент, такой как пероксидаза или щелочная фосфатаза. Лунки микропланшета запечатывали и давали пройти реакции в течение соответствующего периода времени, составлявшего от нескольких минут до нескольких часов, при комнатной температуре, при 37°С или других температурах, которые не влияли на стабильность образцов и реагентов. Затем осуществляли мониторинг результатов реакции с помощью ридера для микропланшетов при соответствующей нанометровой длине волны, измеряя абсорбцию или флуоресценцию.

4.3 Титрование свободного IL-18 в зависимости от уровня IL-18BP

Постоянное количество рекомбинантного IL-18 титровали в зависимости от различных и строго определенных количеств IL-18BP для определения такого количества, при котором свободный IL-18 более не поддается обнаружению. В раствор ЗФР, содержащий 400 пг/мл IL-18, который был дополнен 5% БСА, впрыскивали IL-18BP в определенных количествах, составлявших от 0 до 10000 пг/мл. Молярные соотношения рассчитывали на основе соответствующих молекулярных масс IL-18 и IL-18BP. Обнаружение свободного IL-18 осуществляли с помощью описанного выше ELISA для IL-18 с использованием IL-18BP. Полученные данные, представленные на фиг. 1, демонстрируют, что обнаруживаемая концентрация 400 пг/мл IL-18 находилась на уровне обнаружения фона, когда концентрация IL-18BP была равна или превышала 6000 пг/мл, что соответствовало молярному соотношению IL-18BP/IL-18, в котором доля IL-18BP превышала долю IL-18 более чем в ~15 раз. В отличие от этого, когда молярное соотношение было меньше 15, свободный IL-18 легко поддавался обнаружению.

4.4 Скорректированный расчет константы диссоциации (K_D), характеризующий взаимодействие между человеческим IL-18 и IL-18BP

4.4.1 Расчет K_D методом титрования

Согласно опубликованным данным, величина K_D, полученная на основе измерений методом BIAcore, составляет 400 мМ (Kim и др., 2000⁸). Однако вследствие представленных выше результатов было пересмотрено определение K_D с использованием указанного выше подхода на основе ELISA. Осуществляли титрование 10 пМ IL-18 с использованием IL-18BP в возрастающих концентрациях (60 пМ - 3 нМ) либо в а) сыворотке здоровых добровольцев с истощенным эндогенным IL-18BP, либо в б) ЗФР, дополненном 5% БСА. ELISA для свободного IL-18 в дополнение к поступающим в продажу анализам для общего IL-18 и общего IL-18BP позволяет определять величину K_D в растворе, что должно лучше характеризовать аффинность IL-18 к связывающему его белку в общей воде организма, чем данные, полученные с помощью твердофазного метода BIAcore. Пример результатов представлен в таблице 3.

K_D рассчитывали на основе следующей формулы:

K_D=[свободный IL-18]×[свободный IL-18ВР]/[комплекс IL-18/IL-18BP]

[свободный IL-18BP]=[общий IL-18BP]-[свободный IL-18]

[комплекс IL-18/IL-18BP] = [общий IL-18] - [свободный IL-18]

Результат: D_D=50 пМ (сыворотка в качестве разбавителя); 35 пМ (5% БСА в качестве разбавителя)

Результаты титрования свидетельствуют о том, что величина K_D составляла 50 пМ в случае использования в качестве разбавителя сыворотки, и 35 пМ в случае использования в качестве разбавителя ЗФР, дополненного 5% БСА. В отличие от проведенных ранее оценок величины K_D, характеризующей взаимодействие между человеческим IL-18BP и IL-18, новая рассчитанная величина K_D, свидетельствует о том, что проведенные ранее оценки свободного IL-18, базирующиеся на величине K_D, составляющей 400 пМ, опубликованные Kim с соавторами, 2000, являются неточными.

4.4.2 Оценка величины K_D с помощью BIAcore

После получения представленных выше результатов определения K_D с помощью титрования при создании изобретения проводили анализ аффинности связывания IL-18BP с IL-18 с помощью более простой системы BIAcore, включающей связывание IL-18BP с чипом BIAcore и последующий анализ его аффинности к IL-18. Схема метода отлична от той, которую применяли Kim и др., 2000⁸, которые связывали IL-18 с чипом BIAcore с иммобилизованным моноклональным антителом и затем анализировали аффинность комплекса антитело-IL-18 к IL-18BP. Важным является то, что новая схема BIAcore позволяла получать данные, которые полностью соответствовали результатам, полученным путем указанного выше титрования, а именно, величины K_D находились в пределах от 20 до 30 пМ. Данные представлены в приведенной ниже таблице 4.

4.5 Титрование внесенного IL-18 в сыворотке или 5%-ном растворе БСА, содержащем IL-18BP

Человеческая сыворотка содержит значительные уровни эндогенного IL-18, а также IL-18, входящего в комплекс с IL-18BP, которые составляют несколько нг/мл и несколько пг/мл соответственно. И тот, и другой, поддаются обнаружению с использованием поступающих в продажу антител. Однако не имеется поступающего в продажу анализа, пригодного для обнаружения свободного IL-18. Для проверки пригодности указанной выше схемы ELISA для обнаружения свободного IL-18, при создании изобретения вносили рекомбинантный человеческий IL-18 в человеческую сыворотку для оценки уровней обнаружения. Для этого несколько нанограмм IL-18 вносили либо в сыворотку, содержащую эндогенный IL-18BP в концентрации 35 нг/мл, либо в раствор ЗФР, дополненный 5% БСА и 35 нг/мл IL-18BP. Осуществляли мониторинг полученного в результате этого свободного IL-18 с помощью описанной выше процедуры ELISA. Результаты представлены в приведенной ниже таблице 5.

4.6 Обнаружение свободного IL-18 в сыворотке пациентов, страдающих болезнью Стилла, развившейся у взрослых

После получения представленных результатов, в отличие от указанных выше случаев, для которых характерны сравнительно низкие уровни общего IL-18, при создании изобретения проводили анализ образцов, полученных от пациентов с болезнью Стилла, развившейся у взрослых, которая, как известно, характеризуется наличием повышенных уровней общего IL-18 в сыворотке (Kawashima и др., 2001, и Chen и др., 2004). Как описано у Kawashima и др., 2001, а также в других публикациях, повышенные уровни общего IL-18 в сыворотке коррелируют с симптомами активности болезни Стилла, развившейся у взрослых, такими как а) повышенная температура, артралгия, артрит, повреждение хрящей, б) повышенные уровни ферритина и в) повышенные уровни ферментов печени (LDH). С использованием описанной выше новой схемы ELISA при создании изобретения впервые были получены уровни свободного IL-18 у пациентов с болезнью Стилла, развившейся у взрослых (см. таблицу 6). Как и в случае других проанализованных показаний, рассчитанные уровни свободного IL-18 не соответствовали обнаруженным уровням свободного IL-18. Полученные данным свидетельствуют о том, что по меньшей мере 70% пациентов были позитивными в отношении свободного IL-18.

*: уровень, сравнимый с фоновым сигналом

**: уровень, сравнимый с нижним пределом обнаружения

- : не поддающийся обнаружению уровень, сравнимый с фоновым сигналом.

5. Заключение

Данные, представленные в обеих публикациях и полученные с использованием указанной выше схемы эксперимента, демонстрируют, что поступающие в продажу моноклональные антитела позволяют обнаруживать общий IL-18, но не позволяют обнаруживать свободный IL-18. Кроме того, подтверждено, что наиболее широко применяемые для количественной оценки IL-18 антитела, а именно 125-2Н и 159-12В, также позволяют обнаруживать общий IL-18.

Оценка свободного IL-18 с использованием закона действующих масс представляет собой интересный подход. Однако, получаемые при этом большие «усы», характеризующие погрешность, не позволяют применять его для мониторинга в клинических условиях. Кроме того, антитела к IL-18BP позволяют обнаруживать общий IL-18BP, а не его свободную форму. Следовательно, расчет свободного IL-18 с использованием концентрации IL-18BP является недостаточно точным.

Предложенный подход для количественного определения свободного IL-18 путем нацеливания на сайт связывания IL-18 с IL-18BP, по-видимому, является более пригодным и, как впервые продемонстрировано, он должен быть более точным, чем основанная на экстраполяции количественная оценка с использованием закона действующих масс. Кроме того, аффинность IL-18BP является более высокой, чем аффинность, приведенная у Kim и др., 2000, величина K_D находится в диапазоне, близком к 50 пМ, в сыворотке и составляет 20-30 пМ при определении с использованием новой схемы BIAcore.

6. Введение IL-18BP пациентам с болезнью Стилла взрослых с ранним началом (AoSD)

6.1 Цели

Первичная: Оценка безопасности применения r-hIL-18BP для пациентов с AoSD.

Вторичная: Оценка клинической эффективности и лабораторное/биологическое доказательство эффективности.

6.2 Количество пациентов

30 пациентов

6.3 Критерии включения

- Пациенты возрастом 18 лет и старше, у которых на основе выполнения критериев Ямагучи диагностирована AoSD (см. приложение 2) с активной фазой заболевания, независимо от продолжения указанного ниже разрешенного лечения.

- Пациентов следует рассматривать как пациентов с активной фазой заболевания, если у них выполнены по меньшей мере два из основных критериев Ямагучи (см. приложение 2) при скрининговом визите плюс присутствует по меньшей мере либо повышенная температура, либо повышенный уровень маркеров воспаления (CRP ≥ 10 мг/л и/или скорость осаждения эритроцитов ESR ≥ 28 мм/ч).

- пациенты, которых подвергали лечению с использованием NSAIDS, преднизона (по меньшей мере 5 мг/день) в течение ≥ 1 месяца и/или синтетических sDMARD (метотрексат в дозе по меньшей мере 10 мг/неделю) в течение ≥ 3 месяцев, но у которых не выявлен ответ на лечение или выявлен неполный ответ на лечение.

Женщины с детородным потенциалом, имеющие отрицательный результат теста на беременность при скрининге, визитах V3, V4, V5 и V6 и которые дали согласие на выполнение рекомендаций по высокоэффективному контролю рождаемости в течение периода исследования и вплоть до 1 месяца после окончания лечения. Методы контроля рождаемости, которые рассматриваются как высокоэффективные, представляют собой любые из следующих: комбинированная (включающая применение эстрогенных и прогестогенных препаратов) гормональная контрацепция, ассоциированная с ингибированием овуляции, гормональная контрацепция с применением только прогестогенных препаратов, ассоциированная с ингибированием овуляции, применение внутриматочного устройства (ВМУ), применение внутриматочной гормонвысвобождающей системы (ВМС), двусторонняя перевязка маточных труб, наличие стерилизованного партнера или половое воздержание.

В каждом случае задержки периода менструации (при превышении 1 - месячного периода между менструациями строго рекомендовано подтверждать отсутствие беременности. Эта рекомендация применима также для женщин с детородным потенциалом с нечастыми или нерегулярными менструальными циклами.

Касательно продолжительности контрацепции после окончания исследования, следует принимать во внимание, что медианная величина полужизни r-hIL-18BP составляет почти 40 ч, таким образом, промежуток времени, равный 5 периодам полужизни составляет 200 ч. На всякий случай рекомендовано продолжать осуществлять контрацепцию в течение 4 недель после окончания исследования.

- пациенты могут продолжать лечение с применением стабильных доз нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (NSAID), преднизона (стабильной дозы преднизона (составляющей по меньшей мере 5 мг/день)), и sDMARD в период лечения с использованием r-hIL-18BP (метотрексата в дозе, составляющей по меньшей мере 10 мг/неделю). Более конкретно, исходные применяемые для лечения дозы преднизона можно поддерживать или снижать (при улучшении состояния пациента), любая необходимость в увеличении дозы преднизона в процессе лечения должна рассматриваться как неудача лечения.

- способность понимать и готовность подписать информированное согласие.

- допустимо предшествующее лечение с использованием биологических препаратов, если выдержаны следующие периоды вымывания: одна неделя в случае анакирна, две недели в случае этанерцепта, 6 недель в случае адалимумаба, цертолизумаба, голимумаба, тоцилизумаба, абатацепта и 8 недель в случае инфликсимаба. Предшествующее лечение с использованием ритуксимаба требует 6-месячного периода вымывания и наличия нормального количества В-клеток, а предшествующее лечение с использованием канакинумаба требует 6-месячного периода вымывания.

6.4 Критерии исключения

- пациенты с первым эпизодом AoSD, подвергавшиеся в течение менее чем 1-месячного периода терапии с использованием преднизона или sDMARD.

- пациенты с активными или хроническими инфекциями (а именно, с туберкулезом (ТВ), HIV, HBV и HCV).

- пациенты, страдающие врожденными обусловленными иммунодефицитом заболеваниями.

- пациенты с количеством лейкоцитов ниже 2500 клеток/мм³

- пациенты с уровнем нейтрофилов ниже 1000 клеток/мм³

- индивидуумы, подвергающиеся в рассматриваемый период времени лечению с использованием биологических лекарственных средств

- женщины с детородным потенциалом, которые не желают применять адекватную защиту от беременности

- женщины с детородным потенциалом, которые не желают применять высокоэффективные методы контроля деторождения (см. указанные выше критерии включения) в течение периода вплоть до 1 месяца после окончания их участия в исследовании.

- неспособность понимать и неготовность подписать информированное согласие.

- наличие активного синдрома активации макрофагов (MAS)

- наличие любого острого или хронического угрожающего жизни заболевания,

такого как рак и необратимая недостаточность органа, такого как сердце, печень, легкое и почки (уровень креатинина выше 1,5-кратного верхнего предела нормального уровня).

- пациенты, подвергавшиеся лечению адалимумабом, цертолизумабом, голимумабом, тоцилизумабом и абатацептом в период до 6 недель, инфликсимаба в период до 8 недель, канакинумабом в период до 6 месяцев, этанерцептом в период до 2 недель или анакирна в период до 1 недели до начала лечения с использованием r-hIL-18BP, не должны быть включены в исследование. Пациенты, подвергавшиеся лечению ритуксимабом в период до 6 месяцев до начала лечения, и/или имеющие постоянные низкие уровни В-клеток, не пригодны для включения в исследование.

- индивидуум, от которого нельзя ожидать, что он будет выполнять процедуры, предусмотренные в исследовании

- индивидуум, участвующий в рассматриваемый период времени или участвовавший в течение последних 4 недель до начала настоящего исследования в другом клиническом исследовании.

- пациенты с анамнезом серьезных гиперчувствительных реакций.

6.5 Продолжительность исследования

После лечения в течение двенадцати (12) недель должен иметь место 4-недельный период последующего наблюдения для оценки безопасности. Обработка данных, статистическая обработка и подготовка отчета об исследовании должно требовать еще 4 месяца.

6.6 Исследуемое лекарственное средство

6.6.1 Описание

r-hIL-18BP представляет собой растворимый гликопротеин, состоящий из 164 аминокислот, который получают из клеток линии яичника китайского хомяка. Полипептидная цепь содержит 6 остатков цистеина, находящихся в положениях 21, 34, 56, 59, 101 и 120, которые теоретически могут образовывать три пары дисульфидных связей. Молекула содержит четыре потенциальных сайта N-гликозилирования на остатках аспарагина в положениях 49, 64, 73 и 117. Средняя молекулярная масса полноразмерного полипептидного фрагмента r-hIL-18 ВР, рассчитанная на основе аминокислотного состава, составляет примерно 17,6 кДа. Относительная молекулярная масса всей молекулы составляет примерно 50 кДа (включая гликаны).

6.6.2 Протокол очистки

Процесс очистки начинают с удаления клеток и клеточного дебриса из собранного супернатанта клеточной культуры путем центрифугирования, диафильтрации и переноса в резервуар для смешивания. Собранный продукт, содержащий негомогенный IL-18BP, концентрируют и подвергают диафильтрации в противотоке основного боратного буфера. После этого осуществляют захват IL-18BP на анионообменной смоле ТМАЕ Hi-Cap для удаления солей и питательных веществ, присутствующих в клеточной культуре. Осуществляют элюцию IL-18BP с использованием основного боратного буфера, дополненного NaCl.

Для гомогенизации IL-18BP осуществляют пять дополнительных стадий хроматографии, включая две стадии фильтрации в тангенциальном потоке и стадию удаления вирусов путем фильтрации, следующим образом:

- Препарат белка обрабатывают с помощью аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом на хелатирующей смоле Сефароза Fast Flow, активированной медью, для удаления белков клеток-хозяев. Белок элюируют с использованием ацетата аммония.

- Элюат, полученный после аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом, вносят в колонку для хроматографии гидрофобного взаимодействия с зарядовой связью с МЕР HyperCel для удаления других белков клеток-хозяев. Продукт элюируют с использованием щелочного фосфатного буфера, содержащего пропиленгликоль. Затем концентрируют элюат, содержащий IL-18ВР, путем диафильтрации.

- Полученный в результате диафильтрации ретентат разводят и доводят значение рН до кислого с помощью буфера, на основе 2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты (MES). После этого белок разделяют с помощью ионообменной хроматографии, загружая в колонку с СМ Сефароза Fast Flow, в режиме проскока для удаления оставшихся белков клеток-хозяев, которые были удержаны на колонке. Значение рН несвязанной фракции доводят до основного с помощью тетрабората натрия.

- Затем полученную в результате ионообменной хроматографии фракцию разделяют на колонке для ионообменной хроматографии гидрофобного взаимодействия с фенил-сефарозой Fast Flow для дополнительной очистки. Колонку предварительно уравновешивают с использованием боратного буфера, содержащего высокомолярный сульфат аммония, и продукт элюируют из колонки путем снижения концентрации сульфата аммония.

- Затем осуществляют стадию нанофильтрации для гарантии достаточного удаления вирусных частиц.

- В качестве конечной стадии очистки пермеат обрабатывают с помощью хроматографии с обращенной фазой на смоле Source 30 RPC. Элюцию продукта осуществляют с использованием градиента ацетонитрила, дополненного 0,1% ТФК.

- Элюат, содержащий гомогенизированный IL-18BP, концентрируют путем осуществления стадии ультрафильтрации/диафильтрации и в завершение фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм для целей хранения.

Все стадии очистки осуществляют при комнатной температуре.

Конечная полученная таким путем композиция практически свободна от имеющих N-концевую и/или С-концевую делецию вариантов IL-18BP и содержит от 2% до 8%, но менее чем 10% указанных вариантов.

6.6.3 Композиция

Препарат продукта, представляющего собой лекарственное средство (белок, связывающий рекомбинантный человеческий интерлейкин 18 (rhIL-18ВР), должен содержать 80 мг активной субстанции, и его получают в виде стерилизованного раствора для инъекций, содержащего хлорид натрия, 7 мг на флакон, первичный кислый фосфат натрия, примерно 1,0 мг на флакон, дигидрат динатрийфосфата, примерно 2,4 мг на флакон, гидроксид натрия и орто-фосфорную кислоту, 85%, для доведения рН до 7,0, воду для инъекций для доведения объема до 1 мл (см. приложение 3).

Стандартная единица для введения может представлять собой стеклянный флакон, содержащий в 1 мл инъекционного раствора 80 мг рекомбинантной молекулы.

6.7 Режим дозирования/путь введения

80 мг, 160 мг и 320 мг/подкожно/три раза в неделю (TIW).

Пациенты должны получать лекарственное средство три раза в неделю (TIW). Группе, которую обрабатывают дозой 80 мг, вводят 1 мл исследуемого продукта. Пациентам из группы, которую обрабатывают дозой 160 мг, вводят содержимое 2 флаконов, а пациентам из группы, которую обрабатывают дозой 320 мг, вводят содержимое 4 флаконов. Объем, равный 1 мл, отбирают из каждого флакона с использованием отдельного стерильного одноразового шприца вместимостью 2 мл. Перед осуществлением инъекции флаконы доводят до комнатной температуры (18-25°С), для чего вынимают их из холодильника за 30 мин до введения.

6.7.1 Выбранная доза лекарственного продукта:

Для рассматриваемого состояния не описано валидированных животных моделей. Для мышиной модели индуцируемого коллагеном артрита была определена активная доза r-hIL-18BP при внутрибрюшинном введении (i.p.), составляющая 1 мг/кг веса тела. Поскольку биодоступность при i.p.-пути составляет почти 100%, в то время как при s.с.-пути она составляет 55%, то для вводимой s.с.-путем дозы был рассчитан поправочный коэффициент, равный 0,55 и, таким образом, эффективная доза при s.с.-введении мышам должна составлять 1,82 мг/кг. Если учитывать разницу между константами диссоциации (Kd) для человека и мышей (0,16 нМ по сравнению с 0,40 нМ), то следует вводить дополнительный поправочный коэффициент, равный 2,67. В итоге, ожидаемая фармакологически активная доза для «гуманизированной мыши» при введении s.с.-путем r-hIL-18BP составляет примерно 4,85 мг/кг. Пересчет этой дозы на человека с использованием утвержденного коэффициента конверсии для мыши, равного 12,3 (согласно Руководству США, 2005, «Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers») дает эквивалентную дозу для человека 0,39 мг/кг или 27,3 мг для индивидуума весом 70 кг. Хотя руководство первоначально было написано для экстраполяции доз для животных на здоровых добровольцев, его принципы могут применяться также и для пациентов. С точки зрения клинической эффективности важно подчеркнуть, что дозы по 20 мг при приеме 3 раза в неделю были неэффективными для страдающих RA и Pso пациентов. Эти дозы, по-видимому, должны быть неэффективными также и для AoSD-пациентов, учитывая, что уровни IL-18 в крови при AoSD превышают уровни, известные для двух указанных выше состояний. Таким образом, на основе доклинических и проведенных ранее исследований r-hIL-18BP на людях и для того, чтобы избежать введения неэффективных доз AoSD-пациентам, находящимся на активной фазе заболевания, в настоящем клиническом опыте было предложено проводить исследование с повышением доз с использованием начальной дозы 80 мг TIW и ее ступенчатого повышения до 160 и 320 мг.

6.7.2 Путь введения:

Продукт поступал в виде раствора для введения s.с.-путем. Стеклянный флакон содержал раствор объемом 1 мл с 15%-ным переполнением, содержащий дозу 80 мг активного продукта. Пациентам в группах, обрабатываемых дозами по 160 мг и 320 мг, осуществляли s.с.-путем отдельные инъекции по 1 мл каждая: 2 инъекции по 1 мл в случае дозы 160 мг и 4 инъекции по 1 мл в случае дозы 320 мг. Для каждой инъекции применяли отдельный шприц.

Область s.с.-инъекции меняли, например, их осуществляли в наружную область ягодиц и в различные квадранты передней брюшной стенки. Отдельные инъекции, с помощью которых вводили одну дозу исследуемого лекарственного средства, вводили в одну и ту же область тела, но не в одно и то же самое место инъекции.

6.8 Методология

Пациентов разделяют на три группы, которым вводят дозы по 80 мг, 160 мг или 320 мг.

- Пациентам в группе 1 (n=10) вводят путем подкожной инъекции 80 мг RhIL-18BP TIW.

- После завершения трехнедельной обработки первых 5 пациентов Комитет по мониторингу данных и безопасности (Data Safety Monitoring Board, DSMB) должен осуществлять оценку безопасности. Если в группе имело место 2 или большее количество тяжелых или серьезных нежелательных явлений (SAE), то DSMB должен принять решение о том, прерывать или не прерывать опыт с использованием указанной дозы. DSMB должен дать разрешение на продолжение опыта с включением вплоть до десяти пациентов и на начало исследования на следующей группе, которую обрабатывают более высокой дозой.

- Пациентам в группе 2 (n=10) вводят путем подкожной инъекции 160 мг rhIL-18BP TIW. После завершения трехнедельной обработки первых 5 пациентов DSMB должен осуществлять оценку безопасности. Если в группе имело место 2 или большее количество SAE, то DSMB должен принять решение о том, прерывать или не прерывать опыт с использованием указанной дозы. DSMB должен дать разрешение на продолжение опыта с включением вплоть до десяти пациентов и на начало исследования на следующей группе, которую обрабатывают более высокой дозой.

- Пациентам в группе 3 (n=10) вводят путем подкожной инъекции 320 мг rhIL-18BP TIW. После завершения трехнедельной обработки первых 5 пациентов DSMB должен осуществлять оценку безопасности. Если в группе имело место 2 или большее количество серьезных или SAE, то DSMB должен принять решение о том, прерывать или не прерывать опыт с использованием указанной дозы. DSMB должен дать разрешение на продолжение опыта с включением вплоть до десяти пациентов.

Согласно графику визиты пациентов запланированы в неделю -2 (скрининговый визит и подписание ICF), неделю 0 (визит для включения в опыт, начало лечения), недели 1 (V2), 3 (V3), 6 (V4), 12 (V5) и 16 (V6). Лечение заканчивают на 12 неделе (V5) и осуществляют наблюдение за пациентами для оценки безопасности и переносимости еще в течение одного месяца (V6). Для пациентов, у которых не выявлен ответ на данную дозу после 3-недельного лечения и которых перевели на более высокую дозу, продолжительность лечения должна составлять 15 недель, после чего должен следовать 4-недельный период наблюдения для оценки безопасности.

6.9 Статистический анализ

Размер выборки определяли согласно стандартному методу, принятому для исследований очень редких заболеваний.

- Безопасность и переносимость лечения с использованием rhIL-18BP должны быть оценены на основе случаев и исходов АЕ, результатов стандартных клинических исследований и лабораторных тестов на безопасность.

- Случаи АЕ должны быть описаны для всех событий согласно системно-органной классификации (System Organ Class, SOC)) и предпочтительных терминов (РТ), изложенной в словаре MedDRA, по степени серьезности и связи с исследуемым лечением.

- Лабораторные параметры (гематологические и химические) должны быть обобщены для запланированных в протоколе визитов касательно фактических величин и изменений по сравнению с исходным уровнем. Кроме того, должны быть составлены таблицы сдвигов на основе сравнения величин на исходном уровне с конечными непропущенными величинами.

- Для обобщения демографических характеристик и характеристик на исходном уровне должна применяться описательная статистика. Отобранные переменные, полученные на 3 и 12 неделях, должны быть сравнены с исходными величинами с использованием парного t-критерия или знакового рангового критерия Уилкоксона. Основную оценку эффективности (ключевая вторичная конечная точка) проводят на 12 неделе.

- Для отобранных переменных должны быть рассчитаны средние значения ± С.К.О. и 95%-ные доверительные интервалы на основе всех доступных в соответствующий момент времени (на 3 или 12 неделе) экспериментальных данных.

- Дозу следует рассматривать как эффективную, если более чем у 50% пациентов выявлен положительный ответ на лечение.

- Должна быть проанализирована ассоциация между ответом пациентов на лечение и уровнями свободного IL-18 на исходном уровне.

- Фармакокинетическое исследование rhIL-18BP должно включать следующие конечные точки: должны быть определены время до достижения максимальной концентрации (tmax), максимальная концентрация (Cmax), концентрация в кровотоке, площадь под кривой в течение первых 24 ч после обработки (AUC 0-24) и время полувыведения в сыворотке. Фармакодинамическое исследование должно включать непосредственно конечные ФД-точки: уровни свободного и общего IL-18 и в качестве косвенных конечных ФД-точек: уровни CRP и IL-6 в зависимости от времени и обработки лекарственным средством.

7. Эффективность IL-18BP на мышиной модели обострения COPD

Цель исследования заключалась в определении воздействия IL-18BP, вводимого подкожным путем, для трех уровней доз, на индуцированное полинозиновой-полицитидиловой кислотой обострение индуцированного табачным дымом легочного воспаления у мышей линии C57BL/6J. В качестве референс-средства в исследовании применяли дексаметазон, вводимый в высокой дозе оральным путем.

7.1 Композиция IL-18BP

IL-18BP представлял собой r-hIL-18BP, который вводили в виде стерилизованного раствора для инъекций. Описание экспериментального лекарственного средства представлено выше в разделе 6.6.1. Описание протокола очистки представлено в разделе 6.6.2, а композиция раствора для инъекций представлена в разделе 6.6.3.

7.2 Общая методология: четырехдневная мышиная модель обострения/нарушения, вызванного табачным дымом

Мышам вводили либо наполнитель (ЗФР), либо IL-18BP. IL-18BP вводили подкожно 3 группам животных в дозе 1, 3 или 10 мг/кг соответственно за 2 ч до первой обработки табачным дымом в период со дня 1 до дня 4. Мышам вводили орально либо наполнитель, либо дексаметазон (10 мг/кг) за 1 ч до обработки, которую осуществляли ежедневно по два раза. Мышам вводили интраназально либо наполнитель, либо полинозиновую-полицитидиловую кислоту (2 мг/кг) за 2 ч до первой обработки воздухом или табачным дымом в день 4 для индукции обострения воспаления легких. Обработку табачным дымом осуществляли утром и во второй половине дня следующим образом: в день 1 в течение 15 мин, в день 2 в течение 25 мин, в день 3 в течение 30 мин и в день 4 в течение 30 мин.

Данные о группах животных и соответствующих режимах их обработки обобщены в таблице 6.1.

TS: табачный дым;

Veh: наполнитель;

Dex: дексаметазон,

р[I:С]: полинозиновая-полицитидиловая кислота.

После проведения указанных выше обработок животных умерщвляли под анестезией в день 5. После этого у животных брали образцы крови из подключичной артерии (плазма) и осуществляли бронхоальвеолярный лаваж с использованием 3×0,4 мл ЗФР для дальнейшего анализа клеточных и цитокиновых/медиаторов. Супернатанты бронхоальвеолярного лаважа хранили при -80 С для анализа цитокинов/медиаторов. Клетки, выделенные из BALF, подсчитывали с использованием счетчика для клеток Sysmex. И, наконец, проводили статистический анализ собранных данных с использованием t-критерия Стьюдента и дисперсионный анализ (применяли критерий Сидака в том случае, если данные удовлетворяли критерию нормального распределения, и критерий Уоллиса, если данные не удовлетворяли критерию нормального распределения).

7.3 Подтверждение активации пути IL-18 на четырехдневной мышиной модели обострения воспаления, индуцированного табачным дымом

Анализировали IL-18 в BAL мышей с использованием поступающего в продажу ELISA для подтверждения пригодности мышиной модели для изучения активации пути IL-18. Полученные данные свидетельствуют о выраженной индукции IL-18 в пространстве легочных путей (см. фиг. 5). IL-18 поддавался обнаружению в контроле (обработка только воздухом). Важно отметить, что IL-18 экспрессировался при обработке дымом, но не индуцировался в существенных значимых количествах при обработке только поли[I:С] (ниже нижнего предела обнаружения). В отличие от этого, как и ожидалось, комбинация дыма и поли[I:С] вызывала значительно более высокие уровни IL-18 в BAL, чем только дым или только поли [I:С].

7.4 Ослабление обострения воспаления с помощью IL-18BP на мышиной модели обострения воспаления, индуцированного табачным дымом

7.4.1 Ингибирование общей клеточной инфильтрации и обострения воспаления в пространстве легочных путей с помощью IL-18BP

У мышей, обработанных IL-18BP было выявлено значительное ослабление общей клеточной инфильтрации в легкие, обусловленной индукцией обострения воспаления. Для доз 3 и 10 мг/кг установлена статистически значимая эффективность по сравнению с применяемым в качестве положительного контроля дексаметазоном (см. фиг. 5). Важно отметить, что дексаметазон не обладал эффективностью в дозах 3 мг/кг на мышиной модели (данные не представлены), это свидетельствует о том, что высокая доза дексаметазона, составляющая 10 мг/кг, потенциально может индуцировать апоптоз определенных типов клеток, таких как макрофаги, эозинофилы и лимфоциты (данные не представлены). Сходные результаты были получены при использовании рофлумиласта [3-(циклопропилметокси)-N-(3,5-дихлорпиридин-4-ил)-4-(дифторметокси)бензамид] на мышиной модели, в этом случае не было выявлено признака ингибирования клеточной инфильтрации при использовании дозы 2,5 мг/кг (данные не представлены). На фиг. 6 продемонстрирована выраженная и статистически значимая эффективность IL-18BP при его применении в дозе 10 мг/кг в отношении ингибирования обострения воспаления на рассматриваемой мышиной модели.

7.4.2 Ингибирование инфильтрации нейтрофилов в пространство легочных путей с помощью IL-18BP

IL-18BP ингибировал инфильтрацию нейтрофилов в легкие с обострением воспаления индуцированного табачным дымом. Для доз 3 и 10 мг/кг установлена статистически значимая эффективность по сравнению с применяемым в качестве положительного контроля дексаметазоном (см. фиг. 7). Для рассматриваемой мышиной модели доза IL-18BP, составлявшая 10 мг/кг, по-видимому, обладала наиболее высокой статистически подтвержденной эффективностью (см. фиг. 8).

7.4.3 Ингибирование пути колониестимулирующего фактора гранулоцитов (G-CSF) в пространстве легочных путей с помощью IL-18BP

G-CSF представляет собой хорошо известный цитокин, играющий ключевую роль в стимулировании выживаемости, пролиферации, дифференцировки и функции предшественников нейтрофилов и зрелых нейтрофилов. Следовательно, ослабление пути G-CSF, индуцированное дымом-р[I:С], является важным фактором, демонстрирующим воздействие IL-18BP на рекрутмент нейтрофилов в пространство мышиных легочных путей. Мониторинг присутствия G-CSF в BALF осуществляли с использованием поступающего в продажу набора ELISA. На фиг. 9 продемонстрировано, что введение IL-18BP снижало высвобождение G-CSF в легочных путях, подтверждая тем самым Ингибирование инфильтрации нейтрофилов. Три протестированные на мышиной модели дозы IL-18BP оказывали статистически значимое воздействие.

7.4.4 Безопасность IL-18BP: Воздействие на потерю веса на мышиной модели обострения воспаления, индуцированного табачным дымом

Введение IL-18BP, по-видимому, должно хорошо переноситься, как следует из данных, полученных на мышиной модели обострения воспаления, индуцированного табачным дымом. Например, IL-18BP уменьшал потерю веса, хотя этот эффект не был статистически значимым по данным анализа как с использованием t-критерия Стьюдента, так и дисперсионного анализа (см. фиг. 10). Подавляющее большинство мышей, которым вводили IL-18BP в дозах 3 и 10 мг/кг, теряли 6-7% веса соответственно в отличие от контрольных животных, подвергавшихся воздействию табачного дыма и p[I:С], которые теряли примерно 9%. Таким образом, данные об уменьшении потери веса свидетельствуют о том, что IL-18BP не приводит к дополнительному стрессу на животной модели.

Важно отметить, что мыши, которым вводили только p[I:C], не теряли вес в отличие от мышей, которых обрабатывали комбинацией p[I:C] и табачного дыма [см. фиг. 8, обработка 3) и 4)].

8. Создание моноклонального антитела к IL-18 8.1 Иммунизация мышей и скрининг моноклональных антител Мышей вакцинировали против человеческого интерлейкина-18 с использованием технологии, позволяющей осуществлять иммунизацию правильно уложенными белками. Перед осуществлением иммунизации отбирали генетически модифицированных мышей, у которых главные комплексы гистосовместимости предположительно были чувствительными к IL-18BP, связывающемуся с находящимися на клеточной поверхности эпитопами IL-18. После иммунизации выделяли В-клетки из селезенки и осуществляли гибридизацию согласно стандартной технологии получения гибридом. Гибридомы вносили на микропланшеты и затем тестировали в отношении экспрессии моноклональных антител к IL-18, нацеленных на эпитопы IL-18, содержащиеся в сайте связывания IL-18BP. Скрининг проводили, осуществляя 3 последовательные стадии отбора:

Первая стадия. Предпринимали попытку осуществления положительного скрининга антител с использованием IL-18, присоединенного к гранулам Luminex, выявляя клетки, экспрессирующие моноклональные антитела к IL-18.

Вторая стадия. Возможные антитела, нацеленные на IL-18, присутствующий на сайте связывания IL-18BP, подвергали повторному скринингу в условиях конкуренции с IL-18BP, но не со слияниями IL-18BP с Fc-доменами антитела или слияниями другого типа, для исключения ложно-положительных антител-кандидатов, обусловленных стерической помехой, создаваемой слитым пептидом. Для этого моноклональные антитела связывали с гранулами Luminex, несущими IL-18. Затем комплекс подвергали воздействию биотинилированного IL-18BP для того, чтобы выявить интерференцию с идентифицированными ранее антителами к IL-18 (см. таблицу 7, колонку №2). Второй скрининг выявил более 300 положительных антител-кандидатов (см. таблицу 7, колонку №3). Количество положительных кандидатов оказалось неожиданно большим, что свидетельствовало об очень хорошей иммунизации мышей к области эпитопа-мишени. Однако уровни ингибирования оказались недостаточными вследствие присутствия сниженных, но все еще присутствующих флуоресцентных сигналов, свидетельствующих о связывании IL-18BP с входящим в комплекс антителом к IL-18. Тем не менее, важным являлось то, что указанный стандартный метод скрининга, опубликованный в литературе, не учитывает возможную стерическую помеху, обусловленную крупной молекулой антитела (примерно 160 кДа), для намного меньшей молекулы IL-18BP (примерно 18 кДа, только пептид).

Третья стадия. Третью программу скрининга предпринимали с использованием гранул Luminex, связанных с IL-18BP и затем включенных в комплекс с интерлейкином-18, что гарантировало презентацию правильно уложенного рекомбинантного IL-18 положительным антителам-кандидатам. Реализованный скрининг оказался намного более избирательным, поскольку большинство из указанных выше антител были все еще связаны с гранулами Luminex-IL-18, это свидетельствовало о том, что их выявленное ранее ингибирующее действие в отношении IL-18BP было обусловлено стерической помехой. И, наконец, было отобрано в общей сложности 12 антител, которые рассматривались как нацеленные на IL-18, присутствующий на белке IL-18BP, поскольку они давали очень низкий флуоресцентный сигнал после связывания с IL-18 в присутствии IL-18BP, а именно, клоны №№107С6, 108F8, 109А6, 111А6, 129С3, 131В4, 131Е8, 131Н1, 132С12, 132Н4, 133А6 и 134В2 (см. таблицу 7, колонку №4, отобранные клоны характеризовались более чем 500-кратной ингибирующей способностью по сравнению с теми, которые представлены в колонке №2). Сравнение положительных антител с набором отрицательных антител представлено в приведенной ниже таблице 7.

Полученные в результате третьей стадии скрининга данные (таблица 7, колонка №4) позволили провести в дальнейшем секвенирование мРНК и провести разведение клонов для обогащения клеток, содержащих положительные моноклональные антитела, исходя из клонов №№107С6, 108F8, 109А6, 111А6, 129С3, 131В4, 131В4-2, 131Е8, 131Н1, 132С12, 132Н4, 133А6 и 134В2. Соответствующие величины KD для каждого моноклонального антитела рассчитывали на основе величин ЕС₅₀, полученных путем титрования антител с присутствующим в определенной молярности IL-18, с использованием закона действующих масс (см. выше). Подтверждали, что все указанные моноклональные антитела связывались с IL-18 в сайте связывания IL-18BP.

Ссылки

Argiriadi М.А., Xiang Т., Wu С., Ghayur Т. и Borhani D.W., Unusual water-mediated antigenic recognition of the proinflammatory cytikine interleukin-18, J Biol Chem; 284(36), 2009, cc. 24478-24489.

Azoulay E., Eddahibi S., Marcos E., Levame M., Harf A., Schlemmer В., Adnot S. и Delclaux C., Granulocyte colony-stimulating factor enhances alpha-naphthylthiourea-induced pulmonary hypertension, J Appl Physiol; 94, 2003, cc. 2027-2033.

Baron R.M, Choi A.J.S., Owen C.A. и Choi A.M.K., Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential и pitfalls. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2012, cc. L485-L497.

Chen D.Y., Lan J.L., Lin F.J. и Hsieh T.Y., Proinflammatory cytokine profiles in sera и pathological tissues of patients with active untreated adult onset Still's disease, J Rheumatol, 31, 2004, cc. 2189-2198.

Chen D.Y., Lan J.L., Lin F.J., Hsieh T.Y. и Wen M.C., Predominance of Th1 cytokine in peripheral blood и pathological tissues of patients with active untreated adult onset Still's disease. Ann Rheum Dis, 63(10), 2004, cc. 1300-1306.

Cunningham R.E., Tissue disaggregation. Methods Mol Biol, 34, 1994, cc. 225-228.

Daley E., Emson C., Guignabert C., de Waal Malefyt R., Louten J., Kurup V.P., Hogaboam C., Taraseviciene-Stewart L., Voelkel N.F., Rabinovitch M. и др. Pulmonaty arterial remodeling induced by a Th2 immune response, J Exp Med; 205? 2008, cc. 361-372.

Elias J.A., Kang M.J., Crothers K. и др., Mechanistic heterogeneity in chronic obstructive pulmonary disease: insights from transgenic mice, Proc Am Thorac Soc, 2006, cc. 494-498.

Eltom S., Stevenson C.S. и Rastrick J., P2X7 Receptor и Caspase - 1 Activation Are Central to Airway inflammation Observed after Exposure to Tobacco Smoke PLoS ONE; 6(9), 2011, e24097.

Hackett B.P., Shimizu N. и Gitlin J.D., Clara cell secretory protein gene expression in bronchiolar epithelium. Am J Physiol; 262, 1992, cc. L399-L404.

Halbower A.C., Mason R.J., Abman S.H. и Tuder R.M., Agarose infiltration improves morphology of cryostat sections of lung. Lab Invest; 71, 1994, cc. 149-153.

Hautamaki R.D., Kobayashi D.K., Senior R.M. и Shapiro S.D., Requirement for macrophage elastase for cigarette smoke-induced emphysema in mice. Science, 277, 1997, cc. 2002-2004.

Hoshino Т., Kawase Y., Okamoto M. и др., IL-18-transgenic mice: in vivo evidence of a broad role for IL-18 in modulating immune function. J Immunol; 2001, cc. 7014-7018.

Hoshino Т., Kato S., Oka N. и др., Pulmonary inflammation and emphysema: role of the cytokines IL-18 and IL-13, Am J Respir Crit Care Med, 2007, cc. 49-62.

Helmut Fenner, Targeting IL-18 in Chronic Obstructive Pulmonary disease: Background и rationale, конфиденциальное сообщение, 22 марта 2013 г., с. 19.

Hou S., Li В., Wang L., Qian W., Zhang D., Hong X., Wang H., Guo Y., "Humanization of an anti-CD34 monoclonal antibody by complementarity-determining region grafting based on computer-assisted molecular modeling". J Biochem 144 (1). июль 2008 г., cc. 115-120.

Imaoka H., Hoshino Т., Takei S., Kinoshita Т. и др., Interleukin-18 production and pulmonary function in COPD. Eur Respir J; 2008, cc. 287-297.

Jaatinen Т., Laine J., Isolation of mononuclear cells from human cord blood by Ficoll-Paque density gradient. Curr Protoc Stem Cell Biol; глава 2: Unit 2A.1, 2007.

Kang M.J., Lee C.G., Lee J.Y., Dela Cruz C.S., Chen Z.J., Enelow R., Elias J.A., Cigarette smoke selectively enhances viral PAMP- и virus-induced pulmonary innate immune и remodeling responses in mice. J Clin Invest; 118, 2008, cc. 2771-2784.

Kang M.J., Homer R.J., Gallo А. и др. IL-18 is induced и IL-18 receptor alpha plays a critical role in the pathogenesis of cigarette smoke-induced pulmonary emphysema and inflammation. J Immunol 2007, cc. 1948-1959.

Kang M.J., Choi J.M., Kim B.H. и др. IL-18 induces emphysema and airway and vascular remodelling via IFNγ, IL-17A, и IL-13. Am J Respir Crit Care Med 2012, cc. 1205-1217.

Kashmiri S.V., De Pascalis R., Gonzales N.R., Schlom J., "SDR grafting - a new approach to antibody humanization". Methods 36 (1), май 2005 г., cc. 25-34.

Kawashima M. и др. Levels of interleukin-18 и its binding inhibitors in the blood circulation of patients with adult-onset Still's disease. Arthritis Rheum; 44(3), 2001, cc. 550-560.

Kim S.H. и др., Structural requirements of six naturally occurring isoforms of the IL-18 binding protein to inhibit IL-18. Proc Natl Acad Sci USA; 97(3), 2000, cc. 1190-1195.

Kratzer A., Salys J., Nold-Petry E.I. и др., Role of IL-18 in second hand smoke-induced emphysema. Am J Respir Cell Mol Biol; 48(6), 2013, cc. 725-732.

Lee C.G., Link H., Baluk P., Homer R.J., Chapoval S., Bhandari V., Kang M.J., Cohn L., Kim Y.K., McDonald D.M., и др. Vascular endothelial growth factor (VEGF) induces remodeling и enhances TH2- mediated sensitization и inflammation in the lung. Nat Med; 10, 2004, cc. 1095-1103.

Lee C.G., Hartl D., Lee G.R., Koller В., Matsuura H., Da Silva C.A., Sohn M.H., Cohn L., Homer R.J., Kozhich А.А. и др., Role of breast regression protein 39 (BRP-39)/chitinase 3-like-1 in Th2 и IL-13-induced tissue responses и apoptosis. J Exp Med; 206, 2009, cc. 1149-1166.

Liu J/ и др., Requirement for tumor necrosis factor-receptor 2 in alveolar chemokine expression depends upon the form of the ligand. Am J Respir Cell Mol Biol; 33, 2005, cc. 463-469.

Londhe V.A., Maisonet T.M., Lopez В., Jeng J.M., Li C., Minoo P., A subset of epithelial cells with CCSP promoter activity participates in alveolar development. Am J Respir Cell Mol Biol; 44, 2011, cc. 804-812.

Loza M.J., Watt R., Baribaud F., Barnathan E.S. и Rennard S.I., Systemic inflammatory profile и response to anti-tumor necrosis factor therapy in chronic obstructive pulmonary disease. Respir Res; 13, 2012, с. 12.

Ма В., Kang M.J., Lee C.G., Chapoval S., Liu W., Chen Q., Coyle A.J., Lora J.M., Picarella D., Homer R.J. и Elias J.A., Role of CCR5 in IFN-γ-induced и cigarette smoke-induced emphysema, J Clin Invest; 115, 2005, cc. 3460-3472.

Nakajima Т/ и Owen С., Interleukin-18: The Master Regulator Driving Destructive и Remodeling Processes in the Lungs of Patients with Chronic Obstructive Pulmonary Disease?, Am J Respir Crit Care Med 2012, cc. 1137-1138.

Novick D. и др., A novel IL-18BP ELISA shows elevated serum IL-18BP in sepsis и extensive decrease of free IL-18. Cytokine; 14, 2001, cc. 334-342.

Novick D. и др., High circulating levels of free interleukin-18 in patients with active SLE in the presence of elevated levels of interleukin-18 binding protein. J Autoimmun; 34, 2010, cc. 121-126.

Park M.C., Park Y.B. и Lee S.K., Elevated 2010 levels correlated with disease activity in systemic lupus erythematosus. Clin Rheumatol; 23, 2004, cc. 225-229.

Petersen A.M.W., Penkowa M. и Iversen M., Elevated Levels of IL-18 in Plasma и Skeletal Muscle in Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Lung 2007, cc. 161-171.

Queen С., Schneider W.P., Selick H.E., Payne P.W., Landolfi N.F., Duncan J.F., Avdalovic N.M., Levitt M., Junghans R.P., Waldmann T.A., "A humanized antibody that binds to the interleukin 2 receptor.". Proc Nati Acad Sci U S A. 86 (24), декабрь 1989 гю, cc. 10029-10033.

Rastrick J.M.D., Stevenson C.S., Eltom S., Grace M., Davies M. и др., Cigarette Smoke Induced Airway Inflammation Is Independent of NF-κВ Signalling. PLoS ONE; 8(1), 2013, e54128.

Ray P., Tang W., Wang P., Homer R., Kuhn C. III, Flavell R.A. и Elias J.A., Regulated overexpression of interleukin 11 in the lung: use to dissociate development-dependent and - independent phenotypes. J Clin Invest; 100, 1997, cc. 2501-2511.

Reed L.J. и Muench H., A simple method of estimating 50% endpoints. Am J Hyg; 27, 1938, cc. 493-497.

Riechmann L., dark M., Waldmann H., Winter G., "Reshaping human antibodies for therapy". Nature 332 (6162), 1988, cc. 332-323.

Rovina N., Dima E. и Gerassimou C., Interleukin-18 in induced sputum: Association with lung function in chronic obstructive pulmonary disease. Respiratory Medicine 2009, cc. 1056-1062.

Shapiro D.S., Transgenic и gene-targeted mice as models for chronic obstructive pulmonary disease. Eur J Respir 2007, cc. 375-378.

Taniguchi M. и др. Characterization of anti-human interleukin-18 (IL-18)/interferon-gamma-inducing factor (IGIF) monoclonal antibodies and their application in the measurement of human IL-18 by ELISA. J Immunol Methods; 206, 1997, cc. 107-113.

Wang Z., Zheng, Zhu T.Z., Homer R.J., Riese R.J., Chapman H.A., Shapiro S.D. и Elias J.A., Interferon γ induction of pulmonary emphysema in the adult murine lung. J Exp Med; 192, 2000, cc. 1587-1600.

Wright J.L., Cosio M. и Churg A., Animal models of chronic obstructive disease. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2008, cc. L1-L15.

Wong C.K., Li E.K., Ho C.Y. и Lam C.W., Elevation of plasma interleukin-18 concentration is correlated with disease activity in sistemic lupus erythematosus. Rheumatology (Oxford); 39, 2000, cc. 1078-1081.

Zhang J., Dong Z., Zhou R., Luo D., Wei H. и Tian Z., Isolation of lymphocytes и their innate immune characterizations from liver, intestine, lung и uterus. Cell Mol Immunol; 2, 2005, cc. 271-280.

Zheng Т., Zhu Z., Wang Z., Homer R.J., Ma В., Riese R., Chapman H., Shapiro S.D. и Elias J.A., Inducible targeting of IL-13 to the adult lung causes matrix metalloproteinase- и cathepsin-dependent emphysema. J Clin Invest; 106, 2000, cc. 1081-1093.

Zheng Т. и др., Role of cathepsin S-dependent epithelial cell apoptosis in IFN-gamma-induced alveolar remodeling and pulmonary emphysema. J Immunol; 174, 2005, cc. 8106-8115.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> AБ2 БИО СА

<120> IL-18-связывающие белок (IL-18BP) и антитела при воспалительных

заболеваниях

<130> W1568 PCT/A BS

<150> EP15 18 6626.6

<151> 2015-09-24

<150> EP15 15 8781.3

<151> 2015-03-12

<150> EP15 15 7742.6

<151> 2015-03-05

<160> 390

<170> BiSSAP 1.3

<210> 1

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Эпитоп

<400> 1

Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn

1 5 10

<210> 2

<211> 22

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Эпитоп

<400> 2

Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val

1 5 10 15

Thr Thr Ile Ser Val Lys

20

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Эпитоп

<400> 3

Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys Ser Asp Ile Ile

1 5 10 15

Phe

<210> 4

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Эпитоп

<400> 4

Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser

1 5

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Эпитоп

<400> 5

Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala

1 5 10

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Эпитоп

<400> 6

Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys

1 5

<210> 7

<211> 164

<212> PRT

<213> Человеческая

<220>

<223> Изоформа a связывающего человеческий интерлейкин-18 белка

<400> 7

Thr Pro Val Ser Gln Thr Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ser Val Arg Ser

1 5 10 15

Thr Lys Asp Pro Cys Pro Ser Gln Pro Pro Val Phe Pro Ala Ala Lys

20 25 30

Gln Cys Pro Ala Leu Glu Val Thr Trp Pro Glu Val Glu Val Pro Leu

35 40 45

Asn Gly Thr Leu Ser Leu Ser Cys Val Ala Cys Ser Arg Phe Pro Asn

50 55 60

Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Leu Gly Asn Gly Ser Phe Ile Glu His Leu

65 70 75 80

Pro Gly Arg Leu Trp Glu Gly Ser Thr Ser Arg Glu Arg Gly Ser Thr

85 90 95

Gly Thr Gln Leu Cys Lys Ala Leu Val Leu Glu Gln Leu Thr Pro Ala

100 105 110

Leu His Ser Thr Asn Phe Ser Cys Val Leu Val Asp Pro Glu Gln Val

115 120 125

Val Gln Arg His Val Val Leu Ala Gln Leu Trp Ala Gly Leu Arg Ala

130 135 140

Thr Leu Pro Pro Thr Gln Glu Ala Leu Pro Ser Ser His Ser Ser Pro

145 150 155 160

Gln Gln Gln Gly

<210> 8

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкерная последовательность

<400> 8

Glu Phe Gly Ala Gly Leu Val Leu Gly Gly Gln Phe Met

1 5 10

<210> 9

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VH антитела 107C6

<400> 9

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ala Thr Ala Phe

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 10

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VK антитела 107C6

<400> 10

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Gly Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln

85 90 95

Ser Tyr Asn Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 11

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VH антитела 108F8

<400> 11

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Ser Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ala Thr Ala Phe

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 12

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VK антитела 108F8

<400> 12

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Gly Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln

85 90 95

Ser Tyr Asn Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 13

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VH антитела 109A6

<400> 13

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Ile Gln Arg Pro Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Gly Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Ile His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ala

115

<210> 14

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VK антитела 109A6

<400> 14

Asp Val Val Met Thr Gln Val Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 15

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VH антитела 111A6

<400> 15

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Ile Gln Arg Pro Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Gly Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Ile His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ala

115

<210> 16

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 1 вариабельного домена VK антитела 111A6

<400> 16

Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Arg Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp

35 40 45

Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu

65 70 75 80

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 17

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 2 вариабельного домена VK антитела 111A6

<400> 17

Asp Val Val Met Thr Gln Val Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 18

<211> 115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VH антитела 131B4

<400> 18

Glu Val Gln Val Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Gly Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ala

115

<210> 19

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VK антител 131B4 и 131B4-2

<400> 19

Asp Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Thr Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asp Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Met Ile

65 70 75 80

Thr Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys

100 105 110

<210> 20

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 1 вариабельного домена VH антитела 131E8

<400> 20

Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Arg Pro Gly Pro Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Pro Asn Tyr

20 25 30

Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asn Phe Tyr Ser Lys Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 21

<211> 113

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Antibody 131E8 Последовательность вариабельного домена VH антитела2

<400> 21

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Val Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asn Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 22

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VK антитела 131E8

<400> 22

Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 23

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VH антитела 132H4

<400> 23

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Asn Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ala Asn Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Tyr Phe Asn His Phe Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 24

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VK антитела 132H4

<400> 24

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Asn Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 25

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VH антитела 133A6

<400> 25

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Thr Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Tyr Ser Asn Tyr Phe Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Glu

115 120

<210> 26

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность вариабельного домена VK антитела 133A6

<400> 26

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 27

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VH антитела 107C6

<400> 27

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly

1 5

<210> 28

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VH антитела 107C6

<400> 28

Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro

1 5

<210> 29

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VH антитела 107C6

<400> 29

Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 30

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VK антитела 107C6

<400> 30

Gln Ser Leu Leu Asp Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr

1 5 10

<210> 31

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VK антитела 107C6

<400> 31

Trp Ala Ser

1

<210> 32

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VK антитела 107C6

<400> 32

Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr

1 5

<210> 33

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VH антитела 108F8

<400> 33

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly

1 5

<210> 34

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VH антитела 108F8

<400> 34

Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro

1 5

<210> 35

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VH антитела 108F8

<400> 35

Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 36

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VK антитела 108F8

<400> 36

Gln Ser Leu Leu Asp Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr

1 5 10

<210> 37

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VK антитела 108F8

<400> 37

Trp Ala Ser

1

<210> 38

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VK антитела 108F8

<400> 38

Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr

1 5

<210> 39

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VH антитела 109A6

<400> 39

Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr

1 5

<210> 40

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VH антитела 109A6

<400> 40

Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr

1 5

<210> 41

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VH антитела 109A6

<400> 41

Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr

1 5

<210> 42

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VK антитела 109A6

<400> 42

Gln Arg Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 43

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VK антитела 109A6

<400> 43

Thr Val Ser

1

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VK антитела 109A6

<400> 44

Ser Gln Ser Thr Leu Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 45

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VH антитела 111A6

<400> 45

Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr

1 5

<210> 46

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VH антитела 111A6

<400> 46

Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr

1 5

<210> 47

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VH антитела 111A6

<400> 47

Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr

1 5

<210> 48

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 1 CDR1 VK антитела 111A6

<400> 48

Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr

1 5

<210> 49

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 1 CDR2 VK антитела 111A6

<400> 49

Ser Thr Ser

1

<210> 50

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 1 CDR3 VK антитела 111A6

<400> 50

Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 51

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 2 CDR1 VK антитела 111A6

<400> 51

Gln Arg Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 52

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 2 CDR2 VK антитела 111A6

<400> 52

Thr Val Ser

1

<210> 53

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 2 CDR3 VK антитела 111A6

<400> 53

Ser Gln Ser Thr Leu Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 54

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VH антитела 131B4

<400> 54

Gly Phe Lys Ile Lys Asp Thr Tyr

1 5

<210> 55

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VH антитела 131B4

<400> 55

Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr

1 5

<210> 56

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VH антитела 131B4

<400> 56

Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr

1 5

<210> 57

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VK антитела 131B4

<400> 57

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 58

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VK антитела 131B4

<400> 58

Lys Val Ser

1

<210> 59

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VK антитела 131B4

<400> 59

Ser Gln Ser Ser Leu Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 60

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 1 CDR1 VH антитела 131E8

<400> 60

Gly Phe Ser Leu Pro Asn Tyr Gly

1 5

<210> 61

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 1 CDR2 VH антитела 131E8

<400> 61

Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 62

<211> 14

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 1 CDR3 VH антитела 131E8

<400> 62

Ala Arg Asn Phe Tyr Ser Lys Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 63

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 2 CDR1 VH антитела 131E8

<400> 63

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp

1 5

<210> 64

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 2 CDR2 VH антитела 131E8

<400> 64

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 65

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 2 CDR3 VH антитела 131E8

<400> 65

Ala Arg Leu Gly Asp Tyr

1 5

<210> 66

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VK антитела 131E8

<400> 66

Ser Ser Val Ser Tyr

1 5

<210> 67

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VK антитела 131E8

<400> 67

Asp Thr Ser

1

<210> 68

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VK антитела 131E8

<400> 68

Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 69

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VH антитела 132H4

<400> 69

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala

1 5

<210> 70

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VH антитела 132H4

<400> 70

Ile Ser Ser Gly Gly Ala Asn Ile

1 5

<210> 71

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VH антитела 132H4

<400> 71

Ala Arg Gly Asp Tyr Phe Asn His Phe Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 72

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VK антитела 132H4

<400> 72

Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 73

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VK антитела 132H4

<400> 73

Lys Val Ser

1

<210> 74

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VK антитела 132H4

<400> 74

Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 75

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VH антитела 133A6

<400> 75

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala

1 5

<210> 76

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VH антитела 133A6

<400> 76

Ile Ser Ser Gly Gly Gly Asn Ile

1 5

<210> 77

<211> 13

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VH антитела 133A6

<400> 77

Ala Arg Gly Asp Tyr Ser Asn Tyr Phe Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 78

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR1 VK антитела 133A6

<400> 78

Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 79

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR2 VK антитела 133A6

<400> 79

Lys Val Ser

1

<210> 80

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность CDR3 VK антитела 133A6

<400> 80

Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 81

<211> 453

<212> DNA

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК-последовательность VH 107C6

<400> 81

atgggttggg tgtggacctt gccattcctg atggcagctg cccaaagtat ccaagcacag 60

atccagttgg tgcagtctgg tcctgaactg aagaagcctg gagagacagt caagctctcc 120

tgcagggctt ctggatatac attcacaaac tatggaatga actgggtgaa gcaggctcca 180

ggaaagggtt taaagtggat gggctggata aacacctact ctggagtgcc aacatatgct 240

gatgacttca agggacagtt tgccttctct ttggaaacct ctgccgccac tgcctttttg 300

cagatcaaca acctcaaaga tgaggacacg gctacatatt tttgtgcaag agagggatat 360

agtactacca ggtctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctcagcc 420

aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcc 453

<210> 82

<211> 151

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность VH 107C6

<400> 82

Met Gly Trp Val Trp Thr Leu Pro Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Ile Gln Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Glu Thr Val Lys Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala

65 70 75 80

Asp Asp Phe Lys Gly Gln Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ala

85 90 95

Thr Ala Phe Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Thr

100 105 110

Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro

130 135 140

Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala

145 150

<210> 83

<211> 501

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК-последовательность VK 107C6

<400> 83

atggagtcac agtctcaggt tcttatattg ctgctgctat gggtatctgg tacctgtggg 60

gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagcaggaga gaaggtcact 120

atgagctgca aatccagtca gagtctgctc gacagtagaa cccgaaagaa ctacttggtt 180

tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactgggc atccactagg 240

ggatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 300

atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gcaaacaatc ttataatctt 360

cggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacggg ctgatgctgc accaactgta 420

tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 480

ttgaacaact tctaccccaa a 501

<210> 84

<211> 167

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность VK 107C6

<400> 84

Met Glu Ser Gln Ser Gln Val Leu Ile Leu Leu Leu Leu Trp Val Ser

1 5 10 15

Gly Thr Cys Gly Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala

20 25 30

Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser

35 40 45

Leu Leu Asp Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Val Trp Tyr Gln Gln

50 55 60

Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg

65 70 75 80

Gly Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

85 90 95

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr

100 105 110

Tyr Cys Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

115 120 125

Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro

130 135 140

Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe

145 150 155 160

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys

165

<210> 85

<211> 456

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность VH 108F8

<400> 85

atgggttggg tgtggacctt gctattcctg atggcagctg cccaaagtat ccaatcacag 60

atccagttgg tgcagtctgg tcctgattcg aagaagcctg gagagacagt caagctctcc 120

tgcagggctt ctggatatac attcacaaac tatggaatga actgggtgaa gcaggctcca 180

ggaaagggtt taaagtggat gggctggata aacacctact ctggagtgcc aacatatgct 240

gatgacttca agggacagtt tgccttctct ttggaaacct ctgccgccac tgcctttttg 300

cagatcaaca acctcaaaga tgaggacacg gctacatatt tttgtgcaag agagggatat 360

agtactacca ggtctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctcagcc 420

aaaacgacac ccccatctgt cttccccctg gcacct 456

<210> 86

<211> 152

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность VH 108F8

<400> 86

Met Gly Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Ile Gln Ser Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Ser Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Glu Thr Val Lys Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Val Pro Thr Tyr Ala

65 70 75 80

Asp Asp Phe Lys Gly Gln Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ala

85 90 95

Thr Ala Phe Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Thr

100 105 110

Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Thr Thr Arg Ser Met Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro

130 135 140

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

145 150

<210> 87

<211> 510

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК-последовательность VK 108F8

<400> 87

atgggcttca agatgaagtc agtcgacctg gttcttatat tgctgctgct atgggtatct 60

ggtacctgtg gggacattgt gatgtcacag tctccatcct ccctggctgt gtcagcagga 120

gagaaggtca ctatgagctg caaatccagt cagagtctgc tcgacagtag aacccgaaag 180

aactacttgg tttggtacca gcagaaacca gggcagtctc ctaaactgct gatctactgg 240

gcatccacta ggggatctgg ggtccctgat cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat 300

ttcactctca ccatcagcag tgtgcaggct gaagacctgg cagtttatta ctgcaaacaa 360

tcttataatc ttcggacgtt cggtggaggc accaagctgg aaatcaaacg ggctgatgct 420

gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc agtgagcagt taacatctgg aggtgcctca 480

gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc 510

<210> 88

<211> 170

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность VK 108F8

<400> 88

Met Gly Phe Lys Met Lys Ser Val Asp Leu Val Leu Ile Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Trp Val Ser Gly Thr Cys Gly Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro

20 25 30

Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys

35 40 45

Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Val

50 55 60

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp

65 70 75 80

Ala Ser Thr Arg Gly Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly

85 90 95

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp

100 105 110

Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr Phe Gly

115 120 125

Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val

130 135 140

Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser

145 150 155 160

Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

165 170

<210> 89

<211> 441

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК-последовательность VH 109A6

<400> 89

atgaaatgca gctggattat gttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60

gttcagctgc agcagtctgg ggcagaactt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120

tgcacagctt ctggcttcaa aattaaagac acctatatac actgggtgat ccagaggcct 180

gcacagggcc tggaatggat tggaaggatt gatcctgcga atggtaatac tatttatggc 240

tcaaagttcc agggcaaggc cactctaaca gcggacacat catccaacac agcctacatt 300

cacctcagca gcctgacatc tggggactct gccgtctatt actgtgcggg ctacgtttgg 360

tttgcttact ggggccaagg gactctggtc actgtctctg cagctacaac aacagcccca 420

tccgtcttcc ccctggcacc a 441

<210> 90

<211> 147

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность VH 109A6

<400> 90

Met Lys Cys Ser Trp Ile Met Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly

1 5 10 15

Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Lys Ile

35 40 45

Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Ile Gln Arg Pro Ala Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn

85 90 95

Thr Ala Tyr Ile His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

115 120 125

Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Thr Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro

130 135 140

Leu Ala Pro

145

<210> 91

<211> 498

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК-последовательность VK 109A6

<400> 91

atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcctc cagcagtgat 60

gttgtgatga cccaagttcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120

tcttgcagat ctagtcagag acttgtgcac agtaatggaa acacctattt acattggttc 180

ttacagaagc caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca cagtttccaa ccgattttct 240

ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300

agagtggagg ctgaggatct gggagtttat ttctgctctc aaagtacact tgttccgtgg 360

acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 420

atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 480

aacaacttct acccaaag 498

<210> 92

<211> 166

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность VK 109A6

<400> 92

Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala

1 5 10 15

Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln Val Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu

35 40 45

Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro

50 55 60

Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Val Ser Asn Arg Phe Ser

65 70 75 80

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

85 90 95

Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys

100 105 110

Ser Gln Ser Thr Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

115 120 125

Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro

130 135 140

Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu

145 150 155 160

Asn Asn Phe Tyr Pro Lys

165

<210> 93

<211> 441

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК-последовательность VH 111A6

<400> 93

atgaaatgca gctgggttat gttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60

gttcagctgc agcagtctgg ggcagaactt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120

tgcacagctt ctggcttcaa aattaaagac acctatatac actgggtgat ccagaggcct 180

gcacagggcc tggaatggat tggaaggatt gatcctgcga atggtaatac tatttatggc 240

tcaaagttcc agggcaaggc cactctaaca gcggacacat catccaacac agcctacatt 300

cacctcagca gcctgacatc tggggactct gccgtctatt actgtgcggg ctacgtttgg 360

tttgcttact ggggccaagg gactctggtc actgtctctg cagctacaac aacagcccca 420

tccgtcttcc ccctggcacc a 441

<210> 94

<211> 147

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность VH 111A6

<400> 94

Met Lys Cys Ser Trp Val Met Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly

1 5 10 15

Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Lys Ile

35 40 45

Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Ile Gln Arg Pro Ala Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn

85 90 95

Thr Ala Tyr Ile His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Val Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

115 120 125

Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Thr Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro

130 135 140

Leu Ala Pro

145

<210> 95

<211> 495

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК-последовательность 1 VK 111A6

<400> 95

atggattttc aggtgcagat tttcagcttc ttgctaatca gtgcctcagt tgcaatgtcc 60

agaggagaaa atgtgctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcttctcc aggggagaag 120

gtcaccatga cctgcagggc caggtcaagt gtaagttcca gttacttgca ctggtaccag 180

cagaagtcag gtgcctcccc caaactctgg atttatagca catccaactt ggcttctgga 240

gtccctactc gcttcagtgg cagtgggtct gggacctctt actctctcac aatcagcagt 300

gtggaggctg aagatgctgc cacttattac tgccagcagt acagtggtta cccactcacg 360

ttcggtgctg ggaccaagct ggagctgaaa cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc 420

ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac 480

aacttctacc ccaag 495

<210> 96

<211> 165

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность 1 VK 111A6

<400> 96

Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Ala Met Ser Arg Gly Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile

20 25 30

Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Arg

35 40 45

Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly

50 55 60

Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser

130 135 140

Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn

145 150 155 160

Asn Phe Tyr Pro Lys

165

<210> 97

<211> 499

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ДНК-последовательность 2 VK 111A6

<400> 97