РЕКОМБИНАНТНЫЕ КЛЕТКИ, ПРОДУЦИРУЮЩИЕ ГИАЛУРОНОВУЮ КИСЛОТУ Российский патент 2025 года по МПК C12N15/52 C12N15/81 C12P19/26 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к области биопродукции гиалуроновой кислоты.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Гиалуроновая кислота, также известная как гиалуронан или HA, представляет собой встречающийся в природе высокомолекулярный полисахарид, состоящий из D-глюкуроновой кислоты и N-ацетил-D-глюкозамина, связанных через чередующиеся β-(1→4) и β-(1→3) гликозидные связи, и имеющий химическую формулу (C₁₄H₂₁NO₁₁)n. Гиалуроновая кислота может иметь длину 25000 дисахаридных повторов. Размер полимеров гиалуроновой кислоты может составлять от 5000 до 20000000 Да in vivo.

HA имеет множество применений в медицинской и косметической областях, включая поддерживающий материал для тканевой инженерии, дерматологические наполнители и добавки, улучшающие вязкость, для лечения остеоартрита. В частности, снижение массы или молекулярной массы HA посредством разложения или замедления синтеза влияет на физические и химические свойства, такие как объем ткани, вязкость и эластичность. Поэтому существует постоянная потребность в продукции HA.

Сегодня основными известными источниками HA являются человеческие пуповины, петушиные гребни и ферментация некоторых микроорганизмов.

Способы ферментации для получения HA из микроорганизмов представляют особый интерес, поскольку они облегчают продукцию большого количества HA путем возможного увеличения масштаба при меньших затратах. В отличие от выделения HA из животных источников, которые обеспечивают получение гиалуроновой кислоты с очень высокой молекулярной массой, микробная ферментация позволяет в определенной степени контролировать размер исходной молекулярной массы. Это позволяет избежать необходимости дальнейших стадий фракционирования механическими, физическими или химическими средствами.

С этой целью было показано, что бактериальные культуры, такие как гемолитические стрептококки группы A и C, представляют собой хорошие источники HA (US 5316926, US 4801539, JP 2009011315). Однако такие бактерии, и, в частности, Streptococcus zooepidemicus, который в основном используется в данной области техники, обычно не признаются безопасными. Рекомбинантные клетки-хозяева Bacillus также продемонстрировали способность продуцировать HA в диапазоне от 20 до 800 кДа (US2008038780). В US2006168690 также было продемонстрировано, что трансформация растительных клеток для включения ДНК, кодирующей синтазу гиалуроновой кислоты, успешно позволила продуцировать HA. Наконец, продукция малых молекул HA также была продемонстрирована у дрожжей, таких как рекомбинантные Pichia pastoris, в CN 104263666.

В отличие от других микроорганизмов, которые обычно используются для получения биологических молекул, дрожжи обычно признаются безопасными. Они могут быстро расти и культивироваться при более высокой плотности по сравнению с бактериями и не требуют асептической среды. Кроме того, дрожжевые клетки могут быть легче отделены от среды для культивирования, чем бактерии, что значительно упрощает процесс экстракции и очистки продукта. Наконец, дрожжи обладают преимуществом с точки зрения большей устойчивости к изменениям рН в среде для культивирования и как таковые представляют собой более сильные ферментационные системы.

Однако среди дрожжей отличительные признаки между видами также могут представлять определенные проблемы. Это в основном связано с разницей в метаболизме между видами. Например, интеграции генома в P. pastoris стабильны, но часто встречается высокая вариабельность клонов от одной трансформации, отображающая различные характеристики продуктивности или изменения в их физиологии. Для этого требуется длительный процесс скрининга, чтобы найти клон с оптимальными признаками для желаемого применения. Эта клональная изменчивость является важным недостатком для дальнейшего развития P. pastoris в качестве платформы для получения химических веществ с дополнительными положительными характеристиками. Еще одним недостатком использования P. pastoris является то, что это метанотрофный организм.

Напротив, Saccharomyces cerevisiae особенно полезны в качестве инструмента для получения молекул, представляющих интерес, поскольку они имеют длительную безопасную историю, когда дело доходит до использования людьми (например, в вине, пиве или хлебе), и как таковые являются хорошо известной моделью, генетическая информация о которой хорошо известна в данной области техники. S. cerevisiae также обладают тем преимуществом, что в целом признаны безопасными для людей и животных. Более того, подкисление среды, которое происходит при культивировании этих дрожжей, снижает возможность загрязнения биоферментеров и, следовательно, устраняет необходимость добавления антибиотиков в среду. Наконец, было разработано много генетических инструментов, позволяющих стабильно модифицировать их геном (интеграция в хромосому).

Соответственно, в данной области техники все еще существует потребность в дополнительных способах продукции гиалуроновой кислоты, позволяющих ее высокоэффективный синтез и секрецию. В частности, все еще существует потребность в способах продукции, которые являются экономически эффективными и обеспечивают получение гиалуроновой кислоты, которая безопасна для применения человеком.

В конкретном случае в данной области техники все еще существует потребность в способах продукции гиалуроновой кислоты, позволяющих получать большие количества гиалуроновой кислоты определенного и контролируемого размера.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соответственно, настоящее изобретение относится к следующим элементам:

Пункт 1: дрожжевая клетка, продуцирующая гиалуроновую кислоту (HA), где рекомбинантная клетка содержит:

(a) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы;

(b) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP (уридинтрифосфат)-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB);

(c) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, где указанный полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, содержит сигнал секреции, так что рекомбинантная дрожжевая клетка продуцирует гиалуроновую кислоту, в частности, имеющую желаемую молекулярную массу (HAMW), и

(d) (i) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы (GLN1); и/или

(ii) одну или более нарушенных эндогенных нуклеиновых кислот, кодирующих глутаматсинтазу (GLT1);

где указанная рекомбинантная дрожжевая клетка относится к роду Saccharomyces, или роду Candida, или роду Kluyveromyces, или роду Ogataea, или роду Yarrowia, или роду Debaryomyces, или роду Ashbya.

Как проиллюстрировано в примерах, рекомбинантные дрожжи по изобретению позволяют продуцировать гиалуроновую кислоту в дрожжевой клетке, которая естественным образом не способна продуцировать гиалуроновую кислоту. Кроме того, в примерах продемонстрировано, что размер гиалуроновой кислоты, продуцируемой рекомбинантными дрожжами, может быть контролируемым.

Указанные предпочтительные свойства могут быть дополнительно улучшены путем рекомбинации дрожжей с дополнительными модификациями, описанными в настоящем документе ниже.

Пункт 2: рекомбинантная клетка-хозяин, продуцирующая гиалуроновую кислоту (HA), где рекомбинантная клетка-хозяин содержит:

(a) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы;

(b) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB);

(c) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, где указанный полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, содержит сигнал секреции и якорный сигнал, так что клетка-хозяин продуцирует гиалуроновую кислоту, в частности, имеющую желаемую молекулярную массу (HAMW); и

(d) (i) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы (GLN1); и/или

(ii) одну или более нарушенных эндогенных нуклеиновых кислот, кодирующих глутаматсинтазу (GLT1).

Пункт 3: Рекомбинантная клетка по пункту 1 или 2, где молекулярная масса HA находится в диапазоне менее 50 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 20 до около 50 кДа.

Пункт 4: Рекомбинантная клетка по пункту 1 или 2, где молекулярная масса HA находится в диапазоне более 50 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 50 до около 250 кДа.

Пункт 5: Рекомбинантная клетка по пункту 1 или 2, где молекулярная масса HA находится в диапазоне более 100 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 100 до около 1500 кДа.

Пункт 6: Рекомбинантная клетка по любому из пунктов 1-5, где нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, получена или происходит из Saccharomyces cerevisiae.

Пункт 7: Рекомбинантная клетка по любому из пунктов 1-6, где нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, получена или происходит из по меньшей мере одного из Cupiennius salei, Loxosceles intermedia, Hirudo nipponia, Bothrops atrox или Tityus serrulatus.

Пункт 8: Рекомбинантная клетка по любому из пунктов 1-7, где нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, получена или происходит из по меньшей мере одного из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1, Xenopus laevis или Pasteurella multocida, и, в частности, получена или происходит из по меньшей мере одного из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1 или Xenopus laevis.

Пункт 9: Рекомбинантная клетка по любому из пунктов 1-8, где нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, получена или происходит из по меньшей мере одного из Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus и, в частности, из Arabidopsis thaliana или вируса хлореллы PBCV1.

Пункт 10: Рекомбинантная клетка по любому из пунктов 1-9, где рекомбинантная клетка содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(i) полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1); и/или

(ii) полипептида, имеющего активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1).

Пункт 11: Рекомбинантная клетка по любому из пунктов 1-10, где рекомбинантная клетка содержит по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(i) полипептида, имеющего активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1); и/или

(ii) полипептида, имеющего активность UTP (уридинтрифосфат)-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1); и/или

(iii) полипептида, имеющего активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1); и/или

(iv) полипептида, имеющего активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1).

Пункт 12: Рекомбинантная дрожжевая клетка по любому из пунктов 1 и 3-11, выбранная из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces castelli, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces polysporus, Kluyveromyces thermotolerens, Ogataea polymorpHa, Yarrowia lypolytica, Debaryomyces hansenii и Ashbya gossypii, и предпочтительно представляющая собой Saccharomyces cerevisiae.

Пункт 13: Рекомбинантная клетка-хозяин по любому из пунктов 2-11, относящаяся к порядку Saccharomycetales, в частности, к семейству Saccharomycetales, и, в частности, выбранная из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces castelli, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces polysporus, Kluyveromyces thermotolerens, Ogataea polymorpHa, Yarrowia lypolytica, Debaryomyces hansenii и Ashbya gossypii, и предпочтительно представляющая собой Saccharomyces cerevisiae.

Пункт 14: Способ продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу (HAMW), включающий:

(a) культивирование рекомбинантной клетки, как определено в любом из пунктов 1-13, в среде для культивирования в течение времени, достаточного для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу; и

(b) необязательно выделение или извлечение гиалуроновой кислоты (HA) из рекомбинантной клетки и/или из среды для культивирования.

Пункт 15: Способ по пункту 14, где HA имеет молекулярную массу от около 20 до около 50 кДа и предпочтительно от около 20 до около 30 кДа.

Пункт 16: Способ по пункту 15, где HA имеет молекулярную массу от около 30 до около 50 кДа.

Пункт 17: Способ по пункту 14, где молекулярная масса HA составляет от около 50 до около 150 кДа.

Пункт 18: Способ по пункту 14, где молекулярная масса HA составляет от около 150 до около 1500 кДа.

Пункт 19: Способ по любому из пунктов 14-18, где рекомбинантная клетка содержит по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(i) полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1); и/или

(ii) полипептида, имеющего активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1).

Пункт 20: Способ по любому из пунктов 14-19, где рекомбинантная клетка содержит по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(i) полипептида, имеющего активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1);

(ii) полипептида, имеющего активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1);

(iii) полипептида, имеющего активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1); и/или

(iv) полипептида, имеющего активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1).

Пункт 21: Способ по любому из пунктов 14-20, где рекомбинантная клетка является членом рода Saccharomyces и, в частности, представляет собой Saccharomyces cerevisiae.

Пункт 22: Способ по любому из пунктов 14-21, где время, достаточное для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу, представляет собой период от около 35 до около 50 часов, предпочтительно от около 40 до около 50 часов, предпочтительно около 48 часов.

Пункт 23: Способ по любому из пунктов 14-22, где молекулярную массу гиалуроновой кислоты контролируют путем регулирования pH среды для культивирования.

Пункт 24: Способ по любому из пунктов 14-23, где способ осуществляют в промышленном масштабе, предпочтительно, где среда для культивирования составляет по меньшей мере около 100 л, более предпочтительно в диапазоне от около 1000 до около 3000 л, еще более предпочтительно около 10000 л, еще более предпочтительно около 100000 л или даже около 250000 л.

Пункт 25: Гиалуроновая кислота (HA), получаемая из рекомбинантной клетки по любому из пунктов 1-10 или способом по любому из пунктов 14-24.

Пункт 26: Среда для культивирования, содержащая HA по пункту 25.

Пункт 27: Композиция, содержащая гиалуроновую кислоту (HA) по пункту 24.

Пункт 28: Промышленное изделие, или потребительский продукт, или расходный материал, содержащий (i) HA по пункту 25, (ii) среду для культивирования по пункту 26 или (iii) композицию по пункту 27.

Пункт 29: Промышленное изделие, или потребительский продукт, или расходный материал по пункту 27, представляющий собой косметический продукт, вкусо-ароматическое вещество, парфюмерный продукт, пищевой продукт, продукт питания, напиток, текстурант, фармацевтическую композицию, биологически активную добавку, нутрицевтик, чистящее средство и/или стоматологическую композицию и/или композицию для гигиены полости рта.

Пункт 30: Применение рекомбинантной клетки, как определено в любом из пунктов 1-13, для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей молекулярную массу в диапазоне от около 20 до около 50 кДа или от около 50 до около 1000 кДа.

Пункт 31: Способ продуцирования гиалуроновой кислоты, включающий стадии:

(a) культивирования рекомбинантных дрожжей, как определено в любом из пунктов 1 и 3-12, в среде для культивирования; и

(b) извлечения гиалуроновой кислоты из указанной среды для культивирования,

где гиалуроновая кислота, извлеченная на стадии (b), имеет молекулярную массу, контролируемую путем выбора:

- природы и происхождения нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу, рекомбинантных дрожжей,

- природы и происхождения промотора, контролирующего экспрессию нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу(-ы), рекомбинантных дрожжей,

- наличия якорного сигнала и/или сигнала секреции, связанного с кодируемой(-ыми) гиалуронидазой(-ами), рекомбинантных дрожжей,

- pH среды для культивирования в процессе стадии культивирования рекомбинантных дрожжей, и/или

- продолжительности культивирования рекомбинантных дрожжей.

Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения могут обеспечить одно или более из следующих преимуществ:

способ продуцирования гиалуроновой кислоты с контролируемой молекулярной массой;

способ продуцирования гиалуроновой кислоты с контролируемой молекулярной массой в дрожжевой клетке Saccharomyces; и

способ продуцирования гиалуроновой кислоты с контролируемой молекулярной массой путем изменения генетических параметров (например, регуляторных последовательностей) и/или параметров способа (pH или времени ферментации).

Подробности, примеры и предпочтения, представленные в отношении любого конкретного одного или более заявленных аспектов настоящего изобретения, будут дополнительно описаны в настоящем документе и в равной степени применимы ко всем аспектам настоящего изобретения. Любая комбинация вариантов осуществления, примеров и предпочтений, описанных в настоящем документе, во всех их возможных вариантах охватывается настоящим изобретением, если в настоящем документе не указано иное, или иным образом явно противоречит контексту.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На фиг. 1 показан схематический путь продуцирования гиалуроновой кислоты

На фиг. 2A и 2B показаны агарозные гели, используемые для определения молекулярной массы гиалуроновой кислоты, продуцируемой штаммами согласно изобретению (например, штамм YA5235-1 (фиг. 2A) и штамм YA5359-10 (фиг. 2B)). Агарозные гели получают после прогона аликвоты супернатанта рассматриваемого штамма и окрашивания его «универсальным красителем» (номер CAS 7423-31-6). Стандарты молекулярной массы HA присутствуют в каждом геле для референса.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

SEQ ID NO: 1 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

SEQ ID NO: 2 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

SEQ ID NO: 3 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Pasteurella multocida

SEQ ID NO: 4 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Pasteurella multocida

SEQ ID NO: 5 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Pasteurella multocida

SEQ ID NO: 6 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Xenopus laevis

SEQ ID NO: 7 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Streptococcus zooepidemicus

SEQ ID NO: 8 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

SEQ ID NO: 9 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Pasteurella multocida

SEQ ID NO: 10 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Xenopus laevis

SEQ ID NO: 11 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Streptococcus zooepidemicus

SEQ ID NO: 12 представляет собой нуклеотидную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из Arabidopsis thaliana

SEQ ID NO: 13 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

SEQ ID NO: 14 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

SEQ ID NO: 15 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из Streptococcus zooepidemicus

SEQ ID NO: 16 представляет собой аминокислотную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из Arabidopsis thaliana

SEQ ID NO: 17 представляет собой аминокислотную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из вируса хлореллы PBCV1

SEQ ID NO: 18 представляет собой аминокислотную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из Streptococcus zooepidemicus

SEQ ID NO: 19 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Bothrops atrox, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 20 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Bothrops atrox, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 21 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Cupiennius salei, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 22 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Cupiennius salei, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 23 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Hirudo Nipponia, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 24 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Hirudo Nipponia, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 25 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Loxosceles intermedia, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 26 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Loxosceles intermedia, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 27 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Tityus serrulatus, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 28 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Tityus serrulatus, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 29 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Vespa magnifica, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 30 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Vespa magnifica, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 31 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Bothrops atrox, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 32 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Bothrops atrox, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 33 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Cupiennius salei, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 34 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Cupiennius salei, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 35 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Hirudo Nipponia, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 36 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Hirudo Nipponia, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 37 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Loxosceles intermedia, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 38 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Loxosceles intermedia, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 39 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Tityus serrulatus, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 40 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Tityus serrulatus, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 41 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Vespa magnifica, с N-концевым сигналом секреции

SEQ ID NO: 42 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Vespa magnifica, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

SEQ ID NO: 43 представляет собой нуклеотидную последовательность последовательности секреции, добавленной в 5’

SEQ ID NO: 44 представляет собой аминокислотную последовательность последовательности секреции, добавленной в N-конце

SEQ ID NO: 45 представляет собой нуклеотидную последовательность якорной последовательности, добавленной в 3’

SEQ ID NO: 46 представляет собой аминокислотную последовательность якорной последовательности, добавленной в C-конце

SEQ ID NO: 47 представляет собой нуклеотидную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 48 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

SEQ ID NO: 49 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

SEQ ID NO: 50 представляет собой аминокислотную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 51 представляет собой аминокислотную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

SEQ ID NO: 52 представляет собой нуклеотидную последовательность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 53 представляет собой аминокислотную последовательность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 54 представляет собой нуклеотидную последовательность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 55 представляет собой аминокислотную последовательность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 56 представляет собой нуклеотидную последовательность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 57 представляет собой аминокислотную последовательность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 58 представляет собой нуклеотидную последовательность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 59 представляет собой аминокислотную последовательность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 60 представляет собой нуклеотидную последовательность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 61 представляет собой аминокислотную последовательность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 62 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTDH3

SEQ ID NO: 63 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTDH3.Sk

SEQ ID NO: 64 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTDH3-1.sba

SEQ ID NO: 65 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTDH3.Sar

SEQ ID NO: 66 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pENO2

SEQ ID NO: 67 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTEF3

SEQ ID NO: 68 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTEF1

SEQ ID NO: 69 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTEF1.ago

SEQ ID NO: 70 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTEF1.Sba

SEQ ID NO: 71 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pPDC1

SEQ ID NO: 72 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12

SEQ ID NO: 73 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12.Sm

SEQ ID NO: 74 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12.Sk

SEQ ID NO: 75 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12.Sba

SEQ ID NO: 76 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12.Sar

SEQ ID NO: 77 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pNUP57

SEQ ID NO: 78 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW10.ago

SEQ ID NO: 79 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCWP2

SEQ ID NO: 80 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pRPLA1

SEQ ID NO: 81 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCUP1

SEQ ID NO: 82 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pMET6

SEQ ID NO: 83 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pMET25

SEQ ID NO: 84 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pSAM1

SEQ ID NO: 85 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tTPI1

SEQ ID NO: 86 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tMET25

SEQ ID NO: 87 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tDIT1

SEQ ID NO: 88 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL3

SEQ ID NO: 89 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL3.sm

SEQ ID NO: 90 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL3.sba

SEQ ID NO: 91 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL41B

SEQ ID NO: 92 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL15A

SEQ ID NO: 93 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL15A.sba

SEQ ID NO: 94 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tIDP1

SEQ ID NO: 95 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tTEF1.sba

SEQ ID NO: 96 представляет собой нуклеотидную последовательность глутаминсинтетазы (GLN1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 97 представляет собой аминокислотную последовательность глутаминсинтетазы (GLN1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 98 представляет собой нуклеотидную последовательность глутаматсинтазы (GLT1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 99 представляет собой аминокислотную последовательность глутаматсинтазы (GLT1), происходящую из Saccharomyces cerevisiae

SEQ ID NO: 100 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tTDH3.

SEQ ID NO: 101 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы CviKl

SEQ ID NO: 102 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы IL-5-2s1

SEQ ID NO: 103 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы CZ-2

SEQ ID NO: 104 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы CVG-1

SEQ ID NO: 105 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы CviKl

SEQ ID NO: 106 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы IL-5-2s1

SEQ ID NO: 107 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы CZ-2

SEQ ID NO: 108 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы CVG-1

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы изобретения разработали генетически модифицированные клетки, и, в частности, генетически модифицированные дрожжи, обладающие способностью продуцировать гиалуроновую кислоту по сравнению с родительскими клетками, и особенно по сравнению с родительскими дрожжами, которые естественным образом на это не способны.

Эти генетически модифицированные клетки описаны в настоящем описании.

Определения

Термин «гиалуроновая кислота», также известная как гиалуронан или HA, представляет собой полисахарид, состоящий из D-глюкуроновой кислоты и N-ацетил-D-глюкозамина, связанных через чередующиеся β-(1→4) и β-(1→3) гликозидные связи, и имеющий химическую формулу (C₁₄H₂₁NO₁₁)n.

Гиалуроновая кислота может продуцироваться в рекомбинантной клетке.

В данном контексте термин «рекомбинантный», при использовании в отношении клетки, указывает на то, что клетка была модифицирована путем введения эндогенной и/или гетерологичной нуклеиновой кислоты или белка в клетку или изменения нативной клетки или что клетка получена из клетки, модифицированной таким образом. Таким образом, например, рекомбинантные клетки экспрессируют гены или нуклеиновую кислоту, которые не обнаружены в нативной (нерекомбинантной) форме клетки, или экспрессируют нативные (например, эндогенные) гены на другом уровне, чем их нативный уровень, или экспрессируют добавочные или дополнительные копии нативных (например, эндогенных) на другом уровне, чем их нативный уровень.

В данном контексте термин «рекомбинантный», при использовании в отношении нуклеиновой кислоты или вектора, представляет собой последовательности, образованные/полученные методами генной инженерии, хорошо известными специалисту в данной области техники. Соответственно, руководящие принципы Национального института здравоохранения (NIH) США указывают, что:

«рекомбинантные […] нуклеиновые кислоты определены как:

i. молекулы, которые (а) сконструированы путем соединения молекул нуклеиновой кислоты и (b) которые могут реплицироваться в живой клетке, то есть рекомбинантные нуклеиновые кислоты»,

что отражает общепринятое использование слова «рекомбинантный», применительно к нуклеотидным последовательностям, для обозначения рекомбинированного после вставки или соединения с другой нуклеиновой кислотой.

Белки, которые являются результатом экспрессии рекомбинантной ДНК или рекомбинантного вектора в живых клетках, также называют рекомбинантными белками.

Соответственно, термин «рекомбинантный» является синонимом термина «генетически модифицированный». Термин «ген» является синонимом термина «нуклеиновая кислота» или «нуклеотидная последовательность».

Рекомбинантная нуклеотидная последовательность для применения в рекомбинантной клетке и, в частности, в рекомбинантных дрожжах согласно настоящему изобретению, может быть предоставлена в форме конструкции нуклеиновой кислоты. Термин «конструкция нуклеиновой кислоты» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, одно- или двухцепочечной, которая выделена или получена из нативного (например, эндогенного) гена, встречающегося в природе, или представляет собой гетерологичную нуклеиновую кислоту, или которая была модифицирована, чтобы содержать сегменты нуклеиновой кислоты, которые объединены и сопоставлены таким образом, который в противном случае не существовал бы в природе. Термин «конструкция нуклеиновой кислоты» является синонимом термина «экспрессионная кассета» или «экспрессионная кассета гетерологичной нуклеиновой кислоты», когда конструкция нуклеиновой кислоты содержит один или более регуляторных элементов, необходимых для экспрессии кодирующей последовательности, где указанные контрольные последовательности функционально связаны с указанной кодирующей последовательностью. Неограничивающие примеры регуляторных элементов включают промоторы, энхансеры, сайленсеры, терминаторы и поли-А сигналы.

Рекомбинантная нуклеотидная последовательность для применения в рекомбинантной клетке согласно настоящему изобретению может быть предоставлена в форме экспрессионного вектора, где полинуклеотидная последовательность функционально связана с по меньшей мере одной контрольной последовательностью для экспрессии полинуклеотидной последовательности в рекомбинантной клетке.

Термины «полученный из», или «происходящий из», или «который происходит из» микроорганизма или животного обычно означают, что вещество (например, молекула нуклеиновой кислоты или полипептид), происходящее из микроорганизма или животного, является нативным для этого микроорганизма или животного.

Термин «полученный из» микроорганизма или животного обычно означает, что вещество (например, молекула нуклеиновой кислоты или полипептид), полученное из микроорганизма или животного, является результатом модификаций, внесенных в вещество, нативное для (т.е. присутствующее как таковое) этого микроорганизма или животного. Например, в отношении нуклеотидной последовательности, полученной из микроорганизма или животного, указанная нуклеотидная последовательность может соответствовать перекодированной и/или усеченной версии нативной нуклеотидной последовательности из этого микроорганизма или животного. Другие модификации, хорошо известные специалисту в данной области техники, могут быть внесены в нативное вещество микроорганизма или животного, что приводит к тому, что используемое вещество является «полученным из» указанного микроорганизма или животного.

В данном контексте термин «полипептид» относится к молекуле, содержащей аминокислотные остатки, связанные пептидными связями, и содержащей более пяти аминокислотных остатков. Аминокислоты идентифицируются либо однобуквенными, либо трехбуквенными обозначениями. Термин «белок» в данном контексте является синонимом термина «полипептид» и может также относиться к двум или более полипептидам. Таким образом, термины «белок», «пептид» и «полипептид» могут быть использованы взаимозаменяемо. Полипептиды могут быть необязательно модифицированы (например, гликозилированные, фосфорилированные, ацилированные, фарнезилированные, пренилированные, сульфированные и тому подобное) для добавления функциональности. Полипептиды, проявляющие активность, могут называться ферментами. Следует понимать, что в результате вырожденности генетического кода может быть получено множество нуклеотидных последовательностей, кодирующих данный полипептид.

Полипептид, кодируемый рекомбинантной нуклеиновой кислотой для применения в рекомбинантной клетке и, в частности, в рекомбинантных дрожжах согласно настоящему изобретению, может содержать сигнальный пептид и/или пропептидную последовательность. В случае, если полипептид, экспрессируемый рекомбинантной клеткой, и, в частности, рекомбинантными дрожжами согласно настоящему изобретению, содержит сигнальный пептид и/или пропептид, идентичность последовательности может быть рассчитана по зрелой полипептидной последовательности.

В данном контексте термин «функционально связанный» относится к двум или более элементам нуклеотидной последовательности, которые физически связаны и находятся в функциональной взаимосвязи друг с другом. Например, промотор функционально связан с кодирующей последовательностью, если промотор способен инициировать или регулировать транскрипцию или экспрессию кодирующей последовательности, и в этом случае кодирующую последовательность следует понимать как находящуюся «под контролем» промотора. Как правило, когда две нуклеотидные последовательности функционально связаны, они будут находиться в одной и той же ориентации и, как правило, также в одной и той же рамке считывания. Обычно они будут по существу смежными, хотя это может и не потребоваться.

Термин «нативный» или «эндогенный», используемый в настоящем документе в отношении молекул, и, в частности, ферментов и нуклеиновых кислот, обозначает молекулы, которые экспрессируются в организме, из которого они происходят, или встречаются в природе.

Термин «эндогенный ген» означает, что ген присутствовал в клетке до любой генетической модификации в штамме дикого типа. Эндогенные гены могут быть сверхэкспрессированы путем введения гетерологичных последовательностей в дополнение к или для замены эндогенных регуляторных элементов или путем введения одной или более добавочных или дополнительных копий гена в хромосому или плазмиду (указанные добавочные или дополнительные копии обозначены как «экзогенные или гетерологичные гены», или «гетерологичные нуклеотидные последовательности», или «гетерологичные нуклеиновые кислоты», как определено в настоящем документе). Эндогенные гены также могут быть модифицированы для модуляции их экспрессии и/или активности. Например, мутации могут быть введены в кодирующую последовательность для модификации продукта гена, или гетерологичные последовательности могут быть введены в дополнение к или для замены эндогенных регуляторных элементов. Модуляция эндогенного гена может приводить к повышенной регуляции и/или усилению активности продукта гена или, альтернативно, к пониженной регуляции и/или ослаблению активности продукта эндогенного гена. Другим способом усиления экспрессии эндогенных генов является введение одной или более добавочных или дополнительных копий гена на хромосому или плазмиду (указанные дополнительные копии обозначены как «экзогенные или гетерологичные гены», или «гетерологичные нуклеотидные последовательности», или «гетерологичные нуклеиновые кислоты», как определено в настоящем документе).

Под «одной или более добавочными или дополнительными копиями гена» согласно изобретению в настоящем изобретении, например, понимается от 1 до 50 копий, в частности от 1 до 30 копий, более конкретно от 1 до 20 копий и предпочтительно от 1 до 10 копий. Указанные копии могут быть вставлены в один и тот же локус или в разные локусы рекомбинантной клетки согласно изобретению.

Термин «экзогенный ген» означает, что ген был введен в клетку средствами, хорошо известными специалисту в данной области техники, принимая во внимание, что этот ген встречается или не встречается в природе в клетке дикого типа. Клетки могут экспрессировать экзогенные гены, если эти гены вводятся в клетку со всеми элементами, обеспечивающими их экспрессию в клетке. Трансформация клеток с помощью экзогенной ДНК является рутинной задачей для специалиста в данной области техники. Экзогенные гены могут быть интегрированы в хромосому-хозяина или экспрессироваться вне хромосом из плазмид или векторов. В данной области техники известны различные плазмиды, которые различаются с точки зрения начала их репликации и количества их копий в клетке. Последовательность экзогенных генов может быть адаптирована для ее экспрессии в клетке. Действительно, специалисту в данной области техники известно понятие предпочтения кодонов и то, как адаптировать нуклеотидные последовательности для конкретного предпочтения кодонов без модификации выведенного белка. В частных вариантах осуществления оптимизированные по кодонам гены экспрессируют нативные ферменты.

Термин «гетерологичный ген» или «гетерологичная нуклеотидная последовательность» относится к гену или нуклеотидной последовательности, которые обычно не встречаются в данной клетке в природе. Таким образом, гетерологичная нуклеотидная последовательность может быть: (a) чужеродной для своей клетки-хозяина (т.е. «экзогенной» для клетки); (b) естественным образом обнаруженной в клетке-хозяине (т.е. «эндогенной»), но присутствующей в неестественном количестве в клетке (т.е. в большем или меньшем количестве, чем естественно обнаруженная в клетке-хозяине); или (c) естественным образом обнаруженной в клетке-хозяине, но расположенной вне ее естественного локуса.

В настоящей заявке все гены обозначены их общими названиями и ссылками на их нуклеотидные последовательности и, в случае возникновения, на их аминокислотные последовательности. Используя ссылки, приведенные в номере доступа для известных генов, специалисты в данной области техники могут определить эквивалентные гены в других организмах, бактериальных штаммах, дрожжах, грибах, млекопитающих, растениях и т. д. Эта рутинная работа предпочтительно выполняется с использованием консенсусных последовательностей, которые могут быть определены путем выравнивания последовательностей с генами, полученными из других клеток, и конструирования вырожденных зондов для клонирования соответствующего гена в другом организме.

Специалисту в данной области техники известны различные способы модуляции и, в частности, повышенной регуляции или пониженной регуляции экспрессии эндогенных генов. Например, способ усиления экспрессии или сверхэкспрессии эндогенных генов заключается во введении одной или более добавочных или дополнительных копий гена в хромосому или плазмиду.

Другой способ заключается в замене эндогенного промотора гена более сильным промотором. Эти промоторы могут быть гомологичными или гетерологичными. Промоторы, особенно интересные в настоящем изобретении, более подробно описаны в другом месте настоящего описания.

Экспрессионная конструкция нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать 5'- и/или 3'-последовательности распознавания и/или селективные маркеры.

Термин «индуцибельный промотор» используется для квалификации промотора, активность которого индуцирована, то есть повышена:

- в присутствии одного или более конкретных метаболитов. Чем выше концентрация метаболита в среде, тем сильнее активность промотора; или

- в присутствии низкой концентрации или в отсутствие одного или более метаболитов. Эти метаболиты отличаются от тех, увеличение присутствия которых индуцирует активность промотора. Чем ниже концентрация метаболита в среде, тем сильнее активность промотора.

Термин «репрессируемый промотор» используется для квалификации промотора, активность которого репрессируется, то есть снижается:

- в присутствии одного или более конкретных метаболитов. Чем выше концентрация метаболита в среде, тем слабее активность промотора; или

- в присутствии низкой концентрации или в отсутствие одного или более метаболитов. Эти метаболиты отличаются от тех, увеличение присутствия которых подавляет активность промотора. Чем ниже концентрация метаболита в среде, тем слабее активность промотора.

В данном контексте термин «якорный сигнал» при использовании в сочетании с белком или полипептидом, таким как фермент (такой как, например, гиалуронидаза), означает, например, первую нуклеиновую кислоту, кодирующую белок, которая функционально связана со второй нуклеиновой кислотой, кодирующей белок или полипептид, или первый белок или полипептид, который функционально связан со вторым белком или полипептидом, таким как фермент (такой как, например, гиалуронидаза с образованием, например, слитого белка), и который позволяет клеточному транспортному механизму клетки, в частности клетки S. cerevisiae, правильно закреплять и/или располагать в мембране клетки второй белок, функционально связанный с первым белком.

В данном контексте термин «сигнал секреции» при использовании в сочетании с белком или полипептидом, таким как фермент (такой как, например, гиалуронидаза), означает, например, первую нуклеиновую кислоту, кодирующую пептид или белок, которая функционально связана со второй нуклеиновой кислотой, кодирующей белок, или первый белок, который связан со вторым белком, таким как фермент (такой как, например, гиалуронидаза с образованием, например, слитого белка), и который позволяет клеточному транспортному механизму клетки, в частности клетки S. cerevisiae, локализовать по меньшей мере второй белок на мембране клетки и секретировать второй белок за пределами клетки после того, как первый белок был, например, отщеплен от второго белка.

В данном контексте термины «сигнал секреции» и «якорный сигнал» при использовании в сочетании с белком или полипептидом, таким как фермент (такой как, например, гиалуронидаза), означают, например, первую нуклеиновую кислоту, кодирующую пептид или белок, которая функционально связана со второй нуклеиновой кислотой, кодирующей белок, или первый белок, который функционально связан со вторым белком, таким как фермент (такой как, например, гиалуронидаза), и который позволяет клеточному транспортному механизму клетки, в частности клетки S. cerevisiae, локализовать по меньшей мере второй белок на мембране клетки, где, если второй белок также функционально связан с «якорным сигналом», второй белок не секретируется, но остается прикрепленным к мембране клетки. В некоторых случаях сигнал секреции-якорный сигнал может обеспечивать двойную функцию сигнала секреции и якорного сигнала.

Последовательности сигналов секреции и якорного сигнала, способы экспрессии, закрепления и/или секреции гетерологичных белков, таких как ферменты (такие как, например, гиалуронидаза), на поверхности клетки (такой как, например, дрожжевая клетка) хорошо известны в данной области техники (см., например, Ast et al (2013) Cell 152: 1134-1145, Ast and Schuldiner (2013) Crit Rev Biochem Mol Biol 48(3) 273-288, Van der Vaart et al (1997) Applied Environmental Microbiology 63(2) 615-620, и все содержание каждой из этих публикаций включено в настоящий документ посредством ссылки).

«Активность» фермента используется взаимозаменяемо с термином «функция» и обозначает в контексте настоящего изобретения способность фермента катализировать желаемую реакцию. Количество фермента в клетке-хозяине может быть изменено путем модификации транскрипции гена, кодирующего фермент. Это может быть достигнуто, например, путем модификации числа копий нуклеотидной последовательности, кодирующей фермент (например, путем использования экспрессионного вектора с более высоким или более низким числом копий, содержащего нуклеотидную последовательность, или путем введения дополнительных копий нуклеотидной последовательности в геном клетки-хозяина, или путем делеции или нарушения нуклеотидной последовательности в геноме клетки-хозяина), путем изменения порядка кодирующих последовательностей на полицистронной мРНК оперона или разделения оперона на отдельные гены, каждый из которых имеет свои собственные контрольные элементы, или путем увеличения силы промотора или оператора, с которым функционально связана нуклеотидная последовательность.

Альтернативно или дополнительно, количество копий фермента в клетке-хозяине может быть изменено путем модификации уровня трансляции мРНК, кодирующей фермент. Это может быть достигнуто, например, путем модификации стабильности мРНК, модификации последовательности сайта связывания рибосомы, модификации расстояния или последовательности между сайтом связывания рибосомы и стартовым кодоном последовательности, кодирующей фермент, модификации всей межцистронной области, расположенной «против хода транскрипции» или прилегающей к 5’-стороне стартового кодона области, кодирующей фермент, стабилизации 3’-конца транскрипта мРНК с использованием «шпилек» и специализированных последовательностей, модификации частоты использования кодонов фермента, изменения экспрессии редких кодоновых тРНК, используемых в биосинтезе фермента, и/или повышения стабильности фермента, например, посредством мутации его кодирующей последовательности.

Активность фермента в клетке-хозяине может быть изменена несколькими способами, включая, но не ограничиваясь, экспрессию модифицированной формы фермента, которая проявляет повышенную или пониженную растворимость в клетке-хозяине, экспрессию измененной формы фермента, которая не имеет домена, через который ингибируется активность фермента, экспрессию модифицированной формы фермента, которая имеет более высокий или более низкий Kcat или более низкий или более высокий Km для субстрата, или экспрессию измененной формы фермента, которая более или менее подвержена обратной или упреждающей регуляции другой молекулой в пути.

Термины «кодирующий» или «кодирующий для» относятся к способу, посредством которого полинуклеотид, посредством механизмов транскрипции и трансляции, продуцирует аминокислотную последовательность.

Ген(-ы), кодирующий(-ие) фермент(-ы), рассматриваемый(-ые) в настоящем изобретении, может быть экзогенным или эндогенным.

Способы, осуществленные в настоящем изобретении, предпочтительно требуют применения одной или более конструкций хромосомной интеграции для стабильного введения гетерологичной нуклеотидной последовательности в определенное место на хромосоме или для функционального нарушения одного или более генов-мишеней в генетически модифицированной клетке. В некоторых вариантах осуществления нарушение гена-мишени предотвращает экспрессию родственного функционального белка. В некоторых вариантах осуществления нарушение гена-мишени приводит к экспрессии нефункционального белка из нарушенного гена.

Соответственно, «нарушенная эндогенная нуклеиновая кислота» в настоящем изобретении относится к эндогенной нуклеиновой кислоте или гену, неспособному кодировать функциональный или полностью функциональный белок или полипептид, который он кодирует, до его нарушения. Нуклеиновая кислота может быть, например, нарушена введением интеграционной конструкции в нуклеиновую кислоту, как проиллюстрировано в примерах. Указанная интеграция может, например, предотвращать экспрессию родственного функционального белка или полипептида или приводить к экспрессии нефункционального или не полностью функционального белка или полипептида из нарушенного гена.

Параметры конструкций хромосомной интеграции, которые могут варьироваться в практике настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются, длины гомологичных последовательностей; нуклеотидную последовательность гомологичных последовательностей; длину интегрирующей последовательности; нуклеотидную последовательность интегрирующей последовательности; и нуклеотидную последовательность локуса-мишени. В некоторых вариантах осуществления эффективный диапазон длины каждой гомологичной последовательности составляет от 20 до 5000 пар оснований, предпочтительно от 50 до 100 пар оснований. В конкретных вариантах осуществления длина каждой гомологичной последовательности составляет около 50 пар оснований. Для получения дополнительной информации о длине гомологии, необходимой для нацеливания генов, см. D. Burke et al., Methods in yeast Genetics - A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual (2000).

В некоторых вариантах осуществления (а) нарушенный(-ые) ген(-ы), в который(-ые) вышеупомянутая(-ые) конструкция(-ии) ДНК предназначена(-ы) для вставки, может предпочтительно содержать один или более селектируемых маркеров, пригодных для выбора трансформированных клеток. Предпочтительно, указанный селектируемый(-ые) маркер(-ы) содержится в конструкции(-ях) ДНК согласно настоящему изобретению.

В некоторых вариантах осуществления селектируемый маркер представляет собой маркер устойчивости к антибиотикам. Иллюстративные примеры маркеров устойчивости к антибиотикам включают, но не ограничиваются, продукты гена NAT1, AURl-C, HpH, DSDA, KAN<R> и SH BLE. Продукт гена NAT1 из S. noursei придает устойчивость к норсеотрицину; продукт гена AURl-C из Saccharomyces cerevisiae придает устойчивость к ауреобазидину A (AbA); продукт гена HpH из Klebsiella pneumoniae придает устойчивость к гигромицину B; продукт гена DSDA из E. coli позволяет клеткам расти на планшетах с D-серином в качестве единственного источника азота; ген KAN<R> транспозона Tn903 придает устойчивость к G418; и продукт гена SH BLE из Streptoalloteichus hindustanus придает устойчивость к зеоцину (блеомицину).

В некоторых вариантах осуществления маркер устойчивости к антибиотикам удаляют после выделения генетически модифицированной клетки согласно изобретению. Специалист в данной области техники способен выбрать подходящий маркер в конкретном генетическом контексте.

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению лишена какого-либо маркера устойчивости к антибиотикам. Это преимущественно предотвращает необходимость добавления антибиотиков в селекционную среду.

В некоторых вариантах осуществления селектируемый маркер сохраняет ауксотрофию (например, питательную ауксотрофию) в генетически модифицированной клетке. В таких вариантах осуществления родительская клетка и, в частности, родительские дрожжи содержат функциональное нарушение в одном или более продуктах гена, которые функционируют в аминокислотном или нуклеотидном биосинтетическом пути, таком как, например, продукты гена HIS3, LEU2, LYS1, LYS2, MET15, TRP1, ADE2 и URA3 в дрожжах, что делает родительскую клетку неспособной расти в среде без добавления одного или более питательных веществ (ауксотрофный фенотип). Затем ауксотрофный фенотип может быть сохранен путем трансформации родительской клетки с помощью хромосомной интеграции, кодирующей функциональную копию продукта нарушенного гена (в некоторых вариантах осуществления функциональная копия гена может происходить от близких видов, таких как Kluveromyces, Candida и т. д.), и полученная генетически модифицированная клетка может быть выбрана на основе потери ауксотрофного фенотипа родительской микробной клетки.

Для каждой из нуклеотидных последовательностей, содержащих промоторную последовательность, кодирующую последовательность (например, последовательность, кодирующую фермент) или последовательность терминатора, референсные последовательности описаны в настоящем документе. Настоящее описание также охватывает нуклеотидные последовательности, имеющие определенный процент нуклеотидной идентичности с референсной нуклеотидной последовательностью.

Для каждой из представляющих интерес аминокислотных последовательностей референсные последовательности описаны в настоящем документе. Настоящее описание также охватывает аминокислотные последовательности (например, ферментные аминокислотные последовательности), имеющие определенный процент аминокислотной идентичности с референсной аминокислотной последовательностью.

По очевидным причинам во всем настоящем описании конкретная нуклеотидная последовательность или конкретная аминокислотная последовательность, которая соответствует, соответственно, рассматриваемой нуклеотидной или аминокислотной идентичности, должна дополнительно приводить к получению белка (или фермента), который проявляет желаемую биологическую активность. В данном контексте «процент идентичности» между двумя нуклеотидными последовательностями или между двумя аминокислотными последовательностями определяют путем сравнения обеих оптимально выровненных последовательностей через окно сравнения.

Таким образом, часть нуклеотидной или аминокислотной последовательности в окне сравнения может включать добавления или делеции (например, «гэпы») по сравнению с референсной последовательностью (которая не включает эти добавления или эти делеции), чтобы получить оптимальное выравнивание между обеими последовательностями.

Термины «гомология последовательности», или «идентичность последовательности», или «гомология», или «идентичность» используются в настоящем документе взаимозаменяемо. Для целей настоящего изобретения здесь определено, что для определения процента гомологии последовательностей или идентичности последовательностей двух аминокислотных последовательностей или двух нуклеотидных последовательностей последовательности выравнивают для целей оптимального сравнения. Для оптимизации выравнивания между двумя последовательностями могут быть введены гэпы в любую из двух сравниваемых последовательностей. Такое выравнивание может быть осуществлено по всей длине сравниваемых последовательностей. Альтернативно, выравнивание может быть осуществлено на более короткой длине, например, на около 20, около 50, около 100 или более нуклеиновых кислот/оснований или аминокислот. Идентичность последовательности представляет собой процент идентичных совпадений между двумя последовательностями по зарегистрированной выровненной области.

Сравнение последовательностей и определение процента идентичности последовательностей между двумя последовательностями может быть выполнено с использованием математического алгоритма. Специалисту в данной области техники будет известно, что существует несколько различных компьютерных программ для выравнивания двух последовательностей и определения идентичности между двумя последовательностями (Kruskal, J. B. (1983) An overview of sequence comparison In D. Sankoff and J. B. Kruskal, (ed.), Time warps, string edits and macromolecules: the theory and practice of sequence comparison, pp. 1-44 Addison Wesley).

Процент идентичности последовательностей между двумя аминокислотными последовательностями или между двумя нуклеотидными последовательностями может быть определен с использованием алгоритма Нидлмана-Вунша для выравнивания двух последовательностей. (Needleman, S. B. and Wunsch, C. D. (1970) J. Mol. Biol. 48, 443-453). Как аминокислотные последовательности, так и нуклеотидные последовательности могут быть выровнены с помощью алгоритма. Алгоритм Нидлмана-Вунша был реализован в компьютерной программе NEEDLE.

Для целей изобретения использовали программу NEEDLE из программного обеспечения EMBOSS (версия 2.8.0 или выше, EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite (2000) Rice, P. LongdenJ. and Bleasby, A. Trends in Genetics 16, (6) pp276-277, http://emboss.bioinformatics.nl/). Для белковых последовательностей для матрицы замещения используют EBLOSUM62. Для нуклеотидной последовательности используют EDNAFULL. Необязательными используемыми параметрами являются штраф за открытие гэпа в размере 10 и штраф за продление гэпа в размере 0,5. Штраф за внесение концевого гэпа не добавляется. В разделе выходных данных было указано «Да» в ответ на вопрос «Краткая идентичность и сходство», а «SRS попарно» указано в качестве формата выравнивания выходных данных.

После выравнивания с помощью программы NEEDLE, как описано выше, процент идентичности последовательности между запрашиваемой последовательностью и последовательностью согласно изобретению рассчитывают следующим образом: Количество соответствующих положений в выравнивании, демонстрирующих идентичную аминокислоту или идентичный нуклеотид в обеих последовательностях, деленное на общую длину выравнивания после вычитания общего количества гэпов в выравнивании. Идентичность, определенная в настоящем документе, может быть получена из NEEDLE с использованием опции NOBRIEF и помечена в выходных данных программы как «самая длинная идентичность».

Сходство нуклеотидных и аминокислотных последовательностей, то есть процент идентичности последовательностей, можно определить с помощью выравнивания последовательностей с использованием нескольких других известных в данной области алгоритмов, предпочтительно с помощью математического алгоритма Карлина и Альтшуля (Karlin & Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873-5877), с hmmalign (программное обеспечение HMMER, http://hmmer.wustl.edu/) или с алгоритмом CLUSTAL (Thompson, J. D., Higgins, D. G. & Gibson, T. J. (1994) Nucleic Acids Res. 22, 4673-80), которые доступны,Ошибка! Недопустимый объект гиперссылки. например, на https://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo/, или программы GAP (математический алгоритм Университета Айовы) или математического алгоритма Майерса и Миллера (1989 - Cabios 4: 11-17) или Clone Manager 9. Используемые предпочтительные параметры являются параметрами по умолчанию, поскольку они установлены на https://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo/.

Степень идентичности последовательностей (соответствие последовательностей) может быть рассчитана с использованием, например, BLAST, BLAT или BlastZ (или BlastX). Аналогичный алгоритм включен в программы BLASTN и BLASTP из Altschul et al (1990) J. Mol. Biol. 215, 403-410. Поиски полинуклеотидов BLAST выполняют с помощью программы BLASTN, балл = 100, длина представления = 12, для получения полинуклеотидных последовательностей, гомологичных тем нуклеиновым кислотам, которые кодируют соответствующий белок.

Поиски белка BLAST выполняют с помощью программы BLASTP, балл = 50, длина представления = 3, для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных полипептиду SHC. Для получения выравниваний с гэпами для сравнительных целей используют Gapped BLAST, как описано в Altschul et al (1997) Nucleic Acids Res. 25, 3389-3402. При использовании программ BLAST и Gapped BLAST используются параметры по умолчанию для соответствующих программ. Анализ соответствия последовательностей может быть дополнен установленными методами картирования гомологичности, такими как Shuffle-LAGAN (Brudno M., Bioinformatics 2003b, 19 Suppl 1: 154-162) или случайные поля Маркова. Когда в настоящей заявке упоминаются проценты идентичности последовательностей, эти проценты рассчитывают по отношению к полной длине более длинной последовательности, если специально не указано иное.

В конкретных вариантах осуществления % идентичности между двумя последовательностями определяют с использованием CLUSTAL O (версия 1.2.4).

«Ферментацию» или «культивирование» обычно проводят в ферментаторах с подходящей средой для культивирования, адаптированной к культивируемой клетке, содержащей по меньшей мере один простой источник углерода и, при необходимости, сосубстраты.

Термин «ферментационная композиция» относится к композиции, которая содержит генетически модифицированные клетки-хозяева и продукты или метаболиты, продуцируемые генетически модифицированными клетками-хозяевами. Примером ферментационной композиции является цельноклеточный бульон, который может представлять собой все содержимое сосуда (например, колбы, планшета или ферментера), включая клетки, водную фазу и соединения, полученные из генетически модифицированных клеток-хозяев.

Термин «среда» относится к среде для культивирования, или культуральной среде, или ферментационной среде.

Для максимальной продукции гиалуроновой кислоты рекомбинантные клетки, используемые в качестве продуцирующих хозяев, предпочтительно имеют высокую скорость утилизации углеводов. Эти характеристики могут быть приданы с помощью мутагенеза и селекции, генной инженерии или могут быть естественными. Ферментационная среда, или «среда для культивирования», или «культуральная среда» для настоящих клеток может содержать по меньшей мере около 10 г/л глюкозы и/или сахарозы. Дополнительные углеродные субстраты могут включать, но не ограничиваются, моносахариды, такие как фруктоза, манноза, ксилоза и арабиноза; олигосахариды, такие как лактоза, мальтоза, галактоза или сахароза; полисахариды, такие как крахмал или целлюлоза или их смеси, и неочищенные смеси из возобновляемого сырья, такие как сывороточный пермеат, кукурузный раствор, патока из сахарной свеклы и ячменный солод. Другие углеродные субстраты могут включать глицерин, ацетат и/или этанол.

Следовательно, предполагается, что источник углерода, используемый в настоящем изобретении, может охватывать широкий спектр углеродсодержащих субстратов и будет ограничен только выбором клетки и, в частности, дрожжей.

Хотя предполагается, что все вышеупомянутые углеродные субстраты и их смеси подходят для настоящего изобретения, предпочтительными углеродными субстратами являются глюкоза, фруктоза и сахароза или их смеси с C5-сахарами, такими как ксилоза и/или арабиноза для клеток, и, в частности, дрожжей, модифицированные для использования C5-сахаров и, более конкретно, глюкозы.

Предпочтительными углеродными субстратами являются глюкоза или сахароза.

В дополнение к подходящему источнику углерода ферментационные среды могут содержать подходящие минералы, соли, кофакторы, буферы и другие компоненты, известные специалистам в данной области техники, подходящие для роста культур и активирования ферментативного пути, необходимого для получения целевого продукта.

Кроме того, могут быть рассмотрены дополнительные генетические модификации, подходящие для роста рекомбинантных клеток согласно изобретению.

Термин «аэробные условия» относится к концентрациям кислорода в среде для культивирования, достаточным для того, чтобы аэробная или факультативная анаэробная клетка, и, в частности, дрожжи, могла использовать дикислород в качестве конечного акцептора электронов.

«Микроаэробное условие» относится к среде для культивирования, в которой концентрация кислорода меньше, чем в воздухе, то есть концентрация кислорода до 6 % O₂.

«Подходящая среда для культивирования» обозначает среду (например, стерильную жидкую среду), содержащую питательные вещества, необходимые или предпочтительные для поддержания и/или роста клетки, такие как источники углерода или углеродный субстрат, источники азота, например, пептон, дрожжевые экстракты, мясные экстракты, солодовые экстракты, мочевина, сульфат аммония, хлорид аммония, нитрат аммония и фосфат аммония; источники фосфора, например, монокалийфосфат или дикалийфосфат; микроэлементы (например, соли металлов), например, соли магния, соли кобальта и/или соли марганца; а также факторы роста, такие как аминокислоты, витамины, промоторы роста и тому подобное. Термин «углеродный источник», или «углеродный субстрат», или «источник углерода» в соответствии с настоящим изобретением обозначает любой источник углерода, который может быть использован специалистами в данной области техники для поддержания нормального роста клетки, включая гексозы (такие как глюкоза, галактоза или лактоза), пентозы, моносахариды, олигосахариды, дисахариды (такие как сахароза, целлобиоза или мальтоза), патоку, крахмал или его производные, целлюлозу, гемицеллюлозы и их комбинации.

Среды для культивирования, которые особенно подходят для получения рекомбинантных клеток по изобретению, и, в частности, рекомбинантных дрожжей по изобретению, более подробно описаны ниже в тексте.

В данном контексте термин «около» относится к разумному диапазону около значения, определенного специалистом в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления термин «около» относится к ± одному, двум или трем стандартным отклонениям. В некоторых вариантах осуществления термин «около» относится к ± 5 %, 10%, 20 % или 25%. В некоторых вариантах осуществления термин «около» относится к ± 0,1, 0,2 или 0,3 логарифмическим единицам, например, единицам рН.

Общие признаки генетических модификаций, введенных согласно изобретению

- Все геномные модификации встраивают в рекомбинантные клетки и, в частности, в рекомбинантные дрожжи в соответствии с известными методами генной инженерии:

- Последовательные нуклеотидные последовательности, включенные в генную конструкцию, которая вводится в геном рекомбинантной клетки согласно изобретению, имеют следующую структуру:

Prom₁-ORF₁-term₁-ORF₂-gene₂-term₂ - …/… -Prom_n-ORF_n-term_n, где:

- Prom₁ представляет собой последовательность, регулирующую экспрессию кодирующей последовательности ORF₁,

- ORF₁ представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую целевой белок PROT₁ и, в частности, целевой фермент PROT₁,

- Term₁ представляет собой последовательность терминатора транскрипции, которая опосредует терминацию транскрипции путем предоставления сигналов в только синтезированной мРНК, которые запускают процессы, которые высвобождают мРНК из транскрипционного комплекса, и

- «1», «2», …/… «n» может описывать или не описывать одну и ту же ORF (открытую рамку считывания), промотор или терминатор. Порядок нуклеотидных последовательностей не имеет значения. «n» представляет собой целое число, обычно находящееся в диапазоне от 5 до 20. Эти конструкции встраивают в одну из хромосом рекомбинантных клеток в контролируемом месте. В некоторых вариантах осуществления сайт встраивания не является существенным ни для функциональности встроенной конструкции, ни для жизнеспособности полученной генетически модифицированной клетки.

Как будет понятно специалистам в данной области техники, может быть предпочтительно модифицировать кодирующую последовательность для усиления ее экспрессии в конкретном хозяине. Генетический код является избыточными с 64 возможными кодонами, но большинство организмов обычно используют подмножество этих кодонов. Кодоны, которые чаще всего используются у вида, называются оптимальными кодонами, а те, которые не используются очень часто, классифицируются как редкие или малоиспользуемые кодоны. Кодоны могут быть замещены для отражения предпочтительной частоты использования кодонов хозяином в процессе, иногда называемом «оптимизацией кодонов» или «контролем неоднозначности кодонов видов». Оптимизация кодонов для других клеток-хозяев может быть легко определена с использованием таблиц частот использования кодонов или может быть выполнена с использованием коммерчески доступного программного обеспечения, такого как CodonOp (www.idtdna.com/CodonOptfrom) от Integrated DNA Technologies. Оптимизированные кодирующие последовательности, содержащие кодоны, предпочтительные для конкретного прокариотического или эукариотического хозяина (Murray et al, 1989, Nucl Acids Res. 17: 477-508), могут быть получены, например, для увеличения скорости трансляции или получения рекомбинантных РНК-транскриптов, обладающих желательными свойствами, такими как более длительный период полувыведения, по сравнению с транскриптами, полученными из неоптимизированной последовательности. Стоп-кодоны трансляции также могут быть модифицированы для отражения предпочтений хозяина. Например, типичными стоп-кодонами для S. cerevisiae и млекопитающих являются UAA и UGA, соответственно. Типичным стоп-кодоном для однодольных растений является UGA, тогда как насекомые и E. coli обычно используют UAA в качестве стоп-кодона (DalpHin et al, 1996, Nucl Acids Res. 24: 216-8).

- Когда рекомбинантная клетка представляет собой дрожжевую клетку, и, в частности, дрожжевую клетку Saccharomyces cerevisiae, нуклеотидные последовательности, введенные в геном дрожжей и происходящие из других организмов, отличных от Saccharomyces cerevisiae, как правило, «транскодированы» (как правило, «кодон-оптимизированы»), что означает, что эти нуклеотидные последовательности синтезированы с оптимальной частотой использования кодонов для экспрессии в S. cerevisiae. Нуклеотидная последовательность (и не белковая последовательность) некоторых нуклеотидных последовательностей из S. cerevisiae также была модифицирована («транскодирована») для минимизации рекомбинации с эндогенной копией указанного гена.

- Гены могут быть удалены с помощью стандартных процедур, используемых в клеточной генной инженерии. В некоторых вариантах осуществления гены, нацеленные на делецию, могут быть прерваны путем вставки одной из вышеописанных генных конструкций, или, альтернативно, гены, нацеленные на делецию, заменены коротким участком нуклеотида.

- Нуклеотидные последовательности можно сделать «индуцибельными или репрессируемыми» путем делеции эндогенной копии нуклеотидных последовательностей (при необходимости) и помещения новой копии ORF под контроль индуцибельного или репрессируемого промотора. Индуцибельный или репрессируемый промотор представляет собой промотор, активность которого модулируется или контролируется, т.е. либо повышается, либо снижается, при изменении условий окружающей среды или внешних раздражителей. Индукция или репрессия могут быть искусственно контролируемыми, что включает индукцию или репрессию абиотическими факторами, такими как химические соединения, не встречающиеся в природе в клетке, и, в частности, дрожжах, представляющих интерес, свет, уровни кислорода, тепло или холод. Список и последовательности индуцибельных или репрессируемых промоторов описаны в другом месте настоящего описания.

Рекомбинантные клетки согласно изобретению

Авторы изобретения разработали рекомбинантные клетки, в частности, рекомбинантные дрожжи, обладающие способностью продуцировать гиалуроновую кислоту.

Настоящее изобретение относится к рекомбинантным клеткам и, в частности, к рекомбинантным дрожжам, обладающим способностью продуцировать гиалуроновую кислоту, и где эта способность продуцировать гиалуроновую кислоту получена посредством множества изменений, которые были введены в их геном методами генной инженерии.

Настоящее изобретение относится к рекомбинантной дрожжевой клетке, продуцирующей гиалуроновую кислоту (HA), где рекомбинантная клетка содержит:

(a) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы;

(b) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB);

(c) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, где указанный полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, содержит сигнал секреции, так что рекомбинантная дрожжевая клетка продуцирует гиалуроновую кислоту, в частности, имеющую желаемую молекулярную массу (HAMW), и

(d) (i) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы (GLN1); и/или

(ii) одну или более нарушенных эндогенных нуклеиновых кислот, кодирующих глутаматсинтазу (GLT1);

где указанная рекомбинантная дрожжевая клетка относится к роду Saccharomyces, или роду Candida, или роду Kluyveromyces, или роду Ogataea, или роду Yarrowia, или роду Debaryomyces, или роду Ashbya, и, в частности, выбрана из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces castelli, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces polysporus, Kluyveromyces thermotolerens, Ogataea polymorpHa, Yarrowia lypolytica, Debaryomyces hansenii и Ashby gossypii, и предпочтительно представляет собой Saccharomyces cevisiae.

Настоящее изобретение дополнительно относится к рекомбинантной клетке-хозяину, продуцирующей гиалуроновую кислоту (HA), где рекомбинантная клетка-хозяин содержит:

(a) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы;

(b) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB);

(c) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, где указанный полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, содержит сигнал секреции и якорный сигнал, так что клетка-хозяин продуцирует гиалуроновую кислоту, в частности, имеющую желаемую молекулярную массу (HAMW); и

(d) (i) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы (GLN1); и/или

(ii) одну или более нарушенных эндогенных нуклеиновых кислот, кодирующих глутаматсинтазу (GLT1).

Авторы изобретения обнаружили, что способность продуцировать гиалуроновую кислоту клетками, и, в частности, дрожжевыми клетками, может быть достигнута путем введения в геном этих клеток множества генетических изменений.

Продукция гиалуроновой кислоты клетками по изобретению и, в частности, дрожжевыми клетками по изобретению была достигнута путем оптимизации эндогенного метаболизма UDP-глюкозы и, необязательно, UDP-N-ацетилглюкозамина и направления последующего искусственно модифицированного метаболического пути в основном на продукцию гиалуроновой кислоты при одновременном поддержании оптимальной жизнеспособности полученных генетически модифицированных клеток.

Было определено, что продукция гиалуроновой кислоты рекомбинантными клетками согласно изобретению может быть увеличена путем увеличения превращения глюкозо-6-фосфата в последовательные промежуточные метаболиты (i) глюкозо-1-фосфат, UDP-глюкозу, UDP-глюкуронат и гиалуроновую кислоту и (ii) фруктозо-6-фосфат, глюкозамин-6-фосфат, N-ацетил-глюкозамин-6-фосфат, N-ацетил-глюкозамин-1-фосфат, UDP-N-ацетил-глюкозамин и гиалуроновую кислоту при сохранении метаболического баланса, обеспечивающего хорошую жизнеспособность полученных рекомбинантных клеток.

Действительно, для получения жизнеспособной рекомбинантной клетки согласно изобретению было протестировано множество различных конструкций для получения жизнеспособной и эффективной рекомбинантной клетки и, в частности, жизнеспособных рекомбинантных дрожжей. В частности, такие рекомбинантные дрожжи было трудно получить, поскольку временное накопление некоторых промежуточных продуктов, по-видимому, было токсичным для дрожжей.

Неожиданные технические трудности возникли при создании условий, подходящих для получения рекомбинантной клетки, способной продуцировать гиалуроновую кислоту и, в частности, продуцировать гиалуроновую кислоту с контролируемой молекулярной массой.

Под «контролируемой» молекулярной массой гиалуроновой кислоты согласно настоящему изобретению подразумевается, что по меньшей мере 80 %, в частности по меньшей мере 85 %, гиалуроновой кислоты, продуцируемой способом согласно настоящему изобретению, имеет молекулярную массу, находящуюся в определенном диапазоне молекулярной массы, посредством регулирования по меньшей мере одного параметра способа и/или рекомбинантной клетки согласно настоящему изобретению, такого как, например:

- природа и происхождение нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу рекомбинантной клетки,

- природа и происхождение промотора, контролирующего экспрессию нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу(-ы) рекомбинантной клетки,

- наличие якорного сигнала и/или сигнала секреции, связанного с кодируемой(-ыми) гиалуронидазой(-ами) рекомбинантной клетки,

- рН среды для культивирования в процессе стадии культивирования рекомбинантной клетки, и/или

- продолжительность культивирования рекомбинантной клетки.

Действительно, после долгих исследований и экспериментальных испытаний авторы изобретения обнаружили, что можно культивировать рекомбинантную клетку и, в частности, рекомбинантную дрожжевую клетку, более конкретно, рекомбинантную дрожжевую клетку Saccharomyces cerevisiae, способную продуцировать гиалуроновую кислоту с контролируемой молекулярной массой, контролируемой с использованием следующих параметров:

- выбора природы и происхождения нуклеотидных последовательностей, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы рекомбинантной клетки, в частности, рекомбинантных дрожжей, по изобретению; и/или

- природы и происхождения промотора, контролирующего экспрессию нуклеотидных последовательностей, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы рекомбинантной клетки, в частности, рекомбинантных дрожжей, по изобретению; и/или

- необязательного присутствия якорного сигнала, в дополнение к сигналу секреции, связанного с кодируемым полипептидом, имеющим активность гиалуронидазы рекомбинантной клетки, в частности, рекомбинантных дрожжей, согласно изобретению; и/или

- рН среды для культивирования в процессе стадии культивирования рекомбинантной клетки, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки, согласно изобретению; и/или

- продолжительность культивирования рекомбинантной клетки, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки, согласно изобретению.

Насколько известно авторам изобретателя, этого никогда не было достигнуто раньше.

Молекулярная масса гиалуроновой кислоты (HA) может находиться в диапазоне менее 50 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 20 до около 50 кДа.

Альтернативно, молекулярная масса гиалуроновой кислоты (HA) может находиться в диапазоне более 50 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 50 до около 250 кДа.

В другом альтернативном варианте молекулярная масса HA может находиться в диапазоне более 100 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 100 до около 1500 кДа.

Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, может быть получена или происходит из Saccharomyces cerevisiae.

Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронидазы в рекомбинантной клетке согласно настоящему изобретению, может быть получена или происходит из по меньшей мере одного из Cupiennius salei, Loxosceles intermedia, Hirudo nipponia, Bothrops atrox или Tityus serrulatus.

Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы в рекомбинантной клетке согласно настоящему изобретению, может быть получена или происходит из по меньшей мере одной из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1, Xenopus laevis или Pasteurella multocida и, в частности, получена или происходит из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1 или Xenopus laevis.

Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы в рекомбинантной клетке согласно настоящему изобретению, может быть получена или происходит из по меньшей мере одного из Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus и, в частности, из Arabidopsis thaliana или вируса хлореллы PBCV1.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению может содержать рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одну или более из:

(i) полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1); и/или

(ii) полипептида, имеющего активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1).

Рекомбинантная клетка согласно изобретению может содержать по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одну или более из:

(i) полипептида, имеющего активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1); и/или

(ii) полипептида, имеющего активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1); и/или

(iii) полипептида, имеющего активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1); и/или

(iv) полипептида, имеющего активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1).

Рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению может быть, в частности, выбрана из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces castelli, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces polysporus, Kluyveromyces thermotolerens, Ogataea polymorpHa, Yarrowia lypolytica, Debaryomyces hansenii и Ashbya gossypii, и предпочтительно представляющая собой Saccharomyces cerevisiae.

Рекомбинантная клетка-хозяин согласно изобретению может относиться к порядку Saccharomycetales и, в частности, выбрана из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces castelli, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces polysporus, Kluyveromyces thermotolerens, Ogataea polymorpHa, Yarrowia lypolytica, Debaryomyces hansenii и Ashbya gossypii, и предпочтительно представляет собой Saccharomyces cerevisiae.

Другой объект изобретения относится к способу продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу (HAMW), включающему:

(a) культивирование рекомбинантной клетки, как определено выше, то есть рекомбинантной дрожжевой клетки или рекомбинантной клетки-хозяина согласно настоящему изобретению, в среде для культивирования в течение времени, достаточного для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу; и

(b) необязательно выделение или извлечение гиалуроновой кислоты (HA) из рекомбинантной клетки и/или из среды для культивирования.

В способе согласно изобретению HA может иметь молекулярную массу от около 20 до около 50 кДа и предпочтительно от 20 до 30 кДа.

В способе согласно изобретению HA может альтернативно иметь молекулярную массу от 30 до 50 кДа.

В способе согласно изобретению HA может альтернативно иметь молекулярную массу от около 50 до около 150 кДа.

В способе согласно изобретению HA может альтернативно иметь молекулярную массу от 150 до 1500 кДа.

В способе согласно изобретению нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, может быть получена или происходит из Cupiennius salei, Loxosceles intermedia, Hirudo nipponia, Bothrops atrox или Tityus serrulatus.

В способе согласно изобретению нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, может быть получена или происходит из по меньшей мере одного из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1, Xenopus laevis или Pasteurella multocida и, в частности, получена или происходит из по меньшей мере одного из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1 или Xenopus laevis.

В способе согласно изобретению нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, может быть получена или происходит из по меньшей мере одного из Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus, и, в частности, может быть получена или происходит из Arabidopsis thaliana или вируса хлореллы PBCV1.

В способе согласно изобретению рекомбинантная клетка может содержать по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одного или более из:

(i) полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1); и/или

(ii) полипептида, имеющего активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1).

В способе согласно изобретению рекомбинантная клетка может содержать по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(i) полипептида, имеющего активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1);

(ii) полипептида, имеющего активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1);

(iii) полипептида, имеющего активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1); и/или

(iv) полипептида, имеющего активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1).

В способе согласно изобретению рекомбинантная клетка может быть членом рода Saccharomyces, и, в частности, представляет собой Saccharomyces cerevisiae.

В способе согласно изобретению молекулярная масса гиалуроновой кислоты может контролироваться временем ферментации.

В способе согласно изобретению время, достаточное для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу, может представлять собой период от около 35 до около 50 часов, предпочтительно от около 40 до около 50 часов, предпочтительно около 48 часов.

В способе согласно изобретению молекулярная масса гиалуроновой кислоты может контролироваться посредством рН среды для культивирования.

В способе согласно изобретению молекулярную массу гиалуроновой кислоты может контролироваться посредством регулирования рН среды для культивирования в процессе стадии культивирования (а) способа согласно изобретению.

В способе согласно изобретению молекулярная масса гиалуроновой кислоты может контролироваться посредством удаления биомассы из среды для культивирования.

Способ согласно изобретению может быть осуществлен в промышленном масштабе, предпочтительно, где среда для культивирования составляет по меньшей мере около 100 л, более предпочтительно в диапазоне от около 1000 до около 3000 л, еще более предпочтительно около 10000 л или еще более предпочтительно около 100000 л или даже около 250000 л.

Другой объект изобретения относится к гиалуроновой кислоте (HA), полученной или получаемой из рекомбинантной клетки по изобретению или способом по изобретению.

Еще один объект изобретения относится к среде для культивирования, содержащей гиалуроновую кислоту (HA) согласно изобретению.

Настоящее изобретение дополнительно относится к композиции, содержащей гиалуроновую кислоту (HA) согласно изобретению.

Кроме того, настоящее изобретение относится к промышленному изделию, или потребительскому продукту, или расходному материалу, содержащему (i) HA, имеющую молекулярную массу в диапазоне более 100 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 100 до около 1500 кДа, (ii) среду для культивирования согласно изобретению или (iii) композицию согласно изобретению.

Настоящее изобретение также относится к применению рекомбинантной клетки согласно изобретению для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей молекулярную массу в диапазоне от около 20 до около 50 кДа или от около 50 до около 1000 кДа.

Другой объект настоящего изобретения относится к способу продуцирования гиалуроновой кислоты, включающему стадии:

(a) культивирования рекомбинантных дрожжей согласно изобретению в среде для культивирования; и

(b) извлечения гиалуроновой кислоты из указанной среды для культивирования,

где гиалуроновая кислота, извлеченная на стадии (b), имеет молекулярную массу, контролируемую путем выбора:

- природы и происхождения нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу рекомбинантных дрожжей,

- природы и происхождения промотора, контролирующего экспрессию нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу(-ы) рекомбинантных дрожжей,

- наличия якорного сигнала и/или сигнала секреции, связанного с кодируемой(-ыми) гиалуронидазой(-ами) рекомбинантных дрожжей,

- рН среды для культивирования в процессе стадии культивирования рекомбинантных дрожжей, и/или

- продолжительности культивирования рекомбинантных дрожжей.

Более конкретно, изобретение относится к рекомбинантным дрожжам, продуцирующим гиалуроновую кислоту, где рекомбинантные дрожжи содержат:

(A) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамимидотрансферазы (GFA1);

(B) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1);

(C) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB);

(D) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы (HASA); и

(E) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, где указанный полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, содержит сигнал секреции, так что рекомбинантная дрожжевая клетка продуцирует гиалуроновую кислоту, в частности, имеющую желаемую молекулярную массу (HAMW),

указанные рекомбинантные дрожжи представляют собой Saccharomyces cerevisiae.

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению содержат одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы (GLN1).

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению являются такими, что по меньшей мере одна, и, в частности, все ее эндогенные нуклеиновые кислоты, кодирующие глутаматсинтазу (GLT1), нарушены.

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению:

- содержит одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы (GLN1), и, в частности, полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы (GLN1), полученную или происходящую из Saccharomyces cerevisiae; и

- является такой, что по меньшей мере одна, и, в частности, все ее эндогенные нуклеиновые кислоты, кодирующие глутаматсинтазу (GLT1), нарушены.

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению, содержат только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1).

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи содержат от 5 до 10 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1).

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи содержат от 3 до 7 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB).

В другом варианте осуществления одна или более нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB), получена или происходит из по меньшей мере одного из Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus, и, в частности, получена или происходит из Arabidopsis thaliana или вируса хлореллы PBCV1.

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи содержат от 4 до 8 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы (HASA).

В другом варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы (HASA), получена или происходит из по меньшей мере одной из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1, Xenopus laevis или Pasteurella multocida и, в частности, получена или происходит из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1 или Xenopus laevis.

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению содержат только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронидазы.

В другом варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, получена или происходит из Cupiennius salei, Loxosceles intermedia, Hirudo nipponia, Bothrops atrox или Tityus serrulatus.

В другом варианте осуществления рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка могут содержать по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(A) полипептида, имеющего активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1); и/или

(B) полипептида, имеющего активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1); и/или

(C) полипептида, имеющего активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1); и/или

(D) полипептида, имеющего активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1).

В частности, рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению содержит по меньшей мере две, в частности, по меньшей мере три и более конкретно все модификации, указанные выше.

В конкретном варианте осуществления нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1), нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфат амидотрансферазы (GFA1), нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат N-ацетилтрансферазы (GNA1), нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1), и нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1), представляют собой нуклеиновые кислоты, происходящие или полученные из дрожжей, предпочтительно из Saccharomyces cerevisiae.

В конкретном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, определенный выше и содержащийся в рекомбинантной клетке согласно изобретению, и, в частности, содержащийся в рекомбинантных дрожжах согласно изобретению, находятся под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pPDC1, pTDH3, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTEF1, pENO2, pRPLA1, pNUP57 и pTEF3.

В конкретном варианте осуществления индуцибельные или репрессируемые промоторы, упомянутые в настоящем описании, выбраны из группы, состоящей из промоторов, индуцируемых или репрессируемых медью, или промоторов, индуцируемых или репрессируемых метионином, в частности, выбранных из группы, состоящей из pMET6, pMET25 и pSAM1.

Изобретение также относится к способу продуцирования гиалуроновой кислоты, как описано ранее, и включающему стадии:

(a) культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей, как определено в настоящем документе, в среде для культивирования; и

(b) извлечения гиалуроновой кислоты из указанной среды для культивирования,

где гиалуроновая кислота, извлеченная на стадии (b), имеет молекулярную массу, контролируемую путем выбора:

- природы и происхождения нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу рекомбинантной клетки согласно изобретению, и, в частности, рекомбинантных дрожжей согласно изобретению, и/или

- природы и происхождения промотора, контролирующего экспрессию нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу(-ы) рекомбинантной клетки согласно изобретению, и, в частности, рекомбинантных дрожжей, и/или

- наличия якорного сигнала и/или сигнала секреции, связанного с кодируемой(-ыми) гиалуронидазой(-ами) рекомбинантной клетки согласно изобретению, и, в частности, рекомбинантных дрожжей, и/или

- рН среды для культивирования в процессе стадии культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей; и/или

- продолжительности культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению содержат одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы.

Полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, согласно изобретению означает полипептид, который превращает промежуточные метаболиты UDP-глюкоронат и UDP-N-ацетилглюкозамин (UDP-GlcNAc) в гиалуроновую кислоту ((β-D-1,3-GlcNAc-β-D-1,4-GlcA)n).

В варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно изобретению, таких как, например, индуцибельные или репрессируемые промоторы pCUP1 или pMET25.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, могут находиться под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pCCW12, pCCW12.Sm, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar.

Указанная одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, могут происходить или быть получены из по меньшей мере одного из Streptococcus zooepidemicus (sz), вируса хлореллы PBCV1 (Vir), вируса хлореллы CviKl (Vir), вируса хлореллы IL-5-2s1 (Vir), вируса хлореллы CZ-2 (Vir), вируса хлореллы CVG-1 (Vir), Xenopus laevis (xl) или Pasteurella multocida (pm), и могут происходить или быть получены, в частности, из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1 или Xenopus laevis, как показано в примерах в настоящем документе.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению, может содержать от 2 до 8, в частности, от 4 до 8 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы (HASA). Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению, может, например, содержать 2 или 6, и, в частности, 6 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы (HASA).

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, могут быть вставлены в ген JLP1, и/или в ген SAM3, и/или в ген TRP1, и/или в ген LYP1 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантных дрожжей, как показано в примерах в настоящем документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- от 2 до 8, в частности от 4 до 8 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы (HASA);

- указанную одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, происходящую или полученную из по меньшей мере одного из Streptococcus zooepidemicus (sz), вируса хлореллы PBCV1 (Vir), Xenopus laevis (xl) или Pasteurella multocida (pm), и происходящую или полученную из, в частности, по меньшей мере одного из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1 или Xenopus laevis; и

- указанную одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, находящуюся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках по изобретению, такого как, например, индуцибельные или репрессируемые промоторы pCUP или pMET25, и/или под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pCCW12, pCCW12.Sm, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению, содержит одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB).

Полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB), согласно изобретению означает полипептид, который превращает промежуточный метаболит уридиндифосфат глюкозу (UDP-глюкозу) в UDP-глюкуронат.

В варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB), находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно изобретению, таких как, например, индуцибельные или репрессируемые промоторы pMET25 или pMET6.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, могут находиться под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pCCW12, в частности промоторов pCCW12.sk и pCCW12.sba; pTEF1.Sba и pTDH3.Sk.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, могут происходить или быть получены из по меньшей мере одного из Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus, и, в частности, могут происходить или быть получены из Arabidopsis thaliana или вируса хлореллы PBCV1.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению, может содержать от 2 до 7, в частности, от 3 до 7 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы. Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению, может, например, содержать 2 или 5 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы.

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, могут быть вставлены в ген JLP1, и/или в ген TRP1, и/или в ген LYP1 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантных дрожжей, как показано в примерах в настоящем документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- от 2 до 7, и, в частности, от 3 до 7 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы;

- указанную одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, происходящую или полученную из по меньшей мере одного из Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus, и происходящую или полученную, в частности, из Arabidopsis thaliana или вируса хлореллы PBCV1; и

- указанную одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, находящуюся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках по изобретению, таких как, например, индуцибельные или репрессируемые промоторы pMET25 или pMET6, и/или под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pCCW12, в частности, промоторов pCCW12.sk и pCCW12.sba; pTEF1.Sba и pTDH3.Sk.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность гиалуронидазы

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению, содержит одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы.

Полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, согласно изобретению означает полипептид, который нарушает гиалуроновую кислоту, то есть превращает гиалуроновую кислоту с заданной молекулярной массой в гиалуроновую кислоту с более низкой молекулярной массой.

Как указано ранее, полипептиды, имеющие активность гиалуронидазы, согласно настоящему изобретению содержат сигнал секреции.

В одном варианте осуществления полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, содержит как сигнал секреции, так и якорный сигнал.

В одном варианте осуществления указанная одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно настоящему изобретению.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут находиться под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTEF1, pCCW12, pCCW12.sba, pCCW12.Sar, pPDC1, pTEF3, pTDH3, pNUP57, pCWP2 и pCCW10.ago.

Указанные одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут происходить или быть получены из по меньшей мере одного из Cupiennius salei (Csa), Loxosceles intermedia (Li), Hirudo nipponia (Hn), Bothrops atrox (Ba) или Tityus serrulatus (Ts), как показано в примерах в настоящем документе.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению, может содержать только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронидазы.

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут быть вставлены в ген JLP1 и/или в ген LYP1, как показано в примерах в настоящем документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронидазы;

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, происходящую или полученную из Cupiennius salei (Csa), Loxosceles intermedia (Li), Hirudo nipponia (Hn), Bothrops atrox (Ba) или Tityus serrulatus (Ts);

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, содержащую либо (i) сигнал секреции и не содержащий якорного сигнала, либо (ii) сигнал секреции и якорный сигнал; и

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, находящуюся под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTEF1, pCCW12, pCCW12.sba, pCCW12.Sar, pPDC1, pTEF3, pTDH3, pNUP57, pCWP2 и pCCW10.ago.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы.

Полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, согласно изобретению означает полипептид, который превращает глутамат в глутамин при потреблении одного АТФ (аденозинтрифосфат) и одного NH₄⁺.

В одном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно настоящему изобретению.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, могут находиться под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTEF1 и pTEF1.Ago.

Указанные одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, могут происходить или быть получены из Saccharomyces cerevisiae, как показано в примерах в настоящем документе.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка, согласно изобретению может содержать только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы.

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, могут быть вставлены в ген LYP1 или GLT1 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки, как показано в примерах в настоящем документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы;

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, происходящую или полученную из Saccharomyces cerevisiae; и

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, находящуюся под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTEF1 и pTEF1.Ago.

В дополнительном варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтазы;

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, происходящую или полученную из Saccharomyces cerevisiae;

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, находящуюся под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTEF1 и pTEF1.Ago; и

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, встроенную в ген LYP1 или GLT1 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы.

Полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, согласно изобретению означает полипептид, который превращает фруктозо-6-фосфат в глюкозамин-6-фосфат.

В одном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно настоящему изобретению.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут находиться под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTEF1 и pTEF1.Ago.

Указанные одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут происходить или быть получены из Saccharomyces cerevisiae, как показано в примерах в настоящем документе.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы.

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут быть вставлены в ген SAM3 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки, как показано в примерах в настоящем документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы;

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, происходящую или полученную из Saccharomyces cerevisiae; и

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, находящуюся под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTEF1 и pTEF1.Ago.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы.

Полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, согласно изобретению означает полипептид, который может превращать N-ацетил-глюкозамин в UDP-N-ацетил-глюкозамин.

В варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно изобретению, таких как, например, индуцибельные или репрессируемые промоторы pMET6 или pCUP1.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, могут находиться под контролем промотора pTDH3.

Указанные одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, могут происходить или быть получены из Saccharomyces cerevisiae, как показано в примерах в настоящем документе.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно изобретению, может содержать от 5 до 10 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы. Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать 5, 7 или 8 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы.

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, могут быть вставлены в ген HIS3, и/или в ген JLP1, и/или в ген SAM3 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантных дрожжей, как показано в примерах в данном документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- от 5 до 10 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы;

- указанную одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, происходящую или полученную из Saccharomyces cerevisiae;

- указанную одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, находящуюся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках по изобретению, таких как, например, индуцибельные или репрессируемые промоторы pMET6 или pCUP1 и/или под контролем промотора pTDH3.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1).

Полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1) согласно изобретению, означает полипептид, который превращает глюкозо-6-фосфат в промежуточный метаболит глюкозо-1-фосфат.

В варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно изобретению, таких как, например, индуцибельные или репрессируемые промоторы.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), могут находиться под контролем промотора pPDC1.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), могут происходить или быть получены из Saccharomyces cerevisiae, как показано в примерах в настоящем документе.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1).

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, могут быть вставлены в ген SAM3 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантных дрожжей, как показано в примерах в настоящем документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1;

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, происходящую или полученную из Saccharomyces cerevisiae; и

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, находящуюся под контролем промотора pPDC1.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, содержит одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1).

Полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1), согласно изобретению означает полипептид, который превращает промежуточный метаболит глюкозо-1-фосфат в промежуточный метаболит UDP-глюкозу.

В варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилтрансферазы, находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно изобретению, таких как, например, индуцибельные или репрессируемые промоторы pSAM1 или pCUP1.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, могут находиться под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pPDC1 и pENO2.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, могут происходить или быть получены из Saccharomyces cerevisiae, как показано в примерах в настоящем документе.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать от 5 до 10 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы. Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать 5, 7 или 8 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы.

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий ген активности UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, могут быть вставлены в ген HIS3, и/или в ген JLP1, и/или в ген SAM3 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантных дрожжей, как показано в примерах в данном документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- от 5 до 10 рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы;

- указанную одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, происходящую или полученную из Saccharomyces cerevisiae; и

- указанную одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, находящуюся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках по изобретению, таких как, например, индуцибельные или репрессируемые промоторы pSAM1 или pCUP1 и/или под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pPDC1 и pENO2.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1).

Полипептид, имеющий активность в отношении глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1), согласно изобретению означает полипептид, который может превращать глюкозамин-6-фосфат в N-ацетил-глюкозамин-6-фосфат.

В одном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно настоящему изобретению.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, могут находиться под контролем промотора pCWP2.

Указанные одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, могут происходить или быть получены из Saccharomyces cerevisiae, как показано в примерах в настоящем документе.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы.

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, могут быть вставлены в ген SAM3 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантных дрожжей, как показано в примерах в настоящем документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы;

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, происходящую или полученную из Saccharomyces cerevisiae; и

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, находящуюся под контролем промотора pCWP2.

Рекомбинантные нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1).

Полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1), согласно изобретению означает полипептид, который может превращать N-ацетилглюкозамин-6-фосфат в N-ацетилглюкозамин-1-фосфат.

В одном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, находятся под контролем индуцибельного или репрессируемого промотора, который является функциональным в рекомбинантных клетках согласно настоящему изобретению.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, могут находиться под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTEF3 и pTEF1.

Указанные одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, могут происходить или быть получены из Saccharomyces cerevisiae, как показано в примерах в настоящем документе.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может содержать только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы.

В качестве примера, одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, могут быть вставлены в ген SAM3 рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантных дрожжей, как показано в примерах в настоящем документе.

В варианте осуществления изобретения рекомбинантная клетка и, в частности, рекомбинантные дрожжи по изобретению содержат:

- только одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы;

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, происходящую или полученную из Saccharomyces cerevisiae; и

- указанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, находящуюся под контролем промотора, где промотор выбран из группы, состоящей из pTEF3 и pTEF1.

гиалуронан-синтаза (HASA)

Фермент гиалуронан-синтаза представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализа превращения UDP-глюкуроната или UDP-N-ацетилглюкозы в гиалуроновую кислоту. Гиалуронан-синтаза, происходящая из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, Xenopus laevis или Pasteurella multocida, может быть названа HASA.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность гиалуронан-синтазы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В связи с этим специалист в данной области техники может предпочтительно ссылаться на способ колориметрического определения после обработки концентрированной серной кислотой и карбазолом, описанный в Bitter and Muir (Analytical Biochemistry, 4, 330-334, 1962).

Предпочтительный полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, в настоящем изобретении представляет собой фермент с шифром КФ (классификация ферментов) n 2.4.1.212.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из прокариотических организмов и эукариотических организмов. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, могут происходить или быть получены из архебактерий. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, могут происходить или быть получены из бактерий и, в частности, из Streptococcus zooepidemicus (Sz) или Pasteurella multocida (Pm), вируса хлореллы PBCV1 (Vir), вируса хлореллы CviKl (Vir), вируса хлореллы IL-5-2s1 (Vir), вируса хлореллы CZ-2 (Vir), вируса хлореллы CVG-1 (Vir) или Xenopus laevis (Xl).

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленную как последовательность SEQ ID NO: 1 (Vir), SEQ ID NO: 2 (Vir), SEQ ID NO: 3 (Pm), SEQ ID NO: 4 (Pm), SEQ ID NO: 5 (Pm), SEQ ID NO: 6 (Xl), SEQ ID NO: 7 (sz), SEQ ID NO: 101 (Vir), SEQ ID NO: 102 (Vir), SEQ ID NO: 103 (Vir) или SEQ ID NO: 104 (Vir), и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеотидная последовательность, имеющая, соответственно, нуклеотидную последовательность, представленную как последовательность SEQ ID NO: 1 (Vir), SEQ ID NO: 2 (Vir), SEQ ID NO: 3 (Pm), SEQ ID NO: 4 (Pm), SEQ ID NO: 5 (Pm), SEQ ID NO: 6 (Xl), SEQ ID NO: 7 (sz), SEQ ID NO: 101 (Vir), SEQ ID NO: 102 (Vir), SEQ ID NO: 103 (Vir) или SEQ ID NO: 104 (Vir).

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности, как объяснялось ранее, представляет собой способность кодировать полипептид, который превращает UDP-глюкуронат или UDP-N-ацетилглюкозу в гиалуроновую кислоту.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 70% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность гиалуронан-синтазы, происходящей из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, Xenopus laevis или Pasteurella multocida, специалист в данной области техники может ссылаться, соответственно, на номера доступа B4U0D4, Q84419, P13563, Q7BLV3, M1GZS8, M1H5V3, M1H2Q1 и M1HN86 в базе данных UniProt или на SEQ ID NO: 8 (Vir), SEQ ID NO: 9 (Pm), SEQ ID NO: 10 (Xl), SEQ ID NO:11 (Sz), SEQ ID NO: 105 (Vir), SEQ ID NO: 106 (Vir), SEQ ID NO: 107 (Vir) или SEQ ID NO: 108 (Vir), описанные в данном документе, в частности на SEQ ID NO: 8 (Vir), SEQ ID NO: 9 (Pm), SEQ ID NO: 10 (Xl), SEQ ID NO: 11 (Sz), SEQ ID NO: 105 (Vir), SEQ ID NO: 106 (Vir) или SEQ ID NO: 108 (Vir), и более конкретно на SEQ ID NO: 8 (Vir), SEQ ID NO: 9 (Pm), SEQ ID NO: 10 (Xl), SEQ ID NO: 11 (Sz).

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 50%, предпочтительно по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 8 (Vir), SEQ ID NO: 9 (Pm) SEQ ID NO: 10 (Xl), SEQ ID NO: 11 (Sz), SEQ ID NO: 105 (Vir), SEQ ID NO: 106 (Vir), SEQ ID NO: 107 (Vir) или SEQ ID NO: 108 (Vir), а также биологической активностью той же природы, что и аминокислотная последовательность, представленная как SEQ ID NO: 8 (Vir), SEQ ID NO: 9 (Pm) SEQ ID NO: 10 (Xl), SEQ ID NO:11 (Sz), SEQ ID NO: 105 (Vir), SEQ ID NO: 106 (Vir), SEQ ID NO: 107 (Vir) или SEQ ID NO: 108 (Vir).

Биологическая активность той же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать превращение UDP-глюкуроната или UDP-N-ацетилглюкозы в гиалуроновую кислоту.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 50% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, например, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы.

UDP-ГЛЮКОЗОДЕГИДРОГЕНАЗА (UDP-GlcDH или HASB)

UDP-глюкозодегидрогеназа представляет собой белок, который, как известно в данной области техники, катализирует превращение UDP-глюкозы в UDP-глюкуронат. UDP-глюкозодегидрогеназа, происходящая из генома Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus, может называться HASB.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность UDP-глюкозодегидрогеназы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В этом отношении специалист в данной области техники может предпочтительно обратиться к способу, описанному в Oka and Jigami (FEBS Journal 273, 2645-2657, 2006).

Предпочтительный полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, в настоящем описании представляет собой фермент, имеющий шифр КФ 1.1.1.22.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, включающей прокариотические организмы и эукариотические организмы. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, могут происходить или быть получены из архебактерий. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, могут происходить или быть получены из дрожжей и, в частности, из Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus haromyces.

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеиновой кислотой, представленной как последовательность SEQ ID NO: 12 (At), SEQ ID NO: 13 (Vir), SEQ ID NO: 14 (Vir) или SEQ ID NO: 15 (Sz), и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеиновая кислота, представленной как последовательность SEQ ID NO: 12 (At), SEQ ID NO: 13 (Vir), SEQ ID NO: 14 (Vir) или SEQ ID NO: 15 (Sz). Нуклеиновые кислоты, представленные как последовательности SEQ ID NO: 12 (At), SEQ ID NO: 13 (Vir), SEQ ID NO: 14 (Vir) и SEQ ID NO: 15 (Sz), кодируют полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, происходящей, соответственно, из Arabidopsis thaliana (At), вируса хлореллы PBCV1 (Vir) или Streptococcus zooepidemicus (Sz), которые также могут быть в совокупности названы HASB.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности, как объяснялось ранее, представляет собой способность кодировать полипептид, который превращает UDP-глюкозу в UDP-глюкуронат.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 70% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанными референсными нуклеотидными последовательностями, а также биологическую активность той же природы, что и указанные референсные нуклеотидные последовательности.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанные референсные нуклеотидные последовательности.

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность UDP-глюкозодегидрогеназы, из Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus, специалист в данной области техники может ссылаться на номера доступа NP_173979.1, NP_048965 или KIS19289, соответственно, в базе данных UniProt, или на последовательности, представленные в SEQ ID NO: 16 (At), SEQ ID NO: 17 (Vir) и SEQ ID NO: 18 (Sz), описанные в настоящем документе.

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 55%, предпочтительно по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 16 (At), SEQ ID NO: 17 (Vir) и SEQ ID NO: 18 (Sz), а также биологической активностью той же природы, что и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 16 (At), SEQ ID NO: 17 (Vir) и SEQ ID NO: 18 (Sz).

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать превращение UDP-глюкозы в UDP-глюкуронат.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 55% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, например, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы.

ГИАЛУРОНИДАЗА (HYAL)

Фермент гиалуронидаза представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализа расщепления молекул гиалуроновой кислоты до более мелких молекул гиалуроновой кислоты. Гиалуронидаза, происходящая из Cupiennius salei, Loxosceles intermedia, Hirudo nipponia, Bothrops atrox, Tityus serrulatus или Vespa magnifica, может называться HYAL.

Полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, согласно настоящему изобретению может обладать как сигналом секреции и якорным сигналом, или обладать сигналом секреции и не обладать якорным сигналом, или обладать сигналом секреции-якорным сигналом с двойной функцией секреции и закрепления. Когда кодируемый полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, обладает как сигналом секреции, так и якорным сигналом, его можно назвать HYAL-31, как представлено в примерах. Когда кодированный полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, обладает сигналом секреции и не имеет якорного сигнала, его можно назвать HYAL-3, как представлено в примерах.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность гиалуронидазы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В связи с этим специалист в данной области техники может предпочтительно контролировать молекулярную массу полученной гиалуроновой кислоты на агарозном геле.

Предпочтительный полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, в настоящем описании представляет собой фермент с шифром КФ n 3.2.1.35.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, включающей прокариотические организмы и эукариотические организмы. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут происходить или быть получены из архебактерий. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из дрожжей. В некоторых других предпочтительных вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут происходить или быть получены из Cupiennius salei (Csa), Loxosceles intermedia (Li), Hirudo nipponia (Hn), Bothrops atrox (Ba), Tityus serrulatus (Ts) или Vespa magnifica (Vm), и, в частности, из Cupiennius salei (Csa), Loxosceles intermedia (Li), Hirudo nipponia (Hn), Bothrops atrox (Ba) и Tityus serrulatus (Ts).

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеиновой кислотой SEQ ID NO: 19 (Ba), SEQ ID NO: 25 (Li), SEQ ID NO: 21 (Csa), SEQ ID NO: 27 (Ts), SEQ ID NO: 23 (Hn) или SEQ ID NO: 29 (Vm), а также биологической активностью той же природы, что и нуклеиновая кислота SEQ ID NO: 19 (Ba), SEQ ID NO: 25 (Li), SEQ ID NO: 21 (Csa), SEQ ID NO: 27 (Ts), SEQ ID NO: 23 (Hn) или SEQ ID NO: 29 (Vm). Нуклеиновая кислота SEQ ID NO: 19 (Ba), SEQ ID NO: 25 (Li), SEQ ID NO: 21 (Csa), SEQ ID NO: 27 (Ts), SEQ ID NO: 23 (Hn) или SEQ ID NO: 29 (Vm) кодирует полипептид, имеющий активность гилуронидазы, содержит сигнал секреции и не содержит якорный сигнал и происходит или получена из Bothrops atrox, Loxosceles intermedia, Cupiennius salei, Tityus serrulatus, Hirudo nipponia или Vespa magnifica, соответственно.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из последовательностей нуклеиновых кислот, имеющих по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеиновой кислотой SEQ ID NO: 22 (Csa), SEQ ID NO: 26 (Li), SEQ ID NO: 24 (Hn), SEQ ID NO: 20 (Ba), SEQ ID NO: 28 (Ts) или SEQ ID NO: 30 (Vm), а также биологическую активность той же природы, что и нуклеиновая кислота SEQ ID NO: 22 (Csa), SEQ ID NO: 26 (Li), SEQ ID NO: 24 (Hn), SEQ ID NO: 20 (Ba), SEQ ID NO: 28 (Ts) или SEQ ID NO: 30 (Vm). Нуклеиновая кислота SEQ ID NO: 22 (Csa), SEQ ID NO: 26 (Li), SEQ ID NO: 24 (Hn), SEQ ID NO: 20 (Ba) SEQ ID NO: 28 (Ts) или SEQ ID NO: 30 (Vm) кодирует полипептид, имеющий активность гилуронидазы, содержит сигнал секреции и якорный сигнал и происходит или получена из Cupiennius salei, Loxosceles intermedia, Hirudo nipponia, Bothrops atrox, Tityus serrulatus или Vespa magnifica, соответственно.

В конкретном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, (i) имеющих по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеиновой кислотой SEQ ID NO: 19 (Ba), SEQ ID NO: 25 (Li), SEQ ID NO: 21 (Csa), SEQ ID NO: 27 (Ts) или SEQ ID NO: 23 (Hn) и (ii) имеющих биологическую активность той же природы, что и нуклеиновая кислота SEQ ID NO: 19 (Ba), SEQ ID NO: 25 (Li), SEQ ID NO: 21 (Csa), SEQ ID NO: 27 (Ts) или SEQ ID NO: 23 (Hn).

В конкретном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеиновой кислотой SEQ ID NO: 22 (Csa), SEQ ID NO: 26 (Li), SEQ ID NO: 24 (Hn), SEQ ID NO: 20 (Ba) или SEQ ID NO: 28 (Ts) и (ii) имеющих биологическую активность той же природы, что и нуклеиновая кислота SEQ ID NO: 22 (Csa), SEQ ID NO: 26 (Li), SEQ ID NO: 24 (Hn), SEQ ID NO: 20 (Ba) или SEQ ID NO: 28 (Ts).

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности представляет собой, как объяснялось ранее, способность кодировать полипептид, который катализирует расщепление молекул гиалуроновой кислоты на более мелкие молекулы гиалуроновой кислоты.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 70% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Для аминокислотной последовательности одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, из Cupiennius salei, Loxosceles intermedia, Hirudo nipponia, Bothrops atrox или Tityus serrulatus специалист в данной области техники может ссылаться на номера доступа A0A0S4JYH2, R4J7Z9, X4Y2L4, A0A2H4Z8F4 или P85841, соответственно, в базе данных UniProt, или на SEQ ID NO: 33 (Csa), SEQ ID NO: 37 (Li), SEQ ID NO: 35 (Hn), SEQ ID NO: 31 (Ba), SEQ ID NO: 39 (Ts) или SEQ ID NO: 41 (Vm), описанные в настоящем документе.

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 50%, предпочтительно по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 33 (Csa), SEQ ID NO: 37 (Li), SEQ ID NO: 35 (Hn), SEQ ID NO: 31 (Ba), SEQ ID NO: 39 (Ts) или SEQ ID NO: 41 (Vm), которые содержат сигнал секреции и не имеют якорного сигнала, а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 33 (Csa), SEQ ID NO: 37 (Li), SEQ ID NO: 35 (Hn), SEQ ID NO: 31 (Ba), SEQ ID NO: 39 (Ts) или SEQ ID NO: 41 (Vm).

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 55%, предпочтительно по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 34 (Csa), SEQ ID NO: 38 (Li), SEQ ID NO: 36 (Hn), SEQ ID NO: 32 (Ba), SEQ ID NO: 40 (Ts) или SEQ ID NO: 42 (Vm), которые содержат сигнал секреции и якорный сигнал, а также биологическую активность того же характера, что и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 34 (Csa), SEQ ID NO: 38 (Li), SEQ ID NO: 36 (Hn), SEQ ID NO: 32 (Ba), SEQ ID NO: 40 (Ts) или SEQ ID NO: 42 (Vm).

В конкретном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 55%, предпочтительно по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 33 (Csa), SEQ ID NO: 37 (Li), SEQ ID NO: 35 (Hn), SEQ ID NO: 31 (Ba) или SEQ ID NO: 39 (Ts), а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 33 (Csa), SEQ ID NO: 37 (Li), SEQ ID NO: 35 (Hn), SEQ ID NO: 31 (Ba) или SEQ ID NO: 39 (Ts).

В другом конкретном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 55%, предпочтительно по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 34 (Csa), SEQ ID NO: 38 (Li), SEQ ID NO: 36 (Hn), SEQ ID NO: 32 (Ba) или SEQ ID NO: 40 (Ts), а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 34 (Csa), SEQ ID NO: 38 (Li), SEQ ID NO: 36 (Hn), SEQ ID NO: 32 (Ba) или SEQ ID NO: 40 (Ts).

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать расщепление молекул гиалуроновой кислоты на более мелкие молекулы гиалуроновой кислоты.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 55% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, например, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы.

ГЛЮТАМИНСИНТЕТАЗА (GLN1)

Фермент глутаминсинтетаза представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализа превращения глутамата в глутамин. Глутаминсинтетаза, происходящая из Saccharomyces cerevisiae, может называться GLN1.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность глутаминсинтетазы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В этом отношении специалист в данной области техники может предпочтительно ссылаться на способ, описанный в Legrain et al. (1982) European Journal of Biochemistry 123, 611-616.

Предпочтительный полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, в настоящем изобретении представляет собой фермент с шифром КФ n 6.3.1.2.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, включающей прокариотические организмы и эукариотические организмы. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтезы, могут происходить или быть получены из архебактерий. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, могут происходить или быть получены из дрожжей, и, в частности, из Saccharomyces cerevisiae.

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленной как последовательность SEQ ID NO: 96 (Sc), и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеотидная последовательность, представленная как последовательность SEQ ID NO: 96 (Sc). Нуклеиновая кислота, представленная как последовательность SEQ ID NO: 96, кодирует полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, которая также может называться GLN1.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности представляет собой, как объяснялось ранее, способность кодировать полипептид, который превращает глутамат в глутамин, в частности, путем потребления одного АТФ и одного NH₄⁺.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 70% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность глутаминсинтетазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, специалист в данной области техники может обратиться к регистрационному номеру P32288 в базе данных UniProt или к последовательности SEQ ID NO: 97, описанной в настоящем документе.

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 35%, предпочтительно по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 97, а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 97.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать превращение глутамата в глутамин.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 35% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 36%, 37%, 38%, 39%, 40% 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии полипептида, имеющего активность глутаминсинтетазы, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, например, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы.

ГЛУТАМАТСИНТАЗА (GLT1)

Фермент глутаматсинтаза представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализа превращения глутамина в глутамат. Глутаматсинтаза, происходящая из Saccharomyces cerevisiae, может называться GLT1.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность глутаматсинтазы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В этом отношении специалист в данной области техники может предпочтительно ссылаться на способ, описанный в Roon et al. (1974) Journal of bacteriology 118, 89-95.

Предпочтительный полипептид, имеющий активность глутаматсинтазы, в настоящем изобретении представляет собой фермент с шифром КФ n EC 1.4.1.14 (SEQ ID NO: 98).

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность глутаматсинтазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, специалист в данной области техники может обратиться к регистрационному номеру Q12680 в базе данных UniProt или к последовательности SEQ ID NO: 99, описанной в настоящем документе.

Как указано выше, уровень экспрессии полипептида, имеющего активность глутаматсинтазы, может быть снижен в рекомбинантной клетке и, в частности, в рекомбинантных дрожжах, согласно изобретению по сравнению с указанной клеткой, и, в частности, дрожжами, в их нерекомбинированной форме, то есть по меньшей мере один эндогенный ген рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантных дрожжей, нарушен.

ГЛУТАМИН-ФРУКТОЗА-6-ФОСФАТАМИДОТРАНСФЕРАЗА (GFA1)

Фермент глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансфераза представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализа превращения фруктозо-6-фосфата в глюкозамин-6-фосфат. Глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансфераза, происходящая из Saccharomyces cerevisiae, может называться GFA1.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В этом отношении специалист в данной области техники может предпочтительно ссылаться на способ, описанный в Shiga Shibatan and Hiroaki Kitazawa (Plant Biotechnology 26, 149-152, 2009).

Предпочтительный полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, в настоящем изобретении представляет собой фермент с шифром КФ n EC 2.6.1.16.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, включающей прокариотические организмы и эукариотические организмы. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут происходить или быть получены из архебактерий. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из Bacillus subtilis, и дрожжей. В некоторых других предпочтительных вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут происходить или быть получены из дрожжей и, в частности, из Saccharomyces cerevisiae.

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленной как последовательность SEQ ID NO: 47 (Sc), и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеотидная последовательность, представленная как последовательность SEQ ID NO: 47 (Sc). Нуклеиновая кислота, представленная как последовательность SEQ ID NO: 47, кодирует полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, который также может называться GFA1.

Согласно еще одному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленной как последовательность SEQ ID NO: 48 или SEQ ID NO: 49, и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеотидная последовательность, представленная как последовательность SEQ ID NO: 48 или SEQ ID NO: 49. Нуклеотидная последовательность, представленная как последовательность SEQ ID NO: 48 или SEQ ID NO: 49, кодирует полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, происходящей от вируса хлореллы PBCV1.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности, как объяснялось ранее, представляет собой способность кодировать полипептид, который превращает фруктозо-6-фосфат в глюкозамин-6-фосфат.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 70% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, специалист в данной области техники может обратиться к регистрационному номеру NP8012818 в базе данных UniProt или к последовательности SEQ ID NO: 50, описанной в настоящем документе.

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, происходящей из вируса хлореллы PBCV1, специалист в данной области техники может также ссылаться на регистрационный номер NP_048448 в базе данных UniProt или на последовательность SEQ ID NO: 51, описанную в настоящем документе.

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 35%, предпочтительно по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 50 или SEQ ID NO: 51, а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 50 или SEQ ID NO: 51.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать превращение фруктозо-6-фосфата в глюкозамин-6-фосфат.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 35% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 36%, 37%, 38%, 39%, 40% 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, например, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы.

UDP-N-АЦЕТИЛГЛЮКОЗАМИНПИРОФОСФОРИЛАЗА (QRI1)

Фермент UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилаза представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализа превращения N-ацетилглюкозамин-6-фосфата в UDP-N-ацетилглюкозу. UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилаза, происходящая из Saccharomyces cerevisiae, может называться QRI1.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В этом отношении специалист в данной области техники может предпочтительно ссылаться на способ, описанный в Mio et al. (Journal of Biological Chemistry, Col. 273, No. 23, June 5, 1998, 14392-14397), за исключением того, что UDP-N-ацетил-глюкозамин обнаруживают с помощью ЖХ-МС/МС с использованием колонки Synergi RP Fusion.

Предпочтительный полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, в настоящем изобретении представляет собой фермент с шифром КФ n 2.7.7.23.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из прокариотических организмов и эукариотических организмов. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, могут происходить или быть получены из архебактерий. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из Bacillus subtilis, и дрожжей. В некоторых других предпочтительных вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, могут происходить или быть получены из дрожжей, и, в частности, из Saccharomyces cerevisiae.

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 65%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 52, и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеотидная последовательность, представленная как SEQ ID NO: 52. Нуклеотидная последовательность, представленная как SEQ ID NO: 52, кодирует полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, которая также может называться QRI1.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности представляет собой, как объяснялось ранее, способность кодировать полипептид, который превращает N-ацетил-глюкозамин-6-фосфат в UDP-N-ацетил-глюкозу.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 65% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 70% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, специалист в данной области техники может обратиться к регистрационному номеру NP_010180 в базе данных UniProt или к SEQ ID NO. 53, описанной в настоящем документе.

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 35%, предпочтительно по меньшей мере 45%, предпочтительно по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью, представленной как последовательность SEQ ID NO. 53, а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность, представленная как последовательность SEQ ID NO. 53.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать превращение N-ацетил-глюкозамин-6-фосфата в UDP-N-ацетил-глюкозу.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 35% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 36%, 37%, 38%, 39%, 40% 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 45% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, например, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы.

Фосфоглюкомутаза-1 (PGM1)

Фермент фосфоглюкомутаза-1 представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализации превращения глюкозо-6-фосфата в глюкозо-1-фосфат. Фосфоглюкомутаза-1, происходящая из Saccharomyces cerevisiae, может называться PGM1.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность фосфоглюкомутазы-1, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В этом отношении специалист в данной области техники может предпочтительно ссылаться на способ, описанный в Tiwari and Bhat (Biochemical and BiopHysical Research Communications 366, 340-345, 2008).

Предпочтительный полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1 в настоящем изобретении, представляет собой фермент с шифром КФ n 5.4.2.2.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из прокариотических организмов и эукариотических организмом. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, могут происходить или быть получены из архебактерий. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из бактерий. В предпочтительном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, могут происходить или быть получены из Saccharomyces cerevisiae.

Согласно варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленной как последовательность SEQ ID NO: 54, которая происходит из Saccharomyces cerevisiae, и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеотидная последовательность, представленная как последовательность SEQ ID NO: 54.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности, как объяснялось ранее, представляет собой способность кодировать полипептид, который превращает глюкозо-6-фосфат в глюкозо-1-фосфат.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Для аминокислотной последовательности пептида, имеющего активность фосфоглюкомутазы-1, из Saccharomyces cerevisiae, специалист в данной области техники может обратиться к регистрационному номеру NP33401 в базе данных UniProt или к SEQ ID NO: 55, описанной в настоящем документе.

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью, представленной как последовательность SEQ ID NO: 55, а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность, представленная как последовательность SEQ ID NO: 55.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать превращение глюкозо-6-фосфата в глюкозо-1-фосфат.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, например, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоглюкомутазы-1.

UTP-ГЛЮКОЗО-1-ФОСФАТ-УРИДИЛИЛТРАНСФЕРАЗА (UGP1)

Фермент UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансфераза представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализа превращения глюкозо-1-фосфата в UDP-глюкозу. UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансфераза, происходящая из Saccharomyces cerevisiae, может называться UGP1.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В этом отношении специалист в данной области техники может предпочтительно ссылаться на способ, описанный в Roeben (J. Mol. Biol 364, 551-560, 2006).

Предпочтительный полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, в настоящем изобретении представляет собой фермент с шифром КФ n 2.7.7.9.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из прокариотических организмов и эукариотических организмов. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, могут происходить или быть получены из архебактерий. В некоторых вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из бактерий. В предпочтительном варианте осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, могут происходить или быть получены из Saccharomyces cerevisiae.

Согласно конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилтрансферазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеиновой кислотой, представленной как последовательность SEQ ID NO: 56, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеиновая кислота, представленная как последовательность SEQ ID NO: 56.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности, как объяснялось ранее, представляет собой способность кодировать полипептид, который превращает глюкозо-1-фосфат в UDP-глюкозу.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, специалист в данной области техники может обратиться к регистрационному номеру NP_32861 в базе данных UniProt или к последовательности, представленной как последовательность SEQ ID NO: 57, описанная в настоящем документе.

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 57, а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность, представленная как SEQ ID NO: 57.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать превращение глюкозо-1-фосфата в UDP-глюкозу.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, например, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы.

ГЛЮКОЗАМИН-6-ФОСФАТ-N-АЦЕТИЛТРАНСФЕРАЗА (GNA1)

Фермент глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансфераза представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализа превращения глюкозамин-6-фосфата в N-ацетил-глюкозамин-6-фосфат. Глюкозамин-6-фосфат N-ацетилтрансфераза, происходящая из Saccharomyces cerevisiae, может называться GNA1.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В этом отношении специалист в данной области техники может предпочтительно ссылаться на способ, описанный в Li et al. (Anal. Biochem. 370, 142-146, 2007).

Предпочтительный полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, в настоящем изобретении представляет собой фермент с шифром КФ n 2.3.1.4.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из прокариотических организмов и эукариотических организмов. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, могут происходить или быть получены из дрожжей и, в частности, из Saccharomyces cerevisiae.

Согласно конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленной как последовательность SEQ ID NO: 58, и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеотидная последовательность, представленная как последовательность SEQ ID NO: 58. Нуклеотидная последовательность, представленная как последовательность SEQ ID NO: 58, кодирует полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, который также может называться GNA1.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности, как объяснялось ранее, представляет собой способность кодировать полипептид, который превращает глюкозамин-6-фосфат в N-ацетил-глюкозамин-6-фосфат.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, специалист в данной области техники может обратиться к регистрационному номеру NP_116637 в базе данных UniProt или к SEQ ID NO. 59, описанной в настоящем документе.

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 59, а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность, представленная как SEQ ID NO: 59.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать превращение глюкозамин-6-фосфата в N-ацетил-глюкозамин-6-фосфат.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, например, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы.

ФОСФОАЦЕТИЛГЛЮКОЗАМИНАМУТАЗА (PCM1)

Фермент фосфоацетилглюкозаминмутаза представляет собой белок, который описан в данной области техники для катализа превращения N-ацетил-глюкозамин-6-фосфата в N-ацетил-глюкозамин-1-фосфат. Фосфоацетилглюкозаминмутаза, происходящая из Saccharomyces cerevisiae, может называться PCM1.

Способ, который осуществляют для измерения уровня активности полипептида, имеющего активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, относится к общим знаниям специалиста в данной области техники.

В этом отношении специалист в данной области техники может предпочтительно ссылаться на способ, описанный в Bandini et al. (Molecular Microbiology 85(3), 513-534, 2012).

Предпочтительный полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, в настоящем изобретении представляет собой фермент с шифром КФ n 5.4.2.3.

Согласно предпочтительному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, могут происходить или быть получены из организмов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из прокариотических организмов и эукариотических организмов. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, могут происходить или быть получены из дрожжей, и, в частности, из Saccharomyces cerevisiae.

Согласно конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, имеющих (i) по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с нуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 60, и (ii) биологическую активность той же природы, что и нуклеотидная последовательность, представленная как SEQ ID NO: 60. Нуклеиновая кислота, представленная как SEQ ID NO: 60, кодирует полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, происходящей из Saccharomyces, которая также может называться PCM1.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности, как объяснялось ранее, представляет собой способность кодировать полипептид, который превращает N-ацетил-глюкозамин-6-фосфат в N-ацетил-глюкозамин-1-фосфат.

Как описано в настоящем документе, нуклеотидная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% нуклеотидную идентичность с референсной нуклеотидной последовательностью, включает нуклеотидные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% нуклеотидную идентичность с указанной референсной нуклеотидной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная нуклеотидная последовательность.

Для аминокислотной последовательности полипептида, имеющего активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, происходящей из Saccharomyces cerevisiae, специалист в данной области техники может обратиться к регистрационному номеру NP_010856 в базе данных UniProt или к SEQ ID NO. 61, описанной в настоящем документе.

Согласно другому конкретному варианту осуществления одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, могут представлять собой нуклеиновую кислоту(-ы), кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, имеющих по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 61, а также биологическую активность той же природы, что и аминокислотная последовательность, представленная как SEQ ID NO: 61.

Биологическая активность такой же природы в отношении этой последовательности является такой, как описано ранее, т.е. способность катализировать превращение N-ацетил-глюкозамин-6-фосфата в N-ацетил-глюкозамин-1-фосфат.

Как описано в настоящем документе, аминокислотная последовательность, имеющая по меньшей мере 80% аминокислотную идентичность с референсной аминокислотной последовательностью, включает аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и 99% аминокислотную идентичность с указанной референсной аминокислотной последовательностью, а также биологическую активность той же природы, что и указанная референсная аминокислотная последовательность.

Как указано выше, уровень экспрессии одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы, в настоящем изобретении регулируется по меньшей мере одним промотором и по меньшей мере одним терминатором, как более подробно описано в настоящем документе, которые присутствуют в 5’- и 3’-положении, соответственно, одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность фосфоацетилглюкозаминмутазы.

ПРОМОТОРЫ

Как описано в настоящем документе, экспрессия представляющих интерес генов, которые были генетически сконструированы для получения рекомбинантной клетки согласно изобретению, содержит соответствующие регуляторные последовательности, которые являются функциональными в рекомбинантных клетках согласно изобретению и, в частности, в рекомбинантных дрожжевых клетках согласно изобретению, включая, в частности, Saccharomyces cerevisiae.

Для желаемой экспрессии кодирующих последовательностей, представляющих интерес, могут быть использованы различные промоторы.

Промоторы согласно изобретению могут быть выбраны из группы, состоящей из следующих промоторов:

• pTDH3 (SEQ ID NO: 62),

• pTDH3.sk (SEQ ID NO: 63),

• pTDH3-1.Sba (SEQ ID NO: 64),

• pTDH3.Sar (SEQ ID NO: 65),

• pENO2 (SEQ ID NO: 66),

• pTEF3 (SEQ ID NO: 67),

• pTEF1 (SEQ ID NO: 68),

• pTEF1.ago (SEQ ID NO: 69),

• pTEF1.sba (SEQ ID NO: 70),

• pPDC1 (SEQ ID NO: 71),

• pCCW12 (SEQ ID NO: 72),

• pCCW12.Sm (SEQ ID NO: 73),

• pCCW12.sk (SEQ ID NO: 74),

• pCCW12.sba (SEQ ID NO: 75),

• pCCW12.sar (SEQ ID NO: 76),

• pNUP57 (SEQ ID NO: 77),

• pCCW10.ago (SEQ ID NO: 78),

• pCWP2 (SEQ ID NO: 79) и

• pRPLA1 (SEQ ID NO: 80).

Промоторы, более предпочтительно представляющие интерес в настоящем изобретении, могут быть выбраны из группы, состоящей из:

• pTDH3 (SEQ ID NO: 62),

• pTDH3.sk (SEQ ID NO: 63),

• pTDH3-1.Sba (SEQ ID NO: 64),

• pTDH3.Sar (SEQ ID NO: 65),

• pENO2 (SEQ ID NO: 66),

• pTEF3 (SEQ ID NO: 67),

• pTEF1 (SEQ ID NO: 68),

• pTEF1.ago (SEQ ID NO: 69),

• pTEF1.sba (SEQ ID NO: 70),

• pPDC1 (SEQ ID NO: 71),

• pCCW12 (SEQ ID NO: 72),

• pCCW12.Sm (SEQ ID NO: 73),

• pCCW12.sk (SEQ ID NO: 74),

• pCCW12.sba (SEQ ID NO: 75) и

• pCCW12.sar (SEQ ID NO: 76).

Указанные промоторы могут, в частности, быть выбраны из группы, состоящей из pTDH3, pTDH3-1.Sba, pTDH3.Sar, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba и pCCW12.sar.

Альтернативно, промоторы, представляющие интерес в настоящем изобретении, могут быть выбраны из группы, состоящей из:

• pNUP57 (SEQ ID NO: 77) и

• pCCW10.ago (SEQ ID NO: 78).

Другими промоторами, представляющими интерес в настоящем изобретении, могут быть:

• pCWP2 (SEQ ID NO: 79) и

• pRPLA1 (SEQ ID NO: 80).

Как упоминалось ранее, индуцибельные или репрессируемые промоторы представляют собой промоторы, активность которых контролируется наличием или отсутствием биотических или абиотических факторов, а также количеством указанного фактора. Соответственно, для некоторых промоторов их активность, в частности, будет индуцироваться и, таким образом, увеличиваться, когда количество данного фактора увеличивается или было увеличено, и, соответственно, активность этих же промоторов может быть репрессирована и, таким образом, снижена, когда количество указанного фактора уменьшается или было уменьшено. Количество указанного фактора(-ов) в среде для культивирования рекомбинантной дрожжевой клетки согласно изобретению, содержащей индуцибельные или репрессируемые промоторы, может быть определено и, таким образом, контролироваться специалистом в данной области техники.

Например, увеличение количества меди в среде для культивирования рекомбинантной дрожжевой клетки согласно изобретению, содержащей промотор pCUP-1, будет индуцировать и, таким образом, увеличивать транскрипцию гена под контролем этого промотора. Напротив, уменьшение количества меди в указанной среде для культивирования приведет к репрессии и, следовательно, к уменьшенной транскрипции гена под контролем этого промотора.

В другом примере увеличение количества метионина в среде для культивирования рекомбинантной дрожжевой клетки согласно изобретению, содержащей промотор pMET6, будет репрессировать и, таким образом, уменьшать транскрипцию гена под контролем этого промотора. Напротив, уменьшение количества метионина в указанной среде для культивирования приведет к индуцированной и, следовательно, повышенной транскрипции гена под контролем этого промотора.

По этой причине следующие промоторы упоминаются в настоящем тексте как индуцибельные или репрессируемые промоторы.

Согласно первому варианту осуществления индуцибельные или репрессируемые промоторы согласно изобретению могут быть выбраны из группы, содержащей промоторы, индуцируемые или репрессируемые медью, промоторы, индуцируемые или репрессируемые метионином, и промоторы, индуцируемые или репрессируемые треонином, и, в частности, представляют собой CUP1, являющийся индуцируемыми или репрессируемыми медью (SEQ ID NO: 81).

Согласно этому варианту осуществления индуцибельный или репрессируемый промотор согласно изобретению может, в частности, представлять собой pCUP1.

Таким образом, активность этих промоторов индуцируется посредством увеличения присутствия метионина, меди или треонина, как указано выше, и их активность уменьшается, то есть репрессируется, когда количество метионина, меди или треонина уменьшается.

Согласно второму варианту осуществления индуцибельные или репрессируемые промоторы согласно изобретению могут быть выбраны из группы, содержащей промоторы, индуцируемые или репрессируемые медью, промоторы, индуцируемые или репрессируемые лизином, и промоторы, индуцируемые или репрессируемые метионином, и, в частности, выбраны из группы, состоящей из:

• pMET6, являющийся индуцируемым или репрессируемым метионином (SEQ ID NO: 82),

• pMET25, являющийся индуцируемым или репрессируемым метионином (SEQ ID NO: 83), и

• pSAM1, являющийся индуцируемым или репрессируемым метионином (SEQ ID NO: 84).

Согласно этому конкретному варианту осуществления индуцибельный или репрессируемый промотор согласно изобретению может быть выбран из группы, состоящей из pMET6, pMET25 и pSAM1.

Таким образом, активность этих промоторов репрессируется посредством увеличения присутствия метионина, меди, лизина или глюкозы, как указано выше, и их активность увеличивается, то есть индуцируется, когда количество метионина, меди, лизина или глюкозы уменьшается.

В конкретном варианте осуществления индуцибельные или репрессируемые промоторы согласно изобретению могут быть выбраны из группы, содержащей промоторы, индуцируемые или репрессируемые медью, промоторы, индуцируемые или репрессируемые глюкозой, промоторы, индуцируемые или репрессируемые лизином, промоторы, индуцируемые или репрессируемые метионином, и промоторы, индуцируемые или репрессируемые треонином.

В более конкретном варианте осуществления индуцибельный или репрессируемый промотор согласно изобретению может быть выбран из группы, состоящей из pCUP1, pMET6, pSAM1 и pMET25.

Синтетические промоторы, как описано в Blazeck & Alper (2013) Biotechnol. J. 8 46-58, также можно использовать.

Промоторы согласно настоящему изобретению могут происходить из любого организма из класса Saccharomycetes и, в частности, могут происходить из организма, выбранного из группы, состоящей из по меньшей мере одного из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces castelii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces arboricola, Saccharomyces kudriavzevii, Saccharomyces mikatae, Ashbya gossypii, Kluveromyces lactis, Pichia pastoris, Candida glabrata, Candida tropicalis, Debaryomyces castelii, Yarrowia lipolitica и Cyberlindnera jadinii.

Промоторы согласно настоящему изобретению предпочтительно могут происходить из организма, выбранного из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae (sc), Saccharomyces mikatae (Sm), Saccharomyces kudriavzevii (sk), Saccharomyces bayanus (sba) и Saccharomyces arboricola (Sar).

ТЕРМИНАТОРЫ

Как описано в настоящем документе, экспрессия представляющих интерес генов, которые были генетически сконструированы для получения рекомбинантной клетки согласно изобретению, и, в частности, рекомбинантных дрожжей согласно изобретению, содержит соответствующие последовательности терминаторов транскрипции, которые являются функциональными в рекомбинантных клетках согласно изобретению, и, в частности, в рекомбинантных дрожжевых клетках согласно изобретению, в частности, в Saccharomyces cerevisiae.

Указанные терминаторы транскрипции, идентичные или различные, можно найти в литературе Yamanishi et al., (2013) ACS synthetic biology 2, 337-347.

Терминаторы, более предпочтительно представляющие интерес в настоящем изобретении, могут быть выбраны из группы, содержащей:

• tTPI1 из гена, кодирующего триозофосфатную изомеразу (SEQ ID NO: 85),

• tMET25 из гена, кодирующего O-ацетил гомосерин-O-ацетилсеринсульфгидрилазу (SEQ ID NO: 86),

• tDIT1 (SEQ ID NO: 87),

• tRPL3 (SEQ ID NO: 88),

• tRPL3.sm (SEQ ID NO: 89),

• tRPL3.sba (SEQ ID NO: 90),

• tRPL41B (SEQ ID NO: 91),

• tRPL15A (SEQ ID NO: 92),

• tRPL15A.sba (SEQ ID NO: 93),

• tIDP1 (SEQ ID NO: 94),

• tTEF1.sba (SEQ ID NO: 95) и

• tTDH3 (SEQ ID NO: 100).

В частности, указанный терминатор может быть выбран из группы, состоящей из tTPI1, tMET25, tDIT1, tRPL3, tRPL3.sm, tRPL3.sba, tRPL41B, tRPL15A, tRPL15A.sba, tIDP1, tTEF1.sba и tTDH3.

Терминаторы согласно настоящему изобретению могут происходить из любого организма из класса Saccharomycete https://en.wikipedia.org/wiki/Saccharomycetesи, в частности, могут происходить из организма, выбранного из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae и Saccharomyces Bayanus.

РЕКОМБИНАНТНЫЕ КЛЕТКИ

Рекомбинантные клетки по изобретению могут быть выбраны из группы, состоящей из дрожжей и бактерий.

Рекомбинантные клетки согласно настоящему изобретению, такие как рекомбинантная клетка-хозяин согласно настоящему изобретению, предпочтительно представляют собой рекомбинантные дрожжевые клетки.

Как правило, дрожжи могут быстро расти и могут культивироваться при более высокой плотности по сравнению с бактериями и не требуют асептической среды в промышленных условиях. Кроме того, дрожжевые клетки могут быть легче отделены от среды для культивирования по сравнению с бактериальными клетками, что значительно упрощает процесс экстракции и очистки продукта.

Рекомбинантная клетка согласно настоящему изобретению и, в частности, рекомбинантная дрожжевая клетка согласно настоящему изобретению, предпочтительно представляет собой клетку Saccharomycetales.

Рекомбинантная клетка согласно настоящему изобретению и, в частности, рекомбинантные дрожжи согласно настоящему изобретению, могут, в частности, относится к роду Saccharomyces, или роду Candida, или роду Kluyveromyces, или роду Ogataea, или роду Yarrowia, или роду Debaryomyces, или роду Ashbya.

Рекомбинантная клетка согласно настоящему изобретению, относящаяся к роду Saccharomyces, может быть выбрана из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces castelli, Saccharomyces cariocanus, Saccharomyces kudriavzevii, Saccharomyces arboricolus, Saccharomyces pastorianus, Saccharomyces uvarum и Saccharomyces delbrueckii.

Рекомбинантная клетка по изобретению, относящаяся к роду Candida, может быть выбрана из группы, состоящей из Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Candida dubliniensis, Candida parapsilosis, Candida lusitaniae и Candida guilliermondii.

Рекомбинантная клетка по изобретению, относящаяся к роду Kluyveromyces, может быть выбрана из группы, состоящей из Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces polysporus, Kluyveromyces thermotoleren, Kluyveromyces dobzhanskii и Kluyveromyces wickerhamii.

Рекомбинантная клетка по изобретению, относящаяся к роду Ogataea, может быть выбрана из группы, состоящей из Ogataea polymorpHa, Ogataea histrianica, Ogataea deakii, Ogataea kolombanensis, Ogataea pHilodendra, Ogataea siamensis, Ogataea angusta, Ogataea parapolymorpHa, Ogataea minuta, Ogataea nonfermentans и Ogataea kodamae.

Рекомбинантная клетка по изобретению, относящаяся к роду Yarrowia, может быть выбрана из группы, состоящей из Yarrowia lypolytica, Yarrowia paropHonii, Yarrowia galli, Yarrowia oslonensis, Yarrowia alimentaria, Yarrowia hollandica и Yarrowia yakushimensis.

Рекомбинантная клетка по изобретению, относящаяся к роду Debaryomyces, может быть выбрана из группы, состоящей из Debaryomyces hansenii, Debaryomyces carsonii, Debaryomyces castellii, Debaryomyces marama, Debaryomyces occidentalis, Debaryomyces oviformis, Debaryomyces nepalensis, Debaryomyces coudertii, Debaryomyces udenii, Debaryomyces psychrosporus и Debaryomyces yamadae.

Рекомбинантная клетка по изобретению, относящаяся к роду Ashbya, может быть выбрана из группы, состоящей из Ashbya gossypii и Ashbya aceri.

Рекомбинантная клетка согласно изобретению, и в частности рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению, может быть, в частности, выбрана из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces castelli, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces polysporus, Kluyveromyces thermotolerens, Ogataea polymorpHa, Yarrowia lypolytica, Debaryomyces hansenii и Ashbya gossypii, и предпочтительно представляющая собой Saccharomyces cerevisiae.

В конкретном варианте осуществления рекомбинантная дрожжевая клетка согласно изобретению относится к роду Saccharomyces, Kluyveromyces или Eremothecium, более конкретно относится к видам, выбранным из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Kluyveromyces Marxianus, Ogataea polymorpHa и Ashbya gossypii.

В варианте осуществления рекомбинантная клетка-хозяин согласно настоящему изобретению представляет собой дрожжи, выбранные из порядка Saccharomycetales, в частности, из семейства Saccharomycetaceae, и, в частности, выбранные из группы, состоящей из Yarrowia lipolitica, Kluyveromyces Marxianus, Ogataea polymorpHa, Ashbya gossypii и Saccharomyces cerevisiae.

Рекомбинантная клетка согласно настоящему изобретению наиболее предпочтительно может представлять собой клетку Saccharomyces cerevisiae.

Как указано выше, рекомбинантная клетка согласно изобретению обладает способностью продуцировать гиалуроновую кислоту посредством вставки одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантные дрожжи согласно изобретению обладают способностью продуцировать гиалуроновую кислоту, имеющую контролируемый размер (контролируемую молекулярную массу), путем вставки одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот согласно настоящему изобретению.

Способы, применяемые для вставки конкретной ДНК-конструкции в ген, относятся к общим знаниям специалиста в данной области техники. Связанный способ более подробно описан в настоящем документе после примеров.

Однако возникли неожиданные технические трудности, поскольку последствия встраивания ДНК-конструкций в геном клетки и, в частности, в геном дрожжей, например, в геном Saccharomyces cerevisiae, непредсказуемы. В частности, выживаемость клеток и, в частности, дрожжей и их способность расти и продуцировать желаемую гиалуроновую кислоту также непредсказуемы.

Для получения рекомбинантной клетки и, в частности, рекомбинантных дрожжей согласно изобретению авторами изобретения было протестировано множество различных конструкций с целью получения жизнеспособной и эффективной рекомбинантной клетки и, в частности, дрожжей.

УСЛОВИЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

Настоящее изобретение также относится к применению рекомбинантной клетки по изобретению для продуцирования гиалуроновой кислоты, в частности, гиалуроновой кислоты с контролируемой молекулярной массой.

Настоящее изобретение также относится к способу продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу (HAMW), включающему:

(a) культивирование рекомбинантной клетки согласно настоящему изобретению в среде для культивирования в течение времени, достаточного для получения гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу; и

(b) необязательно выделение или извлечение гиалуроновой кислоты (HA) из рекомбинантной клетки и/или из среды для культивирования.

Как правило, клетки по изобретению и, в частности, дрожжи по изобретению выращивают при температуре в диапазоне от около 20 до около 37°С, предпочтительно при температуре в диапазоне от 27 до 34°С в подходящей среде для культивирования.

Подходящие питательные среды для клеток по изобретению и, в частности, для дрожжей по изобретению представляют собой обычные коммерчески полученные среды, такие как бульон, который содержит основу азотного агара для дрожжей, сульфат аммония и декстрозу в качестве источника углерода/энергии, или среда YPD (пептон декстроза дрожжей), смесь пептона, дрожжевого экстракта и декстрозы в оптимальных пропорциях для выращивания большинства. Также могут быть использованы другие определенные или синтетические питательные среды, и подходящая среда для роста конкретной клетки, и, в частности, дрожжей, будет известна специалисту в области микробиологии или науки о ферментации.

Конкретной средой, подходящей для данного изобретения, является среда SY, которая содержит следующие элементы:

KH₂PO₄: 100 мМ; MgSO₄×7H₂O: 2,8 мМ; K₂SO₄: 11,5 мМ; Na₂SO₄: 1,1 мМ; NaCl: 2,6 мМ; CaCl₂×2H₂O: 0,7 мМ; CuSO₄×5H₂O: 15 мкМ; KI: 6 мкМ; FeCl₃: 30 мкМ; ZnSO₄×7H₂O: 61 мкМ; MnSO₄×H₂O: 25 мкМ; H₂SO₄: 110 мкМ; гемикальциевая соль пантотеновой кислоты: 42 мкМ; гидрохлорид тиамина: 59 мкМ; гидрохлорид пиридоксина: 49 мкМ; мио-инозитол (C₆H₁₂O₆): 555 мкМ; никотиновая кислота (C₆H₅NO₂): 29 мкМ; D-биотин: 0,82 мкМ; цитрат аммония трехосновный: 33 мкМ; и глюкоза или сахароза 2-30 %.

Источники углерода, которые могут быть использованы в среде для культивирования, включают фруктозу, маннозу, ксилозу и арабинозу; олигосахариды, такие как лактоза, мальтоза, галактоза или сахароза; полисахариды, такие как крахмал или целлюлоза или их смеси; и неочищенные смеси из возобновляемого сырья, такие как сывороточный пермеат, кукурузный раствор, патока из сахарной свеклы и ячменный солод.

Источники азота, которые могут быть включены в среду для культивирования, включают пептон, дрожжевые экстракты, мясные экстракты, солодовые экстракты, мочевину, сульфат аммония, хлорид аммония, нитрат аммония, фосфат аммония, цитрат аммония и их комбинации.

Среда для культивирования может дополнительно содержать микроэлементы (например, соли металлов), например, соли магния, соли кобальта и/или соли марганца; а также факторы роста, такие как аминокислоты, витамины, промоторы роста и тому подобное.

Примеры витаминов, которые могут быть включены, представляют собой пантотеновые кислоты гемикальций, гидрохлорид тиамина; гидрохлорид пиридоксина; мио-инозитол; никотиновую кислоту; D-биотин, фолиевую кислоту, пара-аминобензойную кислоту, рибофлавин.

Среда для культивирования согласно настоящему изобретению может дополнительно включать редкие элементы, такие как CuSO₄×5H₂O, KI, FeCl₃, ZnSO₄×7H₂O, MnSO₄×H₂O или H₂SO₄, MgCl₂, CaCl₂, NaCl, K₂HPO₄, KH₂PO₄, ZnCl, H₃BO₃, MnSO₄, Na₂MoO₄.

Термин «подходящая среда для культивирования» определен выше.

Примеры известных сред для культивирования для рекомбинантной клетки согласно настоящему изобретению известны специалисту в данной области техники и представлены в следующей публикации D. Burke et al., Methods in yeast Genetics - A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual (2000).

Подходящие диапазоны рН для ферментации могут составлять от рН 3,0 до рН 7,5, где рН от 4 до 6 является предпочтительным в качестве начального условия.

Как упоминалось в других разделах настоящего описания, значение рН среды для культивирования можно регулировать в процессе стадии культивирования способа согласно изобретению для модуляции активности полипептида, направленной на активность гиалуронидазы, которая будет влиять на молекулярную массу молекул гиалуроновой кислоты, продуцируемых рекомбинантной клеткой согласно изобретению, и, в частности, рекомбинантными дрожжами согласно изобретению.

В частности, рН среды для культивирования может быть изменен в соответствии с гиалуроновой кислотой, которая предназначена для продуцирования рекомбинантными дрожжами. Например, рН среды для культивирования может оставаться на уровне рН 4, 5,5 или 6 в течение времени культивирования.

В конкретном варианте осуществления значение рН среды для культивирования может изменяться или быть измененным в течение времени культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению, в частности, рекомбинантных дрожжей согласно изобретению. Как упоминалось ранее, Saccharomyces cerevisiae подкисляет среду, в которой она культивируется, и, таким образом, снижает рН своей среды для культивирования. Например, значение рН среды для культивирования может начинаться с 6, может быть снижено до 4, а затем доведено обратно до 6. В другом примере значение рН среды для культивирования может начинаться с 6, оставаться или поддерживаться на уровне 6, а затем может быть снижено до 4.

В конкретном варианте осуществления значение рН среды для культивирования может быть модулировано в процессе стадии культивирования (а) способа согласно настоящему изобретению таким образом, чтобы в конце стадии культивирования способа согласно настоящему изобретению значение рН среды для культивирования являлось таким же, как значение рН в начале указанной стадии культивирования (а).

В другом варианте осуществления рН среды для культивирования может оставаться неизменным в течение времени культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению и, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки согласно изобретению.

Указанное время культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей согласно изобретению, может варьироваться в зависимости от молекулярной массы гиалуроновой кислоты, представляющей интерес. Чем больше указанное время, тем ниже молекулярная масса гиалуроновой кислоты в данной среде для культивирования рекомбинантной клетки по изобретению и, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки по изобретению.

Время культивирования рекомбинантной клетки согласно настоящему изобретению и, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки согласно настоящему изобретению, может составлять от около 35 часов до около 50 часов, предпочтительно от около 40 часов до около 50 часов и, в частности, составляет около 48 часов.

Ферментация может проводиться в аэробных или микроаэробных условиях.

Количество продукта гиалуроновой кислоты в ферментационной среде может быть определено с использованием ряда способов, известных в данной области техники, например, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) или газовой хроматографии (ГХ).

В настоящем способе может использоваться периодический способ ферментации. Классическая периодическая ферментация представляет собой замкнутую систему, в которой состав среды устанавливается в начале ферментации и не подвергается искусственным изменениям в процессе ферментации. Таким образом, в начале ферментации среду инокулируют желаемым организмом или организмами, и ферментации позволяют осуществляться без добавления чего-либо в систему. Однако, как правило, способ или система «периодической» ферментации является периодическим с точки зрения добавления источника углерода, и часто предпринимаются попытки контролировать такие факторы, как температура, рН и концентрация кислорода. В периодических системах состав метаболитов и биомассы системы постоянно изменяется до момента прекращения ферментации. В периодических культурах клетки переходят из статистической фазы задержки в логарифмическую фазу быстрого роста и, наконец, в стационарную фазу, где скорость роста уменьшается или останавливается. При отсутствии обработки клетки в стационарной фазе в конечном итоге погибнут. Клетки в логарифмической фазе обычно отвечают за основную часть производства конечного продукта или промежуточного продукта.

В настоящем изобретении также может быть использована система с подпиткой. Система с подпиткой аналогична типичной периодической системе, за исключением того, что субстрат источника углерода добавляется с приращениями по мере ферментации. Системы с подпиткой подходят, когда репрессия катаболитов (например, репрессия глюкозы) склонна ингибировать метаболизм клеток и когда желательно иметь ограниченное количество субстрата в среде. Измерение фактической концентрации субстрата в системах с подпиткой является сложным и поэтому оценивается на основе изменений измеряемых факторов, таких как рН, растворенный кислород и парциальное давление отходящих газов, таких как CO₂.

Способы периодического культивирования и культивирования с подпиткой широко распространены и хорошо известны в данной области техники, и примеры можно найти в Biotechnology: A Textbook of Industrial Microbiology, Crueger, Crueger, and Brock, Second Edition (1989) Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA, или Deshpande, Mukund V., Appl. Biochem. Biotechnol., 36, 227, (1992). Хотя настоящее изобретение осуществляют в периодическом режиме, предполагается, что способ может быть адаптирован для непрерывной ферментации.

Непрерывная ферментация представляет собой открытую систему, в которой определенную ферментационную среду непрерывно добавляют в биореактор и одновременно удаляют равное количество кондиционированной среды для обработки. Непрерывная ферментация обычно поддерживает культуры при постоянной высокой плотности, где клетки в основном находятся в логарифмической фазе роста.

Непрерывная ферментация позволяет модулировать один фактор или любое количество факторов, которые влияют на рост клеток или концентрацию конечного продукта. Например, один способ будет поддерживать лимитирующее питательное вещество, такое как источник углерода или уровень азота, с фиксированной скоростью и позволять варьировать все другие параметры. В других системах ряд факторов, влияющих на рост, может непрерывно изменяться, в то время как концентрация клеток, измеренная по мутности среды, остается постоянной. Непрерывные системы стремятся поддерживать устойчивые условия роста, и, таким образом, потерю клеток из-за удаления среды нужно соотносить со скоростью роста клеток при ферментации. Способы модуляции питательных веществ и факторов роста для непрерывных процессов ферментации, а также методы максимизации скорости образования продукта хорошо известны в области промышленной микробиологии.

Предполагается, что настоящее изобретение может быть осуществлено с использованием периодических процессов, процессов с подпиткой или непрерывных процессов, и что любой известный способ ферментации будет подходящим. Кроме того, предполагается, что клетки могут быть иммобилизованы на субстрате в виде цельноклеточных катализаторов и подвергнуты условиям ферментации для продукции.

Чтобы еще улучшить продукцию гиалуроновой кислоты, конкретный вариант осуществления может состоять из культивирования рекомбинантных клеток согласно изобретению, в частности, рекомбинантных дрожжевых клеток согласно изобретению, в подходящей среде для культивирования, такой как вышеупомянутая, где указанная среда для культивирования содержит оптимальное количество источника углерода, особенно глюкозы или сахарозы.

В предпочтительных вариантах осуществления источник углерода, содержащийся в указанной оптимальной среде для культивирования, состоит из глюкозы и/или сахарозы. В предпочтительных вариантах осуществления указанная оптимальная среда для культивирования содержит 1 мас.% или более глюкозы и/или сахарозы, в частности, содержит 5 мас.% или более глюкозы и/или сахарозы, в частности, содержит 10 мас.% или более глюкозы и/или сахарозы, в частности, содержит 15 мас.% или более глюкозы и/или сахарозы. В предпочтительных вариантах осуществления указанная оптимальная среда для культивирования содержит не более 40 мас.% глюкозы, что включает не более 35 мас.% глюкозы.

В предпочтительном варианте осуществления способ согласно изобретению осуществляют в промышленном масштабе.

Более конкретно, среда для культивирования способа согласно изобретению может составлять по меньшей мере около 100 л, более предпочтительно в диапазоне от около 1000 до около 3000 л, еще более предпочтительно около 10000 л, еще более предпочтительно 100000 л или даже около 250000 л.

Изобретение также относится к способу продуцирования гиалуроновой кислоты, как описано ранее, включающему стадии:

(a) культивирования рекомбинантной клетки согласно настоящему изобретению в среде для культивирования и

(b) извлечения гиалуроновой кислоты из указанной среды для культивирования,

где гиалуроновая кислота, извлеченная на стадии (b), имеет молекулярную массу, контролируемую путем выбора:

- природы и происхождения одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, рекомбинантной клетки по изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей по изобретению,

- природы и происхождения промотора, контролирующего экспрессию одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, рекомбинантной клетки по изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей по изобретению,

- наличие или отсутствие якорного сигнала, связанного с одной или более рекомбинантными нуклеиновыми кислотами, кодирующими полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, рекомбинантной клетки по изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей по изобретению,

- рН среды для культивирования в процессе стадии культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей; и/или

- продолжительности культивирования рекомбинантной клетки по изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей по изобретению.

Молекулярная масса гиалуроновой кислоты может представлять собой конкретную молекулярную массу или более предпочтительно конкретный диапазон молекулярных масс, такой как, например, менее 50 кДа, в диапазоне от около 20 до около 50 кДа, 50 кДа или более, в диапазоне от около 50 до около 150 кДа, в диапазоне от около 50 до около 250 кДа, 100 кДа или более, в диапазоне от около 100 до около 1500 кДа, в диапазоне от около 150 до около 1500 кДа, более 1000 кДа или более 1500 кДа.

Настоящее изобретение также относится к применению рекомбинантной клетки согласно изобретению и, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки согласно изобретению для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей молекулярную массу в диапазоне от около 20 до около 50 кДа или от около 50 до около 1000 кДа.

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, рекомбинантной клетки согласно изобретению могут, например, быть выбраны из тех, которые происходят или были получены из по меньшей мере одного из Cupiennius salei (Csa), Loxosceles intermedia (Li), Hirudo nipponia (Hn), Bothrops atrox (Ba), Tityus serrulatus (Ts) или Vespa magnifica (Vm), в частности, из по меньшей мере одного из Cupiennius salei (Csa), Loxosceles intermedia (Li ), Hirudo nipponia (Hn), Bothrops atrox (Ba) или Tityus serrulatus (Ts), более предпочтительно из тех из последовательностей, которые представлены как последовательности SEQ ID NO: 19 (Ba), SEQ ID NO: 25 (Li), SEQ ID NO: 21 (Csa), SEQ ID NO: 27 (Ts) или SEQ ID NO: 23 (Hn) (в присутствии сигнала секреции и в отсутствие якорного сигнала).

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, рекомбинантной клетки согласно изобретению могут, например, быть выбраны из тех, которые происходят или были получены из по меньшей мере одного из Cupiennius salei (Csa), Loxosceles intermedia (Li), Hirudo nipponia (Hn), Bothrops atrox (Ba), Tityus serrulatus (Ts) или Vespa magnifica (Vm), в частности, из Cupiennius salei (Csa), Loxosceles intermedia (Li), Hirudo nipponia (Hn), Bothrops atrox (Ba) или Tityus serrulatus (Ts), в частности, из последовательностей, представленных как последовательности SEQ ID NO: 22 (Csa), SEQ ID NO: 26 (Li), SEQ ID NO: 24 (Hn), SEQ ID NO: 20 (Ba) или SEQ ID NO: 28 (Ts) (в присутствии как сигнала секреции, так и якорного сигнала).

Одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, рекомбинантной клетки согласно изобретению могут, например, быть помещены под контроль промотора, выбранного из группы, состоящей из pTEF1, pCCW12, pCCW12.sba, pCCW12.Sar, pPDC1, pTEF3, pTDH3, pNUP57 и pCCW10.ago.

В частности, промоторы одной или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, рекомбинантной клетки согласно настоящему изобретению и, в частности, рекомбинантных дрожжей согласно настоящему изобретению могут происходить или быть получены из Saccharomyces Bayanus, Saccharomyces kudriavzevii, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces arboricola или других сахаромицетов или Abishia gossypii.

Сигнал секреции согласно настоящему изобретению может, например, иметь:

- нуклеотидную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 43; и/или

- аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 44.

Якорный сигнал согласно настоящему изобретению может, например, иметь:

- нуклеотидную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 45; и/или

- аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 46.

Сигнал секреции может быть слит с полипептидом, имеющим активность гилуронидазы, путем создания химерной нуклеиновой кислоты, начиная с нуклеотидной последовательности, кодирующей сигнальный пептид, за которой следует рекомбинантная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, как определено ранее.

Сигнал секреции и якорный сигнал могут быть слиты с полипептидом, имеющим активность гилуронидазы, путем создания химерной нуклеиновой кислоты, начиная с нуклеотидной последовательности, кодирующей сигнальный пептид, за которой следует рекомбинантная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, как определено ранее, за которой следует нуклеотидная последовательность, кодирующая якорный сигнал.

Такие химерные нуклеотидные последовательности могут быть получены методами, известными специалисту в данной области техники, такими как химический синтез нуклеиновых кислот или любые рекомбинантные методы, такие как клонирование или ПЦР.

Изобретение также относится к способу, как описано ранее, для продуцирования гиалуроновой кислоты, имеющей молекулярную массу около 50 кДа или менее, и, в частности, менее 50 кДа, и около 20 кДа или более, где:

(a) рН среды выше 4 и, в частности, находится в диапазоне от около 5 до около 7;

(b) одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, встроенная в геном рекомбинантной клетки согласно изобретению, происходит или получена:

(i) из Tityus serrulatus, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTDH3, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar;

(ii) из Cupiennius salei, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pNUP57 и pCCW10.ago;

(iii) из Cupiennius salei, обладает сигналом секреции и якорным сигналом и находится под контролем промотора pCWP2;

(iv) из Loxosceles intermedia, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTDH3, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar; или

(v) из Hirudo nipponia, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pNUP57 и pCCW10.ago; или

(vi) из Hirudo nipponia, обладает как сигналом секреции, так и якорным сигналом и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTDH3, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar; и

(c) стадию извлечения гиалуроновой кислоты из среды для культивирования проводят примерно через 48 часов после начала культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки согласно изобретению;

рекомбинантная клетка представляет собой, в частности, рекомбинантную дрожжевую клетку и, более конкретно, клетку Saccharomyces cerevisiae.

Изобретение также относится к способу, как описано ранее, для продуцирования гиалуроновой кислоты, имеющей молекулярную массу около 50 кДа или более и около 1000 кДа или менее, где:

(a) рН среды составляет от около 4 до около 6 и необязательно варьируется от около 6 до около 4 в процессе стадии культивирования рекомбинантной клетки, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки, согласно изобретению;

(b) одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, встроенная в геном рекомбинантной клетки согласно изобретению, происходит или получена:

(i) из Tityus serrulatus, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTDH3, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar;

(ii) из Tityus serrulatus, обладает как сигналом секреции, так и якорным сигналом и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTDH3, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar;

(iii) из Loxosceles intermedia, обладает как сигналом секреции, так и якорным сигналом и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pNUP57 и pCCW10.ago;

(iv) из Loxosceles intermedia, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTDH3, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar,

(v) из Cupiennius salei, обладает как сигналом секреции, так и якорным сигналом и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pNUP57 и pCCW10.ago;

(vi) из Cupiennius salei, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pNUP57 и pCCW10.ago; или

(vii) из Hirudo nipponia, обладает как сигналом секреции, так и якорным сигналом и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTDH3, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar; и

(c) стадию извлечения гиалуроновой кислоты из среды для культивирования проводят примерно через 48 часов после начала культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки согласно изобретению;

рекомбинантная клетка представляет собой, в частности, рекомбинантную дрожжевую клетку и, более конкретно, клетку Saccharomyces cerevisiae.

Изобретение также относится к способу, как описано ранее, для продуцирования гиалуроновой кислоты, имеющей молекулярную массу более чем около 1000 кДа и, в частности, имеющей молекулярную массу от около 1000 до около 1,5 млн Да, где:

(a) рН среды составляет от около 4 до около 6 и необязательно варьируется от около 6 до около 4 в процессе стадии культивирования рекомбинантной клетки, в частности, рекомбинантных дрожжей, согласно изобретению;

(b) одна или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, встроенная в геном рекомбинантной клетки согласно изобретению, происходит или получена:

(i) из Tityus serrulatus, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pNUP57 и pCCW10.ago;

(ii) из Loxosceles intermedia, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pNUP57 и pCCW10.ago;

(iii) из Bothrops atrox, обладает сигналом секреции, но лишена якорного сигнала, и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTDH3, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar; или

(iv) из Bothrops atrox, обладает как сигналом секреции, так и якорным сигналом и находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из pTDH3, pENO2, pTEF3, pTEF1, pPDC1, pCCW12, pCCW12.Sm, pCCW12.sk, pCCW12.sba, pCCW12.sar, pTDH3-1.Sba и pTDH3.Sar;

и

(c) стадию извлечения гиалуроновой кислоты из среды для культивирования проводят примерно через 48 часов после начала культивирования рекомбинантной клетки согласно изобретению, в частности, рекомбинантной дрожжевой клетки согласно изобретению;

рекомбинантная клетка представляет собой, в частности, рекомбинантные дрожжи и, более конкретно, клетку Saccharomyces cerevisiae.

Другой аспект настоящего изобретения относится к гиалуроновой кислоте (HA), полученной или получаемой из рекомбинантной клетки по изобретению или способом по изобретению.

Дополнительный аспект изобретения представляет собой среду для культивирования, содержащую гиалуроновую кислоту по изобретению.

Изобретение дополнительно относится к композиции, содержащей гиалуроновую кислоту согласно изобретению.

Изобретение также относится к промышленному изделию, или потребительскому продукту, или расходному материалу, содержащему (i) гиалуроновую кислоту по изобретению, (ii) среду для культивирования, содержащую гиалуроновую кислоту по изобретению, или (iii) композицию, содержащую гиалуроновую кислоту по изобретению.

В частности, указанное промышленное изделие, или потребительский продукт, или расходный материал согласно изобретению может представлять собой косметический продукт, вкусо-ароматическое вещество, парфюмерный продукт, пищевой продукт, продукт питания, напиток, текстурант, фармацевтическую композицию, биологически активную добавку, нутрицевтик, чистящее средство и/или стоматологическую композицию и/или композицию для гигиены полости рта.

ОЧИСТКА ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ

В соответствии с конкретным аспектом изобретения ферментативное получение гиалуроновой кислоты предпочтительно включает стадию извлечения гиалуроновой кислоты, полученной из среды для культивирования. Извлечение гиалуроновой кислоты из среды для культивирования является рутинной задачей для специалиста в данной области техники. Оно может быть достигнуто с помощью ряда методов, хорошо известных в данной области техники, включая, но не ограничиваясь, испарение через полупроницаемую мембрану, селективное осаждение, фильтрацию, центрифугирование, распылительную сушку, лиофилизацию или жидкостную экстракцию. Специалист в данной области знает, как адаптировать параметры каждого метода в зависимости от характеристик материала, подвергаемого извлечению.

Дрожжи в качестве модели клетки в настоящем изобретении предпочтительны тем, что синтезированная гиалуроновая кислота полностью выделяется за пределы клеток, что упрощает процесс очистки.

Удаление газа осуществляют отпарным газом, выбранным из гелия, аргона, диоксида углерода, водорода, азота или их смеси.

Жидкостная экстракция достигается с помощью органического растворителя в качестве гидрофобной фазы, такого как пентан, гексан, гептан или додекан. Также могут быть использованы восстановительные растворители.

Специалистам в данной области техники будет понятно, что из-за вырожденной природы генетического кода для кодирования данного фермента согласно настоящему изобретению могут быть использованы различные молекулы ДНК, отличающиеся своими нуклеотидными последовательностями. Нативная последовательность ДНК, кодирующая биосинтетические ферменты, описанные выше, упоминается в настоящем документе только для иллюстрации варианта осуществления настоящего изобретения, и настоящее изобретение включает молекулы ДНК любой последовательности, которые кодируют аминокислотные последовательности полипептидов и белков ферментов, используемых в способах по настоящему изобретению. Аналогичным образом, полипептид обычно может переносить одну или более аминокислотных замен, делеций и вставок в своей аминокислотной последовательности без потери или значительной потери желаемой активности. Настоящее изобретение включает такие полипептиды с аминокислотными последовательностями, отличными от специфических белков, описанных в настоящем документе, при условии, что модифицированные или вариантные полипептиды обладают ферментативной анаболической или катаболической активностью референсного полипептида. Кроме того, аминокислотные последовательности, кодируемые последовательностями ДНК, показанными в настоящем документе, просто иллюстрируют варианты осуществления настоящего изобретения.

В настоящем документе описаны специфические гены и белки, пригодные для применения в способах, композициях и организмах по настоящему изобретению; однако следует понимать, что абсолютная идентичность с такими генами не является необходимой. Например, изменения в конкретном гене или полинуклеотиде, содержащем последовательность, кодирующую полипептид или фермент, могут быть выполнены и подвергнуты скринингу на активность. Как правило, такие изменения включают консервативные мутации и молчащие мутации. Такие модифицированные или мутированные полинуклеотиды и полипептиды могут быть подвергнуты скринингу на экспрессию функционального фермента с использованием способов, известных в данной области техники.

Из-за присущей вырожденности генетического кода для клонирования и экспрессии полинуклеотидов, кодирующих такие ферменты, также могут быть использованы другие полинуклеотиды, которые кодируют по существу те же или функционально эквивалентные полипептиды.

Методики, известные специалистам в данной области техники, могут быть пригодны для идентификации дополнительных гомологичных генов и гомологичных ферментов. Как правило, аналогичные гены и/или аналогичные ферменты могут быть идентифицированы с помощью функционального анализа и будут иметь функциональное сходство.

Способы, известные специалистам в данной области техники, могут быть пригодны для идентификации аналогичных генов и аналогичных ферментов или любых генов, белков или ферментов пути биосинтеза, указанные способы могут включать, но не ограничиваются, клонирование гена с помощью ПЦР с использованием праймеров на основе опубликованной последовательности гена/фермента, представляющего интерес, или с помощью вырожденной ПЦР с использованием вырожденных праймеров, предназначенных для амплификации консервативной области среди представляющего интерес гена. Кроме того, специалист в данной области техники может использовать способы для идентификации гомологичных или аналогичных генов, белков или ферментов с функциональной гомологией или сходством. Способы включают изучение клетки или клеточной культуры на каталитическую активность фермента с помощью ферментных анализов in vitro на указанную активность (например, как описано в настоящем документе или в Kiritani, K., Branched-Chain Amino Acids Methods Enzymology, 1970), затем выделение фермента с указанной активностью путем очистки, определение белковой последовательности фермента с помощью таких методов, как расщепление по Эдману, конструирование праймеров ПЦР до вероятной нуклеотидной последовательности, амплификация указанной последовательности ДНК с помощью ПЦР и клонирование указанной нуклеотидной последовательности. Для идентификации гомологичных или подобных генов и/или гомологичных или подобных ферментов, аналогичных генов и/или аналогичных ферментов или белков способы также включают сравнение данных, касающихся гена-кандидата или гена-фермента, с базами данных, такими как BRENDA, KEGG или MetaCYC. Ген-кандидат или ген-фермент могут быть идентифицированы в вышеупомянутых базах данных в соответствии с изложенными в настоящем документе данными.

ПРОИЗВОДНЫЕ

Термин «гиалуроновая кислота (HA)», используемый в настоящем документе, также предназначен для охвата производных гиалуроновой кислоты, таких как, но не ограничиваясь, ацетилированная или сульфатированная гиалуроновая кислота, пригодная для применения в косметическом продукте, вкусо-ароматическом веществе, парфюмерном продукте, пищевом продукте, продукте питания, напитке, текстуранте, фармацевтической композиции, биологически активной добавке, нутрицевтике, чистящем средстве и/или стоматологической композиции и/или композиции для гигиены полости рта или их комбинациях.

Гиалуроновая кислота может быть получена в виде композиции.

СОСТАВЫ И ПРОДУКТЫ

Композиция по настоящему изобретению может быть включена в состав/продукт, такой как нутрицевтический, фармацевтический, ветеринарный, энологический или косметический состав/продукт.

Таким образом, в настоящем изобретении предложен состав, содержащий композицию по изобретению. Например, в настоящем изобретении может быть предложен косметический состав, содержащий композицию согласно изобретению.

В настоящем изобретении также предложен продукт, содержащий композицию по изобретению. Например, в настоящем изобретении может быть предложен косметический продукт, содержащий композицию согласно изобретению.

«Косметический продукт» означает любое вещество или смесь, предназначенную для контакта с внешними частями человеческого тела (эпидермис, волосяная система, ногти, губы и внешние половые органы) или с зубами и слизистыми оболочками полости рта исключительно или главным образом с целью их очистки, придания запаха, изменения их внешнего вида, их защиты, поддержания их в хорошем состоянии, коррекции запахов тела и/или их комбинаций.

Подразумевается, что «вещество» означает химический элемент и его соединения в естественном состоянии или полученные любым способом производства, включая любую добавку, необходимую для сохранения его стабильности, и любую примесь, полученную в результате используемого способа, но исключая любой растворитель, который может быть отделен, не влияя на стабильность вещества или изменяя его состав.

«Смесь» предназначена для обозначения смеси или раствора, состоящего из двух или более веществ.

Настоящее изобретение также относится к применению композиции по изобретению в нутрицевтическом, фармацевтическом, ветеринарном, энологическом или косметическом составе/продукте.

Такие составы или продукты далее упоминаются как «составы или продукты по изобретению».

Нутрицевтический, фармацевтический, ветеринарный, энологический или косметический состав/продукт может необязательно дополнительно содержать фармацевтические/ветеринарные/косметические (включая косметически активные) ингредиенты, такие как эксципиенты, носители и их смеси, в зависимости от обстоятельств.

«Косметические» или «косметические активные ингредиенты» означают любые и все природные, встречающиеся в природе, идентичные природным, синтетические, полученные синтетически, полученные биосинтетически, устойчивые, возобновляемые и/или биоразлагаемые соединения, ингредиенты, промежуточные продукты, молекулы, вещества, исходные материалы или продукты по отдельности или в составе смеси соединений, ингредиентов, промежуточных продуктов, молекул, веществ, исходных материалов или продуктов, смесей, композиций, составов (включая, но не ограничиваясь, увлажняющие средства для кожи, кремы, бальзамы, сыворотки, масла, косметику для лица, смываемые средства для волос, несмываемые средства для волос, красители для волос (включая но не ограничиваясь, натуральные красители для волос) и/или их комбинации), готовые продукты и родственные технологии, включая, но не ограничиваясь, компоненты, включенные, например, в косметический состав (такие как, но не ограничиваясь, натуральные красители, консерванты, эмульгаторы, антиоксиданты и тому подобное, которые, например, не обладают активностью на коже, волосах, коже головы и тому подобном, но играют роль в составе готового продукта), системы доставки, маркетинговые вспомогательные средства (такие как, например, окрашенные унисферы, применяемые к полупрозрачным составам) и способы получения чего-либо, относящегося к ним, пригодного для использования/используемого для/предназначенного для:

- нанесения путем втирания, обливания, разбрызгивания, распыления или иным образом непосредственно на или к телу человека или животного и/или путем приведения в контакт с различными внешними и/или поверхностными частями тела человека или животного (включая, но не ограничиваясь, кожу, волосы, волосы на теле, волосяную систему, кожу головы, ногти, губы, внешние половые органы, зубы, слизистую оболочку полости рта и/или носа и тому подобное) и/или непрямое нанесение на или к телу человека или животного, такое как, например, нанесение в составе ткани или нанесение на ткань как часть устройства доставки (такого как капсула) или системы доставки (такой как смеси или составы), нанесенной на ткань; и/или

- очищения, ухода, охлаждения, украшения, кондиционирования, обработки, успокаивания, текстурирования, повышения привлекательности, защиты, поддержания, улучшения, усиления, переделывания и/или изменения внешней части и/или поверхности тела человека или животного (такой как, но не ограничиваясь, кожа головы) или эстетического внешнего вида тела человека или животного; и/или с целью главным образом очистки или придания аромата, или защиты или поддержания в хорошем состоянии, или борьбы с запахом тела, или изменения внешнего вида, или исправления или восстановления состояния дисбаланса кожи, слизистой оболочки полости рта, кожи головы или волос путем обеспечения успокаивания, заживления, восстановления или оживления, увлажнения кожи или для облегчения, смазывания, увлажнения, тонуса, заживления, стерилизации, облегчения, коррекции и/или устранения состояний сухости, раздражения, травмы или усталости, и/или с целью коррекции нарушений пигментации или обеспечения нефармацевтического предотвращения и/или лечения перхоти, акне, раздражения и/или воспаления и тому подобного и/или восстановления баланса бактериальной флоры (например, микробиома) на поверхности кожи (например, например, путем повышения уровня полезной бактериальной флоры на поверхности кожи) и/или в целях поддержания тела человека или животного в хорошем состоянии для целей здоровья и/или благополучия и/или для улучшения внешнего вида тела человека или животного, например, путем улучшения внешнего вида продукта, нанесенного на человека или тело; и/или

- обеспечения косметической и/или дерматологической функции и/или преимущества с пользой для биологической активности (но без влияния на структуру или функцию организма). во избежание сомнений, косметический или косметический активный ингредиент или любая его часть также может квалифицироваться как функциональный ингредиент и/или нутрицевтик.

«Функциональный ингредиент» означает пищевой ингредиент или часть пищевого продукта, который обеспечивает лекарственные преимущества или пользу для здоровья, включая любое из следующего: каротиноид, пищевые волокна, жирные кислоты, сапонин, антиоксидант, флавоноид, изотиоцианат, фенол, полифенол (такой как ресвератрол), растительный стерол или станол (фитостеролы и фитостанолы), полиол, пребиотик, фитоэстроген, соевый белок, сульфиды/тиол, витамин, глюкозамин, консерванты, гидратационные агенты, пищевые гелеобразующие ингредиенты, пищевые гелевые смеси и гелевые композиции, длинноцепочечные первичные алифатические насыщенные спирты, красители, текстурирующие агенты, эмульгаторы и их комбинации.

«Нутрицевтик» означает любые и все природные, встречающиеся в природе, устойчивые, полученные синтетически и полученные биосинтетически соединения, смеси соединений, функциональные ингредиенты, молекулы, композиции, исходные материалы и промежуточные продукты (включая связанные с ними компоненты и устройства доставки (такие как капсулы), их системы доставки (такие как смеси или составы) и способы получения вышеуказанного), которые связаны со здоровьем и/или косметическими преимуществами, а также улучшением или поддержанием физических свойств тела человека. во избежание сомнений, нутрицевтики включают соединения, которые могут быть использованы в качестве добавок к пище или напитку, будь то твердый состав, капсула, таблетка, жидкий состав, раствор или суспензия.

Альтернативно, нутрицевтический, фармацевтический, ветеринарный, энологический или косметический состав/продукт может состоять или по существу состоять из композиции по изобретению.

Косметический состав/продукт может представлять собой антивозрастной состав.

В данном контексте ссылки на фармацевтически, ветеринарно или косметически приемлемые эксципиенты могут относиться к фармацевтически, ветеринарно или косметически приемлемым адъювантам, разбавителям и/или носителям, известным специалистам в данной области техники.

Под «фармацевтически/ветеринарно/косметически приемлемым» подразумевается, что дополнительные компоненты композиции, как правило, безопасны, нетоксичны и ни биологически, ни иным образом нежелательны. например, дополнительные компоненты могут быть, как правило, стерильными и апирогенными. Такие компоненты должны быть «приемлемыми» в том смысле, что они совместимы с композицией по настоящему изобретению и не вредны для ее реципиентов. таким образом, «фармацевтически приемлемые эксципиенты» включают любое соединение(-я), используемое(-ые) для формирования части состава, которое предназначено для действия только в качестве эксципиента, то есть не предназначено для проявления биологической активности.

Нутрицевтический, фармацевтический, ветеринарный, энологический или косметический состав/продукт может быть в форме жидкости или твердого вещества.

Жидкие лекарственные составы/продукты для перорального введения включают растворы, эмульсии, водные или масляные суспензии, сиропы и эликсиры.

Составы и продукты (например, фармацевтические, ветеринарные или косметические составы/продукты), описанные в настоящем документе, например, предназначенные для перорального введения, могут быть получены в соответствии со способами, известными специалистам в данной области техники, например, путем смешивания компонентов состава/продукта вместе.

Состав или продукт (например, фармацевтический, ветеринарный или косметический состав/продукт) может содержать один или более дополнительных ингредиентов, таких как фармацевтические ингредиенты и эксципиенты, такие как подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты.

Состав или продукт (например, фармацевтический, ветеринарный или косметический состав/продукт) также может содержать один или более дополнительных активных ингредиентов, таких как косметические или фармацевтические активные ингредиенты, такие как гиалуроновая кислота, экстракт центеллы азиатской, пептиды, такие как matrixyl® и argireline®, и их смеси.

Состав или продукт согласно настоящему изобретению может содержать активный ингредиент(-ы) в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами (или ингредиентами). эти эксципиенты (или ингредиенты) могут быть, например, инертными разбавителями, такими как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующими и дезинтегрирующими агентами, например, кукурузным крахмалом, мальтодекстрином или альгиновой кислотой; связующими агентами, например, крахмалом, желатином или аравийской камедью; или смазывающими агентами, например, стеаратом магния, стеариновой кислотой, тальком и их смесями.

Жидкие составы или продукты (например, фармацевтические, ветеринарные или косметические составы/продукты) могут содержаться в капсуле, которая может быть без покрытия или с покрытием, как определено выше.

Подходящие фармацевтические или ветеринарные носители включают инертные твердые разбавители или наполнители, стерильные водные растворы и различные органические растворители. примерами жидких носителей являются сироп, арахисовое масло, оливковое масло, фосфолипиды, жирные кислоты, амины жирных кислот, полиоксиэтилен и вода.

Кроме того, носитель или разбавитель может включать любой материал с замедленным высвобождением, известный в данной области техники, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, отдельно или смешанный с воском.

Подходящие фармацевтические носители включают инертные стерильные водные растворы и различные органические растворители. примерами жидких носителей являются сироп, растительные масла, фосфолипиды, жирные кислоты, амины жирных кислот, полиоксиэтилен и вода. кроме того, носитель или разбавитель может включать любой материал с замедленным высвобождением, известный в данной области техники, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, отдельно или смешанный с воском.

Подходящие косметические носители обычно представляют собой носители, которые подходят для местного введения на внешнюю поверхность тела человека, такую как кожа, и/или волосы, и/или кожа головы.

Как правило, такие носители являются дерматологически приемлемыми.

Фраза «дерматологически приемлемый носитель» означает, что носитель подходит для местного нанесения на кератиновую ткань, обладает хорошими эстетическими свойствами, совместим с активными веществами в композиции и не вызывает каких-либо необоснованных проблем с безопасностью или токсичностью.

Носитель может быть в самых разнообразных формах. в некоторых случаях растворимость или диспергируемость компонентов (например, экстрактов, солнцезащитных активных, дополнительных компонентов) может определять форму и характер носителя. неограничивающие примеры включают простые растворы (например, водные или безводные), дисперсии, эмульсии и твердые формы (например, гели, стики, жидкотекучие твердые вещества или аморфные материалы).

Дерматологически приемлемый носитель может быть в форме эмульсии. эмульсия обычно может быть классифицирована как имеющая непрерывную водную фазу (например, масло в воде и вода в масле в воде) или непрерывную масляную фазу (например, вода в масле или масло в воде). масляная фаза по настоящему изобретению может содержать силиконовые масла, несиликоновые масла, такие как углеводородные масла, сложные эфиры, простые эфиры и тому подобное, и их смеси. водная фаза обычно содержит воду и водорастворимые ингредиенты (например, водорастворимые увлажняющие агенты, кондиционирующие агенты, антимикробные препараты, увлажнители и/или другие активные вещества для ухода за кожей). однако в некоторых случаях водная фаза может содержать компоненты, отличные от воды, включая, но не ограничиваясь, водорастворимые увлажняющие агенты, кондиционирующие агенты, антимикробные препараты, увлажнители и/или другие водорастворимые активные вещества для ухода за кожей. в некоторых случаях неводный компонент композиции содержит увлажнитель, такой как глицерин и/или другой полиол(-ы). эмульсии также могут содержать эмульгатор. эмульгаторы могут быть неионными, анионными или катионными.

Носитель может содержать один или более дерматологически приемлемых гидрофильных разбавителей. в данном контексте «разбавитель» включает материалы, в которых композиция по изобретению может быть диспергирована, растворена или иным образом включена. гидрофильные разбавители включают воду, органические гидрофильные разбавители, такие как низшие одновалентные спирты (например, c1-c4), и низкомолекулярные гликоли и полиолы, включая пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, глицерин, бутиленгликоль, 1,2,4-бутантриол, сложные эфиры сорбитола, 1,2,6-гексантриол, этанол, изопропанол, сложные эфиры сорбитола, бутандиол, простой эфир пропанола, этоксилированные простые эфиры, пропоксилированные простые эфиры и их комбинации.

Косметический состав/продукт может необязательно содержать один или более дополнительных ингредиентов, обычно используемых в косметических композициях (например, красители, агенты для тонуса кожи, агенты против старения кожи, противовоспалительные агенты, солнцезащитные агенты, их комбинации и тому подобное), при условии, что дополнительные ингредиенты нежелательно не изменяют антигликирующие преимущества, обеспечиваемые композицией.

В некоторых случаях может быть желательным выбрать агенты для тонуса кожи, которые функционируют посредством различных биологических путей, чтобы активные вещества не мешали друг другу, что может снизить эффективность обоих агентов. Дополнительные ингредиенты, при включении в композицию, должны быть пригодны для применения в контакте с кожной тканью человека без чрезмерной токсичности, несовместимости, нестабильности, аллергической реакции и тому подобного.

Термин «носитель», используемый в данном документе, может также относиться к натуральному продукту или продукту, происходящему из природы, который был трансформирован или модифицирован таким образом, что он отличается от натурального продукта, из которого он произошел, такой как мальтодекстрин.

Количество композиции по изобретению, присутствующей в нутрицевтических, фармацевтических, ветеринарных, энологических или косметических составах или продуктах, будет варьироваться в зависимости от применения.

Как правило, количество композиции по настоящему изобретению, которое может присутствовать в нутрицевтических, фармацевтических, ветеринарных, энологических или косметических составах или продуктах, составляет от около 0,001 до около 50 мас.%, например, от около 0,01 до около 30 % или от около 1 до около 20 % нутрицевтических, фармацевтических, ветеринарных, энологических или косметических составов или продуктов, например, от около 0,01 до около 20 мас.%, или от около 0,1 до 10 мас.%, или от около 1 до около 5 мас.% состава или продукта.

Специалистам в данной области техники будет понятно, что из-за вырожденной природы генетического кода для кодирования данного фермента согласно настоящему изобретению могут быть использованы различные молекулы днк, отличающиеся своими нуклеотидными последовательностями. Нативная последовательность днк, кодирующая биосинтетические ферменты, описанные выше, упоминается в настоящем документе только для иллюстрации варианта осуществления настоящего изобретения, и настоящее изобретение включает молекулы днк любой последовательности, которые кодируют аминокислотные последовательности полипептидов и белков ферментов, используемых в способах по настоящему изобретению. Аналогичным образом, полипептид обычно может переносить одну или более аминокислотных замен, делеций и вставок в своей аминокислотной последовательности без потери или значительной потери желаемой активности. Настоящее изобретение включает такие полипептиды с аминокислотными последовательностями, отличными от специфических белков, описанных в настоящем документе, при условии, что модифицированные или вариантные полипептиды обладают ферментативной анаболической или катаболической активностью референсного полипептида. Кроме того, аминокислотные последовательности, кодируемые последовательностями днк, показанными в настоящем документе, просто иллюстрируют варианты осуществления настоящего изобретения.

В настоящем документе описаны специфические гены и белки, пригодные для применения в способах, композициях и организмах по настоящему изобретению; однако следует понимать, что абсолютная идентичность с такими генами не является необходимой. например, изменения в конкретном гене или полинуклеотиде, содержащем последовательность, кодирующую полипептид или фермент, могут быть выполнены и подвергнуты скринингу на активность. как правило, такие изменения включают консервативные мутации и молчащие мутации. Такие модифицированные или мутированные полинуклеотиды и полипептиды могут быть подвергнуты скринингу на экспрессию функционального фермента с использованием способов, известных в данной области техники.

Из-за присущей вырожденности генетического кода для клонирования и экспрессии полинуклеотидов, кодирующих такие ферменты, также могут быть использованы другие полинуклеотиды, которые кодируют по существу те же или функционально эквивалентные полипептиды.

Методики, известные специалистам в данной области техники, могут быть пригодны для идентификации дополнительных гомологичных генов и гомологичных ферментов. Как правило, аналогичные гены и/или аналогичные ферменты могут быть идентифицированы с помощью функционального анализа и будут иметь функциональное сходство.

Способы, известные специалистам в данной области техники, могут быть пригодны для идентификации аналогичных генов и аналогичных ферментов или любых генов, белков или ферментов пути биосинтеза, указанные способы могут включать, но не ограничиваются, клонирование гена с помощью пцр с использованием праймеров на основе опубликованной последовательности гена/фермента, представляющего интерес, или с помощью вырожденной пцр с использованием вырожденных праймеров, предназначенных для амплификации консервативной области среди представляющего интерес гена. кроме того, специалист в данной области техники может использовать методики для идентификации гомологичных или аналогичных генов, белков или ферментов с функциональной гомологией или сходством. методы включают изучение клетки или клеточной культуры на каталитическую активность фермента с помощью ферментных анализов in vitro на указанную активность (например, как описано в настоящем документе или в kiritani, k., branched-chain amino acids methods enzymology, 1970), затем выделение фермента с указанной активностью путем очистки, определение белковой последовательности фермента с помощью таких методов, как расщепление по эдману, конструирование праймеров ПЦР до вероятной нуклеотидной последовательности, амплификация указанной последовательности днк с помощью ПЦР и клонирование указанной нуклеотидной последовательности. для идентификации гомологичных или подобных генов и/или гомологичных или подобных ферментов, аналогичных генов и/или аналогичных ферментов или белков способы также включают сравнение данных, касающихся гена-кандидата или гена-фермента, с базами данных, такими как brenda, kegg или metacyc. ген-кандидат или ген-фермент могут быть идентифицированы в вышеупомянутых базах данных в соответствии с изложенными в настоящем документе данными.

Термины «от … до …» и «в диапазоне от... до...» следует понимать как включающие пределы, если не указано иное. в настоящем описании и следующей формуле изобретения, если из контекста не следует иное, слово «содержат» и такие вариации, как «содержит», «содержащий» и «имеет», следует понимать как подразумевающие включение указанного целого числа или стадии или группы целых чисел или стадий, но не исключение любого другого целого числа или стадии или группы целых чисел или стадий. термин «содержащий» также означает «включающий», а также «состоящий», например, композиция, «содержащая» x, может состоять исключительно из x или может включать что-то дополнительное, например, x + y. следует также отметить, что, как используется в настоящем описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если содержание явно не диктует иное. в качестве примера, ссылка на «ген» или «фермент» представляет собой ссылку на «один или более генов» или «один или более ферментов».

Следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными методиками, протоколами и реагентами, описанными в настоящем документе, поскольку они могут варьироваться. следует также отметить, что терминология, используемая в настоящем документе, предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения, который будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения. если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют те же значения, которые обычно понимаются специалистом в данной области техники. в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы общепринятые методы молекулярной биологии, микробиологии и рекомбинантной днк, которые находятся в пределах компетенции специалиста в данной области техники.

Это изобретение не ограничивается в своем применении деталями конструкции и расположением компонентов, изложенными в следующем описании или проиллюстрированными на фигурах. настоящее изобретение может быть реализовано другими вариантами осуществления и может быть реализовано на практике или осуществлено различными способами. кроме того, формулировки и терминология, используемые в настоящем документе, предназначены для описания и не должны рассматриваться как ограничивающие. предпочтительно термины, используемые в настоящем документе, определены, как описано в "a multilingual glossary of biotechnological terms: (iupac recommendations)", leuenberger, h.g.w, nagel, b. and kolbl, h. eds. (1995), helvetica chimica acta, ch-4010 basel, switzerland).

В тексте настоящего описания приведены ссылки на несколько документов. каждый из документов, цитируемых в настоящем документе (включая все патенты, патентные заявки, научные публикации, спецификации производителя, инструкции, представления последовательности регистрационных номеров genbank и т. д.), будь то указанные ранее или далее, полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Следующие примеры и фигуры представлены в качестве иллюстрации и не подразумевают ограничение изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Протокол получения рекомбинантного штамма Saccharomyces cerevisiae согласно изобретению

Все далее реализованные рекомбинантные штаммы saccharomyces cerevisiae были сконструированы из стандартных штаммов с использованием стандартной процедуры молекулярной генетики дрожжей (Methods In Yeast Genetics - A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual (2000) by d. Burke, d. Dawson, t. Stearns cshl press).

Кластер следующих упомянутых генов интегрировали в рекомбинантные дрожжи сразу, используя способность дрожжей эффективно рекомбинировать свободные концы днк, которые имеют гомологию последовательностей.

Кроме того, для лучшего понимания следующих генотипов:

- jlp1, lyp1, sam3, his3, leu2, trp1 и ura3 являются сайтами встраивания.

- строчные буквы означают, что рассматриваемый ген неактивен, заглавные буквы отражают активный ген.

- «::»: после названия гена означает, что ген прерывается последующим (если вставлено более одного гена, они указаны в скобках []). прерывание гена сопутствует полной делеции кодирующей последовательности, но сохраняет промотор. следовательно, ген, за которым следует «::», неактивен и отмечен строчными буквами. если не указано, транскрипция вставленного гена контролируется промотором нарушенного гена.

- «gene.Kl» означает, что ген происходит из Kluyveromyces lactis.

Более конкретно, кодирующие последовательности, подлежащие клонированию, были искусственно синтезированы. для гетерологичных последовательностей (не дрожжевых) нуклеотидные последовательности модифицировали для получения синонимичной кодирующей последовательности с использованием частоты использования дрожжевого кодона. используя фермент рестрикции и классическую технологию клонирования, каждую синтетическую последовательность клонировали между промотором транскрипции и терминатором транскрипции. каждой промоторной последовательности предшествует последовательность от 50 до 200 нуклеотидов, гомологичная последовательности терминатора вышележащего гена. аналогично, за терминатором каждого гена (гена, содержащего промотор-кодирующая последовательность-терминатор) следуют последовательности, гомологичные непосредственно следующему гену. Таким образом, каждая единица, подлежащая интеграции, имеет от 50 до 200 нуклеотидов, перекрывающихся как с единицей выше по потоку, так и с единицей ниже по потоку. Для первой единицы промотору предшествуют от 50 до 200 нуклеотидов, гомологичных нуклеотиду дрожжевой хромосомы для локуса, в который он будет интегрирован. Аналогично, для последней единицы за терминатором следуют от 50 до 200 нуклеотидов, гомологичных нуклеотиду дрожжевой хромосомы для локуса, в который он будет интегрирован.

Затем каждую единицу амплифицируют пцр из конструкций плазмид с получением x единицы линейной днк, имеющей перекрывающиеся последовательности. по меньшей мере один из этих генов является ауксотрофным маркером для выбора события рекомбинации. все линейные фрагменты трансформируют в дрожжах сразу, и выбирают рекомбинантную дрожжевую клетку для ауксотрофии, связанной с используемым маркером. Затем целостность последовательности проверяют с помощью пцр и секвенирования.

Пример 2: Сравнительные примеры продуцирования гиалуроновой кислоты

1. Продукция гиалуроновой кислоты менее 50 кДа

A. Сначала получают три рекомбинантных штамма: YA5234-1, YA5235-1 и YA5302-2.

Соответственно, эти три штамма являются следующими:

YA5234-1: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1- tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW12.sba-HYAL-3.Ts-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

YA5235-1: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1- tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pNUP57-HYAL-3.Csa-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

YA5302-2: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1- tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW12.Sba-HYAL-3.Li-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

HYAL-3 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, ассоциированную с сигналом секреции, но не якорным сигналом.

Все HASA, HASA-1, HASA-A, HASA2 и XHASA2 представляют собой нуклеиновую кислоту, кодирующую полипепид, имеющий активность гиалуронан-синтазы. Они отличаются друг от друга тем, что представляют собой различные перекодированные варианты нуклеотидной последовательности, кодирующей ферменты гиалуронан-синтазы. HASA-1 имеет последовательность SEQ ID NO: 1, HASA-A имеет последовательность SEQ ID NO: 2, HASA2 имеет последовательность SEQ ID NO: 7, и XHASA2 имеет последовательность SEQ ID NO: 6.

HASB и HASB-A представляют собой нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий активность UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы. Они отличаются друг от друга тем, что представляют собой различные перекодированные варианты нуклеотидной последовательности, кодирующей фермент. HASB.At имеет последовательность SEQ ID NO: 12, HASB.Vir имеет последовательность SEQ ID NO: 13, и HASB-A.Vir имеет последовательность SEQ ID NO: 14.

Все эти штаммы инкубировали в 25 мл среды SY, забуференной MES 0,1 M pH 5,5, в колбе Эрленмейера с дефлекторами в течение 48 часов при 28°C при энергичном перемешивании.

Среда SY содержит следующие элементы:

KH₂PO₄: 100 мм; MgSO₄×7H₂O: 2,8 мм; K₂SO₄: 11,5 мм; Na₂SO₄: 1,1 мм; NaCl: 2,6 мм; CaCl₂×2H₂O: 0,7 мм; CuSO₄×5H₂O: 15 мкм; KI: 6 мкм; FeCl₃: 30 мкм; ZnSO₄×7H₂O: 61 мкм; MnSO₄×H₂O: 25 мкм; H₂SO₄: 110 мкм; гемикальциевая соль пантотеновой кислоты: 42 мкм; гидрохлорид тиамина: 59 мкм; гидрохлорид пиридоксина: 49 мкм; мио-инозитол (C₆H₁₂O₆): 555 мкм; никотиновая кислота (C₆H₅NO₂): 29 мкм; D-биотин: 0,82 мкм; цитрат аммония трехосновный: 33 мкм; и глюкоза или сахароза от 2 до 30 %.

Питательную среду извлекали через 48 часов и анализировали на содержание и качество гиалуроновой кислоты. Аликвоту среды загружали и пропускали через 0,5% агарозный гель, затем окрашивали «универсальным красителем» (Sigma Aldrich CAS номер 7423-31-6).

Количество гиалуроновой кислоты, присутствующей в среде, оценивали с помощью колориметрического определения после обработки концентрированной серной кислотой и карбазолом (Bitter and Muir (1962) analytical biochemistry 4, 330-334).

В иллюстративных целях агарозный гель, полученный после пропускания аликвоты супернатанта штамма YA5235-1 и окрашивания ее «универсальным красителем» (номер CAS 7423-31-6), представлен на фигуре 2A. Классически его вводят в гель бок о бок со стандартами молекулярной массы (мм) ha (слева направо мм 10 кДа, 20 кДа, 50 кДа и 300 кДа).

Количество, полученное с этими различными штаммами, составляет соответственно:

- YA5234-1: 2,4 г.л^-1.

- YA5235-1: 4,5 г.л^-1.

- YA5302-2: 3,7 г.л^-1.

Для сравнения, нативный штамм дрожжей, например, штамм CC788-2D (Chérest et al. (2000) J Biol. Chem. 275: 14056-14063), не продуцирует гиалуроновую кислоту.

Из этого эксперимента следует, что рекомбинантный штамм, содержащий модификации согласно изобретению, продуцирует большее количество гиалуроновой кислоты при культивировании в тех же условиях по сравнению с другими рекомбинантными штаммами, не содержащими всех генетических модификаций согласно изобретению.

Кроме того, эти три штамма привели к получению через 48 часов гиалуроновой кислоты, имеющей молекулярную массу от 20 до 50 кДа.

B. Также были получены три других рекомбинантных штамма: YA5110-13 и YA5260-4.

Эти три штамма являются следующими:

YA5110-13: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3, pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pNUP57-HYAL-3.Hn-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1-TRP1]x2

YA5260-4: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1- HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pTEF3-HYAL-31.Hn-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

YA5569: MAT-α, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA-1.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCWP2-HYAL-31.Csa-tRPL15A, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tRPL41B, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[tRPL3-HASB.Vir-pMET6, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1, TRP1]x2

HYAL-31 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, связанную как с сигналом секреции, так и с якорным сигналом.

Все HASA-1, HASA-A, HASA2 и XHASA2 представляют собой нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы. Они отличаются друг от друга тем, что представляют собой различные перекодированные варианты нуклеотидной последовательности, кодирующей фермент гиалуронан-синтазу. HASA-1 имеет последовательность SEQ ID NO: 1, HASA-A имеет последовательность SEQ ID NO: 2, HASA2 имеет последовательность SEQ ID NO: 7, и XHASA2 имеет последовательность SEQ ID NO: 6.

HASB и HASB-A представляют собой нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий активность UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы. Они отличаются друг от друга тем, что представляют собой различные перекодированные варианты нуклеотидной последовательности, кодирующей фермент. HASB.At имеет последовательность SEQ ID NO: 12, HASB.Vir имеет последовательность SEQ ID NO: 13, и HASB-A.Vir имеет последовательность SEQ ID NO: 14.

Штаммы инокулировали в 2 литрах вышеуказанной среды SY при pH 6 в 2% сахарозе и 500 мкМ CuSO₄ в биореакторе. Затем их выращивали с подпиткой, добавляя 500 мкМ CuSO₄ через 7 ч, 24 ч, 31 ч и от 130 до 175 г.л^-1 сахарозы от 10 до 48 ч.

Для YA5110-13 рН поддерживали между 5,8 и 6,2 с использованием 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH от t=31 ч.

Для YA5260-4 рН поддерживали между 5,8 и 6,2 с использованием 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH на всем протяжении ферментации.

Для YA5569 рН поддерживали между 5,8 и 6,2 с использованием 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH на всем протяжении ферментации.

Питательную среду извлекали через 48 часов и анализировали на содержание и качество гиалуроновой кислоты, как описано выше.

Количество гиалуроновой кислоты, полученное с помощью этих двух штаммов, составляет соответственно:

- YA5110-13: 23 г.л^-1.

- YA5260-4: 16 г.л^-1.

- YA5569: 32 г.л^-1

В сравнении нативный штамм не продуцирует гиалуроновую кислоту.

Из этого эксперимента следует, что рекомбинантный штамм, содержащий модификации согласно изобретению, продуцирует большее количество гиалуроновой кислоты при культивировании в тех же условиях по сравнению с другими рекомбинантными штаммами, не содержащими всех генетических модификаций согласно изобретению.

Кроме того, гиалуроновая кислота, продуцируемая штаммами YA5110-13 и YA5260, имела молекулярную массу около 20 кДа, тогда как гиалуроновая кислота, продуцируемая YA5569, имела молекулярную массу от около 20 до 50 кДа.

Точно такой же эксперимент проводили с использованием этих трех рекомбинантных штаммов при замене сахарозы глюкозой. полученная гиалуроновая кислота имела такую же молекулярную массу около 20 кДа или от около 20 до около 50 кДа через 48 часов.

C. Другой рекомбинантный штамм 5672-29A был получен следующим образом:

5672-29A: MAT-α, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Sba, pTEF1.Sba-HASB.Vir-tRPL3.Sm, pTDH3.Sk-HASB.Vir-tTEF1.Sba, pTDH3-1.Sba-HASA-1.Vir-tRPL3.Sba, pTDH3.Sar-HASA-1.Vir-tRPL15A.Sba, pTEF1-HYAL-31.Hn-tRPL15A], leu2, sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tRPL41B, TRP1.Sba-loxP], trp1

HYAL-31 представляет собой гиалуронидазу, связанную с якорным сигналом.

1 HASA-1 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы. HASA-1 имеет последовательность SEQ ID NO: 1.

Штамм инокулировали в 25 мл указанной выше среды SY при pH 5,5, забуференной MES 0,1 M, в колбе Эрленмейера с дефлекторами при 28°C при энергичном перемешивании.

Питательную среду извлекали через 48 часов и анализировали на содержание и качество гиалуроновой кислоты, как описано выше.

Количество гиалуроновой кислоты, полученное с помощью штамма, составляло 3,7 г.л^-1.

2. Получение гиалуроновой кислоты с молекулярной массой от 50 до 1000 кДа

A. Сначала получали три рекомбинантных штамма: YA5233-1, YA5359-10 и YA5381-1.

Соответственно, эти три штамма являются следующими:

YA5233-1: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pTEF1-HYAL-3.Ts-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

YA5359-10: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1- tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW12.sba-HYAL-31.Ts-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

YA5381-1: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1- tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW12.Sar-HYAL2-31.Ts-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

HASA-1, HASA-A, HASA2 и XHASA2 определены ранее.

HASB и HASB-A определены ранее.

Все эти штаммы инкубировали в 25 мл указанной выше среды SY, забуференной MES 0,1 M pH 5,5, в колбе Эрленмейера с дефлекторами в течение 48 часов при 28°C при энергичном перемешивании.

Питательную среду извлекали через 48 часов и анализировали на содержание и качество гиалуроновой кислоты, как определено выше.

В иллюстративных целях агарозный гель, полученный после пропускания аликвоты супернатанта штамма YA5359-10, через 31 ч и через 48 ч и окрашивания его «универсальным красителем» (номер CAS 7423-31-6), представлен на фигуре 2B. Классически его вводят в гель бок о бок со стандартами молекулярной массы (мм) ha (слева направо мм 20 кДа, 50 кДа, от 60 до 120 кДа, 300 кДа и 750 кДа).

Количество, полученное с этими различными штаммами, составляет соответственно:

- YA5233-1: 3,1 г.л^-1.

- YA5359-10: 3,4 г.л^-1.

- YA5381-1: 3,0 г.л^-1.

В сравнении нативный штамм не продуцирует гиалуроновую кислоту.

Из этого эксперимента следует, что рекомбинантный штамм, содержащий модификации согласно изобретению, продуцирует большее количество гиалуроновой кислоты при культивировании в тех же условиях по сравнению с другими рекомбинантными штаммами, не содержащими всех генетических модификаций согласно изобретению.

Кроме того, эти три штамма приводили к получению через 48 часов гиалуроновой кислоты, имеющей молекулярную массу, составляющую:

- для YA5233-1: от 50 до 500 кДа;

- для YA5359-10: от 100 до 750 кДа; и

- для YA5381-1: от 50 до 250 кДа.

B. Также были получены шесть других рекомбинантных штаммов: YA5262-16, YA5326-3, YA5300-15, YA5358-4, YA5264-1 и YA5331-6.

Эти шесть штаммов являются следующими:

YA5262-16: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW10.ago-HYAL-31.Hn-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

YA5326-3: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW10.ago-HYAL-31.Csa-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1-TRP1]x2

YA5300-15: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pTDH3-HYAL-3.Ts-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1-TRP1]x2

YA5358-4: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW12.Sar-HYAL-31.Li-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

YA5264-1: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pTDH3-HYAL-31.Ts-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1-TRP1]x2

YA5331-6: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pTEF3-HYAL-31.Li-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1-TRP1]x2

HASA-1, HASA-A, HASA2 и XHASA2 определены ранее.

HASB и HASB-A определены ранее.

YA5262-16 инокулировали в 2 литрах вышеуказанной среды SY при pH 4 в 2% глюкозе в биореакторе, и pH поддерживали на уровне 4 на всем протяжении ферментации с использованием 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH.

YA5326-3 был:

- инокулирован в 2 литрах вышеуказанной среды SY при pH 6 в 2% глюкозе в биореакторе, и pH поддерживали на уровне 6 на всем протяжении ферментации с использованием 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH; или

- инокулирован в 2 литрах вышеуказанной среды SY при pH 6 в 2% сахарозе в биореакторе, и pH поддерживали при 6 до 34 ч и при pH 4 от 34 ч до 48 ч с помощью 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH.

YA5300-15 был инокулирован в 2 литрах вышеуказанной среды SY при pH 6 в 2% сахарозе в биореакторе, и pH поддерживали на уровне 6 на всем протяжении ферментации с использованием 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH.

YA5358-4 был инокулирован в 2 литрах вышеуказанной среды SY при pH 6 в 2% глюкозе в биореакторе, и pH поддерживали на уровне 6 на всем протяжении ферментации с использованием 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH.

YA5264-1 был инокулирован в 2 литрах вышеуказанной среды sy при pH 6 в 2% сахарозе в биореакторе, и pH поддерживали на уровне 6 на всем протяжении ферментации с использованием 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH.

YA5331-6 был инокулирован в 2 литрах вышеуказанной среды SY при pH 6 в 2% глюкозе в биореакторе, и pH поддерживали на уровне 6 на всем протяжении ферментации с использованием 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH.

Питательную среду извлекали через 48 часов и анализировали на содержание и качество гиалуроновой кислоты, как описано выше.

Количество гиалуроновой кислоты, полученное с помощью этих двух штаммов, составляет соответственно:

- YA5262-16: 19 г.л^-1;

- YA5326-3: соответственно 13 г.л^-1 и 15 г.л^-1;

- YA5300-15: 9 г.л^-1;

- YA5358-4: 14 г.л^-1;

- YA5264-1: 6 г.л^-1; и

- YA5331-6: 9 г.л^-1.

В сравнении нативный штамм не продуцирует гиалуроновую кислоту.

Из этого эксперимента следует, что рекомбинантный штамм, содержащий модификации согласно изобретению, продуцирует большее количество гиалуроновой кислоты при культивировании в тех же условиях по сравнению с другими рекомбинантными штаммами, не содержащими всех генетических модификаций согласно изобретению.

Кроме того, гиалуроновая кислота, продуцируемая этими штаммами через 48 часов, имела молекулярную массу:

- YA5262-16: 50 кДа;

- YA5326-3: соответственно 50 кДа или составляет от 50 до 250 кДа;

- YA5300-15: составляет от 100 до 1000 кДа;

- YA5358-4: составляет от 100 до 1000 кДа;

- YA5264-1: составляет от 100 до 1000 кДа; и

- YA5331-6: составляет от 100 до 1000 кДа.

Кроме того, ранее описанный рекомбинантный штамм YA5235-1 инокулировали в биореакторе при рН 6 в 2% сахарозе, и рн поддерживали при 6 до 34 ч и при 4 от 34 ч до 48 ч с помощью 15% H₂SO₄ и 10% NH₄OH.

через 48 ч среда содержит 18 г.л^-1 от 100 до 1000 кДа гиалуроновой кислоты.

тот же эксперимент проводили с использованием ya5235-1 при использовании глюкозы вместо сахарозы. полученная гиалуроновая кислота также имеет молекулярную массу от 100 до 1000 кДа.

Эти результаты показывают, что, в частности, регулирование рн в процессе ферментации, а также продукция гиалуронидазы, связанной с сигналом секреции или сигналом секреции и якорным сигналом, влияет или даже позволяет контролировать размер продуцируемого полимера гиалуроновой кислоты.

3. Получение гиалуроновой кислоты с молекулярной массой выше 1000 кДа

получали четыре рекомбинантных штамма: YA5232-1, YA5303-3, YA5374-4 и YA5382-1.

Соответственно, эти четыре штамма являются следующими:

YA5232-1: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pNUP57-HYAL-3.Ts-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1- TRP1]x2

YA5303-2: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1- tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pNUP57-HYAL-3.Li-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1-TRP1]x2

YA5374-3: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1- tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW12.Sar-HYAL-3.Ba-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1-TRP1]x2

YA5382-1: MAT-α, can1-100, his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3-pMET6-QRI1-tIDP1-HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl, pCUP1-HASA2.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1- tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-HASB.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pTEF1-HYAL2-31.Ba-tRPL15A, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tDIT1, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF3-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[pMET6-HASB.Vir-tRPL3, pMET25-HASA-1.Vir-tIDP1-TRP1]x2

HASA-1, HASA-A, HASA2 и XHASA2 определены ранее.

HASB и HASB-A определены ранее.

Все эти штаммы инкубировали в 25 мл указанной выше среды SY, забуференной mes 0,1 m pH 5,5, в колбе Эрленмейера с дефлекторами в течение 48 часов при 28°C при энергичном перемешивании.

Питательную среду извлекали через 48 часов и анализировали на содержание и качество гиалуроновой кислоты, как определено выше.

Количество, полученное с этими различными штаммами, составляет соответственно:

- YA5232-1: 4 г.л^-1.

- YA5303-3: 2,7 г.л^-1.

- YA5374-3: 2,5 г.л^-1.

- YA5382-1: 3,0 г.л^-1.

В сравнении нативный штамм не продуцирует гиалуроновую кислоту.

Из этого эксперимента следует, что рекомбинантный штамм, содержащий модификации согласно изобретению, продуцирует большее количество гиалуроновой кислоты при культивировании в тех же условиях по сравнению с другими рекомбинантными штаммами, не содержащими всех генетических модификаций согласно изобретению.

Кроме того, эти четыре штамма приводили к получению через 48 часов гиалуроновой кислоты, имеющей молекулярную массу:

- для YA5232-1: более чем около 1000 кДа;

- для YA5303-3: около 1000 кДа;

- для YA5374-3: более чем около 1000 кДа; и

- для YA5382-1: более чем около 1000 кДа.

Пример 3: Сравнительные примеры продукции гиалуроновой кислоты

A. Получают пять следующих рекомбинантных штаммов:

YA5509: MAT-α, can1-100, his3::[tRPL3-UGP1-pSAM1, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl-RS, pCUP1-HASA.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-UGD1.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW10.Ago-HYAL-31.Hn-tRPL15A, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tRPL41B, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl-RS, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[tRPL3-HASB.Vir-pMET6, pMET25-HASA.Vir-tIDP1, TRP1]x2, ura3::[tRPL3-MHPF.Ec-pPDC1, pTDH3-GDH-21.Eca-tIDP1, URA3]x2

YA5789: MAT-α, can1-100, his3::[tRPL3-UGP1-pSAM1, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl-RS, pCUP1-HASA.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-UGD1.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[tMET3.Sba-MET3.Sba-RS-pMET3.Sba, pCCW10.Ago-HYAL-31.Hn-tRPL15A, pTEF1.Ago-GLN1-tTDH3, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tRPL41B, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], met3::, sam3::[LEU2.Kl-RS, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[tRPL3-HASB.Vir-pMET6, pMET25-HASA.Vir-tIDP1, TRP1]x2, ura3::[tRPL3-MHPF.Ec-pPDC1, pTDH3-GDH-21.Eca-tIDP1, URA3]x2

YA5790: MAT-α, can1-100, glt1::[MET3.Sba-RS, pCCW10.Ago-HYAL-31.Hn-tRPL15A, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tRPL41B, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba, pTEF1.Ago-GLN1-tTDH3], his3::[tRPL3-UGP1-pSAM1, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl-RS, pCUP1-HASA.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-UGD1.At-tRPL15A], leu2, met3::, sam3::[LEU2.Kl-RS, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[tRPL3-HASB.Vir-pMET6, pMET25-HASA.Vir-tIDP1, TRP1]x2, ura3::[tRPL3-MHPF.Ec-pPDC1, pTDH3-GDH-21.Eca-tIDP1, URA3]x2

YA5806: MAT-α, can1-100, glt1::[MET3.Sba-RS, pCCW10.Ago-HYAL-31.Hn-tRPL15A, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tRPL41B, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], his3::[tRPL3-UGP1-pSAM1, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl-RS, pCUP1-HASA.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-UGD1.At-tRPL15A], leu2, met3::, sam3::[LEU2.Kl-RS, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[tRPL3-HASB.Vir-pMET6, pMET25-HASA.Vir-tIDP1, TRP1]x2, ura3::[tRPL3-MHPF.Ec-pPDC1, pTDH3-GDH-21.Eca-tIDP1, URA3]x2

YA5658: MAT-α, can1-100, his3::[tRPL3-UGP1-pSAM1, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x5, jlp1::[LEU2.Kl-RS, pCUP1-HASA.Sz-tRPL41B, pCUP1-UGP1-tRPL3, pCUP1-QRI1-tIDP1, pPDC1-UGP1-tTPI1, pTDH3-QRI1-tMET25, pCCW12-UGD1.At-tRPL15A], leu2, lyp1::[pCCW10.Ago-HYAL-31.Hn-tRPL15A, pTEF1.Ago-GLN1-tTDH3, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pCCW12-HASA-1.Vir-tRPL41B, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], sam3::[LEU2.Kl-RS, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tIDP1, pCCW12-XHASA2.Xl-tRPL3, pTDH3-QRI1-tIDP1], trp1::[tRPL3-HASB.Vir-pMET6, pMET25-HASA.Vir-tIDP1, TRP1]x2, ura3::[tRPL3-MHPF.Ec-pPDC1, pTDH3-GDH-21.Eca-tIDP1, URA3]x2

HASA-1, HASA-A и XHASA2 определены ранее.

HASB и HASB-A определены ранее.

Все эти штаммы инкубировали в 25 мл указанной выше среды SY, забуференной MES 0,1 M pH 5,5, в колбе Эрленмейера с дефлекторами в течение 48 часов при 28 °C при энергичном перемешивании.

Питательную среду извлекали через 48 часов и анализировали на содержание и качество гиалуроновой кислоты, как определено выше.

Количество, полученное с этими различными штаммами, составляет соответственно:

- YA5509: 3,5 г.л^-1_.

- YA5789 (сверхэкспрессия GLN1): 5 г.л^-1_.

- YA5658 (сверхэкспрессия GNL1): 4,5 г.л^-1_.

- YA5806 (ΔGLT1): 4,5 г.л^-1_.

- YA5790 (сверхэкспрессия GNL1; ΔGLT1): 6,7 г.л^-1_.

В сравнении нативный штамм не продуцирует гиалуроновую кислоту.

В результате этого эксперимента в аналогичных условиях рекомбинантный штамм согласно изобретению продуцирует значительно больше гиалуроновой кислоты, когда либо gln1 сверхэкспрессируется, либо glt1 нарушен, по сравнению с другими рекомбинантными штаммами согласно изобретению, лишенными любой из этих двух модификаций (по сравнению с увеличенным выходом продукции на 27-32 % и 27 %).

Кроме того, рекомбинантный штамм согласно изобретению продуцирует еще больше гиалуроновой кислоты, когда gln1 сверхэкспрессируются, и glt1 нарушен, по сравнению с другими рекомбинантными штаммами согласно изобретению, содержащими только одну из этих двух модификаций или лишенными обеих (повышенный выход продукции на 48 % по сравнению с штаммом, не содержащим ни одной из этих двух модификаций).

B. Получают четыре следующих рекомбинантных штамма:

YA6178: MAT-α, glt1::[MET3.Sba, pTDH3-HYAL-31.Csa-tRPL15A, pTEF1.Ago-GLN1-tTDH3, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x3, jlp1::[LEU2.Sba-loxP, pTEF1.Sba-HASB.Vir-tRPL3.Sm, pTDH3.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pTDH3-1.Sba-HASA-1.Vir-tRPL3.Sba, pTDH3.Sar-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], leu2, met3Δ1, sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tRPL41B, TRP1.Sba-loxP], trp1, ura3::[pPDC1-MHPF.Ec-tRPL3, pTDH3-GDH-21.Eca-tIDP1, URA3]x2

YA6179: MAT-α, glt1::[MET3.Sba, pTDH3-HYAL-31.Csa-tRPL15A, pTEF1.Ago-GLN1-tTDH3, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-2.Vir-tRPL15A.Sba], his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x3, jlp1::[LEU2.Sba-loxP, pTEF1.Sba-HASB.Vir-tRPL3.Sm, pTDH3.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pTDH3-1.Sba-HASA-1.Vir-tRPL3.Sba, pTDH3.Sar-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], leu2, met3Δ1, sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tRPL41B, TRP1.Sba-loxP], trp1, ura3::[pPDC1-MHPF.Ec- tRPL3, pTDH3-GDH-21.Eca-tIDP1, URA3]x2

YA6180: MAT-α, glt1::[MET3.Sba, pTDH3-HYAL-31.Csa-tRPL15A, pTEF1.Ago-GLN1-tTDH3, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-3.Vir-tRPL15A.Sba], his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x3, jlp1::[LEU2.Sba-loxP, pTEF1.Sba-HASB.Vir-tRPL3.Sm, pTDH3.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pTDH3-1.Sba-HASA-1.Vir-tRPL3.Sba, pTDH3.Sar-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], leu2, met3Δ1, sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tRPL41B, TRP1.Sba-loxP], trp1, ura3::[pPDC1-MHPF.Ec-tRPL3, pTDH3-GDH-21.Eca-tIDP1, URA3]x2

YA6181: MAT-α, glt1::[MET3.Sba, pTDH3-HYAL-31.Csa-tRPL15A, pTEF1.Ago-GLN1-tTDH3, pCCW12.Sba-HASB.vir-tRPL3, pCCW12.Sm-HASA-5.Vir-tRPL15A.Sba], his3::[pSAM1-UGP1-tRPL3, pMET6-QRI1-tIDP1, HIS3]x3, jlp1::[LEU2.Sba-loxP, pTEF1.Sba-HASB.Vir-tRPL3.Sm, pTDH3.Sk-HASB-A.Vir-tTEF1.Sba, pTDH3-1.Sba-HASA-1.Vir-tRPL3.Sba, pTDH3.Sar-HASA-A.Vir-tRPL15A.Sba], leu2, met3Δ1, sam3::[LEU2.Kl, pPDC1-PGM1-tIDP1, pTEF1.Ago-GFA1-tRPL15A, pENO2-UGP1-tRPL3, pCWP2-GNA1-tTPI1, pTEF1-PCM1-tRPL41B, TRP1.Sba-loxP], trp1, ura3::[pPDC1-MHPF.Ec- tRPL3, pTDH3-GDH-21.Eca-tIDP1, URA3]x2

HASA-1 и HASA-A определены ранее.

HASB и HASB-A определены ранее.

Все HASA-2, HASA-3 и HASA5 представляют собой нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы. Они отличаются друг от друга тем, что представляют собой различные перекодированные варианты нуклеотидной последовательности, кодирующей фермент гиалуронан-синтазу. HASA-2 имеет последовательность SEQ ID NO: 101, HASA-3 имеет последовательность SEQ ID NO: 102, и HASA-5 имеет последовательность SEQ ID NO: 104.

Все эти штаммы инкубировали в 25 мл указанной выше среды SY, забуференной MES 0,1 M pH 5,5, в колбе Эрленмейера с дефлекторами в течение 48 часов при 28°C при энергичном перемешивании.

Питательную среду извлекали через 48 часов и анализировали на содержание и качество гиалуроновой кислоты, как определено выше.

Количество, полученное с этими различными штаммами, составляет соответственно:

- YA6178: 6,3 г.л^-1_.

- YA6179: 5,9 г.л^-1_.

- YA6180: 5,2 г.л^-1_.

- YA6181: 6,4 г.л^-1_.

В сравнении нативный штамм не продуцирует гиалуроновую кислоту.

Кроме того, эти четыре штамма привели к получению через 48 часов гиалуроновой кислоты, имеющей молекулярную массу около 20 кДа.

ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ

SEQ ID NO: 1 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (Hasa), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

ATGGGTAAGAACATCATTATTATGGTTTCTTGGTACACTATTATTACATCCAATCTCATCGCAGTGGGTGGCGCCTCACTCATACTAGCCCCAGCTATTACGGGCTATGTCCTTCACTGGAACATTGCCCTTTCAACAATTTGGGGAGTGTCGGCCTACGGAATTTTCGTGTTTGGTTTCTTTCTTGCCCAGGTATTATTTAGTGAACTCAACCGGAAAAGGCTCCGGAAGTGGATTTCCCTCCGACCCAAAGGGTGGAATGATGTTAGGTTGGCTGTAATTATTGCCGGCTACCGTGAGGACCCGTATATGTTCCAAAAGTGTCTTGAAAGTGTGCGTGACTCAGACTATGGGAATGTAGCTAGACTAATATGCGTTATTGACGGCGATGAAGACGACGACATGAGGATGGCTGCAGTGTACAAGGCTATCTATAACGACAACATCAAGAAACCTGAGTTTGTCCTCTGTGAGAGTGACGATAAGGAGGGTGAGAGAATAGATAGCGATTTCAGCCGTGATATCTGCGTGCTGCAACCGCATCGCGGAAAGCGTGAATGTTTGTACACAGGGTTCCAATTGGCAAAGATGGACCCCTCAGTTAATGCCGTCGTCCTAATCGACAGTGACACTGTGTTAGAAAAGGACGCGATTCTCGAaGTAGTATACCCGCTGGCATGCGATCCAGAAATACAGGCTGTAGCAGGCGAATGCAAAATATGGAATACTGACACACTGTTGAGTTTGCTGGTAGCCTGGCGATATTACAGCGCATTTTGCGTAGAGCGTAGCGCCCAATCATTCTTCAGGACAGTACAATGCGTCGGAGGACCTCTCGGCGCCTACAAGATTGATATAATTAAGGAAATCAAGGACCCATGGATCAGCCAACGTTTCCTTGGCCAAAAGTGCACATACGGCGACGATAGACGACTCACTAATGAAATACTAATGAGGGGTAAGAAAGTAGTTTTCACCCCATTCGCTGTTGGCTGGTCCGACAGCCCGACGAACGTCTTCCGTTACATTGTACAGCAAACACGGTGGTCCAAGTCGTGGTGTAGGGAGATATGGTATACACTGTTTGCAGCATGGAAGCATGGACTTTCGGGCATTTGGCTCGCATTCGAGTGCTTATACCAGATTACTTATTTCTTCCTGGTGATTTACCTATTCTCCCGTTTGGCTGTTGAGGCTGACCCACGGGCGCAAACGGCCACCGTCATTGTTTCGACCACAGTTGCGCTTATTAAGTGCGGTTACTTTAGCTTCAGAGCTAAAGACATTAGGGCCTTCTATTTCGTCCTCTACACGTTCGTTTACTTCTTCTGCATGATTCCGGCACGAATAACTGCGATGATGACCCTGTGGGACATAGGTTGGGGAACCAGGGGAGGAAATGAGAAGCCTTCCGTAGGCACCAGAGTTGCTTTGTGGGCCAAGCAATATTTGATTGCTTACATGTGGTGGGCCGCTGTCGTCGGTGCTGGCGTGTACTCCATCGTTCATAATTGGATGTTTGACTGGAATTCACTTTCCTACAGGTTCGCACTGGTAGGCATCTGTTCGTATATAGTTTTCATTGTAATAGTGCTGGTAGTCTACTTTACAGGAAAGATCACGACCTGGAACTTCACGAAGCTACAGAAAGAATTGATCGAGGACCGCGTACTGTACGACGCAACGACCAATGCCCAGTCGGTATAA

SEQ ID NO: 2 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

ATGGGCAAGAATATTATTATCATGGTCAGTTGGTATACCATTATTACATCAAACCTAATTGCTGTCGGTGGAGCCTCACTAATCTTAGCTCCCGCGATTACGGGTTATGTGCTTCATTGGAATATTGCTTTATCCACTATTTGGGGTGTTAGCGCTTACGGCATCTTTGTGTTCGGTTTCTTCTTGGCTCAGGTGTTATTCTCTGAGCTAAACAGAAAGAGACTCAGAAAGTGGATTTCGCTGCGGCCGAAGGGATGGAACGATGTTCGGTTAGCGGTGATCATTGCCGGTTATCGTGAAGATCCTTATATGTTTCAGAAGTGTTTGGAATCTGTTCGAGACTCAGACTACGGTAACGTTGCTAGGCTGATCTGCGTAATCGATGGAGACGAAGATGACGATATGAGAATGGCCGCGGTTTATAAAGCCATCTATAACGATAACATTAAGAAGCCAGAGTTTGTTTTATGCGAATCGGATGACAAGGAGGGTGAGAGGATTGATTCTGACTTCTCGCGTGACATCTGTGTCCTGCAGCCCCACAGGGGAAAGCGAGAGTGCCTCTATACAGGATTCCAATTAGCTAAAATGGACCCAAGCGTTAATGCTGTCGTCCTTATCGATAGCGACACGGTGTTGGAAAAGGACGCAATATTGGAAGTAGTCTATCCACTCGCTTGTGATCCAGAGATCCAGGCCGTGGCTGGCGAGTGCAAGATTTGGAATACAGATACGCTTCTGTCATTACTGGTGGCGTGGCGTTATTATTCAGCATTCTGTGTGGAGAGGAGCGCACAATCGTTCTTTCGGACTGTACAATGCGTAGGCGGTCCACTAGGAGCATATAAAATTGACATAATCAAAGAGATAAAAGATCCTTGGATTTCGCAGAGATTCCTCGGTCAAAAGTGTACCTATGGGGACGACAGGCGGTTGACTAACGAGATTCTAATGAGAGGTAAGAAGGTGGTGTTCACTCCTTTTGCGGTAGGTTGGAGCGATTCGCCCACAAATGTATTCAGATACATTGTTCAACAAACAAGGTGGTCGAAATCGTGGTGCCGAGAAATATGGTACACGTTGTTCGCCGCATGGAAACACGGCTTGTCGGGTATATGGCTCGCTTTCGAGTGCCTTTATCAGATCACTTACTTCTTCCTGGTTATTTACTTGTTTTCAAGACTGGCAGTGGAAGCTGATCCAAGGGCTCAGACTGCTACTGTCATCGTTTCAACAACAGTGGCGCTAATAAAGTGTGGTTACTTCAGCTTTCGCGCGAAGGACATAAGAGCGTTTTACTTTGTTCTTTATACCTTTGTATATTTCTTCTGTATGATCCCGGCCCGGATAACAGCTATGATGACATTATGGGACATTGGTTGGGGCACCAGGGGTGGGAATGAGAAGCCGTCCGTAGGAACGAGAGTAGCGCTGTGGGCCAAGCAGTATCTTATCGCATACATGTGGTGGGCAGCTGTCGTCGGGGCAGGTGTATACAGCATAGTACATAACTGGATGTTTGACTGGAACTCACTCTCATATCGATTCGCATTGGTCGGGATCTGCTCTTACATCGTGTTTATTGTTATAGTCTTAGTAGTATATTTCACTGGAAAGATAACAACATGGAATTTCACTAAGCTTCAAAAGGAATTGATTGAAGACAGGGTGCTCTACGATGCGACAACTAATGCACAAAGCGTATAA

SEQ ID NO: 3 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Pasteurella multocida

ATGAACACCCTTTCCCAGGCAATTAAGGCTTATAATAGTAATGATTATCAACTAGCCCTCAAGCTGTTCGAAAAGTCGGCAGAAATCTACGGCAGAAAGATAGTTGAgTTCCAAATTACGAAGTGCAAGGAGAAACTTTCTGCGCACCCATCCGTTAACAGTGCGCATCTCTCGGTTAACAAAGAAGAGAAGGTGAATGTTTGCGACAGTCCATTAGACATAGCCACTCAATTATTGTTATCGAATGTGAAAAAACTCGTCCTTAGTGATAGCGAGAAAAATACACTAAAGAATAAATGGAAGTTGTTGACTGAAAAGAAGTCTGAGAACGCAGAGGTCCGGGCCGTAGCTTTAGTTCCCAAGGACTTTCCGAAAGATTTAGTGCTTGCGCCGTTACCAGACCATGTGAACGATTTTACGTGGTATAAGAAGCGGAAGAAACGCCTAGGAATCAAACCAGAACACCAACACGTTGGCCTCTCCATTATTGTGACAACGTTCAACCGTCCTGCCATCCTCAGCATCACCCTGGCTTGCCTCGTCAATCAAAAGACCCATTATCCTTTTGAGGTGATCGTGACCGACGATGGTTCTCAAGAGGATTTATCGCCTATAATCCGTCAATATGAGAACAAGCTAGACATCCGTTATGTTCGGCAAAAGGACAACGGTTTTCAGGCATCGGCCGCACGTAATATGGGCCTACGTCTAGCCAAATATGACTTCATTGGGCTCCTTGATTGTGATATGGCTCCCAACCCTTTGTGGGTACACTCATACGTTGCGGAACTATTAGAGGACGATGATTTGACCATAATAGGCCCCAGGAAGTACATTGACACGCAACACATAGATCCCAAGGATTTCCTTAATAACGCCTCTCTGTTAGAGTCGTTGCCAGAGGTTAAGACCAATAATTCCGTCGCGGCTAAGGGCGAGGGGACCGTATCTTTAGACTGGCGTTTGGAACAATTTGAGAAGACCGAGAACTTGAGGCTATCCGATAGCCCTTTCCGATTCTTCGCAGCTGGGAATGTGGCTTTCGCCAAGAAGTGGCTTAACAAGTCAGGATTCTTCGACGAGGAATTCAATCACTGGGGAGGTGAAGATGTAGAGTTCGGTTATCGTCTGTTTCGGTACGGTTCGTTCTTCAAAACTATAGACGGCATCATGGCCTATCATCAGGAACCGCCAGGTAAAGAAAACGAAACTGACAGAGAAGCGGGCAAGAACATTACCCTCGATATAATGAGGGAGAAGGTGCCTTACATCTACCGTAAACTCCTGCCTATAGAAGACAGTCATATCAACCGAGTACCATTGGTATCAATTTACATCCCGGCCTACAACTGTGCTAACTATATTCAAAGATGTGTTGATTCAGCTTTGAATCAAACGGTAGTTGATCTCGAAGTGTGCATTTGCAACGACGGTAGTACTGACAACACGCTGGAAGTTATTAACAAGCTGTATGGTAATAATCCGCGTGTGCGTATAATGTCTAAACCCAATGGCGGCATTGCGAGTGCATCCAACGCAGCGGTCAGCTTCGCAAAGGGTTATTACATAGGACAGTTGGACAGCGACGATTACTTAGAACCCGACGCAGTGGAGTTATGTCTCAAGGAATTTCTTAAGGATAAGACCCTTGCGTGCGTTTACACCACTAATCGTAACGTCAACCCAGATGGCTCTTTAATAGCCAATGGCTATAACTGGCCAGAGTTCAGTCGTGAGAAGTTGACTACGGCCATGATTGCTCATCACTTCCGGATGTTTACCATTCGTGCTTGGCATCTGACGGATGGGTTCAATGAGAAGATTGAGAACGCTGTTGACTACGACATGTTTCTCAAGCTCAGTGAAGTTGGTAAATTTAAGCATCTGAACAAAATATGTTATAATCGGGTGTTACACGGCGATAACACCTCAATCAAGAAgCTTGGCATACAAAAGAAGAATCATTTCGTAGTTGTCAATCAGTCTCTAAACCGCCAAGGTATAACTTATTATAACTACGATGAATTTGATGATCTCGATGAGAGTCGGAAATACATTTTCAACAAGACTGCAGAGTATCAAGAAGAGATAGATATTCTTAAAGATATTAAGATCATTCAGAACAAAGACGCCAAAATAGCTGTCTCCATTTTCTATCCGAACACTCTAAACGGGTTGGTGAAGAAGCTAAATAATATTATAGAGTATAATAAGAATATCTTCGTTATTGTACTTCATGTCGATAAGAATCACTTAACCCCAGACATCAAGAAGGAGATATTAGCCTTCTACCATAAGCATCAGGTGAACATCTTATTGAACAATGACATCTCCTACTATACATCAAATCGTCTGATTAAGACAGAAGCCCATTTGAGTAACATTAACAAGCTaAGTCAATTAAATCTTAACTGCGAATACATTATATTCGACAATCACGATTCCTTATTTGTGAAGAACGATTCCTATGCATACATGAAGAAGTATGATGTTGGAATGAACTTCTCTGCATTGACTCATGATTGGATTGAAAAGATAAACGCTCACCCGCCATTTAAGAAGCTgATCAAAACTTACTTCAATGACAATGATCTTAAGTCGATGAATGTAAAGGGTGCCTCCCAGGGAATGTTTATGACATACGCATTAGCCCACGAGTTATTGACGATCATCAAGGAGGTGATAACCTCTTGTCAATCCATTGACTCCGTCCCCGAATACAACACAGAAGATATTTGGTTTCAGTTTGCACTTTTAATTCTGGAAAAGAAGACCGGCCACGTATTCAACAAGACAAGCACTCTCACGTATATGCCATGGGAACGTAAACTGCAGTGGACGAATGAACAAATAGAGTCCGCAAAGAGGGGCGAAAACATTCCGGTAAACAAGTTCATCATTAACAGCATTACCCTTTAA

SEQ ID NO: 4 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Pasteurella multocida

ATGAACACCCTTTCCCAGGCAATTAAGGCTTATAATAGTAATGATTATCAACTAGCCCTCAAGCTGTTCGAAAAGTCGGCAGAAATCTACGGCAGAAAGATAGTTGAgTTCCAAATTACGAAGTGCAAGGAGAAACTTTCTGCGCACCCATCCGTTAACAGTGCGCATCTCTCGGTTAACAAAGAAGAGAAGGTGAATGTTTGCGACAGTCCATTAGACATAGCCACTCAATTATTGTTATCGAATGTGAAAAAACTCGTCCTTAGTGATAGCGAGAAAAATACACTAAAGAATAAATGGAAGTTGTTGACTGAAAAGAAGTCTGAGAACGCAGAGGTCCGGGCCGTAGCTTTAGTTCCCAAGGACTTTCCGAAAGATTTAGTGCTTGCGCCGTTACCAGACCATGTGAACGATTTTACGTGGTATAAGAAGCGGAAGAAACGCCTAGGAATCAAACCAGAACACCAACACGTTGGCCTCTCCATTATTGTGACAACGTTCAACCGTCCTGCCATCCTCAGCATCACCCTGGCTTGCCTCGTCAATCAAAAGACCCATTATCCTTTTGAGGTGATCGTGACCGACGATGGTTCTCAAGAGGATTTATCGCCTATAATCCGTCAATATGAGAACAAGCTAGACATCCGTTATGTTCGGCAAAAGGACAACGGTTTTCAGGCATCGGCCGCACGTAATATGGGCCTACGTCTAGCCAAATATGACTTCATTGGGCTCCTTGATTGTGATATGGCTCCCAACCCTTTGTGGGTACACTCATACGTTGCGGAACTATTAGAGGACGATGATTTGACCATAATAGGCCCCAGGAAGTACATTGACACGCAACACATAGATCCCAAGGATTTCCTTAATAACGCCTCTCTGTTAGAGTCGTTGCCAGAGGTTAAGACCAATAATTCCGTCGCGGCTAAGGGCGAGGGGACCGTATCTTTAGACTGGCGTTTGGAACAATTTGAGAAGACCGAGAACTTGAGGCTATCCGATAGCCCTTTCCGATTCTTCGCAGCTGGGAATGTGGCTTTCGCCAAGAAGTGGCTTAACAAGTCAGGATTCTTCGACGAGGAATTCAATCACTGGGGAGGTGAAGATGTAGAGTTCGGTTATCGTCTGTTTCGGTACGGTTCGTTCTTCAAAACTATAGACGGCATCATGGCCTATCATCAGGAACCGCCAGGTAAAGAAAACGAAACTGACAGAGAAGCGGGCAAGAACATTACCCTCGATATAATGAGGGAGAAGGTGCCTTACATCTACCGTAAACTCCTGCCTATAGAAGACAGTCATATCAACCGAGTACCATTGGTATCAATTTACATCCCGGCCTACAACTGTGCTAACTATATTCAAAGATGTGTTGATTCAGCTTTGAATCAAACGGTAGTTGATCTCGAAGTGTGCATTTGCAACGACGGTAGTACTGACAACACGCTGGAAGTTATTAACAAGCTGTATGGTAATAATCCGCGTGTGCGTATAATGTCTAAACCCAATGGCGGCATTGCGAGTGCATCCAACGCAGCGGTCAGCTTCGCAAAGGGTTATTACATAGGACAGTTGGACAGCGACGATTACTTAGAACCCGACGCAGTGGAGTTATGTCTCAAGGAATTTCTTAAGGATAAGACCCTTGCGTGCGTTTACACCACTAATCGTAACGTCAACCCAGATGGCTCTTTAATAGCCAATGGCTATAACTGGCCAGAGTTCAGTCGTGAGAAGTTGACTACGGCCATGATTGCTCATCACTTCCGGATGTTTACCATTCGTGCTTGGCATCTGACGGATGGGTTCAATGAGAAGATTGAGAACGCTGTTGACTACGACATGTTTCTCAAGCTCAGTGAAGTTGGTAAATTTAAGCATCTGAACAAAATATGTTATAATCGGGTGTTACACGGCGATAACACCTCAATCAAGAAgCTTGGCATACAAAAGAAGAATCATTTCGTAGTTGTCAATCAGTCTCTAAACCGCCAAGGTATAACTTATTATAACTACGATGAATTTGATGATCTCGATGAGAGTCGGAAATACATTTTCAACAAGACTGCAGAGTATCAAGAAGAGATAGATATTCTTAAAGATATTTAA

SEQ ID NO: 5 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Pasteurella multocida

ATGAACACCCTTTCCCAGGCAATTAAGGCTTATAATAGTAATGATTATCAACTAGCCCTCAAGCTGTTCGAAAAGTCGGCAGAAATCTACGGCAGAAAGATAGTTGAgTTCCAAATTACGAAGTGCAAGGAGAAACTTTCTGCGCACCCATCCGTTAACAGTGCGCATCTCTCGGTTAACAAAGAAGAGAAGGTGAATGTTTGCGACAGTCCATTAGACATAGCCACTCAATTATTGTTATCGAATGTGAAAAAACTCGTCCTTAGTGATAGCGAGAAAAATACACTAAAGAATAAATGGAAGTTGTTGACTGAAAAGAAGTCTGAGAACGCAGAGGTCCGGGCCGTAGCTTTAGTTCCCAAGGACTTTCCGAAAGATTTAGTGCTTGCGCCGTTACCAGACCATGTGAACGATTTTACGTGGTATAAGAAGCGGAAGAAACGCCTAGGAATCAAACCAGAACACCAACACGTTGGCCTCTCCATTATTGTGACAACGTTCAACCGTCCTGCCATCCTCAGCATCACCCTGGCTTGCCTCGTCAATCAAAAGACCCATTATCCTTTTGAGGTGATCGTGACCGACGATGGTTCTCAAGAGGATTTATCGCCTATAATCCGTCAATATGAGAACAAGCTAGACATCCGTTATGTTCGGCAAAAGGACAACGGTTTTCAGGCATCGGCCGCACGTAATATGGGCCTACGTCTAGCCAAATATGACTTCATTGGGCTCCTTGATTGTGATATGGCTCCCAACCCTTTGTGGGTACACTCATACGTTGCGGAACTATTAGAGGACGATGATTTGACCATAATAGGCCCCAGGAAGTACATTGACACGCAACACATAGATCCCAAGGATTTCCTTAATAACGCCTCTCTGTTAGAGTCGTTGCCAGAGGTTAAGACCAATAATTCCGTCGCGGCTAAGGGCGAGGGGACCGTATCTTTAGACTGGCGTTTGGAACAATTTGAGAAGACCGAGAACTTGAGGCTATCCGATAGCCCTTTCCGATTCTTCGCAGCTGGGAATGTGGCTTTCGCCAAGAAGTGGCTTAACAAGTCAGGATTCTTCGACGAGGAATTCAATCACTGGGGAGGTGAAGATGTAGAGTTCGGTTATCGTCTGTTTCGGTACGGTTCGTTCTTCAAAACTATAGACGGCATCATGGCCTATCATCAGGAACCGCCAGGTAAAGAAAACGAAACTGACAGAGAAGCGGGCAAGAACATTACCCTCGATATAATGAGGGAGAAGGTGCCTTACATCTACCGTAAACTCCTGCCTATAGAAGACAGTCATATCAACCGAGTACCATTGGTATCAATTTACATCCCGGCCTACAACTGTGCTAACTATATTCAAAGATGTGTTGATTCAGCTTTGAATCAAACGGTAGTTGATCTCGAAGTGTGCATTTGCAACGACGGTAGTACTGACAACACGCTGGAAGTTATTAACAAGCTGTATGGTAATAATCCGCGTGTGCGTATAATGTCTAAACCCAATGGCGGCATTGCGAGTGCATCCAACGCAGCGGTCAGCTTCGCAAAGGGTTATTACATAGGACAGTTGGACAGCGACGATTACTTAGAACCCGACGCAGTGGAGTTATGTCTCAAGGAATTTCTTAAGGATAAGACCCTTGCGTGCGTTTACACCACTAATCGTAACGTCAACCCAGATGGCTCTTTAATAGCCAATGGCTATAACTGGCCAGAGTTCAGTCGTGAGAAGTTGACTACGGCCATGATTGCTCATCACTTCCGGATGTTTACCATTCGTGCTTGGCATCTGACGGATGGGTTCAATGAGAAGATTGAGAACGCTGTTGACTACGACATGTTTCTCAAGCTCAGTGAAGTTGGTAAATTTAAGCATCTGAACAAAATATGTTATAATCGGGTGTTACACGGCGATAACACCTCAATCAAGAAGCTTGGCATACAAAAGAAGAATCATTTCGTAGTTGTCAATCAGTCTCTAAACCGCCAAGGTATAACTTATTATAACTACGATGAATTTGATGATCTCGATGAGAGTCGGAAATACATTTTCAACAAGACTGCAGAGTATCAAGAAGAGATAGATATTCTTAAAGATATTGGATCCGCCATTTCTCAAATCACTGACGGTCAAATCCAAGCTACTACCACTGCTACCACCGAAGCTACCACCACTGCTGCCCCATCTTCCACCGTTGAAACTGTTTCTCCATCCAGCACCGAAACTATCTCTCAACAAACTGAAAATGGTGCTGCTAAGGCCGCTGTCGGTATGGGTGCCGGTGCTCTAGCTGCTGCTGCTATGTTGTTATAA

SEQ ID NO: 6 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Xenopus laevis

ATGCACTGTGAACGATTTATTTGTATATTACGAATAATTGGTACGACTTTGTTCGGAGTAAGTCTGCTACTAGGGATATCCGCCGCTTATATCGTGGGATACCAATTCATTCAGACGGATAATTACTACTTTTCCTTCGGTCTCTACGGTGCTATTTTAGCTTTACATTTAATCATTCAGTCTCTCTTCGCATTCCTGGAGCATCGTAAGATGAAGCGGTCACTTGAAACCCCTATAAAATTAAACAAGAGCGTAGCATTGTGTATCGCTGCATACCAGGAAGACGAAGATTATCTTAGAAAATGTTTGCTTTCTGTGAAACGGCTCACATACCCCGGTATGAAGGTAATCATGGTGATAGATGGTAACTCTGATGACGATCTATACATGATGAACATATTCAGAGAGATCATGGGAAATGATAGCTGCGCCACCTATGTATGGAAGAATAATTTTCACATGAAGGGACCAAACGAGACCGACGAGACTCACCGCGAGTCCATGCAGCATGTAACACAGATGGTGCTTTCTAACAGAAATGTCTGTATCATGCAAAAGTGGAACGGGAAACGCGAGGTGATGTATACTGCATTCAAAGCGCTGGGTCGGTCGGTTGATTACGTCCAAGTGTGCGACTCAGATACAGTCCTTGATCCAGCAAGCTCGGTGGAGATGGTCAAGGTGTTGGAGGAAGACATTATGGTCGGAGGTGTAGGCGGAGACGTGCAGATACTCAATAAGTACGACTCCTGGATCAGTTTCTTGAGTTCGGTTCGTTATTGGATGGCTTTCAATATAGAACGAGCATGCCAATCATACTTTGGCTGTGTGCAGTGTATATCGGGGCCTCTGGGCATGTACAGAAACTCACTCTTACATGAGTTCATTGAAGACTGGTACAATCAAGAATTCCTCGGTTCCCAATGCTCTTTCGGTGATGATCGGCATTTGACTAATCGAGTACTATCATTGGGCTATGCTACTAAATACACTGCGCGCAGTAAGTGTCTGACAGAAACCCCCACAGAATATCTTAGATGGTTGAACCAACAAACCAGGTGGAGTAAGTCCTATTTCCGCGAGTGGTTGTACAACTCTTTGTGGTTCCACAAACACCATTTATGGATGACTTATGAAGCCGTAATTACGGGTTTCTTCCCCTTCTTCTTAATAGCGACGGTGATTCAGCTCTTCTATCGTGGTCGAATTTGGAATATCTTACTCTTTCTACTCACAGTTCAATTAGTTGGTCTAATAAAGTCGTCGTTTGCAAGTGCGTTGCGTGGAAACATCGTTATGGTCTTTATGAGTTTCTACAGTGTTTTATACATGAGTAGCTTGCTGCCAGCAAAGATGTTTGCAATCGCCACGATAAACAAGGCTGGATGGGGTACTAGTGGTAGAAAGACCATAGTTGTTAATTTTATTGGTTTAATCCCTATTACGGTATGGTTCACAATTTTACTAGGGGGAGTATGCTACACTATATGGCGGGAAACCAAGAAGCCGTTTAGCGAGTCTGAGAAGATCGTTCTTGCGGTCGGTGCTATATTGTATGCTTGTTATTGGGTCATGTTGCTTACAATGTATGTCAGTCTTGTCATGAAGTGCGGGCGCCGTAGGAAGGAACCACAGCACGACCTTGTTTTAGCATAA

SEQ ID NO: 7 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Streptococcus Zooepidemicus

ATGAGGACGTTAAAGAATCTTATCACTGTTGTAGCGTTCAGTATATTCTGGGTTTTGCTGATCTATGTAAATGTCTATCTTTTCGGTGCGAAGGGGTCTCTATCAATATATGGATTCTTGCTAATTGCGTATTTGCTTGTGAAGATGAGTCTTTCATTCTTCTATAAACCATTCAAAGGTCGAGCTGGTCAGTATAAAGTCGCAGCGATTATCCCTTCATACAACGAGGATGCAGAATCGCTGTTGGAAACCTTAAAATCTGTTCAACAACAAACCTATCCCCTTGCTGAAATTTATGTAGTTGATGATGGTTCCGCAGATGAAACCGGTATCAAGCGGATCGAGGATTATGTCAGGGATACAGGCGACTTAAGTTCAAATGTGATTGTGCATCGATCAGAAAAGAATCAAGGCAAGAGACACGCCCAAGCATGGGCATTTGAAAGATCTGATGCAGATGTATTTCTAACAGTCGATAGTGATACTTACATTTATCCGGACGCCCTTGAAGAGTTATTGAAAACCTTCAATGATCCGACAGTATTTGCCGCAACTGGCCACTTGAACGTTCGTAACAGGCAGACTAATCTATTGACCAGACTCACTGATATAAGATACGACAATGCTTTTGGCGTCGAACGTGCTGCTCAAAGTGTAACTGGTAATATACTGGTGTGTTCCGGGCCACTGTCCGTCTATCGCAGAGAAGTAGTAGTCCCGAACATTGACAGGTATATTAATCAGACTTTTCTGGGTATCCCCGTGTCAATTGGGGACGACCGGTGTTTAACGAACTACGCTACTGATTTGGGCAAGACTGTATATCAGTCGACGGCTAAATGTATTACAGACGTCCCAGATAAGATGTCGACTTACCTTAAACAGCAGAATAGATGGAATAAGTCATTCTTTAGAGAATCTATCATCAGCGTGAAGAAGATCATGAATAATCCATTCGTGGCGCTTTGGACCATTTTGGAGGTTTCCATGTTTATGATGCTTGTCTACTCTGTCGTTGATTTCTTTGTAGGTAACGTTCGAGAATTTGATTGGCTCAGAGTTCTTGCTTTCTTAGTTATCATCTTCATCGTTGCGCTATGCAGGAATATTCATTACATGCTAAAACATCCGCTTAGCTTCTTACTCAGCCCTTTCTACGGCGTTTTGCATCTCTTCGTTTTGCAGCCATTGAAGCTCTACTCCTTATTTACCATTCGAAACGCTGATTGGGGTACGCGCAAGAAACTATTAtaa

SEQ ID NO: 8 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

MGKNIIIMVSWYTIITSNLIAVGGASLILAPAITGYVLHWNIALSTIWGVSAYGIFVFGFFLAQVLFSELNRKRLRKWISLRPKGWNDVRLAVIIAGYREDPYMFQKCLESVRDSDYGNVARLICVIDGDEDDDMRMAAVYKAIYNDNIKKPEFVLCESDDKEGERIDSDFSRDICVLQpHRGKRECLYTGFQLAKMDPSVNAVVLIDSDTVLEKDAILEVVYPLACDPEIQAVAGECKIWNTDTLLSLLVAWRYYSAFCVERSAQSFFRTVQCVGGPLGAYKIDIIKEIKDPWISQRFLGQKCTYGDDRRLTNEILMRGKKVVFTPFAVGWSDSPTNVFRYIVQQTRWSKSWCREIWYTLFAAWKHGLSGIWLAFECLYQITYFFLVIYLFSRLAVEADPRAQTATVIVSTTVALIKCGYFSFRAKDIRAFYFVLYTFVYFFCMIPARITAMMTLWDIGWGTRGGNEKPSVGTRVALWAKQYLIAYMWWAAVVGAGVYSIVHNWMFDWNSLSYRFALVGICSYIVFIVIVLVVYFTGKITTWNFTKLQKELIEDRVLYDATTNAQSV

SEQ ID NO: 9 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Pasteurella multocida

MNTLSQAIKAYNSNDYQLALKLFEKSAEIYGRKIVEFQITKCKEKLSAHPSVNSAHLSVNKEEKVNVCDSPLDIATQLLLSNVKKLVLSDSEKNTLKNKWKLLTEKKSENAEVRAVALVPKDFPKDLVLAPLPDHVNDFTWYKKRKKRLGIKPEHQHVGLSIIVTTFNRPAILSITLACLVNQKTHYPFEVIVTDDGSQEDLSPIIRQYENKLDIRYVRQKDNGFQASAARNMGLRLAKYDFIGLLDCDMAPNPLWVHSYVAELLEDDDLTIIGPRKYIDTQHIDPKDFLNNASLLESLPEVKTNNSVAAKGEGTVSLDWRLEQFEKTENLRLSDSPFRFFAAGNVAFAKKWLNKSGFFDEEFNHWGGEDVEFGYRLFRYGSFFKTIDGIMAYHQEPPGKENETDREAGKNITLDIMREKVPYIYRKLLPIEDSHINRVPLVSIYIPAYNCANYIQRCVDSALNQTVVDLEVCICNDGSTDNTLEVINKLYGNNPRVRIMSKPNGGIASASNAAVSFAKGYYIGQLDSDDYLEPDAVELCLKEFLKDKTLACVYTTNRNVNPDGSLIANGYNWPEFSREKLTTAMIAHHFRMFTIRAWHLTDGFNEKIENAVDYDMFLKLSEVGKFKHLNKICYNRVLHGDNTSIKKLGIQKKNHFVVVNQSLNRQGITYYNYDEFDDLDESRKYIFNKTAEYQEEIDILKDIKIIQNKDAKIAVSIFYPNTLNGLVKKLNNIIEYNKNIFVIVLHVDKNHLTPDIKKEILAFYHKHQVNILLNNDISYYTSNRLIKTEAHLSNINKLSQLNLNCEYIIFDNHDSLFVKNDSYAYMKKYDVGMNFSALTHDWIEKINAHPPFKKLIKTYFNDNDLKSMNVKGASQGMFMTYALAHELLTIIKEVITSCQSIDSVPEYNTEDIWFQFALLILEKKTGHVFNKTSTLTYMPWERKLQWTNEQIESAKRGENIPVNKFIINSITL

SEQ ID NO: 10 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Xenopus Laevis

MHCERFICILRIIGTTLFGVSLLLGISAAYIVGYQFIQTDNYYFSFGLYGAILALHLIIQSLFAFLEHRKMKRSLETPIKLNKSVALCIAAYQEDEDYLRKCLLSVKRLTYPGMKVIMVIDGNSDDDLYMMNIFREIMGNDSCATYVWKNNFHMKGPNETDETHRESMQHVTQMVLSNRNVCIMQKWNGKREVMYTAFKALGRSVDYVQVCDSDTVLDPASSVEMVKVLEEDIMVGGVGGDVQILNKYDSWISFLSSVRYWMAFNIERACQSYFGCVQCISGPLGMYRNSLLHEFIEDWYNQEFLGSQCSFGDDRHLTNRVLSLGYATKYTARSKCLTETPTEYLRWLNQQTRWSKSYFREWLYNSLWFHKHHLWMTYEAVITGFFPFFLIATVIQLFYRGRIWNILLFLLTVQLVGLIKSSFASALRGNIVMVFMSFYSVLYMSSLLPAKMFAIATINKAGWGTSGRKTIVVNFIGLIPITVWFTILLGGVCYTIWRETKKPFSESEKIVLAVGAILYACYWVMLLTMYVSLVMKCGRRRKEPQHDLVLA

SEQ ID NO: 11 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из Streptococcus Zooepidemicus

MRTLKNLITVVAFSIFWVLLIYVNVYLFGAKGSLSIYGFLLIAYLLVKMSLSFFYKPFKGRAGQYKVAAIIPSYNEDAESLLETLKSVQQQTYPLAEIYVVDDGSADETGIKRIEDYVRDTGDLSSNVIVHRSEKNQGKRHAQAWAFERSDADVFLTVDSDTYIYPDALEELLKTFNDPTVFAATGHLNVRNRQTNLLTRLTDIRYDNAFGVERAAQSVTGNILVCSGPLSVYRREVVVPNIDRYINQTFLGIPVSIGDDRCLTNYATDLGKTVYQSTAKCITDVPDKMSTYLKQQNRWNKSFFRESIISVKKIMNNPFVALWTILEVSMFMMLVYSVVDFFVGNVREFDWLRVLAFLVIIFIVALCRNIHYMLKHPLSFLLSPFYGVLHLFVLQPLKLYSLFTIRNADWGTRKKLL

SEQ ID NO: 12 представляет собой нуклеотидную последовательность udp-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из Arabidopsis Thaliana

ATGGTCAAAATATGCTGTATCGGGGCTGGATATGTCGGTGGGCCTACAATGGCCGTTATGGCCCTAAAGTGTCCAGAGATTGAAGTCGTGGTAGTTGATATATCGGAGCCACGAATTAACGCATGGAACTCAGACCGTCTACCAATTTATGAGCCAGGGTTAGAGGATGTCGTCAAACAGTGTAGAGGGAAGAATTTGTTCTTCTCTACAGATGTAGAGAAGCATGTATTTGAGTCAGATATAGTGTTTGTTTCGGTAAACACTCCTACGAAAACGCAGGGTCTGGGTGCAGGTAAAGCAGCAGATTTGACATATTGGGAGTCCGCTGCTCGCATGATAGCTGATGTGAGCAAATCGTCGAAAATCGTCGTTGAAAAGAGTACAGTACCAGTTCGTACAGCCGAGGCTATAGAAAAGATTTTAACGCACAATTCGAAGGGTATCGAATTCCAGATCTTATCAAATCCAGAATTCTTGGCCGAAGGGACGGCGATTAAAGACTTATATAACCCTGATAGAGTTCTAATCGGTGGCAGGGACACCGCTGCGGGACAAAAGGCCATTAAGGCGTTGCGTGACGTGTATGCCCACTGGGTTCCTGTTGAGCAAATAATCTGTACTAATTTATGGAGTGCCGAGCTATCAAAGTTGGCTGCGAACGCATTTCTAGCTCAAAGGATAAGTTCAGTAAACGCAATGTCAGCGCTTTGTGAGGCAACTGGTGCTGACGTAACCCAAGTCGCTCACGCCGTTGGAACCGACACTAGAATTGGACCGAAGTTTCTTAACGCATCCGTAGGCTTCGGCGGATCTTGCTTTCAGAAAGACATCCTGAATCTTATTTACATCTGCGAATGCAATGGTCTTCCAGAAGCAGCCAATTATTGGAAACAGGTAGTCAAGGTAAATGACTACCAAAAGATTAGGTTTGCTAATCGAGTCGTATCTTCTATGTTCAACACCGTCTCCGGTAAGAAAATTGCTATTTTGGGATTTGCGTTCAAGAAGGACACCGGCGACACGCGTGAAACTCCTGCCATAGATGTGTGTAATCGCCTCGTGGCTGATAAAGCAAAGCTGTCGATCTATGATCCGCAAGTATTAGAAGAGCAGATCCGCCGTGATCTGTCCATGGCCCGATTCGATTGGGACCATCCAGTCCCACTCCAGCAGATCAAAGCTGAAGGTATCTCCGAACAGGTTAACGTTGTGTCCGACGCCTACGAGGCTACGAAGGATGCTCATGGTTTATGTGTTTTAACCGAATGGGACGAATTCAAGTCACTTGATTTTAAGAAGATCTTTGATAATATGCAGAAACCCGCTTTCGTTTTCGACGGAAGAAACGTGGTCGACGCTGTGAAATTGAGAGAAATTGGATTCATAGTATATTCCATAGGTAAACCTCTGGATAGTTGGCTCAAGGATATGCCGGCTGTTGCATAA

SEQ ID NO: 13 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

ATGAGTAGAATTGCTGTCGTTGGATGCGGTTACGTGGGTACGGCCTGCGCCGTACTTTTGGCGCAGAAGAACGAAGTTATCGTTTTGGATATCTCGGAGGACCGGGTACAACTGATTAAGAATAAGAAGTCACCTATAGAAGATAAGGAAATCGAAGAATTCCTGGAGACGAAAGATTTGAATCTAACAGCGACGACGGATAAGGTGCTCGCCTATGAGAATGCTGAATTCGTTATAATAGCTACACCGACCGATTACGATGTCGTCACTAGATATTTCAACACTAAGTCTGTTGAAAATGTGATAGGCGATGTCATTAAGAACACTCAGACACACCCTACTATAGTGATCAAGAGTACTATTCCAATCGGTTTCGTGGATAAAGTTAGAGAACAGTTCGATTATCAAAATATTATCTTCTCGCCGGAATTCTTGAGAGAAGGACGAGCATTATATGATAATCTTTACCCCTCCCGTATCATCGTCGGTGATGACTCCCCAATTGCCTTAAAATTCGCGAATCTCTTGGTCGAGGGTAGCAAAACTCCACTAGCTCCCGTATTAACTATGGGTACGCGAGAGGCCGAAGCTGTAAAACTATTTTCAAATACATATTTGGCTATGAGAGTAGCATACTTCAATGAGCTAGACACATTTGCAATGTCCCATGGTATGAACGCAAAAGAGATTATCGACGGAGTCACACTAGAACCAAGGATAGGGCAGGGTTATTCGAATCCTTCATTTGGGTATGGAGCCTATTGTTTCCCAAAAGATACAAAGCAATTGTTGGCTAATTTTGAAGGGGTTCCACAAGATATTATTGGCGCAATCGTAGAGTCTAACGAAACTAGAAAGGAGGTTATTGTTTCTGAGGTCGAGAACAGATTTCCGACCACAGTTGGCGTATATAAGTTGGCTGCTAAAGCTGGTTCGGATAATTTCAGGTCTAGTGCGATAGTCGATATCATGGAAAGGTTGGCTAATAAGGGCTACCACATCAAAATATTTGAACCTACCGTTGAACAATTTGAGAATTTTGAGGTAGATAATAATCTCACAACTTTTGCAACCGAGTCTGATGTAATAATTGCGAACAGAGTTCCAGTCGAACATCGCATTCTGTTTGGGAAGAAGTTAATAACACGGGATGTCTATGGGGATAA

SEQ ID NO: 14 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из вируса хлореллы PBCV-1

ATGTCACGAATCGCAGTAGTTGGCTGTGGGTACGTGGGAACCGCATGCGCTGTACTGCTGGCGCAAAAGAATGAGGTAATCGTTCTTGATATTAGTGAGGATAGGGTCCAACTAATCAAGAACAAGAAATCCCCGATCGAAGATAAGGAGATTGAAGAATTCTTGGAAACAAAAGACCTAAACTTAACTGCAACAACTGACAAAGTTTTAGCCTACGAAAACGCTGAGTTTGTGATTATAGCGACACCCACAGATTATGACGTAGTTACCAGATACTTTAACACGAAGTCCGTAGAGAACGTCATTGGAGATGTTATAAAGAATACTCAGACTCATCCTACGATAGTAATAAAGTCAACCATTCCCATAGGTTTCGTAGATAAGGTTAGGGAGCAATTCGATTACCAGAACATTATATTTTCGCCAGAATTTCTGAGAGAGGGTCGCGCCCTGTATGATAATCTATATCCATCACGGATTATAGTGGGCGATGACTCTCCGATTGCACTTAAGTTTGCTAATCTTTTAGTTGAGGGCTCCAAAACTCCGCTCGCCCCAGTACTTACGATGGGTACACGTGAGGCTGAAGCTGTCAAGCTGTTTTCAAACACATACCTTGCTATGCGAGTCGCATACTTTAACGAACTAGATACCTTTGCTATGTCGCACGGTATGAATGCTAAAGAAATCATAGATGGCGTAACGTTGGAGCCTCGGATAGGTCAAGGATATTCCAATCCATCTTTTGGCTACGGTGCGTATTGTTTCCCAAAGGACACGAAGCAATTATTAGCTAACTTTGAGGGTGTTCCGCAAGATATAATTGGGGCGATAGTAGAAAGCAATGAAACACGGAAGGAGGTAATCGTGAGTGAAGTGGAAAACCGATTCCCCACTACGGTCGGCGTTTACAAATTAGCCGCCAAGGCTGGTTCCGACAATTTCCGATCCAGCGCAATAGTAGATATTATGGAAAGATTAGCTAATAAGGGATACCACATTAAAATCTTTGAACCTACTGTCGAACAGTTCGAGAACTTCGAGGTTGATAATAACTTGACGACTTTCGCAACGGAGAGCGATGTAATTATTGCAAACCGCGTACCTGTGGAACATCGAATTTTGTTCGGAAAGAAGCTGATTACACGCGATGTATATGGCGATAACTAA

SEQ ID NO: 15 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из Streptococcus Zooepidemicus

ATGAAGATATCGGTAGCGGGTTCGGGGTACGTGGGGTTATCCTTGTCAATCTTGCTTGCCCAACATAACGATGTGACTGTTGTAGATATAATCGACGAAAAGGTACGGCTAATTAACCAGGGCATATCTCCGATTAAGGATGCGGACATTGAGGAATATCTGAAGAATGCACCGTTGAATCTTACGGCTACACTAGACGGAGCTTCGGCTTATAGTAATGCTGATCTGATTATAATCGCAACGCCAACTAATTACGATTCAGAACGCAATTATTTCGACACCAGACACGTTGAAGAAGTAATTGAGCAAGTATTGGATTTAAATGCCTCCGCTACTATAATCATCAAGAGTACCATACCCTTGGGTTTTATTAAACACGTAAGAGAGAAATACCAAACAGACAGAATCATCTTTTCTCCAGAGTTCTTAAGAGAGTCAAAGGCATTGTACGATAACTTATACCCCTCTCGTATAATAGTCAGTTATGAGAAGGATGACTCTCCAAGAGTTATACAAGCAGCTAAGGCGTTCGCGGGTTTATTAAAAGAGGGGGCAAAGAGCAAGGATACCCCAGTTCTGTTTATGGGCTCTCAAGAAGCTGAAGCTGTCAAGCTGTTTGCTAATACTTTTCTCGCCATGAGGGTCAGTTACTTCAACGAGCTTGACACTTATAGCGAATCAAAAGGACTAGACGCCCAAAGAGTTATAGAAGGCGTCTGCCATGATCAAAGGATAGGTAATCATTACAATAATCCATCCTTCGGATATGGCGGTTATTGTTTACCCAAAGACTCAAAGCAACTTTTGGCTAATTATAGAGGCATACCTCAGTCTCTAATGTCTGCCATCGTTGAATCGAACAAGATCCGTAAGTCGTATTTAGCTGAACAAATATTAGATAGGGCTTCTTCACAAAAGCAGGCTGGTGTACCTTTAACCATAGGATTTTACCGTTTGATTATGAAGTCCAACTCCGATAACTTTAGAGAATCAGCCATTAAAGATATTATTGACATCATTAATGACTACGGTGTCAATATTGTCATTTATGAACCTATGTTGGGAGAAGACATTGGTTATAGAGTCGTTAAAGATTTGGAACAGTTTAAGAACGAAAGTACAATTATTGTTAGTAACAGGTTTGAAGATGATTTAGGTGATGTTATTGATAAAGTTTATACACGTGACGTCTTTGGTAG

SEQ ID NO: 16 представляет собой аминокислотную последовательность udp-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из Arabidopsis Thaliana

MVKICCIGAGYVGGPTMAVMALKCPEIEVVVVDISEPRINAWNSDRLPIYEPGLEDVVKQCRGKNLFFSTDVEKHVFESDIVFVSVNTPTKTQGLGAGKAADLTYWESAARMIADVSKSSKIVVEKSTVPVRTAEAIEKILTHNSKGIEFQILSNPEFLAEGTAIKDLYNPDRVLIGGRDTAAGQKAIKALRDVYAHWVPVEQIICTNLWSAELSKLAANAFLAQRISSVNAMSALCEATGADVTQVAHAVGTDTRIGPKFLNASVGFGGSCFQKDILNLIYICECNGLPEAANYWKQVVKVNDYQKIRFANRVVSSMFNTVSGKKIAILGFAFKKDTGDTRETPAIDVCNRLVADKAKLSIYDPQVLEEQIRRDLSMARFDWDHPVPLQQIKAEGISEQVNVVSDAYEATKDAHGLCVLTEWDEFKSLDFKKIFDNMQKPAFVFDGRNVVDAVKLREIGFIVYSIGKPLDSWLKDMPAVA

SEQ ID NO: 17 представляет собой аминокислотную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из вируса хлореллы PBCV1

MSRIAVVGCGYVGTACAVLLAQKNEVIVLDISEDRVQLIKNKKSPIEDKEIEEFLETKDLNLTATTDKVLAYENAEFVIIATPTDYDVVTRYFNTKSVENVIGDVIKNTQTHPTIVIKSTIPIGFVDKVREQFDYQNIIFSPEFLREGRALYDNLYPSRIIVGDDSPIALKFANLLVEGSKTPLAPVLTMGTREAEAVKLFSNTYLAMRVAYFNELDTFAMSHGMNAKEIIDGVTLEPRIGQGYSNPSFGYGAYCFPKDTKQLLANFEGVPQDIIGAIVESNETRKEVIVSEVENRFPTTVGVYKLAAKAGSDNFRSSAIVDIMERLANKGYHIKIFEPTVEQFENFEVDNNLTTFATESDVIIANRVPVEHRILFGKKLITRDVYGDN

SEQ ID NO: 18 представляет собой аминокислотную последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB), происходящую из Streptococcus Zooepidemicus

MKISVAGSGYVGLSLSILLAQHNDVTVVDIIDEKVRLINQGISPIKDADIEEYLKNAPLNLTATLDGASAYSNADLIIIATPTNYDSERNYFDTRHVEEVIEQVLDLNASATIIIKSTIPLGFIKHVREKYQTDRIIFSPEFLRESKALYDNLYPSRIIVSYEKDDSPRVIQAAKAFAGLLKEGAKSKDTPVLFMGSQEAEAVKLFANTFLAMRVSYFNELDTYSESKGLDAQRVIEGVCHDQRIGNHYNNPSFGYGGYCLPKDSKQLLANYRGIPQSLMSAIVESNKIRKSYLAEQILDRASSQKQAGVPLTIGFYRLIMKSNSDNFRESAIKDIIDIINDYGVNIVIYEPMLGEDIGYRVVKDLEQFKNESTIIVSNRFEDDLGDVIDKVYTRDVFGRD

SEQ ID NO: 19 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Bothrops Atrox, с N-концевым сигналом секреции

ATGCAATTTAGCACAGTCGCATCAGTAGCCTTCGTTGCCTTGGCCAACTTCGTGGCAGCACCGATGTATCCGAACGAACCGTTCTTAGTCTTTTGGAACGCGCCTACAACTCAGTGTAGACTTCGATATAAGGTTGACCTTGATCTGAAGACATTCCATATCGTGACAAATGCTAATGACTCGCTGTCAGGATCGGCTGTCACGATTTTCTATCCCACGCACTTAGGGGTTTACCCACATATTGATGACAGGGGGCACTTCTTCAATGGCATCATACCCCAAAATGAATCCCTGGTAAAGCATTTAAACAAATCTAAATCAGATATTAATCGAATGATTCCCTTAAGAACATTCCACGGGCTGGGAGTCATAGACTGGGAAAACTGGCGGCCACAGTGGGATAGGAATTGGGGAAGTAAGAACGTTTATAGGAATAGATCAATCCAATTCGCGCGTGATCTCCACCCAGAGCTTAGTGAGGACAAGATTAAACGCTTGGCAAAACAGGAATTCGAGAAAGCTGCAAAGAGTTTTATGAGGGATACACTATTATTAGCCGAGGAGATGCGACCAGACGGCTACTGGGGATACTATCTGTACCCCGATTGTCACAATTACAATTATAAGACTAAGCCAGATCAGTACACAGGAGAGTGCCCTGACATCGAGATGTCACGTAACAATCAACTCTTGTGGCTTTGGCGGGATAGCACTGCCCTTTTCCCCAATATCTACTTAGAGACTATACTAAGAAGCTCTGACAATGCCCTGAAGTTTGTGCACCATAGGCTCAAGGAGGCAATGAGGATAGCCTCAATGGCTCGAAATGACTACGCGTTGCCTTTCTTTGTTTATGCTCGACCATTCTATGCCTATACCTTCGAACCATTGACTCAGGAAGACCTTGTGACTACGGTCGGAGAGACCGCGGACATGGGCGCCGCTGGGATCGTATTTTGGGGGAGTATGCAGTACGCAAGCACGGTTGAATCTTGCGGCAAAGTCAAGGACTACATGAATGGCCCACTGGGGCGTTACATTGTGAATGTTACAACTGCCGCCAAAATTTGCTCACGATTCTTGTGCAAACGTCATGGTAGGTGTGTAAGAAAGCACTCAGACTCCAATGCATTCCTTCACCTATTTCCCGATTCGTTTCGCATAATGGTGCACGGGAATGCAACCGAGAAGAAAGTTATAGTAAAGGGGAAGCTGGAATTAAAGAATCTTATATTCTTACGTAATAACTTTATGTGCCAGTGTTATCAAGGCTGGAAAGGTCTATATTGCGAGAAGCATTCGATAAAGGAAATTCGGAAAATCTAA

SEQ ID NO: 20 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Bothrops Atrox, с N-концевым сигналом секреции и с-концевым якорным сигналом

ATGCAATTTAGCACAGTCGCATCAGTAGCCTTCGTTGCCTTGGCCAACTTCGTGGCAGCACCGATGTATCCGAACGAACCGTTCTTAGTCTTTTGGAACGCGCCTACAACTCAGTGTAGACTTCGATATAAGGTTGACCTTGATCTGAAGACATTCCATATCGTGACAAATGCTAATGACTCGCTGTCAGGATCGGCTGTCACGATTTTCTATCCCACGCACTTAGGGGTTTACCCACATATTGATGACAGGGGGCACTTCTTCAATGGCATCATACCCCAAAATGAATCCCTGGTAAAGCATTTAAACAAATCTAAATCAGATATTAATCGAATGATTCCCTTAAGAACATTCCACGGGCTGGGAGTCATAGACTGGGAAAACTGGCGGCCACAGTGGGATAGGAATTGGGGAAGTAAGAACGTTTATAGGAATAGATCAATCCAATTCGCGCGTGATCTCCACCCAGAGCTTAGTGAGGACAAGATTAAACGCTTGGCAAAACAGGAATTCGAGAAAGCTGCAAAGAGTTTTATGAGGGATACACTATTATTAGCCGAGGAGATGCGACCAGACGGCTACTGGGGATACTATCTGTACCCCGATTGTCACAATTACAATTATAAGACTAAGCCAGATCAGTACACAGGAGAGTGCCCTGACATCGAGATGTCACGTAACAATCAACTCTTGTGGCTTTGGCGGGATAGCACTGCCCTTTTCCCCAATATCTACTTAGAGACTATACTAAGAAGCTCTGACAATGCCCTGAAGTTTGTGCACCATAGGCTCAAGGAGGCAATGAGGATAGCCTCAATGGCTCGAAATGACTACGCGTTGCCTTTCTTTGTTTATGCTCGACCATTCTATGCCTATACCTTCGAACCATTGACTCAGGAAGACCTTGTGACTACGGTCGGAGAGACCGCGGACATGGGCGCCGCTGGGATCGTATTTTGGGGGAGTATGCAGTACGCAAGCACGGTTGAATCTTGCGGCAAAGTCAAGGACTACATGAATGGCCCACTGGGGCGTTACATTGTGAATGTTACAACTGCCGCCAAAATTTGCTCACGATTCTTGTGCAAACGTCATGGTAGGTGTGTAAGAAAGCACTCAGACTCCAATGCATTCCTTCACCTATTTCCCGATTCGTTTCGCATAATGGTGCACGGGAATGCAACCGAGAAGAAAGTTATAGTAAAGGGGAAGCTGGAATTAAAGAATCTTATATTCTTACGTAATAACTTTATGTGCCAGTGTTATCAAGGCTGGAAAGGTCTATATTGCGAGAAGCATTCGATAAAGGAAATTCGGAAAATCGGATCCGCCATTTCTCAAATCACTGACGGTCAAATCCAAGCTACTACCACTGCTACCACCGAAGCTACCACCACTGCTGCCCCATCTTCCACCGTTGAAACTGTTTCTCCATCCAGCACCGAAACTATCTCTCAACAAACTGAAAATGGTGCTGCTAAGGCCGCTGTCGGTATGGGTGCCGGTGCTCTAGCTGCTGCTGCTATGTTGTTATAA

SEQ ID NO: 21 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Cupiennius Salei, с N-концевым сигналом секреции

ATGCAATTCAGCACTGTTGCATCAGTTGCATTTGTCGCCCTGGCGAATTTTGTAGCCGCGTTCAAGATTTACTGGAACGTCCCAACTTTTCAGTGCACGCATAACTACAAAATCGATTATGTCAAATTGTTGTCCACTTACGGGATACAGGTCAATGATGGCGGTAAGTTTCAAGGAAACCAAGTGACTATCTTTTATGAAACCCAGTTGGGTTTGTATCCACGAATCCTAAAATCTGGTAAAATGGAAAACGGCGGAATCCCTCAACGCGGTAACTTTGAGAAACACCTAGAAAAGGCAAGCACGGACCTCCAGAAAGTGATCCCTTGGAAAGAGTTTAGCGGATTAGGTGTGATAGATTGGGAGGCTTGGAGACCCACATGGGAATTTAACTGGGAACCGTTGAGGATATATCAAACCGAATCAATTAAGAGAGCTAAAGAACTACACCCTACCGCAAACGATTCCGCAGTAAAAGAAATTGCAGAGCGGCAATGGGAAGATTCAGCCAAGTTATACATGTTAGAAACACTGCGGCTGGCAAAGAAACTTCGACCTCAAGCGCCTTGGTGTTACTACTTATTTCCTGATTGCTATAATTACGTCGGAAAGAAACCAAAAGATTTCCAATGTAGTGCCTCGATACGTAAAGGTAACGATAAGCTAAGCTGGTTGTGGAAAGATTCTACGGCATTGTGTCCATCGATATACGTATATGAATCACAATTAGACAGGTATTCTTTTGAACAAAGGACATGGCGCGACAATGAGAAACTTCGGGAAGCGTTGCGTGTAGCCACGAGAACCTCTAAAATATACCCATACGTTAACTATTTCGATAAGGAGCTTATACCGGAGCAAGAAGTATGGAGAATGCTTGCGCAGGCAGCTGCTGTCGGTGGCAGTGGTGCGGTAATTTGGGGCTCATCTGCTGCAGTTGCATCTGAAGAGTTATGTAAATCTTTAAAACAGTATATTATTGAAACGCTTGGGCCGGCGGCAGAGAAGGTGGCTTGGCGTAGTGACTTATGCAGCAAAGAAATTTGTAATAATCAGGGTCGCTGCACATTCCCGGACGATGATTATGCAAACGCATGGAAATTATTTACAGATGATACTGTTAAGTTTTATGCTGGTAATATTACATGTAGGTGCTCCGAGAATTATTCTGGTCGTTTCTGCGAAAAGAAGAATTAA

SEQ ID NO: 22 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Cupiennius Salei, с N-концевым сигналом секреции и с-концевым якорным сигналом

ATGCAATTCAGCACTGTTGCATCAGTTGCATTTGTCGCCCTGGCGAATTTTGTAGCCGCGTTCAAGATTTACTGGAACGTCCCAACTTTTCAGTGCACGCATAACTACAAAATCGATTATGTCAAATTGTTGTCCACTTACGGGATACAGGTCAATGATGGCGGTAAGTTTCAAGGAAACCAAGTGACTATCTTTTATGAAACCCAGTTGGGTTTGTATCCACGAATCCTAAAATCTGGTAAAATGGAAAACGGCGGAATCCCTCAACGCGGTAACTTTGAGAAACACCTAGAAAAGGCAAGCACGGACCTCCAGAAAGTGATCCCTTGGAAAGAGTTTAGCGGATTAGGTGTGATAGATTGGGAGGCTTGGAGACCCACATGGGAATTTAACTGGGAACCGTTGAGGATATATCAAACCGAATCAATTAAGAGAGCTAAAGAACTACACCCTACCGCAAACGATTCCGCAGTAAAAGAAATTGCAGAGCGGCAATGGGAAGATTCAGCCAAGTTATACATGTTAGAAACACTGCGGCTGGCAAAGAAACTTCGACCTCAAGCGCCTTGGTGTTACTACTTATTTCCTGATTGCTATAATTACGTCGGAAAGAAACCAAAAGATTTCCAATGTAGTGCCTCGATACGTAAAGGTAACGATAAGCTAAGCTGGTTGTGGAAAGATTCTACGGCATTGTGTCCATCGATATACGTATATGAATCACAATTAGACAGGTATTCTTTTGAACAAAGGACATGGCGCGACAATGAGAAACTTCGGGAAGCGTTGCGTGTAGCCACGAGAACCTCTAAAATATACCCATACGTTAACTATTTCGATAAGGAGCTTATACCGGAGCAAGAAGTATGGAGAATGCTTGCGCAGGCAGCTGCTGTCGGTGGCAGTGGTGCGGTAATTTGGGGCTCATCTGCTGCAGTTGCATCTGAAGAGTTATGTAAATCTTTAAAACAGTATATTATTGAAACGCTTGGGCCGGCGGCAGAGAAGGTGGCTTGGCGTAGTGACTTATGCAGCAAAGAAATTTGTAATAATCAGGGTCGCTGCACATTCCCGGACGATGATTATGCAAACGCATGGAAATTATTTACAGATGATACTGTTAAGTTTTATGCTGGTAATATTACATGTAGGTGCTCCGAGAATTATTCTGGTCGTTTCTGCGAAAAGAAGAATGGATCCGCCATTTCTCAAATCACTGACGGTCAAATCCAAGCTACTACCACTGCTACCACCGAAGCTACCACCACTGCTGCCCCATCTTCCACCGTTGAAACTGTTTCTCCATCCAGCACCGAAACTATCTCTCAACAAACTGAAAATGGTGCTGCTAAGGCCGCTGTCGGTATGGGTGCCGGTGCTCTAGCTGCTGCTGCTATGTTGTTATAA

SEQ ID NO: 23 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Hirudo Nipponia, с N-концевым сигналом секреции

ATGCAATTCTCTACTGTCGCTTCCGTTGCTTTCGTCGCTTTGGCTAACTTTGTTGCCGCTATGAAGGAGATAGCAGTTACCATCGATGATAAGAATGTTATAGCGTCTGTCAGTGAAAGCTTCCATGGTGTGGCTTTCGACGCAAGCCTATTCTCACCTAAAGGGCTATGGTCGTTTGTTGACATTACTTCACCCAAGTTATTCAAGCTTCTGGAGGGACTCTCCCCTGGTTATTTCCGTGTCGGCGGCACATTTGCGAACTGGTTATTCTTCGACCTCGATGAAAACAACAAGTGGAAGGATTACTGGGCTTTTAAGGACAAGACTCCAGAGACCGCCACGATTACCCGACGGTGGCTCTTCAGGAAGCAAAACAACCTCAAGAAGGAAACCTTTGATGATTTGGTAAAGCTTACAAAGGGGTCCAAGATGCGGCTGCTATTTGATCTAAACGCAGAGGTCCGTACAGGATATGAGATAGGCAAGAAGATGACATCAACTTGGGACTCAAGCGAGGCAGAAAAGTTGTTCAAATATTGCGTTAGCAAGGGATATGGAGATAATATCGATTGGGAGTTAGGCAACGAACCTGATCACACGTCAGCACACAATTTGACAGAGAAGCAAGTAGGTGAAGATTTTAAGGCCCTACACAAGGTGTTGGAAAAGTATCCAACACTTAATAAAGGTAGCTTGGTTGGTCCAGACGTTGGGTGGATGGGAGTGTCGTACGTCAAGGGTCTGGCTGACGGGGCTGGAGATCATGTGACCGCTTTTACTCTACATCAGTATTATTTCGATGGAAATACGAGTGATGTTAGTACCTACTTGGATGCGACGTACTTTAAGAAGTTGCAACAGTTATTCGATAAGGTAAAAGACGTACTCAAGAATTCTCCACATAAGGACAAACCCTTGTGGCTAGGGGAAACCTCTTCCGGCTACAACAGTGGGACTAAAGATGTATCCGATAGATACGTGTCGGGGTTCTTGACGCTGGACAAGTTGGGGCTTTCGGCGGCAAATAACGTCAAGGTGGTCATCAGACAAACGATTTATAATGGTTACTATGGTTTGCTTGACAAGAATACTTTGGAGCCCAATCCGGACTACTGGCTGATGCACGTCCACAATTCCTTAGTTGGTAATACCGTTTTCAAGGTCGATGTCAGCGATCCCACAAACAAAGCCCGTGTTTACGCTCAGTGTACGAAGACCAATAGTAAACATACCCAGTCACGTTATTATAAGGGGTCCCTAACCATTTTCGCGTTGAATGTAGGTGATGAAGATGTTACACTCAAGATTGATCAATACAGTGGTAAGAAAATATACTCATATATTCTGACGCCTGAAGGCGGCCAGTTAACCTCTCAAAAGGTACTGCTTAACGGTAAAGAATTGAAGTTAGTGTCAGATCAACTTCCAGAACTTAACGCGGACGAAAGTAAAACATCCTTCACATTGTCTCCCAAAACTTTTGGATTCTTTGTGGTCTCGGATGCCAACGTTGAAGCTTGCAAGAAATAA

SEQ ID NO: 24 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Hirudo Nipponia, с N-концевым сигналом секреции и с-концевым якорным сигналом

ATGCAATTCTCTACTGTCGCTTCCGTTGCTTTCGTCGCTTTGGCTAACTTTGTTGCCGCTATGAAGGAGATAGCAGTTACCATCGATGATAAGAATGTTATAGCGTCTGTCAGTGAAAGCTTCCATGGTGTGGCTTTCGACGCAAGCCTATTCTCACCTAAAGGGCTATGGTCGTTTGTTGACATTACTTCACCCAAGTTATTCAAGCTTCTGGAGGGACTCTCCCCTGGTTATTTCCGTGTCGGCGGCACATTTGCGAACTGGTTATTCTTCGACCTCGATGAAAACAACAAGTGGAAGGATTACTGGGCTTTTAAGGACAAGACTCCAGAGACCGCCACGATTACCCGACGGTGGCTCTTCAGGAAGCAAAACAACCTCAAGAAGGAAACCTTTGATGATTTGGTAAAGCTTACAAAGGGGTCCAAGATGCGGCTGCTATTTGATCTAAACGCAGAGGTCCGTACAGGATATGAGATAGGCAAGAAGATGACATCAACTTGGGACTCAAGCGAGGCAGAAAAGTTGTTCAAATATTGCGTTAGCAAGGGATATGGAGATAATATCGATTGGGAGTTAGGCAACGAACCTGATCACACGTCAGCACACAATTTGACAGAGAAGCAAGTAGGTGAAGATTTTAAGGCCCTACACAAGGTGTTGGAAAAGTATCCAACACTTAATAAAGGTAGCTTGGTTGGTCCAGACGTTGGGTGGATGGGAGTGTCGTACGTCAAGGGTCTGGCTGACGGGGCTGGAGATCATGTGACCGCTTTTACTCTACATCAGTATTATTTCGATGGAAATACGAGTGATGTTAGTACCTACTTGGATGCGACGTACTTTAAGAAGTTGCAACAGTTATTCGATAAGGTAAAAGACGTACTCAAGAATTCTCCACATAAGGACAAACCCTTGTGGCTAGGGGAAACCTCTTCCGGCTACAACAGTGGGACTAAAGATGTATCCGATAGATACGTGTCGGGGTTCTTGACGCTGGACAAGTTGGGGCTTTCGGCGGCAAATAACGTCAAGGTGGTCATCAGACAAACGATTTATAATGGTTACTATGGTTTGCTTGACAAGAATACTTTGGAGCCCAATCCGGACTACTGGCTGATGCACGTCCACAATTCCTTAGTTGGTAATACCGTTTTCAAGGTCGATGTCAGCGATCCCACAAACAAAGCCCGTGTTTACGCTCAGTGTACGAAGACCAATAGTAAACATACCCAGTCACGTTATTATAAGGGGTCCCTAACCATTTTCGCGTTGAATGTAGGTGATGAAGATGTTACACTCAAGATTGATCAATACAGTGGTAAGAAAATATACTCATATATTCTGACGCCTGAAGGCGGCCAGTTAACCTCTCAAAAGGTACTGCTTAACGGTAAAGAATTGAAGTTAGTGTCAGATCAACTTCCAGAACTTAACGCGGACGAAAGTAAAACATCCTTCACATTGTCTCCCAAAACTTTTGGATTCTTTGTGGTCTCGGATGCCAACGTTGAAGCTTGCAAGAAAGGATCCGCCATTTCTCAAATCACTGACGGTCAAATCCAAGCTACTACCACTGCTACCACCGAAGCTACCACCACTGCTGCCCCATCTTCCACCGTTGAAACTGTTTCTCCATCCAGCACCGAAACTATCTCTCAACAAACTGAAAATGGTGCTGCTAAGGCCGCTGTCGGTATGGGTGCCGGTGCTCTAGCTGCTGCTGCTATGTTGTTATAA

SEQ ID NO: 25 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Loxosceles Intermedia, с N-концевым сигналом секреции

ATGCAGTTTTCAACCGTTGCGAGCGTCGCTTTTGTGGCTCTTGCTAATTTCGTTGCCGCCTTCGATGTCTTCTGGAATGTTCCGTCGCAGCAATGCAAGAAATATGGTATGAAATTCGTTCCGCTCTTAGAGCAATACTCTATCCTAGTCAACAAAGAAGACAATTTCAAGGGCGACAAAATAACGATCTTTTATGAGTCACAGCTCGGGCTTTACCCACATATTGGTGCAAACGACGAGTCGTTTAATGGCGGGATACCACAATTAGGTGACCTGAAAGCACACTTAGAAAAGTCAGCGGTTGATATACGACGTGATATTTTGGATAAGTCGGCGACTGGTCTAAGAATTATAGACTGGGAAGCATGGAGACCAATATGGGAATTCAACTGGTCTAGCCTACGAAAGTACCAAGATAAAATGAAGAAAGTCGTCCGCCAGTTTAACCCGACTGCTCATGAATCCACAGTGGCCAAACTAGCACATAATGAGTGGGAAAATAGTAGTAAGTCTTGGATGCTTTCTACATTGCAGTTGGGTAAGCAACTTCGTCCAAACTCTGTATGGTGCTATTATTTATTTCCCGACTGTTATAACTATGATGGCAACTCAGTCCAAGAATTTCAGTGTTCTGAAGCTATCCGTAAGGGGAACGATAGGTTGAAATGGTTGTGGGAAGAATCGACAGCTGTATGCCCATCTATCTACATAAAAGAAGGCCAACTGACCAATTATACCTTGCAAAAGAGAATCTGGTTTACCAATGGGAGATTACAGGAAGCCTTGAGAGTAGCTCAACCTAAAGCGCGTATTTATCCATACATAAATTACTCCATCAAACCCGGAATGATGGTGCCTGAAGTTGAGTTTTGGCGGTTAATCGCTCAGATAGCCTCGCTGGGTATGGATGGAGCAGTGATTTGGGGATCAAGTGCGAGTGTAGGCAGTAAGAATCATTGTGCGCAATTAATGAAGTACATTGCAGACGTATTGGGTCCTGCAACTTTGCGCATAAAAGAAAATGTAGCACGGTGCAGTAAACAGGCGTGCTCTGGTAGGGGTAGATGTACCTGGCCTAAAGATACCTCTGTTATTGCTTGGAAGTTCCTCGTTGAAAAGGAAGACTATGACTTTTATCTGGGTGATATAGAGTGTAAATGTGTTGAAGGCTACGAAGGTAGGTACTGTGAACAAAAGACTAAGTAA

SEQ ID NO: 26 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Loxosceles Intermedia, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

ATGCAGTTTTCAACCGTTGCGAGCGTCGCTTTTGTGGCTCTTGCTAATTTCGTTGCCGCCTTCGATGTCTTCTGGAATGTTCCGTCGCAGCAATGCAAGAAATATGGTATGAAATTCGTTCCGCTCTTAGAGCAATACTCTATCCTAGTCAACAAAGAAGACAATTTCAAGGGCGACAAAATAACGATCTTTTATGAGTCACAGCTCGGGCTTTACCCACATATTGGTGCAAACGACGAGTCGTTTAATGGCGGGATACCACAATTAGGTGACCTGAAAGCACACTTAGAAAAGTCAGCGGTTGATATACGACGTGATATTTTGGATAAGTCGGCGACTGGTCTAAGAATTATAGACTGGGAAGCATGGAGACCAATATGGGAATTCAACTGGTCTAGCCTACGAAAGTACCAAGATAAAATGAAGAAAGTCGTCCGCCAGTTTAACCCGACTGCTCATGAATCCACAGTGGCCAAACTAGCACATAATGAGTGGGAAAATAGTAGTAAGTCTTGGATGCTTTCTACATTGCAGTTGGGTAAGCAACTTCGTCCAAACTCTGTATGGTGCTATTATTTATTTCCCGACTGTTATAACTATGATGGCAACTCAGTCCAAGAATTTCAGTGTTCTGAAGCTATCCGTAAGGGGAACGATAGGTTGAAATGGTTGTGGGAAGAATCGACAGCTGTATGCCCATCTATCTACATAAAAGAAGGCCAACTGACCAATTATACCTTGCAAAAGAGAATCTGGTTTACCAATGGGAGATTACAGGAAGCCTTGAGAGTAGCTCAACCTAAAGCGCGTATTTATCCATACATAAATTACTCCATCAAACCCGGAATGATGGTGCCTGAAGTTGAGTTTTGGCGGTTAATCGCTCAGATAGCCTCGCTGGGTATGGATGGAGCAGTGATTTGGGGATCAAGTGCGAGTGTAGGCAGTAAGAATCATTGTGCGCAATTAATGAAGTACATTGCAGACGTATTGGGTCCTGCAACTTTGCGCATAAAAGAAAATGTAGCACGGTGCAGTAAACAGGCGTGCTCTGGTAGGGGTAGATGTACCTGGCCTAAAGATACCTCTGTTATTGCTTGGAAGTTCCTCGTTGAAAAGGAAGACTATGACTTTTATCTGGGTGATATAGAGTGTAAATGTGTTGAAGGCTACGAAGGTAGGTACTGTGAACAAAAGACTAAGGGATCCGCCATTTCTCAAATCACTGACGGTCAAATCCAAGCTACTACCACTGCTACCACCGAAGCTACCACCACTGCTGCCCCATCTTCCACCGTTGAAACTGTTTCTCCATCCAGCACCGAAACTATCTCTCAACAAACTGAAAATGGTGCTGCTAAGGCCGCTGTCGGTATGGGTGCCGGTGCTCTAGCTGCTGCTGCTATGTTGTTATAA

SEQ ID NO: 27 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Tityus Serrulatus, с N-концевым сигналом секреции

ATGCAATTCTCTACTGTCGCTTCCGTTGCTTTCGTCGCTTTGGCTAACTTTGTTGCCGCTGCTGATTTTAAAGTTTACTGGGAAGTGCCTTCCTTCCTTTGTTCTAAACGTTTTAAAATTAATGTAACGGAAGTTTTAACAAGTCACGAGATTCTTGTCAATCAGGGTGAGAGTTTCAACGGTGACAAGATAGTAATCTTTTACGAAAACCAATTGGGGAAGTACCCGCATATTGACTCAAACAATGTGGAGATCAATGGAGGAATACTTCAAGTAGCCGATTTGGCGAAGCATTTGAAAGTAGCCAAGGATAATATCACTAAATTCGTCCCGAATCCTAATTTCAACGGTGTCGGAGTGATCGACTGGGAAGCTTGGCGGCCATCATGGGAATTTAACTGGGGTAAGTTAAAAGTATATAAAGAAAAGAGCATTGACTTGGTCAAGTCGAAACATCCGGAGTGGCCCTCCGACAGGGTTGAAAAGGTTGCTAAAGAGGAGTGGGAGGAGAGTGCCAAAGAATGGATGGTGAAGACCCTGAAGTTAGCACAGGAAATGCGACCGAACGCAGTTTGGTGCTATTATCTATTCCCTGACTGCTACAATTATTTCGGTAAGGATCAACCCTCTCAATTCAGCTGCTCGTCTCGAATTCAGAAGGAAAATTCTCGTCTTTCTTGGCTCTGGAATCAATCAACAGCCATTTGCCTAAGCATTTATATCCAGGAATCCCATGTTACCAAATATAATATGTCCCAGCGGACATGGTGGATCGATGCGAGATTAAGAGAAGCAATTCGAGTCAGCGAACACAGACCAAACATACCCATCTACCCTTACATTAATTATATTCTACCTGGAACTAATCAAACTGTACCAGCAATGGACTTTAAAAGGACACTGGGTCAAATAGCTAGCCTCGGCCTAGATGGTGCTTTGTTATGGGGATCTAGCTATCATGTTTTAACAGAATCTCAATGCAAAATCACTTCTGATTATGTGAAATCAGTGATTGCTCCTACCGTGGCTACTGTCGTTCTCAATACAAACAGATGCTCACAGATAATTTGTAAGGGTCGCGGCAACTGTGTTTGGCCTGAAGAACCATTTAGTTCTTGGAAATACTTAGTTGACCCCAAAATGCCAGTGTTCAAGCCAACCAACATCCACTGTAAATGTAAAGGTTACCTAGGTAGATACTGTGAGATCCCAAAGTAA

SEQ ID NO: 28 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Tityus Serrulatus, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

ATGCAATTCTCTACTGTCGCTTCCGTTGCTTTCGTCGCTTTGGCTAACTTTGTTGCCGCTGCTGATTTTAAAGTTTACTGGGAAGTGCCTTCCTTCCTTTGTTCTAAACGTTTTAAAATTAATGTAACGGAAGTTTTAACAAGTCACGAGATTCTTGTCAATCAGGGTGAGAGTTTCAACGGTGACAAGATAGTAATCTTTTACGAAAACCAATTGGGGAAGTACCCGCATATTGACTCAAACAATGTGGAGATCAATGGAGGAATACTTCAAGTAGCCGATTTGGCGAAGCATTTGAAAGTAGCCAAGGATAATATCACTAAATTCGTCCCGAATCCTAATTTCAACGGTGTCGGAGTGATCGACTGGGAAGCTTGGCGGCCATCATGGGAATTTAACTGGGGTAAGTTAAAAGTATATAAAGAAAAGAGCATTGACTTGGTCAAGTCGAAACATCCGGAGTGGCCCTCCGACAGGGTTGAAAAGGTTGCTAAAGAGGAGTGGGAGGAGAGTGCCAAAGAATGGATGGTGAAGACCCTGAAGTTAGCACAGGAAATGCGACCGAACGCAGTTTGGTGCTATTATCTATTCCCTGACTGCTACAATTATTTCGGTAAGGATCAACCCTCTCAATTCAGCTGCTCGTCTCGAATTCAGAAGGAAAATTCTCGTCTTTCTTGGCTCTGGAATCAATCAACAGCCATTTGCCTAAGCATTTATATCCAGGAATCCCATGTTACCAAATATAATATGTCCCAGCGGACATGGTGGATCGATGCGAGATTAAGAGAAGCAATTCGAGTCAGCGAACACAGACCAAACATACCCATCTACCCTTACATTAATTATATTCTACCTGGAACTAATCAAACTGTACCAGCAATGGACTTTAAAAGGACACTGGGTCAAATAGCTAGCCTCGGCCTAGATGGTGCTTTGTTATGGGGATCTAGCTATCATGTTTTAACAGAATCTCAATGCAAAATCACTTCTGATTATGTGAAATCAGTGATTGCTCCTACCGTGGCTACTGTCGTTCTCAATACAAACAGATGCTCACAGATAATTTGTAAGGGTCGCGGCAACTGTGTTTGGCCTGAAGAACCATTTAGTTCTTGGAAATACTTAGTTGACCCCAAAATGCCAGTGTTCAAGCCAACCAACATCCACTGTAAATGTAAAGGTTACCTAGGTAGATACTGTGAGATCCCAAAGGGATCCGCCATTTCTCAAATCACTGACGGTCAAATCCAAGCTACTACCACTGCTACCACCGAAGCTACCACCACTGCTGCCCCATCTTCCACCGTTGAAACTGTTTCTCCATCCAGCACCGAAACTATCTCTCAACAAACTGAAAATGGTGCTGCTAAGGCCGCTGTCGGTATGGGTGCCGGTGCTCTAGCTGCTGCTGCTATGTTGTTATAA

SEQ ID NO: 29 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Vespa Magnifica, с N-концевым сигналом секреции

ATGCAATTTTCTACAGTGGCAAGTGTTGCATTCGTTGCACTAGCCAACTTTGTGGCGGCAGATAGCTGTGGGTCAAACTGCGAAAAGAGTGAGAGACCGAAAAGGGTCTTCAACATTTACTGGAACGTACCTACATTCATGTGTCACCAGTACGGACTATACTTTGACGAGGTCACGAATTTTAATATAAAGCACAACAGCAAAGACAATTTTCAAGGGGACAAGATCGCGATCTTTTATGACCCCGGGGAGTTTCCCGCTCTGCTGCCACTAAACTATGGTAAGTACAAGATCAGGAATGGTGGTGTTCCACAAGAGGGTAACATCACCATCCATCTGCAGAGATTCATAGAGTACCTAGATAAGACCTATCCGAACCGTAACTTTTCAGGCATCGGTGTGATCGATTTCGAGAGGTGGAGACCAATTTTCAGACAGAATTGGGGTAATATGAAGATTTACAAGAACTTCTCCATCGATCTTGTGCGTAAAGAGCATCCTTTCTGGAATAAGAAAATGATCGAGTTGGAAGCTTCTAAAAGATTCGAGAAATACGCCCGTCTGTTCATGGAAGAAACATTAAAGTTGGCTAAGAAAACTAGAAAACAGGCCGATTGGGGCTACTACGGTTACCCCTATTGCTTCAACATGTCTCCTACTAATTTCGTTCCTGACTGCGATGTCACAGCTAGGGATGAGAACAACGAGATGTCTTGGTTGTTTAACAACCAGAATGTCCTATTACCAAGTGTATACATTAGGAGAGAGCTAACTCCTGACCAGAGGATTGGGCTTGTACAGGGGAGAGTGAAGGAAGCTGTGAGAATTTCAAATAAACTGAAGCACTCACCTAAAGTCTTCAGCTATTGGTGGTATGTTTACCAAGACGAGACCAACACCTTCTTAACGGAGACCGACGTCAAGAAGACGTTTCAGGAGATTGTGATCAACGGTGGAGATGGGATTATAATCTGGGGTTCGTCCTCTGATGTAAACAGCTTGTCCAAGTGTACGAGGTTAAGGGAGTACCTATTGACAGTCTTGGGACCAATTGCTGTTAACGTGACTGAAGCAGTAAACTAA

SEQ ID NO: 30 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Vespa Magnifica, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

ATGCAATTTTCTACAGTGGCAAGTGTTGCATTCGTTGCACTAGCCAACTTTGTGGCGGCAGATAGCTGTGGGTCAAACTGCGAAAAGAGTGAGAGACCGAAAAGGGTCTTCAACATTTACTGGAACGTACCTACATTCATGTGTCACCAGTACGGACTATACTTTGACGAGGTCACGAATTTTAATATAAAGCACAACAGCAAAGACAATTTTCAAGGGGACAAGATCGCGATCTTTTATGACCCCGGGGAGTTTCCCGCTCTGCTGCCACTAAACTATGGTAAGTACAAGATCAGGAATGGTGGTGTTCCACAAGAGGGTAACATCACCATCCATCTGCAGAGATTCATAGAGTACCTAGATAAGACCTATCCGAACCGTAACTTTTCAGGCATCGGTGTGATCGATTTCGAGAGGTGGAGACCAATTTTCAGACAGAATTGGGGTAATATGAAGATTTACAAGAACTTCTCCATCGATCTTGTGCGTAAAGAGCATCCTTTCTGGAATAAGAAAATGATCGAGTTGGAAGCTTCTAAAAGATTCGAGAAATACGCCCGTCTGTTCATGGAAGAAACATTAAAGTTGGCTAAGAAAACTAGAAAACAGGCCGATTGGGGCTACTACGGTTACCCCTATTGCTTCAACATGTCTCCTACTAATTTCGTTCCTGACTGCGATGTCACAGCTAGGGATGAGAACAACGAGATGTCTTGGTTGTTTAACAACCAGAATGTCCTATTACCAAGTGTATACATTAGGAGAGAGCTAACTCCTGACCAGAGGATTGGGCTTGTACAGGGGAGAGTGAAGGAAGCTGTGAGAATTTCAAATAAACTGAAGCACTCACCTAAAGTCTTCAGCTATTGGTGGTATGTTTACCAAGACGAGACCAACACCTTCTTAACGGAGACCGACGTCAAGAAGACGTTTCAGGAGATTGTGATCAACGGTGGAGATGGGATTATAATCTGGGGTTCGTCCTCTGATGTAAACAGCTTGTCCAAGTGTACGAGGTTAAGGGAGTACCTATTGACAGTCTTGGGACCAATTGCTGTTAACGTGACTGAAGCAGTAAACGGATCCGCCATTTCTCAAATCACTGACGGTCAAATCCAAGCTACTACCACTGCTACCACCGAAGCTACCACCACTGCTGCCCCATCTTCCACCGTTGAAACTGTTTCTCCATCCAGCACCGAAACTATCTCTCAACAAACTGAAAATGGTGCTGCTAAGGCCGCTGTCGGTATGGGTGCCGGTGCTCTAGCTGCTGCTGCTATGTTGTTATAA

SEQ ID NO: 31 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Bothrops Atrox, с N-концевым сигналом секреции

MQFSTVASVAFVALANFVAAPMYPNEPFLVFWNAPTTQCRLRYKVDLDLKTFHIVTNANDSLSGSAVTIFYPTHLGVYpHIDDRGHFFNGIIPQNESLVKHLNKSKSDINRMIPLRTFHGLGVIDWENWRPQWDRNWGSKNVYRNRSIQFARDLHPELSEDKIKRLAKQEFEKAAKSFMRDTLLLAEEMRPDGYWGYYLYPDCHNYNYKTKPDQYTGECPDIEMSRNNQLLWLWRDSTALFPNIYLETILRSSDNALKFVHHRLKEAMRIASMARNDYALPFFVYARPFYAYTFEPLTQEDLVTTVGETADMGAAGIVFWGSMQYASTVESCGKVKDYMNGPLGRYIVNVTTAAKICSRFLCKRHGRCVRKHSDSNAFLHLFPDSFRIMVHGNATEKKVIVKGKLELKNLIFLRNNFMCQCYQGWKGLYCEKHSIKEIRKI

SEQ ID NO: 32 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Bothrops Atrox, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

MQFSTVASVAFVALANFVAAPMYPNEPFLVFWNAPTTQCRLRYKVDLDLKTFHIVTNANDSLSGSAVTIFYPTHLGVYpHIDDRGHFFNGIIPQNESLVKHLNKSKSDINRMIPLRTFHGLGVIDWENWRPQWDRNWGSKNVYRNRSIQFARDLHPELSEDKIKRLAKQEFEKAAKSFMRDTLLLAEEMRPDGYWGYYLYPDCHNYNYKTKPDQYTGECPDIEMSRNNQLLWLWRDSTALFPNIYLETILRSSDNALKFVHHRLKEAMRIASMARNDYALPFFVYARPFYAYTFEPLTQEDLVTTVGETADMGAAGIVFWGSMQYASTVESCGKVKDYMNGPLGRYIVNVTTAAKICSRFLCKRHGRCVRKHSDSNAFLHLFPDSFRIMVHGNATEKKVIVKGKLELKNLIFLRNNFMCQCYQGWKGLYCEKHSIKEIRKIGSAISQITDGQIQATTTATTEATTTAAPSSTVETVSPSSTETISQQTENGAAKAAVGMGAGALAAAAMLL

SEQ ID NO: 33 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Cupiennius Salei, с N-концевым сигналом секреции

MQFSTVASVAFVALANFVAAFKIYWNVPTFQCTHNYKIDYVKLLSTYGIQVNDGGKFQGNQVTIFYETQLGLYPRILKSGKMENGGIPQRGNFEKHLEKASTDLQKVIPWKEFSGLGVIDWEAWRPTWEFNWEPLRIYQTESIKRAKELHPTANDSAVKEIAERQWEDSAKLYMLETLRLAKKLRPQAPWCYYLFPDCYNYVGKKPKDFQCSASIRKGNDKLSWLWKDSTALCPSIYVYESQLDRYSFEQRTWRDNEKLREALRVATRTSKIYPYVNYFDKELIPEQEVWRMLAQAAAVGGSGAVIWGSSAAVASEELCKSLKQYIIETLGPAAEKVAWRSDLCSKEICNNQGRCTFPDDDYANAWKLFTDDTVKFYAGNITCRCSENYSGRFCEKKN

SEQ ID NO: 34 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Cupiennius Salei, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

MQFSTVASVAFVALANFVAAFKIYWNVPTFQCTHNYKIDYVKLLSTYGIQVNDGGKFQGNQVTIFYETQLGLYPRILKSGKMENGGIPQRGNFEKHLEKASTDLQKVIPWKEFSGLGVIDWEAWRPTWEFNWEPLRIYQTESIKRAKELHPTANDSAVKEIAERQWEDSAKLYMLETLRLAKKLRPQAPWCYYLFPDCYNYVGKKPKDFQCSASIRKGNDKLSWLWKDSTALCPSIYVYESQLDRYSFEQRTWRDNEKLREALRVATRTSKIYPYVNYFDKELIPEQEVWRMLAQAAAVGGSGAVIWGSSAAVASEELCKSLKQYIIETLGPAAEKVAWRSDLCSKEICNNQGRCTFPDDDYANAWKLFTDDTVKFYAGNITCRCSENYSGRFCEKKNGSAISQITDGQIQATTTATTEATTTAAPSSTVETVSPSSTETISQQTENGAAKAAVGMGAGALAAAAMLL

SEQ ID NO: 35 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Hirudo Nipponia, с N-концевым сигналом секреции

MQFSTVASVAFVALANFVAA~MKEIAVTIDDKNVIASVSESFHGVAFDASLFSPKGLWSFVDITSPKLFKLLEGLSPGYFRVGGTFANWLFFDLDENNKWKDYWAFKDKTPETATITRRWLFRKQNNLKKETFDDLVKLTKGSKMRLLFDLNAEVRTGYEIGKKMTSTWDSSEAEKLFKYCVSKGYGDNIDWELGNEPDHTSAHNLTEKQVGEDFKALHKVLEKYPTLNKGSLVGPDVGWMGVSYVKGLADGAGDHVTAFTLHQYYFDGNTSDVSTYLDATYFKKLQQLFDKVKDVLKNSpHKDKPLWLGETSSGYNSGTKDVSDRYVSGFLTLDKLGLSAANNVKVVIRQTIYNGYYGLLDKNTLEPNPDYWLMHVHNSLVGNTVFKVDVSDPTNKARVYAQCTKTNSKHTQSRYYKGSLTIFALNVGDEDVTLKIDQYSGKKIYSYILTPEGGQLTSQKVLLNGKELKLVSDQLPELNADESKTSFTLSPKTFGFFVVSDANVEACKKGSAISQITDGQIQATTTATTEATTTAAPSSTVETVSPSSTETISQQTENGAAKAAVGMGAGALAAAAMLL

SEQ ID NO: 36 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Hirudo Nipponia, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

MQFSTVASVAFVALANFVAA~MKEIAVTIDDKNVIASVSESFHGVAFDASLFSPKGLWSFVDITSPKLFKLLEGLSPGYFRVGGTFANWLFFDLDENNKWKDYWAFKDKTPETATITRRWLFRKQNNLKKETFDDLVKLTKGSKMRLLFDLNAEVRTGYEIGKKMTSTWDSSEAEKLFKYCVSKGYGDNIDWELGNEPDHTSAHNLTEKQVGEDFKALHKVLEKYPTLNKGSLVGPDVGWMGVSYVKGLADGAGDHVTAFTLHQYYFDGNTSDVSTYLDATYFKKLQQLFDKVKDVLKNSpHKDKPLWLGETSSGYNSGTKDVSDRYVSGFLTLDKLGLSAANNVKVVIRQTIYNGYYGLLDKNTLEPNPDYWLMHVHNSLVGNTVFKVDVSDPTNKARVYAQCTKTNSKHTQSRYYKGSLTIFALNVGDEDVTLKIDQYSGKKIYSYILTPEGGQLTSQKVLLNGKELKLVSDQLPELNADESKTSFTLSPKTFGFFVVSDANVEACKK

SEQ ID NO: 37 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящей из Loxosceles Intermedia, с N-концевым сигналом секреции

MQFSTVASVAFVALANFVAAFDVFWNVPSQQCKKYGMKFVPLLEQYSILVNKEDNFKGDKITIFYESQLGLYpHIGANDESFNGGIPQLGDLKAHLEKSAVDIRRDILDKSATGLRIIDWEAWRPIWEFNWSSLRKYQDKMKKVVRQFNPTAHESTVAKLAHNEWENSSKSWMLSTLQLGKQLRPNSVWCYYLFPDCYNYDGNSVQEFQCSEAIRKGNDRLKWLWEESTAVCPSIYIKEGQLTNYTLQKRIWFTNGRLQEALRVAQPKARIYPYINYSIKPGMMVPEVEFWRLIAQIASLGMDGAVIWGSSASVGSKNHCAQLMKYIADVLGPATLRIKENVARCSKQACSGRGRCTWPKDTSVIAWKFLVEKEDYDFYLGDIECKCVEGYEGRYCEQKTK

SEQ ID NO: 38 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Loxosceles Intermedia, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

MQFSTVASVAFVALANFVAAFDVFWNVPSQQCKKYGMKFVPLLEQYSILVNKEDNFKGDKITIFYESQLGLYpHIGANDESFNGGIPQLGDLKAHLEKSAVDIRRDILDKSATGLRIIDWEAWRPIWEFNWSSLRKYQDKMKKVVRQFNPTAHESTVAKLAHNEWENSSKSWMLSTLQLGKQLRPNSVWCYYLFPDCYNYDGNSVQEFQCSEAIRKGNDRLKWLWEESTAVCPSIYIKEGQLTNYTLQKRIWFTNGRLQEALRVAQPKARIYPYINYSIKPGMMVPEVEFWRLIAQIASLGMDGAVIWGSSASVGSKNHCAQLMKYIADVLGPATLRIKENVARCSKQACSGRGRCTWPKDTSVIAWKFLVEKEDYDFYLGDIECKCVEGYEGRYCEQKTKGSAISQITDGQIQATTTATTEATTTAAPSSTVETVSPSSTETISQQTENGAAKAAVGMGAGALAAAAMLL

SEQ ID NO: 39 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Tityus Serrulatus, с N-концевым сигналом секреции

MQFSTVASVAFVALANFVAAADFKVYWEVPSFLCSKRFKINVTEVLTSHEILVNQGESFNGDKIVIFYENQLGKYpHIDSNNVEINGGILQVADLAKHLKVAKDNITKFVPNPNFNGVGVIDWEAWRPSWEFNWGKLKVYKEKSIDLVKSKHPEWPSDRVEKVAKEEWEESAKEWMVKTLKLAQEMRPNAVWCYYLFPDCYNYFGKDQPSQFSCSSRIQKENSRLSWLWNQSTAICLSIYIQESHVTKYNMSQRTWWIDARLREAIRVSEHRPNIPIYPYINYILPGTNQTVPAMDFKRTLGQIASLGLDGALLWGSSYHVLTESQCKITSDYVKSVIAPTVATVVLNTNRCSQIICKGRGNCVWPEEPFSSWKYLVDPKMPVFKPTNIHCKCKGYLGRYCEIPK

SEQ ID NO: 40 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Tityus Serrulatus, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

MQFSTVASVAFVALANFVAAADFKVYWEVPSFLCSKRFKINVTEVLTSHEILVNQGESFNGDKIVIFYENQLGKYpHIDSNNVEINGGILQVADLAKHLKVAKDNITKFVPNPNFNGVGVIDWEAWRPSWEFNWGKLKVYKEKSIDLVKSKHPEWPSDRVEKVAKEEWEESAKEWMVKTLKLAQEMRPNAVWCYYLFPDCYNYFGKDQPSQFSCSSRIQKENSRLSWLWNQSTAICLSIYIQESHVTKYNMSQRTWWIDARLREAIRVSEHRPNIPIYPYINYILPGTNQTVPAMDFKRTLGQIASLGLDGALLWGSSYHVLTESQCKITSDYVKSVIAPTVATVVLNTNRCSQIICKGRGNCVWPEEPFSSWKYLVDPKMPVFKPTNIHCKCKGYLGRYCEIPKGSAISQITDGQIQATTTATTEATTTAAPSSTVETVSPSSTETISQQTENGAAKAAVGMGAGALAAAAMLL

SEQ ID NO: 41 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Vespa Magnifica, с N-концевым сигналом секреции

MQFSTVASVAFVALANFVAADSCGSNCEKSERPKRVFNIYWNVPTFMCHQYGLYFDEVTNFNIKHNSKDNFQGDKIAIFYDPGEFPALLPLNYGKYKIRNGGVPQEGNITIHLQRFIEYLDKTYPNRNFSGIGVIDFERWRPIFRQNWGNMKIYKNFSIDLVRKEHPFWNKKMIELEASKRFEKYARLFMEETLKLAKKTRKQADWGYYGYPYCFNMSPTNFVPDCDVTARDENNEMSWLFNNQNVLLPSVYIRRELTPDQRIGLVQGRVKEAVRISNKLKHSPKVFSYWWYVYQDETNTFLTETDVKKTFQEIVINGGDGIIIWGSSSDVNSLSKCTRLREYLLTVLGPIAVNVTEAVN

SEQ ID NO: 42 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящую из Vespa Magnifica, с N-концевым сигналом секреции и С-концевым якорным сигналом

MQFSTVASVAFVALANFVAADSCGSNCEKSERPKRVFNIYWNVPTFMCHQYGLYFDEVTNFNIKHNSKDNFQGDKIAIFYDPGEFPALLPLNYGKYKIRNGGVPQEGNITIHLQRFIEYLDKTYPNRNFSGIGVIDFERWRPIFRQNWGNMKIYKNFSIDLVRKEHPFWNKKMIELEASKRFEKYARLFMEETLKLAKKTRKQADWGYYGYPYCFNMSPTNFVPDCDVTARDENNEMSWLFNNQNVLLPSVYIRRELTPDQRIGLVQGRVKEAVRISNKLKHSPKVFSYWWYVYQDETNTFLTETDVKKTFQEIVINGGDGIIIWGSSSDVNSLSKCTRLREYLLTVLGPIAVNVTEAVNAISQITDGQIQATTTATTEATTTAAPSSTVETVSPSSTETISQQTENGAAKAAVGMGAGALAAAAMLL

SEQ ID NO: 43 представляет собой нуклеотидную последовательность последовательности секреции, добавленной в 5’

ATGCAATTTAGCACAGTCGCATCAGTAGCCTTCGTTGCCTTGGCCAACTTCGTGGCAGCA

SEQ ID NO: 44 представляет собой аминокислотную последовательность последовательности секреции, добавленной в N-конце

MQFSTVASVAFVALANFVAA

SEQ ID NO: 45 представляет собой нуклеотидную последовательность якорной последовательности, добавленной в 3’

GGATCCGCCATTTCTCAAATCACTGACGGTCAAATCCAAGCTACTACCACTGCTACCACCGAAGCTACCACCACTGCTGCCCCATCTTCCACCGTTGAAACTGTTTCTCCATCCAGCACCGAAACTATCTCTCAACAAACTGAAAATGGTGCTGCTAAGGCCGCTGTCGGTATGGGTGCCGGTGCTCTAGCTGCTGCTGCTATGTTGTTATAA

SEQ ID NO: 46 представляет собой аминокислотную последовательность якорной последовательности, добавленной в C-конце

AISQITDGQIQATTTATTEATTTAAPSSTVETVSPSSTETISQQTENGAAKAAVGMGAGALAAAAMLL

SEQ ID NO: 47 представляет собой нуклеотидную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

ATGTGTGGTATCTTTGGTTACTGCAATTATCTAGTGGAAAGATCCAGAGGAGAAATTATCGACACCTTAGTGGATGGTTTACAAAGATTAGAATATAGAGGCTATGATTCCACCGGTATTGCTATCGATGGTGACGAAGCTGATTCTACTTTCATCTATAAGCAAATCGGTAAAGTGAGTGCTTTGAAAGAGGAGATTACTAAGCAAAATCCGAACAGAGACGTTACTTTTGTCTCTCATTGTGGTATTGCGCATACTAGATGGGCTACTCACGGTCGACCAGAACAAGTTAACTGTCACCCTCAAAGATCTGACCCAGAAGACCAATTTGTGGTCGTTCATAATGGTATCATCACAAATTTTAGAGAACTGAAGACTCTTTTAATTAACAAAGGTTATAAATTCGAAAGTGATACCGATACCGAGTGTATTGCTAAACTATATTTGCATTTATACAATACAAATTTACAAAATGGGCATGACTTAGATTTCCACGAATTAACCAAGCTAGTTCTTTTAGAACTAGAAGGTTCATACGGGTTATTATGTAAATCTTGTCACTATCCTAATGAGGTTATCGCCACTAGAAAAGGGTCCCCTTTACTGATTGGTGTCAAATCTGAAAAAAAACTAAAAGTCGACTTCGTGGATGTGGAATTTCCCGAAGAAAACGCTGGTCAACCGGAAATTCCATTGAAATCTAACAACAAATCATTTGGCTTGGGCCCAAAGAAAGCTCGTGAATTTGAAGCTGGTTCCCAAAATGCCAATTTACTACCAATTGCCGCCAATGAATTTAACTTGAGACATTCTCAATCCAGGGCTTTCCTATCAGAAGATGGATCTCCAACACCGGTGGAATTTTTTGTTTCTTCGGATGCGGCATCTGTTGTTAAACATACCAAGAAGGTGCTATTTTTAGAAGATGACGATTTGGCTCATATTTACGATGGTGAGTTACATATTCATAGATCTAGAAGAGAAGTAGGCGCATCAATGACAAGGTCCATTCAAACTTTAGAGATGGAGTTAGCTCAGATCATGAAGGGCCCTTACGACCATTTTATGCAAAAGGAAATCTATGAGCAACCAGAATCTACTTTCAATACTATGAGAGGTAGAATCGACTATGAAAATAATAAAGTGATATTGGGTGGTTTAAAGGCATGGTTACCAGTTGTCAGAAGAGCACGGAGACTGATCATGATCGCATGCGGTACTTCTTATCATTCATGTTTGGCTACTCGTGCTATCTTCGAAGAATTATCAGATATCCCAGTTAGTGTGGAATTAGCGTCTGACTTTCTGGACAGAAAATGCCCTGTCTTCAGAGACGATGTATGCGTGTTTGTTTCACAAAGTGGTGAAACTGCGGATACCATGCTGGCTCTAAATTATTGTTTAGAAAGAGGAGCCTTAACTGTCGGAATTGTTAACAGTGTTGGTTCTTCTATCTCTCGTGTCACCCACTGTGGTGTTCATATTAACGCTGGTCCTGAAATTGGTGTTGCCTCTACAAAAGCTTATACTTCCCAGTATATTGCCTTAGTGATGTTTGCTCTATCGCTGTCAGATGACCGTGTATCGAAAATAGACAGAAGAATTGAAATCATTCAAGGCTTGAAGTTAATCCCGGGCCAAATTAAGCAGGTATTAAAGCTGGAACCAAGAATAAAAAAGCTCTGTGCGACTGAATTAAAGGATCAAAAATCTCTATTGTTATTGGGTAGAGGTTACCAATTTGCTGCTGCTCTGGAAGGTGCTTTGAAGATCAAAGAAATTTCTTATATGCATTCTGAAGGTGTTTTGGCAGGTGAGTTGAAGCACGGTGTCTTGGCCTTGGTGGACGAAAACTTGCCAATCATTGCTTTTGGTACCAGAGACTCTCTATTCCCTAAAGTAGTTTCCTCTATTGAGCAAGTTACTGTAAGAAAGGGCCATCCAATTATTATTTGTAACGAAAATGATGAAGTGTGGGCGCAAAAATCTAAATCAATCGACCTGCAAACCTTAGAAGTTCCACAAACTGTTGATTGTTTACAAGGTCTAATTAATATTATTCCATTACAACTAATGTCATATTGGTTGGCTGTTAATAAAGGGATTGATGTTGATTTTCCAAGAAACTTGGCTAAATCTGTTACCGTCGAATAA

SEQ ID NO: 48 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

ATGTGCGGGATCTTCGGTGCTGTGTCGAACAATAATAGCATAGAAGTTTCCATCAAGGGTATACAGAAGCTAGAGTACCGCGGGTACGATTCGTGTGGAATAGCCTATACAGACGGAGGCGCCATTGAACGGATCAGGTCAATAGATGGGATCGACGACTTAAGGAAGAAAACAATAACAGAGTCTTCCCCGGTAGCTATCGCTCATTCAAGGTGGAGTACCACTGGGATTCCAAGTGTTGTGAACGCCCACCCGCACATCTCTCGGGGCACGTCTGGATGCGAGTCGCGCATTGCAGTCGTACACAATGGCATTATTGAAAATTACCAGCAGATCCGCAAGTACTTGATAAATCTTGGGTATACTTTCGATTCACAGACCGACACGGAAGTCATTGCTCATCTAATAGACTCGCAGTATAACGGGAACATCCTGCACACCGTCCAAATGGCAGTTAAGCACCTCAAAGGAAGCTACGCCATAGCAGTCATGTGCCATAAGGAGTCCGGGAAGATCGTGGTGGCAAAACAGAAGAGTCCGTTGGTATTGGGTATAGGAAGCGACGGAGCTTATTATATCGCATCGGACGTATTGGCTCTTCCCACTAACAAAGTGGTCTACATAAGTGACGGATTCTCTGCTGAGTTAAGTCCTGGATCGATGACTATCTATGATCTGGATGGCAATAAGGTAGAATACGAGGTGGAAGACGTTGAAATGGAGCAGACGTCGATGTCTTTAGATAACTTTGATCACTACATGATCAAAGAGATCAATGAACAGCCGATATCAATTCTCAATACTATTAAGAACAAAGGATTCTATGCAGAGATATTTGGTGATCTAGCACATGAAATATTTCAGAAGATCGACAATATATTGATTCTAGCCTGCGGAACTTCGTATCATGCAGGTCTCGTCGGGAAGCAATGGATAGAGACCATCTCACGCATCCCGGTGGATGTTCATATTGCAAGCGAGTATGAGCCGACAATTCCACGAGCCAATACACTTGTGATAACGATTAGTCAAAGCGGCGAGACTGCGGATACAATCGCAGCCCTTCAACGAGCGCAAAACGCAGGAATGATATACACTTTGTGTATCTGCAACAGCCCCAAGTCAACTCTAGTGCGCGAGTCGATAATGAAATACATAACCAAATGCGGTTCAGAAGTTTCTGTTGCCAGTACTAAAGCATTTACGTCGCAACTTGTGGTGTTGTATATGCTTGCGAACGTTCTTGCGAACAAAACTGATGATCTGCTAGGGGATCTTCCTCAAGCTATCGAGAGAGTAATCTGTCTTACTAATGACGAAATGAAGCGTTGGGCGGATGAAATTTGTACTGCCAAAAGTGCCATCTTCTTAGGGAGAGGACTGAACGCACCTGTAGCATTTGAGGGCGCGCTAAAGTTGAAGGAAATCTCATATATCCATGCCGAGGGTTTCCTCGGTGGAGAGTTGAAGCATGGGCCGCTGGCTTTGTTGGACGATAAGATCCCTGTAATCGTGACTGTTGCTGACCACGCTTATTTGGATCACATTAAGGCTAACATCGACGAGGTATTGGCACGAAACGTTACCGTATACGCGATCGTCGATCAGTATGTTAATATTGAACCACAGGAGCGACTGCATGTAGTAAAAGTGCCGTTTGTGAGTAAAGAGTTTTCTCCCATCATCCACACAATTCCGATGCAATTGTTATCGTATTATGTCGCGATCAAGCTGGGCAAGAACGTTGACAAGCCACGTAACCTGGCGAAAAGTGTTACAACATTCtaa

SEQ ID NO: 49 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

ATGTGTGGCATCTTTGGAGCAGTGTCAAACAACAACTCTATCGAGGTGTCAATCAAGGGTATTCAGAAGCTAGAATATCGTGGGTATGATTCGTGCGGTATTGCGTATACAGATGGGGGTGCGATTGAGCGTATACGTTCTATTGACGGCATTGACGATCTGCGTAAGAAAACAATCACAGAATCATCACCAGTGGCCATTGCTCACTCGCGGTGGAGCACCACTGGAATTCCATCAGTGGTGAACGCACATCCTCATATTTCTCGCGGAACCAGTGGGTGTGAGTCTCGTATCGCGGTAGTCCACAACGGTATCATTGAAAACTATCAGCAGATCCGAAAATATCTCATCAATCTTGGTTATACGTTTGATAGTCAAACGGACACAGAGGTCATTGCGCATTTGATTGATTCTCAGTACAATGGGAATATCTTGCACACCGTCCAAATGGCTGTCAAGCACCTGAAGGGCTCTTATGCCATTGCAGTTATGTGTCATAAAGAGTCTGGTAAAATAGTCGTGGCGAAACAGAAGTCACCCCTCGTACTTGGAATCGGCTCAGATGGTGCTTACTACATCGCTTCGGACGTGCTGGCGCTGCCGACAAATAAAGTTGTTTATATTTCAGACGGTTTCTCCGCAGAACTATCTCCAGGGAGTATGACCATTTACGATCTTGATGGAAATAAAGTAGAATATGAAGTAGAGGACGTTGAAATGGAACAAACTAGTATGTCTCTCGATAACTTTGATCATTACATGATTAAGGAAATTAATGAGCAACCAATCAGTATTCTAAACACTATAAAAAATAAAGGGTTCTATGCAGAAATATTCGGTGATTTGGCTCATGAAATCTTCCAAAAAATAGACAACATCCTGATACTGGCTTGTGGTACAAGTTATCACGCCGGTCTTGTAGGAAAACAGTGGATAGAGACCATCTCtAGAATCCCCGTGGATGTTCACATCGCGAGTGAATACGAACCTACTATTCCGAGAGCGAACACATTGGTAATCACTATTTCACAGTCGGGTGAAACTGCGGACACGATAGCGGCTTTGCAACGGGCCCAAAACGCCGGGATGATTTATACATTGTGTATTTGCAATTCACCAAAGAGCACTCTTGTTCGTGAGAGCATTATGAAGTACATCACGAAATGTGGTTCTGAGGTGTCAGTGGCATCAACGAAGGCGTTTACTTCTCAGCTCGTAGTACTGTACATGCTGGCAAACGTATTGGCAAATAAAACCGATGATTTGCTGGGAGACCTCCCACAGGCAATAGAACGGGTAATTTGTTTGACAAATGACGAAATGAAACGATGGGCCGACGAAATTTGCACTGCGAAATCCGCGATCTTCCTGGGAAGAGGACTAAACGCACCAGTTGCCTTTGAGGGAGCGTTGAAGCTCAAAGAAATCTCTTACATTCATGCAGAGGGCTTCCTGGGAGGTGAGTTGAAACACGGCCCCCTCGCACTCCTTGATGACAAGATTCCTGTTATCGTAACCGTAGCAGATCATGCTTATTTGGACCATATCAAAGCAAATATCGACGAAGTGCTTGCGAGGAACGTTACGGTATACGCCATAGTAGACCAGTATGTGAACATCGAGCCCCAGGAACGCCTTCACGTCGTCAAGGTTCCGTTTGTATCCAAAGAATTTTCTCCGATAATTCACACTATCCCGATGCAACTGCTTTCGTATTACGTGGCAATTAAGCTTGGAAAGAACGTTGACAAACCAAGGAATCTTGCAAAATCCGTGACTACCTTTTAA

SEQ ID NO: 50 представляет собой аминокислотную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

MCGIFGYCNYLVERSRGEIIDTLVDGLQRLEYRGYDSTGIAIDGDEADSTFIYKQIGKVSALKEEITKQNPNRDVTFVSHCGIAHTRWATHGRPEQVNCHPQRSDPEDQFVVVHNGIITNFRELKTLLINKGYKFESDTDTECIAKLYLHLYNTNLQNGHDLDFHELTKLVLLELEGSYGLLCKSCHYPNEVIATRKGSPLLIGVKSEKKLKVDFVDVEFPEENAGQPEIPLKSNNKSFGLGPKKAREFEAGSQNANLLPIAANEFNLRHSQSRAFLSEDGSPTPVEFFVSSDAASVVKHTKKVLFLEDDDLAHIYDGELHIHRSRREVGASMTRSIQTLEMELAQIMKGPYDHFMQKEIYEQPESTFNTMRGRIDYENNKVILGGLKAWLPVVRRARRLIMIACGTSYHSCLATRAIFEELSDIPVSVELASDFLDRKCPVFRDDVCVFVSQSGETADTMLALNYCLERGALTVGIVNSVGSSISRVTHCGVHINAGPEIGVASTKAYTSQYIALVMFALSLSDDRVSKIDRRIEIIQGLKLIPGQIKQVLKLEPRIKKLCATELKDQKSLLLLGRGYQFAAALEGALKIKEISYMHSEGVLAGELKHGVLALVDENLPIIAFGTRDSLFPKVVSSIEQVTARKGHPIIICNENDEVWAQKSKSIDLQTLEVPQTVDCLQGLINIIPLQLMSYWLAVNKGIDVDFPRNLAKSVTVE

SEQ ID NO: 51 представляет собой аминокислотную последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящую из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

MCGIFGAVSNNNSIEVSIKGIQKLEYRGYDSCGIAYTDGGAIERIRSIDGIDDLRKKTITESSPVAIAHSRWSTTGIPSVVNAHpHISRGTSGCESRIAVVHNGIIENYQQIRKYLINLGYTFDSQTDTEVIAHLIDSQYNGNILHTVQMAVKHLKGSYAIAVMCHKESGKIVVAKQKSPLVLGIGSDGAYYIASDVLALPTNKVVYISDGFSAELSPGSMTIYDLDGNKVEYEVEDVEMEQTSMSLDNFDHYMIKEINEQPISILNTIKNKGFYAEIFGDLAHEIFQKIDNILILACGTSYHAGLVGKQWIETISRIPVDVHIASEYEPTIPRANTLVITISQSGETADTIAALQRAQNAGMIYTLCICNSPKSTLVRESIMKYITKCGSEVSVASTKAFTSQLVVLYMLANVLANKTDDLLGDLPQAIERVICLTNDEMKRWADEICTAKSAIFLGRGLNAPVAFEGALKLKEISYIHAEGFLGGELKHGPLALLDDKIPVIVTVADHAYLDHIKANIDEVLARNVTVYAIVDQYVNIEPQERLHVVKVPFVSKEFSPIIHTIPMQLLSYYVAIKLGKNVDKPRNLAKSVTTF

SEQ ID NO: 52 представляет собой нуклеотидную последовательность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

ATGACTGACACAAAACAGCTATTCATTGAAGCCGGACAAAGTCAACTTTTCCACAATTGGGAAAGCTTGTCTCGCAAAGACCAAGAAGAATTGCTTTCAAACCTGGAGCAAATATCTTCCAAGAGGTCCCCTGCAAAACTACTGGAAGACTGTCAAAATGCTATTAAATTCTCACTAGCTAACTCTTCTAAGGATACTGGCGTCGAAATTTCACCATTGCCCCCTACTTCGTACGAGTCGCTTATTGGCAACAGTAAGAAAGAAAATGAATACTGGCGTTTAGGCCTTGAAGCTATTGGCAAGGGTGAAGTCGCAGTGATTTTAATGGCTGGCGGACAAGGTACGCGGTTAGGATCCTCTCAACCAAAGGGCTGTTACGACATTGGATTGCCTTCTAAGAAATCTCTTTTTCAAATTCAAGCTGAAAAGTTGATCAGGTTGCAAGATATGGTAAAGGACAAAAAGGTAGAAATTCCTTGGTATATTATGACATCAGGCCCCACTAGAGCGGCTACTGAGGCATACTTTCAAGAACACAATTATTTTGGCTTGAATAAAGAACAAATTACGTTCTTCAACCAGGGAACCCTGCCTGCCTTTGATTTAACCGGGAAGCATTTCCTAATGAAAGACCCAGTAAACCTATCTCAATCACCAGATGGAAATGGTGGACTCTACCGTGCCATCAAGGAAAACAAGTTGAACGAAGACTTTGATAGGAGAGGAATCAAGCATGTTTACATGTACTGTGTCGATAATGTCCTATCTAAAATCGCAGACCCTGTATTTATTGGTTTTGCCATCAAGCATGGCTTCGAACTGGCCACCAAAGCCGTTAGAAAGAGAGATGCGCATGAATCAGTTGGGTTAATTGCTACTAAAAACGAGAAACCATGTGTCATAGAATATTCTGAAATTTCCAATGAATTGGCTGAAGCAAAGGATAAAGATGGCTTATTAAAACTACGCGCAGGCAACATTGTAAATCATTATTACCTAGTGGATTTACTAAAACGTGATTTGGATCAGTGGTGTGAGAATATGCCATATCACATTGCGAAGAAGAAAATTCCAGCTTATGATAGTGTTACCGGCAAGTACACTAAGCCTACCGAACCAAACGGTATAAAATTAGAGCAATTCATATTTGATGTCTTTGACACTGTACCACTGAACAAGTTTGGGTGCTTAGAAGTAGATAGATGCAAAGAATTTTCACCTTTAAAAAACGGTCCTGGTTCTAAGAACGATAATCCTGAGACCAGCAGACTAGCATATTTGAAACTAGGAACCTCGTGGTTGGAAGATGCAGGCGCTATTGTAAAAGATGGGGTACTAGTCGAAGTTTCCAGCAAATTGAGTTATGCAGGTGAAAATCTATCCCAGTTCAAAGGTAAAGTCTTTGACAGAAGTGGTATAGTATTAGAAAAATAA

SEQ ID NO: 53 представляет собой аминокислотную последовательность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

MTDTKQLFIEAGQSQLFHNWESLSRKDQEELLSNLEQISSKRSPAKLLEDCQNAIKFSLANSSKDTGVEISPLPPTSYESLIGNSKKENEYWRLGLEAIGKGEVAVILMAGGQGTRLGSSQPKGCYDIGLPSKKSLFQIQAEKLIRLQDMVKDKKVEIPWYIMTSGPTRAATEAYFQEHNYFGLNKEQITFFNQGTLPAFDLTGKHFLMKDPVNLSQSPDGNGGLYRAIKENKLNEDFDRRGIKHVYMYCVDNVLSKIADPVFIGFAIKHGFELATKAVRKRDAHESVGLIATKNEKPCVIEYSEISNELAEAKDKDGLLKLRAGNIVNHYYLVDLLKRDLDQWCENMPYHIAKKKIPAYDSVTGKYTKPTEPNGIKLEQFIFDVFDTVPLNKFGCLEVDRCKEFSPLKNGPGSKNDNPETSRLAYLKLGTSWLEDAGAIVKDGVLVEVSSKLSYAGENLSQFKGKVFDRSGIVLEK

SEQ ID NO: 54 представляет собой нуклеотидную последовательность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

ATGTCACTTCTAATAGATTCTGTACCAACAGTTGCTTATAAGGACCAAAAACCGGGTACTTCAGGTTTACGTAAGAAGACCAAGGTTTTCATGGATGAGCCTCATTATACTGAGAACTTCATTCAAGCAACAATGCAATCTATCCCTAATGGCTCAGAGGGAACCACTTTAGTTGTTGGAGGAGATGGTCGTTTCTACAACGATGTTATCATGAACAAGATTGCCGCAGTAGGTGCTGCAAACGGTGTCAGAAAGTTAGTCATTGGTCAAGGCGGTTTACTTTCAACACCAGCTGCTTCTCATATAATTAGAACATACGAGGAAAAGTGTACCGGTGGTGGTATCATATTAACTGCCTCACACAACCCAGGCGGTCCAGAGAATGATTTAGGTATCAAGTATAATTTACCTAATGGTGGGCCAGCTCCAGAGAGTGTCACTAACGCTATCTGGGAAGCGTCTAAAAAATTAACTCACTATAAAATTATAAAGAACTTCCCCAAGTTGAATTTGAACAAGCTTGGTAAAAACCAAAAATATGGCCCATTGTTAGTGGACATAATTGATCCTGCCAAAGCATACGTTCAATTTCTGAAGGAAATTTTTGATTTTGACTTAATTAAAAGCTTCTTAGCGAAACAGCGCAAAGACAAAGGGTGGAAGTTGTTGTTTGACTCCTTAAATGGTATTACAGGACCATATGGTAAGGCTATATTTGTTGATGAATTTGGTTTACCGGCAGAGGAAGTTCTTCAAAATTGGCACCCTTTACCTGATTTCGGCGGTTTACATCCCGATCCGAATCTAACCTATGCACGAACTCTTGTTGACAGGGTTGACCGCGAAAAAATTGCCTTTGGAGCAGCCTCCGATGGTGATGGTGATAGGAATATGATTTACGGTTATGGCCCTGCTTTCGTTTCGCCAGGTGATTCTGTTGCCATTATTGCCGAATATGCACCCGAAATTCCATACTTCGCCAAACAAGGTATTTATGGCTTGGCACGTTCATTTCCTACATCCTCAGCCATTGATCGTGTTGCAGCAAAAAAGGGATTAAGATGTTACGAAGTTCCAACCGGCTGGAAATTCTTCTGTGCCTTATTTGATGCTAAAAAGCTATCAATCTGTGGTGAAGAATCCTTCGGTACAGGTTCCAATCATATCAGAGAAAAGGACGGTCTATGGGCCATTATTGCTTGGTTAAATATCTTGGCTATCTACCATAGGCGTAACCCTGAAAAGGAAGCTTCGATCAAAACTATTCAGGACGAATTTTGGAACGAGTATGGCCGTACTTTCTTCACAAGATACGATTACGAACATATCGAATGCGAGCAGGCCGAAAAAGTTGTAGCTCTTTTGAGTGAATTTGTATCAAGGCCAAACGTTTGTGGCTCCCACTTCCCAGCTGATGAGTCTTTAACCGTTATCGATTGTGGTGATTTTTCGTATAGAGATCTAGATGGCTCCATCTCTGAAAATCAAGGCCTTTTCGTAAAGTTTTCGAATGGGACTAAATTTGTTTTGAGGTTATCCGGCACAGGCAGTTCTGGTGCAACAATAAGATTATACGTAGAAAAGTATACTGATAAAAAGGAGAACTATGGCCAAACAGCTGACGTCTTCTTGAAACCCGTCATCAACTCCATTGTAAAATTCTTAAGATTTAAAGAAATTTTAGGAACAGACGAACCAACAGTCCGCACATAG

SEQ ID NO: 55 представляет собой аминокислотную последовательность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

MSLLIDSVPTVAYKDQKPGTSGLRKKTKVFMDEpHYTENFIQATMQSIPNGSEGTTLVVGGDGRFYNDVIMNKIAAVGAANGVRKLVIGQGGLLSTPAASHIIRTYEEKCTGGGIILTASHNPGGPENDLGIKYNLPNGGPAPESVTNAIWEASKKLTHYKIIKNFPKLNLNKLGKNQKYGPLLVDIIDPAKAYVQFLKEIFDFDLIKSFLAKQRKDKGWKLLFDSLNGITGPYGKAIFVDEFGLPAEEVLQNWHPLPDFGGLHPDPNLTYARTLVDRVDREKIAFGAASDGDGDRNMIYGYGPAFVSPGDSVAIIAEYAPEIPYFAKQGIYGLARSFPTSSAIDRVAAKKGLRCYEVPTGWKFFCALFDAKKLSICGEESFGTGSNHIREKDGLWAIIAWLNILAIYHRRNPEKEASIKTIQDEFWNEYGRTFFTRYDYEHIECEQAEKVVALLSEFVSRPNVCGSHFPADESLTVIDCGDFSYRDLDGSISENQGLFVKFSNGTKFVLRLSGTGSSGATIRLYVEKYTDKKENYGQTADVFLKPVINSIVKFLRFKEILGTDEPTVRT

SEQ ID NO: 56 представляет собой нуклеотидную последовательность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

ATGTCCACTAAGAAGCACACCAAAACACATTCCACTTATGCATTCGAGAGCAACACAAACAGCGTTGCTGCCTCACAAATGAGAAACGCCTTAAACAAGTTGGCGGACTCTAGTAAACTTGACGATGCTGCTCGCGCTAAGTTTGAGAACGAACTGGATTCGTTTTTCACGCTTTTCAGGAGATATTTGGTAGAGAAGTCTTCTAGAACCACCTTGGAATGGGACAAGATCAAGTCTCCCAACCCGGATGAAGTGGTTAAGTATGAAATTATTTCTCAGCAGCCCGAGAATGTCTCAAACCTTTCCAAATTGGCTGTTTTGAAGTTGAACGGTGGGCTGGGTACCTCCATGGGCTGCGTTGGCCCTAAATCTGTTATTGAAGTGAGAGAGGGAAACACCTTTTTGGATTTGTCTGTTCGTCAAATTGAATACTTGAACAGACAGTACGATAGCGACGTGCCATTGTTATTGATGAATTCTTTCAACACTGACAAGGATACGGAACACTTGATTAAGAAGTATTCCGCTAACAGAATCAGAATCAGATCTTTCAATCAATCCAGGTTCCCAAGAGTCTACAAGGATTCTTTATTGCCTGTCCCCACCGAATACGATTCTCCACTGGATGCTTGGTATCCACCAGGTCACGGTGATTTGTTTGAATCTTTACACGTATCTGGTGAACTGGATGCCTTAATTGCCCAAGGAAGAGAAATATTATTTGTTTCTAACGGTGACAACTTGGGTGCTACCGTCGACTTAAAAATTTTAAACCACATGATCGAGACTGGTGCCGAATATATAATGGAATTGACTGATAAGACCAGAGCCGATGTTAAAGGTGGTACTTTGATTTCTTACGATGGTCAAGTCCGTTTATTGGAAGTCGCCCAAGTTCCAAAAGAACACATTGACGAATTCAAAAATATCAGAAAGTTTACCAACTTCAACACGAATAACTTATGGATCAATCTGAAAGCAGTAAAGAGGTTGATCGAATCGAGCAATTTGGAGATGGAAATCATTCCAAACCAAAAAACTATAACAAGAGACGGTCATGAAATTAATGTCTTACAATTAGAAACCGCTTGTGGTGCTGCTATCAGGCATTTTGATGGTGCTCACGGTGTTGTCGTTCCAAGATCAAGATTCTTGCCTGTCAAGACCTGTTCCGATTTGTTGCTGGTTAAATCAGATCTATTCCGTCTGGAACACGGTTCTTTGAAGTTAGACCCATCCCGTTTTGGTCCAAACCCATTAATCAAGTTGGGCTCGCATTTCAAAAAGGTTTCTGGTTTTAACGCAAGAATCCCTCACATCCCAAAAATCGTCGAGCTAGATCATTTGACCATCACTGGTAACGTCTTTTTAGGTAAAGATGTCACTTTGAGGGGTACTGTCATCATCGTTTGCTCCGACGGTCATAAAATCGATATTCCAAACGGCTCCATATTGGAAAATGTTGTCGTTACTGGTAATTTGCAAATCTTGGAACATTGA

SEQ ID NO: 57 представляет собой аминокислотную последовательность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

MSTKKHTKTHSTYAFESNTNSVAASQMRNALNKLADSSKLDDAARAKFENELDSFFTLFRRYLVEKSSRTTLEWDKIKSPNPDEVVKYEIISQQPENVSNLSKLAVLKLNGGLGTSMGCVGPKSVIEVREGNTFLDLSVRQIEYLNRQYDSDVPLLLMNSFNTDKDTEHLIKKYSANRIRIRSFNQSRFPRVYKDSLLPVPTEYDSPLDAWYPPGHGDLFESLHVSGELDALIAQGREILFVSNGDNLGATVDLKILNHMIETGAEYIMELTDKTRADVKGGTLISYDGQVRLLEVAQVPKEHIDEFKNIRKFTNFNTNNLWINLKAVKRLIESSNLEMEIIPNQKTITRDGHEINVLQLETACGAAIRHFDGAHGVVVPRSRFLPVKTCSDLLLVKSDLFRLEHGSLKLDPSRFGPNPLIKLGSHFKKVSGFNARIpHIPKIVELDHLTITGNVFLGKDVTLRGTVIIVCSDGHKIDIPNGSILENVVVTGNLQILEH

SEQ ID NO: 58 представляет собой нуклеотидную последовательность глюкозамин-6-фосфат-n-ацетилтрансферазы (GNA1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

ATGAGCTTACCCGATGGATTTTATATAAGGCGAATGGAAGAGGGGGATTTGGAACAGGTCACTGAGACGCTAAAGGTTTTGACCACCGTGGGCACTATTACCCCCGAATCCTTCAGCAAACTCATAAAATACTGGAATGAAGCCACAGTATGGAATGATAACGAAGATAAAAAAATAATGCAATATAACCCCATGGTGATTGTGGACAAGCGCACCGAGACGGTTGCCGCTACGGGGAATATCATCATCGAAAGAAAGATCATTCATGAACTGGGGCTATGTGGCCACATCGAGGACATTGCAGTAAACTCCAAGTATCAGGGCCAAGGTTTGGGCAAGCTCTTGATTGATCAATTGGTAACTATCGGCTTTGACTACGGTTGTTATAAGATTATTTTAGATTGCGATGAGAAAAATGTCAAATTCTATGAAAAATGTGGGTTTAGCAACGCAGGCGTGGAAATGCAAATTAGAAAATAG

SEQ ID NO: 59 представляет собой аминокислотную последовательность глюкозамин-6-фосфат-n-ацетилтрансферазы (GNA1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

MSLPDGFYIRRMEEGDLEQVTETLKVLTTVGTITPESFSKLIKYWNEATVWNDNEDKKIMQYNPMVIVDKRTETVAATGNIIIERKIIHELGLCGHIEDIAVNSKYQGQGLGKLLIDQLVTIGFDYGCYKIILDCDEKNVKFYEKCGFSNAGVEMQIRK

SEQ ID NO: 60 представляет собой нуклеотидную последовательность фосфоацетилглюкозаминмутазы (pcm1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

ATGAAGGTTGATTACGAGCAATTGTGCAAACTCTACGATGACACGTGCCGCACAAAGAATGTGCAGTTCAGTTACGGTACGGCCGGATTCAGAACGCTGGCCAAGAATTTGGATACGGTGATGTTCAGTACTGGTATACTGGCGGTTCTCAGGTCGCTGAAGCTTCAGGGTCAGTATGTGGGGGTGATGATCACGGCGTCGCACAACCCATACCAGGACAACGGGGTCAAGATCGTGGAACCAGACGGATCGATGCTTTTGGCCACATGGGAGCCATATGCCATGCAGTTGGCCAATGCGGCCTCTTTTGCCACTAATTTTGAAGAATTTCGTGTTGAGTTGGCCAAGCTGATTGAACACGAAAAGATTGATTTGAATACAACCGTCGTGCCTCACATCGTGGTTGGGAGAGACTCTAGGGAAAGTAGTCCATACTTGCTGCGCTGCTTGACTTCCTCCATGGCCAGCGTCTTCCACGCGCAAGTTTTGGACCTAGGCTGTGTCACTACGCCTCAATTGCATTACATTACTGATTTGTCCAACAGGCGGAAACTGGAAGGAGACACAGCGCCAGTTGCCACAGAACAGGACTACTATTCGTTCTTTATAGGAGCCTTCAACGAGCTCTTCGCCACGTATCAGCTGGAGAAGAGGCTGTCTGTCCCAAAATTGTTCATAGACACAGCCAATGGTATCGGTGGTCCACAGTTGAAAAAACTACTGGCCTCCGAAGATTGGGACGTGCCAGCGGAGCAAGTTGAGGTAATCAACGACAGGTCCGATGTTCCAGAACTGTTGAATTTTGAATGCGGTGCGGATTATGTGAAGACTAACCAGAGATTACCCAAGGGTCTTTCTCCATCCTCGTTTGATTCGCTATATTGCTCCTTTGATGGTGACGCAGACAGGGTTGTGTTCTACTATGTCGACTCAGGATCAAAATTTCATTTGTTGGATGGTGACAAAATTTCCACTTTGTTTGCAAAGTTCTTGTCTAAACAACTAGAATTGGCACACCTAGAACATTCTTTGAAGATTGGTGTTGTGCAAACTGCCTATGCAAACGGCAGTTCCACCGCTTACATAAAAAATACGTTGCACTGTCCCGTGTCTTGCACTAAGACAGGTGTTAAACACTTGCATCATGAAGCTGCCACTCAGTACGATATTGGCATTTATTTCGAAGCAAATGGACATGGTACGATTATATTCAGCGAAAAATTTCATCGAACTATCAAATCTGAATTATCCAAGTCCAAGTTAAATGGTGATACGTTAGCTTTGAGAACTTTGAAGTGTTTCTCTGAATTGATTAATCAGACCGTGGGAGATGCTATTTCAGACATGCTTGCTGTCCTTGCTACTTTGGCGATTTTGAAAATGTCGCCAATGGATTGGGATGAAGAGTATACTGATTTGCCCAACAAGCTGGTTAAGTGCATCGTTCCTGATAGGTCAATTTTCCAAACCACGGACCAGGAAAGAAAATTGCTCAATCCAGTGGGGTTGCAAGACAAGATAGATCTTGTGGTAGCCAAGTATCCCATGGGAAGAAGCTTTGTCAGAGCCAGTGGTACGGAGGATGCGGTGAGGGTTTATGCGGAATGTAAGGACTCCTCTAAGTTAGGTCAATTTTGTGACGAAGTGGTGGAGCACGTTAAGGCATCTGCTTGA

SEQ ID NO: 61 представляет собой аминокислотную последовательность фосфоацетилглюкозаминмутазы (pcm1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

MKVDYEQLCKLYDDTCRTKNVQFSYGTAGFRTLAKNLDTVMFSTGILAVLRSLKLQGQYVGVMITASHNPYQDNGVKIVEPDGSMLLATWEPYAMQLANAASFATNFEEFRVELAKLIEHEKIDLNTTVVpHIVVGRDSRESSPYLLRCLTSSMASVFHAQVLDLGCVTTPQLHYITDLSNRRKLEGDTAPVATEQDYYSFFIGAFNELFATYQLEKRLSVPKLFIDTANGIGGPQLKKLLASEDWDVPAEQVEVINDRSDVPELLNFECGADYVKTNQRLPKGLSPSSFDSLYCSFDGDADRVVFYYVDSGSKFHLLDGDKISTLFAKFLSKQLELAHLEHSLKIGVVQTAYANGSSTAYIKNTLHCPVSCTKTGVKHLHHEAATQYDIGIYFEANGHGTIIFSEKFHRTIKSELSKSKLNGDTLALRTLKCFSELINQTVGDAISDMLAVLATLAILKMSPMDWDEEYTDLPNKLVKCIVPDRSIFQTTDQERKLLNPVGLQDKIDLVVAKYPMGRSFVRASGTEDAVRVYAECKDSSKLGQFCDEVVEHVKASA

SEQ ID NO: 62 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTDH3

CTGCTGTAACCCGTACATGCCCAAAATAGGGGGCGGGTTACACAGAATATATAACATCGTAGGTGTCTGGGTGAACAGTTTATTCCTGGCATCCACTAAATATAATGGAGCCCGCTTTTTAAGCTGGCATCCAGAAAAAAAAAGAATCCCAGCACCAAAATATTGTTTTCTTCACCAACCATCAGTTCATAGGTCCATTCTCTTAGCGCAACTACAGAGAACAGGGGCACAAACAGGCAAAAAACGGGCACAACCTCAATGGAGTGATGCAACCTGCCTGGAGTAAATGATGACACAAGGCAATTGACCCACGCATGTATCTATCTCATTTTCTTACACCTTCTATTACCTTCTGCTCTCTCTGATTTGGAAAAAGCTGAAAAAAAAGGTTGAAACCAGTTCCCTGAAATTATTCCCCTACTTGACTAATAAGTATATAAAGACGGTAGGTATTGATTGTAATTCTGTAAATCTATTTCTTAAACTTCTTAAATTCTACTTTTATAGTTAGTCTTTTTTTTAGTTTTAAAACACCAAGAACTTAGTTTCGAATAAACACACATAAACAAACAAA

SEQ ID NO: 63 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTDH3.Sk

CAATTCATCGGCCCTTTTAGCGGCTACCCGCGCCATCTAAATGATAGGGCGGGTGACACTATGGTAAATCCCATAATTAGGTGTCTGGGTGAGTGGTTCTGATGCCGGCATCCACTAAATATATTGGAGCCCATTTTTTACGCGGGCTTCCAGAAAAAAAGAGAATCCCAGCACCAAAAGGTGGTTCTCTTCACCAACCATCAGATCATAGGTCCACAACCACACATAACAGGGGCACAAAAAGGCAAAAAACGGACATAACCTCAATGGAGTGATGCAAATTGACTGGAGCAAAAGCTGACACAAGGCATTGATTGACCTACGCATGTATCTGTATTCTTTTCTTACACCTTCTATTACCTTCTAACTCTTTGGGTTGGAAAAAACTGAAAAAAAAGGTTGGGACCTGGTTCCCCCAAGTTGTCCCCCTACTTGGTTATTAAATATATAAAGACAGCAAGTGTTGATTATAATCTTGTAAATCTATAGTTCTTAATCTATACTTCTATTTATATTTTAAATTAGTCTTTTTATTTCCAAGTCCCCAAGAACTTAGTTTCGAATAAACACACACAAATAAACACA

SEQ ID NO: 64 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTDH3-1.sba

GCAGCGCTTCTTCCGCTCTAGTTTTTATAGTTATTATTACTACCACCTTAAAAATACGTAAATACTCAAAATAGTAGTGATATTCCCAACCTTATTCATCCAAGGCACATCATCATCATCAGCCATTCATCTTTCACCTGCCATTAGTAACCCGTCTTCTCATTGAGCGGGTTACGGCAGCCACAGGCCACATTCCGAATGTCTGGGTGAGCGGTCCCTTTTCCAGCATCCACTAAATATCTCCGATCCCGCTTTTTAATCTGGCTTCCTGAAAAAAAGAGAATCCCAGCACCAAAAAATGGCTCTCTTCACCAACCATCAGATCATAGGTCCCATTCTCTTACCGCAACCGTACAGAACAGGGGAAAACGGGTACAACCTCAATGGAGTGATGCAAACTGACTGGAGCAAAAAGCTGACACAAGGCAATCGACCTACGTGTCTGTCTATTTTCTCACACCTTCTATTACCTTCTAACTCTCTGGGTTGGAAAAAACTGAAAAAAAGGTTGAGACCAGTTTCCACAAATCATCCCCCTGTTTGATTAATAAATATATAAAGACGACAACTATCGATCATAAACTCATAAAACTATAACTCCTTTACACTTCTTATTTTATAGTTATTCTATTTTAATTCTTATTGATTTTAAAACCCCAAGAACTTAGTTTCGAAAACACACACACACAAACAATTAAAA

SEQ ID NO: 65 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTDH3.Sar

GAGCTAAATATCAGCCCTTCGGGTCCTGCCTGCTACCCGGTCCTGTTCGAATAAAAACGCGGGTAACACGACCCAGTAACACCTGTCGTTGGGTGTCTGGGTCAGAAGTTCTGATACCGGCTTCCACTAAATAGATTGGGTTCCGCTCTTTACGCTGGCTTCCTGAAAAAAGAGATTCCGGGCACCAAAAAATTGGTCTCTTTGCCAACCATCAGATCATAGGTCCATTCTCTTACCATAACCACACAGGATAGGGGCACCACAGGCGAAAATGGGCACAAAATCTCAATGGAGTGATGCAAATTAGCTGGAACAAAAGCTGACACAAGGCAATTAACCTGCGCATGTATCCATCTCCTTTTCTTACACCTTCTCTTACGTTCTAACTGTTTGGGTTGGAAAAATTAAAAAAAAAAGGTTGAGACCAGTTTCCCCAAATCGTCCCCCTACTTGATTCATAAATATATAAAGACGACAACTATTGATTATAATCTTGTAAATCTATAACTCTTTACTTTCTCCTATTTATAATTTAACTTAATCTTTTTAGATTTAAAACCCCAAGAACTTAGTTTCGAACAAACACACACAAATAAACAAAA

SEQ ID NO: 66 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pENO2

CGCTCAGCATCTGCTTCTTCCCAAAGATGAACGCGGCGTTATGTCACTAACGACGTGCACCAACTTGCGGAAAGTGGAATCCCGTTCCAAAACTGGCATCCACTAATTGATACATCTACACACCGCACGCCTTTTTTCTGAAGCCCACTTTCGTGGACTTTGCCATATGCAAAATTCATGAAGTGTGATACCAAGTCAGCATACACCTCACTAGGGTAGTTTCTTTGGTTGTATTGATCATTTGGTTCATCGTGGTTCATTAATTTTTTTTCTCCATTGCTTTCTGGCTTTGATCTTACTATCATTTGGATTTTTGTCGAAGGTTGTAGAATTGTATGTGACAAGTGGCACCAAGCATATATAAAAAAAAAAAGCATTATCTTCCTACCAGAGTTGATTGTTAAAAACGTATTTATAGCAAACGCAATTGTAATTAATTCTTATTTTGTATCTTTTCTTCCCTTGTCTCAATCTTTTATTTTTATTTTATTTTTCTTTTCTTAGTTTCTTTCATAACACCAAGCAACTAATACTATAACATACAATAATA

SEQ ID NO: 67 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTEF3

GGCTGATAATAGCGTATAAACAATGCATACTTTGTACGTTCAAAATACAATGCAGTAGATATATTTATGCATATTACATATAATACATATCACATAGGAAGCAACAGGCGCGTTGGACTTTTAATTTTCGAGGACCGCGAATCCTTACATCACACCCAATCCCCCACAAGTGATCCCCCACACACCATAGCTTCAAAATGTTTCTACTCCTTTTTTACTCTTCCAGATTTTCTCGGACTCCGCGCATCGCCGTACCACTTCAAAACACCCAAGCACAGCATACTAAATTTCCCCTCTTTCTTCCTCTAGGGTGTCGTTAATTACCCGTACTAAAGGTTTGGAAAAGAAAAAAGAGACCGCCTCGTTTCTTTTTCTTCGTCGAAAAAGGCAATAAAAATTTTTATCACGTTTCTTTTTCTTGAAAATTTTTTTTTTTGATTTTTTTCTCTTTCGATGACCTCCCATTGATATTTAAGTTAATAAACGGTCTTCAATTTCTCAAGTTTCAGTTTCATTTTTCTTGTTCTATTACAACTTTTTTTACTTCTTGCTCATTAGAAAGAAAGCATAGCAATCTAATCTAAGTTTTAATTACAAA

SEQ ID NO: 68 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTEF1

GTTTAGCTTGCCTCGTCCCCGCCGGGTCACCCGGCCAGCGACATGGAGGCCCAGAATACCCTCCTTGACAGTCTTGACGTGCGCAGCTCAGGGGCATGATGTGACTGTCGCCCGTACATTTAGCCCATACATCCCCATGTATAATCATTTGCATCCATACATTTTGATGGCCGCACGGCGCGAAGCAAAAATTACGGCTCCTCGCTGCAGACCTGCGAGCAGGGAAACGCTCCCCTCACAGACGCGTTGAATTGTCCCCACGCCGCGCCCCTGTAGAGAAATATAAAAGGTTAGGATTTGCCACTGAGGTTCTTCTTTCATATACTTCCTTTTAAAATCTTGCTACGATACAGTTCTCACATCACATCCGAACATAAACAACC

SEQ ID NO: 69 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTEF1.ago

GTTTAGCTTGCCTCGTCCCCGCCGGGTCACCCGGCCAGCGACATGGAGGCCCAGAATACCCTCCTTGACAGTCTTGACGTGCGCAGCTCAGGGGCATGATGTGACTGTCGCCCGTACATTTAGCCCATACATCCCCATGTATAATCATTTGCATCCATACATTTTGATGGCCGCACGGCGCGAAGCAAAAATTACGGCTCCTCGCTGCAGACCTGCGAGCAGGGAAACGCTCCCCTCACAGACGCGTTGAATTGTCCCCACGCCGCGCCCCTGTAGAGAAATATAAAAGGTTAGGATTTGCCACTGAGGTTCTTCTTTCATATACTTCCTTTTAAAATCTTGCTACGATACAGTTCTCACATCACATCCGAACATAAACAACC

SEQ ID NO: 70 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pTEF1.sba

CGCCAACAAACCTTCGAACACTTTAATTTTCGAGGACCGCAGATCCTCACATCACACCCACACCCAAGACTGCTTCCCCCACACACCCTGCATCTGTACACTTTCTTCTGCTCTGTTTTTCTCTCCGGCGTTCTCTCGGGTCGCCCGCATCGCCGCGCCGGCTGGAACCGCCCACGCACCGCATATTGCAAATCGCCTGCCCCCTCTTGCTCCTTTTTGAGGGCGCGCCGTTACCCGCGCCCAGGGTCCGGAAAAAGAAACAAGGCTCTACCGCGTTTCTTTTTCCTTGTCGAAAAAGGCAAAAATGAAAATTTTTATCACGTTTCTTTTTTTTTGAAAAATTTTTTTTTTGGTTTTTTTTCTTTCGATGGCCTCCCATTGATATTTAAGTTAATAAATGGTTTTCAGTTTTCAAGTTTCAGTTTGTGTTCTTCTTTGCTAACTTTCACTTACACCTCGAAAGAAAGTATAGCAATCTAATCTTAGTTTTAATTACAA

SEQ ID NO: 71 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pPDC1

TTATTTACCTATCTCTAAACTTCAACACCTTATATCATAACTAATATTTCTTGAGATAAGCACACTGCACCCATACCTTCCTTAAAAACGTAGCTTCCAGTTTTTGGTGGTTCCGGCTTCCTTCCCGATTCCGCCCGCTAAACGCATATTTTTGTTGCCTGGTGGCATTTGCAAAATGCATAACCTATGCATTTAAAAGATTATGTATGCTCTTCTGACTTTTCGTGTGATGAGGCTCGTGGAAAAAATGAATAATTTATGAATTTGAGAACAATTTTGTGTTGTTACGGTATTTTACTATGGAATAATCAATCAATTGAGGATTTTATGCAAATATCGTTTGAATATTTTTCCGACCCTTTGAGTACTTTTCTTCATAATTGCATAATATTGTCCGCTGCCCCTTTTTCTGTTAGACGGTGTCTTGATCTACTTGCTATCGTTCAACACCACCTTATTTTCTAACTATTTTTTTTTTAGCTCATTTGAATCAGCTTATGGTGATGGCACATTTTTGCATAAACCTAGCTGTCCTCGTTGAACATAGGAAAAAAAAATATATAAACAAGGCTCTTTCACTCTCCTTGCAATCAGATTTGGGTTTGTTCCCTTTATTTTCATATTTCTTGTCATATTCCTTTCTCAATTATTATTTTCTACTCATAACCTCACGCAAAATAACACAGTCAAATCAATCAAA

SEQ ID NO: 72 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12

aaccagggcaaagcaaaataaaagAAACTTAATACGTTATGCCGTAATGAAGGGCTACCAAAAACGATAATCTCAACTGTAAACAGGTACAATGCGGACCCTTTTGCCACAAAACATACATCATTCATTGCCGGAAAAAGAAAGAAGTGAAGACAGCAGTGCAGCCAGCCATGTTGCGCCAATCTAATTATAGATGCTGGTGCCCTGAGGATGTATCTGGAGCCAGCCATGGCATCATGCGCTACCGCCGGATGTAAAATCCGACACGCAAAAGAAAACCTTCGAGGTTGCGCACTTCGCCCACCCATGAACCACACGGTTAGTCCAAAAGGGGCAGTTCAGATTCCAGATGCGGGAATTAGCTTGCTGCCACCCTCACCTCACTAACGCTGCGGTGTGCGGATACTTCATGCTATTTATAGACGCGCGTGTCGGAATCAGCACGCGCAAGAACCAAATGGGAAAATCGGAATGGGTCCAGAACTGCTTTGAGTGCTGGCTATTGGCGTCTGATTTCCGTTTTGGGAATCCTTTGCCGCGCGCCCCTCTCAAAACTCCGCACAAGTCCCAGAAAGCGGGAAAGAAATAAAACGCCACCAAAAAAAAAAATAAAAGCCAATCCTCGAAGCGTGGGTGGTAGGCCCTGGATTATCCCGTACAAGTATTTCTCAGGAGTAAAAAAACCGTTTGTTTTGGAATTCCCCATTTCGCGGCCACCTACGCCGCTATCTTTGCAACAACTATCTGCGATAACTCAGCAAATTTTGCATATTCGTGTTGCAGTATTGCGATAATGGGAGTCTTACTTCCAACATAACGGCAGAAAGAAATGTGAGAAAATTTTGCATCCTTTGCCTCCGTTCAAGTATATAAAGTCGGCATGCTTGATAATCTTTCTTTCCATCCTACATTGTTCTAATTATTCTTATTCTCCTTTATTCTTTCCTAACATACCAAGAAATTAATCTTctgtcattcgcttaaacactatatcaata

SEQ ID NO: 73 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12.Sm

CGTTGTGCTGTAGTGAAGGAAGACTAAAAAGGATAATCACAGTTGTAAAGAGGTATAATGCGGACCCTTTTGCCACAAAACACACATCTTTCGTTTCCAAAATAAGAAAGAAGAAAGCAAAAAGATTAGCAGCCACGTTGCTGCGATCTAATTATAGACGGTGGCGTCATCATTCTCACCCAAGATTGTGTCTTGAACCTGCCACGGGTCCTGCGTTATCGCCGGATGTAAAACTAGACATGCAAAAAAAGGACCTTCCAGGTAGCGTGCTCCACACCACCCATGACCACCACAGTTAGTCCAAAAGAGGCAGCACCACTTCCCGATGGGGGAATTAGATTGCTGCCACCCTCACCTCACTAATGCTGCGGTGTGCGGATATGCCCTGCTATATATAGCTCCGCGTTTTTGAACCAGCACAGCGCGAGCACCAAAAAGGAAAATCGCATAGGCCCAGAACTGATTTCAGCACGGGCTATTGGCGTTGGGTTTCCGTTCTGGGAAACCTTCGCCGCGTCCCCCTCACAAACCTCCGCACAAGTTCGAGCAAGCGGGAAAAAACGAAAAACGCCATTAATACTAAATAAAGCAAATCCTCGAAGCGTGGGTGGCAAGCCCCTGGATTTTTCCGCACAAGTACTCTTCTCAGGAGTAAAAAAACCCGTTTGTTTTGGAATTCCCCATTTCGCGGCCATCTACGCCGGTATCTTCGCAATATCTATCAGCGATAACTCAGCAATTTTAATATTCGTGTTGCAGTGCTGCGATAGCGGGAGTCTTGTTTGTAACATAACGGCAGAAAGGAATGAGAGAAAATTTTCCATTCTTTGGCCTCCGTTCAAGTATATAAAGCCGGCATGCTTGGTAATCTTTCTCTCTCTTCTGTATTGTTTCTATAATACTTTTATCTTCTAATTATTTTCTGAAAAAACCAAGAAATTAATCTTCTGTCATTCGCTTAAACACTATATCAATA

SEQ ID NO: 74 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12.Sk

TGTAAAATCCTACACGCAAAAAACCTCTTGGGTTGCGCGTTTTCCACCACCCACGACCCGCACAATCAATCCAAAAGGGGCAACGCCAGTTCCCAATGCGGGAATTAGCTCCTCACCCCCCTCACCCGCTAACGCTGCGGTGTGCGGACACGCAGCAGTATTTATAGATCCTCGTGTTGGAACCAGCCCGCGTGAGCACCAAATTGGAAAGTCGCAATGGGCCCAGAACCGCTTTCAGTACTGGGCCATTGGCGTCTAGTTTCCGTTTTGAGCGTCCTTCGCCGCGTCTCTCTGTGAAATCCCCGCACAAGTCTGAGCAGGCAAAAAAAAAAAACGCCACCAAAAATAAATAAAGCCAATCCTCGAAGGATGAGTAGGAAAGGAAGCCCCTGGTTTTTTCCCGCACGAATATTTTTCAGGAGTGAAAAAATCCGTTTGTTTTGGAATTCCCCATTTCGCGCTCACCTACGCCGGTATCTTTGGAACAACTATCAGCGATAACTCAGCAAAATTTGCATATCCGTGCTGCAATAGTGCGATAGTGGGATTGGGAGTCTTGTTGCATCATAACGGCAGAAAGGAATGAATAAAAATTTTCCGTTCTTTGTCTCCGTTCAAGTATATAAAGTCGGCATGCTTGATTATCTTTTCTTCTCTTCTACTACATTTCTATTTCACTTTCTACTCTATTCTTCCCTGAAAAACCCAAGAAAATAATCTTCTGTCATTCGCTTAAACAATATATCAAAA

SEQ ID NO: 75 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12.Sba

ACCATGCCACGGTGCTGGCCCCACTTCCACCCACGACCCGCACGGTTGGCCCGAAAGGGGCAACACCAGTTCCCAATACGGAAATTAGTCCGCCACCACCCTCACCTCGCTAGAGCTGCGGTGTGCGGGCGTGCATCGCTATTTATAGACATGCCTGCTGGCGTCACCGCGCGCGAGCACCAAACAGGAAAATCGCACTGGGCCCAGAACCACGCTATGCGCTGGGCCGATGGCGTCCGGTTTCCCTTTGGGAGCCCCCTGCCACGTTCGCCTAACAAATCCCCGCACCGGCTTGAGAAAAAAGCGAAAAGCGAAAAAAAAAAATCAACGCCACCAAAATTAAAAAAAAAGAGCCATCCTCGAAGGGTGAATAGTAGCCCCTGACTTTTCCCGCACAGACAGACACCTTTCAGGAGTGAACAAAAAAGCAGTTTGTTTTGGAATTCCCCCATTTCGCGGTGGCCTGCGCAGGTATCTCTGCGTCAACTATCAGCGATAACTCAGCAAATTTTGCATATTCGTGTTGCGATACTACGATAATGGGAGTCTGTCGCCTAATAACGGCAACAAGGAATGAGAGAGAAAAATTTTCTTCATTCTCCAGCTCCCGTTCAAGTATATAAGGTCGGCATGGTCGATTGTCTTTCCTTCTCTTCAGTTACGTCTCTCTATTTACATTATTCTTATTTTTATTTAATAAAAACCCCAAGAAATTAATCTTCTGTCATTCGCTTAAACACTATATCAAAA

SEQ ID NO: 76 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW12.Sar

AAAAAACAACCTTCTGCCAACCTGCGTGCTTCTCACCACCCATGACCCACACAATTGACCCGAATGGGGCAACTCCAGTTCCCAATACGGGAATTAACTCGCCACCATATTTACCGCGTTGAAGCTGTGGTGTGCGGACACTCCGTACTATTTATAGACCCACGCGGTGGAACCAGCACGCGCGCGCACTAAACAGGAAAATCGCATTGAGTCCAGAACCGCCACCAGCACTTGGCCATTGGCGTCTAATTTCCGTTTTCGGCGCCCCTCACCGCGTCCTTCTAACAAAGCGCGCACAAGCTTGAGCAAGTGAAAAGAAAATTAAAAATAAAAAACCGCCACCAAAACAAATAAAGCAATCTTCGAAGTGTGGGTTGGTGGGAAGCCCCTGGCTTTTCCCGCACCAGTCGTTTTCAGGAGTAAAAAAATACCCGTTTGTTTTGGAATTCCCCATTTCGCGGCGACCTGCGCCGGTATCTTTGCAACAACTATTTGCGATAACTCAGCAAAATTTGCATATTCGTGTTGGGATATTGCGATAGTGGGAGTCTTGTTGCATAATAACGGTAAAAAGAAGTGAAGGAAAAAAATTTGCATCCTTTAGTCTCAGTTCAAGTATATAAAGTCGGGATATTCAATTATCTTTCTTTCTCTTGCTCAAAGGTTTCTATATTTTTTTTATAGTATTTCTTTTGTTATAAAATACCAAGAAATTAATCTTCTGTCATTCGCTTAAATACTACATCAATA

SEQ ID NO: 77 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pNUP57

TCATCTGCGCAATGACTATCAAGACCTTCTGCAAGAATTTCAAATCTCACTGAAAATCTTGACCGAAAAGTGTCTTGAAAACCCATCAAGCCTGCAAAACCTATCTTTGACATTAGTCTCCATTATAAAAACGGCATAGTTGGGAGAAAACTTTCCATACTTCAATTGTGGACTGATATAAGTATTTTAGTTTTGCCCGCATGATCATCCCACATGGCTACAGCAGTTCTCTCATAGGAAAATAGTACAATAGCTACGTGATATAATCTAAATAATTGTTGCCAATGTGTAATTATATCATTTTGAACGTACGCGAAATGGATTATTTTCAAAAATTTTGTTTCTTGAAATGAGTAAAAGCAAAAGTCCAACTCTCCAAGTCGATGTAAACAACTTTTTGCCAAAGGGACTGAAAGACTAAATCGAGGATTATCCCGTTCAAACTATTCCAGAAACGCTCGTTAGTAACAAAAGACATACCTTGTTGACCAATTGATCAC

SEQ ID NO: 78 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCCW10.ago

GGTACCACGGCAACCTCGTTCGCTGTTCATCCCCTTCGTCACACAGGACGTTGGATGCCGTAAGCAGCGTTGCTTTTGATCCTCagGATCGGCCGGGTAACCCGCGGCtGCTTCTATTTTAGTATTCATATCTCAAGCACATCCATTCCGGCCGTTTGGGGGCGCCGCCGCACTCGTGTCCATTCCTACCGTGGCACTTAGGGCTATCCTGTCGGAGCGCCCCGCCGACCGCCTTATCGGCACCAAAAGTAGAAGCCCCGGCCCCGCGTGGCTCAGACTCACCATCGGTGCTATTTACTTTTCGATCAGATCGCGGCGCGCGGTGGCCGGCATTTCCGGAAGCGGCCACGGAGCAGAGGTGGCGCATTCGAATCGCATACGTCTTCGCCACGCCGGAAAAAAAATTTTCGGCTATATAAGGAGAGGCGGCCGTCTTGCTGCAGGCAGTTTCACTTTCTCTAAAACCAAAGAACATCGATTTCTTTAGTCACTCGCTTCCTTACACCGAACTCGAGGCGGCCGC

SEQ ID NO: 79 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCWP2

CTAGCCTCCCCTTTTTATTTTGTGCGGTCACCGCAAGGGACAAAGCTTTTCTTAGAAAACCGTCTGAGAAGCATAACGTACGCCATCCCCTAGACATATTAATAATGCTACAGATACTATGCTGCTCGTCTTTTTTTGACGACCCTTTTATTGCAATGTGCAACTAATGGCAAACAACCACATAGTATCACAGTATTACATTGCCTCCACCGATGCGGATGTTAGGGCGCCAAGTCTGTCATGAAGCATGTTCCTGTCATAATCTTGTATGCAAAATACCGCGTTCTGCGCCACTGATATGCTAGGCAGCAGCAACCTATGCAGAAGATTGCTTTTCCCACGCCTGTTTTACGTCTCCAGGGCACTTGAAACAATGCAGCGATCGCCGCCACAACACGCCAAAGAGAAGCGAAAGTGGGCCTGGGCGGCCTCAGTTTCGGCAGAGGTAAACAACACGAACTGAACTGCCTTAGCTCCGAAGGGCAATTCCACAGGCACTCCGCGGGGCCCGGCCAAGGCCCAAAAGGCGTGGAATATGCGCGTTTTGGGGCCATAACACCCAGTACCACGGCCGGAACGGGCCATATAATAAGTTTTTCACTCTCAAGAATGGTAAACGTAAATAGGAACATCCCACTACCCTAGAAATTGCGGAAATTTCGCGCTTATCATTAGAAAATCTGGAACCGTCCTTTTTCCTCTTTCTTGCATTTCCCTTTCCGTATTATTGCCATTCTTTAACTGCATTTGGGGAACCGTAGACCAAAAGCCAAACAGAGAAATGTAACGTTCTAAAAAAAAAACAACGAAAAAATTGAAAAATAAGATACAATAATCGTATATAAATCAGGCTTCTTGTTCATCATTTTCAATTCTCTTCTTGCCATCCCTTTTCCTATCTTTGTTCTTTTCTTCTCATAATCAAGAATAAATAACTTCATCA

SEQ ID NO: 80 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pRPLA1

TCAAGTTGGATACTGATCTGATCTCTCCGCCCTACTACCAGGGACCCTCATGATTACCGCTCGAATGCGACGTTTCCTGCCTCATAAAACTGGCTTGAAAATATTTATTCGCTGAACAGTAGCCTAGCTTATAAAAATTTCATTTAATTAATGTAATATGAAAACTCACATGCCTTCTGTTTCTAAAATTGTCACAGCAAGAAATAACATTACCATACGTGATCTTATTAAACTCTAGTATCTTGTCTAATACTTCATTTAAAAGAAGCCTTAACCCTGTAGCCTCATCTATGTCTGCTACATATCGTGAGGTACGAATATCGTAAGATGATACCACGCAACTTTGTAATGATTTTTTTTTTTTCATTTTTTAAAGAATGCCTTTACATGGTATTTGAAAAAAATATCTTTATAAAGTTTGCGATCTCTTCTGTTCTGAATAATTTTTAGTAAAAGAAATCAAAAGAATAAAGAAATAGTCCGCTTTGTCCAATACAACAGCTTAAACCGATTATCTCTAAAATAACAAGAAGAA

SEQ ID NO: 81 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pCUP1

CGGCAAACTTCAACGATTTCTATGATGCATTTTATAATTAGTAAGCCGATCCCATTACCGACATTTGGGCGCTATACGTGCATATGTTCATGTATGTATCTGTATTTAAAACACTTTTGTATTATTTTTCCTCATATATGTGTATAGGTTTATACGGATGATTTAATTATTACTTCACCACCCTTTATTTCAGGCTGATATCTTAGCCTTGTTACTAGTTAGAAAAAGACATTTTTGCTGTCAGTCACTGTCAAGAGATTCTTTTGCTGGCATTTCTTCTAGAAGCAAAAAGAGCGATGCGTCTTTTCCGCTGAACCGTTCCAGCAAAAAAGACTACCAACGCAATATGGATTGTCAGAATCATATAAAAGAGAAGCAAATAACTCCTTGTCTTGTATCAATTGCATTATAATATCTTCTTGTTAGTGCAATATCATATAGAAGTCATCGAAATAGATATTAAGAAAAACAAACTGTACAATCAATCAATCAATCATCACATAAA

SEQ ID NO: 82 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pMET6

CCACAGGAAATATTTCACGTGACTTACAAACAGAGTCGTACGTCAGGACCGGAGTCAGGTGAAAAAATGTGGGCCGGTAAAGGGAAAAAACCAGAAACGGGACTACTATCGAACTCGTTTAGTCGCGAACGTGCAAAAGGCCAATATTTTTCGCTAGAGTCATCGCAGTCATGGCAGCTCTTTCGCTCTATCTCCCGGTCGCAAAACTGTGGTAGTCATAGCTCGTTCTGCTCAATTGAGAACTGTGAATGTGAATATGGAACAAATGCGATAGATGCACTAATTTAAGGGAAGCTAGCTAGTTTTCCCAACTGCGAAAGAAAAAAAGGAAAGAAAAAAAAATTCTATATAAGTGATAGATATTTCCATCTTTACTAGCATTAGTTTCTCTTTTACGTATTCAATATTTTTGTTAAACTCTTCCTTTATCATAAAAAAGCAAGCATCTAAGAGCATTGACAACACTCTAAGAAACAAAATACCAATATAATTTCAAAGTACATATCAAAA

SEQ ID NO: 83 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pMET25

TTACATTATCAATCCTTGCGTTTCAGCTTCCACTAATTTAGATGACTATTTCTCATCATTTGCGTCATCTTCTAACACCGTATATGATAATATACTAGTAACGTAAATACTAGTTAGTAGATGATAGTTGATTTTTATTCCAACACTAAGAAATAATTTCGCCATTTCTTGAATGTATTTAAAGATATTTAATGCTATAATAGACATTTAAATCCAATTCTTCCAACATACAATGGGAGTTTGGCCGAGTGGTTTAAGGCGTCAGATTTAGGTGGATTTAACCTCTAAAATCTCTGATATCTTCGGATGCAAGGGTTCGAATCCCTTAGCTCTCATTATTTTTTGCTTTTTCTCTTGAGGTCACATGATCGCAAAATGGCAAATGGCACGTGAAGCTGTCGATATTGGGGAACTGTGGTGGTTGGCAAATGACTAATTAAGTTAGTCAAGGCGCCATCCTCATGAAAACTGTGTAACATAATAACCGAAGTGTCGAAAAGGTGGCACCTTGTCCAATTGAACACGCTCGATGAAAAAAATAAGATATATATAAGGTTAAGTAAAGCGTCTGTTAGAAAGGAAGTTTTTCCTTTTTCTTGCTCTCTTGTCTTTTCATCTACTATTTCCTTCGTGTAATACAGGGTCGTCAGATACATAGATACAATTCTATTACCCCCATCCATACA

SEQ ID NO: 84 представляет собой нуклеотидную последовательность промотора pSAM1

GAAACGGACGTAAGACGGAAATAGAATTTGAAGATAAAGTTATATATCACTACACACGAATACTTTCTTTTTTTTTTTTCACAGGAAAACTGTGGTGGCGCCCTTGCCTACTAGTGCATTTCTTTTTTCGGGTTCTTGTCTCGAcGAAATTTTAGCCTCATCGTAGTTTTTCACTCTGGTATCGATGAAAAAGGGAAGAGTAAAAAGTTTTCCGTTTAGTACTTAATGGGATTGGTTTGGGACGTATATATCGACTGGTGTTGTCTGTTATTCATCGTTGTTTTTCGGTTAGCTTCGAAAAAAAAATAGAGTAAAAACCAGGAATTTACCCTAAAAACAAGAAAAAATAAGATAAACGAAAAT

SEQ ID NO: 85 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tTPI1

GATTAATATAATTATATAAAAATATTATCTTCTTTTCTTTATATCTAGTGTTATGTAAAATAAATTGATGACTACGGAAAGCTTTTTTATATTGTTTCTTTTTCATTCTGAGCCACTTAAATTTCGTGAATGTTCTTGTAAGGGACGGTAGATTTACAAGTGATACAACAAAAAGCAAGGCGCTTTTTCTAATAAAAAGAAGAAAAGCATTTAACAATTGAACACCTCTATATCAACGAAGAATATTACTTTGTCTCTAAATCCTTGTAAAATGTGTACGATCTCTATATGGGTTACTCA

SEQ ID NO: 86 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tMET25

GTGTGCGTAATGAGTTGTAAAATTATGTATAAACCTACTTTCTCTCACAAGTACTATACTTTTATAAAACGAACTTTATTGAAATGAATATCCTTTTTTTCCCTTGTTACATGTCGTGACTCGTACTTTGAACCTAAATTGTTCTAACATCAAAGAACAGTGTTAATTCGCAGTCGAGAAGAAAAATATGGTGAACAAGACTCATCTACTTCATGAGACTACTTTACGCCTCCTATAAAGCTGTCACACTGGATAAATTTATTGTAGGACCAAGTTACAAAAGAGGATGATGGAGGTTT

SEQ ID NO: 87 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tDIT1

TAAAGTAAGAGCGCTACATTGGTCTACCTTTTTGTTCTTTTACTTAAACATTAGTTAGTTCGTTTTCTTTTTCTCATTTTTTTATGTTTCCCCCCCAAAGTTCTGATTTTATAATATTTTATTTCACACAATTCCATTTAACAGAGGGGGAATAGATTCTTTAGCTTAGAAAATTAGTGATCAATATATATTTGCCTTTCTTTTCATCTTTTCAGTGATATTAATGGTTTCGAGACACTGCAATGGCCCTAGTTGTCTAAGAGGATAGATGTTACTGTCAAAGATGATATTTTGAATTTC

SEQ ID NO: 88 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL3

GAAGTTTTGTTAGAAAATAAATCATTTTTTAATTGAGCATTCTTATTCCTATTTTATTTAAATAGTTTTATGTATTGTTAGCTACATACAACAGTTTAAATCAAATTTTCTTTTTCCCAAGTCCAAAATGGAGGTTTATTTTGATGACCCGCATGCGATTATGTTTTGAAAGTATAAGACTACATACATGTACATATATTTAAACATGTAAACCCGTCCATTATATTGCTTACTTTCTTCTTTTTTGCCGTTTTGACTTGGACCTCTGGTTTGCTATTTCCTTACAATCTTTGCTACAAT

SEQ ID NO: 89 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL3.sm

GAAGTTTTTAAAGCATTTTTTAGACACTTCTCATTTTTCTAAGTTTTTTTAAAATAGTTTTATGTATTTACTACGTATCACAATTTGAAATAATTCATCTTCCCAAAAAACTAAGATTTTTATCCTTGTCACGATCCGTAACCAGTTTATAATATTTTAGAGCTTATACACGTACGTATACACACGTGTCGGTACATGAGAATTACGTTCAAAATTATTCACTTTTTTTTTCTCTGCCGTTTTACTTTTGAACTCTGTCTCGCTATTTCCTTACAATCTTCGCTACAATACCACTTGCCCTTGG

SEQ ID NO: 90 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL3.sba

GAAGTTTTCTGACAAAAACATAACGTTTTTTCCAATCATTTCTTATTTTTCCGGTTTATTTAAATAGTTTTTATGTACTATTATACGTATGACTATTTAACTTAAATTCTTCCTCCCAAGAAATCTCCCAAGTTTTTCATTATCATGGCATACACCACTATCAGTTACAAAATGGTAGCTCAACCATATATATATCTCTATATACACATATAAATGCAAACAGGTCCAAGTCACCGCTCACTGCAGTTTCTTTTGCCGTTTTGACTTCGATCTCTGCTTGGCTATTTTCTCACAATCCT

SEQ ID NO: 91 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL41B

GCGGATTGAGAGCAAATCGTTAAGTTCAGGTCAAGTAAAAATTGATTTCGAAAACTAATTTCTCTTATACAATCCTTTGATTGGACCGTCATCCTTTCGAATATAAGATTTTGTTAAGAATATTTTAGACAGAGATCTACTTTATATTTAATATCTAGATATTACATAATTTCCTCTCTAATAAAATATCATTAATAAAATAAAAATGAAGCGATTTGATTTTGTGTTGTCAACTTAGTTTGCCGCTATGCCTCTTGGGTAATGCTATTATTGAATCGAAGGGCTTTATTATATTACCCT

SEQ ID NO: 92 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL15A

GCTGGTTGATGGAAAATATAATTTTATTGGGCAAACTTTTGTTTATCTGATGTGTTTTATACTATTATCTTTTTAATTAATGATTCTATATACAAACCTGTATATTTTTTCTTTAACCAATTTTTTTTTTTATAGACCTAGAGCTGTACTTTTATTCTGCTATCAAGCAAACCCCTACCCCCTCTTCTCAATCCTCCCCTCAGGCAGAACTTATCTACCTGTATCAAGGAGCGGACGAGGGAGTCCTAATTGTTCTACGTATACCAATGCTAGCAGCTTACATAGGTGGTGGCACTACCA

SEQ ID NO: 93 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tRPL15A.sba

GCTGGCTGATGAAAAATATAGTTCTGTTGGGCAAGCATTTGTTTACCTAGCATCTCTTTTATACTATTATTATCTTTATATTTGATGATTTTATATACAAGTTGTATACCTTTTCTTTAACCAATTTTTTTTTTTCTAATGGTGCACCTAGAAGTACATTTTTTCTCACCAATAGATAGTCAAGATACTCCCAGCCTCTATGGCGTTACCACGGAGCCGACAAGGGAAAGCTGCTTATCTTACATATGCAGATGCCAAGGCCCGTTACAGGCCGCCTTATTGATGTTTAGAAATAGCTTC

SEQ ID NO: 94 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tIDP1

TCGAATTTACGTAGCCCAATCTACCACTTTTTTTTTTCATTTTTTAAAGTGTTATACTTAGTTATGCTCTAGGATAATGAACTACTTTTTTTTTTTTTTTTTTACTGTTATCATAAATATATATACCTTATTGTTGTTTGCAACCGTCGGTTAATTCCTTATCAAGGTTCCCCAAGTTCGGATCATTACCATCAATTTCCAACATTTTCATGAGTTCTTCTTCTTCATTACCGTGTTTTAGGGGGCTGTTCGCACTTCTAATAGGGCTATCACCAAGCTGTTCTAATTCGTCCAAAAGTT

SEQ ID NO: 95 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tTEF1.sba

GGAGATTGATAGGACTTTTCTAGTTGCATATCTTTTATTTTTAAATCTTATCTATTAGTTAATTTTTTGTAATTTATCCTTATATATATAGTTTGGTTATTCTAAAACATCATTTCAGTATCTAAAACCTCTCTTATTCATTACCTTTTTATTTAATGGTTTTTGCTACAGGCAAAAATTTAATGGTTTTTGCTACAGGCAAAAATCCCGCCGTGGACTTATTCCACGTTAACTCGGTTACAGGGTCATGAACCATTTTGTCAATTATCGAAATAACTTCTTCAAAAGTCCCTCTTACTT

SEQ ID NO: 96 представляет собой нуклеотидную последовательность глутаминсинтетазы (gln1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

ATGGCTGAAGCAAGCATCGAAAAGACTCAAATTTTACAAAAATATCTAGAACTGGACCAAAGAGGTAGAATAATTGCCGAATACGTTTGGATCGATGGTACTGGTAACTTACGTTCCAAAGGTAGAACTTTGAAGAAGAGAATCACATCCATTGACCAATTGCCAGAATGGAACTTCGACGGTTCTTCTACCAACCAAGCGCCAGGCCACGACTCTGACATCTATTTGAAACCCGTTGCTTACTACCCAGATCCCTTCAGGAGAGGTGACAACATTGTTGTCTTGGCCGCATGTTACAACAATGACGGTACTCCAAACAAGTTCAACCACAGACACGAAGCTGCCAAGCTATTTGCTGCTCATAAGGATGAAGAAATCTGGTTTGGTCTAGAACAAGAATACACTCTATTTGACATGTATGACGATGTTTACGGATGGCCAAAGGGTGGGTACCCAGCTCCACAAGGTCCTTACTACTGTGGTGTTGGTGCCGGTAAGGTTTATGCCAGAGACATGATCGAAGCTCACTACAGAGCTTGTTTGTATGCCGGATTAGAAATTTCTGGTATTAACGCTGAAGTCATGCCATCTCAATGGGAATTCCAAGTCGGTCCATGTACCGGTATTGACATGGGTGACCAATTATGGATGGCCAGATACTTTTTGCACAGAGTGGCAGAAGAGTTTGGTATCAAGATCTCATTCCATCCAAAGCCATTGAAGGGTGACTGGAACGGTGCCGGTTGTCACACTAACGTTTCCACCAAGGAAATGAGACAACCAGGTGGTATGAAATACATCGAACAAGCCATCGAGAAGTTATCCAAGAGACACGCTGAACACATTAAGTTGTACGGTAGCGATAACGACATGAGATTAACTGGTAGACATGAAACCGCTTCCATGACTGCCTTTTCTTCTGGTGTCGCCAACAGAGGTAGCTCAATTAGAATCCCAAGATCCGTCGCCAAGGAAGGTTACGGTTACTTTGAAGACCGTAGACCAGCTTCCAACATCGACCCATACTTGGTTACAGGTATCATGTGTGAAACTGTTTGCGGTGCTATTGACAATGCTGACATGACGAAGGAATTTGAAAGAGAATCTTCATAA

SEQ ID NO: 97 представляет собой аминокислотную последовательность глутаминсинтетазы (gln1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

MAEASIEKTQILQKYLELDQRGRIIAEYVWIDGTGNLRSKGRTLKKRITSIDQLPEWNFDGSSTNQAPGHDSDIYLKPVAYYPDPFRRGDNIVVLAACYNNDGTPNKFNHRHEAAKLFAAHKDEEIWFGLEQEYTLFDMYDDVYGWPKGGYPAPQGPYYCGVGAGKVYARDMIEAHYRACLYAGLEISGINAEVMPSQWEFQVGPCTGIDMGDQLWMARYFLHRVAEEFGIKISFHPKPLKGDWNGAGCHTNVSTKEMRQPGGMKYIEQAIEKLSKRHAEHIKLYGSDNDMRLTGRHETASMTAFSSGVANRGSSIRIPRSVAKEGYGYFEDRRPASNIDPYLVTGIMCETVCGAIDNADMTKEFERESS

SEQ ID NO: 98 представляет собой нуклеотидную последовательность глутаматсинтазы (glt1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

ATGCCAGTGTTGAAATCAGACAATTTCGATCCATTGGAAGAAGCTTACGAAGGTGGGACAATTCAAAACTATAACGATGAACACCATCTTCATAAATCTTGGGCAAATGTGATTCCGGACAAACGAGGACTTTACGACCCTGATTATGAACATGACGCTTGTGGTGTCGGTTTCGTAGCAAATAAGCATGGTGAACAGTCTCACAAGATTGTTACTGACGCTAGATATCTTTTAGTGAATATGACACATCGTGGTGCCGTCTCATCTGATGGGAACGGTGACGGTGCCGGTATTCTGCTAGGTATTCCTCACGAATTTATGAAAAGAGAATTCAAGTTAGATCTTGATCTAGACATACCTGAGATGGGCAAATACGCCGTAGGTAACGTCTTCTTCAAGAAGAACGAAAAAAATAACAAGAAAAATTTAATTAAGTGTCAGAAGATTTTCGAGGATTTAGCTGCATCCTTCAACTTATCCGTATTAGGTTGGAGAAACGTCCCCGTAGATTCTACTATTTTAGGAGACGTTGCATTATCTCGTGAACCTACTATTCTACAGCCATTATTGGTTCCATTGTATGATGAAAAACAACCGGAGTTTAATGAAACTAAATTTAGAACTCAATTGTATCTTTTAAGGAAGGAGGCCTCTCTTCAAATAGGACTGGAAAACTGGTTCTATGTTTGTTCCCTAAACAATACCACCATTGTTTACAAGGGTCAATTGACGCCAGCTCAAGTGTATAACTACTATCCCGACTTGACTAATGCGCATTTCAAATCCCACATGGCGTTGGTCCATTCAAGATTTTCCACTAATACTTTCCCCTCTTGGGATAGAGCTCAACCTTTACGTTGGCTAGCTCATAATGGTGAAATTAACACCTTAAGAGGTAACAAGAATTGGATGCGCTCCAGAGAAGGTGTGATGAATTCAGCAACTTTCAAAGATGAGTTAGACAAACTATACCCAATTATCGAAGAAGGTGGTTCTGATTCAGCTGCATTGGATAACGTTTTAGAACTATTGACTATTAATGGCACATTATCTCTACCTGAAGCTGTTATGATGATGGTTCCTGAAGCGTATCATAAGGATATGGATTCTGACCTAAAAGCATGGTACGACTGGGCTGCATGTCTGATGGAACCTTGGGATGGTCCAGCTTTGTTAACTTTCACTGATGGACGTTACTGTGGTGCTATATTGGATAGAAATGGTTTAAGACCTTGTCGTTATTACATCACTAGTGATGACAGAGTTATCTGTGCTTCAGAGGTAGGTGTCATTCCTATCGAAAATTCATTGGTTGTTCAAAAAGGTAAACTGAAGCCAGGTGATTTATTCCTAGTGGATACTCAATTGGGTGAAATGGTCGATACTAAAAAGTTAAAATCTCAAATCTCAAAAAGACAAGATTTTAAGTCTTGGTTATCCAAAGTCATCAAGTTAGACGACTTGTTATCAAAAACCGCTAATTTGGTTCCTAAAGAATTTATATCACAGGATTCATTGTCTTTGAAAGTTCAAAGTGACCCACGTCTATTGGCCAATGGTTATACCTTCGAACAAGTCACATTTCTGTTAACTCCAATGGCTTTAACAGGTAAAGAAGCTTTAGGTTCGATGGGTAACGATGCGCCACTGGCTTGTTTAAATGAAAATCCTGTCTTACTTTATGATTATTTCAGACAATTGTTTGCTCAAGTGACCAATCCTCCAATTGACCCAATTCGTGAAGCAAATGTTATGTCGTTAGAATGTTATGTCGGACCTCAAGGCAACCTTTTGGAAATGCATTCATCTCAATGTGATCGTTTATTATTGAAATCTCCTATTTTGCATTGGAATGAGTTCCAAGCTTTGAAAAACATTGAAGCTGCTTACCCATCATGGTCTGTAGCAGAAATTGATATCACATTCGACAAGAGTGAGGGTCTATTGGGCTATACCGACACAATTGATAAAATCACTAAGTTAGCGAGCGAAGCAATTGATGATGGTAAAAAGATCTTAATAATTACTGACAGGAAAATGGGTGCCAACCGTGTTTCCATCTCCTCTTTGATTGCAATTTCATGTATTCATCATCACCTAATCAGAAACAAGCAGCGTTCCCAAGTTGCTTTGATTTTGGAAACAGGTGAAGCCAGAGAAATTCACCATTTCTGTGTCCTACTAGGTTATGGTTGTGATGGTGTTTATCCATACTTAGCCATGGAAACTTTGGTCAGAATGAATAGAGAAGGTCTACTTCGTAATGTCAACAATGACAATGATACACTTGAGGAAGGGCAAATACTAGAAAATTACAAGCACGCTATTGATGCAGGTATCTTGAAGGTTATGTCTAAAATGGGTATCTCCACTCTAGCATCCTACAAAGGTGCTCAAATTTTTGAAGCCCTAGGTTTAGATAACTCTATTGTTGATTTGTGTTTCACAGGTACTTCTTCCAGAATTAGAGGTGTAACTTTCGAGTATTTGGCTCAAGATGCCTTTTCTTTACATGAGCGTGGTTATCCATCCAGACAAACCATTAGTAAATCTGTTAACTTACCAGAAAGTGGTGAATACCACTTTAGGGATGGTGGTTACAAACACGTCAACGAACCAACCGCAATTGCTTCGTTACAAGATACTGTCAGAAACAAAAATGATGTCTCTTGGCAATTATATGTAAAGAAGGAAATGGAAGCAATTAGAGACTGTACACTAAGAGGACTGTTAGAATTAGATTTTGAAAATTCTGTCAGTATCCCTCTAGAACAAGTTGAACCATGGACTGAAATTGCCAGAAGATTTGCGTCAGGTGCAATGTCTTATGGTTCTATTTCTATGGAAGCTCACTCTACATTGGCTATTGCCATGAATCGTTTAGGGGCCAAATCCAATTGTGGTGAAGGTGGTGAAGACGCAGAACGTTCTGCTGTTCAAGAAAACGGTGATACTATGAGATCTGCTATCAAACAAGTTGCTTCCGCTAGATTCGGTGTAACTTCATACTACTTGTCAGATGCTGATGAAATCCAAATTAAGATTGCTCAGGGTGCTAAGCCGGGTGAAGGTGGTGAACTACCAGCCCACAAAGTGTCTAAGGATATCGCAAAAACCAGGCACTCCACCCCTAATGTTGGGTTAATCTCTCCTCCTCCTCATCACGATATTTATTCCATTGAAGATTTGAAACAACTGATTTATGATTTGAAATGTGCTAATCCAAGAGCGGGAATTTCTGTAAAGTTGGTTTCCGAAGTTGGTGTTGGTATTGTTGCCTCTGGTGTAGCTAAGGCTAAAGCCGATCATATCTTAGTTTCTGGTCATGATGGTGGTACAGGTGCTGCAAGATGGACGAGTGTCAAATATGCGGGTTTGCCATGGGAATTAGGTCTAGCTGAAACTCACCAGACTTTAGTCTTGAATGATTTAAGACGTAATGTTGTTGTCCAAACCGATGGTCAATTGAGAACTGGGTTTGATATTGCTGTTGCAGTTTTATTAGGGGCAGAATCTTTTACCTTGGCAACAGTTCCATTAATTGCTATGGGTTGTGTTATGTTAAGAAGATGTCACTTGAACTCTTGTGCTGTTGGTATTGCCACACAAGATCCATATTTGAGAAGTAAGTTTAAGGGTCAGCCCGAACATGTTATCAACTTCTTCTATTACTTGATCCAAGATTTAAGACAAATCATGGCCAAGTTAGGATTCCGTACCATTGACGAAATGGTGGGTCATTCTGAAAAATTAAAGAAAAGGGACGACGTAAATGCCAAAGCCATAAATATCGATTTATCTCCTATTTTGACCCCAGCACATGTTATTCGTCCAGGTGTTCCAACCAAGTTCACTAAGAAACAAGACCACAAACTCCACACCCGTCTAGATAATAAGTTAATCGATGAGGCTGAAGTTACTTTGGATCGTGGCTTACCAGTGAATATTGACGCCTCTATAATCAATACTGATCGTGCACTCGGTTCTACTTTATCTTACAGAGTCTCGAAGAAATTTGGTGAAGATGGTTTGCCAAAGGACACCGTTGTCGTTAACATAGAAGGTTCAGCGGGTCAATCTTTTGGTGCTTTCCTAGCTTCTGGTATCACTTTTATCTTGAATGGTGATGCTAATGATTATGTTGGTAAAGGTTTATCCGGTGGTATTATTGTCATTAAACCACCAAAGGATTCTAAATTCAAGAGTGATGAAAATGTAATTGTTGGTAACACTTGTTTCTATGGTGCTACTTCTGGTACTGCATTCATTTCAGGTAGTGCCGGTGAGCGTTTCGGTGTCAGAAACTCTGGTGCCACCATCGTTGTTGAGAGAATTAAGGGTAACAATGCCTTTGAGTATATGACTGGTGGTCGTGCCATTGTCTTATCACAAATGGAATCCCTAAACGCCTTCTCTGGTGCTACTGGTGGTATTGCATACTGTTTAACTTCCGATTACGACGATTTTGTTGGAAAGATTAACAAAGATACTGTTGAGTTAGAATCATTATGTGACCCGGTCGAGATTGCGTTTGTTAAGAATTTGATCCAGGAGCATTGGAACTACACACAATCTGATCTAGCAGCCAGGATTCTCGGTAATTTCAACCATTATTTGAAAGATTTCGTTAAAGTCATTCCAACTGATTATAAGAAAGTTTTGTTGAAGGAGAAAGCAGAAGCTGCCAAGGCAAAGGCTAAGGCAACTTCAGAATACTTAAAGAAGTTTAGATCGAACCAAGAAGTTGATGACGAAGTCAATACTCTATTGATTGCTAATCAAAAAGCTAAAGAGCAAGAAAAAAAGAAGAGTATTACTATTTCAAATAAGGCCACTTTGAAGGAGCCTAAGGTTGTTGATTTAGAAGATGCAGTTCCAGATTCCAAACAGCTAGAGAAGAATAGCGAAAGGATTGAAAAAACACGTGGTTTTATGATCCACAAACGTCGTCATGAGACACACAGAGATCCAAGAACCAGAGTTAATGACTGGAAAGAATTTACTAACCCTATTACCAAGAAGGATGCCAAATATCAAACTGCGAGATGTATGGATTGTGGTACACCATTCTGTTTATCTGATACCGGTTGTCCCCTATCTAACATTATCCCCAAGTTTAATGAATTGTTATTCAAGAACCAATGGAAGTTGGCACTGGACAAATTGCTAGAGACAAACAATTTCCCAGAATTCACTGGAAGAGTATGTCCAGCACCCTGTGAGGGAGCTTGTACACTAGGTATTATTGAAGACCCAGTCGGCATAAAATCGGTTGAAAGAATTATCATTGACAATGCTTTCAAGGAAGGATGGATTAAGCCTTGTCCACCAAGTACACGCACTGGCTTTACAGTGGGTGTCATTGGTTCTGGTCCAGCAGGTTTAGCGTGTGCTGATATGTTGAACCGTGCCGGACATACGGTCACTGTTTATGAAAGATCCGACCGTTGTGGTGGGTTATTGATGTATGGTATTCCAAACATGAAGTTGGATAAGGCTATAGTGCAACGTCGTATTGATCTATTGAGTGCCGAAGGTATTGACTTTGTTACCAACACCGAAATTGGTAAAACCATAAGCATGGATGAGCTAAAGAACAAGCACAATGCAGTAGTGTATGCTATCGGTTCTACCATTCCACGTGACTTACCTATTAAGGGTCGTGAATTGAAGAATATTGATTTTGCCATGCAGTTGTTGGAATCTAACACAAAAGCTTTATTGAACAAAGATCTGGAAATCATTCGTGAAAAGATCCAAGGTAAGAAAGTAATTGTTGTCGGTGGTGGTGACACAGGTAACGATTGTTTAGGTACATCTGTAAGACACGGTGCAGCATCAGTTTTGAATTTCGAATTGTTGCCTGAGCCACCAGTGGAACGTGCCAAAGACAATCCATGGCCTCAATGGCCGCGTGTCATGAGAGTGGACTACGGTCATGCTGAAGTGAAAGAGCATTATGGTAGAGACCCTCGTGAATACTGCATCTTGTCCAAGGAATTTATCGGTAACGATGAGGGTGAAGTCACTGCCATCAGAACTGTGCGCGTAGAATGGAAGAAGTCACAAAGTGGCGTATGGCAAATGGTAGAAATTCCCAACAGTGAAGAGATCTTTGAAGCCGATATCATTTTGTTGTCTATGGGTTTCGTGGGTCCTGAATTGATCAATGGCAACGATAACGAAGTTAAGAAGACAAGACGTGGTACGATTGCCACACTCGACGACTCCTCATACTCTATTGATGGAGGAAAGACTTTTGCATGTGGTGACTGTAGAAGAGGGCAATCTTTGATTGTCTGGGCCATCCAAGAAGGTAGAAAATGTGCTGCCTCTGTCGATAAGTTCCTAATGGACGGCACTACGTATCTACCAAGTAATGGTGGTATCGTTCAACGTGATTACAAACTATTGAAAGAATTAGCTAGTCAAGTCTAA

SEQ ID NO: 99 представляет собой аминокислотную последовательность глутаматсинтазы (glt1), происходящую из Saccharomyces Cerevisiae

MPVLKSDNFDPLEEAYEGGTIQNYNDEHHLHKSWANVIPDKRGLYDPDYEHDACGVGFVANKHGEQSHKIVTDARYLLVNMTHRGAVSSDGNGDGAGILLGIpHEFMKREFKLDLDLDIPEMGKYAVGNVFFKKNEKNNKKNLIKCQKIFEDLAASFNLSVLGWRNVPVDSTILGDVALSREPTILQPLLVPLYDEKQPEFNETKFRTQLYLLRKEASLQIGLENWFYVCSLNNTTIVYKGQLTPAQVYNYYPDLTNAHFKSHMALVHSRFSTNTFPSWDRAQPLRWLAHNGEINTLRGNKNWMRSREGVMNSATFKDELDKLYPIIEEGGSDSAALDNVLELLTINGTLSLPEAVMMMVPEAYHKDMDSDLKAWYDWAACLMEPWDGPALLTFTDGRYCGAILDRNGLRPCRYYITSDDRVICASEVGVIPIENSLVVQKGKLKPGDLFLVDTQLGEMVDTKKLKSQISKRQDFKSWLSKVIKLDDLLSKTANLVPKEFISQDSLSLKVQSDPRLLANGYTFEQVTFLLTPMALTGKEALGSMGNDAPLACLNENPVLLYDYFRQLFAQVTNPPIDPIREANVMSLECYVGPQGNLLEMHSSQCDRLLLKSPILHWNEFQALKNIEAAYPSWSVAEIDITFDKSEGLLGYTDTIDKITKLASEAIDDGKKILIITDRKMGANRVSISSLIAISCIHHHLIRNKQRSQVALILETGEAREIHHFCVLLGYGCDGVYPYLAMETLVRMNREGLLRNVNNDNDTLEEGQILENYKHAIDAGILKVMSKMGISTLASYKGAQIFEALGLDNSIVDLCFTGTSSRIRGVTFEYLAQDAFSLHERGYPSRQTISKSVNLPESGEYHFRDGGYKHVNEPTAIASLQDTVRNKNDVSWQLYVKKEMEAIRDCTLRGLLELDFENSVSIPLEQVEPWTEIARRFASGAMSYGSISMEAHSTLAIAMNRLGAKSNCGEGGEDAERSAVQENGDTMRSAIKQVASARFGVTSYYLSDADEIQIKIAQGAKPGEGGELPAHKVSKDIAKTRHSTPNVGLISPPpHHDIYSIEDLKQLIYDLKCANPRAGISVKLVSEVGVGIVASGVAKAKADHILVSGHDGGTGAARWTSVKYAGLPWELGLAETHQTLVLNDLRRNVVVQTDGQLRTGFDIAVAVLLGAESFTLATVPLIAMGCVMLRRCHLNSCAVGIATQDPYLRSKFKGQPEHVINFFYYLIQDLRQIMAKLGFRTIDEMVGHSEKLKKRDDVNAKAINIDLSPILTPAHVIRPGVPTKFTKKQDHKLHTRLDNKLIDEAEVTLDRGLPVNIDASIINTDRALGSTLSYRVSKKFGEDGLPKDTVVVNIEGSAGQSFGAFLASGITFILNGDANDYVGKGLSGGIIVIKPPKDSKFKSDENVIVGNTCFYGATSGTAFISGSAGERFGVRNSGATIVVERIKGNNAFEYMTGGRAIVLSQMESLNAFSGATGGIAYCLTSDYDDFVGKINKDTVELESLCDPVEIAFVKNLIQEHWNYTQSDLAARILGNFNHYLKDFVKVIPTDYKKVLLKEKAEAAKAKAKATSEYLKKFRSNQEVDDEVNTLLIANQKAKEQEKKKSITISNKATLKEPKVVDLEDAVPDSKQLEKNSERIEKTRGFMIHKRRHETHRDPRTRVNDWKEFTNPITKKDAKYQTARCMDCGTPFCLSDTGCPLSNIIPKFNELLFKNQWKLALDKLLETNNFPEFTGRVCPAPCEGACTLGIIEDPVGIKSVERIIIDNAFKEGWIKPCPPSTRTGFTVGVIGSGPAGLACADMLNRAGHTVTVYERSDRCGGLLMYGIPNMKLDKAIVQRRIDLLSAEGIDFVTNTEIGKTISMDELKNKHNAVVYAIGSTIPRDLPIKGRELKNIDFAMQLLESNTKALLNKDLEIIREKIQGKKVIVVGGGDTGNDCLGTSVRHGAASVLNFELLPEPPVERAKDNPWPQWPRVMRVDYGHAEVKEHYGRDPREYCILSKEFIGNDEGEVTAIRTVRVEWKKSQSGVWQMVEIPNSEEIFEADIILLSMGFVGPELINGNDNEVKKTRRGTIATLDDSSYSIDGGKTFACGDCRRGQSLIVWAIQEGRKCAASVDKFLMDGTTYLPSNGGIVQRDYKLLKELASQV

SEQ ID NO: 100 представляет собой нуклеотидную последовательность терминатора tTDH3

GTGAATTTACTTTAAATCTTGCATTTAAATAAATTTTCTTTTTATAGCTTTATGACTTAGTTTCAATTTATATACTATTTTAATGACATTTTCGATTCATTGATTGAAAGCTTTGTGTTTTTTCTTGATGCGCTATTGCATTGTTCTTGTCTTTTTCGCCACATGTAATATCTGTAGTAGATACCTGATACATTGTGGATGCTGAGTGAAATTTTAGTTAATAATGGAGGCGCTCTTAATAATTTTGGGGATATTGGCTTTTTTTTTTAAAGTTTACAAATGAATTTTTTCCGCCAGGAT

SEQ ID NO: 101 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (hasa), происходящую из вируса хлореллы CviKl

ATGCTTTTCAGTTGTTTGTCCTTCGTGATCTGCCATCTTAGTTTTATTTTGCGTTATTACAAGAGGCTTCTAAAAGTGACGATGGGAAAGAACATTATAATAATGGTGAGTTGGTACACAATAATAACTTCCAACATCATCGCCGTCGGTGGGGCGTCTCTGATTTTGGCCCCAGCCATCACTGGATACATCTTGCACTGGAACATCGCCTTGTCAACCATCTGGGGAGTTTCCGCTTATGGGATATTCGTGTTCGGATTCTTCCTGGCTCAGGTTTTATTTAGTGAGCTAAATCGTAAAAGACTAAGAAAGTGGATTTCTCTAAGACCAAAGGGTTGGAACGACGTACGTCTGGCTGTCATCATAGCTGGTTACAGGGAAGACCCGTACATGTTTCAGAAATGCCTTGAGTCAGTAAGGGACTCTGACTATGGTAATGTCGCTCGTCTTATCTGTGTAATTGACGGAGATGAGGACGACGACATGAAGATGGCAGCCGTTTATAAGGCGATATATAATGACAATATCAAGAAGCCAGAGTTTGTGTTATGTGAGAGCGATGATAAGGAAGGCGAGAGAATTGACTCAGATTTTAGCAGGGACATCTGCGTCTTACAACCACACCGTGGCAAAAGGGAGTGCTTGTATACCGGCTTTCAGCTGGCCAAAATGGACCCGTCGGTAAACGCCGTTGTTCTTATTGACTCTGACACGGTCTTGGAAAAGGACGCAATCTTGGAAGTCGTGTATCCATTGGCCTGTGACCCGGAAATTCAAGCTGTCGCAGGAGAGTGCAAAATATGGAACACAGATACACTTTTGTCGTTGTTGGTGGCTTGGAGATATTATTCAGCCTTTTGCGTGGAGAGATCCGCCCAATCATTCTTTAGGACAGTCCAGTGTGTAGGTGGACCCTTGGGCGCCTACAAGATAGATATCATCAAAGAGATCAAAGATCCCTGGATCTCCCAACGTTTCTTAGGTCAGAAGTGCACCTACGGTGACGACCGTAGGTTAACAAATGAAATCTTAATGAGGGGTAAGAAGGTCGTCTTCACTCCTTTCGCAGTTGGCTGGAGTGACTCACCAACCAACGTGTTCAGGTACATCGTACAACAGACTAGGTGGAGTAAATCATGGTGCCGTGAGATATGGTACACTTTGTTTGCTGCGTGGAAGCACGGACTAAGCGGAATTTGGTTGGCATTTGAGTGCCTTTATCAGATTACGTACTTCTTCCTAGTCATATATTTATTTTCGAGACTAGCCGTTGAAGCTGACCCAAGAGCACAGACCGCAACAGTAATCGTGTCTACCACGGTAGCCCTGATTAAGTGTGGTTACTTCTCTTTTCGTGCGAAAGATATTCGTGCTTTCTACTTCGTCCTGTACACATTTGTCTACTTCTTCTGTATGATCCCAGCAAGGGTGACAGCCATGATGACACTTTGGGATATCGGCTGGGGCACGCGTGGCGGAAACGAGAAACCAAGTGTCGGCACTAGGGTCGCTCTGTGGGCTAAACAGTATTTGATAGCATACATGTGGTGGGCAGCAGTTGTTGGCGCTGGGGTATACTCCATTGTTCATAATTGGATGTTTGACTGGAACTCACTATCCTATAGGTTCGCACTTGTAGGTATATGCTCTTACATCGTATTCATCACAATCGTTCTAGTCATCTATTTCACAGGAAAGATTACCACATGGAATTTCACCAAATTACAGAAGGAGTTAATCAAGGATAGGGTCTTATACGATGCTTCCACTAACGCCCAGACTGTATAA

SEQ ID NO: 102 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (hasa), происходящую из вируса хлореллы IL-5-2s1

ATGGCTGCTTCATTCTATGTTATCTTCTTGTTCGTAATATGCCACCTGTCCTTCGTCTTATATCGTCAAGTTCTATACATAATTTTGGGTAGATACTGGAGTGTTAACAAGCTGACAATGATCTCTTGGTATACCATTATATCATCTAATCTAATCGCAATCGGTGGGGCTTCCCTTATTTTGGCACCGGCCATAACCGGCTACATTTTGCATTGGAACATAGCTCTAAGCACAATTTGGGGTGTGTCAGCCTATGGCATTTTCGTGTTCGGGTTCTTTCTTGCTCAGGTTTTGTTCAGTGAGCTTAACAGGAAGAGGTTGAGAAAATGGATCTCTTTGAGACCAGATAACTGGAACGCGGTGAGAGTTGCCGTGATAATCGCTGGTTACCGTGAAGACCCATACATGTTTCAAAAGTGTTTGGAATCGGTGAGAGACTCCGATTATGGTAACATTGCGAGGCTTATATGCGTTATAGATGGGGACGAAGATGACGACATGAAGATGGCAGATGTATACAAGGCTATTTACAATGACAATATAAAGAAGCCGGAAATTATCCTATGTGAGTCCGACGACAAAGAGGGAGAAAGGATAGACAGTGATTTTAGCCGTGATATTTGCGTGCTTCAGCCTCACAGAGGTAAGCGTGAATGTTTATATACTGGCTTTCAGTTAGCTAAAATGGACCCCTCTGTACACGCGGTTGTGCTTATTGACTCGGATACAGTTTTGGAGAAGGATGCCATCCTGGAAGTGGTCTACCCACTTGCTTGCGACCATGAGATTCAAGCAGTCGCAGGTGAATGCAAGATATGGAATACGGACACCTTATTATCCATATTAGTCGCCTGGCGTTACTACTCAGCTTTCTGCGTTGAGCGTAGCGCTCAGTCCTTCTTCCGTACTGTGCAATGCGTCGGCGGTCCGTTAGGGGCATACAAAATAGACATAATTAAAGAGATAAAGGAGCCGTGGATTTCACAAAGATTTCTGGGTCAGAAGTGTACGTACGGAGATGACAGAAGATTAACTAACGAAGTGTTGATGCGTGGAAAGAAAGTAGTCTTCACACCTTTTGCGGTAGGATGGAGCGACTCGCCTACTAATGTCTTCCGTTATATTGTGCAGCAGACGAGGTGGAGTAAGAGCTGGTGCAGGGAGATTTGGTATACACTGTTCGCGGCGTGGAAGCATGGGTTATCAGGCATTTGGTTGGCATTTGAGTGCTTGTATCAGATCACATACTTCTTTCTAGTGATATATCTGTTCAGTAGACTAGCAGTCGAGGCTGACCCGAGAGCGCAAACTGCAACGGTTATAGTCAGCACAATGGTTTCACTAATCAAGTGTGGATATTTCTCATTCCGTGCTAAGGACATTAGAGCGTTTTATTTCGTACTATATACTTTTGTGTACTTCTTTTGCATGATCCCAGCAAGAGTCACTGCTATGATGACCTTGTGGGATATTGGGTGGGGTACTAGGGGTGGAAACGTGAAACCATCGATCGGAACTAGGATCTCTTTGTGGGCTAAGCAGTACTTAATCGCGTACATGTGGTGGGCAGCTGTGATCGCCGCAGGAGTCTATAGTATAATACATAATTGGATGTTTGATTGGAACTCCTTGTCCTATCGTTTCGCGTTAATAGGCATCTGCTCGTATATCGTATTCATTGCCATTGTTATAGTGATATACTTCACAGGTAAGATCACCACTTGGAATTTTACCAAGCTACAGAAAGAGTTAATTGAAGATAGAGTCTTGCATGATGCCGATGTGGACATACAGAACGTATAA

SEQ ID NO: 103 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (HASA), происходящую из вируса хлореллы CZ-2

ATGACATCTTGGAGAACGATTGTGTCAGCTAACCTTTTCGCAGTTGGTGGGGCTCTTCTAATGTTAGCCCCAGCTATCGTGGGCTATGTATTTCAGTGGAATATAGGCGTGTCCGCAGTCTGGGGCATCTCCGTATACGGCGTCTTTGTGTTGGGATTTTATATCGCTCAAATCGTCTTCTCTGAGTTCAACAGGATGAGATTATCCGATTGGATAAGTCTTAGACCAGACAACTGGAACGCCACAAGGGTTGCGGTCATTATAGCTGGATACAGAGAAGATCCTTTTATGTTCAAGAAGTGCTTAGAGAGTGTGAGGGATTCGGAATACGGCAACGTAGCAAGGCTTATATGCGTAATTGACGGAGACGAAGAAGAGGACCTAAAGATGGCTGAGATTTACAAGCAGGTTTACAATGACAACGTGAAGAAACCAGGTGTAGTGTTATGCGAATCGGAGAACAAGAATGGATCGACTATAGATTCGGACGTATCTAAGAATATATGCATACTGCAACCCCACCGTGGGAAACGTGAGAGCCTATATACCGGTTTCCAATTGGCAAGCATGGACCCTTCCGTACATGCGGTTGTTCTTATAGATTCCGACACTGTATTAGAGAAGAATGCTATTCTTGAGGTCGTATACCCTCTATCTTGTGACCCCAACATTAAGGCCGTCGCCGGGGAGTGCAAGATATGGAATACAGACACCATCTTGTCCATGCTTGTCTCTTGGAGATACTTCTCTGCCTTCAATGTCGAGCGTGGAGCCCAGTCATTATGGAAGACTGTGCAATGCGTAGGCGGGCCACTTGGCGCATACACTATCGACATCATAAATGAAATTAAAGACCCGTGGATTACCCAGACATTCCTGGGCAACAAGTGCACTTATGGCGACGATAGACGTCTTACCAATGAGGTTTTAATGAGGGGCAAGAAGATTGTATACACTCCGTTTGCCGTCGGTTGGAGCGACAGTCCGACGAATGTCATGAGGTACATTGTGCAGCAAACTAGATGGAGTAAGTCATGGTGCAGAGAGATATGGTACACGTTAGGCAGTGCCTGGAAACATGGATTCTCCGGCATATACCTTGCGTTTGAGTGTATGTACCAGATAATGTACTTCTTCTTAGTCATGTACCTGTTTTCGTATATCGCAATAAAGGCAGACATCCGTGCTCAGACTGCAACTGTGTTGGTTTCTACTCTAGTCACCATAATAAAGAGCAGTTACCTAGCGCTGAGGGCCAAGAACCTGAAGGCTTTCTATTTCGTTCTGTATACCTATGTCTATTTCTTTTGCATGATACCTGCTAGGATTACCGCTATGTTTACAATGTTTGATATAGCTTGGGGTACACGTGGTGGTAATGCGAAAATGACAATCGGGGCTAGAGTTTGGCTGTGGGCGAAGCAGTTCTTAATAACTTATATGTGGTGGGCAGGAGTACTAGCGGCGGGAGTTTACAGTATAGTTGACAATTGGTACTTCGATTGGGCTGATATACAGTACAGGTTTGCATTGGTAGGTATTTGCTCGTATTTGGTCTTTGTCAGTATTGTACTGGTAATCTACTTGATCGGTAAGATAACAACGTGGAACTACACACCGCTACAGAAGGAACTTATTGAGGAGAGATACTTGCATAACGCCTCTGAGAATGCCCCGGAAGTTTAA

SEQ ID NO: 104 представляет собой перекодированную нуклеотидную последовательность гиалуронан-синтазы (hasa), происходящую из вируса хлореллы CVG-1

ATGACTTCTTGGCGTACAATTGTTTCTGCTAACTTGTTCGCAGTTGGTGGCGCCTTGTTGATGTTAGCTCCCGCGATAGCCGGTTATGTATTTAAATGGAACATAGGCGTTTCTGCCGTTTGGGGTATTTCAGTGTACGGGGTCTTCGTGCTTGGTTTCTATATTGCACAGGTAGTCTTCAGCGAGTTTAATAGGATGCAGCTGTCAGACTGGATCTCATTGAGACCCGACAACTGGAACGCCACCAGAGTAGCGGTAATTATTGCTGGTTACAGGGAAGACCCCTTTATGTTCAAGAAGTGCCTAGAATCTGTGAGAGACTCAGAATACGGGAACATAGCGAGGCTAATCTGTGTTATCGACGGCGATGAAGAGGAAGACCTTAAGATGGCTGAGATATACAAGCAAGTATACAACGACAACGTCAAGACCCCCGGTGTTGTGCTATGCGAGAATGAAAATAAGAATGGTAGCACCATTGACCCAGATTTTAGTAAGAACATCTGCATTCTGCAACCACACAGGGGCAAACGTGAATCTTTGTACACCGGATTCCAGATGGCTGGCATGGACCCATCAGTGCACGCAGTTGTACTTATAGACAGTGATACTGTTCTTGAAAAGAACGCTATCCTAGAGGTTGTGTACCCTCTATCTTGTGATCCAAATATCAAAGCTGTCGCGGGAGAGTGTAAAATCTGGAACACAGATACCATTTTGTCTATGCTAGTTTCATGGCGTTATTTCTCGGCTTTCAACGTGGAGAGAGGCGCACAGTCCCTTTGGAAAACAGTCCAGTGTGTCGGCGGGCCTTTGGGAGCATACACTATAGACATCATAAACGAGATAAAAGACCCCTGGATTACTCAGACATTCTTAGGAAACAAATGTACGTATGGTGACGACAGAAGGTTAACCAATGAAGTGCTTATGAGGGGAAAGAAGATTGTCTATACTCCCTTTGCTGTCGGTTGGTCCGATTCGCCCACAAACGTTATGAGGTACATCGTCCAGCAGACAAGGTGGTCTAAGAGCTGGTGCCGTGAGATTTGGTACACCTTGGGATCAGCATGGAAACATGGTTTCTCCGGAATCTACTTAGCGTTCGAGTGCATGTACCAGATTATGTATTTCTTTATTGTGATGTATTTGTTCAGTTACATTGCCATTAAAGCCAACATCAGGGCACAAGCAGCCACGGTATTGGTCAGTACGCTTGTCGCAGTAATCAAATCTAGTTATTTGGCATTAAGAGCGAAGAACCTAAAAGCTTTGTATTTCGTCCTGTATACCTACGTCTACTTCTTCTGCATGATTCCAGCTAGAATAACAGCGATGTTCACGATGTTCGATATTGCATGGGGTACTAGAGGCGGTAACGCAAAGATGACGATCGGTGCTAGAGTCTGGTTGTGGGCTAAACAATTCTTAATTACATACATGTGGTGGGTGGGAGTTTTGGCCGCTGGGGTCTACAGTATAGTCGATAACTGGTACTTCGACTGGGCGGACATCCAGTACAGATTCGCGCTAGTGGGGATTTGCAGTTACTTAGGTTTCGTTTCCATAATGCTGGTATTCTATCTGATTGGTAAAATAACTACGTGGAATTACACTCCTCTACAAAAGGAGCTGATTAAAGAGAGGTTACACGCCGCTAATGCAACAGAGGTCTAA

SEQ ID NO: 105 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (hasa), происходящую из вируса хлореллы CviKl

MLFSCLSFVICHLSFILRYYKRLLKVTMGKNIIIMVSWYTIITSNIIAVGGASLILAPAITGYILHWNIALSTIWGVSAYGIFVFGFFLAQVLFSELNRKRLRKWISLRPKGWNDVRLAVIIAGYREDPYMFQKCLESVRDSDYGNVARLICVIDGDEDDDMKMAAVYKAIYNDNIKKPEFVLCESDDKEGERIDSDFSRDICVLQpHRGKRECLYTGFQLAKMDPSVNAVVLIDSDTVLEKDAILEVVYPLACDPEIQAVAGECKIWNTDTLLSLLVAWRYYSAFCVERSAQSFFRTVQCVGGPLGAYKIDIIKEIKDPWISQRFLGQKCTYGDDRRLTNEILMRGKKVVFTPFAVGWSDSPTNVFRYIVQQTRWSKSWCREIWYTLFAAWKHGLSGIWLAFECLYQITYFFLVIYLFSRLAVEADPRAQTATVIVSTTVALIKCGYFSFRAKDIRAFYFVLYTFVYFFCMIPARVTAMMTLWDIGWGTRGGNEKPSVGTRVALWAKQYLIAYMWWAAVVGAGVYSIVHNWMFDWNSLSYRFALVGICSYIVFITIVLVIYFTGKITTWNFTKLQKELIKDRVLYDASTNAQTV

SEQ ID NO: 106 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (hasa), происходящую из вируса хлореллы IL-5-2s1

MAASFYVIFLFVICHLSFVLYRQVLYIILGRYWSVNKLTMISWYTIISSNLIAIGGASLILAPAITGYILHWNIALSTIWGVSAYGIFVFGFFLAQVLFSELNRKRLRKWISLRPDNWNAVRVAVIIAGYREDPYMFQKCLESVRDSDYGNIARLICVIDGDEDDDMKMADVYKAIYNDNIKKPEIILCESDDKEGERIDSDFSRDICVLQpHRGKRECLYTGFQLAKMDPSVHAVVLIDSDTVLEKDAILEVVYPLACDHEIQAVAGECKIWNTDTLLSILVAWRYYSAFCVERSAQSFFRTVQCVGGPLGAYKIDIIKEIKEPWISQRFLGQKCTYGDDRRLTNEVLMRGKKVVFTPFAVGWSDSPTNVFRYIVQQTRWSKSWCREIWYTLFAAWKHGLSGIWLAFECLYQITYFFLVIYLFSRLAVEADPRAQTATVIVSTMVSLIKCGYFSFRAKDIRAFYFVLYTFVYFFCMIPARVTAMMTLWDIGWGTRGGNVKPSIGTRISLWAKQYLIAYMWWAAVIAAGVYSIIHNWMFDWNSLSYRFALIGICSYIVFIAIVIVIYFTGKITTWNFTKLQKELIEDRVLHDADVDIQNV

SEQ ID NO: 107 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (hasa), происходящую из вируса хлореллы CZ-2

MTSWRTIVSANLFAVGGALLMLAPAIVGYVFQWNIGVSAVWGISVYGVFVLGFYIAQIVFSEFNRMRLSDWISLRPDNWNATRVAVIIAGYREDPFMFKKCLESVRDSEYGNVARLICVIDGDEEEDLKMAEIYKQVYNDNVKKPGVVLCESENKNGSTIDSDVSKNICILQpHRGKRESLYTGFQLASMDPSVHAVVLIDSDTVLEKNAILEVVYPLSCDPNIKAVAGECKIWNTDTILSMLVSWRYFSAFNVERGAQSLWKTVQCVGGPLGAYTIDIINEIKDPWITQTFLGNKCTYGDDRRLTNEVLMRGKKIVYTPFAVGWSDSPTNVMRYIVQQTRWSKSWCREIWYTLGSAWKHGFSGIYLAFECMYQIMYFFLVMYLFSYIAIKADIRAQTATVLVSTLVTIIKSSYLALRAKNLKAFYFVLYTYVYFFCMIPARITAMFTMFDIAWGTRGGNAKMTIGARVWLWAKQFLITYMWWAGVLAAGVYSIVDNWYFDWADIQYRFALVGICSYLVFVSIVLVIYLIGKITTWNYTPLQKELIEERYLHNASENAPEV

SEQ ID NO: 108 представляет собой аминокислотную последовательность гиалуронан-синтазы (hasa), происходящую из вируса хлореллы CVG-1

MTSWRTIVSANLFAVGGALLMLAPAIAGYVFKWNIGVSAVWGISVYGVFVLGFYIAQVVFSEFNRMQLSDWISLRPDNWNATRVAVIIAGYREDPFMFKKCLESVRDSEYGNIARLICVIDGDEEEDLKMAEIYKQVYNDNVKTPGVVLCENENKNGSTIDPDFSKNICILQpHRGKRESLYTGFQMAGMDPSVHAVVLIDSDTVLEKNAILEVVYPLSCDPNIKAVAGECKIWNTDTILSMLVSWRYFSAFNVERGAQSLWKTVQCVGGPLGAYTIDIINEIKDPWITQTFLGNKCTYGDDRRLTNEVLMRGKKIVYTPFAVGWSDSPTNVMRYIVQQTRWSKSWCREIWYTLGSAWKHGFSGIYLAFECMYQIMYFFIVMYLFSYIAIKANIRAQAATVLVSTLVAVIKSSYLALRAKNLKALYFVLYTYVYFFCMIPARITAMFTMFDIAWGTRGGNAKMTIGARVWLWAKQFLITYMWWVGVLAAGVYSIVDNWYFDWADIQYRFALVGICSYLGFVSIMLVFYLIGKITTWNYTPLQKELIKERLHAANATEV

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> GIVAUDAN SA

<120> РЕКОМБИНАНТНЫЕ КЛЕТКИ, ПРОДУЦИРУЮЩИЕ ГИАЛУРОНОВУЮ КИСЛОТУ

<130> PR92297/MGG

<150> EP21306488.4

<151> 2021-10-26

<150> EP21166743.1

<151> 2021-04-01

<160> 108

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 1707

<212> ДНК

<213> Вирус хлореллы Paramecium bursaria 1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<400> 1

atgggtaaga acatcattat tatggtttct tggtacacta ttattacatc caatctcatc 60

gcagtgggtg gcgcctcact catactagcc ccagctatta cgggctatgt ccttcactgg 120

aacattgccc tttcaacaat ttggggagtg tcggcctacg gaattttcgt gtttggtttc 180

tttcttgccc aggtattatt tagtgaactc aaccggaaaa ggctccggaa gtggatttcc 240

ctccgaccca aagggtggaa tgatgttagg ttggctgtaa ttattgccgg ctaccgtgag 300

gacccgtata tgttccaaaa gtgtcttgaa agtgtgcgtg actcagacta tgggaatgta 360

gctagactaa tatgcgttat tgacggcgat gaagacgacg acatgaggat ggctgcagtg 420

tacaaggcta tctataacga caacatcaag aaacctgagt ttgtcctctg tgagagtgac 480

gataaggagg gtgagagaat agatagcgat ttcagccgtg atatctgcgt gctgcaaccg 540

catcgcggaa agcgtgaatg tttgtacaca gggttccaat tggcaaagat ggacccctca 600

gttaatgccg tcgtcctaat cgacagtgac actgtgttag aaaaggacgc gattctcgaa 660

gtagtatacc cgctggcatg cgatccagaa atacaggctg tagcaggcga atgcaaaata 720

tggaatactg acacactgtt gagtttgctg gtagcctggc gatattacag cgcattttgc 780

gtagagcgta gcgcccaatc attcttcagg acagtacaat gcgtcggagg acctctcggc 840

gcctacaaga ttgatataat taaggaaatc aaggacccat ggatcagcca acgtttcctt 900

ggccaaaagt gcacatacgg cgacgataga cgactcacta atgaaatact aatgaggggt 960

aagaaagtag ttttcacccc attcgctgtt ggctggtccg acagcccgac gaacgtcttc 1020

cgttacattg tacagcaaac acggtggtcc aagtcgtggt gtagggagat atggtataca 1080

ctgtttgcag catggaagca tggactttcg ggcatttggc tcgcattcga gtgcttatac 1140

cagattactt atttcttcct ggtgatttac ctattctccc gtttggctgt tgaggctgac 1200

ccacgggcgc aaacggccac cgtcattgtt tcgaccacag ttgcgcttat taagtgcggt 1260

tactttagct tcagagctaa agacattagg gccttctatt tcgtcctcta cacgttcgtt 1320

tacttcttct gcatgattcc ggcacgaata actgcgatga tgaccctgtg ggacataggt 1380

tggggaacca ggggaggaaa tgagaagcct tccgtaggca ccagagttgc tttgtgggcc 1440

aagcaatatt tgattgctta catgtggtgg gccgctgtcg tcggtgctgg cgtgtactcc 1500

atcgttcata attggatgtt tgactggaat tcactttcct acaggttcgc actggtaggc 1560

atctgttcgt atatagtttt cattgtaata gtgctggtag tctactttac aggaaagatc 1620

acgacctgga acttcacgaa gctacagaaa gaattgatcg aggaccgcgt actgtacgac 1680

gcaacgacca atgcccagtc ggtataa 1707

<210> 2

<211> 1707

<212> ДНК

<213> Вирус хлореллы Paramecium bursaria 1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<400> 2

atgggcaaga atattattat catggtcagt tggtatacca ttattacatc aaacctaatt 60

gctgtcggtg gagcctcact aatcttagct cccgcgatta cgggttatgt gcttcattgg 120

aatattgctt tatccactat ttggggtgtt agcgcttacg gcatctttgt gttcggtttc 180

ttcttggctc aggtgttatt ctctgagcta aacagaaaga gactcagaaa gtggatttcg 240

ctgcggccga agggatggaa cgatgttcgg ttagcggtga tcattgccgg ttatcgtgaa 300

gatccttata tgtttcagaa gtgtttggaa tctgttcgag actcagacta cggtaacgtt 360

gctaggctga tctgcgtaat cgatggagac gaagatgacg atatgagaat ggccgcggtt 420

tataaagcca tctataacga taacattaag aagccagagt ttgttttatg cgaatcggat 480

gacaaggagg gtgagaggat tgattctgac ttctcgcgtg acatctgtgt cctgcagccc 540

cacaggggaa agcgagagtg cctctataca ggattccaat tagctaaaat ggacccaagc 600

gttaatgctg tcgtccttat cgatagcgac acggtgttgg aaaaggacgc aatattggaa 660

gtagtctatc cactcgcttg tgatccagag atccaggccg tggctggcga gtgcaagatt 720

tggaatacag atacgcttct gtcattactg gtggcgtggc gttattattc agcattctgt 780

gtggagagga gcgcacaatc gttctttcgg actgtacaat gcgtaggcgg tccactagga 840

gcatataaaa ttgacataat caaagagata aaagatcctt ggatttcgca gagattcctc 900

ggtcaaaagt gtacctatgg ggacgacagg cggttgacta acgagattct aatgagaggt 960

aagaaggtgg tgttcactcc ttttgcggta ggttggagcg attcgcccac aaatgtattc 1020

agatacattg ttcaacaaac aaggtggtcg aaatcgtggt gccgagaaat atggtacacg 1080

ttgttcgccg catggaaaca cggcttgtcg ggtatatggc tcgctttcga gtgcctttat 1140

cagatcactt acttcttcct ggttatttac ttgttttcaa gactggcagt ggaagctgat 1200

ccaagggctc agactgctac tgtcatcgtt tcaacaacag tggcgctaat aaagtgtggt 1260

tacttcagct ttcgcgcgaa ggacataaga gcgttttact ttgttcttta tacctttgta 1320

tatttcttct gtatgatccc ggcccggata acagctatga tgacattatg ggacattggt 1380

tggggcacca ggggtgggaa tgagaagccg tccgtaggaa cgagagtagc gctgtgggcc 1440

aagcagtatc ttatcgcata catgtggtgg gcagctgtcg tcggggcagg tgtatacagc 1500

atagtacata actggatgtt tgactggaac tcactctcat atcgattcgc attggtcggg 1560

atctgctctt acatcgtgtt tattgttata gtcttagtag tatatttcac tggaaagata 1620

acaacatgga atttcactaa gcttcaaaag gaattgattg aagacagggt gctctacgat 1680

gcgacaacta atgcacaaag cgtataa 1707

<210> 3

<211> 2919

<212> ДНК

<213> Pasteurella multocida

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Pasteurella multocida

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Pasteurella multocida

<400> 3

atgaacaccc tttcccaggc aattaaggct tataatagta atgattatca actagccctc 60

aagctgttcg aaaagtcggc agaaatctac ggcagaaaga tagttgagtt ccaaattacg 120

aagtgcaagg agaaactttc tgcgcaccca tccgttaaca gtgcgcatct ctcggttaac 180

aaagaagaga aggtgaatgt ttgcgacagt ccattagaca tagccactca attattgtta 240

tcgaatgtga aaaaactcgt ccttagtgat agcgagaaaa atacactaaa gaataaatgg 300

aagttgttga ctgaaaagaa gtctgagaac gcagaggtcc gggccgtagc tttagttccc 360

aaggactttc cgaaagattt agtgcttgcg ccgttaccag accatgtgaa cgattttacg 420

tggtataaga agcggaagaa acgcctagga atcaaaccag aacaccaaca cgttggcctc 480

tccattattg tgacaacgtt caaccgtcct gccatcctca gcatcaccct ggcttgcctc 540

gtcaatcaaa agacccatta tccttttgag gtgatcgtga ccgacgatgg ttctcaagag 600

gatttatcgc ctataatccg tcaatatgag aacaagctag acatccgtta tgttcggcaa 660

aaggacaacg gttttcaggc atcggccgca cgtaatatgg gcctacgtct agccaaatat 720

gacttcattg ggctccttga ttgtgatatg gctcccaacc ctttgtgggt acactcatac 780

gttgcggaac tattagagga cgatgatttg accataatag gccccaggaa gtacattgac 840

acgcaacaca tagatcccaa ggatttcctt aataacgcct ctctgttaga gtcgttgcca 900

gaggttaaga ccaataattc cgtcgcggct aagggcgagg ggaccgtatc tttagactgg 960

cgtttggaac aatttgagaa gaccgagaac ttgaggctat ccgatagccc tttccgattc 1020

ttcgcagctg ggaatgtggc tttcgccaag aagtggctta acaagtcagg attcttcgac 1080

gaggaattca atcactgggg aggtgaagat gtagagttcg gttatcgtct gtttcggtac 1140

ggttcgttct tcaaaactat agacggcatc atggcctatc atcaggaacc gccaggtaaa 1200

gaaaacgaaa ctgacagaga agcgggcaag aacattaccc tcgatataat gagggagaag 1260

gtgccttaca tctaccgtaa actcctgcct atagaagaca gtcatatcaa ccgagtacca 1320

ttggtatcaa tttacatccc ggcctacaac tgtgctaact atattcaaag atgtgttgat 1380

tcagctttga atcaaacggt agttgatctc gaagtgtgca tttgcaacga cggtagtact 1440

gacaacacgc tggaagttat taacaagctg tatggtaata atccgcgtgt gcgtataatg 1500

tctaaaccca atggcggcat tgcgagtgca tccaacgcag cggtcagctt cgcaaagggt 1560

tattacatag gacagttgga cagcgacgat tacttagaac ccgacgcagt ggagttatgt 1620

ctcaaggaat ttcttaagga taagaccctt gcgtgcgttt acaccactaa tcgtaacgtc 1680

aacccagatg gctctttaat agccaatggc tataactggc cagagttcag tcgtgagaag 1740

ttgactacgg ccatgattgc tcatcacttc cggatgttta ccattcgtgc ttggcatctg 1800

acggatgggt tcaatgagaa gattgagaac gctgttgact acgacatgtt tctcaagctc 1860

agtgaagttg gtaaatttaa gcatctgaac aaaatatgtt ataatcgggt gttacacggc 1920

gataacacct caatcaagaa gcttggcata caaaagaaga atcatttcgt agttgtcaat 1980

cagtctctaa accgccaagg tataacttat tataactacg atgaatttga tgatctcgat 2040

gagagtcgga aatacatttt caacaagact gcagagtatc aagaagagat agatattctt 2100

aaagatatta agatcattca gaacaaagac gccaaaatag ctgtctccat tttctatccg 2160

aacactctaa acgggttggt gaagaagcta aataatatta tagagtataa taagaatatc 2220

ttcgttattg tacttcatgt cgataagaat cacttaaccc cagacatcaa gaaggagata 2280

ttagccttct accataagca tcaggtgaac atcttattga acaatgacat ctcctactat 2340

acatcaaatc gtctgattaa gacagaagcc catttgagta acattaacaa gctaagtcaa 2400

ttaaatctta actgcgaata cattatattc gacaatcacg attccttatt tgtgaagaac 2460

gattcctatg catacatgaa gaagtatgat gttggaatga acttctctgc attgactcat 2520

gattggattg aaaagataaa cgctcacccg ccatttaaga agctgatcaa aacttacttc 2580

aatgacaatg atcttaagtc gatgaatgta aagggtgcct cccagggaat gtttatgaca 2640

tacgcattag cccacgagtt attgacgatc atcaaggagg tgataacctc ttgtcaatcc 2700

attgactccg tccccgaata caacacagaa gatatttggt ttcagtttgc acttttaatt 2760

ctggaaaaga agaccggcca cgtattcaac aagacaagca ctctcacgta tatgccatgg 2820

gaacgtaaac tgcagtggac gaatgaacaa atagagtccg caaagagggg cgaaaacatt 2880

ccggtaaaca agttcatcat taacagcatt accctttaa 2919

<210> 4

<211> 2112

<212> ДНК

<213> Pasteurella multocida

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Pasteurella multocida

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Pasteurella multocida

<400> 4

atgaacaccc tttcccaggc aattaaggct tataatagta atgattatca actagccctc 60

aagctgttcg aaaagtcggc agaaatctac ggcagaaaga tagttgagtt ccaaattacg 120

aagtgcaagg agaaactttc tgcgcaccca tccgttaaca gtgcgcatct ctcggttaac 180

aaagaagaga aggtgaatgt ttgcgacagt ccattagaca tagccactca attattgtta 240

tcgaatgtga aaaaactcgt ccttagtgat agcgagaaaa atacactaaa gaataaatgg 300

aagttgttga ctgaaaagaa gtctgagaac gcagaggtcc gggccgtagc tttagttccc 360

aaggactttc cgaaagattt agtgcttgcg ccgttaccag accatgtgaa cgattttacg 420

tggtataaga agcggaagaa acgcctagga atcaaaccag aacaccaaca cgttggcctc 480

tccattattg tgacaacgtt caaccgtcct gccatcctca gcatcaccct ggcttgcctc 540

gtcaatcaaa agacccatta tccttttgag gtgatcgtga ccgacgatgg ttctcaagag 600

gatttatcgc ctataatccg tcaatatgag aacaagctag acatccgtta tgttcggcaa 660

aaggacaacg gttttcaggc atcggccgca cgtaatatgg gcctacgtct agccaaatat 720

gacttcattg ggctccttga ttgtgatatg gctcccaacc ctttgtgggt acactcatac 780

gttgcggaac tattagagga cgatgatttg accataatag gccccaggaa gtacattgac 840

acgcaacaca tagatcccaa ggatttcctt aataacgcct ctctgttaga gtcgttgcca 900

gaggttaaga ccaataattc cgtcgcggct aagggcgagg ggaccgtatc tttagactgg 960

cgtttggaac aatttgagaa gaccgagaac ttgaggctat ccgatagccc tttccgattc 1020

ttcgcagctg ggaatgtggc tttcgccaag aagtggctta acaagtcagg attcttcgac 1080

gaggaattca atcactgggg aggtgaagat gtagagttcg gttatcgtct gtttcggtac 1140

ggttcgttct tcaaaactat agacggcatc atggcctatc atcaggaacc gccaggtaaa 1200

gaaaacgaaa ctgacagaga agcgggcaag aacattaccc tcgatataat gagggagaag 1260

gtgccttaca tctaccgtaa actcctgcct atagaagaca gtcatatcaa ccgagtacca 1320

ttggtatcaa tttacatccc ggcctacaac tgtgctaact atattcaaag atgtgttgat 1380

tcagctttga atcaaacggt agttgatctc gaagtgtgca tttgcaacga cggtagtact 1440

gacaacacgc tggaagttat taacaagctg tatggtaata atccgcgtgt gcgtataatg 1500

tctaaaccca atggcggcat tgcgagtgca tccaacgcag cggtcagctt cgcaaagggt 1560

tattacatag gacagttgga cagcgacgat tacttagaac ccgacgcagt ggagttatgt 1620

ctcaaggaat ttcttaagga taagaccctt gcgtgcgttt acaccactaa tcgtaacgtc 1680

aacccagatg gctctttaat agccaatggc tataactggc cagagttcag tcgtgagaag 1740

ttgactacgg ccatgattgc tcatcacttc cggatgttta ccattcgtgc ttggcatctg 1800

acggatgggt tcaatgagaa gattgagaac gctgttgact acgacatgtt tctcaagctc 1860

agtgaagttg gtaaatttaa gcatctgaac aaaatatgtt ataatcgggt gttacacggc 1920

gataacacct caatcaagaa gcttggcata caaaagaaga atcatttcgt agttgtcaat 1980

cagtctctaa accgccaagg tataacttat tataactacg atgaatttga tgatctcgat 2040

gagagtcgga aatacatttt caacaagact gcagagtatc aagaagagat agatattctt 2100

aaagatattt aa 2112

<210> 5

<211> 2322

<212> ДНК

<213> Pasteurella multocida

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Pasteurella multocida

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Pasteurella multocida

<400> 5

atgaacaccc tttcccaggc aattaaggct tataatagta atgattatca actagccctc 60

aagctgttcg aaaagtcggc agaaatctac ggcagaaaga tagttgagtt ccaaattacg 120

aagtgcaagg agaaactttc tgcgcaccca tccgttaaca gtgcgcatct ctcggttaac 180

aaagaagaga aggtgaatgt ttgcgacagt ccattagaca tagccactca attattgtta 240

tcgaatgtga aaaaactcgt ccttagtgat agcgagaaaa atacactaaa gaataaatgg 300

aagttgttga ctgaaaagaa gtctgagaac gcagaggtcc gggccgtagc tttagttccc 360

aaggactttc cgaaagattt agtgcttgcg ccgttaccag accatgtgaa cgattttacg 420

tggtataaga agcggaagaa acgcctagga atcaaaccag aacaccaaca cgttggcctc 480

tccattattg tgacaacgtt caaccgtcct gccatcctca gcatcaccct ggcttgcctc 540

gtcaatcaaa agacccatta tccttttgag gtgatcgtga ccgacgatgg ttctcaagag 600

gatttatcgc ctataatccg tcaatatgag aacaagctag acatccgtta tgttcggcaa 660

aaggacaacg gttttcaggc atcggccgca cgtaatatgg gcctacgtct agccaaatat 720

gacttcattg ggctccttga ttgtgatatg gctcccaacc ctttgtgggt acactcatac 780

gttgcggaac tattagagga cgatgatttg accataatag gccccaggaa gtacattgac 840

acgcaacaca tagatcccaa ggatttcctt aataacgcct ctctgttaga gtcgttgcca 900

gaggttaaga ccaataattc cgtcgcggct aagggcgagg ggaccgtatc tttagactgg 960

cgtttggaac aatttgagaa gaccgagaac ttgaggctat ccgatagccc tttccgattc 1020

ttcgcagctg ggaatgtggc tttcgccaag aagtggctta acaagtcagg attcttcgac 1080

gaggaattca atcactgggg aggtgaagat gtagagttcg gttatcgtct gtttcggtac 1140

ggttcgttct tcaaaactat agacggcatc atggcctatc atcaggaacc gccaggtaaa 1200

gaaaacgaaa ctgacagaga agcgggcaag aacattaccc tcgatataat gagggagaag 1260

gtgccttaca tctaccgtaa actcctgcct atagaagaca gtcatatcaa ccgagtacca 1320

ttggtatcaa tttacatccc ggcctacaac tgtgctaact atattcaaag atgtgttgat 1380

tcagctttga atcaaacggt agttgatctc gaagtgtgca tttgcaacga cggtagtact 1440

gacaacacgc tggaagttat taacaagctg tatggtaata atccgcgtgt gcgtataatg 1500

tctaaaccca atggcggcat tgcgagtgca tccaacgcag cggtcagctt cgcaaagggt 1560

tattacatag gacagttgga cagcgacgat tacttagaac ccgacgcagt ggagttatgt 1620

ctcaaggaat ttcttaagga taagaccctt gcgtgcgttt acaccactaa tcgtaacgtc 1680

aacccagatg gctctttaat agccaatggc tataactggc cagagttcag tcgtgagaag 1740

ttgactacgg ccatgattgc tcatcacttc cggatgttta ccattcgtgc ttggcatctg 1800

acggatgggt tcaatgagaa gattgagaac gctgttgact acgacatgtt tctcaagctc 1860

agtgaagttg gtaaatttaa gcatctgaac aaaatatgtt ataatcgggt gttacacggc 1920

gataacacct caatcaagaa gcttggcata caaaagaaga atcatttcgt agttgtcaat 1980

cagtctctaa accgccaagg tataacttat tataactacg atgaatttga tgatctcgat 2040

gagagtcgga aatacatttt caacaagact gcagagtatc aagaagagat agatattctt 2100

aaagatattg gatccgccat ttctcaaatc actgacggtc aaatccaagc tactaccact 2160

gctaccaccg aagctaccac cactgctgcc ccatcttcca ccgttgaaac tgtttctcca 2220

tccagcaccg aaactatctc tcaacaaact gaaaatggtg ctgctaaggc cgctgtcggt 2280

atgggtgccg gtgctctagc tgctgctgct atgttgttat aa 2322

<210> 6

<211> 1656

<212> ДНК

<213> Xenopus laevis

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Xenopus laevis

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Xenopus laevis

<400> 6

atgcactgtg aacgatttat ttgtatatta cgaataattg gtacgacttt gttcggagta 60

agtctgctac tagggatatc cgccgcttat atcgtgggat accaattcat tcagacggat 120

aattactact tttccttcgg tctctacggt gctattttag ctttacattt aatcattcag 180

tctctcttcg cattcctgga gcatcgtaag atgaagcggt cacttgaaac ccctataaaa 240

ttaaacaaga gcgtagcatt gtgtatcgct gcataccagg aagacgaaga ttatcttaga 300

aaatgtttgc tttctgtgaa acggctcaca taccccggta tgaaggtaat catggtgata 360

gatggtaact ctgatgacga tctatacatg atgaacatat tcagagagat catgggaaat 420

gatagctgcg ccacctatgt atggaagaat aattttcaca tgaagggacc aaacgagacc 480

gacgagactc accgcgagtc catgcagcat gtaacacaga tggtgctttc taacagaaat 540

gtctgtatca tgcaaaagtg gaacgggaaa cgcgaggtga tgtatactgc attcaaagcg 600

ctgggtcggt cggttgatta cgtccaagtg tgcgactcag atacagtcct tgatccagca 660

agctcggtgg agatggtcaa ggtgttggag gaagacatta tggtcggagg tgtaggcgga 720

gacgtgcaga tactcaataa gtacgactcc tggatcagtt tcttgagttc ggttcgttat 780

tggatggctt tcaatataga acgagcatgc caatcatact ttggctgtgt gcagtgtata 840

tcggggcctc tgggcatgta cagaaactca ctcttacatg agttcattga agactggtac 900

aatcaagaat tcctcggttc ccaatgctct ttcggtgatg atcggcattt gactaatcga 960

gtactatcat tgggctatgc tactaaatac actgcgcgca gtaagtgtct gacagaaacc 1020

cccacagaat atcttagatg gttgaaccaa caaaccaggt ggagtaagtc ctatttccgc 1080

gagtggttgt acaactcttt gtggttccac aaacaccatt tatggatgac ttatgaagcc 1140

gtaattacgg gtttcttccc cttcttctta atagcgacgg tgattcagct cttctatcgt 1200

ggtcgaattt ggaatatctt actctttcta ctcacagttc aattagttgg tctaataaag 1260

tcgtcgtttg caagtgcgtt gcgtggaaac atcgttatgg tctttatgag tttctacagt 1320

gttttataca tgagtagctt gctgccagca aagatgtttg caatcgccac gataaacaag 1380

gctggatggg gtactagtgg tagaaagacc atagttgtta attttattgg tttaatccct 1440

attacggtat ggttcacaat tttactaggg ggagtatgct acactatatg gcgggaaacc 1500

aagaagccgt ttagcgagtc tgagaagatc gttcttgcgg tcggtgctat attgtatgct 1560

tgttattggg tcatgttgct tacaatgtat gtcagtcttg tcatgaagtg cgggcgccgt 1620

aggaaggaac cacagcacga ccttgtttta gcataa 1656

<210> 7

<211> 1254

<212> ДНК

<213> Streptococcus zooepidemicus

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Streptococcus zooepidemicus

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Streptococcus zooepidemicus

<400> 7

atgaggacgt taaagaatct tatcactgtt gtagcgttca gtatattctg ggttttgctg 60

atctatgtaa atgtctatct tttcggtgcg aaggggtctc tatcaatata tggattcttg 120

ctaattgcgt atttgcttgt gaagatgagt ctttcattct tctataaacc attcaaaggt 180

cgagctggtc agtataaagt cgcagcgatt atcccttcat acaacgagga tgcagaatcg 240

ctgttggaaa ccttaaaatc tgttcaacaa caaacctatc cccttgctga aatttatgta 300

gttgatgatg gttccgcaga tgaaaccggt atcaagcgga tcgaggatta tgtcagggat 360

acaggcgact taagttcaaa tgtgattgtg catcgatcag aaaagaatca aggcaagaga 420

cacgcccaag catgggcatt tgaaagatct gatgcagatg tatttctaac agtcgatagt 480

gatacttaca tttatccgga cgcccttgaa gagttattga aaaccttcaa tgatccgaca 540

gtatttgccg caactggcca cttgaacgtt cgtaacaggc agactaatct attgaccaga 600

ctcactgata taagatacga caatgctttt ggcgtcgaac gtgctgctca aagtgtaact 660

ggtaatatac tggtgtgttc cgggccactg tccgtctatc gcagagaagt agtagtcccg 720

aacattgaca ggtatattaa tcagactttt ctgggtatcc ccgtgtcaat tggggacgac 780

cggtgtttaa cgaactacgc tactgatttg ggcaagactg tatatcagtc gacggctaaa 840

tgtattacag acgtcccaga taagatgtcg acttacctta aacagcagaa tagatggaat 900

aagtcattct ttagagaatc tatcatcagc gtgaagaaga tcatgaataa tccattcgtg 960

gcgctttgga ccattttgga ggtttccatg tttatgatgc ttgtctactc tgtcgttgat 1020

ttctttgtag gtaacgttcg agaatttgat tggctcagag ttcttgcttt cttagttatc 1080

atcttcatcg ttgcgctatg caggaatatt cattacatgc taaaacatcc gcttagcttc 1140

ttactcagcc ctttctacgg cgttttgcat ctcttcgttt tgcagccatt gaagctctac 1200

tccttattta ccattcgaaa cgctgattgg ggtacgcgca agaaactatt ataa 1254

<210> 8

<211> 568

<212> БЕЛОК

<213> Вирус хлореллы Paramecium bursaria 1

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<400> 8

Met Gly Lys Asn Ile Ile Ile Met Val Ser Trp Tyr Thr Ile Ile Thr

1 5 10 15

Ser Asn Leu Ile Ala Val Gly Gly Ala Ser Leu Ile Leu Ala Pro Ala

20 25 30

Ile Thr Gly Tyr Val Leu His Trp Asn Ile Ala Leu Ser Thr Ile Trp

35 40 45

Gly Val Ser Ala Tyr Gly Ile Phe Val Phe Gly Phe Phe Leu Ala Gln

50 55 60

Val Leu Phe Ser Glu Leu Asn Arg Lys Arg Leu Arg Lys Trp Ile Ser

65 70 75 80

Leu Arg Pro Lys Gly Trp Asn Asp Val Arg Leu Ala Val Ile Ile Ala

85 90 95

Gly Tyr Arg Glu Asp Pro Tyr Met Phe Gln Lys Cys Leu Glu Ser Val

100 105 110

Arg Asp Ser Asp Tyr Gly Asn Val Ala Arg Leu Ile Cys Val Ile Asp

115 120 125

Gly Asp Glu Asp Asp Asp Met Arg Met Ala Ala Val Tyr Lys Ala Ile

130 135 140

Tyr Asn Asp Asn Ile Lys Lys Pro Glu Phe Val Leu Cys Glu Ser Asp

145 150 155 160

Asp Lys Glu Gly Glu Arg Ile Asp Ser Asp Phe Ser Arg Asp Ile Cys

165 170 175

Val Leu Gln Pro His Arg Gly Lys Arg Glu Cys Leu Tyr Thr Gly Phe

180 185 190

Gln Leu Ala Lys Met Asp Pro Ser Val Asn Ala Val Val Leu Ile Asp

195 200 205

Ser Asp Thr Val Leu Glu Lys Asp Ala Ile Leu Glu Val Val Tyr Pro

210 215 220

Leu Ala Cys Asp Pro Glu Ile Gln Ala Val Ala Gly Glu Cys Lys Ile

225 230 235 240

Trp Asn Thr Asp Thr Leu Leu Ser Leu Leu Val Ala Trp Arg Tyr Tyr

245 250 255

Ser Ala Phe Cys Val Glu Arg Ser Ala Gln Ser Phe Phe Arg Thr Val

260 265 270

Gln Cys Val Gly Gly Pro Leu Gly Ala Tyr Lys Ile Asp Ile Ile Lys

275 280 285

Glu Ile Lys Asp Pro Trp Ile Ser Gln Arg Phe Leu Gly Gln Lys Cys

290 295 300

Thr Tyr Gly Asp Asp Arg Arg Leu Thr Asn Glu Ile Leu Met Arg Gly

305 310 315 320

Lys Lys Val Val Phe Thr Pro Phe Ala Val Gly Trp Ser Asp Ser Pro

325 330 335

Thr Asn Val Phe Arg Tyr Ile Val Gln Gln Thr Arg Trp Ser Lys Ser

340 345 350

Trp Cys Arg Glu Ile Trp Tyr Thr Leu Phe Ala Ala Trp Lys His Gly

355 360 365

Leu Ser Gly Ile Trp Leu Ala Phe Glu Cys Leu Tyr Gln Ile Thr Tyr

370 375 380

Phe Phe Leu Val Ile Tyr Leu Phe Ser Arg Leu Ala Val Glu Ala Asp

385 390 395 400

Pro Arg Ala Gln Thr Ala Thr Val Ile Val Ser Thr Thr Val Ala Leu

405 410 415

Ile Lys Cys Gly Tyr Phe Ser Phe Arg Ala Lys Asp Ile Arg Ala Phe

420 425 430

Tyr Phe Val Leu Tyr Thr Phe Val Tyr Phe Phe Cys Met Ile Pro Ala

435 440 445

Arg Ile Thr Ala Met Met Thr Leu Trp Asp Ile Gly Trp Gly Thr Arg

450 455 460

Gly Gly Asn Glu Lys Pro Ser Val Gly Thr Arg Val Ala Leu Trp Ala

465 470 475 480

Lys Gln Tyr Leu Ile Ala Tyr Met Trp Trp Ala Ala Val Val Gly Ala

485 490 495

Gly Val Tyr Ser Ile Val His Asn Trp Met Phe Asp Trp Asn Ser Leu

500 505 510

Ser Tyr Arg Phe Ala Leu Val Gly Ile Cys Ser Tyr Ile Val Phe Ile

515 520 525

Val Ile Val Leu Val Val Tyr Phe Thr Gly Lys Ile Thr Thr Trp Asn

530 535 540

Phe Thr Lys Leu Gln Lys Glu Leu Ile Glu Asp Arg Val Leu Tyr Asp

545 550 555 560

Ala Thr Thr Asn Ala Gln Ser Val

565

<210> 9

<211> 972

<212> БЕЛОК

<213> Pasteurella multocida

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Pasteurella multocida

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Pasteurella multocida

<400> 9

Met Asn Thr Leu Ser Gln Ala Ile Lys Ala Tyr Asn Ser Asn Asp Tyr

1 5 10 15

Gln Leu Ala Leu Lys Leu Phe Glu Lys Ser Ala Glu Ile Tyr Gly Arg

20 25 30

Lys Ile Val Glu Phe Gln Ile Thr Lys Cys Lys Glu Lys Leu Ser Ala

35 40 45

His Pro Ser Val Asn Ser Ala His Leu Ser Val Asn Lys Glu Glu Lys

50 55 60

Val Asn Val Cys Asp Ser Pro Leu Asp Ile Ala Thr Gln Leu Leu Leu

65 70 75 80

Ser Asn Val Lys Lys Leu Val Leu Ser Asp Ser Glu Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Lys Asn Lys Trp Lys Leu Leu Thr Glu Lys Lys Ser Glu Asn Ala Glu

100 105 110

Val Arg Ala Val Ala Leu Val Pro Lys Asp Phe Pro Lys Asp Leu Val

115 120 125

Leu Ala Pro Leu Pro Asp His Val Asn Asp Phe Thr Trp Tyr Lys Lys

130 135 140

Arg Lys Lys Arg Leu Gly Ile Lys Pro Glu His Gln His Val Gly Leu

145 150 155 160

Ser Ile Ile Val Thr Thr Phe Asn Arg Pro Ala Ile Leu Ser Ile Thr

165 170 175

Leu Ala Cys Leu Val Asn Gln Lys Thr His Tyr Pro Phe Glu Val Ile

180 185 190

Val Thr Asp Asp Gly Ser Gln Glu Asp Leu Ser Pro Ile Ile Arg Gln

195 200 205

Tyr Glu Asn Lys Leu Asp Ile Arg Tyr Val Arg Gln Lys Asp Asn Gly

210 215 220

Phe Gln Ala Ser Ala Ala Arg Asn Met Gly Leu Arg Leu Ala Lys Tyr

225 230 235 240

Asp Phe Ile Gly Leu Leu Asp Cys Asp Met Ala Pro Asn Pro Leu Trp

245 250 255

Val His Ser Tyr Val Ala Glu Leu Leu Glu Asp Asp Asp Leu Thr Ile

260 265 270

Ile Gly Pro Arg Lys Tyr Ile Asp Thr Gln His Ile Asp Pro Lys Asp

275 280 285

Phe Leu Asn Asn Ala Ser Leu Leu Glu Ser Leu Pro Glu Val Lys Thr

290 295 300

Asn Asn Ser Val Ala Ala Lys Gly Glu Gly Thr Val Ser Leu Asp Trp

305 310 315 320

Arg Leu Glu Gln Phe Glu Lys Thr Glu Asn Leu Arg Leu Ser Asp Ser

325 330 335

Pro Phe Arg Phe Phe Ala Ala Gly Asn Val Ala Phe Ala Lys Lys Trp

340 345 350

Leu Asn Lys Ser Gly Phe Phe Asp Glu Glu Phe Asn His Trp Gly Gly

355 360 365

Glu Asp Val Glu Phe Gly Tyr Arg Leu Phe Arg Tyr Gly Ser Phe Phe

370 375 380

Lys Thr Ile Asp Gly Ile Met Ala Tyr His Gln Glu Pro Pro Gly Lys

385 390 395 400

Glu Asn Glu Thr Asp Arg Glu Ala Gly Lys Asn Ile Thr Leu Asp Ile

405 410 415

Met Arg Glu Lys Val Pro Tyr Ile Tyr Arg Lys Leu Leu Pro Ile Glu

420 425 430

Asp Ser His Ile Asn Arg Val Pro Leu Val Ser Ile Tyr Ile Pro Ala

435 440 445

Tyr Asn Cys Ala Asn Tyr Ile Gln Arg Cys Val Asp Ser Ala Leu Asn

450 455 460

Gln Thr Val Val Asp Leu Glu Val Cys Ile Cys Asn Asp Gly Ser Thr

465 470 475 480

Asp Asn Thr Leu Glu Val Ile Asn Lys Leu Tyr Gly Asn Asn Pro Arg

485 490 495

Val Arg Ile Met Ser Lys Pro Asn Gly Gly Ile Ala Ser Ala Ser Asn

500 505 510

Ala Ala Val Ser Phe Ala Lys Gly Tyr Tyr Ile Gly Gln Leu Asp Ser

515 520 525

Asp Asp Tyr Leu Glu Pro Asp Ala Val Glu Leu Cys Leu Lys Glu Phe

530 535 540

Leu Lys Asp Lys Thr Leu Ala Cys Val Tyr Thr Thr Asn Arg Asn Val

545 550 555 560

Asn Pro Asp Gly Ser Leu Ile Ala Asn Gly Tyr Asn Trp Pro Glu Phe

565 570 575

Ser Arg Glu Lys Leu Thr Thr Ala Met Ile Ala His His Phe Arg Met

580 585 590

Phe Thr Ile Arg Ala Trp His Leu Thr Asp Gly Phe Asn Glu Lys Ile

595 600 605

Glu Asn Ala Val Asp Tyr Asp Met Phe Leu Lys Leu Ser Glu Val Gly

610 615 620

Lys Phe Lys His Leu Asn Lys Ile Cys Tyr Asn Arg Val Leu His Gly

625 630 635 640

Asp Asn Thr Ser Ile Lys Lys Leu Gly Ile Gln Lys Lys Asn His Phe

645 650 655

Val Val Val Asn Gln Ser Leu Asn Arg Gln Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn

660 665 670

Tyr Asp Glu Phe Asp Asp Leu Asp Glu Ser Arg Lys Tyr Ile Phe Asn

675 680 685

Lys Thr Ala Glu Tyr Gln Glu Glu Ile Asp Ile Leu Lys Asp Ile Lys

690 695 700

Ile Ile Gln Asn Lys Asp Ala Lys Ile Ala Val Ser Ile Phe Tyr Pro

705 710 715 720

Asn Thr Leu Asn Gly Leu Val Lys Lys Leu Asn Asn Ile Ile Glu Tyr

725 730 735

Asn Lys Asn Ile Phe Val Ile Val Leu His Val Asp Lys Asn His Leu

740 745 750

Thr Pro Asp Ile Lys Lys Glu Ile Leu Ala Phe Tyr His Lys His Gln

755 760 765

Val Asn Ile Leu Leu Asn Asn Asp Ile Ser Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg

770 775 780

Leu Ile Lys Thr Glu Ala His Leu Ser Asn Ile Asn Lys Leu Ser Gln

785 790 795 800

Leu Asn Leu Asn Cys Glu Tyr Ile Ile Phe Asp Asn His Asp Ser Leu

805 810 815

Phe Val Lys Asn Asp Ser Tyr Ala Tyr Met Lys Lys Tyr Asp Val Gly

820 825 830

Met Asn Phe Ser Ala Leu Thr His Asp Trp Ile Glu Lys Ile Asn Ala

835 840 845

His Pro Pro Phe Lys Lys Leu Ile Lys Thr Tyr Phe Asn Asp Asn Asp

850 855 860

Leu Lys Ser Met Asn Val Lys Gly Ala Ser Gln Gly Met Phe Met Thr

865 870 875 880

Tyr Ala Leu Ala His Glu Leu Leu Thr Ile Ile Lys Glu Val Ile Thr

885 890 895

Ser Cys Gln Ser Ile Asp Ser Val Pro Glu Tyr Asn Thr Glu Asp Ile

900 905 910

Trp Phe Gln Phe Ala Leu Leu Ile Leu Glu Lys Lys Thr Gly His Val

915 920 925

Phe Asn Lys Thr Ser Thr Leu Thr Tyr Met Pro Trp Glu Arg Lys Leu

930 935 940

Gln Trp Thr Asn Glu Gln Ile Glu Ser Ala Lys Arg Gly Glu Asn Ile

945 950 955 960

Pro Val Asn Lys Phe Ile Ile Asn Ser Ile Thr Leu

965 970

<210> 10

<211> 551

<212> БЕЛОК

<213> Xenopus laevis

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Xenopus laevis

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Xenopus laevis

<400> 10

Met His Cys Glu Arg Phe Ile Cys Ile Leu Arg Ile Ile Gly Thr Thr

1 5 10 15

Leu Phe Gly Val Ser Leu Leu Leu Gly Ile Ser Ala Ala Tyr Ile Val

20 25 30

Gly Tyr Gln Phe Ile Gln Thr Asp Asn Tyr Tyr Phe Ser Phe Gly Leu

35 40 45

Tyr Gly Ala Ile Leu Ala Leu His Leu Ile Ile Gln Ser Leu Phe Ala

50 55 60

Phe Leu Glu His Arg Lys Met Lys Arg Ser Leu Glu Thr Pro Ile Lys

65 70 75 80

Leu Asn Lys Ser Val Ala Leu Cys Ile Ala Ala Tyr Gln Glu Asp Glu

85 90 95

Asp Tyr Leu Arg Lys Cys Leu Leu Ser Val Lys Arg Leu Thr Tyr Pro

100 105 110

Gly Met Lys Val Ile Met Val Ile Asp Gly Asn Ser Asp Asp Asp Leu

115 120 125

Tyr Met Met Asn Ile Phe Arg Glu Ile Met Gly Asn Asp Ser Cys Ala

130 135 140

Thr Tyr Val Trp Lys Asn Asn Phe His Met Lys Gly Pro Asn Glu Thr

145 150 155 160

Asp Glu Thr His Arg Glu Ser Met Gln His Val Thr Gln Met Val Leu

165 170 175

Ser Asn Arg Asn Val Cys Ile Met Gln Lys Trp Asn Gly Lys Arg Glu

180 185 190

Val Met Tyr Thr Ala Phe Lys Ala Leu Gly Arg Ser Val Asp Tyr Val

195 200 205

Gln Val Cys Asp Ser Asp Thr Val Leu Asp Pro Ala Ser Ser Val Glu

210 215 220

Met Val Lys Val Leu Glu Glu Asp Ile Met Val Gly Gly Val Gly Gly

225 230 235 240

Asp Val Gln Ile Leu Asn Lys Tyr Asp Ser Trp Ile Ser Phe Leu Ser

245 250 255

Ser Val Arg Tyr Trp Met Ala Phe Asn Ile Glu Arg Ala Cys Gln Ser

260 265 270

Tyr Phe Gly Cys Val Gln Cys Ile Ser Gly Pro Leu Gly Met Tyr Arg

275 280 285

Asn Ser Leu Leu His Glu Phe Ile Glu Asp Trp Tyr Asn Gln Glu Phe

290 295 300

Leu Gly Ser Gln Cys Ser Phe Gly Asp Asp Arg His Leu Thr Asn Arg

305 310 315 320

Val Leu Ser Leu Gly Tyr Ala Thr Lys Tyr Thr Ala Arg Ser Lys Cys

325 330 335

Leu Thr Glu Thr Pro Thr Glu Tyr Leu Arg Trp Leu Asn Gln Gln Thr

340 345 350

Arg Trp Ser Lys Ser Tyr Phe Arg Glu Trp Leu Tyr Asn Ser Leu Trp

355 360 365

Phe His Lys His His Leu Trp Met Thr Tyr Glu Ala Val Ile Thr Gly

370 375 380

Phe Phe Pro Phe Phe Leu Ile Ala Thr Val Ile Gln Leu Phe Tyr Arg

385 390 395 400

Gly Arg Ile Trp Asn Ile Leu Leu Phe Leu Leu Thr Val Gln Leu Val

405 410 415

Gly Leu Ile Lys Ser Ser Phe Ala Ser Ala Leu Arg Gly Asn Ile Val

420 425 430

Met Val Phe Met Ser Phe Tyr Ser Val Leu Tyr Met Ser Ser Leu Leu

435 440 445

Pro Ala Lys Met Phe Ala Ile Ala Thr Ile Asn Lys Ala Gly Trp Gly

450 455 460

Thr Ser Gly Arg Lys Thr Ile Val Val Asn Phe Ile Gly Leu Ile Pro

465 470 475 480

Ile Thr Val Trp Phe Thr Ile Leu Leu Gly Gly Val Cys Tyr Thr Ile

485 490 495

Trp Arg Glu Thr Lys Lys Pro Phe Ser Glu Ser Glu Lys Ile Val Leu

500 505 510

Ala Val Gly Ala Ile Leu Tyr Ala Cys Tyr Trp Val Met Leu Leu Thr

515 520 525

Met Tyr Val Ser Leu Val Met Lys Cys Gly Arg Arg Arg Lys Glu Pro

530 535 540

Gln His Asp Leu Val Leu Ala

545 550

<210> 11

<211> 417

<212> БЕЛОК

<213> Streptococcus zooepidemicus

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Streptococcus zooepidemicus

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из Streptococcus zooepidemicus

<400> 11

Met Arg Thr Leu Lys Asn Leu Ile Thr Val Val Ala Phe Ser Ile Phe

1 5 10 15

Trp Val Leu Leu Ile Tyr Val Asn Val Tyr Leu Phe Gly Ala Lys Gly

20 25 30

Ser Leu Ser Ile Tyr Gly Phe Leu Leu Ile Ala Tyr Leu Leu Val Lys

35 40 45

Met Ser Leu Ser Phe Phe Tyr Lys Pro Phe Lys Gly Arg Ala Gly Gln

50 55 60

Tyr Lys Val Ala Ala Ile Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser

65 70 75 80

Leu Leu Glu Thr Leu Lys Ser Val Gln Gln Gln Thr Tyr Pro Leu Ala

85 90 95

Glu Ile Tyr Val Val Asp Asp Gly Ser Ala Asp Glu Thr Gly Ile Lys

100 105 110

Arg Ile Glu Asp Tyr Val Arg Asp Thr Gly Asp Leu Ser Ser Asn Val

115 120 125

Ile Val His Arg Ser Glu Lys Asn Gln Gly Lys Arg His Ala Gln Ala

130 135 140

Trp Ala Phe Glu Arg Ser Asp Ala Asp Val Phe Leu Thr Val Asp Ser

145 150 155 160

Asp Thr Tyr Ile Tyr Pro Asp Ala Leu Glu Glu Leu Leu Lys Thr Phe

165 170 175

Asn Asp Pro Thr Val Phe Ala Ala Thr Gly His Leu Asn Val Arg Asn

180 185 190

Arg Gln Thr Asn Leu Leu Thr Arg Leu Thr Asp Ile Arg Tyr Asp Asn

195 200 205

Ala Phe Gly Val Glu Arg Ala Ala Gln Ser Val Thr Gly Asn Ile Leu

210 215 220

Val Cys Ser Gly Pro Leu Ser Val Tyr Arg Arg Glu Val Val Val Pro

225 230 235 240

Asn Ile Asp Arg Tyr Ile Asn Gln Thr Phe Leu Gly Ile Pro Val Ser

245 250 255

Ile Gly Asp Asp Arg Cys Leu Thr Asn Tyr Ala Thr Asp Leu Gly Lys

260 265 270

Thr Val Tyr Gln Ser Thr Ala Lys Cys Ile Thr Asp Val Pro Asp Lys

275 280 285

Met Ser Thr Tyr Leu Lys Gln Gln Asn Arg Trp Asn Lys Ser Phe Phe

290 295 300

Arg Glu Ser Ile Ile Ser Val Lys Lys Ile Met Asn Asn Pro Phe Val

305 310 315 320

Ala Leu Trp Thr Ile Leu Glu Val Ser Met Phe Met Met Leu Val Tyr

325 330 335

Ser Val Val Asp Phe Phe Val Gly Asn Val Arg Glu Phe Asp Trp Leu

340 345 350

Arg Val Leu Ala Phe Leu Val Ile Ile Phe Ile Val Ala Leu Cys Arg

355 360 365

Asn Ile His Tyr Met Leu Lys His Pro Leu Ser Phe Leu Leu Ser Pro

370 375 380

Phe Tyr Gly Val Leu His Leu Phe Val Leu Gln Pro Leu Lys Leu Tyr

385 390 395 400

Ser Leu Phe Thr Ile Arg Asn Ala Asp Trp Gly Thr Arg Lys Lys Leu

405 410 415

Leu

<210> 12

<211> 1446

<212> ДНК

<213> Arabidopsis thaliana

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB),

происходящая из Arabidopsis thaliana

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB),

происходящая из Arabidopsis thaliana

<400> 12

atggtcaaaa tatgctgtat cggggctgga tatgtcggtg ggcctacaat ggccgttatg 60

gccctaaagt gtccagagat tgaagtcgtg gtagttgata tatcggagcc acgaattaac 120

gcatggaact cagaccgtct accaatttat gagccagggt tagaggatgt cgtcaaacag 180

tgtagaggga agaatttgtt cttctctaca gatgtagaga agcatgtatt tgagtcagat 240

atagtgtttg tttcggtaaa cactcctacg aaaacgcagg gtctgggtgc aggtaaagca 300

gcagatttga catattggga gtccgctgct cgcatgatag ctgatgtgag caaatcgtcg 360

aaaatcgtcg ttgaaaagag tacagtacca gttcgtacag ccgaggctat agaaaagatt 420

ttaacgcaca attcgaaggg tatcgaattc cagatcttat caaatccaga attcttggcc 480

gaagggacgg cgattaaaga cttatataac cctgatagag ttctaatcgg tggcagggac 540

accgctgcgg gacaaaaggc cattaaggcg ttgcgtgacg tgtatgccca ctgggttcct 600

gttgagcaaa taatctgtac taatttatgg agtgccgagc tatcaaagtt ggctgcgaac 660

gcatttctag ctcaaaggat aagttcagta aacgcaatgt cagcgctttg tgaggcaact 720

ggtgctgacg taacccaagt cgctcacgcc gttggaaccg acactagaat tggaccgaag 780

tttcttaacg catccgtagg cttcggcgga tcttgctttc agaaagacat cctgaatctt 840

atttacatct gcgaatgcaa tggtcttcca gaagcagcca attattggaa acaggtagtc 900

aaggtaaatg actaccaaaa gattaggttt gctaatcgag tcgtatcttc tatgttcaac 960

accgtctccg gtaagaaaat tgctattttg ggatttgcgt tcaagaagga caccggcgac 1020

acgcgtgaaa ctcctgccat agatgtgtgt aatcgcctcg tggctgataa agcaaagctg 1080

tcgatctatg atccgcaagt attagaagag cagatccgcc gtgatctgtc catggcccga 1140

ttcgattggg accatccagt cccactccag cagatcaaag ctgaaggtat ctccgaacag 1200

gttaacgttg tgtccgacgc ctacgaggct acgaaggatg ctcatggttt atgtgtttta 1260

accgaatggg acgaattcaa gtcacttgat tttaagaaga tctttgataa tatgcagaaa 1320

cccgctttcg ttttcgacgg aagaaacgtg gtcgacgctg tgaaattgag agaaattgga 1380

ttcatagtat attccatagg taaacctctg gatagttggc tcaaggatat gccggctgtt 1440

gcataa 1446

<210> 13

<211> 1166

<212> ДНК

<213> Вирус хлореллы Paramecium bursaria 1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы

(HASB), происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы

(HASB), происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<400> 13

atgagtagaa ttgctgtcgt tggatgcggt tacgtgggta cggcctgcgc cgtacttttg 60

gcgcagaaga acgaagttat cgttttggat atctcggagg accgggtaca actgattaag 120

aataagaagt cacctataga agataaggaa atcgaagaat tcctggagac gaaagatttg 180

aatctaacag cgacgacgga taaggtgctc gcctatgaga atgctgaatt cgttataata 240

gctacaccga ccgattacga tgtcgtcact agatatttca acactaagtc tgttgaaaat 300

gtgataggcg atgtcattaa gaacactcag acacacccta ctatagtgat caagagtact 360

attccaatcg gtttcgtgga taaagttaga gaacagttcg attatcaaaa tattatcttc 420

tcgccggaat tcttgagaga aggacgagca ttatatgata atctttaccc ctcccgtatc 480

atcgtcggtg atgactcccc aattgcctta aaattcgcga atctcttggt cgagggtagc 540

aaaactccac tagctcccgt attaactatg ggtacgcgag aggccgaagc tgtaaaacta 600

ttttcaaata catatttggc tatgagagta gcatacttca atgagctaga cacatttgca 660

atgtcccatg gtatgaacgc aaaagagatt atcgacggag tcacactaga accaaggata 720

gggcagggtt attcgaatcc ttcatttggg tatggagcct attgtttccc aaaagataca 780

aagcaattgt tggctaattt tgaaggggtt ccacaagata ttattggcgc aatcgtagag 840

tctaacgaaa ctagaaagga ggttattgtt tctgaggtcg agaacagatt tccgaccaca 900

gttggcgtat ataagttggc tgctaaagct ggttcggata atttcaggtc tagtgcgata 960

gtcgatatca tggaaaggtt ggctaataag ggctaccaca tcaaaatatt tgaacctacc 1020

gttgaacaat ttgagaattt tgaggtagat aataatctca caacttttgc aaccgagtct 1080

gatgtaataa ttgcgaacag agttccagtc gaacatcgca ttctgtttgg gaagaagtta 1140

ataacacggg atgtctatgg ggataa 1166

<210> 14

<211> 1170

<212> ДНК

<213> Вирус хлореллы Paramecium bursaria 1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы

(HASB), происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы

(HASB), происходящая из вируса хлореллы PBCV-1

<400> 14

atgtcacgaa tcgcagtagt tggctgtggg tacgtgggaa ccgcatgcgc tgtactgctg 60

gcgcaaaaga atgaggtaat cgttcttgat attagtgagg atagggtcca actaatcaag 120

aacaagaaat ccccgatcga agataaggag attgaagaat tcttggaaac aaaagaccta 180

aacttaactg caacaactga caaagtttta gcctacgaaa acgctgagtt tgtgattata 240

gcgacaccca cagattatga cgtagttacc agatacttta acacgaagtc cgtagagaac 300

gtcattggag atgttataaa gaatactcag actcatccta cgatagtaat aaagtcaacc 360

attcccatag gtttcgtaga taaggttagg gagcaattcg attaccagaa cattatattt 420

tcgccagaat ttctgagaga gggtcgcgcc ctgtatgata atctatatcc atcacggatt 480

atagtgggcg atgactctcc gattgcactt aagtttgcta atcttttagt tgagggctcc 540

aaaactccgc tcgccccagt acttacgatg ggtacacgtg aggctgaagc tgtcaagctg 600

ttttcaaaca cataccttgc tatgcgagtc gcatacttta acgaactaga tacctttgct 660

atgtcgcacg gtatgaatgc taaagaaatc atagatggcg taacgttgga gcctcggata 720

ggtcaaggat attccaatcc atcttttggc tacggtgcgt attgtttccc aaaggacacg 780

aagcaattat tagctaactt tgagggtgtt ccgcaagata taattggggc gatagtagaa 840

agcaatgaaa cacggaagga ggtaatcgtg agtgaagtgg aaaaccgatt ccccactacg 900

gtcggcgttt acaaattagc cgccaaggct ggttccgaca atttccgatc cagcgcaata 960

gtagatatta tggaaagatt agctaataag ggataccaca ttaaaatctt tgaacctact 1020

gtcgaacagt tcgagaactt cgaggttgat aataacttga cgactttcgc aacggagagc 1080

gatgtaatta ttgcaaaccg cgtacctgtg gaacatcgaa ttttgttcgg aaagaagctg 1140

attacacgcg atgtatatgg cgataactaa 1170

<210> 15

<211> 1199

<212> ДНК

<213> streptococcus zooepidemicus

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы

(HASB), происходящая из Streptococcus zooepidemicus

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы

(HASB), происходящая из Streptococcus zooepidemicus

<400> 15

atgaagatat cggtagcggg ttcggggtac gtggggttat ccttgtcaat cttgcttgcc 60

caacataacg atgtgactgt tgtagatata atcgacgaaa aggtacggct aattaaccag 120

ggcatatctc cgattaagga tgcggacatt gaggaatatc tgaagaatgc accgttgaat 180

cttacggcta cactagacgg agcttcggct tatagtaatg ctgatctgat tataatcgca 240

acgccaacta attacgattc agaacgcaat tatttcgaca ccagacacgt tgaagaagta 300

attgagcaag tattggattt aaatgcctcc gctactataa tcatcaagag taccataccc 360

ttgggtttta ttaaacacgt aagagagaaa taccaaacag acagaatcat cttttctcca 420

gagttcttaa gagagtcaaa ggcattgtac gataacttat acccctctcg tataatagtc 480

agttatgaga aggatgactc tccaagagtt atacaagcag ctaaggcgtt cgcgggttta 540

ttaaaagagg gggcaaagag caaggatacc ccagttctgt ttatgggctc tcaagaagct 600

gaagctgtca agctgtttgc taatactttt ctcgccatga gggtcagtta cttcaacgag 660

cttgacactt atagcgaatc aaaaggacta gacgcccaaa gagttataga aggcgtctgc 720

catgatcaaa ggataggtaa tcattacaat aatccatcct tcggatatgg cggttattgt 780

ttacccaaag actcaaagca acttttggct aattatagag gcatacctca gtctctaatg 840

tctgccatcg ttgaatcgaa caagatccgt aagtcgtatt tagctgaaca aatattagat 900

agggcttctt cacaaaagca ggctggtgta cctttaacca taggatttta ccgtttgatt 960

atgaagtcca actccgataa ctttagagaa tcagccatta aagatattat tgacatcatt 1020

aatgactacg gtgtcaatat tgtcatttat gaacctatgt tgggagaaga cattggttat 1080

agagtcgtta aagatttgga acagtttaag aacgaaagta caattattgt tagtaacagg 1140

tttgaagatg atttaggtga tgttattgat aaagtttata cacgtgacgt ctttggtag 1199

<210> 16

<211> 481

<212> БЕЛОК

<213> Arabidopsis thaliana

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB),

происходящая из Arabidopsis thaliana

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB),

происходящая из Arabidopsis thaliana

<400> 16

Met Val Lys Ile Cys Cys Ile Gly Ala Gly Tyr Val Gly Gly Pro Thr

1 5 10 15

Met Ala Val Met Ala Leu Lys Cys Pro Glu Ile Glu Val Val Val Val

20 25 30

Asp Ile Ser Glu Pro Arg Ile Asn Ala Trp Asn Ser Asp Arg Leu Pro

35 40 45

Ile Tyr Glu Pro Gly Leu Glu Asp Val Val Lys Gln Cys Arg Gly Lys

50 55 60

Asn Leu Phe Phe Ser Thr Asp Val Glu Lys His Val Phe Glu Ser Asp

65 70 75 80

Ile Val Phe Val Ser Val Asn Thr Pro Thr Lys Thr Gln Gly Leu Gly

85 90 95

Ala Gly Lys Ala Ala Asp Leu Thr Tyr Trp Glu Ser Ala Ala Arg Met

100 105 110

Ile Ala Asp Val Ser Lys Ser Ser Lys Ile Val Val Glu Lys Ser Thr

115 120 125

Val Pro Val Arg Thr Ala Glu Ala Ile Glu Lys Ile Leu Thr His Asn

130 135 140

Ser Lys Gly Ile Glu Phe Gln Ile Leu Ser Asn Pro Glu Phe Leu Ala

145 150 155 160

Glu Gly Thr Ala Ile Lys Asp Leu Tyr Asn Pro Asp Arg Val Leu Ile

165 170 175

Gly Gly Arg Asp Thr Ala Ala Gly Gln Lys Ala Ile Lys Ala Leu Arg

180 185 190

Asp Val Tyr Ala His Trp Val Pro Val Glu Gln Ile Ile Cys Thr Asn

195 200 205

Leu Trp Ser Ala Glu Leu Ser Lys Leu Ala Ala Asn Ala Phe Leu Ala

210 215 220

Gln Arg Ile Ser Ser Val Asn Ala Met Ser Ala Leu Cys Glu Ala Thr

225 230 235 240

Gly Ala Asp Val Thr Gln Val Ala His Ala Val Gly Thr Asp Thr Arg

245 250 255

Ile Gly Pro Lys Phe Leu Asn Ala Ser Val Gly Phe Gly Gly Ser Cys

260 265 270

Phe Gln Lys Asp Ile Leu Asn Leu Ile Tyr Ile Cys Glu Cys Asn Gly

275 280 285

Leu Pro Glu Ala Ala Asn Tyr Trp Lys Gln Val Val Lys Val Asn Asp

290 295 300

Tyr Gln Lys Ile Arg Phe Ala Asn Arg Val Val Ser Ser Met Phe Asn

305 310 315 320

Thr Val Ser Gly Lys Lys Ile Ala Ile Leu Gly Phe Ala Phe Lys Lys

325 330 335

Asp Thr Gly Asp Thr Arg Glu Thr Pro Ala Ile Asp Val Cys Asn Arg

340 345 350

Leu Val Ala Asp Lys Ala Lys Leu Ser Ile Tyr Asp Pro Gln Val Leu

355 360 365

Glu Glu Gln Ile Arg Arg Asp Leu Ser Met Ala Arg Phe Asp Trp Asp

370 375 380

His Pro Val Pro Leu Gln Gln Ile Lys Ala Glu Gly Ile Ser Glu Gln

385 390 395 400

Val Asn Val Val Ser Asp Ala Tyr Glu Ala Thr Lys Asp Ala His Gly

405 410 415

Leu Cys Val Leu Thr Glu Trp Asp Glu Phe Lys Ser Leu Asp Phe Lys

420 425 430

Lys Ile Phe Asp Asn Met Gln Lys Pro Ala Phe Val Phe Asp Gly Arg

435 440 445

Asn Val Val Asp Ala Val Lys Leu Arg Glu Ile Gly Phe Ile Val Tyr

450 455 460

Ser Ile Gly Lys Pro Leu Asp Ser Trp Leu Lys Asp Met Pro Ala Val

465 470 475 480

Ala

<210> 17

<211> 389

<212> БЕЛОК

<213> Вирус хлореллы Paramecium bursaria 1

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB),

происходящая из вируса хлореллы PBCV1

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB),

происходящая из вируса хлореллы PBCV1

<400> 17

Met Ser Arg Ile Ala Val Val Gly Cys Gly Tyr Val Gly Thr Ala Cys

1 5 10 15

Ala Val Leu Leu Ala Gln Lys Asn Glu Val Ile Val Leu Asp Ile Ser

20 25 30

Glu Asp Arg Val Gln Leu Ile Lys Asn Lys Lys Ser Pro Ile Glu Asp

35 40 45

Lys Glu Ile Glu Glu Phe Leu Glu Thr Lys Asp Leu Asn Leu Thr Ala

50 55 60

Thr Thr Asp Lys Val Leu Ala Tyr Glu Asn Ala Glu Phe Val Ile Ile

65 70 75 80

Ala Thr Pro Thr Asp Tyr Asp Val Val Thr Arg Tyr Phe Asn Thr Lys

85 90 95

Ser Val Glu Asn Val Ile Gly Asp Val Ile Lys Asn Thr Gln Thr His

100 105 110

Pro Thr Ile Val Ile Lys Ser Thr Ile Pro Ile Gly Phe Val Asp Lys

115 120 125

Val Arg Glu Gln Phe Asp Tyr Gln Asn Ile Ile Phe Ser Pro Glu Phe

130 135 140

Leu Arg Glu Gly Arg Ala Leu Tyr Asp Asn Leu Tyr Pro Ser Arg Ile

145 150 155 160

Ile Val Gly Asp Asp Ser Pro Ile Ala Leu Lys Phe Ala Asn Leu Leu

165 170 175

Val Glu Gly Ser Lys Thr Pro Leu Ala Pro Val Leu Thr Met Gly Thr

180 185 190

Arg Glu Ala Glu Ala Val Lys Leu Phe Ser Asn Thr Tyr Leu Ala Met

195 200 205

Arg Val Ala Tyr Phe Asn Glu Leu Asp Thr Phe Ala Met Ser His Gly

210 215 220

Met Asn Ala Lys Glu Ile Ile Asp Gly Val Thr Leu Glu Pro Arg Ile

225 230 235 240

Gly Gln Gly Tyr Ser Asn Pro Ser Phe Gly Tyr Gly Ala Tyr Cys Phe

245 250 255

Pro Lys Asp Thr Lys Gln Leu Leu Ala Asn Phe Glu Gly Val Pro Gln

260 265 270

Asp Ile Ile Gly Ala Ile Val Glu Ser Asn Glu Thr Arg Lys Glu Val

275 280 285

Ile Val Ser Glu Val Glu Asn Arg Phe Pro Thr Thr Val Gly Val Tyr

290 295 300

Lys Leu Ala Ala Lys Ala Gly Ser Asp Asn Phe Arg Ser Ser Ala Ile

305 310 315 320

Val Asp Ile Met Glu Arg Leu Ala Asn Lys Gly Tyr His Ile Lys Ile

325 330 335

Phe Glu Pro Thr Val Glu Gln Phe Glu Asn Phe Glu Val Asp Asn Asn

340 345 350

Leu Thr Thr Phe Ala Thr Glu Ser Asp Val Ile Ile Ala Asn Arg Val

355 360 365

Pro Val Glu His Arg Ile Leu Phe Gly Lys Lys Leu Ile Thr Arg Asp

370 375 380

Val Tyr Gly Asp Asn

385

<210> 18

<211> 401

<212> БЕЛОК

<213> Streptococcus zooepidemicus

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB),

происходящая из Streptococcus zooepidemicus

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UDP-глюкозодегидрогеназы (HASB),

происходящая из Streptococcus zooepidemicus

<400> 18

Met Lys Ile Ser Val Ala Gly Ser Gly Tyr Val Gly Leu Ser Leu Ser

1 5 10 15

Ile Leu Leu Ala Gln His Asn Asp Val Thr Val Val Asp Ile Ile Asp

20 25 30

Glu Lys Val Arg Leu Ile Asn Gln Gly Ile Ser Pro Ile Lys Asp Ala

35 40 45

Asp Ile Glu Glu Tyr Leu Lys Asn Ala Pro Leu Asn Leu Thr Ala Thr

50 55 60

Leu Asp Gly Ala Ser Ala Tyr Ser Asn Ala Asp Leu Ile Ile Ile Ala

65 70 75 80

Thr Pro Thr Asn Tyr Asp Ser Glu Arg Asn Tyr Phe Asp Thr Arg His

85 90 95

Val Glu Glu Val Ile Glu Gln Val Leu Asp Leu Asn Ala Ser Ala Thr

100 105 110

Ile Ile Ile Lys Ser Thr Ile Pro Leu Gly Phe Ile Lys His Val Arg

115 120 125

Glu Lys Tyr Gln Thr Asp Arg Ile Ile Phe Ser Pro Glu Phe Leu Arg

130 135 140

Glu Ser Lys Ala Leu Tyr Asp Asn Leu Tyr Pro Ser Arg Ile Ile Val

145 150 155 160

Ser Tyr Glu Lys Asp Asp Ser Pro Arg Val Ile Gln Ala Ala Lys Ala

165 170 175

Phe Ala Gly Leu Leu Lys Glu Gly Ala Lys Ser Lys Asp Thr Pro Val

180 185 190

Leu Phe Met Gly Ser Gln Glu Ala Glu Ala Val Lys Leu Phe Ala Asn

195 200 205

Thr Phe Leu Ala Met Arg Val Ser Tyr Phe Asn Glu Leu Asp Thr Tyr

210 215 220

Ser Glu Ser Lys Gly Leu Asp Ala Gln Arg Val Ile Glu Gly Val Cys

225 230 235 240

His Asp Gln Arg Ile Gly Asn His Tyr Asn Asn Pro Ser Phe Gly Tyr

245 250 255

Gly Gly Tyr Cys Leu Pro Lys Asp Ser Lys Gln Leu Leu Ala Asn Tyr

260 265 270

Arg Gly Ile Pro Gln Ser Leu Met Ser Ala Ile Val Glu Ser Asn Lys

275 280 285

Ile Arg Lys Ser Tyr Leu Ala Glu Gln Ile Leu Asp Arg Ala Ser Ser

290 295 300

Gln Lys Gln Ala Gly Val Pro Leu Thr Ile Gly Phe Tyr Arg Leu Ile

305 310 315 320

Met Lys Ser Asn Ser Asp Asn Phe Arg Glu Ser Ala Ile Lys Asp Ile

325 330 335

Ile Asp Ile Ile Asn Asp Tyr Gly Val Asn Ile Val Ile Tyr Glu Pro

340 345 350

Met Leu Gly Glu Asp Ile Gly Tyr Arg Val Val Lys Asp Leu Glu Gln

355 360 365

Phe Lys Asn Glu Ser Thr Ile Ile Val Ser Asn Arg Phe Glu Asp Asp

370 375 380

Leu Gly Asp Val Ile Asp Lys Val Tyr Thr Arg Asp Val Phe Gly Arg

385 390 395 400

Asp

<210> 19

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Bothrops atrox

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Bothrops atrox с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Bothrops atrox с N-концевым сигналом секреции

<400> 19

atgcaattta gcacagtcgc atcagtagcc ttcgttgcct tggccaactt cgtggcagca 60

ccgatgtatc cgaacgaacc gttcttagtc ttttggaacg cgcctacaac tcagtgtaga 120

cttcgatata aggttgacct tgatctgaag acattccata tcgtgacaaa tgctaatgac 180

tcgctgtcag gatcggctgt cacgattttc tatcccacgc acttaggggt ttacccacat 240

attgatgaca gggggcactt cttcaatggc atcatacccc aaaatgaatc cctggtaaag 300

catttaaaca aatctaaatc agatattaat cgaatgattc ccttaagaac attccacggg 360

ctgggagtca tagactggga aaactggcgg ccacagtggg ataggaattg gggaagtaag 420

aacgtttata ggaatagatc aatccaattc gcgcgtgatc tccacccaga gcttagtgag 480

gacaagatta aacgcttggc aaaacaggaa ttcgagaaag ctgcaaagag ttttatgagg 540

gatacactat tattagccga ggagatgcga ccagacggct actggggata ctatctgtac 600

cccgattgtc acaattacaa ttataagact aagccagatc agtacacagg agagtgccct 660

gacatcgaga tgtcacgtaa caatcaactc ttgtggcttt ggcgggatag cactgccctt 720

ttccccaata tctacttaga gactatacta agaagctctg acaatgccct gaagtttgtg 780

caccataggc tcaaggaggc aatgaggata gcctcaatgg ctcgaaatga ctacgcgttg 840

cctttctttg tttatgctcg accattctat gcctatacct tcgaaccatt gactcaggaa 900

gaccttgtga ctacggtcgg agagaccgcg gacatgggcg ccgctgggat cgtattttgg 960

gggagtatgc agtacgcaag cacggttgaa tcttgcggca aagtcaagga ctacatgaat 1020

ggcccactgg ggcgttacat tgtgaatgtt acaactgccg ccaaaatttg ctcacgattc 1080

ttgtgcaaac gtcatggtag gtgtgtaaga aagcactcag actccaatgc attccttcac 1140

ctatttcccg attcgtttcg cataatggtg cacgggaatg caaccgagaa gaaagttata 1200

gtaaagggga agctggaatt aaagaatctt atattcttac gtaataactt tatgtgccag 1260

tgttatcaag gctggaaagg tctatattgc gagaagcatt cgataaagga aattcggaaa 1320

atctaa 1326

<210> 20

<211> 1537

<212> ДНК

<213> Bothrops atrox

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Bothrops atrox с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Bothrops atrox с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<400> 20

atgcaattta gcacagtcgc atcagtagcc ttcgttgcct tggccaactt cgtggcagca 60

ccgatgtatc cgaacgaacc gttcttagtc ttttggaacg cgcctacaac tcagtgtaga 120

cttcgatata aggttgacct tgatctgaag acattccata tcgtgacaaa tgctaatgac 180

tcgctgtcag gatcggctgt cacgattttc tatcccacgc acttaggggt ttacccacat 240

attgatgaca gggggcactt cttcaatggc atcatacccc aaaatgaatc cctggtaaag 300

catttaaaca aatctaaatc agatattaat cgaatgattc ccttaagaac attccacggg 360

ctgggagtca tagactggga aaactggcgg ccacagtggg ataggaattg gggaagtaag 420

aacgtttata ggaatagatc aatccaattc gcgcgtgatc tccacccaga gcttagtgag 480

gacaagatta aacgcttggc aaaacaggaa ttcgagaaag ctgcaaagag ttttatgagg 540

gatacactat tattagccga ggagatgcga ccagacggct actggggata ctatctgtac 600

cccgattgtc acaattacaa ttataagact aagccagatc agtacacagg agagtgccct 660

gacatcgaga tgtcacgtaa caatcaactc ttgtggcttt ggcgggatag cactgccctt 720

ttccccaata tctacttaga gactatacta agaagctctg acaatgccct gaagtttgtg 780

caccataggc tcaaggaggc aatgaggata gcctcaatgg ctcgaaatga ctacgcgttg 840

cctttctttg tttatgctcg accattctat gcctatacct tcgaaccatt gactcaggaa 900

gaccttgtga ctacggtcgg agagaccgcg gacatgggcg ccgctgggat cgtattttgg 960

gggagtatgc agtacgcaag cacggttgaa tcttgcggca aagtcaagga ctacatgaat 1020

ggcccactgg ggcgttacat tgtgaatgtt acaactgccg ccaaaatttg ctcacgattc 1080

ttgtgcaaac gtcatggtag gtgtgtaaga aagcactcag actccaatgc attccttcac 1140

ctatttcccg attcgtttcg cataatggtg cacgggaatg caaccgagaa gaaagttata 1200

gtaaagggga agctggaatt aaagaatctt atattcttac gtaataactt tatgtgccag 1260

tgttatcaag gctggaaagg tctatattgc gagaagcatt cgataaagga aattcggaaa 1320

atcggatccg ccatttctca aatcactgac ggtcaaatcc aagctactac cactgctacc 1380

accgaagcta ccaccactgc tgccccatct tccaccgttg aaactgtttc tccatccagc 1440

accgaaacta tctctcaaca aactgaaaat ggtgctgcta aggccgctgt cggtatgggt 1500

gccggtgctc tagctgctgc tgctatgttg ttataaa 1537

<210> 21

<211> 1197

<212> ДНК

<213> Cupiennius salei

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Cupiennius salei с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Cupiennius salei с N-концевым сигналом секреции

<400> 21

atgcaattca gcactgttgc atcagttgca tttgtcgccc tggcgaattt tgtagccgcg 60

ttcaagattt actggaacgt cccaactttt cagtgcacgc ataactacaa aatcgattat 120

gtcaaattgt tgtccactta cgggatacag gtcaatgatg gcggtaagtt tcaaggaaac 180

caagtgacta tcttttatga aacccagttg ggtttgtatc cacgaatcct aaaatctggt 240

aaaatggaaa acggcggaat ccctcaacgc ggtaactttg agaaacacct agaaaaggca 300

agcacggacc tccagaaagt gatcccttgg aaagagttta gcggattagg tgtgatagat 360

tgggaggctt ggagacccac atgggaattt aactgggaac cgttgaggat atatcaaacc 420

gaatcaatta agagagctaa agaactacac cctaccgcaa acgattccgc agtaaaagaa 480

attgcagagc ggcaatggga agattcagcc aagttataca tgttagaaac actgcggctg 540

gcaaagaaac ttcgacctca agcgccttgg tgttactact tatttcctga ttgctataat 600

tacgtcggaa agaaaccaaa agatttccaa tgtagtgcct cgatacgtaa aggtaacgat 660

aagctaagct ggttgtggaa agattctacg gcattgtgtc catcgatata cgtatatgaa 720

tcacaattag acaggtattc ttttgaacaa aggacatggc gcgacaatga gaaacttcgg 780

gaagcgttgc gtgtagccac gagaacctct aaaatatacc catacgttaa ctatttcgat 840

aaggagctta taccggagca agaagtatgg agaatgcttg cgcaggcagc tgctgtcggt 900

ggcagtggtg cggtaatttg gggctcatct gctgcagttg catctgaaga gttatgtaaa 960

tctttaaaac agtatattat tgaaacgctt gggccggcgg cagagaaggt ggcttggcgt 1020

agtgacttat gcagcaaaga aatttgtaat aatcagggtc gctgcacatt cccggacgat 1080

gattatgcaa acgcatggaa attatttaca gatgatactg ttaagtttta tgctggtaat 1140

attacatgta ggtgctccga gaattattct ggtcgtttct gcgaaaagaa gaattaa 1197

<210> 22

<211> 1407

<212> ДНК

<213> Cupiennius salei

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Cupiennius salei с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Cupiennius salei с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<400> 22

atgcaattca gcactgttgc atcagttgca tttgtcgccc tggcgaattt tgtagccgcg 60

ttcaagattt actggaacgt cccaactttt cagtgcacgc ataactacaa aatcgattat 120

gtcaaattgt tgtccactta cgggatacag gtcaatgatg gcggtaagtt tcaaggaaac 180

caagtgacta tcttttatga aacccagttg ggtttgtatc cacgaatcct aaaatctggt 240

aaaatggaaa acggcggaat ccctcaacgc ggtaactttg agaaacacct agaaaaggca 300

agcacggacc tccagaaagt gatcccttgg aaagagttta gcggattagg tgtgatagat 360

tgggaggctt ggagacccac atgggaattt aactgggaac cgttgaggat atatcaaacc 420

gaatcaatta agagagctaa agaactacac cctaccgcaa acgattccgc agtaaaagaa 480

attgcagagc ggcaatggga agattcagcc aagttataca tgttagaaac actgcggctg 540

gcaaagaaac ttcgacctca agcgccttgg tgttactact tatttcctga ttgctataat 600

tacgtcggaa agaaaccaaa agatttccaa tgtagtgcct cgatacgtaa aggtaacgat 660

aagctaagct ggttgtggaa agattctacg gcattgtgtc catcgatata cgtatatgaa 720

tcacaattag acaggtattc ttttgaacaa aggacatggc gcgacaatga gaaacttcgg 780

gaagcgttgc gtgtagccac gagaacctct aaaatatacc catacgttaa ctatttcgat 840

aaggagctta taccggagca agaagtatgg agaatgcttg cgcaggcagc tgctgtcggt 900

ggcagtggtg cggtaatttg gggctcatct gctgcagttg catctgaaga gttatgtaaa 960

tctttaaaac agtatattat tgaaacgctt gggccggcgg cagagaaggt ggcttggcgt 1020

agtgacttat gcagcaaaga aatttgtaat aatcagggtc gctgcacatt cccggacgat 1080

gattatgcaa acgcatggaa attatttaca gatgatactg ttaagtttta tgctggtaat 1140

attacatgta ggtgctccga gaattattct ggtcgtttct gcgaaaagaa gaatggatcc 1200

gccatttctc aaatcactga cggtcaaatc caagctacta ccactgctac caccgaagct 1260

accaccactg ctgccccatc ttccaccgtt gaaactgttt ctccatccag caccgaaact 1320

atctctcaac aaactgaaaa tggtgctgct aaggccgctg tcggtatggg tgccggtgct 1380

ctagctgctg ctgctatgtt gttataa 1407

<210> 23

<211> 1530

<212> ДНК

<213> Hirudo nipponia

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Hirudo Nipponia с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Hirudo Nipponia с N-концевым сигналом секреции

<400> 23

atgcaattct ctactgtcgc ttccgttgct ttcgtcgctt tggctaactt tgttgccgct 60

atgaaggaga tagcagttac catcgatgat aagaatgtta tagcgtctgt cagtgaaagc 120

ttccatggtg tggctttcga cgcaagccta ttctcaccta aagggctatg gtcgtttgtt 180

gacattactt cacccaagtt attcaagctt ctggagggac tctcccctgg ttatttccgt 240

gtcggcggca catttgcgaa ctggttattc ttcgacctcg atgaaaacaa caagtggaag 300

gattactggg cttttaagga caagactcca gagaccgcca cgattacccg acggtggctc 360

ttcaggaagc aaaacaacct caagaaggaa acctttgatg atttggtaaa gcttacaaag 420

gggtccaaga tgcggctgct atttgatcta aacgcagagg tccgtacagg atatgagata 480

ggcaagaaga tgacatcaac ttgggactca agcgaggcag aaaagttgtt caaatattgc 540

gttagcaagg gatatggaga taatatcgat tgggagttag gcaacgaacc tgatcacacg 600

tcagcacaca atttgacaga gaagcaagta ggtgaagatt ttaaggccct acacaaggtg 660

ttggaaaagt atccaacact taataaaggt agcttggttg gtccagacgt tgggtggatg 720

ggagtgtcgt acgtcaaggg tctggctgac ggggctggag atcatgtgac cgcttttact 780

ctacatcagt attatttcga tggaaatacg agtgatgtta gtacctactt ggatgcgacg 840

tactttaaga agttgcaaca gttattcgat aaggtaaaag acgtactcaa gaattctcca 900

cataaggaca aacccttgtg gctaggggaa acctcttccg gctacaacag tgggactaaa 960

gatgtatccg atagatacgt gtcggggttc ttgacgctgg acaagttggg gctttcggcg 1020

gcaaataacg tcaaggtggt catcagacaa acgatttata atggttacta tggtttgctt 1080

gacaagaata ctttggagcc caatccggac tactggctga tgcacgtcca caattcctta 1140

gttggtaata ccgttttcaa ggtcgatgtc agcgatccca caaacaaagc ccgtgtttac 1200

gctcagtgta cgaagaccaa tagtaaacat acccagtcac gttattataa ggggtcccta 1260

accattttcg cgttgaatgt aggtgatgaa gatgttacac tcaagattga tcaatacagt 1320

ggtaagaaaa tatactcata tattctgacg cctgaaggcg gccagttaac ctctcaaaag 1380

gtactgctta acggtaaaga attgaagtta gtgtcagatc aacttccaga acttaacgcg 1440

gacgaaagta aaacatcctt cacattgtct cccaaaactt ttggattctt tgtggtctcg 1500

gatgccaacg ttgaagcttg caagaaataa 1530

<210> 24

<211> 1740

<212> ДНК

<213> Hirudo nipponia

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Hirudo Nipponia с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Hirudo Nipponia с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<400> 24

atgcaattct ctactgtcgc ttccgttgct ttcgtcgctt tggctaactt tgttgccgct 60

atgaaggaga tagcagttac catcgatgat aagaatgtta tagcgtctgt cagtgaaagc 120

ttccatggtg tggctttcga cgcaagccta ttctcaccta aagggctatg gtcgtttgtt 180

gacattactt cacccaagtt attcaagctt ctggagggac tctcccctgg ttatttccgt 240

gtcggcggca catttgcgaa ctggttattc ttcgacctcg atgaaaacaa caagtggaag 300

gattactggg cttttaagga caagactcca gagaccgcca cgattacccg acggtggctc 360

ttcaggaagc aaaacaacct caagaaggaa acctttgatg atttggtaaa gcttacaaag 420

gggtccaaga tgcggctgct atttgatcta aacgcagagg tccgtacagg atatgagata 480

ggcaagaaga tgacatcaac ttgggactca agcgaggcag aaaagttgtt caaatattgc 540

gttagcaagg gatatggaga taatatcgat tgggagttag gcaacgaacc tgatcacacg 600

tcagcacaca atttgacaga gaagcaagta ggtgaagatt ttaaggccct acacaaggtg 660

ttggaaaagt atccaacact taataaaggt agcttggttg gtccagacgt tgggtggatg 720

ggagtgtcgt acgtcaaggg tctggctgac ggggctggag atcatgtgac cgcttttact 780

ctacatcagt attatttcga tggaaatacg agtgatgtta gtacctactt ggatgcgacg 840

tactttaaga agttgcaaca gttattcgat aaggtaaaag acgtactcaa gaattctcca 900

cataaggaca aacccttgtg gctaggggaa acctcttccg gctacaacag tgggactaaa 960

gatgtatccg atagatacgt gtcggggttc ttgacgctgg acaagttggg gctttcggcg 1020

gcaaataacg tcaaggtggt catcagacaa acgatttata atggttacta tggtttgctt 1080

gacaagaata ctttggagcc caatccggac tactggctga tgcacgtcca caattcctta 1140

gttggtaata ccgttttcaa ggtcgatgtc agcgatccca caaacaaagc ccgtgtttac 1200

gctcagtgta cgaagaccaa tagtaaacat acccagtcac gttattataa ggggtcccta 1260

accattttcg cgttgaatgt aggtgatgaa gatgttacac tcaagattga tcaatacagt 1320

ggtaagaaaa tatactcata tattctgacg cctgaaggcg gccagttaac ctctcaaaag 1380

gtactgctta acggtaaaga attgaagtta gtgtcagatc aacttccaga acttaacgcg 1440

gacgaaagta aaacatcctt cacattgtct cccaaaactt ttggattctt tgtggtctcg 1500

gatgccaacg ttgaagcttg caagaaagga tccgccattt ctcaaatcac tgacggtcaa 1560

atccaagcta ctaccactgc taccaccgaa gctaccacca ctgctgcccc atcttccacc 1620

gttgaaactg tttctccatc cagcaccgaa actatctctc aacaaactga aaatggtgct 1680

gctaaggccg ctgtcggtat gggtgccggt gctctagctg ctgctgctat gttgttataa 1740

<210> 25

<211> 1206

<212> ДНК

<213> Loxosceles intermedia

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Loxosceles intermedia с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Loxosceles intermedia с N-концевым сигналом секреции

<400> 25

atgcagtttt caaccgttgc gagcgtcgct tttgtggctc ttgctaattt cgttgccgcc 60

ttcgatgtct tctggaatgt tccgtcgcag caatgcaaga aatatggtat gaaattcgtt 120

ccgctcttag agcaatactc tatcctagtc aacaaagaag acaatttcaa gggcgacaaa 180

ataacgatct tttatgagtc acagctcggg ctttacccac atattggtgc aaacgacgag 240

tcgtttaatg gcgggatacc acaattaggt gacctgaaag cacacttaga aaagtcagcg 300

gttgatatac gacgtgatat tttggataag tcggcgactg gtctaagaat tatagactgg 360

gaagcatgga gaccaatatg ggaattcaac tggtctagcc tacgaaagta ccaagataaa 420

atgaagaaag tcgtccgcca gtttaacccg actgctcatg aatccacagt ggccaaacta 480

gcacataatg agtgggaaaa tagtagtaag tcttggatgc tttctacatt gcagttgggt 540

aagcaacttc gtccaaactc tgtatggtgc tattatttat ttcccgactg ttataactat 600

gatggcaact cagtccaaga atttcagtgt tctgaagcta tccgtaaggg gaacgatagg 660

ttgaaatggt tgtgggaaga atcgacagct gtatgcccat ctatctacat aaaagaaggc 720

caactgacca attatacctt gcaaaagaga atctggttta ccaatgggag attacaggaa 780

gccttgagag tagctcaacc taaagcgcgt atttatccat acataaatta ctccatcaaa 840

cccggaatga tggtgcctga agttgagttt tggcggttaa tcgctcagat agcctcgctg 900

ggtatggatg gagcagtgat ttggggatca agtgcgagtg taggcagtaa gaatcattgt 960

gcgcaattaa tgaagtacat tgcagacgta ttgggtcctg caactttgcg cataaaagaa 1020

aatgtagcac ggtgcagtaa acaggcgtgc tctggtaggg gtagatgtac ctggcctaaa 1080

gatacctctg ttattgcttg gaagttcctc gttgaaaagg aagactatga cttttatctg 1140

ggtgatatag agtgtaaatg tgttgaaggc tacgaaggta ggtactgtga acaaaagact 1200

aagtaa 1206

<210> 26

<211> 1416

<212> ДНК

<213> Loxosceles intermedia

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Loxosceles intermedia с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Loxosceles intermedia с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<400> 26

atgcagtttt caaccgttgc gagcgtcgct tttgtggctc ttgctaattt cgttgccgcc 60

ttcgatgtct tctggaatgt tccgtcgcag caatgcaaga aatatggtat gaaattcgtt 120

ccgctcttag agcaatactc tatcctagtc aacaaagaag acaatttcaa gggcgacaaa 180

ataacgatct tttatgagtc acagctcggg ctttacccac atattggtgc aaacgacgag 240

tcgtttaatg gcgggatacc acaattaggt gacctgaaag cacacttaga aaagtcagcg 300

gttgatatac gacgtgatat tttggataag tcggcgactg gtctaagaat tatagactgg 360

gaagcatgga gaccaatatg ggaattcaac tggtctagcc tacgaaagta ccaagataaa 420

atgaagaaag tcgtccgcca gtttaacccg actgctcatg aatccacagt ggccaaacta 480

gcacataatg agtgggaaaa tagtagtaag tcttggatgc tttctacatt gcagttgggt 540

aagcaacttc gtccaaactc tgtatggtgc tattatttat ttcccgactg ttataactat 600

gatggcaact cagtccaaga atttcagtgt tctgaagcta tccgtaaggg gaacgatagg 660

ttgaaatggt tgtgggaaga atcgacagct gtatgcccat ctatctacat aaaagaaggc 720

caactgacca attatacctt gcaaaagaga atctggttta ccaatgggag attacaggaa 780

gccttgagag tagctcaacc taaagcgcgt atttatccat acataaatta ctccatcaaa 840

cccggaatga tggtgcctga agttgagttt tggcggttaa tcgctcagat agcctcgctg 900

ggtatggatg gagcagtgat ttggggatca agtgcgagtg taggcagtaa gaatcattgt 960

gcgcaattaa tgaagtacat tgcagacgta ttgggtcctg caactttgcg cataaaagaa 1020

aatgtagcac ggtgcagtaa acaggcgtgc tctggtaggg gtagatgtac ctggcctaaa 1080

gatacctctg ttattgcttg gaagttcctc gttgaaaagg aagactatga cttttatctg 1140

ggtgatatag agtgtaaatg tgttgaaggc tacgaaggta ggtactgtga acaaaagact 1200

aagggatccg ccatttctca aatcactgac ggtcaaatcc aagctactac cactgctacc 1260

accgaagcta ccaccactgc tgccccatct tccaccgttg aaactgtttc tccatccagc 1320

accgaaacta tctctcaaca aactgaaaat ggtgctgcta aggccgctgt cggtatgggt 1380

gccggtgctc tagctgctgc tgctatgttg ttataa 1416

<210> 27

<211> 1218

<212> ДНК

<213> Tityus serrulatus

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Tityus serrulatus с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Tityus serrulatus с N-концевым сигналом секреции

<400> 27

atgcaattct ctactgtcgc ttccgttgct ttcgtcgctt tggctaactt tgttgccgct 60

gctgatttta aagtttactg ggaagtgcct tccttccttt gttctaaacg ttttaaaatt 120

aatgtaacgg aagttttaac aagtcacgag attcttgtca atcagggtga gagtttcaac 180

ggtgacaaga tagtaatctt ttacgaaaac caattgggga agtacccgca tattgactca 240

aacaatgtgg agatcaatgg aggaatactt caagtagccg atttggcgaa gcatttgaaa 300

gtagccaagg ataatatcac taaattcgtc ccgaatccta atttcaacgg tgtcggagtg 360

atcgactggg aagcttggcg gccatcatgg gaatttaact ggggtaagtt aaaagtatat 420

aaagaaaaga gcattgactt ggtcaagtcg aaacatccgg agtggccctc cgacagggtt 480

gaaaaggttg ctaaagagga gtgggaggag agtgccaaag aatggatggt gaagaccctg 540

aagttagcac aggaaatgcg accgaacgca gtttggtgct attatctatt ccctgactgc 600

tacaattatt tcggtaagga tcaaccctct caattcagct gctcgtctcg aattcagaag 660

gaaaattctc gtctttcttg gctctggaat caatcaacag ccatttgcct aagcatttat 720

atccaggaat cccatgttac caaatataat atgtcccagc ggacatggtg gatcgatgcg 780

agattaagag aagcaattcg agtcagcgaa cacagaccaa acatacccat ctacccttac 840

attaattata ttctacctgg aactaatcaa actgtaccag caatggactt taaaaggaca 900

ctgggtcaaa tagctagcct cggcctagat ggtgctttgt tatggggatc tagctatcat 960

gttttaacag aatctcaatg caaaatcact tctgattatg tgaaatcagt gattgctcct 1020

accgtggcta ctgtcgttct caatacaaac agatgctcac agataatttg taagggtcgc 1080

ggcaactgtg tttggcctga agaaccattt agttcttgga aatacttagt tgaccccaaa 1140

atgccagtgt tcaagccaac caacatccac tgtaaatgta aaggttacct aggtagatac 1200

tgtgagatcc caaagtaa 1218

<210> 28

<211> 1428

<212> ДНК

<213> Tityus serrulatus

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Tityus serrulatus с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Tityus serrulatus с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<400> 28

atgcaattct ctactgtcgc ttccgttgct ttcgtcgctt tggctaactt tgttgccgct 60

gctgatttta aagtttactg ggaagtgcct tccttccttt gttctaaacg ttttaaaatt 120

aatgtaacgg aagttttaac aagtcacgag attcttgtca atcagggtga gagtttcaac 180

ggtgacaaga tagtaatctt ttacgaaaac caattgggga agtacccgca tattgactca 240

aacaatgtgg agatcaatgg aggaatactt caagtagccg atttggcgaa gcatttgaaa 300

gtagccaagg ataatatcac taaattcgtc ccgaatccta atttcaacgg tgtcggagtg 360

atcgactggg aagcttggcg gccatcatgg gaatttaact ggggtaagtt aaaagtatat 420

aaagaaaaga gcattgactt ggtcaagtcg aaacatccgg agtggccctc cgacagggtt 480

gaaaaggttg ctaaagagga gtgggaggag agtgccaaag aatggatggt gaagaccctg 540

aagttagcac aggaaatgcg accgaacgca gtttggtgct attatctatt ccctgactgc 600

tacaattatt tcggtaagga tcaaccctct caattcagct gctcgtctcg aattcagaag 660

gaaaattctc gtctttcttg gctctggaat caatcaacag ccatttgcct aagcatttat 720

atccaggaat cccatgttac caaatataat atgtcccagc ggacatggtg gatcgatgcg 780

agattaagag aagcaattcg agtcagcgaa cacagaccaa acatacccat ctacccttac 840

attaattata ttctacctgg aactaatcaa actgtaccag caatggactt taaaaggaca 900

ctgggtcaaa tagctagcct cggcctagat ggtgctttgt tatggggatc tagctatcat 960

gttttaacag aatctcaatg caaaatcact tctgattatg tgaaatcagt gattgctcct 1020

accgtggcta ctgtcgttct caatacaaac agatgctcac agataatttg taagggtcgc 1080

ggcaactgtg tttggcctga agaaccattt agttcttgga aatacttagt tgaccccaaa 1140

atgccagtgt tcaagccaac caacatccac tgtaaatgta aaggttacct aggtagatac 1200

tgtgagatcc caaagggatc cgccatttct caaatcactg acggtcaaat ccaagctact 1260

accactgcta ccaccgaagc taccaccact gctgccccat cttccaccgt tgaaactgtt 1320

tctccatcca gcaccgaaac tatctctcaa caaactgaaa atggtgctgc taaggccgct 1380

gtcggtatgg gtgccggtgc tctagctgct gctgctatgt tgttataa 1428

<210> 29

<211> 1083

<212> ДНК

<213> Vespa magnifica

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Vespa magnifica с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Vespa magnifica с N-концевым сигналом секреции

<400> 29

atgcaatttt ctacagtggc aagtgttgca ttcgttgcac tagccaactt tgtggcggca 60

gatagctgtg ggtcaaactg cgaaaagagt gagagaccga aaagggtctt caacatttac 120

tggaacgtac ctacattcat gtgtcaccag tacggactat actttgacga ggtcacgaat 180

tttaatataa agcacaacag caaagacaat tttcaagggg acaagatcgc gatcttttat 240

gaccccgggg agtttcccgc tctgctgcca ctaaactatg gtaagtacaa gatcaggaat 300

ggtggtgttc cacaagaggg taacatcacc atccatctgc agagattcat agagtaccta 360

gataagacct atccgaaccg taacttttca ggcatcggtg tgatcgattt cgagaggtgg 420

agaccaattt tcagacagaa ttggggtaat atgaagattt acaagaactt ctccatcgat 480

cttgtgcgta aagagcatcc tttctggaat aagaaaatga tcgagttgga agcttctaaa 540

agattcgaga aatacgcccg tctgttcatg gaagaaacat taaagttggc taagaaaact 600

agaaaacagg ccgattgggg ctactacggt tacccctatt gcttcaacat gtctcctact 660

aatttcgttc ctgactgcga tgtcacagct agggatgaga acaacgagat gtcttggttg 720

tttaacaacc agaatgtcct attaccaagt gtatacatta ggagagagct aactcctgac 780

cagaggattg ggcttgtaca ggggagagtg aaggaagctg tgagaatttc aaataaactg 840

aagcactcac ctaaagtctt cagctattgg tggtatgttt accaagacga gaccaacacc 900

ttcttaacgg agaccgacgt caagaagacg tttcaggaga ttgtgatcaa cggtggagat 960

gggattataa tctggggttc gtcctctgat gtaaacagct tgtccaagtg tacgaggtta 1020

agggagtacc tattgacagt cttgggacca attgctgtta acgtgactga agcagtaaac 1080

taa 1083

<210> 30

<211> 1293

<212> ДНК

<213> Vespa magnifica

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Vespa magnifica с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<220>

<223> Перекодированная нуклеоитидная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Vespa magnifica с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<400> 30

atgcaatttt ctacagtggc aagtgttgca ttcgttgcac tagccaactt tgtggcggca 60

gatagctgtg ggtcaaactg cgaaaagagt gagagaccga aaagggtctt caacatttac 120

tggaacgtac ctacattcat gtgtcaccag tacggactat actttgacga ggtcacgaat 180

tttaatataa agcacaacag caaagacaat tttcaagggg acaagatcgc gatcttttat 240

gaccccgggg agtttcccgc tctgctgcca ctaaactatg gtaagtacaa gatcaggaat 300

ggtggtgttc cacaagaggg taacatcacc atccatctgc agagattcat agagtaccta 360

gataagacct atccgaaccg taacttttca ggcatcggtg tgatcgattt cgagaggtgg 420

agaccaattt tcagacagaa ttggggtaat atgaagattt acaagaactt ctccatcgat 480

cttgtgcgta aagagcatcc tttctggaat aagaaaatga tcgagttgga agcttctaaa 540

agattcgaga aatacgcccg tctgttcatg gaagaaacat taaagttggc taagaaaact 600

agaaaacagg ccgattgggg ctactacggt tacccctatt gcttcaacat gtctcctact 660

aatttcgttc ctgactgcga tgtcacagct agggatgaga acaacgagat gtcttggttg 720

tttaacaacc agaatgtcct attaccaagt gtatacatta ggagagagct aactcctgac 780

cagaggattg ggcttgtaca ggggagagtg aaggaagctg tgagaatttc aaataaactg 840

aagcactcac ctaaagtctt cagctattgg tggtatgttt accaagacga gaccaacacc 900

ttcttaacgg agaccgacgt caagaagacg tttcaggaga ttgtgatcaa cggtggagat 960

gggattataa tctggggttc gtcctctgat gtaaacagct tgtccaagtg tacgaggtta 1020

agggagtacc tattgacagt cttgggacca attgctgtta acgtgactga agcagtaaac 1080

ggatccgcca tttctcaaat cactgacggt caaatccaag ctactaccac tgctaccacc 1140

gaagctacca ccactgctgc cccatcttcc accgttgaaa ctgtttctcc atccagcacc 1200

gaaactatct ctcaacaaac tgaaaatggt gctgctaagg ccgctgtcgg tatgggtgcc 1260

ggtgctctag ctgctgctgc tatgttgtta taa 1293

<210> 31

<211> 441

<212> БЕЛОК

<213> Bothrops atrox

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Bothrops atrox с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Bothrops atrox с N-концевым сигналом секреции

<400> 31

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Pro Met Tyr Pro Asn Glu Pro Phe Leu Val Phe Trp

20 25 30

Asn Ala Pro Thr Thr Gln Cys Arg Leu Arg Tyr Lys Val Asp Leu Asp

35 40 45

Leu Lys Thr Phe His Ile Val Thr Asn Ala Asn Asp Ser Leu Ser Gly

50 55 60

Ser Ala Val Thr Ile Phe Tyr Pro Thr His Leu Gly Val Tyr Pro His

65 70 75 80

Ile Asp Asp Arg Gly His Phe Phe Asn Gly Ile Ile Pro Gln Asn Glu

85 90 95

Ser Leu Val Lys His Leu Asn Lys Ser Lys Ser Asp Ile Asn Arg Met

100 105 110

Ile Pro Leu Arg Thr Phe His Gly Leu Gly Val Ile Asp Trp Glu Asn

115 120 125

Trp Arg Pro Gln Trp Asp Arg Asn Trp Gly Ser Lys Asn Val Tyr Arg

130 135 140

Asn Arg Ser Ile Gln Phe Ala Arg Asp Leu His Pro Glu Leu Ser Glu

145 150 155 160

Asp Lys Ile Lys Arg Leu Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala Ala Lys

165 170 175

Ser Phe Met Arg Asp Thr Leu Leu Leu Ala Glu Glu Met Arg Pro Asp

180 185 190

Gly Tyr Trp Gly Tyr Tyr Leu Tyr Pro Asp Cys His Asn Tyr Asn Tyr

195 200 205

Lys Thr Lys Pro Asp Gln Tyr Thr Gly Glu Cys Pro Asp Ile Glu Met

210 215 220

Ser Arg Asn Asn Gln Leu Leu Trp Leu Trp Arg Asp Ser Thr Ala Leu

225 230 235 240

Phe Pro Asn Ile Tyr Leu Glu Thr Ile Leu Arg Ser Ser Asp Asn Ala

245 250 255

Leu Lys Phe Val His His Arg Leu Lys Glu Ala Met Arg Ile Ala Ser

260 265 270

Met Ala Arg Asn Asp Tyr Ala Leu Pro Phe Phe Val Tyr Ala Arg Pro

275 280 285

Phe Tyr Ala Tyr Thr Phe Glu Pro Leu Thr Gln Glu Asp Leu Val Thr

290 295 300

Thr Val Gly Glu Thr Ala Asp Met Gly Ala Ala Gly Ile Val Phe Trp

305 310 315 320

Gly Ser Met Gln Tyr Ala Ser Thr Val Glu Ser Cys Gly Lys Val Lys

325 330 335

Asp Tyr Met Asn Gly Pro Leu Gly Arg Tyr Ile Val Asn Val Thr Thr

340 345 350

Ala Ala Lys Ile Cys Ser Arg Phe Leu Cys Lys Arg His Gly Arg Cys

355 360 365

Val Arg Lys His Ser Asp Ser Asn Ala Phe Leu His Leu Phe Pro Asp

370 375 380

Ser Phe Arg Ile Met Val His Gly Asn Ala Thr Glu Lys Lys Val Ile

385 390 395 400

Val Lys Gly Lys Leu Glu Leu Lys Asn Leu Ile Phe Leu Arg Asn Asn

405 410 415

Phe Met Cys Gln Cys Tyr Gln Gly Trp Lys Gly Leu Tyr Cys Glu Lys

420 425 430

His Ser Ile Lys Glu Ile Arg Lys Ile

435 440

<210> 32

<211> 511

<212> БЕЛОК

<213> Bothrops atrox

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Bothrops atrox с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Bothrops atrox с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<400> 32

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Pro Met Tyr Pro Asn Glu Pro Phe Leu Val Phe Trp

20 25 30

Asn Ala Pro Thr Thr Gln Cys Arg Leu Arg Tyr Lys Val Asp Leu Asp

35 40 45

Leu Lys Thr Phe His Ile Val Thr Asn Ala Asn Asp Ser Leu Ser Gly

50 55 60

Ser Ala Val Thr Ile Phe Tyr Pro Thr His Leu Gly Val Tyr Pro His

65 70 75 80

Ile Asp Asp Arg Gly His Phe Phe Asn Gly Ile Ile Pro Gln Asn Glu

85 90 95

Ser Leu Val Lys His Leu Asn Lys Ser Lys Ser Asp Ile Asn Arg Met

100 105 110

Ile Pro Leu Arg Thr Phe His Gly Leu Gly Val Ile Asp Trp Glu Asn

115 120 125

Trp Arg Pro Gln Trp Asp Arg Asn Trp Gly Ser Lys Asn Val Tyr Arg

130 135 140

Asn Arg Ser Ile Gln Phe Ala Arg Asp Leu His Pro Glu Leu Ser Glu

145 150 155 160

Asp Lys Ile Lys Arg Leu Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala Ala Lys

165 170 175

Ser Phe Met Arg Asp Thr Leu Leu Leu Ala Glu Glu Met Arg Pro Asp

180 185 190

Gly Tyr Trp Gly Tyr Tyr Leu Tyr Pro Asp Cys His Asn Tyr Asn Tyr

195 200 205

Lys Thr Lys Pro Asp Gln Tyr Thr Gly Glu Cys Pro Asp Ile Glu Met

210 215 220

Ser Arg Asn Asn Gln Leu Leu Trp Leu Trp Arg Asp Ser Thr Ala Leu

225 230 235 240

Phe Pro Asn Ile Tyr Leu Glu Thr Ile Leu Arg Ser Ser Asp Asn Ala

245 250 255

Leu Lys Phe Val His His Arg Leu Lys Glu Ala Met Arg Ile Ala Ser

260 265 270

Met Ala Arg Asn Asp Tyr Ala Leu Pro Phe Phe Val Tyr Ala Arg Pro

275 280 285

Phe Tyr Ala Tyr Thr Phe Glu Pro Leu Thr Gln Glu Asp Leu Val Thr

290 295 300

Thr Val Gly Glu Thr Ala Asp Met Gly Ala Ala Gly Ile Val Phe Trp

305 310 315 320

Gly Ser Met Gln Tyr Ala Ser Thr Val Glu Ser Cys Gly Lys Val Lys

325 330 335

Asp Tyr Met Asn Gly Pro Leu Gly Arg Tyr Ile Val Asn Val Thr Thr

340 345 350

Ala Ala Lys Ile Cys Ser Arg Phe Leu Cys Lys Arg His Gly Arg Cys

355 360 365

Val Arg Lys His Ser Asp Ser Asn Ala Phe Leu His Leu Phe Pro Asp

370 375 380

Ser Phe Arg Ile Met Val His Gly Asn Ala Thr Glu Lys Lys Val Ile

385 390 395 400

Val Lys Gly Lys Leu Glu Leu Lys Asn Leu Ile Phe Leu Arg Asn Asn

405 410 415

Phe Met Cys Gln Cys Tyr Gln Gly Trp Lys Gly Leu Tyr Cys Glu Lys

420 425 430

His Ser Ile Lys Glu Ile Arg Lys Ile Gly Ser Ala Ile Ser Gln Ile

435 440 445

Thr Asp Gly Gln Ile Gln Ala Thr Thr Thr Ala Thr Thr Glu Ala Thr

450 455 460

Thr Thr Ala Ala Pro Ser Ser Thr Val Glu Thr Val Ser Pro Ser Ser

465 470 475 480

Thr Glu Thr Ile Ser Gln Gln Thr Glu Asn Gly Ala Ala Lys Ala Ala

485 490 495

Val Gly Met Gly Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Ala Met Leu Leu

500 505 510

<210> 33

<211> 398

<212> БЕЛОК

<213> Cupiennius salei

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Cupiennius salei с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Cupiennius salei с N-концевым сигналом секреции

<400> 33

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Phe Lys Ile Tyr Trp Asn Val Pro Thr Phe Gln Cys

20 25 30

Thr His Asn Tyr Lys Ile Asp Tyr Val Lys Leu Leu Ser Thr Tyr Gly

35 40 45

Ile Gln Val Asn Asp Gly Gly Lys Phe Gln Gly Asn Gln Val Thr Ile

50 55 60

Phe Tyr Glu Thr Gln Leu Gly Leu Tyr Pro Arg Ile Leu Lys Ser Gly

65 70 75 80

Lys Met Glu Asn Gly Gly Ile Pro Gln Arg Gly Asn Phe Glu Lys His

85 90 95

Leu Glu Lys Ala Ser Thr Asp Leu Gln Lys Val Ile Pro Trp Lys Glu

100 105 110

Phe Ser Gly Leu Gly Val Ile Asp Trp Glu Ala Trp Arg Pro Thr Trp

115 120 125

Glu Phe Asn Trp Glu Pro Leu Arg Ile Tyr Gln Thr Glu Ser Ile Lys

130 135 140

Arg Ala Lys Glu Leu His Pro Thr Ala Asn Asp Ser Ala Val Lys Glu

145 150 155 160

Ile Ala Glu Arg Gln Trp Glu Asp Ser Ala Lys Leu Tyr Met Leu Glu

165 170 175

Thr Leu Arg Leu Ala Lys Lys Leu Arg Pro Gln Ala Pro Trp Cys Tyr

180 185 190

Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Tyr Val Gly Lys Lys Pro Lys Asp

195 200 205

Phe Gln Cys Ser Ala Ser Ile Arg Lys Gly Asn Asp Lys Leu Ser Trp

210 215 220

Leu Trp Lys Asp Ser Thr Ala Leu Cys Pro Ser Ile Tyr Val Tyr Glu

225 230 235 240

Ser Gln Leu Asp Arg Tyr Ser Phe Glu Gln Arg Thr Trp Arg Asp Asn

245 250 255

Glu Lys Leu Arg Glu Ala Leu Arg Val Ala Thr Arg Thr Ser Lys Ile

260 265 270

Tyr Pro Tyr Val Asn Tyr Phe Asp Lys Glu Leu Ile Pro Glu Gln Glu

275 280 285

Val Trp Arg Met Leu Ala Gln Ala Ala Ala Val Gly Gly Ser Gly Ala

290 295 300

Val Ile Trp Gly Ser Ser Ala Ala Val Ala Ser Glu Glu Leu Cys Lys

305 310 315 320

Ser Leu Lys Gln Tyr Ile Ile Glu Thr Leu Gly Pro Ala Ala Glu Lys

325 330 335

Val Ala Trp Arg Ser Asp Leu Cys Ser Lys Glu Ile Cys Asn Asn Gln

340 345 350

Gly Arg Cys Thr Phe Pro Asp Asp Asp Tyr Ala Asn Ala Trp Lys Leu

355 360 365

Phe Thr Asp Asp Thr Val Lys Phe Tyr Ala Gly Asn Ile Thr Cys Arg

370 375 380

Cys Ser Glu Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Cys Glu Lys Lys Asn

385 390 395

<210> 34

<211> 468

<212> БЕЛОК

<213> Cupiennius salei

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Cupiennius salei с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Cupiennius salei с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<400> 34

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Phe Lys Ile Tyr Trp Asn Val Pro Thr Phe Gln Cys

20 25 30

Thr His Asn Tyr Lys Ile Asp Tyr Val Lys Leu Leu Ser Thr Tyr Gly

35 40 45

Ile Gln Val Asn Asp Gly Gly Lys Phe Gln Gly Asn Gln Val Thr Ile

50 55 60

Phe Tyr Glu Thr Gln Leu Gly Leu Tyr Pro Arg Ile Leu Lys Ser Gly

65 70 75 80

Lys Met Glu Asn Gly Gly Ile Pro Gln Arg Gly Asn Phe Glu Lys His

85 90 95

Leu Glu Lys Ala Ser Thr Asp Leu Gln Lys Val Ile Pro Trp Lys Glu

100 105 110

Phe Ser Gly Leu Gly Val Ile Asp Trp Glu Ala Trp Arg Pro Thr Trp

115 120 125

Glu Phe Asn Trp Glu Pro Leu Arg Ile Tyr Gln Thr Glu Ser Ile Lys

130 135 140

Arg Ala Lys Glu Leu His Pro Thr Ala Asn Asp Ser Ala Val Lys Glu

145 150 155 160

Ile Ala Glu Arg Gln Trp Glu Asp Ser Ala Lys Leu Tyr Met Leu Glu

165 170 175

Thr Leu Arg Leu Ala Lys Lys Leu Arg Pro Gln Ala Pro Trp Cys Tyr

180 185 190

Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Tyr Val Gly Lys Lys Pro Lys Asp

195 200 205

Phe Gln Cys Ser Ala Ser Ile Arg Lys Gly Asn Asp Lys Leu Ser Trp

210 215 220

Leu Trp Lys Asp Ser Thr Ala Leu Cys Pro Ser Ile Tyr Val Tyr Glu

225 230 235 240

Ser Gln Leu Asp Arg Tyr Ser Phe Glu Gln Arg Thr Trp Arg Asp Asn

245 250 255

Glu Lys Leu Arg Glu Ala Leu Arg Val Ala Thr Arg Thr Ser Lys Ile

260 265 270

Tyr Pro Tyr Val Asn Tyr Phe Asp Lys Glu Leu Ile Pro Glu Gln Glu

275 280 285

Val Trp Arg Met Leu Ala Gln Ala Ala Ala Val Gly Gly Ser Gly Ala

290 295 300

Val Ile Trp Gly Ser Ser Ala Ala Val Ala Ser Glu Glu Leu Cys Lys

305 310 315 320

Ser Leu Lys Gln Tyr Ile Ile Glu Thr Leu Gly Pro Ala Ala Glu Lys

325 330 335

Val Ala Trp Arg Ser Asp Leu Cys Ser Lys Glu Ile Cys Asn Asn Gln

340 345 350

Gly Arg Cys Thr Phe Pro Asp Asp Asp Tyr Ala Asn Ala Trp Lys Leu

355 360 365

Phe Thr Asp Asp Thr Val Lys Phe Tyr Ala Gly Asn Ile Thr Cys Arg

370 375 380

Cys Ser Glu Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Cys Glu Lys Lys Asn Gly Ser

385 390 395 400

Ala Ile Ser Gln Ile Thr Asp Gly Gln Ile Gln Ala Thr Thr Thr Ala

405 410 415

Thr Thr Glu Ala Thr Thr Thr Ala Ala Pro Ser Ser Thr Val Glu Thr

420 425 430

Val Ser Pro Ser Ser Thr Glu Thr Ile Ser Gln Gln Thr Glu Asn Gly

435 440 445

Ala Ala Lys Ala Ala Val Gly Met Gly Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala

450 455 460

Ala Met Leu Leu

465

<210> 35

<211> 579

<212> БЕЛОК

<213> Hirudo nipponia

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Hirudo Nipponia с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Hirudo Nipponia с N-концевым сигналом секреции

<400> 35

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Met Lys Glu Ile Ala Val Thr Ile Asp Asp Lys Asn

20 25 30

Val Ile Ala Ser Val Ser Glu Ser Phe His Gly Val Ala Phe Asp Ala

35 40 45

Ser Leu Phe Ser Pro Lys Gly Leu Trp Ser Phe Val Asp Ile Thr Ser

50 55 60

Pro Lys Leu Phe Lys Leu Leu Glu Gly Leu Ser Pro Gly Tyr Phe Arg

65 70 75 80

Val Gly Gly Thr Phe Ala Asn Trp Leu Phe Phe Asp Leu Asp Glu Asn

85 90 95

Asn Lys Trp Lys Asp Tyr Trp Ala Phe Lys Asp Lys Thr Pro Glu Thr

100 105 110

Ala Thr Ile Thr Arg Arg Trp Leu Phe Arg Lys Gln Asn Asn Leu Lys

115 120 125

Lys Glu Thr Phe Asp Asp Leu Val Lys Leu Thr Lys Gly Ser Lys Met

130 135 140

Arg Leu Leu Phe Asp Leu Asn Ala Glu Val Arg Thr Gly Tyr Glu Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Met Thr Ser Thr Trp Asp Ser Ser Glu Ala Glu Lys Leu

165 170 175

Phe Lys Tyr Cys Val Ser Lys Gly Tyr Gly Asp Asn Ile Asp Trp Glu

180 185 190

Leu Gly Asn Glu Pro Asp His Thr Ser Ala His Asn Leu Thr Glu Lys

195 200 205

Gln Val Gly Glu Asp Phe Lys Ala Leu His Lys Val Leu Glu Lys Tyr

210 215 220

Pro Thr Leu Asn Lys Gly Ser Leu Val Gly Pro Asp Val Gly Trp Met

225 230 235 240

Gly Val Ser Tyr Val Lys Gly Leu Ala Asp Gly Ala Gly Asp His Val

245 250 255

Thr Ala Phe Thr Leu His Gln Tyr Tyr Phe Asp Gly Asn Thr Ser Asp

260 265 270

Val Ser Thr Tyr Leu Asp Ala Thr Tyr Phe Lys Lys Leu Gln Gln Leu

275 280 285

Phe Asp Lys Val Lys Asp Val Leu Lys Asn Ser Pro His Lys Asp Lys

290 295 300

Pro Leu Trp Leu Gly Glu Thr Ser Ser Gly Tyr Asn Ser Gly Thr Lys

305 310 315 320

Asp Val Ser Asp Arg Tyr Val Ser Gly Phe Leu Thr Leu Asp Lys Leu

325 330 335

Gly Leu Ser Ala Ala Asn Asn Val Lys Val Val Ile Arg Gln Thr Ile

340 345 350

Tyr Asn Gly Tyr Tyr Gly Leu Leu Asp Lys Asn Thr Leu Glu Pro Asn

355 360 365

Pro Asp Tyr Trp Leu Met His Val His Asn Ser Leu Val Gly Asn Thr

370 375 380

Val Phe Lys Val Asp Val Ser Asp Pro Thr Asn Lys Ala Arg Val Tyr

385 390 395 400

Ala Gln Cys Thr Lys Thr Asn Ser Lys His Thr Gln Ser Arg Tyr Tyr

405 410 415

Lys Gly Ser Leu Thr Ile Phe Ala Leu Asn Val Gly Asp Glu Asp Val

420 425 430

Thr Leu Lys Ile Asp Gln Tyr Ser Gly Lys Lys Ile Tyr Ser Tyr Ile

435 440 445

Leu Thr Pro Glu Gly Gly Gln Leu Thr Ser Gln Lys Val Leu Leu Asn

450 455 460

Gly Lys Glu Leu Lys Leu Val Ser Asp Gln Leu Pro Glu Leu Asn Ala

465 470 475 480

Asp Glu Ser Lys Thr Ser Phe Thr Leu Ser Pro Lys Thr Phe Gly Phe

485 490 495

Phe Val Val Ser Asp Ala Asn Val Glu Ala Cys Lys Lys Gly Ser Ala

500 505 510

Ile Ser Gln Ile Thr Asp Gly Gln Ile Gln Ala Thr Thr Thr Ala Thr

515 520 525

Thr Glu Ala Thr Thr Thr Ala Ala Pro Ser Ser Thr Val Glu Thr Val

530 535 540

Ser Pro Ser Ser Thr Glu Thr Ile Ser Gln Gln Thr Glu Asn Gly Ala

545 550 555 560

Ala Lys Ala Ala Val Gly Met Gly Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Ala

565 570 575

Met Leu Leu

<210> 36

<211> 509

<212> БЕЛОК

<213> Hirudo nipponia

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Hirudo Nipponia с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Hirudo Nipponia с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<400> 36

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Met Lys Glu Ile Ala Val Thr Ile Asp Asp Lys Asn

20 25 30

Val Ile Ala Ser Val Ser Glu Ser Phe His Gly Val Ala Phe Asp Ala

35 40 45

Ser Leu Phe Ser Pro Lys Gly Leu Trp Ser Phe Val Asp Ile Thr Ser

50 55 60

Pro Lys Leu Phe Lys Leu Leu Glu Gly Leu Ser Pro Gly Tyr Phe Arg

65 70 75 80

Val Gly Gly Thr Phe Ala Asn Trp Leu Phe Phe Asp Leu Asp Glu Asn

85 90 95

Asn Lys Trp Lys Asp Tyr Trp Ala Phe Lys Asp Lys Thr Pro Glu Thr

100 105 110

Ala Thr Ile Thr Arg Arg Trp Leu Phe Arg Lys Gln Asn Asn Leu Lys

115 120 125

Lys Glu Thr Phe Asp Asp Leu Val Lys Leu Thr Lys Gly Ser Lys Met

130 135 140

Arg Leu Leu Phe Asp Leu Asn Ala Glu Val Arg Thr Gly Tyr Glu Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Met Thr Ser Thr Trp Asp Ser Ser Glu Ala Glu Lys Leu

165 170 175

Phe Lys Tyr Cys Val Ser Lys Gly Tyr Gly Asp Asn Ile Asp Trp Glu

180 185 190

Leu Gly Asn Glu Pro Asp His Thr Ser Ala His Asn Leu Thr Glu Lys

195 200 205

Gln Val Gly Glu Asp Phe Lys Ala Leu His Lys Val Leu Glu Lys Tyr

210 215 220

Pro Thr Leu Asn Lys Gly Ser Leu Val Gly Pro Asp Val Gly Trp Met

225 230 235 240

Gly Val Ser Tyr Val Lys Gly Leu Ala Asp Gly Ala Gly Asp His Val

245 250 255

Thr Ala Phe Thr Leu His Gln Tyr Tyr Phe Asp Gly Asn Thr Ser Asp

260 265 270

Val Ser Thr Tyr Leu Asp Ala Thr Tyr Phe Lys Lys Leu Gln Gln Leu

275 280 285

Phe Asp Lys Val Lys Asp Val Leu Lys Asn Ser Pro His Lys Asp Lys

290 295 300

Pro Leu Trp Leu Gly Glu Thr Ser Ser Gly Tyr Asn Ser Gly Thr Lys

305 310 315 320

Asp Val Ser Asp Arg Tyr Val Ser Gly Phe Leu Thr Leu Asp Lys Leu

325 330 335

Gly Leu Ser Ala Ala Asn Asn Val Lys Val Val Ile Arg Gln Thr Ile

340 345 350

Tyr Asn Gly Tyr Tyr Gly Leu Leu Asp Lys Asn Thr Leu Glu Pro Asn

355 360 365

Pro Asp Tyr Trp Leu Met His Val His Asn Ser Leu Val Gly Asn Thr

370 375 380

Val Phe Lys Val Asp Val Ser Asp Pro Thr Asn Lys Ala Arg Val Tyr

385 390 395 400

Ala Gln Cys Thr Lys Thr Asn Ser Lys His Thr Gln Ser Arg Tyr Tyr

405 410 415

Lys Gly Ser Leu Thr Ile Phe Ala Leu Asn Val Gly Asp Glu Asp Val

420 425 430

Thr Leu Lys Ile Asp Gln Tyr Ser Gly Lys Lys Ile Tyr Ser Tyr Ile

435 440 445

Leu Thr Pro Glu Gly Gly Gln Leu Thr Ser Gln Lys Val Leu Leu Asn

450 455 460

Gly Lys Glu Leu Lys Leu Val Ser Asp Gln Leu Pro Glu Leu Asn Ala

465 470 475 480

Asp Glu Ser Lys Thr Ser Phe Thr Leu Ser Pro Lys Thr Phe Gly Phe

485 490 495

Phe Val Val Ser Asp Ala Asn Val Glu Ala Cys Lys Lys

500 505

<210> 37

<211> 401

<212> БЕЛОК

<213> Loxosceles intermedia

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Loxosceles intermedia с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Loxosceles intermedia с N-концевым сигналом секреции

<400> 37

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Phe Asp Val Phe Trp Asn Val Pro Ser Gln Gln Cys

20 25 30

Lys Lys Tyr Gly Met Lys Phe Val Pro Leu Leu Glu Gln Tyr Ser Ile

35 40 45

Leu Val Asn Lys Glu Asp Asn Phe Lys Gly Asp Lys Ile Thr Ile Phe

50 55 60

Tyr Glu Ser Gln Leu Gly Leu Tyr Pro His Ile Gly Ala Asn Asp Glu

65 70 75 80

Ser Phe Asn Gly Gly Ile Pro Gln Leu Gly Asp Leu Lys Ala His Leu

85 90 95

Glu Lys Ser Ala Val Asp Ile Arg Arg Asp Ile Leu Asp Lys Ser Ala

100 105 110

Thr Gly Leu Arg Ile Ile Asp Trp Glu Ala Trp Arg Pro Ile Trp Glu

115 120 125

Phe Asn Trp Ser Ser Leu Arg Lys Tyr Gln Asp Lys Met Lys Lys Val

130 135 140

Val Arg Gln Phe Asn Pro Thr Ala His Glu Ser Thr Val Ala Lys Leu

145 150 155 160

Ala His Asn Glu Trp Glu Asn Ser Ser Lys Ser Trp Met Leu Ser Thr

165 170 175

Leu Gln Leu Gly Lys Gln Leu Arg Pro Asn Ser Val Trp Cys Tyr Tyr

180 185 190

Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Tyr Asp Gly Asn Ser Val Gln Glu Phe

195 200 205

Gln Cys Ser Glu Ala Ile Arg Lys Gly Asn Asp Arg Leu Lys Trp Leu

210 215 220

Trp Glu Glu Ser Thr Ala Val Cys Pro Ser Ile Tyr Ile Lys Glu Gly

225 230 235 240

Gln Leu Thr Asn Tyr Thr Leu Gln Lys Arg Ile Trp Phe Thr Asn Gly

245 250 255

Arg Leu Gln Glu Ala Leu Arg Val Ala Gln Pro Lys Ala Arg Ile Tyr

260 265 270

Pro Tyr Ile Asn Tyr Ser Ile Lys Pro Gly Met Met Val Pro Glu Val

275 280 285

Glu Phe Trp Arg Leu Ile Ala Gln Ile Ala Ser Leu Gly Met Asp Gly

290 295 300

Ala Val Ile Trp Gly Ser Ser Ala Ser Val Gly Ser Lys Asn His Cys

305 310 315 320

Ala Gln Leu Met Lys Tyr Ile Ala Asp Val Leu Gly Pro Ala Thr Leu

325 330 335

Arg Ile Lys Glu Asn Val Ala Arg Cys Ser Lys Gln Ala Cys Ser Gly

340 345 350

Arg Gly Arg Cys Thr Trp Pro Lys Asp Thr Ser Val Ile Ala Trp Lys

355 360 365

Phe Leu Val Glu Lys Glu Asp Tyr Asp Phe Tyr Leu Gly Asp Ile Glu

370 375 380

Cys Lys Cys Val Glu Gly Tyr Glu Gly Arg Tyr Cys Glu Gln Lys Thr

385 390 395 400

Lys

<210> 38

<211> 471

<212> БЕЛОК

<213> Loxosceles intermedia

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Loxosceles intermedia с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Loxosceles intermedia с N-концевым сигналом секреции и C-концевым

якорным сигналом

<400> 38

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Phe Asp Val Phe Trp Asn Val Pro Ser Gln Gln Cys

20 25 30

Lys Lys Tyr Gly Met Lys Phe Val Pro Leu Leu Glu Gln Tyr Ser Ile

35 40 45

Leu Val Asn Lys Glu Asp Asn Phe Lys Gly Asp Lys Ile Thr Ile Phe

50 55 60

Tyr Glu Ser Gln Leu Gly Leu Tyr Pro His Ile Gly Ala Asn Asp Glu

65 70 75 80

Ser Phe Asn Gly Gly Ile Pro Gln Leu Gly Asp Leu Lys Ala His Leu

85 90 95

Glu Lys Ser Ala Val Asp Ile Arg Arg Asp Ile Leu Asp Lys Ser Ala

100 105 110

Thr Gly Leu Arg Ile Ile Asp Trp Glu Ala Trp Arg Pro Ile Trp Glu

115 120 125

Phe Asn Trp Ser Ser Leu Arg Lys Tyr Gln Asp Lys Met Lys Lys Val

130 135 140

Val Arg Gln Phe Asn Pro Thr Ala His Glu Ser Thr Val Ala Lys Leu

145 150 155 160

Ala His Asn Glu Trp Glu Asn Ser Ser Lys Ser Trp Met Leu Ser Thr

165 170 175

Leu Gln Leu Gly Lys Gln Leu Arg Pro Asn Ser Val Trp Cys Tyr Tyr

180 185 190

Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Tyr Asp Gly Asn Ser Val Gln Glu Phe

195 200 205

Gln Cys Ser Glu Ala Ile Arg Lys Gly Asn Asp Arg Leu Lys Trp Leu

210 215 220

Trp Glu Glu Ser Thr Ala Val Cys Pro Ser Ile Tyr Ile Lys Glu Gly

225 230 235 240

Gln Leu Thr Asn Tyr Thr Leu Gln Lys Arg Ile Trp Phe Thr Asn Gly

245 250 255

Arg Leu Gln Glu Ala Leu Arg Val Ala Gln Pro Lys Ala Arg Ile Tyr

260 265 270

Pro Tyr Ile Asn Tyr Ser Ile Lys Pro Gly Met Met Val Pro Glu Val

275 280 285

Glu Phe Trp Arg Leu Ile Ala Gln Ile Ala Ser Leu Gly Met Asp Gly

290 295 300

Ala Val Ile Trp Gly Ser Ser Ala Ser Val Gly Ser Lys Asn His Cys

305 310 315 320

Ala Gln Leu Met Lys Tyr Ile Ala Asp Val Leu Gly Pro Ala Thr Leu

325 330 335

Arg Ile Lys Glu Asn Val Ala Arg Cys Ser Lys Gln Ala Cys Ser Gly

340 345 350

Arg Gly Arg Cys Thr Trp Pro Lys Asp Thr Ser Val Ile Ala Trp Lys

355 360 365

Phe Leu Val Glu Lys Glu Asp Tyr Asp Phe Tyr Leu Gly Asp Ile Glu

370 375 380

Cys Lys Cys Val Glu Gly Tyr Glu Gly Arg Tyr Cys Glu Gln Lys Thr

385 390 395 400

Lys Gly Ser Ala Ile Ser Gln Ile Thr Asp Gly Gln Ile Gln Ala Thr

405 410 415

Thr Thr Ala Thr Thr Glu Ala Thr Thr Thr Ala Ala Pro Ser Ser Thr

420 425 430

Val Glu Thr Val Ser Pro Ser Ser Thr Glu Thr Ile Ser Gln Gln Thr

435 440 445

Glu Asn Gly Ala Ala Lys Ala Ala Val Gly Met Gly Ala Gly Ala Leu

450 455 460

Ala Ala Ala Ala Met Leu Leu

465 470

<210> 39

<211> 405

<212> БЕЛОК

<213> Tityus serrulatus

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Tityus serrulatus с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL),

происходящая из Tityus serrulatus с N-концевым сигналом секреции

<400> 39

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Ala Asp Phe Lys Val Tyr Trp Glu Val Pro Ser Phe

20 25 30

Leu Cys Ser Lys Arg Phe Lys Ile Asn Val Thr Glu Val Leu Thr Ser

35 40 45

His Glu Ile Leu Val Asn Gln Gly Glu Ser Phe Asn Gly Asp Lys Ile

50 55 60

Val Ile Phe Tyr Glu Asn Gln Leu Gly Lys Tyr Pro His Ile Asp Ser

65 70 75 80

Asn Asn Val Glu Ile Asn Gly Gly Ile Leu Gln Val Ala Asp Leu Ala

85 90 95

Lys His Leu Lys Val Ala Lys Asp Asn Ile Thr Lys Phe Val Pro Asn

100 105 110

Pro Asn Phe Asn Gly Val Gly Val Ile Asp Trp Glu Ala Trp Arg Pro

115 120 125

Ser Trp Glu Phe Asn Trp Gly Lys Leu Lys Val Tyr Lys Glu Lys Ser

130 135 140

Ile Asp Leu Val Lys Ser Lys His Pro Glu Trp Pro Ser Asp Arg Val

145 150 155 160

Glu Lys Val Ala Lys Glu Glu Trp Glu Glu Ser Ala Lys Glu Trp Met

165 170 175

Val Lys Thr Leu Lys Leu Ala Gln Glu Met Arg Pro Asn Ala Val Trp

180 185 190

Cys Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Tyr Phe Gly Lys Asp Gln

195 200 205

Pro Ser Gln Phe Ser Cys Ser Ser Arg Ile Gln Lys Glu Asn Ser Arg

210 215 220

Leu Ser Trp Leu Trp Asn Gln Ser Thr Ala Ile Cys Leu Ser Ile Tyr

225 230 235 240

Ile Gln Glu Ser His Val Thr Lys Tyr Asn Met Ser Gln Arg Thr Trp

245 250 255

Trp Ile Asp Ala Arg Leu Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Glu His Arg

260 265 270

Pro Asn Ile Pro Ile Tyr Pro Tyr Ile Asn Tyr Ile Leu Pro Gly Thr

275 280 285

Asn Gln Thr Val Pro Ala Met Asp Phe Lys Arg Thr Leu Gly Gln Ile

290 295 300

Ala Ser Leu Gly Leu Asp Gly Ala Leu Leu Trp Gly Ser Ser Tyr His

305 310 315 320

Val Leu Thr Glu Ser Gln Cys Lys Ile Thr Ser Asp Tyr Val Lys Ser

325 330 335

Val Ile Ala Pro Thr Val Ala Thr Val Val Leu Asn Thr Asn Arg Cys

340 345 350

Ser Gln Ile Ile Cys Lys Gly Arg Gly Asn Cys Val Trp Pro Glu Glu

355 360 365

Pro Phe Ser Ser Trp Lys Tyr Leu Val Asp Pro Lys Met Pro Val Phe

370 375 380

Lys Pro Thr Asn Ile His Cys Lys Cys Lys Gly Tyr Leu Gly Arg Tyr

385 390 395 400

Cys Glu Ile Pro Lys

405

<210> 40

<211> 475

<212> БЕЛОК

<213> Tityus serrulatus

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Tityus serrulatus с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Tityus serrulatus с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<400> 40

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Ala Asp Phe Lys Val Tyr Trp Glu Val Pro Ser Phe

20 25 30

Leu Cys Ser Lys Arg Phe Lys Ile Asn Val Thr Glu Val Leu Thr Ser

35 40 45

His Glu Ile Leu Val Asn Gln Gly Glu Ser Phe Asn Gly Asp Lys Ile

50 55 60

Val Ile Phe Tyr Glu Asn Gln Leu Gly Lys Tyr Pro His Ile Asp Ser

65 70 75 80

Asn Asn Val Glu Ile Asn Gly Gly Ile Leu Gln Val Ala Asp Leu Ala

85 90 95

Lys His Leu Lys Val Ala Lys Asp Asn Ile Thr Lys Phe Val Pro Asn

100 105 110

Pro Asn Phe Asn Gly Val Gly Val Ile Asp Trp Glu Ala Trp Arg Pro

115 120 125

Ser Trp Glu Phe Asn Trp Gly Lys Leu Lys Val Tyr Lys Glu Lys Ser

130 135 140

Ile Asp Leu Val Lys Ser Lys His Pro Glu Trp Pro Ser Asp Arg Val

145 150 155 160

Glu Lys Val Ala Lys Glu Glu Trp Glu Glu Ser Ala Lys Glu Trp Met

165 170 175

Val Lys Thr Leu Lys Leu Ala Gln Glu Met Arg Pro Asn Ala Val Trp

180 185 190

Cys Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Tyr Phe Gly Lys Asp Gln

195 200 205

Pro Ser Gln Phe Ser Cys Ser Ser Arg Ile Gln Lys Glu Asn Ser Arg

210 215 220

Leu Ser Trp Leu Trp Asn Gln Ser Thr Ala Ile Cys Leu Ser Ile Tyr

225 230 235 240

Ile Gln Glu Ser His Val Thr Lys Tyr Asn Met Ser Gln Arg Thr Trp

245 250 255

Trp Ile Asp Ala Arg Leu Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Glu His Arg

260 265 270

Pro Asn Ile Pro Ile Tyr Pro Tyr Ile Asn Tyr Ile Leu Pro Gly Thr

275 280 285

Asn Gln Thr Val Pro Ala Met Asp Phe Lys Arg Thr Leu Gly Gln Ile

290 295 300

Ala Ser Leu Gly Leu Asp Gly Ala Leu Leu Trp Gly Ser Ser Tyr His

305 310 315 320

Val Leu Thr Glu Ser Gln Cys Lys Ile Thr Ser Asp Tyr Val Lys Ser

325 330 335

Val Ile Ala Pro Thr Val Ala Thr Val Val Leu Asn Thr Asn Arg Cys

340 345 350

Ser Gln Ile Ile Cys Lys Gly Arg Gly Asn Cys Val Trp Pro Glu Glu

355 360 365

Pro Phe Ser Ser Trp Lys Tyr Leu Val Asp Pro Lys Met Pro Val Phe

370 375 380

Lys Pro Thr Asn Ile His Cys Lys Cys Lys Gly Tyr Leu Gly Arg Tyr

385 390 395 400

Cys Glu Ile Pro Lys Gly Ser Ala Ile Ser Gln Ile Thr Asp Gly Gln

405 410 415

Ile Gln Ala Thr Thr Thr Ala Thr Thr Glu Ala Thr Thr Thr Ala Ala

420 425 430

Pro Ser Ser Thr Val Glu Thr Val Ser Pro Ser Ser Thr Glu Thr Ile

435 440 445

Ser Gln Gln Thr Glu Asn Gly Ala Ala Lys Ala Ala Val Gly Met Gly

450 455 460

Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Ala Met Leu Leu

465 470 475

<210> 41

<211> 360

<212> БЕЛОК

<213> Vespa magnifica

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Vespa magnifica с N-концевым сигналом секреции

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Vespa magnifica с N-концевым сигналом секреции

<400> 41

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Asp Ser Cys Gly Ser Asn Cys Glu Lys Ser Glu Arg

20 25 30

Pro Lys Arg Val Phe Asn Ile Tyr Trp Asn Val Pro Thr Phe Met Cys

35 40 45

His Gln Tyr Gly Leu Tyr Phe Asp Glu Val Thr Asn Phe Asn Ile Lys

50 55 60

His Asn Ser Lys Asp Asn Phe Gln Gly Asp Lys Ile Ala Ile Phe Tyr

65 70 75 80

Asp Pro Gly Glu Phe Pro Ala Leu Leu Pro Leu Asn Tyr Gly Lys Tyr

85 90 95

Lys Ile Arg Asn Gly Gly Val Pro Gln Glu Gly Asn Ile Thr Ile His

100 105 110

Leu Gln Arg Phe Ile Glu Tyr Leu Asp Lys Thr Tyr Pro Asn Arg Asn

115 120 125

Phe Ser Gly Ile Gly Val Ile Asp Phe Glu Arg Trp Arg Pro Ile Phe

130 135 140

Arg Gln Asn Trp Gly Asn Met Lys Ile Tyr Lys Asn Phe Ser Ile Asp

145 150 155 160

Leu Val Arg Lys Glu His Pro Phe Trp Asn Lys Lys Met Ile Glu Leu

165 170 175

Glu Ala Ser Lys Arg Phe Glu Lys Tyr Ala Arg Leu Phe Met Glu Glu

180 185 190

Thr Leu Lys Leu Ala Lys Lys Thr Arg Lys Gln Ala Asp Trp Gly Tyr

195 200 205

Tyr Gly Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn Met Ser Pro Thr Asn Phe Val Pro

210 215 220

Asp Cys Asp Val Thr Ala Arg Asp Glu Asn Asn Glu Met Ser Trp Leu

225 230 235 240

Phe Asn Asn Gln Asn Val Leu Leu Pro Ser Val Tyr Ile Arg Arg Glu

245 250 255

Leu Thr Pro Asp Gln Arg Ile Gly Leu Val Gln Gly Arg Val Lys Glu

260 265 270

Ala Val Arg Ile Ser Asn Lys Leu Lys His Ser Pro Lys Val Phe Ser

275 280 285

Tyr Trp Trp Tyr Val Tyr Gln Asp Glu Thr Asn Thr Phe Leu Thr Glu

290 295 300

Thr Asp Val Lys Lys Thr Phe Gln Glu Ile Val Ile Asn Gly Gly Asp

305 310 315 320

Gly Ile Ile Ile Trp Gly Ser Ser Ser Asp Val Asn Ser Leu Ser Lys

325 330 335

Cys Thr Arg Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Thr Val Leu Gly Pro Ile Ala

340 345 350

Val Asn Val Thr Glu Ala Val Asn

355 360

<210> 42

<211> 428

<212> БЕЛОК

<213> Vespa magnifica

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Vespa magnifica с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронидазы (HYAL), происходящая из

Vespa magnifica с N-концевым сигналом секреции и C-концевым якорным сигналом

<400> 42

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala Asp Ser Cys Gly Ser Asn Cys Glu Lys Ser Glu Arg

20 25 30

Pro Lys Arg Val Phe Asn Ile Tyr Trp Asn Val Pro Thr Phe Met Cys

35 40 45

His Gln Tyr Gly Leu Tyr Phe Asp Glu Val Thr Asn Phe Asn Ile Lys

50 55 60

His Asn Ser Lys Asp Asn Phe Gln Gly Asp Lys Ile Ala Ile Phe Tyr

65 70 75 80

Asp Pro Gly Glu Phe Pro Ala Leu Leu Pro Leu Asn Tyr Gly Lys Tyr

85 90 95

Lys Ile Arg Asn Gly Gly Val Pro Gln Glu Gly Asn Ile Thr Ile His

100 105 110

Leu Gln Arg Phe Ile Glu Tyr Leu Asp Lys Thr Tyr Pro Asn Arg Asn

115 120 125

Phe Ser Gly Ile Gly Val Ile Asp Phe Glu Arg Trp Arg Pro Ile Phe

130 135 140

Arg Gln Asn Trp Gly Asn Met Lys Ile Tyr Lys Asn Phe Ser Ile Asp

145 150 155 160

Leu Val Arg Lys Glu His Pro Phe Trp Asn Lys Lys Met Ile Glu Leu

165 170 175

Glu Ala Ser Lys Arg Phe Glu Lys Tyr Ala Arg Leu Phe Met Glu Glu

180 185 190

Thr Leu Lys Leu Ala Lys Lys Thr Arg Lys Gln Ala Asp Trp Gly Tyr

195 200 205

Tyr Gly Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn Met Ser Pro Thr Asn Phe Val Pro

210 215 220

Asp Cys Asp Val Thr Ala Arg Asp Glu Asn Asn Glu Met Ser Trp Leu

225 230 235 240

Phe Asn Asn Gln Asn Val Leu Leu Pro Ser Val Tyr Ile Arg Arg Glu

245 250 255

Leu Thr Pro Asp Gln Arg Ile Gly Leu Val Gln Gly Arg Val Lys Glu

260 265 270

Ala Val Arg Ile Ser Asn Lys Leu Lys His Ser Pro Lys Val Phe Ser

275 280 285

Tyr Trp Trp Tyr Val Tyr Gln Asp Glu Thr Asn Thr Phe Leu Thr Glu

290 295 300

Thr Asp Val Lys Lys Thr Phe Gln Glu Ile Val Ile Asn Gly Gly Asp

305 310 315 320

Gly Ile Ile Ile Trp Gly Ser Ser Ser Asp Val Asn Ser Leu Ser Lys

325 330 335

Cys Thr Arg Leu Arg Glu Tyr Leu Leu Thr Val Leu Gly Pro Ile Ala

340 345 350

Val Asn Val Thr Glu Ala Val Asn Ala Ile Ser Gln Ile Thr Asp Gly

355 360 365

Gln Ile Gln Ala Thr Thr Thr Ala Thr Thr Glu Ala Thr Thr Thr Ala

370 375 380

Ala Pro Ser Ser Thr Val Glu Thr Val Ser Pro Ser Ser Thr Glu Thr

385 390 395 400

Ile Ser Gln Gln Thr Glu Asn Gly Ala Ala Lys Ala Ala Val Gly Met

405 410 415

Gly Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Ala Met Leu Leu

420 425

<210> 43

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность последовательности сигнала секреции,

добавленного в N-конце

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность последовательности сигнала секреции,

добавленного в N-конце

<400> 43

atgcaattta gcacagtcgc atcagtagcc ttcgttgcct tggccaactt cgtggcagca 60

<210> 44

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Аминоксилотная последовательность последовательности сигнала секреции,

добавленного в N-конце

<220>

<223> Аминоксилотная последовательность последовательности сигнала секреции,

добавленного в N-конце

<400> 44

Met Gln Phe Ser Thr Val Ala Ser Val Ala Phe Val Ala Leu Ala Asn

1 5 10 15

Phe Val Ala Ala

20

<210> 45

<211> 213

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность якорной последовательности, добавленной

в C-конце

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность якорной последовательности, добавленной

в C-конце

<400> 45

ggatccgcca tttctcaaat cactgacggt caaatccaag ctactaccac tgctaccacc 60

gaagctacca ccactgctgc cccatcttcc accgttgaaa ctgtttctcc atccagcacc 120

gaaactatct ctcaacaaac tgaaaatggt gctgctaagg ccgctgtcgg tatgggtgcc 180

ggtgctctag ctgctgctgc tatgttgtta taa 213

<210> 46

<211> 68

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Аминоксилотная последовательность якорной последовательности, добавленной

в C-конце

<220>

<223> Аминоксилотная последовательность якорной последовательности, добавленной

в C-конце

<400> 46

Ala Ile Ser Gln Ile Thr Asp Gly Gln Ile Gln Ala Thr Thr Thr Ala

1 5 10 15

Thr Thr Glu Ala Thr Thr Thr Ala Ala Pro Ser Ser Thr Val Glu Thr

20 25 30

Val Ser Pro Ser Ser Thr Glu Thr Ile Ser Gln Gln Thr Glu Asn Gly

35 40 45

Ala Ala Lys Ala Ala Val Gly Met Gly Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala

50 55 60

Ala Met Leu Leu

65

<210> 47

<211> 2154

<212> ДНК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы

(GFA1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы

(GFA1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 47

atgtgtggta tctttggtta ctgcaattat ctagtggaaa gatccagagg agaaattatc 60

gacaccttag tggatggttt acaaagatta gaatatagag gctatgattc caccggtatt 120

gctatcgatg gtgacgaagc tgattctact ttcatctata agcaaatcgg taaagtgagt 180

gctttgaaag aggagattac taagcaaaat ccgaacagag acgttacttt tgtctctcat 240

tgtggtattg cgcatactag atgggctact cacggtcgac cagaacaagt taactgtcac 300

cctcaaagat ctgacccaga agaccaattt gtggtcgttc ataatggtat catcacaaat 360

tttagagaac tgaagactct tttaattaac aaaggttata aattcgaaag tgataccgat 420

accgagtgta ttgctaaact atatttgcat ttatacaata caaatttaca aaatgggcat 480

gacttagatt tccacgaatt aaccaagcta gttcttttag aactagaagg ttcatacggg 540

ttattatgta aatcttgtca ctatcctaat gaggttatcg ccactagaaa agggtcccct 600

ttactgattg gtgtcaaatc tgaaaaaaaa ctaaaagtcg acttcgtgga tgtggaattt 660

cccgaagaaa acgctggtca accggaaatt ccattgaaat ctaacaacaa atcatttggc 720

ttgggcccaa agaaagctcg tgaatttgaa gctggttccc aaaatgccaa tttactacca 780

attgccgcca atgaatttaa cttgagacat tctcaatcca gggctttcct atcagaagat 840

ggatctccaa caccggtgga attttttgtt tcttcggatg cggcatctgt tgttaaacat 900

accaagaagg tgctattttt agaagatgac gatttggctc atatttacga tggtgagtta 960

catattcata gatctagaag agaagtaggc gcatcaatga caaggtccat tcaaacttta 1020

gagatggagt tagctcagat catgaagggc ccttacgacc attttatgca aaaggaaatc 1080

tatgagcaac cagaatctac tttcaatact atgagaggta gaatcgacta tgaaaataat 1140

aaagtgatat tgggtggttt aaaggcatgg ttaccagttg tcagaagagc acggagactg 1200

atcatgatcg catgcggtac ttcttatcat tcatgtttgg ctactcgtgc tatcttcgaa 1260

gaattatcag atatcccagt tagtgtggaa ttagcgtctg actttctgga cagaaaatgc 1320

cctgtcttca gagacgatgt atgcgtgttt gtttcacaaa gtggtgaaac tgcggatacc 1380

atgctggctc taaattattg tttagaaaga ggagccttaa ctgtcggaat tgttaacagt 1440

gttggttctt ctatctctcg tgtcacccac tgtggtgttc atattaacgc tggtcctgaa 1500

attggtgttg cctctacaaa agcttatact tcccagtata ttgccttagt gatgtttgct 1560

ctatcgctgt cagatgaccg tgtatcgaaa atagacagaa gaattgaaat cattcaaggc 1620

ttgaagttaa tcccgggcca aattaagcag gtattaaagc tggaaccaag aataaaaaag 1680

ctctgtgcga ctgaattaaa ggatcaaaaa tctctattgt tattgggtag aggttaccaa 1740

tttgctgctg ctctggaagg tgctttgaag atcaaagaaa tttcttatat gcattctgaa 1800

ggtgttttgg caggtgagtt gaagcacggt gtcttggcct tggtggacga aaacttgcca 1860

atcattgctt ttggtaccag agactctcta ttccctaaag tagtttcctc tattgagcaa 1920

gttactgtaa gaaagggcca tccaattatt atttgtaacg aaaatgatga agtgtgggcg 1980

caaaaatcta aatcaatcga cctgcaaacc ttagaagttc cacaaactgt tgattgttta 2040

caaggtctaa ttaatattat tccattacaa ctaatgtcat attggttggc tgttaataaa 2100

gggattgatg ttgattttcc aagaaacttg gctaaatctg ttaccgtcga ataa 2154

<210> 48

<211> 1788

<212> ДНК

<213> Вирус хлореллы Paramecium bursaria 1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность глутамин-фруктозо-6-

фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящая из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность глутамин-фруктозо-6-

фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящая из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

<400> 48

atgtgcggga tcttcggtgc tgtgtcgaac aataatagca tagaagtttc catcaagggt 60

atacagaagc tagagtaccg cgggtacgat tcgtgtggaa tagcctatac agacggaggc 120

gccattgaac ggatcaggtc aatagatggg atcgacgact taaggaagaa aacaataaca 180

gagtcttccc cggtagctat cgctcattca aggtggagta ccactgggat tccaagtgtt 240

gtgaacgccc acccgcacat ctctcggggc acgtctggat gcgagtcgcg cattgcagtc 300

gtacacaatg gcattattga aaattaccag cagatccgca agtacttgat aaatcttggg 360

tatactttcg attcacagac cgacacggaa gtcattgctc atctaataga ctcgcagtat 420

aacgggaaca tcctgcacac cgtccaaatg gcagttaagc acctcaaagg aagctacgcc 480

atagcagtca tgtgccataa ggagtccggg aagatcgtgg tggcaaaaca gaagagtccg 540

ttggtattgg gtataggaag cgacggagct tattatatcg catcggacgt attggctctt 600

cccactaaca aagtggtcta cataagtgac ggattctctg ctgagttaag tcctggatcg 660

atgactatct atgatctgga tggcaataag gtagaatacg aggtggaaga cgttgaaatg 720

gagcagacgt cgatgtcttt agataacttt gatcactaca tgatcaaaga gatcaatgaa 780

cagccgatat caattctcaa tactattaag aacaaaggat tctatgcaga gatatttggt 840

gatctagcac atgaaatatt tcagaagatc gacaatatat tgattctagc ctgcggaact 900

tcgtatcatg caggtctcgt cgggaagcaa tggatagaga ccatctcacg catcccggtg 960

gatgttcata ttgcaagcga gtatgagccg acaattccac gagccaatac acttgtgata 1020

acgattagtc aaagcggcga gactgcggat acaatcgcag cccttcaacg agcgcaaaac 1080

gcaggaatga tatacacttt gtgtatctgc aacagcccca agtcaactct agtgcgcgag 1140

tcgataatga aatacataac caaatgcggt tcagaagttt ctgttgccag tactaaagca 1200

tttacgtcgc aacttgtggt gttgtatatg cttgcgaacg ttcttgcgaa caaaactgat 1260

gatctgctag gggatcttcc tcaagctatc gagagagtaa tctgtcttac taatgacgaa 1320

atgaagcgtt gggcggatga aatttgtact gccaaaagtg ccatcttctt agggagagga 1380

ctgaacgcac ctgtagcatt tgagggcgcg ctaaagttga aggaaatctc atatatccat 1440

gccgagggtt tcctcggtgg agagttgaag catgggccgc tggctttgtt ggacgataag 1500

atccctgtaa tcgtgactgt tgctgaccac gcttatttgg atcacattaa ggctaacatc 1560

gacgaggtat tggcacgaaa cgttaccgta tacgcgatcg tcgatcagta tgttaatatt 1620

gaaccacagg agcgactgca tgtagtaaaa gtgccgtttg tgagtaaaga gttttctccc 1680

atcatccaca caattccgat gcaattgtta tcgtattatg tcgcgatcaa gctgggcaag 1740

aacgttgaca agccacgtaa cctggcgaaa agtgttacaa cattctaa 1788

<210> 49

<211> 1788

<212> ДНК

<213> Вирус хлореллы Paramecium bursaria 1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность глутамин-фруктозо-6-

фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящая из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность глутамин-фруктозо-6-

фосфатамидотрансферазы (GFA1), происходящая из вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

<400> 49

atgtgtggca tctttggagc agtgtcaaac aacaactcta tcgaggtgtc aatcaagggt 60

attcagaagc tagaatatcg tgggtatgat tcgtgcggta ttgcgtatac agatgggggt 120

gcgattgagc gtatacgttc tattgacggc attgacgatc tgcgtaagaa aacaatcaca 180

gaatcatcac cagtggccat tgctcactcg cggtggagca ccactggaat tccatcagtg 240

gtgaacgcac atcctcatat ttctcgcgga accagtgggt gtgagtctcg tatcgcggta 300

gtccacaacg gtatcattga aaactatcag cagatccgaa aatatctcat caatcttggt 360

tatacgtttg atagtcaaac ggacacagag gtcattgcgc atttgattga ttctcagtac 420

aatgggaata tcttgcacac cgtccaaatg gctgtcaagc acctgaaggg ctcttatgcc 480

attgcagtta tgtgtcataa agagtctggt aaaatagtcg tggcgaaaca gaagtcaccc 540

ctcgtacttg gaatcggctc agatggtgct tactacatcg cttcggacgt gctggcgctg 600

ccgacaaata aagttgttta tatttcagac ggtttctccg cagaactatc tccagggagt 660

atgaccattt acgatcttga tggaaataaa gtagaatatg aagtagagga cgttgaaatg 720

gaacaaacta gtatgtctct cgataacttt gatcattaca tgattaagga aattaatgag 780

caaccaatca gtattctaaa cactataaaa aataaagggt tctatgcaga aatattcggt 840

gatttggctc atgaaatctt ccaaaaaata gacaacatcc tgatactggc ttgtggtaca 900

agttatcacg ccggtcttgt aggaaaacag tggatagaga ccatctctag aatccccgtg 960

gatgttcaca tcgcgagtga atacgaacct actattccga gagcgaacac attggtaatc 1020

actatttcac agtcgggtga aactgcggac acgatagcgg ctttgcaacg ggcccaaaac 1080

gccgggatga tttatacatt gtgtatttgc aattcaccaa agagcactct tgttcgtgag 1140

agcattatga agtacatcac gaaatgtggt tctgaggtgt cagtggcatc aacgaaggcg 1200

tttacttctc agctcgtagt actgtacatg ctggcaaacg tattggcaaa taaaaccgat 1260

gatttgctgg gagacctccc acaggcaata gaacgggtaa tttgtttgac aaatgacgaa 1320

atgaaacgat gggccgacga aatttgcact gcgaaatccg cgatcttcct gggaagagga 1380

ctaaacgcac cagttgcctt tgagggagcg ttgaagctca aagaaatctc ttacattcat 1440

gcagagggct tcctgggagg tgagttgaaa cacggccccc tcgcactcct tgatgacaag 1500

attcctgtta tcgtaaccgt agcagatcat gcttatttgg accatatcaa agcaaatatc 1560

gacgaagtgc ttgcgaggaa cgttacggta tacgccatag tagaccagta tgtgaacatc 1620

gagccccagg aacgccttca cgtcgtcaag gttccgtttg tatccaaaga attttctccg 1680

ataattcaca ctatcccgat gcaactgctt tcgtattacg tggcaattaa gcttggaaag 1740

aacgttgaca aaccaaggaa tcttgcaaaa tccgtgacta ccttttaa 1788

<210> 50

<211> 717

<212> БЕЛОК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы

(GFA1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы

(GFA1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 50

Met Cys Gly Ile Phe Gly Tyr Cys Asn Tyr Leu Val Glu Arg Ser Arg

1 5 10 15

Gly Glu Ile Ile Asp Thr Leu Val Asp Gly Leu Gln Arg Leu Glu Tyr

20 25 30

Arg Gly Tyr Asp Ser Thr Gly Ile Ala Ile Asp Gly Asp Glu Ala Asp

35 40 45

Ser Thr Phe Ile Tyr Lys Gln Ile Gly Lys Val Ser Ala Leu Lys Glu

50 55 60

Glu Ile Thr Lys Gln Asn Pro Asn Arg Asp Val Thr Phe Val Ser His

65 70 75 80

Cys Gly Ile Ala His Thr Arg Trp Ala Thr His Gly Arg Pro Glu Gln

85 90 95

Val Asn Cys His Pro Gln Arg Ser Asp Pro Glu Asp Gln Phe Val Val

100 105 110

Val His Asn Gly Ile Ile Thr Asn Phe Arg Glu Leu Lys Thr Leu Leu

115 120 125

Ile Asn Lys Gly Tyr Lys Phe Glu Ser Asp Thr Asp Thr Glu Cys Ile

130 135 140

Ala Lys Leu Tyr Leu His Leu Tyr Asn Thr Asn Leu Gln Asn Gly His

145 150 155 160

Asp Leu Asp Phe His Glu Leu Thr Lys Leu Val Leu Leu Glu Leu Glu

165 170 175

Gly Ser Tyr Gly Leu Leu Cys Lys Ser Cys His Tyr Pro Asn Glu Val

180 185 190

Ile Ala Thr Arg Lys Gly Ser Pro Leu Leu Ile Gly Val Lys Ser Glu

195 200 205

Lys Lys Leu Lys Val Asp Phe Val Asp Val Glu Phe Pro Glu Glu Asn

210 215 220

Ala Gly Gln Pro Glu Ile Pro Leu Lys Ser Asn Asn Lys Ser Phe Gly

225 230 235 240

Leu Gly Pro Lys Lys Ala Arg Glu Phe Glu Ala Gly Ser Gln Asn Ala

245 250 255

Asn Leu Leu Pro Ile Ala Ala Asn Glu Phe Asn Leu Arg His Ser Gln

260 265 270

Ser Arg Ala Phe Leu Ser Glu Asp Gly Ser Pro Thr Pro Val Glu Phe

275 280 285

Phe Val Ser Ser Asp Ala Ala Ser Val Val Lys His Thr Lys Lys Val

290 295 300

Leu Phe Leu Glu Asp Asp Asp Leu Ala His Ile Tyr Asp Gly Glu Leu

305 310 315 320

His Ile His Arg Ser Arg Arg Glu Val Gly Ala Ser Met Thr Arg Ser

325 330 335

Ile Gln Thr Leu Glu Met Glu Leu Ala Gln Ile Met Lys Gly Pro Tyr

340 345 350

Asp His Phe Met Gln Lys Glu Ile Tyr Glu Gln Pro Glu Ser Thr Phe

355 360 365

Asn Thr Met Arg Gly Arg Ile Asp Tyr Glu Asn Asn Lys Val Ile Leu

370 375 380

Gly Gly Leu Lys Ala Trp Leu Pro Val Val Arg Arg Ala Arg Arg Leu

385 390 395 400

Ile Met Ile Ala Cys Gly Thr Ser Tyr His Ser Cys Leu Ala Thr Arg

405 410 415

Ala Ile Phe Glu Glu Leu Ser Asp Ile Pro Val Ser Val Glu Leu Ala

420 425 430

Ser Asp Phe Leu Asp Arg Lys Cys Pro Val Phe Arg Asp Asp Val Cys

435 440 445

Val Phe Val Ser Gln Ser Gly Glu Thr Ala Asp Thr Met Leu Ala Leu

450 455 460

Asn Tyr Cys Leu Glu Arg Gly Ala Leu Thr Val Gly Ile Val Asn Ser

465 470 475 480

Val Gly Ser Ser Ile Ser Arg Val Thr His Cys Gly Val His Ile Asn

485 490 495

Ala Gly Pro Glu Ile Gly Val Ala Ser Thr Lys Ala Tyr Thr Ser Gln

500 505 510

Tyr Ile Ala Leu Val Met Phe Ala Leu Ser Leu Ser Asp Asp Arg Val

515 520 525

Ser Lys Ile Asp Arg Arg Ile Glu Ile Ile Gln Gly Leu Lys Leu Ile

530 535 540

Pro Gly Gln Ile Lys Gln Val Leu Lys Leu Glu Pro Arg Ile Lys Lys

545 550 555 560

Leu Cys Ala Thr Glu Leu Lys Asp Gln Lys Ser Leu Leu Leu Leu Gly

565 570 575

Arg Gly Tyr Gln Phe Ala Ala Ala Leu Glu Gly Ala Leu Lys Ile Lys

580 585 590

Glu Ile Ser Tyr Met His Ser Glu Gly Val Leu Ala Gly Glu Leu Lys

595 600 605

His Gly Val Leu Ala Leu Val Asp Glu Asn Leu Pro Ile Ile Ala Phe

610 615 620

Gly Thr Arg Asp Ser Leu Phe Pro Lys Val Val Ser Ser Ile Glu Gln

625 630 635 640

Val Thr Ala Arg Lys Gly His Pro Ile Ile Ile Cys Asn Glu Asn Asp

645 650 655

Glu Val Trp Ala Gln Lys Ser Lys Ser Ile Asp Leu Gln Thr Leu Glu

660 665 670

Val Pro Gln Thr Val Asp Cys Leu Gln Gly Leu Ile Asn Ile Ile Pro

675 680 685

Leu Gln Leu Met Ser Tyr Trp Leu Ala Val Asn Lys Gly Ile Asp Val

690 695 700

Asp Phe Pro Arg Asn Leu Ala Lys Ser Val Thr Val Glu

705 710 715

<210> 51

<211> 595

<212> БЕЛОК

<213> Вирус хлореллы Paramecium bursaria 1

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы

(GFA1), происходящая из Вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы

(GFA1), происходящая из Вируса хлореллы 1 (PBCV-1)

<400> 51

Met Cys Gly Ile Phe Gly Ala Val Ser Asn Asn Asn Ser Ile Glu Val

1 5 10 15

Ser Ile Lys Gly Ile Gln Lys Leu Glu Tyr Arg Gly Tyr Asp Ser Cys

20 25 30

Gly Ile Ala Tyr Thr Asp Gly Gly Ala Ile Glu Arg Ile Arg Ser Ile

35 40 45

Asp Gly Ile Asp Asp Leu Arg Lys Lys Thr Ile Thr Glu Ser Ser Pro

50 55 60

Val Ala Ile Ala His Ser Arg Trp Ser Thr Thr Gly Ile Pro Ser Val

65 70 75 80

Val Asn Ala His Pro His Ile Ser Arg Gly Thr Ser Gly Cys Glu Ser

85 90 95

Arg Ile Ala Val Val His Asn Gly Ile Ile Glu Asn Tyr Gln Gln Ile

100 105 110

Arg Lys Tyr Leu Ile Asn Leu Gly Tyr Thr Phe Asp Ser Gln Thr Asp

115 120 125

Thr Glu Val Ile Ala His Leu Ile Asp Ser Gln Tyr Asn Gly Asn Ile

130 135 140

Leu His Thr Val Gln Met Ala Val Lys His Leu Lys Gly Ser Tyr Ala

145 150 155 160

Ile Ala Val Met Cys His Lys Glu Ser Gly Lys Ile Val Val Ala Lys

165 170 175

Gln Lys Ser Pro Leu Val Leu Gly Ile Gly Ser Asp Gly Ala Tyr Tyr

180 185 190

Ile Ala Ser Asp Val Leu Ala Leu Pro Thr Asn Lys Val Val Tyr Ile

195 200 205

Ser Asp Gly Phe Ser Ala Glu Leu Ser Pro Gly Ser Met Thr Ile Tyr

210 215 220

Asp Leu Asp Gly Asn Lys Val Glu Tyr Glu Val Glu Asp Val Glu Met

225 230 235 240

Glu Gln Thr Ser Met Ser Leu Asp Asn Phe Asp His Tyr Met Ile Lys

245 250 255

Glu Ile Asn Glu Gln Pro Ile Ser Ile Leu Asn Thr Ile Lys Asn Lys

260 265 270

Gly Phe Tyr Ala Glu Ile Phe Gly Asp Leu Ala His Glu Ile Phe Gln

275 280 285

Lys Ile Asp Asn Ile Leu Ile Leu Ala Cys Gly Thr Ser Tyr His Ala

290 295 300

Gly Leu Val Gly Lys Gln Trp Ile Glu Thr Ile Ser Arg Ile Pro Val

305 310 315 320

Asp Val His Ile Ala Ser Glu Tyr Glu Pro Thr Ile Pro Arg Ala Asn

325 330 335

Thr Leu Val Ile Thr Ile Ser Gln Ser Gly Glu Thr Ala Asp Thr Ile

340 345 350

Ala Ala Leu Gln Arg Ala Gln Asn Ala Gly Met Ile Tyr Thr Leu Cys

355 360 365

Ile Cys Asn Ser Pro Lys Ser Thr Leu Val Arg Glu Ser Ile Met Lys

370 375 380

Tyr Ile Thr Lys Cys Gly Ser Glu Val Ser Val Ala Ser Thr Lys Ala

385 390 395 400

Phe Thr Ser Gln Leu Val Val Leu Tyr Met Leu Ala Asn Val Leu Ala

405 410 415

Asn Lys Thr Asp Asp Leu Leu Gly Asp Leu Pro Gln Ala Ile Glu Arg

420 425 430

Val Ile Cys Leu Thr Asn Asp Glu Met Lys Arg Trp Ala Asp Glu Ile

435 440 445

Cys Thr Ala Lys Ser Ala Ile Phe Leu Gly Arg Gly Leu Asn Ala Pro

450 455 460

Val Ala Phe Glu Gly Ala Leu Lys Leu Lys Glu Ile Ser Tyr Ile His

465 470 475 480

Ala Glu Gly Phe Leu Gly Gly Glu Leu Lys His Gly Pro Leu Ala Leu

485 490 495

Leu Asp Asp Lys Ile Pro Val Ile Val Thr Val Ala Asp His Ala Tyr

500 505 510

Leu Asp His Ile Lys Ala Asn Ile Asp Glu Val Leu Ala Arg Asn Val

515 520 525

Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Gln Tyr Val Asn Ile Glu Pro Gln Glu

530 535 540

Arg Leu His Val Val Lys Val Pro Phe Val Ser Lys Glu Phe Ser Pro

545 550 555 560

Ile Ile His Thr Ile Pro Met Gln Leu Leu Ser Tyr Tyr Val Ala Ile

565 570 575

Lys Leu Gly Lys Asn Val Asp Lys Pro Arg Asn Leu Ala Lys Ser Val

580 585 590

Thr Thr Phe

595

<210> 52

<211> 1434

<212> ДНК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидая последовательность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1),

происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидая последовательность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1),

происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 52

atgactgaca caaaacagct attcattgaa gccggacaaa gtcaactttt ccacaattgg 60

gaaagcttgt ctcgcaaaga ccaagaagaa ttgctttcaa acctggagca aatatcttcc 120

aagaggtccc ctgcaaaact actggaagac tgtcaaaatg ctattaaatt ctcactagct 180

aactcttcta aggatactgg cgtcgaaatt tcaccattgc cccctacttc gtacgagtcg 240

cttattggca acagtaagaa agaaaatgaa tactggcgtt taggccttga agctattggc 300

aagggtgaag tcgcagtgat tttaatggct ggcggacaag gtacgcggtt aggatcctct 360

caaccaaagg gctgttacga cattggattg ccttctaaga aatctctttt tcaaattcaa 420

gctgaaaagt tgatcaggtt gcaagatatg gtaaaggaca aaaaggtaga aattccttgg 480

tatattatga catcaggccc cactagagcg gctactgagg catactttca agaacacaat 540

tattttggct tgaataaaga acaaattacg ttcttcaacc agggaaccct gcctgccttt 600

gatttaaccg ggaagcattt cctaatgaaa gacccagtaa acctatctca atcaccagat 660

ggaaatggtg gactctaccg tgccatcaag gaaaacaagt tgaacgaaga ctttgatagg 720

agaggaatca agcatgttta catgtactgt gtcgataatg tcctatctaa aatcgcagac 780

cctgtattta ttggttttgc catcaagcat ggcttcgaac tggccaccaa agccgttaga 840

aagagagatg cgcatgaatc agttgggtta attgctacta aaaacgagaa accatgtgtc 900

atagaatatt ctgaaatttc caatgaattg gctgaagcaa aggataaaga tggcttatta 960

aaactacgcg caggcaacat tgtaaatcat tattacctag tggatttact aaaacgtgat 1020

ttggatcagt ggtgtgagaa tatgccatat cacattgcga agaagaaaat tccagcttat 1080

gatagtgtta ccggcaagta cactaagcct accgaaccaa acggtataaa attagagcaa 1140

ttcatatttg atgtctttga cactgtacca ctgaacaagt ttgggtgctt agaagtagat 1200

agatgcaaag aattttcacc tttaaaaaac ggtcctggtt ctaagaacga taatcctgag 1260

accagcagac tagcatattt gaaactagga acctcgtggt tggaagatgc aggcgctatt 1320

gtaaaagatg gggtactagt cgaagtttcc agcaaattga gttatgcagg tgaaaatcta 1380

tcccagttca aaggtaaagt ctttgacaga agtggtatag tattagaaaa ataa 1434

<210> 53

<211> 477

<212> БЕЛОК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы

(QRI1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы

(QRI1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 53

Met Thr Asp Thr Lys Gln Leu Phe Ile Glu Ala Gly Gln Ser Gln Leu

1 5 10 15

Phe His Asn Trp Glu Ser Leu Ser Arg Lys Asp Gln Glu Glu Leu Leu

20 25 30

Ser Asn Leu Glu Gln Ile Ser Ser Lys Arg Ser Pro Ala Lys Leu Leu

35 40 45

Glu Asp Cys Gln Asn Ala Ile Lys Phe Ser Leu Ala Asn Ser Ser Lys

50 55 60

Asp Thr Gly Val Glu Ile Ser Pro Leu Pro Pro Thr Ser Tyr Glu Ser

65 70 75 80

Leu Ile Gly Asn Ser Lys Lys Glu Asn Glu Tyr Trp Arg Leu Gly Leu

85 90 95

Glu Ala Ile Gly Lys Gly Glu Val Ala Val Ile Leu Met Ala Gly Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Arg Leu Gly Ser Ser Gln Pro Lys Gly Cys Tyr Asp Ile

115 120 125

Gly Leu Pro Ser Lys Lys Ser Leu Phe Gln Ile Gln Ala Glu Lys Leu

130 135 140

Ile Arg Leu Gln Asp Met Val Lys Asp Lys Lys Val Glu Ile Pro Trp

145 150 155 160

Tyr Ile Met Thr Ser Gly Pro Thr Arg Ala Ala Thr Glu Ala Tyr Phe

165 170 175

Gln Glu His Asn Tyr Phe Gly Leu Asn Lys Glu Gln Ile Thr Phe Phe

180 185 190

Asn Gln Gly Thr Leu Pro Ala Phe Asp Leu Thr Gly Lys His Phe Leu

195 200 205

Met Lys Asp Pro Val Asn Leu Ser Gln Ser Pro Asp Gly Asn Gly Gly

210 215 220

Leu Tyr Arg Ala Ile Lys Glu Asn Lys Leu Asn Glu Asp Phe Asp Arg

225 230 235 240

Arg Gly Ile Lys His Val Tyr Met Tyr Cys Val Asp Asn Val Leu Ser

245 250 255

Lys Ile Ala Asp Pro Val Phe Ile Gly Phe Ala Ile Lys His Gly Phe

260 265 270

Glu Leu Ala Thr Lys Ala Val Arg Lys Arg Asp Ala His Glu Ser Val

275 280 285

Gly Leu Ile Ala Thr Lys Asn Glu Lys Pro Cys Val Ile Glu Tyr Ser

290 295 300

Glu Ile Ser Asn Glu Leu Ala Glu Ala Lys Asp Lys Asp Gly Leu Leu

305 310 315 320

Lys Leu Arg Ala Gly Asn Ile Val Asn His Tyr Tyr Leu Val Asp Leu

325 330 335

Leu Lys Arg Asp Leu Asp Gln Trp Cys Glu Asn Met Pro Tyr His Ile

340 345 350

Ala Lys Lys Lys Ile Pro Ala Tyr Asp Ser Val Thr Gly Lys Tyr Thr

355 360 365

Lys Pro Thr Glu Pro Asn Gly Ile Lys Leu Glu Gln Phe Ile Phe Asp

370 375 380

Val Phe Asp Thr Val Pro Leu Asn Lys Phe Gly Cys Leu Glu Val Asp

385 390 395 400

Arg Cys Lys Glu Phe Ser Pro Leu Lys Asn Gly Pro Gly Ser Lys Asn

405 410 415

Asp Asn Pro Glu Thr Ser Arg Leu Ala Tyr Leu Lys Leu Gly Thr Ser

420 425 430

Trp Leu Glu Asp Ala Gly Ala Ile Val Lys Asp Gly Val Leu Val Glu

435 440 445

Val Ser Ser Lys Leu Ser Tyr Ala Gly Glu Asn Leu Ser Gln Phe Lys

450 455 460

Gly Lys Val Phe Asp Arg Ser Gly Ile Val Leu Glu Lys

465 470 475

<210> 54

<211> 1713

<212> ДНК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1),

происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1),

происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 54

atgtcacttc taatagattc tgtaccaaca gttgcttata aggaccaaaa accgggtact 60

tcaggtttac gtaagaagac caaggttttc atggatgagc ctcattatac tgagaacttc 120

attcaagcaa caatgcaatc tatccctaat ggctcagagg gaaccacttt agttgttgga 180

ggagatggtc gtttctacaa cgatgttatc atgaacaaga ttgccgcagt aggtgctgca 240

aacggtgtca gaaagttagt cattggtcaa ggcggtttac tttcaacacc agctgcttct 300

catataatta gaacatacga ggaaaagtgt accggtggtg gtatcatatt aactgcctca 360

cacaacccag gcggtccaga gaatgattta ggtatcaagt ataatttacc taatggtggg 420

ccagctccag agagtgtcac taacgctatc tgggaagcgt ctaaaaaatt aactcactat 480

aaaattataa agaacttccc caagttgaat ttgaacaagc ttggtaaaaa ccaaaaatat 540

ggcccattgt tagtggacat aattgatcct gccaaagcat acgttcaatt tctgaaggaa 600

atttttgatt ttgacttaat taaaagcttc ttagcgaaac agcgcaaaga caaagggtgg 660

aagttgttgt ttgactcctt aaatggtatt acaggaccat atggtaaggc tatatttgtt 720

gatgaatttg gtttaccggc agaggaagtt cttcaaaatt ggcacccttt acctgatttc 780

ggcggtttac atcccgatcc gaatctaacc tatgcacgaa ctcttgttga cagggttgac 840

cgcgaaaaaa ttgcctttgg agcagcctcc gatggtgatg gtgataggaa tatgatttac 900

ggttatggcc ctgctttcgt ttcgccaggt gattctgttg ccattattgc cgaatatgca 960

cccgaaattc catacttcgc caaacaaggt atttatggct tggcacgttc atttcctaca 1020

tcctcagcca ttgatcgtgt tgcagcaaaa aagggattaa gatgttacga agttccaacc 1080

ggctggaaat tcttctgtgc cttatttgat gctaaaaagc tatcaatctg tggtgaagaa 1140

tccttcggta caggttccaa tcatatcaga gaaaaggacg gtctatgggc cattattgct 1200

tggttaaata tcttggctat ctaccatagg cgtaaccctg aaaaggaagc ttcgatcaaa 1260

actattcagg acgaattttg gaacgagtat ggccgtactt tcttcacaag atacgattac 1320

gaacatatcg aatgcgagca ggccgaaaaa gttgtagctc ttttgagtga atttgtatca 1380

aggccaaacg tttgtggctc ccacttccca gctgatgagt ctttaaccgt tatcgattgt 1440

ggtgattttt cgtatagaga tctagatggc tccatctctg aaaatcaagg ccttttcgta 1500

aagttttcga atgggactaa atttgttttg aggttatccg gcacaggcag ttctggtgca 1560

acaataagat tatacgtaga aaagtatact gataaaaagg agaactatgg ccaaacagct 1620

gacgtcttct tgaaacccgt catcaactcc attgtaaaat tcttaagatt taaagaaatt 1680

ttaggaacag acgaaccaac agtccgcaca tag 1713

<210> 55

<211> 570

<212> БЕЛОК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), происходящая из

Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1), происходящая из

Saccharomyces cerevisiae

<400> 55

Met Ser Leu Leu Ile Asp Ser Val Pro Thr Val Ala Tyr Lys Asp Gln

1 5 10 15

Lys Pro Gly Thr Ser Gly Leu Arg Lys Lys Thr Lys Val Phe Met Asp

20 25 30

Glu Pro His Tyr Thr Glu Asn Phe Ile Gln Ala Thr Met Gln Ser Ile

35 40 45

Pro Asn Gly Ser Glu Gly Thr Thr Leu Val Val Gly Gly Asp Gly Arg

50 55 60

Phe Tyr Asn Asp Val Ile Met Asn Lys Ile Ala Ala Val Gly Ala Ala

65 70 75 80

Asn Gly Val Arg Lys Leu Val Ile Gly Gln Gly Gly Leu Leu Ser Thr

85 90 95

Pro Ala Ala Ser His Ile Ile Arg Thr Tyr Glu Glu Lys Cys Thr Gly

100 105 110

Gly Gly Ile Ile Leu Thr Ala Ser His Asn Pro Gly Gly Pro Glu Asn

115 120 125

Asp Leu Gly Ile Lys Tyr Asn Leu Pro Asn Gly Gly Pro Ala Pro Glu

130 135 140

Ser Val Thr Asn Ala Ile Trp Glu Ala Ser Lys Lys Leu Thr His Tyr

145 150 155 160

Lys Ile Ile Lys Asn Phe Pro Lys Leu Asn Leu Asn Lys Leu Gly Lys

165 170 175

Asn Gln Lys Tyr Gly Pro Leu Leu Val Asp Ile Ile Asp Pro Ala Lys

180 185 190

Ala Tyr Val Gln Phe Leu Lys Glu Ile Phe Asp Phe Asp Leu Ile Lys

195 200 205

Ser Phe Leu Ala Lys Gln Arg Lys Asp Lys Gly Trp Lys Leu Leu Phe

210 215 220

Asp Ser Leu Asn Gly Ile Thr Gly Pro Tyr Gly Lys Ala Ile Phe Val

225 230 235 240

Asp Glu Phe Gly Leu Pro Ala Glu Glu Val Leu Gln Asn Trp His Pro

245 250 255

Leu Pro Asp Phe Gly Gly Leu His Pro Asp Pro Asn Leu Thr Tyr Ala

260 265 270

Arg Thr Leu Val Asp Arg Val Asp Arg Glu Lys Ile Ala Phe Gly Ala

275 280 285

Ala Ser Asp Gly Asp Gly Asp Arg Asn Met Ile Tyr Gly Tyr Gly Pro

290 295 300

Ala Phe Val Ser Pro Gly Asp Ser Val Ala Ile Ile Ala Glu Tyr Ala

305 310 315 320

Pro Glu Ile Pro Tyr Phe Ala Lys Gln Gly Ile Tyr Gly Leu Ala Arg

325 330 335

Ser Phe Pro Thr Ser Ser Ala Ile Asp Arg Val Ala Ala Lys Lys Gly

340 345 350

Leu Arg Cys Tyr Glu Val Pro Thr Gly Trp Lys Phe Phe Cys Ala Leu

355 360 365

Phe Asp Ala Lys Lys Leu Ser Ile Cys Gly Glu Glu Ser Phe Gly Thr

370 375 380

Gly Ser Asn His Ile Arg Glu Lys Asp Gly Leu Trp Ala Ile Ile Ala

385 390 395 400

Trp Leu Asn Ile Leu Ala Ile Tyr His Arg Arg Asn Pro Glu Lys Glu

405 410 415

Ala Ser Ile Lys Thr Ile Gln Asp Glu Phe Trp Asn Glu Tyr Gly Arg

420 425 430

Thr Phe Phe Thr Arg Tyr Asp Tyr Glu His Ile Glu Cys Glu Gln Ala

435 440 445

Glu Lys Val Val Ala Leu Leu Ser Glu Phe Val Ser Arg Pro Asn Val

450 455 460

Cys Gly Ser His Phe Pro Ala Asp Glu Ser Leu Thr Val Ile Asp Cys

465 470 475 480

Gly Asp Phe Ser Tyr Arg Asp Leu Asp Gly Ser Ile Ser Glu Asn Gln

485 490 495

Gly Leu Phe Val Lys Phe Ser Asn Gly Thr Lys Phe Val Leu Arg Leu

500 505 510

Ser Gly Thr Gly Ser Ser Gly Ala Thr Ile Arg Leu Tyr Val Glu Lys

515 520 525

Tyr Thr Asp Lys Lys Glu Asn Tyr Gly Gln Thr Ala Asp Val Phe Leu

530 535 540

Lys Pro Val Ile Asn Ser Ile Val Lys Phe Leu Arg Phe Lys Glu Ile

545 550 555 560

Leu Gly Thr Asp Glu Pro Thr Val Arg Thr

565 570

<210> 56

<211> 1500

<212> ДНК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы

(UGP1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы

(UGP1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 56

atgtccacta agaagcacac caaaacacat tccacttatg cattcgagag caacacaaac 60

agcgttgctg cctcacaaat gagaaacgcc ttaaacaagt tggcggactc tagtaaactt 120

gacgatgctg ctcgcgctaa gtttgagaac gaactggatt cgtttttcac gcttttcagg 180

agatatttgg tagagaagtc ttctagaacc accttggaat gggacaagat caagtctccc 240

aacccggatg aagtggttaa gtatgaaatt atttctcagc agcccgagaa tgtctcaaac 300

ctttccaaat tggctgtttt gaagttgaac ggtgggctgg gtacctccat gggctgcgtt 360

ggccctaaat ctgttattga agtgagagag ggaaacacct ttttggattt gtctgttcgt 420

caaattgaat acttgaacag acagtacgat agcgacgtgc cattgttatt gatgaattct 480

ttcaacactg acaaggatac ggaacacttg attaagaagt attccgctaa cagaatcaga 540

atcagatctt tcaatcaatc caggttccca agagtctaca aggattcttt attgcctgtc 600

cccaccgaat acgattctcc actggatgct tggtatccac caggtcacgg tgatttgttt 660

gaatctttac acgtatctgg tgaactggat gccttaattg cccaaggaag agaaatatta 720

tttgtttcta acggtgacaa cttgggtgct accgtcgact taaaaatttt aaaccacatg 780

atcgagactg gtgccgaata tataatggaa ttgactgata agaccagagc cgatgttaaa 840

ggtggtactt tgatttctta cgatggtcaa gtccgtttat tggaagtcgc ccaagttcca 900

aaagaacaca ttgacgaatt caaaaatatc agaaagttta ccaacttcaa cacgaataac 960

ttatggatca atctgaaagc agtaaagagg ttgatcgaat cgagcaattt ggagatggaa 1020

atcattccaa accaaaaaac tataacaaga gacggtcatg aaattaatgt cttacaatta 1080

gaaaccgctt gtggtgctgc tatcaggcat tttgatggtg ctcacggtgt tgtcgttcca 1140

agatcaagat tcttgcctgt caagacctgt tccgatttgt tgctggttaa atcagatcta 1200

ttccgtctgg aacacggttc tttgaagtta gacccatccc gttttggtcc aaacccatta 1260

atcaagttgg gctcgcattt caaaaaggtt tctggtttta acgcaagaat ccctcacatc 1320

ccaaaaatcg tcgagctaga tcatttgacc atcactggta acgtcttttt aggtaaagat 1380

gtcactttga ggggtactgt catcatcgtt tgctccgacg gtcataaaat cgatattcca 1440

aacggctcca tattggaaaa tgttgtcgtt actggtaatt tgcaaatctt ggaacattga 1500

<210> 57

<211> 499

<212> БЕЛОК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы

(UGP1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы

(UGP1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 57

Met Ser Thr Lys Lys His Thr Lys Thr His Ser Thr Tyr Ala Phe Glu

1 5 10 15

Ser Asn Thr Asn Ser Val Ala Ala Ser Gln Met Arg Asn Ala Leu Asn

20 25 30

Lys Leu Ala Asp Ser Ser Lys Leu Asp Asp Ala Ala Arg Ala Lys Phe

35 40 45

Glu Asn Glu Leu Asp Ser Phe Phe Thr Leu Phe Arg Arg Tyr Leu Val

50 55 60

Glu Lys Ser Ser Arg Thr Thr Leu Glu Trp Asp Lys Ile Lys Ser Pro

65 70 75 80

Asn Pro Asp Glu Val Val Lys Tyr Glu Ile Ile Ser Gln Gln Pro Glu

85 90 95

Asn Val Ser Asn Leu Ser Lys Leu Ala Val Leu Lys Leu Asn Gly Gly

100 105 110

Leu Gly Thr Ser Met Gly Cys Val Gly Pro Lys Ser Val Ile Glu Val

115 120 125

Arg Glu Gly Asn Thr Phe Leu Asp Leu Ser Val Arg Gln Ile Glu Tyr

130 135 140

Leu Asn Arg Gln Tyr Asp Ser Asp Val Pro Leu Leu Leu Met Asn Ser

145 150 155 160

Phe Asn Thr Asp Lys Asp Thr Glu His Leu Ile Lys Lys Tyr Ser Ala

165 170 175

Asn Arg Ile Arg Ile Arg Ser Phe Asn Gln Ser Arg Phe Pro Arg Val

180 185 190

Tyr Lys Asp Ser Leu Leu Pro Val Pro Thr Glu Tyr Asp Ser Pro Leu

195 200 205

Asp Ala Trp Tyr Pro Pro Gly His Gly Asp Leu Phe Glu Ser Leu His

210 215 220

Val Ser Gly Glu Leu Asp Ala Leu Ile Ala Gln Gly Arg Glu Ile Leu

225 230 235 240

Phe Val Ser Asn Gly Asp Asn Leu Gly Ala Thr Val Asp Leu Lys Ile

245 250 255

Leu Asn His Met Ile Glu Thr Gly Ala Glu Tyr Ile Met Glu Leu Thr

260 265 270

Asp Lys Thr Arg Ala Asp Val Lys Gly Gly Thr Leu Ile Ser Tyr Asp

275 280 285

Gly Gln Val Arg Leu Leu Glu Val Ala Gln Val Pro Lys Glu His Ile

290 295 300

Asp Glu Phe Lys Asn Ile Arg Lys Phe Thr Asn Phe Asn Thr Asn Asn

305 310 315 320

Leu Trp Ile Asn Leu Lys Ala Val Lys Arg Leu Ile Glu Ser Ser Asn

325 330 335

Leu Glu Met Glu Ile Ile Pro Asn Gln Lys Thr Ile Thr Arg Asp Gly

340 345 350

His Glu Ile Asn Val Leu Gln Leu Glu Thr Ala Cys Gly Ala Ala Ile

355 360 365

Arg His Phe Asp Gly Ala His Gly Val Val Val Pro Arg Ser Arg Phe

370 375 380

Leu Pro Val Lys Thr Cys Ser Asp Leu Leu Leu Val Lys Ser Asp Leu

385 390 395 400

Phe Arg Leu Glu His Gly Ser Leu Lys Leu Asp Pro Ser Arg Phe Gly

405 410 415

Pro Asn Pro Leu Ile Lys Leu Gly Ser His Phe Lys Lys Val Ser Gly

420 425 430

Phe Asn Ala Arg Ile Pro His Ile Pro Lys Ile Val Glu Leu Asp His

435 440 445

Leu Thr Ile Thr Gly Asn Val Phe Leu Gly Lys Asp Val Thr Leu Arg

450 455 460

Gly Thr Val Ile Ile Val Cys Ser Asp Gly His Lys Ile Asp Ile Pro

465 470 475 480

Asn Gly Ser Ile Leu Glu Asn Val Val Val Thr Gly Asn Leu Gln Ile

485 490 495

Leu Glu His

<210> 58

<211> 480

<212> ДНК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы

(GNA1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы

(GNA1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 58

atgagcttac ccgatggatt ttatataagg cgaatggaag agggggattt ggaacaggtc 60

actgagacgc taaaggtttt gaccaccgtg ggcactatta cccccgaatc cttcagcaaa 120

ctcataaaat actggaatga agccacagta tggaatgata acgaagataa aaaaataatg 180

caatataacc ccatggtgat tgtggacaag cgcaccgaga cggttgccgc tacggggaat 240

atcatcatcg aaagaaagat cattcatgaa ctggggctat gtggccacat cgaggacatt 300

gcagtaaact ccaagtatca gggccaaggt ttgggcaagc tcttgattga tcaattggta 360

actatcggct ttgactacgg ttgttataag attattttag attgcgatga gaaaaatgtc 420

aaattctatg aaaaatgtgg gtttagcaac gcaggcgtgg aaatgcaaat tagaaaatag 480

<210> 59

<211> 159

<212> БЕЛОК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы

(GNA1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы

(GNA1), происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 59

Met Ser Leu Pro Asp Gly Phe Tyr Ile Arg Arg Met Glu Glu Gly Asp

1 5 10 15

Leu Glu Gln Val Thr Glu Thr Leu Lys Val Leu Thr Thr Val Gly Thr

20 25 30

Ile Thr Pro Glu Ser Phe Ser Lys Leu Ile Lys Tyr Trp Asn Glu Ala

35 40 45

Thr Val Trp Asn Asp Asn Glu Asp Lys Lys Ile Met Gln Tyr Asn Pro

50 55 60

Met Val Ile Val Asp Lys Arg Thr Glu Thr Val Ala Ala Thr Gly Asn

65 70 75 80

Ile Ile Ile Glu Arg Lys Ile Ile His Glu Leu Gly Leu Cys Gly His

85 90 95

Ile Glu Asp Ile Ala Val Asn Ser Lys Tyr Gln Gly Gln Gly Leu Gly

100 105 110

Lys Leu Leu Ile Asp Gln Leu Val Thr Ile Gly Phe Asp Tyr Gly Cys

115 120 125

Tyr Lys Ile Ile Leu Asp Cys Asp Glu Lys Asn Val Lys Phe Tyr Glu

130 135 140

Lys Cys Gly Phe Ser Asn Ala Gly Val Glu Met Gln Ile Arg Lys

145 150 155

<210> 60

<211> 1674

<212> ДНК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1),

происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1),

происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 60

atgaaggttg attacgagca attgtgcaaa ctctacgatg acacgtgccg cacaaagaat 60

gtgcagttca gttacggtac ggccggattc agaacgctgg ccaagaattt ggatacggtg 120

atgttcagta ctggtatact ggcggttctc aggtcgctga agcttcaggg tcagtatgtg 180

ggggtgatga tcacggcgtc gcacaaccca taccaggaca acggggtcaa gatcgtggaa 240

ccagacggat cgatgctttt ggccacatgg gagccatatg ccatgcagtt ggccaatgcg 300

gcctcttttg ccactaattt tgaagaattt cgtgttgagt tggccaagct gattgaacac 360

gaaaagattg atttgaatac aaccgtcgtg cctcacatcg tggttgggag agactctagg 420

gaaagtagtc catacttgct gcgctgcttg acttcctcca tggccagcgt cttccacgcg 480

caagttttgg acctaggctg tgtcactacg cctcaattgc attacattac tgatttgtcc 540

aacaggcgga aactggaagg agacacagcg ccagttgcca cagaacagga ctactattcg 600

ttctttatag gagccttcaa cgagctcttc gccacgtatc agctggagaa gaggctgtct 660

gtcccaaaat tgttcataga cacagccaat ggtatcggtg gtccacagtt gaaaaaacta 720

ctggcctccg aagattggga cgtgccagcg gagcaagttg aggtaatcaa cgacaggtcc 780

gatgttccag aactgttgaa ttttgaatgc ggtgcggatt atgtgaagac taaccagaga 840

ttacccaagg gtctttctcc atcctcgttt gattcgctat attgctcctt tgatggtgac 900

gcagacaggg ttgtgttcta ctatgtcgac tcaggatcaa aatttcattt gttggatggt 960

gacaaaattt ccactttgtt tgcaaagttc ttgtctaaac aactagaatt ggcacaccta 1020

gaacattctt tgaagattgg tgttgtgcaa actgcctatg caaacggcag ttccaccgct 1080

tacataaaaa atacgttgca ctgtcccgtg tcttgcacta agacaggtgt taaacacttg 1140

catcatgaag ctgccactca gtacgatatt ggcatttatt tcgaagcaaa tggacatggt 1200

acgattatat tcagcgaaaa atttcatcga actatcaaat ctgaattatc caagtccaag 1260

ttaaatggtg atacgttagc tttgagaact ttgaagtgtt tctctgaatt gattaatcag 1320

accgtgggag atgctatttc agacatgctt gctgtccttg ctactttggc gattttgaaa 1380

atgtcgccaa tggattggga tgaagagtat actgatttgc ccaacaagct ggttaagtgc 1440

atcgttcctg ataggtcaat tttccaaacc acggaccagg aaagaaaatt gctcaatcca 1500

gtggggttgc aagacaagat agatcttgtg gtagccaagt atcccatggg aagaagcttt 1560

gtcagagcca gtggtacgga ggatgcggtg agggtttatg cggaatgtaa ggactcctct 1620

aagttaggtc aattttgtga cgaagtggtg gagcacgtta aggcatctgc ttga 1674

<210> 61

<211> 557

<212> БЕЛОК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1),

происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1),

происходящая из Saccharomyces cerevisiae

<400> 61

Met Lys Val Asp Tyr Glu Gln Leu Cys Lys Leu Tyr Asp Asp Thr Cys

1 5 10 15

Arg Thr Lys Asn Val Gln Phe Ser Tyr Gly Thr Ala Gly Phe Arg Thr

20 25 30

Leu Ala Lys Asn Leu Asp Thr Val Met Phe Ser Thr Gly Ile Leu Ala

35 40 45

Val Leu Arg Ser Leu Lys Leu Gln Gly Gln Tyr Val Gly Val Met Ile

50 55 60

Thr Ala Ser His Asn Pro Tyr Gln Asp Asn Gly Val Lys Ile Val Glu

65 70 75 80

Pro Asp Gly Ser Met Leu Leu Ala Thr Trp Glu Pro Tyr Ala Met Gln

85 90 95

Leu Ala Asn Ala Ala Ser Phe Ala Thr Asn Phe Glu Glu Phe Arg Val

100 105 110

Glu Leu Ala Lys Leu Ile Glu His Glu Lys Ile Asp Leu Asn Thr Thr

115 120 125

Val Val Pro His Ile Val Val Gly Arg Asp Ser Arg Glu Ser Ser Pro

130 135 140

Tyr Leu Leu Arg Cys Leu Thr Ser Ser Met Ala Ser Val Phe His Ala

145 150 155 160

Gln Val Leu Asp Leu Gly Cys Val Thr Thr Pro Gln Leu His Tyr Ile

165 170 175

Thr Asp Leu Ser Asn Arg Arg Lys Leu Glu Gly Asp Thr Ala Pro Val

180 185 190

Ala Thr Glu Gln Asp Tyr Tyr Ser Phe Phe Ile Gly Ala Phe Asn Glu

195 200 205

Leu Phe Ala Thr Tyr Gln Leu Glu Lys Arg Leu Ser Val Pro Lys Leu

210 215 220

Phe Ile Asp Thr Ala Asn Gly Ile Gly Gly Pro Gln Leu Lys Lys Leu

225 230 235 240

Leu Ala Ser Glu Asp Trp Asp Val Pro Ala Glu Gln Val Glu Val Ile

245 250 255

Asn Asp Arg Ser Asp Val Pro Glu Leu Leu Asn Phe Glu Cys Gly Ala

260 265 270

Asp Tyr Val Lys Thr Asn Gln Arg Leu Pro Lys Gly Leu Ser Pro Ser

275 280 285

Ser Phe Asp Ser Leu Tyr Cys Ser Phe Asp Gly Asp Ala Asp Arg Val

290 295 300

Val Phe Tyr Tyr Val Asp Ser Gly Ser Lys Phe His Leu Leu Asp Gly

305 310 315 320

Asp Lys Ile Ser Thr Leu Phe Ala Lys Phe Leu Ser Lys Gln Leu Glu

325 330 335

Leu Ala His Leu Glu His Ser Leu Lys Ile Gly Val Val Gln Thr Ala

340 345 350

Tyr Ala Asn Gly Ser Ser Thr Ala Tyr Ile Lys Asn Thr Leu His Cys

355 360 365

Pro Val Ser Cys Thr Lys Thr Gly Val Lys His Leu His His Glu Ala

370 375 380

Ala Thr Gln Tyr Asp Ile Gly Ile Tyr Phe Glu Ala Asn Gly His Gly

385 390 395 400

Thr Ile Ile Phe Ser Glu Lys Phe His Arg Thr Ile Lys Ser Glu Leu

405 410 415

Ser Lys Ser Lys Leu Asn Gly Asp Thr Leu Ala Leu Arg Thr Leu Lys

420 425 430

Cys Phe Ser Glu Leu Ile Asn Gln Thr Val Gly Asp Ala Ile Ser Asp

435 440 445

Met Leu Ala Val Leu Ala Thr Leu Ala Ile Leu Lys Met Ser Pro Met

450 455 460

Asp Trp Asp Glu Glu Tyr Thr Asp Leu Pro Asn Lys Leu Val Lys Cys

465 470 475 480

Ile Val Pro Asp Arg Ser Ile Phe Gln Thr Thr Asp Gln Glu Arg Lys

485 490 495

Leu Leu Asn Pro Val Gly Leu Gln Asp Lys Ile Asp Leu Val Val Ala

500 505 510

Lys Tyr Pro Met Gly Arg Ser Phe Val Arg Ala Ser Gly Thr Glu Asp

515 520 525

Ala Val Arg Val Tyr Ala Glu Cys Lys Asp Ser Ser Lys Leu Gly Gln

530 535 540

Phe Cys Asp Glu Val Val Glu His Val Lys Ala Ser Ala

545 550 555

<210> 62

<211> 574

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTDH3

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTDH3

<400> 62

ctgctgtaac ccgtacatgc ccaaaatagg gggcgggtta cacagaatat ataacatcgt 60

aggtgtctgg gtgaacagtt tattcctggc atccactaaa tataatggag cccgcttttt 120

aagctggcat ccagaaaaaa aaagaatccc agcaccaaaa tattgttttc ttcaccaacc 180

atcagttcat aggtccattc tcttagcgca actacagaga acaggggcac aaacaggcaa 240

aaaacgggca caacctcaat ggagtgatgc aacctgcctg gagtaaatga tgacacaagg 300

caattgaccc acgcatgtat ctatctcatt ttcttacacc ttctattacc ttctgctctc 360

tctgatttgg aaaaagctga aaaaaaaggt tgaaaccagt tccctgaaat tattccccta 420

cttgactaat aagtatataa agacggtagg tattgattgt aattctgtaa atctatttct 480

taaacttctt aaattctact tttatagtta gtcttttttt tagttttaaa acaccaagaa 540

cttagtttcg aataaacaca cataaacaaa caaa 574

<210> 63

<211> 585

<212> ДНК

<213> Saccharomyces kudriavzevii

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTDH3.Sk

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTDH3.Sk

<400> 63

caattcatcg gcccttttag cggctacccg cgccatctaa atgatagggc gggtgacact 60

atggtaaatc ccataattag gtgtctgggt gagtggttct gatgccggca tccactaaat 120

atattggagc ccatttttta cgcgggcttc cagaaaaaaa gagaatccca gcaccaaaag 180

gtggttctct tcaccaacca tcagatcata ggtccacaac cacacataac aggggcacaa 240

aaaggcaaaa aacggacata acctcaatgg agtgatgcaa attgactgga gcaaaagctg 300

acacaaggca ttgattgacc tacgcatgta tctgtattct tttcttacac cttctattac 360

cttctaactc tttgggttgg aaaaaactga aaaaaaaggt tgggacctgg ttcccccaag 420

ttgtccccct acttggttat taaatatata aagacagcaa gtgttgatta taatcttgta 480

aatctatagt tcttaatcta tacttctatt tatattttaa attagtcttt ttatttccaa 540

gtccccaaga acttagtttc gaataaacac acacaaataa acaca 585

<210> 64

<211> 700

<212> ДНК

<213> Saccharomyces bayanus

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTDH3-1.sba

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTDH3-1.sba

<400> 64

gcagcgcttc ttccgctcta gtttttatag ttattattac taccacctta aaaatacgta 60

aatactcaaa atagtagtga tattcccaac cttattcatc caaggcacat catcatcatc 120

agccattcat ctttcacctg ccattagtaa cccgtcttct cattgagcgg gttacggcag 180

ccacaggcca cattccgaat gtctgggtga gcggtccctt ttccagcatc cactaaatat 240

ctccgatccc gctttttaat ctggcttcct gaaaaaaaga gaatcccagc accaaaaaat 300

ggctctcttc accaaccatc agatcatagg tcccattctc ttaccgcaac cgtacagaac 360

aggggaaaac gggtacaacc tcaatggagt gatgcaaact gactggagca aaaagctgac 420

acaaggcaat cgacctacgt gtctgtctat tttctcacac cttctattac cttctaactc 480

tctgggttgg aaaaaactga aaaaaaggtt gagaccagtt tccacaaatc atccccctgt 540

ttgattaata aatatataaa gacgacaact atcgatcata aactcataaa actataactc 600

ctttacactt cttattttat agttattcta ttttaattct tattgatttt aaaaccccaa 660

gaacttagtt tcgaaaacac acacacacaa acaattaaaa 700

<210> 65

<211> 602

<212> ДНК

<213> Saccharomyces arboricola

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTDH3.Sar

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTDH3.Sar

<400> 65

gagctaaata tcagcccttc gggtcctgcc tgctacccgg tcctgttcga ataaaaacgc 60

gggtaacacg acccagtaac acctgtcgtt gggtgtctgg gtcagaagtt ctgataccgg 120

cttccactaa atagattggg ttccgctctt tacgctggct tcctgaaaaa agagattccg 180

ggcaccaaaa aattggtctc tttgccaacc atcagatcat aggtccattc tcttaccata 240

accacacagg ataggggcac cacaggcgaa aatgggcaca aaatctcaat ggagtgatgc 300

aaattagctg gaacaaaagc tgacacaagg caattaacct gcgcatgtat ccatctcctt 360

ttcttacacc ttctcttacg ttctaactgt ttgggttgga aaaattaaaa aaaaaaggtt 420

gagaccagtt tccccaaatc gtccccctac ttgattcata aatatataaa gacgacaact 480

attgattata atcttgtaaa tctataactc tttactttct cctatttata atttaactta 540

atctttttag atttaaaacc ccaagaactt agtttcgaac aaacacacac aaataaacaa 600

aa 602

<210> 66

<211> 550

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pENO2

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pENO2

<400> 66

cgctcagcat ctgcttcttc ccaaagatga acgcggcgtt atgtcactaa cgacgtgcac 60

caacttgcgg aaagtggaat cccgttccaa aactggcatc cactaattga tacatctaca 120

caccgcacgc cttttttctg aagcccactt tcgtggactt tgccatatgc aaaattcatg 180

aagtgtgata ccaagtcagc atacacctca ctagggtagt ttctttggtt gtattgatca 240

tttggttcat cgtggttcat taattttttt tctccattgc tttctggctt tgatcttact 300

atcatttgga tttttgtcga aggttgtaga attgtatgtg acaagtggca ccaagcatat 360

ataaaaaaaa aaagcattat cttcctacca gagttgattg ttaaaaacgt atttatagca 420

aacgcaattg taattaattc ttattttgta tcttttcttc ccttgtctca atcttttatt 480

tttattttat ttttcttttc ttagtttctt tcataacacc aagcaactaa tactataaca 540

tacaataata 550

<210> 67

<211> 598

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTEF3

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTEF3

<400> 67

ggctgataat agcgtataaa caatgcatac tttgtacgtt caaaatacaa tgcagtagat 60

atatttatgc atattacata taatacatat cacataggaa gcaacaggcg cgttggactt 120

ttaattttcg aggaccgcga atccttacat cacacccaat cccccacaag tgatccccca 180

cacaccatag cttcaaaatg tttctactcc ttttttactc ttccagattt tctcggactc 240

cgcgcatcgc cgtaccactt caaaacaccc aagcacagca tactaaattt cccctctttc 300

ttcctctagg gtgtcgttaa ttacccgtac taaaggtttg gaaaagaaaa aagagaccgc 360

ctcgtttctt tttcttcgtc gaaaaaggca ataaaaattt ttatcacgtt tctttttctt 420

gaaaattttt ttttttgatt tttttctctt tcgatgacct cccattgata tttaagttaa 480

taaacggtct tcaatttctc aagtttcagt ttcatttttc ttgttctatt acaacttttt 540

ttacttcttg ctcattagaa agaaagcata gcaatctaat ctaagtttta attacaaa 598

<210> 68

<211> 383

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTEF1

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTEF1

<400> 68

gtttagcttg cctcgtcccc gccgggtcac ccggccagcg acatggaggc ccagaatacc 60

ctccttgaca gtcttgacgt gcgcagctca ggggcatgat gtgactgtcg cccgtacatt 120

tagcccatac atccccatgt ataatcattt gcatccatac attttgatgg ccgcacggcg 180

cgaagcaaaa attacggctc ctcgctgcag acctgcgagc agggaaacgc tcccctcaca 240

gacgcgttga attgtcccca cgccgcgccc ctgtagagaa atataaaagg ttaggatttg 300

ccactgaggt tcttctttca tatacttcct tttaaaatct tgctacgata cagttctcac 360

atcacatccg aacataaaca acc 383

<210> 69

<211> 383

<212> ДНК

<213> Ashbya gossypii

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTEF1.ago

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTEF1.ago

<400> 69

gtttagcttg cctcgtcccc gccgggtcac ccggccagcg acatggaggc ccagaatacc 60

ctccttgaca gtcttgacgt gcgcagctca ggggcatgat gtgactgtcg cccgtacatt 120

tagcccatac atccccatgt ataatcattt gcatccatac attttgatgg ccgcacggcg 180

cgaagcaaaa attacggctc ctcgctgcag acctgcgagc agggaaacgc tcccctcaca 240

gacgcgttga attgtcccca cgccgcgccc ctgtagagaa atataaaagg ttaggatttg 300

ccactgaggt tcttctttca tatacttcct tttaaaatct tgctacgata cagttctcac 360

atcacatccg aacataaaca acc 383

<210> 70

<211> 498

<212> ДНК

<213> Saccharomyces bayanus

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTEF1.Sba

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pTEF1.Sba

<400> 70

cgccaacaaa ccttcgaaca ctttaatttt cgaggaccgc agatcctcac atcacaccca 60

cacccaagac tgcttccccc acacaccctg catctgtaca ctttcttctg ctctgttttt 120

ctctccggcg ttctctcggg tcgcccgcat cgccgcgccg gctggaaccg cccacgcacc 180

gcatattgca aatcgcctgc cccctcttgc tcctttttga gggcgcgccg ttacccgcgc 240

ccagggtccg gaaaaagaaa caaggctcta ccgcgtttct ttttccttgt cgaaaaaggc 300

aaaaatgaaa atttttatca cgtttctttt tttttgaaaa attttttttt tggttttttt 360

tctttcgatg gcctcccatt gatatttaag ttaataaatg gttttcagtt ttcaagtttc 420

agtttgtgtt cttctttgct aactttcact tacacctcga aagaaagtat agcaatctaa 480

tcttagtttt aattacaa 498

<210> 71

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pPDC1

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pPDC1

<400> 71

ttatttacct atctctaaac ttcaacacct tatatcataa ctaatatttc ttgagataag 60

cacactgcac ccatac 76

<210> 72

<211> 998

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12

<400> 72

aaccagggca aagcaaaata aaagaaactt aatacgttat gccgtaatga agggctacca 60

aaaacgataa tctcaactgt aaacaggtac aatgcggacc cttttgccac aaaacataca 120

tcattcattg ccggaaaaag aaagaagtga agacagcagt gcagccagcc atgttgcgcc 180

aatctaatta tagatgctgg tgccctgagg atgtatctgg agccagccat ggcatcatgc 240

gctaccgccg gatgtaaaat ccgacacgca aaagaaaacc ttcgaggttg cgcacttcgc 300

ccacccatga accacacggt tagtccaaaa ggggcagttc agattccaga tgcgggaatt 360

agcttgctgc caccctcacc tcactaacgc tgcggtgtgc ggatacttca tgctatttat 420

agacgcgcgt gtcggaatca gcacgcgcaa gaaccaaatg ggaaaatcgg aatgggtcca 480

gaactgcttt gagtgctggc tattggcgtc tgatttccgt tttgggaatc ctttgccgcg 540

cgcccctctc aaaactccgc acaagtccca gaaagcggga aagaaataaa acgccaccaa 600

aaaaaaaaat aaaagccaat cctcgaagcg tgggtggtag gccctggatt atcccgtaca 660

agtatttctc aggagtaaaa aaaccgtttg ttttggaatt ccccatttcg cggccaccta 720

cgccgctatc tttgcaacaa ctatctgcga taactcagca aattttgcat attcgtgttg 780

cagtattgcg ataatgggag tcttacttcc aacataacgg cagaaagaaa tgtgagaaaa 840

ttttgcatcc tttgcctccg ttcaagtata taaagtcggc atgcttgata atctttcttt 900

ccatcctaca ttgttctaat tattcttatt ctcctttatt ctttcctaac ataccaagaa 960

attaatcttc tgtcattcgc ttaaacacta tatcaata 998

<210> 73

<211> 976

<212> ДНК

<213> Saccharomyces mikatae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12.Sm

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12.Sm

<400> 73

cgttgtgctg tagtgaagga agactaaaaa ggataatcac agttgtaaag aggtataatg 60

cggacccttt tgccacaaaa cacacatctt tcgtttccaa aataagaaag aagaaagcaa 120

aaagattagc agccacgttg ctgcgatcta attatagacg gtggcgtcat cattctcacc 180

caagattgtg tcttgaacct gccacgggtc ctgcgttatc gccggatgta aaactagaca 240

tgcaaaaaaa ggaccttcca ggtagcgtgc tccacaccac ccatgaccac cacagttagt 300

ccaaaagagg cagcaccact tcccgatggg ggaattagat tgctgccacc ctcacctcac 360

taatgctgcg gtgtgcggat atgccctgct atatatagct ccgcgttttt gaaccagcac 420

agcgcgagca ccaaaaagga aaatcgcata ggcccagaac tgatttcagc acgggctatt 480

ggcgttgggt ttccgttctg ggaaaccttc gccgcgtccc cctcacaaac ctccgcacaa 540

gttcgagcaa gcgggaaaaa acgaaaaacg ccattaatac taaataaagc aaatcctcga 600

agcgtgggtg gcaagcccct ggatttttcc gcacaagtac tcttctcagg agtaaaaaaa 660

cccgtttgtt ttggaattcc ccatttcgcg gccatctacg ccggtatctt cgcaatatct 720

atcagcgata actcagcaat tttaatattc gtgttgcagt gctgcgatag cgggagtctt 780

gtttgtaaca taacggcaga aaggaatgag agaaaatttt ccattctttg gcctccgttc 840

aagtatataa agccggcatg cttggtaatc tttctctctc ttctgtattg tttctataat 900

acttttatct tctaattatt ttctgaaaaa accaagaaat taatcttctg tcattcgctt 960

aaacactata tcaata 976

<210> 74

<211> 750

<212> ДНК

<213> Saccharomyces kudriavzevii

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12.Sk

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12.Sk

<400> 74

tgtaaaatcc tacacgcaaa aaacctcttg ggttgcgcgt tttccaccac ccacgacccg 60

cacaatcaat ccaaaagggg caacgccagt tcccaatgcg ggaattagct cctcaccccc 120

ctcacccgct aacgctgcgg tgtgcggaca cgcagcagta tttatagatc ctcgtgttgg 180

aaccagcccg cgtgagcacc aaattggaaa gtcgcaatgg gcccagaacc gctttcagta 240

ctgggccatt ggcgtctagt ttccgttttg agcgtccttc gccgcgtctc tctgtgaaat 300

ccccgcacaa gtctgagcag gcaaaaaaaa aaaacgccac caaaaataaa taaagccaat 360

cctcgaagga tgagtaggaa aggaagcccc tggttttttc ccgcacgaat atttttcagg 420

agtgaaaaaa tccgtttgtt ttggaattcc ccatttcgcg ctcacctacg ccggtatctt 480

tggaacaact atcagcgata actcagcaaa atttgcatat ccgtgctgca atagtgcgat 540

agtgggattg ggagtcttgt tgcatcataa cggcagaaag gaatgaataa aaattttccg 600

ttctttgtct ccgttcaagt atataaagtc ggcatgcttg attatctttt cttctcttct 660

actacatttc tatttcactt tctactctat tcttccctga aaaacccaag aaaataatct 720

tctgtcattc gcttaaacaa tatatcaaaa 750

<210> 75

<211> 750

<212> ДНК

<213> Saccharomyces bayanus

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12.Sba

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12.Sba

<400> 75

accatgccac ggtgctggcc ccacttccac ccacgacccg cacggttggc ccgaaagggg 60

caacaccagt tcccaatacg gaaattagtc cgccaccacc ctcacctcgc tagagctgcg 120

gtgtgcgggc gtgcatcgct atttatagac atgcctgctg gcgtcaccgc gcgcgagcac 180

caaacaggaa aatcgcactg ggcccagaac cacgctatgc gctgggccga tggcgtccgg 240

tttccctttg ggagccccct gccacgttcg cctaacaaat ccccgcaccg gcttgagaaa 300

aaagcgaaaa gcgaaaaaaa aaaatcaacg ccaccaaaat taaaaaaaaa gagccatcct 360

cgaagggtga atagtagccc ctgacttttc ccgcacagac agacaccttt caggagtgaa 420

caaaaaagca gtttgttttg gaattccccc atttcgcggt ggcctgcgca ggtatctctg 480

cgtcaactat cagcgataac tcagcaaatt ttgcatattc gtgttgcgat actacgataa 540

tgggagtctg tcgcctaata acggcaacaa ggaatgagag agaaaaattt tcttcattct 600

ccagctcccg ttcaagtata taaggtcggc atggtcgatt gtctttcctt ctcttcagtt 660

acgtctctct atttacatta ttcttatttt tatttaataa aaaccccaag aaattaatct 720

tctgtcattc gcttaaacac tatatcaaaa 750

<210> 76

<211> 750

<212> ДНК

<213> Saccharomyces arboricola

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12.Sar

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW12.Sar

<400> 76

aaaaaacaac cttctgccaa cctgcgtgct tctcaccacc catgacccac acaattgacc 60

cgaatggggc aactccagtt cccaatacgg gaattaactc gccaccatat ttaccgcgtt 120

gaagctgtgg tgtgcggaca ctccgtacta tttatagacc cacgcggtgg aaccagcacg 180

cgcgcgcact aaacaggaaa atcgcattga gtccagaacc gccaccagca cttggccatt 240

ggcgtctaat ttccgttttc ggcgcccctc accgcgtcct tctaacaaag cgcgcacaag 300

cttgagcaag tgaaaagaaa attaaaaata aaaaaccgcc accaaaacaa ataaagcaat 360

cttcgaagtg tgggttggtg ggaagcccct ggcttttccc gcaccagtcg ttttcaggag 420

taaaaaaata cccgtttgtt ttggaattcc ccatttcgcg gcgacctgcg ccggtatctt 480

tgcaacaact atttgcgata actcagcaaa atttgcatat tcgtgttggg atattgcgat 540

agtgggagtc ttgttgcata ataacggtaa aaagaagtga aggaaaaaaa tttgcatcct 600

ttagtctcag ttcaagtata taaagtcggg atattcaatt atctttcttt ctcttgctca 660

aaggtttcta tatttttttt atagtatttc ttttgttata aaataccaag aaattaatct 720

tctgtcattc gcttaaatac tacatcaata 750

<210> 77

<211> 500

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pNUP57

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pNUP57

<400> 77

tcatctgcgc aatgactatc aagaccttct gcaagaattt caaatctcac tgaaaatctt 60

gaccgaaaag tgtcttgaaa acccatcaag cctgcaaaac ctatctttga cattagtctc 120

cattataaaa acggcatagt tgggagaaaa ctttccatac ttcaattgtg gactgatata 180

agtattttag ttttgcccgc atgatcatcc cacatggcta cagcagttct ctcataggaa 240

aatagtacaa tagctacgtg atataatcta aataattgtt gccaatgtgt aattatatca 300

ttttgaacgt acgcgaaatg gattattttc aaaaattttg tttcttgaaa tgagtaaaag 360

caaaagtcca actctccaag tcgatgtaaa caactttttg ccaaagggac tgaaagacta 420

aatcgaggat tatcccgttc aaactattcc agaaacgctc gttagtaaca aaagacatac 480

cttgttgacc aattgatcac 500

<210> 78

<211> 523

<212> ДНК

<213> Ashbya gossypii

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW10.ago

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCCW10.ago

<400> 78

ggtaccacgg caacctcgtt cgctgttcat ccccttcgtc acacaggacg ttggatgccg 60

taagcagcgt tgcttttgat cctcaggatc ggccgggtaa cccgcggctg cttctatttt 120

agtattcata tctcaagcac atccattccg gccgtttggg ggcgccgccg cactcgtgtc 180

cattcctacc gtggcactta gggctatcct gtcggagcgc cccgccgacc gccttatcgg 240

caccaaaagt agaagccccg gccccgcgtg gctcagactc accatcggtg ctatttactt 300

ttcgatcaga tcgcggcgcg cggtggccgg catttccgga agcggccacg gagcagaggt 360

ggcgcattcg aatcgcatac gtcttcgcca cgccggaaaa aaaattttcg gctatataag 420

gagaggcggc cgtcttgctg caggcagttt cactttctct aaaaccaaag aacatcgatt 480

tctttagtca ctcgcttcct tacaccgaac tcgaggcggc cgc 523

<210> 79

<211> 943

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCWP2

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCWP2

<400> 79

ctagcctccc ctttttattt tgtgcggtca ccgcaaggga caaagctttt cttagaaaac 60

cgtctgagaa gcataacgta cgccatcccc tagacatatt aataatgcta cagatactat 120

gctgctcgtc tttttttgac gaccctttta ttgcaatgtg caactaatgg caaacaacca 180

catagtatca cagtattaca ttgcctccac cgatgcggat gttagggcgc caagtctgtc 240

atgaagcatg ttcctgtcat aatcttgtat gcaaaatacc gcgttctgcg ccactgatat 300

gctaggcagc agcaacctat gcagaagatt gcttttccca cgcctgtttt acgtctccag 360

ggcacttgaa acaatgcagc gatcgccgcc acaacacgcc aaagagaagc gaaagtgggc 420

ctgggcggcc tcagtttcgg cagaggtaaa caacacgaac tgaactgcct tagctccgaa 480

gggcaattcc acaggcactc cgcggggccc ggccaaggcc caaaaggcgt ggaatatgcg 540

cgttttgggg ccataacacc cagtaccacg gccggaacgg gccatataat aagtttttca 600

ctctcaagaa tggtaaacgt aaataggaac atcccactac cctagaaatt gcggaaattt 660

cgcgcttatc attagaaaat ctggaaccgt cctttttcct ctttcttgca tttccctttc 720

cgtattattg ccattcttta actgcatttg gggaaccgta gaccaaaagc caaacagaga 780

aatgtaacgt tctaaaaaaa aaacaacgaa aaaattgaaa aataagatac aataatcgta 840

tataaatcag gcttcttgtt catcattttc aattctcttc ttgccatccc ttttcctatc 900

tttgttcttt tcttctcata atcaagaata aataacttca tca 943

<210> 80

<211> 535

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pRPLA1

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pRPLA1

<400> 80

tcaagttgga tactgatctg atctctccgc cctactacca gggaccctca tgattaccgc 60

tcgaatgcga cgtttcctgc ctcataaaac tggcttgaaa atatttattc gctgaacagt 120

agcctagctt ataaaaattt catttaatta atgtaatatg aaaactcaca tgccttctgt 180

ttctaaaatt gtcacagcaa gaaataacat taccatacgt gatcttatta aactctagta 240

tcttgtctaa tacttcattt aaaagaagcc ttaaccctgt agcctcatct atgtctgcta 300

catatcgtga ggtacgaata tcgtaagatg ataccacgca actttgtaat gatttttttt 360

ttttcatttt ttaaagaatg cctttacatg gtatttgaaa aaaatatctt tataaagttt 420

gcgatctctt ctgttctgaa taatttttag taaaagaaat caaaagaata aagaaatagt 480

ccgctttgtc caatacaaca gcttaaaccg attatctcta aaataacaag aagaa 535

<210> 81

<211> 505

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCUP1

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pCUP1

<400> 81

cggcaaactt caacgatttc tatgatgcat tttataatta gtaagccgat cccattaccg 60

acatttgggc gctatacgtg catatgttca tgtatgtatc tgtatttaaa acacttttgt 120

attatttttc ctcatatatg tgtataggtt tatacggatg atttaattat tacttcacca 180

ccctttattt caggctgata tcttagcctt gttactagtt agaaaaagac atttttgctg 240

tcagtcactg tcaagagatt cttttgctgg catttcttct agaagcaaaa agagcgatgc 300

gtcttttccg ctgaaccgtt ccagcaaaaa agactaccaa cgcaatatgg attgtcagaa 360

tcatataaaa gagaagcaaa taactccttg tcttgtatca attgcattat aatatcttct 420

tgttagtgca atatcatata gaagtcatcg aaatagatat taagaaaaac aaactgtaca 480

atcaatcaat caatcatcac ataaa 505

<210> 82

<211> 510

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pMET6

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pMET6

<400> 82

ccacaggaaa tatttcacgt gacttacaaa cagagtcgta cgtcaggacc ggagtcaggt 60

gaaaaaatgt gggccggtaa agggaaaaaa ccagaaacgg gactactatc gaactcgttt 120

agtcgcgaac gtgcaaaagg ccaatatttt tcgctagagt catcgcagtc atggcagctc 180

tttcgctcta tctcccggtc gcaaaactgt ggtagtcata gctcgttctg ctcaattgag 240

aactgtgaat gtgaatatgg aacaaatgcg atagatgcac taatttaagg gaagctagct 300

agttttccca actgcgaaag aaaaaaagga aagaaaaaaa aattctatat aagtgataga 360

tatttccatc tttactagca ttagtttctc ttttacgtat tcaatatttt tgttaaactc 420

ttcctttatc ataaaaaagc aagcatctaa gagcattgac aacactctaa gaaacaaaat 480

accaatataa tttcaaagta catatcaaaa 510

<210> 83

<211> 686

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pMET25

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pMET25

<400> 83

ttacattatc aatccttgcg tttcagcttc cactaattta gatgactatt tctcatcatt 60

tgcgtcatct tctaacaccg tatatgataa tatactagta acgtaaatac tagttagtag 120

atgatagttg atttttattc caacactaag aaataatttc gccatttctt gaatgtattt 180

aaagatattt aatgctataa tagacattta aatccaattc ttccaacata caatgggagt 240

ttggccgagt ggtttaaggc gtcagattta ggtggattta acctctaaaa tctctgatat 300

cttcggatgc aagggttcga atcccttagc tctcattatt ttttgctttt tctcttgagg 360

tcacatgatc gcaaaatggc aaatggcacg tgaagctgtc gatattgggg aactgtggtg 420

gttggcaaat gactaattaa gttagtcaag gcgccatcct catgaaaact gtgtaacata 480

ataaccgaag tgtcgaaaag gtggcacctt gtccaattga acacgctcga tgaaaaaaat 540

aagatatata taaggttaag taaagcgtct gttagaaagg aagtttttcc tttttcttgc 600

tctcttgtct tttcatctac tatttccttc gtgtaataca gggtcgtcag atacatagat 660

acaattctat tacccccatc cataca 686

<210> 84

<211> 363

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pSAM1

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность промотора pSAM1

<400> 84

gaaacggacg taagacggaa atagaatttg aagataaagt tatatatcac tacacacgaa 60

tactttcttt tttttttttc acaggaaaac tgtggtggcg cccttgccta ctagtgcatt 120

tcttttttcg ggttcttgtc tcgacgaaat tttagcctca tcgtagtttt tcactctggt 180

atcgatgaaa aagggaagag taaaaagttt tccgtttagt acttaatggg attggtttgg 240

gacgtatata tcgactggtg ttgtctgtta ttcatcgttg tttttcggtt agcttcgaaa 300

aaaaaataga gtaaaaacca ggaatttacc ctaaaaacaa gaaaaaataa gataaacgaa 360

aat 363

<210> 85

<211> 300

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tTPI1

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tTPI1

<400> 85

gattaatata attatataaa aatattatct tcttttcttt atatctagtg ttatgtaaaa 60

taaattgatg actacggaaa gcttttttat attgtttctt tttcattctg agccacttaa 120

atttcgtgaa tgttcttgta agggacggta gatttacaag tgatacaaca aaaagcaagg 180

cgctttttct aataaaaaga agaaaagcat ttaacaattg aacacctcta tatcaacgaa 240

gaatattact ttgtctctaa atccttgtaa aatgtgtacg atctctatat gggttactca 300

<210> 86

<211> 299

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tMET25

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tMET25

<400> 86

gtgtgcgtaa tgagttgtaa aattatgtat aaacctactt tctctcacaa gtactatact 60

tttataaaac gaactttatt gaaatgaata tccttttttt cccttgttac atgtcgtgac 120

tcgtactttg aacctaaatt gttctaacat caaagaacag tgttaattcg cagtcgagaa 180

gaaaaatatg gtgaacaaga ctcatctact tcatgagact actttacgcc tcctataaag 240

ctgtcacact ggataaattt attgtaggac caagttacaa aagaggatga tggaggttt 299

<210> 87

<211> 300

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tDIT1

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tDIT1

<400> 87

taaagtaaga gcgctacatt ggtctacctt tttgttcttt tacttaaaca ttagttagtt 60

cgttttcttt ttctcatttt tttatgtttc ccccccaaag ttctgatttt ataatatttt 120

atttcacaca attccattta acagaggggg aatagattct ttagcttaga aaattagtga 180

tcaatatata tttgcctttc ttttcatctt ttcagtgata ttaatggttt cgagacactg 240

caatggccct agttgtctaa gaggatagat gttactgtca aagatgatat tttgaatttc 300

<210> 88

<211> 300

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL3

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL3

<400> 88

gaagttttgt tagaaaataa atcatttttt aattgagcat tcttattcct attttattta 60

aatagtttta tgtattgtta gctacataca acagtttaaa tcaaattttc tttttcccaa 120

gtccaaaatg gaggtttatt ttgatgaccc gcatgcgatt atgttttgaa agtataagac 180

tacatacatg tacatatatt taaacatgta aacccgtcca ttatattgct tactttcttc 240

ttttttgccg ttttgacttg gacctctggt ttgctatttc cttacaatct ttgctacaat 300

<210> 89

<211> 304

<212> ДНК

<213> Saccharomyces mikatae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL3.sm

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL3.sm

<400> 89

gaagttttta aagcattttt tagacacttc tcatttttct aagttttttt aaaatagttt 60

tatgtattta ctacgtatca caatttgaaa taattcatct tcccaaaaaa ctaagatttt 120

tatccttgtc acgatccgta accagtttat aatattttag agcttataca cgtacgtata 180

cacacgtgtc ggtacatgag aattacgttc aaaattattc actttttttt tctctgccgt 240

tttacttttg aactctgtct cgctatttcc ttacaatctt cgctacaata ccacttgccc 300

ttgg 304

<210> 90

<211> 299

<212> ДНК

<213> Saccharomyces bayanus

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL3.sba

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL3.sba

<400> 90

gaagttttct gacaaaaaca taacgttttt tccaatcatt tcttattttt ccggtttatt 60

taaatagttt ttatgtacta ttatacgtat gactatttaa cttaaattct tcctcccaag 120

aaatctccca agtttttcat tatcatggca tacaccacta tcagttacaa aatggtagct 180

caaccatata tatatctcta tatacacata taaatgcaaa caggtccaag tcaccgctca 240

ctgcagtttc ttttgccgtt ttgacttcga tctctgcttg gctattttct cacaatcct 299

<210> 91

<211> 300

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL41B

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL41B

<400> 91

gcggattgag agcaaatcgt taagttcagg tcaagtaaaa attgatttcg aaaactaatt 60

tctcttatac aatcctttga ttggaccgtc atcctttcga atataagatt ttgttaagaa 120

tattttagac agagatctac tttatattta atatctagat attacataat ttcctctcta 180

ataaaatatc attaataaaa taaaaatgaa gcgatttgat tttgtgttgt caacttagtt 240

tgccgctatg cctcttgggt aatgctatta ttgaatcgaa gggctttatt atattaccct 300

<210> 92

<211> 300

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL15A

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL15A

<400> 92

gctggttgat ggaaaatata attttattgg gcaaactttt gtttatctga tgtgttttat 60

actattatct ttttaattaa tgattctata tacaaacctg tatatttttt ctttaaccaa 120

tttttttttt tatagaccta gagctgtact tttattctgc tatcaagcaa acccctaccc 180

cctcttctca atcctcccct caggcagaac ttatctacct gtatcaagga gcggacgagg 240

gagtcctaat tgttctacgt ataccaatgc tagcagctta cataggtggt ggcactacca 300

<210> 93

<211> 300

<212> ДНК

<213> Saccharomyces bayanus

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL15A.sba

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tRPL15A.sba

<400> 93

gctggctgat gaaaaatata gttctgttgg gcaagcattt gtttacctag catctctttt 60

atactattat tatctttata tttgatgatt ttatatacaa gttgtatacc ttttctttaa 120

ccaatttttt tttttctaat ggtgcaccta gaagtacatt ttttctcacc aatagatagt 180

caagatactc ccagcctcta tggcgttacc acggagccga caagggaaag ctgcttatct 240

tacatatgca gatgccaagg cccgttacag gccgccttat tgatgtttag aaatagcttc 300

<210> 94

<211> 300

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tIDP1

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tIDP1

<400> 94

tcgaatttac gtagcccaat ctaccacttt tttttttcat tttttaaagt gttatactta 60

gttatgctct aggataatga actacttttt tttttttttt tttactgtta tcataaatat 120

atatacctta ttgttgtttg caaccgtcgg ttaattcctt atcaaggttc cccaagttcg 180

gatcattacc atcaatttcc aacattttca tgagttcttc ttcttcatta ccgtgtttta 240

gggggctgtt cgcacttcta atagggctat caccaagctg ttctaattcg tccaaaagtt 300

<210> 95

<211> 300

<212> ДНК

<213> Saccharomyces bayanus

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tTEF1.sba

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tTEF1.sba

<400> 95

ggagattgat aggacttttc tagttgcata tcttttattt ttaaatctta tctattagtt 60

aattttttgt aatttatcct tatatatata gtttggttat tctaaaacat catttcagta 120

tctaaaacct ctcttattca ttaccttttt atttaatggt ttttgctaca ggcaaaaatt 180

taatggtttt tgctacaggc aaaaatcccg ccgtggactt attccacgtt aactcggtta 240

cagggtcatg aaccattttg tcaattatcg aaataacttc ttcaaaagtc cctcttactt 300

<210> 96

<211> 1113

<212> ДНК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность глутаминсинтетазы (GLN1)

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность глутаминсинтетазы (GLN1)

<400> 96

atggctgaag caagcatcga aaagactcaa attttacaaa aatatctaga actggaccaa 60

agaggtagaa taattgccga atacgtttgg atcgatggta ctggtaactt acgttccaaa 120

ggtagaactt tgaagaagag aatcacatcc attgaccaat tgccagaatg gaacttcgac 180

ggttcttcta ccaaccaagc gccaggccac gactctgaca tctatttgaa acccgttgct 240

tactacccag atcccttcag gagaggtgac aacattgttg tcttggccgc atgttacaac 300

aatgacggta ctccaaacaa gttcaaccac agacacgaag ctgccaagct atttgctgct 360

cataaggatg aagaaatctg gtttggtcta gaacaagaat acactctatt tgacatgtat 420

gacgatgttt acggatggcc aaagggtggg tacccagctc cacaaggtcc ttactactgt 480

ggtgttggtg ccggtaaggt ttatgccaga gacatgatcg aagctcacta cagagcttgt 540

ttgtatgccg gattagaaat ttctggtatt aacgctgaag tcatgccatc tcaatgggaa 600

ttccaagtcg gtccatgtac cggtattgac atgggtgacc aattatggat ggccagatac 660

tttttgcaca gagtggcaga agagtttggt atcaagatct cattccatcc aaagccattg 720

aagggtgact ggaacggtgc cggttgtcac actaacgttt ccaccaagga aatgagacaa 780

ccaggtggta tgaaatacat cgaacaagcc atcgagaagt tatccaagag acacgctgaa 840

cacattaagt tgtacggtag cgataacgac atgagattaa ctggtagaca tgaaaccgct 900

tccatgactg ccttttcttc tggtgtcgcc aacagaggta gctcaattag aatcccaaga 960

tccgtcgcca aggaaggtta cggttacttt gaagaccgta gaccagcttc caacatcgac 1020

ccatacttgg ttacaggtat catgtgtgaa actgtttgcg gtgctattga caatgctgac 1080

atgacgaagg aatttgaaag agaatcttca taa 1113

<210> 97

<211> 370

<212> БЕЛОК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глутаминсинтетазы (GLN1)

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глутаминсинтетазы (GLN1)

<400> 97

Met Ala Glu Ala Ser Ile Glu Lys Thr Gln Ile Leu Gln Lys Tyr Leu

1 5 10 15

Glu Leu Asp Gln Arg Gly Arg Ile Ile Ala Glu Tyr Val Trp Ile Asp

20 25 30

Gly Thr Gly Asn Leu Arg Ser Lys Gly Arg Thr Leu Lys Lys Arg Ile

35 40 45

Thr Ser Ile Asp Gln Leu Pro Glu Trp Asn Phe Asp Gly Ser Ser Thr

50 55 60

Asn Gln Ala Pro Gly His Asp Ser Asp Ile Tyr Leu Lys Pro Val Ala

65 70 75 80

Tyr Tyr Pro Asp Pro Phe Arg Arg Gly Asp Asn Ile Val Val Leu Ala

85 90 95

Ala Cys Tyr Asn Asn Asp Gly Thr Pro Asn Lys Phe Asn His Arg His

100 105 110

Glu Ala Ala Lys Leu Phe Ala Ala His Lys Asp Glu Glu Ile Trp Phe

115 120 125

Gly Leu Glu Gln Glu Tyr Thr Leu Phe Asp Met Tyr Asp Asp Val Tyr

130 135 140

Gly Trp Pro Lys Gly Gly Tyr Pro Ala Pro Gln Gly Pro Tyr Tyr Cys

145 150 155 160

Gly Val Gly Ala Gly Lys Val Tyr Ala Arg Asp Met Ile Glu Ala His

165 170 175

Tyr Arg Ala Cys Leu Tyr Ala Gly Leu Glu Ile Ser Gly Ile Asn Ala

180 185 190

Glu Val Met Pro Ser Gln Trp Glu Phe Gln Val Gly Pro Cys Thr Gly

195 200 205

Ile Asp Met Gly Asp Gln Leu Trp Met Ala Arg Tyr Phe Leu His Arg

210 215 220

Val Ala Glu Glu Phe Gly Ile Lys Ile Ser Phe His Pro Lys Pro Leu

225 230 235 240

Lys Gly Asp Trp Asn Gly Ala Gly Cys His Thr Asn Val Ser Thr Lys

245 250 255

Glu Met Arg Gln Pro Gly Gly Met Lys Tyr Ile Glu Gln Ala Ile Glu

260 265 270

Lys Leu Ser Lys Arg His Ala Glu His Ile Lys Leu Tyr Gly Ser Asp

275 280 285

Asn Asp Met Arg Leu Thr Gly Arg His Glu Thr Ala Ser Met Thr Ala

290 295 300

Phe Ser Ser Gly Val Ala Asn Arg Gly Ser Ser Ile Arg Ile Pro Arg

305 310 315 320

Ser Val Ala Lys Glu Gly Tyr Gly Tyr Phe Glu Asp Arg Arg Pro Ala

325 330 335

Ser Asn Ile Asp Pro Tyr Leu Val Thr Gly Ile Met Cys Glu Thr Val

340 345 350

Cys Gly Ala Ile Asp Asn Ala Asp Met Thr Lys Glu Phe Glu Arg Glu

355 360 365

Ser Ser

370

<210> 98

<211> 6438

<212> ДНК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность глутаматсинтазы (GLT1)

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность глутаматсинтазы (GLT1)

<400> 98

atgccagtgt tgaaatcaga caatttcgat ccattggaag aagcttacga aggtgggaca 60

attcaaaact ataacgatga acaccatctt cataaatctt gggcaaatgt gattccggac 120

aaacgaggac tttacgaccc tgattatgaa catgacgctt gtggtgtcgg tttcgtagca 180

aataagcatg gtgaacagtc tcacaagatt gttactgacg ctagatatct tttagtgaat 240

atgacacatc gtggtgccgt ctcatctgat gggaacggtg acggtgccgg tattctgcta 300

ggtattcctc acgaatttat gaaaagagaa ttcaagttag atcttgatct agacatacct 360

gagatgggca aatacgccgt aggtaacgtc ttcttcaaga agaacgaaaa aaataacaag 420

aaaaatttaa ttaagtgtca gaagattttc gaggatttag ctgcatcctt caacttatcc 480

gtattaggtt ggagaaacgt ccccgtagat tctactattt taggagacgt tgcattatct 540

cgtgaaccta ctattctaca gccattattg gttccattgt atgatgaaaa acaaccggag 600

tttaatgaaa ctaaatttag aactcaattg tatcttttaa ggaaggaggc ctctcttcaa 660

ataggactgg aaaactggtt ctatgtttgt tccctaaaca ataccaccat tgtttacaag 720

ggtcaattga cgccagctca agtgtataac tactatcccg acttgactaa tgcgcatttc 780

aaatcccaca tggcgttggt ccattcaaga ttttccacta atactttccc ctcttgggat 840

agagctcaac ctttacgttg gctagctcat aatggtgaaa ttaacacctt aagaggtaac 900

aagaattgga tgcgctccag agaaggtgtg atgaattcag caactttcaa agatgagtta 960

gacaaactat acccaattat cgaagaaggt ggttctgatt cagctgcatt ggataacgtt 1020

ttagaactat tgactattaa tggcacatta tctctacctg aagctgttat gatgatggtt 1080

cctgaagcgt atcataagga tatggattct gacctaaaag catggtacga ctgggctgca 1140

tgtctgatgg aaccttggga tggtccagct ttgttaactt tcactgatgg acgttactgt 1200

ggtgctatat tggatagaaa tggtttaaga ccttgtcgtt attacatcac tagtgatgac 1260

agagttatct gtgcttcaga ggtaggtgtc attcctatcg aaaattcatt ggttgttcaa 1320

aaaggtaaac tgaagccagg tgatttattc ctagtggata ctcaattggg tgaaatggtc 1380

gatactaaaa agttaaaatc tcaaatctca aaaagacaag attttaagtc ttggttatcc 1440

aaagtcatca agttagacga cttgttatca aaaaccgcta atttggttcc taaagaattt 1500

atatcacagg attcattgtc tttgaaagtt caaagtgacc cacgtctatt ggccaatggt 1560

tataccttcg aacaagtcac atttctgtta actccaatgg ctttaacagg taaagaagct 1620

ttaggttcga tgggtaacga tgcgccactg gcttgtttaa atgaaaatcc tgtcttactt 1680

tatgattatt tcagacaatt gtttgctcaa gtgaccaatc ctccaattga cccaattcgt 1740

gaagcaaatg ttatgtcgtt agaatgttat gtcggacctc aaggcaacct tttggaaatg 1800

cattcatctc aatgtgatcg tttattattg aaatctccta ttttgcattg gaatgagttc 1860

caagctttga aaaacattga agctgcttac ccatcatggt ctgtagcaga aattgatatc 1920

acattcgaca agagtgaggg tctattgggc tataccgaca caattgataa aatcactaag 1980

ttagcgagcg aagcaattga tgatggtaaa aagatcttaa taattactga caggaaaatg 2040

ggtgccaacc gtgtttccat ctcctctttg attgcaattt catgtattca tcatcaccta 2100

atcagaaaca agcagcgttc ccaagttgct ttgattttgg aaacaggtga agccagagaa 2160

attcaccatt tctgtgtcct actaggttat ggttgtgatg gtgtttatcc atacttagcc 2220

atggaaactt tggtcagaat gaatagagaa ggtctacttc gtaatgtcaa caatgacaat 2280

gatacacttg aggaagggca aatactagaa aattacaagc acgctattga tgcaggtatc 2340

ttgaaggtta tgtctaaaat gggtatctcc actctagcat cctacaaagg tgctcaaatt 2400

tttgaagccc taggtttaga taactctatt gttgatttgt gtttcacagg tacttcttcc 2460

agaattagag gtgtaacttt cgagtatttg gctcaagatg ccttttcttt acatgagcgt 2520

ggttatccat ccagacaaac cattagtaaa tctgttaact taccagaaag tggtgaatac 2580

cactttaggg atggtggtta caaacacgtc aacgaaccaa ccgcaattgc ttcgttacaa 2640

gatactgtca gaaacaaaaa tgatgtctct tggcaattat atgtaaagaa ggaaatggaa 2700

gcaattagag actgtacact aagaggactg ttagaattag attttgaaaa ttctgtcagt 2760

atccctctag aacaagttga accatggact gaaattgcca gaagatttgc gtcaggtgca 2820

atgtcttatg gttctatttc tatggaagct cactctacat tggctattgc catgaatcgt 2880

ttaggggcca aatccaattg tggtgaaggt ggtgaagacg cagaacgttc tgctgttcaa 2940

gaaaacggtg atactatgag atctgctatc aaacaagttg cttccgctag attcggtgta 3000

acttcatact acttgtcaga tgctgatgaa atccaaatta agattgctca gggtgctaag 3060

ccgggtgaag gtggtgaact accagcccac aaagtgtcta aggatatcgc aaaaaccagg 3120

cactccaccc ctaatgttgg gttaatctct cctcctcctc atcacgatat ttattccatt 3180

gaagatttga aacaactgat ttatgatttg aaatgtgcta atccaagagc gggaatttct 3240

gtaaagttgg tttccgaagt tggtgttggt attgttgcct ctggtgtagc taaggctaaa 3300

gccgatcata tcttagtttc tggtcatgat ggtggtacag gtgctgcaag atggacgagt 3360

gtcaaatatg cgggtttgcc atgggaatta ggtctagctg aaactcacca gactttagtc 3420

ttgaatgatt taagacgtaa tgttgttgtc caaaccgatg gtcaattgag aactgggttt 3480

gatattgctg ttgcagtttt attaggggca gaatctttta ccttggcaac agttccatta 3540

attgctatgg gttgtgttat gttaagaaga tgtcacttga actcttgtgc tgttggtatt 3600

gccacacaag atccatattt gagaagtaag tttaagggtc agcccgaaca tgttatcaac 3660

ttcttctatt acttgatcca agatttaaga caaatcatgg ccaagttagg attccgtacc 3720

attgacgaaa tggtgggtca ttctgaaaaa ttaaagaaaa gggacgacgt aaatgccaaa 3780

gccataaata tcgatttatc tcctattttg accccagcac atgttattcg tccaggtgtt 3840

ccaaccaagt tcactaagaa acaagaccac aaactccaca cccgtctaga taataagtta 3900

atcgatgagg ctgaagttac tttggatcgt ggcttaccag tgaatattga cgcctctata 3960

atcaatactg atcgtgcact cggttctact ttatcttaca gagtctcgaa gaaatttggt 4020

gaagatggtt tgccaaagga caccgttgtc gttaacatag aaggttcagc gggtcaatct 4080

tttggtgctt tcctagcttc tggtatcact tttatcttga atggtgatgc taatgattat 4140

gttggtaaag gtttatccgg tggtattatt gtcattaaac caccaaagga ttctaaattc 4200

aagagtgatg aaaatgtaat tgttggtaac acttgtttct atggtgctac ttctggtact 4260

gcattcattt caggtagtgc cggtgagcgt ttcggtgtca gaaactctgg tgccaccatc 4320

gttgttgaga gaattaaggg taacaatgcc tttgagtata tgactggtgg tcgtgccatt 4380

gtcttatcac aaatggaatc cctaaacgcc ttctctggtg ctactggtgg tattgcatac 4440

tgtttaactt ccgattacga cgattttgtt ggaaagatta acaaagatac tgttgagtta 4500

gaatcattat gtgacccggt cgagattgcg tttgttaaga atttgatcca ggagcattgg 4560

aactacacac aatctgatct agcagccagg attctcggta atttcaacca ttatttgaaa 4620

gatttcgtta aagtcattcc aactgattat aagaaagttt tgttgaagga gaaagcagaa 4680

gctgccaagg caaaggctaa ggcaacttca gaatacttaa agaagtttag atcgaaccaa 4740

gaagttgatg acgaagtcaa tactctattg attgctaatc aaaaagctaa agagcaagaa 4800

aaaaagaaga gtattactat ttcaaataag gccactttga aggagcctaa ggttgttgat 4860

ttagaagatg cagttccaga ttccaaacag ctagagaaga atagcgaaag gattgaaaaa 4920

acacgtggtt ttatgatcca caaacgtcgt catgagacac acagagatcc aagaaccaga 4980

gttaatgact ggaaagaatt tactaaccct attaccaaga aggatgccaa atatcaaact 5040

gcgagatgta tggattgtgg tacaccattc tgtttatctg ataccggttg tcccctatct 5100

aacattatcc ccaagtttaa tgaattgtta ttcaagaacc aatggaagtt ggcactggac 5160

aaattgctag agacaaacaa tttcccagaa ttcactggaa gagtatgtcc agcaccctgt 5220

gagggagctt gtacactagg tattattgaa gacccagtcg gcataaaatc ggttgaaaga 5280

attatcattg acaatgcttt caaggaagga tggattaagc cttgtccacc aagtacacgc 5340

actggcttta cagtgggtgt cattggttct ggtccagcag gtttagcgtg tgctgatatg 5400

ttgaaccgtg ccggacatac ggtcactgtt tatgaaagat ccgaccgttg tggtgggtta 5460

ttgatgtatg gtattccaaa catgaagttg gataaggcta tagtgcaacg tcgtattgat 5520

ctattgagtg ccgaaggtat tgactttgtt accaacaccg aaattggtaa aaccataagc 5580

atggatgagc taaagaacaa gcacaatgca gtagtgtatg ctatcggttc taccattcca 5640

cgtgacttac ctattaaggg tcgtgaattg aagaatattg attttgccat gcagttgttg 5700

gaatctaaca caaaagcttt attgaacaaa gatctggaaa tcattcgtga aaagatccaa 5760

ggtaagaaag taattgttgt cggtggtggt gacacaggta acgattgttt aggtacatct 5820

gtaagacacg gtgcagcatc agttttgaat ttcgaattgt tgcctgagcc accagtggaa 5880

cgtgccaaag acaatccatg gcctcaatgg ccgcgtgtca tgagagtgga ctacggtcat 5940

gctgaagtga aagagcatta tggtagagac cctcgtgaat actgcatctt gtccaaggaa 6000

tttatcggta acgatgaggg tgaagtcact gccatcagaa ctgtgcgcgt agaatggaag 6060

aagtcacaaa gtggcgtatg gcaaatggta gaaattccca acagtgaaga gatctttgaa 6120

gccgatatca ttttgttgtc tatgggtttc gtgggtcctg aattgatcaa tggcaacgat 6180

aacgaagtta agaagacaag acgtggtacg attgccacac tcgacgactc ctcatactct 6240

attgatggag gaaagacttt tgcatgtggt gactgtagaa gagggcaatc tttgattgtc 6300

tgggccatcc aagaaggtag aaaatgtgct gcctctgtcg ataagttcct aatggacggc 6360

actacgtatc taccaagtaa tggtggtatc gttcaacgtg attacaaact attgaaagaa 6420

ttagctagtc aagtctaa 6438

<210> 99

<211> 2145

<212> БЕЛОК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глутаматсинтазы (GLT1)

<220>

<223> Аминокислотная последовательность глутаматсинтазы (GLT1)

<400> 99

Met Pro Val Leu Lys Ser Asp Asn Phe Asp Pro Leu Glu Glu Ala Tyr

1 5 10 15

Glu Gly Gly Thr Ile Gln Asn Tyr Asn Asp Glu His His Leu His Lys

20 25 30

Ser Trp Ala Asn Val Ile Pro Asp Lys Arg Gly Leu Tyr Asp Pro Asp

35 40 45

Tyr Glu His Asp Ala Cys Gly Val Gly Phe Val Ala Asn Lys His Gly

50 55 60

Glu Gln Ser His Lys Ile Val Thr Asp Ala Arg Tyr Leu Leu Val Asn

65 70 75 80

Met Thr His Arg Gly Ala Val Ser Ser Asp Gly Asn Gly Asp Gly Ala

85 90 95

Gly Ile Leu Leu Gly Ile Pro His Glu Phe Met Lys Arg Glu Phe Lys

100 105 110

Leu Asp Leu Asp Leu Asp Ile Pro Glu Met Gly Lys Tyr Ala Val Gly

115 120 125

Asn Val Phe Phe Lys Lys Asn Glu Lys Asn Asn Lys Lys Asn Leu Ile

130 135 140

Lys Cys Gln Lys Ile Phe Glu Asp Leu Ala Ala Ser Phe Asn Leu Ser

145 150 155 160

Val Leu Gly Trp Arg Asn Val Pro Val Asp Ser Thr Ile Leu Gly Asp

165 170 175

Val Ala Leu Ser Arg Glu Pro Thr Ile Leu Gln Pro Leu Leu Val Pro

180 185 190

Leu Tyr Asp Glu Lys Gln Pro Glu Phe Asn Glu Thr Lys Phe Arg Thr

195 200 205

Gln Leu Tyr Leu Leu Arg Lys Glu Ala Ser Leu Gln Ile Gly Leu Glu

210 215 220

Asn Trp Phe Tyr Val Cys Ser Leu Asn Asn Thr Thr Ile Val Tyr Lys

225 230 235 240

Gly Gln Leu Thr Pro Ala Gln Val Tyr Asn Tyr Tyr Pro Asp Leu Thr

245 250 255

Asn Ala His Phe Lys Ser His Met Ala Leu Val His Ser Arg Phe Ser

260 265 270

Thr Asn Thr Phe Pro Ser Trp Asp Arg Ala Gln Pro Leu Arg Trp Leu

275 280 285

Ala His Asn Gly Glu Ile Asn Thr Leu Arg Gly Asn Lys Asn Trp Met

290 295 300

Arg Ser Arg Glu Gly Val Met Asn Ser Ala Thr Phe Lys Asp Glu Leu

305 310 315 320

Asp Lys Leu Tyr Pro Ile Ile Glu Glu Gly Gly Ser Asp Ser Ala Ala

325 330 335

Leu Asp Asn Val Leu Glu Leu Leu Thr Ile Asn Gly Thr Leu Ser Leu

340 345 350

Pro Glu Ala Val Met Met Met Val Pro Glu Ala Tyr His Lys Asp Met

355 360 365

Asp Ser Asp Leu Lys Ala Trp Tyr Asp Trp Ala Ala Cys Leu Met Glu

370 375 380

Pro Trp Asp Gly Pro Ala Leu Leu Thr Phe Thr Asp Gly Arg Tyr Cys

385 390 395 400

Gly Ala Ile Leu Asp Arg Asn Gly Leu Arg Pro Cys Arg Tyr Tyr Ile

405 410 415

Thr Ser Asp Asp Arg Val Ile Cys Ala Ser Glu Val Gly Val Ile Pro

420 425 430

Ile Glu Asn Ser Leu Val Val Gln Lys Gly Lys Leu Lys Pro Gly Asp

435 440 445

Leu Phe Leu Val Asp Thr Gln Leu Gly Glu Met Val Asp Thr Lys Lys

450 455 460

Leu Lys Ser Gln Ile Ser Lys Arg Gln Asp Phe Lys Ser Trp Leu Ser

465 470 475 480

Lys Val Ile Lys Leu Asp Asp Leu Leu Ser Lys Thr Ala Asn Leu Val

485 490 495

Pro Lys Glu Phe Ile Ser Gln Asp Ser Leu Ser Leu Lys Val Gln Ser

500 505 510

Asp Pro Arg Leu Leu Ala Asn Gly Tyr Thr Phe Glu Gln Val Thr Phe

515 520 525

Leu Leu Thr Pro Met Ala Leu Thr Gly Lys Glu Ala Leu Gly Ser Met

530 535 540

Gly Asn Asp Ala Pro Leu Ala Cys Leu Asn Glu Asn Pro Val Leu Leu

545 550 555 560

Tyr Asp Tyr Phe Arg Gln Leu Phe Ala Gln Val Thr Asn Pro Pro Ile

565 570 575

Asp Pro Ile Arg Glu Ala Asn Val Met Ser Leu Glu Cys Tyr Val Gly

580 585 590

Pro Gln Gly Asn Leu Leu Glu Met His Ser Ser Gln Cys Asp Arg Leu

595 600 605

Leu Leu Lys Ser Pro Ile Leu His Trp Asn Glu Phe Gln Ala Leu Lys

610 615 620

Asn Ile Glu Ala Ala Tyr Pro Ser Trp Ser Val Ala Glu Ile Asp Ile

625 630 635 640

Thr Phe Asp Lys Ser Glu Gly Leu Leu Gly Tyr Thr Asp Thr Ile Asp

645 650 655

Lys Ile Thr Lys Leu Ala Ser Glu Ala Ile Asp Asp Gly Lys Lys Ile

660 665 670

Leu Ile Ile Thr Asp Arg Lys Met Gly Ala Asn Arg Val Ser Ile Ser

675 680 685

Ser Leu Ile Ala Ile Ser Cys Ile His His His Leu Ile Arg Asn Lys

690 695 700

Gln Arg Ser Gln Val Ala Leu Ile Leu Glu Thr Gly Glu Ala Arg Glu

705 710 715 720

Ile His His Phe Cys Val Leu Leu Gly Tyr Gly Cys Asp Gly Val Tyr

725 730 735

Pro Tyr Leu Ala Met Glu Thr Leu Val Arg Met Asn Arg Glu Gly Leu

740 745 750

Leu Arg Asn Val Asn Asn Asp Asn Asp Thr Leu Glu Glu Gly Gln Ile

755 760 765

Leu Glu Asn Tyr Lys His Ala Ile Asp Ala Gly Ile Leu Lys Val Met

770 775 780

Ser Lys Met Gly Ile Ser Thr Leu Ala Ser Tyr Lys Gly Ala Gln Ile

785 790 795 800

Phe Glu Ala Leu Gly Leu Asp Asn Ser Ile Val Asp Leu Cys Phe Thr

805 810 815

Gly Thr Ser Ser Arg Ile Arg Gly Val Thr Phe Glu Tyr Leu Ala Gln

820 825 830

Asp Ala Phe Ser Leu His Glu Arg Gly Tyr Pro Ser Arg Gln Thr Ile

835 840 845

Ser Lys Ser Val Asn Leu Pro Glu Ser Gly Glu Tyr His Phe Arg Asp

850 855 860

Gly Gly Tyr Lys His Val Asn Glu Pro Thr Ala Ile Ala Ser Leu Gln

865 870 875 880

Asp Thr Val Arg Asn Lys Asn Asp Val Ser Trp Gln Leu Tyr Val Lys

885 890 895

Lys Glu Met Glu Ala Ile Arg Asp Cys Thr Leu Arg Gly Leu Leu Glu

900 905 910

Leu Asp Phe Glu Asn Ser Val Ser Ile Pro Leu Glu Gln Val Glu Pro

915 920 925

Trp Thr Glu Ile Ala Arg Arg Phe Ala Ser Gly Ala Met Ser Tyr Gly

930 935 940

Ser Ile Ser Met Glu Ala His Ser Thr Leu Ala Ile Ala Met Asn Arg

945 950 955 960

Leu Gly Ala Lys Ser Asn Cys Gly Glu Gly Gly Glu Asp Ala Glu Arg

965 970 975

Ser Ala Val Gln Glu Asn Gly Asp Thr Met Arg Ser Ala Ile Lys Gln

980 985 990

Val Ala Ser Ala Arg Phe Gly Val Thr Ser Tyr Tyr Leu Ser Asp Ala

995 1000 1005

Asp Glu Ile Gln Ile Lys Ile Ala Gln Gly Ala Lys Pro Gly Glu Gly

1010 1015 1020

Gly Glu Leu Pro Ala His Lys Val Ser Lys Asp Ile Ala Lys Thr Arg

1025 1030 1035 1040

His Ser Thr Pro Asn Val Gly Leu Ile Ser Pro Pro Pro His His Asp

1045 1050 1055

Ile Tyr Ser Ile Glu Asp Leu Lys Gln Leu Ile Tyr Asp Leu Lys Cys

1060 1065 1070

Ala Asn Pro Arg Ala Gly Ile Ser Val Lys Leu Val Ser Glu Val Gly

1075 1080 1085

Val Gly Ile Val Ala Ser Gly Val Ala Lys Ala Lys Ala Asp His Ile

1090 1095 1100

Leu Val Ser Gly His Asp Gly Gly Thr Gly Ala Ala Arg Trp Thr Ser

1105 1110 1115 1120

Val Lys Tyr Ala Gly Leu Pro Trp Glu Leu Gly Leu Ala Glu Thr His

1125 1130 1135

Gln Thr Leu Val Leu Asn Asp Leu Arg Arg Asn Val Val Val Gln Thr

1140 1145 1150

Asp Gly Gln Leu Arg Thr Gly Phe Asp Ile Ala Val Ala Val Leu Leu

1155 1160 1165

Gly Ala Glu Ser Phe Thr Leu Ala Thr Val Pro Leu Ile Ala Met Gly

1170 1175 1180

Cys Val Met Leu Arg Arg Cys His Leu Asn Ser Cys Ala Val Gly Ile

1185 1190 1195 1200

Ala Thr Gln Asp Pro Tyr Leu Arg Ser Lys Phe Lys Gly Gln Pro Glu

1205 1210 1215

His Val Ile Asn Phe Phe Tyr Tyr Leu Ile Gln Asp Leu Arg Gln Ile

1220 1225 1230

Met Ala Lys Leu Gly Phe Arg Thr Ile Asp Glu Met Val Gly His Ser

1235 1240 1245

Glu Lys Leu Lys Lys Arg Asp Asp Val Asn Ala Lys Ala Ile Asn Ile

1250 1255 1260

Asp Leu Ser Pro Ile Leu Thr Pro Ala His Val Ile Arg Pro Gly Val

1265 1270 1275 1280

Pro Thr Lys Phe Thr Lys Lys Gln Asp His Lys Leu His Thr Arg Leu

1285 1290 1295

Asp Asn Lys Leu Ile Asp Glu Ala Glu Val Thr Leu Asp Arg Gly Leu

1300 1305 1310

Pro Val Asn Ile Asp Ala Ser Ile Ile Asn Thr Asp Arg Ala Leu Gly

1315 1320 1325

Ser Thr Leu Ser Tyr Arg Val Ser Lys Lys Phe Gly Glu Asp Gly Leu

1330 1335 1340

Pro Lys Asp Thr Val Val Val Asn Ile Glu Gly Ser Ala Gly Gln Ser

1345 1350 1355 1360

Phe Gly Ala Phe Leu Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ile Leu Asn Gly Asp

1365 1370 1375

Ala Asn Asp Tyr Val Gly Lys Gly Leu Ser Gly Gly Ile Ile Val Ile

1380 1385 1390

Lys Pro Pro Lys Asp Ser Lys Phe Lys Ser Asp Glu Asn Val Ile Val

1395 1400 1405

Gly Asn Thr Cys Phe Tyr Gly Ala Thr Ser Gly Thr Ala Phe Ile Ser

1410 1415 1420

Gly Ser Ala Gly Glu Arg Phe Gly Val Arg Asn Ser Gly Ala Thr Ile

1425 1430 1435 1440

Val Val Glu Arg Ile Lys Gly Asn Asn Ala Phe Glu Tyr Met Thr Gly

1445 1450 1455

Gly Arg Ala Ile Val Leu Ser Gln Met Glu Ser Leu Asn Ala Phe Ser

1460 1465 1470

Gly Ala Thr Gly Gly Ile Ala Tyr Cys Leu Thr Ser Asp Tyr Asp Asp

1475 1480 1485

Phe Val Gly Lys Ile Asn Lys Asp Thr Val Glu Leu Glu Ser Leu Cys

1490 1495 1500

Asp Pro Val Glu Ile Ala Phe Val Lys Asn Leu Ile Gln Glu His Trp

1505 1510 1515 1520

Asn Tyr Thr Gln Ser Asp Leu Ala Ala Arg Ile Leu Gly Asn Phe Asn

1525 1530 1535

His Tyr Leu Lys Asp Phe Val Lys Val Ile Pro Thr Asp Tyr Lys Lys

1540 1545 1550

Val Leu Leu Lys Glu Lys Ala Glu Ala Ala Lys Ala Lys Ala Lys Ala

1555 1560 1565

Thr Ser Glu Tyr Leu Lys Lys Phe Arg Ser Asn Gln Glu Val Asp Asp

1570 1575 1580

Glu Val Asn Thr Leu Leu Ile Ala Asn Gln Lys Ala Lys Glu Gln Glu

1585 1590 1595 1600

Lys Lys Lys Ser Ile Thr Ile Ser Asn Lys Ala Thr Leu Lys Glu Pro

1605 1610 1615

Lys Val Val Asp Leu Glu Asp Ala Val Pro Asp Ser Lys Gln Leu Glu

1620 1625 1630

Lys Asn Ser Glu Arg Ile Glu Lys Thr Arg Gly Phe Met Ile His Lys

1635 1640 1645

Arg Arg His Glu Thr His Arg Asp Pro Arg Thr Arg Val Asn Asp Trp

1650 1655 1660

Lys Glu Phe Thr Asn Pro Ile Thr Lys Lys Asp Ala Lys Tyr Gln Thr

1665 1670 1675 1680

Ala Arg Cys Met Asp Cys Gly Thr Pro Phe Cys Leu Ser Asp Thr Gly

1685 1690 1695

Cys Pro Leu Ser Asn Ile Ile Pro Lys Phe Asn Glu Leu Leu Phe Lys

1700 1705 1710

Asn Gln Trp Lys Leu Ala Leu Asp Lys Leu Leu Glu Thr Asn Asn Phe

1715 1720 1725

Pro Glu Phe Thr Gly Arg Val Cys Pro Ala Pro Cys Glu Gly Ala Cys

1730 1735 1740

Thr Leu Gly Ile Ile Glu Asp Pro Val Gly Ile Lys Ser Val Glu Arg

1745 1750 1755 1760

Ile Ile Ile Asp Asn Ala Phe Lys Glu Gly Trp Ile Lys Pro Cys Pro

1765 1770 1775

Pro Ser Thr Arg Thr Gly Phe Thr Val Gly Val Ile Gly Ser Gly Pro

1780 1785 1790

Ala Gly Leu Ala Cys Ala Asp Met Leu Asn Arg Ala Gly His Thr Val

1795 1800 1805

Thr Val Tyr Glu Arg Ser Asp Arg Cys Gly Gly Leu Leu Met Tyr Gly

1810 1815 1820

Ile Pro Asn Met Lys Leu Asp Lys Ala Ile Val Gln Arg Arg Ile Asp

1825 1830 1835 1840

Leu Leu Ser Ala Glu Gly Ile Asp Phe Val Thr Asn Thr Glu Ile Gly

1845 1850 1855

Lys Thr Ile Ser Met Asp Glu Leu Lys Asn Lys His Asn Ala Val Val

1860 1865 1870

Tyr Ala Ile Gly Ser Thr Ile Pro Arg Asp Leu Pro Ile Lys Gly Arg

1875 1880 1885

Glu Leu Lys Asn Ile Asp Phe Ala Met Gln Leu Leu Glu Ser Asn Thr

1890 1895 1900

Lys Ala Leu Leu Asn Lys Asp Leu Glu Ile Ile Arg Glu Lys Ile Gln

1905 1910 1915 1920

Gly Lys Lys Val Ile Val Val Gly Gly Gly Asp Thr Gly Asn Asp Cys

1925 1930 1935

Leu Gly Thr Ser Val Arg His Gly Ala Ala Ser Val Leu Asn Phe Glu

1940 1945 1950

Leu Leu Pro Glu Pro Pro Val Glu Arg Ala Lys Asp Asn Pro Trp Pro

1955 1960 1965

Gln Trp Pro Arg Val Met Arg Val Asp Tyr Gly His Ala Glu Val Lys

1970 1975 1980

Glu His Tyr Gly Arg Asp Pro Arg Glu Tyr Cys Ile Leu Ser Lys Glu

1985 1990 1995 2000

Phe Ile Gly Asn Asp Glu Gly Glu Val Thr Ala Ile Arg Thr Val Arg

2005 2010 2015

Val Glu Trp Lys Lys Ser Gln Ser Gly Val Trp Gln Met Val Glu Ile

2020 2025 2030

Pro Asn Ser Glu Glu Ile Phe Glu Ala Asp Ile Ile Leu Leu Ser Met

2035 2040 2045

Gly Phe Val Gly Pro Glu Leu Ile Asn Gly Asn Asp Asn Glu Val Lys

2050 2055 2060

Lys Thr Arg Arg Gly Thr Ile Ala Thr Leu Asp Asp Ser Ser Tyr Ser

2065 2070 2075 2080

Ile Asp Gly Gly Lys Thr Phe Ala Cys Gly Asp Cys Arg Arg Gly Gln

2085 2090 2095

Ser Leu Ile Val Trp Ala Ile Gln Glu Gly Arg Lys Cys Ala Ala Ser

2100 2105 2110

Val Asp Lys Phe Leu Met Asp Gly Thr Thr Tyr Leu Pro Ser Asn Gly

2115 2120 2125

Gly Ile Val Gln Arg Asp Tyr Lys Leu Leu Lys Glu Leu Ala Ser Gln

2130 2135 2140

Val

2145

<210> 100

<211> 300

<212> ДНК

<213> Saccharomyces cerevisiae

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tTDH3

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность терминатора tTDH3

<400> 100

gtgaatttac tttaaatctt gcatttaaat aaattttctt tttatagctt tatgacttag 60

tttcaattta tatactattt taatgacatt ttcgattcat tgattgaaag ctttgtgttt 120

tttcttgatg cgctattgca ttgttcttgt ctttttcgcc acatgtaata tctgtagtag 180

atacctgata cattgtggat gctgagtgaa attttagtta ataatggagg cgctcttaat 240

aattttgggg atattggctt ttttttttaa agtttacaaa tgaatttttt ccgccaggat 300

<210> 101

<211> 1788

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CviKI

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CviKI

<400> 101

atgcttttca gttgtttgtc cttcgtgatc tgccatctta gttttatttt gcgttattac 60

aagaggcttc taaaagtgac gatgggaaag aacattataa taatggtgag ttggtacaca 120

ataataactt ccaacatcat cgccgtcggt ggggcgtctc tgattttggc cccagccatc 180

actggataca tcttgcactg gaacatcgcc ttgtcaacca tctggggagt ttccgcttat 240

gggatattcg tgttcggatt cttcctggct caggttttat ttagtgagct aaatcgtaaa 300

agactaagaa agtggatttc tctaagacca aagggttgga acgacgtacg tctggctgtc 360

atcatagctg gttacaggga agacccgtac atgtttcaga aatgccttga gtcagtaagg 420

gactctgact atggtaatgt cgctcgtctt atctgtgtaa ttgacggaga tgaggacgac 480

gacatgaaga tggcagccgt ttataaggcg atatataatg acaatatcaa gaagccagag 540

tttgtgttat gtgagagcga tgataaggaa ggcgagagaa ttgactcaga ttttagcagg 600

gacatctgcg tcttacaacc acaccgtggc aaaagggagt gcttgtatac cggctttcag 660

ctggccaaaa tggacccgtc ggtaaacgcc gttgttctta ttgactctga cacggtcttg 720

gaaaaggacg caatcttgga agtcgtgtat ccattggcct gtgacccgga aattcaagct 780

gtcgcaggag agtgcaaaat atggaacaca gatacacttt tgtcgttgtt ggtggcttgg 840

agatattatt cagccttttg cgtggagaga tccgcccaat cattctttag gacagtccag 900

tgtgtaggtg gacccttggg cgcctacaag atagatatca tcaaagagat caaagatccc 960

tggatctccc aacgtttctt aggtcagaag tgcacctacg gtgacgaccg taggttaaca 1020

aatgaaatct taatgagggg taagaaggtc gtcttcactc ctttcgcagt tggctggagt 1080

gactcaccaa ccaacgtgtt caggtacatc gtacaacaga ctaggtggag taaatcatgg 1140

tgccgtgaga tatggtacac tttgtttgct gcgtggaagc acggactaag cggaatttgg 1200

ttggcatttg agtgccttta tcagattacg tacttcttcc tagtcatata tttattttcg 1260

agactagccg ttgaagctga cccaagagca cagaccgcaa cagtaatcgt gtctaccacg 1320

gtagccctga ttaagtgtgg ttacttctct tttcgtgcga aagatattcg tgctttctac 1380

ttcgtcctgt acacatttgt ctacttcttc tgtatgatcc cagcaagggt gacagccatg 1440

atgacacttt gggatatcgg ctggggcacg cgtggcggaa acgagaaacc aagtgtcggc 1500

actagggtcg ctctgtgggc taaacagtat ttgatagcat acatgtggtg ggcagcagtt 1560

gttggcgctg gggtatactc cattgttcat aattggatgt ttgactggaa ctcactatcc 1620

tataggttcg cacttgtagg tatatgctct tacatcgtat tcatcacaat cgttctagtc 1680

atctatttca caggaaagat taccacatgg aatttcacca aattacagaa ggagttaatc 1740

aaggataggg tcttatacga tgcttccact aacgcccaga ctgtataa 1788

<210> 102

<211> 1803

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы IL-5-2s1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы IL-5-2s1

<400> 102

atggctgctt cattctatgt tatcttcttg ttcgtaatat gccacctgtc cttcgtctta 60

tatcgtcaag ttctatacat aattttgggt agatactgga gtgttaacaa gctgacaatg 120

atctcttggt ataccattat atcatctaat ctaatcgcaa tcggtggggc ttcccttatt 180

ttggcaccgg ccataaccgg ctacattttg cattggaaca tagctctaag cacaatttgg 240

ggtgtgtcag cctatggcat tttcgtgttc gggttctttc ttgctcaggt tttgttcagt 300

gagcttaaca ggaagaggtt gagaaaatgg atctctttga gaccagataa ctggaacgcg 360

gtgagagttg ccgtgataat cgctggttac cgtgaagacc catacatgtt tcaaaagtgt 420

ttggaatcgg tgagagactc cgattatggt aacattgcga ggcttatatg cgttatagat 480

ggggacgaag atgacgacat gaagatggca gatgtataca aggctattta caatgacaat 540

ataaagaagc cggaaattat cctatgtgag tccgacgaca aagagggaga aaggatagac 600

agtgatttta gccgtgatat ttgcgtgctt cagcctcaca gaggtaagcg tgaatgttta 660

tatactggct ttcagttagc taaaatggac ccctctgtac acgcggttgt gcttattgac 720

tcggatacag ttttggagaa ggatgccatc ctggaagtgg tctacccact tgcttgcgac 780

catgagattc aagcagtcgc aggtgaatgc aagatatgga atacggacac cttattatcc 840

atattagtcg cctggcgtta ctactcagct ttctgcgttg agcgtagcgc tcagtccttc 900

ttccgtactg tgcaatgcgt cggcggtccg ttaggggcat acaaaataga cataattaaa 960

gagataaagg agccgtggat ttcacaaaga tttctgggtc agaagtgtac gtacggagat 1020

gacagaagat taactaacga agtgttgatg cgtggaaaga aagtagtctt cacacctttt 1080

gcggtaggat ggagcgactc gcctactaat gtcttccgtt atattgtgca gcagacgagg 1140

tggagtaaga gctggtgcag ggagatttgg tatacactgt tcgcggcgtg gaagcatggg 1200

ttatcaggca tttggttggc atttgagtgc ttgtatcaga tcacatactt ctttctagtg 1260

atatatctgt tcagtagact agcagtcgag gctgacccga gagcgcaaac tgcaacggtt 1320

atagtcagca caatggtttc actaatcaag tgtggatatt tctcattccg tgctaaggac 1380

attagagcgt tttatttcgt actatatact tttgtgtact tcttttgcat gatcccagca 1440

agagtcactg ctatgatgac cttgtgggat attgggtggg gtactagggg tggaaacgtg 1500

aaaccatcga tcggaactag gatctctttg tgggctaagc agtacttaat cgcgtacatg 1560

tggtgggcag ctgtgatcgc cgcaggagtc tatagtataa tacataattg gatgtttgat 1620

tggaactcct tgtcctatcg tttcgcgtta ataggcatct gctcgtatat cgtattcatt 1680

gccattgtta tagtgatata cttcacaggt aagatcacca cttggaattt taccaagcta 1740

cagaaagagt taattgaaga tagagtcttg catgatgccg atgtggacat acagaacgta 1800

taa 1803

<210> 103

<211> 1686

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CZ-2

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CZ-2

<400> 103

atgacatctt ggagaacgat tgtgtcagct aaccttttcg cagttggtgg ggctcttcta 60

atgttagccc cagctatcgt gggctatgta tttcagtgga atataggcgt gtccgcagtc 120

tggggcatct ccgtatacgg cgtctttgtg ttgggatttt atatcgctca aatcgtcttc 180

tctgagttca acaggatgag attatccgat tggataagtc ttagaccaga caactggaac 240

gccacaaggg ttgcggtcat tatagctgga tacagagaag atccttttat gttcaagaag 300

tgcttagaga gtgtgaggga ttcggaatac ggcaacgtag caaggcttat atgcgtaatt 360

gacggagacg aagaagagga cctaaagatg gctgagattt acaagcaggt ttacaatgac 420

aacgtgaaga aaccaggtgt agtgttatgc gaatcggaga acaagaatgg atcgactata 480

gattcggacg tatctaagaa tatatgcata ctgcaacccc accgtgggaa acgtgagagc 540

ctatataccg gtttccaatt ggcaagcatg gacccttccg tacatgcggt tgttcttata 600

gattccgaca ctgtattaga gaagaatgct attcttgagg tcgtataccc tctatcttgt 660

gaccccaaca ttaaggccgt cgccggggag tgcaagatat ggaatacaga caccatcttg 720

tccatgcttg tctcttggag atacttctct gccttcaatg tcgagcgtgg agcccagtca 780

ttatggaaga ctgtgcaatg cgtaggcggg ccacttggcg catacactat cgacatcata 840

aatgaaatta aagacccgtg gattacccag acattcctgg gcaacaagtg cacttatggc 900

gacgatagac gtcttaccaa tgaggtttta atgaggggca agaagattgt atacactccg 960

tttgccgtcg gttggagcga cagtccgacg aatgtcatga ggtacattgt gcagcaaact 1020

agatggagta agtcatggtg cagagagata tggtacacgt taggcagtgc ctggaaacat 1080

ggattctccg gcatatacct tgcgtttgag tgtatgtacc agataatgta cttcttctta 1140

gtcatgtacc tgttttcgta tatcgcaata aaggcagaca tccgtgctca gactgcaact 1200

gtgttggttt ctactctagt caccataata aagagcagtt acctagcgct gagggccaag 1260

aacctgaagg ctttctattt cgttctgtat acctatgtct atttcttttg catgatacct 1320

gctaggatta ccgctatgtt tacaatgttt gatatagctt ggggtacacg tggtggtaat 1380

gcgaaaatga caatcggggc tagagtttgg ctgtgggcga agcagttctt aataacttat 1440

atgtggtggg caggagtact agcggcggga gtttacagta tagttgacaa ttggtacttc 1500

gattgggctg atatacagta caggtttgca ttggtaggta tttgctcgta tttggtcttt 1560

gtcagtattg tactggtaat ctacttgatc ggtaagataa caacgtggaa ctacacaccg 1620

ctacagaagg aacttattga ggagagatac ttgcataacg cctctgagaa tgccccggaa 1680

gtttaa 1686

<210> 104

<211> 1677

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CVG-1

<220>

<223> Перекодированная нуклеотидная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CVG-1

<400> 104

atgacttctt ggcgtacaat tgtttctgct aacttgttcg cagttggtgg cgccttgttg 60

atgttagctc ccgcgatagc cggttatgta tttaaatgga acataggcgt ttctgccgtt 120

tggggtattt cagtgtacgg ggtcttcgtg cttggtttct atattgcaca ggtagtcttc 180

agcgagttta ataggatgca gctgtcagac tggatctcat tgagacccga caactggaac 240

gccaccagag tagcggtaat tattgctggt tacagggaag acccctttat gttcaagaag 300

tgcctagaat ctgtgagaga ctcagaatac gggaacatag cgaggctaat ctgtgttatc 360

gacggcgatg aagaggaaga ccttaagatg gctgagatat acaagcaagt atacaacgac 420

aacgtcaaga cccccggtgt tgtgctatgc gagaatgaaa ataagaatgg tagcaccatt 480

gacccagatt ttagtaagaa catctgcatt ctgcaaccac acaggggcaa acgtgaatct 540

ttgtacaccg gattccagat ggctggcatg gacccatcag tgcacgcagt tgtacttata 600

gacagtgata ctgttcttga aaagaacgct atcctagagg ttgtgtaccc tctatcttgt 660

gatccaaata tcaaagctgt cgcgggagag tgtaaaatct ggaacacaga taccattttg 720

tctatgctag tttcatggcg ttatttctcg gctttcaacg tggagagagg cgcacagtcc 780

ctttggaaaa cagtccagtg tgtcggcggg cctttgggag catacactat agacatcata 840

aacgagataa aagacccctg gattactcag acattcttag gaaacaaatg tacgtatggt 900

gacgacagaa ggttaaccaa tgaagtgctt atgaggggaa agaagattgt ctatactccc 960

tttgctgtcg gttggtccga ttcgcccaca aacgttatga ggtacatcgt ccagcagaca 1020

aggtggtcta agagctggtg ccgtgagatt tggtacacct tgggatcagc atggaaacat 1080

ggtttctccg gaatctactt agcgttcgag tgcatgtacc agattatgta tttctttatt 1140

gtgatgtatt tgttcagtta cattgccatt aaagccaaca tcagggcaca agcagccacg 1200

gtattggtca gtacgcttgt cgcagtaatc aaatctagtt atttggcatt aagagcgaag 1260

aacctaaaag ctttgtattt cgtcctgtat acctacgtct acttcttctg catgattcca 1320

gctagaataa cagcgatgtt cacgatgttc gatattgcat ggggtactag aggcggtaac 1380

gcaaagatga cgatcggtgc tagagtctgg ttgtgggcta aacaattctt aattacatac 1440

atgtggtggg tgggagtttt ggccgctggg gtctacagta tagtcgataa ctggtacttc 1500

gactgggcgg acatccagta cagattcgcg ctagtgggga tttgcagtta cttaggtttc 1560

gtttccataa tgctggtatt ctatctgatt ggtaaaataa ctacgtggaa ttacactcct 1620

ctacaaaagg agctgattaa agagaggtta cacgccgcta atgcaacaga ggtctaa 1677

<210> 105

<211> 595

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CviKI

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CviKI

<400> 105

Met Leu Phe Ser Cys Leu Ser Phe Val Ile Cys His Leu Ser Phe Ile

1 5 10 15

Leu Arg Tyr Tyr Lys Arg Leu Leu Lys Val Thr Met Gly Lys Asn Ile

20 25 30

Ile Ile Met Val Ser Trp Tyr Thr Ile Ile Thr Ser Asn Ile Ile Ala

35 40 45

Val Gly Gly Ala Ser Leu Ile Leu Ala Pro Ala Ile Thr Gly Tyr Ile

50 55 60

Leu His Trp Asn Ile Ala Leu Ser Thr Ile Trp Gly Val Ser Ala Tyr

65 70 75 80

Gly Ile Phe Val Phe Gly Phe Phe Leu Ala Gln Val Leu Phe Ser Glu

85 90 95

Leu Asn Arg Lys Arg Leu Arg Lys Trp Ile Ser Leu Arg Pro Lys Gly

100 105 110

Trp Asn Asp Val Arg Leu Ala Val Ile Ile Ala Gly Tyr Arg Glu Asp

115 120 125

Pro Tyr Met Phe Gln Lys Cys Leu Glu Ser Val Arg Asp Ser Asp Tyr

130 135 140

Gly Asn Val Ala Arg Leu Ile Cys Val Ile Asp Gly Asp Glu Asp Asp

145 150 155 160

Asp Met Lys Met Ala Ala Val Tyr Lys Ala Ile Tyr Asn Asp Asn Ile

165 170 175

Lys Lys Pro Glu Phe Val Leu Cys Glu Ser Asp Asp Lys Glu Gly Glu

180 185 190

Arg Ile Asp Ser Asp Phe Ser Arg Asp Ile Cys Val Leu Gln Pro His

195 200 205

Arg Gly Lys Arg Glu Cys Leu Tyr Thr Gly Phe Gln Leu Ala Lys Met

210 215 220

Asp Pro Ser Val Asn Ala Val Val Leu Ile Asp Ser Asp Thr Val Leu

225 230 235 240

Glu Lys Asp Ala Ile Leu Glu Val Val Tyr Pro Leu Ala Cys Asp Pro

245 250 255

Glu Ile Gln Ala Val Ala Gly Glu Cys Lys Ile Trp Asn Thr Asp Thr

260 265 270

Leu Leu Ser Leu Leu Val Ala Trp Arg Tyr Tyr Ser Ala Phe Cys Val

275 280 285

Glu Arg Ser Ala Gln Ser Phe Phe Arg Thr Val Gln Cys Val Gly Gly

290 295 300

Pro Leu Gly Ala Tyr Lys Ile Asp Ile Ile Lys Glu Ile Lys Asp Pro

305 310 315 320

Trp Ile Ser Gln Arg Phe Leu Gly Gln Lys Cys Thr Tyr Gly Asp Asp

325 330 335

Arg Arg Leu Thr Asn Glu Ile Leu Met Arg Gly Lys Lys Val Val Phe

340 345 350

Thr Pro Phe Ala Val Gly Trp Ser Asp Ser Pro Thr Asn Val Phe Arg

355 360 365

Tyr Ile Val Gln Gln Thr Arg Trp Ser Lys Ser Trp Cys Arg Glu Ile

370 375 380

Trp Tyr Thr Leu Phe Ala Ala Trp Lys His Gly Leu Ser Gly Ile Trp

385 390 395 400

Leu Ala Phe Glu Cys Leu Tyr Gln Ile Thr Tyr Phe Phe Leu Val Ile

405 410 415

Tyr Leu Phe Ser Arg Leu Ala Val Glu Ala Asp Pro Arg Ala Gln Thr

420 425 430

Ala Thr Val Ile Val Ser Thr Thr Val Ala Leu Ile Lys Cys Gly Tyr

435 440 445

Phe Ser Phe Arg Ala Lys Asp Ile Arg Ala Phe Tyr Phe Val Leu Tyr

450 455 460

Thr Phe Val Tyr Phe Phe Cys Met Ile Pro Ala Arg Val Thr Ala Met

465 470 475 480

Met Thr Leu Trp Asp Ile Gly Trp Gly Thr Arg Gly Gly Asn Glu Lys

485 490 495

Pro Ser Val Gly Thr Arg Val Ala Leu Trp Ala Lys Gln Tyr Leu Ile

500 505 510

Ala Tyr Met Trp Trp Ala Ala Val Val Gly Ala Gly Val Tyr Ser Ile

515 520 525

Val His Asn Trp Met Phe Asp Trp Asn Ser Leu Ser Tyr Arg Phe Ala

530 535 540

Leu Val Gly Ile Cys Ser Tyr Ile Val Phe Ile Thr Ile Val Leu Val

545 550 555 560

Ile Tyr Phe Thr Gly Lys Ile Thr Thr Trp Asn Phe Thr Lys Leu Gln

565 570 575

Lys Glu Leu Ile Lys Asp Arg Val Leu Tyr Asp Ala Ser Thr Asn Ala

580 585 590

Gln Thr Val

595

<210> 106

<211> 600

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы IL-5-2s1

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы IL-5-2s1

<400> 106

Met Ala Ala Ser Phe Tyr Val Ile Phe Leu Phe Val Ile Cys His Leu

1 5 10 15

Ser Phe Val Leu Tyr Arg Gln Val Leu Tyr Ile Ile Leu Gly Arg Tyr

20 25 30

Trp Ser Val Asn Lys Leu Thr Met Ile Ser Trp Tyr Thr Ile Ile Ser

35 40 45

Ser Asn Leu Ile Ala Ile Gly Gly Ala Ser Leu Ile Leu Ala Pro Ala

50 55 60

Ile Thr Gly Tyr Ile Leu His Trp Asn Ile Ala Leu Ser Thr Ile Trp

65 70 75 80

Gly Val Ser Ala Tyr Gly Ile Phe Val Phe Gly Phe Phe Leu Ala Gln

85 90 95

Val Leu Phe Ser Glu Leu Asn Arg Lys Arg Leu Arg Lys Trp Ile Ser

100 105 110

Leu Arg Pro Asp Asn Trp Asn Ala Val Arg Val Ala Val Ile Ile Ala

115 120 125

Gly Tyr Arg Glu Asp Pro Tyr Met Phe Gln Lys Cys Leu Glu Ser Val

130 135 140

Arg Asp Ser Asp Tyr Gly Asn Ile Ala Arg Leu Ile Cys Val Ile Asp

145 150 155 160

Gly Asp Glu Asp Asp Asp Met Lys Met Ala Asp Val Tyr Lys Ala Ile

165 170 175

Tyr Asn Asp Asn Ile Lys Lys Pro Glu Ile Ile Leu Cys Glu Ser Asp

180 185 190

Asp Lys Glu Gly Glu Arg Ile Asp Ser Asp Phe Ser Arg Asp Ile Cys

195 200 205

Val Leu Gln Pro His Arg Gly Lys Arg Glu Cys Leu Tyr Thr Gly Phe

210 215 220

Gln Leu Ala Lys Met Asp Pro Ser Val His Ala Val Val Leu Ile Asp

225 230 235 240

Ser Asp Thr Val Leu Glu Lys Asp Ala Ile Leu Glu Val Val Tyr Pro

245 250 255

Leu Ala Cys Asp His Glu Ile Gln Ala Val Ala Gly Glu Cys Lys Ile

260 265 270

Trp Asn Thr Asp Thr Leu Leu Ser Ile Leu Val Ala Trp Arg Tyr Tyr

275 280 285

Ser Ala Phe Cys Val Glu Arg Ser Ala Gln Ser Phe Phe Arg Thr Val

290 295 300

Gln Cys Val Gly Gly Pro Leu Gly Ala Tyr Lys Ile Asp Ile Ile Lys

305 310 315 320

Glu Ile Lys Glu Pro Trp Ile Ser Gln Arg Phe Leu Gly Gln Lys Cys

325 330 335

Thr Tyr Gly Asp Asp Arg Arg Leu Thr Asn Glu Val Leu Met Arg Gly

340 345 350

Lys Lys Val Val Phe Thr Pro Phe Ala Val Gly Trp Ser Asp Ser Pro

355 360 365

Thr Asn Val Phe Arg Tyr Ile Val Gln Gln Thr Arg Trp Ser Lys Ser

370 375 380

Trp Cys Arg Glu Ile Trp Tyr Thr Leu Phe Ala Ala Trp Lys His Gly

385 390 395 400

Leu Ser Gly Ile Trp Leu Ala Phe Glu Cys Leu Tyr Gln Ile Thr Tyr

405 410 415

Phe Phe Leu Val Ile Tyr Leu Phe Ser Arg Leu Ala Val Glu Ala Asp

420 425 430

Pro Arg Ala Gln Thr Ala Thr Val Ile Val Ser Thr Met Val Ser Leu

435 440 445

Ile Lys Cys Gly Tyr Phe Ser Phe Arg Ala Lys Asp Ile Arg Ala Phe

450 455 460

Tyr Phe Val Leu Tyr Thr Phe Val Tyr Phe Phe Cys Met Ile Pro Ala

465 470 475 480

Arg Val Thr Ala Met Met Thr Leu Trp Asp Ile Gly Trp Gly Thr Arg

485 490 495

Gly Gly Asn Val Lys Pro Ser Ile Gly Thr Arg Ile Ser Leu Trp Ala

500 505 510

Lys Gln Tyr Leu Ile Ala Tyr Met Trp Trp Ala Ala Val Ile Ala Ala

515 520 525

Gly Val Tyr Ser Ile Ile His Asn Trp Met Phe Asp Trp Asn Ser Leu

530 535 540

Ser Tyr Arg Phe Ala Leu Ile Gly Ile Cys Ser Tyr Ile Val Phe Ile

545 550 555 560

Ala Ile Val Ile Val Ile Tyr Phe Thr Gly Lys Ile Thr Thr Trp Asn

565 570 575

Phe Thr Lys Leu Gln Lys Glu Leu Ile Glu Asp Arg Val Leu His Asp

580 585 590

Ala Asp Val Asp Ile Gln Asn Val

595 600

<210> 107

<211> 561

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CZ-2

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CZ-2

<400> 107

Met Thr Ser Trp Arg Thr Ile Val Ser Ala Asn Leu Phe Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Ala Leu Leu Met Leu Ala Pro Ala Ile Val Gly Tyr Val Phe Gln

20 25 30

Trp Asn Ile Gly Val Ser Ala Val Trp Gly Ile Ser Val Tyr Gly Val

35 40 45

Phe Val Leu Gly Phe Tyr Ile Ala Gln Ile Val Phe Ser Glu Phe Asn

50 55 60

Arg Met Arg Leu Ser Asp Trp Ile Ser Leu Arg Pro Asp Asn Trp Asn

65 70 75 80

Ala Thr Arg Val Ala Val Ile Ile Ala Gly Tyr Arg Glu Asp Pro Phe

85 90 95

Met Phe Lys Lys Cys Leu Glu Ser Val Arg Asp Ser Glu Tyr Gly Asn

100 105 110

Val Ala Arg Leu Ile Cys Val Ile Asp Gly Asp Glu Glu Glu Asp Leu

115 120 125

Lys Met Ala Glu Ile Tyr Lys Gln Val Tyr Asn Asp Asn Val Lys Lys

130 135 140

Pro Gly Val Val Leu Cys Glu Ser Glu Asn Lys Asn Gly Ser Thr Ile

145 150 155 160

Asp Ser Asp Val Ser Lys Asn Ile Cys Ile Leu Gln Pro His Arg Gly

165 170 175

Lys Arg Glu Ser Leu Tyr Thr Gly Phe Gln Leu Ala Ser Met Asp Pro

180 185 190

Ser Val His Ala Val Val Leu Ile Asp Ser Asp Thr Val Leu Glu Lys

195 200 205

Asn Ala Ile Leu Glu Val Val Tyr Pro Leu Ser Cys Asp Pro Asn Ile

210 215 220

Lys Ala Val Ala Gly Glu Cys Lys Ile Trp Asn Thr Asp Thr Ile Leu

225 230 235 240

Ser Met Leu Val Ser Trp Arg Tyr Phe Ser Ala Phe Asn Val Glu Arg

245 250 255

Gly Ala Gln Ser Leu Trp Lys Thr Val Gln Cys Val Gly Gly Pro Leu

260 265 270

Gly Ala Tyr Thr Ile Asp Ile Ile Asn Glu Ile Lys Asp Pro Trp Ile

275 280 285

Thr Gln Thr Phe Leu Gly Asn Lys Cys Thr Tyr Gly Asp Asp Arg Arg

290 295 300

Leu Thr Asn Glu Val Leu Met Arg Gly Lys Lys Ile Val Tyr Thr Pro

305 310 315 320

Phe Ala Val Gly Trp Ser Asp Ser Pro Thr Asn Val Met Arg Tyr Ile

325 330 335

Val Gln Gln Thr Arg Trp Ser Lys Ser Trp Cys Arg Glu Ile Trp Tyr

340 345 350

Thr Leu Gly Ser Ala Trp Lys His Gly Phe Ser Gly Ile Tyr Leu Ala

355 360 365

Phe Glu Cys Met Tyr Gln Ile Met Tyr Phe Phe Leu Val Met Tyr Leu

370 375 380

Phe Ser Tyr Ile Ala Ile Lys Ala Asp Ile Arg Ala Gln Thr Ala Thr

385 390 395 400

Val Leu Val Ser Thr Leu Val Thr Ile Ile Lys Ser Ser Tyr Leu Ala

405 410 415

Leu Arg Ala Lys Asn Leu Lys Ala Phe Tyr Phe Val Leu Tyr Thr Tyr

420 425 430

Val Tyr Phe Phe Cys Met Ile Pro Ala Arg Ile Thr Ala Met Phe Thr

435 440 445

Met Phe Asp Ile Ala Trp Gly Thr Arg Gly Gly Asn Ala Lys Met Thr

450 455 460

Ile Gly Ala Arg Val Trp Leu Trp Ala Lys Gln Phe Leu Ile Thr Tyr

465 470 475 480

Met Trp Trp Ala Gly Val Leu Ala Ala Gly Val Tyr Ser Ile Val Asp

485 490 495

Asn Trp Tyr Phe Asp Trp Ala Asp Ile Gln Tyr Arg Phe Ala Leu Val

500 505 510

Gly Ile Cys Ser Tyr Leu Val Phe Val Ser Ile Val Leu Val Ile Tyr

515 520 525

Leu Ile Gly Lys Ile Thr Thr Trp Asn Tyr Thr Pro Leu Gln Lys Glu

530 535 540

Leu Ile Glu Glu Arg Tyr Leu His Asn Ala Ser Glu Asn Ala Pro Glu

545 550 555 560

Val

<210> 108

<211> 558

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CVG-1

<220>

<223> Аминокислотная последовательность гиалуронан-синтазы (HASA),

происходящая из вируса хлореллы CVG-1

<400> 108

Met Thr Ser Trp Arg Thr Ile Val Ser Ala Asn Leu Phe Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Ala Leu Leu Met Leu Ala Pro Ala Ile Ala Gly Tyr Val Phe Lys

20 25 30

Trp Asn Ile Gly Val Ser Ala Val Trp Gly Ile Ser Val Tyr Gly Val

35 40 45

Phe Val Leu Gly Phe Tyr Ile Ala Gln Val Val Phe Ser Glu Phe Asn

50 55 60

Arg Met Gln Leu Ser Asp Trp Ile Ser Leu Arg Pro Asp Asn Trp Asn

65 70 75 80

Ala Thr Arg Val Ala Val Ile Ile Ala Gly Tyr Arg Glu Asp Pro Phe

85 90 95

Met Phe Lys Lys Cys Leu Glu Ser Val Arg Asp Ser Glu Tyr Gly Asn

100 105 110

Ile Ala Arg Leu Ile Cys Val Ile Asp Gly Asp Glu Glu Glu Asp Leu

115 120 125

Lys Met Ala Glu Ile Tyr Lys Gln Val Tyr Asn Asp Asn Val Lys Thr

130 135 140

Pro Gly Val Val Leu Cys Glu Asn Glu Asn Lys Asn Gly Ser Thr Ile

145 150 155 160

Asp Pro Asp Phe Ser Lys Asn Ile Cys Ile Leu Gln Pro His Arg Gly

165 170 175

Lys Arg Glu Ser Leu Tyr Thr Gly Phe Gln Met Ala Gly Met Asp Pro

180 185 190

Ser Val His Ala Val Val Leu Ile Asp Ser Asp Thr Val Leu Glu Lys

195 200 205

Asn Ala Ile Leu Glu Val Val Tyr Pro Leu Ser Cys Asp Pro Asn Ile

210 215 220

Lys Ala Val Ala Gly Glu Cys Lys Ile Trp Asn Thr Asp Thr Ile Leu

225 230 235 240

Ser Met Leu Val Ser Trp Arg Tyr Phe Ser Ala Phe Asn Val Glu Arg

245 250 255

Gly Ala Gln Ser Leu Trp Lys Thr Val Gln Cys Val Gly Gly Pro Leu

260 265 270

Gly Ala Tyr Thr Ile Asp Ile Ile Asn Glu Ile Lys Asp Pro Trp Ile

275 280 285

Thr Gln Thr Phe Leu Gly Asn Lys Cys Thr Tyr Gly Asp Asp Arg Arg

290 295 300

Leu Thr Asn Glu Val Leu Met Arg Gly Lys Lys Ile Val Tyr Thr Pro

305 310 315 320

Phe Ala Val Gly Trp Ser Asp Ser Pro Thr Asn Val Met Arg Tyr Ile

325 330 335

Val Gln Gln Thr Arg Trp Ser Lys Ser Trp Cys Arg Glu Ile Trp Tyr

340 345 350

Thr Leu Gly Ser Ala Trp Lys His Gly Phe Ser Gly Ile Tyr Leu Ala

355 360 365

Phe Glu Cys Met Tyr Gln Ile Met Tyr Phe Phe Ile Val Met Tyr Leu

370 375 380

Phe Ser Tyr Ile Ala Ile Lys Ala Asn Ile Arg Ala Gln Ala Ala Thr

385 390 395 400

Val Leu Val Ser Thr Leu Val Ala Val Ile Lys Ser Ser Tyr Leu Ala

405 410 415

Leu Arg Ala Lys Asn Leu Lys Ala Leu Tyr Phe Val Leu Tyr Thr Tyr

420 425 430

Val Tyr Phe Phe Cys Met Ile Pro Ala Arg Ile Thr Ala Met Phe Thr

435 440 445

Met Phe Asp Ile Ala Trp Gly Thr Arg Gly Gly Asn Ala Lys Met Thr

450 455 460

Ile Gly Ala Arg Val Trp Leu Trp Ala Lys Gln Phe Leu Ile Thr Tyr

465 470 475 480

Met Trp Trp Val Gly Val Leu Ala Ala Gly Val Tyr Ser Ile Val Asp

485 490 495

Asn Trp Tyr Phe Asp Trp Ala Asp Ile Gln Tyr Arg Phe Ala Leu Val

500 505 510

Gly Ile Cys Ser Tyr Leu Gly Phe Val Ser Ile Met Leu Val Phe Tyr

515 520 525

Leu Ile Gly Lys Ile Thr Thr Trp Asn Tyr Thr Pro Leu Gln Lys Glu

530 535 540

Leu Ile Lys Glu Arg Leu His Ala Ala Asn Ala Thr Glu Val

545 550 555

<---

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к биопродукции гиалуроновой кислоты. Предложена рекомбинантная клетка, содержащая множество модификаций, как описано в настоящем тексте. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам, обеспечивающим биопродукцию гиалуроновой кислоты, имеющей контролируемую молекулярную массу, с использованием генетически модифицированных клеток по изобретению. Изобретение позволяет экономически эффективно получать большие количества безопасной для применения человеком гиалуроновой кислоты определенного и контролируемого размера. 5 н. и 21 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 пр.

1. Рекомбинантная дрожжевая клетка, продуцирующая гиалуроновую кислоту (HA), где рекомбинантная клетка содержит:

(a) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы;

(b) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP (уридинтрифосфат)-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB);

(c) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, где указанный полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, содержит сигнал секреции, так что рекомбинантная дрожжевая клетка продуцирует гиалуроновую кислоту, в частности, имеющую желаемую молекулярную массу (HAMW), и

(d) (i) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы (GLN1); и/или

(ii) одну или более нарушенных эндогенных нуклеиновых кислот, кодирующих глутаматсинтазу (GLT1), где указанные нарушенные нуклеиновые кислоты неспособны кодировать функциональную или полностью функциональную глутаматсинтазу;

где указанная рекомбинантная дрожжевая клетка относится к роду Saccharomyces, или роду Candida, или роду Kluyveromyces, или роду Ogataea, или роду Yarrowia, или роду Debaryomyces, или роду Ashbya.

2. Рекомбинантная клетка-хозяин, продуцирующая гиалуроновую кислоту (HA), где рекомбинантная клетка-хозяин содержит:

(a) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы;

(b) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы (UDP-GlcDH или HASB);

(c) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, где указанный полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, содержит сигнал секреции и якорный сигнал, так что клетка-хозяин продуцирует гиалуроновую кислоту, в частности, имеющую желаемую молекулярную массу (HAMW); и

(d) (i) одну или более рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы (GLN1); и/или

(ii) одну или более нарушенных эндогенных нуклеиновых кислот, кодирующих глутаматсинтазу (GLT1), где указанные нарушенные нуклеиновые кислоты неспособны кодировать функциональную или полностью функциональную глутаматсинтазу.

3. Рекомбинантная клетка по п. 1 или 2, где молекулярная масса HA находится в диапазоне менее 50 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 20 до около 50 кДа.

4. Рекомбинантная клетка по п. 1 или 2, где молекулярная масса HA находится в диапазоне более 50 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 50 до около 250 кДа.

5. Рекомбинантная клетка по п. 1 или 2, где молекулярная масса HA находится в диапазоне более 100 кДа, предпочтительно в диапазоне от около 100 до около 1500 кДа.

6. Рекомбинантная клетка по любому из пп. 1-5, где нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность глутаминсинтетазы, получена или происходит из Saccharomyces cerevisiae.

7. Рекомбинантная клетка по любому из пп. 1-6, где нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронидазы, получена или происходит из по меньшей мере одного из Cupiennius salei, Loxosceles intermedia, Hirudo nipponia, Bothrops atrox или Tityus serrulatus.

8. Рекомбинантная клетка по любому из пп. 1-7, где нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность гиалуронан-синтазы, получена или происходит из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1, Xenopus laevis или Pasteurella multocida, в частности получена или происходит из по меньшей мере одного из Streptococcus zooepidemicus, вируса хлореллы PBCV1, вируса хлореллы CviKl, вируса хлореллы IL-5-2s1, вируса хлореллы CZ-2, вируса хлореллы CVG-1 или Xenopus laevis.

9. Рекомбинантная клетка по любому из пп. 1-8, где нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, имеющий активность UDP-глюкозодегидрогеназы, получена или происходит из по меньшей мере одного из Arabidopsis thaliana, вируса хлореллы PBCV1 или Streptococcus zooepidemicus, в частности из Arabidopsis thaliana или вируса хлореллы PBCV1.

10. Рекомбинантная клетка по любому из пп. 1-9, где рекомбинантная клетка содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(i) полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1); и/или

(ii) полипептида, имеющего активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1).

11. Рекомбинантная клетка по любому из пп. 1-10, где рекомбинантная клетка содержит по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(i) полипептида, имеющего активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1); и/или

(ii) полипептида, имеющего активность UTP (уридинтрифосфат)-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1); и/или

(iii) полипептида, имеющего активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1); и/или

(iv) полипептида, имеющего активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1).

12. Рекомбинантная дрожжевая клетка по любому из пп. 1 и 3-11, выбранная из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces castelli, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces polysporus, Kluyveromyces thermotolerens, Ogataea polymorpha, Yarrowia lypolytica, Debaryomyces hansenii и Ashbya gossypii, и предпочтительно представляющая собой Saccharomyces cerevisiae.

13. Рекомбинантная клетка-хозяин по любому из пп. 2-11, относящаяся к порядку Saccharomycetales, и, в частности, выбранная из группы, состоящей из Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces paradoxus, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces castelli, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces polysporus, Kluyveromyces thermotolerens, Ogataea polymorpha, Yarrowia lypolytica, Debaryomyces hansenii и Ashbya gossypii, и предпочтительно представляющая собой Saccharomyces cerevisiae.

14. Способ продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу (HAMW), включающий:

(a) культивирование рекомбинантной клетки, как определено в любом из пп. 1-13, в среде для культивирования в течение времени, достаточного для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу; и

(b) необязательно выделение или извлечение гиалуроновой кислоты (HA) из рекомбинантной клетки и/или из среды для культивирования.

15. Способ по п. 14, где HA имеет молекулярную массу от около 20 до около 50 кДа и предпочтительно от около 20 до около 30 кДа.

16. Способ по п. 15, где HA имеет молекулярную массу от около 30 до около 50 кДа.

17. Способ по п. 14, где молекулярная масса HA составляет от около 50 до около 150 кДа.

18. Способ по п. 14, где молекулярная масса HA составляет от около 150 до около 1500 кДа.

19. Способ по любому из пп. 14-18, где рекомбинантная клетка содержит по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(i) полипептида, имеющего активность глутамин-фруктозо-6-фосфатамидотрансферазы (GFA1); и/или

(ii) полипептида, имеющего активность UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы (QRI1).

20. Способ по любому из пп. 14-19, где рекомбинантная клетка содержит по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую одно или более из:

(i) полипептида, имеющего активность фосфоглюкомутазы-1 (PGM1);

(ii) полипептида, имеющего активность UTP-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансферазы (UGP1);

(iii) полипептида, имеющего активность глюкозамин-6-фосфат-N-ацетилтрансферазы (GNA1); и/или

(iv) полипептида, имеющего активность фосфоацетилглюкозаминмутазы (PCM1).

21. Способ по любому из пп. 14-20, где рекомбинантная клетка является членом рода Saccharomyces и, в частности, представляет собой Saccharomyces cerevisiae.

22. Способ по любому из пп. 14-21, где время, достаточное для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей желаемую молекулярную массу, представляет собой период от около 35 до около 50 часов, предпочтительно от около 40 до около 50 часов, предпочтительно около 48 часов.

23. Способ по любому из пп. 14-22, где молекулярную массу гиалуроновой кислоты контролируют путем регулирования pH среды для культивирования.

24. Способ по любому из пп. 14-23, где способ осуществляют в промышленном масштабе, предпочтительно, где среда для культивирования составляет по меньшей мере около 100 л, более предпочтительно в диапазоне от около 1000 до около 3000 л, еще более предпочтительно около 10000 л, еще более предпочтительно около 100000 л или даже около 250000 л.

25. Применение рекомбинантной клетки, как определено в любом из пп. 1-13, для продуцирования гиалуроновой кислоты (HA), имеющей молекулярную массу в диапазоне от около 20 до около 50 кДа или от около 50 до около 1000 кДа.

26. Способ продуцирования гиалуроновой кислоты, включающий стадии:

(a) культивирования рекомбинантных дрожжей, как определено в любом из пп. 1 и 3-12, в среде для культивирования; и

(b) извлечения гиалуроновой кислоты из указанной среды для культивирования,

где гиалуроновая кислота, извлеченная на стадии (b), имеет молекулярную массу, контролируемую путем выбора:

- природы и происхождения нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу, рекомбинантных дрожжей,

- природы и происхождения промотора, контролирующего экспрессию нуклеиновой кислоты, кодирующей гиалуронидазу(ы), рекомбинантных дрожжей,

- наличия якорного сигнала и/или сигнала секреции, связанного с кодируемой(ыми) гиалуронидазой(ами), рекомбинантных дрожжей,

- pH среды для культивирования в процессе стадии культивирования рекомбинантных дрожжей, и/или

- продолжительности культивирования рекомбинантных дрожжей.