Способ определения эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза Российский патент 2025 года по МПК G01N33/49 G01N33/68 G01N33/92 G01N33/569 G01N33/573 G09B23/28 

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно инфектологии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения и профилактики бруцеллеза.

Известен способ оценки эффективности лечения хронического бруцеллеза по активности провосполительного цитокинов ИЛ-2 и ФНО-α в венозной крови пациентов с хроническом бруцеллезом в динамике терапии (Гладилина Е.Г. Хронический бруцеллез клинико-диагностическое и прогностическое значение параметров системы липопероксидации, цитокинового профиля и маркеров синдрома эндогенной цитоксикации: автореферат… дисс. к.м.н. по специальности 14.00.10. - Саратов. - 2006. - 28 с). Способ заключается в построении математической модели процесса с учетом уровня промежуточных и конечных продуктов липопероксидации, цитокинов ИЛ-1 и ФНО-α, а также маркеров синдрома эндотоксикоза в венозной крови больных хроническим бруцеллезом до и после курса лечения. Недостатками способа являются трудоемкость и затратность (дважды проводятся серологические исследования, ПЦР - диагностика бруцеллезной инфекции, исследуются показатели системы перекисного окисления липидов, антиоксидантный статус, маркеры эндотоксикоза, проводится фенотипирование лимфоцитов, определение содержания цитокинов ИЛ-1 и ФНО-α в сыворотке крови пациентов с хроническим бруцеллезом). Кроме того, построение многомерных математических моделей для каждого пациента с хроническим бруцеллезом требует специалсуперлокьных навыков от врача, в связи с чем способ не нашел широкого применения в клинике инфекционных болезней.

Известен способ оценки иммуногенности штаммов бруцелл, включающий иммуноферментный анализ культуральных супернатантов клеток периферической крови на содержание цитокинов-фактора некроза опухолей (ФНО-α), интерлейкина-1β) и колониестимулирующего фактора (КСФ), синтезированных мононуклеарами периферической крови in vitro без воздействия (спонтанная продукция) и под воздействием антигенов оцениваемых штаммов бруцелл (индуцированная продукция) и определение их иммуногенности по соотношению спонтанной и индуцированной продукции указанных цитокинов, при этом штаммы бруцелл считают иммуногенными, если их антигены вызывают усиление продукции ФНО-α в 1-1,25, ИЛ-1β в 2-2,50 и КСФ в 3-3,70 (Патент RU №2419096, МПК G01N 33/50, Опубл.: 20.05.2011 Бюл. №14). Недостатком способа являются то, что способ предназначен только экспресс оценки иммуногенности вакцинных штаммов бруцелл.

Известен способ оценки эффективности лечения хронического бруцеллеза путем исследования сыворотки крови до начала терапии и после окончании, определения сывороточного уровня ФНО-α, ИНФ-γ/ИЛ-10 с последующем расчетом соотношения ИНФ-γ/ИЛ-10. При сохраняющейся после курса терапии высокой экспрессии в крови ИНФ-γ/ИЛ-10 в 1,5 раза выше, чем в группе здоровых и более пониженном 2 раза более сывороточном уровни ИНФ-γ и сниженном в 2,5 раза и более по сравнению со здоровыми лицами соотношении ИФН-γ/ИЛ-10, лечения оценивается как недостаточного эффективное (Патент RU №2580760, МПК G01N 33/53, Опубл.: 10.04.2016 Бюл. № 10).

Недостатком способа является то, что способ предназначен для оценки эффективности лечения больных хроническом бруцеллезом людей в фазе обострения болезни до начала терапии и по ее окончанию. Однако, несмотря на указанной недостаток, данный способ использован нами в качестве одного из аналогов при разработке критериев оценки эффективности экстренной защиты бруцеллеза по критерию соотношения цитокинов при ИНФ-γ/ИЛ-1β в котором в качестве противовосполительного цитокина использован ИЛ-10. В отличие от аналога, нами использован провосполительный цитокин ИЛ-1β, как принимающий совместно с ИНФ-α непосредственное участие в обезвреживании и элиминации патогена из организма.

Более близким к заявленному методу является способ одновременной профилактики и лечения бруцеллеза с применением стрептомицинрезистентного штамма В. abortus 82 Sr в сочетании с антибиотиками стрептомицином (Крючков Р.А., Иммунобиологические свойства стрептомицинрезистентного штамма 82-Sr В. abortus и для применения при сочетанной защите животных от бруцеллеза. - Автореф. дисс… к.б.н. - (Казань, 2010. - 22 с), который использован нами в качестве прототипа. В качестве оценки эффективности терапии и профилактики бруцеллеза автор использовал наличие или отсутствие заражающего вирулентного штамма В. abortus 54 ВГНКИ в посевах из органов и тканей убитых после заражения и проведения сочетанной профилактики и лечения животных - носителей возбудителя бруцеллеза животных. Недостатком способа оценки эффективности противобруцеллезной защиты является использование серологических реакций (РБП, РА, РСК), которые дают недостоверную информацию из-за наличия блокирующих антител к микроорганизмам, имеющим общие системные детерминанты с бруцеллами, которые обуславливают ложноположительные серологические реакции на бруцеллез (Состояние и перспективы лабораторной диагностики бруцеллеза /Г.И. Лямкин (и др.) // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - № 12 - с. 45-49).

Другим недостатком способа оценки эффективности сочетанной защиты на фоне применения известных средств (вакцина из шт. В. abortus 82 Sr и стрептомицин) является незавершимость изучения специфического клеточного иммунитете с использованном РБТЛ - теста, который дает полную информацию о состоянии клеточного иммунитета только в параллельном определении концентрации антиген индуцированного ИНФ-γ, важнейшего показателя функционирования Т-клеточного иммунитета-СД4 и СД8 - Т-клеток, блокирующих размножение патогена внутри макрофагов (Патент RU 2740009, МПК G01N 33/53, Опубл.: 30.12.2020 Бюл. № 1).

При разработке способа оценки эффективности экстренной защиты (профилактики и лечения) бруцеллеза мы исходили из того, что в патогенезе развития инфекционного поражения, в том числе и бруцеллеза, важная роль принадлежит окислительному стрессу, развивающемуся в результате дисбаланса между оксидантной и антиоксидантной системами организма, обусловленного образованием токсических активных форм кислорода (АФК): синглетного кислорода (¹О₂), супероксидрадикала О^2-), перекиси водорода (Н₂О₂) и супероксид анион-радикала НО₂. При этом ненасыщенные жирные кислоты подвергается перекисному окислению липидов (ПОЛ) с образованием токсического продукта - малондиальдегида (МДА), мишенью атаки которых являются иммунокомпетентные клетки системы иммуногемопоэза (стволовые клетки костного мозга, лимфоциты, моноциты, нейтрофилы), а также ферменты антиоксидантный защиты (супероксиддисмутаза, каталаза, глутагионпероксидаза и SH-группы белков), играющих ключевую роль в регуляции внутриклеточного окислительно - восстановительного равновесия. Отсюда следует важнейший (первый) аспект - своевременная нейтрализация АФК, индуцированных патогенным агентом - возбудителем бруцеллеза, является важнейшим фактором в борьбе с патогеном. В основе молекулярных механизмов противобруцеллезной защиты лежит участие медиаторов иммуногенеза-цитокинов, являющихся первой линией защиты организма против патогена.

Известно, что при комбинированном бруцеллезном иммунодефиците ключевая роль принадлежит клеточному иммунитету и дисбалансу Th1, про -и противовоспалительных цитокинов (интерлейкин-1β, интерлейкин - 6, а также интерферонов, прежде всего, интерферону - гамма (lFN-γ), необходимых для элиминации возбудителя (U. Kulakov Y.K. Molecular aspectsof Brucella persistence. Mol. Gen. Microbiol. Virusol, 2016). Адекватный клеточный иммунный ответ (Th1) имеет решающее значение для обезвреживания бруцелл. Второй важнейший аспект противобруцеллезной защиты при применении иммунопротекторов является коррекция дисбаланса Th1 про- и противовоспалительные цитокинов, участвующих в обезвреживании патогена (бруцелл).

Показано, что жизненно важным для блокирования патогена и дальнейшего развития бруцеллезной инфекции является участие макрофагов, дендритных клеток, СД4⁺ и СД8⁺ - Т-клеток, продуцирующих интерферон -гамма (IFN-γ) блокирующих размножение патогена внутримакрофагов (Dornales Е.М., Teixeira - Carvalho A.A., Arajo M.S., Sriranganthan N., Lage A.P. Immuneresponse triggered by Brucella abortus followinginfection or vaccination, Vaccine, 2015, 33 (31) 3659-3666).

Вышеназванные принципы (аспекты), определяющие молекулярные механизмы защиты от патогенна (возбудителя бруцеллеза) легли в основу разработки заявленного способа оценки эффективности способа противобруцеллезной защиты.

Задачей изобретения является разработка способа оценки эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза с учетом ведущих патогенитических механизмов развития бруцеллеза, объективного, более простого в использовании, доступного для применения в клинической практике.

Технический результат изобретения: разработанный способ оценки эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза является патогенетически обоснованным, объективным и простым в осуществлении.

Поставленная задача решается благодаря тому, что в заявленном способе оценивается состояние системы прооксидантно - антиоксидантной системы и определением концентрации токсических продуктов пероксидации липидов - малондиальдегида (МДА), антиоксидантного фермента - супероксиддисмутазы (СОД), субпопуляций Т-лимфоцитов (СД 4, СД8-клеток), цитокинов ИЛ-1β, и определяют критерии оценка проведения экстренной защиты: пределы значений соотношений МДА/СОД 0,33-0,41, СД 4/СД8 - 2,80-2,90, ИНФ-γ/ИЛ-β-1,07-1,31 свидетельствуют об эффективности экстренной профилактики и лечения с использованием испытуемых средств защиты, а увеличение соотношений МДА/СОД, СД4/СД8 - в 2-3 раза по сравнению с контролем - оценивают экстренную защиту как неэффективную.

Предложенный способ отличаются тем, что в качестве критериев оценки эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза используют коэффициент эффективности антиоксидантной защиты (КЭ ОАЗ=МДА/СОД, значения иммунорегуляторного индекса (СД4/СД8) и цитокиновый индекс (ИНФ-γ/ИЛ-β), сдвиг значения которых вправо (увеличения) или влево (уменьшение) свидетельствуют об эффективности или неэффективности испытуемых средств экстренной защиты против бруцеллеза.

Кроме того, способ отличается тем, что в качестве средства экстренной защиты против бруцеллеза используют вакцинную из ципролетрезистентного штамма в В. abortus 82-Cr в сочетании с антибиотиком-ципролетом, с последующим определением концентрации токсических продуктов липопероксидации липидов (МДА), антирадикального фермента (СОД), содержания субпопуляций Т-лимфоцитов (СД-4, СД8-клеток) и концентрации иммунорегуляторных цитокинов (ИЛ-1β и ИНФ-γ) с последующим расчетом коэффициентов эффективности антиоксидантной защиты (АОЗ), иммуноклеточной защиты (СД4/СД8) и цитокиновой защиты (ИНФ-γ/ИЛ-1β).

Техническое решение позволяет усовершенствовать оценку противобруцеллезный защиты при помощи лабораторных методов, оборудования и реактивов, не требующих высоких финансовых и трудозатрат, в том числе за счет применения готовых наборов тест-систем для определения ИЛ-1β, ИНФ-γ в сыворотке крови зараженных и подвергнутых экстренной защите животных.

Способ оценки эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза осуществляются следующим способом.

На первом этапе исследований проводят моделирования экспериментального острого бруцеллезного процесса путем подкожного заражения высокочувствительных к изучаемой инфекции лабораторных животных высоковирулентным штаммом возбудителя бруцеллеза.

В качестве биологической модели воспроизведения экспериментального острого бруцеллеза использовали морских свинок обоего пола живой массой 350-400 г; в качестве поражающего агента - вирулентный штамм возбудителя бруцеллеза В. abortus 54 М ВГНКИ, ЛД₁₀₀ которого составляет 50 м.к. для морских свинок. Диагноз на бруцеллез ставили на основании руководств общепринятых серологических тестов: животные положительные реагировали в реакции агглютинации (РА) и реакции длительного связывания комплемента (РДСК). В качестве лечебно-профилактического средства использовали разработанный нами вакцинный препарат на основе ципролетрезистентного мутанта В. abortus 82CR и антибиотик нового поколения из класса фторхинолонов - ципролет (ципролетфлоксацин). (Патент RU № 2523392, МПК A61K 39/10, Опубл.: 20.07.2014 Бюл. № 20). В качестве препарата сравнения использовали вакцину из штамма В. abortus 82-Sr (стрептоцинрезистентный мутант В. abortus 82) (Крючков Р.А. Иммунобиологические свойства штамма 82-Sr В. abortus и его применение при сочетанной защите животного от бруцеллеза: Автреф. Дисс. к.б.н. - Казань - 2010. - 22 с). В качестве сравнения антибиотика-стрептомицин гидрохлорид. Группу сравнения составляли интактные морские свинки, сопоставимые по полу и живой массе, не зараженные, не вакцинированные и не леченые испытуемыми средствами.

На следующем этапе работы, с целью разработки способа оценки эффективности экстренной терапии бруцеллеза у зараженных возбудителем бруцеллеза и подвергнутых лечению и профилактики испытуемыми средствами (вакцина из В. abortus Cr в сочетании с ципролетом), и после применения испытуемых средств в динамике брали пробы крови и в сыворотке определяли содержание продуктов свободно-радикального окисления липидов (ПОЛ) - малонового диальдегида (МДА) (Гурьянова В.А., Трошин Е.И., Изучение уровня перикислого окисления липидов (ПОЛ) в тканях крыс при облучении // Матер. Респ. научно-произв. конф. Казань, 1996. - с. 97). Параллельно в этих пробах сывороток, для оценки состояния системы антиоксидантной защиты (САЗ) на фоне заражения и применения противобруцеллеззных средств, определяли уровень фермента антирадикальной защиты - супероксидисмутазы (СОД) (Fridovich 1. Suporoxida anion radical and superoxideb dies- mutases // Ann. Rev. Riochem. - 1995. - V. 64. - P. 97-112).

У зараженных возбудителем бруцеллеза и подвергнутых комбинированному лечебно-профилактическому воздействию (вакцина из шт. В. abortus 82-Cr + антибиотик ципролет) до начала терапии и по ее окончании) в динамике определяли содержания токсического продукта липопероксидации МДА/СОД, характеризующее как коэффициент эффективности антиоксидантной зашиты (КЭ АОЗ). По динамике этого показателя судят об эффективности лечебно-профилактического средства защиты от бруцеллеза.

Учитывая, что патогенетической основой развития острой бруцеллезной инфекции является непостоянность врожденного и адеквантного иммунитета, в отношении бруцелл с созданием условий для незавершенного фагоцитоза и долгосрочного внутриклеточного паразитирования ключевая роль принадлежит клеточному иммунитету и дисбалансу Th1, про - и противовосполительных цитокинов, а также гамма -интерферона (ИНФ-γ), необходимых для нейтрализации и элиминации возбудителя и адекватной клеточной иммунный ответ (Th1) имеет решающие значение для обезвреживания бруцелл (Mantur B.G., Amarnath S.K., Shinde R.S. Review of cetutcal and libratory features of huun brucellesis // I.ludian.Med.Microobiol. - 2007,V. 25. - P/188-202), проводили определение содержания Т-лимфоцитов и их субпопуляций (Т-хелперов-СД4-клеток и Т-супрессоров СД8-клеток) (Иванов А.В. и др.) Методика проведения субпопуляционного анализа лимфацитов: Иммуно-клеточная тест-система для оценки влияния ионизирующей радиации на организм животных. -М.: ФГНУ «Росинформагротех, 2006. - 16 с).

Для этого у зараженного возбудителя бруцеллеза морских свинок в динамике (до и после заражения и после проведения экстренной профилактики и лечения испытуемыми средствами противобруцнеллезной защиты), брали пробы крови и подвергали гематологическому анализу с определением количества СД4 и СД8 -клеток и рассчитывали соотношение СД4 и СД8, которое характеризует об активации или угнетение иммунной реактивности организма и по значениям этого показателя судят об эффективности испытуемого лечебно-профилактического средстве противобруцеллезной защиты.

Известно, что ведущим механизмом антибактериальной защиты при бруцеллезе является фагоцитоз, эффективность которого повышается за счет опсонирующего и активирующие действия специфических антител и активирующего действия цитокинов-медиаторов иммуногенеза, принимающих непосредственное участие в реализации антиинфекционного противобруцеллезного иммунитета (Roop R.M.II. Gaines J.M., Anderson E.S. Caaswell С.C. Martin D.W. Survival of the fittest: howv Brucella stra Ins adapt to theier intracellular in the host.Medical Microbiology and immunology, 2009; 198 (4) 221-238). Поэтому в настоящее время в качестве биомаркеров диагностики, лечения и прогноза бруцеллезного процесса выступает цитокины, в частности, противовоспалительные цитокины: интерлейкин-1 (ИЛ-1β), интерферон -гамма (ИНФ-γ), необходимых для обезвреживания и элиминации возбудителя (He Y.Analises of Brucella pathogenesis, host immune nty, and vaccine targets uning systems biology and biolnformetics, frontiers in Cellular and infection Microbiology 2012; 2 (2) dol 10.3389/fcimb.2012/00002.2012). Согласно данным указанных исследователей, важнейшим компонентом противобруцеллезного иммунитета, обусловливающим выживание хозяина, является ИНФ-γ, в продукции которого вовлечены СД4-и СД8-Т-клетки).

В результате проведенных цитированными исследователями экспериментов установлено, что ИЛ-1 и ИНФ-γ являются ключевыми элементами Th1 иммунного ответа, контролирующего рост и размножение бруцелл в организме.

Исходя из вышеизложенного, проводили опыты по определению уровня противовоспалительного цитокина - ИЛ-1β и гамма - интерферона (ИНФ-γ) в сыворотке крови зараженного возбудителем бруцеллеза в динамике до и после применения тестируемых средств противобруцеллезной защиты с использованием метода твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА для определения цитокина ИЛ-1β) тест-системы (Flow Cydomik Simplex Kit («Bender Med Sistems GmbH», Австрия). ИНФ-γ в сыворотке крови исследовали с помощью тест-системы А-8752 «гамма - Интерферон-ИФА-БЕСТ», Россия. Определение изучаемых показателей проводили до и после проведение антибиотико - вакцинотерапии и по результатам полученных данных рассчитывали соотношение ИНФ-γ/ИЛ-1β, характеризующее эффективность вакцинотерапии при бруцеллезе и свидетельствует и преимущественной дифференцировке Т-киллеров в сторону Th фенотипа, что проявляется в активации специфического клеточного иммунного ответа в макрофагальной системе с сокращением срока персистенции возбудителя в организме (элиминация или гибель патогена).

Сущность заявляемого способа оценки эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза поясняется следующими таблицами, где на Таблице 1 показано влияние лечебно-профилактических средств экстренной защиты на состояние системы прооксидантно-антиоксидантной защиты (ПРОАЗ) зараженных возбудителем бруцеллеза морских свинок; на Таблице 2 представлены показатели Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций в крови зараженных, иммунизированных В. abortus 82-Sr, В. abortus 82 Cr и леченных антибиотиками (стрептомицин, ципролет) морских свинок (М±м);

на Таблице 3 - Динамика цитокинового профиля у пораженных возбудителем бруцеллеза и подвергнутых вакцино-антибиотикотерапии, известным и предлагаемым средствами животных; на Таблице 4 - Результаты оценки эффективности известного и предлагаемого способов экстренной защиты животных от бруцеллеза (М±м).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Оценка эффективности средств экстренной профилактики бруцеллеза по коррекции дисбаланса системы антиоксидантной защиты.

Для оценки степени антирадикальной защиты испытуемых средств (вакцина из шт. В. abortus 82-Cr в сочетании с антибиотиком-ципролетом) были проведены опыты на 60 морских свинках обоего пола живой массой 350-400 г, которые были разделены на 3 группы по 20 в каждой. Животных 1-й группы, за 5 дней до заражения однократно иммунизировали подкожно в область паха в дозе 1,5 млрд. м.к. в объеме 1 мл вакциной из штамма В. abortus 82-Sr. Одновременно им вводили внутримышечно стрептомицин в дозе 25 мг на голову в объеме 1 мл на 0,3%-ном растворе новокаина один раз в течение 15 сут.

Животным 2-й группы (20 морских свинок), через 3 после заражения однократно подкожно с внутренней стороны, куда вводили культуру вирулентного штамма В. abortus 54-М ВГНКИ, вводили вакцину из штамма В. abortus 82-Cr в дозе 1 млрд м.к. в объеме 1 мл и одновременно внутримышечно вводили ципролет в дозе 1-3 мг/кг 2 раза в день в течение 5-7 дней. Зараженных вирулентным штаммом возбудителя бруцеллеза морских свинок не иммунизировали и не вводили антибиотиками - они служили контролем заражения. Животных 4-й группы не заражали и не иммунизировали - они служили биологическим контролем.

Оценку эффективности экстренной терапии испытуемых средств осуществляли по изменению системы антиоксидантный защиты (по снижению содержания продуктов свободно-радикального окисления липидов (ПОЛ) в МДА-тесте), изменению активности ферментов антиоксидантный защиты-супероксиддисмутазы (СОД).

В качестве критерия оценки эффективности способа экстренной терапии и профилактики бруцеллеза с использованием тестируемых средств защиты использовали соотношение концентрации токсического радикала-малонового диальдегида (МДА) и концентрации антиоксидантного фермента - супероксидусмутазы (СОД) - МДА/СОД, что характеризуется как коэффициент эффективности антиоксидантной защиты (КЭ АОЗ=МДА/СОД), по значениям этого показателя судили о степени детоксикации организма при бруцеллезном эндотоксикозе.

Результаты изучения влияния тестируемых средств экстренной защиты пораженных возбудителем бруцеллеза животных на состояние системы прооксидантно-антиоксидантной защиты (ПРОАЗ) представлены в таблице 1.

Из данных таблицы 1 видно, что заражение морских свинок возбудителем бруцеллеза привело к резкому (в 11,39 раза) увеличению соотношения МДА/СОД по сравнению со здоровыми животными. Применение известного средства защиты (вакцина из шт. В. abortus 82 SR + стрептомицин) приводило к 3,84 кратному увеличению соотношения МДА/СОД, что в 2,96 раза меньше, чем у больных животных и в 3,84 раза больше, чем у здоровых морских свинок.

Применение предлагаемого средства защиты обеспечивало существенное снижение соотношения МДА/СОД - в 9,17 раза по сравнению с больными бруцеллезом животными, составляя 0,41±0,09 против 0,33±0,03 усл. ед. у здоровых морских свинок.

Повышение интенсивности ПОЛ на фоне поражения организма возбудителем бруцеллеза сопровождалось реципрокным снижением активности антиокислительного фермента СОД антиоксидатной защиты (САЗ). Установлено, что содержание ключевого фермента антиоксидантной защиты: СОД у пораженных возбудителем бруцеллеза животных было снижено в 2,33 (СОД, Р<0,01) по сравнению с таковой животных контрольной группы.

На фоне проведения экстренной терапии пораженных возбудителем бруцеллеза морских свинок разработанными средствами противобруцеллезной защиты наблюдалось повышение активности антиоксидантной системы (АОС) путем ингибирования образования окисленных продуктов ПОЛ (МДА) и сохранением активности ферментов антиоксидантный защиты - СОД.

Установлено, что на фоне проводимой экстренной терапии пораженных бруцеллезом животных отмечается повышение антиоксидантный и антиокислительной активности крови и снижение интенсивности ПОЛ. При этом, как видно из таблицы 1, наиболее значимое увеличение АОС крови, обусловленное повышением ферментов антиоксидантной защиты (СОД, одновременным снижением интенсивности ПОЛ), отмечалось в группе животных, иммунизированных вакциной из шт. В. abortus 82-Cr в сочетании с антибиотиком ципролет.В группе животных, получавших в качестве средств экстренной защиты вакцину из стрептомицинрезистентного шт. В. abortus 82-SR в сочетании со стрептомицином отмечали низкую антиоксидантную защиту - уровень накопления токсических продуктов ПОЛ в этой группе был в 2,24 раза выше (Р<0,01), чем у животных 2-й группы, леченных В. abortus 82 Cr и ципролетом, а активность ферментов антиоксидантной защиты (СОД) был ниже в 1,37 (СОД), раза в 1,95 раза по сравнению с таковыми животных 2-й группы, леченных вакциной из шт. В. abortus 82-Cr в сочетании с ципролетом.

Сопоставительный анализ показателей прооксидатно-антиоксидантной системы позволили выявить обратную корреляционную связь между показателями продуктов пероксидации липидов (ПОЛ-МДА) и одним из важнейших ферментов антиоксидантной защиты-супероксиддисмутазой (СОД).

Результаты статистической обработки полученных данных показали, что поражение организма возбудителем бруцеллеза сопровождается резким (8-10 - кратным, в зависимости от вирулентности штамма и степени бруцеллезного поражения), повышением соотношения МДА/СОД. Применение средств защиты существенно влияет на изучаемый показатель и, в зависимости выраженности их защитного потенциала, значения соотношения составляют в пределах 0,41-1,31- При высоком лечебно-профилактическом потенциале испытуемого средства значения этого показателя составляют 0,39-0,43. Как видно из данных таблицы, применение разработанного способа экстренной профилактики и лечение бруцеллеза оказывает существенное влияние на коэффициент эффективности антиоксидантной защиты (КЭ АОЗ=0,41±0,09), что приближается к контрольному уровню (КЭ АОЗ=0,35±0,03), незначительного отличаясь от последнего (Р>0,05).

Таким образом, поражение организма возбудителем бруцеллеза сопровождается резким повышением содержания токсических продуктов пероксидации липидов (ПОЛ, МДА) с одновременным резким снижением активности ключевого фермента антиоксидантной защиты - СОД, что ведет к повышению соотношения МДА/СОД, характеризующего степень интоксикации организма продуктами липопероксидации липидов, играющих важную роль в патогенезе бруцеллезной инфекции. Применение на этом фоне средств экстренной защиты против бруцеллеза - и вакцины из шт. В. abortus 82 Cr в сочетании с ципролетом способствует повышению активности системы антиоксидантной защиты организма путем ингибирования образования токсических продуктов пероксидации липидов (МДА) с сохранением активности ключевого фермента антиоксидантной защиты (СОД), нормализуя проксидантно-антиоксидантное соотношение МДА/СОД, приближая его значение к контрольным показателем (КЭ АОЗ=0,41±0,09 против 3,76±0,90 у больных бруцеллезом животных.

Пример 2. Оценка эффективности испытуемых средств экстренной защиты животных от бруцеллеза по изучению состояние иммунной системы.

Опыты данной серии были проведены на тех же животных, что в 1-й серии (зараженные, зараженные+вакцинированные В. abortus 82-SR и леченные стрептомицином, зараженное+вакцинированные В. abortus 82-Cr леченные ципролетом) опытов с соблюдением аналогичных условий заражения (дозы, штамм), иммунизации (использованные штаммы, иммунизирующие дозы, сроки применения) и лечения испытуемыми антибиотиками (дозы, краткость и длительность применения стрептомицина и ципролета).

Для оценки состояния иммунной системы пораженного возбудителем бруцеллеза и подвергнутых экстренной иммуно - и антибиотикотерапии с использованием разработанных средств противобруцеллезной защиты организма, у животных всех групп по окончании курса лечения и профилактики бруцеллеза, брали пробы крови и в них определяли содержание Т - и В- лимфоцитов, их субпопуляций, обращая особое внимание на состояние Т - клеточного звена иммунитета (общее содержание Т- клеток - СДЗ, и их субпопуляций: Т - хелперов - СД4- и Т-супрессоров-СД8-клеток).

Результаты изучения состояния иммунной системы у пораженных возбудителем бруцеллеза и его коррекции на фоне экстренной защиты с использованием разработанных средств, представлены в таблице 2.

Из данных таблицы видно, что заражение морских свинок высоковирулентным штаммом возбудителя бруцеллеза сопровождалось 3,5-кратным повышением соотношения СД4/СД8. Применение известного способа профилактики и лечения больных морских свинок вакциной из штамма В. abortus 82-SR в сочетании со стрептомицином снижает иммунорегуляторный индекс (СД4/СД8) больных бруцеллезом морских свинок в 2,08 раза, а лечение больных бруцеллезом морских свинок предлагаемым средством (вакцина из шт. В. abortus 82 Cr в сочетании с ципролетом) в 2, 80 раза по сравнению с больными животными (Р<0,001).

Из данных таблицы 2 видно, что поражение организма возбудителем бруцеллеза сопровождается угнетением клеточного иммунитета. Установлено, что Т-клеточное звено иммунитета, являясь главным и важнейшим компонентом проективного иммунного ответа против бруцеллеза, экстренно реагирует на внедрение в организм патогена и сопровождается резким снижением количества СД3-, СД4- и СД8- клеток, когда количество их снизилось в 1,66 (СДЗ), 1,44 (СД4) и 1,94 (СД8) раза по сравнению с контролем (Р<0,01; Р<0,001 соответственно). При этом наиболее важными показателями поражения Т-клеточного звена иммунного ответа на внедрение в организм патогена является нарушение соотношения Т- хелперов (СД4) и Т-супрессоров (СД8) - СД4/СД8, которые у пораженных возбудителем увеличилось в 1,99 раза по сравнению с контролем, что свидетельствует о снижении иммунной реактивности организма.

Применение испытуемого средств противобруцеллезной защиты (вакцина из шт. В. abortus 82-Cr) оказывало стимулирующее действие на главные компоненты протективного иммунного ответа - Т-хелперы (СД4) и Т-супрессоры (СД8), восстанавливая их уровень до контрольных значений, когда на фоне применения разрабатываемых средств количественное содержание субпопуляций Т- клеток было почти на уровне контрольных значений. Эффективность иммуно - и антибиотикотерапии с использованием вакцины из шт. В. abortus 82-Cr + ципролет в сочетании с ципролетом подтверждена восстановлением важнейшего показателя - соотношения СД4/СД8, свидетельствующего об активации иммунной реактивности организма и об эффективности используемого лечебно-профилактического средства.

Результаты параллельных иммунологических исследований по изучению сравнительной эффективности известного средства экстренной противобруцеллезной защиты - вакцины из шт. abortus 82-SR в сочетании с антибиотиком стрептомицином показали, что на фоне применения известного способа экстренной противобруцеллезной защиты организма является менее эффективным по сравнению с предлагаемым, поскольку показатели СД4 - и СД8-Т-клеток недостоверно отличались от таковых зараженных, нелеченых животных, а иммунорегуляторной индекс (СД4/СД8) составлял 3,50±0,1 против 3,74±0,3 у зараженных, что свидетельствует о более низкой лечебно-профилактической эффективности известного средства экстренной противобруцеллезной защиты.

Таким образом, в результате проведенных серии опытов показано, что поражение организма возбудителем бруцеллеза сопровождается угнетением клеточного звена иммунитета, что является главным и важнейшим компонентом протективного иммунного ответа против бруцелл, экстренно реагируя на внедрение патогена в организм, сопровождающиеся резким снижением количества СД3-, СД4-, СД8- клеток и нарушением индекса (ИИ) -СД4/СД8 в 1,99 раза по сравнению с контролем (сдвиг индекса вправо-показатель снижения иммунной реактивности организма на патоген). Применение испытуемых средств экстренной противобруцеллезной защиты (Вакцина из шт. В. abortus 82-Cr в сочетании антибиотиком ципролетом) оказывало стимулирующие действии на главные компоненты протективного иммунного ответа - Т-хелперы (СД4-клеток) и Т - супрессоры (СД8 клетки), восстанавливая их значения до контрольного уровня.

Пример 3. Оценка средств экстренной защиты от бруцеллеза по состоянию уровня провосполительного цитокина (ИЛ-1(3) и гамма -интерферона.

Эксперименты проведены исходя из того, что важнейшими биомаркерами лечения и профилактики бруцеллеза выступают цитокины, в частности, противовоспалительный цитокин интерлейкин-1 (ИЛ-1β) и интерферон гамма (ИНФ-γ), которые принимают непосредственное участие в обезвреживания и элиминации возбудителя, обуславливая выживание хозяина, в продукции которых вовлечены СД4- и СД8-клетки.

Опыты по определению уровня противовоспалительных цитокинов были проведены на морских свинках, зараженных возбудителем бруцеллеза с последующей экстренной иммунизации испытуемыми вакцинами В. abortus 82-SR и В. abortus 82-Cr в сочетании со стрептомицином и ципролетом соответственно в аналогичных условиях, дозах и кратностях, упомятых в предыдущей серии экспериментов.

Для определения количества противовоспалительных цитокинов (ИНФ-γ и ИЛ-1β), у зараженных, иммунизированных и леченных антибиотиками животных по окончании курса экстренной защиты, брали пробы крови и в сыворотке определяли содержание вышеназванных цитокинов с помощью набора реагентов «ИФА-БЕСТ» для количественного определения согласно приложенной инструкции по сравнению с контрольными (незараженными) животными.

Результаты биохимических исследований сыворотки крови, зараженных возбудителем бруцеллеза и подвергнутых вакцино - и антибиотикотерапии предлагаемым и известным средствами экстренной защиты организма от бруцеллеза представлены в таблице 3.

Из данных таблицы видно, что заражение морских свинок возбудителем бруцеллеза вызывало резкое (в 4,09 раза) снижение иммунорегуляторного индекса ИЛ-1β/ИЛ-1β животных. Применение известного средства защиты (вакцина из штамма 82 Sr в сочетании со стрептомицином) вызывало 2,15-кратное снижение иммунорегуляторного индекса (ИНФ-γ/ИЛ-1β) по сравнению с таковым здоровых (биологический контроль) животных. А значение этого показателя по отношению к больным (зараженным) животным имело тенденцию к увеличению в 1, 91 раза, поскольку использованное средство ингибировало резкое снижение иммунорегуляторного индекса (ИНФ-γ/ИЛ-1β), однако степень ингибирования этого показателя была недостаточно эффективной, поскольку наиболее эффективная противобруцеллезная защита по данному критерию достигалась при использовании предлагаемого средства защиты - вакцины из штамма В. abortus 82 Cr + ципролет, когда иммунорегуляторный индекс (ИНФ-γ/ИЛ-β) приближался к таковому здоровых животных, составляя 1,07 усл./ед. при значении 1,3 усл. ед. у здоровых животных.

Из данных таблицы 3 видно, что поражение организма возбудителем бруцеллеза сопровождается резким (в 1,77 раза) увеличением концентрации провосполительного цитокина ИЛ-1β (р<0,01) с одновременном существенным (в 2,34 раза, Р<0,01) снижением ключевого цитокина адаптивного иммунитета-ИНФ-γ, содержание которого составляло 15,7±0,81 против 36,7±1,47 пг/мл у контрольных животных. При этом установлено, что указанные изменение в цитокиновой системе оказывали на важнейший показатель состояния клеточного иммунитета-соотношения ИНФ-γ /ИЛ-1β, которое снизилось при этом в 4,09 раза (Р<0,001) по отношению к контролю.

После проведения курса экстренной терапии с использованием вакцины из штамма В. abortus 82-Cr в сочетании с антибиотиком нового поколения - ципролетом уровень интерлейкина-1β снижается в 1,67 раза по сравнению с зараженными животными и приближается к контрольному уровню (Р<0,05).

Параллельное испытание защитной эффективности экстренной терапии зараженных возбудителями бруцеллеза животных 3-й группы и леченных известным способом (вакцина из шт. 82-SR+стрептомицин), показало, что при этом содержание цитокина (ИЛ-1β) остается на высоком уровне, превышая таковой контрольных животных в 1,39 раза (Р<0,01) и уступал уровню цитокина зараженных (интактных) животных в 1,27 раза (Р<0,05).

Результаты изучение характера изменения ключевого элемента Th иммунного ответа - интерферона - гамма (ИНФ-γ) на фоне заражения морских свинок возбудителем бруцеллеза и лечения их вакцинами В. abortus 82-SR - 82-Cr в сочетании с антибиотиками стрептомицином и ципролетом показали, что заражение животных высоковирулентным штаммом В. abortus 54М ВГНКИ сопровождается резким (в 2,34 раза, Р<0,001) снижением содержания в крови ИНФ-γ, составляя 15,7±0,4 пг/мл против 36,7±1,47 пг/мл у контрольных животных. Проведение курса экстренной защиты зараженных животных с использованием предлагаемого способа защиты против бруцеллеза (иммунизация зараженных животных В. abortus 82-Cr в сочетании с лечением ципролетом) оказывало иммунокоррегирующее действие, повышая содержание в крови ИНФ-γ до 31,9±0,9 против 15,7±0,8 пг/мл у зараженных животных (Р<0,001).

Параллельное проведение экстренной защиты животных от бруцеллеза с использованием известного способа (одновременное введение зараженным животным вакцины из шт. В. abortus 82 - Sr в сочетании стрептомицином не оказывало существенного влияния на содержание в крови ключевого цитокина адаптивного иммунитета - ИНФ-γ, содержание которого на фоне применения известного способа защиты составляло 23,7±1,3 пг/мл против 15,7±0,4 пг/мл, в контроле заражения, что в 1,38 раза иные такового животных, подвергнутых экстренной защите предполагаемыми средствами.

Анализ данных таблицы 3 показывает, что поражение животных бруцеллезом сопровождается значительными сдвигами соотношения провосполительного цитокина ИЛ-1β и ИНФ-γ, (ИНФ-γ/ИЛ-1β), которое на фоне поражения патогеном достоверно снижается в 4,01 раза (Р<0,01), а при проведении экстренной защиты с использованием вакцина из шт. 82Cr в сочетании с ципролетом значения этого показателя повышается до 1,07, что достоверно (Р<0,001) выше такового зараженных животных в 3,34 раза. При применения известного способа экстренной защиты от бруцеллеза с использованием вакцины из шт. 82-Cr в сочетании с ципролетом значения этого показателя повышается до 1,07, что достоверно (Р<0,001) выше такового зараженных животных в 3,34 раза. При применении известного способа экстренной защиты от бруцеллеза с использованием вакцины из шт. 82-SR в сочетании с стрептомицином указанный показателя значительно уступает таковому (1,75 раза (Р<0,01) предлагаемого средства экстренной защиты против бруцеллеза.

Результаты сопоставительного анализа содержание в крови провоспалительных цитокинов больных (зараженных высоковирулентным штаммом возбудителя бруцеллеза) здоровых (контрольных и подвергнутых терапии животных показали, что соотношение ИНФ-γ/ИЛ-1β является весьма важным показателем, который характеризует эффективность терапии при бруцеллезе и свидетельствует об активации специфического клеточного иммунного ответа и макрофагальной системы, связанных с развитием фагоцитоза. Адекватный клеточной иммунной ответ (Th1) с задействием цитокинов ИЛ-1 и прежде всего ИНФ-γ, имеет решающее значение в обезвреживании и элиминации возбудителя из организма.

Сказанное подтверждается данными приведенными в примере 4 изобретения.

Пример 4. Оценка эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза по критерию освобождения (гибели или элиминации бруцелл) организма от возбудителя в зависимости от состояния его антиоксидантной, цитокиновой и иммуноклеточной систем.

Для решения этой задачи опыты проводили на 160 морских свинках обоего пола живой массой 330-400 г, которые были разделены на 8 групп по 20 животных в каждой. Животным 1-й группы однократно подкожно с внутренней стороны бедра вводили вакцину из штамма В. abortus 82-SR в дозе 1,5 млрд м.к. в объеме 1 мл и внутримышечно стрептомицин в дозе 25 мг на голову в объеме 1 мл на 0,5%-ным растворе новокоина один раз в день в течение 15 сут. Одновременно животных заразали культурой вирулентного штамма В. abortus 54-М ВГНКИ в области паха в дозе 50 м.к. (ЛД₁₀₀) в объеме 1 мл на фосфатно-буферном физиологическом растворе (ФСР). В аналогичных условиях животным 2-й группы вводили вакцину из шт. 82 Cr в дозе 1,0 млрд. м.к. в объеме ципролетфлаксацин (ципролет) внутримышечно в дозе 1 и 2 мл/кг 2 раза в день в течение 5 сут. Одновременно, сразу же после вакцинации введения ципролета, животных заражали возбудителем бруцеллеза шт. 54-М ВГНКИ в области паха в дозе 50 мл в объеме 1 мл на ФБР. Животные 3-й и 4-й группе проводили иммунизации и лечению 'антибиотиками за 3 часа до заражения в аналогичных условиях, дозах и кратностях - той лишь разницей, что животных 3-й группы иммунизировали вакциной из шт. В. abortus 82Cr и лечение антибиотиком ципролетом в дозах кратностях и сроках применения аналогично животным 1-й и 2-групп соответственно. Животные 5-й и 6-й групп подвергали иммунизации и антибиотикотерапии согласно вышеописанной схеме с использанием вакцины из шт. В. abortus 82-SR и антибиотоксин - стрептомицин (5-е группы) и вакциной из шт. В. abortus 82-Cr в сочетании с ципролетом (6-я группа) соответственно. Условия иммунизации и лечения животных были абсолютно идентичными с таковыми для групп 1-4 лишь той разницой, что иммунизации и введение антибиотиков проводили за 24 ч до заражения. Иммунизацию и антибиотикотерапию животных 7-й и 8-й групп проводдили вышеуказанными вакцинами и антибиотиками за 5 сут до заражения с соблюдением всех вышеописанных условий, доз, кратности и длительности применения испытуемых средств. При этом животных 7-й группы иммунизировали вакциной из шт. В. abortus 82-SR в сочетании со стрептомицином, а животных 8-й группы - вакциной из ципролетрезистентного шт. В. abortus 82-Cr в сочетании с ципролетом.

Через 1 мес после иммунизации животных стрептомицин-резистентным штаммом В. abortus 82Sr в сочетании с стрептомицином и В. abortus 82-Cr в сочетании с ципролетом и заражения их высоковирулентным штаммом возбудителя бруцеллеза В. abortus 54-М ВГНКИ в летальной дозе (ЛД₁₀₀) у животных всех групп брали пробы крови для проведения гематологического и иммунохимического анализа сыворотке крови и подвергали эвтаназию для бактериологического исследования с целью изучения эффективности экстренной защиты животных от бруцеллеза. В качестве критериев оценки эффективности лечебно-профилактических мероприятий послужили сочетание системы антиоксидантной защиты (концентрация токсического продукта липопероксидации липидов - МДА и соотношение МДА/СОД, характеризующего степени эффективности антиоксидантной защиты на фоне применения испытуемого средства защиты; состояние. Т - клеточного звена иммунитета (содержимые Т-хелперов СД4, Т- супрессоров - СД8), экстренно реагирующих на внедрение в организм патогена и изменени иммунорегуляторного индекса (ИИ) - СД4/СД8 со сдвигом вправо или влево, в зависимости от иммуноадаптогенного потенциала клеточного иммунитета организма на фоне применения испытуемых средств защиты; состояние цитокиновогот системы (концентрация провосполительного цитокина - ИЛ-1β, принимающего экстренную ответную (защитную) реакцию на внедрение патогена, повышение бактерицидную и литическую активность фагоцитов и литическую активность киллеров (NK-клеток), а также концентрация провосполительного цитокина - ИНФ-γ, принимающего активное участие в обезвреживании и элиминации бруцелл, продуцентами которого являются Т-хелперы (СД4-клетки) и Т-супрессоры (СД8-клетки), которые при скоординированной взаимосвязанной работе ограничивают время пребывания возбудителя (персистенцию) в организме и определяют исход инфекции (выздоровление) вследствие наступления адаптивного иммунитета и очищение организма от патогена. В качестве интегрального показателя степени защиты организма от бруцеллеза на фоне применения испытуемых средств защиты принимали важнейший показатель освобождение организма зараженных животных от возбудителя бруцеллеза, которое оценивали по результатам индикации вирулентного шт. В. abortus 54-М ВГНКИ с определением индекса инфицированности органов количества заразившихся животных на фоне применения испытуемых средств экстренной защиты от бруцеллеза.

Результаты проведенных исследований по оценке экстренной профилактики и лечения бруцеллеза по критерию освобождения (гибели или элиминации бруцелл) организма от бруцеллеза в зависимости от состояния его антиоксидантной, цитокиновой и иммуноклеточной системы представлены в таблице 4.

Из данных таблицы 4 видно, что использование ципролетрезистентного штамма В. abortus 82-Cr в сочетании с антибиотиком нового поколения ципролета обладает более высоким потенциалом экстренной защиты против бруцеллеза-иммунизация высоковоспримчивых к бруцеллезной инфекции животных (морских свинок) и одновременное введение ципролета в момент внедрения высоковирулентного штамма возбудителя в организм обеспечивает 70%-ную защиту от поражения бруцеллезом, в то время как использование известных средств -стрептомицинрезистентного штамма В. abortus SR в сочетании с стрептомицином защищает только 45% животных от бруцеллезного поражения, что в 1,5 раза ниже, чем у предполагаемого (Р<0,05).

Максимальная защита (80%) организма от патогена при использовании предлагаемого способа наступает при одновременном введении в организм вакцины из шт. В. abortus Cr в сочетании с ципролетом за 24 ч до заражения животных высоковирулентным штаммом возбудителя. В отличие от предлагаемого, применение известного способа экстренной защиты с использованием стрептомицинрезистентного шт. В. abortus 82-SR в сочетании со стрептомицином обеспечивает 70 %-ную защиту при проведении экстренной защиты за 5 сут до заражения животных патогеном. При этом способ предполагает длительное (в течение 15 сут) в 3 раза дольше, чем предлагаемый введение стрептомицина в дозе 25 мг на голову, в то время как предлагаемый способ предусматривает 2-кратное введение ципролета в течение 5 сут в дозе 0,5 мг на животное, что в 50 раз меньше известного.

Более высокий защитный потенциал предлагаемого способа оценки экстренной защиты достигается за счет ингибирования образования высокотоксичных свободных радикалов (МДА и сохранения активности антирадикального фермента (СОД) при значениях коэффициента антирадикальной защиты МДА/СОД-0,41±0,07 при 0,33±00,3 в контроле (Р<0,05), коррекции дисбаланса в Т-клеточном звене иммунитета (Т-хелперно-Т-супрессного соотношения СД4/СД8, которое характеризует степень адаптивного (протективного) иммунитета. Как видно из данных таблицы и высокий иммунный ответ организма (80%-ная защита от патогенна) достигается при более высоких значениях иммунорегуляторного индекса - СД4/СД8=2,95±0,65 при 2,90±0,81 в контроле, в то время как максимальная защита от бруцеллеза при известном способе (70%-ная защита) достигается при значениях СД4/СД8=3,27±0,57 при 2,90=0,81 в контроле, что в 1,13 раза превышает таковой контроля и в 1,14 раза выше такового у предлагаемого способа защиты, обусловливая за низкий защитный потенциал способа экстренной защиты от бруцеллеза.

Результаты параллельного изучения состояния цитокиновой защиты при остром экспериментальном бруцеллезе морских свинок, подвергнутых экстренной вакцинопрофилактике и антибиотикотерапии с использованием ципролета максимальная защита (80%) у пораженных возбудителем морских свинок достигается при соотношении концентрации провосполительного цитокина - ИЛ-1β к концентрации ИНФ-γ (ИЛ-1β) достигается при значениях 0,91±0,11 против 1,31 в контроле, в то время как значение этого показателя у известного, при максимальной защите 70%, достигается при значениях показателя 0,71±0,05, что уступает контролю в 2,03 (Р<0,01)и предлагаемому в 1,28 раза (Р<0,05).

Результаты индикации возбудителя в пробах из органов убитых через 1 мес после заражения и проведения экстренной защиты показали, что лечение и профилактика бруцеллеза с использованием предлагаемого средства вызывает ускорение гибели патогена в течение 3-24 ч и 5 сут после заражения, составляя степень элиминации 90-100%. В отличие от предлагаемого, гибель и элиминация патогенна при использовании известного способа наступает через 5-9 сут после заражения и сочетанной защиты со степенью элиминации 45-80%.

Таким образом, развитие острого бруцеллезного процессах в организме на фоне внедрения высоковирулентного патогена в организм сопровождаются резким усиленном интоксикации продуктами пероксидации липидов (МДА), которые истощает систему антиоксидантной защиты (СОД) организма, ведущей к иммунной реактивности Т-клеточного звена иммунитета (снижения иммунорегуляторного индекса-СД4/СД8), которое обуславливают внедрение в организм патогена и длительной его персистенции в организм путем усилении синтеза провосполительного цитокина -ИЛ-1β и реципрокного торможения синтеза ключевого цитокина-ИНФ-γ, участвующего в нейтрализации, обезвреживании и элиминации патогена.

Приложение на этом фоне средств экстренной защиты (вакцина из шт В. abortus Cr в сочетании с ципролетом) ингибирует образования свободных радикалов (токсических продуктов пероксидации липидов - МВА), сохраняет активность антирадикального фермента -СОД, восстанавливая коэффициент эффективности антиоксидантный защиты (КЭ АОЗ=МДА/СОД), устраняя дисбаланс Т-клеточного звена иммунитета (Иммунорегуляторной индекс -СД4/СД8), снижая концентрацию провосполительного цитокина - ИЛ-1β и повышение концентрацию ИНФ-γ, способствуя экспресс -реакции иммунной системы к развитию адаптивного иммунитета и инактивации патогена с усилением процесса по элиминации из организма.

Выводы

Критериями оценки эффективности экстренной профилактика и лечения (защиты) при бруцеллезе является:

1. Значения коэффициента эффективности антиоксидантной защиты (КЭ ОАЗ=МДА/СОД) в пределах 0,35-0,41+0,09 свидетельствуют об эффективности профилактики и терапии; увеличения этого коэффициента в 2-3 раза - о низком защитном потенциале испытуемого средства, а резкое (8-10-кратное) повышение этого показателя свидетельствует о неэффективности испытуемого средства.

2. Значения иммунорегуляторного испытуемого (СД4/СД8) в пределах 2,80-2,90 свидетельствуют о высоком защитном потенциале испытуемого лечебно-профилактического средства, 2-3 кратном повышение - о его низком защитном потенциале.

3. Снижение соотношения цитокинов ИНФ/ИЛ-1β в 2,43 раза по отношению к контролю (зараженные, больные бруцеллезом животных) свидетельствует о низкой эффективности испытуемого средства защиты, а 2-кратное повышение его сравнению с контролем - о достаточно высокой эффективности испытуемого средства противобруцеллезной защиты.

4. Ускорения гибели и элиминации патогена из организма на фоне применения испытуемого средства защиты до 3-24 ч после применения со степенью элиминации 90-100% против 5 до сут у степени элиминации 45-80% контроля (известного средства защиты).

Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, инфектологии, и может быть использовано для определения эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза. Проводят забор периферической крови у зараженных и подвергнутых экстренной профилактике и лечению животных - морских свинок, исследование периферической крови и ее сыворотки. У животных определяют содержание клеточных продуктов пероксидации липидов - малондиальдегида (МДА), мкмоль/л, антиоксидантного фермента - супероксиддисмутазы (СОД), ед./мл/мин, цитокинов: ИЛ-1β, пг/мл, и гамма интерферона (ИНФ-γ), пг/мл. Проводят оценку состояния Т-клеточного звена иммунитета путем определения содержания субпопуляции T-лимфоцитов: Т-хелперов - СД4-клеток, %, и Т-супрессоров - СД8-клеток, %. Рассчитывают соотношения МДА/СОД, усл. ед, СД4/СД8 и ИНФ-γ/ИЛ-1β, усл. ед. При значениях соотношений МДА/СОД 0,33-0,41 усл. ед, СД4/СД8 2,80-2,90, ИНФ-γ/ИЛ-1β 1,07-1,31 усл. ед. определяют эффективность экстренной профилактики и лечения бруцеллеза. Способ обеспечивает возможность патогенетически обоснованной, объективной и простой в осуществлении оценки эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза за счет оценки состояния прооксидантно-антиоксидантной системы и определения концентрации токсических продуктов пероксидации липидов - МДА, антиоксидантного фермента - СОД, субпопуляций Т-лимфоцитов: СД4, СД8-клеток, цитокинов: ИЛ-1β и ИНФ-γ. 4 табл., 4 пр.

Способ определения эффективности экстренной профилактики и лечения бруцеллеза, включающий забор периферической крови у зараженных и подвергнутых экстренной профилактике и лечению животных - морских свинок, исследование периферической крови и ее сыворотки, отличающийся тем, что у животных определяют содержание клеточных продуктов пероксидации липидов - малондиальдегида (МДА), мкмоль/л, антиоксидантного фермента - супероксиддисмутазы (СОД), ед./мл/мин, цитокинов: ИЛ-1β, пг/мл, и гамма интерферона (ИНФ-γ), пг/мл, а также проводят оценку состояния Т-клеточного звена иммунитета путем определения содержания субпопуляции T-лимфоцитов: Т-хелперов - СД4-клеток, %, и Т-супрессоров - СД8-клеток, %, рассчитывают соотношения МДА/СОД, усл. ед, СД4/СД8 и ИНФ-γ/ИЛ-1β, усл. ед; и при значениях соотношений МДА/СОД 0,33-0,41 усл. ед, СД4/СД8 2,80-2,90, ИНФ-γ/ИЛ-1β 1,07-1,31 усл. ед. определяют эффективность экстренной профилактики и лечения бруцеллеза.