Способ применения сплит-конъюгированной вакцины против бруцеллёза животных в качестве "провокатора" с целью ликвидации больных скрытой формой бруцеллёза животных Российский патент 2020 года по МПК A61K39/10 A61K47/42 A61P31/04 

Областью применения изобретения является сельское хозяйство, молочное животноводство, ветеринария, инфекционная патология крупного рогатого скота.

Учитывая, что возбудитель бруцеллеза способен к значительной трансформации, длительной персистенции и риверсии (П.А. Триленко, 1976) с целью иммунокоррекции испытывается значительное количество фармакологических средств синтетического бактериального и животного происхождения: диабазол, поливинилпирролидон (ПВП), нилверм (левамизол) (А.П. Красиков, B.C. Бронников, 1989; Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин, 1985); гидрат окиси алюминия, легкое миндальное масло, ПВП, дрожжевая РНК, левамизол, убитая культура БЦЖ (В.И. Белобаб, К.А. Калашников, В.Б. Тен, 1985); синтетический линейный карбоцепной полимер ПВП-40 и ПВП-700, синтетический полимер винилпиридинвинилацетат, синтетический карбоцепной полимер поли-4-винилпиридин, левамизол; коринеморфные бактерии шт. N 51, гидролизат молозива, нуклеината натрия, зимозан (П.Е. Игнатов, Н.И. Блинов, Ю.З. Кирш, 1983). Применяемые, как адъюванты, преимущественно вместе с вакцинами, иммунокорректоры повышают у лабораторных животных невосприимчивость к бруцеллзу, нивелируют отрицательное действие вакцины из шт. 19 (реактогенность, длительная серопозитивность), усиливают иммуногенность бруцеллезной химической вакцины, стимулируя, в основном, клеточный иммунитет. Однако производственных испытаний этих веществ на сельскохозяйственных животных, в том числе на молодняке крупного рогатого скота, пока недостаточно и определенных выводов о их внедрении в клиническую ветеринарию пока не имеется.

С целью формирования противобруцеллезного иммунитета телкам 4-5-месячного возраста в комплексе с противобруцеллезной вакциной Бруцелла Абортус шт. 19 используют в качестве природных иммуномодуляторов препараты тимуса (экстракт, тимарин). При этом экстракт тимуса применяют перед вакцинацией двукратно через одни сутки (Б.И. Кандауров, Н.Г. Кузнецова, 1989), а тимарин в день вакцинации, на 4-е и 7-е сутки после вакцинации (С.К. Переходова, М.А. Бажин, В. А. Мироненко, 1990).

Недостатком данных рекомендаций является то, что применение только тимусных препаратов преимущественно влияет на Т-защитные стороны иммунитета, мало затрагивая динамику Б-лимфоцитов и, кроме того, учитывая, что пик реакции организма на антигенные препараты бруцелл приходится на 21-30-е сутки, а пик иммунного ответа на иммуномодуляторы приходится на более ранние сроки, становится очевидным недостаточная эффективность рекомендаций авторов по формированию иммунной защиты организма при комплексном применении противобруцеллезных вакцин и иммуномодуляторов. Кроме того, применение противобруцеллезных вакцин в 4-5-месячном возрасте на фоне отсутствия или значительного ослабления колострального иммунитета создает условия для спонтанного заражения молодняка возбудителем бруцеллеза.

Прототипом изобретения является способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота (патент на ИЗ №2065749, МПК А61К 39/10, А61К 39/39, опубл. 27.08.1996), осуществляемый путем иммунизации животных в стандартной дозе 5 мл вакциной из штамма 82 бруцелла абортус и ревакцинации серологически отрицательно реагирующих животных той же вакциной в той же дозе, отличающийся тем, что животных иммунизируют в 20-30 суточном возрасте с последующим через 14-21 сутки введением 0,01%-ного раствора Т-активина в дозе 4 мкг/кг или 0,04 мл/кг и В-активина в дозе 6 мг порошка, растворенного в 0,01%-ном растворе Т-активина, однократно в сутки в течение 3-х дней, а ревакцинируют через 12 месяцев.

Недостатком данного способа является то, что при применении вакцины против бруцеллеза животных из штамма 82 в крови животных сохраняются антитела до 12 месяцев, что препятствует отличию больных животных от вакцинированных.

Технической задачей изобретения является создание иммунитета у животных против бруцеллеза, а также обострение инфекционного процесса путем введения сплит-конъюгированной вакцины против бруцеллеза животных с целью более быстрого обнаружения и ликвидации больных бруцеллезом животных.

Поставленная задача решается способом применения сплит-конъюгированной вакцины против бруцеллеза животных в качестве «провокатора» с целью ликвидации больных скрытой формой бруцеллеза животных, исследования сыворотки крови после вакцинации, ревакцинация серологически отрицательно реагирующих животных той же вакциной в той же дозе, отличающимся тем, что иммунизацию проводят испытуемой вакциной в дозе 1,0 мл спустя каждые 6 месяцев после вакцинации и исследования сыворотки крови спустя каждые 3 месяца до полного оздоровления хозяйства, причем введение животным вакцины происходит при растворении ее с иммунопротектором полипептидом-С.

Сущность изобретения заключается в том, что крупный рогатый скот в любом возрасте иммунизируют в дозе 1,0 мл сплит-конъюгированной вакциной против бруцеллеза животных (с использованием иммуномодулятора Полипептида-С). После выявления положительно реагирующих животных их в течение 15 дней нужно ликвидируют, затем исследуют кровь животных еще раз спустя 6 месяцев после первой вакцинации, а все поголовье крупного рогатого скота хозяйства, после получения отрицательного результата, прививают повторно испытуемой вакциной. Положительно реагирующих на бруцеллез животных снова в течение 15 дней ликвидируют. Затем проводят серологические исследования сыворотки крови животных. У вакцинированных животных спустя 3 месяца исчезают антитела в крови животных, тогда как у больных животных наоборот из органов и тканей возбудитель бруцеллеза попадает в кровь, так как вакцина обостряет инфекционный процесс и больных бруцеллезом животных можно легко выявить стандартными серологическими реакциями (РСК, РА, РБП) [5]. Кроме этого, вакцина создает иммунитет в течение указанного срока. Схема вакцинации: после вакцинации исследовать кровь животных серологическими реакциями через каждые 3 месяца, и через каждые 6 месяцев вакцинировать животных сплит-конъюгированной вакциной против бруцеллеза животных до полного оздоровления хозяйства от бруцеллеза.

Сроки пребывания антител в крови у крупного рогатого скота, (месяцы) при применении испытуемых вакцин приведены в таблице.

Существенными признаками является то, что:

1) Животных иммунизируют первично в любом возрасте, поскольку вакцина инактивированная и в период стельности, что дает возможность предотвратить заражение животных возбудителем бруцеллеза на всем протяжении жизни [7].

2) Введение животным вакцины происходит при растворении ее с иммунопротектором полипептидом-С, полученным из активированных клеток селезенки теленка, состоящей из смеси пептидов-активаторов В-клеток и конъюгированных с антигенами бруцелл.

3) Ревакцинируют животных через каждые 6 месяцев, что существенно снижает риски появления больных бруцеллезом животных [6].

4) Иммунопротектор полипептид-С позволяет активировать не только гуморальный иммунный ответ организмом животных на антигены, но и активирует клеточные факторы иммунитета.

Сплит-конъюгированная вакцина против бруцеллеза, содержит сплит антигены бруцелл 3-х штаммов - В. melitensis Rev-1, В. bovis 19, В. abortus 104 М, конъюгированные на протекторе иммунного ответа и сорбированные на гель гидроокиси алюминия.

Это инактивированная вакцина, которая представляет собой комбинацию частей вышеуказанных бактерий (очищенные полисахариды клеточной стенки) с белками-носителями, в качестве которых выступают бактериальные токсины. Сплит-конъюгированная вакцина против бруцеллеза животных, состоит из белков и высокомолекулярных растворимых пептидов вакцинного штамма, конъюгированных с нано иммунопротектором полипептид-С и адсорбированных на гель гидроокиси алюминия.

Рекомендуется применять сплит-конъюгированную вакцину против бруцеллеза животных в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах с целью:

1. Обнаружения латентных (больных скрытой формой бруцеллеза) животных, для чего ее необходимо вводить сразу после выявления в хозяйстве больных бруцеллезом животных (крупный рогатый скот). Спустя 14 суток, после введения вакцины кровь нужно исследовать всеми серологическими реакциями (РСК, РА, РБП) на бруцеллез [4]. При выявлении положительно реагирующих животных фиксировать инвентарные номера и титры антител таких животных и снова исследовать серологическими реакциями через 30 суток. Сравнивать результаты серологических исследований крови с предыдущими, фиксировать инвентарные номера животных и титры антител. Исследовать кровь всех животных хозяйства спустя 3 месяца на бруцеллез серологическими реакциями, в том числе РБП. Считать положительно реагирующих на бруцеллез животных больными спустя 3 месяца после вакцинации и ликвидировать их в течение 15 суток. При необходимости и подозрении на наличие еще больных бруцеллезом животных в хозяйстве следует провести ревакцинацию сплит-конъюгированной вакциной против бруцеллеза животных и повторить трехкратное исследование крови всех животных хозяйства на бруцеллез.

2. Создания гуморального иммунитета организмом животных на введенную вакцину.

В случае выявления в хозяйстве больных бруцеллезом животных рекомендуем применять вакцину как для выявления больных бруцеллезом животных, так и для создания иммунитета здоровым животным. Схема следующая: после выделения положительно реагирующих животных их в течение 15 дней следует ликвидировать, а все поголовье крупного рогатого скота хозяйства привить сплит-конъюгированной вакциной против бруцеллеза животных. Через 6 месяца после вакцинации вновь исследовать кровь здоровых животных на бруцеллез серологическими реакциями. Положительно реагирующих животных считать больными бруцеллезом и ликвидировать их в течение 15 дней [2]. Повторно исследовать кровь животных хозяйства через 14 суток. При получении отрицательного результата на бруцеллез повторно привить всех животных хозяйства вакциной. Спустя 3 месяца снова двукратно с интервалом 14 суток исследовать кровь животных на бруцеллез. К этому времени больных бруцеллезом животных не должно остаться в хозяйстве и вакцина при двукратном применении сформирует гуморальный иммунитет к бруцеллезу у животных, связанный как с образованием специфических антител, так и с созданием иммунной памяти организмом животных [1, 3]. С целью профилактики бруцеллеза вакцину нужно применять через каждые 6 месяцев.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Веселовский, С.Ю. Экспериментальное применение сплит-конъюгированной вакцины против бруцеллеза животных с использованием иммуномодулятора полиоксидония // С.Ю. Веселовский, В.А. Агольцов, О.М. Попова, Д.А. Девришов и др. // Научная жизнь - Москва-2018. - №2. - С. 89-100.

2. Иванов Н.П. Бруцеллез животных: методы и средства борьбы с ним. - Алматы, 2006. - 506 с.

3. Иванов А.В. Иммунологические свойства вакцинных штаммов Brucella abortus I Иванов А.В. // Ветеринария. - 2009. - №3. - С. 27 - 29.

4. Наставление по диагностике бруцеллеза животных от 29 сентября 2003 г. №13-5-02/0850.

5. Новицкий А.А. Использование провоцирующих свойств химической вакцины для выявления латентных форм бруцеллеза / А.А. Новицкий // Современные проблемы и научное обеспечение развития животноводства материалы международной научно-практической конференции. ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина». 2016. С. 153-159.

6. Пути решения проблем, обуславливающие актуальность бруцеллеза / О.Д. Скляров, А.И. Климанов, К.В. Шумилов и др. // Ветеринария. - 2011. - №1. - С. 34-38.

7. Состояние и перспективы изыскания нового поколения вакцин при бруцеллезе животных / А.В. Иванов, К.М. Салмаков, A.M. Фомин, А.Н. Чернов // Научно-производственный журнал «Ветеринарный врач» - 2009. - №6. - С. 9-12. 123.

Изобретение относится к способу применения сплит-конъюгированной вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота в качестве «провокатора» с целью ликвидации больных животных скрытой формой бруцеллеза крупного рогатого скота путем иммунизации животных вакциной против бруцеллеза крупного рогатого скота, исследования сыворотки крови после вакцинации, ревакцинации серологически отрицательно реагирующих животных той же вакциной в той же дозе. Способ характеризуется тем, что иммунизацию проводят сплит-конъюгированной вакциной против бруцеллеза крупного рогатого скота в дозе 1,0 мл спустя каждые 6 месяцев после вакцинации и исследования сыворотки крови спустя каждые 3 месяца до полного оздоровления хозяйства, причем введение животным вакцины происходит при растворении ее с иммунопротектором полипептидом-С. Использование предлагаемого способа позволяет создать иммунитет у животных против бруцеллеза, а также более быстро обнаруживать и ликвидировать больных бруцеллезом животных. 1 табл.

Способ применения сплит-конъюгированной вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота в качестве «провокатора» с целью ликвидации больных животных скрытой формой бруцеллеза крупного рогатого скота путем иммунизации животных вакциной против бруцеллеза крупного рогатого скота, исследования сыворотки крови после вакцинации, ревакцинации серологически отрицательно реагирующих животных той же вакциной в той же дозе, отличающийся тем, что иммунизацию проводят сплит-конъюгированной вакциной против бруцеллеза крупного рогатого скота в дозе 1,0 мл спустя каждые 6 месяцев после вакцинации и исследования сыворотки крови спустя каждые 3 месяца до полного оздоровления хозяйства, причем введение животным вакцины происходит при растворении ее с иммунопротектором полипептидом-С.