АНТИТЕЛА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОПИОИДНОЙ ЗАВИСИМОСТИ Российский патент 2025 года по МПК C07K16/44 C12N15/13 C12N15/63 A61K39/395 A61P25/36 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно заявке США №63/111699 (поданной 10 ноября 2020 г.; в настоящее время находится на рассмотрении), раскрытие которой полностью включено посредством ссылки.

ЗАЯВЛЕНИЕ О ГОСУДАРСТВЕННОЙ ПОДДЕРЖКЕ

[0002] Настоящее изобретение сделано при государственной поддержке по гранту №DA046323, предоставленному Национальным институтом здравоохранения. Правительство имеет определенные права на изобретение.

ССЫЛКА НА «СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ», ТАБЛИЦУ ИЛИ ПРИЛОЖЕНИЕ К СПИСКУ КОМПЬЮТЕРНЫХ ПРОГРАММ, ПРЕДСТАВЛЕННОЕ В ВИДЕ ФАЙЛА ASCII

[0003] Список последовательностей, записанный в файле 2014_1PC_20211105_SeqListing, создан 05 ноября 2021 г., 75558 байт, машинный формат IBM-PC, операционная система MS Windows, настоящим включен посредством ссылки.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0004] Продолжающийся рост злоупотребления опиоидами создает острую потребность в быстродействующих и эффективных методах лечения для борьбы с опиоидной интоксикацией и передозировкой. В начале августа 2017 года опиоидный кризис был объявлен в Соединенных Штатах чрезвычайной ситуацией национального масштаба из-за постоянно растущего числа сообщений о передозировке опиоидами. Этиология смертельных случаев из-за баллонирования, связанного с опиоидами, является многофакторной и чаще всего связана со злоупотреблением сильнодействующими полусинтетическими и полностью синтетическими опиоидами, т.е. героином и фентанилом, соответственно. Препараты класса фентанила являются мощными агонистами мю-опиоидных рецепторов, и это фармакологическое свойство отвечает за их болеутоляющее, вызывающее привыкание и потенциально опасное депрессивное действие на центральную нервную систему (ЦНС). Впервые обнаруженный в 1960 году Полом Янссеном, фентанил представляет собой препарат списка II Управления по борьбе с наркотиками (DEA), который обычно используют в клинике. Фентанил можно вводить внутривенно для анестезии, а также трансдермально и трансмукозально в виде пластырей и леденцов, соответственно, для уменьшения боли в различных ситуациях (например, послеоперационной, связанной с раком и острой боли). Однако фентанил отражает профиль склонности к злоупотреблению героином, и сообщалось о преднамеренном злоупотреблении пластырями с фентанилом, отпускаемыми по рецепту. В то время как злоупотребление героином остается проблемой общественного здравоохранения на протяжении многих десятилетий, в последнее время фентанил представляет еще большую опасность для потребителей незаконных опиоидов из-за его повышенной активности.

Рост злоупотребления опиоидами усилил потребность в новых и креативных способах как лечения, так и противодействия их последствиям. Налоксон эффективен для реверсии передозировки героина и рецептурных опиоидов, но менее эффективен против фентанила и карфентанила. В частности, сообщалось, что высокая эффективность препаратов класса фентанила, особенно карфентанила, превосходит продолжительность действия налоксона и терапевтическую эффективность типичных доз налоксона. Фентанил, хотя и эффективен при обезболивании и индукции анестезии, особенно опасен при незаконном использовании из-за его способности вызывать дыхательную недостаточность. В то время как фармакология карфентанила недостаточно хорошо изучена у людей, он имеет сходные с фентанилом свойства, но со значительно повышенной активностью и способностью вызывать «ренаркотизацию», в результате чего субъект испытывает опиоидную интоксикацию спустя долгое время после кажущегося выздоровления. Хотя это явление не изучалось у людей, известно, что оно возникает у крупных животных, получавших транквилизатор карфентанил, и для предотвращения ренаркотизации требуется введение доз налоксона, в 100 раз превышающих дозы карфентанила. В клинических условиях требуется непрерывный или многократный прием налоксона с течением времени, чтобы поддерживать реверсию интоксикации фентанилом и предотвратить возможную ренаркотизацию. Налмефен является еще одним опиоидным антагонистом, который продемонстрировал повышенную эффективность и продолжительность действия при дыхательной недостаточности, вызванной фентанилом и карфентанилом, по сравнению с налоксоном. Хотя антагонисты опиоидов полезны для борьбы с передозировкой опиоидов, в данной области необходимы новые лекарственные средства и новые подходы для лечения или предотвращения передозировки опиоидов и лечения расстройств, связанных с употреблением опиоидов. Изобретение направлено на это, а также на другие важные цели.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0006] В настоящей заявке представлены антитела с высокой аффинностью и специфичностью к синтетическим опиоидам, таким как фентанил, карфентанил и их аналоги. Настоящее изобретение обеспечивает антитела, включающие: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1, CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 4, CDR Н2 с последовательностью SEQ ID NO: 5, и CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6. Настоящее изобретение обеспечивает способы профилактики передозировки опиоидами, способы лечения передозировки опиоидами и способы лечения расстройств, связанных с употреблением опиоидов, путем введения пациенту эффективного количества любого из описанных в настоящей заявке антител. Эти и другие варианты осуществления настоящего изобретения подробно представлены в настоящей заявке.

ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0007] Фиг. 1А-1С показывают определение эффективности и периода полужизни моноклональных антител (mAb) у обезьян. Фиг. 1А: макакам-резусам (n=3) вводили внутривенно (в/в) дозу фентанила с последующим внутривенным введением дозы 8 мг/кг JBZ-1 или сравнительного mAb. Эффекты на антиноцицепцию отдергивания хвоста наблюдали и отображали в процентах от максимально возможного эффекта (МРЕ). Фиг. 1В: кумулятивную дозу фентанила ED50 определяли у тех же обезьян в трех временных точках после инфузии mAb. Фиг. 1С: у обезьян были взяты образцы крови и проанализированы методом ELISA для определения концентрации антител в указанные моменты времени.

[0008] Фиг. 2А-2С показывают фармакокинетику фентанила у мышей, которым вводили человеческое mAb. Антифентаниловые моноклональные антитела связывают большие количества лекарственного средства в крови, чтобы уменьшить периферическое действие лекарственного средства и на головной мозг. Фиг. 2А: эксперимент с изменением во времени уровней фентанила в крови у мышей (n=4), которым вводили 30 мг/кг mAb за 48 часов до внутривенной инъекции 0,1 мг/кг фентанила. Фиг. 2В: значениями площади под кривой для фентанила, полученные из данных панели А. Фиг. 2С: уровни фентанила в крови у мышей, получавших JBZ-1, JBZ-2 и Р2В5, через 15 минут и 3 часа.

[0009] Фиг. 3A-3D демонстрируют in vivo mAb-опосредованный антагонизм карфентанил-индуцированной антиноцицепции. Фиг. 3A-3B: обработка JBZ-1 за 24 часа до провокации лекарственным средством значительно сдвигает кривые доза-эффект карфентанила вправо в тестах на отдергивание хвоста и с горячей пластинкой. Фиг. 3C: сравнение ED50 значений фентанила у мышей, получавших JBZ-1, JBZ-2 и Р2В5, в анализе антиноцицепции с отдергиванием хвоста, демонстрирующее превосходство JBZ-2. Фиг. 3D: Сравнение процента мышей ниже порога максимально возможного эффекта в анализе антиноцицепции с горячей пластинкой при обработке JBZ-1, JBZ-2 и JBZ-3, показывающее превосходство JBZ-2.

[0010] Фиг. 4А-4С представлена оценка антител JBZ-2, JBZ-3, JBZ-4 и Р2В5 при антиноцицептивных эффектах фентанила. Фиг. 4А: mAb (45 мг/кг) вводили интраперитонеально (и/п) n=4 самкам Swiss Webster и антиноцицептивное действие индуцировали интраперитонеальным введением 0,4 мг/кг фентанила через 4 часа после введения mAb. Фиг. 4В: антиноцицепцию отслеживали в течение 15-115-минутного периода после введения фентанила и выражали как среднее значение. Фиг. 4С: антиноцицептивное действие фентанила повторно тестировали на тех же мышах через 2 дня после введения mAb.

[0011] Фиг. 5А-5В показывают количественную оценку антител и фентанила в периферической крови мышей. Фиг. 5А: тем же мышам из исследования антиноцицепции вводили фентанил и/п (0,4 мг/кг) и образцы крови брали через 20 минут после инъекции лекарственного средства. Образцы подщелачивали, объединяли с дейтерированным внутренним стандартом, экстрагировали органическим растворителем и анализировали методом ЖХ-МС/МС с использованием стандартной кривой для интерполяции неизвестных концентраций. Фиг. 5В: образцы крови, взятые перед введением лекарственного средства через 2 дня после введения mAb, анализировали при помощи ELISA.

[0012] Фиг. 6А-6В показывают избавление от индуцированной фентанилом антиноцицепции путем инфузии JBZ-4 и JBZ-7. После интраперитонеального введения дозы 0,2 мг/кг фентанила мышей тестировали в анализах антиноцицепции с использованием горячей пластины (Фиг. 6А) и на отдергивание хвоста (Фиг. 6В) через 15 минут и сразу же вводили в/в антитело в дозе 30 мг/кг, после чего тестирование возобновляли. JBZ-4 превосходил JBZ-7.

[0013] Фиг. 7А-7В показывают, что JBZ-4 блокирует и устраняет дыхательную недостаточность, вызванную карфентанилом. Фиг. 7А: мышам, предварительно обработанным 30 мг/кг JBZ-4, через 48 часов вводили в/в карфентанил (30 мкг/кг), и их дыхание наблюдали при помощи плетизмографии всего тела и выражали в виде минутного объема (MV), нормализованного к исходному уровню. Фиг. 7В: В экспериментах по спасению мышам вводили и/п карфентанил (30 мкг/кг), а затем в/в спасательную дозу либо 1 мг/кг налоксона, либо (60 мг/кг) JBZ-4, и наблюдали за дыханием.

[0014] Фиг. 8А-8В представляют необработанные сенсограммы скоростей ассоциации (kon) и скоростей диссоциации (koff) фентанила (Фиг. 8А) и карфентанила (Фиг. 8В) с использованием JBZ-4 с подогнанной кривой.

[0015] Фиг. 9 показывает провиль концентрация-время моноклонального антитела JBZ-4 у крыс после однократного внутривенного болюсного введения JBZ-4 в дозе 10, 100 и 250 мг/кг.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0016] Определения

[0017] Заголовки разделов, используемые в настоящей заявке, предназначены только для организационных целей и не должны толковаться как ограничивающие описываемый объект изобретения. Все документы или части документов, цитируемые в заявке, включая, без ограничения, патенты, патентные заявки, статьи, книги, руководства и трактаты, явным образом включены в настоящую заявку путем ссылки во всей их полноте для любых целей.

[0018] Если не указано иное, используемые в настоящей заявке технические и научные термины имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в данной области техники. См., например, Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 1994); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Press (Cold Springs Harbor, NY 1989). Любые способы, устройства и вещества, подобные или эквивалентные тем, которые описаны в настоящей заявке, могут быть использованы при практическом осуществлении настоящего изобретения. Следующие определения представлены для облегчения понимания некоторых терминов, часто используемых в настоящей заявке, и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

[0019] В настоящем изобретении "содержит", "включающий", "содержащий" и "имеющий" и т.п. могут иметь значение, приписываемое им в патентном законодательстве США, и могут означать "содержит", "включая" и т.п. "Состоящий по существу из или "состоит по существу" также имеет значение, указанное в патентном законодательстве США, и этот термин является открытым, допуская наличие большего, чем то, что цитируется, при условии, что основные или новые характеристики того, что указано не изменены наличием большего, чем то, что указано, но исключает варианты осуществления предшествующего уровня техники.

[0020] При использовании в настоящей заявке термин "около" означает диапазон значений, включая указанное значение, которое специалист в данной области техники счел бы достаточно схожим с указанным значением. В вариантах осуществления термин "около" означает в пределах стандартного отклонения с использованием измерений, обычно приемлемых в данной области. В вариантах осуществления "около" означает диапазон до+/- 10% от указанного значения. В вариантах осуществления около означает указанное значение.

[0021] "JBZ-1" относится к моноклональному антителу, имеющему аминокислотную последовательность легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 45, и аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 46.

[0022] "JBZ-2" относится к моноклональному антителу (mAb), имеющему вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 37 и вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления эти термины относятся к моноклональному антителу (mAb), имеющему аминокислотную последовательность легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 38 и аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 25.

[0023] "JBZ-3" относится к JBZ-2 антителу, имеющему шесть дополнительных мутаций в вариабельной области тяжелой цепи (последовательность не показана).

[0024] "JBZ-4" относится к антителу, имеющему вариабельную область легкой цепи, включающую CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1, CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 15, CDR H2 с последовательностью SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 16, и CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления термины относятся к антителу, включающему вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 20 и вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления термины относятся к антителу, включающему аминокислотную последовательность легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 22 и аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 25.

[0025] "JBZ-5" относится к антителу, включающему вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 43, и вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления термин относится к антителу, включающему аминокислотную последовательность легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 44, и аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 25.

[0026] "JBZ-б" относится к антителу, включающему вариабельную область легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 40, и вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления термин относится к антителу, включающему аминокислотную последовательность легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 41, и аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 25.

[0027] "JBZ-7" относится к JBZ-4 антителу, имеющему шесть дополнительных мутаций в вариабельной области тяжелой цепи (последовательность не показана).

[0028] Шесть сравнительных антител (последовательности не показаны) обозначены в настоящей заявке как "Р1А2", "Р2С1", "Р2В5", "Р1С1", "P1D8" и "P1F8."

[0029] "PBS" относится к забуференному фосфатом солевому раствору.

[0030] Антитела представляют собой большие комплексные молекулы со сложной внутренней структурой. Молекула природного антитела содержит две идентичные пары полипептидных цепей, где каждая пара имеет одну легкую цепь и одну тяжелую цепь. Каждая легкая цепь и тяжелая цепь, в свою очередь, состоят из двух областей: вариабельной ("V") области, участвующей в связывании антигена-мишени, и константной ("С") области, взаимодействующей с другими компонентами иммунной системы. Вариабельные области легкой и тяжелой цепей объединяются в трехмерном пространстве, образуя вариабельную область, которая связывает антиген (например, лекарственное средство, такое как опиоид, или рецептор на поверхности клетки). В каждой вариабельной области легкой или тяжелой цепи имеется три коротких сегмента (длиной в среднем 10 аминокислот), называемых определяющими комплементарность областями ("CDR"). Шесть CDR в вариабельном домене антитела (три из легкой цепи и три из тяжелой цепи) складываются вместе в трехмерном пространстве, образуя фактический сайт связывания антитела, который стыкуется с антигеном-мишенью (например, опиоидом). Часть вариабельной области, не содержащаяся в CDR, называется каркасом ("FR"), который образует окружение для CDR. В вариантах осуществления положения CDR и FR определены в настоящей заявке системой нумерации Chothia (Chothia et al, J. Mol. Biol, 196 (4):901-917 (1987); Chothia et al, Nature, 342(6252:877-883 (1989); Al-Lazikani et al, J. Mol. Biol. 273 (4):927-948 (1997)). В вариантах осуществления положения, занимаемые отдельными остатками в легкой или тяжелой цепи антитела, определены в настоящей заявке в соответствии с системой нумерации Chothia. В вариантах осуществления положения CDR и FR определены в настоящей заявке в соответствии с системой нумерации Rabat (Rabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991)). В вариантах осуществления положения, занимаемые отдельными остатками в легкой или тяжелой цепи антитела, определены в настоящей заявке в соответствии с системой нумерации Rabat. В различных разделах расположение остатков, необходимых для связывания, в легкой цепи и тяжелой цепи антитела определяется положением остатка в соответствии с системой нумерации Rabat или системой нумерации Chothia, как хорошо известно в данной области.

[0031] Термин "антитело" используется в соответствии с его общеизвестным значением в данной области. Антитела существуют, например, в виде интактных иммуноглобулинов или в виде ряда хорошо охарактеризованных фрагментов, полученных при расщеплении различными пептидазами. Таким образом, например, пепсин расщепляет антитело ниже дисульфидных связей в шарнирной области с образованием F(ab)'₂, димера Fab, который сам представляет собой легкую цепь, соединенную с V_H-C_H1 дисульфидной связью. F(ab)'₂ может быть восстановлен в мягких условиях для разрыва дисульфидной связи в шарнирной области, тем самым превращая димер F(ab)'₂ в мономер Fab'. Мономер Fab' представляет собой по существу Fab с частью шарнирной области (см. Fundamental Immunology (Paul ed., 3d ed. 1993)). Хотя различные фрагменты антител определяются с точки зрения расщепления интактного антитела, специалисту в данной области техники будет понятно, что такие фрагменты могут быть синтезированы de novo либо химически, либо с использованием методов рекомбинантной ДНК. Таким образом, термин "антитело" в контексте настоящей заявки также содержит фрагменты антител, либо полученные путем модификации целых антител, либо фрагменты, синтезированные de novo с использованием методов рекомбинантной ДНК (например, одноцепочечные Fv), либо фрагменты, идентифицированные с использованием библиотек фагового дисплея (см., например, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)).

[0032] "Вариант антитела", представленный в настоящей заявке, относится к полипептиду, способному связываться с антигеном и включающему один или несколько структурных доменов антитела или его фрагмента. Неограничивающие примеры вариантов антител содержат однодоменные антитела или нанотела, аффитела (полипептиды, которые меньше моноклональных антител (например, около 6 кДА) и способные связывать антигены с высокой аффинностью и имитирующие моноклональные антитела, моноспецифические Fab₂, биспецифические Fab₂, триспецифические Fab₃, моновалентные IgG, scFv, биспецифические диатела, триспецифические триатела, scFv-Fc, минитела, IgNAR, V-NAR, hcIgG, VhH или пептитела. "Нанотело" или "однодоменное антитело", как описано в настоящей заявке, широко известно в данной области и относится к фрагменту антитела, состоящему из одного мономерного вариабельного домена антитела. Подобно целому антителу, оно способно избирательно связываться со специфическим антигеном. "Пептитело", представленное в настоящей заявке, относится к пептидному фрагменту, присоединенному (через ковалентный или нековалентный линкер) к Fc-домену антитела.

[0033] Термины "CDR L1", "CDR L2" и "CDR L3" в контексте настоящей заявки относятся к определяющим комплементарность областям (CDR) 1, 2 и 3 вариабельной области легкой (L) цепи антитела. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи, как представлено в настоящей заявке, содержит, в направлении от N-конца к С-концу, CDR L1, CDR L2 и CDR L3. Аналогичным образом, термины "CDR H1", "CDR Н2" и "CDR H3" в контексте настоящей заявки относятся к определяющим комплементарность областям (CDR) 1, 2 и 3 вариабельной области тяжелой (Н) цепи антитела. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи, как представлено в настоящей заявке, содержит, в направлении от N-конца к С-концу, CDR H1, CDR Н2 и CDR H3.

[0034] Термины " FR L1", " FR L2", " FR L3" и " FR L4" в контексте настоящей заявки используются в соответствии с их общепринятым в данной области техники значением и относятся к каркасным областям (FR) 1, 2, 3 и 4 вариабельной области легкой (L) цепи антитела. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи, как представлено в настоящей заявке, содержит, в направлении от N-конца к С-концу, FR L1, FR L2, FR L3 и FR L4. Аналогичным образом, термины "FR H1", "FR Н2", "FR H3" и "FR Н4" в контексте настоящей заявки используются в соответствии с их общепринятым в данной области техники значением и относятся к каркасным областям (FR) 1, 2, 3 и 4 вариабельной области тяжелой (Н) цепи антитела. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи, как представлено в настоящей заявке, содержит, в направлении от N-конца к С-концу, FR H1, FR Н2, FR H3 и FR Н4.

[0035] Типичная структурная единица иммуноглобулина (антитела) содержит тетрамер. Каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, каждая пара имеет одну «легкую» (около 25 кДа) и одну «тяжелую» цепь (около 50-70 кДа). N-конец каждой цепи определяет вариабельную область примерно от 100 до 110 или более аминокислот, в первую очередь ответственную за распознавание антигена. Термины вариабельная легкая цепь (VL), вариабельный домен легкой цепи (VL) или вариабельная область легкой цепи и вариабельная тяжелая цепь (VH), вариабельный домен тяжелой цепи (VH) или вариабельная область тяжелой цепи относятся к этим областям легкой и тяжелой цепи, соответственно. Термины вариабельная легкая цепь (VL), вариабельный домен легкой цепи (VL) и вариабельная область легкой цепи в контексте настоящей заявки можно использовать взаимозаменяемо. Термины вариабельная тяжелая цепь (VH), вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельная область тяжелой цепи в контексте настоящей заявки можно использовать взаимозаменяемо. Fc (т.е. фрагмент, являющийся кристаллизуемой областью) представляет собой «основание» или «хвост» иммуноглобулина и обычно состоит из двух тяжелых цепей, которые обеспечивают два или три константных домена в зависимости от класса антитела. Связываясь со специфическими белками, Fc-область обеспечивает, чтобы каждое антитело генерировало соответствующий иммунный ответ на данный антиген.

[0036] Антитела, описанные в настоящей заявке, например, рекомбинантные, моноклональные или поликлональные антитела, могут быть получены любым способом, известным в данной области (см., например, Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4: 72 (1983); Cole et al., pp.77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985); Coligan, Current Protocols in Immunology (1991); Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988); и Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2d ed. 1986)). Гены, кодирующие тяжелую и легкую цепи представляющего интерес антитела, можно клонировать из клетки, например, гены, кодирующие моноклональное антитело, можно клонировать из гибридомы и использовать для получения рекомбинантного моноклонального антитела. Библиотеки генов, кодирующих тяжелые и легкие цепи моноклональных антител, также могут быть получены из гибридомных или плазматических клеток. Случайные комбинации продуктов генов тяжелой и легкой цепей создают большой пул антител с различной антигенной специфичностью (см., например, Kuby, Immunology (3-яя редакция, 1997)). Методы получения одноцепочечных антител или рекомбинантных антител (патент США №4946778, патент США №4816567) могут быть адаптированы для получения антител. Кроме того, для экспрессии гуманизированных или человеческих антител можно использовать трансгенных мышей или другие организмы, например других млекопитающих (см., например, Патенты США №№5545807; 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5661016, Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14:845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14:826 (1996); and Lonberg & Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)). Альтернативно, технологию фагового дисплея можно использовать для идентификации антител и гетеромерных Fab-фрагментов, которые специфически связываются с выбранными антигенами (см., например, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Marks et al., Biotechnology 10:779-783 (1992)). Антитела также можно сделать биспецифическими, т.е. способными распознавать два разных антигена (см., например, WO 93/08829, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991); и Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986)). Антитела также могут представлять собой гетероконъюгаты, например два ковалентно соединенных антитела, или иммунотоксины (см., например, Патент США №4676980, WO 91/00360; WO 92/200373; и ЕР 03089).

[0037] Способы гуманизации или приматизации нечеловеческих антител хорошо известны в данной области (например, Патенты США №№4816567; 5530101; 5859205; 5585089; 5693761; 5693762; 5777085; 6180370; 6210671; и 6329511; WO 87/02671; заявка на патент ЕР 0173494; Jones et al. (1986) Nature 321:522; и Verhoyen et al. (1988) Science 239:1534). Гуманизированные антитела более подробно описаны, например, в Winter and Milstein (1991) Nature 349:293. Как правило, гуманизированное антитело имеет один или несколько аминокислотных остатков, введенных в него из источника, который не является человеком. Эти аминокислотные остатки нечеловеческого происхождения часто называют "импортными" остатками, которые обычно берут из "импортного" вариабельного домена. Гуманизация может быть осуществлена в основном по методу Винтера и сотрудников (см., например, Morrison et al., PNAS USA, 81:6851-6855 (1984), Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988), Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988) и Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992), Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31 (3):169-217 (1994)), путем замены CDR или последовательностями CDR грызунов соответствующих последовательностей человеческого антитела. Соответственно, такие гуманизированные антитела представляют собой химерные антитела (патент США №4816567), в которых часть, существенно меньшая, чем интактный вариабельный домен человека, заменена соответствующей последовательностью от нечеловеческих видов. На практике гуманизированные антитела обычно представляют собой антитела человека, в которых некоторые остатки CDR и, возможно, некоторые остатки FR заменены остатками из аналогичных сайтов в антителах грызунов. Например, полинуклеотиды, включающие первую последовательность, кодирующую каркасные области гуманизированного иммуноглобулина, и второй набор последовательностей, кодирующих желаемые определяющие комплементарность области иммуноглобулина, могут быть получены синтетическим путем или путем объединения соответствующих сегментов кДНК и геномной ДНК. Последовательности ДНК константной области человека могут быть выделены в соответствии с хорошо известными процедурами из различных клеток человека.

[0038] "Химерное антитело" представляет собой молекулу антитела, в которой (а) константная область или ее часть изменена, заменена или обменена таким образом, что антигенсвязывающий сайт (вариабельная область) связан с константной областью другого или измененного класса, эффекторной функцией и/или видом, или совершенно другой молекулой, которая придает новые свойства химерному антителу, например, ферментом, токсином, гормоном, фактором роста, лекарственным средством и т.д.; или (b) вариабельная область или ее часть изменена, заменена или обменена с вариабельной областью, имеющей другую или измененную антигенную специфичность. В вариантах осуществления описанные в настоящей заявке антитела представляют собой гуманизированные и/или химерные моноклональные антитела.

[0039] Эпитоп mAb представляет собой область его антигена, с которой связывается mAb. Два антитела связываются с одним и тем же или перекрывающимся эпитопом, если каждое конкурентно ингибирует (блокирует) связывание другого с антигеном. То есть, 1х, 5х, 10х, 20х или 100х избыток одного антитела ингибирует связывание другого по меньшей мере на 30%, но предпочтительно на 50%, 75%, 90% или даже 99%, как измерено в анализе конкурентного связывания (см., например, Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990). Альтернативно, два антитела имеют один и тот же эпитоп, если по существу все аминокислотные мутации в антигене, которые снижают или устраняют связывание одного антитела, снижают или устраняют связывание другого. Два антитела имеют перекрывающиеся эпитопы, если некоторые аминокислотные мутации, которые уменьшают или устраняют связывание одного антитела, уменьшают или устраняют связывание другого.

[0040] Одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) обычно представляет собой слитый белок вариабельных областей тяжелой (VH) и легкой (VL) цепей иммуноглобулинов, соединенных коротким линкерным пептидом из 10-25 аминокислот. Линкер обычно может быть обогащен глицином для гибкости, а также серином или треонином для растворимости. Линкер может соединять либо N-конец VH с С-концом VL, либо наоборот. В вариантах осуществления линкер содержит более одного серина. В вариантах осуществления линкер содержит более одного глицина. В вариантах осуществления линкер имеет структуру -(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)₃-.

[0041] Фраза "специфически (или селективно) связывается" с антителом или "специфически (или селективно) иммунореактивен с", когда речь идет о опиоиде, белке или пептиде, относится к реакции связывания, которая определяет присутствие опиоида или белка, часто в гетерогенной популяции опиоидов, белков и других биопрепаратов. Таким образом, в указанных условиях иммунологического анализа связывание указанных антител с определенным опиоидом или белком по меньшей мере в два раза превышает фоновое значение, а чаще более чем в 10-100 раз превышает фоновое значение. Для специфического связывания с антителом в таких условиях требуется антитело, выбранное по его специфичности в отношении конкретного опиоида или белка. Например, поликлональные антитела могут быть выбраны для получения только субпопуляции антител, которые специфически иммунореактивны с выбранным антигеном, а не с другими белками. Этот отбор может быть достигнут путем исключения антител, которые перекрестно реагируют с другими молекулами. Для выбора антител, специфически иммунореактивных с конкретным опиоидом или белком, можно использовать различные форматы иммунологического анализа. Например, твердофазные иммунологические анализы ELISA обычно используют для выбора антител, специфически иммунореактивных с белком (описание форматов и условий иммунологического анализа, которые можно использовать для определения специфической иммунореактивности, см., например, в Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual (1998) для).

[0042] Термин "аминокислота" относится к встречающимся в природе и синтетическим аминокислотам, а также к аналогам аминокислот и миметикам аминокислот, которые функционируют аналогично встречающимся в природе аминокислотам. Встречающиеся в природе аминокислоты представляют собой аминокислоты, закодированные генетическим кодом, а также те аминокислоты, которые позже модифицированы, например, гидроксипролин, γ-карбоксиглутамат и О-фосфосерин. Аналоги аминокислот относятся к соединениям, которые имеют ту же основную химическую структуру, что и встречающиеся в природе аминокислоты, то есть α-углерод, связанный с водородом, карбоксильной группой, аминогруппой и R группой, например, гомосерин, норлейцин, метионинсульфоксид, метионинметилсульфоний. Такие аналоги имеют модифицированные R группы (например, норлейцин) или модифицированные пептидные остовы, но сохраняют ту же основную химическую структуру, что и природная аминокислота. Аминокислотные миметики относятся к химическим соединениям, которые имеют структуру, отличную от общей химической структуры аминокислоты, но функционируют так же, как встречающаяся в природе аминокислота. Термины «не встречающаяся в природе аминокислота» и «неприродная аминокислота» относятся к аналогам аминокислот, синтетическим аминокислотам и миметикам аминокислот, которые не встречаются в природе.

[0043] Аминокислоты могут обозначаться в настоящей заявке либо их общеизвестными трехбуквенными символами, либо однобуквенными символами, рекомендованными Комиссией по биохимической номенклатуре IUPAC-IUB. Нуклеотиды также могут обозначаться их общепринятыми однобуквенными кодами.

[0044] Термины "полипептид", "пептид" и "белок" в настоящей заявке используются взаимозаменяемо для обозначения полимера, состоящего из аминокислотных остатков, где полимер может быть конъюгирован с фрагментом, не состоящим из аминокислот. Эти термины применяют к аминокислотным полимерам, в которых один или более аминокислотных остатков является искусственными химическим миметиком соответствующей встречающейся в природе аминокислоты, а также к аминокислотным полимерам природного происхождения и аминокислотным полимерам неприродного происхождения. «Слитый белок» относится к химерному белку, кодирующему две или более отдельных белковых последовательностей, которые рекомбинантно экспрессируются в виде одного фрагмента.

[0045] "Нуклеиновая кислота" относится к нуклеотидам (например, дезоксирибонуклеотидам или рибонуклеотидам) и их полимерам в одно-, двух- или многоцепочечной форме или их комплементарным формам; или нуклеозидам (например, дезоксирибонуклеозидам или рибонуклеозидам). В вариантах осуществления "нуклеиновая кислота" не содержит нуклеозиды. Термины "полинуклеотид," "олигонуклеотид," "олиго" и т.п.относятся, в обычном и общепринятом смысле, к линейной последовательности нуклеотидов. Термин "нуклеозид" относится, в обычном и общепринятом смысле, к гликозиламину, включающему нуклеооснование и пятиуглеродный сахар (рибозу или дезоксирибозу). Неограничивающие примеры нуклеозидов содержат цитидин, уридин, аденозин, гуанозин, тимидин и инозин. Термин "нуклеотид" относится, в обычном и общепринятом смысле, к единичному звену полинуклеотида, т.е. мономеру. Нуклеотиды могут представлять собой рибонуклеотиды, дезоксирибонуклеотиды или их модифицированные версии. Примеры рассматриваемых в настоящей заявке полинуклеотидов содержат одно- и двухцепочечную ДНК, одно- и двухцепочечную РНК и гибридные молекулы, содержащие смеси одно- и двухцепочечной ДНК и РНК. Примеры нуклеиновой кислоты, например, полинуклеотиды рассматриваемые в настоящей заявке, содержат любые типы РНК, например мРНК, миРНК, микроРНК и направляющую РНК, и любые типы ДНК, геномную ДНК, плазмидную ДНК и миникольцевую ДНК, и любые их фрагменты. Термин "дуплекс" в контексте полинуклеотидов относится, в обычном и общепринятом смысле, к двухцепочечности. Нуклеиновые кислоты могут быть линейными или разветвленными. Например, нуклеиновые кислоты могут представлять собой линейную цепь нуклеотидов, или нуклеиновые кислоты могут быть разветвленными, например, нуклеиновые кислоты содержат одно или несколько плеч или ответвлений нуклеотидов. Необязательно, разветвленные нуклеиновые кислоты многократно разветвляются с образованием структур более высокого порядка, таких как дендримеры и т.п.

[0046] Термин "комплемент" в контексте настоящей заявки относится к нуклеотиду (например, РНК или ДНК) или последовательности нуклеотидов, способной к образованию пар оснований с комплементарным нуклеотидом или последовательностью нуклеотидов. Как описано в настоящей заявке и общеизвестно в данной области, комплементарный (совпадающий) нуклеотид аденозина представляет собой тимидин, а комплементарный (совпадающий) нуклеотид гуанозина представляет собой цитозин. Таким образом, комплемент может включать последовательность нуклеотидов, которые образуют пары оснований с соответствующими комплементарными нуклеотидами второй последовательности нуклеиновой кислоты. Нуклеотиды комплемента могут частично или полностью совпадать с нуклеотидами второй последовательности нуклеиновой кислоты. Когда нуклеотиды комплемента полностью совпадают с каждым нуклеотидом второй последовательности нуклеиновой кислоты, комплемент образует пары оснований с каждым нуклеотидом второй последовательности нуклеиновой кислоты. Когда нуклеотиды комплемента частично совпадают с нуклеотидами второй последовательности нуклеиновой кислоты, только некоторые из нуклеотидов комплемента образуют пары оснований с нуклеотидами второй последовательности нуклеиновой кислоты. Примеры комплементарных последовательностей содержат кодирующие и некодирующие последовательности, где некодирующая последовательность содержит нуклеотиды, комплементарные кодирующей последовательности, и, таким образом, образует комплемент кодирующей последовательности. Еще одним примером комплементарных последовательностей являются смысловая и антисмысловая последовательности, где смысловая последовательность содержит нуклеотиды, комплементарные антисмысловой последовательности, и, таким образом, образует комплемент антисмысловой последовательности.

[0047] Как описано в настоящей заявке комплементарность последовательностей может быть частичной, когда только некоторые из нуклеиновых кислот совпадают в соответствии со спариванием оснований, или полной, когда все нуклеиновые кислоты совпадают в соответствии со спариванием оснований. Таким образом, две последовательности, являющиеся комплементарными друг другу, могут иметь определенный процент одинаковых нуклеотидов (т.е. идентичность около 60%, предпочтительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более высокую идентичность в указанной области).

[0048] Полинуклеотид обычно состоит из определенной последовательности четырех нуклеотидных оснований: аденина (А); цитозина (С); гуанина (G); и тимина (Т) (урацил (U) вместо тимина (Т), когда полинуклеотид представляет собой РНК). Таким образом, термин "полинуклеотидная последовательность" является буквенным представлением молекулы полинуклеотида; альтернативно, этот термин может быть применен к самой молекуле полинуклеотида. Это буквенное представление можно вводить в базы данных в компьютер, имеющий центральный процессор, и использовать для приложений биоинформатики, таких как функциональная геномика и поиск гомологии. Полинуклеотиды могут необязательно включать один или более нестандартных нуклеотидов, аналогов нуклеотидов и/или модифицированных нуклеотидов.

[0049] "Консервативно модифицированные варианты" относятся как к аминокислотным, так и к последовательностям нуклеиновой кислоты. Что касается конкретных нуклеиновокислотных последовательностей "консервативно модифицированные варианты" относятся к тем нуклеиновым кислотам, которые кодируют идентичные или по существу идентичные аминокислотные последовательности. Из-за вырожденности генетического кода ряд нуклеиновокислотных последовательностей будет кодировать любой заданный белок. Например, кодоны GCA, GCC, GCG и GCU кодируют аминокислоту аланин. Таким образом, в каждом положении, где аланин определяется кодоном, кодон может быть изменен на любой из соответствующих описанных кодонов без изменения кодируемого полипептида. Такие вариации нуклеиновых кислот представляют собой «молчащие вариации», которые представляют собой один из видов консервативно модифицированных вариаций. Каждая последовательность нуклеиновой кислоты в настоящей заявке, которая кодирует полипептид, также описывает каждую возможную молчащую вариацию нуклеиновой кислоты. Специалисту будет понятно, что каждый кодон в нуклеиновой кислоте (за исключением AUG, который обычно является единственным кодоном для метионина, и TGG, который обычно является единственным кодоном для триптофана) можно модифицировать с получением функционально идентичной молекулы. Соответственно, каждая молчащая вариация нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, подразумевается в каждой описанной последовательности.

[0050] Что касается аминокислотных последовательностей, специалисту в данной области техники будет понятно, что отдельные замены, делеции или добавления к последовательности нуклеиновой кислоты, пептида, полипептида или белка, которые изменяют, добавляют или удаляют одну аминокислоту или небольшой процент аминокислот в кодируемой последовательности, представляют собой "консервативно модифицированный вариант", в котором изменение приводит к замене аминокислоты на химически подобную аминокислоту. Таблицы консервативных замен, представляющие функционально сходные аминокислоты, хорошо известны в данной области. Такие консервативно модифицированные варианты являются дополнением к полиморфным вариантам, межвидовым гомологам и аллелям согласно настоящему изобретению и не исключают их.

[0051] Каждая из следующих восьми групп содержит аминокислоты, являющиеся консервативными заменами друг друга: (1) аланин (А), глицин (G); (2) аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (Е); (3) аспарагин (N), глутамин (Q); (4) аргинин (R), лизин (К); (5) изолейцин (I), лейцин (L), метионин (М), валин (V); (б) фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W); (7) серии (S), треонин (Т); и (8) цистеин (С), метионин (М).

[0052] "Процент идентичности последовательности" определяют путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей в окне сравнения, где часть полинуклеотидной или полипептидной последовательности в окне сравнения может включать добавления или делеции (т.е. гэпы) по сравнению с эталонной последовательностью (которая не содержит добавлений или делеций) для оптимального выравнивания двух последовательностей. Процент рассчитывают путем определения количества положений, в которых идентичное основание нуклеиновой кислоты или аминокислотный остаток встречается в обеих последовательностях, чтобы получить количество совпадающих положений, деления количества совпадающих положений на общее количество положений в окне сравнения и умножения результата на 100 с получением процента идентичности последовательности.

[0053] Термины "идентичный" или процент "идентичности" в контексте двух или более последовательностей нуклеиновых кислот или полипептидов относятся к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые являются одинаковыми или имеют определенный процент аминокислотных остатков или нуклеотидов, которые являются одинаковыми (т.е. 60% идентичность, необязательно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичность в определенной области, например, целых полипептидных последовательностей или отдельных доменов полипептидной последовательности) при сравнении и выравнивании для максимального соответствия в окне сравнения, или указанной области, как измерено с использованием одного из следующих алгоритмов сравнения последовательностей или путем ручного выравнивания и визуального осмотра. Такие последовательности затем называют "по существу идентичными". Это определение также относится к комплементу исследуемой последовательности. Необязательно, идентичность существует в области, длина которой составляет по меньшей мере около 50 нуклеотидов, или предпочтительно в области, длина которой составляет от 100 до 500 или 1000 или более нуклеотидов.

[0054] Для сравнения последовательностей обычно одна последовательность действует как эталонная последовательность, с которой сравнивают исследуемые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей в компьютер вводят исследуемую и эталонную последовательности, при необходимости назначаются координаты подпоследовательностей и назначаются параметры программы алгоритма последовательности. Можно использовать параметры программы по умолчанию или можно указать альтернативные параметры. Алгоритм сравнения последовательностей затем вычисляет процент идентичности последовательностей для исследуемых последовательностей относительно эталонной последовательности на основе параметров программы.

[0055] "Окно сравнения" в контексте настоящей заявки содержит ссылку на сегмент любого из числа смежных положений, выбранных из группы, состоящей, например, из полноразмерной последовательности или из 20-600, от около 50 до около 200, или от около 100 до около 150 аминокислот или нуклеотидов, в которых последовательность можно сравнить с эталонной последовательностью с таким же количеством смежных положений после оптимального выравнивания двух последовательностей. Способы выравнивания последовательностей для сравнения хорошо известны в данной области. Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения можно осуществить, например, с использованием алгоритма локальной гомологии Smith and Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c, алгоритма гомологического выравнивания Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443, метода поиска подобия Pearson and Lipman (1988) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444, компьютеризированной реализации этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и T FAS ТА в пакете программного обеспечения Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) или путем ручного выравнивания и визуального осмотра (см., например, Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (1995 supplement)).

[0056] Примером алгоритма, подходящего для определения процента идентичности последовательностей и сходства последовательностей, являются алгоритмы BLAST и BLAST 2.0, которые описаны в Altschul et al. (1977) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402 и Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410, соответственно. Программное обеспечение для выполнения анализа BLAST находится в открытом доступе через Национальный центр биотехнологической информации (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).

Этот алгоритм содержит сначала идентификацию пар последовательностей с высокой оценкой (HSP) путем определения коротких слов длины W в запрашиваемой последовательности, которые либо соответствуют, либо удовлетворяют некоторому положительно-оцениваемому пороговому показателю Т при совпадении со словом той же длины в последовательности базы данных. Т указан как порог оценки соседнего слова (Altschul et al., см. выше). Эти начальные совпадения соседних слов действуют как исходные данные для инициирования поиска, чтобы найти более длинные HSP, содержащие их. Совпадения слов расширяются в обоих направлениях вдоль каждой последовательности настолько, насколько может быть увеличена совокупная оценка выравнивания. Совокупные баллы рассчитываются с использованием для нуклеотидных последовательностей параметров М (поощрительный балл за пару совпадающих остатков; всегда>0) и N (штрафной балл за несовпадающие остатки; всегда<0). Для аминокислотных последовательностей используют матрицу оценок для расчета совокупной оценки. Расширение совпадений слов в каждом направлении останавливается, когда: совокупная оценка выравнивания падает на величину X от максимально достигнутого значения; совокупная оценка становится равной нулю или ниже из-за накопления одного или более отрицательно-оцениваемых выравниваний остатков; или достигнут конец любой последовательности. Параметры алгоритма BLAST W, Т и X определяют чувствительность и скорость выравнивания. Программа BLASTN (для нуклеотидных последовательностей) использует по умолчанию длину слова (W), равную 11, ожидание (Е), равное 10, М=5, N=-4 и сравнение обеих цепочек. Для аминокислотных последовательностей программа BLASTP использует по умолчанию длину слова=3, ожидание (Е)=10 и матрицу оценок BL0SUM62 (см. Henikoff and Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915) выравнивание (В)=50, ожидание (E)=10, M=5, N=-4 и сравнение обеих цепочек.

[0057] Алгоритм BLAST также выполняет статистический анализ сходства между двумя последовательностями (см., например, Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787). Одной из мер сходства, обеспечиваемой алгоритмом BLAST, является наименьшая суммарная вероятность (P(N)), которая указывает вероятность того, что совпадение между двумя нуклеотидными или аминокислотными последовательностями произойдет случайно. Например, нуклеиновая кислота считается подобной эталонной последовательности, если наименьшая суммарная вероятность при сравнении исследуемой нуклеиновой кислоты с эталонной нуклеиновой кислотой составляет меньше чем около 0,2, меньше чем около 0,01 или меньше чем около 0,001.

[0058] Признаком того, что две последовательности нуклеиновых кислот или полипептидов по существу идентичны, является то, что полипептид, кодируемый первой нуклеиновой кислотой, является иммунологически перекрестно реактивным с антителами, вырабатываемыми против полипептида, кодируемого второй нуклеиновой кислотой, как описано ниже. Таким образом, полипептид обычно по существу идентичен второму полипептиду, например, если два пептида отличаются только консервативными заменами. Другим признаком того, что две последовательности нуклеиновой кислоты последовательности по существу идентичны, является то, что две молекулы или их комплементы гибридизуются друг с другом в жестких условиях, как описано ниже. Еще одним признаком того, что две последовательности нуклеиновых кислот последовательности по существу идентичны, является то, что для амплификации последовательности можно использовать одни и те же праймеры.

[0059] Аминокислотный остаток в антителе "соответствует" данному остатку, когда он занимает такое же существенное структурное положение в антителе, как и данный остаток. Например, выбранный остаток в сравнительном антителе соответствует положению 48 (в соответствии с системой нумерации Rabat или Chothia) в антителе, представленном в настоящей заявке, когда выбранный остаток находится в таком же существенном пространственном или структурном взаиморасположении с положением 48 по Rabat или Chothia, как определено с использованием применимых способов в данной области техники. Например, сравнительное антитело может быть выровнено для максимальной гомологии последовательности с антителом, представленным в настоящей заявке, и может быть определено, что положение в выровненном сравнительном антителе, которое выравнивается с положением 48 по Rabat или Chothia, соответствует ему. Альтернативно, вместо выравнивания (или в дополнение к выравниванию) первичной последовательности, как описано выше, также можно использовать трехмерное структурное выравнивание, например, когда структура сравнительного антитела выравнивается для максимального соответствия с антителом, представленным в настоящей заявке, и сравнивают структуры полностью. В этом случае можно сказать, что аминокислота, которая занимает то же существенное положение, что и положение 48 по Rabat или Chothia в структурной модели, соответствует.

[0060] Термин "выделенный" применительно к белку означает, что белок по существу свободен от других клеточных компонентов, с которыми он связан в естественном состоянии. Предпочтительно он находится в гомогенном состоянии, хотя он может быть либо в сухом, либо в водном растворе. Чистоту и гомогенность обычно определяют с использованием методов аналитической химии, таких как электрофорез в полиакриламидном геле или высокоэффективная жидкостная хроматография. Белок, который является преобладающим видом, присутствующим в препарате, является по существу очищенным. Термин "очищенный" означает, что белок дает по существу одну полосу в электрофоретическом геле. В частности, это означает, что белок имеет чистоту по меньшей мере 85%, чистоту по меньшей мере 90%, чистоту по меньшей мере 95% или чистоту по меньшей мере 99%.

[0061] В контексте настоящей заявки термин "вектор" относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. Одним типом вектора является "плазмида", которая относится к петле линейной или кольцевой двухцепочечной ДНК, в которую могут быть лигированы дополнительные сегменты ДНК. Другой тип вектора представляет собой вирусный вектор, в котором дополнительные сегменты ДНК могут быть лигированы в вирусный геном. Некоторые векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую они введены (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальный ориджин репликации, и эписомальные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, неэписомальные векторы млекопитающих) интегрируются в геном клетки-хозяина при введении в клетку-хозяин и, таким образом, реплицируются вместе с геномом хозяина. Более того, некоторые векторы способны направлять экспрессию генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы называются в настоящей заявке "векторами экспрессии." Как правило, векторы экспрессии, используемые в методах рекомбинантной ДНК, часто имеют форму плазмид. В настоящем описании "плазмида" и "вектор" могут использоваться взаимозаменяемо, поскольку плазмида является наиболее часто используемой формой вектора. Однако предполагается, что изобретение содержит такие другие формы векторов экспрессии, как вирусные векторы (например, дефектные по репликации ретровирусы, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы), которые выполняют эквивалентные функции. Кроме того, некоторые вирусные векторы способны нацеливаться на определенный тип клеток либо специфически, либо неспецифически. Репликационно-некомпетентные вирусные векторы или репликационно-дефектные вирусные векторы относятся к вирусным векторам, которые способны инфицировать свои клетки-мишени и доставлять их вирусную нагрузку, но затем не могут продолжить типичный литический путь, который приводит к лизису и гибели клеток.

[0062] В контексте настоящей заявки термины "опиоид" и "синтетический опиоид" относятся к фентанилу, аналогам фентанила, карфентанилу и аналогам карфентанила.

[0063] "Фентаниловый аналог" относится к аналогу фентанила. В аспектах аналог фентанила представляет собой соединение, которое связывается с мю-опиоидным рецептором в большей степени, чем фентанил, или которое демонстрирует связывание с мю-опиоидным рецептором в количестве примерно на 0-50% меньше по сравнению с фентанилом, примерно на 0-25% меньше по сравнению с фентанилом или примерно на 0-10% меньше по сравнению с фентанилом, в соответствии со стандартным анализом связывания мю-опиоидных рецепторов in vitro или in vivo (например, Lipinski et al, Molecules, 24(4):740 (2019)). Примеры аналогов фентанила содержат ацетилфентанил, альфентанил, бутилфентанил, бутирфентанил, пара-толилфентанил, 3-метилфентанил, α-метилфентанил, ремифентанил, мефентанил, фенаридин, омефентанил, мирфентанил и т.п. В аспектах аналог фентанила представляет собой ацетилфентанил, альфентанил, бутилфентанил, пара-толилфентанил, 3-метилфентанил, α-метилфентанил или ремифентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой ацетилфентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой бутилфентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой альфентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой ремифентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой бутирфентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой пара-толилфентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой 3-метилфентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой α-метилфентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой мефентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой фенаридин. В аспектах аналог фентанила представляет собой омефентанил. В аспектах аналог фентанила представляет собой мирфентанил.

[0064] "Карфентаниловый аналог" относится к аналогу карфентанила. В аспектах аналог карфентанила представляет собой соединение, которое связывается с мю-опиоидным рецептором в большей степени, чем карфентанил, или которое демонстрирует связывание с мю-опиоидным рецептором в количестве примерно на 0-50% меньше по сравнению с карфентанилом, примерно на 0-25% меньше по сравнению с карфентанилом или примерно на 0-10% меньше по сравнению с карфентанилом, в соответствии со стандартным анализом связывания мю-опиоидных рецепторов in vitro или in vivo (например, Lipinski et al, Molecules, 24(4):740 (2019)). Примеры аналогов карфентанила содержат суфентанил, ремифентанил, альфентанил, лофентанил, брифентанил, трефентанил и т.п.В аспектах аналог карфентанила представляет собой суфентанил. В аспектах аналог карфентанила представляет собой ремифентанил. В аспектах аналог карфентанила представляет собой альфентанил. В аспектах аналог карфентанила представляет собой лофентанил. В аспектах аналог карфентанила представляет собой брифентанил. В аспектах аналог карфентанила представляет собой трефентанил.

[0065] Антитела

[0066] в настоящей заявке представлено антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 7, LFR2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8, LFR3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 9, и LFR4, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или с 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 11; HFR2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 12, HFR3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 13, и HFR4, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 14. В вариантах осуществления SEQ ID NO: 1-14 основаны на системе нумерации Rabat. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая больше или равна аффинности связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0%-25% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0%-20% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0%-15% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0%-10% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0%-5% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'2-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0067] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 1, CDR L2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 4, CDR Н2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 5, и CDR H3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0068] В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 7, LFR2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8, LFR3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 9, и LFR4, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 11; HFR2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 12, HFR3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 13, и HFR4, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 14. В вариантах осуществления антитело содержит: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 1, CDR L2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 4, CDR Н2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 5, и CDR H3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 7, LFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 8, LFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 9, и LFR4, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 11; HFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 12, HFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 13, и HFR4, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 14. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0069] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 4 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; CDR Н2 с последовательностью SEQ ID NO: 5 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 7 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; LFR2, представленную в SEQ ID NO: 8 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; LFR3, представленную в SEQ ID NO: 9 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и LFR4, представленную в SEQ ID NO: 10 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 11 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; HFR2 с последовательностью SEQ ID NO: 12 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; HFR3 с последовательностью SEQ ID NO: 13 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и HFR4 с последовательностью SEQ ID NO: 14 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 10 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 9 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 8 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 7 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 6 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 5 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 4 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 3 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 или 2 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 1 консервативно модифицированный вариант. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 2 консервативно модифицированных варианта. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 3 консервативно модифицированных варианта. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 4 консервативно модифицированных варианта. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 5 консервативно модифицированных вариантов. Как описано в настоящей заявке, консервативно модифицированный вариант содержит консервативную замену, делецию аминокислоты, добавление аминокислоты или комбинацию двух или более из них. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой консервативную замену. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой делецию аминокислоты. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой добавление аминокислоты. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая больше или равна аффинности связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 25% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 20% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 15% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 10% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 5% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂ фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0070] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1, CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 4, CDR Н2 с последовательностью SEQ ID NO: 5, и CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 7, LFR2, представленную в SEQ ID NO: 8, LFR3, представленную в SEQ ID NO: 9, и LFR4, представленную в SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 11; HFR2 с последовательностью SEQ ID NO: 12, HFR3 с последовательностью SEQ ID NO: 13, и HFR4 с последовательностью SEQ ID NO: 14. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0071] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 15; CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 16, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 7, LFR2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8, LFR3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 9, и LFR4, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 17; HFR2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 18, HFR3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 19, и HFR4, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 14. В вариантах осуществления SEQ ID NO: 1-3, 6-10, 14-16 и 17-19 основаны на системе нумерации Chothia. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая больше или равна аффинности связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 25% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 20% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 15% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 10% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 5% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления аффинность связывания определяют при помощи анализа, описанного в Примере 3. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0072] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 15, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 16, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 15, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 16, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 15, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 16, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 1, CDR L2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 15, CDR Н2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 16, и CDR H3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 15, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 16, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело содержит (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, CDR L2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, и CDR L3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 15, CDR Н2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 16, и CDR H3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0073] В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 7, LFR2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8, LFR3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 9, и LFR4, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 17; HFR2, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 18, HFR3, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 19, и HFR4, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 14. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 7, LFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 8, LFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 9, и LFR4, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 17; HFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 18, HFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 19, и HFR4, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 14. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0074] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 15 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; CDR Н2 с последовательностью SEQ ID NO: 16 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 7 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; LFR2, представленную в SEQ ID NO: 8 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; LFR3, представленную в SEQ ID NO: 9 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и LFR4, представленную в SEQ ID NO: 10 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 17 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; HFR2 с последовательностью SEQ ID NO: 18 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; HFR3 с последовательностью SEQ ID NO: 19 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов; и HFR4 с последовательностью SEQ ID NO: 14 и имеющую один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 5 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 4 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 консервативно модифицированного варианта - примерно 3 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов независимо выбраны из 1 или 2 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 1 консервативно модифицированный вариант. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 2 консервативно модифицированных варианта. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 3 консервативно модифицированных варианта. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 4 консервативно модифицированных варианта. В вариантах осуществления один или несколько консервативно модифицированных вариантов представляют собой 5 консервативно модифицированных вариантов. Как описано в настоящей заявке, консервативно модифицированный вариант содержит консервативную замену, делецию аминокислоты, добавление аминокислоты или комбинацию двух или более из них. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой консервативную замену. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой делецию аминокислоты. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой добавление аминокислоты. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая больше или равна аффинности связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 25% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 20% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 15% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 10% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 5% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления аффинность связывания определяют при помощи анализа, описанного в Примере 3. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0075] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1, CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, CDR Н2 с последовательностью SEQ ID NO: 16, и CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 7, LFR2, представленную в SEQ ID NO: 8, LFR3, представленную в SEQ ID NO: 9, и LFR4, представленную в SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 17; HFR2 с последовательностью SEQ ID NO: 18, HFR3 с последовательностью SEQ ID NO: 19, и HFR4 с последовательностью SEQ ID NO: 14. I В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0076] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1, имеющую последовательность xSxGxDxTxLxPxKxRxSxGxYx, CDR L2, имеющую последовательность xKxDxTxExRxPxSx, и CDR L3, имеющую последовательность xQxSxAxDxSxSxFxTxYxPxSx; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1, имеющую последовательность xSxRxNxWxWxSx или xGxGxFxIxSxSxRxNx, CDR Н2, имеющую последовательность xExVxYxHxTxGxIxTxNxYxNxPxSxLxKxSx или xYxHxTxGxIx, и CDR H3, имеющую последовательность xExVxVxGxPxTxTxGxYxFxDxLx; где "х" представляет собой аминокислоту или отсутствует. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1, имеющую последовательность xSxYxExLxTxQxPxPxSxVxSxVxSxPxGxQxTxAxRxIxTxCx, LFR2, имеющую последовательность xWxYxQxQxKxPxDxQxAxPxLxLxVxIxNx, LFR3, имеющую последовательность xGxIxPxExRxFxSxGxSxKxSxGxTxTxVxTxLxTxIxSxGxVxQxAxExDxExAxDxYxYxC х, и LFR4, имеющую последовательность xFxGxGxGxTxKxLxTxVxLx; где "х" представляет собой аминокислоту или отсутствует. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1, имеющую последовательность xQxVxQxLxQxExSxGxPxGxLxVxKxPxSxGxTxLxSxLxTxCxTxVxSxGxGxFxIxSx или xQxVxQxLxQxExSxGxPxGxLxVxKxPxSxGxTxLxSxLxTxCxTxVxSx; HFR2, имеющую последовательность xWxVxRxQxPxPxGxKxGxLxExWxIxGx или xWxWxSxWxVxRxQxPxPxGxKxGxLxExWxIxGxExVx, HFR3, имеющую последовательность xRxVxTxIxSxVxDxKxSxKxNxQxFxSxLxKxLxSxSxVxTxAxAxDxTxAxVxYxYxCxAxRx или xTxNxYxNxPxSxLxKxSxRxVxTxIxSxVxDxKxSxKxNxQxFxSxLxKxLxSxSxVxTxAxA xDxTxAxVxYxYxCxAxRx, и HFR4, имеющую последовательность xWxGxRxGxTxLxVxTxIxSxSx; где "х" представляет собой аминокислоту или отсутствует. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая больше или равна аффинности связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 25% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 20% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 15% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 10% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 5% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления аффинность связывания определяют при помощи анализа, описанного в Примере 3. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0077] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи, которая содержит: (i) CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1; (ii) CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2; и (iii) CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3, CDR L3, имеющую последовательность xQSAxFTYPx; или CDR L3, имеющую последовательность xQSADSSFTYPSx; и вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит: (iv) CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 4, CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, или CDR H1, имеющую последовательность GGFISSRNW; (v) CDR H2 с последовательностью SEQ ID NO: 5, CDR H2 с последовательностью SEQ ID NO: 16, CDR H2, имеющую последовательность xWxExIxNx, или CDR H2, имеющую последовательность xWxExITNx; и (vi) CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6, CDR H3, имеющую последовательность xExVxGYFx, или CDR H3, имеющую последовательность xExVGPxTGYFx; где х независимо отсутствует или представляет собой от 1 до 8 аминокислот. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В вариантах осуществления CDR L3 имеет последовательность xQSAxFTYPx. В вариантах осуществления CDR L3 имеет последовательность xQSADSSFTYPSx. В вариантах осуществления CDR H1 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 4. В вариантах осуществления CDR H1 имеет последовательность GGFISSRNW. В вариантах осуществления CDR H1 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 15. В вариантах осуществления CDR Н2 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 5. В вариантах осуществления CDR Н2 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 16. В вариантах осуществления CDR Н2 имеет последовательность xWxExIxNx. В вариантах осуществления CDR Н2 имеет последовательность xWxExITNx. В вариантах осуществления CDR H3 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность xExVxGYFx. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность ExVGPxTGYFx. В вариантах осуществления х независимо отсутствует или представляет собой от 1 до 7 аминокислот. В вариантах осуществления х независимо отсутствует или представляет собой от 1 до 6 аминокислот. В вариантах осуществления х независимо отсутствует или представляет собой от 1 до 5 аминокислот. В вариантах осуществления х независимо отсутствует или представляет собой от 1 до 4 аминокислот. В вариантах осуществления х независимо отсутствует или представляет собой от 1 до 3 аминокислот. В вариантах осуществления х независимо отсутствует или представляет собой от 1 до 2 аминокислот. В вариантах осуществления х независимо отсутствует или представляет собой 1 аминокислоту. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0078] В настоящей заявке представлено антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи, которая содержит (i) CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1; (ii) CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2; и (iii) CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3, CDR L3, имеющую последовательность QSADSSFTYP; CDR L3, имеющую последовательность QSA; CDR L3, имеющую последовательность QSAD; CDR L3, имеющую последовательность QSADS; CDR L3, имеющую последовательность QSADSS; CDR L3, имеющую последовательность FTYP; CDR L3, имеющую последовательность SFTYP; CDR L3, имеющую последовательность SSFTYP; или CDR L3, имеющую последовательность DSSFTYP; и вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит (iv) CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 4, CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, или CDR H1, имеющую последовательность GGFISSRNW; (v) CDR H2 с последовательностью SEQ ID NO: 5, CDR H2 с последовательностью SEQ ID NO: 16, CDR H2, имеющую последовательность WIGEVYHTGI, CDR H2, имеющую последовательность EVYHTGI, CDR H2, имеющую последовательность WIGEVYHTGITN, CDR H2, имеющую последовательность WIGEVYHTGIT, CDR H2, имеющую последовательность EVYHTGITN, CDR H2, имеющую последовательность YHTGITN, CDR H2, имеющую последовательность ITN; и (vi) CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6, CDR H3, имеющую последовательность EW, CDR H3, имеющую последовательность EWG, CDR H3, имеющую последовательность EWGP, CDR H3, имеющую последовательность EWGPT, CDR H3, имеющую последовательность EWGPTT, CDR H3, имеющую последовательность EWGPTTG, CDR H3, имеющую последовательность EWGPTTGY, CDR H3, имеющую последовательность VGP, CDR H3, имеющую последовательность GYF, CDR H3, имеющую последовательность TGYF, CDR H3, имеющую последовательность TTGYF, CDR H3, имеющую последовательность PTTGYF, CDR H3, имеющую последовательность GPTTGYF, CDR H3, имеющую последовательность VGPTTGYF, или CDR H3, имеющую последовательность EWGPTTGYF. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность QSADSSFTYP. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность QSA. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность QSAD. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность QSADS. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность QSADSS. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность FTYP. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность SFTYP. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность SSFTYP. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность DSSFTYP. В вариантах осуществления CDR L3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В вариантах осуществления CDR H1 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 4. В вариантах осуществления CDR H1 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 15. В вариантах осуществления CDR H1 имеет последовательность GGFISSRNW. В вариантах осуществления CDR Н2 имеет последовательность WIGEVYHTGI. В вариантах осуществления CDR Н2 имеет последовательность EVYHTGI. В вариантах осуществления CDR Н2 имеет последовательность WIGEVYHTGITN. В вариантах осуществления CDR Н2 имеет последовательность WIGEVYHTGIT. В вариантах осуществления CDR Н2 имеет последовательность EVYHTGITN. В вариантах осуществления CDR Н2 имеет последовательность YHTGITN. В вариантах осуществления CDR Н2 имеет последовательность ITN. В вариантах осуществления CDR Н2 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 5. В вариантах осуществления CDR Н2 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 16. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность EW. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность EWG. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность EWGP. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность EWGPT. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность EWGPTT. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность EWGPTTG. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность EWGPTTGY. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность VGP. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность GYF. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность TGYF. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность TTGYF. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность PTTGYF. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность GPTTGYF. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность VGPTTGYF. В вариантах осуществления CDR H3 имеет последовательность EWGPTTGYF. В вариантах осуществления CDR H3 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR2 с последовательностью SEQ ID NO: 12, HFR2 с последовательностью SEQ ID NO: 18, или HFR2, имеющую последовательность WIGE. В вариантах осуществления HFR2 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 12. В вариантах осуществления HFR2 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 18. В вариантах осуществления HFR2 имеет последовательность WIGE. В вариантах осуществления антитело также содержит каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR3 с последовательностью SEQ ID NO: 13, HFR3 с последовательностью SEQ ID NO: 19, HFR3, имеющую последовательность ITNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR, или HFR3, имеющую последовательность ITN. В вариантах осуществления HFR3 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 13. В вариантах осуществления HFR3 является такой, как представлено в SEQ ID NO: 19. В вариантах осуществления HFR3 имеет последовательность ITN. В вариантах осуществления HFR3 имеет последовательность ITNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFSLKLS SVTAADTAVYYCAR. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0079] Настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания с фентанилом, которая больше или равна аффинности связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 25% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 20% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 15% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 10% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления антитело имеет аффинность связывания с фентанилом, которая на 0% - 5% меньше, чем аффинность связывания с фентанилом антитела, имеющего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22 и последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 25. В вариантах осуществления аффинность связывания определяют при помощи анализа, описанного в Примере 2. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0080] В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания (KD) с фентанилом по меньшей мере 10^-7 М. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания (KD) с фентанилом по меньшей мере 10^-8 М. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания (KD) с фентанилом по меньшей мере 10^-9 М. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания (KD) с фентанилом по меньшей мере 10^-10 М. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания (KD) с фентанилом по меньшей мере 10^-11 М. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания (KD) с фентанилом от около 10^-7 М до около 10^-11 М. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания (KD) с фентанилом от около 10^-8 М до около 10^-11 М. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, имеющее аффинность связывания (KD) с фентанилом от около 10^-9 М до около 10^-11 М. В вариантах осуществления аффинность связывания определяют при помощи анализа, описанного в Примере 2. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂ фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0081] В вариантах осуществления антитело, описанное в настоящей заявке, содержит вариабельную область легкой цепи. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 80% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 95% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 20 и где имеет один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 20 и где имеет 1-20 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 20 и где имеет 1-15 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 20 и где имеет 1-10 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 20 и где имеет 1-5 консервативно модифицированных вариантов. Как описано в настоящей заявке, консервативно модифицированный вариант содержит консервативную замену, делецию аминокислоты, добавление аминокислоты или комбинацию двух или более из них. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой консервативную замену. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой делецию аминокислоты. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой добавление аминокислоты. В вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи содержит SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления константная область легкой цепи является такой, как представлено в SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂ фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0082] В вариантах осуществления антитело, описанное в настоящей заявке, содержит вариабельную область тяжелой цепи. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 80% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 95% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 23 и где имеет один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 23 и где имеет 1-20 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 23 и где имеет 1-15 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 23 и где имеет 1-10 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 23 и где имеет 1-5 консервативно модифицированных вариантов. Как описано в настоящей заявке, консервативно модифицированный вариант содержит консервативную замену, делецию аминокислоты, добавление аминокислоты или комбинацию двух или более из них. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой консервативную замену. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой делецию аминокислоты. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой добавление аминокислоты. В вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления константную область тяжелой цепи является такой, как представлено в SEQ ID NO: 23. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂- фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0083] В вариантах осуществления антитело, описанное в настоящей заявке, содержит константную область легкой цепи. В вариантах осуществления константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 80% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 95% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 21 и где имеет один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 21 и где имеет 1-20 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 21 и где имеет 1-21 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 21 и где имеет 1-10 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 21 и где имеет 1-5 консервативно модифицированных вариантов. Как описано в настоящей заявке, консервативно модифицированный вариант содержит консервативную замену, делецию аминокислоты, добавление аминокислоты или комбинацию двух или более из них. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой консервативную замену. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой делецию аминокислоты. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой добавление аминокислоты. В вариантах осуществления константная область легкой цепи содержит SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления константная область легкой цепи является такой, как представлено в SEQ ID NO: 21. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂ фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0084] В вариантах осуществления антитело, описанное в настоящей заявке, содержит константную область тяжелой цепи. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 80% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 92% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 94% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 95% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 24 и где имеет один или несколько консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 24 и где имеет 1-20 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 24 и где имеет 1-15 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 24 и где имеет 1-10 консервативно модифицированных вариантов. В вариантах осуществления константная область легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 24 и где имеет 1-5 консервативно модифицированных вариантов. Как описано в настоящей заявке, консервативно модифицированный вариант содержит консервативную замену, делецию аминокислоты, добавление аминокислоты или комбинацию двух или более из них. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой консервативную замену. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой делецию аминокислоты. В вариантах осуществления консервативно модифицированный вариант представляет собой добавление аминокислоты. В вариантах осуществления константная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления константную область тяжелой цепи является такой, как представлено в SEQ ID NO: 24. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG. В вариантах осуществления антитело представляет собой антитело IgG1. В вариантах осуществления антитело представляет собой Fab'-фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой F(ab)'₂ - фрагмент. В вариантах осуществления антитело представляет собой scFv. В вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой химерное антитело. В вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В настоящей заявке представлена нуклеиновая кислота, способная кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0085] Комплексы

[0086] В настоящей заявке представлены комплексы, включающие описанное в настоящей заявке антитело (включая его аспекты и варианты осуществления) и опиоид. Как описано в настоящей заявке, антитела по настоящему изобретению связываются с фентанилом, аналогом фентанила, карфентанилом или аналогом карфентанила, тем самым образуя комплекс антитела и опиоида. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает описанное в настоящей заявке антитело (включая его аспекты и варианты осуществления) и синтетический опиоид. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает описанное в настоящей заявке антитело (включая его аспекты и варианты осуществления) и фентанил, аналог фентанила, карфентанил или аналог карфентанила. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает описанное в настоящей заявке антитело (включая его аспекты и варианты осуществления) и фентанил. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает описанное в настоящей заявке антитело (включая его аспекты и варианты осуществления) и карфентанил. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает описанное в настоящей заявке антитело (включая его аспекты и варианты осуществления) и аналог фентанила. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает описанное в настоящей заявке антитело (включая его аспекты и варианты осуществления) и аналог карфентанила. В аспектах аналог фентанила представляет собой ацетилфентанил, альфентанил, бутилфентанил, бутирфентанил, пара-толилфентанил, 3-метилфентанил, а-метилфентанил, ремифентанил, мефентанил, фенаридин, омефентанил или мирфентанил. В аспектах аналог карфентанила представляет собой суфентанил, ремифентанил, альфентанил, лофентанил, брифентанил, трефентанил.

[0087] Нуклеиновые кислоты

[0088] В настоящей заявке представлены выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело, представленное в настоящей заявке, включая его варианты осуществления и аспекты. Например, нуклеиновая кислота может кодировать по меньшей мере одну CDR, специфические остатки, участвующие в связывании эпитопа, или связывающиеся каркасные остатки.

[0089] В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 75% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 80% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 85% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 92% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 94% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 95% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 96% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 98% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота содержит SEQ ID NO: 26. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота является такой, как представлено в SEQ ID NO: 26. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0090] В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 75% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 80% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 85% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 92% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 94% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 95% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 96% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 98% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота содержит SEQ ID NO: 27. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота является такой, как представлено в SEQ ID NO: 27. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0091] В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 75% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 28. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 80% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 28 В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 85% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 28. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 90% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 28. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 92% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 28. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 94% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 28. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 95% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 28. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 96% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 28. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 98% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 28. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота содержит SEQ ID NO: 28. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота является такой, как представлено в SEQ ID NO: 28. В настоящей заявке представлен вектор, включающий нуклеиновую кислоту, способную кодировать антитело, описанное в настоящей заявке, включая все его варианты осуществления.

[0092] Способы лечения

[0093] В аспектах настоящее изобретение обеспечивает способы лечения передозировки опиоидами у пациента путем введения пациенту эффективного количества антитела, описанного в настоящей заявке. В аспектах настоящее изобретение обеспечивает способы лечения передозировки опиоидами у пациента путем введения пациенту эффективного количества фармацевтической композиции, включающей описанное в настоящей заявке антитело и фармацевтически приемлемый эксципиент. Альтернативно, способы лечения передозировки опиоидами могут называться способами обеспечения реверсии передозировки опиоидами, в которых описанные в настоящей заявке антитела вводят пациенту, который испытывает передозировку опиоидами. В аспектах опиоид представляет собой фентанил, аналог фентанила, карфентанил, аналог карфентанила или комбинацию двух или более из них. В аспектах опиоид представляет собой фентанил или аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой фентанил. В аспектах опиоид представляет собой аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой карфентанил или аналог карфентанила. В аспектах опиоид представляет собой аналог карфентанила.

[0094] В аспектах настоящее изобретение обеспечивает способы профилактики передозировки опиоидами у пациента путем введения пациенту эффективного количества антитела, описанного в настоящей заявке. В аспектах настоящее изобретение обеспечивает способы профилактики передозировки опиоидами у пациента путем введения пациенту эффективного количества фармацевтической композиции, включающей описанное в настоящей заявке антитело и фармацевтически приемлемый эксципиент. В аспектах опиоид представляет собой фентанил, аналог фентанила, карфентанил, аналог карфентанила, или комбинацию двух или более из них. В аспектах опиоид представляет собой фентанил или аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой фентанил. В аспектах опиоид представляет собой аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой карфентанил или аналог карфентанила. В аспектах опиоид представляет собой аналог карфентанила.

[0095] В аспектах настоящее изобретение обеспечивает способы лечения расстройства, связанного с употреблением опиоидов, у пациента путем введения пациенту эффективного количества антитела, описанного в настоящей заявке. В аспектах настоящее изобретение обеспечивает способы лечения расстройства, связанного с употреблением опиоидов, у пациента путем введения пациенту эффективного количества фармацевтической композиции, включающей описанное в настоящей заявке антитело и фармацевтически приемлемый эксципиент. В аспектах опиоид представляет собой фентанил, аналог фентанила, карфентанил, аналог карфентанила, или комбинацию двух или более из них. В аспектах опиоид представляет собой фентанил или аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой фентанил. В аспектах опиоид представляет собой аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой карфентанил или аналог карфентанила. В аспектах опиоид представляет собой аналог карфентанила.

[0096] В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы лечения опиоид-индуцированной дыхательной недостаточности путем введения пациенту эффективного количества антитела, описанного в настоящей заявке. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы лечения опиоид-индуцированной дыхательной недостаточности путем введения пациенту эффективного количества фармацевтической композиции, включающей описанное в настоящей заявке антитело и фармацевтически приемлемый эксципиент. Альтернативно, способы могут называться способами облегчения дыхательной недостаточности, вызванной опиоидами. В аспектах опиоид представляет собой фентанил, аналог фентанила, карфентанил, аналог карфентанила или комбинацию двух или более из них. В аспектах опиоид представляет собой фентанил или аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой фентанил. В аспектах опиоид представляет собой аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой карфентанил или аналог карфентанила. В аспектах опиоид представляет собой аналог карфентанила.

[0097] В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы профилактики опиоид-индуцированной дыхательной недостаточности путем введения пациенту эффективного количества антитела, описанного в настоящей заявке. В вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы профилактики опиоид-индуцированной дыхательной недостаточности путем введения пациенту эффективного количества фармацевтической композиции, включающей описанное в настоящей заявке антитело и фармацевтически приемлемый эксципиент. В аспектах опиоид представляет собой фентанил, аналог фентанила, карфентанил, аналог карфентанила или комбинацию двух или более из них. В аспектах опиоид представляет собой фентанил или аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой фентанил. В аспектах опиоид представляет собой аналог фентанила. В аспектах опиоид представляет собой карфентанил или аналог карфентанила. В аспектах опиоид представляет собой аналог карфентанила.

[0098] В контексте настоящей заявки термин "введение" означает пероральное введение, введение в виде суппозитория, местный контакт, внутривенное, парентеральное, интраперитонеальное, внутримышечное, внутриочаговое, подоболочечное, интраназальное или подкожное введение субъекту. Введение осуществляют любым путем, включая парентеральный и трансмукозальный (например, буккальный, подъязычный, небный, десневой, назальный, вагинальный, ректальный или чрескожный). Парентеральное введение содержит, например, внутривенное, внутримышечное, внутриартериальное, внутрикожное, подкожное, интраперитонеальное, интравентрикулярное и интракраниальное введение. Другие способы доставки содержат, но не ограничиваются этим, использование липосомальных композиций, внутривенное вливание, чрескожные пластыри и т.д. В вариантах осуществления введение не содержит введение какого-либо активного агента, кроме указанного активного агента.

[0099] Термины "лечащий" или "лечение" относится к любым показателям успеха терапии или облегчения заболевания, патологии или состояния, включая любые объективные или субъективные параметры, такие как ослабление; ремиссия; снижение симптомов или облегчение переносимости пациентом травмы, патологии или состояния; замедление темпов дегенерации или упадка; обеспечение действия, делающего конечную стадию дегенерации менее изнурительной; улучшение физического или психического самочувствия пациента. Лечение или улучшение симптомов может быть основано на объективных или субъективных параметрах; включая результаты медицинского осмотра, нейропсихиатрического обследования и/или психиатрической оценки. Термин "лечение" и его грамматические формы могут включать профилактику патологии, состояния или заболевания. В вариантах осуществления лечение является профилактическим. В вариантах осуществления лечение не содержит профилактику.

[00100] "Лечащий" или "лечение" в контексте настоящей заявки (и как хорошо известно в данной области) также в широком смысле содержит любой подход для получения полезных или желаемых результатов в состоянии субъекта, включая клинические результаты. Благоприятные или желаемые клинические результаты могут включать, но не ограничиваются этим, облегчение или улучшение одного или нескольких симптомов или состояний, уменьшение распространенности заболевания, стабилизацию (т.е. без ухудшения) состояния заболевания, предотвращение передачи или распространения заболевания, задержку или замедление прогрессирования заболевания, улучшение или временное облегчение болезненного состояния, уменьшение рецидивов заболевания и ремиссию, частичную или полную, выявляемую или неопределяемую. Другими словами, "лечение" в контексте настоящей заявки содержит любое излечение, облегчение или профилактику заболевания. Лечение может предотвратить возникновение болезни; препятствовать распространению заболевания; облегчить симптомы болезни, полностью или частично устранить основную причину болезни, сократить продолжительность болезни или обеспечить комбинацию вышеуказанных эффектов.

[00101] "Лечащий" и "лечение" в контексте настоящей заявки содержат профилактическое лечение. Способы лечения содержат введение субъекту терапевтически эффективного количества активного агента. Стадия введения может состоять из одного введения или может включать серию введений. Продолжительность периода лечения зависит от множества факторов, таких как тяжесть состояния, возраст пациента, концентрация активного агента, активность композиций, используемых при лечении, или их комбинация. Также следует понимать, что эффективная доза агента, используемого для лечения или профилактики, может увеличиваться или уменьшаться в ходе конкретного режима лечения или профилактики. Возможны изменения дозировки, которые становятся очевидными на основании стандартных диагностических анализов, известных в данной области. В некоторых случаях может потребоваться длительное введение. Например, композиции вводят субъекту в количестве и в течение времени, достаточных для лечения пациента. В вариантах осуществления лечение не является профилактическим лечением.

[00102] Термин "профилактика" относится к уменьшению возникновения симптомов заболевания у пациента. Как указано выше, профилактика может быть полной (отсутствие обнаруживаемых симптомов) или частичной, так что наблюдается меньше симптомов, чем могло бы быть при отсутствии лечения.

[00103] "Пациент" или "субъект, нуждающийся в этом" относится к живому организму, страдающему или склонному к заболеванию или состоянию, которое можно лечить путем введения фармацевтической композиции, представленной в настоящей заявке. Неограничивающие примеры содержат людей, других млекопитающих, крупный рогатый скот, крыс, мышей, собак, обезьян, коз, овец, коров, оленей и других животных, не относящихся к млекопитающим. В некоторых вариантах осуществления пациент представляет собой человека.

[00104] Со ссылкой на Диагностическое и статистическое руководство по психическим расстройствам, 5-ое издание, Американской ассоциации психиатров, 2013 (также указанное в настоящей заявке как DSM5), раскрытие которого полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки, "расстройство, связанное с употреблением опиоидов" характеризуется признаками и симптомами, отражающими компульсивное, продолжительное самостоятельное употребление опиоидных веществ, которые не используются в законных медицинских целях, или, если присутствует другое заболевание, требующее лечения опиоидами, они используются в дозах, значительно превышающих количество, необходимое для данного заболевания. В аспектах, расстройство, связанное с употреблением опиоидов, представляет собой умеренное расстройство, связанное с употреблением опиоидов. "Умеренное расстройство, связанное с употреблением опиоидов" определено со ссылкой на контрольный список расстройств, связанных с употреблением опиоидов DSM5 (ICD-9-CM код 304.00 или ICD-10-CM код F11.20), как наличие 4 или 5 симптомов, указанных в контрольном списке расстройств, связанных с употреблением опиоидов DSM5. В аспектах, расстройство, связанное с употреблением опиоидов, представляет собой тяжелое расстройство, связанное с употреблением опиоидов. "Тяжелое расстройство, связанное с употреблением опиоидов" определено со ссылкой на контрольный список расстройств, связанных с употреблением опиоидов DSM5 (ICD-9-CM код 304.00 или ICD-10-CM код F11.20), как наличие 6 или более симптомов, указанных в контрольном списке расстройств, связанных с употреблением опиоидов DSM5. В аспектах, расстройство, связанное с употреблением опиоидов, представляет собой связанное с употреблением опиоидов расстройство от умеренной до тяжелой степени. Расстройство, связанное с употреблением опиоидов, от умеренного до тяжелого относится к наличию 4 или более симптомов, указанных в контрольном списке расстройств, связанных с употреблением опиоидов DSM5. В аспектах, расстройство, связанное с употреблением опиоидов представляет собой легкое расстройство, связанное с употреблением опиоидов. "Легкое расстройство, связанное с употреблением опиоидов" определено со ссылкой на контрольный список расстройств, связанных с употреблением опиоидов DSM5 (ICD-9-CM код 305.50 или ICD-10-CM код F11.10), как наличие 2 или 3 симптомов, указанных в контрольном списке расстройств, связанных с употреблением опиоидов DSM5. В аспектах, расстройство, связанное с употреблением опиоидов представляет собой расстройство, связанное с употреблением опиоидов, от легкой до умеренной степени тяжести. Расстройство, связанное с употреблением опиоидов, от легкой до умеренной степени относится к наличию 2-5 симптомов, указанных в контрольном списке расстройств, связанных с употреблением опиоидов DSM5. В аспектах, "лечение расстройства, связанного с употреблением опиоидов" содержит одно или несколько из следующих: (i) уменьшение симптомов отмены опиоидов, (ii) устранение симптомов отмены опиоидов, (iii) снижения влечения к опиоидам, (iv) устранение влечения к опиоидам, (v) сокращение незаконного употребления опиоидов, (vi) устранение незаконного употребления опиоидов и (vii) индукцию воздержания от опиоидов. Термин "расстройство, связанное с употреблением опиоидов" можно использовать взаимозаменяемо с терминами "опиоидная наркомания" или "опиоидная зависимость".

[00105] Композиции

[00106] В настоящей заявке представлены композиции, включающие антитела, описанные в настоящей заявке (включая их варианты осуществления и аспекты), и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[00107] "Фармацевтически приемлемый эксципиент" и "фармацевтически приемлемый носитель" относятся к веществу, которое способствует введению активного агента и его абсорбции субъектом и может быть включено в композиции по настоящему изобретению, не оказывая значительного неблагоприятного токсикологического воздействия на пациента. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых эксципиентов содержат воду, NaCl, нормальные солевые растворы, раствор лактата Рингера, нормальный раствор сахарозы, нормальный раствор глюкозы, связующие вещества, наполнители, разрыхлители, смазывающие вещества, покрытия, подсластители, ароматизаторы, растворы солей (такие как раствор Рингера), спирты, масла, желатины, углеводы, такие как лактоза, амилоза или крахмал, сложные эфиры жирных кислот, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидин и красители и т.п. Такие композиции можно стерилизовать и, при желании, смешивать с вспомогательными агентами, такими как смазывающие вещества, консерванты, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, соли для воздействия на осмотическое давление, буферы, красители и/или ароматические вещества и т.п., которые не взаимодействуют неблагоприятным образом с антителами по настоящему изобретению. Специалисту в данной области будет понятно, что можно использовать и другие фармацевтические эксципиенты.

[00108] Растворы антител можно получить в воде, соответствующим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии также можно получить в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях, а также в маслах. При обычных условиях хранения и использования эти композиции могут содержать консервант для предотвращения роста микроорганизмов.

[00109] Для парентерального введения в водном растворе, например, раствор следует соответствующим образом забуферить, а жидкий разбавитель сначала сделать изотоническим с использованием достаточного количества физиологического раствора или глюкозы. Водные растворы, в частности стерильные водные среды, особенно подходят для внутривенного, внутримышечного, подкожного и интраперитонеального введения. Например, одну дозу можно растворить в 1 мл изотонического раствора NaCl и либо добавить к 1000 мл жидкости для гиподермоклиза, либо ввести в предполагаемое место инфузии.

[00110] Стерильные растворы для инъекций можно получить путем включения антител в необходимом количестве в соответствующий растворитель с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии получают путем включения антител в стерильный носитель, содержащий основную дисперсионную среду. Для получения стерильных порошков для восстановления стерильных растворов для инъекций можно использовать методы вакуумной сушки и сублимационной сушки, которые позволяют получить порошок активного ингредиента плюс любые дополнительные желаемые ингредиенты. Также рассматривают композицию более концентрированных или высококонцентрированных растворов для прямого введения. Растворители, такие как диметилсульфоксид, можно использовать для очень быстрого проникновения для доставки высоких концентраций активных агентов на небольшую площадь.

[00111] Фармацевтические композиции можно доставлять в виде интраназальных или ингаляционных растворов или спреев, аэрозолей или ингалянтов. Назальные растворы могут представлять собой водные растворы, предназначенные для введения в носовой ход в виде капель или спреев. Назальные растворы можно получить таким образом, чтобы они были во многих отношениях подобны назальной секреции. Таким образом, водные назальные растворы обычно являются изотоническими и слегка забуференными для поддержания рН от 5,5 до 6,5. Кроме того, при необходимости в композицию могут быть включены антимикробные консерванты, подобные тем, которые используют в офтальмологических композициях, и соответствующие стабилизаторы лекарственных средств. Известны различные коммерческие назальные композиции.

[00112] Пероральные композиции могут включать эксципиенты, такие как, например, фармацевтические сорта маннита, лактозы, крахмала, стеарата магния, сахарина натрия, целлюлозы, карбоната магния и т.п.Эти композиции имеют форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, составов с замедленным высвобождением или порошков. В аспектах пероральные фармацевтические композиции будут содержать инертный разбавитель или пищевой носитель, или они могут быть заключены в желатиновые капсулы с твердой или мягкой оболочкой, или они могут быть спрессованы в таблетки, или они могут быть введены непосредственно в пищу. Для перорального терапевтического введения антитела могут быть объединены с эксципиентами и могут использоваться в форме таблеток для приема внутрь, буккальных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.п. Процентное содержание в композициях может, конечно, варьироваться и обычно может составлять от около 1 до около 75% масс, единицы. Количество антител в таких композициях является таким, чтобы можно было получить подходящую дозировку.

[00113] Композиции антител могут быть представлены в однодозовых или многодозовых герметичных контейнерах, таких как ампулы и флаконы. Таким образом, композиция может быть в стандартной лекарственной форме. В такой форме композиция подразделяется на стандартные дозы, содержащие соответствующие количества антител. Таким образом, композиции можно вводить в различных дозированных формах в зависимости от способа введения.

[00114] Дозировки

[00115] Фармацевтические композиции содержат композиции, в которых активный ингредиент (т.е. антитело) содержится в терапевтически эффективном количестве, т.е. в количестве, эффективном для достижения его предполагаемой цели. Фактическое количество, эффективное для конкретного применения, будет зависеть, среди прочего, от состояния, подлежащего лечению, по оценке практикующего врача.

[00116] "Эффективное количество" представляет собой количество, достаточное для достижения антителом определенной цели, по сравнению с отсутствием соединения (например, для достижения эффекта, для которого его вводят, лечения заболевания или уменьшения одного или нескольких симптомов заболевания или состояния). Примером "эффективного количества" является количество, достаточное для лечения, предотвращения или уменьшения симптома или симптомов заболевания, которое также можно назвать "терапевтически эффективным количеством". "Уменьшение" симптома или симптомов (и грамматические эквиваленты этой фразы) означает уменьшение тяжести или частоты симптома (симптомов) или устранение симптома (симптомов). "Профилактически эффективное количество" антитела представляет собой количество этого антитела, которое при введении субъекту будет оказывать предполагаемый профилактический эффект, например, предотвращать или замедлять возникновение (или рецидив) заболевания, патологии или состояния или уменьшать вероятность возникновения (или рецидива) заболевания, патологии или состояния или их симптомов. Полный профилактический эффект не обязательно достигается при введении одной дозы и может проявляться только после введения серии доз. Таким образом, профилактически эффективное количество можно вводить за один или несколько приемов. Точные количества будут зависеть от цели лечения и могут быть установлены специалистом в данной области с использованием известных методик (см., например, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); и Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins).

[00117] Для любого описанного в настоящей заявке антитела терапевтически эффективное количество может быть первоначально определено в анализах клеточных культур. Целевыми концентрациями будут такие концентрации антитела, которые могут обеспечить успешное осуществление способов, описанных в настоящей заявке, как определяют с использованием способов, описанных в настоящей заявке или известных в данной области техники. Как хорошо известно в данной области техники, терапевтически эффективные количества для применения у людей можно также определить на животных моделях. Например, доза для человека может быть составлена таким образом, чтобы достичь концентрации, которая, как было установлено, эффективна для животных. Дозировка для человека может быть скорректирована путем мониторинга эффективности и корректировки дозы в сторону увеличения или уменьшения, как описано выше. Регулировка дозы для достижения максимальной эффективности у людей на основе способов, описанных выше, и других способов находится в пределах возможностей специалиста в данной области.

[00118] Дозировки и частота (однократная или многократные дозы) антител могут варьироваться в зависимости от потребностей пациента. Доза, вводимая пациенту, должна быть достаточной, чтобы со временем вызвать благоприятный терапевтический ответ у пациента. Размер дозы также будет определяться наличием, характером и степенью любых неблагоприятных побочных эффектов. Определение надлежащей дозировки для конкретной ситуации находится в пределах компетенции специалистов в данной области. Как правило, лечение начинают с меньших доз, которые меньше оптимальной дозы антитела. После этого дозу увеличивают небольшими приращениями до тех пор, пока не будет достигнут оптимальный эффект в данных обстоятельствах. Величина доз и интервалы могут быть скорректированы индивидуально, чтобы обеспечить уровни антител, эффективные для конкретного клинического показания, подлежащего лечению. Это обеспечит терапевтический режим, соответствующий тяжести болезненного состояния индивидуума. В вариантах осуществления антитело вводят в количестве от около 0,001 мкг до около 10000 мкг.

[00119] С использованием указаний, представленных в настоящей заявке, можно спланировать эффективную схему профилактического или терапевтического лечения, которая не вызывает существенной токсичности и где эффективна для лечения клинических симптомов, проявляемых у конкретного пациента. Это планирование должно включать тщательный выбор моноклональных антител с учетом таких факторов, как активность соединения, относительная биодоступность, масса тела пациента, наличие и тяжесть неблагоприятных побочных эффектов.

[00120] Варианты осуществления 1-31:

[00121] Вариант осуществления 1. Антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 1, CDR L2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит: CDR H1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 15, CDR Н2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 16, и CDR H3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 6.

[00122] Вариант осуществления 2. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 1, где: (i) вариабельная область легкой цепи содержит CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1, CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, CDR Н2 с последовательностью SEQ ID NO: 16, и CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6.

[00123] Вариант осуществления 3. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 1 или 2, также содержащее каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 7, LFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 8, LFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 9, и LFR4, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 10.

[00124] Вариант осуществления 4. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 3, где каркасная область легкой цепи содержит LFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 7, LFR2, представленную в SEQ ID NO: 8, LFR3, представленную в SEQ ID NO: 9, и LFR4, представленную в SEQ ID NO: 10.

[00125] Вариант осуществления 5. Антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-4, также содержащее каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 17; HFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 18, HFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 19, и HFR4, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 14.

[00126] Вариант осуществления б. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 5, где каркасная область тяжелой цепи содержит HFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 17; HFR2 с последовательностью SEQ ID NO: 18, HFR3 с последовательностью SEQ ID NO: 19, и HFR4 с последовательностью SEQ ID NO: 14.

[00127] Вариант осуществления 7. Антитело, содержащее: (i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 1, CDR L2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 4, CDR Н2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 5, и CDR H3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 6.

[00128] Вариант осуществления 8. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 7, в котором: (i) вариабельная область легкой цепи, которая содержит CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO: 1, CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO: 2, и CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO: 3; и (ii) вариабельная область тяжелой цепи, которая содержит CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO: 4, CDR Н2 с последовательностью SEQ ID NO: 5, и CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO: 6.

[00129] Вариант осуществления 9. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 7 или 8, также содержащее каркасную область легкой цепи, которая содержит LFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 7, LFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 8, LFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 9, и LFR4, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 10.

[00130] Вариант осуществления 10. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 9, где каркасная область легкой цепи содержит LFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 7, LFR2, представленную в SEQ ID NO: 8, LFR3, представленную в SEQ ID NO: 9, и LFR4, представленную в SEQ ID NO: 10.

[00131] Вариант осуществления 11. Антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 7-10, также содержащее каркасную область тяжелой цепи, которая содержит HFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 11; HFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 12, HFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 13, и HFR4, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 14.

[00132] Вариант осуществления 12. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 11, где каркасная область тяжелой цепи содержит HFR1 с последовательностью SEQ ID NO: 11; HFR2 с последовательностью SEQ ID NO: 12, HFR3 с последовательностью SEQ ID NO: 13, и HFR4 с последовательностью SEQ ID NO: 14.

[00133] Вариант осуществления 13. Антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 20, и вариабельную область тяжелой цепи, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 23.

[00134] Вариант осуществления 14. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 13, где вариабельная область легкой цепи содержит SEQ ID NO: 20 и вариабельная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO: 23.

[00135] Вариант осуществления 15. Антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-14, также содержащее константную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность по меньшей мере с 85% идентичностью с SEQ ID NO: 21.

[00136] Вариант осуществления 16. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 15, где константная область легкой цепи содержит SEQ ID NO: 21.

[00137] Вариант осуществления 17. Антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-16, также содержащее константную область тяжелой цепи с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 24.

[00138] Вариант осуществления 18. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 17, где константная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO: 24.

[00139] Вариант осуществления 19. Антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-18, где антитело представляет собой антитело IgG.

[00140] Вариант осуществления 20. Антитело в соответствии с вариантом осуществления 19, где антитело IgG представляет собой антитело IgG1.

[00141] Вариант осуществления 21. Антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-20, где антитело представляет собой Fab'-фрагмент или F(ab)'2-фрагмент.

[00142] Вариант осуществления 22. Антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-19, где антитело представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент.

[00143] Вариант осуществления 23. Антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-22, где антитело представляет собой гуманизированное моноклональное антитело.

[00144] Вариант осуществления 24. Фармацевтическая композиция, включающая антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-23 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[00145] Вариант осуществления 25. Способ лечения или профилактики передозировки опиоидами у пациента, где способ включает введение пациенту эффективного количества антитела в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-23 или фармацевтической композиции в соответствии с вариантом осуществления 24.

[00146] Вариант осуществления 26. Способ лечения расстройства, связанного с употреблением опиоидов, у пациента, где способ включает введение пациенту эффективного количества антитела в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-23 или фармацевтической композиции в соответствии с вариантом осуществления 24.

[00147] Вариант осуществления 27. Способ лечения или профилактики опиоид-индуцированной дыхательной недостаточности у пациента, где способ включает введение пациенту эффективного количества антитела в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-23 или фармацевтической композиции в соответствии с вариантом осуществления 24.

[00148] Вариант осуществления 28. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-23.

[00149] Вариант осуществления 29. Выделенная нуклеиновая кислота, имеющая последовательность нуклеиновой кислоты с по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 или SEQ ID NO: 28.

[00150] Вариант осуществления 30. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-23.

[00151] Вариант осуществления 31. Комплекс, включающий: (i) антитело в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-23; и (ii) фентанил, аналог фентанила, карфентанил или аналог карфентанила.

ПРИМЕРЫ

[00152] Описанные в настоящей заявке антиопиоидные mAb обладают высокой аффинностью связывания с фентанилом, карфентанилом и родственными аналогами, поэтому они способны эффективно смягчать вредные эффекты синтетических опиоидов. mAb можно вводить пациентам для немедленного лечения передозировки опиоидами или для защиты их от последующего воздействия опиоидов. В последнем случае пациенты получат защиту не только от острых летальных эффектов высоких доз фентанила, но и от аддиктивных эффектов низких доз фентанила. Таким образом, антиопиоидные mAb можно использовать в качестве антидота от синтетических опиоидов, а также в качестве терапии расстройств, связанных с употреблением опиоидов.

[00153] Высокая степень активности фентанила и других синтетических опиоидов, а также большая продолжительность их действия сделали современные методы лечения передозировок опиоидами, такими как налоксон, менее эффективными. Антиопиоидные mAb чрезвычайно эффективны в борьбе с опиоидной интоксикацией, поскольку они обладают пикомолярным сродством к целевым опиоидам, таким образом, они могут блокировать лекарственное средство в периферической крови, чтобы предотвратить доступ лекарственного средства к местам действия в головном мозге. Кроме того, mAb не связываются с какими-либо эндогенными мишенями в организме, что обеспечивает им очень благоприятный профиль безопасности. Человеческие антитела IgG обычно демонстрируют продолжительность действия в течение одного месяца; таким образом, антиопиоидные mAb могут защищать пациентов от опиоидной интоксикации в течение длительного периода времени, что намного превышает возможности современной фармакологической терапии.

[00154] Пример 1

[00155] Антитела, описанные в настоящей заявке, получали путем иммунизации крыс вакциной на основе конъюгата карфентанила, отбора/секвенирования В-клеток с использованием комбинации карфентанил- и фентанил-биотиновых зондов и реконструирования антител с использованием библиотек фагового дисплея, содержащих последовательности антител человека. Способы описаны, например, в WO 2017/127390, WO 2020/018596 и Smith et al, "Monoclonal Antibodies for Combating Synthetic Opioid Intoxication", J. Am. Chem. Soc, 141 (26): 10489-10503 (2019).

[00156] Пример 2

[00157] Кинетику связывания для выбранных mAb и фентанила и его производных определяли методом SPR с использованием прибора Biacore 8К (GE Healthcare Life Sciences), оснащенного сенсорным чипом СМ5 Series S. Выбранные mAb иммобилизовали в отдельных каналах на поверхности сенсорного чипа с использованием набора для аминного связывания следующим образом. Поверхность проточной кюветы 2 каждого канала активировали в течение 7 минут 1:1 смесью 0,1 М NHS и 0,4 М EDC при скорости потока 10 мкл/мин; где проточная кювета 1 каждого канала не была активирована. Отобранные mAb, ресуспендированные в 10 мМ ацетата натрия (рН 5,5), инжектировали поверх активированного Fc2 в течение 120 секунд со скоростью 10 мкл/мин в каждый канал отдельно. Все поверхности проточной кюветы блокировали путем 7-минутной инжекции 1,0 М раствора этаноламина-HCl (рН 8,5) со скоростью потока 10 мкл/мин. Все анализы осуществляли при скорости потока 30 мкл/мин при 25°С и 37°С с использованием буфера IX PBS-P+(28-9950-84, GE Healthcare Life Sciences) в качестве рабочего буфера. Для определения кинетики связывания использовали заранее определенный одноцикловый кинетический метод (SCK, контрольное программное обеспечение Biacore 8К, версия 1.1.1.7442) с четырьмя концентрациями аналита следующим образом: 1) 4 х цикла запуска (каждый цикл содержит 300 сек инжекции рабочего буфера и 600 сек диссоциации, все при скорости потока 30 мкл/мин, поверхность чипа регенерировали при помощи Gly-HCl (рН 1,5) в течение 30 сек) осуществляли до анализа SCK. 2) Для анализа SCK фентанил и карфентанил или родственные аналоги получали в рабочем буфере с концентрацией 1,25, 5, 20 и 80 нМ. Разведения соединения инжектировали последовательно в течение 120 сек с последующей диссоциацией в течение 10800 сек в рабочем буфере. 3) Поверхность сенсорного чипа регенерировали путем 30-сек инжекции раствора Gly-HCl (рН 1,5) перед следующим циклом анализа SCK. Инжекцию рабочего буфера в качестве холостой пробы также осуществляли перед каждой прогонкой соединения, используя точно такие же условия для анализа SCK.

[00158] Все данные собирали в файл результатов с использованием контрольного программного обеспечения Biacore. Затем наборы данных, хранящиеся в файле результатов, анализировали при помощи оценочного программного обеспечения Biacore 8К (версия 1.1.1.7442) с использованием заранее определенного фрагмент/LWM одноциклового кинетического метода. Каждый набор данных SCK анализа дважды соотносили с сигналом от эталонного Fcl и инжекции рабочего буфера в качестве холостой пробы и осуществляли подгонку с использованием модели связывания 1:1. В Таблице 1 показаны структуры фентанила, карфентанила и родственных аналогов. В Таблицах 2А-2С показана кинетика прямого связывания иммобилизованных mAb со свободными фентаниловыми соединениями.

[00159]

[00160]

[00161]

[00162]

[00163] Кинетика прямого связывания JBZ-4 с фентанилом и родственными аналогами была всесторонне охарактеризована методом поверхностного плазмонного резонанса (SPR) на основании одноцикловой кинетики, где антитело было иммобилизовано путем амидного связывания с поверхностью сенсорного чипа, и различные разведения соединения (40, 20, 10, 5, 2, 5 нМ) пропускали через сенсор. Скорости ассоциации (k_on) и диссоциации (k_off) пределяли путем подгонки модели связывания 1:1 к данным, чтобы получить константы аффинности (K_d), определенные для каждого соединения (Таблица 2D). Иллюстративная сенсограмма кинетики прямого связывания JBZ-4 с фентанилом показана на Фиг. 8А, а с карфентанилом показана на Фиг. 8В. Аффинность в отношении аналогов фентанила обычно находилась в пикомолярном диапазоне (пМ).

[00164]

[00165] Селективность связывания также определяли с использованием конкурентного анализа SPR, в котором конъюгат фентанил-BSA иммобилизовали на поверхности сенсора, а антитело JBZ-4, смешанное с различными соединениями, пропускали над поверхностью чипа. Как показано в Таблице 2Е, 16 нМ фентанила или карфентанила полностью ингибировали связывание сенсорного лиганда, в то время как более чем в 1000 раз большие концентрации нефентаниловых молекул приводили к очень слабому связыванию соединения. Селективность связывания обычно превышала 104-кратную для каждой молекулы, хотя точное значение не могло быть определено из-за крайне недостаточного связывания антител с молекулами, отличными от фентанила.

[00166]

[00167] Пример 3

[00168] Эксперименты по оценке антиноцицепции у макак-резусов осуществляли, как описано ранее: Tenney et al, Neuropharmacology. 2019; 158:107730. Обезьянам внутривенно (в/в) вводили фентанил в дозе 0,1-0,18 мг/кг с последующей внутривенной инъекцией JBZ-1 или сравнительного mAb в дозе 8 мг/кг. Эффекты антитела на антиноцицепцию отслеживали в течение первых 100 мин после инъекции фентанила, а также через 2, 7 и 14 дней. Образцы крови, взятые у обезьян, анализировали методом ELISA против фентанил-BSA захваченного антигена с использованием соответствующих антител для получения стандартных кривых. Наблюдали эффекты на антиноцицепцию отдергивания хвоста, и они показаны на Фиг. 1А. Кумулятивную дозу фентанила, значения ED50, определяли у тех же обезьян в трех временных точках после инфузии mAb, как показано на Фиг. 1В. Образцы крови брали у обезьян и анализировали при помощи ELISA для определения концентрации антител в указанные моменты времени, как показано на Фиг. 1С.

[00169] Пример 4

[00170] Самкам мышей Swiss Webster (n=4 на группу) вводили путем в/в инъекцию в хвостовую вену 30 мг/кг mAb за 48 ч до внутривенной инъекции 0,1 мг/кг фентанилцитрата в хвостовую вену. Образцы крови брали в указанные моменты времени после введения фентанила и подготавливали следующим образом: замороженные образцы мышиной крови размораживали на льду и 60 мкл крови пипеткой переносили в новую пробирку вместе с 8 мкл 50 нг/мл фентанил-d5 в МеОН. После встряхивания добавляли 120 мкл 50 мМ раствора К2003 и 420 мкл 7:3 гексана/этилацетата. Образцы встряхивали в течение 15 секунд и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 минут. Верхние слои растворителя пипеткой переносили в новые пробирки и упаривали на системе Genevac в течение 1 часа. Полученные остатки растворяли в 68 мкл МеОН и анализировали на устройстве ЖХ/МС/МС. Стандарты подготавливали таким же образом путем экстракции крови с добавлением фентанила в диапазоне концентраций от 5000 нг/мл до 1,6 нг/мл. Было определено, что предел обнаружения составляет около 1,6 нг/мл. Результаты эксперимента по определению уровней фентанила в крови у мышей в зависимости от времени показаны на Фиг. 2А. Фиг. 2В показывает значения площади под кривой для фентанила, полученные из панели данных Фиг. 2А. Уровни фентанила в крови у мышей, получавших JBZ-1, JBZ-2 и P2B5, через 15 минут и 3 часа, показаны на Фиг. 2С.

[00171] Пример 5

[00172] Мышей SCID (n=5-8 в группе) тестировали на ответ на кумулятивное действие лекарственного средства преимущественно в супраспинальных (горячая пластина) и спинных (отдергивание хвоста) поведенческих испытаниях через 24 часа после внутривенной инъекции JBZ-1 в дозе 25 мг/кг. В тесте с горячей пластинкой мышь наблюдали в акриловом цилиндре (диаметр 14 см * 22 см) с температурой поверхности 55°С.Латентный период для выполнения одной из следующих ноцицептивных реакций: облизывания задней лапы, встряхивания/отдергивания задней лапы или прыжка, был определен с порогом 35-сек для предотвращения повреждения тканей. Тест тепловой иммерсии хвоста осуществляли с использованием измерителя аналгезии отдергивания хвоста ITC Life Science для измерения времени отдергивания хвоста от нагретого светового луча (активная интенсивность 45%) с отсечкой 10 сек для предотвращения повреждения тканей. Поскольку отдергивание хвоста является рефлекторным поведением, тест с горячей пластинкой всегда осуществляли первым. Сразу же после обоих антиноцицептивных анализов интраперитонеально (и/п) вводили фентанил или карфентанил. Испытываемые дозы фентанила составляли 0,2, 0,4, 0,6 и 0,8 мг/кг, а испытываемые дозы карфентанила составляли 0,01, 0,02, 0,04, 0,06 и 0,08 мг/кг для получения полной кривой доза-ответ.Для контроля дополнительная группа мышей (n=4) получала меньшие дозы (0,05, 0,1, 0,15, 0,2 мг/кг фентанила и 0,005, 0,01, 0,015 и 0,02 мг/кг карфентанила) для более точной оценки ED₅₀. Тестирование для всех животных повторяли с пятнадцатиминутными интервалами после каждой инъекции с увеличением кумулятивной дозы до тех пор, пока в обоих анализах не наблюдали полную антиноцицепцию (превышение времени отсечки). Максимально возможный эффект в процентах (%МРЕ) рассчитывали в зависимости от времени по уравнению:

Полученная кривая %МРЕ против log(дозы) была

аппроксимирована с использованием нелинейной регрессии log (агонист) vs. нормализованного ответа в GraphPad PRISM 6. Значения ED50 представлены в виде среднего значения ±SEM, и были определены для каждого испытания антиноцицепции и индивидуальных групп лечения. In vivo mAb-опосредованный антагонизм карфентанила и индуцированная фентанилом антиноцицептивная реакция у мышей. Фиг. 3A-3B показывают, что обработка mAb за 24 часа до введения лекарственного средства значительно сдвигает кривые доза-эффект карфентанила вправо в испытаниях антиноцицепции с горячей пластинкой и отдергиванием хвоста. Фиг. 3C показывает сравнение ED50 фентанила у мышей, получавших JBZ-1, JBZ-2 и антитело Р2В5. На Фиг. 3D представлено сравнение процента мышей ниже порога максимально возможного эффекта в анализе антиноцицепции с горячей пластинкой при обработке JBZ-1, JBZ-2 и JBZ-3.

[00173] Пример 6

[00174] Антитела JBZ-2, JBZ-3, JBZ-4 и Р2В5 оценивали в анализе антиноцицептивного эффекта фентанила. mAbs (45 мг/кг) вводили и/п 4 самкам Swiss Webster и антиноцицептивное действие индуцировали при помощи и/п введения 0,4 мг/кг фентанила через 4 часа после введения mAb. Измерения осуществляли в течение 90 минут, и результаты показаны на Фиг. 4А. Антиноцицепцию отслеживали в течение периода времени 15-115 мин после введения фентанила и выражали в виде среднего значения, как показано на Фиг. 4В. Антиноцицептивное действие фентанила повторно тестировали на тех же мышах через 2 дня после введения mAb, и результаты показаны на Фиг. 4С.

[00175] Тем же мышам из исследования антиноцицептивного эффекта вводили и/п фентанил (0,4 мг/кг) и брали образцы крови через 20 минут после инъекции лекарственного средства. Результаты показаны на Фиг. 5А. Образцы подщелачивали, объединяли с дейтерированным внутренним стандартом, экстрагировали органическим растворителем и анализировали методом ЖХ-МС/МС с использованием стандартной кривой для интерполяции неизвестных концентраций. Образцы крови, взятые перед введением лекарственного средства через 2 дня после введения mAb, анализировали методом ELISA. Результаты показаны на Фиг. 5 В.

[00176] Пример 7

[00177] Испытывали помощь при фентанил-индуцированной антиноцицепции путем инфузии JBZ-4 и JBZ-7. После введения и/п дозы фентанила 0,2 мг/кг мышей тестировали в анализах антиноцицептивного эффекта с горячей пластинкой (Фиг. 6А) и на отдергивание хвоста (Фиг. 6 В) через 15 минут и сразу же вводили в/в антитело в дозе 30 мг/кг, после чего тестирование возобновляли. JBZ-4 показал лучшие результаты по сравнению с JBZ-7.

[00178] Пример 8

[00179] В то время как анализ антиноцицепции является надежным индикатором опиоидной анальгезии, модели дыхания являются более трансляционно релевантными для определения фатальны эффектов опиоидов. Антитела по настоящему изобретению, например, JBZ-4, блокируют и купируют карфентанил-индуцированную дыхательную недостаточность. Мышам, предварительно обработанным 30 мг/кг JBZ-4, через 48 часов вводили в/в 30 мкг/кг карфентанила и их дыхание наблюдали с помощью плетизмографии всего тела и выражали в виде минутного объема (MV), нормализованного к исходному уровню. Результаты показаны на Фиг. 7А.

[00180] Эффективность JBZ-4 оценивали на мышиной модели, у которой дыхательную недостаточность индуцировали карфентанилом с последующей спасательной инфузией антитела. Экспериментальный протокол состоял из первых находящихся в состоянии равновесия мышей (n=12 в группе) в аппарате плетизмографии всего тела ЕМКА в течение 20 минут до тех пор, пока не наблюдали стабильное дыхание, которое служило исходным показателем. В момент времени=0 мин вводили карфентанил (10 мкг/кг, в/в) и наблюдали резкое снижение дыхания примерно до 10% исходного минутного объема (MV). В момент времени=15 мин вводили JBZ-4 антитело (60 мг/кг, в/в) или налоксон (1 мг/кг, в/в), после чего наблюдали немедленное и устойчивое увеличение MV, достигающее статистической значимости по сравнению с контрольной группой, получавшей физиологический раствор, начиная с 20 мин. В то время как налоксон продемонстрировал более быстрое начало действия из-за его быстрого распределения в виде небольшой молекулы, антитело продемонстрировало более устойчивую степень обратного действия в более поздние моменты времени (Фиг. 7 В).

[00181] Пример 9

[00182] Рентгеновская кристаллическая структура с разрешением около 1,8 А была исследована для антигенсвязывающего фрагмента JBZ-4 (Fab), образующего комплекс с фентанилом. Структура показывает отношение лекарственного средства к Fab 1:1 (или отношение лекарственного средства к полному IgG 2:1) и антигенсвязывающую область на конце Fab, образованном между тяжелой и легкой цепями. Структура также демонстрирует способ связывания фентанила: молекула ориентирована фенетильным хвостом, направленным «вниз» в гидрофобный карман паратопа, пропаноильная группа, по-видимому, направлена в сторону растворителя, а анилидное кольцо, по-видимому, соединяется с неглубоким карманом, примыкающим к более глубокому фенетильному карману.

[00183] Пример 10

[00184] Исследование фармакокинетики (РК). Осуществляли фармакокинетическое исследование однократной дозы моноклонального антитела (JBZ-4) без соблюдения GLP. Группам из девяти взрослых самцов крыс CD вводили однократную внутривенную (в/в) болюсную дозу моноклонального антитела JBZ-4 (10 мл/кг) при 10, 100 и 250 мг/кг. Образцы крови для определения концентрации JBZ-4 в сыворотке получали от 3 крыс/временная точка в 16 временных точках (0,083, 1, 4, 8, 24, 48, 72, 96, 144, 192, 240, 288, 336, 408, 504 и 672 часа после введения дозы). Образцы крови обрабатывали с получением сыворотки и анализировали на наличие JBZ-4 с использованием метода ELISA. Средние для группы профили зависимости концентрации в сыворотке от времени использовали для оценки следующих РК параметров у крыс с использованием некомпартментного анализа (Phoenix WinNonlin, версия 8.1, Certara, Princeton, NJ): общую экспозицию лекарственного средства определяли как площадь под кривой зависимости концентрации в сыворотке от времени, средний период полужизни р-фазы (t_1/2, β), C_max, клиренс (CL) и кажущийся объем распределения терминальной фазы (V_z). Номинальную дозу, вводимую для каждой лечебной группы, использовали для моделирования.

[00185] РК профили JBZ-4 у крыс после однократного в/в введения болюсной дозы при 10, 25 и 250 мг/кг показаны на Фиг. 9. Крысы демонстрировали биэкспоненциальный профиль зависимости концентрации в сыворотке от времени с короткой фазой распределения, за которой следовала длинная фаза элиминации. Период полужизни, Cmax, AUC и объем распределения (vz), увеличивающиеся пропорционально уровню дозы, показаны в Таблице 3. При 10 мг/кг период полужизни составил 102 часа, C_max составила 805 мкг/мл, объем распределения был 0,0196 л/кг и значение клиренса (CL) составляло 0,134 мл/час/кг. При 100 мг/кг период полужизни составил 171 час, C_max составила 4701 мкг/мл, объем распределения составил 0,0485 и значение клиренса составило 0,197 мл/час/кг.При 250 мг/кг период полужизни составил 308 часов, C_max составила 9228 мкг/мл, объем распределения был 0,0766 л/кг и значение клиренса составило 0,173 мл/час/кг. Двухфазное распределение JBZ-4 с длительным периодом полужизни характерно для моноклональных антител IgG.

[00186]

[00187] Пример 11

[00188] Плетизмографическое исследование на обезьянах будет проведено аналогично процедурам, описанным в Kishioka et al, Buprenorphine and methoclocinnamox: agonist and antagonist effects on respiratory function in rhesus monkeys," European Journal of Pharmacology, 391:289-297 (2000), за исключением того, что JBZ-4 будет использован вместо бупренорфина или метоклоциннамокса, а фентанил или аналоги фентанила будут использованы вместо морфина или героина. В исследовании будет оценена способность JBZ-4 противодействовать угнетающему дыхание эффекту фентанила. Вкратце, обезьян предварительно обрабатывают внутривенными или внутримышечными инъекциями от 1 мг/кг до 40 мг/кг JBZ-4. Во время сеансов испытаний обезьяны будут получать внутримышечные кумулятивные дозы от 0,0001 мг/кг до 0,01 мг/кг фентанила, после чего сразу же последует воздействие воздуха в течение 14 минут, а затем воздействие 5% углекислого газа в течение 6 минут. Этот цикл будет повторяться 3-5 раз. В ходе исследования будет получена кривая доза опиоида-ответ, которая будет смещена вправо при лечении JBZ-4. Кривые доза-ответ, полученные с нефентаниловыми опиоидами, такими как оксикодон, не должны зависеть от лечения JBZ-4.

[00189] Заголовки разделов, используемые в настоящей заявке, предназначены только для организационных целей и не должны толковаться как ограничивающие описываемое изобретение. Все документы или части документов, цитируемые в заявке, настоящим прямо включены путем ссылки во всей своей полноте для любых целей.

[00190] Хотя в настоящей заявке показаны и описаны различные варианты осуществления и аспекты, специалистам в данной области техники будет очевидно, что такие варианты осуществления и аспекты представлены только в качестве примера. Теперь для специалистов в данной области техники будут очевидны многочисленные вариации, изменения и замены. Могут быть использованы различные альтернативы вариантам осуществления и аспектам, описанным в настоящей заявке.

[00191] Перечень последовательностей в произвольной форме

[00192] Положения CDR и FR в последовательностях, описанных в настоящей заявке, определены системой нумерации Rabat.

[00193] SEQ ID NO: 1=CDR-L1

SGDTLPKRSGY

[00194] SEQ ID NO: 2=CDR-L2

KDTERPS

[00195] SEQ ID NO: 3=CDR-L3

QSADSSFTYPS

[00196] SEQ ID NO: 4=CDR-H1

SRNWWS

[00197] SEQ ID NO: 5=CDR-H2

EVYHTGITNYNPSLKS

[00198] SEQ ID NO: 6=CDR-H3

EWGPTTGYFDL

[00199] SEQ ID NO: 7=LFR1

SYELTQPPSVSVSPGQTARITC

[00200] SEQ ID NO: 8=LFR2

WYQQKPDQAPLLVIN

[00201] SEQ ID NO: 9=LFR3

GIPERFSGSKSGTTVTLTISGVQAEDEADYYC

[00202] SEQ ID NO: 10=LFR4

FGGGTKLTVL

[00203] SEQ ID NO: 11=HFR1

QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCTVSGGFIS

[00204] SEQ ID NO: 12=HFR2

WVRQPPGKGLEWIG

[00205] SEQ ID NO: 13=HFR3

RVTISVDKSKNQFSLKLS SVTAADTAVYYCAR

[00206] SEQ ID NO: 14=HFR4

WGRGTLVTISS

[00207] SEQ ID NO: 15=CDR-H1

GGFISSRN

[00208] SEQ ID NO: 16=CDR-H2

YHTGI

[00209] SEQ ID NO: 17=HFR1

QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCTVS

[00210] SEQ ID NO: 18=HFR2

WWSWVRQPPGKGLEWIGEV

[00211] SEQ ID NO: 19=HFR3

TNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR

[00212] SEQ ID NO: 20=Вариабельная область легкой цепи.

[00213] SEQ ID NO: 21=Константная область легкой цепи

[00214] SEQ ID NO: 22=Аминокислотная последовательность легкой цепи

[00215] SEQ ID NO: 23: Вариабельная область тяжелой цепи.

[00216] SEQ ID NO: 24=Константная область тяжелой цепи

[00217] SEQ ID NO: 25=Аминокислотная последовательность тяжелой цепи

[00218] SEQ ID NO: 26

Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи JBZ-2

[00219] SEQ ID NO: 27

Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи JBZ-2

[00220] SEQ ID NO: 28

Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи JBZ-2

[00221] SEQ ID NO: 29 Специально созданная CDR-L3

xQSAxFTYPx

[00222] SEQ ID NO: 30 Специально созданная CDR-L3

xQSADSSFTYPSx

[00223] SEQ ID NO: 31 Специально созданная CDR-H1

GGFISSRNW

[00224] SEQ ID NO: 32 Специально созданная CDR-H2

xWxExIxNx

[00225] SEQ ID NO: 33 Специально созданная CDR-H2

xWxExITNx

[00226] SEQ ID NO: 34 Специально созданная CDR-H3

xExVxGYFx

[00227] SEQ ID NO: 35 Специально созданная CDR-H3

xExVGPxTGYFx

[00228] SEQ ID NO: 36=LFR3 JBZ-2

[00229] SEQ ID NO: 37=Вариабельная область легкой цепи. JBZ-2

[00230] SEQ ID NO: 38=Аминокислотная последовательность легкой цепи. JBZ-2

[00231] SEQ ID NO: 39=LFR3 JBZ-6

[00232] SEQ ID NO: 40=Вариабельная область легкой цепи. JBZ-6

[00233] SEQ ID NO: 41=Аминокислотная последовательность легкой цепи JBZ-6

[00234] SEQ ID NO: 42=LFR3 JBZ-5

[00235] SEQ ID NO: 43=Вариабельная область легкой цепи. JBZ-5

[00236] SEQ ID NO: 44=Аминокислотная последовательность легкой цепи JBZ-5

[00237] SEQ ID NO: 45 Аминокислотная последовательность легкой цепи JBZ-1:

[00238] SEQ ID NO: 46 Аминокислотная последовательность тяжелой цепи JBZ-1:

[00239] SEQ ID NO: 47 Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи JBZ-1:

[00240] SEQ ID NO: 48 Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи JBZ-1:

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ДЗЕ СКРИППС РИСЕРЧ ИНСТИТЬЮТ

ДЖАНДА, Ким, Д.

БРЕМЕР, Пол, Т.

ЧЖОУ, Бинь

<120> АНТИТЕЛА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОПИОИДНОЙ ЗАВИСИМОСТИ

<130> 056957-507001WO

<150> 63/111,699

<151> 2020-11-10

<160> 48

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 1

Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly Tyr

1 5 10

<210> 2

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 2

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser

1 5

<210> 3

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 3

Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr Pro Ser

1 5 10

<210> 4

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 4

Ser Arg Asn Trp Trp Ser

1 5

<210> 5

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 5

Glu Val Tyr His Thr Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 6

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 6

Glu Val Val Gly Pro Thr Thr Gly Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 7

<211> 22

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 7

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys

20

<210> 8

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 8

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

1 5 10 15

<210> 9

<211> 32

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 9

Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Thr Val Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 10

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 10

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

1 5 10

<210> 11

<211> 30

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 11

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Phe Ile Ser

20 25 30

<210> 12

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 12

Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 13

<211> 32

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 13

Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys

1 5 10 15

Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 14

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 14

Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Ile Ser Ser

1 5 10

<210> 15

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 15

Gly Gly Phe Ile Ser Ser Arg Asn

1 5

<210> 16

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 16

Tyr His Thr Gly Ile

1 5

<210> 17

<211> 25

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 17

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser

20 25

<210> 18

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 18

Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

1 5 10 15

Gly Glu Val

<210> 19

<211> 41

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 19

Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp

1 5 10 15

Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala

20 25 30

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

35 40

<210> 20

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 20

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Lys Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr

85 90 95

Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 21

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 21

Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser

1 5 10 15

Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp

20 25 30

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro

35 40 45

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn

50 55 60

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys

65 70 75 80

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val

85 90 95

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

100 105

<210> 22

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 22

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Lys Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr

85 90 95

Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln

115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly

130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly

145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala

165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser

180 185 190

Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val

195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210

<210> 23

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 23

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Phe Ile Ser Ser Arg

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Val Tyr His Thr Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Val Val Gly Pro Thr Thr Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Ile Ser Ser

115 120

<210> 24

<211> 330

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 24

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 25

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 25

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Phe Ile Ser Ser Arg

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Val Tyr His Thr Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Val Val Gly Pro Thr Thr Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Ile Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 26

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 26

tcctatgagc tgacccagcc accctccgtg tctgtgagcc caggccagac cgccaggatc 60

acatgttccg gcgatacact gcccaagcgg agcggctact ggtatcagca gaagccagac 120

caggcccccc tgctggtcat caacaaggat accgagaggc cttctggcat cccagagcgg 180

ttcagcggca gcaagtctgg caccacagtg accctgacaa tcagcggagt gcaggcagag 240

gacgaggcag attactattg ccagtccgcc gacagctcct tcacctaccc aagctttggc 300

ggcggcacca agctgacagt gctgggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 360

ccgccctcga gtgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 420

ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 480

gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540

agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600

gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642

<210> 27

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 27

tcctatgagc tgacccagcc accctccgtg tctgtgagcc caggccagac cgccaggatc 60

acatgttccg gcgatacact gcccaagcgg agcggctact ggtatcagca gaagccagac 120

caggcccccc tgctggtcat caacaaggat accgagaggc cttctggcat cccagagcgg 180

ttcagcggca gcaaatctgg caccacagtg accctgacaa tcagcggagt gcaggcagag 240

gacgaggcag attactattg ccagtccgcc gacagctcct tcacctaccc aagctttggc 300

ggcggcacca agctgacagt gctgggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 360

ccgccctcga gtgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 420

ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 480

gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540

agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600

gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642

<210> 28

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 28

caggtgcagc tgcaggagag cggacctgga ctggtgaagc catccggcac cctgtctctg 60

acctgcacag tgtctggcgg cttcatcagc tcccggaact ggtggagctg ggtgagacag 120

ccacctggca agggcctgga gtggatcggc gaggtgtacc acaccggcat cacaaactat 180

aacccctccc tgaagtctcg ggtgaccatc agcgtggaca agtccaagaa tcagttcagc 240

ctgaagctgt ctagcgtgac cgccgccgat acagccgtgt actattgcgc cagggaggtg 300

gtgggaccta ccacaggcta ctttgacctg tggggaaggg gcaccctggt gacaatctcc 360

tctgcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420

gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc tgtgacggtc 480

tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540

tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggttgag 660

cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720

ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780

cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840

tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900

aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960

aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020

tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080

gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260

tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320

acgcagaaga gcctctccct gtccccgggt aaa 1353

<210> 29

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> VARIANT

<222> (1)..(10)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<400> 29

Xaa Gln Ser Ala Xaa Phe Thr Tyr Pro Xaa

1 5 10

<210> 30

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> VARIANT

<222> (1)..(13)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<400> 30

Xaa Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr Pro Ser Xaa

1 5 10

<210> 31

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 31

Gly Gly Phe Ile Ser Ser Arg Asn Trp

1 5

<210> 32

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> VARIANT

<222> (1)..(9)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<400> 32

Xaa Trp Xaa Glu Xaa Ile Xaa Asn Xaa

1 5

<210> 33

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> VARIANT

<222> (1)..(9)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<400> 33

Xaa Trp Xaa Glu Xaa Ile Thr Asn Xaa

1 5

<210> 34

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> VARIANT

<222> (1)..(9)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<400> 34

Xaa Glu Xaa Val Xaa Gly Tyr Phe Xaa

1 5

<210> 35

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<220>

<221> VARIANT

<222> (1)..(12)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<400> 35

Xaa Glu Xaa Val Gly Pro Xaa Thr Gly Tyr Phe Xaa

1 5 10

<210> 36

<211> 32

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 36

Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 37

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 37

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr

85 90 95

Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 38

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 38

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr

85 90 95

Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln

115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly

130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly

145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala

165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser

180 185 190

Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val

195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210

<210> 39

<211> 32

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 39

Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Thr Thr Val Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 40

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 40

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr

85 90 95

Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 41

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 41

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr

85 90 95

Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln

115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly

130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly

145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala

165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser

180 185 190

Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val

195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210

<210> 42

<211> 32

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 42

Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Thr Val Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 43

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 43

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Thr Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr

85 90 95

Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 44

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 44

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Thr Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr

85 90 95

Pro Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln

115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly

130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly

145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala

165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser

180 185 190

Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val

195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210

<210> 45

<211> 214

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 45

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Thr Leu Pro Lys Arg Ser Gly

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn

35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Phe Thr Tyr

85 90 95

Pro Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln

115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly

130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly

145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala

165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser

180 185 190

Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val

195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210

<210> 46

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 46

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Phe Ile Ser Ser Arg

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Val Tyr His Thr Gly Ile Thr Asn Tyr Ile Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Val Val Gly Pro Thr Thr Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Ile Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 47

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 47

tcctatgagc tgacccagcc accctccgtg tctgtgagcc caggccagac cgccaggatc 60

acatgttccg gcgatacact gcccaagcgg agcggctact ggtatcagca gaagccagac 120

caggcccccc tgctggtcat caacaaggat accgagaggc cttctggcat cccagagcgg 180

ttcagcggca gctcctctgg caccacagtg accctgacaa tcagcggagt gcaggcagag 240

gacgaggcag attactattg ccagtccgcc gacagctcct tcacctaccc aatgtttggc 300

ggcggcacca agctgacagt gctgggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 360

ccgccctcga gtgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 420

ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 480

gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540

agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600

gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642

<210> 48

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 48

caggtgcagc tgcaggagag cggacctgga ctggtgaagc catccggcac cctgtctctg 60

acctgcacag tgtctggcgg cttcatcagc tcccggaact ggtggagctg ggtgagacag 120

ccacctggca agggcctgga gtggatcggc gaggtgtacc acaccggcat cacaaactat 180

atcccctccc tgaagtctcg ggtgaccatc agcgtggaca agtccaagaa tcagttcagc 240

ctgaagctgt ctagcgtgac cgccgccgat acagccgtgt actattgcgc cagggaggtg 300

gtgggaccta ccacaggcta ctttgacctg tggggaaggg gcaccctggt gacaatctcc 360

tctgcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420

gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc tgtgacggtc 480

tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540

tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggttgag 660

cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720

ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780

cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840

tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900

aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960

aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020

tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080

gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260

tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320

acgcagaaga gcctctccct gtccccgggt aaa 1353

<---

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены антитела для связывания с фентанилом, аналогом фентанила или карфентанилом, фармацевтические композиции, содержащие указанные антитела, и применение антител и фармацевтических композиций для лечения или профилактики передозировок опиоидами, для лечения расстройства, связанного с употреблением опиоидов, и для лечения или профилактики опиоид-индуцированной дыхательной недостаточности. Изобретение может найти дальнейшее применение в терапии опиоидной зависимости. 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 22 ил., 7 табл., 11 пр.

1. Антитело для связывания с фентанилом, аналогом фентанила или карфентанилом,

где антитело содержит:

(i) вариабельную область легкой цепи, которая содержит

CDR L1 с последовательностью SEQ ID NO:1,

CDR L2 с последовательностью SEQ ID NO:2, и

CDR L3 с последовательностью SEQ ID NO:3; и

(ii) вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит

CDR H1 с последовательностью SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:15,

CDR H2 с последовательностью SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:16, и

CDR H3 с последовательностью SEQ ID NO:6.

2. Антитело по п. 1, также содержащее:

каркасную область легкой цепи, которая содержит

LFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:7,

LFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:8,

LFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:9, и

LFR4 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:10; и

каркасную область тяжелой цепи, которая содержит

HFR1 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:17, и

HFR2 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:12 или SEQ ID NO:18,

HFR3 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:13 или SEQ ID NO:19, и

HFR4 с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:14.

3. Антитело по п. 2, где

каркасная область легкой цепи содержит

LFR1 с последовательностью SEQ ID NO:7,

LFR2 с последовательностью SEQ ID NO:8,

LFR3 с последовательностью SEQ ID NO:9, и

LFR4 с последовательностью SEQ ID NO:10; и

каркасная область тяжелой цепи содержит

HFR1 с последовательностью SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:17,

HFR2 с последовательностью SEQ ID NO:12 или SEQ ID NO:18,

HFR3 с последовательностью SEQ ID NO:13 или SEQ ID NO:19, и

HFR4 с последовательностью SEQ ID NO:14.

4. Антитело по любому из пп. 1-3, содержащее

вариабельную область легкой цепи, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO:20, и

вариабельную область тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO:23.

5. Антитело по п. 4, где

вариабельная область легкой цепи содержит SEQ ID NO:20, и

вариабельная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO:23.

6. Антитело по любому из пп. 1-5, также содержащее

константную область легкой цепи, аминокислотная последовательность которой по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO:21, и

константную область тяжелой цепи, которая по меньшей мере 85% идентична SEQ ID NO:24.

7. Антитело по п. 6, где

константная область легкой цепи содержит SEQ ID NO:21, и

константная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO:24.

8. Антитело по п. 1, где антитело представляет собой антитело IgG.

9. Антитело по п. 8, где антитело IgG представляет собой антитело IgG1.

10. Антитело по п. 1, где антитело представляет собой Fab'-фрагмент или F(ab)'2-фрагмент.

11. Антитело по п. 1, где антитело представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент.

12. Антитело по п. 1, где антитело представляет собой гуманизированное моноклональные антитело.

13. Фармацевтическая композиция для связывания с фентанилом, аналогом фентанила или карфентанилом, где фармацевтическая композиция содержит антитело по любому из пп. 1-12 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

14. Применение антитела по любому из пп. 1-12 для лечения или профилактики передозировки опиоидами, где опиодиом является фентанил, аналог фентанила или карфентанил.

15. Применение антитела по любому из пп. 1-12 для лечения расстройства, связанного с употреблением опиоидов, где опиоидом является фентанил, аналог фентанила или карфентанил.

16. Применение антитела по любому из пп. 1-12 для лечения или профилактики опиоид-индуцированной дыхательной недостаточности, где опиоидом является фентанил, аналог фентанила или карфентанил.

17. Выделенная нуклеиновая кислота для получения антитела, которое связывается с фентанилом, аналогом фентанила или карфентанилом, где выделенная нуклеиновая кислота кодирует антитело по любому из пп. 1-12.

18. Вектор для получения антитела, которое связывается с фентанилом, аналогом фентанила или карфентанилом, где вектор содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело по любому из пп. 1-12.