Пентафторфениловый эфир п-нитробензойной кислоты в качестве реагента для блокирования непрореагировавших аминогрупп в твердофазном синтезе пептидов Советский патент 1983 года по МПК C07C103/52 

.мическому соединению, а именно к пентафторфениловому эфиру ттнитробензойной кислоты формулы Т- I , которое может быть использовано в ка честве реагента для блокирования непрореагировавших аминогрупп в твердо фазном синтезе пептидов. Известен твердофазный метод синте за пептидов, который применяется для получения биологически активных пептидов. Одним из недостатков, этого способа получения пептидов является непол ное протекание реакции образования пептидной связи, вследствие чего об разуются пептиды с ошибочной последовательностью, которые трудно отделить от конечного целевого продукта Для того, чтобы снизить вероятность образования ошибЗЧйых последовательностей в пептидной цепи, все непрореагировавшие аминогруппы в полимере блокируются обработкой различными ацилирующими реагентами 3« В качестве блокирующих реагентов используют уксусный ангидрид, 3-нитрофталевый ангидрид, сульфопропионо вый ангидрид 2, з и . Общим недостатком указанных блокирующих реагентов является недостаточная эффективность.блокирования непрореагировавщих аминогрупп и опас ность протекания побочных реакций. Известно использование в качестве реагента для блокирования непрореаги ровавших аминогрупп в твердофазном синтезе пептидов п -нитрофенилового эфира уксусной, кислоты 53. .Недостатком этого реагента является недостаточно высокая степень блокирования непрореагировавших ами ногрупп. Цель изобретения - получение нового реагента для блокировки непрореагировавших аминогрупп в твердофаз ном синтезе пептидов, позволяющего повысить степень блокирования непрореагировавших аминогрупп в пептидилполимере и упростить процедуру выделения конечного продукта.

пентафторфениловым эфиром п-нитробензойной кислоты формулы

Г Г Синтез пентафторфенилового эфира h-нитробензойной кислоты осуществляют путем взаимодействия п-нитробензоилхлорида с пентафторфенолом„ Блокирование непрореагировавших аминогрупп осуществляют обработкой пептидилполимера 3 5 кратным избытком пентафторфенилового эфира п-нитробензойной кислоты в диметилформамидеП р и м 6 р 1о Пентафторфениловый эфир п-нитробензойной кислоты. К раствору 2,85 г (15,5 ммоль) пентафторфенола в 20 мл 3 Нс едкого натра прибавляют при перемешивании 3,3 г (18,0 ммоль) п-ни тробен зоилхлорида о Выпавший осадок отделяют, промывают небольшим количеством воды и сушат, Получают ,2 г (62,0%) пентафторфенилового эфира п-нитробензойной кислоты в виде твердого вещества, ТоПЛ„ 122°С, ,9 (Силуфол, хлороформ: метанол 2:1), , (Силуфол, хлороформ:гексан 2:1 К Элементный анализ: Найдено, %.; С 46,б9; Н 1 ,23; ЦзН4 5 04 С146,80; Н 1,20) Вычислено, 5 К $2,6 мг глицилПримерполимера H-Gly-(P)(P - хлорметилированный сополимер стирола с 2% дивинилбензола с содержанием хлора 4,5%) с содержанием свободных аминогрупп 0,46 ммоль/г аминоацилполимера (100%) прибавляют 2,6-кратный избыток пентафторфенилового эфира п-нитробензойной кислоты (21 ,0 мг, 0,06 ммоль) в 0,5мл диметилформамида и перемешивают 2 ч при . Количество остаточных аминогрупп после обработки составляет 2,3% от исходного количества свободных аминогрупп , содержащихся в Тлицилполимере. П р и м е р 3. К 41,1 мг трипептиилполимера Boc-Val-Leu-Gly-(D (Р тефлон с радиационно привитым полистиролом) со степенью посадки стартовой аминокислоты 0,31 ммоль/г аминоацилполимера и содержанием остаточных аминогрупп 3,8 прибавляют 2,6-кратный избыток пентафторфенилового эфира п-нитробензойной кислоты (11,1 мг, 0,03 моль) в 0,2 мл диметилформамида и перемешивают 1 ч при 20°С„ Содержание остаточных свободных аминогрупп определяют с помощью пикриновой кислоты и составляет ,, считая на стартовую аминокислоту, присоединенную к полимеру, П р и м е р Зо Бромгидрат МИЛЛИзил-1-валил-1-лейцил-глицина. Твердофазный синтез тетрапептидилполимера Boc-Lys(Form)-Val-Leu-G1y-(P)проводят в стандартных условиях L6 . Цикл синтеза состоит из следующих стадий: кислотное деблокирование оС-аминогрупп, нейтрализация трифторацетата по аминогруппе, конденсация с защищенной аминокислотой, определе ние количества остаточных аминогрупп с пикриновой кислотой, блокирование непрореагировавших аминогрупп ным избытком пентафторфенилового эфи ра И-нитробензойной кислоты в димети формамиде. Для синтеза тетрапептидилполимера используют тефлон с радиационно прит витым полистиролом, Присоединение стартовой аминокислоты Boc-Gly к хлорметилированному полимерному носи телю осуществляют нагреванием 1,9 г полимера с 0,46 г цезиевой соли BocGly в 5 мл диметилформамида до в течение 1 ч Синтез начинают с 2,0 г Boc-Gly(/ содержащего 0,31 ммоль Boc-Gly (1 г Boc-Gly-(P), и последовательно присоединяют к не100 му 1,84 ммоль Boc-Leu в присутствии 1,84 ммоль дициклогексилкарбодиимида и 1,84 ммоль 1-оксибензотриазола в 4 мл диметилформамида при 7 ч (содержание, остаточных аминогрупп в расчете на стартовую аминокислоту составляет 1,9%) 1,84 ммоль симметричного ангидрида, полученного из Boc-Val, в 4 мл диметилформамида в течение 14 ч при 20°С . (содержание остаточных аминогрупп 3,8), 1,84 ммоль Boc-Lys (Form) в присутствии ,84ммоль дициклогексилкарбодиимида и 1,84ммоль 1-оксибензотриазола в 4 мл диметил. . ... формамида при -15°С в течение 18 ч. Затем 350 мг тетрапептидилполимера, содержащего 0,09 ммоль тетрапептида, суспендируют в 3 AЛ трифторуксусной кислоты в присутствии 0,3 мл анизола и пропускают через суспензию ток сухого бромистого водорода в течение 1 ч при 20°С,Смолу отделяют фильтрованием, промывают трифторуксусной кислотой, фильтрат упаривают в вакууме, остаток растирают с сухим эфиром и хроматографируют на колонке с сефадексом LH-20 в метаноле. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют, упаривают в вакууме, остаток растирают, с ацетоном Выход 25,5 мг (5,2% в расчете на стартовую аминокислоту, присое-° диненную к полимеру), т,пл, 208-2100, ,0° ( ; уксусная кислота), ,63 (хроматография на бумаге марки Б, система н-бутанол : уксусная кислотагвода 4:1:5), ,79 (электрофорез на бумаге марки Б, буфер 2М уксусная кислота: 1 ,5М муравьиная кислота 1:1, рН 2, 350 В, 2 ч). Аминокислотный анализ: Gly 0,92 (1,0); Leu 1,05 (1,0);-Val 0,Э7 (1 ,0)) Lys 1 ,06 (1 ,0).

Пентафторфениловый эфир п-нитробензойной кислоты формулы ... . . TV т в качестве реагента для блокирования непрореагировавших аминогрупп в твер8 дофазн м синтезе пептидов.