Способ получения амида N -трет.бутоксикарбонилпролил-лейцил-глицина Советский патент 1981 года по МПК C07K5/97 A61K38/06 

Изобретение относится к способу получения амида N -трет-бутоксикарбонил(Вос}-пролил-лейцил-глицина (а нокислоты L-конфигурации, кроме гли цина) который является исходным веществом для синтеза амида пролил-лейцил-глицина, применяемого в мед цине для лечения паркинсонизма и в пептидном синтезе для получения био логически активных гормонов окситоцина и дезаминоокситоцина. Известен способ получения амида М Вос-пролил-лейцил-глицина путем классического синтеза с использованием для конденсации М Вос-аминокислот данной последовательности метода смешанных ангидридов с изобутиловым эфиром хлоругольной кисло ты температуре -15-(-20°с). Отопление Вос-защиты проводят 4 н. раствором хлористого водорода в дноксане. Аммонолиэ полученного зти яового эфира N Boc-пролил-лейцил-глицина осуществляют насыщенным ра створом аммиака в метаноле. Выход соответствующего амида в пятистащийном синтезе составляет 69% iM Недостатками известного синтеза являются сравнительно низкий выход целевого продукта вследствие киого- стадийности процесса и сложность технологического процесса, связаиная с применением хлористого водорода и проведением синтеза при низкой температуре . . Наиболее близким к предлагаемому является способ твердофазного синтеза амида № Вос-пролил-лейцшт-глици7 на на аминоацилполимере, путем ступенчатого наращивания амииокислот с С-коица, где в качестве аминоацилполимера нсполБэован ВОс-глицил-оксиацетнл-полистирол. Для защиты аминогрупп на каждой стадии используют Вос-группиров у, Отщепление Вбс-группы перед каждой стадией конденсации проводят 2,5 н раствором хлористого водорода в этиловом эфире уксусной кислоты, а ней3трализацию смеси проводят 10%-ным раствором триэтиламина в димегилфор мамиде. Конденсацию Вос-аминокислот с глицнл-оксиацетилполистиролом осу ществляют дициклогексилкарбодиимидн методом при молярных соотношениях Вос-аминокислоты, дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) и глицил-оксиацети полистирола 3:3:1 соответственно. Реакция пептидообраэования в случае лейцина протекает в течение 3 ч, а пролина - 2 ч. Обработкой полученно го пептидил-полимера насыщенным раствор м аммиака в метаноле осуществляют одновременно отщепление пептида от полимерного носителя и аммонолиз пептида. Выход продукта после перекристаллизации из вода: сост ляет 61%, считая на Вос-глицил окси ацетил-полистирол zj , Однако нзвестшлй способ отличается низким выходом целевого продук та сложностью проведения технологического процесса, связанной с применением газообразного хлористого водорода в качестве реагента для отщепления Вос-защиты из-за необходимости полной герметичности аппаратуры, и загрязнением окружающей среды, так как газообразный хлористый водород является сильнодействуЮ1Ф1М ядовитым веществом. Цель изобретения - повш1ение выхода, упрощение технологического пр цесса и обеспечение защиты окружающей среды. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения амида N -Вос-пролил-лейцил-глицина путем ступенчатого нараощвания аминокислот с С конца твердофазным методом на аминоацилполимере, HCJJOдя из М трет-бутоксикарбонил-глицил-сефадекда, с использование в качестве конденсирующего средства дициклогексилкарбодиимида, отщеплением М Вос-защитной группы на каждой стадии осуществляют 0,5-1 н рас вором серной кислоты в уксусной кислоте. Конденсацию Н Вос-аминокислоты с аминоацилсефадексом осуществляют при молярных соотношениях N -Вос-аминокислоты, дициклогексилкарбодиимида и аминоацил-сефадвкса 3:1, 5:1. Используемый в качестве аминов ацилполимера Вос-глицил-сефадекс я;вляется полярным гнцрофильшлм ами74ноацил-полимером. Гидрофильность и доступность активных центров способствует более благоприятному проникновению реагентов во все участки набухщего геля и тем самым ускоряет реакцию отщепления Вос-защиты. Применение в качестве реагента для отщепления Вос-защиты 0,5-1 н раствора серной кислоты в уксусной к| слоте позволяет провести реакцию отщепления селективно, т.е. не затрагивая сложноэфирной связи между аминокислотой и полимером, что исключает отщепление пептида от полимерного носителя и обеспечивает увеличение выхода. Достигается также упрощение прове-, дения процесса, так как отпадает необходимость работать с токсичным и ;коррозийным хлористым водородом, Кроме того, время отщепления Вос-заощты уменьшается 2 раза. Применение в реакции конденсации hP -Вос-аминокислоты, дициклогексилкарбодиимида и аминоацилполимера в молярных соотношениях 3:, 5:1 соответственно способствует преимущественному протеканию реакции пептидообразования, а не побочной реакции перегруппировки промежуточного активированного производного аминокислоты с дициклогексилкарбодиимидом в неактивную аминоацилмочеви- . ну, препятствукнцей полному протеканию реакции конденсации. Время протекания реакции конденсации для Вос-лейцина и Вос-пролина составляет 1,5 ч. Синтез Boc-Pro-Leu-Gly-NH протекает по следующей схеме Вос-глицил-сефадекс 1.H2S04/ACOH 2.10%-ный тризтиламин/ /диметилформамидглицил - сефадекс iBoc-лейцин, ДЦГК Вос-лейцил-глицил-сефадекс I 1. Н 504/АсОН 2. 10% EtjN/CHjjClj лейцил-глицил-сефадекс Вос-пролин, ДЦГК Вос-пролил-лейцил-глнцил-сефадекс . I MHj/MeOH Амид К -Вос-пролил-лейцил-глицина. hi -Вос-пролил-ле П р.и м е р 1. N -Вос-пролил-лейцил-глицил-сефадекс. 5 г Вос-глицил-сефадекса с емкостью 0,53 ммоль Вос-глицина на 1 г сефадекса помещают в реакционный со суд, предназначенный для ручного синтеза, и проводят следующий цикл операций. М4ИД М-Вос-цролил-лейцил-глицина К 6 г полученного М -Вос-пролил-лейцип-глицил-сефадекса прибавляют 60 ш охлажденного нас1лценного раст вора в метаноле колбу плот ио эакрьюают и оставляют прн комнат ной температуре в течение двух дней Затем полимер-носитель отфильтровывают, промывают его метанолом (3. 10 мл), и метанольный раствор упаривают в вакууме. Кристаллический остаток перекристаллизовывают из во ды и получают целевой продукт в виде белого кристаллического вещества. Выход 0,99 г (97% в пересчете н -Вос-глицил-сефадекс) . Т рд, 1 39UO C. - 72,, метанол) . Найдено, %: С 54,92; Н 8,42: N 14,17. Пример 2. Синтез N -Вос-пролил-лейцил-глицил-сефадекса про водят по аналогичному циклу операций, описанному в примере 1, за 7. .4 исключением операций I и 13, где обработку проводят 30 мл 0,5 н раствора серной кислоты в уксусной кислоте; в|1емя реакции в операции 1 30 мин, э в операции 13 АО мин. Амид М Вос-пролил-лейцил-глицина получают аналогично примеру 1. Выход 0,98 г (96% в пересчете на № Вос-глицил-сефадекс). „. 139lAO C, - 7 2 (, Метанол). Найдено, %: С 5Д,90; Н 8,46; 14,24. (;,,-l/2 HjO Вычислено, %: С 54,87; Н 8,44; N 14,22. Пример 3. Синтез N -Вос-пролил-лейцил-глицил-сефадекса проводят по аналогичному циклу операций, описанному в примере I, за исключением операций 9 и 14. В операции 9 к реакционной смеси прибавляют 1,84 г (3 ммоль) N -Вос-лейцина и 1,64 г (З ммоль) ДЦГК. В операции 14 к реакционной смеси прибавляют 1,71 г (З ммоль) N -Вос-пролина, 1,64 г (З ммоль) ЩГК. Аналогично примеру 1 получают амид N -Вос-пролил-лейцил-глицина. Выход г 189%, считая на N -Вос-глицил-сефадекс). Т,, 137139c, 71°9 (, метанол). Найдено, %: С 54,72; Н 8,48; N 14,12.

Обработка 1 н раствором серной кислоты в уксусной кислоте 30

Промывка ДМФА, 3 раза 20

Промывка этанолом,

3 раза15

Промывка эфиром,

3 раза15

Обработка 10%-ным раствором триэтиламина в ДМФА10

Промывка ДМФА, 3 раза 20

10 3

8 3

Промывка этанолом

3 раза.15

Промывка эфиром,

3 раза15

Прибавление 1,84 г (З ммоль)

Вос-лейцина, 0,82 г (1,5 ммоль)

ДЦГК в смеси ДОФА и диклорметана 1:1 20

Промывка ДМФА, 5 раз 20

Промывка этанолом,

3 разаI5

Промывка эфиром,

3 раза15

Обработка I н раствором серной кислоты в уксусной кислоте 30

Повторение операций 2-8

(З ммоль) N Boc-пролина, 0,82 г (if5 ммоль) ДЦГК в смеси ДМФА и дихпорметана ( К: 1 ) .

Прив1едены ммоль в расчете .полимере.

Формула изобретения

/

Способ получения амида М трет-бутоксикарбонил-пролил-лейцил-глицина путем ступенчатого наращивания аминокислот с С-конца твердофазньм методом на аминоацилпошсчере,, исходя из М трет-буроксикарбонил-глицил-полимера, с использованием в качестве конденсирующего агента дициклогексилкарбодиимида, с отадеплением на каяодой стадии М Вос-защитной группы кислотным реагентом, с последующим отщеплением конечного

Продолжение табл.

90 3

20

пептида от полимерного носителя с одновременным аммонолизом и вьщелением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целыо повышения выхода, упрощения технологического процесса и обеспечения защиты окружающей среды, в качестве аминоацклпол(мера используют tr -Вос-глицилсефадекс, отщепление Вес-защиты проводят 0,5-1 н раствором верной кислоты уксусной кислоте, а конденсацню (г Вос-аминокислоты с аминоация-сефадексом осуществляют прн молярныж соотношениях N Boc9857П7IP

-аминокислоты, дициклогексилкарбоди-вийской ССР Серия Химия, 1975,

имида и аминоацил-сефадекса 3:1, 5:1.1.5, с. 61 §-621.

Источники информации,2. Mizoguchi T.Shigezane К.,

принятые во внимание при экспертизеTfricamura N. Solid - phase synthesis

Яуиземе А.В. и Папсуевич О.П. Усрвер-as а polymer support. - Chem. Pharm.

шенствованный синтез С-концевого фраг-Bull., 1970, v. 18, № 7, рр„ 1465мента окситоцина. - Известия АН Лат-1474 (прототип).