Штамм aLLeScpeRIa теRRеSтRIS 62447-продуцент целлюлаз Советский патент 1983 года по МПК C12N15/00 C12N9/42 

о: 4

ор ел Изобретение относится к получе нию ферментов, имеющих прикладное значение, и может быть использован либо для осахаривания кормов, либо для получения глюкозы и олигосахаридов из целлюлозосодержащих субст ратов. Известен штамм грибов Aspergil us terreus 17Р-продуцент целлюлаз при культивировании при 40С С1 Наиболее близкими к предлагаемому являются штаммы Thielavia terrestris и Allescheria terrest- ris С21. . Однако известные штаммы имеют недостаток, который заключается в том, что для получения препаратов целлюлаз используется гриб с интен сивным спорообразованием, что вызы вает загрязнение окружающей среды спорами целлюлазообразующего гриба Целью изобретения является полу чение нового штамма - продуцента целлюлаз с меньшей опасностью загрязнения окружающей среды спорами гриба. Поставленная цель достигается тем, что в качестве продуцента целлюлаз используется облигатно термофильный гриб Allescheria ter restris 62447, обладающий слабым спороношением. Штамм Allescheria terrestris 624 депонировали во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером ВКМР-2173Д) Вид Allescheria terrestris опис Apinis в 1963 году (Noda Hedvvigia 5,68). Выделенный из почв юга УССР шта гриба Allescheria tefrestris 62447 имеет следующие культуральные и мо фологические признаки. Культуральные признаки AMesch ris terrestris 62447. Гриб имеет сумчатую (Eurotiales и конициальную типа Асremonium (Cephа 1 OSрогium) стадии. Данный штамм представляет конидиальную стадию, является облигатны термофилом, не растущим при темпера туре ниже 25°С. Исследовался рост гриба на 5 сре дах следующего состава: Среда 1. Сусло-агар (нейтральный Рост очень хороший. Цвет колонии белый в молодом возрасте, зрелая колония приобретает кремовато-белый цвет, обратная сторона колонии бурого цвета. Среда 2. Среда Чапека, г/л: KNO 2,0; MgS04-7 Н20 0,5; КС 1 0,5; КН2Р04 1-0; FeSO -7H20 0,01; 20. Рост очень скудный, погруженный Среда 3. Модифицированная среда Чапека, где KNOj заменен NH4N03 и вместо глюкозы добавлена сахароза в количестве 20 г/л. Рост погруженный, воздушный мицелий слабо развит. Колония бесцветная, растет концентрическими кругами , растущие края колонии погружены в субстрат, обратная сторона колонии неокрашенная. Среда 4. Модифицированная среда Чапека, где глюкоза заменена вытяжкой отрубей в количестве 10%. Рост скудный, в основном погруженный (субстратный), воздушный мицелий отсутствует. Обратная сторо- на колонии неокрашенная, более утолщенная. Среда 5. Сыворотка молочная. Культуральные признаки такие же как и на среде 3. Морфологические признаки Allescheria terrestris 62447. Среда 1. Гифы двух типов: тонкие - мелко густо гранулированные (1,5-2,0 мкм) и более толстые - редко септированные, полные или вакуолизированные (до 4-5,0 мкм). Конидиеносцы простые (удлиненно-цилиндрические, одиночные) и типа фиалид (одиночные или густо расположены муточками). Конидии овально-яйцевидные с заостренным кончиком, размером 3,5-5,0 - 1,5-2,5 мкм. Среда 2. Гифы двух типов как и на среде 1, однако более толстые гифы густо гранулированы. Спороношение более интенсивное, по сравнению с ростом на сусло-агаре. Конидии удлиненно-цилиндрические и овальнояйцевидные. Конидиеносцы удлиненноцилиндрические по типу Асremonium. Среда 3. Гифы довольно однородные-, сильно ветвящиеся, образующие бугорчатые вздутия, условатые на отдельных клетках. Конидиеносцы типа фиалид. Несмотря на скудный рост мицелия, наблюдается интенсивное, обильное Спороношение путем образования обильного количества фиалид.Конидии удлиненно-цилиндрические до 10-12 мкм длиной и овально-яйЦевидные, как на среде 1. Наблюдаются почкующиеся конидии. Среда 4. Гифы однородные, узловато-бугорчатые довольно гомогенные, наблюдаются отдельные фрагменты обрывов гиф, типа почкующихся, тоже узловато-бугорчатые (удлиняются путем выпячивания крайних клеток) . Конидиеносцы слабо развиты (по типу фиалид;, короткие, встречаются отдельные бластоспоровые клетки. Конидии мелкие, редкие,овальнояйцевидной формы, более сужены, с вытянутым усеченным кончиком, по сравнению с ростом на среде 1, размеры 4-6-2-3 мкм. Среда 5. Гифы довольно однородные , сильно вакуолизированные. Спороношение слабое, конидии овальнояйцевидные , такие же как на среде 1. Конициеносцы типа фиалид и удлиненноцилиндрические (по типу Acremo- niuro).

Пример 1. Посевной материал выращивают при 42°С в колбах емкостью в 750 мл на качалке, имеющей 180 об/мин, в течение 3 сут на среде содержащей, г/Л: мальтозу 257 NH4N03 2; К-Н2Р04 1,5 г; «9504 х7Н20 1,5; СаСОз 0,5, в которую добавляют 10% вытяжки отрубей. Посевной материал, составляющий 8-10% от общего объема среды, добавляют в среду, содержащую, г/л: пшеничную

солому 20; 2;

1,0; HjO 0,5; KCl 0,5t

FeSO x7 N20 0,01, и засеянную среду инкубируют при 42°С в течение 3 сут в колбах емкостью 750 мл, на качалке, имеющей 180 об/мин.

Культуральная жидкость гриба, отделенная от выращенной биомассы и неиспользованного субстрата центрифугированием (16000 об/мин, 15 мин), содержала целлюлолитический фермент, Сх- и С -активности которого составляли соответственно

11 и 2,0 ея/мп кулыуральной жидг кости.

Пример 2. Культивирование проводят аналогично примеру 1, используя в качестве субстрата березовые опилки .в той же концентрации.

Культуральная жидкость содержала целлюлолитический фермент, Сх- и С -активности которых составляли соответственно 2,4 и 1,1 ед/мл культуральной жидкости.

Пример 3. Культивирование проводят аналогично примеру 1, используя в качестве субстрата гузапаю (стебель хлопчатника) в той же концентрации. Культуральная жидкость содержала целлюлолитический фермент, Сх-С -активности которого составляли соответственно 3,25 и 0,5 ед/мл культуральной жидкости.

Таким образом, предлагаемый штамм Allescheria terrestris 62447, образующий в 20 раз меньше спор по сравнению с другими штаммами Allescheria terrestris и в 100 раз меньше по

сравнению со штаммами AsperglMus

terreus, значительно уменьшает опасность загрязнения окружающей среды спорами целлюлазообразующего гриба.

Штамм Allescheria terrestfis 62,447 (Всесоюзная коллекция Микроорганизмов при ИБФМ АН СССР, коллекционный номер i ВКМр-217ЗД-) - продуцент целлкхпаэ.