Питательная среда для выращивания культур клеток животных Советский патент 1983 года по МПК C12N1/00 

1 Изобретение относится к ветеринар ной вирусологии, в частности к оптимизации способов выращивания культуры ткани. Известна серия синтетических питательных средств 7С, в которых соотношение аминокислот сбалансировано подобно животным тканям . Недостатками этой среды являются сложность и трудоемкость ее приготов ления . Наиболее близкой к предлагаемой является среда с ферментативным гидролизатом лактальбумина ГЛА L2 Однако, в связи с тем, что ГЛА изготавливается фирмой Дифко (США и импортируется в СССР, резко возрас тает стоимость вирусных вакцин и других препаратов, сырьем для которых является ГЛА, Цель изобретения - удешевление пи тательной среды и повышение эффектив ности ее использования. Указанная цель достигается тем, что в качестве гидролизата белков используют сухой ферментативный.гидролизат белков мышц при следующем соотношении компонентов, %: Сухой ферментативный . гидролизат белков 0,25-0.30 Сыворотка крови 5 -10 Остальное Солевой раствор Сухой ферментативный гидролизат белкой мышц ФГМ-С получают в резул тате глубокого ферментативного гидро лиза мышечной ткани крупного рогатого скота или свиней. Глубина гидролиза (коэффициент протеолиза составляет 0,,OJ достигается в результате тщательного измельчения мышечной ткани и поджелудочной железы на коллоидной мельнице. В качестве протеолитического фермента вместо подже лудочной железы может быть использован панкреатин с активностью 5 ед. По завершении гидролиза проводят осаждение высокомолекулярных соединений в изоэлектрической точке, препарат фильтруют и высушивают. ФГМ-С содержит не менее 18 аминокислот, в том числе все незаменимые, суммарное количество которых составляет бЗ-б9 что в 1,2-1,5 раза превышает их соде жание в ГЛА. Содержание аминокислот в сухих ФГМ-С и ГЛА приведено в табл. 1. 2 Питательную среду с ФГМ-С (.0,10 ,5%) готовят на сбалансированном солевом растворе (например, Хенкса или Эрла), стерилизуют и проверяют ее ростовые свойства при выращивании перевиваемых клеток почки поросят (ПП; в течение 3 последовательных пассажей, оценивая рост клеток через 3 и 7 дн. Содержание ФГМ-С в питательной среде и характеристика роста в ней монослойной культуры перевиваемых клеток ПП приведены в табл. 2. Рабочая концентрация ФГМ-С 0,250,30%. Клетки культивируют также в среде с 0,5 ГЛА или в среде Игла, модифицированной для выращивания клеток ВНК-21. При одинаковой посевной концентрации рост всех испытанных клеток в средах с ФГМ-С и ГЛА одинаков, сроки формирования монослоя и его сохранения одни и те же. Перевиваемые клетки, выращенные в предлагаемой среде, сохраняют первоначальную морфолог 1ю и ростовые свойства. Среда с ФГМ-С может быть также использована для длительного серийного выращивания перевиваемых линий клеток.Серийное пассирование перевиваемых клеток в новой среде tpe6yeT предварительнойадаптации. Все испытанные клеточные системы (первичные и перевиваемые сохраняют чувствительность к вирусам ящура, чумы,птиц, диареи крупного скота, олезни Ауески, Ньюкасла и Тешена. Показатели чувствительности клеток, выращиваемых в средах с ФГМ-С 0,25 и ГЛА (Q,Sl), к вирусам животных приведены в табл. 3. .Замена в составе питательных ред импортного ГЛА на отечественный ГМ-С удешевляет стоимость питательых сред и производимых биопрепаратов изготовление которых основано на рименении .метода культуры ткаей. Изготовление ФГМ-С не требует ложного оборудования и может проодиться на предприятиях биологичесой промышленности.

Таблица 1 Характеристика ро Оценка роста клеток через, Дн 0,5 ФГМ-С-1-99,5 солевого раствора

Т а б л и ц а 2 та клеток ПП в среде с содержанием 0,25% ФГМ-С+99,75 0,U ФГМ-С+99.9% солевого раствора солевого раствора

Монослой, начало деструкции

Частичная или полная деструкция монослоя

Частичный или полный монослой

Монослой

ТаблицаЗ