Способ получения комплекса протеолитических ферментов Советский патент 1983 года по МПК C12N9/50 

ю « го Изобретеш е отнсюится к ферментной промышленности, в частност к способам получе1шя протеопитических ферментов из микробиолопгческого сырья, в частности из культуры S-ti eptonivjces . Известен способ получения протеолити чесюк ферментов из отходов производств итаконовой кислоты, а именно из мицелия гтесневого гриба AspelpiEEus ieVreO5 L Недостатком этого способа является низкая активность получаемого препарата (6-9 ед/г). Известен способ получе шя комплекса прт)теолит1гческих ферментов, продуцируемых otv-eptovT vcee V-tseus , включающий получение культуральной нсидкости очистку ее от стрептомицина изопропиповым спитром, выделение целевого продукта и его сушку L2j, Недостатками данного способа ЯВЛЕПОТ ся относительно низкая протеолитическая акт1-тность перепарата (ТОО ел/г препарата по Кунитцу) и недостаточная очистка от стрептомицина (его содержание впрепарате составляет 3,5%). Известен также способ получения ком лекса протеолитичесКИх ферментов (проте литического препарата протелина) из отходов производства стрептомицина, вкл чающий очистку исходного сырья от балластных белков, стрептомицина и солей, выделение целевого продут та и его сушку) согласно которому в качестве неходкого сьфья используют не непосредственно сточные воды, а отделенный от Sfflx мицелий, очистка от стрептомицина и примесей осуществляется сорбцией на катионите с последующей хроматографией и депигментацией 3. Недостатками способа являются трудо емкость его осуществления, сложность технологии} недостаточная активность протеолитического комплекса. Цель изобретения - удешевление спосо ба и повышение протеолитической активности ферментного комплекса. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения комплекса 1фотеолитических ферментов из отходов производства стрептомиш на, включающему очистку исходного сырья от балластных белков, стрептомицина и соле выделеш-te целевого продукта и его сушку, в качестве источника сырья исполь3;yTOT сточные воды производства стрептомицина} которые упаривают в трех-пятикратном обтзбме, а очистку осуществляют путем введе шя хлористой срлн кальция и 2062 магния в количестве 50-55 г на упаренных сточных вод. При этом перед упариванием проводят дополтгительную стабилизацию ферментного комплекса путем введения хлористой соли кальция или магния в количестве 0,2-4 г на I л сточных вод.. Пример1.К5л сточных вод, имеющих следующую характеристику: содержание белка 4,3-5,5 мг/мл; содержание стрептомкщина 0,1-6,0 ед/мл; исходная протеолитическая активность (по Кунитцу) 9,5-11,5 ед/мл; рН 4,5-6,0 полученных после отделения стрептомицина, непосредственно перед упариванием вводят CaCe,j. 6Н,О в количестве 0,О01М, Затем раствор концентрируют на циркуляцнонном испарителе, который обеспечивает мягкое- упаривание раствора до 1/5 объема при остаточном давлении Ю2О мм рт. ст, и температуре не выше 40 С в течение 2 ч. Концентрированный раствор охлаждают до 4 С, а затем вводят & конпентрации 0,23 М до насыщения. Суспензию выдерживают 1О ч. при 4 С. Осадок отделяют полчаса центрифугированием при 8 тыс. об./мин, Н-адосадочную жидкость диализируют 1-1,5 суток при температуре не выше 10 °С, а затем яиофильно сушат. Выход препарата - 0,05% (по расчету на ЮО л сырья). АКТИВНОСТЬ ферментного комплекса 2420 ед/г препарата при определении протеолитической активности по методу Кунитца, Получаемый комплекс содержит трипсин- и химотрипсинподобные протеиназы, а также амино- и карбоксипептидазы. Состав сточных вод непостоянен, поэто- му гфедварительная стабилизация не явлйется обязательной операцией. Пример 2, Последовательность операций осуществляют в соответствии с методикой,описанной в примере 1. Варьируют количество вводимой в сточные воды хлористой соли кальция: о управления для стабилизации в количестве О,О1 М, после упаривания для очистки - 0,24 М, Упаривание осуществляют в трехкратном объеме. Выход препарата составляет 0,1%. Активность препарата по Кунитцу 622О ед/г. П р и м е р 3, Способ получения компг лекса протеолитических ферментов осуествляют в соответствии со схвчой. описанной в примере 1, однако в качестве хлористой сопи берут в коли честве: до упаривания 0,02 М, после упа ривания - 0,25 М. Выход препарата составляет 0,1%. Активность препарата по Кунитцу 70ОО ед/г. Уменьшение количества (менее О,р01 хлористой соли приводит к снижению активности препарата до 42% при упаривании, а повышение концентрации более 0,О2 М - к увеличению времени упаривания раствора и инактивации ферментно- го комплекса; снижение концентраций (менее 0,23 М) СаСбд или . Риводит к недостаточной очистке раствора от балластных белков, а увеличение концентрации соли (более О,25 М) - к потерям активности за счет осаждения част ферментного комплекса. По своему составу препарат представляет собой комплекс эндо- и экэопептигидролаз включающих химотрипсин, трипсин, нейтральные проаеи аэы, карбоксипептидазы, аминопептиДазы. Использование предлагаемого способа обеспечивает по сравнению с известньтми следующие преимущества: получение ферментного протеопиткческого комплекса с высокой активность (до 70ОО ёд/г препарата по Кунитцу); достижение хорошей очистки препарата; удешевление способа за счет утилизации сточных вод производства стрептомицина; стоимость которых 2 руб. за 1 мЗ J простоту и доступность средств для осушествления предлагаемого способа. Таким образом, изобретение позволяет -удешевить способ и повысить активность протеолитического комплекса.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ из отхопов производства стрептоми,цина, вк-точающий очистку исходного сырья от балластных белков, стрептомицина и солей,выделение целевого продукта и его сушку, отличающийся тем, что, с целью удешевления способа и повышения протеолитической активности ферментного комплекса, в качестве источника сьфья используют сточные воды производства стрептомицина , которые упаривают в трех-пятикратном объеме, а очистку осушествляют путем введения хлористой соли кальция или магния в количестве 5О55 г на 1 л упаренных сточных вод, 2„ Способ по п. Ij о т л и ч а ю ш и и с я тем, что перед упариванием проводят дополнительную стабилизацию фар -ментного комплекса путем введеш1Я хлористой соли кальция или магния в количестве 0,2-4 г на 1 л сточных вод.