Способ количественного определения целлюлозы Советский патент 1983 года по МПК G01N33/46 C12Q1/34 

Изобретение относится, k аналитической химии, а именно к способам количественного определения целлюлозы. Известен способ определения малых количеств бактериальной целлюлозы, основанный на ацетолиэе предваритель но очищенного образца, кислотном гидролизе полученного продукта и ко лориметрическом определении во йстЗ.навливающихсахаров с медным реагентом ГД J Недостатки способа - длительность и сложность обработки, недостаточная , избирательность и высокиЯ предел обнаружения, Наиболее близким к предлагаемому является способ количественного определения целлюлозы и целлюлозных микроорганизмов путем обработки ана.лизируемой пробы фильтратом культурал йЪй жидкости бактерии Sor. cellulesum при рН 3-5 и 40-45 С с последующим спектрофотометрическим определением образующихся в результате ферментативного гидролиза редуцирующих методом Шамоди-Нель- сона Г21/ Однако способ обладает недостаточно низким пределом обнаружения ,(0,01 мг/мл), сложностью и длительностью подготовительных операций (необходимость, постоянного культиви , рования культуры Sor. oellulosum). Цель изобретения: - снижение предела обнаружения и упрощение технологии определения Поставленная .цель достигается согласно способу количественного определения целлюлозг з путем обработ .ки анализируемой пробы целлюлозогид ролизующихМ ферментным препаратом с последующей обработкой полученной оме си реактивом Шомоди-Нельсона и спектр фотометрированиемокрашенного раствор при котором пробу Предварительно разм лывают и обработку осуществляют ферментным препаратом, выделенным из культуры Geotrichum candidum ,3 С при рН 4,0-4,8 и 45-50 с Предварительная обработка анали зируемой пробы приводит к переходу целлюлозы в легкогидролизуемое состояние , а использование ферментного препарата позволяет упростить и ста дартизировать процесс (активность ферментного препарата в течение дли тельного времени остается неизменной ). Раствор ферментного препарата из гриба Geotrichum candidum 3с fXJTO вят,.заливая навеску соответствующи obbei.iOM ацетатного буфера (рН 4,0-), интенсивно перемешиваяла магнитной мешалке (15 мин), затем центрифугируют при 8000-об/мин (15 мин). Гото вят раствор в день определения. Раствор Шамоди- готовят соединением четырех объемов раствора 1 (12 тартрата натрия, 24 г Ка2СОд(безв. ), 16 г NaHCO, 14 г , довести до 800 мл водой) и одного объема раствора 2 (2,4 г CuSO -SHgO и 3,6 г . в 200 мл воды). Реактив Нельсона готовят растворением 25 г молибдата аммония в 450 мл воды, добавлением 21 мл концентрированной серной кислоты, 3 г у ышьяковокислого натрия в 25 мл воды и доведением объема до 500 мл. Раствор перед употреблением выдерживают :48 ч при 37°С. Хранится раствор в течение длительного времени. Построение калибровочного графика определения целлюлозы. В термостатированную при 50°С ячейку помещают порошок прёдваритель но размолотой на вибррмельнйце целлюлозы (0,005-5,00 мг) и заливают : 5 мл раствора ферментного препарата Geotrichum candidumЗс„ В результате сухого размола на ,.Bj бpaциpнIfOй мельнице в -течение 30 мин получают тончайший белый порошок с размером частиц до 200 мкм. ; Процесс ферментативного гидролиза проводят при постоянном перемешивании в течение 1 ч (время контролируют с точностью +10 .с). Раствор центрифугируют при 8000 об/мин в течение 10 мин, отбиран5т 1 мл раствора и определяют обра.зовавшиеся ;редуцйрующие вещества по методике Шамоди-Нельсона. На чертеже представлен калибровочный график зависимости образовав шихся в результате ферментативного гидролнза редуцирующих веществ (по оптической плотности окрашенного . раствора) от содержания целлюлозы Результаты для построения калибровочного графика приведены в табл, 1. Таблица 1 Результаты определения целлюлозы приведены в табл, 2„

Таблиц а: 3

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ путем обработки анализируемой пробы целлюлозогидролизукнцим ферментным препаратом с последующей обработкой полученной смеси реактивом Шамоди-Нельсона и спектрофотометрированием окрашенного раствора, отличающийся тем, что, с целью снижения предела обнаружения и упрощения технологии определения, пробу предварительно размалывают и обработку осуществляют, ферментным препаратом, выделенным :из культуры Geotrichum candidum 3с, при рН tt,Q-k,B и 45-50 С. О N:) а: