Штамм РС/Ленинград/285/76 респираторно-синцитиального вируса,используемый для приготовления респираторно-синцитиального диагностикума Советский патент 1983 года по МПК C12N15/00 A61K39/12 

«

4

Л Об Изобретение относится к медицин ской вирусологии и может быть исполь зовано для приготовления .респираторно-синцитиального диагностикума. Известен эталонный штамм Long, используемый для приготовления PC вирусного диагностикума tl Однако Long обладает доволь но низкой инфекциозностью и недостаточной диагностической денностью, поскольку, отличаясь по антигенному профилю-.от диких штаммов, не в полной мере выявляет антитела к современным циркулирующим вирусам. , Целью изобретения является штамм РС/Ленинград/285/ б респираторносинцитиального вируса, обладающий повышенной диагностической ценностьй и более высокой инфекциозностью. Поставленная цель достигается путем, использования дляприготовления РС-диагностикума штамма РС/Ле нинград/285/76. Штамм РС/Ленин град/285/76 изолирован в декабре 1976 г. от ребенка с острым респираторным заболеванием. Штамм характеризуется следуницими признаками. Морфология. Чрезвычайно полиморф ные частицы, типичные для респираторно-синцитйального вируса. Репродукционная активность. Из числа изученных вирусов (118 штаммо предлагаемый штамм относится к категории высокоурожайных вирусов, которые составляют только 16,1% общего количества изолированных нами штаммов. . Инфекционные титры вирусов при культивировании их в клетках различ ного происхождения - ЛЭЧ, ПЭЧ, ОК |(диплоидная культура клеток легочной ткани плода человека, 1ервичная культура клеток почечной ткани плода человека и клетки органного эпителия человека) - Достигают 6,08,5 Ig ИДдд/МЛ.. Резистентность к ингибиторам Предлагаемый штамм относится к категории малочувЬтвительиых штаммов, поскольку он в числе других ва риа«тов этой группы, составившей только 12,6%, очень плохо взаимодей ствует с сыворотками различного вид животных (морской свинки, лошади, телят и хомяков). Индексы ингибиции соответствуют низким значениям. По антигенной характеристике предлагаемый шталм отличается доста точной антигенной новизной, иерсйек тивностью и и иротой антигенного спектра. Степень родства у штамма РС/Ленинград/285/76 с эталонным вариантом и с другими циркулировавшими штаммами наибольшая и составляет 71,0%. Вольшинсто нзолятов совремён н,ых штамкюв реагирует с сывороткой РС/Ленингращ/285/7б до 1:2 или до омологичного титра, что свидетель твует о широком антигенном спектре редлагаемого штамма; Авидность к спцифическим антитеам сывороток человека. Предлагаемый штамм характеризуетя высокой чувствительностью к разичному спектру антител человечесих сывороток. Средние геометричесие титры антител, а также процент еропозитизйных сывороток при использовании штамма РС/Ленинград/285/76 значительно выше, чем с остальными изученными штаммами, включая эталон. Пример. Маточный материал PC вируса, прошедший контроль на стерильность, специфичность, биологическую активность, резистентность к неспецифическим ингибиторам сывороток различного вида животных, разводят в 1000 раз на поддерживающей среде Игла (рН 7,2), содержащей антибиотики (пенициллин 200 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл). Объем разведенного вируса - 100 мл. Вируснейтрализующий и комплементсвязывающий антигены готовят в диплоидной культуре Клеток легочной ткани плода человека. Для этого матрасы с клеточной культурой (пробы 5-8) заражают полученным разведением вируса. Доза заражения составляет ИД50/мл. После 1,5-2-часового конт-акта вируса с клетками культуру несколько раз промывают фосфатносолевым буферным раствором (рН 7,2). Зараженные клетки инкубируют в термостате при 36°С в течение 3-4 сут. до наступления характерных деструктивных изменений клеток. Вируссодержащий материал подвергают 3кратному пипетированию. Собранную жидкость центрифугируют 20 мин .при 2000 об/мин для удаления клеточного детрита. Поддерживающая среда при выраздива1 ии вируса состоит из среды Игла, бычьего альбумина (1%) и антибиотиков. Полученный материал (пробы 5-8) проверяют на присутствие инфекцион НОго вируса путем определения егхэ концентрации в диплоидной культуре клеток легочной ткани плода человека при 36°С. В из материалов 5-8 инфекционной титр вируса равняется 8,0; 8,5; 8,0; 8,5е Всё пробы 5-8 специфичны, так как нейтрализуются гомологичной сыворот.кой до тиТра 1:128. Вирус содержащий материал контролирлот на чувствитель-« ность к неспецифическим ингибиторам сывороток различного вида животных с помощью реакции нейтрализации в диплоидной культуре клеток легочной ткани плода человека. Ингибирующую активность сывороток выражают в инДексах ингибиции (в антилогарифмах

разности титров вируса в контроле и в присутствии сывороток). Все npo-i б1Ы 5-8 оказались достаточно резистентными к действию ингибиторов различных сывороток.

Антигены 5 и б (осветленная вир

.руссодержащая культуральная жидкость ), проверенные на стерильность, специфичность, биологическую активность и ингибиторорезистентность, используют в качестве комплементсвязывающего антигена. Подготовленные и проконтролированные на стери.льность, специфичность, биологическую активность и ингибиторорезистентность антигены подвергают лиофилизации. Для этого в каждую бутыль, содерйсащую 100 мл вирусного антигена, добавляют равный объем 13% пептона. Бутыли 5-8 обозначают как серии диагностйкума 1,2,3,4. Затем каждую серию разливают (по 10 MJCI) во емкостью 50 мл Сразу по

окончании лиофилизации, продолжительность, которой 36 ч, флаконы перекрывают резиновыми пробками.

Полученные диагностикумы (серии i 1,2,3,4) повторно контролируют на стерильность, специфичность, биологическую активность. Инфекционный ; титр в готовых диагностикумах серий . 1 и 2 составляет 8,0-8,5 б , комплементсвязывающая активность 1:40.

Диагностикумы по всем указанный контрольньм исс ледоВаниям отвечают предъявляемьм к. ним требованиям. Использование штамма в качестве антигенов для серологических реакций значительно повысит эффективность иагностики РС-инфекций, и, кроме того, штамм может быть использован

в различных видах серологических ис Следований, например, для выявления вируснейтрализующих и комплементсвяэывающих антител.

РС/Ленинград/285/76 респй-: раторно-синцитиального вируса ГКВ № 1771 (Институт вирусологии ИМ. Д.И. Ивановского АМН СССР), ис- пользуемый для приготовления респираторнр-синцитиального диагностикума. :