Способ выявления микоплазм в культурах клеток Советский патент 1983 года по МПК C12N5/00 

4 4

о: со Изобретение относится к медицине, а именно вирусологии. Известен способ выявления микоппаэ в культурах клеток путем окраски фпюоро фомами с последующим исследо ванием препаратов в люминесцентном микроскопе Cl3 Известный способ является недостаточно точным. Цель изобретения г повышение точноои способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выявления миколпаэм в культурах клеток путем окраски флюорохромами с последукнайм исследованием препаратов в люминесцентном 4 шкр6скопе клеточные культур обрабатывают оливомншном в раэведе.НИИ 1,О - 4,0 мГ/л в течение 1-8 ч. Пример 1. Культуры перевиваемых клеток выращивают на покровны стеклах в пёни1шллиновых флаконах и фиксируют после образования монослоя через 2-3 сут в охлажденном до 4° С 70° этиловом спирте в течение 1 ч. Готовят раствор антибиотика опивомицина в концентрации 1,0-40 Омкг/л (opt 20 мкг/мл) на дистиллированной воде с добавлением 20 мМ ионов (в виде солей Alg-50 или ), рН раствора 2,0 - 8,0. Рабочий раствор может длительное время храниться в холодильнике npHi- 4°С. Этот раствор наносят на препарат и помешают его в темную камеру. Окраска произвоЯится при is 4 - 37° С в интервале 1-8 ч. Окрашенною стекла с культурой монтаруют Иа предметные стекла в глицерйне с дистиллированной водой (1:1), обводят парафином и исследуют в люминесцентном микроскопе с увеличением об. Х9О (иммерсия). Для анализа используют фильтрЬ1Фе 1-4; ОС 15-2 и.БС 8-2. При этом ДНК микоплазм и ядер .светится ярким желточэеленым светом, цитоплазма не светится. Результатьг исследования перевиваемых клеточных культур приведены в таблице.

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКОПЛАЗМ В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК путем окраски фпюорохромами с последующим исследованием препаратов в люминесцентном микроскопе, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, клеточные культуры обрабатывают оливомицином в разведении 1,0 - 4,0 мг/л в течение 1-8 ч.

Пример 2. Клеточные культуры выращиваемы в виде суспензии, исследуют на наличие микоппазм с помсхцью оливомицина. Для этого на предметных стеклах Делают мазки культур клеток, которые после высушивания на воздухе фиксируют в охлажденном 70° спирте и окрашивают Ьливомнцином, как описано Bbmie, Псхзле опопаскивания в дистиллированной вопе и высушивания препараты просматривают под микроскопом.

В культурах, контаминированных микоппазмами, выявляются ярко светящиеся фокусы в Цитоплазме клеток, содержащих ДНК микоплазм. По величине и расположении) они идентичны микоплаз - мам, выявляемым другими методами. В культурах, свободных от микоплазм, подобные фокусы не выявляются.

31044630 ,4

Испсяьзование изобретения позволит. венных: клеточнык культурах, примеупростить технологию и повысить надеж-ияемых в вирусологических исследоность выявления микоппаэм в производст- ваниях.